JP2004508188A - 別々に修飾された表面部分を有する吸着剤、その製造方法およびその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、次のステップを含んでなる吸着剤の製造方法に関する：（ａ）外および内表面上に修飾可能な結合部位を有する多多孔質粒状キャリア物質を用意し、（ｂ）充填条件下で液体であって、キャリア物質の表面上にある結合部位が本質的に完全に修飾されうる溶液と修飾条件下で本質的に混和性でない、少くとも１種の媒体によりキャリア物質の孔を満たし、（ｃ）キャリア物質の外表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させ、および（ｄ）場合により、キャリア物質の外表面上にある結合部位が本質的に完全に修飾されうる溶液と、修飾条件下で本質的に混和性でない媒体を孔から除去する。また、本発明は、１．５μｍ以下の平均孔度を有する多多孔質キャリア物質を含んでなり、本質的に球形の非凝集粒子の形をとる全血用の吸着剤に関する。孔容量の最大５０％が＞１．５μｍの孔度を有する孔の形で構成される。外表面が本質的に血液細胞と相互作用しないように、多多孔質キャリア物質の外表面が少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を有し、多孔質キャリア物質の内表面、即ち、多孔質キャリア物質の孔の表面が、血中に含有される物質と相互作用する少くとも１種の表面修飾基Ｍ_２を有している。

Description

【０００１】
本発明は、≦１．５μｍの平均孔度を有する多孔質キャリア物質からなる、本質的に球形の非凝集粒子の形をとる全血用の吸着剤に関し、孔容量の最大５０％が＞１．５μｍの孔度を有する孔に存在してよく、外表面が本質的に血液細胞と相互作用しないように、多孔質キャリア物質の外表面が少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を有し、多孔質キャリア物質の内表面、即ち、多孔質キャリア物質の孔の表面が、血中に存在する物質と相互作用する少くとも１種の表面修飾基Ｍ_２を有している。更に、本発明は、このような吸着剤の製造方法、この吸着剤の使用、および本発明による吸着剤をハウジングに入れた吸着器に関する。
【０００２】
吸着剤は医療技術で広く用いられている。血液または血液成分から低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を除去するか、またはその濃度を低下させる吸着剤入りの吸着器は、ドイツ特許３９ ３２ ９７１からわかるように、頻繁に記載されている。この文献は、ＬＤＬ分子が結合する表面に官能基を有した、一定粒度および排除限界の有機キャリアとして、吸着剤物質を記載している。
【０００３】
ポリアクリル酸（ＰＡＡ）で被覆された多孔質ポリメタクリレート粒子製のＬＤＬ吸着物があり、ＰＡＡは粒子を囲む外表面および孔を形成する内表面に結合形で存在している。血液細胞はＰＡＡと最少の相互作用を有するのみであるため、このような吸着剤は全血に適しており、即ち吸着剤粒子は血液細胞と相互作用することなく、即ちそれらを活性化、結合または損傷することなく、それらを通過させる。そのため、この方法によると、すべての血液は血液細胞の先行分離なしに吸着物を通り抜けられる。ＬＤＬは、キャリアへ付着している官能基へのＬＤＬの特異的結合によらず、サイズ排除メカニズムにより、ここでは分離されている。
【０００４】
キャリア物質は通常補体活性化をもたらし、および／または血小板凝集および付着を誘発することから、吸着剤が全血と適合することは極めてまれである。
【０００５】
全血適合性は、官能基付きで用いられるコーティングに特に依存している。関連技術で知られているある官能基を用いた場合、それらは血液細胞と相互作用することから、全血と適合する吸着物を製造することは不可能である。その一例は免疫複合体と結合する吸着物であり、その吸着物はその表面に官能基としてタンパク質Ｃ１ｑを担持している。そのタンパク質は免疫グロブリンと相互作用して、それらの溶液からそれらを除去しうる。しかしながら、血液細胞、特に血小板もタンパク質Ｃ１ｑとの結合部位を有しているため、それらもこのような吸着剤と結合する。そのため、全血はこれらの吸着剤を無事に通り抜けられない。同様の問題はいわゆるフィブリノーゲン吸着物でも生じる。
【０００６】
このような場合に、血液細胞がまず血漿から分離されねばならず、その際に血漿のみが吸着物を通り抜ける。Ｃ１ｑタンパク質との結合による免疫複合体の分離後に、血液細胞は精製された血漿と再び混合されねばならない。この操作は複雑であり、高リスク操作であるばかりか、患者にも重荷である。
【０００７】
文献（例えば、Ｄｒａｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９８，２８（１２）；ＵＳ特許５，４７６，７１５Ａ）に記載された全血吸着剤は、血液細胞が動ける空間を形成しうるほど大きな粒子からなる。更に、その粒子は内表面に通じる孔を有している。これらの孔は、高分子でさえそれらに入り込めるほど大きい。しかしながら、これらの孔は、血液細胞がそれらに入り込むのを防げるほど小さい。そのため、血液細胞は粒子の外表面のみと接触する。更に、欧州特許０ ４２４ ６９８によると、これらの粒子は、“滑らか”で不活性な外面を有するように、できるだけ球形かつ非凝集でなければならず、こうして血小板はそれらを滑り抜けられるのである。
【０００８】
ドイツ特許出願１９８ ４２ ７８５Ａ１は、多孔質物質の外表面が電気中性および親水性であり、内表面もいわゆる官能性リガンドを具備するように、表面が化学的に官能化された多孔質物質について記載している。しかしながら、全血に適合した物質はそこに記載されていない。これらの多孔質物質は、最初にエポキシ基を多孔質ベースキャリアへ導入し、こうしてベースキャリアの孔表面および外表面の双方がエポキシ基で官能化され、次いでエポキシ基が求核剤との反応で触媒的に開かれることにより製造される。このプロセスでは、多孔質ベースキャリアの平均孔径より大きな粒度を有する粒状触媒が用いられ、そのため反応は孔中で生じない。次いで、孔表面の残留エポキシ基は官能性リガンドを導入することにより変換される。しかしながら、粒状触媒を用いると、ある著しい欠点を伴うが、それは被覆されたキャリア物質から粒状触媒を分離することが難しいからである。更に、反応は触媒粒子とキャリア物質粒子との接触点のみで生じうるため、非常に長い反応時間および十分な攪拌が表面でほぼ完全な反応を達成するために必要である。更に、長時間の攪拌は触媒粒子の磨耗を起しうるため、吸着物は触媒残渣で汚れるようになる。更に、磁気触媒粒子が用いられたときには、吸着剤に触媒粒子の残留する可能性が排除しえない。しかしながら、これらの触媒粒子は、特に全血を精製する際に、血液の諸成分との相互作用のせいで問題を生じうるため、このような触媒は全血と適合しない。
【０００９】
このため、本発明の目的は、全血と適合して、血液細胞へ接近しうる位置に基を有した吸着剤を提供することであり、これらの基は血液から分離すべき物質と相互作用しうるものである。更に、このような吸着剤が容易かつ経済的に製造しうる方法が提供される。
この目的は、請求の範囲で特徴づけられる態様により達成される。
【００１０】
特に、全血用の吸着剤は本質的に球形の非凝集粒子の形で提供され、この吸着剤は≦１．５μｍの平均孔度を有する多孔質キャリア物質からなり、孔容量の最大５０％が＞１．５μｍの孔度を有する孔に存在してよく、外表面が本質的に血液細胞と相互作用しないように、多孔質キャリア物質の外表面が少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を有し、多孔質キャリア物質の内表面、即ち、多孔質キャリア物質の孔の表面が、血中に存在する物質と相互作用する少くとも１種の表面修飾基Ｍ_２を有している。
【００１１】
本発明によると、粒子の“外表面”という用語は粒子を囲む表面に関する、と理解されている。
粒子の“内表面”という用語は、粒子の孔を形成する表面、即ち粒子の孔の表面に関する、と理解されている。
本発明による“相互作用”という用語には、全血中に含有される物質および／または細胞の活性化、結合、反応および／または損傷を含む。本発明によると、選択的相互作用が好ましい。別な態様によると、相互作用は特異的でもよい。
【００１２】
本発明による吸着剤は粒状である。本発明による吸着剤の粒子は本質的に球形で、凝集していない。球形粒子は、不規則形状粒子または粒子の不規則形状凝集物とは違い、望んでいないように、血小板のような血液粒子をそれらが留めない、という利点を有している。
【００１３】
本発明による吸着剤の多孔質キャリア物質は、≦１．５μｍ、好ましくは≦１．０μｍの平均孔度および／または平均孔径を有し、孔容量の最大５０％が＞１．５μｍの孔度を有する孔の形で存在する。１．５μｍの最大平均孔度は、約２μｍの直径を有する最少血液細胞の大きさにより定められている。本発明に従い規定されたような最大平均孔度は、本質的に血液細胞が孔中へ入り込めないことを保証している。非常に小さな粒子または溶解した粒子のみが血液から分離されるべきであるならば、低い平均孔径、例えば１μｍ、０．５μｍまたは０．３μｍを有する多孔質キャリア物質を選択することが好ましい。
【００１４】
本発明によると、平均孔度はＤＩＮ６６，１３３と類似した水銀押込み（水銀ポロシメトリー）により定められる。この方法は、選択圧力の相関として、多孔質固形物中へ注入された水銀容量の測定に基づいている。水銀のような非湿潤液は圧力下のみで多孔質系中へ入り込む。適用される圧力は、孔開口部の内径と反比例している。こうして水銀が適用圧力下で入り込める孔を検出する。円筒形孔の場合、孔半径ｒ_ｐと圧力ｐとの関係はＷａｓｈｂｕｒｎ式で表わされる：
【数１】

上記において、σは水銀の表面張力〔Ｎ／ｍ〕であり、θは液相で測定された試料における水銀の湿潤角である。ＤＩＮ６６，１３３との違いは、１４１．３°の一定値が湿潤角に用いられ、粒子間容量は平均孔度の測定に際して考慮されない。図２および３は、本発明に従い用いうる２つの多孔質キャリア物質の平均孔容量の測定を、例として示している。粒子間容量は右ピークで表わされ、約１０μｍより大きな値で始まる。左ピークは開孔の分布を示している。図２は約２００ｎｍの比較的小さな平均孔度を有するキャリア物質について示している。図３は約１μｍの大きな平均孔度を有するキャリア物質について示している。
【００１５】
更に、吸着剤粒子は好ましくは５０〜５００μｍ、更に好ましくは１００〜３００μｍの粒度を有している。全血に対して体外循環で用いられるとき、吸着剤の粒子は少くとも５０μｍの粒度を有しているべきであり、それは最大血球、即ち全血中に存在する血液細胞が２０μｍの直径を有しているからである。そのため、吸着剤を保持するスクリーンは、すべての血液細胞を通り抜けさせるために、少くとも２５μｍ、好ましくは少くとも４０μｍのメッシュを有していなければならない。更に、大きさが５０μｍ以上の吸着剤粒子で充填されたカラムにおける粒子間の空間は、血液細胞を通り抜けさせる上で十分なものにする。更に、スクリーン物質を選択するに際して、最少吸着物粒子の直径より常に小さいことが、メッシュ幅にとり重要である。
【００１６】
本発明による吸着剤は多孔質キャリア物質を含んでいる。外および内表面が本発明に従い修飾された、調製済みの多孔質粒状キャリア物質から出発することが、ここでは可能である。この態様による適切な物質には、ガラス、炭水化物、セファロース、シリカのようなキャリア物質、あるいはアクリレートまたはメタクリレートとポリアミドとのコポリマーのような有機キャリア物質がある。この態様におけるキャリア物質は、好ましくは有機物質、特に好ましくは（メタ）アクリレートエステルおよび／または（メタ）アクリルアミドから得られるコポリマーから製造される。それらは好ましくはエポキシ基を有している。“（メタ）アクリル”という用語は、対応アクリル系化合物および対応メタクリル系化合物の双方に関する、と理解されている。
【００１７】
しかしながら、キャリア物質として既に調製された粒子から出発する代わりに、対応モノマーから出発したポリマーに基づき多孔質粒子を製造し、こうして得られた多孔質ポリマー粒子の内および外表面を修飾することも可能である。
【００１８】
本発明に従い用いられる多孔質キャリア物質は、表面修飾基Ｍ_１および／またはＭ_２向けに用いうる修飾可能な結合部位をその外および内表面に有している。特に好ましい結合部位は、直接的な共有結合により、開環、特に求核性開環をうけて追加の官能基をキャリア物質へ結合させうる官能基として、歪のあるヘテロ環式系であり、こうしてその物質は表面修飾基Ｍ_１および／またはＭ_２のような官能基を有している。キャリア物質は、このような官能基用の結合部位として、特に好ましくはオキシラン基、特にエポキシ基を含んでいる。
【００１９】
エチレングリコールジ（メタ）アクリレートおよびグリシジル（メタ）アクリレートおよび／またはアリルグリシジルエーテルの重合により得られる架橋ランダムコポリマーが、キャリア物質として好ましい。
【００２０】
本発明の一態様において、ガラス、炭水化物、セファロース、シリカのような多孔質粒状キャリア物質または有機キャリア物質が第一ステップで用意され、好ましい架橋ランダムコポリマーが下記モノマー単位の重合により製造される：
（Ａ）１０〜３０重量％の量で（メタ）アクリルアミド
（Ｂ）３０〜８０重量％の量でＮ，Ｎ′‐メチレン‐ビス（メタ）アクリルアミド、および
（Ｃ）１０〜２０重量％の量でアリルグリシジルエーテルおよび／またはグリシジル（メタ）アクリレート：モノマー単位の総重量に各々基づく。
【００２１】
網状構造が、好ましくは懸濁重合により作製される。このようなコポリマーは、Ｒｏｈｍ ＧｍｂＨからブランド名Ｅｕｐｅｒｇｉｔ Ｃ２５０ＬおよびＥｕｐｅｒｇｉｔ ＦＥ１６２で市販されている。
【００２２】
本発明の一態様によると、“表面修飾基”という用語は、キャリア物質と結合したときに、溶液中に含有されたある物質または物質の基と好ましい選択的相互作用を生じうる能力を有している、キャリア物質の結合部位への結合に適した好ましい有機末端基、物質、化合物および／または前駆化合物に関する、と理解されている。
【００２３】
キャリア物質の粒子の外表面は、血液細胞との相互作用を本質的に行わない表面修飾基Ｍ_１を有し、即ち粒子の外表面は“滑らか”、即ち血液細胞に対して不活性である。
【００２４】
血液細胞に対して滑らかなこのような表面修飾基Ｍ_１は、文献で知られている。本発明による表面修飾基Ｍ_１は、好ましくは、少くとも１種のポリ（カルボン酸）、アルブミン、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ポリエチレンオキシド、ＰＥおよびポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）のブロックコポリマーおよび／またはポリミキシンとの、表面上における結合部位の反応による反応産物である。ポリアクリル酸およびヘパリンが特に好ましい例である。ポリ（メタ）アクリル酸という用語、および以下で用いられているような相当語は、アクリル酸、メタクリル酸またはそれらの混合物から誘導されうる化合物を表わす。ポリ（メタ）アクリル酸（ＰＡＡ）は、アクリル酸および／または（メチル）アクリル酸のラジカル重合により得られる式‐（ＣＨ_２‐Ｃ（Ｈ）（ＣＯＯＨ））_ｎ‐および／または‐（ＣＨ_２‐Ｃ（ＣＨ_３）（ＣＯＯＨ））_ｎ‐のポリマーである、と理解されている。しかしながら、ポリ（メタ）アクリル酸は、エステル、アミド、ニトリルのようなポリマー（メタ）アクリル酸誘導体の加水分解でも得られる。本発明による特に適切なポリ（メタ）アクリル酸は、例えば１０^２〜１０^７ｇ／ｍｏｌの重量平均分子量を有している。ポリミキシンは、グラム陰性菌に対してのみ有効なペプチド抗生物質である。ポリミキシンＢは、Ｌ‐２，４‐ジアミノ酪酸基およびＤ‐アミノ酸を有するシクロペプチドに関する。
【００２５】
一態様によると、表面修飾基Ｍ_１は血液細胞以外の物質と相互作用することがある。これは、表面修飾基Ｍ_１がもはや血液細胞といかなる相互作用も有さず、代わりにそれが血中に存在する他の物質と選択的に相互作用するならば可能である。この態様によると、表面修飾基Ｍ_１はこうした官能性表面修飾基でもよい。
【００２６】
表面修飾基Ｍ_２は血中に存在する物質と相互作用するため、孔中へ入り込めるほど十分に小さな物質のみが、選択された孔径に応じて、表面修飾基Ｍ_２と接触しうる。そのため、表面修飾基Ｍ_２はいわゆる官能性表面修飾基であり、その官能性表面修飾基は、例えば分離エフェクター、更には触媒または酵素にも関すると理解されている。分離エフェクターは、クロマトグラフィー分離または他の分配法、例えば液‐液分配に用いられる、選択的相互作用を生じる。
【００２７】
血液細胞は孔中へ入り込めず、そのため表面修飾基Ｍ_２と直接接触しないため、血液細胞と不適合性の表面修飾基Ｍ_２を吸着剤粒子の内表面へ形成することが可能である。
【００２８】
少くとも１種の表面修飾基Ｍ_２は、好ましくは、内表面上に存在する少くとも１種の免疫吸着物を含んでなる。“免疫吸着物”という用語は、免疫反応によりある物質または物質基へ、好ましくは特異的に結合しうる化合物に関する、と本発明では理解されている。特に好ましい免疫吸着物は、補体因子Ｃ１ｑを含む基、アミンを含む官能基、ペプチド、抗体、例えばモノクローナルまたはポリクローナル抗フィブリノーゲン抗体または抗フィブリン抗体および抗原、例えば合成ＡＢ血液型抗原と、ＤＮＡおよびＲＮＡまたはそれらの鏡像分子から選択されるものである。
【００２９】
表面修飾基Ｍ_１および／またはＭ_２が官能基を伴うとき、それらはスペーサーを介してキャリア物質へ共有結合されてもよい。“スペーサー”とは、様々な化学構造および長さを有する有機橋状部分に関するもので、その介助により有機官能基がキャリア物質の表面に結合される、と理解されている。好ましくは、しかしながら、表面修飾基Ｍ_１および／またはＭ_２のような官能基は、スペーサーなしでキャリア物質の表面へ直接結合されている。官能基をキャリア物質へ直接結合させると、１つの反応ステップを省ける。
【００３０】
そのため、吸着剤物質の内表面上に適切な表面修飾基Ｍ_２が存在している場合、全血中に存在する物質が多孔質キャリア物質の選択平均孔度とほぼ同様の直径または好ましくはそれより小さな直径を有しているならば、それらを分離することが可能である。平均孔度は好ましくは有効な分離のために選択され、そのため孔は分離すべき粒子よりもかなり大きい。
【００３１】
例えばガンマ線、プラズマ処理またはエチレンオキシド処理による、滅菌（特に、例えば１２１℃加熱滅菌）の可能性は、このような吸着剤の使用にとり重要であり、それは血液が患者へ治療後に戻されねばならず、それがいかなる敗血症または炎症も起してはならないからである。１２１℃で１バール圧力の加熱滅菌が、必要ならば滅菌前処理と組み合わせると好ましい。
【００３２】
本発明による吸着剤の場合、たとえ分離に必要な表面修飾基Ｍ_２が血液細胞と有害な相互作用を有するとしても、血中に存在する物質を全血から分離することが可能であり、それは表面修飾基Ｍ_２が排他的に存在する内壁上における吸着剤の孔中へ血液細胞が入り込めないからである。これは、血液細胞の分離、単離血漿の処理および血液成分の混合のような体外ステップを省けるため、この方法の生体適合性を増し、更には補体活性化のリスクをかなり減らす。体外ステップの省略は処理時間を短縮して、その方法を簡素化するため、患者の安全性および満足感を増す。
【００３３】
本発明は吸着剤の製造方法にも関し、それは次のステップからなる：
‐内および外表面上に修飾可能な結合部位を有する多孔質粒状キャリア物質を用意し、
‐充填条件下で液体であって、キャリア物質の表面上にある結合部位が本質的に完全に修飾されうる溶液と（修飾条件下で）本質的に混和性でない、少くとも１種の媒体によりキャリア物質の孔を満たし、
‐キャリア物質の外表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させ、および
‐場合により、孔から媒体を除去する；その媒体は、キャリア物質の表面上にある結合部位が本質的に完全に修飾されうる溶液と、（修飾条件下で）本質的に混和性でない。
【００３４】
好ましくは、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させる、キャリア物質の外表面上にある結合部位の本質的に完全な修飾のステップ、または孔から媒体を除去するステップの後に〔この媒体は、キャリア物質の表面上にある結合部位が本質的に完全に修飾されうる溶液と、（修飾条件下で）本質的に混和性でない〕、キャリア物質の内表面上にある結合部位が、表面修飾基Ｍ_１を修飾しえない反応溶液で少くとも１種の表面修飾基Ｍ_２を形成するように修飾される。
【００３５】
本発明による方法の一態様のキャリア物質の孔を満たすために上記されたステップに従い、まず充填条件下で液体である媒体によりキャリア物質の孔が満たされる。この媒体は、キャリア物質の表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成しうる溶液と、（修飾条件下で）本質的に混和性でない。
【００３６】
“充填条件下で液体（である）媒体”という語句は、本発明によると、キャリア物質の孔中へ注入または導入でき、これらの孔から本質的に完全に再び除去できて、キャリア物質の表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成しうる溶液と（修飾条件下で）本質的に混和性でない媒体を意味する。このような媒体は、単一媒体、少くとも２種の媒体および／または溶液の混合物からなる。
【００３７】
一般に、媒体は室温で液体のものである。しかしながら、特別な態様によると、媒体は室温で気体でもよい。その際には、例えば低温および／または高圧で、孔が満たされ、外表面上の結合部位がこれらの条件下で修飾される。この態様は、室温で気体の媒体が特に容易に再び孔から除去されうる、という利点を有している。別な態様によると、媒体は室温で固体でもよい。その際には、例えば加熱しながら、キャリア物質の孔が満たされる。この態様は、例えば長時間の反応向けに、孔が特に永続的に媒体で満たされる、という利点を有している。
【００３８】
実際には、孔のこの充填は、最も簡単な場合で、室温で液体である媒体に多孔質キャリア物質の粒子を浸し、それらをこの媒体で膨潤させることにより、媒体で行われ、こうして空気がキャリア物質の孔から本質液に完全に出される。更に、粒子は気密容器へ入れてもよく、そこでは真空に付すことにより、容器から、ひいては多孔質キャリア物質の孔からも空気が除去されて、媒体が、この媒体が液体という条件下で、排気容器中の粒子へ加えられる。
【００３９】
粒子の膨潤後に、過剰の液体媒体は、例えば、孔中に存在する媒体を除去せずにキャリア物質粒子からそれを除去するために、吸引フィルターで単に吸引してもよい。次いで、キャリア物質の表面上にある結合部位を修飾して、表面修飾基Ｍ_１を形成するための反応溶液が、粒子へ加えられる。
【００４０】
本発明によると、孔を満たすための媒体は、（修飾条件下で）この反応溶液と本質液に混和性でない。そのため、好ましくは疎水性媒体が、外表面のＭ_１修飾に際して、および／または水性反応溶液を用いるときに、孔充填および／または孔形成媒体として用いられる。疎水性媒体として使用向けの特に好ましい媒体には、直鎖または分岐、環式または非環式Ｃ_１‐Ｃ_２０アルカン、例えばペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン、シクロヘキサン、直鎖または分岐、環式または非環式Ｃ_５‐Ｃ_２０アルカノール、例えばヘキサノール、オクタノール、デカノール、ウンデカノールおよびドデカノール、直鎖および分岐、環式または非環式Ｃ_２‐Ｃ_３０カルボキシレートエステルおよび芳香族Ｃ_６‐Ｃ_２０炭化水素並びにそれらの混合物からなる群のものがある。
【００４１】
キャリア物質の外表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成しうる溶液と、（修飾条件下で）本質的に混和性でない媒体で孔を満たした後、キャリア物質の外表面上にある結合部位が反応により本質的に完全に修飾されて、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成する。
【００４２】
本発明によると、“本質的に完全な修飾”という語句は、キャリア物質の表面上に存在する本質的にすべての結合部位が、外表面上または内表面上で表面修飾基Ｍ_１および／またはＭ_２を形成するように反応して、そのため本質的にフリーのまたは修飾可能な結合部位がキャリア物質の各表面上に残存していないことを意味する。このような本質的に完全な修飾を行うために、各反応溶液は好ましくは過剰の修飾剤を含有している。
【００４３】
本発明に従い用いられる“修飾”という用語には、多孔質キャリア物質の各表面上で結合部位を変化、反応、形成および／または破壊させることを含む。好ましい態様によると、“修飾する”という用語には、表面修飾基Ｍ_１および／またはＭ_２を形成する、例えば求核剤または求電子剤との、多孔質キャリア物質の表面上における結合部位の反応を含む。本発明による表面修飾基Ｍ_１は、好ましくは血液と相互作用しない特性を有し、その一方で表面修飾基Ｍ_２は血液のような溶液、懸濁液または分散液中に存在する分離すべき物質と相互作用する。
【００４４】
キャリア物質の外表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成した後、修飾に必要な反応溶液と、場合により、キャリア物質の外表面上にある結合部位を修飾して少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成しうる溶液と本質的に混和性でない媒体も、例えば、必要ならば長時間にわたる吸引、加熱、真空適用により、および／または、容易に除去される別の媒体でそれらを洗い落とすことにより、孔から除去される。
【００４５】
好ましい態様によると、多孔質キャリア物質の内表面上にある結合部位が、多孔質キャリア物質の外表面上にある結合部位の修飾後に修飾される。表面修飾基Ｍ_２用の反応溶液が孔中に存在する媒体と混和性であるならば、その媒体は孔中に残し、必ずしも除去しなくてよく、何故ならば、結合部位を修飾して表面修飾基Ｍ_２を形成する反応溶液と孔中の媒体とを混ぜて、孔中へこの反応溶液を拡散させることにより、孔中で結合部位を修飾することも可能だからである。しかしながら、ほとんどの場合において、まず媒体を孔から除去することが好ましい。キャリア物質の内表面も、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_２を形成するように、好ましくは本質的に完全に修飾される。
【００４６】
別な態様によると、表面修飾基Ｍ_１を形成する、外表面上にある結合部位の修飾前に、表面修飾基Ｍ_２が多孔質キャリア物質の表面上に存在してもよい。この態様によると、最初に内および外表面上にあるすべての結合部位は、必要であれば、表面修飾基Ｍ_２を形成するように反応させてよい。しかしながら、修飾なしでＭ_２の所要結合特性を有することも、キャリア物質の結合部位にとり可能である。Ｍ_２基を有するこのようなキャリア物質は、場合により修飾されて、本発明による方法において、内および外表面上に修飾可能な結合部位を有する多孔質粒状キャリア物質を調製するステップで、キャリア物質として用意される。次いで、以下のステップが本発明による方法の一態様に従い行われる：充填条件下で液体であって、キャリア物質の表面上にある結合部位が本質的に完全に修飾されうる溶液と（修飾条件下で）本質的に混和性でない、少くとも１種の媒体によりキャリア物質の孔を満たし；キャリア物質の外表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させ、場合により孔からその媒体を除去する；その媒体は、キャリア物質の外表面上にある結合部位が本質的に完全に修飾されうる溶液と、（修飾条件下で）本質的に混和性でない；キャリア物質の外表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させるステップにおいて、キャリア物質の外表面上にある修飾可能な結合部位の修飾は、例えば表面修飾基Ｍ_２を壊すことで行ってもよい。
【００４７】
別な態様によると、外表面および内表面上に修飾可能な結合部位を有する多孔質粒状キャリア物質を用意した後、キャリア物質の外表面上にある結合部位を本質的に完全に反応させて、表面修飾基Ｍ_１を形成させることにより、本発明による吸着剤を製造することも可能であり、この反応は、キャリア物質を透過しない本質的に非透過性の光照射により誘導される。このような光は孔中へ入り込めないため、表面修飾基Ｍ_１を形成させる結合部位の反応はキャリア物質の孔中で生じない。次いで、キャリア物質の内表面上にある結合部位も反応させて、表面修飾基Ｍ_２を形成してよいが、必要ならば、この反応は前記の光照射なしに誘導される。
【００４８】
このように、この態様による方法は次のステップからなる：
‐表面修飾基Ｍ_１および／またはＭ_２を形成するように反応しうる修飾可能な結合部位を外表面および内表面上に有する多孔質粒状キャリア物質を用意し、
‐キャリア物質を本質的に透過しない光照射により誘導される反応により、キャリア物質の外表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させ、および
‐場合により、表面修飾基Ｍ_１を修飾しない反応により、キャリア物質の内表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_２を形成させる。
【００４９】
キャリア物質を本質的に透過しない光は、好ましくは、ＵＶまたは可視範囲の電磁線である。
【００５０】
この方法によると、用意される多孔質キャリア物質が、全表面上に修飾可能な表面修飾基Ｍ_２を既に有すること、および内表面上にある結合部位の修飾が、外表面上にある結合部位の本質的に完全な修飾後にもはや不要となることも、可能である。
【００５１】
本発明の好ましい態様によると、本発明による吸着剤を形成するように修飾しうる上記の多孔質キャリア物質は、下記の懸濁重合プロセスによりある重合性化合物から出発して、前記のように製造される。
【００５２】
吸着剤を製造するこの方法は次のステップからなる：
‐少くとも１種のモノマー、少くとも１種の架橋剤、孔形成媒体および重合開始剤を含有した疎水相が、水および少くとも１種の保護コロイドを含有した連続相に分散され、疎水相中のモノマーおよび架橋剤が重合されて、得られた多孔質粒状キャリア物質の孔が孔形成媒体で満たされるような懸濁重合により、内および外表面上に修飾可能な結合部位を有する多孔質粒状キャリア物質を製造し、
‐キャリア物質の外表面上にある修飾可能な結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させ、および
‐場合により、孔から孔形成媒体を除去する。
【００５３】
本発明の別な好ましい態様によると、本発明による吸着剤を形成するように修飾しうる多孔質キャリア物質は、下記の懸濁重合プロセスにより製造してもよく、その場合に水溶性モノマーが水性連続相へ加えられるため、キャリア物質の多孔質粒子の製造およびこれら粒子の外表面の修飾は１ステップで行われる。
【００５４】
好ましい吸着剤を製造するこの方法は次のステップからなる：
‐少くとも１種のモノマー、少くとも１種の架橋剤、孔形成媒体および重合開始剤を含有した疎水相が、水、少くとも１種の保護コロイドおよび疎水相に本質的に不溶性の少くとも１種の水溶性モノマーを含有した連続相に分散され、疎水相中に存在するモノマーおよび架橋剤が重合されて、多孔質コアを形成し、疎水相と連続相との相界面で少くとも１種の水溶性モノマーが重合されて、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成し、水溶性モノマーから形成されたポリマー鎖の少くとも一部がこうして形成された多孔質コアと共有結合するような懸濁重合により、内および外表面上に修飾可能な結合部位を有する多孔質粒状キャリア物質を製造し、および
‐場合により、孔から孔形成媒体を除去する。
【００５５】
上記の懸濁重合プロセスでは、当技術分野で常用される保護コロイドおよび／または安定剤も水性連続相で用いてよい。好ましくは、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびポリエチレングリコールからなる群より選択される１種以上の保護コロイドが用いられる。
【００５６】
疎水相中に存在するモノマーは、好ましくは、エポキシ基を有するモノマー、またはエポキシ基を有するモノマーと少くとも１種の追加モノマーとの混合物である。しかしながら、前記のように、官能基として歪のあるヘテロ環式系、例えばアジリジン基またはエピスルフィド基を有する他のモノマーも用いてよい。エポキシ基を有するモノマーは、好ましくは、エポキシ基を有する（メタ）アクリル酸モノマーである。本発明で用いられる“エポキシ基を有する（メタ）アクリル酸モノマー”という用語は、エポキシ基を有する部分が置換または非置換（メタ）アクリル酸のエステル官能基を介して結合された、このようなモノマーに主に関する、と理解されている。しかしながら、例えばＣ‐Ｃ二重結合の炭素の１つで、ある他の手法により（メタ）アクリル酸モノマーへ結合されることも、エポキシ基を有する部分で考えられる。特に好ましい態様によると、エポキシ基を有する（メタ）アクリル酸モノマーはグリシジル（メタ）アクリレートである。
【００５７】
上記の懸濁重合プロセスにおいて、少くとも２つの重合可能基を有するモノマーが架橋剤として用いられ、成長ポリマー鎖の架橋をもたらす。“架橋剤”という用語は、少くとも２つの重合可能基を有する、当技術分野で用いられている慣例的モノマーに関すると理解されており、その重合可能基には例えばビニル基、アクリレート基またはメタクリレート基がある。好ましくは、（メタ）アクリル酸をベースにしたモノマーが、少くとも２つの重合可能基を有するモノマーとして用いられる。特に好ましい態様によると、少くとも２つの重合可能基を有するモノマーはエチレングリコールジ（メタ）アクリレートである。更に、このようなモノマーの２つの（メタ）アクリレート基は、例えばα，ω‐ジオールまたは一般的には少くとも２つのＯＨ基を有するアルコールから誘導される別の連結基で結合してもよい。疎水相中のモノマー含有率をベースにした架橋剤の量は、５〜９５重量％、好ましくは２０〜６０重量％、特に好ましくは４０重量％である。
【００５８】
前記の懸濁重合プロセスにおいて、孔形成媒体は、炭素５〜１４の直鎖、分岐または環式アルコール、および１〜６の炭素を有する一価または多価アルコールでエステル化された炭素２〜１０のモノまたはジカルボン酸のエステルから選択される、少くとも２種の成分の混合物である。上記孔形成媒体の一成分として、炭素５〜１４の直鎖、分岐または環式（一級、二級または三級）アルコール、例えばヘキサノール、オクタノール、デカノールまたはドデカノールがある。上記孔形成媒体の他成分として、１〜６の炭素を有する一価または多価アルコールでエステル化された炭素２〜１０のモノまたはジカルボン酸のエステル、例えば酢酸ブチル、コハク酸ジエチルまたはグリセロールトリブチレートがある。２成分の混合物が孔形成媒体または孔形成剤として用いられ、得られるポリマーはいずれの成分にも不溶性であるが、１成分は懸濁重合で形成されたオリゴマーを溶解し、他成分は得られたオリゴマーを溶解しえない。孔の形成は孔形成媒体の成分の特別な選択により可能とされる。ポリマーキャリア物質に孔を形成する上記の方法は、当業者に公知である。更に、例えば、孔形成媒体の適切な選択または成分の比率を変えることによる日常実験で、所望どおりに孔容量および孔径を調整することが可能である。これに関して、“オリゴマー”という用語は、上記のように懸濁重合プロセスで形成される約１０^４ｇ／ｍｏｌ以内の分子量を有した物質に関する、と理解されている。ドデカノールおよびシクロヘキサノールの混合物および／またはコハク酸ジエチルおよびドデカノールの混合物が、孔形成媒体として特に好ましい。疎水相をベースにした上記孔形成媒体の量は、２０〜９０重量％、好ましくは４０〜８０重量％、特に好ましくは７０重量％である。
【００５９】
前記の懸濁重合プロセスで用いられる重合開始剤は、一般的にいかなる特定の制限にも付されない。例えば、アゾ化合物、過酸化物およびレドックス開始剤の群からの重合開始剤も用いてよい。好ましくは、適切なアゾ化合物または適切な過酸化物が重合開始剤として用いられる。重合開始剤は、特に好ましくはアゾビスイソブチロニトリルまたは過酸化ジベンゾイルである。モノマーの量をベースにした重合開始剤の量は、０．１〜５重量％、好ましくは０．５〜２重量％、特に好ましくは１重量％である。
【００６０】
水溶性モノマーが水性連続相へ加えられる上記の懸濁重合プロセスにおいて、水溶性モノマーには一官能性ビニル化合物がある。水溶性モノマーは、好ましくは１以上の極性基を有している。水溶性モノマーは、特に好ましくは、ヒドロキシアルキルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレート、Ｎ‐ビニル‐２‐ピロリドン、アクリロニトリルおよびメタクリロニトリル、アクリル酸およびメタクリル酸、アリルアルコール、アリルアミン、３‐アリルオキシ‐１，２‐プロパンジオール、（エチレングリコール）_ｎ‐ビニルメチルエーテル（ｎ＝１〜１０）、Ｎ‐メチロール‐アクリルアミド、２‐アクリルアミド‐２‐メチルプロパンスルホン酸およびビニルベンゼンスルホン酸の塩、ビニルスルホン酸並びにそれらの組合せから選択される。好ましいヒドロキシアルキルメタクリレートおよび／またはアミノアルキルメタクリレートは、炭素１〜１０のアルキル基、例えばエチル、プロピルまたはブチル基を有するものである。アクリル酸、Ｎ‐ビニル‐２‐ピロリドンまたはそれらの組合せであることが、水溶性モノマーにとり更に一層好ましい。水溶性モノマーの量は、多孔質キャリア物質のモノマーの総出発重量をベースにすると、２〜８０重量％である。水溶性モノマーの量は、多孔質キャリア物質のモノマーの総出発重量をベースにすると、好ましくは５〜５０重量％、特に好ましくは２０〜３０重量％である。
【００６１】
本発明は、全血から毒素のような生体分子および／または病原物質を分離するための、本発明による吸着剤の使用にも関する。例えば、ＬＤＬおよび内毒素、免疫グロブリン、フィブリン、フィブリノーゲン、免疫複合体、外毒素、フィブロネクチンおよび／または超抗原のような生体高分子が除去されうる。
【００６２】
更に、本発明は、全血から生体分子および／または病原物質を分離する、ハウジングおよびその中の吸着剤からなる吸着器の製造のための、本発明による吸着剤の使用にも関する。本発明に従い製造された吸着剤を備える吸着器は、好ましくはチューブまたはカラムの形でデザインされて、パッキング物質として吸着剤を含有したハウジングを有している。本発明による吸着器で通常処理される血液の量およびその効率に関して、吸着器は好ましくは２５０〜１２５０ｍｌの容量を有している。吸着器は操作に際して個別に、二重にまたは多数で用いられる。２以上の吸着器がある場合、再生されている別の吸着器と交互に、血液を１つの吸着器へ付せるという可能性がある。これは、本発明に従い製造される吸着剤の使用に際して、大きな効率をもたらす。吸着剤を含有した吸着器は、好ましくは、血液が吸着器へ供給されるヘッドエンドに入口部分を備えたハウジングを有するようにデザインされ、この場合に出口は吸着器のハウジングの底に存在する。
【００６３】
望ましくない物質、例えば吸着剤物質から生じる物質が、処理済み血液と共に患者の血流へ戻らないようにするため、吸着器のハウジングの出口にフィルターが好ましくは設けられる。それは好ましくは粒状フィルターである。
本発明は下記例から更に説明される。
【００６４】
例
例１
反応溶液Ｉ：ＣＭＥＣＤＩ（２‐モルホリノ‐エタンスルホン酸一水和物）７５ｍｇを４℃でｐＨ４．７５の０．１Ｍ ＭＥＳ（Ｎ‐シクロヘキシル‐Ｎ′‐（２‐モルホリノエチル）カルボジイミドメチル‐ｐ‐トルエンサルフェート）２００ｍｌに溶解した；重量平均分子量８００，０００のポリアクリル酸７５ｍｇを加え、ｐＨを４．７５に調整し、混合液を４℃で０．５時間攪拌した。
【００６５】
丸底フラスコに、２５％ＮＨ_３溶液７５ｍｌ中キャリア物質粒子（Ｅｕｐｅｒｇｉｔ Ｃ ２５０Ｌ）７５ｍｌを一夜攪拌した。キャリア物質粒子を水で３回洗浄し、デカントし、吸引濾過し、水で再び洗浄して、乾燥させた。
【００６６】
キャリア物質粒子をｎ‐ヘキサン１００ｍｌ中で３０分間かけて膨潤させ、その後吸引フィルターで１５秒間にわたり吸引濾過し、次いで４℃で上記の反応溶液Ｉへ直ちに加え、その後４℃で一夜混合攪拌した。次いで粒子を吸引濾過し、水、４Ｍ ＮａＣｌおよび再び水で洗浄し、真空デシケーター中ＣａＣｌ_２で乾燥させた。
【００６７】
これらの粒子４０ｍｌを０．２５％グルタルジアルデヒド溶液５０ｍｌと一緒に４０℃で２時間攪拌した。次いで粒子を水７．５Ｌで洗浄し、吸引しながら乾燥させた。
【００６８】
Ｃ１ｑ溶液１８ｍｌにリン酸緩衝液（ＰＢＳ、０．１Ｍ ＮａＨ_２ＰＯ_４、０．１５４Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ６．８）３２ｍｌを加え、２８０ｎｍのＵＶ吸収を測定した。２８０ｎｍで測定された吸収値は１．０４０であったが、これは１．５３ｇ／Ｌの濃度に相当する（反応溶液ＩＩ）。
【００６９】
この溶液に反応溶液Ｉで処理された粒子を加え、混合液を室温で３時間攪拌し、次いで吸引濾過した。溶液は２８０ｎｍで０．５７７のＵＶ吸収値を有していたが、これは０．８５ｇ／Ｌの濃度に相当する。そのため、反応溶液ＩＩのカップリング収量は０．６８ｇ／Ｌであった。
【００７０】
次いで粒子をＰＢＳ６００ｍｌで洗浄し、ＰＢＳ中５ｍＭアルコルビン酸２００ｍｌで２回にわたり各々室温で１時間攪拌し、吸引濾過した。粒子をｐＨ８のＰＢＳ中１Ｍエタノールアミン中で４時間にわたり室温で攪拌し、吸引濾過した。次いで粒子をＰＢＳ中５ｍＭアルコルビン酸２００ｍｌで２回にわたり各々室温で１時間攪拌し、吸引濾過した。次いで粒子を下記溶液で洗浄した：
１．４００ｍｌ、０．１Ｍアセテート、０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ４
２．４００ｍｌ、１Ｍ ＮａＨ_２ＰＯ_４、０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ９
３．４００ｍｌ、０．１Ｍ ＮａＨ_２ＰＯ_４、０．１５４Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ６．８
４．２Ｌ、０．１５４Ｍ ＮａＣｌ
最後に、粒子を加熱滅菌のため０．１５４Ｍ ＮａＣｌ中１２１℃で２０分間オートクレーブ処理した。
【００７１】
例２〜６
表１で掲載されているような媒体、表面修飾基などを用いて、吸着剤物質を例１で記載されたものと同様の手法で製造した。
比較目的のために、内および外双方の表面に表面修飾基としてＣ１ｑ（比較例１）、ＰＡＡ（比較例２）またはＯＨ基（比較例３）を有する吸着剤を、比較目的のために製造した。

注記：
すべてのビーズは１００〜２００ｎｍの平均孔度を有していた。
Ｅｕｐｅｒｇｉｔ ２５０Ｌをビーズ１に用いた。
ビーズ２は、エチレングリコールジ（メタ）アクリレートおよびグリシジルメタクリレートおよびアリルグリシジルエーテルの重合により製造されたランダムコポリマー製であった。
【００７２】
血小板および／または免疫複合体への結合能力に関する試験の結果は、表２で示されている。

【００７３】
例１〜６で記載されたような本発明によるすべての吸着物は免疫複合体への結合能力を有しているが、血小板と相互作用しないことが、この表２からわかる。外表面上にＣ１ｑ表面修飾基も有する吸着剤は免疫複合体に加えて全血から血小板も濾過し（比較例１）、そのためこの吸着物は全血を精製する上で適さないであろう。表面修飾基としてＰＡＡのみを有する吸着物（比較例２）は全血と適合したが、免疫複合体へのいかなる結合部位も有さず、そのためそれは免疫複合体を分離することが不可能であった。表面修飾基Ｍ_１としてＯＨ基を有する吸着剤は、血小板と弱い相互作用を有した。この理由から、ＯＨ基とは異なる表面修飾基Ｍ_１が本発明によると好ましい。
【００７４】
例７
ステップＡ（懸濁重合による多孔質キャリア物質の製造）
多孔質キャリア物質を、例えば、欧州特許出願０ ４９５ １０７Ａ１に従い懸濁重合により製造する。得られたキャリア物質（ビーズ）を０．５バールの過剰圧で３０秒以内に母液から濾取する。
【００７５】
ステップＢ（キャリア物質の外表面のアミノ化）
ステップＡからの湿潤キャリア物質１００ｇを、２５重量％アンモニア（Ｆｌｕｋａ）３００ｍｌと一緒に回転攪拌機で３時間にわたり室温でインキュベートした。次いで反応溶液を０．５バールの過剰圧で濾過してキャリア物質を分離し、これを中性になるまで蒸留水で洗浄した。
【００７６】
ステップＣ（表面修飾基Ｍ _１ によるキャリア物質の外表面の修飾）
１０重量％ポリアクリル酸溶液（Ｄｅｇａｐａｓ １１１０５Ｓ，Ｓｔｏｃｋｈａｕｓｅｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）２５ｇを等張ＮａＣｌ溶液１７５ｇに溶解し、４．７５のｐＨに調整し、等張ＮａＣｌ溶液５０ｍｌ中Ｎ‐（３‐ジメチルアミノプロピル）‐Ｎ′‐エチルカルボジイミド塩酸（Ｆｌｕｋａ）１．２５ｇの溶液と回転攪拌機で４５分間にわたり室温でインキュベートした。
次いで、ステップＢの溶液から濾過されたキャリア物質をこの溶液へ加え、回転攪拌機で４時間にわたり室温でインキュベートした。
【００７７】
ステップＤ（キャリア物質の孔空間の洗浄）
上記の修飾溶液の吸引濾過後、キャリア物質を５０％イソプロパノール中０．０５Ｍ水酸化ナトリウム溶液６００ｍｌで１回、イソプロパノール６００ｍｌで４回および蒸留水６００ｍｌで２回洗浄した。
【００７８】
ステップＥ（キャリア物質の内表面のアミノ化）
ステップＤに従い得られたキャリア物質の内表面のアミノ化をステップＢと同様に行ったが、但し４０℃で１２．５％アンモニアを用いた（反応時間４時間）。
【００７９】
ステップＦ（表面修飾基Ｍ _２ へのアミノ基のカップリング）
ステップＥからのキャリア物質をＮａＨ_２ＰＯ_４緩衝液（ｐＨ６．８）（ＰＰ緩衝液）２５０ｍｌで４回洗浄した。次いでキャリア物質をＰＰ緩衝液中０．４％グルタルジアルデヒド溶液（Ｆｌｕｋａ）３００ｍｌで回転攪拌機で２時間にわたり４０℃でインキュベートし、１２回にわたり各々蒸留水１Ｌで洗浄し、ｐＨ＝６．８にＰＰ緩衝液１Ｌで４回平衡化した。次いでグルタルジアルデヒド基をｐＨ８で蒸留水中エタノールアミン溶液（Ｆｌｕｋａ）３００ｍｌと反応させ（４時間、室温、回転攪拌機）、キャリア物質を４回にわたり各々ＰＰ緩衝液２５０ｍｌで洗浄した。次いでキャリア物質をＰＰ緩衝液中５ｍＭアスコルビン酸溶液（Ｆｌｕｋａ）２５０ｍｌと一緒に（暗所下）回転攪拌機で４時間にわたり室温でインキュベートし、各々５００ｍｌの以下で洗浄し：
等張ＮａＣｌ溶液中ｐＨ４．６の０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、
等張ＮａＣｌ溶液中ｐＨ９の０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液
等張ＮａＣｌ溶液中ｐＨ７．４の０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液
等張ＮａＣｌ溶液（４回）
次いで１２１℃で２０分間オートクレーブ処理した。
【００８０】
例８
多孔質キャリア物質を例７で記載されたものと同様の手法で製造したが、但しステップＤはステップＣの前に行った。
【００８１】
比較例４および５
比較目的のため、吸着剤を例７で記載されたように製造したが、但しそれらは内および外双方の表面において表面修飾基Ｍ_１のみ（比較例４）または表面修飾基Ｍ_２のみ（比較例５）で修飾した。
表３は血小板およびフィブリノーゲンへの結合能力の試験の結果をまとめている。

【００８２】
例９（水相中水溶性モノマーの存在下で懸濁重合による多孔質キャリア物質の製造）
４ブレードパドルスターラーを備えた二重ジャケット付きガラスリアクター中で、ポリビニルアルコール（Ｗ２５／１９０，Ｅｒｋｏｌ）１．５ｇおよび蒸留水７４４ｇを溶解するまで攪拌した。次いで、シクロヘキサノール１３５ｇ、ドデカノール（Ｆｌｕｋａ）１３ｇ、エチレングリコールジメタクリレート（Ｒｏｈｍ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ）４０ｇ、グリシジルメタクリレート （Ｔｒａｎｓｏｌ） ６０ｇおよびアゾビスイソブチロニトリル（Ｖａｚｏ ６４，ＤｕＰｏｎｔ）１．１ｇからなる溶液を加えた。反応混合液を２７０ｒｐｍで３０分間攪拌し、次いで６５℃へ加熱して重合を始めた。６０℃の温度に達したら、アクリル酸（Ｍｅｒｃｋ）１９ｇを反応混合液へ加えた。更に６５℃で５時間および７８℃で４時間後、混合液を１．５時間にわたり９１℃へ加熱した。室温まで冷却した後、こうして形成されたビーズポリマーを濾取し、イソプロパノールで何度も（４００ｍｌで１２回）洗浄し、分別した。
【００８３】
上記のように形成された湿潤キャリア物質１００ｇを、２５重量％アンモニア（Ｆｌｕｋａ）と一緒に回転攪拌機で３時間にわたり室温でインキュベートした。次いで反応溶液を０．５バールの過剰圧で濾過してキャリア物質を分離し、これを中性になるまで蒸留水で洗浄した。
【００８４】
上記のキャリア物質をＮａＨ_２ＰＯ_４緩衝液（ｐＨ６．８）（ＰＰ緩衝液）２５０ｍｌで４回洗浄した。次いでキャリア物質をＰＰ緩衝液中０．４％グルタルジアルデヒド溶液（Ｆｌｕｋａ）３００ｍｌと一緒に回転攪拌機で２時間にわたり４０℃でインキュベートし、１２回にわたり各々蒸留水１Ｌで洗浄し、ｐＨ＝６．８にＰＰ緩衝液１Ｌで４回平衡化した。次いでグルタルジアルデヒド基をｐＨ８で蒸留水中０．２５Ｍエタノールアミン溶液（Ｆｌｕｋａ）３００ｍｌと反応させ（４時間、室温、回転攪拌機）、キャリア物質を４回にわたり各々ＰＰ緩衝液２５０ｍｌで洗浄した。次いでキャリア物質をＰＰ緩衝液中５ｍＭアスコルビン酸溶液（Ｆｌｕｋａ）２５０ｍｌと一緒に（暗所下）回転攪拌機で４時間にわたり室温でインキュベートし、各々５００ｍｌの以下で洗浄し：
等張ＮａＣｌ溶液中ｐＨ４．６の０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液、
等張ＮａＣｌ溶液中ｐＨ９の０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液
等張ＮａＣｌ溶液中ｐＨ７．４の０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液
等張ＮａＣｌ溶液（４回）
次いで１２１℃で２０分間オートクレーブ処理した。
【００８５】
比較例６
比較目的のため、多孔質キャリア物質を例９で記載されたように製造したが、但しアクリル酸は反応混合液へ（即ち、反応相へ）加えなかった。
【００８６】
比較例７
比較目的のため、担体物質を例９で記載されたように製造し、多孔質キャリア物質の内および外表面上においてポリアクリル酸で処理した。
表４は、例９と比較例６および７に従い製造された多孔質キャリア物質の血小板およびフィブリノーゲン結合能力を調べた試験の結果をまとめている。

【図面の簡単な説明】
【図１】
孔３および修飾可能な結合部位４と、そこに結合した表面修飾基Ｍ_１およびＭ_２をもつキャリア物質２を有した、本発明による吸着剤粒子１の態様に関する断面図を示している。キャリア物質２の孔３は、表面修飾基Ｍ_２を結合させた“内”表面６により囲まれている。“外”表面５、即ち吸着物粒子１を囲む表面上の結合部位は、内表面６上の表面修飾基Ｍ_２とは異なる表面修飾基Ｍ_１により占められている。
【図２】
例えば、下記のようにＤＩＮ６６，１３３と類似した方法により、本発明による吸着剤で測定された、２つの孔度分布を示している。
【図３】
例えば、下記のようにＤＩＮ６６，１３３と類似した方法により、本発明による吸着剤で測定された、２つの孔度分布を示している。

Claims (43)

1. ‐外および内表面上に修飾可能な結合部位を有する多孔質粒状キャリア物質を用意し、
   ‐充填条件下で液体であって、キャリア物質の表面上にある結合部位が本質的に完全に修飾されうる溶液と修飾条件下で本質的に混和性でない、少くとも１種の媒体によりキャリア物質の孔を満たし、
   ‐キャリア物質の外表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させ、
   ‐場合により、孔から媒体を除去し、ここで、この媒体が、キャリア物質の外表面上にある結合部位が本質的に完全に修飾されうる溶液と、修飾条件下で本質的に混和性でないこと
   からなる、吸着剤の製造方法。
2. ‐少くとも１種のモノマー、少くとも１種の架橋剤、孔形成媒体および重合開始剤から作製された疎水相が、水および少くとも１種の保護コロイドから作製された連続相に分散され、疎水相中に存在するモノマーおよび架橋剤が重合されて、得られた多孔質粒状キャリア物質の孔が孔形成媒体で満たされるような懸濁重合により、外および内表面上に修飾可能な結合部位を有する多孔質粒状キャリア物質を製造し、
   ‐キャリア物質粒子の外表面上にある修飾可能な結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させ、
   ‐場合により、孔から孔形成媒体を除去すること
   からなる、吸着剤の製造方法。
3. ‐少くとも１種のモノマー、少くとも１種の架橋剤、孔形成媒体および重合開始剤から作製された疎水相が、水、少くとも１種の保護コロイドおよび疎水相に本質的に不溶性の少くとも１種の水溶性モノマーから作製された連続相に分散され、疎水相中に存在するモノマーおよび架橋剤が重合されて、多孔質コアを形成し、疎水相と連続相との相界面で少くとも１種の水溶性モノマーが重合されて、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成し、水溶性モノマーから形成されたポリマー鎖の少くとも一部が、こうして形成された多孔質コアと共有結合するような懸濁重合により、外および内表面上に修飾可能な結合部位を有する多孔質粒状キャリア物質を製造し、
   ‐場合により、孔から孔形成媒体を除去すること
   からなる、吸着剤の製造方法。
4. 少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させる、キャリア物質の外表面上にある結合部位の本質的に完全な修飾の後、または孔から媒体を除去する工程の後、ここでその媒体は、キャリア物質の外表面上にある結合部位が本質的に完全に修飾されうる溶液と、修飾条件下で本質的に混和性でなく、または孔から孔形成媒体を除去した後で、キャリア物質の内表面上にある結合部位が、表面修飾基Ｍ_１を修飾しえない溶液を用いて修飾されて、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_２を形成する、請求項１、２または３に記載の方法。
5. 水ベース溶液が、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成するために、キャリア物質の外表面上にある結合部位を修飾しうる溶液として用いられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
6. 疎水性媒体が、外表面のＭ_１修飾に際して、孔充填または孔形成媒体として用いられる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
7. 疎水性媒体が、直鎖および分岐、環式または非環式Ｃ_１‐Ｃ_２０アルカン、直鎖および分岐、環式または非環式Ｃ_５‐Ｃ_２０アルカノール、直鎖および分岐、環式または非環式Ｃ_２‐Ｃ_３０カルボキシレートエステル、および芳香族Ｃ_６‐Ｃ_２０炭化水素原子からなる群より選択される、少くとも１種のものである、請求項６に記載の方法。
8. 孔形成媒体が、５〜１４の炭素原子を有する直鎖、分岐または環式アルコール、および１〜６の炭素を有する一価または多価アルコールでエステル化された２〜１０の炭素原子を有するモノカルボン酸またはジカルボン酸のエステルから選択される、少くとも２種の成分の混合物である、請求項７に記載の方法。
9. ‐修飾可能な結合部位を外表面および内表面上に有する多孔質粒状キャリア物質を製造し、
   ‐キャリア物質を本質的に透過しない光照射により誘発される反応により、キャリア物質の外表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を形成させ、
   ‐必要であれば、表面修飾基Ｍ_１を修飾しえない反応により、キャリア物質の内表面上にある結合部位を本質的に完全に修飾して、少くとも１種の表面修飾基Ｍ_２を形成させること
   からなる、吸着剤の製造方法。
10. 疎水相中に含有されるモノマーが、エポキシ基を有するモノマー、またはエポキシ基を有するモノマーと少くとも１種の追加モノマーとの混合物である、請求項２または３に記載の方法。
11. エポキシ基を有するモノマーが、エポキシ基を有する（メタ）アクリル酸モノマーである、請求項１０に記載の方法。
12. エポキシ基を有する（メタ）アクリル酸モノマーがグリシジル（メタ）アクリレートである、請求項１１に記載の方法。
13. 架橋剤が、少くとも２つの重合可能基を有するモノマーである、請求項２、３および１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 少くとも２つの重合可能基を有するモノマーが、（メタ）アクリル酸をベースにしたモノマーである、請求項１３に記載の方法。
15. 少くとも２つの重合可能基を有するモノマーがエチレングリコールジ（メタ）アクリレートである、請求項１４に記載の方法。
16. 重合開始剤が、アゾ化合物、過酸化物およびレドックス開始剤の群から選択される、請求項２、３および１０〜１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 重合開始剤がアゾビスイソブチロニトリルまたは過酸化ジベンゾイルである、請求項１６に記載の方法。
18. 水溶性モノマーが一官能性ビニル化合物である、請求項３および１０〜１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 水溶性モノマーが１以上の極性基を有している、請求項３および１０〜１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 水溶性モノマーが、ヒドロキシアルキルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレート、Ｎ‐ビニル‐２‐ピロリドン、アクリロニトリルおよびメタクリロニトリル、アクリル酸およびメタクリル酸、アリルアルコール、アリルアミン、３‐アリルオキシ‐１，２‐プロパンジオール、（エチレングリコール）_ｎ‐ビニルメチルエーテル：ｎ＝１〜１０、Ｎ‐メチロール‐アクリルアミド、２‐アクリルアミド‐２‐メチルプロパンスルホン酸およびビニルベンゼンスルホン酸の塩、ビニルスルホン酸並びにそれらの組合せからなる群より選択される、請求項３および１０〜１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 水溶性モノマーの割合が、多孔質キャリア物質の総出発モノマー重量をベースにすると、２〜８０重量％である、請求項３および１０〜２０のいずれか一項に記載の方法。
22. １．５μｍ以下の平均孔度を有する多孔質キャリア物質を含んでなり、孔容量の最大５０％が１．５μｍよりも大きい孔度を有する孔の形で存在してよく、外表面が本質的に血液細胞と相互作用しないように、多孔質キャリア物質の外表面が少くとも１種の表面修飾基Ｍ_１を有し、多孔質キャリア物質の内表面、即ち、多孔質キャリア物質の孔の表面が、血中に含有される物質と相互作用する少くとも１種の表面修飾基Ｍ_２を有している、本質的に球形の非凝集粒子の形をとる全血用の吸着剤。
23. 吸着剤の粒子が５０〜５００μｍの粒度を有している、請求項２２に記載の吸着剤。
24. 多孔質キャリア物質の内表面がアミノ化により表面修飾されている、請求項２２または２３に記載の吸着剤。
25. 外表面上にある結合部位へ少くとも１種の基Ｍ_１の共有結合により外表面が修飾され、および／または内表面上にある結合部位へ少くとも１種の基Ｍ_２の共有結合により内表面が修飾されている、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の吸着剤。
26. 少くとも１種の基Ｍ_１が、少くとも１種のポリ（カルボン酸）、アルブミン、ヘパリン、ヘパリン硫酸および／またはポリミキシンである、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の吸着剤。
27. 少くとも１種の基Ｍ_１が、ポリアクリル酸および／またはヘパリンから選択される、請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の吸着剤。
28. 少くとも１種の基Ｍ_２が免疫吸着物である、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の吸着剤。
29. 少くとも１種の基Ｍ_２が、補体因子Ｃ１ｑ、ペプチド、モノクローナルまたはポリクローナル抗フィブリノーゲンまたは抗フィブリン抗体のような抗体、および合成Ａ／Ｂ血液型抗原のような抗原からなる群より選択される、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の吸着剤。
30. キャリア物質が、（メタ）アクリレートエステルおよび／またはアミドから誘導されたコポリマーである、請求項２２〜２９のいずれか一項に記載の吸着剤。
31. （メタ）アクリレートエステルおよび／またはアミドから誘導されたコポリマーがエポキシ基を有している、請求項３０に記載の吸着剤。
32. コポリマーが、エチレングリコールジ（メタ）アクリレートおよびグリシジル（メタ）アクリレートおよび／またはアリルグリシジルエーテルの重合により形成されたランダム（統計的）コポリマーである、請求項３０または３１に記載の吸着剤。
33. コポリマーが、下記モノマー単位の重合により製造される架橋ランダム統計的コポリマーである：
    （Ａ）１０〜３０重量％の量で（メタ）アクリルアミド
    （Ｂ）３０〜８０重量％の量でＮ，Ｎ′‐メチレン‐ビス（メタ）アクリルアミド、および
    （Ｃ）１０〜２０重量％の量でアリルグリシジルエーテルおよび／またはグリシジル（メタ）アクリレート：モノマー単位の総重量に各々基づく、
    請求項３０または３１に記載の吸着剤。
34. コポリマーが懸濁重合により製造された、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の吸着剤。
35. 全血から生体分子および／または病原物質を分離するための、請求項２２〜３４のいずれか一項に記載された吸着剤の使用。
36. 分離される生体分子が、免疫グロブリン、フィブリノーゲンおよび／または免疫複合体である、請求項３５に記載の使用。
37. 全血から生体分子および／または病原物質を分離する、ハウジングおよびその中に置かれた吸着剤を含んでなる吸着器の製造のための、請求項２２〜３４のいずれか一項に記載された吸着剤の使用。
38. 吸着器が１０〜１２５０ｍｌの容量を有している、請求項３７に記載の使用。
39. 吸着器が、ヘッドエンドに入口部分、およびハウジングの底に出口部分を有している、請求項３７または３８に記載の使用。
40. 吸着器がその出口部分にフィルターを有している、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の使用。
41. フィルターが粒子フィルターである、請求項４０に記載の使用。
42. 少くとも２５μｍのメッシュを有するスクリーンが、ハウジングの底に置かれている、請求項３７〜４１のいずれか一項に記載の使用。
43. 少くとも４０μｍのメッシュを有するスクリーンが、ハウジングの底に置かれている、請求項３７〜４２のいずれか一項に記載の使用。

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