JP2004502456A5

JP2004502456A5 -

Info

Publication number: JP2004502456A5
Application number: JP2002509470A
Authority: JP
Filing date: 2000-11-09
Publication date: 2005-11-17

Description

組換えヒトα−L−イズロニダーゼを生成し、そして97〜99％以上に精製した。患者は障害の典型的な臨床学的出現を示し、そして診断を、白血球におけるα−L−イズロニダーゼ欠失の生化学的決定により確認した。
患者は、125,000単位/kgの用量（元のアッセイ及び単位定義を用いて）て、ヒトα−L−イズロニダーゼ（通常の塩溶液中、0.1％のヒト血清アルブミンにより希釈された）を静脈内投与され；3,000単位/kgが最初の１時間にわたって与えられ、そして61,000単位/kgが次の２時間のそれぞれにおいて与えられた。125,000単位/kgの用量は、新規アッセイを用いれば、100SI単位/kgに相当する。

Claims

９９％に等しいか又はそれ以上の純度を有する、組換えα−Ｌ−イズロニダーゼ酵素、又はその生物学的活性フラグメント又は変異体。
タンパク質ｍｇ当たり約２４０，０００単位以上の比活性を有する請求項１に記載の組換えのα−Ｌ−イズロニダーゼ酵素、又はその生物学的活性フラグメント又は変異体。
請求項１記載のヒト組換えα−Ｌ−イズロニダーゼ、又はその生物学的フラグメント又は変異体のみか、又は医薬的に適切なキャリヤーと共に含んで成る医薬組成物。
塩化ナトリウム溶液、緩衝液及びポリソルベート８０をさらに含んで成る請求項３に記載の医薬組成物。
前記ヒト組換えα−Ｌ−イズロニダーゼが、約０．５ｍｇ／ｍｌ及び約１２５，０００単位／ｍｌの濃度で存在有する請求項３又は４に記載の医薬組成物。
前記塩化ナトリウム溶液が、約１５０ｍＭの濃度で存在する請求項４又は５に記載の医薬組成物。
前記緩衝液が、約１００ｍＭの濃度及びｐＨ５．４〜５．９のリン酸ナトリウム緩衝液である請求項４〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
用量形への希釈の後、ヒトアルブミンが少なくとも約１ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項４〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記ヒトアルブミンが、前記ヒト対象における急性アレルギー又は補体介在性反応を妨げるか又は低めるために使用される請求項８記載の医薬組成物。
前記溶液のｐＨが、約５．８で維持される請求項４〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記ポリソルベート８０が、０．００１％で維持される請求項４〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記ポリソルベートが、最終生成物においてタンパク質を安定化するために必要とされる請求項４〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
請求項１記載のヒトα−Ｌ−イズロニダーゼの生成方法であって、
（ａ）バイオリアクター中への接種のための、コード核酸により形質転換された細胞の種母系統を調製し；
（ｂ）大多孔性マイクロキャリヤーをリン酸緩衝溶液において洗浄し、そしてオートクレーブし、前記マイクロキャリヤーと増殖培地とを組み合わせ、そして前記マイクロキャリヤー混合物を前記バイオリアクター中にポンプ輸送することによって、大多孔性マイクロキャリヤーを含む混合物を調製し；
（ｃ）ｐＨ、溶存酸素及び灌流の制御下で、前記バイオリアクターに前記細胞を接種し、そしてインキュベートし；
（ｄ）細胞密度が約１０^６に達した時に細胞を収穫し；そして
（ｅ）前記α−Ｌ−イズロニダーゼ酵素を全体収率４５〜５５％をもって精製する；
段階を含んで成る方法。
請求項１記載のα−Ｌ−イズロニダーゼを、約９９％に等しいか又はそれよりも高い純度に精製するための方法であって、
（ａ）前記ヒトα−Ｌ−イズロニダーゼをコードする核酸により形質転換された細胞の培養物から得られる流体を収穫し、そして濾過し；
（ｂ）前記流体のｐＨを、酸性ｐＨに調節し、続いて０．２〜０．５４ミクロンのフィルターを通して濾過し；
（ｃ）前記ヒト組換えα−Ｌ−イズロニダーゼを捕獲するために、ブルーセファロースＦＦカラムに前記流体を通し；
（ｄ）汚染性ＣＨＯタンパク質を除去するために、銅キレート化セファロースカラムに前記流体を通し；
（ｅ）前記カラム状に担持される残留浸出Ｃｉｂａｃｒｏｎブルー色素及び銅イオンを減じるために、フェニルセファロースカラムに前記流体を通して；そして
（ｆ）精製されるα−Ｌ−イズロニダーゼを濃縮し、そしてダイアフィルトレーションする段階を含んで成る方法。
前記ブルーセファロースＦＦカラムが、前記ヒトα−Ｌ−イズロニダーゼを７〜１０倍に精製するために使用される請求項１４記載の方法。
前記ヒトα−Ｌ−イズロニダーゼの量的な回収を高めるためにすべての緩衝液中、１０％グリセロールを用いることを含んで成る請求項１４に記載の方法。
α−Ｌ−イズロニダーゼの欠失により完全に又は部分的に引き起こされる疾病の処理のための、請求項３〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記疾病がムコ多糖症である請求項１７に記載の医薬組成物。
前記疾病がＩ型ムコ多糖症（ＭＰＳＩ）である請求項１８に記載の医薬組成物。
前記疾病が、Ｈｕｒｌｅｒ病、Ｓｃｈｅｉｅ症候群及びＨｕｒｌｅｒ−Ｓｃｈｅｉｅ症候群から成る群から選択される請求項１７に記載の医薬組成物。
前記疾病を有する対象が、約１％又はそれ以下の通常のα−Ｌ−イズロニダーゼ活性を示す請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
少なくとも約１２５，０００単位又は０．５ｍｇ／ｋｇの前記ヒト組換えα−Ｌ−イズロニダーゼの用量が、その欠失の患者に毎週投与される請求項１７〜２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇの前記配合物の約１時間のゆっくりした注入速度、続く２時間の急速な注入速度で注入される請求項１７〜２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記注入が、補体介在性臨床学的アレルギー反応を最少にするために使用される請求項２３に記載の医薬組成物。
ヒト組換えα−イズロニダーゼによる処理が、リソソーム貯蔵を減じる請求項１７〜２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記処理が、前記ヒト対象の臨床学的及び生化学的徴候の改良を引き起こす請求項１７〜２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記処理が、肝臓体積及び尿グリコサミノグルカン排泄の正常化、脾臓サイズ及び無呼吸／減呼吸現象の低下、思春期前患者における身長及び成長速度の上昇、肩屈曲及び肘及び膝延長の改良、心機能に関連する症状の改良、及び毎日の活動の持久力及び限界の改良をもたらす請求項１７〜２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。