WO2014187302A1

WO2014187302A1 - 度拉鲁肽注射剂及其制备方法

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Publication number: WO2014187302A1
Application number: PCT/CN2014/077845
Authority: WO
Inventors: 王博; 郑春连; 刘建; 马亚平; 袁建成
Original assignee: 深圳翰宇药业股份有限公司
Priority date: 2013-05-21
Filing date: 2014-05-20
Publication date: 2014-11-27
Also published as: CN104173275A

Abstract

一种度拉鲁肽注射剂及其制备方法，所述注射液含有度拉鲁肽、pH调节剂、增溶剂、抑菌剂、渗透压调节剂和注射用水，其中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：度拉鲁肽：PH调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂为1.5:（2.0-35）：（2-5）：（7-16）：（180-420），且这五种组分的重量总和与注射用水的体积之比以mg/ml计为0.6-1.6。

Description

度拉鲁肽注射剂及其制备方法技术领域

本发明涉及一种注射剂及其制备方法，具体涉及一种度拉鲁肽注射剂及其制备方法。背景技术

小肠的内分泌细胞可产生一种激素，这种激素能在进餐或者口服葡萄糖后促进胰岛素的分泌，因此人们将它命名为肠促胰岛素

( Incretin ) , 它可以调节餐后胰岛素分泌总量的 60%。肠促胰素主要有以下两种：胰高血糖素样肽 -1 ( GLP-1 )和葡萄糖依赖的促胰岛素多肽 C GIP )

经过对人体的进一步研究发现， II 型糖尿病患者口服葡萄糖和输注葡萄糖后胰岛素的分泌量相当，这提示 II型糖尿病患者肠促胰素分泌量降低，并且 II型糖尿病患者餐后 GIP水平与常人相似，而 GLP-1 则显著减少，这提示 II型糖尿病患者出现了 GLP-1缺乏，除此之外， GLP-1还有减緩胃排空、抑制进食等，这使得 GLP-1有控制体重的作用。由此， GLP-1成为一种新的 II型糖尿病的治疗靶点。

然而，要将 GLP-1 应用于临床面临的最大问题是人体自身产生的 GLP-1 极易被体内的二肽基肽酶 IV( DPP-IV )降解，这大大限制了 GLP-1 的临床应用。为解决这一难题，既保有 GLP-1的功效，又能抵抗降解的 GLP-1类似物成为了研发热点。

目前上市的 GLP-1类似物产品有艾塞那肽注射液（百泌达，皮下注射给药，每日两次）和利拉鲁肽注射液（诺和力，皮下注射给药，每曰一次）。但是，由于这两种产品的半衰期短，给药频率高，因此每次给药后患者都有明显的胃肠道反应，如果长期给药会给患者带来了很大的不便和痛苦。因此，需要一种长效且副作用小的 GLP-1类似物。

在 2012年美国高血压学会 ( ASH ) 会议上， Ferdinand教授发表了一项关于一周一次给药度拉鲁肽（ Dulaglutide ) 来治疗 II型糖尿病患者的研究结果，由此度拉鲁肽作为一种长效的 GLP-1类似物成为了研究热点，其具有半衰期长，给药次数少，不良反应低等优点；现代临床实验已经证明每周一次皮下给药的度拉鲁肽能显著地降低糖化血红蛋白（HAlc) 水平，其降低幅度大于每日 2次给药的艾塞那肽注射液（给药 6个月）、口服二曱双胍 26周（给药 26周）、默沙东口服药物西他列汀（ Januvia) (给药 1年）的效果。因此，该药具有艮大的研究开发价值和广阔的市场前景。目前，对于度拉鲁肽，国内外尚无上市产品发明内容

本发明的一个目的是提供一种度拉鲁肽注射液，包含度拉鲁肽、 pH 调节剂、增溶剂、抑菌剂、渗透压调节剂和注射用水，其中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：

度拉鲁肽: pH调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂为 1.5: ( 2.0-35 ): (2-5) ： (7-16) ： ( 180-420 ) , 且这五种组分的重量总和与注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.6-1.6。

本发明的另一个目的是提供一种度拉鲁肽注射液的制备方法，所述方法包括以下步骤：

(1)按度拉鲁肽： pH调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂的重量比为 1.5: ( 2.0-35 ) ： (2-5) ： (7-16) ： ( 180-420 ) 的比例称取各组分；

(2) 向 pH调节剂中加入注射用水、搅拌溶解，使溶液的 pH值为 6-7.5;

(3)加入渗透压调节剂，搅拌溶解至溶液澄清；

(4)加入增溶剂和抑菌剂，然后加入度拉鲁肽，搅拌溶解至溶液澄清，过滤 ϊ

其中步骤（ 1 )中五种组分的重量总和与加入的注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.6-1.6。本发明提供的度拉鲁肽注射剂具有以下的优势：

(1)质量稳定，不易降解。选用的 pH调节剂可有效地调节 pH 以维护注射液中度拉鲁肽的稳定。对本发明提供的度拉鲁肽注射液进行稳定性试验的结果表明，在高温条件下放置 10天后，溶液澄清、无细菌生长；常规保存 12个月后，溶液依然澄清，含量基本不变，这表明本发明提供的度拉鲁肽注射液稳定性良好不易降解。

( 2 ) 胃肠道反应较少，降糖效果明显，用药频率低，可增强患者服药的顺应性。在用药后的胃肠道反应方面，注射度拉鲁肽后的胃肠道反应要低于现有降糖药物。在对糖尿病大鼠的降糖效果方面，与现有降糖药物相比，一周一次注射度拉鲁肽的降糖效果与一日两次注射的艾塞那肽的降糖效果相当，且作用更持久，胃肠道不良反应少，患者服用方便，具有广阔的应用前景。

( 3 ) 配制方法简单，易操作；配制所需辅料易于获得。具体实施方式

本发明的一个方面，提供了一种度拉鲁肽注射液，包含度拉鲁肽、 pH调节剂、增溶剂、抑菌剂、渗透压调节剂和注射用水，其中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：

度拉鲁肽: pH调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂为 1.5: ( 2.0-35 ): ( 2-5 ) ： ( 7-16 ) ： ( 180-420 ) , 且这五种组分的重量总和与注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.6-1.6。

本发明提供的度拉鲁肽注射液的 pH值为 6-7.5。

由于度拉鲁肽是一种多肽类物质，在强碱性条件下容易被破坏，因此，本发明上下文所述的 "pH调节剂" 是指能将溶液的 pH调节为 6-7.5以维持度拉鲁肽的稳定的试剂。所述 pH调节剂选自磷酸氢二钠- 磷酸二氢钠的混合物、拧檬酸-拧檬酸钠的混合物、醋酸-醋酸钠的混合物中的任意一种或两种。

优选地，本发明提供的度拉鲁肽注射液中的 pH调节剂为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的混合物。进一步地，磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的重量比为 2-2.1:1。

注射液应具有与血浆相同的或略偏高的渗透压，否则由于渗透压紊乱或其他作用，很快会引起患者头痛和呕吐等不良反应。本发明上下文所述的 "渗透压调节剂" 指的是可将注射液的渗透压调节至与血浆相同或略高进而降低患者用药后的肠胃道反应的试剂。所述渗透压调节剂为甘露醇或氯化钠。

优选地，本发明提供的度拉鲁肽注射液中渗透压调节剂为甘露醇。多肽易受细菌降解，因此应加入抑菌剂防止其降解。本发明提供的度拉鲁肽注射液中抑菌剂为间曱酚和苯酚中的一种或两者的混合物。优选地，本发明提供的度拉鲁肽注射液中的抑菌剂为间曱酚。

由于度拉鲁肽分子量大，溶解性较差，因此优选吐温 -20, 吐温 -80 中的一种或两种作为增溶剂，进而提高度拉鲁肽的溶解性，保持注射液的稳定性。优选地，本发明提供的度拉鲁肽注射液中的增溶剂为吐温 -20。

在一个优选的实施方案中，本发明的度拉鲁肽注射液中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：

度拉鲁肽： pH 调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂为 1.5: ( 2.4-4.9 ) ： ( 3-4 ) ： ( 8-15 ) ： ( 200-240 ) , 且这五种组分的重量总和与注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.8-1.3。

在一个更优选的实施方案中，本发明的度拉鲁肽注射液中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：

度拉鲁肽： pH调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂为 1.5: ( 4.8-4.9 ) ： 3.5: 8.1: 240, 且这五种组分的重量总和与注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.8-0.85。本发明另一方面，提供了一种度拉鲁肽注射液的制备方法，所述方法包括：

( 1 )按度拉鲁肽： pH调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂的重量比为 1.5: ( 2.0-35 ) ： ( 2-5 ) ： ( 7-16 ) ： ( 180-420 ) 的比例称取各组分；

( 2 ) 向 pH调节剂中加入注射用水、搅拌溶解，使溶液的 pH值为 6-7.5;

( 3 )加入渗透压调节剂，搅拌溶解至溶液澄清；

( 4 )加入增溶剂和抑菌剂，然后加入度拉鲁肽，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；

其中步骤（ 1 )中五种组分的重量总和与加入的注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.6-1.6。其中， pH调节剂、增溶剂、抑菌剂和渗透压调节剂的定义和选取范围如上所述。

优选地，本发明的度拉鲁肽注射液的制备在无菌条件下进行。

优选地，本发明的度拉鲁肽注射液的包装形式为注射笔。

依照本发明的方法制成的度拉鲁肽注射液中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：

优选地，依照本发明的方法制成的度拉鲁肽注射液中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：

更优选地，依照本发明的方法制成的度拉鲁肽注射液中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：

度拉鲁肽： pH 调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂为 1.5: ( 4.8-4.9 ) ： 3.5: 8.1: 240, 且这五种组分的重量总和与注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.8-0.85。

本发明上下文的宽泛、优选、更优选的定义可按需彼此结合。实施例

为了进一步理解本发明，下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，应理解，下述实施例意在说明，不对本发明构成限制。

原材料

度拉鲁肽（来自深圳翰宇药业股份有限公司， 20121015批）艾塞那肽注射液（购自美国^ ^来公司（Lilly ) , A872736 )

利拉鲁肽注射液（购自诺和诺德公司（ Novo NoRDisk ) , AS64216 ) 碑酸氢二钠 /碑酸二氢钠（购自湖南九典制药有限公司， 201206G02 批）

杵檬酸 /杵檬酸钠（购自台山市新宁制药有限公司， 20100602批）醋酸 /醋酸钠（购自台山市新宁制药有限公司， 20100602批）苯酚（购自 SIGMA公司）间曱酚（购自 ACROS )

吐温 -20 (购自青岛天力源生物科技有限公司）

吐温 -80 (购自南京威尔化工）

甘露醇（购自青岛明月海藻集团有限公司）

注射用水（公司自制）实施例 1度拉鲁肽注射液的制备

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台进行，取各组分:

度拉鲁肽 150 mg 甘露醇 24g

碑酸氢二钠 330mg

碑酸二氢钠 162mg

间曱酚 810mg

吐温 -20 300mg

注射用水 300 mL 称取 330 mg磷酸氢二钠和 162 mg磷酸二氢钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 24g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 300mg吐温 -20, 810mg间曱酚，搅拌均勾溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。

实施例 2度拉鲁肽注射液的制备

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台进行，取各组分：度拉鲁肽 150 mg 甘露醇 24g

碑酸氢二钠 165mg

碑酸二氢钠 81mg

间曱酚 810mg

吐温 -20 300mg

注射用水 300 mL 称取 165 m 碑酸氢二钠和 81 m 碑酸二氢钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 24g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 300mg吐温 -20, 810mg间曱酚，搅拌均匀溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。实施例 3度拉鲁肽注射液的制备

度拉鲁肽 150 mg 甘露醇 24g

碑酸氢二钠 198mg

碑酸二氢钠 97.2mg 间曱酚 810mg

吐温 -20 300mg

注射用水 300 mL 称取 198 m 磷酸氢二钠和 97.2 m 磷酸二氢钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 24g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 300mg吐温 -20, 810mg间曱酚，搅拌均勾溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。实施例 4度拉鲁肽注射液的制备

度拉鲁肽 150 mg 甘露醇 24g

碑酸氢二钠 330mg

碑酸二氢钠 162mg

苯酚 1500mg 吐温 -20 300mg

注射用水 300 mL 称取 330 mg磷酸氢二钠和 162 mg磷酸二氢钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 24g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 300mg吐温 -20, 1500mg苯酚，搅拌均勾溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。

实施例 5 度拉鲁肽注射液的制备

碑酸氢二钠 330mg

碑酸二氢钠 162mg

间曱酚 810mg

吐温 -20 450mg

注射用水 300 mL 称取 330 mg磷酸氢二钠和 162 mg磷酸二氢钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6-7.5, 再加入 24g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 450mg吐温 -20, 810mg间曱酚，搅拌均勾溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。实施例 6 度拉鲁肽注射液的制备

度拉鲁肽 150 mg 甘露醇 24g

拧檬酸 1260mg 杵檬酸钠 1765mg 间曱酚 810mg

吐温 -20 450mg

注射用水 300 mL 称取 1260 m 拧檬酸和 1765 m 杵檬酸钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 24g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 450mg吐温 -20, 810mg间曱酚，搅拌均匀溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支

实施例 7 度拉鲁肽注射液的制备

拧檬酸 630mg

杵檬酸钠 882.5mg

苯酚 1500mg 吐温 -20 450mg

注射用水 300 mL 称取 630 m 拧檬酸和 882.5 m 拧檬酸钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 24g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 450mg吐温 -20, 1500mg苯酚，搅拌均匀溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。

实施例 8 度拉鲁肽注射液的制备

醋酸 200mg

醋酸钠 660mg

间曱酚 810mg

吐温 -20 450mg

注射用水 300 mL 称取 200 m 拧檬酸和 660 m 拧檬酸钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 24g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 450mg吐温 -20, 810mg间曱酚，搅拌均匀溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。

实施例 9 度拉鲁肽注射液的制备

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台进行，取各组分：度拉鲁肽 150 mg 甘露醇 18g

醋酸 lOOmg

醋酸钠 330mg

苯酚 1500mg 吐温 -20 450mg

注射用水 300 mL 称取 100 m 醋酸和 330 m 醋酸钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 18g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 450mg吐温 -20, 1500mg苯酚，搅拌均勾溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。实施例 10 度拉鲁肽注射液的制备

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台进行，取各组分：度拉鲁肽 150 mg 氯化钠 42g

醋酸 lOOmg

醋酸钠 330mg

间曱酚 810mg

吐温 -20 450mg

注射用水 300 mL 称取 100 m 醋酸和 330 m 醋酸钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 42g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 450mg吐温 -20, 810m 间曱酚，搅拌均匀溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。实施例 11度拉鲁肽注射液的制备

碑酸氢二钠 330mg

碑酸二氢钠 162mg

间曱酚 810mg

吐温 -20 300mg

注射用水 300 mL 称取 330 mg磷酸氢二钠和 162 mg磷酸二氢钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 42g氯化钠，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 300mg吐温 -20, 810mg间曱酚，搅拌均勾溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。

实施例 12度拉鲁肽注射液的制备

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台进行，取各组分：度拉鲁肽 150 mg 氯化钠 30g

碑酸氢二钠 330mg

碑酸二氢钠 162mg

间曱酚 810mg

吐温 -20 300mg

注射用水 300 mL 称取 330 mg磷酸氢二钠和 162 mg磷酸二氢钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 30g氯化钠，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 300mg吐温 -20, 810mg间曱酚，搅拌均勾溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。实施例 13度拉鲁肽注射液的制备

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台进行，取各组分：度拉鲁肽 150 mg 氯化钠 35g

碑酸氢二钠 330mg

碑酸二氢钠 162mg

间曱酚 810mg

吐温 -80 300mg

注射用水 300 mL 称取 330 mg磷酸氢二钠和 162 mg磷酸二氢钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 35g氯化钠，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 300mg吐温 -80, 810mg间曱酚，搅拌均勾溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。

实施例 14度拉鲁肽注射液的制备

碑酸氢二钠 330mg

碑酸二氢钠 162mg

间曱酚 810mg

吐温 -20 300mg

注射用水 300 mL 称取 330 mg磷酸氢二钠和 162 mg磷酸二氢钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 35g氯化钠，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 300mg吐温 -20, 810mg间曱酚，搅拌均勾溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。

实施例 15度拉鲁肽注射液的制备

碑酸氢二钠 330mg

碑酸二氢钠 162mg

间曱酚 810mg

吐温 -20 350mg

注射用水 300 mL 称取 330 mg磷酸氢二钠和 162 mg磷酸二氢钠，加入 210 mL注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6~7.5, 再加入 35g氯化钠，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 350mg吐温 -20, 810mg间曱酚，搅拌均勾溶解，称取 150 mg度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3 mL卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 100支。

实施例 16 度拉鲁肽注射液的制备（处方放大 100倍）

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台进行，取各组分：度拉鲁肽 15g

甘露醇 2400g

碑酸氢二钠 33g

碑酸二氢钠 16.2g

间曱酚 81g

吐温 -20 35g

注射用水 30L

称取 33g磷酸氢二钠和 16.2 g磷酸二氢钠，加入 21L注射用水搅拌溶解后，使溶液的 pH值为 6-7.5, 再加入 2400g甘露醇，搅拌溶解至溶液澄清，依次分别加入 35g吐温 -20, 81g间曱酚，搅拌均匀溶解，称取 15g度拉鲁肽，补足剩余溶液，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；将配制好的溶液灌入已硅化并加塞的 3ml卡式瓶中，轧盖，装入一次性注射笔中，每支 3ml, 共灌装 10000支。实施例 17——稳定性试验

将本发明实施例 1-16制得的度拉鲁肽注射液（100支）分别在强光（4500 lx ± 500 lx ) 、高温条件下（ 40Ό , 相对湿度 75% )放置 5 天和 10天，然后分别取样，考察其纯度变化（各 10支），溶液澄明度（各 10支）及细菌生长情况（各 30支）（参见表 1 ) ；

其中纯度的检测按照中国药典 2010年版二部附录高效液相色谱法进行；

细菌生长情况检测按照中国药典 2010年版二部附录 XI H 无菌检查法中的薄膜过滤法进行。

表 1 本发明的度拉鲁肽注射液稳定性试验

40 °C下留样纯度

溶液澄明度细菌生长情况

0天 99.1% 澄清，透明无

实施例 1 5天 97.7% 澄明度下降无

10天 96.5% 澄明度下降无

0天 98.9% 澄清，透明无

实施例 2 5天 97.5% 澄明度下降无

10天 95.8% 澄明度下降无

0天 99.2% 澄清透明无

实施例 3 5天 98.8% 澄明度下降无

10天 97.1% 澄明度下降无

0天 100.0% 澄清透明无

实施例 4 5天 98.9% 澄明度下降无

10天 97.9% 澄明度下降无

0天 99.6% 澄清透明无

实施例 6

5天 96.1% 澄明度下降无 10天 92.8% 澄明度下降无

0天 99.4% 澄清透明无

实施例 8 5天 95.2% 澄明度下降无

10天 91.7% 澄明度下降无

0天 100% 澄清透明无

实施例 11 5天 98.9% 澄明度下降无

10天 95.4% 澄明度下降无

0天 99.3% 澄清透明无

实施例 15 5天 95.7% 澄明度下降无

10天 94.5% 澄明度下降无

0天 100.0% 澄清透明无

实施例 16 5天 97.8% 澄明度下降无

10天 96.7% 澄明度下降无

该实施例中所使用的度拉鲁肽注射液仅为示例性的目的，本发明其他实施例提供的度拉鲁肽注射液的检测结果与表 1 中的结果相似，此处不再赘述。

由表 1可知，本发明实施例 1、实施例 2, 实施例 3, 实施例 4及实施例 16提供的度拉鲁肽注射液中度拉鲁肽纯度下降的速度最慢，抑菌剂的浓度达到要求（不同的抑菌剂有不同的浓度要求，本发明实施例中所使用的抑菌剂均按常规用量浓度加入），各处方均无细菌生长。

取本发明实施例 1、实施例 2及实施例 16提供的度拉鲁肽注射液在 2-8Ό温度，相对湿度 60%的贮藏条件下，进一步考察本发明提供的度拉鲁肽注射液的长期稳定性，溶液澄明度变化及细菌生长情况，结果见表 2。

其中，澄明度的检测按照中国药典 2010年版二部附录 IX B 澄清度检查法进行检查：若留样前后样品浊度一致，即为澄明度无变化。表 2 度拉鲁肽注射液稳定性考察结果

主药纯度溶液澄明度细菌生长情况

0个月 100.00% 无变化无

实施例 1

3个月 99.70% 无变化无 6个月 98.50% 无变化无

12个月 98.30% 无变化无

0个月 99.80% 无变化无

3个月 98.84% 无变化无

实施例 2

6个月 98.31% 无变化无

12个月 98.29% 无变化无

0个月 100.00% 无变化无

3个月 100.00% 无变化无

实施例 16

6个月 99.50% 无变化无

12个月 98.90% 无变化无由表 2可知，本发明提供的度拉鲁肽注射液在贮藏 12个月后在含量、澄明度、及细菌生长情况均合格，质量稳定。

综合表 1和表 2可知，本发明提供的度拉鲁肽注射液具有良好的稳定性，緩冲 pH调节系统使本发明的度拉鲁肽注射液的 pH维持在 6-7.5之间（对于度拉鲁肽的最适 pH条件，此 pH范围由原料稳定的 pH范围确定）；且抑菌剂的使用使细菌无法生长，从而避免了细菌对度拉鲁肽的降解。

该实施例中所使用的度拉鲁肽注射液仅为示例性的目的，本发明其他实施例提供的度拉鲁肽注射液的检测结果与表 2 中的结果相似，此处不再赘述。实施例 18 本发明提供的度拉鲁肽注射液的降糖效果

取本发明实施例 16提供的度拉鲁肽注射液，进行降糖效果检测，取市售的利拉鲁肽注射液和艾塞那肽注射液作为对照。

试验所用的 SD ( Sprague-Dawley ) 大鼠为 6-8 周龄、雄性、体重 200 g-250克、 50只，由广东省医学实验动物中心提供（许可证号： SCXK (粤） 2008-0002; 质量合格证号： 2012A008 )。

试验动物饲养在广东省实验动物监测所（AAALAC 认证单位）的 SPF 级恒温恒湿的层流清洁房间内，使用独立通风笼具 IVC, 温度为 ( 22±3 ) °C、湿度为 40-80%。饲料为清洁级鼠料，购自广东省医学实验动物中心；饮用水为超滤净化水，食物和水均经过高压灭菌处理。动物可以自由摄取高压无菌食物和饮水。通过耳缘打孔为动物编号。

每 5只鼠一笼，笼由聚碳酸酯制成，体积为 300 mmxl80 mmxl50 mm。软制玉米芯高压消毒清洁垫料，每周更换两次。每只笼具具有标签，标明动物数量、性别、品系、接收时间、组别以及试验开始时间。

随机选取上述 SD大鼠中的 10只作为正常组，喂食基础饲料，用 1.5 mL注射用水灌胃。其余大鼠适应性喂养 5天后，即开始喂食高脂饲料，配合普通饲料， 7天后，过夜禁食，次日正常组用生理盐水代替链脲佐菌素腹腔注射，其余用链脲佐菌素（购自 Sigma 公司）以 50 mg/k 腹腔注射（用 0.1 mol/L 的无菌杵檬酸緩冲液配制， pH 值为 4.5 ) , 72小时后剪尾测血糖，以空腹血糖 >11.1 mmol/L作为糖尿病大鼠的造模成功标志。

造模成功后，分为正常组 A; 模型对照组 B; 艾塞那肽注射剂颈背部皮下给药每日早晚两次给药组 C , 每次 S g.Kg-¹; 度拉鲁肽注射剂颈背部皮下给药每周一次给药组 D每次 l.Smg.Kg-¹; E组利拉鲁肽注射液颈背部皮下给药每日一次，每次 0.6 mg.Kg-¹, 给药后第 0周， 1 周， 2周， 3周， 4周， 5周， 6周收集尾静脉血，用血糖仪（强生公司，型号为 One Touch Ultra )检测血糖值，本实验各数据采用 SPSS 16.0 软件进行处理分析，各组比较采用 t检验，结果见表 3。

表 3 实验大鼠的血糖值 ( mmol/L)

由表 3可知，与 A组相比，：8组？<0.01 , 有显著性差异，与 B组相比， C, D, E组 P<0.01 ,有显著性差异，与 C组相比， D, E组 P>0.05, 无显著性差异，总降糖效果相当，但从上表看出，度拉鲁肽注射液与利拉鲁肽注射液降糖效果要稍快于艾塞那肽注射液。

这表明，本发明提供的度拉鲁肽注射液与市售现有降糖注射液相比，降糖效果相当，都具有显著的降糖效果，且降糖速度要稍快于市售的艾塞那肽和利鲁拉肽注射液。

该实施例中所使用的度拉鲁肽注射液仅为示例性的目的，本发明其他实施例提供的度拉鲁肽注射液的检测结果与表 3 中的结果相似，此处不再赘述。实施例 19本发明提供的度拉鲁肽注射液不良反应鉴定

由于 GLP-1类似物给药时常伴有胃肠道反应，所以对用药后的大鼠进行观察。取雄性健康 SD大鼠 50只，体重 200 g~ 250 g, 清洁级。随机选取其中 10只作为正常组，喂食基础饲料，用 1.5 mL注射用水灌胃。其余大鼠适应性喂养 5天后，即开始喂食高脂饲料，配合普通饲料， 7天后，过夜禁食，次日正常组用生理盐水代替链脲佐菌素腹腔注射，其余用链脲佐菌素以 50 mg/kg腹腔注射（用 0.1 mol/L 的无菌杵檬酸緩冲液配制， pH 值为 4.5 ) , 72小时后剪尾测血糖，以空腹血糖>11.1 mmol/L作为糖尿病大鼠的造模成功标志。

造模成功后，分为正常组 A; 模型对照组 B; 艾塞那肽注射剂颈背部皮下给药每日早晚两次给药组 C , 每次 S g.Kg-¹; 度拉鲁肽注射剂颈背部皮下给药每周一次给药组 D每次 l.Smg.Kg-¹; 利拉鲁肽注射液颈背部皮下给药每日一次，每次 0.6 mg.Kg-¹, 给药后进行状态观察，记录其在用药后的反应，结果如表 4所示：

表 4 大鼠用药后状态观察

组别

给药前注射给药 6周毛色、尿量、饮水 p区吐比毛色、尿量、饮水 p区吐比腹泻进食行为腹泻比例进食行为量、体重、活动量例量、活动量例比例

A组体毛紧凑，毛色为

白色，饮水量及尿

0 正常 0

量正常, 活动量适

中

B组体毛松散，毛色发

进食量显

黄，尿量及饮水量 0 0

著提高

显著增加，活动量下降，体重下降

c组体毛松散，毛

色发黄，尿量及饮毛色转白，尿量及进食量较

进食量显

水量显著增加，活 0 0 饮水量减少，活动 2% 少，进食 2.6%

著提高

动量下降，体重下量增加行为少降

D组体毛松散，毛色发

毛色转白，尿量及进食量正黄，尿量及饮水量进食量显

0 0 饮水量减少，活动 0 常，进食 0 显著增加，活动量著提高

量明显增加行为多下降，体重下降

E组体毛松散，毛色发

毛色转白，尿量及进食量正黄，尿量及饮水量进食量显

0 0 饮水量减少，活动 0 常，进食 1.3% 显著增加，活动量著提高

量明显增加行为多下降，体重下降

由表 4可知，未给药时，造模大鼠出现明显 ''三多一少" 的糖尿病症状，注射给药 6周后，大鼠毛色，尿量，饮水量，均正常，但 C 组注射艾塞那肽进食量较少，大鼠有呕吐和腹泻现象， E 组注射利拉鲁肽有 1.3%腹泻现象， D组注射度拉鲁肽大鼠无呕吐和腹泻现象. 这说明本法制备度拉鲁肽注射液较与已上市利拉鲁肽和艾塞那肽注射液相比，胃肠道反应明显减少。说明本发明提供的度拉鲁肽注射液采用了合理的渗透压调节剂并调节出了合适的渗透压。

该实施例中所使用的度拉鲁肽注射液仅为示例性的目的，本发明其他实施例提供的度拉鲁肽注射液的检测结果与表 4 中的结果相似，此处不再赘述。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

权利要求书

1. 一种度拉鲁肽注射液，包含度拉鲁肽、 pH调节剂、增溶剂、抑菌剂、渗透压调节剂和注射用水，其中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：

度拉鲁肽: pH调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂为 1.5: ( 2.0-35 ): ( 2-5 ) ： ( 7-16 ) ： ( 180-420 ) , 且这五种组分的重量总和与注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.6-1.6;

更优选地，所述度拉鲁肽注射液中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：

度拉鲁肽： pH调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂为 1.5: ( 2.4-4.9 ) ： ( 3-4 ) ： ( 8-15 ) ： ( 200-240 ) , 且这五种组分的重量总和与注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.8-1.3;

最优选地，所述度拉鲁肽注射液中除注射用水外的各组分的含量按重量比计为：

度拉鲁肽： pH调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂为 1.5: ( 4.8-4.9 ) ： 3.5: 8.1: 240, 且这五种组分的重量总和与注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.8-0.85。

2. 根据权利要求 1的度拉鲁肽注射液，其 pH值为 6-7.5。

3.根据权利要求 1或 2的度拉鲁肽注射液，其中 pH调节剂为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠的混合物、拧檬酸-拧檬酸钠的混合物、醋酸-醋酸钠的混合物中的任意一种或两种，优选为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的混合物，其中，磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的重量比为 2-2.1:1。

4.根据权利要求 1或 2的度拉鲁肽注射液，其中所述渗透压调节剂为甘露醇或氯化钠。

5. 根据权利要求 1或 2的度拉鲁肽注射液，其中所述渗透压调节剂为甘露醇。

6. 根据权利要求 1或 2的度拉鲁肽注射液，其中所述抑菌剂为间曱酚和苯酚中的一种或两者的混合物，优选为间曱酚。

7. 根据权利要求 1或 2的度拉鲁肽注射液，其中所述增溶剂为吐温 -20、吐温 -80中的一种或两种，优选为吐温 -20。

8. 一种度拉鲁肽注射液的制备方法，所述方法包括： (1)按度拉鲁肽： pH调节剂：增溶剂：抑菌剂：渗透压调节剂的重量比为 1.5: ( 2.0-35 ) ： (2-5) ： (7-16) ： ( 180-420 ) 的比例称取各组分；

(3)加入渗透压调节剂，搅拌溶解至溶液澄清；

(4)加入增溶剂和抑菌剂，然后加入度拉鲁肽，搅拌溶解至溶液澄清，过滤除菌；

其中步骤（ 1 )中五种组分的重量总和与加入的注射用水的体积之比以 mg/ml计为 0.6-1.6。

9. 根据权利要求 8的制备方法，其在无菌条件下进行。

10.根据权利要求 1或 2的度拉鲁肽注射液，其包装形式为注射笔。