JP2003518123A - ４−置換７−アザ−インドリン−２−オンおよびその蛋白質キナーゼ阻害剤としての使用 - Google Patents

４−置換７−アザ−インドリン−２−オンおよびその蛋白質キナーゼ阻害剤としての使用

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Abstract

(57)【要約】 本発明は，４−置換７−アザ−インドリン−２−オン，およびその蛋白質キナーゼ阻害剤としての使用に関する。本明細書に開示される特定の４−置換７−アザ−インドリン−２−オンは，式（１）の化合物および薬学的に許容しうる塩，溶媒和物，包接化合物，およびプロドラッグであり，式中，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｘ，Ｙ，およびＺは本明細書において定義されるとおりである。本発明はさらに，式（１）の化合物を含む医薬組成物および投与形態，およびこれを疾病，例えば，限定されないが，癌の治療および／または予防に使用する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は，米国特許仮出願６０／１７１，２８８（１９９９年１２月２１日出
願，その全体を本明細書の一部としてここに引用する）に基づく優先権を主張す
る。
【０００２】１．発明の分野 本発明は，蛋白質キナーゼ阻害剤，これを含む医薬組成物および投与形態，お
よび疾病，例えば，限定されないが，癌の治療および予防にこれを使用する方法
に関する。
【０００３】２．発明の背景 細胞シグナル伝達は，各種の細胞プロセスを制御する外部刺激を細胞表面のレ
セプターから細胞内部にリレーするためのメカニズムである。シグナル伝達の重
要な生物化学的メカニズムの一つは蛋白質の可逆的リン酸化である。蛋白質のリ
ン酸化状態は，そのコンフォメーション，酵素活性，および細胞内局在に影響を
与えることができ，これは蛋白質キナーゼ（"ＰＫ"）と蛋白質ホスファターゼと
の相反的作用により調節される。したがって，蛋白質キナーゼの制御および制御
の欠失は，細胞の挙動に劇的な影響を有する。
【０００４】 細胞のシグナル伝達の間，それぞれのレセプターキナーゼの機能は，その発現
のパターン，リガンドの利用可能性，およびこれにより活性化される一連の下流
のシグナル伝達経路により決定される。経路の一例には，リン酸化を介して他の
キナーゼ，例えばＳｒｃチロシンキナーゼおよびＲａｆ，Ｍｅｋ，およびＥｒｋ
セリン／トレオニンキナーゼにシグナルを伝える，成長因子レセプターチロシン
キナーゼ（"ＲＴＫ"），例えばＥＧＦ−Ｒ，ＰＤＧＦ−Ｒ，ＶＥＧＦ−Ｒ，ＩＧ
Ｆ１−Ｒ，およびインスリンレセプターのカスケードが含まれる。例えば，Ｄａ
ｖｉｓ，Ｂ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ８３８−８４１
（４ｔｈ ｅｄ．，１９９０）；およびＢｒｏｔｔ，Ｂ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，
Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．４（１１）：９２１−９２９（１９９
３）を参照。これらのキナーゼはそれぞれ，関連するが機能的に異なる役割を果
たす。成長因子シグナリング経路の制御の欠失は，癌等の疾病状態においてしば
しば生ずる。
【０００５】 蛋白質キナーゼの異常な発現またはその変異は，制御されない細胞増殖（例え
ば，悪性腫瘍成長），または鍵となる発生プロセスの欠陥につながることが示さ
れている。蛋白質キナーゼは，中枢神経系疾患（例えば，アルツハイマー），炎
症性疾患（例えば，乾癬），骨疾病（例えば，骨粗鬆症），アテローム性動脈硬
化症，再狭窄，血栓症，代謝性疾患（例えば，糖尿病），および感染性疾病（例
えば，ウイルスまたは真菌感染）の標的として関与することが示唆されている。
【０００６】 蛋白質キナーゼの制御および／または阻害は，種々の疾病の治療および／また
は予防を助けることができるため，蛋白質キナーゼ活性に影響を与える化合物の
発見にかなりの数の研究が向けられてきた。この研究は，ＰＣＴ出願ＷＯ９１／
０９５９８および米国特許５，８１１，４３２に開示される化合物の発見につな
がったであろう研究と類似する。この化合物は式：
【化１３】 ［式中，Ａ，Ｂ，Ｄ，およびＥの１つは窒素であり，他のものは炭素であり；Ｘ
およびＹは，例えば，ハロゲンまたはヒドロキシであることができ；Ｒ1は（Ｃ1 −Ｃ6）アルキルまたはアミドであり；Ｒ2は（Ｃ1−Ｃ8）アルキル，好ましくは
（Ｃ3−Ｃ8）アルキルであり；そしてＷは，例えば，水素または（Ｃ2−Ｃ10）
アルカノイルである］ で表される。これらの化合物は，キナーゼ阻害剤であるとは報告されていないが
プロスタグランジンＨ2シンターゼ，５−リポキシゲナーゼ，およびインターロ
イキン−１の生合成の阻害剤であると述べられており，抗炎症剤および鎮痛剤で
あると述べられている。
【０００７】 蛋白質キナーゼ阻害剤であると述べられている化合物の例は，ＰＣＴ出願ＷＯ
９７／１３７７１に開示されている。これらの化合物は，式：
【化１４】 ［式中，Ｘは窒素またはＣＨであり；Ｒ2，Ｙ，Ｒ3，およびＲ5はそれぞれ多数
の成分から選択され；基
【化１５】 は，例えば，５員の複素環を表し；そして各Ｒ1は，独立して，５または６員の
複素環を表す］ で表される。
【０００８】 ＰＣＴ出願ＷＯ９８／０２４３７は，上述した化合物と類似する構造の化合物
を開示する：
【化１６】 上述したように，Ｒ1は５または６員の複素環を表す。これらの化合物もまた，
蛋白質チロシンキナーゼ阻害剤であると述べられている。
【０００９】 ＰＣＴ出願ＷＯ９８／０２４３８は，式：
【化１７】 ［式中，Ｘは窒素またはＣＨであり；Ｒ1，Ｒ2，およびＹは，それぞれ多数の成
分から選択され；Ｕは５−１０員の単環または二環の環系であり；基：
【化１８】 は，例えば，５員の複素環を表し；そしてＲ"はフェニル基または５または６員
の複素環を表す］ の化合物を開示する。これらの化合物もまた，蛋白質チロシンキナーゼ阻害剤で
あると述べられている。
【００１０】 ＰＣＴ出願ＷＯ９８／２３６１３は，式：
【化１９】 ［式中，Ｚは式：
【化２０】 であり，Ｒ6は，Ｈ，ハロゲン，シアノ，アルキル，または置換アルキルである
］ の化合物を開示する。これらの化合物は，過剰増殖疾病，例えば癌の治療に用い
ることができると述べられている。
【００１１】 ＰＣＴ出願ＷＯ９９／２１８５９は，式：
【化２１】 ［式中，Ｒ基は様々に定義されている］ の化合物を開示する。これらの化合物は，蛋白質キナーゼ阻害剤として有用であ
ると記載されている。
【００１２】 ＰＣＴ出願ＷＯ９９／３７６２２は，式：
【化２２】 の化合物を開示し，これはＰＤＥ４およびＴＮＦ−αアンタゴニストとして有用
であると述べられている。
【００１３】 米国特許５，９１６，８９１は，式：
【化２３】 の化合物を開示し，これは，ｐ３８／Ｒａｆ阻害剤であると述べられている式：
【化２４】 の化合物の誘導体である。これらの化合物はいずれも，ロフェコキシブおよびセ
レコキシブと共通の構造的特徴を有する。ロフェコキシブは，商品名Ｖｉｏｘｘ
ｓとしてＭｅｒｃｋ社から販売されており，式：
【化２５】 を有する。セレコキシブはＭｏｎｓａｎｔｏ社から販売されており，式：
【化２６】 を有する。
【００１４】 蛋白質キナーゼ阻害剤として有用であると述べられている化合物の最後の例は
，ＰＣＴ出願ＷＯ８７／０４９２８およびＷＯ９６／１６９６４に開示されてい
る。
【００１５】 多数の化合物が蛋白質キナーゼ活性を阻害すると報告されているが，ヒトの癌
および他の疾病の治療および／または予防において用いることができる化合物は
なお必要とされている。これは，部分的には，生物利用性，毒性および他の問題
点のため，既知の蛋白質キナーゼ阻害剤の多くが臨床開発に適さないからである
。
【００１６】 したがって，本発明は，部分的には，チロシンキナーゼの酵素活性に影響を与
え，このことによりキナーゼから伝達されるシグナルを妨害することにより，蛋
白質キナーゼ（"ＰＫ"）シグナル伝達を調節する化合物に関する。より詳細には
，本発明は，多くの種類の固形腫瘍，例えば，限定されないが，癌腫，肉腫，例
えば，カポジ肉腫，白血病，赤芽球腫，神経膠芽細胞腫，髄膜腫，星状細胞腫，
黒色腫および筋原細胞腫を治療する方法として，ＲＴＫ，細胞チロシンキナーゼ
（"ＣＴＫ"）および／またはセリン／トレオニンキナーゼ（"ＳＴＫ"）に媒介さ
れるシグナル伝達経路を調節する化合物に関する。これらに関連する他の特定の
適応症には，限定されないが，脳癌，膀胱癌，卵巣癌，胃癌，膵臓癌，結腸癌，
血液癌，肺癌，骨癌および白血病が含まれる。
【００１７】 本明細書に記載される化合物がその予防，治療および／または研究に有用であ
るかもしれない，制御されないＰＫ活性に関連する疾患のタイプのさらに別の例
は，限定されないが，細胞増殖疾患，繊維性疾患および代謝性疾患である。本発
明によって予防，治療またはさらに研究することができる細胞増殖疾患には，癌
，血管増殖疾患およびメサンギウム細胞増殖疾患が含まれる。
【００１８】 血管増殖疾患とは，一般に血管の異常な増殖が生ずる脈管形成および新脈管形
成疾患を表す。血管の形成および広がり，すなわちそれぞれ脈管形成および新脈
管形成は，種々の生理学的プロセス，例えば，胚発生，黄体形成，創傷治癒およ
び臓器再生において重要な役割を果たす。これらはまた，癌の発達に中枢的役割
を果たす。血管増殖疾患の他の例には，新たな毛細血管が関節に侵入して軟骨を
破壊する関節炎，および眼性疾病，例えば網膜内の新たな毛細血管が硝子体に侵
入し，出血し，盲目を引き起こす糖尿病性網膜症が含まれる。逆に，血管の縮小
，収縮または閉塞に関連する疾患，例えば再狭窄にも関与する。
【００１９】 繊維性疾患とは，細胞外マトリクスの異常な形成を表す。繊維性疾患の例には
，肝硬変およびメサンギウム細胞増殖疾患が含まれる。肝硬変は，細胞外マトリ
クス構成物の増加，およびそれによる肝瘢痕の形成により特徴づけられる。肝硬
変は，肝臓の肝硬変症等の疾病を引き起こしうる。肝瘢痕につながる細胞外マト
リクスの増加は肝炎ウイルスなどのウイルス感染によっても引き起こされる。脂
肪細胞は，肝硬変において主要な役割を果たしているようである。示唆されてい
る他の繊維性疾患には，アテローム性動脈硬化症が含まれる。メサンギウム細胞
増殖疾患とは，メサンギウム細胞の異常な増殖により引き起こされる疾患を表す
。メサンギウム増殖疾患には，種々のヒト腎臓病，例えば糸球体腎炎，糖尿病性
腎症，悪性腎硬化症，血栓性微小血管症症候群，移植拒絶，および糸球体症が含
まれる。ＰＤＧＦ−Ｒは，メサンギウム細胞増殖の維持における関与が示唆され
ている（Ｆｌｏｅｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ ４３：４７Ｓ−５４Ｓ（１９９３））。
【００２０】 先に記載されているように，ＰＫは，そのような細胞増殖疾患と関連づけられ
ている。例えば，ＲＴＫファミリーのあるメンバーは，癌の発達と関連づけられ
ている。これらのレセプターのいくつか，例えば，ＥＧＦＲ（Ｔｕｚｉ ｅｔ
ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６３：２２７−２３３（１９９１）；Ｔｏｒ
ｐ ｅｔ ａｌ．，ＡＰＭＩＳ １００：７１３−７１９（１９９２））ＨＥＲ
２／ｎｅｕ（Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：７０７−
７１２（１９８９）），およびＰＤＧＦＲ（Ｋｕｍａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎ
ｃｏｇｅｎｅ，７：６２７−６３３（１９９２））は，多くの腫瘍で過剰発現さ
れており，および／またはオートクリンループにより持続的に活性化されている
。実際，最も一般的かつ重症の癌において，これらのレセプターの過剰発現（Ａ
ｋｂａｓａｋ ａｎｄ Ｓｕｎｅｒ−Ａｋｂａｓａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅ
ｕｒｏｌ Ｓｃｉ．，１１１：１１９−１３３（１９９２）；Ｄｉｃｋｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｓ．６１：２４９−２
７３（１９９２）；Ｋｏｒｃ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９
０：１３５２−１３６０（１９９２）），およびオートクリンループ（Ｌｅｅ
ａｎｄ Ｄｏｎｏｇｈｕｅ，Ｊ：Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１８：１０５７−１
０７０（１９９２）；Ｋｏｒｃ ｅｔ ａｌ．，上掲；Ａｋｂａｓａｋ ａｎｄ
Ｓｕｎｅｒ−Ａｋｂａｓａｋ ｅｔ ａｌ．，上掲）が示されている。例えば
，ＥＧＦＲは，扁平上皮癌，星状細胞腫，神経膠芽細胞腫，頭頚部癌，肺癌およ
び膀胱癌と関連づけられている。ＨＥＲ２は，乳，卵巣，胃，肺，膵臓および膀
胱癌と関連づけられている。ＰＤＧＦＲは，神経膠芽細胞腫，肺，卵巣，黒色腫
および前立腺と関連づけられている。ＲＴＫｃ−ｍｅｔは，一般的に肝癌の発癌
と，したがって肝細胞癌腫と関連づけられている。Ｃ−ｍｅｔは，悪性腫瘍形成
と関連づけられている。より詳細には，ＲＴＫｃ−ｍｅｔは，癌の中でも，結腸
直腸，甲状腺，膵臓および胃癌腫，白血病およびリンパ腫と関連づけられている
。さらに，ｃ−ｍｅｔ遺伝子の過剰発現が，ホジキン病，バーキット病を有する
患者，およびリンパ腫細胞株において検出されている。Ｆｌｋは，広範なスペク
トルの腫瘍，例えば，限定されないが，乳，卵巣および肺腫瘍，ならびに神経膠
芽細胞腫等の神経膠腫と関連づけられている。ＩＧＦ−ＩＲは，栄養維持および
タイプＩＩ糖尿病における関与に加えて，いくつかのタイプの癌と関連づけられ
ている。例えば，ＩＧＦ−Ｉは，いくつかの腫瘍タイプ，例えば，ヒト乳癌細胞
（Ａｒｔｅａｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１４１
８−１４２３（１９８９））および小細胞肺癌細胞（Ｍａｃａｕｌｅｙ ｅｔ
ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５０：２５１１−２５１７（１９９０））の
オートクリン成長刺激剤であることが示唆されている。さらに，ＩＧＦ−Ｉは，
神経系の正常な成長および分化に全体的に関与しており，ヒト神経膠腫のオート
クリン刺激剤であるようである（Ｓａｎｄｂｅｒｇ−Ｎｏｒｄｑｖｉｓｔ ｅｔ
ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２４７５−２４７８（１９９３））。
細胞増殖におけるＩＧＦ−ＩＲおよびそのリガンドの重要性は，多くのタイプの
培養細胞（繊維芽細胞，上皮細胞，平滑筋細胞，Ｔ−リンパ球，骨髄細胞，軟骨
細胞，骨芽細胞，骨髄の幹細胞）がＩＧＦ−Ｉにより成長するよう刺激されると
いう事実によってさらに支持される（Ｇｏｌｄｒｉｎｇ ａｎｄ Ｇｏｌｄｒｉ
ｎｇ，Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，１：３０１−
３２６（１９９１））。最近の一連の発表においては，Ｂａｓｅｒｇａはさらに
，ＩＧＦ−ＩＲがトランスフォーメーションのメカニズムに中枢的役割を果たし
，広範なスペクトルのヒト悪性腫瘍に対する治療的介在の好ましい標的でありう
ることを示唆する（Ｂａｓｅｒｇａ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５５：２４９−
２５２（１９９５）；Ｂａｓｅｒｇａ，Ｃｅｌｌ，７９：９２７−９３０（１９
９４）；Ｃｏｐｐｏｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４
：４５８８−４５９５（１９９４））。ＳＴＫは，多くのタイプの癌，特に乳癌
における関与が示唆されている（Ｃａｎｃｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａ
ｎｃｅｒ，５４：５７１−７７（１９９３））。
【００２１】 しかし，異常なＰＫ活性と疾病との関連性は，癌に限られない。例えば，ＲＴ
Ｋは，疾病，例えば，乾癬，糖尿病，子宮内膜症，新脈管形成，じゅく状斑の発
達，アルツハイマー疾病，表皮過増殖および神経変性性疾病，加齢性黄斑変性，
血管腫と関連づけられている。例えば，ＥＧＦＲは，角膜および皮膚の創傷治癒
における関与が示唆されている。タイプＩＩ糖尿病においてインスリン−Ｒおよ
びＩＧＦ−１Ｒの欠陥が示されている。特定のＲＴＫとその治療適応症との間の
より完全な相関はＰｌｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（ＤＮ＆Ｐ７：３３４−３３
９（１９９４））に記載されている。先に記載されているように，ＲＴＫのみな
らず，ＣＴＫ，例えば，限定されないが，ｓｒｃ，ａｂ１，ｆｐｓ，ｙｅｓ，ｆ
ｙｎ，ｌｙｎ，Ｉｃｋ，ｂｌｋ，ｈｃｋ，ｆｇｒおよびｙｒｋ（Ｂｏｌｅｎ ｅ
ｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．，６：３４０３−３４０９（１９９２）により概
説）もまた，増殖および代謝性シグナル伝達経路に関与しており，したがって，
本発明にかかる多くのＰＴＫ媒介性疾患に関与することが予測され，このことが
実際に示されている。例えば，変異したｓｒｃ（ｖ−ｓｒｃ）は，トリにおいて
発癌蛋白質（ｐｐ６０v-src）であることが示されている。さらに，その細胞性
ホモログであるプロトオンコジンｐｐ６０c-srcは，多くのレセプターの発癌シ
グナルを伝達する。例えば，腫瘍におけるＥＧＦＲまたはＨＥＲ２／ｎｅｕの過
剰発現は，悪性細胞に特徴的であるが正常細胞では見られないｐｐ６０c-srcの
構成的活性化につながる。一方，ｃ−ｓｒｃの発現に欠陥を有するマウスは大理
石骨病的表現型を示し，このことは，ｃ−ｓｒｃが破骨細胞機能において鍵とな
るよう関与していること，および関連する疾患に関与している可能性を示唆する
。同様に，Ｚａｐ７０は，Ｔ−細胞シグナリングにおける関与が示唆されている
。
【００２２】 ＰＫは他の疾病および疾患における関与が示唆されている。例えば，ＳＴＫは
，炎症，自己免疫疾病，免疫応答，および過増殖疾患，例えば再狭窄，線維症，
乾癬，変形性関節症および慢性関節リウマチと関連づけられている。ＰＫはまた
，胚着床における関与が示唆されており，本発明の化合物は，胚着床を予防する
有効な方法を提供するかもしれない。最後に，ＲＴＫおよびＣＴＫの両方とも，
超免疫疾患に関与していることが現在疑われている。
【００２３】３．発明の概要 本発明は，新規な４−置換７−アザ−インドリン−２−オン，これらを含む医
薬組成物および投与形態，蛋白質キナーゼ阻害剤としてこれらを使用する方法，
および疾病の治療および／または予防のためにこれらを使用する方法を包含する
。
【００２４】 本発明の第１の態様は式１の化合物またはその薬学的に許容しうる塩，溶媒和
物，包接化合物，またはプロドラッグを含む：
【化２７】 ［式中， Ｒ1は，Ｈまたはメチルであり； Ｒ2およびＲ3は，それぞれ独立して，Ｈ，ハロゲン，（Ｃ1−Ｃ3）アルキル，ま
たは（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシであり；またはＲ2およびＲ3は，一緒になって，任
意に０−３個の複素原子を含んでいてもよい，任意に置換されていてもよいメチ
リデンまたは３−７員の環を形成し； Ｒ4は，Ｈ，メチル，トリフルオロメチル，（Ｃ1−Ｃ4）アルキル，アルコキシ
，アミド，アミノ，または任意に置換されていてもよいアリールであり； Ｘは，化学結合，エチニル，−Ｏ−，−Ｓ−，−Ｓ（Ｏ）−，−Ｓ（Ｏ2）−，
−ＮＲ5Ｃ（Ｏ）−，または−ＮＲ5−であり，ここで，Ｒ5は，Ｈ，メチル，ま
たは置換メチレンであり； Ｙは，０−３個の複素原子を含み，任意に置換されていてもよい，５−１０員の
単環または二環の，飽和，不飽和，または芳香族環であり；および Ｚは，ＮまたはＣＲ6であり，ここで，Ｒ6は，Ｈ，ハロゲン，ニトロ，シアノ，
アルコキシル，スルホンアミド，アミノ，またはアミドである］。
【００２５】 式１の好ましい化合物は，Ｘが化学結合，−Ｏ−，−Ｓ−，または−ＮＲ5−
であるものである。
【００２６】 別の好ましい式１の化合物は，Ｙが，フェニル，インドリル，インドリニル，
１Ｈ−インダゾリル，２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾリル，１Ｈ−ベンズイ
ミダゾリル，２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル，ベンゾトリアゾリ
ル，ピリジル，ピリミジル，４−置換ピペラジン−１−イル，モルホリノ，ピペ
リジニル，ピロリジン−１−イル，フラニル，チオフェニル，ピロリル，ピラゾ
リル，イミダゾリル，ピリドピロリル，ピリダゾピロリル，ピリミドピロリル，
ピラゾピロリル，ピリドフラニル，およびそれらの誘導体からなる群より選択さ
れる化合物である。
【００２７】 別の好ましい式１の化合物は，ＺがＮまたはＣＨである化合物である。 別の好ましい式１の化合物は，Ｒ2およびＲ3がいずれもＨ，ハロゲン，または
メチルである化合物である。
【００２８】 式１の別の好ましい化合物は，Ｒ2およびＲ3が一緒になって，１，３−ジオキ
ソラン，１，３−ジオキサン，シクロプロピル，シクロブチル，シクロペンチル
，およびシクロヘキシルからなる群より選択される環を形成している化合物であ
る。
【００２９】 式１の別の好ましい化合物は，Ｒ2およびＲ3が一緒になって，式１ａ−１ｎか
ら選択される，任意に置換されていてもよいメチリデンを形成する化合物である
：
【化２８】
【化２９】 ［式中， ｎは，０−３の整数であり； 各Ｒ7は，独立して，Ｈ，アルキル，カルボン酸，アミン，ハロゲン，ニトロ，
シアノ，Ｘ1，Ｘ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル−Ｒ8，Ｘ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルケニル
−Ｒ8，またはＸ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルキニル−Ｒ8であり； Ｘ1は，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ9−，−ＮＲ9Ｃ（Ｏ）−，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 1 ，−ＯＣ（Ｏ）−，−Ｏ−，−ＮＲ9−，−Ｓ−，−Ｓ（Ｏ2），または−Ｓ（
Ｏ2）ＮＲ9−であり； Ｘ2は，化学結合，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ9−，−ＮＲ9Ｃ（Ｏ）−，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−，
Ｃ（Ｏ）Ｒ11，−ＯＣ（Ｏ）−，−Ｏ−，−ＮＲ9−，−Ｓ−，−Ｓ（Ｏ2），ま
たは−Ｓ（Ｏ2）ＮＲ9−であり； Ｒ8は，水素，ジアルキルアミノ，カルボキシル，ヒドロキシル，アルコキシ，
スルホンアミド，尿素，カルバメート，ジオール，アルキルスルホニル，および
Ｒ10からなる群より選択され； Ｒ9は，Ｈまたは（Ｃ1−Ｃ3）アルキルであり； Ｒ10は，１−４個の複素原子を含む，任意に置換されていてもよい５または６員
の飽和，不飽和，または芳香族複素環であり；および Ｒ11は，任意に置換されていてもよい５または６員の飽和複素環である］。
【００３０】 本発明のより好ましい化合物においては，Ｒ7は，Ｘ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル
−Ｒ8，Ｘ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルケニル−Ｒ9，またはＸ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルキニ
ル−Ｒ8であり，Ｒ8は，アルキルスルホニル，アルコキシ，カルボキシル，モル
ホリノ，１−アルキル−ピペラジン−４−イル，ピロリジニル，ピペリジニル，
ピリジル，イミダゾロ，トリアゾロ，テトラゾロ，およびチアゾロからなる群よ
り選択される。
【００３１】 本発明のさらに別の好ましい化合物は，Ｒ4が，Ｈ，メチル，またはトリフル
オロメチルである式１の化合物である。 本発明のさらに別の好ましい化合物は，ＺがＣＨであるとき，Ｒ1はＣＨ3であ
るか，またはＲ3およびＲ2が任意に置換されていてもよいメチリデンを形成しな
い，式１の化合物である。
【００３２】 本発明の特定の好ましい化合物は式３−５４の化合物，およびその薬学的に許
容しうる塩，溶媒和物，包接化合物，およびプロドラッグである：
【化３０】
【化３１】
【化３２】
【化３３】
【化３４】
【化３５】 本発明の化合物の好ましい薬学的に許容しうる塩は塩酸塩である。
【００３３】 本発明の第２の態様は，式２の化合物を製造する方法を包含する：
【化３６】 ［式中，Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｒ1，Ｒ4，Ｒ7，およびｎは上で定義したとおりである］
。該方法は，式：
【化３７】 ［式中，Ｌは脱離基である］ の化合物を，式２の化合物を形成するのに十分な条件下で，式ＹＸＨの化合物と
反応させることを含む。好ましい脱離基には，限定されないが，Ｂｒ，Ｃｌ，Ｓ
ＣＨ3，およびＳ（Ｏ）ＣＨ3が含まれる。この態様の好ましい方法においては，
反応は溶媒中で実施する。好ましい溶媒は極性溶媒である。より好ましい溶媒に
は，限定されないが，アルコール，ＤＭＦ，ＤＭＳＯ，およびこれらの混合物が
含まれる。この態様の別の好ましい方法においては，反応は，触媒，例えば，限
定されないが，ＡｇＯＴｆ，Ｐｄ（Ｐｈ3）4，およびｐ−ＴｓＯＨにより触媒さ
れる。
【００３４】 本発明の第３の態様は，式２の化合物を製造する方法を包含する。該方法は，
式：
【化３８】 の化合物を，式２の化合物を形成するのに十分な条件下で式：
【化３９】 の化合物と反応させることを含む。この態様の好ましい方法においては，反応は
溶媒中で行う。好ましい溶媒は，極性溶媒である。より好ましい溶媒には，限定
されないが，アルコール，ＤＭＦ，ＤＭＳＯ，およびこれらの混合物が含まれる
。この態様の別の好ましい方法においては，反応は塩基により触媒される。好ま
しい塩基には，限定されないが，ピリジンおよびピペリジンが含まれる。
【００３５】 本発明の第４の態様は，式１の化合物，またはその薬学的に許容しうる塩，溶
媒和物，包接化合物，またはプロドラッグ，および薬学的に許容しうる担体を含
む医薬組成物を包含する。この態様はさらに，経口，経皮，局所，非経口（例え
ば，皮下，鞘内，筋肉内，および静脈内），または粘膜（例えば，直腸，膣，お
よび鼻腔）投与に適した投与形態を包含する。したがって，本発明においては，
固体の，凍結乾燥した，注射可能なおよび経皮局所処方が企図される。
【００３６】 本発明の第５の態様は，蛋白質キナーゼ活性を制御，調節または阻害する方法
を包含する。該方法は，式１の化合物，またはその薬学的に許容しうる塩または
溶媒和物を蛋白質キナーゼと接触させる。この態様の好ましい方法においては，
蛋白質キナーゼは蛋白質チロシンキナーゼである。好ましくは，接触は，培養細
胞中で（インビトロ）またはヒト，動物またはトリで（インビボ）で行う。
【００３７】 この態様の別の好ましい方法においては，蛋白質キナーゼは，ａｂ１，ＡＴＫ
，ｂｃｒ−ａｂ１，Ｂｌｋ，Ｂｒｋ，Ｂｔｋ，ｃ−ｆｍｓ，ｃ−ｋｉｔ，ｃ−ｍ
ｅｔ，ｃ−ｓｒｃ，ＣＤＫ１，ＣＤＫ２，ＣＤＫ４，ＣＤＫ６，ｃＲａｆｌ，Ｃ
ＳＦ１Ｒ，ＣＳＫ，ＥＧＦＲ，ＥｒｂＢ２，ＥｒｂＢ３，ＥｒｂＢ４，ＥＲＫ，
Ｆａｋ，ｆｅｓ，ＦＧＦＲ１，ＦＧＦＲ２，ＦＧＦＲ３，ＦＧＦＲ４，ＦＧＦＲ
５，Ｆｇｒ，ＦＬＫ−４，ｆｌｔ−１，Ｆｐｓ，Ｆｒｋ，Ｆｙｎ，ＧＳＫ，Ｇｓ
ｔ−Ｆｌｋｌ，Ｈｃｋ，Ｈｅｒ−２，Ｈｅｒ−４，ＩＧＦ−１Ｒ，ＩＮＳ−Ｒ，
Ｊａｋ，ＪＮＫ，ＫＤＲ，Ｌｃｋ，Ｌｙｎ，ＭＥＫ，ｐ３８，ＰＡＮＨＥＲ，Ｐ
ＤＧＦＲ，ＰＬＫ，ＰＫＣ，ＰＹＫ２，Ｒａｆ，Ｒｈｏ，ｒｏｓ，ＳＲＣ，ｔｉ
ｅ1，ｔｉｅ2，ＴＲＫ，ＵＬ９７，ＶＥＧＦＲ，Ｙｅｓ，およびＺａｐ７０から
なる群より選択される。
【００３８】 この態様のより好ましい方法においては，蛋白質キナーゼは，ＰＡＮＨＥＲ，
ＥＧＦＲ，Ｈｅｒ−２，Ｈｅｒ−４，ＰＤＧＦＲ，ＳＲＣ，Ｌｃｋ，ｃｄｋ２，
ｐ３８，Ｒａｆ，およびＲｈｏからなる群より選択される。 この態様のさらに好ましい方法においては，蛋白質キナーゼは，ＰＡＮＨＥＲ
，ＣＤＫ２，ＰＤＧＦＲ，ｐ３８，およびＲａｆからなる群より選択される。
【００３９】 本発明の第６の態様は，制御されない蛋白質キナーゼ活性により特徴づけられ
る疾病を治療または予防する方法を包含する。該方法は，そのような治療または
予防を必要とする患者（例えば，哺乳動物，好ましくはヒト）に，治療上または
予防上有効量の，式１の化合物またはその薬学的に許容しうる塩，溶媒和物，包
接化合物，またはプロドラッグを投与することを含む。
【００４０】 この態様の好ましい方法においては，制御されない蛋白質キナーゼ活性により
特徴づけられる疾病は，血管増殖疾患，例えば，限定されないが，関節炎および
再狭窄；繊維性疾患，例えば，限定されないが，肝硬変およびアテローム性動脈
硬化症；メサンギウム細胞増殖疾患，例えば，限定されないが，糸球体腎炎，糖
尿病性腎症，悪性腎硬化症，血栓性微小血管症症候群，臓器移植拒絶，および糸
球体症；代謝性疾患，例えば，限定されないが，乾癬，糖尿病，慢性創傷，炎症
，および神経変性性疾病；自己免疫疾病；アレルギー；ぜん息；血栓症；神経系
疾病；および癌からなる群より選択される。
【００４１】 この態様のより好ましい方法においては，制御されない蛋白質キナーゼ活性に
より特徴づけられる疾病は癌である。癌の例には，限定されないが，乳，胃，卵
巣，結腸，肺（非小細胞を含む），脳，喉頭，リンパ系，尿生殖器管（膀胱およ
び前立腺を含む），卵巣，胃，骨，および膵臓癌が含まれる。
【００４２】３．１．定義 本明細書において用いる場合，"ハロゲン"との用語には，フッ素，塩素，臭素
，およびヨウ素が含まれる。
【００４３】 本明細書において用いる場合，"アルキル"との用語には，直鎖，環状，または
分枝鎖成分，およびこれらの組み合わせを有する飽和の一価炭化水素ラジカルが
含まれる。
【００４４】 本明細書において用いる場合，"アルケニル"との用語には，少なくとも１つの
炭素−炭素二重結合を含む，直鎖，環状，または分枝鎖成分，およびこれらの組
み合わせを有する飽和の一価炭化水素ラジカルが含まれる。
【００４５】 本明細書において用いる場合，"アルキニル"との用語には，少なくとも１つの
炭素−炭素三重結合を含む，直鎖，環状，または分枝鎖成分，およびこれらの組
み合わせを有する飽和の一価炭化水素ラジカルが含まれる。
【００４６】 本明細書において化合物または成分を記述するために用いる場合，"誘導体"と
の用語は，少なくとも１つの結合の飽和の程度が変化している（例えば，単結合
が二重または三重結合で置き換えられている），または少なくとも１つの水素原
子が異なる原子または化学成分で置き換えられている，化合物または成分を意味
する。種々の原子および化学成分の例には，限定されないが，ハロゲン，酸素，
窒素，イオウ，ヒドロキシ，メトキシ，アルキル，アミン，アミド，ケトン，お
よびアルデヒドが含まれる。
【００４７】 本明細書において化合物または成分を記述するために用いる場合，"置換"とは
，少なくとも１つの水素原子が異なる原子または化学成分で置き換えられている
化合物または成分を意味する。種々の原子および化学成分の例には，限定されな
いが，ハロゲン，酸素，窒素，イオウ，ヒドロキシ，メトキシ，アルキル，アミ
ン，アミド，ケトン，およびアルデヒドが含まれる。
【００４８】 本明細書において用いる場合，"複素原子"との用語は，Ｏ，Ｓ，およびＮから
なる群より選択される原子を意味する。
【００４９】 本明細書において用いる場合，"メチリデン"との用語は，任意に置換されてい
てもよい炭素−炭素二重結合を意味する。
【００５０】 本明細書において用いる場合，"プロドラッグ"との用語は，生物学的条件下で
（インビトロまたはインビボで），加水分解，酸化または他の反応によりその化
合物を生ずる化合物の誘導体を意味する。プロドラッグの例には，限定されない
が，生物加水分解可能な成分，例えば，アミド，エステル，カルバメート，カー
ボネート，またはウレイドを含む，式１の化合物の誘導体が含まれる。そのよう
な生物加水分解可能な成分は，例えば，ペプチドに結合させることができる。
【００５１】 本明細書において用いる場合，"生物加水分解可能なカルバメート"，"生物加
水分解可能なカーボネート"および"生物加水分解可能なウレイド"との用語は，
１）化合物の生物学的活性を妨害しないが，その化合物にインビボで有利な特性
，例えば取り込み，作用の持続，または作用の開始を付与することができる；ま
たは２）生物学的に不活性であるが，インビボで生物学的に活性な化合物に変換
される，のいずれかである化合物の，それぞれカルバメート，カーボネート，ま
たはウレイドを意味する。生物加水分解可能なカルバメートの例には，限定され
ないが，低級アルキルアミン，置換エチレンジアミン，アミノ酸，ヒドロキシア
ルキルアミン，複素環および複素芳香族アミン，およびポリエーテルアミンが含
まれる。
【００５２】 本明細書において用いる場合，"生物加水分解可能なエステル"との用語は，１
）化合物の生物学的活性を妨害しないが，その化合物にインビボで有利な特性，
例えば取り込み，作用の持続，または作用の開始を付与することができる；また
は２）生物学的に不活性であるが，インビボで生物学的に活性な化合物に変換さ
れる，のいずれかである化合物のエステルを意味する。生物加水分解可能なエス
テルの例には，限定されないが，低級アルキルエステル，アルコキシアシルオキ
シエステル，アルキルアシルアミノアルキルエステル，および塩素エステルが含
まれる。
【００５３】 本明細書において用いる場合，"生物加水分解可能なアミド"との用語は，１）
化合物の生物学的活性を妨害しないが，その化合物にインビボで有利な特性，例
えば取り込み，作用の持続，または作用の開始を付与することができる；または
２）生物学的に不活性であるが，インビボで生物学的に活性な化合物に変換され
る，のいずれかである化合物のアミドを意味する。生物加水分解可能なアミドの
例には，限定されないが，低級アルキルアミド，α−アミノ酸アミド，アルコキ
シアシルアミド，およびアルキルアミノアルキルカルボニルアミドが含まれる。
【００５４】 本明細書において用いる場合，"制御されない蛋白質キナーゼ活性により特徴
づけられる疾病"との用語は，異常なキナーゼ活性により引き起こされるかまた
は悪化する疾病または状態を意味する。そのような疾病または状態の例には，限
定されないが，制御されない細胞増殖（例えば，悪性腫瘍成長），または鍵とな
る発生プロセスの欠陥が含まれる。特定の例には，限定されないが，中枢神経系
疾患，炎症性疾患，骨疾病，アテローム性動脈硬化症，再狭窄，血栓症，代謝性
疾患，および感染性疾病が含まれる。
【００５５】 本明細書において用いる場合，"治療する"との用語には，疾病の症状の改善，
減少，または根絶が含まれる。
【００５６】４．発明の詳細な説明 本発明は，１またはそれ以上の蛋白質キナーゼの活性に影響を及ぼす化合物を
包含する。本発明はさらに，レセプターおよび非レセプタータイプの療法の蛋白
質キナーゼを制御，調節，および／または阻害する方法において有用な化合物を
包含する。本発明はさらに，トリおよび動物において，特にヒト等の哺乳動物に
おいて，制御されない蛋白質キナーゼ活性に関連する疾病および疾患を治療また
は予防する方法を提供する。
【００５７】 本発明の化合物は，式１：
【化４０】 ［式中，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｘ，Ｙ，およびＺは本明細書において定義される
とおりである］ の化合物およびその薬学的に許容しうる塩，溶媒和物，包接化合物，およびプロ
ドラッグである。本発明のある種の化合物は，１またはそれ以上のキラル中心ま
たは軸を有することが理解されるべきである。したがって，本発明はさらに，式
１の化合物のラセミ体および光学的に純粋エナンチオマーを包含する。本発明は
また，式１の化合物の結晶およびアモルファス形，ならびに，凍結乾燥した，凍
結乾燥していない，および滅菌した組成物を包含する。
【００５８】 式１の化合物の薬学的に許容しうる塩には，酸性成分または塩基性成分の塩が
含まれる。本来塩基性である本発明の化合物は，種々の無機および有機酸と広範
な種類の塩を形成することができる。そのような塩基性化合物の薬学的に許容し
うる酸付加塩を製造するために用いることができる酸は，非毒性付加塩，すなわ
ち薬学的に許容しうるアニオンを含む塩，例えば，限定されないが，塩酸塩，シ
ュウ酸塩，ヨウ素酸，硝酸塩，硫酸塩，亜硫酸塩，リン酸塩，リン酸，イソニコ
チン酸塩，酢酸塩，乳酸塩，サリチル酸塩，クエン酸塩，クエン酸，酒石酸塩，
パントテン酸塩，二酒石酸塩，アスコルビン酸塩，コハク酸塩，マレイン酸塩，
ゲンチシン酸，フマル酸塩，グルコン酸塩，グルクロン酸塩，サッカレート，ギ
酸塩，安息香酸塩，メタンスルホン酸塩，エタンスルホン酸塩，ベンゼンスルホ
ン酸塩，ｐ−トルエンスルホン酸塩，およびパモエート［すなわち，１，１’−
メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート）］を形成する酸である
。塩基性成分，例えばアミノ基を含む本発明の化合物は，上述した酸に加えて，
種々のアミノ酸と薬学的に許容しうる塩を形成することができる。
【００５９】 本来酸性である本発明の化合物は，種々の薬学的に許容しうるカチオンと塩基
付加塩を形成することができる。そのような塩の例には，限定されないが，アル
カリ金属またはアルカリ土類金属塩，例えば，カルシウム，マグネシウム，ナト
リウム，およびカリウム塩が含まれる。
【００６０】４．１．合成 本発明の化合物は，４−クロロ−１，３−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｂ］ピ
リジン−２−オンまたは４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］
ピリミジン−６−オン，または他の商業的にまたは容易に入手可能な出発物質か
ら容易に製造することができる。４−クロロ−１，３−ジヒドロ−ピロロ［２，
３−ｂ］ピリジン−２−オンを製造する好ましい方法は，スキーム１に示される
：スキーム１
【化４１】
【００６１】 スキーム１にしたがえば，化合物（ａ）を塩素で処理して化合物（ｂ）を得る
。当業者に知られる種々の反応条件を用いて化合物（ａ）を塩素で処理すること
ができるが，ＰＯＣｌ3を用いることが好ましい。次に，化合物（ｂ）を，ｔ−
ブタノール中のＣ5Ｈ5Ｎ−ＨＢｒ−Ｂｒ2を用いて化合物（ｃ）に変換する。こ
の反応は，好ましくは室温で約４時間行うが，当業者は，溶媒および反応温度お
よび時間を様々に変化させて化合物（ｃ）の収量を最大にすることができること
を認識するであろう。最後に，化合物（ｃ）に結合した臭素原子を水素原子で置
き換えることにより，４−クロロ−１，３−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｂ］ピ
リジン−２−オン（化合物（ｄ））を形成する。これは酢酸中の亜鉛を用いて容
易に行うことができるが，当業者に知られる他の方法を用いることもできる。
【００６２】 ４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン
を製造する好ましい方法はスキーム２に記載される：スキーム２
【化４２】
【００６３】 スキーム２にしたがえば，化合物（ｅ）を塩基性条件下でホルムアミジン塩酸
と反応させて，化合物（ｆ）を得る。次に，化合物（ｆ）を酸性条件下で，好ま
しくは１Ｎ水性ＨＣｌを用いて環化させて，化合物（ｇ）を得る。次に化合物（
ｇ）のケト成分を，例えば，ＰＯＣｌ3を用いて塩素で置き換える。次に，得ら
れた化合物（ｈ）を，ｔ−ブタノール中のＣ5Ｈ5Ｎ−ＨＢｒ−Ｂｒ2を用いて化
合物（ｉ）に変換する。この反応は，好ましくは，室温で約４時間行うが，当業
者は，溶媒および反応温度および時間を様々に変化させて化合物（ｉ）の収量を
最大にすることができることを認識するであろう。最後に，化合物（ｉ）に結合
した臭素原子を水素原子で置き換えることにより，４−クロロ−５，７−ジヒド
ロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（化合物（ｊ））を形成する。
これは酢酸中の亜鉛を用いて容易に行うことができるが，当業者に知られる他の
方法を用いることもできる。
【００６４】 本発明の化合物は，４−クロロ−１，３−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｂ］ピ
リジン−２−オンおよび４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］
ピリミジン−６−オンから容易に製造することができる。好ましい方法はスキー
ム３に示され，ここで，Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｒ1，Ｒ4，Ｒ7，Ｌ，およびｎのそれぞれ
は本明細書において定義されるとおりである： スキーム３
【化４３】
【００６５】 スキーム３にしたがえば，出発物質（ｋ）を適当な反応条件下でピロールの誘
導体とカップリングさせて，化合物（ｌ）を得る。次に，脱離基Ｌを成分ＸＹで
置き換えて，化合物２を得る。
【００６６】 本発明の化合物を製造する別の好ましい方法は，スキーム４に示される。 スキーム４
【化４４】
【００６７】 スキーム４にしたがえば，化合物（ｍ）をＸＹとカップリングさせて，化合物
（ｎ）を形成する。次に，化合物（ｎ）を，ｔ−ブタノール中のＣ5Ｈ5Ｎ−ＨＢ
ｒ−Ｂｒ２を用いて化合物（ｏ）に変換する。この反応は，好ましくは，室温で
約４時間行うが，当業者は，溶媒および反応温度および時間を様々に変化させて
化合物（ｏ）の収量を最大にすることができることを認識するであろう。最後に
，化合物（ｏ）を適当な反応条件下でピロールの誘導体とカップリングさせて，
化合物２を得る。
【００６８】４．２．生物学的活性 本発明の化合物が蛋白質キナーゼの活性に影響を及ぼす能力は当業者によく知
られる方法を用いて容易に決定することができる。例えば，化合物を目的とする
キナーゼを発現する細胞と接触させ（インビトロまたはインビボで），その後，
（ａ）培養細胞の表現型の変化を化合物に暴露されていない対照細胞と比較して
評点することができる；または（ｂ）細胞溶解物を調製してリン酸化された蛋白
質を評価することができる。
【００６９】 この後者の方法は，いくつかの方法論により例示される。一般的な手法は，細
胞をリガンドおよび放射性リン酸とともにインキュベートし，細胞を溶解させ，
一次元または二次元のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）手
法を用いて細胞成分を分離し，次にＸ線フィルムを露光することにより，リン酸
化された蛋白質の存在を検出することを含む。類似の手法は，ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
を用いて細胞成分を分離し，分離された成分を固体支持体，例えばニトロセルロ
ースのシートに移し，次に抗ホスホチロシン抗体（抗ＰＹ）を用いてリン酸化さ
れたチロシンの存在を検出することを含む。抗ＰＹは，放射性物質でこれを標識
し，放射活性を検出するよう設計された特別の装置を用いて標識ニトロセルロー
スをスキャンするか，またはＸ線フィルムを露光することにより検出することが
できる。あるいは，抗ＰＹを西洋ワサビペルオキシダーゼ等の酵素で標識し，次
に酵素用の発色基質を加えることにより検出することができる。さらに別の方法
は，抗ＰＹを，抗ＰＹを認識し上述したように放射活性成分または酵素で標識さ
れている第二抗体と反応させることにより検出することを含む。これらのおよび
類似の手法の例は，Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓ
ｉｓ １４：１１２−１２６（１９９３）；Ｃａｍｐｂｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，
Ｊ：Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：７４２７−７４３４（１９９３）；Ｄｏｎａ
ｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＣｅｌｌＧｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｉｆｆ．３：２５８−
２６８（１９９２）；およびＫａｔａｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１５０：５８５−５９３（１９９３）に記載されている。
【００７０】 本発明の化合物の生物学的活性を決定するのに用いることができる他のＥＬＩ
ＳＡタイプのアッセイは，Ｐｅｒａｌｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ
．２８５：７１−７８（１９９２）；Ｓｃｈｒａａｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ
ｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２１１：２３３−２３９（１９９３
）；Ｃｌｅａｖｌａｎｄ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
１９０：２４９−２５３（１９９０）；Ｆａｒｌｅｙ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０３：１５１−１５７（１９９２）；およびＬｚ
ａｒｏ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９２：２５７−
２６１（１９９１）に記載されている。
【００７１】 本発明の化合物が蛋白質キナーゼ活性に影響を及ぼす能力を決定するための好
ましい方法は，米国特許出願０８／２３４，４４０（本明細書の一部としてここ
に引用する）に記載されている。この方法にしたがえば，キナーゼを発現し，シ
グナル伝達の間にリン酸化されるかまたは脱リン酸化される標的細胞を本発明の
化合物に暴露する。その後，標的細胞を溶解して，蛋白質基質を含む内容物を放
出させる。基質は，細胞溶解物を固体支持体に固定化した基質特異的抗体と接触
させ，次に他の細胞成分を洗い流すことにより単離することができる。単離した
基質についてイムノアッセイを行って，目的とする化合物に暴露されていない対
照標的細胞の溶解物と比較して，基質上のホスホチロシン残基の存在または非存
在を検出する。本発明の化合物の生物学的効果を測定する他の好ましい方法は，
以下の実施例２０−２４に記載される。
【００７２】４．３．医薬組成物および治療方法 本発明の化合物（本明細書においては"活性成分"または"活性化合物"とも称さ
れる）は，蛋白質キナーゼ活性を制御，調節，または阻害するために用いること
ができる。したがって，これらは，トリおよび動物において，疾病または疾患の
治療および／または予防に用いることができる。好ましい患者は哺乳動物であり
，特にヒトである。本発明の方法により治療または予防することができる疾病お
よび疾患の例には，限定されないが，血管増殖疾患，例えば，限定されないが，
関節炎および再狭窄；繊維性疾患，例えば，限定されないが，肝硬変およびアテ
ローム性動脈硬化症；メサンギウム細胞増殖疾患，例えば，限定されないが，糸
球体腎炎，糖尿病性腎症，悪性腎硬化症，血栓性微小血管症症候群，臓器移植拒
絶，および糸球体症；代謝性疾患，例えば，限定されないが，乾癬，糖尿病，慢
性創傷，炎症，および神経変性性疾病；自己免疫疾病；アレルギー；ぜん息；血
栓症；神経系疾病；および癌が含まれる。癌の例には，限定されないが，乳，胃
，卵巣，結腸，肺（非小細胞肺癌を含む），脳，喉頭，リンパ系，尿生殖器管（
膀胱および前立腺），卵巣，胃，骨，および膵臓癌が含まれる。
【００７３】４．３．１．投与経路および投与形態 本発明の化合物は，任意の適切な経路，例えば，限定されないが，経口，経皮
，局所，非経口（例えば，皮下，鞘内，筋肉内，および静脈内），および粘膜（
例えば，直腸，膣および鼻腔）経路により患者に投与することができる。本発明
に包含される投与形態には，限定されないが，錠剤，カプレット，カプセル，ト
ローチ，分散物，懸濁液，坐剤，溶液，クリーム，パッチ，溶液，再構成して溶
液とするのに適した凍結乾燥固体，およびエアロゾル（例えばミニポンプの形で
）が含まれる。
【００７４】 本発明の化合物は，全身的方法ではなく局所に，例えば化合物を固形癌内に直
接，しばしばデポ剤または持続放出製剤中で注射（例えばボーラス注射）するこ
とにより投与してもよい。さらに，化合物はターゲティングされたドラッグデリ
バリーシステムにおいて，例えば腫瘍特異的抗体により被覆されたリポソーム中
で投与してもよい。リポソームは腫瘍にターゲティングされ，選択的に取り込ま
れるであろう。
【００７５】 本発明の医薬組成物は，当該技術分野においてよく知られる方法，例えば慣用
の混合，溶解，顆粒化，糖衣作成，研和，乳化，カプセル封入，捕捉，または凍
結乾燥法により製造することができる。すなわち，医薬組成物は，活性物質を薬
学的に許容しうる製剤に加工することを容易にする賦形剤および補助剤を含む，
１またはそれ以上の生理学的に許容しうる担体を用いて，処方することができる
。適切な処方は，選択される投与経路に依存する。
【００７６】 注射用には，活性成分を水溶性溶液，好ましくはハンクス溶液，リンゲル溶液
，または生理的食塩緩衝液等の生理学的に適合性の緩衝液中で処方することがで
きる。経粘膜投与用には，浸透すべき障壁に適した浸透剤を処方に用いる。その
ような浸透剤は当該技術分野において一般に知られている。
【００７７】 経口投与のためには，活性成分を当該技術分野においてよく知られる薬学的に
許容しうる担体と混合することができる。そのような担体は，本発明の化合物を
，治療すべき患者による経口摂取のための錠剤，丸薬，糖衣剤，カプセル，液体
，ゲル，シロップ，スラリー，懸濁液等として製剤することを可能とする。経口
で使用するための医薬製剤は，本発明の化合物を固体賦形剤と混合し，得られた
混合物を任意にすりつぶし，混合物を顆粒に加工し，任意に適当な助剤を加えて
，錠剤または糖衣錠コアを得ることができる。適当な賦形剤には，例えば，ラク
トース，ショ糖，マンニトール，またはソルビトール等の糖類；トウモロコシデ
ンプン，小麦デンプン，米デンプン，およびジャガイモデンプン等のセルロース
製品，ゼラチン，トラガカントゴム，メチルセルロース，ヒドロキシプロピルメ
チルセルロース，カルボキシメチルセルロースナトリウム，および／またはポリ
ビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の増量剤などが含まれる。所望の場合には，架橋
されたポリビニルピロリドン，寒天，またはアルギン酸またはその塩，例えばア
ルギン酸ナトリウム等の崩壊剤を加えてもよい。
【００７８】 糖衣剤のコアは，ラクトースを含まないものであってもよく，適当なコーティ
ングとともに提供されて，本発明の錠剤を得る。この目的のためには，濃縮され
た糖溶液を用いることができる。これは，アラビアゴム，タルク，ポリビニルピ
ロリドン，カルボポールゲル，ポリエチレングリコール，および／または二酸化
チタン，ラッカー溶液，および適当な有機溶媒または溶媒混合物を任意に含むこ
とができる。識別のため，あるいは活性成分の用量の異なる組合せを特徴づける
ため，染料または色素を錠剤または糖衣剤コーティングに添加してもよい。
【００７９】 経口投与することができる医薬製剤には，ゼラチンから作成されるプッシュフ
ィットカプセル，ならびにゼラチンおよびグリセロール，ソルビトール等の可塑
剤から作成される密封軟カプセルが含まれる。プッシュフィットカプセルは，活
性成分を，ラクトース等の増量剤，デンプン等の結合剤，および／またはタルク
およびステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤，さらに任意に安定剤との混合物中
に含むことができる。軟カプセルにおいては，活性化合物は脂肪油，流動パラフ
ィン，または液体ポリエチレングリコール等の適当な液体中に溶解または懸濁す
ることができる。さらに安定剤を添加してもよい。経口投与用のすべての処方は
，そのような投与に適当な用量で調製すべきである。
【００８０】 口内投与のためには，本発明の投与形態は，慣用的な方法で処方された錠剤ま
たはトローチ剤の形であることができる。
【００８１】 吸入による投与用には，本発明の活性成分は，加圧されたパックまたはネブラ
イザーから，適当な噴射剤，例えば，ジクロロジフルオロメタン，トリクロロフ
ルオロメタン，ジクロロテトラフルオロエタン，二酸化炭素を用いて，エアーゾ
ルスプレイの形状で便利に輸送することができる。加圧されたエアーゾルの場合
，用量単位は計量された量を送達するべく備えられたバルブにより調節すること
ができる。例えば吸入器または注入器において使用するためのゼラチン製のカプ
セルおよびカートリッジは，化合物の粉末混合物と，ラクトースまたはデンプン
等の適当な粉末基剤とを含むよう処方することができる。
【００８２】 本発明の化合物は，例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与用に
処方することができる。注射用の処方は，単位用量で，例えばアンプルで，また
は添加された保存料と共に多用量容器中で提供することができる。組成物は油性
または水性のベヒクル中で，懸濁液，溶液，または乳濁液等の形状をとることが
でき，懸濁剤，安定剤および／または分散剤等の処方用物質を含んでいてもよい
。
【００８３】 非経口投与用の薬剤処方は，水溶性の形態の活性化合物の水性溶液を含む。さ
らに，活性化合物の懸濁液を，適当な油性の注入用懸濁液として調製することが
できる。適切な親油性溶媒またはベヒクルには，ゴマ油等の脂肪油，オレイン酸
エチルまたはトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル，またはリポソーム等を含
む。水性の注射用懸濁液は，カルボキシメチルセルロースナトリウム，ソルビト
ール，またはデキストラン等の，懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでいても
よい。任意に，懸濁液はまた，高度に濃縮された溶液の調製を可能にする，化合
物の溶解性を増加させる適当な安定剤または薬剤を含んでいてもよい。
【００８４】 本発明の活性成分はまた，粉体の形態であって，使用前に適当なベヒクル，例
えば発熱物質を含まない滅菌水を用いて構成することができる。
【００８５】 本発明の化合物はまた，例えばカカオバターまたは他のグリセリド等の慣用の
坐剤基剤を用いて，坐剤または停留浣腸等の直腸用組成物に処方することができ
る。本明細書に開示される化合物は，さらにデポ製剤として処方することができ
る。そのような長時間作用性の処方は，埋込み（例えば皮下または筋肉内への）
によるか，または筋肉内注射により投与することができる。すなわち，化合物は
，適当な高分子性または疎水性物質と共に（例えば薬理学的に許容される油剤中
の乳濁液として），イオン交換樹脂と共に，または溶けにくい塩等の溶けにくい
誘導体として，処方することができる。
【００８６】 疎水性である本発明の化合物のための好ましい薬学的担体は，ベンジルアルコ
ール，非極性界面活性剤，水混和性有機ポリマーおよび水性相を含む共溶媒系で
ある。共溶媒系はＶＰＤ共溶媒系であってもよい。ＶＰＤは，３％（ｗ／ｖ）ベ
ンジルアルコール，８％（ｗ／ｖ）非極性界面活性剤ポリソルベート８０，およ
び６５％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコール３００を純粋エタノール中に作成し
た溶液である。ＶＰＤ共溶媒系（ＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）は，ＶＰＤを５％デキストロ
ースの水溶液中に１：１で希釈したものである。この共溶媒系は疎水性化合物を
よく溶解し，それ自体，全身投与に際して低い毒性を示す。本来，共溶媒系の比
率は，その溶解性および毒性特性を破壊することなく相当変化させることができ
る。さらに，共溶媒成分の同一性も変化させることができる。例えば，他の低毒
性非極性界面活性剤をポリソルベート８０の代わりに用いることができ，ポリエ
チレングリコールの分画サイズは様々でありうる。他の生体適合性ポリマー，例
えばポリビニルピロリドンをポリエチレングリコールの代わりに用いることがで
き，他の糖または多糖類をデキストロースの代わりに用いることができる。
【００８７】 あるいは，疎水的医薬化合物のための他の輸送系を用いてもよい。リポソーム
および乳剤は，疎水的薬剤のための輸送用ベヒクルまたは担体の例としてよく知
られている。さらに，ある種の有機溶媒，例えばジメチルスルホキシドもまた用
いることができるが，しばしば毒性がより高くなる。さらに，本発明の化合物は
，持続放出系，例えば治療薬剤を含む固体疎水性ポリマーの準透過性マトリック
スを用いて輸送することができる。当業者には種々の持続放出材料がよく知られ
ている。持続放出カプセルはその化学的性質に応じて，数週間から１００日を越
える期間，化合物を放出する。治療薬剤の化学的性質および生物学的安定性に応
じて，さらに別の蛋白質安定化戦略を用いてもよい。
【００８８】 医薬組成物はまた，適当な固体またはゲル相の担体または賦形剤を含んでいて
もよい。そのような担体または賦形剤の例には，限定されないが，炭酸カルシウ
ム，リン酸カルシウム，種々の糖，デンプン，セルロース誘導体，ゼラチン，お
よびポリエチレングリコール等の高分子が含まれる。
【００８９】 上述した一般的投与形態に加えて，本発明の化合物はまた，制御放出手段およ
び／または輸送デバイス，例えばＡｌｚｅｔ浸透圧ポンプ（Ａｌｚａ Ｃｏｒｐ
ｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡより入手可能）により投与すること
ができる。適当な輸送デバイスは，米国特許３，５３６，８０９；３，５９８，
１２３；３，８４５，７７０；３，９１６，８９９；３，９４４，０６４および
４，００８，７１９に記載されており，これらの開示の全体を本明細書の一部と
してここに引用する。
【００９０】 本発明の組成物は，所望の場合には，活性成分を含む１またはそれ以上の単位
用量形を含んでいてもよいパックまたはディスペンサー装置で提供することがで
きる。パックは，例えば，ブリスターパックなどの金属またはプラスチック箔を
含むことができる。パックまたはディスペンサー装置には，投与の指示が添付さ
れていてもよい。適合した薬学的担体中に処方された，本発明の化合物を含む組
成物もまた製造され，適当な容器内に配置され，指示された条件による治療のた
めにラベルを付すことができる。ラベル上に示される適切な状態としては，腫瘍
，例えば神経膠腫または神経膠芽細胞腫の治療，および新脈管形成の阻害が挙げ
られる。
【００９１】 本発明において用いるのに適した医薬組成物には，活性成分がその意図される
目的を達成するのに有効な量で含まれる組成物が含まれる。有効量の決定は，特
に本明細書に提供される詳細な開示に鑑みて，十分に当業者の能力の範囲内であ
る。
【００９２】４．３．２．投与量 本発明の方法において用いられる任意の化合物について，治療上または予防上
有効な用量は，最初は細胞培養アッセイから見積もることができる。例えば，動
物モデルにおいて，培養細胞において決定されたＩＣ50（すなわちキナーゼ活性
の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度範囲を達成する
ような用量を処方することができる。そのような情報は，ヒトにおける有用な用
量をさらに正確に決定するために用いることができる。
【００９３】 治療上有効量とは，患者の症状の軽減または生存の長期化をもたらす化合物の
量を表す。予防上有効量とは，疾病または状態の開始を予防するかまたは遅らせ
るのに十分な化合物の量を表す。本発明の化合物の毒性および治療上有効性は，
培養細胞または実験動物における標準的な薬学的方法，例えば，ＬＤ50（集団の
５０％に致死的な用量）およびＥＤ50（集団の５０％において治療上有効な用量
）を決定するための方法により決定することができる。毒性と治療的または予防
的効果との間の用量の比は治療指数であり，ＬＤ50に対するＥＤ50の比率として
表すことができる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。これらの培養細胞ア
ッセイおよび動物研究から得られるデータは，ヒトにおいて用いるためのある範
囲の投与量を処方するために用いることができる。そのような化合物の投与量は
，好ましくは，ＥＤ50を含み毒性がほとんどまたは全くない循環濃度の範囲内に
ある。投与量は，用いる投与形態および用いる投与経路により，この範囲内で様
々でありうる。正確な処方，投与経路，および投与量は，個々の医師が，患者の
状態を考慮して選択することができる（例えば，Ｆｉｎｇｌ ｅｔ ａｌ．１９
７５，"Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅ
ｒａｐｅｕｔｉｃｓ"，Ｃｈ．１，ｐ．１を参照）。
【００９４】 投与量および間隔は，個々に，活性成分がキナーゼ調節効果を維持するのに十
分な血漿レベル，すなわち最小有効濃度（ＭＥＣ）を与えるよう調節することが
できる。ＭＥＣは，各化合物について異なるが，インビトロのデータ，例えば，
本明細書に記載されるアッセイを用いて，キナーゼの５０−９０％の阻害を達成
するのに必要な濃度から見積もることができる。ＭＥＣを達成するのに必要な投
与量は，個々の特性および投与経路に依存するであろうが，高速液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）アッセイまたはバイオアッセイを用いて血漿濃度を決定す
ることができる。
【００９５】 投与間隔もまた，ＭＥＣ値を用いて決定することができる。化合物は，１０−
９０％の時間，好ましくは３０−９０％の時間，最も好ましくは５０−９０％の
時間，ＭＥＣより高い血漿レベルを維持する投与計画を用いて投与すべきである
。
【００９６】 全身投与用の通常の患者の投与量は，１−２０００ｍｇ／日，一般には１−２
５０ｍｇ／日，典型的には１０−１５０ｍｇ／日の範囲である。患者の体重に関
して表すと，通常の投与量は，０．０２−２５ｍｇ／ｋｇ／日，一般には０．０
２−３ｍｇ／ｋｇ／日，典型的には０．２−１．５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である
。患者の体表面積に関して表すと，通常の投与量は，０．５−１２００ｍｇ／ｍ 2 ／日，一般には０．５−１５０ｍｇ／ｍ2／日，典型的には５−１００ｍｇ／ｍ 2 ／日の範囲である。通常の平均血漿レベルは，５０−５０００μｇ／ｍｌ，一
般には５０−１０００μｇ／ｍｌ，および典型的には１００−５００μｇ／ｍｌ
の範囲内に維持すべきである。ただし，局所投与または選択的取り込みの場合に
は，薬剤の有効な局所濃度は血漿濃度とは関係ないであろう。しかし，当業者に
は認識されるように，これらの投与量および血漿レベルは，患者，治療する疾病
（例えば，異なる癌は異なる投与量を必要とするであろう），投与の経路，およ
び用いられる特定の活性成分により様々であろう。用量，およびおそらくは投与
頻度もまた，個々の患者の年齢，体重，および応答により様々であろう。したが
って，新生児，小児，および６５歳以上の患者，および腎臓または肝臓機能に障
害を有する患者には，最初に低用量を投与し，個々の臨床応答および血液レベル
に基づいて用量を評定することが推奨される。
【００９７】 望ましい血中レベルは，血漿レベルをＨＰＬＣによりモニターしながら化合物
を連続注入することにより維持することができる。担当医師は，毒性または骨髄
，肝臓または腎臓の機能不全のために，投与をいつどのように終了し，中断し，
または調節するかがわかるであろうことに注意すべきである。担当医師は，臨床
応答が不適切である場合には，治療をより高いレベルに調節することがわかるで
あろう（毒性を防止しつつ）。
【００９８】 本発明のさらなる利点は，以下の非限定的実施例から理解することができる。
【００９９】５．実施例 ５．１．実施例１ ４−クロロ−［３−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−オンの合成
１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−７−オキシド（１．８６ｇ，１３．９ｍ
ｍｏｌ，参考文献：Ｊ Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４５（２０）：４０４５−８（１９
８０））を１０ｍＬのオキシ塩化リンに溶解した。反応混合物を６時間還流し，
室温に冷却し，濃縮した。残渣を酢酸エチル／水で抽出した。有機層をブライン
で洗浄してｐＨ６とし，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮し，真空オーブン中
で一夜乾燥して，０．８８ｇ（４２％）の４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−
ｂ］ピリジンを褐色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−
ｄ6）δ１１．９９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．１６（ｄ，Ｊ＝５．１５Ｈ
ｚ，１Ｈ），７．５７（ｔ，ｂｒ，Ｊ＝３３８Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ
＝５．１５Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．８０，３．３８Ｈｚ，１Ｈ
）．ＭＳｍ／ｅ１５３［Ｍ+］．
【０１００】 ｔ−ブタノール（２５ｍＬ）中の４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピ
リジン（０．４ｇ，２．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に，ピリジニウムブロマイドパ
ーブロマイド（ＰＢＰＢ，２．５ｇ，７．８ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応
混合物を室温で３時間撹拌し，さらに０．３９ｇ（３．１ｍｍｏｌ）のＰＢＰＢ
を加えた。得られた反応混合物をさらに１時間撹拌し，酢酸エチル／水で抽出し
た。有機層をブラインで洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥し，濃縮した。粗
生成物をジクロロメタン中で砕いて，０．７３３ｇ（８６％）の３，３−ジブロ
モ−４−クロロ−１，３−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−オン
を褐色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．
２３（ｓ，ｂｒ，ＮＨ），８．２０（ｄ，Ｊ＝５．６６Ｈｚ，１Ｈ），および７
．３０（ｄ，Ｊ＝５．６６Ｈｚ，１Ｈ）．ＭＳｍ／ｅ３２６［Ｍ+］．
【０１０１】 ３，３−ジブロモ−４−クロロ−１，３−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｂ］ピ
リジン−２−オン（０．７４５ｇ，２．３ｍｍｏｌ），亜鉛粉（１．４９ｇ，２
３ｍｍｏｌ），酢酸（１０ｍＬ）およびメタノール（１０ｍＬ）の混合物を室温
で２時間撹拌した。次に反応混合物をブラインで希釈し，酢酸エチルで抽出した
。有機層をさらにブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮し，真
空オーブン中で乾燥して，０．３ｇ（７８％）の４−クロロ−１，３−ジヒドロ
−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−オンを褐色固体として得た。1Ｈ ＮＭ
Ｒ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．２１（ｓ，ｂｒ，ＮＨ），８．０
１（ｄ，Ｊ＝５．６６Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝５．６６Ｈｚ，１Ｈ）
，および３．５９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）．ＭＳｍ／ｅ１６８［Ｍ+］．
【０１０２】 ５．２．実施例２ ４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オンの
合成 ４０ｍＬの純粋エタノール中の４５．２ｍｍｏｌのナトリウムエトキシド（ナト
リウムおよび純粋エタノールからインシトゥーで作成）の溶液に，ホルムアミジ
ン塩酸（１．７４ｇ，２１．５ｍｍｏｌ）および２−シアノ−４，４−ジエトキ
シ−酪酸エチルエステル（２．４７ｇ，１１ｍｍｏｌ，参考文献：Ｄａｖｏｌｌ
，Ｊ．，ＪＣｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３１−１３８（１９６０））を加えた。混合物
を６時間還流し，室温に冷却し，濾過した。固体を熱アセトニトリルで洗浄した
。濾液を酢酸で中和してｐＨ６．５とし，次に容量の半分を蒸発させた。得られ
た濾液に酢酸エチル（５０ｍＬ）を加えた。沈殿物を濾過し，ＥｔＯＡｃで洗浄
して，１．６ｇ（６６％）の６−アミノ−５−（２，２−ジエトキシ−エチル）
−３Ｈ−ピリミジン−４−オンを白色固体として得，これをさらに精製すること
なく用いた。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．４６（ｓ，
ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．６８（ｓ，１Ｈ），６．０７（ｓ，ｂｒ，２Ｈ，ＮＨ
２），４．５４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ（ＯＣＨ2ＣＨ3）2），３．
５３−５．６２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ（ＯＣＨ2ＣＨ3）2），３．３１−３．４９（
ｍ，２Ｈ，ＣＨ（ＯＣＨ2ＣＨ3）2），２．５０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），および１
．０５（ｔ，Ｊ＝６．９３Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＯＣＨ2ＣＨ3）2）
【０１０３】 ６−アミノ−５−（２，２−ジエトキシ−エチル）−３Ｈ−ピリミジン−４−
オン（１５０ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）を５．０ｍＬの１ＮＨＣｌ溶液に溶解した
。混合物を室温で１時間撹拌し，沈殿物を濾過し，最少量の水で洗浄し，真空オ
ーブン中で一夜乾燥して，６０ｍｇ（６４％）の３，７−ジヒドロ−ピロロ［２
，３−ｄ］ピリミジン−４−オンを白色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０
ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．８３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１．７５（ｓ，１
Ｈ，ＮＨ），７．８０（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｄｄ，Ｊ＝２．６５，３．２１
Ｈｚ，１Ｈ），および６．４２（ｄｄ，Ｊ＝２．０９，３．２１Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳｍ／ｅ１３４［Ｍ＋１］+
【０１０４】 ３，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン（６０ｍｇ，
０．４５ｍｍｏｌ）を３．０ｍＬのオキシ塩化リンと反応させて，４９ｍｇ（７
０％）の４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを灰白色固体とし
て得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．５７（ｓ，ｂｒ
，１Ｈ，ＮＨ），８．５８（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｄｄ，Ｊ＝２．５３，３．
３６Ｈｚ，１Ｈ），および６．５９（ｄｄ，Ｊ＝１．８６，３．３６Ｈｚ，１Ｈ
）．Ｓｍ／ｅ１５３［Ｍ−１］+．
【０１０５】 ４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２４５ｍｇ，１．６５
ｍｍｏｌ）を，ＰＢＰＢを用いて酸化して，２３０ｍｇ（４２％）の５，５−ジ
ブロモ−４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６
−オンを白色固体として得た。次にこれを亜鉛粉を用いて還元して，８０ｍｇ（
４２％）の４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−
６−オンを淡褐色固体として得た。
【０１０６】 ５．３．実施例３ ５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−２−オキソ−１，
２−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イリデンメチル］−４−メ
チル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）
−アミド（式３）の合成 氷冷した３ｍＬ（３９．２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）に，オキシ塩化リン（０．６７ｍＬ，７．１８ｍｍｏｌ）を滴加し，得られた
混合物を３０分間撹拌した。３ｍＬのＤＭＦ中の１ｇ（６．５３ｍｍｏｌ）の４
−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステルの溶液を反応液に加
えた。１時間後，反応液を室温まであたためさらに２．５時間撹拌した。反応混
合物を水（１００ｍＬ）で希釈し，１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で塩基性にしてｐ
Ｈ＝１１とした。沈殿物を濾過により除去し，水ですすぎ，乾燥して，０．８ｇ
（６８％）の５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチ
ルエステルを白色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6 ）δ１２．６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．７８（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），６．６
８（ｓ，１Ｈ），４．２６（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），２．
２８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ 3 ）．ＭＳ１８１［Ｍ+］．
【０１０７】 ３５ｍＬの水および１５ｍＬのエタノール中の０．８ｇ（４．４ｍｍｏｌ）の
５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステルの
溶液に，０．５ｇ（８．９ｍｍｏｌ）の水酸化カリウムを加えた。反応混合物を
１００℃で１時間加熱し，室温に冷却し，エタノールを留去した。水層を２Ｎ塩
化水素溶液を用いて酸性にしてｐＨ＝３とした。沈殿物を濾過し，水で洗浄して
，０．６７ｇ（６８％）の５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カ
ルボン酸を褐色固体として得た。ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）ｄ
１２．９２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯ2Ｈ），１２．４８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），
９．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ−５），６．６３（ｓ，１Ｈ），２．２８（ｓ，３
Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳｍ／ｚ１５２［Ｍ−１］．
【０１０８】 アセトニトリル中の５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボ
ン酸（２ｇ，１３ｍｍｏｌ）の懸濁液に，４−（２−アミノエチル）モルホリン
（１．９ｍＬ，１４ｍｍｏｌ），ＥＤＣ（２．７ｇ，１４ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ
（１．９ｇ，１４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．６ｍＬ，２６ｍｍｏ
ｌ）を順番に加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌し，減圧下で濃縮した。
残渣を３００ｍＬの１Ｎ塩化水素溶液に溶解した。水性層を１５０ｍＬの酢酸エ
チルで２回洗浄し，炭酸水素ナトリウムで塩基性にした。次に生成物を２５０ｍ
Ｌのジクロロメタンで２回抽出し，ＭｇＳＯ4で乾燥し，濃縮して，１．８ｇ（
５３％）の５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−
モルホリン−４−イル−エチル）−アミドを黄色がかった固体として得た。1Ｈ
ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．１９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ
），９．７２（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），８．２９（ｂｒｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ
，ＣＯＮＨ），６．６５（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），３．５（ｍ，４Ｈ），
３．３（ｍ，２Ｈ，ＣＯＮＣＨ2），２．４（ｍ，６Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ
，ＣＨ3）．ＭＳｍ／ｚ２６５［Ｍ+］．
【０１０９】 ４−クロロ−１，３−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−オン（
８５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ），５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２
−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（１２５ｍｇ，０
．５ｍｍｏｌ），０．１ｍＬのピペリジンおよび１０ｍＬのエタノールの反応混
合物を室温で一夜撹拌した。氷浴中で冷却した後に黄色沈殿物を濾過し，冷エタ
ノールで洗浄し，乾燥して，１８５ｍｇ（９２％）の５−（４−クロロ−２−オ
キソ−１，２−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イリデンメチル
）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル
−エチル）−アミドを得た。
【０１１０】 ５−（４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｂ］ピ
リジン−３−イリデンメチル）４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（
２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（１０ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ
），３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミン（５０ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ
），ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）および１
ｍＬの２−メトキシエチルエーテルの混合物を密封管中で１８０−１９０℃で６
時間加熱し，室温に冷却し，濃縮した。次に残渣を調製用ＴＬＣプレートで精製
し，ジクロロメタン中１０％メタノールで溶出して，５−［４−（３−クロロ−
４−フルオロ−フェニルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピロロ［２
，３−ｂ］ピリジン−３−イリデンメチル］−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２
−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミドを橙色固体として
得た（収率は約２８％）。
【０１１１】 ５．４．実施例４ ５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−６−オキソ−６，
７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］−４−
メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル
）−アミド塩酸（式４）の合成 ４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（
８０ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−
２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（１２４ｍｇ，
０．４７ｍｍｏｌ）と室温で縮合させて，５０ｍｇ（２６％）の５−（４−クロ
ロ−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イ
リデンメチル）４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン
−４−イル−エチル）−アミドを黄色固体として得た。
【０１１２】 ５−（４−クロロ−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピ
リミジン−５−イリデンメチル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン
酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（４４ｍｇ，０．１１ｍｍｏ
ｌ），３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミン（１５４ｍｇ，１．１ｍｍｏ
ｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１０．１ｍｇ，０．０５３ｍｍｏ
ｌ），１−メチル−２−ピロリジノン（２．５ｍＬ）および２−メトキシエチル
エーテル（２．５ｍｌ）の混合物を１９０℃で１６時間加熱し，濃縮した。残渣
を逆相ＨＰＬＣにより精製し，次に２ＮＨＣｌおよびアセトニトリルに溶解し，
凍結乾燥して，２４ｍｇ（３９％）の５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−
フェニルアミノ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリ
ミジン−５−イリデンメチル］−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸
（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド塩酸を赤色固体として得た。1
Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．４６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．７９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．７４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＨＣｌ），９．
３３（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），８．３３（
ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝２．３９，６．６８Ｈｚ，１Ｈ
），７．３８−７．４７（ｍ，２Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝９．０３，１Ｈ），
６．９４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），３．９６（ｄｔ，Ｊ＝５．７４，１１．３７Ｈｚ
，２Ｈ，ＣＨ2），３．８０（ｔ，Ｊ＝１２．１０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．６
８（ｄｄ，Ｊ＝５．９９＆１１．６１Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．５２（ｄ，ｂ
ｒ，Ｊ＝１２．４４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２９−３．３１（ｍ，２Ｈ，Ｃ
Ｈ2），３．１０−３．１３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），および２．２３（ｓ，３Ｈ，
ＣＨ3）．ＭＳ５２６［Ｍ+］．
【０１１３】 ５．５．実施例５ ５−（６−オキソ−４−ピペリジン−イル−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３
−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（
２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（式５）の合成 エタノール（４ｍＬ）中の４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ
］ピリミジン−６−オン（８５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）および５−ホルミル−１
Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド
（１２５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）の混合物に，０．２ｍＬのピペリジンを加えた
。混合物を室温で２０時間撹拌した。氷浴で冷却した後に黄色沈殿物を濾過し，
冷エタノールで洗浄し，乾燥して，１１４ｍｇ（５０．６％）の表題化合物を得
た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．２３（ｂｒｓ，１Ｈ
，ＮＨ），１１．６８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．３９（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨ
ＣＨ2），８．３２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．１１（ｓ，１Ｈ），６．９
１−６．９８（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．３８（ｍ
，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．３９−２．４７（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），１．６５
（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2）．ＭＳ４５２．２［Ｍ+＋１］．
【０１１４】 ５．６．実施例６ ５−［４−（１−ベンジル−１−インドール−５−イルアミノ）−６−オキソ−
６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］−
４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エ
チル）−アミド塩酸（式６）の合成 表題化合物（８％収率）は，５−（４−クロロ−６−オキソ−６，７−ジヒドロ
−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル）−４−メチル−１Ｈ
−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミドお
よび１−ベンジル−１Ｈ−インドール−５−イルアミンから，実施例１２に記載
される方法にしたがって製造した。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6 ）δ１３．４４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．７９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），
１０．９７（ｂｒｓ，１Ｈ，ＨＣ1），９．２８（ｂｒｓ，１Ｈ），８．８５（
ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），８．２５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．１
−７．５（ｍ，１０Ｈ），６．８９（ｂｒｓ，１Ｈ），６．４３（ｓ，１Ｈ），
５．４０（ｓ，２Ｈ），３．９６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．８４（ｍ，２Ｈ，
ＣＨ2），３．６８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．５２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．
２９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．１２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５３（ｓ，３Ｈ
，ＣＨ3）．
【０１１５】 ５．７．実施例７ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３，５−ジメチル
−４−（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメ
チレン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン塩酸
（式７）の合成 エタノール（４ｍＬ）中の４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ
］ピリミジン−６−オン（８５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）および３，５−ジメチル
−４−（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボ
アルデヒド（１２５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）の混合物に，０．１−０．２ｍＬの
ピペリジンを加えた。混合物を室温で２０時間撹拌した。氷浴で冷却した後，黄
色沈殿物を濾過し，冷エタノールで洗浄し，乾燥して，８９ｍｇ（４５％）の４
−クロロ−５−［３，５−ジメチル−４−（３−モルホリン−４−イル−プロピ
ル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，
３−ｄ］ピリミジン−６−オンを得た。
【０１１６】 表題化合物（１０％収率）は，４−クロロ−５−［３，５−ジメチル−４−（
３−モルホリン−４−イル−プロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オンおよび３−ク
ロロ−４−フルオロ−フェニルアミンから実施例１２に記載される方法にしたが
って製造した。
【０１１７】 ５．８．実施例８ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−（５−メチル−３Ｈ
−イミダゾール−４−イルメチレン）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ
］ピリミジン−６−オン（式８）の合成 ４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（
１等量）を，５−メチル−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボアルデヒド（１等量
）と室温で縮合させて，（７６．９％）の４−クロロ−５−（５−メチル−３Ｈ
−イミダゾール−４−イルメチレン）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ
］ピリミジン６−オンを得た。
【０１１８】 表題化合物（２３％収率）は，４−クロロ−５−（５−メチル−３Ｈ−イミダ
ゾール−４−イルメチレン）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミ
ジン−６−オンおよび３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミンから，実施例
１２に記載の方法にしたがって，ただしＨＣｌ塩に変換せずに製造した。1Ｈ
ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．４５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．７６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．１９（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，
１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｍ，１Ｈ），７．４５
（ｍ，２Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ３
７１．４［Ｍ+＋１］．
【０１１９】 ５．９．実施例９ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−（３，５−ジメチル
−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−
ｄ］ピリミジン−６−オン（式９）の合成 ４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（
１等量）を，３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（１等
量）と室温で縮合させて，（４４．５％）の４−クロロ−５−（３，５−ジメチ
ル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３
−ｄ］ピリミジン−６−オンを得た。
【０１２０】 表題化合物（５７％収率）は，４−クロロ−５−（３，５−ジメチル−１Ｈ−
ピロール−２−イルメチレン）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリ
ミジン−６−オンおよび３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミンから，実施
例１２に記載の方法にしたがって，ただしＨＣｌ塩に変換せずに製造した。1Ｈ
ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．１０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ
），１１．６０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．２７（ｓ
，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７０（ｍ，１Ｈ），７．３−７．４（ｍ，３Ｈ），
６．０４（ｂｒｓ，１Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．１６（ｓ，３
Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ３８４．３［Ｍ+＋１］．
【０１２１】 ５．１０．実施例１０ ４−メチル−５−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−６−オキソ−
６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］−
１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル］−アミ
ド（式１０）の合成 表題化合物（４７％収率）は，５−（４−クロロ−６−オキソ−６，７−ジヒド
ロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル）−４−メチル−１
Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド
および１−メチルピペラジンから，実施例１４に記載の方法にしたがって製造し
た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．３７（ｂｒｓ，１Ｈ
，ＮＨ），１１．８３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．５６（ｖｂｒｓ，１Ｈ）
，８．４５（ｖｂｒｓ，１Ｈ），８．３８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．０９
（ｓ，１Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），３．４−３．６（ｍ，１０Ｈ，５ｘＣＨ 2 ），２．８５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４−２．６（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ 2 ），２．４９（ＤＭＳＯ下，３Ｈ，ＣＨ3），２．３１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳ４８１．３［Ｍ+＋１］．
【０１２２】 ５．１１．実施例１１ ５−（５−メチル−３Ｈ−イミダゾール−４−イルメチレン）−４−（４−メチ
ル−ピペラジン−１−イル）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミ
ジン−６−オン（式１１）の合成 表題化合物（４９％収率）は，４−クロロ−５−（５−メチル−３Ｈ−イミダゾ
ール−４−イルメチレン）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジ
ン−６−オンおよび１−メチルピペラジンから，実施例１４に記載の方法にした
がって製造した。ＭＳ−ＥＩ３２５［Ｍ+］．
【０１２３】 ５．１２．実施例１２ ５−［４−（１−ベンジル−１Ｈ−インドール−５−イルアミノ）−６−オキソ
−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］
−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−ア
ミド塩酸（式１２）の合成 ２ｍＬの１−メチル−２−ピロリジノンおよび２−メトキシエチルエーテル（１
：３）中の５−（４−クロロ−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３
−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（
２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド，１−ベンジル−１Ｈ−インドー
ル−５−イルアミンおよびｐ−トルエンスルホン酸（５ｍｇ）の混合物を１７０
−１８５℃で７−１５時間加熱した。反応混合物を蒸発乾固させ，逆相ＨＰＬＣ
により精製し，次に２ＮＨＣｌおよびアセトニトリルに溶解し，凍結乾燥して，
１３．５ｍｇ（４２％）の表題化合物を得た。ＭＳ５８９．３［Ｍ+＋１］．
【０１２４】 ５．１３．実施例１３ ５−（４−モルホリン−４−イル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２
，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン
酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（式１３）の合成 表題化合物（３５％収率）は，５−（４−クロロ−６−オキソ−６，７−ジヒド
ロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール
−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミドおよびモルホ
リンから，実施例１４に記載の方法にしたがって製造した。ＭＳ−ＥＩ４５３［
Ｍ+］．
【０１２５】 ５．１４．実施例１４ ５−（５−メチル−３Ｈ−イミダゾール−４−イルメチレン）−４−モルホリン
−４−イル−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（
式１４）の合成 エタノール（１．５ｍＬ）中の４−クロロ−５−（５−メチル−３Ｈ−イミダゾ
ール−４−イルメチレン）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジ
ン−６−オン（２６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）およびモルホリン（１００ｍｇ，１
．１５ｍｍｏｌ）の混合物を密封管中で１１０℃で３時間加熱した。反応溶液を
蒸発乾固させ，冷エタノールで処理した。黄色沈殿物を濾過して，２２ｍｇ（７
０．５％）の表題化合物を得た。ＭＳ−ＥＩ３１２［Ｍ+］．
【０１２６】 ５．１５．実施例１５ ５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−６−オキソ−６，
７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］−１Ｈ
−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（
式１５）の合成 ４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（
１等量）を，エタノール中の５−ホルミル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（
２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（１等量）およびトリエチルアミ
ンと室温で縮合させて，（９２．５％）の５−（４−クロロ−６−オキソ−６，
７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル）−１Ｈ
−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミドを
得た。
【０１２７】 表題化合物（１６％収率）は，５−（４−クロロ−６−オキソ−６，７−ジヒ
ドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロー
ル−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミドおよび３−
クロロ−４−フルオロ−フェニルアミンから，実施例１２に記載の方法にしたが
って，ただしＨＣｌ塩に変換せずに製造した。ＭＳ５１２．３［Ｍ＋１］．
【０１２８】 ５．１６．実施例１６ ５−［４−（３−エチニル−フェニルアミノ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ
−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］−１Ｈ−ピロール−
２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド塩酸（式１６）
の合成 表題化合物（２０％収率）は，５−（４−クロロ−６−オキソ−６，７−ジヒド
ロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール
−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミドおよび３−エ
チニルアニリンから，実施例１２に記載の方法にしたがって製造した。ＭＳ４８
４．３［Ｍ+＋１］．
【０１２９】 ５．１７．実施例１７ ５−［４−（３−エチニル−フェニルアミノ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ
−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］−４−メチル−１Ｈ
−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（
式１７）の合成 表題化合物（１５％収率）は，５−（４−クロロ−６−オキソ−６，７−ジヒド
ロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル）−４−メチル−１
Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド
および３−エチニルアニリンから，実施例１２に記載の方法にしたがって，ただ
し，ＨＣｌ塩に変換せずに製造した。ＭＳ４９８．２［Ｍ+＋１］．
【０１３０】 ５．１８．実施例１８ ５−［３，５−ジメチル−４−（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−１Ｈ
−ピロール−２−イルメチレン］−４−（３−エチニル−フェニルアミノ）−５
，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式１８）の合成
表題化合物（７％収率）は，４−クロロ−５−［３，５−ジメチル−４−（３−
モルホリン−４−イル−プロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−５
，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オンおよび３−エチニ
ルアニリンから，実施例１２に記載の方法にしたがって，ただしＨＣｌ塩に変換
せずに製造した。ＭＳ４８３．３［Ｍ+＋１］．
【０１３１】 ５．１９．実施例１９ ３−｛５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−６−オキソ
−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］
−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−イル｝−プロピオン酸（式１９）の
合成 ２５ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
（７６７．９ｍｇ，５ｍｍｏｌ）および３−クロロ−４−フルオロ−フェニルア
ミン（８７３．４ｍｇ，６ｍｍｏｌ）の溶液に，窒素下で，銀トリフルオロメタ
ンスルホン酸（１．５４ｇ，６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を９５℃で１５時間
撹拌した。冷却した。反応液を酢酸エチル（７０ｍＬ）で希釈し，セライトを通
して濾過し，酢酸エチルでよく洗浄した。濾液をブライン（５ｘ）で洗浄した。
ブラインを酢酸エチルで抽出し，次にこれをブラインで洗浄した。合わせた酢酸
エチルを乾燥し（硫酸マグネシウム），濃縮し，精製して，１．２２ｇ（９３％
）の（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］
ピリミジン−４−イル）−アミンを灰白色固体として得た。ｍ．ｐ．２７４−２
７５Ｃ．1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７８（ｂｒｓ，
１Ｈ，ＮＨ），９．４１（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），８．２８（ｍ，
１Ｈ），７．７９（ｍ，１Ｈ），７．３７（ｔ，１Ｈ），７．２５（ｍ，１Ｈ）
，６．７６（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ２６３．４［Ｍ+＋１］．
【０１３２】 １ｍＬのｔ−ブタノール中の（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−（７
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−アミン（２６．３ｍｇ，０
．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に，６４ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）のピリジニウムブロ
マイドパーブロマイド（ＰＢＰＢ）を少しずつ加えた。反応混合物を室温で４時
間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し，水，水性硫酸ナトリウム，ブライン
で洗浄し，乾燥し，濃縮して，５，５−ジブロモ−４（３−クロロ−４−フルオ
ロ−フェニルアミノ）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−
６−オンを得た（精製せずに次の工程で用いた）。
【０１３３】 ２ｍＬの酢酸中の５，５−ジブロモ−４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェ
ニルアミノ）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン
（上述より），亜鉛粉の混合物を室温で１時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで
希釈し，濾過した。濾液を水，炭酸水素ナトリウムおよびブラインで洗浄し，乾
燥し，濃縮し，精製して，１１．２ｍｇ（２工程の合計収率４０％）の４−（３
−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，
３−ｄ］ピリミジン−６−オンを灰白色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００
ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．０８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．０２（ｓ
，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｍ，１Ｈ），７．５８（ｍ，１Ｈ
），７．３５（ｔ，１Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）．ＭＳ２７９．３［
Ｍ+ｌ］．
【０１３４】 エタノール（１ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ
）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（６．３ｍ
ｇ，０．０２２６ｍｍｏｌ），３−（５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−
ピロール−３−イル）−プロピオン酸（４．９ｍｇ，０．０２４９ｍｍｏｌ）お
よびピペリジン（４滴）の混合物を室温で２４時間撹拌した。反応液を濃縮し，
精製（逆相ＨＰＬＣ）して，５．２ｍｇ（５１％）の表題化合物を得た。ＭＳ４
５６．４［Ｍ+＋１］．
【０１３５】 ５．２０．実施例２０ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−メチル−５，７−ジ
ヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オンの合成 本発明のこの特定の方法においては，表題化合物はスキーム５にしたがって製造
する： スキーム５
【化４５】
【０１３６】 スキーム５にしたがい，ＤＭＦ（５ｍＬ）中の４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２
，３−ｄ］ピリミジン（１２１ｍｇ，０．７９ｍｍｏｌ）の溶液に，炭酸セシウ
ム（９６８ｍｇ，３ｍｍｏｌ）を，続いてヨウ化メチル（１ｇ，７．１ｍｍｏｌ
）を加えた。混合物を室温で６時間撹拌した。反応液を水に注加し，酢酸エチル
で抽出した。有機層をブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮し，カラムクロマトグラ
フィーを行って，１１６ｍｇ（８８％）の４−クロロ−７−メチル−７Ｈ−ピロ
ロ［２，３−ｄ］ピリミジンを白色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨ
ｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）８．６２（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），６．６２
（ｓ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
【０１３７】 ＤＭＦ（６ｍＬ）中の４−クロロ−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］
ピリミジン（３９８．８ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）および３−クロロ−４−フルオ
ロ−フェニルアミン（３７８ｍｇ，２．６ｍｍｏｌ）の混合物を室温で２分間撹
拌した。これに，銀トリフレート（６７２ｍｇ，２．６ｍｍｏｌ）を加え，次に
混合物を９０℃で２時間撹拌した。次に反応液を酢酸エチルで希釈し，沈殿物を
濾別し，沈殿物を１０％アンモニア溶液で洗浄した。濾液を酢酸エチルで抽出し
，乾燥し，濃縮した。残渣を酢酸エチル中で砕き，濾過して，５４９．１ｍｇ（
８３％）の（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−（７−メチル−７Ｈ−ピ
ロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−アミンを灰白色固体として得た。 1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）９．４８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８
．３５（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝２．７＆６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．
７５−７．８０（ｍ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３
０（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），３
．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ２７７［Ｍ+＋１］．
【０１３８】 ＰＢＰＢ（２．８ｇ，７．８ｍｍｏｌ）を，ｔｅｒｔ−ブタノール（２０ｍＬ
）および酢酸（１０ｍＬ）中に懸濁した（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル
）−（７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−アミ
ン（１．０８ｇ，３．９ｍｍｏｌ）に少しずつ加えた。室温で１８時間撹拌した
後，混合物に亜鉛粉（７６０ｍｇ，１１．７ｍｍｏｌ）を少しずつ加え，撹拌を
一夜続けた。沈殿物を濾別し，濾液を濃縮した。残渣を少量の水中で砕き，沈殿
物を真空濾過により回収し，少量の酢酸エチルで洗浄し，乾燥して，１．１２ｇ
（９８％）の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−メチル
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オンを褐色固体と
して得た。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）９．０７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．４
２（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝２．６＆７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（
ｍ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ，Ｃ
Ｈ2），３．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
【０１３９】 ５．２１．実施例２１ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３，５−ジメチル
−４−（３−オキソ−３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−ピロール
−２−イルメチレン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−
６−オン（式２４）の合成 エタノール中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５，７−
ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，０．２５ｍ
ｍｏｌ），３，５−ジメチル−４−（３−オキソ−３−ピロリジン−１−イル−
プロピル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（６４．６ｍｇ，０．２６
ｍｍｏｌ）およびピペリジン（３滴）の混合物を室温で窒素下で２日間撹拌した
。沈殿物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，６５ｍｇ（
５１％）の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ
１３．１８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．６１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．
１３（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝２．４＆
６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３１−７．４２（ｍ，３Ｈ），３．２５（ｍ，４Ｈ，
２ｘＣＨ2），２．６３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３５（ｍ，
２Ｈ，ＣＨ2），２．３１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．１２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）
，１．７６（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ５０９［Ｍ+＋ｌ］．
【０１４０】 ５．２２．実施例２２ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−｛３−メチル−５−
［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−３−オキソ−プロピル］−１Ｈ
−ピロール−２−イルメチレン｝−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピ
リミジン−６−オン（式２５）の合成 ＤＭＦ（４ｍＬ）中の３−（５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−
イル）−プロピオン酸（２７１．８ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）の溶液に，ＨＯＢｔ
（２４３．２ｍｇ，１．８ｍｍｏｌ），ＥＤＣ（３４５．１ｍｇ，１．８ｍｍｏ
ｌ）を，次に１−メチルピペラジン（０．２ｍＬ，１．８ｍｍｏｌ）を加えた。
混合物を室温で窒素下で一夜撹拌した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム（５０
ｍＬ）に注加し，酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を乾燥し，濃縮し，カ
ラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を行って，３２５．２ｍｇ（８２
％）の３−メチル−５−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−３−オ
キソ−プロピル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒドを白色固体として得
た。
【０１４１】 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ
）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ
，０．２５ｍｍｏｌ），３−メチル−５−［３−（４−メチル−ピペラジン−１
−イル）−３−オキソ−プロピル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（
７９ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）およびピペリジン（３滴）の混合物を油浴中で６５
℃で２時間撹拌した。反応液を室温で一夜冷却した。沈殿物を真空濾過により回
収し，エタノール（５ｘ）で洗浄し，乾燥して，８８．９ｍｇ（６８％）の表題
化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．１５（ｓ
，１Ｈ，ＮＨ），１１．５５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．０８（ｓ，１Ｈ），
８．２７（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆６．９Ｈｚ，１Ｈ），７
．３０−７．４０（ｍ，３Ｈ），６．０８（ｄ，Ｊ＝２．２３Ｈｚ，１Ｈ），３
．４３（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．８９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2 ），２．６８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．２４（ｍ，４Ｈ，２
ｘＣＨ2），２．１６（ｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3）．ＭＳ５２４［Ｍ+＋１］．
【０１４２】 ５．２３実施例２３ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３−メチル−５−
（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−５，
７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式２６）の合成 ＤＭＦ（８０ｍＬ）中の５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カル
ボン酸（４ｇ，２６ｍｍｏｌ）の懸濁液に，モルホリン（１．９ｍＬ，３１ｍｍ
ｏｌ），続いてＥＤＡＣ（５．９ｇ，３１ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ（４．２ｇ，３
１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８ｍＬ，６２ｍｍｏｌ）を加えた。反応
混合物を室温で２日間撹拌した。沈殿物を濾別し，ヘキサンで洗浄し，次に濾液
を濃縮し，水で希釈し，酢酸エチル（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。水性層を炭
酸ナトリウムを用いてｐＨ＝９に調節し，再び抽出した。合わせた有機層を濃縮
し，酢酸エチルに再懸濁した。得られた沈殿物を真空濾過により回収して，３ｇ
の固体を得た。濾液をカラムクロマトグラフィーにより精製して，１．２ｇの固
体を得た。回収された合計で，４．２ｇ（７３％）の３−メチル−５−（モルホ
リン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒドを淡黄色固体
として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．２４（ｂｒｓ
，１Ｈ，ＮＨ），９．７１（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），６．３９（ｓ，１Ｈ），３．
５９（ｂｒｓ，８Ｈ，４ｘＣＨ2），２．２９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
【０１４３】 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ
）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（９３ｍｇ
，０．３３ｍｍｏｌ），３−メチル−５−（モルホリン−４−カルボニル）−１
Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（７３ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ），および
ピペリジン（１滴）の混合物を室温で３日間撹拌した。沈殿物を真空濾過により
回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，１１０．３ｍｇ（６９％）の表題化合
物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．４３（ｂｒｓ
，１Ｈ，ＮＨ），１１．７４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．２３（ｂｒｓ，１Ｈ
），８．３３（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆６．７Ｈｚ，１Ｈ）
，７．４４（ｍ，１Ｈ），７．３２−７．３７（ｍ，２Ｈ），６．６１（ｄ，Ｊ
＝２．２８Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．６５（ｍ，
４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ４８３［Ｍ+］．
【０１４４】 ５．２４．実施例２４ ３−｛２−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−６−オキソ
−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］
−５−イソプロピル−１Ｈ−ピロール−３−イル｝−プロピオン酸（式２７）の
合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），３−（２−ホルミル−５−イソプロピル−１Ｈ−ピロール
−３−イル）−プロピオン酸（５４．４ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）およびピペリ
ジン（３滴）の混合物を室温で２日間撹拌した。沈殿物を真空濾過により回収し
，水，１ＮＨＣｌ，水および最後にエタノールで洗浄し，真空オーブン中で乾燥
して，８３ｍｇ（７１％）の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，
ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．４４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１２．１５（ｂｒｓ，
１Ｈ，ＣＯＯＨ），１１．６９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．０２（ｂｒｓ，１
Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆６．４Ｈｚ，１Ｈ
），７．４７（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝８．９
Ｈｚ，１Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），３．０１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ
（ＣＨ3）2），２．８３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４８（ｍ
，２Ｈ，ＣＨ2），１．２１．２７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3） 2 ）．ＭＳ４６９［Ｍ+＋１］．
【０１４５】 ５．２５実施例２５ ５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−６−オキソ−６，
７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］−２，
４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル
）−アミド（式２８）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（６６ｍｇ，
０．２４ｍｍｏｌ），５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−
カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド（６３．７ｍｇ，０．２４
ｍｍｏｌ）およびピペリジン（１滴）の混合物を室温で３日間撹拌した。沈殿物
を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，７８．５ｍｇ（６２
％）の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３
．３３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．６１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．１７
（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆６．
５Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｍ，４Ｈ），３．２９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．
５（ｍ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2＆ＣＨ2），２．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），
２．２５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2Ｃ
Ｈ3）2）．ＭＳ５２６［Ｍ+＋１］．
【０１４６】 ５．２６．実施例２６ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３−メチル−４−
（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチ
レン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式２
９）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），３−メチル−４−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボ
ニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（７０．７ｍｇ，０．３ｍｍｏ
ｌ）およびピペリジン（３滴）の混合物を室温で４日間撹拌した。沈殿物を真空
濾過により回収し，エタノールで洗浄して，６３ｍｇ（５１％）の化合物を黄色
固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．２９（
ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．７３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．１６（ｂｒｓ
，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．７＆６．５Ｈｚ，
１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．
４０（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝９．０５Ｈｚ，１Ｈ），３．４９（ｍ，
４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ，），２．１９（ｓ，３Ｈ
，ＣＨ3），２．１８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ４９６［Ｍ+＋１］．
【０１４７】 ５．２７．実施例２７ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３，５−ジメチル
４−（３−モルホリン−４−イル−３−オキソ−プロピル）−１Ｈ−ピロール−
２−イルメチレン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ「２，３ｄ］ピリミジン−６−
オン（式３０）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（８６ｍｇ，
０．３１ｍｍｏｌ），３，５−ジメチル−４−（３−モルホリン−４−イル−３
−オキソ−プロピル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（８３ｍｇ，０
．３１ｍｍｏｌ）およびピペリジン（１滴）の混合物を室温で３日間撹拌した。
沈殿物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，表題化合物を
得た。ＭＳ５２５［Ｍ+＋１］．
【０１４８】 ５．２８．実施例２８ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３−メチル−４−
（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−５，
７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式３１）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），３−メチル−４−（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ
−ピロール−２−カルボアルデヒド（６６．７ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）およびピ
ペリジン（３滴）の混合物を室温で４日間撹拌した。沈殿物を真空濾過により回
収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，３９ｍｇ（３２％）の表題化合物を得た
。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．３０（ｂｒｓ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．６９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．１６（ｂｒｓ，１Ｈ），８．
３１（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．８＆６．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４
６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ
），７．３５（ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），
３．５１（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ４８３
［Ｍ+ｌ］．
【０１４９】 ５．２９．実施例２９ ５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−メチル−６−
オキソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメ
チル］−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−
イル−エチル）−アミド（式３２）の合成 エタノールおよびＤＭＦ（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェ
ニルアミノ）−７−メチル−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジ
ン−６−オン（２４４ｍｇ，０．８３ｍｍｏｌ），５−ホルミル−４−メチル−
１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミ
ド（１．２当量）およびピペリジン（１滴）の混合物を９０℃で２時間撹拌した
。反応液を水で希釈し，沈殿物を真空濾過により回収し，水，酢酸エチルおよび
ヘキサンで洗浄し，乾燥して，１３８．５ｍｇ（３１％）の表題化合物を得た。
ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．３９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，９．２９（ｂｒｓ，１Ｈ），８．３８（ｍ，２Ｈ），７．７２（ｍ１Ｈ），７
．３９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．３４（ｍ，２Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ
），３．５６（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．３５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．３
１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４１（ｍ，４Ｈ，
２ｘＣＨ2），２．２０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ５４０［Ｍ+＋１］．
【０１５０】 ５．３０．実施例３０ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［５−（モルホリン
−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−５，７−ジヒドロ
−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式３３）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），５−（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−
２−カルボアルデヒド（６２．５ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）およびピペリジン（３
滴）の混合物を室温で４日間撹拌した。沈殿物を真空濾過により回収し，エタノ
ールで洗浄し，乾燥して，６９ｍｇ（５９％）の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭ
Ｒ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．４１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１
１．６５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．８１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２８
（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｍ，１Ｈ），７．５３（ｍ，
１Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝９．０５Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝３．６
Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｍ，４Ｈ，
２ｘＣＨ2），３．６５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ４６９［Ｍ+＋１］．
【０１５１】 ５．３１．実施例３１ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−メチル−５−［３−
メチル−５−（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチ
レン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式３
４）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−７−メチル−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン
（１１６ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ），３−メチル−５−（モルホリン−４−カルボ
ニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（１３０ｍｇ）およびピペリジ
ン（１滴）の混合物を９０℃で２時間撹拌した。反応液を水で希釈し，沈殿物を
真空濾過により回収し，水，酢酸エチルおよびヘキサンで洗浄し，乾燥して，１
４１ｍｇ（７４％）の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳ
Ｏ−ｄ6）δ１３．４２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．２９（ｂｒｓ，１Ｈ），
８．３８（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｍ，１Ｈ），７．３４−７．４１（ｍ，３Ｈ
），６．６（ｓ，１Ｈ），３．６７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．６５（ｍ，
４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．２９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．２０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ 3 ）．ＭＳ４９７［Ｍ+＋ｌ]．
【０１５２】 ５．３２．実施例３２ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［４−メチル−５−
（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチ
レン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式３
５）の合成 酢酸（３６０ｍＬ）および水（３００ｍｌ）を，ＴＨＦ（３００ｍＬ）中のエチ
ル３，５ジメチル−２−ピロールカルボキシレート（５ｇ，２９．９ｍｍｏｌ）
の溶液に加えた。混合物を−１０から−５℃に３０分間冷却した。次にこの混合
物に硝酸セリウムアンモニウム（ＣＡＮ，６７．２１ｇ，１２２．６ｍｍｏｌ）
を３０分間かけて加えた。混合物を−１０から−５℃で１．５時間撹拌した。反
応液を水（８００ｍＬ）で希釈し，ジクロロメタン（３ｘ）で抽出した。合わせ
た抽出物を炭酸水素ナトリウム溶液で水性層が塩基性となるまで洗浄し，乾燥し
，濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（１０％ＥｔＯＡｃ，ヘキサン中）で精製
して，２．４ｇ（４４％）の５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−
カルボン酸エチルエステルを白色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ
，ＤＭＳＯ−）δ１２．６１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．６４（ｓ，１Ｈ，Ｃ
ＨＯ），６．７８（ｓ，１Ｈ），４．２７（ｑ，Ｊ＝７．１７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣ
Ｈ2ＣＨ3），２．２６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．３０（ｔ，Ｊ＝７．１７Ｈｚ
，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ１８２［Ｍ+＋１］．
【０１５３】 水酸化リチウム（８．７３ｇ，３６．４４ｍｍｏｌ）を，メタノール（２７ｍ
Ｌ）および水（９ｍＬ）中の５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−
カルボン酸エチルエステル（１．３２ｇ，７．２７ｍｍｏｌ）に加えた。混合物
を室温で週末の間撹拌した。反応液を水（１０ｍＬ）で希釈し，ほとんどのメタ
ノールを留去し，エーテルで洗浄した。水性層を１ＮＨＣｌ（３７ｍＬ）で酸性
にしてｐＨ＝２とし，酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮
した。残渣をジクロロメタンで洗浄し，濾過して，０．９８ｇ（８８％）の５−
ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸を褐色固体として得た
。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８７（ｂｒｓ，１Ｈ，
ＣＯＯＨ），１２．４１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．６３（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ
），６．７４（ｓ，１Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
【０１５４】 ＤＭＦ５ｍＬ中の５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン
酸（３０６．３ｍｇ，２ｍｍｏｌ）の溶液に，ＨＯＢｔ（３２４．３ｍｇ，２．
４ｍｍｏｌ），ＥＤＣ（４６０．１ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）を，次に１−メチル
ピペラジン（０．２７ｍＬ，２．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で窒素下
で一夜撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し，炭酸水素ナトリウムで洗浄した
。水性層を酢酸エチルで数回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し，乾
燥し，濃縮し，カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を行って，３１
０ｍｇ（６６％）の４−メチル−５−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニ
ル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒドを淡黄色泡状固体として得た。1
Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）１２．２０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ
），９．４７（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），６．８０（ｓ，１Ｈ），３．５８（ｍ，４
Ｈ，２ｘＣＨ2），３．４４（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．０３（ｓ，３Ｈ，Ｃ
Ｈ3）．
【０１５５】 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ
）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ
，０．２５ｍｍｏｌ），４−メチル−５−（４−メチル−ピペラジン−１−カル
ボニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（７０．６ｍｇ，０．３ｍｍ
ｏｌ）およびピペリジン（３滴）の混合物を室温で４日間撹拌した。沈殿物を真
空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，８９．１ｍｇ（７２％）
の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．１
３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．７４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．７７（ｂ
ｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２７（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄｄ，Ｊ＝２．７＆６
．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），７．５２（ｍ，１Ｈ），７．３８（
ｔ，Ｊ＝８．８５Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），３．５２（ｍ，４Ｈ，
２ｘＣＨ2），２．３７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3
），２．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ４９６［Ｍ+＋１］．
【０１５６】 ５．３３．実施例３３ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−メチル−５−［３−
メチル−５−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−
２−イルメチレン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６
−オン（式３６）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−７−メチル−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン
（８０ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ），３−メチル−５−（４−メチル−ピペラジン
−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（１．２当量）お
よびピペリジン（１滴）の混合物を９０℃で２時間撹拌した。反応液を水で希釈
し，沈殿物を真空濾過により回収し，水，酢酸エチルおよびヘキサンで洗浄し，
乾燥して，１２０．５ｍｇ（７２％）の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３０
０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．４２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．３２（
ｂｒｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，ＩＨ），７．７１（ｍ，１Ｈ），７．３５−７
．４１（ｍ，３Ｈ），６．６０（ｓ，１Ｈ），３．６９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2
），３．３０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２
１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．２０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ５１０［Ｍ+＋ｌ
］．
【０１５７】 ５．３４．実施例３４ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［４−メチル−５−
（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−５，
７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式３７）の合成 ＤＭＦ（５ｍＬ）中の５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボ
ン酸（３０６．３ｍｇ，２ｍｍｏｌ）の溶液に，ＨＯＢｔ（３２４．３ｍｇ，２
．４ｍｍｏｌ），ＥＤＣ（４６０．１ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）を，次にモルホリ
ン（０．２１ｍＬ，２．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で窒素下で一夜撹
拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し，炭酸水素ナトリウムで洗浄した。水性層
を酢酸エチルで数回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し，乾燥し，濃
縮し，カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）を行って，３９５ｍｇ（
８９％）の４−メチル−５−（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール
−２−カルボアルデヒドを淡黄色泡状固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０Ｍ
Ｈｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．１８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．４６（ｓ，
１Ｈ，ＣＨＯ），６．７９（ｓ，１Ｈ），３．４３（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），
２．２９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．１７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．０１（
ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
【０１５８】 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ
）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ
，０．２５ｍｍｏｌ），４−メチル−５−（モルホリン−４−カルボニル）−１
Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（６６．７ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）および
ピペリジン（３滴）の混合物を室温で４日間撹拌した。沈殿物を真空濾過により
回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，１０５ｍｇ（８７％）の表題化合物を
得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．１６（ｂｒｓ，１
Ｈ，ＮＨ），１１．７４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．７８（ｂｒｓ，１Ｈ），
８．２７（ｓ，１Ｈ０，７．７４（ｄｄ，Ｊ＝２．２＆６．５Ｈｚ，１Ｈ），７
．７１（ｓ，１Ｈ），７．５２（ｍ，１Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，
１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），３．６５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．５４
（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．１５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ４８３［Ｗ＋１
【０１５９】 ５．３５．実施例３５ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−（３，５−ジメチル
−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−７−メチル−５，７−ジヒドロ−ピロ
ロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式３８）の合成 ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−メチル−５，７−ジ
ヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（１００ｍｇ，０．３４ｍ
ｍｏｌ）をエタノール（３ｍＬ）中の３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−
カルボアルデヒド（５０ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）およびピペリジン（２滴）と
８０℃で２時間縮合させて，５０ｍｇ（３７％）の表題化合物を得た。1Ｈ Ｎ
ＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．０７（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），
９．１８（ｓ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｍ，１Ｈ），７．３
５（ｓ，１Ｈ），７．３０−７．４０（ｍ，２Ｈ），６．０５（ｓ，１Ｈ），３
．３２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．１６（ｓ，３
Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ３９８［Ｍ+＋１］．
【０１６０】 ５．３６．実施例３６ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３−メチル−５−
（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチ
レン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式３
９）の合成 ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カル
ボン酸（１．５３ｇ，１０ｍｍｏｌ）の懸濁液に，１−メチルピペラジン（１．
２ｇ，１２ｍｍｏｌ）を，続いて１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミド塩酸（ＥＤＡＣ，２．３ｇ，１２ｍｍｏｌ），１−ヒドロキ
シベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ，１．６ｇ，１２ｍｍｏｌ）およびトリエチル
アミン（３．２ｍＬ，２４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２日間撹拌
した。反応液を濃縮し，水で希釈し，酢酸エチル（５ｘ）で抽出した。合わせた
酢酸エチルを濃縮して容量を２０ｍＬとし，ヘキサン（１０ｍＬ）中で砕いた。
得られた固体を真空濾過により回収して，１．６ｇ（６８％）の３−メチル−５
−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボ
アルデヒドを黄色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6 ）δ１２．２１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．７（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），６．３５（
ｓ，１Ｈ），３．５８（ｍ，４Ｈ２ｘＣＨ2），２．３０（ｍ，７Ｈ，２ｘＣＨ2 ＆ＣＨ3），２．１８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ２３６［Ｍ+＋１］．
【０１６１】 エタノール中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５，７
−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，０．２５
ｍｍｏｌ）および３−メチル−５−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル
）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（７０．６ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ
）およびピペリジン（３滴）の混合物を室温で４日間撹拌した。沈殿物を真空濾
過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，１２４ｍｇ（１００％）の表
題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．４１（
ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．７７（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．２２（ｂｒｓ，１
Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．７＆６．６Ｈｚ，１Ｈ
），７．４２（ｍ，１Ｈ），７．３２−７．３７（ｍ，２Ｈ），６．５８（ｄ，
Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．３６（ｍ，
４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．２０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ 3 ）．ＭＳ４９６［Ｍ+＋１］．
【０１６２】 ５．３７．実施例３７ ３−｛５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−メチル
−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリ
デンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−イル｝−プロピオン酸
（式４０）の合成 ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−メチル−５，７−ジ
ヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（１００ｍｇ，０．３４ｍ
ｍｏｌ）を，エタノール（３ｍＬ）中の３−（５−ホルミル−２，４−ジメチル
−１Ｈ−ピロール−３−イル）プロピオン酸（８０ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）お
よびピペリジン（２滴）と８０℃で２時間縮合させて，３６ｍｇ（２３％）の表
題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．１５（
ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１２．０７（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．１８（ｓ
，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ
），７．３０−７．３９（ｍ，２Ｈ），３．３２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．６
３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３３（ｓ，３Ｈ，
ＣＨ3），２．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
【０１６３】 ５．３８．実施例３８ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３，５−ジメチル
−４−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イ
ルメチレン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン
（式４１）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），３，５−ジメチル−４−（４−メチル−ピペラジン−１−
カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（７４．８ｍｇ，０．３
ｍｍｏｌ）およびピペリジン（３滴）の混合物を室温で４日間撹拌した。沈殿物
を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，１０２ｍｇ（８０％
）の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．
２７（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．６６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．１２（
ｂｒｓ，１Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｍ
，１Ｈ），７．３１−７．３６（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2
），２．３０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．２７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．１
８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．１２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ５１０［Ｍ+＋１
］．
【０１６４】 ５．３９．実施例３９ ３−｛５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−メチル
−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリ
デンメチル］−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル｝−プロピオン酸（式４
２）の合成 ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−メチル−５，７−ジ
ヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（１００ｍｇ，０．３４ｍ
ｍｏｌ）を，エタノール（３ｍＬ）中の３−（５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ
−ピロール−２−イル）プロピオン酸（６２ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）およびピ
ペリジン（２滴）と８０℃で２時間縮合させて，３１ｍｇ（２０％）の表題化合
物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．１４（ｂｒｓ
，１Ｈ，ＮＨ），９．１４（ｓ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｍ
，１Ｈ），７．３０−７．４０（ｍ，３Ｈ），６．０８（ｓ，１Ｈ），３．３２
（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．８９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５３（ｍ，２Ｈ，Ｃ
Ｈ2），２．１６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
【０１６５】 ５．４０．実施例４０ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３，５−ジメチル
−４−（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式４３）の
合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），３，５−ジメチル−４−（モルホリン−４−カルボニル）
−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（７０．９ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）お
よいピペリジン（３滴）の混合物を室温で４日間撹拌した。沈殿物を真空濾過に
より回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，９８．５ｍｇ（７９％）の表題化
合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．２８（ｂｒ
ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．６８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．１２（ｂｒｓ，１
Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｍ，１Ｈ），
７．３１−７．３６（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．４
５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．３１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．１４（ｓ，３
Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ４９７［Ｍ+＋１］．
【０１６６】 ５．４１．実施例４１ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３，５−ジメチル
−４−（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメ
チレン］−７−メチル−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−
６−オン（式４４）の合成 エタノール（３ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−７−メチル−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン
（１００ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ），３，５−ジメチル−４−（３−モルホリン
−４−イル−プロピル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（８５ｍｇ，
０．３４ｍｍｏｌ）およびピペリジン（２滴）を８０℃で１時間撹拌した。反応
液を濃縮し，カラムクロマトグラフィーを行って，４６ｍｇ（２６％）の表題化
合物を淡黄色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ
１３．１４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．１７（ｓ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１
Ｈ），７．６８（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．３２（
ｍ，２Ｈ），３．５５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．３０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）
，２．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３０（ｍ
，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．１０（ｓ，３Ｈ，Ｃ
Ｈ3），１．５５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）．
【０１６７】 ５．４２．実施例４２ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［５−（４−メチル
−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−５，
７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式４５）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），５−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ
−ピロール−２−カルボアルデヒド（６６．４ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）およびピ
ペリジン（３滴）の混合物を室温で４日間撹拌した。沈殿物を真空濾過により回
収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，１０１．５ｍｇ（８４％）の表題化合物
を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．３９（ｂｒｓ，
１Ｈ，ＮＨ），１１．７４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．８１（ｂｒｓ，１Ｈ）
，８．２８（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｍ，１Ｈ），７．
５３（ｍ，１Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｍ，１
Ｈ），６．７４（ｍ，１Ｈ），３．７０（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．３７（
ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ４８２［Ｍ+＋１
］．
【０１６８】 ５．４３．実施例４３ ５−［３−メチル−５−（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２
−イルメチレン］−４−（１−フェニル−エチルアミノ）−５，７−ジヒドロ−
ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式４６）の合成 ２−メトキシエタノール（０．５ｍＬ）中の４−クロロ−５−［３−メチル−５
−（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−５
，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（３７ｍｇ，０．
１ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−（＋）−１−フェニルエチルアミン（１２１ｍｇ，
１ｍｍｏｌ）を１１０−１２０℃で１．５時間加熱した。反応液を水で希釈し，
濾過した。沈殿物を水，少量のエタノール，酢酸エチル，ヘキサンで洗浄し，乾
燥して，３８．１ｍｇ（８１％）の表題化合物を黄色固体として得た。ＭＳ４５
９［Ｍ+＋１］．
【０１６９】 ５．４４．実施例４４ ５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−６−オキソ−６，
７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］−４−
メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（式４７）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボ
ン酸（４５．９ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）およびピペリジン（３滴）を室温で４日
間撹拌した。沈殿物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥し，次
に１ＮＨＣ1（３ｘ），水（５ｘ）で洗浄し，乾燥して，８８．８ｍｇ（８６％
）の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．
５５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．８４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．２８（
ｓ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１
Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７
４（ｄ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ，１Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ４１
４［Ｍ+＋１］．
【０１７０】 ５．４５．実施例４５ ５−［３−メチル−５−（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２
−イルメチレン］−４−ピペリジン−１−イル−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２
，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式４８）の合成 エタノール（３ｍＬ）中の４−クロロ−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ
］ピリミジン−６−オン（１６９ｍｇ，１ｍｍｏｌ），３−メチル−５−（モル
ホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（２２２ｍ
ｇ，１ｍｍｏｌ）およびピペリジン（２滴）の混合物を一夜加熱還流した。沈殿
物を真空濾過により回収し，酢酸エチル／ヘキサンで洗浄し，乾燥して，３３２
．２ｍｇ（７９％）の表題化合物を黄色固体として得た。ＭＳ４２３［Ｍ+＋１
］．
【０１７１】 ５．４６．実施例４６ ３−｛５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−６−オキソ
−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］
−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル｝−プロピオン酸（式４９）の合成 ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．３７ｇ，１４．３ｍｍｏｌ）を，ＴＨＦ
（無水，３０ｍＬ）中の乾燥ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）トリフェニ
ルホスホニウムブロミド（６．５６ｇ，１４．３ｍｍｏｌ）に窒素下で加えた。
混合物を室温で３０分間撹拌した。この混合物にＴＨＦ（３５ｍＬ）中の５−ホ
ルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル（２．３
６ｇ，１３ｍｍｏｌ）を加えた。次に混合物を室温で窒素雰囲気下で一夜撹拌し
た。固体を濾別し，濾液を濃縮し，カラムクロマトグラフィー（１０％ＥｔＯＡ
ｃ，ヘキサン中）を行って，２．９５ｇ（８１％）の５−（２−ｔｅｒｔ−ブト
キシカルボニル−ビニル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチ
ルエステルを得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．８５
（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．３５（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７３
（ｓ，１Ｈ），６．４１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｑ，Ｊ＝
７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2），２．２２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．４４（ｓ，
９Ｈ，３ｘＣＨ3），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ２７９［Ｍ+］．
【０１７２】 酢酸エチル（６０ｍＬ）およびエタノール（３０ｍＬ）中の５−（２−ｔｅｒ
ｔ−ブトキシカルボニル−ビニル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボ
ン酸エチルエステル（２．４８ｇ）の溶液を，１％パラジウム担持炭素を用いて
室温で一夜水素化して，２．４９ｇ（１００％）の５−（２−ｔｅｒｔブトキシ
カルボニル−エチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエ
ステルを白色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ
１１．１２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），５．７４（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），
４．１７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2），２．７１（ｔ，Ｊ＝７．５
Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．１
８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．３６（ｓ，９Ｈ，３ｘＣＨ3），１．２８（ｔ，Ｊ
＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ２８２［Ｍ+＋１］．
【０１７３】 水酸化リチウム（１．０２ｇ，４２．６５ｍｍｏｌ）を，メタノール（５０ｍ
Ｌ）および水（１２ｍＬ）中の５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エチ
ル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル（２．４ｇ
，８．５３ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。エタノール（４ｍＬ）をこの混合物に
加え（出発物質の溶解を助けるため），混合物を室温で一夜撹拌した。反応液を
水（２０ｍＬ）で希釈し，濃縮し（ほとんどのアルコールを除去するため），エ
ーテルで抽出した。水性層を１ＮＨＣｌ（４３ｍＬ）を用いて酸性にしてｐＨ＝
２とし，酢酸エチル（２ｘ）で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し，
乾燥し，濃縮して，１．８９ｇの５−（２−カルボキシ−エチル）−３−メチル
−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステルを白色固体として得た。
【０１７４】 ＴＨＦ（４０ｍＬ）および水（４８ｍＬ）中の５−（２−カルボキシ−エチル
）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル（１．８ｇ，
８ｍｍｏｌ）および水酸化リチウム（１．９４ｇ，８ｍｍｏｌ）の混合物を室温
で２日間撹拌し，次に油浴中で８０℃で４時間撹拌した。反応液を室温に冷却し
，濃ＨＣｌを用いて酸性にしてｐＨ＝２とし，酢酸エチルで抽出した。次に有機
層を乾燥し，濃縮して，１．３２ｇの５−（２−カルボキシ−エチル）−３−メ
チル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸を得た。
【０１７５】 トリフルオロ酢酸（６ｍＬ）中の５−（２−カルボキシ−エチル）−３−メチ
ル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（１．３ｇ，６．５９ｍｍｏｌ）の溶液を
室温で１０分間撹拌した。次にこれを０℃に冷却し，これにトリエチルオルトホ
ルメート（６ｍＬ）を加えた。混合物を０℃で１０分間，室温で１０分間撹拌し
た。反応液を水（５０ｍＬ）に注加し，酢酸エチルで抽出した。抽出物を乾燥し
，濃縮して，１．２ｇの３−（５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２
−イル）−プロピオン酸を茶色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，
ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．１７（ｂｒｓ，１Ｈ），１１．５０（ｂｒｓ，１Ｈ）
，９．４４（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），５．８５（ｓ，１Ｈ），２．７４（ｔ，Ｊ＝
７．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），
２．２３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ１８２［Ｍ+＋１］．
【０１７６】 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ
）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ
，０．２５ｍｍｏｌ），３−（５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２
−イル）−プロピオン酸（５４．４ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）およびピペリジン（
３滴）の混合物を室温で４日間撹拌した。反応液を濃縮し，残渣を水に溶解し，
１ＮＨＣｌで酸性にしてｐＨ＝２とした。次に得られた固体を水，エタノールで
洗浄し，乾燥して，９３．９ｍｇ（８５％）の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ
（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．１８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１２
．１９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），１１．６１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．
０９（ｓ，１Ｈ），８．２７（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｍ，１Ｈ），７．３９（
ｍ，１Ｈ），７．３０−７．３５（ｍ，２Ｈ），６．０７（ｓ，１Ｈ），２．９
０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．６０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２
Ｈ，ＣＨ2），２．１６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ４４２［Ｍ+＋ｌ］．
【０１７７】 ５．４７．実施例４７ ４−（インダン−４−イルアミノ）−５−［３−メチル−５−（モルホリン−４
−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−５，７−ジヒドロ−ピ
ロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式５０）の合成 ２−メトキシエタノール（０．６ｍＬ）中の４−クロロ−５−［３−メチル−５
−（モルホリン−４−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−５
，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（５０ｍｇ，０．
１３ｍｍｏｌ），５−アミノインダン（１７８．１２ｍｇ，１．３ｍｍｏｌ）の
混合物を１１０−１２０℃で８時間加熱し，酢酸エチル／水で抽出した。有機層
を濃縮し，残渣をアセトン中で砕き，濾過して，２９ｍｇの黄色固体を得た。母
液を濃縮し，カラムクロマトグラフィーを行って，１０．１ｍｇの生成物を得た
。合計収率３９．１ｍｇ（６４％）の表題化合物を黄色固体として得た。1Ｈ
ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．４２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．７４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．１１（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２７（
ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．２５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．０４−７．１
５（ｍ，３Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６３（ｍ，８Ｈ
，４ｘＣＨ2），２．７９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ 3 ），１．９９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）．ＭＳ４７１［Ｍ+＋１］．
【０１７８】 ５．４８．実施例４８ ｛５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−６−オキソ−６
，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］−２
，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−イル｝−酢酸（式５１）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），（５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３
−イル）−酢酸（５４．３ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）およびピペリジン（３滴）の
混合物を室温で１日間撹拌した。反応液を濃縮し，残渣を１ＮＨＣｌに懸濁した
。沈殿物を濾過し，水で洗浄し，熱酢酸エチルに懸濁し，濾過し，乾燥して，４
２ｍｇ（３８％）の表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ
−ｄ6）δ１３．２１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１２．１７（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｃ
ＯＯＨ），１１．６５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．１３（ｓ，１Ｈ），８．２６（
ｓ，１Ｈ），７．７１（ｍ，１Ｈ），７．３−７．４（ｍ，３Ｈ），３．３７（
ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．１０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3
）．ＭＳ４４２［Ｍ+＋１］．
【０１７９】 ５．４９実施例４９ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［５−（３，５−ジ
メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イ
ルメチレン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン
（式５２）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），５−（３，５−ジメチル−ピペラジン−１−カルボニル）
−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（７４．８ｍｇ，０．３
ｍｍｏｌ）およびピペリジン（３滴）の混合物を室温で一夜撹拌した。沈殿物を
真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，９３．１ｍｇ（７３％
）の表題化合物を黄色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ
−ｄ6）δ１３．３９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．７５（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），９．２３（ｂｒｓ，１Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ
＝２．６＆６．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３３−７．３８（
ｍ，２Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），４．２２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2
），２．６８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５２（ｍ，２Ｈ，２ｘＣＨ），２．２
２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９９（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），０．
９８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ５１０［Ｍ+＋１］．
【０１８０】 ５．５０．実施例５０ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［３−メチル−５−
（３，４，５−トリメチル−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−
２−イルメチレン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−Ｄピリミジン−６−
オン（式５３）の合成 ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５，７−ジヒドロ−ピロ
ロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オンを３−メチル−５−（３，４，５−トリ
メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒ
ドと縮合させて，表題化合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−
ｄ6）δ１３．４１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．７８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ
），９．２３（ｂｒｓ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝
２．５＆６．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．３３−７．３８（ｍ
，２Ｈ），６．５８（ｍ，１Ｈ），４．１９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．７８（
ｍ，２Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．１８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２
．１１（ｍ，２Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3）．Ｍ
Ｓ５２４［Ｍ+＋１］．
【０１８１】 ５．５１．実施例５１ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［５−（４−エチル
−ピペラジン−１−カルボニル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチ
レン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式５
４）の合成 エタノール（２ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（７０ｍｇ，
０．２５ｍｍｏｌ），５−（４−エチル−ピペラジン−１−カルボニル）−３−
メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（７４．８ｍｇ，０．３ｍｍｏ
ｌ）およびピペリジン（３滴）の混合物を室温で一夜撹拌した。沈殿物を真空濾
過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，９３ｍｇ（７３％）の表題化
合物を得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ３．４０（ｂｒｓ
，１Ｈ，ＮＨ），１１．８１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．２８（ｂｒｓ，１Ｈ
），８．３３（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｍ，１Ｈ），７．３３−７．４５（ｍ，
３Ｈ），６．５８（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．３１
−２．４２（ｍ，６Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．０１（ｔ，Ｊ＝
７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ５１０［Ｍ+＋１］．
【０１８２】 ５．５２．実施例５２ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５，７−ジヒドロ−ピロ
ロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式５５）の合成 ２５ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
（７６７．９ｍｇ，５ｍｍｏｌ）および３−クロロ−４−フルオロ−フェニルア
ミン（８７３．４ｍｇ，６ｍｍｏｌ）の溶液に，窒素下で，銀トリフルオロメタ
ンスルホン酸（１．５４ｇ，６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を９５℃で１５時間
撹拌した。冷却した反応液を酢酸エチル（７０ｍＬ）で希釈し，セライトを通し
て濾過し，酢酸エチルでよく洗浄した。濾液をブライン（５ｘ）で洗浄した。ブ
ラインを酢酸エチルで抽出し，次にこれをブラインで洗浄した。合わせた酢酸エ
チルを乾燥し（硫酸マグネシウム），濃縮し，精製して，１．２２ｇ（９３％）
の（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピ
リミジン−４−イル）−アミンを灰白色固体として得た。ｍ．ｐ．２７４−２７
５Ｃ．1Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７８（ｂｒｓ，１
Ｈ，ＮＨ），９．４１（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），８．２８（ｍ，１
Ｈ），７．７９（ｍ，１Ｈ），７．３７（ｔ，１Ｈ），７．２５（ｍ，１Ｈ），
６．７６（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ２６３．４［Ｍ"＋ｌ］．
【０１８３】 １ｍＬのｔ−ブタノール中の（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−（７
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−アミン（２６．３ｍｇ，０
．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に，６４ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）のピリジニウムブロ
ミドペルブロミド（ＰＢＰＢ）を少しずつ加えた。反応混合物を室温で４時間撹
拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し，水，水性硫酸ナトリウム，ブラインで洗
浄し，乾燥し，濃縮して，５，５−ジブロモ−４−（３−クロロ−４−フルオロ
−フェニルアミノ）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６
−オンを得た（精製せずに次の工程で用いた）。
【０１８４】 ２ｍＬの酢酸中の５，５−ジブロモ−４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェ
ニルアミノ）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン
（上述より），亜鉛粉の混合物を室温で１時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで
希釈し，濾過した。濾液を水，炭酸水素ナトリウムおよびブラインで洗浄し，乾
燥し，濃縮し，精製して，１１．２ｍｇ（２工程の合計収率４０％）の４−（３
−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，
３−ｄ］ピリミジン−６−オンを灰白色固体として得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００
ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．０８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．０２（ｓ
，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｍ，１Ｈ），７．５８（ｍ，１Ｈ
），７．３５（ｔ，１Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）．ＭＳ２７９．３［
Ｍ+＋１］．
【０１８５】 ５．５３．実施例５３ ５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−モルホリン−
４−イルメチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミ
ジン−５−イリデンメチル］−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（
２モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（式５６）の合成 ＥｔＯＨ−ジオキサン−ＤＭＦ（２：２：１）（１０ｍＬ）中の５−［４−（３
−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−
ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチル］−４−メチル−１Ｈ−
ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド（１
７０ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）の懸濁液にＮ，Ｎ’−ジモルホリノメタン（０．
５ｍＬ）を加えた。混合物を１００℃で１８時間撹拌し，次に室温に冷却した。
生成物を結晶化させ，濾過し，メタノールで洗浄し，高真空下で乾燥して，純粋
な５−［４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−７−モルホリン
−４−イルメチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ピリミジ
ンイリデンメチル］−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モル
ホリン−４−イル−エチル）−アミド（１３０ｍｇ，６５％）を得た。ＭＳ６２
５［Ｍ+＋１］．
【０１８６】 ５．５４．実施例５４ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−｛１−［５−（モル
ホリン−４−カルボニル）−チオフェン−２−イル］−メチリデン｝−５，７−
ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式５７）の合成 エタノール（３ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（９０ｍｇ，
０．３２ｍｍｏｌ），５−（モルホリン−４−カルボニル）−チオフェン−２−
カルボアルデヒド（８２ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ），およびトリエチルアミン（
２滴）の混合物を９０℃の油浴中で２時間撹拌し，室温に冷却した。溶媒を留去
し，残渣をシリカゲルカラムで精製し，塩化メチレンメタノール（９８：２およ
び９５：５）で溶出して，純粋な４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルア
ミノ）−５−｛１−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−チオフェン−２−
イル］−メチリデン｝−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン６
−オン（４１ｍｇ，２８％）を得た。ＭＳ４８６［Ｍ+＋１］．
【０１８７】 ５．５５．実施例５５ ４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５−［１−（２−クロロ
−４−ヒドロキシ−フェニル）−メチリデン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２
，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（式５８）の合成 エタノール（３ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）
−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オン（１００ｍｇ
，０．３６ｍｍｏｌ），２−クロロ−４−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド（８４
．５ｍｇ，０．５４ｍｍｏｌ），およびピペリジン（３滴）の混合物を６０℃の
油浴中で４時間加熱し，室温に冷却した。生成物を結晶化させ，濾過し，エタノ
ールで洗浄し，高真空下で乾燥して，純粋な４−（３−クロロ−４−フルオロ−
フェニルアミノ）−５−［１−（２−クロロ−４−ヒドロキシ−フェニル）−メ
チリデン］−５，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−オンを
得た。1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．５２（ｂｒｓ，１
Ｈ），１０．４５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｂｒｓ
，１Ｈ），７．６５（ｓ，ｌＨ），７．１１（ｔ，１Ｈ），６．９６（ｍ，ｌＨ
），６．７９（ｍ，１Ｈ），６．７２（ｄ，１Ｈ），６．６６（ｍ，１Ｈ），６
．５６（ｄｄ，１Ｈ）．ＭＳ４１８［Ｍ+＋１］．
【０１８８】５．５６．実施例５６：活性の調節のアッセイ 以下の試薬，供給物および方法を用いて，本発明の化合物がＰＤＧＦＲのイン
ビトロ活性を調節する能力を酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）
で容易に決定することができる。
【０１８９】試薬および供給物 すべてのＥＬＩＳＡ反応はＣｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレート（
Ｃｏｒｎｉｎｇ，カタログ＃；２５８０５−９６）中で行う。モノクローナル抗
ＰＤＧＦＲ抗体（２８Ｄ４Ｃ1０）は，使用まで５０ｍＬ管で−２０℃で保存す
る。本発明において用いる抗体単離方法は，当該技術分野に一般に知られるもの
であり，例えば，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ａｎｄ
Ｌａｎｅ，Ｄ．，１９８８，"Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ"，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ
）に記載される。
【０１９０】 希釈緩衝液はダルベッコリン酸緩衝化食塩水（（ＰＢＳ）；Ｇｉｂｃｏ，カタ
ログ＃；４５０−１３００ＥＢ）である。あるいは，以下の試薬および以下のプ
ロトコルを用いることによりマグネシウムを含むＰＢＳを調製することができる
。１リットルのＰＢＳの１０ｘ保存溶液を作成するためには，最初に約９００ｍ
ＬのｄＨ2Ｏを１リットルのメスシリンダーに入れ，これに２．０１３ｇのＫＣ
ｌ，１．９１６ｇのＫＨ2ＰＯ4（一塩基），８０．６５ｇのＮａＣｌ，および１
１．５０ｇのＮａ2ＨＰＯ4（二塩基）を加える。混合物を撹拌し，溶解したとき
，ＨＣＩで溶液のｐＨを７．２とする。最後に，１．０１７ｇのＭｇＣｌ2・６
Ｈ2Ｏ（無水）を加え，ｄＨ2Ｏで容量を１リットルとする。ＰＢＳは室温に放置
することができるが，４℃が好ましい保存温度である。
【０１９１】 ＴＢＳＴ緩衝液（ＴＢＳ＋０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）は，最終１ｘ作
業濃度で使用する。緩衝液は，約９００ｍＬのｄＨ2Ｏを１リットルメスシリン
ダーに入れ，６．０５７ｇのＴｒｉｓおよび８．７６６ｇのＮａＣｌを加え，撹
拌することにより調製する。試薬が溶解したら，ＨＣｌで混合物のｐＨを７．２
とする。次に，１ｍＬのＴｒｉｔｏｎＸ−１００を加え，ｄＨ2Ｏで容量を１リ
ットルとする。あるいは，予め作成し４℃で保存したＴＢＳの保存溶液を用いて
，これにＴｒｉｔｏｎＸ−１００を最終濃度０．１％で加え，界面活性剤が溶解
するまで撹拌してもよい。ＴＢＳＴは室温で放置することができるが，４℃が好
ましい保存温度であることに注意すべきである。
【０１９２】 ＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液は，５ｇの無脂インスタントミルク（Ｃａｒｎ
ａｔｉｏｎ）を秤量し，１００ｍＬのＰＢＳ（上述）を清浄なビーカーに入れ。
次に，インスタントミルクをＰＢＳに加え，室温でミルクが溶解するまで撹拌す
ることにより調製する。１００ｍＬのＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液（または"
ブロッキング緩衝液"）が，約６枚のアッセイプレートに十分である。４℃で保
存したとき，この溶液は１−２週間安定である。
【０１９３】 ＰＤＧＦＲ−βを発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞からの溶解物を得て，１ｍＬアリ
コートで−８０℃で保存する。真核生物細胞におけるＰＤＧＦＲ−βの発現は当
該技術分野においてよく知られている。溶解物は以下の方法により調製する。運
搬皿を氷トレイに置いて冷却した後，培地を除去し，氷冷ＰＢＳを加える。ＰＢ
Ｓを除去し，これを繰り返す。必要ならば残ったＰＢＳを吸引し，４ｍＬの氷冷
ＨＮＴＧ溶解緩衝液（以下に実施例５８に記載）をピペッターを用いて各皿に加
える。氷上に５−１０分間放置し，次に，ゴムのポリスマンを用いて細胞を掻き
取る。ピペッターで溶解物を取り出し，氷上の３０ｍＬの遠心管に入れる。管を
３０−６０秒間ボルテックスし，次に予め０℃以下に冷却したＪ−２０ローター
で７０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。上清を回収し，これを２５０ｍＬの
管中で合わせ，氷上に置く。蛋白質測定を行って，溶液１ｍＬあたりの総蛋白質
量を測定する。溶解物を１ｍＬのアリコートに分割し，−８０℃で保存する。
【０１９４】 ＴＢＳ緩衝液の１ｘ作業溶液は，９００ｍＬのｄＨ2Ｏを１リットルのメスシ
リンダーに入れ，６．０５７ｇのＴｒｉｓおよび８．７６６ｇのＮａＣｌを加え
，撹拌することにより調製する。すべての試薬が溶解したとき，ＨＣｌで溶液の
ｐＨを７．２に調節し，ｄＨ2Ｏで容量を１リットルとする。１０ｘ保存溶液は
，量を１０倍にすることにより作成することができる（ただし最終容量は１リッ
トルのままである）。次に，この保存溶液をｄＨ2Ｏで１０倍に希釈し，ｐＨを
７．２に調節する。ＴＢＳは室温で保存することができるが，４℃に保存するほ
うがよいことに注意すべきである。
【０１９５】 １リットルのＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯの１ｘ作業溶液を作成するためには，約
８５０ｍＬのｄＨ2Ｏを１リットルのメスシリンダーに入れ，次に６．０５７ｇ
のＴｒｉｓおよび８．７６６ｇのＮａＣｌを加え，撹拌する。すべての試薬が溶
解したとき，ＨＣｌで溶液のｐＨを７．２に調節する。次に，１００ｍＬのＤＭ
ＳＯを加え，ｄＨ2Ｏで容量を１リットルとする。あるいは，２５ｍＬのＤＭＳ
Ｏを２２５ｍＬのＴＢＳ（上述）に加える。ここで，ＴＢＳは０．９ｘであるこ
とに注意すべきであるが，これはアッセイに影響を与えないはずである。
【０１９６】 １ｍＭアデノシン−５’−三リン酸（ＡＴＰ，ウマ筋肉より）の１ｍＭ保存溶
液を作成するためには，２．７５ｍｇのＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ，カタログ＃；Ａ−
５３９４）を５ｍＬのｄＨ2Ｏに加え，ボルテックスする。同じＡＴＰ対ｄＨ2Ｏ
の比率を用いる限り，より多い容量の保存溶液を調製することができることに注
意すべきである。また，この試薬は使用の直前に作成し，氷上に保持しなければ
ならないことに注意すべきである。
【０１９７】 １ＭＭｎＣｌ2の保存溶液は，１９．７９ｇのＭｎＣｌ2を１００ｍｌのｄＨ2
Ｏに加え，溶解するまで撹拌することにより調製する。次に溶液を濾過し，滅菌
し，１ｍｌアリコート中で−８０℃で保存する。
【０１９８】 １０ｘキナーゼ緩衝液は，以下の成分から構成される：
【表１】 １０ｍｌのキナーゼ緩衝液ミックスが約１２．５枚のアッセイプレートに十分で
ある。キナーゼ緩衝液を作成するためには，１．０ｍＬの１０ｘキナーゼ緩衝液
を水で最終容量８．０ｍＬに希釈する。
【０１９９】 ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉ
ｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ＃；ＡＳ−７２０９２）を用いて，試験薬剤および溶
解物を混合する。
【０２００】 エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）５００ｍＭ保存溶液は，以下のようにし
て調製する：１）約７０ｍＬのｄＨ2Ｏを２５０ｍＬのビーカーに入れる；２）
１４．１２ｇのＥＤＴＡを加える；３）ビーカー中のｐＨ電極を用いて，１０Ｎ
ＮａＯＨを滴加する（ＥＤＴＡはｐＨが約７．０となるまで溶解しないであろう
）。ＥＤＴＡが溶解するにつれて，ｐＨは低下し，したがって，より多くのＮａ
ＯＨを加える必要があることに注意すべきである；４）すべてのＥＤＴＡが溶解
したとき，ｐＨを８．０に調節する；５）１００ｍＬのメスシリンダーに移し，
ｄＨ2Ｏで容量を１００ｍＬとする。２００ｍＭの作業溶液を作成するためには
，３０ｍＬのｄＨ2Ｏを２０ｍＬの５００ｍＭＥＤＴＡ（上述）に加える。
【０２０１】 ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗血清は，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２０１：６５−７９（１９９１）に記載されているように
作成し，０．１ｍＬアリコートで−８０℃で保存する。抗血清は，融解して４℃
で保存したとき，数週間安定である。ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコン
ジュゲートは市販されている（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，カタログ＃；ＡＬ１０４０
４）。
【０２０２】 ２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）（
ＡＢＴＳ）（Ｓｉｇｍａ，カタログ＃；Ａ−１８８８）を含む発色剤は，以下の
ようにして調製する。約９００ｍＬのｄＨ2Ｏを１リットルのメスシリンダーに
入れる。１９．２１ｇのクエン酸および３５．４９ｇのＮａ２ＨＰ０４を加え，
リン酸でｐＨを４．０とする。ＡＢＴＳを加え，ホイルで覆う。約０．５時間放
置して溶解させ，溶液を濾過する。この溶液は使用直前まで４℃で暗所に保存し
なければならないことに注意すべきである。
【０２０３】 過酸化水素３０％溶液は一般に入手可能である（Ｆｉｓｈｅｒ，カタログ＃；
Ｈ３２５）。これは，使用直前まで４℃で暗所に保存する。
【０２０４】 ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2処方は，１５ｍＬのＡＢＴＳ溶液（上述）および２μｌのＨ 2 Ｏ2からなる。使用の５分前に調製し，室温に置く。使用の６０分前にＡＢＴＳ
を取り出し，室温に暖めるか，管を３７℃の水浴に入れて急速に暖める。使用前
に３μｌのＨ2Ｏ2を加える。
【０２０５】 ０．２ＭＨＣｌは，９８．３ｍＬのｄＨ2Ｏを１．７ｍＬのＨＣｌと混合する
ことにより調製する。この溶液は室温で保存する。
【０２０６】方法 Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを，０．５μｇ／ウエルの１０
０μｌの容量のＰＢＳ中の２８Ｄ４Ｃ１０抗体で４℃で一夜被覆し，プレートを
逆さにして液体を除去することにより未結合抗体２８Ｄ４Ｃ１０をウエルから除
去する。蒸留Ｈ2Ｏをウエルに満たすことにより１回洗浄する。プレートをペー
パータオル上で軽くたたいて過剰の液体を除去する。
【０２０７】 １５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。室温で振盪しながら３
０分間インキュベートし，プレートを脱イオン水で３回，次にＴＢＳＴで１回洗
浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体および泡を除去
する。
【０２０８】 溶解物をＰＢＳで希釈する（１０ｍｇ溶解物／１００ｐＬＰＢＳ）。１００μ
ｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で６０分間振盪する。プレートを脱イ
オン水で３回，次にＴＢＳＴで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽
くたたいて過剰の液体および泡を除去する。 捕獲ＰＤＧＦＲを含むＥＬＩＳＡプレートに８０μｌのキナーゼ緩衝液を加え
る。
【０２０９】 薬剤／抽出物を９６−ウエルポリプロピレンプレート中でＴＢＳ＋１０％ＤＭ
ＳＯで１：１０（特に記載しないかぎり）に希釈する。すなわち，１０μｌの化
合物＋９０μｌの（ＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯ）。１０μｌの希釈薬剤／抽出物を
ＥＬＩＳＡプレートに加える。対照ウエル（薬剤を加えないウエル）には，１０
μｌのＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯを加える。室温で振盪しながら３０分間インキュ
ベートする。
【０２１０】 １０μｌの２５μＭＡＴＰを，ＡＴＰを加えない負対照ウエルを除き，すべて
のウエルに直接加える（ウエル中１００μｌの最終容量，ウエル中２．５μＭＡ
ＴＰの最終濃度）。振盪しながら３０分間インキュベートする。
【０２１１】 ３０分後，１０μｌの２００ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ８．０をウエル中最終濃度２
０ｍＭで加えて反応を停止させる。脱イオン水で４回，ＴＢＳＴで２回洗浄する
。
【０２１２】 １００μｌ／ウエルの抗ホスホチロシンモノクローナル抗体（１：１０，００
０希釈，ＴＢＳＴ）を加える。室温で振盪しながら３０−４５分間インキュベー
トする。プレートを脱イオン水で３回，次にＴＢＳＴで１回洗浄する。プレート
をペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体および泡を除去する。
【０２１３】 １００μｌ／ウエルのｂｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダー
ゼコンジュゲート（１：６，０００希釈，ＴＢＳＴ）を加える。室温で振盪しな
がら３０分間インキュベートする。プレートを脱イオン水で３回，次にＴＢＳＴ
で１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体および
泡を除去する。
【０２１４】 １００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。振盪しながら１０−
３０分間インキュベートする。泡を除去する。必要ならば，ウエルあたり１００
μｌの０．２ＭＨＣＩを加えることにより反応を停止させる。
【０２１５】 ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読む。試験フ
ィルター：４１０ｎＭ；参照フィルター：６３０ｎＭ。
【０２１６】 この実験において対照を配置するための好ましいテンプレートは以下に提供さ
れる。
【表２】
【０２１７】５．５７．実施例５７：ＧＳＴ−ＦＬＫ１活性の調節のアッセイ 以下の試薬，供給物，および方法を用いて，本発明の化合物が，ポリグルタミ
ン酸，チロシン（ｐＥＹ）ペプチドに対するＧｓｔ−Ｆｌｋｌのインビトロ活性
に及ぼす影響をハイスループットスクリーニングアッセイにおいてアッセイする
ことができる。
【０２１８】試薬および供給物 アッセイは，Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎ
ｇ，カタログ＃；２５８０５−９６）中で，ｐＥＹ４：１，凍結乾燥物（Ｓｉｇ
ｍａ，カタログ＃；Ｐ０２７５）をＦＬＫ１の基質として用いて実施する。滅菌
ＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬのｐＥＹを調製し，１ｍＬアリコートで−２０℃で保存す
る。
【０２１９】 １００μｌＰＢＳ中の２μｇ／ウエルのｐＥＹで室温で２時間，または４℃で
一夜被覆する。蒸発を防ぐためにプレートをよく覆う。４℃で７−１０日間保存
する。
【０２２０】 ＰＢＳ緩衝液は，１リットルのメスシリンダーに，約９００ｍＬのｄＨ2Ｏお
よび０．２ｇのＫＨ2ＰＯ4，１．１５ｇのＮａ2ＨＰＯ4，０．２ｇのＫＣｌ，お
よび８．０ｇのＮａＣｌを加えることにより調製する。すべての試薬が溶解した
ら，ＨＣｌでｐＨを７．２とし，ｄＨ2Ｏで容量を１リットルとする。１０ｘ保
存溶液は，量を１０倍にすることにより作成することができる（ただし最終容量
は１リットルのままである）。次にこの保存溶液をｄＨ2Ｏで１０倍に希釈し，
ｐＨを７．２に調節する。ＰＢＳは室温で保存することができるが，４℃で保存
することが最良であることに注意すべきである。
【０２２１】 ＰＢＳ−Ｔｗ緩衝液は上述のように調製し，ただし，容量を１リットルにする
前に，１ｍＬのｔｗｅｅｎ−２０を加える。ＴＢＳ−Ｔｗは室温で保存すること
ができるが，４℃が好ましい保存温度であることに注意すべきである。
【０２２２】 ＴＢＢブロッキング緩衝液は，１リットルのメスビーカーに約９００ｍＬのｄ
Ｈ2Ｏ，１．２１ｇのＴｒｉｓ，８．７７ｇのＮａＣｌ，および１ｍＬのＴｗｅ
ｅｎ−２０を加えることにより調製する。すべての試薬が溶解したとき，ＨＣｌ
でｐＨを７．２とする。次に，１０ｇのＢＳＡを加え，溶解するまで撹拌する。
ｄＨ2Ｏで容量を１リットルとし，溶液を濾過して粒子状物質を除去し，４℃で
保存する。１０ｘ保存溶液は，量を１０倍にすることにより作成することができ
る（ただし，最終容量は１リットルのままである）。次に，この保存溶液をｄＨ 2 Ｏで１０倍に希釈する。溶液を濾過して粒子状物質を除去し，４℃で保存する
。４℃で保存したとき，この溶液は約４−８週間安定であることに注意すべきで
ある。
【０２２３】 ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ溶液は，１リットルのメスビーカーに約９９０ｍＬのＰＢ
Ｓを加えることにより調製する。次に，１０ｇのＢＳＡを加え，溶解するまで撹
拌する。ＰＢＳで容量を１リットルとし，溶液を濾過して粒子状物質を除去し，
４℃で保存する。４℃で保存したとき，この溶液は約４−８週間安定であること
に注意すべきである。 ＨＥＰＥＳ緩衝液は市販されている（ＧＩＢＣＯ，カタログ＃；１５６３０−
０８０）。
【０２２４】 ＧＳＴ−Ｆｌｋ１ｃｄは，ｓｆ９組換えバキュロウイルストランスフォーメー
ションから精製し，１００μｌのアリコート中で−８０℃で保存する（５ｎｇ（
０．００５μｇｇ）／ウエル，キナーゼ希釈緩衝液，ＫＤＢ中を用いる）。トラ
ンスフォーメーションは以下のようにして調製する。バキュロウイルス発現系で
ｐＦＢＧ２Ｔをトランスファーベクターとして用いて，Ｆｌｋ−１（ｃｄ）のＧ
ＳＴ−融合蛋白質を生成する。このプラスミドは，ＰＣＲによりＢａｍＨｌ／Ｂ
ｇｌＩＩフラグメントとして増幅させｐＦａｓｔＢａｃ−１（ＧＩＢＣＯ−ＢＲ
Ｌ）のＢａｍＨＩ部位にクローニングされたＧＳＴコーディング配列を含む。ア
ミノ酸８１２−１３４６をコードするＦｌｋ−１ｃＤＮＡの部分をＰＣＲにより
ＮｏｔＩ／ＳｐｈＩフラグメントとして増幅し，ｐＦＢＧ２Ｔ中のＧＳＴコーデ
ィング配列の下流にインフレームでライゲーションする。組換えウイルスは，以
下の標準的プロトコルにより生成する（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ，ＦａｓｔＢａｃマ
ニュアル）。蛋白質製造のためには，標準的方法によりＳｆ９細胞を感染させ（
Ｋｉｎｇ，Ｌ．Ａ．ａｎｄ Ｐｏｓｓｅｅ，Ｒ．Ｄ．"Ｔｈｅ Ｂａｃｌｏｖｉ
ｒｕｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｇ
ｕｉｄｅ，"Ｃｈａｐｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ，Ｌｏｎｄｏｎ（１９９２））
，融合蛋白質をグルタチオン−セファロース（Ｓｉｇｍａ）でアフィニティーク
ロマトグラフィーにより精製する。 ｄＨ2Ｏ＋４％ＤＭＳＯの溶液は，１０ｍＬのＤＭＳＯを２４０ｍＬのｄＨ2Ｏ
と混合し，撹拌することにより調製する。
【０２２５】 アデノシン−５’−三リン酸（ウマ筋肉より）１０ｍＭＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ，
カタログ＃；Ａ−５３９４）は，５ｍＬのｄＨ2Ｏを２７．５ｍｇＡＴＰに加え
，ボルテックスすることにより調製する。任意の量のＡＴＰを用いることができ
るが，ＡＴＰ対ｄＨ2Ｏの比率を同じに保つことに注意すべきである。また，こ
の試薬は小アリコート中で−２０℃で保存することができ，使用直前に取り出し
て氷上に保持することに注意すべきである。アリコートを凍結／融解してはなら
ない。未使用部分は廃棄する。
【０２２６】 １ＭＭｎＣｌ2の保存溶液は，１９．７９ｇのＭｎＣｌ2を１０ｍＬのｄＨ2Ｏ
に加え，撹拌することにより調製する。ＭｎＣＩ２が溶解したら，濾過滅菌し，
−２０℃で保存する。 ４０ｍＭＭｎＣｌ2の作業用保存溶液は，９６ｍＬのｄＨ2Ｏおよび１Ｍ保存溶
液からの４ｍＬのＭｎＣｌ2を使用直前に混合することにより調製する。
【０２２７】 １００ｍＬのキナーゼ緩衝液が，約４０枚のアッセイプレートに十分である。
キナーゼ希釈緩衝液（ＫＤＢ）は，８８．５６ｍＬのｄＨ2Ｏを１０ｍＬの１Ｍ
Ｈｅｐｅｓ，ｐＨ７．５，１ｍＬの５ＭＮａＣｌ，４０ｍｌの１００ｍＭバナジ
ン酸ナトリウムおよび０．４ｍＬの５％ＢＳＡ（ｄＨ2Ｏ中）と混合することに
より調製する。
【０２２８】 １００ｍＬのキナーゼ緩衝液ミックスが，約４０枚のアッセイプレートに十分
である。キナーゼアッセイは，ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレー
ト（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ＃；ＡＳ−７２０９２）
中で行う。
【０２２９】 エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）は実施例５６と同様に調製する。
【０２３０】 第１および第２抗体希釈緩衝液は，８９．５ｍＬのＰＢＳＴｗを，０．５ｍＬ
のＰＢＳ中ミルク，１ｍＬの１０ｍＭバナジン酸ナトリウムおよび１０ｍＬのＰ
ＢＳ中５％ＢＳＡと混合することにより調製する。
【０２３１】 抗ホスホチロシンウサギポリクローナル抗血清およびヤギ抗ウサギＨＲＰコン
ジュゲートは，市販されている（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，カタログ＃；Ａｌ１０４
０４）。
【０２３２】 ＡＢＴＳ溶液は実施例５６と同様に調製する。 過酸化水素３０％溶液（Ｆｉｓｈｅｒ，カタログ＃；Ｈ３２５）。使用するま
で４℃で暗所に保存する。 ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2は実施例５６と同様に調製する。使用の約６０分前にＡＢＴ
Ｓを取り出し，室温に暖める。あるいは，管を３７℃の水浴に置くことにより急
速に暖める。使用前に３μｌのＨ2Ｏ2を加える。 ０．２ＭＨＣｌは上述のように調製し，室温で保存する。
【０２３３】方法 Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを滅菌ＰＢＳ中の２μｇのポリ
ＥＹペプチドで被覆する。プレートを逆さにすることにより未結合液体をウエル
から除去する。ＴＢＳＴｗで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽く
たたいて過剰の液体を除去する。
【０２３４】 １００μｌの１％ＢＳＡ，ＰＢＳ中を各ウエルに加える。室温で，振盪しなが
ら１時間インキュベートする。プレートを逆さにすることにより．未結合液体を
ウエルから除去することを繰り返す。ＴＢＳＴｗで１回洗浄する。プレートをペ
ーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体を除去する。
【０２３５】 １５０μｌ／ウエルを用いてウエルを５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５で浸す。
【０２３６】 ＮＵＮＣ９６−ウエルポリプロピレンプレート中で薬剤／抽出物を所望の最終
アッセイ濃度の４倍でｄＨ2Ｏ＋４％ＤＭＳＯ中で希釈する（特に記載しないか
ぎり）。迅速な混合を確実にするために，常に，より多い容量の水をより少ない
容量の化合物に加える。 ２５μｌの希釈薬剤／抽出物をＥＬＩＳＡプレートに加える。対照ウエル（薬
剤を加えないウエル）には，２５μｌのｄＨ2Ｏ＋４％ＤＭＳＯを加える。
【０２３７】 ＧＳＴ−Ｆｌｋ１を０．００５μｇ（５ｎｇ）／ウエルでＫＤＢ中で希釈する
。５０ｍＬＫＤＢについて，１００μｌの０．０５０ｍｇ／ｍＬＧＳＴ−Ｆｌｋ
ｌ酵素を加える。これは１０枚のアッセイプレートに十分である。５０μｌの希
釈酵素を各ウエルに加える。負対照ウエルには２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加
える。
【０２３８】 ２５μｌの４０ｍＭＭｎＣｌ2および４ｘＡＴＰ（２μＭ）をすべてのウエル
に直接加える（ウエル中１００μｌの最終容量，ウエル中０．５μＭＡＴＰ最終
濃度）。室温で浸透しながら１５分間インキュベートする。１５分後，２５μｌ
の５００ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ８．０を５０ｍＭ最終濃度でウエルに加えることに
より反応を停止する。ＴＢＳＴｗで３回洗浄し，プレートをペーパータオル上で
軽くたたいて過剰の液体を除去する。
【０２３９】 １００μｌ／ウエルの抗ホスホチロシン抗血清（１：１０，０００希釈，抗体
希釈緩衝液）を加える。室温で，振盪しながら９０分間インキュベートする。Ｔ
ＢＳＴｗで１回洗浄し，プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体
を除去する。
【０２４０】 １００μｌ／ウエルのヤギ抗ウサギＨＲＰコンジュゲート（１：６，０００希
釈，抗体希釈緩衝液）を加える。室温で振盪しながら９０分間インキュベートす
る。ＴＢＳＴｗで３回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過
剰の液体を除去する。
【０２４１】 室温で１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。振盪しながら
１５−３０分間インキュベートする。泡を除去する。必要ならば，ウエルあたり
１００μｌの０．２ＭＨＣｌを加えて反応を停止させる。
【０２４２】 ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読む：試験フ
ィルター：４１０ｎＭ；参照フィルター：６３０ｎＭ。この実験において対照を
配置するための好ましいテンプレートは，上述の実施例５６に記載される。
【０２４３】５．５８．実施例５８：ＨＥＲ−２活性の調節のアッセイ 以下の試薬，供給物および方法を用いて，本発明の化合物がＨＥＲ−２の活性
に影響を与える能力を全細胞でＥＬＩＳＡフォーマットで評価することができる
。
【０２４４】材料および試薬 組織培養 液体培地，ＤＭＥＭ，（ＧＩＢＣＯ，カタログ＃；１１９６５−０９２），お
よび熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ），（ＧＩＢＣＯ，カタログ＃；１６００
０−０４４）は市販されている。トリプシン（ＧＩＢＣＯ，カタログ＃；２５２
００−０５６），６ｍＬアリコートで−２０℃で保存されているＬ−グルタミン
（ＧＩＢＣＯ，カタログ＃；２５０３０−０８１），およびＨＥＰＥＳ（ＧＩＢ
ＣＯ，カタログ＃；１５６３０−０８０）も市販されている。
【０２４５】 成長培地は，５００ｍＬのＤＭＥＭの瓶に，１０％の熱不活性化ＦＢＳ（５５
ｍＬ），１０ｍＬのＨＥＰＥＳおよび５．５ｍＬのＬ−グルタミンを加えること
により調製する。飢餓培地は，５００ｍＬのＤＭＥＭの瓶に，０．５％の熱不活
性化ＦＢＳ（２．５ｍＬ），１０ｍＬのＨＥＰＥＳおよび５．５ｍＬのＬ−グル
タミンを加えることにより調製する。
【０２４６】 平底９６−ウエル組織培養マイクロタイタープレート，（Ｃｏｒｎｉｎｇ，カ
タログ＃；２５８６０），１５ｃｍ組織培養皿，（Ｃｏｒｎｉｎｇ，カタログ＃
；０８７５７１４８），Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレート，（Ｃ
ｏｒｎｉｎｇ，カタログ＃；２５８０５−９６），ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポ
リプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ＃；
ＡＳ−７２０９２），およびＣｏｓｔａｒトランスファー用トランスファーカー
トリッジ９６，カタログ＃；７６１０はすべて市販されている。
【０２４７】 ＳＵＭＯ１はモノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体である。より詳細には，ＳＵＭＯ
１は，ハイブリドーマクローンｍＡｂｌ０８（ＰＮＡＳ８６：９２５−９２９（
１９８９））により産生される腹水由来抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体である。
抗体はプロテインＡアガロースを用いて，記載されるように慣用の手段で精製す
る（Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ａｎｄＬａｎｅ，Ｄ．，１９８８，"Ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ"，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂ
ｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ
ｅｗＹｏｒｋ）。
【０２４８】 ＰＢＳ（ＧＩＢＣＯ，カタログ＃；４５０−１３００ＥＢ）は販売元から入手
するか，または実施例５６に記載されるように調製する。
【０２４９】 ＴＥＳＴ緩衝液は，６．０５７ｇのＴｒｉｓ，および８．７６６ｇのＮａＣＩ
を９００ｍＬのｄＨ2Ｏに加え，ｐＨを７．２に調節し，次に１ｍＬのＴｒｉｔ
ｏｎＸ−１００をｄＨ2Ｏに加え，ｄＨ2Ｏで混合物を１Ｌとすることにより，保
存溶液として調製する。
【０２５０】 ５％ブロッキング緩衝液は，５ｇの無脂インスタントミルクを秤量し，１００
ｍＬのＴＥＳＴ（上述）を清浄なビーカーに入れる。次に，インスタントミルク
をＴＥＳＴに加え，室温でミルクが溶解するまで撹拌する。この溶液は４℃で保
存したとき１−２週間安定であることに注意すべきである。
【０２５１】 ＥＧＦリガンド：ＥＧ．−２０１，（Ｓｈｉｎｋｏ Ａｍｅｒｉｃａｎ，Ｊａ
ｐａｎ）は市販されている。粉体をバイアル中で保存する（１００μｇ／バイア
ル），４℃。
【０２５２】 保存濃度１６．５μＭのＥＧＦリガンドは，すべての粉末をバイアル中で１０
０μｌの１０ｍＭＨＣｌに再懸濁し，１００μｌの１０ｍＭＮａＯＨを加えるこ
とにより調製する。次に，８００μｌのＰＢＳをバイアルに加え，エッペンドル
フチューブに移して，−２０℃で保存する。最良の結果を得るためには，使用直
前に１つのＥＧＦバイアルを作成する。再懸濁したＥＧＦは典型的には−２０℃
で数週間安定である。
【０２５３】 ５ｘＨＮＴＧ溶解緩衝液の保存溶液は，２３．８３ｇのＨＥＰＥＳおよび４３
．８３ｇのＮａＣｌを３５０ｍＬのｄＨ2Ｏ中で混合することにより調製する。
混合物のｐＨを７．２にし，５００ｍＬのグリセロールおよび１００ｍＬのＴｒ
ｉｔｏｎＸ−１００を加える。ｄＨ2Ｏで容量を１Ｌとし，撹拌する。
【０２５４】 １ｘＨＮＴＧ＊緩衝液は，２ｍＬのＨＮＴＧを，１００μｌの１ｍＭＮａ3Ｖ
Ｏ4，２４０μｌの２５ｍＭＮａ4Ｐ2Ｏ7および１００μｌの５ｍＭＥＤＴＡと混
合することにより調製する。ｄＨ2Ｏで混合物を１０ｍＬとする。
【０２５５】 ＥＤＴＡは実施例５６に記載されるように調製する。
【０２５６】 ０．１ＭＮａ3ＶＯ4保存溶液は，約９０ｍＬのｄＨ2Ｏを２５０ｍＬのビーカ
ーに入れ，次にＮａ3ＶＯ4を加えることにより調製する。ビーカー内のｐＨ電極
を用いて，ｐＨを１０に調製し（橙色に変化），次に電子レンジに約１分間かけ
ることにより沸騰させる（溶液は透明になる）。室温に冷却し，水浴に置く。ｐ
Ｈを調べ，ｐＨを１０にした後，ｐＨが１０に保持されるまで沸騰させ冷却する
。ｐＨを調節するためにはＨＣｌまたはＮａＯＨを用い，１ｍＬアリコートを作
成して−８０℃で保存する。
【０２５７】 ０．２ＭＮａ4Ｐ2Ｏ7保存溶液（Ｆｉｓｈｅｒ，カタログ＃；５３９０）は，
８．９２ｇを１００ｍＬのｄＨ2Ｏに加えることにより調製する。使用前に溶液
を濾過する。
【０２５８】 ホスホチロシンに特異的なウサギポリクローナル抗血清（抗Ｐｔｙｒ抗体）は
，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２０１：６５−７９（１９９
１）に記載されるように生成する。
【０２５９】 アフィニティー精製抗血清，ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体，ペルオキシダーゼコン
ジュゲートは市販されている（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ抗体Ｃａｔ＃；ＡＬＩ０４０
４）。
【０２６０】 ＡＢＴＳ溶液は実施例５６と同様に調製する。 過酸化水素３０％溶液（Ｆｉｓｈｅｒ，カタログ＃；Ｈ３２５）。使用まで４
℃で暗所に保存する。 ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2は実施例５６と同様に調製する。使用の約６０分前にＡＢＴ
Ｓを取り出し，室温に暖める。あるいは，管を３７℃の水浴に置くことにより急
速に暖める。 使用前に３μｌのＨ2Ｏ2を加える。 ０．２ＭＨＣｌは上述のように調製し，室温で保存する。
【０２６１】方法 Ａ．ＥＬＩＳＡプレートのプレコーティング Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをＳＵＭＯ１でＰＢＳ中１．０
μｇ／ウエル，１００μｌの最終容量／ウエルで，４℃で一夜被覆する。被覆し
たプレートは４℃で保存した場合１０日間まで良好である。必要ならば，プレー
トを室温で振盪しながら２時間被覆することができる。
【０２６２】 使用の日に，被覆緩衝液を除去し，プレートを脱イオン水で３回，ＴＥＳＴ緩
衝液で１回洗浄する。すべての洗浄は，特に記載しない限り，このような方法で
行うことに注意すべきである。１００μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加
える。プレートを室温で振盪しながら３０分間インキュベートする。使用直前に
，プレートを上述のように洗浄する。
【０２６３】Ｂ．細胞播種 このアッセイにはＥＧＦＲ／ＨＥＲ−２キメラ／＃Ｔ３−Ｃ７細胞株を用いる
。実験には８０−９０％コンフルエントの皿を選択する。トリプシン処理および
１０００ｒｐｍ，室温，５分間の遠心分離により細胞を回収する。
【０２６４】 細胞を飢餓培地中に再懸濁し，トリパンブルーで計数する。９０％以上の生存
率のもののみが許容可能である。細胞を９６ウエルマイクロタイタープレート中
で飢餓培地に２，５００細胞／ウエルの密度で，９０μｌ／ウエルで播種する。
播種した細胞を５％ＣＯ2で３７℃で一夜インキュベートする。
【０２６５】 播種の２日後にアッセイを開始する。
【０２６６】Ｃ．アッセイ方法 一次スクリーニング 試料は，飢餓ＤＭＥＭ（非滅菌でもよい）を含むポリプロピレンプレートで直
接希釈する。この希釈はスクリーニングする試料によって１：１０またはそれよ
り高いであろう。同量のＤＭＳＯを対照ウエルに加える。次にすべての細胞を細
胞プレートに１：１０希釈で移す（１０μｌの試料および培地を９０μｌの飢餓
培地に加える）。最終ＤＭＳＯ濃度は１％またはそれより低いであろう。
【０２６７】二次スクリーニング １０種類の試料をＮＵＮＣ９６ウエルポリプロピレンプレートの列Ａのウエル
２−１１に入れる。これらのウエルは正常の飢餓ＤＭＥＭを含む。１：１０希釈
のために，１０μｌの薬剤を９０μｌの培地に加える。残りのウエル（対照を含
む）にはＤＭＳＯ／培地混合物を加える。この混合物中のＤＭＳＯのパーセンテ
ージは，最初の希釈率（この場合は１：１０）により決定する。したがって，Ｄ
ＭＳＯ濃度は１０％である。列Ａから等量の薬剤および培地を，ＤＭＳＯおよび
培地を含む列Ｂに加える。次に，等量を取り出して列Ｃに加える。これをすべて
の列について繰り返す。これは１：２希釈である。次にすべてのウエルを細胞プ
レートに１：１０希釈で移す（１０μｌの試料および培地を９０μｌの飢餓ＤＭ
ＥＭに加える）。最終ＤＭＳＯ濃度は１％またはそれより低いであろう。
【０２６８】 ５％ＣＯ2中で３７℃で２時間インキュベートし，インキュベーションの間に
，保存ＥＧＦ（１６．５ｕＭ）を暖めたＤＭＥＭ（非滅菌でもよい）で希釈して
１５０ｎＭとすることによりＥＧＦリガンドを調製し，１００μｌ／ウエルに十
分な量のＨＮＴＧ＊を新たに調製し，氷上に置く。
【０２６９】 薬剤とともに２時間インキュベートした後，調製したＥＧＦリガンドを５０μ
ｌ／ウエルで最終濃度５０ｎＭで細胞に加える。正対照ウエル（８）には，同じ
量のＥＧＦを加える。負対照にはＥＧＦを加えない。３７℃で１０分間インキュ
ベートする。
【０２７０】 流し台に廃棄することにより，薬剤，ＥＧＦ，およびＤＭＥＭを除去する。細
胞をＰＢＳで１回洗浄する。
【０２７１】 ＨＮＴＧ＊を１００μｌ／ウエルで細胞に加える。氷上に５分間置く。その間
に，ブロッキング緩衝液をＥＬＩＳＡプレートから除去し，上述したように洗浄
する。マイクロピペッターにしっかり固定したピペットチップを用いて，プレー
トから細胞を掻き取り，ＨＮＴＧ＊溶解緩衝液を繰り返し吸引および分配するこ
とにより細胞物質をホモジナイズする。溶解物を，被覆し，ブロッキングし，洗
浄したＥＬＩＳＡプレートに加える。あるいは，Ｃｏｓｔａｒトランスファーカ
ートリッジを用いて溶解物をＥＬＩＳＡプレートに移してもよい。室温で振盪し
ながら１時間インキュベートする。
【０２７２】 流し台に廃棄することにより溶解物を除去し，次に上に記載されるように洗浄
する。新たに希釈した抗ホスホチロシン（抗Ｐｔｙｒ）抗体（１：３０００，Ｔ
ＥＳＴ）をＥＬＩＳＡプレートに１００μｌ／ウエルで加える。室温で振盪しな
がら３０分間インキュベートする。 流し台に廃棄することにより抗Ｐｔｙｒ抗体を除去し，上に記載されるように
洗浄する。
【０２７３】 新たに希釈したＢＩＯＳＯＵＲＣＥ抗体をＥＬＩＳＡプレートに加える（１：
８０００，ＴＥＳＴ，１００μｌ／ウエル）。室温で振盪しながら３０分間イン
キュベートする。 流し台に捨てることによりＢＩＯＳＯＵＲＣＥ抗体を除去し，先に記載される
ように洗浄する。
【０２７４】 新たに調製したＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液をＥＬＩＳＡプレートに１００μｌ／ウ
エルで加える。振盪しながら５−１０分間インキュベートする。泡を除去し，必
要ならば，ウエルあたり１００μｌの０．２ＭＨＣｌを加えることにより反応を
停止させる。
【０２７５】 ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読む。試験フ
ィルター：４１０ｎＭ；参照フィルター：６３０ｎＭ。この実験において対照を
配置するための好ましいテンプレートは以下に提供される。
【表３】
【０２７６】５．５９．実施例５９：ＣＤＫ２の阻害のアッセイ 以下の試薬，供給物および方法を用いて，本発明の化合物がヒトｃｄｋ２／サ
イクリンＡのインビトロキナーゼ活性を調節する能力をシンチレーションプロキ
シミティーアッセイ（ＳＰＡ）において，アッセイする。
【０２７７】試薬および供給物 アッセイは，Ｗａｌｌａｃ９６−ウエルポリエチレンテレフタレート（ｆｌｅ
ｘｉ）プレート（Ｗａｌｌａｃ，カタログ＃；１４５０−４０１）中で行う。Ａ
ｍｅｒｓｈａｍＲｅｄｉｖｕｅ［γ33Ｐ］ＡＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ，カタログ
＃；ＡＨ９９６８）。
【０２７８】 アッセイ用のビーズは，Ａｍｅｒｓｈａｍのストレプトアビジン被覆ポリビニ
ルトルエンＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ，カタログ＃；ＲＰＮＱ０００７）
である。ビーズをマグネシウムまたはカルシウムを含まないＰＢＳ中で２０ｍｇ
／ｍＬで再構成する。再構成したビーズは４℃で保存する。
【０２７９】 活性化ｃｄｋ２／サイクリンＡ酵素複合体は，Ｓｆ９細胞から精製し，２００
μｌのアリコートで−８０℃で保存する。ヒトｃｄｋ２／サイクリンＡ蛋白質は
，バキュロウイルス感染ｓｆ９細胞から，先に記載されるように発現させ，活性
化し，精製する（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３０：１３１７−１３１９（１９
９３））。
【０２８０】 基質はビオチニル化ペプチド基質（Ｄｅｂｔｉｄｅ）である。これは，ビオチ
ン−Ｘ−ＰＫＴＰＫＫＡＫＫＬのペプチドであり，ｄＨ2Ｏ中に５ｍｇ／ｍＬの
濃度で溶解し，１００μｌのアリコートで−８０℃で保存する。
【０２８１】 ペプチド／ＡＴＰ混合物は，９．９７９ｍＬのｄＨ2Ｏを０．００１２５ｍＬ
の冷１０ｍＭＡＴＰ，０．０１０ｍＬの５ｍｇ／ｍＬのＤｅｂｔｉｄｅ，および
０．０１０ｍＬの１０μＣｉ／ｍＬのγ33ＰＡＴＰと混合することにより調製す
る。
【０２８２】 ２．５ｘキナーゼ緩衝液は，８．８５ｍＬのｄＨ2Ｏを０．６２５ｍＬの１Ｍ
Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．４，０．２５ｍＬの１ＭＭｇＣｌ2，０．２５ｍＬの１０％
ＮＰ４０，および０．０２５ｍＬの１ＭＤＴＴと混合することにより調製する。
１０ｍｌのキナーゼ緩衝液ミックスが，約４．５枚のアッセイプレートに十分で
ある。
【０２８３】 １０ｍＭアデノシン−５’−三リン酸（ウマ筋肉より）ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ，
カタログ＃；Ａ−５３９４）は，実施例５７と同様に調製する。この試薬は−２
０℃で小アリコート中に保存し，使用直前に取り出して氷上に保持することがで
きる。アリコートを凍結／融解してはならない；未使用部分は廃棄する。
【０２８４】 マグネシウムまたはカルシウムを含まないＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食
塩水）（Ｇｉｂｃｏ，カタログ＃；１４１９０−１４４）は，販売元から購入す
るか，または実施例５７と同様に調製し，５００ｍＭＥＤＴＡの保存溶液は実施
例５６と同様に調製する。
【０２８５】 実験の前に，以下の保存溶液を調製する：
【表４】
【０２８６】方法 阻害剤の溶液は，５％ＤＭＳＯ中に所望の最終濃度の５倍で調製する。 １０μｌを各ウエルに加える。負対照については，１０μｌの５％ＤＭＳＯを
加える。
【０２８７】 ５μｌのｃｄｋ２／サイクリンＡ溶液を２．１ｍＬの２ｘキナーゼ緩衝液（プ
レートあたり）中で希釈し，２０μｌ／ウエルの酵素を加える。これは，ハンド
ピペットを用いるかまたはＴｉｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐを用いること
により加えることができる。酵素は凍結／融解することができるが，これにより
ある程度の活性が失われることに注意すべきである。各凍結／融解サイクルにつ
いて，アッセイにおいて用いる酵素の量を２倍にする。また，酵素は急速に融解
してはならず（例えば手のひらの中で），アッセイにおいて用いる前には氷上に
保持しなければならない。負対照ウエルには１０μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加え
る。
【０２８８】 キナーゼ反応を開始させるためには，ハンドピペットまたはＴｉｔｅｒｔｅｋ
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐのいずれかを用いて２０μｌのペプチド／ＡＴＰ混合物を
加える。実験台の覆いの後に１時間放置する。振盪は必要ではなく，Ｆｌｅｘｉ
プレートを用いる場合には推奨されない（プレートは振盪器に出し入れすること
が容易ではない）。
【０２８９】 Ｔｉｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐまたはハンドピペットのいずれかを用
いてウエルあたり２００μｌの溶液を加える。少なくとも１０分間放置する。プ
レートを約２３００ｒｐｍで３−５分間遠心する。 Ｔｒｉｌｕｘリーダーでプレートを計数する。
【０２９０】 この実験において対照を配置するための好ましいテンプレートは，上述の実施
例５６に示される。
【０２９１】５．６０．実施例６０：ＥＧＦＲ活性の調節のアッセイ 以下の試薬，供給物および方法を用いて，本発明の化合物がＥＧＦＲのインビ
トロ活性を調節する能力をＥＬＩＳＡで容易に決定することができる。
【０２９２】試薬および供給物 反応は，Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレート中で行う（Ｃｏｒｎ
ｉｎｇ，カタログ＃；２５８０５−９６）。 ＳＵＭＯ１は，モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体であり，−２０℃で１ｍＬアリ
コート中で保存する。これは実施例５８に記載されている。
【０２９３】 ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，カタログ＃；４５０−１３００ＥＢ）は販売元から購入
するか，または実施例５６に記載されるように調製する。 ＴＢＳ緩衝液は実施例５６と同様に調製し，ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を０．１
％で加える。 ブロッキング緩衝液は実施例５７と同様に調製する。 Ａ４３１マウス細胞溶解物は−８０℃で保存する（ＡＴＣＣ，カタログ．ｅ＃
；ＨＢ−９６２９）。 ＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯは実施例５６と同様に調製する。 １．０ｍＭのＡＴＰ保存溶液および１ＭのＭｎＣｌ2保存溶液は，上述したよ
うに調製する。
【０２９４】 ＡＴＰ／ＭｎＣｌ2リン酸化ミックスは，３００μｌの１．０ｍＭＡＴＰおよ
び５００μｌの１ＭＭｎＣｌ2を９．２ｍＬのｄＨ2Ｏに加え，混合することによ
り調製する。１０ｍＬのリン酸化ミックスが約６枚のアッセイプレートに十分で
ある。混合物は新たに作成し，使用直前まで氷上に保持しなければならないこと
，および好ましくはＡＴＰは粉末保存物から新たに作成するが，ＡＴＰの残存保
存溶液は後に使用するために小アリコート中で−２０℃で凍結してもよいことに
注意すべきである。
【０２９５】 ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレートを反応に用いる（Ａｐｐｌ
ｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ＃；ＡＳ−７２０９２）。 ＥＤＴＡは実施例５６と同様に調製する。
【０２９６】 ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン血清は，上述のように調製し，−８０
℃で１ｍＬアリコート中で保存する。１ｍＬバイアルを融解し，より少量のアリ
コートに分けて−８０℃で保存する。抗血清は，融解し４℃で保存したとき，数
週間安定である。ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｂｉｏ
ｓｏｕｒｃｅ，カタログ＃；ＡＬＩ０４０４）は市販されている。
【０２９７】 ＡＢＴＳ溶液は実施例５６に記載されるように調製する。 過酸化水素３０％溶液は市販されている（Ｆｉｓｈｅｒ，カタログ＃；Ｈ３２
５）。使用するまで４℃で暗所に保存する。 ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2は実施例５６と同様に調製する。 ＡＢＴＳは使用の約６０分前に取り出し，室温まで暖める。あるいは，管を３
７℃の水浴中に置くことにより急速に暖める。使用前に３μｌのＨ2Ｏ2を加える
。 ０．２ＭＨＣｌは上述のように調製し，室温で保存する。
【０２９８】方法 Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを０．５μｌ／ウエルのＳＵＭ
Ｏ１で，１００μｌの容量のＰＢＳ中で４℃で一夜被覆する。プレートを逆さに
して液体を除去することにより未結合ＳＵＭＯ１をウエルから除去する。蒸留Ｈ 2 Ｏでウエルを満たすことにより１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で
軽くたたいて過剰の液体を除去する。
【０２９９】 １５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。室温で振盪しながら３
０分間インキュベートする。プレートを脱イオン水で３回，次にＴＢＳＴで１回
洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体および泡を除
去する。
【０３００】 溶解物をＰＢＳ中で希釈し（７μｇ溶解物／１００μｌＰＢＳ），１００μｌ
の希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で６０分間振盪する。蒸留Ｈ2Ｏでウエ
ルを満たすことにより１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたい
て過剰の液体を除去する。 捕獲されたＥＧＦＲを含むＥＬＩＳＡプレートに１２０μｌのＴＢＳＴを加え
る。
【０３０１】 薬剤／抽出物を９６−ウエルポリプロピレンプレート中でＴＢＳＴで１：１０
（特に記載しないかぎり）に希釈する。すなわち，１０μｌの化合物＋９０μｌ
のＴＢＳＴ。１３．５μｌの希釈薬剤／抽出物をＥＬＩＳＡプレートに加える。
対照ウエル（薬剤を加えないウエル）には，１３．５μｌのＴＢＳＴ＋１０％Ｄ
ＭＳＯを加える。室温で振盪しながら３０分間インキュベートする。
【０３０２】 １５μｌのリン酸化ミックスを，ＡＴＰ／ＭｎＣｌ2を加えない負対照ウエル
を除くすべてのウエルに直接加える。ウエル中約１５０μｌの最終容量，ウエル
中，３μＭＡＴＰ／５ｍＭＭｎＣｌ2の最終濃度。振盪しながら５分間インキュ
ベートする。これは一定時間の事象であることに注意すべきである。ＡＴＰ／Ｍ
ｎＣｌ2がレセプターを５分間しかリン酸化しないことが重要である。自動化９
６点ピペッターワークステーションを用いてＡＴＰ／ＭｎＣｌ2を加え，５分後
に同じワークステーションを用いてＥＤＴＡで反応を停止させることが最もよい
。あるいは１２チャネルピペッターを用いて１回に１列に加え，各列の間に２０
秒間をおくと，正確に５分後にＥＤＴＡで反応を停止することができる（これは
１つのバッチでリン酸化するプレートの数による）。各添加の間に振盪する。
【０３０３】 ５分後，反応を停止するために１６．５μｌの２００ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ８．
０をウエル中最終濃度２０ｍＭで加える。それぞれの添加の間に振盪を続ける。
これは，上述のように同じワークステーションで行ってもよく，１２チャンネル
ピペッターにより同じタイミングの方法を用いてもよい。ＥＤＴＡを加えた後，
１分間浸透する。脱イオン水で４回，ＴＢＳＴで２回洗浄する。
【０３０４】 １００μｌ／ウエルの抗ホスホチロシン（１：３０００希釈，ＴＢＳＴ）を加
える。室温で振盪しながら３０−４５分間インキュベートする。蒸留Ｈ2Ｏでウ
エルを満たすことにより１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたた
いて過剰の液体を除去する。
【０３０５】 １００μｌ／ウエルのｂｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダー
ゼコンジュゲート（１：２０００希釈，ＴＢＳＴ）を加える。室温で振盪しなが
ら３０分間インキュベートする。蒸留Ｈ2Ｏでウエルを満たすことにより１回洗
浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体を除去する。
【０３０６】 １００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。振盪しながら５−１
０分間インキュベートする。泡を除去する。必要ならば，ウエルあたり１００μ
ｌの０．２ＭＨＣｌを加えることにより反応を停止させる。ＤｙｎａｔｅｃｈＭ
Ｒ７０００ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読む。試験フィルター：４１０ｎＭ
；参照フィルター：６３０ｎＭ。この実験における対照の配置のための好ましい
テンプレートは，上述の実施例５６に示される。
【０３０７】５．６１．実施例６１：選択された化合物のキナーゼ阻害 上述したような方法を用いて，本発明の選択された化合物がキナーゼ，Ｆｌｋ
ＧＳＴ，ＥＧＦＲ，ＰＤＧＦＲ，ｃｄｋ２ＳＰＡ，およびＨＥＲ−２の活性を阻
害する能力を以下に示す。
【０３０８】
【表５】
【表６】
【表７】
【０３０９】 これらのデータから，本発明の好ましい化合物が，種々の異なるキナーゼの活
性を阻害しうることが明らかである。さらに，特定の化合物が高度に選択的な阻
害を示すことができることが明らかである。例えば，化合物６の塩酸塩（すなわ
ち，５−［４−（１−ベンジル−１Ｈ−インドール−５−イルアミノ）−６−オ
キソ−６，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イリデンメチ
ル］−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イ
ル−エチル）−アミド塩酸）は，非常に低い濃度でＥＧＦＲを阻害するが，ＰＤ
ＧＦＲの活性に対しては比較的少ない影響を示す。
【０３１０】５．６２．実施例６２：経口処方 本発明のキナーゼ阻害剤を含む硬質ゼラチンカプセル投与形態は，以下の成分
を用いて製造することができる：
【表８】
【０３１１】 キナーゼ阻害剤をふるい分けし，示される賦形剤と混合する。当該技術分野に
おいてよく知られる適当な機械および方法を用いて，混合物を適当なサイズの２
部分硬質ゼラチンカプセルに充填する。例えば，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈ
ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６版または１８版（その全体
を本明細書の一部としてここに引用する）を参照。充填物の重量を変更し，必要
ならば適合するようにカプセルサイズを変更することにより，他の投与量も製造
することができる。上述の適切な非ラクトース硬質ゼラチンカプセル処方の任意
のものを形成することができる。
【０３１２】 圧縮錠剤形態のキナーゼ阻害剤は，以下の成分を用いて製造することができる
：
【表９】
【０３１３】 キナーゼ阻害剤を適当なサイズのふるいを通してふるい分けし，非ラクトース
賦形剤と，均一な混合物が形成されるまで混合する。乾燥混合物をスクリーンに
かけ，ステアリン酸マグネシウムと混合する。次に，得られた粉体混合物を圧縮
して所望の形状およびサイズの錠剤とする。活性成分対賦形剤の比率を変更する
ことにより，または表の重量を改変することにより，他の強度の錠剤を製造する
ことができる。
【０３１４】 上述した本発明の態様は，単に例示を意図するものであり，当業者は，特定の
材料および方法の多くの同等物を認識し，または日常的な実験ルーチンを越える
実験を用いることなく確認するであろう。そのような同等物はすべて本発明の範
囲内に含まれ，特許請求の範囲の範囲内であると考えられる。本明細書において
参照されるすべての特許，特許出願，および刊行物は，その全体を本明細書の一
部としてここに引用する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 1/18 Ａ６１Ｐ 1/18 3/00 3/00 5/00 5/00 9/00 9/00 11/00 11/00 11/06 11/06 13/00 13/00 15/00 15/00 19/00 19/00 25/00 25/00 35/00 35/00 37/08 37/08 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 487/04 １４０ Ｃ０７Ｄ 487/04 １４０ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 リャン，コンジン アメリカ合衆国 94037−2242 カリフォ ルニア州 サニーヴェイル，ウエスト レ ミントン ドライブ 729 (72)発明者 スン，リ アメリカ合衆国 94404 カリフォルニア 州 フォスター シティ，リックオーバー レイン 1151 (72)発明者 ウェイ，チャン・チェン アメリカ合衆国 94404 カリフォルニア 州 フォスター シティ， コモンズ レ イン 39 (72)発明者 タン，ペン・チョウ アメリカ合衆国 94556 カリフォルニア 州 モラーガ，カミノ リカルド 827 (72)発明者 マクマホン，ジェラルド アメリカ合衆国 94109 カリフォルニア 州 サン フランシスコ，グリーンウィッ チ ストリート 1414 (72)発明者 ヒース，クラウス・ピーター アメリカ合衆国 94114 カリフォルニア 州 サン フランシスコ，コリングウッド ストリート 334 (72)発明者 キュイ，ジンロン アメリカ合衆国 94404 カリフォルニア 州 フォスター シティ，アークチュルス サークル 808 Ｆターム(参考） 4C050 AA01 BB04 CC08 EE03 FF02 GG03 GG04 HH04 4C065 AA04 BB04 CC01 DD02 EE02 HH01 JJ02 JJ07 KK01 KK05 LL04 PP01 PP09 PP16 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 CB05 MA01 MA04 MA52 MA55 MA56 MA63 NA14 NA15 ZA02 ZA36 ZA59 ZA66 ZA81 ZA96 ZB13 ZB26 ZC20 ZC21

Claims (35)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式１： 【化１】 ［式中， Ｒ1はＨまたはメチルであり； Ｒ2およびＲ3は，それぞれ独立して，Ｈ，ハロゲン，（Ｃ1−Ｃ3）アルキル，ま
    たは（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシであり；またはＲ2およびＲ3は一緒になって，任意
    に置換されていてもよいメチリデンまたは任意に０−３個の複素原子を含む３−
    ７員の環を形成し； Ｒ4は，Ｈ，メチル，トリフルオロメチル，（Ｃ1−Ｃ4）アルキル，アルコキシ
    ，アミド，アミノ，または任意に置換されていてもよいアリールであり； Ｘは，化学結合，エチニル，−Ｏ−，−Ｓ−，−Ｓ（Ｏ）−，−Ｓ（Ｏ2）−，
    −ＮＲ5Ｃ（Ｏ）−，または−ＮＲ5−であり，ここで，Ｒ5は，Ｈ，メチル，ま
    たは置換メチレンであり； Ｙは，０−３個の複素原子を含み，任意に置換されていてもよい，５−１０員の
    単環または二環の，飽和，不飽和，または芳香族環であり；および Ｚは，ＮまたはＣＲ6であり，ここで，Ｒ6は，Ｈ，ハロゲン，ニトロ，シアノ，
    アルコキシル，スルホンアミド，アミノ，またはアミドである］ の化合物，またはその薬学的に許容しうる塩，溶媒和物，包接化合物，またはプ
    ロドラッグ。
  2. 【請求項２】 Ｘが，化学結合，−Ｏ−，−Ｓ−，または−ＮＲ5−である
    ，請求項１記載の化合物。
  3. 【請求項３】 Ｙが，フェニル，インドリル，インドリニル，１Ｈ−インダ
    ゾリル，２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾリル，１Ｈ−ベンズイミダゾリル，
    ２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル，ベンゾトリアゾリル，ピリジル
    ，ピリミジル，４−置換ピペラジン−１−イル，モルホリノ，ピペリジニル，ピ
    ロリジン−１−イル，フラニル，チオフェニル，ピロリル，ピラゾリル，イミダ
    ゾリル，ピリドピロリル，ピリダゾピロリル，ピリミドピロリル，ピラゾピロリ
    ル，ピリドフラニル，およびそれらの誘導体からなる群より選択される，請求項
    １記載の化合物。
  4. 【請求項４】 ＺがＮまたはＣＨである，請求項１記載の化合物。
  5. 【請求項５】 Ｒ2およびＲ3がいずれもＨ，ハロゲン，またはメチルである
    ，請求項１記載の化合物。
  6. 【請求項６】 Ｒ2およびＲ3が一緒になって，１，３−ジオキソラン，１，
    ３−ジオキサン，シクロプロピル，シクロブチル，シクロペンチル，およびシク
    ロヘキシルからなる群より選択される環を形成する，請求項１記載の化合物。
  7. 【請求項７】 Ｒ2およびＲ3が一緒になって，式１ａ−１ｎ： 【化２】 ［式中， ｎは０−３の整数であり； 各Ｒ7は，独立して，Ｈ，アルキル，カルボン酸，アミン，ハロゲン，ニトロ，
    シアノ，Ｘ1，Ｘ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル−Ｒ8，Ｘ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルケニル
    −Ｒ8，またはＸ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルキニル−Ｒ8であり； Ｘ1は，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ9−，−ＮＲ9Ｃ（Ｏ）−，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 1 ，−ＯＣ（Ｏ）−，−Ｏ−，−ＮＲ9−，−Ｓ−，−Ｓ（０２），または−Ｓ（
    Ｏ2）ＮＲ9−であり； Ｘ2は，化学結合，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ9−，−ＮＲ9Ｃ（Ｏ）−，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−，
    Ｃ（Ｏ）Ｒ11−ＯＣ（Ｏ）−，−Ｏ−，−ＮＲ9−，−Ｓ−，−Ｓ（Ｏ2），また
    は−Ｓ（Ｏ2）ＮＲ9−であり； Ｒ8は，水素，ジアルキルアミノ，カルボキシル，ヒドロキシル，アルコキシ，
    スルホンアミド，尿素，カルバメート，ジオール，アルキルスルホニル，および
    Ｒ10からなる群より選択され； Ｒ9はＨまたは（Ｃ1−Ｃ3）アルキルであり； Ｒ10は，１−４個の複素原子を含む任意に置換されていてもよい５または６員の
    飽和，不飽和，または芳香族複素環であり；および Ｒ11は任意に置換されていてもよい５−６員の飽和複素環である］ から選択される，任意に置換されていてもよいメチリデンを形成する，請求項１
    記載の化合物。
  8. 【請求項８】 Ｒ7が，Ｘ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル−Ｒ8，Ｘ2−（Ｃ1−Ｃ4 ）アルケニル−Ｒ8，またはＸ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルキニル−Ｒ8であり，および
    Ｒ8が，アルキルスルホニル，アルコキシ，カルボキシル，モルホリノ，１−ア
    ルキル−ピペラジン−４−イル，ピロリジニル，ピペリジニル，ピリジル，イミ
    ダゾロ，トリアゾロ，テトラゾロ，およびチアゾロからなる群より選択される，
    請求項７記載の化合物。
  9. 【請求項９】 Ｒ4が，Ｈ，メチル，またはトリフルオロメチルである，請
    求項１記載の化合物。
  10. 【請求項１０】 ＺがＣＨであるとき，Ｒ1はＣＨ3であるか，またはＲ3お
    よびＲ2は任意に置換されていてもよいメチリデンを形成しない，請求項１記載
    の化合物。
  11. 【請求項１１】 次式： 【化３】 【化４】 【化５】 【化６】 【化７】 【化８】 からなる群より選択される化合物，およびその薬学的に許容しうる塩，溶媒和物
    ，包接化合物，およびプロドラッグ。
  12. 【請求項１２】 式２： 【化９】 ［式中， Ｒ1は，Ｈまたはメチルであり； Ｒ4は，Ｈ，メチル，トリフルオロメチル，（Ｃ1−Ｃ4）アルキル，アルコキシ
    ，アミド，アミノ，または任意に置換されていてもよいアリールであり； Ｘは，化学結合，エチニル，−Ｏ−，−Ｓ−，−Ｓ（Ｏ）−，−Ｓ（Ｏ2）−，
    −ＮＲ5Ｃ（Ｏ）−，または−ＮＲ5−であり，ここで，Ｒ5は，Ｈ，メチル，ま
    たは置換メチレンであり； Ｙは，０−３個の複素原子を含み，任意に置換されていてもよい５−１０員の単
    環または二環の，飽和，不飽和，または芳香族環であり；および Ｚは，ＮまたはＣＲ6であり，ここでＲ6は，Ｈ，ハロゲン，ニトロ，シアノ，ア
    ルコキシル，スルホンアミド，アミノ，またはアミドであり； ｎは，０−３の整数であり； 各Ｒ7は，独立して，Ｈ，アルキル，カルボン酸，アミン，ハロゲン，ニトロ，
    シアノ，Ｘ1，Ｘ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル−Ｒ8，Ｘ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルケニル
    −Ｒ8，またはＸ2−（Ｃ1−Ｃ4）アルキニル−Ｒ8であり； Ｘ1は，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ9−，−ＮＲ9Ｃ（Ｏ）−，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−，Ｃ（Ｏ）Ｒ1 1 ，−ＯＣ（Ｏ）−，−Ｏ−，−ＮＲ9−，−Ｓ−，−Ｓ（Ｏ2），または−Ｓ（
    Ｏ2）ＮＲ9−であり； Ｘ2は，化学結合，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ9−，−ＮＲ9Ｃ（Ｏ）−，−Ｃ（Ｏ）０−，
    Ｃ（Ｏ）Ｒ11，−ＯＣ（Ｏ）−，−Ｏ−，−ＮＲ9−，−Ｓ−，−Ｓ（Ｏ2），ま
    たは−Ｓ（Ｏ2）ＮＲ9−であり； Ｒ8は，水素，ジアルキルアミノ，カルボキシル，ヒドロキシル，アルコキシ，
    スルホンアミド，尿素，カルバメート，ジオール，アルキルスルホニル，および
    Ｒ10からなる群より選択され； Ｒ9は，Ｈまたは（Ｃ1−Ｃ3）アルキルであり； Ｒ10は，１−４個の複素原子を含み任意に置換されていてもよい５または６員の
    飽和，不飽和，または芳香族複素環であり；および Ｒ11は，任意に置換されていてもよい５または６員の飽和複素環である］ の化合物，またはその薬学的に許容しうる塩，溶媒和物，包接化合物，またはプ
    ロドラッグを製造する方法であって，式： 【化１０】 ［式中，Ｌは脱離基である］ の化合物を，式２の化合物を形成するのに十分な条件下で式ＹＸＨの化合物と反
    応させることを含む方法。
  13. 【請求項１３】 Ｌが，Ｂｒ，Ｃｌ，ＳＣＨ3，およびＳ（Ｏ）ＣＨ3からな
    る群より選択される，請求項１２記載の方法。
  14. 【請求項１４】 反応が極性溶媒中で実施される，請求項１２記載の方法。
  15. 【請求項１５】 極性溶媒が，アルコール，ＤＭＦ，およびＤＭＳＯからな
    る群より選択される，請求項１４記載の方法。
  16. 【請求項１６】 反応が，ＡｇＯＴｆ，Ｐｄ（Ｐｈ3）4，およびｐ−ＴｓＯ
    Ｈからなる群より選択される触媒により触媒される，請求項１２記載の方法。
  17. 【請求項１７】 式２の化合物を製造する方法であって，式： 【化１１】 の化合物を，式２の化合物を形成するのに十分な条件下で式： 【化１２】 の化合物と反応させることを含む方法。
  18. 【請求項１８】 反応が極性溶媒中で実施される，請求項１７記載の方法。
  19. 【請求項１９】 極性溶媒が，アルコール，ＤＭＦ，およびＤＭＳＯからな
    る群より選択される，請求項１８記載の方法。
  20. 【請求項２０】 塩基により触媒される，請求項１７記載の方法。
  21. 【請求項２１】 塩基が，ピリジンおよびピペリジンからなる群より選択さ
    れる，請求項２０記載の方法。
  22. 【請求項２２】 式１の化合物，またはその薬学的に許容しうる塩，溶媒和
    物，包接化合物，またはプロドラッグ，および薬学的に許容しうる担体を含む医
    薬組成物。
  23. 【請求項２３】 請求項１１記載の化合物および薬学的に許容しうる担体ま
    たは賦形剤を含む医薬組成物。
  24. 【請求項２４】 経口，経皮，局所，非経口，または粘膜投与に適している
    ，請求項２２記載の医薬組成物。
  25. 【請求項２５】 蛋白質キナーゼ活性を制御，調節または阻害する方法であ
    って，式１の化合物，またはその薬学的に許容しうる塩または溶媒和物を蛋白質
    キナーゼと接触させることを含む方法。
  26. 【請求項２６】 蛋白質キナーゼが蛋白質チロシンキナーゼである，請求項
    ２５記載の方法。
  27. 【請求項２７】 蛋白質キナーゼが，ａｂ１，ＡＴＫ，ｂｅｒ−ａｂ１，Ｂ
    ｌｋ，Ｂｒｋ，Ｂｔｋ，ｃ−ｆｍｓ，ｃ−ｋｉｔ，ｃ−ｍｅｔ，ｃ−ｓｒｃ，Ｃ
    ＤＫ１，ＣＤＫ２，ＣＤＫ４，ＣＤＫ６，ｃＲａｆｌ，ＣＳＦ１Ｒ，ＣＳＫ，Ｅ
    ＧＦＲ，ＥｒｂＢ２，ＥｒｂＢ３，ＥｒｂＢ４，ＥＲＫ，Ｆａｋ，ｆｅｓ，ＦＧ
    ＦＲ１，ＦＧＦＲ２，ＦＧＦＲ３，ＦＧＦＲ４，ＦＧＦＲ５，Ｆｇｒ，ＦＬＫ−
    ４，ｆｌｔ−１，Ｆｐｓ，Ｆｒｋ，Ｆｙｎ，ＧＳＫ，Ｇｓｔ−Ｆｌｋｌ，Ｈｃｋ
    ，Ｈｅｒ−２，Ｈｅｒ−４，ＩＧＦ−１Ｒ，ＩＮＳ−Ｒ，Ｊａｋ，ＪＮＫ，ＫＤ
    Ｒ，Ｌｃｋ，Ｌｙｎ，ＭＥＫ，ｐ３８，ＰＡＮＨＥＲ，ＰＤＧＦＲ，ＰＬＫ，Ｐ
    ＫＣ，ＰＹＫ２，Ｒａｆ，Ｒｈｏ，ｒｏｓ，ＳＲＣ，ｔｉｅ1，ｔｉｅ2，ＴＲＫ
    ，ＵＬ９７，ＶＥＧＦＲ，Ｙｅｓ，およびＺａｐ７０からなる群より選択される
    ，請求項２５記載の方法。
  28. 【請求項２８】 蛋白質キナーゼが，ＰＡＮＨＥＲ，ＥＧＦＲ，Ｈｅｒ−２
    ，Ｈｅｒ−４，ＰＤＧＦＲ，ＳＲＣ，Ｌｃｋ，ｃｄｋ２，ｐ３８，Ｒａｆ，およ
    びＲｈｏからなる群より選択される，請求項２７記載の方法。
  29. 【請求項２９】 蛋白質キナーゼが，ＰＡＮＨＥＲ，ＣＤＫ２，ＰＤＧＦＲ
    ，ｐ３８，およびＲａｆからなる群より選択される，請求項２８記載の方法。
  30. 【請求項３０】 蛋白質キナーゼが培養細胞中にある，請求項２５記載の方
    法。
  31. 【請求項３１】 蛋白質キナーゼが哺乳動物中にある，請求項２５記載の方
    法。
  32. 【請求項３２】 制御されない蛋白質キナーゼ活性により特徴づけられる哺
    乳動物の疾病を治療または予防する方法であって，そのような治療または予防を
    必要とする哺乳動物に，治療上または予防上有効量の式１の化合物，またはその
    薬学的に許容しうる塩，溶媒和物，包接化合物，またはプロドラッグを投与する
    ことを含む方法。
  33. 【請求項３３】 制御されない蛋白質キナーゼ活性により特徴づけられる疾
    病が，血管増殖疾患；繊維性疾患；メサンギウム細胞増殖疾患；代謝性疾患；ア
    レルギー；ぜん息；血栓症；神経系疾病；および癌からなる群より選択される，
    請求項３０記載の方法。
  34. 【請求項３４】 制御されない蛋白質キナーゼ活性により特徴づけられる疾
    病が癌である，請求項３１記載の方法。
  35. 【請求項３５】 癌が，乳，胃，卵巣，結腸，肺，脳，喉頭，リンパ系，尿
    生殖器管（膀胱および前立腺を含む），卵巣，胃，骨，および膵臓癌からなる群
    より選択される，請求項３２記載の方法。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006049339A1 (ja) * 2004-11-08 2006-05-11 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. 新規縮環イミダゾール誘導体
JP2007504159A (ja) * 2003-08-28 2007-03-01 アイアールエム・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー プロテインキナーゼ阻害剤としての化合物および組成物
JP2008517984A (ja) * 2004-10-25 2008-05-29 アステックス、セラピューティックス、リミテッド プロテインキナーゼ阻害剤としてのオルト縮合ピリジンおよびピリミジン誘導体（例えばプリン類）
JP2009532475A (ja) * 2006-04-05 2009-09-10 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ヤヌスキナーゼの阻害剤として有用なデアザプリン
JP2016513656A (ja) * 2013-03-13 2016-05-16 ボストン バイオメディカル， インコーポレイテッド がんの処置のための、がん幹細胞経路キナーゼの阻害剤としての３−（アリールまたはヘテロアリール）メチレンインドリン−２−オン誘導体

Families Citing this family (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6987113B2 (en) 1997-06-11 2006-01-17 Sugen, Inc. Tyrosine kinase inhibitors
US6525072B1 (en) 1998-08-31 2003-02-25 Sugen, Inc. Geometrically restricted 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US7740841B1 (en) * 2000-01-28 2010-06-22 Sunnybrook Health Science Center Therapeutic method for reducing angiogenesis
TWI329105B (en) * 2002-02-01 2010-08-21 Rigel Pharmaceuticals Inc 2,4-pyrimidinediamine compounds and their uses
AR039241A1 (es) 2002-04-04 2005-02-16 Biogen Inc Heteroarilos trisustituidos y metodos para su produccion y uso de los mismos
UA80295C2 (en) 2002-09-06 2007-09-10 Biogen Inc Pyrazolopyridines and using the same
MXPA05003817A (es) * 2002-10-09 2005-07-13 Scios Inc Derivados de azaindoles como inhibidores de p38 quinasa.
US20050288299A1 (en) * 2002-10-09 2005-12-29 Mavunkel Babu J Azaindole derivatives as inhibitors of p38 kinase
US20050043212A1 (en) * 2002-10-09 2005-02-24 Ford Kirschenbaum Differential inhibition of p38 map kinase isoforms
NZ545270A (en) * 2003-07-30 2010-04-30 Rigel Pharmaceuticals Inc 2,4-Pyrimidinediamine compounds for use in the treatment or prevention of autoimmune diseases
EA010160B1 (ru) 2003-09-18 2008-06-30 Конформа Терапьютикс Корпорейшн Новые гетероциклические соединения - ингибиторы hsp90 и способы их получения
US20050203111A1 (en) * 2004-03-12 2005-09-15 Vvii Newco 2003, Inc. Compositions and methods for preventing and treating skin and hair conditions
US20080044439A1 (en) * 2004-03-11 2008-02-21 David Nathaniel E Compositions and Methods for Preventing and Treating Skin and Hair Conditions
JP2008503473A (ja) * 2004-06-17 2008-02-07 プレキシコン，インコーポレーテッド Ｃ−ｋｉｔ活性を調節する化合物
US20070203161A1 (en) * 2006-02-24 2007-08-30 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the jak pathway
KR101312225B1 (ko) 2005-06-08 2013-09-26 리겔 파마슈티칼스, 인크. Ｊａｋ 경로의 억제를 위한 조성물 및 방법
US7560551B2 (en) 2006-01-23 2009-07-14 Amgen Inc. Aurora kinase modulators and method of use
JP5256047B2 (ja) 2006-01-27 2013-08-07 シャンハイ ヘンルイ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン２−インドリノン（ｉｎｄｏｌｉｎｏｎｅ）プロテインキナーゼ阻害剤
CN101007815B (zh) * 2006-01-27 2010-06-23 江苏恒瑞医药股份有限公司 吡咯并六元杂环化合物及其在医药上的用途
WO2007098507A2 (en) 2006-02-24 2007-08-30 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the jak pathway
CN101054379A (zh) * 2006-04-11 2007-10-17 上海恒瑞医药有限公司 吡咯取代的嘧啶酮衍生物、其制备方法及其在医药上的用途
GB0608176D0 (en) * 2006-04-25 2006-06-07 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical Compounds
EP3421471B1 (en) * 2006-04-25 2021-05-26 Astex Therapeutics Limited Purine and deazapurine derivatives as pharmaceutical compounds
US7951819B2 (en) 2006-04-26 2011-05-31 Cancer Research Technology Limited Imidazo[4, 5-B]pyridin-2-one and oxazolo[4, 5-B] pyridin-2-one compounds and analogs thereof as cancer therapeutic compounds
US8604031B2 (en) 2006-05-18 2013-12-10 Mannkind Corporation Intracellular kinase inhibitors
WO2008063888A2 (en) 2006-11-22 2008-05-29 Plexxikon, Inc. Compounds modulating c-fms and/or c-kit activity and uses therefor
US20100173426A1 (en) * 2006-12-19 2010-07-08 Johnson Faye M Biomaker identifying the reactivation of stat3 after src inhibition
WO2008093246A2 (en) * 2007-02-02 2008-08-07 Vegenics Limited Vegf receptor antagonist for treating organ transplant alloimmunity and arteriosclerosis
EP2170830B1 (en) 2007-07-17 2014-10-15 Plexxikon, Inc. 2-FLUORO-BENZENESULFONAMIDE COMPOUNDS AS Raf KINASE MODULATORS
NZ586418A (en) 2007-12-19 2012-09-28 Cancer Rec Tech Ltd Pyrido[2,3-b]pyrazine-8-substituted compounds and their use
US20090203709A1 (en) * 2008-02-07 2009-08-13 Abbott Laboratories Pharmaceutical Dosage Form For Oral Administration Of Tyrosine Kinase Inhibitor
WO2009103032A1 (en) 2008-02-15 2009-08-20 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine-2-amine compounds and their use as inhibitors of jak kinases
NZ589315A (en) 2008-04-16 2012-11-30 Portola Pharm Inc 2,6-diamino-pyrimidin-5-yl-carboxamides as Spleen tryosine kinase (syk) or Janus kinase (JAK) inhibitors
US8138339B2 (en) 2008-04-16 2012-03-20 Portola Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of protein kinases
JP2011518219A (ja) 2008-04-22 2011-06-23 ポートラ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド タンパク質キナーゼの阻害剤
GB0807609D0 (en) 2008-04-25 2008-06-04 Cancer Rec Tech Ltd Therapeutic compounds and their use
CN102245604A (zh) 2008-12-23 2011-11-16 雅培制药有限公司 抗病毒化合物
JP2012513409A (ja) * 2008-12-23 2012-06-14 アボット・ラボラトリーズ 抗ウイルス化合物
AU2010232670B2 (en) 2009-04-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Propane- I-sulfonic acid {3- [5- (4 -chloro-phenyl) -1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine-3-carbonyl] -2, 4-difluoro-pheny l } -amide compositions and uses thereof
RU2541571C2 (ru) * 2009-04-15 2015-02-20 Эббви Инк. Противовирусные соединения
TWI469780B (zh) 2009-06-11 2015-01-21 Abbvie Bahamas Ltd 抗病毒化合物
US8937150B2 (en) 2009-06-11 2015-01-20 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
CN102470135A (zh) * 2009-07-28 2012-05-23 里格尔药品股份有限公司 抑制jak途径的组合物和方法
WO2011041584A2 (en) 2009-09-30 2011-04-07 President And Fellows Of Harvard College Methods for modulation of autophagy through the modulation of autophagy-enhancing gene products
PE20121327A1 (es) 2009-11-06 2012-10-18 Plexxikon Inc Compuestos y metodos para la modulacion de cinasas, e indicaciones para ello
WO2011092469A1 (en) 2010-02-01 2011-08-04 Cancer Research Technology Limited 1-(5-tert-butyl-2-phenyl-2h-pyrazol-3-yl)-3-[2-fluoro-4-(1-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1h-imidazo[4,5-b]pyridin-7-yloxy)-phenyl]-urea and related compounds and their use in therapy
NZ605440A (en) 2010-06-10 2014-05-30 Abbvie Bahamas Ltd Solid compositions comprising an hcv inhibitor
WO2012061428A2 (en) 2010-11-01 2012-05-10 Portola Pharmaceuticals, Inc. Nicotinamides as jak kinase modulators
MX338551B (es) * 2010-12-20 2016-04-20 Pfizer Nuevos compuestos de piridina fusionada como inhibidores de caseina quinasa.
US9943605B2 (en) 2010-12-23 2018-04-17 Nektar Therapeutics Polymer-semaxanib moiety conjugates
PL2672967T3 (pl) 2011-02-07 2019-04-30 Plexxikon Inc Związki i sposoby modulacji kinaz i wskazania ku temu
TWI558702B (zh) 2011-02-21 2016-11-21 普雷辛肯公司 醫藥活性物質的固態形式
BR112013028895A2 (pt) 2011-05-10 2016-08-09 Bayer Ip Gmbh (tio)carbonilamidinas bicíclicas
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
IN2014CN04065A (ja) 2011-11-23 2015-09-04 Portola Pharm Inc
US9034832B2 (en) 2011-12-29 2015-05-19 Abbvie Inc. Solid compositions
WO2013162027A1 (ja) 2012-04-27 2013-10-31 学校法人 慶應義塾 神経分化促進剤
US9150570B2 (en) 2012-05-31 2015-10-06 Plexxikon Inc. Synthesis of heterocyclic compounds
US9676756B2 (en) 2012-10-08 2017-06-13 Portola Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrimidinyl kinase inhibitors
JP2016510751A (ja) 2013-03-06 2016-04-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗がん剤耐性を治療及び予防する方法
US11484534B2 (en) 2013-03-14 2022-11-01 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
GB201320732D0 (en) 2013-11-25 2014-01-08 Cancer Rec Tech Ltd Methods of chemical synthesis
GB201320729D0 (en) 2013-11-25 2014-01-08 Cancer Rec Tech Ltd Therapeutic compounds and their use
WO2015103490A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 Abbvie, Inc. Solid antiviral dosage forms
CN107073121A (zh) 2014-06-13 2017-08-18 基因泰克公司 治疗及预防癌症药物抗性的方法
CA2988707C (en) 2015-06-16 2023-10-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Combination of cbp/catenin inhibitor and immune checkpoint inhibitor for treating cancer
JP6126319B1 (ja) 2015-06-23 2017-05-10 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 （６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−４，７−ジオキソ−８−（｛６−［３−（ピペラジン−１−イル）アゼチジン−１−イル］ピリジン−２−イル｝メチル）−２−（プロプ−２−エン−１−イル）−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド化合物の結晶
US10544140B2 (en) * 2015-11-12 2020-01-28 Lg Chem, Ltd. Pharmaceutical composition containing, as active ingredient, 7-azaindolin-2-one derivative or pharmaceutically acceptable salt thereof
CN106008528A (zh) * 2016-07-28 2016-10-12 安徽赛迪生物科技有限公司 一种合成4-氯-5,7-二氢-6h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-酮的方法

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4959368A (en) 1986-02-24 1990-09-25 Mitsui Petrochemical Industries Ltd. Therapeutic agent for neurological diseases
WO1991009598A1 (en) 1990-01-05 1991-07-11 Pfizer Inc. Azaoxindole derivatives
US5811432A (en) 1990-11-09 1998-09-22 Pfizer Inc Azaoxindole derivatives
US5916891A (en) 1992-01-13 1999-06-29 Smithkline Beecham Corporation Pyrimidinyl imidazoles
PL175347B1 (pl) * 1992-04-03 1998-12-31 Upjohn Co Trójpierścieniowe heterocykliczne aminy aktywne farmaceutycznie
MX9304769A (es) 1992-08-05 1994-05-31 Max Planck Gesellschaft Subfamilia ptp-d de fosfatasas de la proteina tirosina.
GB9423997D0 (en) 1994-11-28 1995-01-11 Erba Carlo Spa Substituted 3-arylidene-7-azaoxindole compounds and process for their preparation
AR004010A1 (es) 1995-10-11 1998-09-30 Glaxo Group Ltd Compuestos heterociclicos
HRP970371A2 (en) * 1996-07-13 1998-08-31 Kathryn Jane Smith Heterocyclic compounds
BR9710362A (pt) 1996-07-13 1999-08-17 Glaxo Group Ltd Composto formula-ao farmaceutica utiliza-ao de um composto processos de tratamento de um ser humano ou animal sofrendo de uma mediada por atividade anormal de cinase de proteina tirosina e para a prepara-ao de um composto
WO1998023613A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 Pfizer Inc. Fused bicyclic pyrimidine derivatives
GB9721437D0 (en) * 1997-10-10 1997-12-10 Glaxo Group Ltd Heteroaromatic compounds and their use in medicine
JPH11209350A (ja) 1998-01-26 1999-08-03 Eisai Co Ltd 含窒素複素環誘導体およびその医薬
ES2243461T3 (es) * 2000-02-28 2005-12-01 Sugen, Inc. Compuestos de 3-(pirolillactona) -2-indolinona como inhibidores quinasa.

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007504159A (ja) * 2003-08-28 2007-03-01 アイアールエム・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー プロテインキナーゼ阻害剤としての化合物および組成物
JP2008517984A (ja) * 2004-10-25 2008-05-29 アステックス、セラピューティックス、リミテッド プロテインキナーゼ阻害剤としてのオルト縮合ピリジンおよびピリミジン誘導体（例えばプリン類）
WO2006049339A1 (ja) * 2004-11-08 2006-05-11 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. 新規縮環イミダゾール誘導体
JPWO2006049339A1 (ja) * 2004-11-08 2008-05-29 萬有製薬株式会社 新規縮環イミダゾール誘導体
JP2009532475A (ja) * 2006-04-05 2009-09-10 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ヤヌスキナーゼの阻害剤として有用なデアザプリン
JP2014024869A (ja) * 2006-04-05 2014-02-06 Vertex Pharmaceuticals Inc ヤヌスキナーゼの阻害剤として有用なデアザプリン
JP2016513656A (ja) * 2013-03-13 2016-05-16 ボストン バイオメディカル， インコーポレイテッド がんの処置のための、がん幹細胞経路キナーゼの阻害剤としての３−（アリールまたはヘテロアリール）メチレンインドリン−２−オン誘導体

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