JP2002509694A5 - - Google Patents
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Description
【特許請求の範囲】
【請求項１】 核酸の検出方法であって、
一方が、該核酸の一方の鎖の結合配列（Ａ）に結合することができ、かつもう一方が、Ａの３’方向に位置し、Ａと重複しない配列Ｃと本質的に相補的である結合配列Ｃ’に結合することができる、２つのプライマーの助けにより該核酸の一部の多数の増幅物を作製する工程、
配列Ａと配列Ｃとの間に位置する配列Ｂまたはその相補体に結合することができる結合配列Ｄを有するプローブと増幅物を接触させる工程、
増幅物とプローブのハイブリッドの形成を検出する工程、
を含み、
結合配列Ａと結合配列Ｃとの間に位置する配列が、プローブの結合配列Ｄおよびそれに結合する増幅物の配列から形成される配列領域Ｅに属さないヌクレオチドを含まないか、または含んでも３ヌクレオチド未満であり、かつ増幅物が１００ヌクレオチドより短いものである、核酸の検出方法。
【請求項２】 プローブの結合配列Ｄがプライマーの１つの又は両方の結合配列と重複するものである請求項１記載の方法。
【請求項３】 プライマーの少なくとも１つが、検出対象の核酸またはその相補体と直接ハイブリダイズしない伸長不可能な部分にヌクレオチドを有するものである、請求項１または２記載の方法。＿
【請求項４】 プライマーの少なくとも１つが固定可能に標識されるものであり、かつプローブが検出可能に標識されるものである、請求項１〜３いずれかに記載の方法。
【請求項５】 プライマーの少なくとも１つが検出可能に標識されるものであり、かつプローブが固定可能に標識されるかまたは固定化されるものである、請求項１〜４いずれかに記載の方法。＿
【請求項６】 増幅物が物理的方法および／または分光学的方法により検出される、請求項１〜５いずれかに記載の方法。＿
【請求項７】 増幅物を質量分析により検出する請求項１〜６いずれかに記載の方法。
【請求項８】 核酸の特異的検出方法であって、
少なくとも２つのプライマーの助けにより該核酸の一部の多数の増幅物を作製する工程、
増幅物に結合することができるプローブと増幅物を接触させる工程、ならびに
増幅物とプローブとのハイブリッドの形成を検出する工程、
を含み、プライマーの少なくとも１つが検出対象の生物に属する生物群に特異的でなく、かつ増幅物が１００ヌクレオチドより短いものである、核酸の特異的検出方法。＿
【請求項９】 核酸の一部の増幅物の同時作製方法であって、異なる配列を有するこれらの一部の増幅を可能にするプライマーを使用し、該プライマーが、形成される増幅物が長さで２０％を超えて異なることなく、かつ１００ヌクレオチドを超えない長さであるように選択される、核酸の一部の増幅物の同時作製方法。＿
【請求項１０】 その配列が、以下に示すＨＧＢＶ配列：
５’−ＧＴＡＣＴＧＣＣＴＧ ＡＴＡＧＧＧＴＣＣＴ ＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡ ＴＣＴＧＧＧＡＧＴＣ ＴＣＧＴＡＧＡＣＣＧ ＴＡＧＣＡＣＡＴＧ−３’
の連続塩基の配列、それに相補的な配列またはこれらの配列に８０％以上の同一性を有する配列に由来する、２つのプライマーおよび１つのプローブを使用する、ＨＣＶの検出方法。＿
【請求項１１】 複数の核酸の検出方法であって、
一方が、それぞれの場合に、該核酸の１方の鎖の結合配列（Ａ）に結合することができ、かつもう一方が、Ａの３’方向に位置し、Ａと重複しない配列Ｃと本質的に相補的である結合配列Ｃ’に結合することができる、２つのプライマーの対の助けによりこれらの核酸の一部の多数の増幅物を同時に作製する工程、ここで、前記プライマーは、形成される増幅物が長さで２０％を超えて異なることなく、かつ１００ヌクレオチドを超えない長さであるように選択されるものである、
配列Ａおよび配列Ｃの間に位置する配列Ｂまたはその相補体に結合することができる結合配列Ｄを有するプローブと個々の増幅物を各時点で接触させる工程、ならびに
増幅物とプローブのハイブリッドの形成を検出する工程、
を含み、
結合配列Ａと結合配列Ｃとの間に位置する配列が、プローブの結合配列Ｄおよびそれに結合する増幅物の配列から形成される配列領域Ｅに属さないヌクレオチドを含まないか、または含んでも３ヌクレオチド未満であり、かつ増幅物が１００ヌクレオチドより短いものである、複数の核酸の検出方法。＿
【請求項１】 核酸の検出方法であって、
一方が、該核酸の一方の鎖の結合配列（Ａ）に結合することができ、かつもう一方が、Ａの３’方向に位置し、Ａと重複しない配列Ｃと本質的に相補的である結合配列Ｃ’に結合することができる、２つのプライマーの助けにより該核酸の一部の多数の増幅物を作製する工程、
配列Ａと配列Ｃとの間に位置する配列Ｂまたはその相補体に結合することができる結合配列Ｄを有するプローブと増幅物を接触させる工程、
増幅物とプローブのハイブリッドの形成を検出する工程、
を含み、
結合配列Ａと結合配列Ｃとの間に位置する配列が、プローブの結合配列Ｄおよびそれに結合する増幅物の配列から形成される配列領域Ｅに属さないヌクレオチドを含まないか、または含んでも３ヌクレオチド未満であり、かつ増幅物が１００ヌクレオチドより短いものである、核酸の検出方法。
【請求項２】 プローブの結合配列Ｄがプライマーの１つの又は両方の結合配列と重複するものである請求項１記載の方法。
【請求項３】 プライマーの少なくとも１つが、検出対象の核酸またはその相補体と直接ハイブリダイズしない伸長不可能な部分にヌクレオチドを有するものである、請求項１または２記載の方法。＿
【請求項４】 プライマーの少なくとも１つが固定可能に標識されるものであり、かつプローブが検出可能に標識されるものである、請求項１〜３いずれかに記載の方法。
【請求項５】 プライマーの少なくとも１つが検出可能に標識されるものであり、かつプローブが固定可能に標識されるかまたは固定化されるものである、請求項１〜４いずれかに記載の方法。＿
【請求項６】 増幅物が物理的方法および／または分光学的方法により検出される、請求項１〜５いずれかに記載の方法。＿
【請求項７】 増幅物を質量分析により検出する請求項１〜６いずれかに記載の方法。
【請求項８】 核酸の特異的検出方法であって、
少なくとも２つのプライマーの助けにより該核酸の一部の多数の増幅物を作製する工程、
増幅物に結合することができるプローブと増幅物を接触させる工程、ならびに
増幅物とプローブとのハイブリッドの形成を検出する工程、
を含み、プライマーの少なくとも１つが検出対象の生物に属する生物群に特異的でなく、かつ増幅物が１００ヌクレオチドより短いものである、核酸の特異的検出方法。＿
【請求項９】 核酸の一部の増幅物の同時作製方法であって、異なる配列を有するこれらの一部の増幅を可能にするプライマーを使用し、該プライマーが、形成される増幅物が長さで２０％を超えて異なることなく、かつ１００ヌクレオチドを超えない長さであるように選択される、核酸の一部の増幅物の同時作製方法。＿
【請求項１０】 その配列が、以下に示すＨＧＢＶ配列：
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【請求項１１】 複数の核酸の検出方法であって、
一方が、それぞれの場合に、該核酸の１方の鎖の結合配列（Ａ）に結合することができ、かつもう一方が、Ａの３’方向に位置し、Ａと重複しない配列Ｃと本質的に相補的である結合配列Ｃ’に結合することができる、２つのプライマーの対の助けによりこれらの核酸の一部の多数の増幅物を同時に作製する工程、ここで、前記プライマーは、形成される増幅物が長さで２０％を超えて異なることなく、かつ１００ヌクレオチドを超えない長さであるように選択されるものである、
配列Ａおよび配列Ｃの間に位置する配列Ｂまたはその相補体に結合することができる結合配列Ｄを有するプローブと個々の増幅物を各時点で接触させる工程、ならびに
増幅物とプローブのハイブリッドの形成を検出する工程、
を含み、
結合配列Ａと結合配列Ｃとの間に位置する配列が、プローブの結合配列Ｄおよびそれに結合する増幅物の配列から形成される配列領域Ｅに属さないヌクレオチドを含まないか、または含んでも３ヌクレオチド未満であり、かつ増幅物が１００ヌクレオチドより短いものである、複数の核酸の検出方法。＿
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