JP2002508673A - グラフト・プロテーゼとその材料及び方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 患者の一部を移植し、転植し、置換し、或いは治療するためのグラフト・プロテーゼ（１１）、材料及び方法。前記グラフト・プロテーゼは粘膜下組織供給源体から取出された純粋なコラーゲンを基体とする基質構成体を包含する。前記粘膜下組織供給源体は汚染菌を不活性化及び除去し、それにより前記純粋の構成体を生体に適合可能にする消毒手順及び採取手順によって浄化され、患者の体の内外に移植するのに適切である。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称 グラフト・プロテーゼとその材料及び方法関連出願 本発明は、それぞれ１９９６年８月２３日及び１９９６年９月６日に出願 された米国特許出願第60/024,542号及び第60/024,693号に基づく優先権を請求す る出願であり、それら各米国出願の全体がここに組み入れられる。技術分野 本発明は一般的に医療用構造体に関し、特にグラフト・プロテーゼとその 材料及び方法に関する。従来技術 純粋な形態を持ちかつコラーゲンを基体とする材料から取出された移植組 織がこれまでにも生成されており、刊行物にも開示されている。高引張り強度の 粘着フィルムがコラーゲン分子或いはコラーゲンを基体とする材料を使用して生 成されている。しかしアルデヒドが一般的にコラーゲン分子を架橋し、高引張り 強度を有する膜を生成するために使用されている。これらの種類の材料を有する ことにより、アルデヒドはその膜から、例えば加水分解して、採取することが可 能である。そのような残留分は細胞毒性が有るから、これらの膜は貧弱な移植組 織である。 他にも、コラーゲン分子が架橋されたアルデヒドに関連する問題を回避し コラーゲンを基体とする移植組織を生成する技術が開発されている。そのような 1つの技術が米国特許第5,141,747号に例示されており、この特許では、コラーゲ ン分子が架橋、即ちそれらのリシン・エプシロン・アミノ基で結合され、続いて 、結合され且つ好ましくは改変されたコラーゲン分子が変性される。そのような コラーゲン材料の開示された用途は鼓膜治療用である。そのような膜は良好な物 理特性を示し、且つ、次の処理によって滅菌消毒されることが開示されているが 、それらは細胞増殖を改造したり生成することはことは出来ない。即ち、一般に 、再生長を促進し且つ損傷又は罹患した組織構成体を治すことは不可能である。 一般に外科技術の研究者は多年に渡って損傷又は罹患した組織構成体例え ば血管や筋、靭帯、腱等を置換或いは治療するための移植組織及びグラフトとし て使用するための新規な技術及び材料を開発する仕事に携わっている。今日では 、例えば整形外科医において断裂した十字形靭帯に対する置換体として使用する ために、自原的又は同種異系の起始部の膝蓋腱を採取することは珍しいことでは ない。そのような技術に関する外科的手法は公知である。更に、外科医にとって 、生理的構成体を再構成或いは置換するためにプラスチック材料、メタル材料及 びセラミック材料或いはそれらの何れかから形成された移植可能なプロテーゼを 使用することは常識になっている。それらの使用が広範になっているにも拘わら ず、まだ外科移植されたプロテーゼはthe患者に多くの付随して起こるリスクを 与えている。 研究者例えばヘルニヤ損傷及び関節脱臼損傷に関与する研究者はまた、そ のような機能組織構成体及び他の結合組織の双方或いは一方として満足に働く高 分子即ちプラスチック材料を開発することを企てている。長期間の結合組織置換 に適切である丈夫で永続性のあるプラスチック材料を供することは困難であるこ とが見出されている。プラスチック材料を包囲する組織は病菌で冒される可能性 が有り、そのような感染症を治療する難しさが移植組織即ちプロテーゼの機能不 全につながることが多い。 上述の如く、種々のコラーゲンを基体とする材料もまた上記組織置換体に 使用されて来ているが、しかしこれらの材料は何れも必要な引張り強度を示さず 、或いはまた感染症及び他の免疫反応や被包に問題が有り、或いはそれらに抗生 物質や増殖因子等が装荷されている可能性が有るときに他の問題が有った。例え ば、米国特許第4,956,178号は哺乳類動物の腸管から得られる粘膜下組織コラー ゲン基質を開示しているが、しかしコラーゲン基質に抗生物質が装荷されること が開示されている。関連特許の米国特許第5,372,821号には、粘膜下組織コラー ゲン基質が従来技術、例えばアルデヒドなめし処理や、プロピレン・オキシド、 ガンマ放射線及び過酢酸によって滅菌消毒することが可能であることが開示され ている。滅菌処置に先立って先ず粘膜下組織層が周囲の組織から剥離されること を除き、具体的な処理手順は何も開示されていない。 従って、改良された純粋の形態のコラーゲンを基体とする基質をその組織 供給源体から採取する必要が有る。また組織供給源体からのそのような基質の容 易な採取を高める処理を行い、そのような改良された純粋な生成物を生じる必要 が有る。本発明はそのようなニーズに向けられている。発明の概要 本発明の1つの好ましい実施例によれば、粘膜下組織供給源体から取出さ れた純粋なコラーゲンを基体とする基質構成体で純粋の構成体を生体に適合可能 に為す汚染菌濃度を有するものを包含するグラフト・プロテーゼが供される。 本発明の他の好ましい実施例によれば、粘膜下組織供給源体から取出され た純粋なコラーゲンを基体とする基質構成体で純粋の構成体がグラム当たり１２ 内毒素単位未満の内毒素濃度を有するものを包含するグラフト・プロテーゼが供 される。 本発明の他の好ましい実施例によれば、粘膜下組織供給源体から取出され た純粋なコラーゲンを基体とする基質構成体で純粋の構成体がミリグラム当たり ２マイクログラム未満の核酸含有率を有するものを包含するグラフト・プロテー ゼが供される。 本発明の他の好ましい実施例によれば、粘膜下組織供給源体から取出され た純粋なコラーゲンを基体とする基質構成体で純粋の構成体がグラム当たり５０ ０溶菌斑形成単位未満のウイルス濃度を有するものを包含するグラフト・プロテ ーゼが供される。 本発明はまた、粘膜下組織供給源体から取出された純粋なコラーゲンを基 体とする基質構成体で純粋の構成体がキログラム当たり１００，０００ＰＰＭ未 満の処理剤濃度を有するものを包含するグラフト・プロテーゼを供する。 本発明の更に他の実施例は粘膜下組織供給源体からコラーゲンを基体とす る基質を採取するための方法に関する。本方法は、粘膜下組織供給源体を消毒剤 で処理し、消毒された粘膜下組織供給源体を供する手順及び消毒された粘膜下組 織供給源体からコラーゲンを基体とする基質を取出す手順を包含する。 本発明の他の好ましい実施例によれば、粘膜下組織供給源体からコラーゲ ンを基体とする基質を採取するための方法は、消毒剤で処理された粘膜下組織供 給源体を供する手順及び粘膜下組織供給源体からコラーゲンを基体とする基質を 取出す手順を包含する。 本発明はまた、最初にその構成体及び他の組織を含有する組織供給源体か ら取出されたコラーゲンを含有する構成体でそれがグラム当たり１２内毒素単位 以下の内毒素濃度を有するものを包含する構成体に関する。 本発明によれば、また哺乳類動物の組織供給源体から採取された、哺乳類 動物粘膜下組織を包含し、且つ哺乳類動物の組織供給源体を消毒する手順及びそ の結果消毒された哺乳類動物の組織供給源体から続いてその構成体を取出す手順 を包含する処理によって採取可能な純粋のコラーゲン含有基質が供される。 好適な態様では、本発明は動物の消化管或いは呼吸管、尿管、生殖腺から 取出された純粋の形態の粘膜下組織コラーゲン基質で、それらが実質的に零か或 いは基本的に発熱物質を含まないバイオバードン・レベルを有するものを供する 。好適なコラーゲン基質は人又は動物の患者の体内に細胞毒性反応や感染、移植 組織の拒絶反応、或いは多数の患者に他の何らかの有害な作用を引き起こすこと 無く、移植することが可能である。本発明の幾つかの態様による好適な移植可能 なコラーゲン基体は主として粘膜下組織を含有するが、この例のコラーゲン基質 はまたそれが取出された元の供給源体に依存する一部の層の薄層筋粘膜、筋粘膜 、層組織密集層及び／或いは他のそのような材料を含有することが出来る。 更に本発明によれば、動物或いは人の消化管や呼吸管、尿管或いは生殖腺 から取出される浄化され剥離された粘膜下組織コラーゲン基質が供され、この純 粋の粘膜下組織コラーゲン基質は剥離された粘膜下組織コラーゲン基質を採取す るために消毒された粘膜下組織供給源体を剥離することによって生成される。例 えば、動物の消化管或いは呼吸管、尿管、生殖腺から採取された、処理されてお らず、剥離もされていない粘膜下組織供給源体を処理する手順及びそれに続いて 粘膜下組織コラーゲン基質をその付着組織から剥離する手順を具備する処理によ って有益な基質を得ることが出来る。好適なコラーゲン基質は、実質的に零のバ イオバードン・レベルを有し、且つ人又は動物の患者の体内に細胞毒性反応や感 染、移植組織の拒絶反応、或いは多数の患者に他の何らかの有害な作用を引き起 こすこと無く移植することが可能である。 更に本発明によれば、消毒された粘膜下組織供給源体を剥離し、剥離され た粘膜下組織コラーゲン基質を得る手順を具備し、実質的に無菌状態の極めて純 粋な剥離された粘膜下組織コラーゲン基質を得る方法が供される。好適な方法は 動物或いは人の消化管や呼吸管、尿管或いは生殖腺から採取された、剥離されて いない粘膜下組織供給源体を消毒剤で処理する手順と、それに続き粘膜下組織を その粘膜下組織に付着したその粘膜下組織の他の供給源体組織から剥離する手順 とを具備する。 更に本発明によれば、動物の消化管や呼吸管、尿管或いは生殖腺から取出 された、実質的に零のバイオバードンを有し、実質的に表面屑を含有せず、例え ば筋組織や、粘膜層、脂質或いは細胞屑を実質的に包含しない、極めて純粋な粘 膜下組織コラーゲン基質が供される。好適なコラーゲン基質は、人又は動物の患 者の体内に細胞毒性反応や感染、移植組織の拒絶反応、或いは多数の患者に他の 何らかの有害な作用を引き起こすこと無く移植することが可能である。 更に本発明によれば、動物の消化管や呼吸管、尿管或いは生殖腺から取出 され、粘膜下組織が増殖因子を含有する実質的に無菌状態で剥離され、剥離され た粘膜下組織供給源体を溶剤、例えば水でリンスし、続いて消毒剤、好ましくは 約１．５〜約１０のｐＨの過酸で処置し、更に続いて粘膜下組織を付着組織から 剥離することによって、極めて純粋な粘膜下組織が供される。その過酸は７以上 のｐＨで緩衝される。そのようにして生成されたコラーゲン基質は実質的に高含 有量の１以上の増殖因子を有することが望ましい。 更に本発明によれば、基本的に発熱物質を含まない粘膜下組織コラーゲン 基質を包含するグラフト組織構成体が供される。更にそのような構成体は、グラ ム当たり約１内毒素単位(EU/g)以下の発熱物質含有率を有する粘膜下組織コラー ゲン基質を包含することが好ましい。 更に本発明によれば、上述のような極めて純粋な粘膜下組織は、人又は動 物の患者の体内への移植に際して活発な生体内血管形成を実証する。 本発明は純粋の、移植可能な組織構成体、そのような純粋の、移植可能な 組織構成体を生成するための処理、及び損傷又は罹患した組織構成体の再生長及 び治療を促進するそれらの用途に関する。特に、本発明は移植可能組織として使 用するのに適する純粋の形態の粘膜下組織コラーゲン基質、及びそのような純粋 の形態のこのコラーゲンを基体とする移植可能組織を生成する方法に関する。 本発明のこれらの態様及び他の態様は、当業技術者には以下に述べる記載 を検討することによって明らかになろう。図面の簡単な説明 図１は本発明による管状グラフト・プロテーゼ組織の斜視図である。詳細な説明 本発明の原理の理解を容易にするために、本発明の若干の好適な実施例に 言及し、且つ、特定の専門語が本発明を説明するために使用される。それにも拘 わらず、本発明の範囲を限定する意図で無く、更にここに述べられている本発明 が考察される原理の変更、改良及び応用が、本発明が関わる当業技術者に普通に 発想されるものであることが理解されるであろう。 本明細書の説明では、多数の専門用語が使用される。本明細書及び請求の 範囲の明確且つ首尾一貫した理解を供するために、次の定義が与えられる。 バイオバードン：生きている微生物の数を言い、これはコロニー形成単位 （ＣＦＵ）で記録され、所定の量の材料ので確認される。例証とする微生物には 細菌、真菌及びそれらの胚種が包含される。 消毒：或る材料のバイオバードンの低減を言う。 無菌：或る材料の所定の断片にＩＣＦＵの生きている微生物を有する可能 性が１００万分の１以下であるようなバイオバードンを有する状態を言う。 発熱物質：ホスト細胞中に導入された後、発熱反応を引き起こす物質を言 う。 内毒素：グラム陰性細菌の細胞壁の一部である特定の発熱物質を言う。内 毒素は細菌及び汚染した材料から煩雑に発散される。 浄化（純粋化）：或る材料を処理し、その材料に伴って発生する１以上の 汚染菌、例えばそれと共にその材料が事実上発生させる汚染菌及び材料上に発生 する微生物の一方又は双方の成分を除去することを言う。例えば、汚染菌は、毒 性や感染性、発熱性、刺激可能性、反応性、溶血活力、発癌性及び免疫性の何れ かを引き起こすことが知られているそれらのものであることができる。 生体適合性：或る材料が”International Standards Organization（ISO ）Standard No．10993”や”U.S．Pharmacopeia（USP）23、the U.S．Food and Drug Administration（FDA）blue book memorandum No．G95-1，entitled”Use of International Standard ISO-10993，Biological Evaluation of Medical De vices Part-1:Evaluation and Testing”の何れか又は双方に記載されている生 体適合性検査に合格するための能力を言う。代表的には、これらの検査は或る材 料の毒性や感染性、発熱性、刺激可能性、反応性、溶血活力、発癌性及び免疫性 又は何れかに関する効力検定を行う。生体に適合可能な構成体又は材料は大多数 の患者に採用されたときには逆の反応を起こさない。更に、生体適合性はプリオ ンや界面活性剤、オリゴヌクレオチドのような汚染菌及びその他の生体適合性発 効剤又は汚染菌によって影響され得ることが考察される。 汚染物質：或る材料に或いはその内部に付着した望ましくない物質を言う 。これには、バイオバードンや内毒素、殺菌剤のような処理剤、血液、血液成分 、ウイルス、ＤＮＡ、ＲＮＡ、胚種、不要な組織層の断片、細胞屑及び粘膜が含 まれるが、これらに限定されるものではない。 粘膜下組織：動物の消化管、呼吸管、尿管及び生殖腺の殆どの部分で粘膜 の下部に生じるコラーゲンを含有する結合組織層を言う。 上記で明らかな如く、本発明は一般的には純粋の、コラーゲンを基体とす る基質構成体を包含するグラフト・プロテーゼ及びその材料、並びにそれらを採 取する方法及びそれらを使用する方法を供する。本発明の有益なグラフト・プロ テーゼは、例えば人或いは他の呻乳類動物の組織、例えば豚や牛又は羊の組織を 包含する粘膜下組織供給源体から得られる。 動物の組織での場合のように、粘膜下組織は一般的には、人又は動物が感 染症又は病気を持たないことを前提として、その自然状態において無菌である。 これは、粘膜下組織が動物の消化管、呼吸管、尿管及び生殖腺内の内部組織層で あるから特にそうである。従って、一般的には粘膜下組織は細菌及び腸管の上皮 のような他の細胞屑に曝されない。本発明の１つの特徴は、剥離の前に供給源体 組織を粘膜下組織に対して消毒することにより、粘膜下組織層の無菌状態を、特 にもし剥離処理が無菌状態の下で行われる場合には、維持若しくは実質的に維持 することが出来ることを見出したことである。 特に、粘膜下組織供給源体の消毒に続いて、例えば被膜筋及び被膜粘膜か ら粘膜下組織を剥離し、粘膜下組織を包含する純粋の基質を採取することによっ て、粘膜下組織が細菌やその他の汚染菌に曝されるのを極小化することが見出さ れた。その結果、そのことによって、必要に応じ、単離した粘膜下組織基質が消 毒剤又は滅菌剤に曝されるのを極小化し、粘膜下組織の生来の生化学特性及び粘 膜下組織の多くの有益な効果を実質的に維持することが可能になる。 本発明による粘膜下組織移植可能コラーゲン基質は、上述したように、動 物の消化管や呼吸管、尿管或いは生殖腺から採取することが出来る。好ましくは 、コラーゲンを基体とする、従って大部分がコラーゲンである粘膜下組織が哺乳 類動物の消化管から取出され、とりわけ好ましくは、豚の腸管から取出される。 最も好ましい無傷の小腸の供給源体はおおよそ４５０ポンド以上重い成熟した成 体の豚から採取される。健康な、病気に罹っていない動物から採取された腸は、 その腸の内腔内に含有されている大腸菌のような様々な微生物だけでなく、腸管 内に血管及び血液供給源を含有する。従って、粘膜下組織を剥離する前に無傷の 腸を消毒することにより、これらの汚染菌が実質的に除去され、現在存在する何 らかの他の微生物有機物や発熱物質或いはその他の病原菌と同様に血液及び血液 成分からも実質的に拘束されない好適な移植可能粘膜下組織が供される。実質的 には、本発明が何らかの理論によって限定されることを意図するものではないこ とは言うまでもないが、この処置は粘膜下組織の生来の無菌状態を実質的に維持 すると思われる。 また、本発明によるコラーゲン基質は該基質の生来の生化学特性及びその 移植の有効性に悪影響を与える可能性が有る何らかの抗生物質や抗ウイルス性薬 剤或いは抗菌型薬剤に実質的に拘束されないことが望ましい。従来、そのような 組織材料を処理する１つの方法に、例えば米国特許第4,956,178号に開示されて いるような、剥離された組織を生理食塩水中でリンスし、それを殺菌剤に浸す方 法が有る。そのような技術は本発明の分離された粘膜下組織で選択的に実施する ことが可能であるが、本発明による好ましい処理ではコラーゲン基質の生化学特 性に悪影響を与えるだけでなく、必ずしも患者の組織中に導入することが出来な い殺菌剤等を使用することは回避している。 上述の如く、極めて純粋な形態の移植可能な粘膜下組織コラーゲン基質を 、例えば粘膜下組織供給源体を剥離することにより、粘膜下組織層を包含する純 粋のコラーゲン基質を取出す前に、先ず粘膜下組織供給源体を消毒することによ って得ることが出来る。また、この処理によって、その結果得られた粘膜下組織 層は、この粘膜下組織層からそこに付着した組織を取出すのが極めて容易である こと及び独特の低汚染菌特性を包含する幾つかの処理上の利点及び改善された諸 特性が得られる。 本発明の処理は、好ましくは、先ず粘膜下組織供給源体を溶剤、適切には 水で１回以上リンスする手順を包含する。このリンスする手順に続き、消毒剤で 処置される。この消毒剤は望ましくは酸化剤である。好適な消毒剤はペルオキシ 化合物であり、中でも好ましくは有機ペルオキシ化合物であり、更に好ましくは 過酸である。そのような消毒剤は望ましくは液体媒体中で、好ましくは約１．５ 〜約１０のｐＨを持つ溶液中で、最も好ましくは約２〜約６のｐＨを持つ溶液中 で使用される。本発明の方法では、消毒剤は一般的に特質の回復ここに記述され ているような、好ましくは基本的に零のバイオバードンか或いは基本的に発熱物 質に拘束されない状態を示す純粋の粘膜下組織基質を供する条件下で或る期間使 用される。このことについては、本発明の望ましい処理には、少なくとも５分間 、代表的には約５分〜約４０時間の範囲の期間、更に代表的には約０．５時間〜 約５時間の範囲の期間、組織供給源体を消毒剤を含有する液体媒体中に例えば投 入或いはシャワーすることによって液浸する手順が包含される。 好適なペルオキシ消毒剤は過酸化水素である。過酸化水素の濃度は容積比 で約０．０５％〜３０％の範囲である。より好ましい過酸化水素の濃度は容積比 で約１％〜１０％であり、最も好ましい濃度は容積比で約２％〜５％である。そ の溶液は約５〜９のｐＨに緩衝することが出来るが、より好ましいｐＨは、約６ 〜７．５である。これらの濃度は水又は容積比が約２％〜３０％のアルコールの 水溶液で希釈することが出来る。最も好ましいアルコールはエタノールである。 その溶液温度は約１５℃〜５０℃で変化する。より好ましい溶液温度は約２０〜 ４０℃である。最も好ましい溶液温度は約３２〜３７℃である。その曝し時間は 約１０分〜４００分である。好ましい曝し時間は約１２０分〜２４０分である。 最も好ましい曝し時間は約１８０分〜２１０分である。 好適な有機過酸化物消毒剤は過プロピオン酸である。過プロピオン酸の濃 度は容積比で約０．１％〜１０％で変動する。より好ましい過プロピオン酸の濃 度は容積比で約０．１％〜１．０％であり、最も好ましい濃度は容積比で約０． ２％〜０．５％である。過プロピオン酸のこれらの濃度は水又は容積比が約２％ 〜３０％のアルコールの水溶液で希釈することが出来る。最も好ましいアルコー ルはエタノールである。粘膜下組織供給源体を有機過酸化物溶液に約１５分〜約 ４０時間の範囲の期間、更に代表的には約０．５時間〜約８時間の範囲の期間、 曝すことができる。他にも"Peroxygen Compounds"，S．Block，in Disinfection ，Sterilivation and Preservation，S．Block Editor，4th Edition，Philadel phia，Lea & Febiger，pp．167-181，1991及び"Disinfection with peroxygens" ，M.G.C．Baldry and J.A.L．Fraser，in Industrial Biocides，K．Payne，Edi tor，New York，John Wiley and Sons，pp．91-116，1988に記載されているよう なペルオキシ消毒剤が使用に好適である。 もう１つの酸化消毒剤は、ジグルコン酸形態を持つクロルヘキシン（１ ，６-ジ（４-クロロフェノール・ジグアニド）ヘキサン）である。クロルヘキシ ン・ジグルコナートの濃度は重量比で約０．１％〜１５％で変動する。より好ま しいクロルヘキシン・ジグルコナートの濃度は重量比で約０．１％〜２％であり 、最も好ましい濃度は重量比で約０．２％〜５％である。その溶液は約５〜８の ｐＨに緩衝することが出来るが、そうでなくともよい。より好ましいｐＨは、約 ５．５〜７である。これらの濃度は水又は重量比が約２％〜２０％のアルコール の水溶液で希釈することが出来る。最も好ましいアルコールは約２％〜３０％の 濃度のエタノールである。その溶液温度は約１５〜５０℃の範囲である。その曝 し時間は約１０分〜４００分で変動する。より好ましい曝し時間は約３０分〜６ ０分である。他にも"Chlorhexldine"，G．W．Denton，in Disinfection，Steril ization and Preservation，S．Block，Editor，4th Edition，Philadelphia Le a & Febiger，pp．274-289，1991”に記載されているようなクロリン剤がある。 好適な予備処理では、過酸その他の消毒剤を、好ましくはアルコールが１ 個〜約６個の炭素原子を持ち、且つ該アルコールが概ね容積比で溶液の約１％〜 約３０％を占めることが出来る希釈水溶性アルコール溶液中に溶解することが出 来る。本発明で使用するためのより好ましいアルコールはエタノール、プロパノ ール及びブタノールから成るグループから選択される。エタノールはこれらの目 的にもっとも好適なアルコールである。 過酸が消毒で使用されるとき、該過酸は過酢酸、過プロビオン酸及び過安 息香酸から成るグループから選択されることが好ましい。過酢酸は最も好適な消 毒剤である。過酢酸は容積比で約２％〜約１０％のアルコール溶液で希釈するこ とが好ましい。過酢酸の濃度は例えば容積比で約１．０％〜約０．５％で変動す る。過酢酸の最も好ましい濃度は容積比で約０．１％〜約０．３％である。過酸 化水素もまた消毒剤として使用可能である。それに代わり、或いは、更に加えて 、例えば小腸からの粘膜下組織供給源体が、コラーゲン基質中に実質的な架橋を 採用すること無く消毒するために使用すること出来る過酸のような他の消毒剤の 作用とは異なり、そのような架橋を採用する能力が有ることが知られているグル タルアルデヒドやホルマリン等のような消毒剤を使用して消毒することが出来る 。更に、粘膜下組織供給源体は、消毒の目的で放射線、例えばガンマ放射線で処 理することが出来る。 消毒処理には次のような変形例を包含する。 １．腸は、溶液対腸の比が重量比で１０：１の、０．２％過酢酸、５％エ タノールの溶液で処理される。溶液は２．６のｐＨを有する。溶液と腸とは２時 間強く掻き雑ぜられる。 ２．腸は、溶液対腸の比が重量比で５：１の、１％過酢酸、２５％エタノ ールの溶液で処理される。溶液は２のｐＨを有する。溶液と腸とは１時間強く掻 き雑ぜられる。 ３．腸は、溶液対腸の比が重量比で５：１の、１％過酢酸、１５％エタノ ール及び１０％過酸化水素の溶液で処理される。溶液と腸とは１時間強く掻き雑 ぜられる。 ４．無傷の小腸が高純度純水で１５分づつ４回リンスされる。該腸が続い て１．５MRADのＭＲＤ電子ビーム放射線に掛けられる。 ５．無傷の小腸が高純度純水で１５分づつ４回リンスされる。コンベヤ・ ベルトに沿って、腸にこの腸を消毒する高輝度パルス光を照射される。 上述の処置に続いて、粘膜下組織層がその供給源体、例えば無傷の腸や牛 の子宮等から剥離される。この消毒後剥離手順を続けることにより、粘膜下組織 層を付着組織から、例えば少なくとも付着器官膜筋組織から分離することが、消 毒の前に粘膜下組織層を剥離する場合に比べて容易になる。更に、その結果得ら れた、最も好適な形態での粘膜下組織層は優れた微細組織構造を示し、最初に粘 膜下組織層をその供給源体から剥離し、続いてその組織層を消毒する場合に比べ て、その表面に付着した組織及び屑が少ないことが見出された。更に、より均一 な粘膜下組織をこの処理から得ることが出来、且つ、各分離処理作業作業から同 等又は類似の物理特性及び生化学的特性を有する粘膜下組織をより堅実に得るこ とが出来る。更に重要なことには、この処理により極めて純粋な実質的に無菌の 粘膜下組織が得られる。 粘膜下組織供給源体の剥離は、実質的に無菌の即ち菌が最低量に処理され た粘膜下組織を生成するために、好ましくは消毒された又は無菌のケーシング・ マシンを使用することによって実行される。適切なケーシング・マシンは、”AB Stridhs Maskiner，Gotoborg，Sweden”から市販されている”Model 3-U-400 S tridhs Universal Machine for Hog Casing”である。従って、その測定された バイオバードン・レベルは最低レベル又は実質的に零である。勿論、粘膜下組織 供給源体を剥離するための、例えば、手での剥離を包含する他の手段を、本発明 から逸脱すること無く使用することが可能である。 また、本発明によるより好ましい処理は、粘膜下組織コラーゲン基質に含 有される汚染菌を除去又は顕著に低減するだけでなく、物理特性及び機械的特性 、例えば食違い多孔性（即ち、粘膜下組織層の一方の側が他の側より大きな多孔 性を持つ特性）の実質的な劣化を示さない組織を生成することが見出された。ま た、より好ましい処理は、結局この移植組織の有効度に悪影響を与える粘膜下組 織コラーゲン基質の食違い多孔性に悪影響を与えないことが見出された。例えば 、組織を必ずしもコラーゲン基質の多孔性即ち生来の構造を断裂する架橋剤又は 材料で処理する必要は無い。更に、過酸化水素が使用されるときは、基質は、全 体としてより高い酸素含有量だけでなくより大きな多孔性を有する。 これは、汚染菌、例えば内毒素や発熱物質等の不存在を確実にすることに 役立つ。 また、本発明の、例えば粘膜下組織を包含するコラーゲンを基体とする基 質は、有益な形態において、活発な血管形成、即ち組織の基質の中での血管の内 部成長を誘発する能力を実証する。このことに関しては、本発明のこれらの好適 な基質はそれら基質がそれと共に当然に生じる、例えばグリコサミノグリカンや 糖蛋白質、増殖因子例えば”Transforming Growth Factor-a(＾)”や"Transform ing Growth Factor-a(＾)"、”Fibroblast Growth Factor 2(basic)”の１つ又 はそれ以上含む、有益な成分を含有する。 本発明の好適なコラーゲンを基体とする基質、好ましくは基質を含有する 粘膜下組織はまた、下記のテーブル１に記載の低汚染菌濃度、即ち、各汚染菌濃 度が個別にに或いは他の開示された汚染菌濃度の幾つか又は全てとの何らかの組 合わせで取得される低汚染菌濃度を特徴とする。テーブル１中の各略語は次のと おりである。即ち、CFG/gはグラム当たりのコロニー形成単位を表し、PFU/gはグ ラム当たりの溶菌斑形成単位を表し、μg/mgはミリグラム当たりのマイクログラ ムを表し、ppm/kgはキログラム当たりのＰＰＭ（parts per million）量を表す 。 本発明の更に多くの好適なコラーゲンを基体とする基質でさえも、１EU/g 未満の内毒素濃度を含有し、且つ最も好ましくは０．５EU/g未満の内毒素濃度を 含有する。 本発明による純粋のコラーゲンを基体とする基質は幾つかの方法で処理す ることが出来、体外及び体内の双方に有用なコラーゲン基質を供する。例えば、 粘膜下組織は脈管用途、例えば米国特許第2,127,903号及び4,902,508号に一般的 に記載されているような用途に有用な組織グラフトを供するように構成すること が出来る。図１を参照して、脈管移植で使用する為の、受容体の血管の径に近い 径Ｄを持つ、概ね管状のグラフト・プロテーゼ構成体１１がコラーゲンを基体と する基質１２か或いはそれを含んで形成される。１つの方法では、これは粘膜下 組織の管状のセグメント又はシートを操作して受容体の血管の径とほぼ同等の径 Ｄを持つ円筒を形成し、長軸方向継ぎ目１３を縫合するか、接着或いはその他の 固定を行って内腔１４を有する適切な寸法の管状の脈管グラフトを形成すること によって達成することが出来る。例証の下準備手順で、グラフトが、移植される べき導管の径とほぼ等しい外径を有する無菌のロッド又はマンドレルを覆って形 成される。例えば、ロッドが生来の管状形を保持する粘膜下組織のセグメントの 内腔内へ導入される。続いて過剰な組織が集結され、所望の内腔径が、グラフト の長手方向に沿い、例えば２本の連続的な縫合線又は１本の断続縫合線を使用し て縫合するか、或いは組織固定技術として知られている他の技術によって達成さ れる。或いは、本発明の粘膜下組織のシートをロッドの回りに巻き付けて重なり 合った継ぎ合わせを形成し、縫合するか接着剤接合或いは別の方法で固定して管 状のグラフト構成体を供することが出来る。好適な形態ではグラフトの内腔内面 を粘膜下組織の粘膜側によって形成することが出来る。 本発明の粘膜下組織は、低有孔指数、高コンプライアンス及び高破裂強度 を包含する脈管用途の組織グラフト材料に極めて好適な機械的特性を有する。こ の好適な組織グラフト材料は、手術時出血を防止するのに十分に低く、しかもな お新規開発された脈管の血管がグラフト材料を貫いて広がり、新生内膜及び内腔 面に栄養分を与えるのを可能にするのに十分に高い有孔度のものであることが当 業技術者には認められるであろう。 本発明の粘膜下組織はまた、例えば米国特許第5,275,826号に記載されて いるような技術を使用して処理し、流動化された構成体を供することが出来る。 この点に関しては、粘膜下組織の溶液或いは懸濁液は、粘膜下組織をプロテアー ゼ（例えば、トリプシン又はペプシン）で、組織を可溶化し、実質的に均質な溶 液を形成するのに十分な時間、粉砕又は柔らかく分解或いはそれらの双方を行う ことにより、準備することが出来る。粘膜下組織出発材料は、望ましくは引き裂 きやカッティング、磨り潰し或いは剪断等によって粉砕される。何個かの粘膜下 組織が分散している懸濁液を高速混合機での処理に掛け、必要に応じて遠心分離 機に掛け、余分の上澄み廃液を流し出すことによっても良好な結果が得られるも のの、粘膜下組織を凍結状態又は凍結乾燥状態で磨り潰すことが有益である。粉 砕された粘膜下組織を乾燥、例えば凍結乾燥して、粉末を形成することが出来る 。その後、必要に応じて、その粉末を水和し、即ち、水と混合するか生理食塩水 及び任意の他の薬理的に許容される添加剤を緩衝し、例えば、２５ＥＣで約３０ ０，０００cpsに対し約２の粘度を有する流動性グラフト組織構成体を形成する ことが出来る。高い粘度のグラフト構成体はゲル状又はペースト状の粘稠度を有 することが出来る。 本発明の流動化された粘膜下組織は、最も代表的には損傷又は罹患した 組織欠陥を補正するために治療或いは増殖を必要とする組織例えば骨組織又は軟 組織に対する注入可能な異種間グラフトとしての用途が有る。本発明の流動化さ れた粘膜下組織構成体はまた、例えば美容外科処置又は外傷治療外科処置で使用 するための、シール（縫合）された小袋に形成された１シート以上の粘膜下組織 を含有する移植組織構成体に対する充填剤として使用するのが有益である。 １つの例証の下準備では、上記のようにして準備された粘膜下組織に例え ばカッティングによって小ピースに縮小され、平底ステンレス・スチール容器に 詰められる。その容器に液体窒素を導入して試料を凍結させ、続いて試料が凍結 状態にある間に粉砕され、粗い粘膜下組織粉末を形成する。そのような処理は、 例えば凍結試料の上部に置かれた円筒型黄銅インゴットを持つ手動アーバ・プレ スで実行することができる。そのインゴットは試料とプレスのアーバとの間のイ ンタフェースとして働く。液体窒素は周期的に粘膜下組織試料に加えられ、それ らを凍結状態に保持することが出来る。 粘膜下組織試料を粉砕するために他の方法を使用し、本発明により使用す ることができる粘膜下組織粉末を生成することが出来る。例えば、粘膜下組織試 料を凍結乾燥し、続いて手動アーバ・プレス又は他の磨り潰し手段を使用して磨 り潰すことが出来る。或いは、粘膜下組織を高剪断力混合機で処理し、脱水及び 乾燥され次第粘膜下組織粉末を生成することが出来る。 プレチルド乳鉢及び乳棒を使用して粘膜下組織粉末を更に磨り潰すことに より、一様なより細かく割られた生成物を作ることが出来る。更に液体窒素が最 終磨り潰し中に固体凍結粒子を維持するために必要なときに使用される。その粉 末は、例えば緩衝処理された生理食塩水を用いて容易に水和され、所望の粘度の 本発明の流動化された組織グラフト材料を生成することが出来る。 別の好適な流動化された材料を準備するために、粘膜下組織粉末をワイヤ ・メッシュを通して篩分けし、寄せ集め、蛋白質分解して実質的に均質な溶液を 形成することが出来る。例えば、その粉末を、室温で４８時間に渡って、１mg/m lのペプシン（Sigma Chemical Co.，St．Louis Mo製）及び０．１Mの酢酸で分解 し、ＨＣＩでｐＨ２．５に調整することが出来る。この処理の後、反応媒体を水 酸化ナトリウムで中和し、その消化活動を不活性化することが出来る。その可溶 化された粘膜下組織を続いてその溶液を塩沈殿によって濃縮し、更に浄化及び凍 結乾燥の何れか又は双方を行って分離し、プロテアーゼで可溶化された腸粘膜下 組織を粉末状態にすることが出来る。 本発明の流動化された粘膜下組織組成は、組織の置換や増殖及び治療の何 れか又は全てに広範な用途が有る。これら流動化された粘膜下組織構成体は、実 在する傷の範囲内で生来の結合組織又は骨の再生長を誘発するために使用するこ とができる。有効量の流動化された粘膜下組織構成体を、治療が必要な組織欠陥 又は傷の局部に注入することにより、容易に粘膜下組織のバイオトロピック特性 の利点を享受することが出来る。 また、例えば米国特許第2,127,903号や”International Publication No ．WO 96/32146，dated 17 October 1996，publishing International Applicati on No．PCT/US96/04271，filed 5 April 1996”に記載されているような技術を 使用して、２個以上の本発明の粘膜下組織セグメントを組合わせることにより、 広い表面領域を持つ構成体を形成することが可能である。従って、多数の粘膜下 組織条片を例えばそれら条片の重なり合った部分を脱水状態下で圧縮することに よって、互いに融合し、目的の構成体を形成するために用いられる個々の条片の 何 れか1つの平坦面の表面面積より広い表面面積を持つ全体が平坦な構成体を形成 することが出来る。 本発明の粘膜下組織はまた、他の自然物から得られたグラフト材料又は合 成グラフト材料に応用されている技術を使用して、整形外科用軟組織用途、例え ば腱治療又は靭帯治療に有用なグラフト組織構成体を準備するために使用するこ とが出来る。例えば概ね米国特許第2,127,903号及び5,281,422号に記載されてい るような治療技術を本発明の粘膜下組織を使用して着手することが出来る。 腱置換体用途及び靭帯置換体用途では、粘膜下組織のセグメントを長軸方 向に引張ることによって下準備することが出来る。例えば、粘膜下組織セグメン トを、そのセグメントの長軸に負荷をその組織セグメントの約１０％〜２０％の 伸びを可能にするのに十分な長期間に渡って印加すること、例えばそのセグメン トから重りを懸架することによって調整することが出来る。そのグラフト材料は また、横方向に引張ることによっても下準備することが出来る。続いて、その粘 膜下組織セグメントを、それ単独でまたは他のセグメントと組合わせて、様々な 形状に形成し、靭帯又は腱の置換体として役立てるか、或いは捻挫又は切断され た腱又は靭帯の代わりに代用するか添え当て補強することが出来る。 そのような結合組織グラフト用途では、セグメントを、少なくとも対向端 部及び対向側部の一方又は双方が多層のグラフト材料を持つように形成されてい る状態の単層又は多層構成を持ち、骨、腱、靭帯、軟骨及び筋のような生理的構 成体への固着の補強を供するように構成することが望ましい。靭帯置換体用途で は、両端が、代表的には例えば膝関節の場合のように関節でつながっている第１ 及び第2の骨にそれぞれ固着される。鍵置換体用途では、グラフト構成体の第１ 端が骨に固着され、第２端が筋に固着される。 上記のように、結合組織用途では、例えば骨格に固着されるべきグラフト 構成体の端部を、グラフトが固着部位で断裂するのを低減するように、形成し、 操作し又は形作ることが有益である。これらの目的で、粘膜下組織グラフト材料 を折りたたむか又は部分的に裏返して、例えばスパイク付きワッシャ又はステー プルで締めるための多数の組織層を供することが出来る。成いは、粘膜下組織セ グメントをそれ自体の上に折返し両端部を接合して例えば第１の骨に固着される べ き第1の結合部を供し、且つ中間部の屈曲部が前記第1の骨に関して関節でつなが れている第２の骨に固着されるべき第２の結合部を供するようにすることが出来 る。 例えば、粘膜下組織グラフトの端部の1方が例えば大腿骨内の髄道を通っ て引張されてその大腿骨に固着されるように適合され、端部の他方が頚骨内の髄 道を通って引張されてその頚骨に固着されるように適合されて生来の十字形靭帯 の置換体を供し、緊張状態でそれら髄道間に配置されるように適合されているセ グメントが靭帯機能、即ち通常の靭帯によって供される筋張及び姿勢機能を供す るようにすることが出来る。 整形外科用途で使用されるグラフトは代表的には外科設備内に緊張状態で 配置されるので、２個以上のセグメントを組合わせて多層重ねグラフト構成体を 含有することが好ましい。従って、本発明の別の目的は、２個以上の粘膜下組織 セグメントがそれらの端部がともに接合され、それら接合された端部及び側部の 一方或いは双方が骨や腱、靭帯或いは他の生理的構成体に固着されるように適合 されている、そのようなグラフトを供することにある。二重セグメントを供する ための1つの方法は、1つの管状セグメントを他のセグメントの部内で引張するよ うにされ、それらの接合された端部を例えば骨、腱又は靭帯に固着することが出 来る。これら二重セグメントは筋肉の張力による捻挫に対する増強された引張り 強度及び粘膜下組織復元性（retela submucosatance）を供する。他の形態では 、多数の粘膜下組織セグメント又は条片を、靭帯や腱の治療で有効に働く、網状 交錯配列例えば菱状又はサッシュコード状の網状交錯配列或いは隣接するループ と相互に結合された多数のループを包含する網目構成に配列することが出来る。 本発明の粘膜下組織はまた、骨折した骨の両片を結合し且つ体内で適切な 方向に保持するための結合組織として使用するための整形外科用グラフトを供す るために使用され、その組織セグメントは骨折した骨のセグメントを取巻く骨折 包みとして働き且つその骨に固着されるように形成される。 更にまた、整形外科用途では、本発明の粘膜下組織を、例えば米国特許第 5,641,518号に記載されている一般的技術を用いて骨組織を治療するために使用 することが出来る。このようにして粉末状態の粘膜下組織を損傷又は罹患した骨 部 を治療するため、その中へ移植することが出来る。その粘膜下組織粉末は単独又 は1つ以上の生理学的に適合するミネラルや増殖因子、抗生物質、化学療法剤、 抗原、抗体、酵素及びホルモンのような付加的な生体活性物質とともに使用する ことが出来る。好ましくは粉末状態移植材は所定の３次元形状に圧縮され、骨部 に移植され、内生的な組織を持つグラフトの置換中は実質的にその形状を保持す る。 本発明の粘膜下組織はまた、例証的には、対象細胞、例えば内皮細胞や線 維母生成細胞、胎児皮膚細胞、骨肉腫細胞及び腺癌細胞のような真核細胞の増殖 を支持する栄養素と組合わせて、シート状、ペースト状或いはゲル状の細胞増殖 基体として使用することが出来る。好適な形態では、粘膜下組織基体組成は、人 の細胞を包含する哺乳類動物の細胞の無性芽増殖及び分裂の一方又は双方を支持 する。 本発明の粘膜下組織はまた、形質変化された細胞を生成するための構成体 内のコラーゲン基質として働くことが出来る（例えば、”International Public ation No．WO 96/25179 dated 22 August 1996，publishing International App lication No.PCT/US96/02136 filed 16 February 1996”及び”International P ublication No．WO 95/22611 dated 24 August 1995，publishing Internationa l Application No．PCT/US96/02251 filed 21 February 1995”を参照されたい ）。細胞形質転換のためのそのような構成体は、一般的に本発明の浄化粘膜下組 織を、例えば、体外又は体内の目的細胞が遺伝子工学的に転換されるようになる 核酸塩基配列を含有する遺伝子組み換えベクター（例えばプラスミド）と組合わ せて流動状態又はペースト状で包含する。形質変換を目的とする細胞は、例えば 骨始原細胞を包含することが出来る。 本発明の粘膜下組織はまた、”Ann．Plast．Surg.，1995，35:3740380;an d J．Surg．Res.，1996，60:107=114”に記載されている技術と類似の技術を用 いて、例えばヘルニヤのような腹壁の傷の治療を包含する、腹腔の治療に使用す ることが出来る。そのような用途では、本発明の好適な粘膜下組織グラフトは改 造された組織の順調な器質化、脈管新生及び整合性を促進する。皮膚科用途では 、本発明の粘膜下組織は、この技術分野及び文献（例えば、”Annals of Plasti c Surgery 1995，35:381388”を参照されたい）で知られている一般的移植技術を 用いて、一部又は全厚みの傷の治療及び皮膚増殖で使用することが出来る。更に 、火傷治療の領域では、培養表皮グラフト（好ましくは培養表皮自家移植片即ち ＣＥＡ）が転植される皮膚置換体を供することが一般的に知られている。そのよ うな培養グラフトは代表的には皮膚置換体に表皮角質生成細胞及び線維母生成細 胞の一方又は双方の転植を包含していた。本発明によれば、浄化粘膜下組織を、 例えばシート状の皮膚置換体及びＣＥＡとして従って粘膜下組織に転植された状 態で使用することが出来る。 本発明のこの態様を実施する1つの方法では、例えば表皮角質生成細胞シ ートを粘膜下組織の粘膜側に接種又は転植することによって、表皮角質生成細胞 を転植することが出来る。また、線維母生成細胞を粘膜下組織の粘膜側及びその 反対側（腹腔側）の一方又は双方に転植することも出来る。 本発明の粘膜下組織はまた、泌尿生殖科用途でのグラフト組織で使用する ことも出来る。例えば、一般的に米国特許第5,645,860号、”Urology，1995，46 :396-400”及び”J．urology，1996，155:2098”に記載されている技術に相応す る技術を用いて、粘膜下組織を膀胱治療で使用し、膀胱再生のための足場を供す ることが出来る。流動化された形態では、本発明の粘膜下組織はまた内視鏡導入 手順でベシキュレテラル（vesicureteral）の逆流を補正するために使用するこ とが出来る。そのような用途では、粘膜下組織注入を、例えば患者の輸尿管オリ フィスの下方領域で行い、注入場所に順調な筋増殖及びコラーゲン形成を誘発す ることが出来る。 他の領域では、本発明の粘膜下組織を用いて形成されたグラフト組織構成 体を、神経科用途、例えば損傷処置や腫瘍切除処置又は減圧処置による傷を治療 するために硬膜置換体を必要とする技術で使用することが出来る。 本発明とその特徴及び利点に対する理解を更に容易にするために、以下の 特別な実施例が供される。これらの特別な実施例は本発明の例証であつて限定す るものではない。実施例１ 成熟した成体の豚の３０フィートの無傷の腸を水でリンスする。続いてこ の材料を、０．２％容積比過酢酸の５％容積比エタノール水溶液中で２時間攪拌 処理する。続いて粘膜下組織層を消毒されたケーシング・マシンで無傷の腸から 剥離する。剥離された粘膜下組織を滅菌水で４回リンスし、内毒素、微生物有機 物及び発熱物質のような不純物や汚染菌を調べる。その結果得られた組織は基本 的に零レベルのバイオバードンを持つことが見出された。無傷の腸から容易且つ 堅実に分離された粘膜下組織層はその表面に最低量の組織屑を持つことが見出さ れた。実施例２ 豚の無傷の腸の１０フィートの断片を水で洗浄する。リンスした後、粘膜 下組織腸管コラーゲン供給源体材料のこの断片を、０．２％容積比過酢酸の５％ 容積比エタノール水溶液中で２．５時間攪拌処理する。過酢酸で処理された後、 粘膜下組織層を無傷の腸から剥離する。続いて、その結果得られた粘膜下組織を 滅菌水で4回リンスする。そのバイオバードンは基本的に零レベルであることが 見出された。実施例３ その粘膜下組織腸管コラーゲン材料の小片をラットにに皮下移植した。７ ２時間で、顕著な血管形成が観測された。実施例４ 小腸の２個の断片を別々の方法で処理する。第1の断片を水道水でリンス し、０．２％容積比の過酢酸を有し、ｐＨがほぼ２．６の５％容積比エタノール 水溶液中で５時間消毒し、粘膜下組織を剥離し、純粋の水でリンスし、２個の標 本に分け、急速冷凍する。第２の断片を水道水でリンスし、粘膜下組織を剥離し 、米国特許第4,902,508号に記載されているように１０％硫酸ネオマイシン溶液 中に２０分間置き、純粋の水でリンスし、２個の標本に分け、急速冷凍する。４ 個の上記処理された標本のバイオバードン・レベルと内毒素濃度とを調べる。第 １の２個の標本は各々０．１CFU/g未満のバイオバードン・レベル及び０．１EU/ g未満の内毒素濃度を有する。第２の２個の標本はそれぞれ１．７CFU/gと２．７ CFU/gのバイオバードン・レベル及び２３．９EU/gと１５．７EU/gの内毒素濃度 を有する。実施例５ 小腸の３個の断片を別々の方法で処理する。第1の断片を水道水でリンス し、０．２％容積比の過酢酸を有し、ｐＨが約２．６の５％容積比エタノール水 溶液中で２時間消毒し、粘膜下組織を剥離し、純粋の水でリンスし、急速冷凍す る。第２の断片を水道水でリンスし、粘膜下組織を剥離し、純粋の水でリンスし 、米国特許第5,460,962号の実施例１（ｐＨ７．２に緩衝された過酢酸の０．１ ％容積比水溶液中で４０時間処理）による方法により消毒し、急速冷凍する。第 ３の断片を水道水でリンスし、粘膜下組織を剥離し、純粋の水でリンスし、米国 特許第5,460,962号の実施例２（ｐＨ７．２に緩衝された０．１％容積比過酢酸 の高濃度食塩溶液中で処理）による方法により消毒し、急速冷凍する。３個の標 本の全ての内毒素を調べた。内毒素濃度は、第１標本が０．１４EU/g未満、第２ 標本が２４EU/g超、第３標本が２８EU/g超であった。実施例６ 豚の小腸の２つの断片を７×１０６溶菌斑形成単位（ＰＦＵ）のウイルス に感染させた。両方とも、溶液対材料比が９：１の重量比の０．１８％容積比過 酢酸、４．８％エタノール水溶液に曝した。この溶液に第１の標本を５分間液浸 し、第２の標本を２時間液浸した。５分間処理された材料は、その材料の１グラ ム当たり４００PFUを示した。２時間処理された材料は、その材料の１グラム当 たり０PFUを示した。実施例７ ここで述べたように準備された浄化粘膜下組織を調べ、その核酸含有量を 判定した。各々５mgの重量の４個の標本を、”DNA/RNA Isolation Kit by Amers ham Lifescience Inc.，Arlington Heights，Illinois”に詳述されているよう な、ＤＮＡ／ＲＮＡ抽出を行った。核酸計量を、２６０nm及び２８０nmでの溶液 光学濃度の分光光度定量によって実行した。平均核酸含有量は材料の１ミリグラ ム当たり１．９±０．２μｇであった。 米国特許第4,902,508号に記載されているようにして準備された小腸粘膜 下組織を調べ、その核酸含有量を判定した。各々５mgの重量の４個の標本を、” DNA/RNA Isolation Kit by Amersham”に詳述されているような、ＤＮＡ／ＲＮ Ａ 抽出を行った。核酸計量を、２６０nm及び２８０nmでの溶液光学濃度の分光光度 定量によって実行した。平均核酸含有量は材料の１ミリグラム当たり２．４±０ ．２μｇであった。実施例８ 本明細書で述べた方法によって準備された粘膜下組織の断片を、"standar d ISO 10993"に記載された生体適合性検査のため、第三者的な検査試験所（NamS A，Inc.，Northwood，Ohio）に送った。それらの標本は、"USP Acute Systemic Toxicity"、"USP Intracutaneous Toxicity"、"Cytotoxicity"、"LAL Endotoxin 、aterial-mediated Pyrogenicity"、”Direct Contact Hemolysis”及び”Prim ary Skin Irritation”の各検査を受けた。それらの標本は全ての検査に合格し 、その材料が生体に適合可能であることを示した。 上記処理手順の変形は本発明の範囲内のものであることを意味しているこ とが十分認められるであろう。例えば、粘膜下組織の供給源体組織、例えば胃や 無傷の腸、牛の子宮等を部分的に剥離し、消毒剤又は滅菌消毒剤で処理した後、 粘膜下組織を完全に剥離する。実例として、無傷の腸の付着腸間膜層及び漿膜層 の一方又は双方を、消毒剤で処置する前に取出し、続いて粘膜下組織から残留し ている付着組織を剥離するのが有益である。これらの手順に続いて、別途の消毒 手順、例えば酵素による浄化及び核酸除去を行うことが出来るが、そうでなくと もよい。或いは、被膜筋及び被膜粘膜から剥離された粘膜下組織供給源体を、最 低限、消毒剤又は他のそのような薬剤で処理し、続いて完全に消毒処置を行い所 望の汚染菌濃度を達成ことが出来る。そのような変形及び改変は全てここに記述 されている処理の一部であり、本発明の範囲内のものであると考えられる。 また、ここに引用された刊行物は関連分野の業務に携わる人達に所有されてい る技術を示し、そのような刊行物は個々に参照に供され完全に記述している如く に、個々の刊行物の全体がここでの説明のための参照に供される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ， ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，Ｆ Ｉ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ， ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 クック インコーポレーティッド. アメリカ合衆国，47402 インディアナ ブルーミントン サウス カレー パイク 925 (72)発明者 クック ウイリアム エー. アメリカ合衆国，47401 インディアナ ブルーミントン ワイリー ストリート 1208 (72)発明者 ハイルス マイケル シー. アメリカ合衆国，47905 インディアナ イースト ラファイエット 900 サウス 4326 (72)発明者 コズマ トーマス ジー. アメリカ合衆国，47906 インディアナ ウエスト ラファイエット コートハウス ドライブ 3118 アパートメント ２シ ー (72)発明者 パテル ウメシュ エッチ. アメリカ合衆国，47906 インディアナ ウエスト ラファイエット キングスウッ ド ロード サウス1135

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．粘膜下組織から取出された純粋なコラーゲンを基体とする基質構成体を具備 し、該純粋の構成体がそれ自体を生体に適合可能に為す汚染菌濃度を有するグラ フト・プロテーゼ。 ２．前記純粋の構成体はグラム当たり１２内毒素単位未満の内毒素濃度を有する ことを特徴とする請求の範囲１に記載のグラフト・プロテーゼ。 ３．前記内毒素濃度がグラム当たり１０内毒素単位未満であることを特徴とする 請求の範囲２に記載のグラフト・プロテーゼ。 ４．前記内毒素濃度がグラム当たり５内毒素単位未満であることを特徴とする請 求の範囲３に記載のグラフト・プロテーゼ。 ５．前記内毒素濃度がグラム当たり１内毒素単位未満であることを特徴とする請 求の範囲３に記載のグラフト・プロテーゼ。 ６．前記純粋の構成体がグラム当たり２コロニー形成単位未満のバイオバードン ・レベルを有することを特徴とする請求の範囲１に記載のグラフト・プロテーゼ 。 ７．前記バイオバードン・レベルがグラム当たり１コロニー形成単位未満である ことを特徴とする請求の範囲６に記載のグラフト・プロテーゼ。 ８．前記バイオバードン・レベルがグラム当たり０．５コロニー形成単位未満で あることを特徴とする請求の範囲７に記載のグラフト・プロテーゼ。 ９．前記純粋の構成体がミリグラム当たり１０マイクログラム未満の核酸含有量 を有することを特徴とする請求の範囲１に記載のグラフト・プロテーゼ。 １０．前記核酸含有量がミリグラム当たり２マイクログラム未満であることを特 徴とする請求の範囲９に記載のグラフト・プロテーゼ。 １１．前記純粋の構成体がグラム当たり５００溶菌斑形成単位未満のウイルス濃 度を有することを特徴とする請求の範囲１に記載のグラフト・プロテーゼ。 １２．前記ウイルス濃度がグラム当たり１００溶菌斑形成単位未満であることを 特徴とする請求の範囲１１に記載のグラフト・プロテーゼ。 １３．前記ウイルス濃度がグラム当たり１溶菌斑形成単位未満であることを特徴 とする請求の範囲１２に記載のグラフト・プロテーゼ。 １４．前記純粋の構成体がキログラム当たり１００，０００ＰＰＭ未満の処理剤 濃度を有することを特徴とする請求の範囲１に記載のグラフト・プロテーゼ。 １５．前記処理剤濃度がキログラム当たり１，０００ＰＰＭ未満であることを特 徴とする請求の範囲１４に記載のグラフト・プロテーゼ。 １６．前記処理剤濃度がキログラム当たり１００ＰＰＭ未満であることを特徴と する請求の範囲１５に記載のグラフト・プロテーゼ。 １７．前記純粋の構成体がグラム当たり２コロニー形成単位未満の菌類濃度を有 することを特徴とする請求の範囲１に記載のグラフト・プロテーゼ。 １８．前記菌類濃度がグラム当たり１コロニー形成単位未満であることを特徴と する請求の範囲１７に記載のグラフト・プロテーゼ。 １９．前記菌類濃度がグラム当たり０．５コロニー形成単位未満であることを特 徴とする請求の範囲１８に記載のグラフト・プロテーゼ。 ２０．前記純粋の構成体が、剥離された粘膜下組織供給源体を含有することを特 徴とする請求の範囲１に記載のグラフト・プロテーゼ。 ２１．前記純粋の構成体が消毒され、且つ剥離された粘膜下組織供給源体を含有 することを特徴とする請求の範囲１に記載のグラフト・プロテーゼ。 ２２．前記純粋の構成体が消毒され、続いて剥離された粘膜下組織供給源体を含 有することを特徴とする請求の範囲１に記載のグラフト・プロテーゼ。 ２３．粘膜下組織供給源体から取出された純粋なコラーゲンを基体とする基質構 成体を具備し、該純粋の構成体がグラム当たり１２内毒素単位未満の内毒素濃度 を有することを特徴とするグラフト・プロテーゼ。 ２４．粘膜下組織供給源体から取出された純粋なコラーゲンを基体とする基質構 成体を具備し、該純粋の構成体がミリグラム当たり２マイクログラム未満の核酸 含有率を有することを特徴とするグラフト・プロテーゼ。 ２５．粘膜下組織供給源体から取出された純粋なコラーゲンを基体とする基質構 成体を具備し、該純粋の構成体がグラム当たり５００溶菌斑形成単位未満のウイ ルス濃度を有することを特徴とするグラフト・プロテーゼ。 ２６．粘膜下組織供給源体から取出された純粋なコラーゲンを基体とする基質構 成体を具備し、該純粋の構成体がキログラム当たり１００，０００ＰＰＭ未満の 処理剤濃度を有することを特徴とするグラフト・プロテーゼ。 ２７．粘膜下組織供給源体からコラーゲンを基体とする基質を得る方法であって 、前記粘膜下組織供給源体を消毒剤で処理して消毒された粘膜下組織供給源体を 供する手順と、 前記消毒された粘膜下組織供給源体から前記コラーゲンを基体とする基質 を取出す手順と、を含有する方法。 ２８．前記粘膜下組織供給源体が哺乳類動物の消化管に由来することを特徴とす る請求の範囲２７に記載の方法。 ２９．前記哺乳類動物が豚であることを特徴とする請求の範囲２８に記載の方法 。 ３０．前記粘膜下組織供給源体が豚の小腸に由来することを特徴とする請求の範 囲２９に記載の方法。 ３１．前記消毒剤が酸化剤であることを特徴とする請求の範囲２７に記載の方法 。 ３２．前記消毒剤がペルオキシ化合物であることを特徴とする請求の範囲２７に 記載の方法。 ３３．前記消毒剤が有機ペルオキシ化合物であることを特徴とする請求の範囲３ ２に記載の方法。 ３４．前記消毒剤が過酸であることを特徴とする請求の範囲３３に記載の方法。 ３５．前記過酸が、過酢酸、過プロピオン酸及び過安息香酸から成るグループか ら選択されることを特徴とする請求の範囲３４に記載の方法。 ３６．前記過酸が過酢酸であることを特徴とする請求の範囲３５に記載の方法。 ３７．前記処理が、前記粘膜下組織供給源体を、アルコールと前記過酸とを含有 する媒体で処理する手順を包含することを特徴とする請求の範囲３４に記載の方 法。 ３８．前記アルコールが１〜６個の炭素原子を持つことを特徴とする請求の範囲 ３７に記載の方法。 ３９．前記アルコールが、エタノーるプロパノール及びブタノールから成るグル ープから選択されることを特徴とする請求の範囲３８に記載の方法。 ４０．前記アルコールがエタノールであることを特徴とする請求の範囲３９に記 載の方法。 ４１．前記媒体が約０．１％〜約０．３％容積比の過酢酸を含有するエタノール 水溶液であることを特徴とする請求の範囲４０に記載の方法。 ４２．前記処理が、前記粘膜下組織供給源体を、前記過酸を含有し、約２〜約６ のｐＨを持つ媒体で処理する手順を包含することを特徴とする請求の範囲３４に 記載の方法。 ４３．前記媒体が約２〜約６のｐＨを持つことを特徴とする請求の範囲４２に記 載の方法。 ４４．前記過酸が過酢酸であり、且つ前記媒体が約０．１％〜約０．３％容積比 の過酢酸を含有することを特徴とする請求の範囲４３に記載の方法。 ４５．粘膜下組織供給源体からコラーゲンを基体とする基質を得る方法であって 、消毒剤で処理されている粘膜下組織供給源体を供する手順と、 前記粘膜下組織供給源体から前記コラーゲンを基体とする基質を取出す手 順と、を含有する方法。 ４６．前記粘膜下組織供給源体が小腸に由来することを特徴とする請求の範囲４ ５に記載の方法。 ４７．前記消毒処理が、前記粘膜下組織供給源体を酸化剤で処理する手順を包含 することを特徴とする請求の範囲４６に記載の方法。 ４８．前記処理が、前記粘膜下組織供給源体を、前記酸化剤を含有する水溶液媒 体に接触させる手順を包含することを特徴とする請求の範囲４７に記載の方法。 ４９．前記処理が、前記粘膜下組織供給源体を、ペルオキシ化合物を含有する水 溶液媒体に接触させる手順を包含することを特徴とする請求の範囲４７に記載の 方法。 ５０．前記ペルオキシ化合物が過酸であることを特徴とする請求の範囲４９に記 載の方法。 ５１．前記過酸が過酢酸であることを特徴とする請求の範囲５０に記載の方法。 ５２．前記媒体がアルコールを含有することを特徴とする請求の範囲５１に記載 の方法。 ５３．前記アルコールがエタノールであることを特徴とする請求の範囲５３に記 載の方法。 ５４．前記小腸が豚に由来することを特徴とする請求の範囲５１に記載の方法。 ５５．初めにコラーゲンを含有する構成体及び他の組織を含有する組織供給源体 から取出されたコラーゲンを含有する構成体を具備し、前記コラーゲンを含有す る構成体がグラム当たり１２内毒素単位以下の内毒素濃度を持つことを特徴とす る構成体。 ５６．前記コラーゲン含有層が粘膜であり、前記組織供給源体が小腸であること を特徴とする請求の範囲５５に記載の構成体。 ５７．前記組織供給源体が豚の小腸であることを特徴とする請求の範囲５６に記 載の構成体。 ５８．前記内毒素濃度がグラム当たり１０内毒素単位未満であることを特徴とす る請求の範囲５５に記載の構成体。 ５９．前記内毒素濃度がグラム当たり５内毒素単位未満であることを特徴とする 請求の範囲５８に記載の構成体。 ６０．前記内毒素濃度がグラム当たり１内毒素単位未満であることを特徴とする 請求の範囲５０に記載の構成体。 ６１．前記内毒素濃度がグラム当たり０．５内毒素単位未満であることを特徴と する請求の範囲６０に記載の構成体。 ６２．哺乳類動物の組織供給源体から得られる純粋のコラーゲン含有基質であっ て、該基質が哺乳類動物粘膜下組織及び前記哺乳類動物の組織供給源体からの残 留汚染菌を具備し、前記基質が、前記哺乳類動物の組織を消毒する手順とそれに 続き前記消毒された哺乳類動物の組織から前記基質を取出す手順とを具備する処 理によって得られることを特徴とする純粋のコラーゲン含有基質。 ６３．前記消毒処理が、前記哺乳類動物の組織供給源体を過酸を含有する水溶液 に接触させる手順を包含することを特徴とする請求の範囲６２に記載の構成体。 ６４．前記過酸が過酢酸であることを特徴とする請求の範囲６３に記載の構成体 。