JP2002360293A - 微生物によるクロロヒドリンの光学分割法 - Google Patents
微生物によるクロロヒドリンの光学分割法Info
- Publication number
- JP2002360293A JP2002360293A JP2001175480A JP2001175480A JP2002360293A JP 2002360293 A JP2002360293 A JP 2002360293A JP 2001175480 A JP2001175480 A JP 2001175480A JP 2001175480 A JP2001175480 A JP 2001175480A JP 2002360293 A JP2002360293 A JP 2002360293A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- microorganism
- chloro
- optically active
- butyrolactone
- hydroxy
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン
酸アルキルエステルと光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブ
チロラクトンの効率的製法の提供。 【解決手段】 ラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブ
タン酸アルキルエステル混合物に、その化合物に対して
立体選択的脱クロル化活性を有する微生物を作用させ、
一方の光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸ア
ルキルエステルを残存させると共に、他方の光学活性３
−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンを生成せしめる方法
において、水溶性弱塩基性化合物の存在下その微生物を
作用させることを特徴するクロロヒドリンの光学分割法
酸アルキルエステルと光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブ
チロラクトンの効率的製法の提供。 【解決手段】 ラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブ
タン酸アルキルエステル混合物に、その化合物に対して
立体選択的脱クロル化活性を有する微生物を作用させ、
一方の光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸ア
ルキルエステルを残存させると共に、他方の光学活性３
−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンを生成せしめる方法
において、水溶性弱塩基性化合物の存在下その微生物を
作用させることを特徴するクロロヒドリンの光学分割法
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は医薬・農薬・生理活
性物質などの光学活性化合物の合成における有用なキラ
ルビルディングブロックおよび中間体となりうる光学活
性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステ
ル並びに光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトン
の微生物処理による改良製法に関する。
性物質などの光学活性化合物の合成における有用なキラ
ルビルディングブロックおよび中間体となりうる光学活
性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステ
ル並びに光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトン
の微生物処理による改良製法に関する。
【０００２】
【従来の技術】医薬品等の光学活性化合物の中間体とし
て有用な光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸
アルキルエステルと光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチ
ロラクトンのより簡便で、安価で、工業的に有利な製法
が望まれている。既に本発明者らは、ラセミ体４−クロ
ロ−３−ヒドロキシブタン酸エステルのようなクロロヒ
ドリンに微生物菌体あるいはその菌体産生物を作用さ
せ、立体選択的脱クロル化反応により、一方の光学活性
体を該光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンに
変換し、残存するもう一方の光学活性４−クロロ−３−
ヒドロキシブタン酸エステルを同時に回収する方法（特
開平9-47296、US Patent 5,776,766、Suzuki et al. En
zyme and Microb. Technol., 24, 13-20 (1999)）を見
出している。
て有用な光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸
アルキルエステルと光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチ
ロラクトンのより簡便で、安価で、工業的に有利な製法
が望まれている。既に本発明者らは、ラセミ体４−クロ
ロ−３−ヒドロキシブタン酸エステルのようなクロロヒ
ドリンに微生物菌体あるいはその菌体産生物を作用さ
せ、立体選択的脱クロル化反応により、一方の光学活性
体を該光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンに
変換し、残存するもう一方の光学活性４−クロロ−３−
ヒドロキシブタン酸エステルを同時に回収する方法（特
開平9-47296、US Patent 5,776,766、Suzuki et al. En
zyme and Microb. Technol., 24, 13-20 (1999)）を見
出している。
【０００３】しかし、この方法では、脱クロル化反応の
進行に伴って生成する塩化水素酸により、反応液中のｐ
Ｈが低下し微生物菌体あるいはその菌体産生酵素の至適
ｐＨからずれるため、反応効率が劣る。そのために中和
剤として、炭酸カルシウムや水酸化ナトリウムを添加
し、反応を行うことも本発明者らは報告している（特開
平9-47296、US Patent 5,776,766、Suzuki et al. Enzy
me and Microb. Technol., 24, 13-20 (1999)）。中和
剤として炭酸カルシウムを用いる場合、立体選択性上昇
に効果が得られるが、低溶解度であるため、工業的にス
ケールアップすることが難しい。即ち １）正確なｐＨ調整が難しく、 ２）光学活性体の回収時に、残存する炭酸カルシウムを
除去しなければならず、そして ３）中和に要した塩基の添加量から基質分解量を推測
し、流加反応の基質流加シグナルとして利用できない。
即ち、光学分割反応は使用する微生物菌体やその産生物
が基質濃度の影響を受けやすく、仕込み基質量を多くす
る場合は基質を逐次添加することが有効な反応法であ
る。そこで中和に要した塩基量を基に基質添加量を決定
することは有効な手段であるが、炭酸カルシウムは殆ど
不溶性のため中和に要した塩基量を正確に定量すること
は難しく、炭酸カルシウムをアルカリ源とする場合には
効果的な基質添加を行うことができず、工業的にスケー
ルアップすることが難しい。一方、水酸化ナトリウムは
水溶性アルカリ源であり、取り扱いは比較的容易である
が、ラセミ体ブタン酸エステルを基質とするこの反応で
は、立体選択性が低く、反応終了液からの光学活性４−
クロロ−３−ヒドロキシブタン酸エステルおよび光学活
性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンを回収する工程
において、生成する３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクト
ンの光学純度が低くなるなど実際的でないばかりか、効
率的でない。
進行に伴って生成する塩化水素酸により、反応液中のｐ
Ｈが低下し微生物菌体あるいはその菌体産生酵素の至適
ｐＨからずれるため、反応効率が劣る。そのために中和
剤として、炭酸カルシウムや水酸化ナトリウムを添加
し、反応を行うことも本発明者らは報告している（特開
平9-47296、US Patent 5,776,766、Suzuki et al. Enzy
me and Microb. Technol., 24, 13-20 (1999)）。中和
剤として炭酸カルシウムを用いる場合、立体選択性上昇
に効果が得られるが、低溶解度であるため、工業的にス
ケールアップすることが難しい。即ち １）正確なｐＨ調整が難しく、 ２）光学活性体の回収時に、残存する炭酸カルシウムを
除去しなければならず、そして ３）中和に要した塩基の添加量から基質分解量を推測
し、流加反応の基質流加シグナルとして利用できない。
即ち、光学分割反応は使用する微生物菌体やその産生物
が基質濃度の影響を受けやすく、仕込み基質量を多くす
る場合は基質を逐次添加することが有効な反応法であ
る。そこで中和に要した塩基量を基に基質添加量を決定
することは有効な手段であるが、炭酸カルシウムは殆ど
不溶性のため中和に要した塩基量を正確に定量すること
は難しく、炭酸カルシウムをアルカリ源とする場合には
効果的な基質添加を行うことができず、工業的にスケー
ルアップすることが難しい。一方、水酸化ナトリウムは
水溶性アルカリ源であり、取り扱いは比較的容易である
が、ラセミ体ブタン酸エステルを基質とするこの反応で
は、立体選択性が低く、反応終了液からの光学活性４−
クロロ−３−ヒドロキシブタン酸エステルおよび光学活
性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンを回収する工程
において、生成する３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクト
ンの光学純度が低くなるなど実際的でないばかりか、効
率的でない。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上述の通
り、ラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸エス
テルのようなクロロヒドリンに微生物菌体あるいはその
菌体産生物を作用させ、立体選択的脱クロル化反応によ
り、一方の光学活性体を該光学活性３−ヒドロキシ−γ
−ブチロラクトンに変換し、同時に残存するもう一方の
光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸エステル
を回収する方法を見出しているが、それらの工業生産に
おいて実際的な製法を確立するために、そしてそれらの
生産性の向上並びに高光学純度のものを得るため鋭意研
究した結果、立体選択的な脱クロル化反応に伴い生成す
る塩化水素酸によるｐＨの低下に対して、水溶性弱塩基
性化合物により、その反応ｐＨを微生物あるいはその産
生酵素の至適ｐＨで制御することにより、高光学純度の
光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキル
エステルおよび３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンを
効率的に得る方法を見出し、本発明を完成したのであ
る。
り、ラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸エス
テルのようなクロロヒドリンに微生物菌体あるいはその
菌体産生物を作用させ、立体選択的脱クロル化反応によ
り、一方の光学活性体を該光学活性３−ヒドロキシ−γ
−ブチロラクトンに変換し、同時に残存するもう一方の
光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸エステル
を回収する方法を見出しているが、それらの工業生産に
おいて実際的な製法を確立するために、そしてそれらの
生産性の向上並びに高光学純度のものを得るため鋭意研
究した結果、立体選択的な脱クロル化反応に伴い生成す
る塩化水素酸によるｐＨの低下に対して、水溶性弱塩基
性化合物により、その反応ｐＨを微生物あるいはその産
生酵素の至適ｐＨで制御することにより、高光学純度の
光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキル
エステルおよび３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンを
効率的に得る方法を見出し、本発明を完成したのであ
る。
【０００５】即ち、本発明はラセミ体４−クロロ−３−
ヒドロキシブタン酸アルキルエステル混合物に、該化合
物に対して立体選択的脱クロル化活性を有する微生物ま
たは該微生物の産生物を作用させ、一方の光学活性４−
クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステルを残
存させると共に、他方の光学活性３−ヒドロキシ−γ−
ブチロラクトンを生成せしめる方法において、水溶性弱
塩基性化合物の存在下該微生物または該微生物の産生物
を作用させることを特徴とするクロロヒドリンの光学分
割法を提供することにある。本発明はまた、ラセミ体４
−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステル混
合物に、該化合物に対して立体選択的脱クロル化活性を
有する微生物または該微生物の産生物を作用させ、一方
の光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキ
ルエステルを残存させると共に、他方の光学活性３−ヒ
ドロキシ−γ−ブチロラクトンを生成せしめ、ついで該
光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキル
エステルを単離する方法において、水溶性弱塩基性化合
物の存在下該微生物または該微生物の産生物を作用させ
ること特徴とする方法、並びに、ラセミ体４−クロロ−
３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステル混合物に、該
化合物に対して立体選択的脱クロル化活性を有する微生
物または該産生物を作用させ、一方の光学活性４−クロ
ロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステルを残存さ
せると共に、他方の光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチ
ロラクトンを生成せしめ、ついで該光学活性３−ヒドロ
キシ−γ−ブチロラクトンを単離する方法において、水
溶性弱塩基性化合物の存在下該微生物または該微生物の
産生物を作用させること特徴とする方法に関する。
ヒドロキシブタン酸アルキルエステル混合物に、該化合
物に対して立体選択的脱クロル化活性を有する微生物ま
たは該微生物の産生物を作用させ、一方の光学活性４−
クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステルを残
存させると共に、他方の光学活性３−ヒドロキシ−γ−
ブチロラクトンを生成せしめる方法において、水溶性弱
塩基性化合物の存在下該微生物または該微生物の産生物
を作用させることを特徴とするクロロヒドリンの光学分
割法を提供することにある。本発明はまた、ラセミ体４
−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステル混
合物に、該化合物に対して立体選択的脱クロル化活性を
有する微生物または該微生物の産生物を作用させ、一方
の光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキ
ルエステルを残存させると共に、他方の光学活性３−ヒ
ドロキシ−γ−ブチロラクトンを生成せしめ、ついで該
光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキル
エステルを単離する方法において、水溶性弱塩基性化合
物の存在下該微生物または該微生物の産生物を作用させ
ること特徴とする方法、並びに、ラセミ体４−クロロ−
３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステル混合物に、該
化合物に対して立体選択的脱クロル化活性を有する微生
物または該産生物を作用させ、一方の光学活性４−クロ
ロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステルを残存さ
せると共に、他方の光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチ
ロラクトンを生成せしめ、ついで該光学活性３−ヒドロ
キシ−γ−ブチロラクトンを単離する方法において、水
溶性弱塩基性化合物の存在下該微生物または該微生物の
産生物を作用させること特徴とする方法に関する。
【０００６】
【発明の具体的説明】本発明で用いられる水溶性弱塩基
性化合物としては、アンモニア水、炭酸アンモニウム
塩、炭酸水素アンモニウム塩、炭酸アルカリ金属塩また
は炭酸水素アルカリ金属塩が挙げられ、具体的には、ア
ンモニア水の他、炭酸アンモニウム、炭酸水素アンモニ
ウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウ
ム、炭酸水素ナトリウムの水溶液を挙げることができ
る。好ましい水溶性弱塩基性化合物としてはアンモニア
水、炭酸アンモニウム塩、炭酸水素アンモニウム塩、ま
たはそれらの水溶液が挙げられる。本発明に使用される
微生物は、４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキ
ルエステルに対して、立体選択的な脱ハロゲン化反応を
触媒する酵素を産生する菌株であれば特に制限されず、
例えばエンテロバクター属(Enterobacter)に属する微生
物、 キトロバクター属(Citobacter)に属する微生物、
バシラス属(Bacillus)に属する微生物が例示される。基
質に対しエンテロバクター属(Enterobacter)に属する微
生物または キトロバクター属(Citobacter)に属する微
生物を作用させると、Ｒ体の４−クロロ−３−ヒドロキ
シブタン酸アルキルエステルが残存し、Ｓ体の３−ヒド
ロキシ−γ−ブチロラクトンが生成する。一方、バシラ
ス属(Bacillus)に属する微生物を作用させると、Ｓ体の
４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステル
が残存し、Ｒ体の光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロ
ラクトンが生成する。
性化合物としては、アンモニア水、炭酸アンモニウム
塩、炭酸水素アンモニウム塩、炭酸アルカリ金属塩また
は炭酸水素アルカリ金属塩が挙げられ、具体的には、ア
ンモニア水の他、炭酸アンモニウム、炭酸水素アンモニ
ウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウ
ム、炭酸水素ナトリウムの水溶液を挙げることができ
る。好ましい水溶性弱塩基性化合物としてはアンモニア
水、炭酸アンモニウム塩、炭酸水素アンモニウム塩、ま
たはそれらの水溶液が挙げられる。本発明に使用される
微生物は、４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキ
ルエステルに対して、立体選択的な脱ハロゲン化反応を
触媒する酵素を産生する菌株であれば特に制限されず、
例えばエンテロバクター属(Enterobacter)に属する微生
物、 キトロバクター属(Citobacter)に属する微生物、
バシラス属(Bacillus)に属する微生物が例示される。基
質に対しエンテロバクター属(Enterobacter)に属する微
生物または キトロバクター属(Citobacter)に属する微
生物を作用させると、Ｒ体の４−クロロ−３−ヒドロキ
シブタン酸アルキルエステルが残存し、Ｓ体の３−ヒド
ロキシ−γ−ブチロラクトンが生成する。一方、バシラ
ス属(Bacillus)に属する微生物を作用させると、Ｓ体の
４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステル
が残存し、Ｒ体の光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロ
ラクトンが生成する。
【０００７】具体的には、本発明者らにより土壌から分
離されたEnterobacter sp DS-S-75株、Citrobacter fre
undii DS-S-13株、Citrobacter freundii DS-K-40株、B
acillus sphaericus DS-ID-819株を挙げることができ
る。これらの微生物は、既に特許生物寄託センターに寄
託番号 (FERM BP-5494：寄託日1996．3.12)、寄託番号
(FERM BP-5492：寄託日1996．3.12)、寄託番号 (FERM B
P-5493：寄託日1996．3.12)、寄託番号 (FERM BP-549
5：寄託日1996．3.12)としてそれぞれ寄託されている。
離されたEnterobacter sp DS-S-75株、Citrobacter fre
undii DS-S-13株、Citrobacter freundii DS-K-40株、B
acillus sphaericus DS-ID-819株を挙げることができ
る。これらの微生物は、既に特許生物寄託センターに寄
託番号 (FERM BP-5494：寄託日1996．3.12)、寄託番号
(FERM BP-5492：寄託日1996．3.12)、寄託番号 (FERM B
P-5493：寄託日1996．3.12)、寄託番号 (FERM BP-549
5：寄託日1996．3.12)としてそれぞれ寄託されている。
【０００８】上記微生物を培養するための培地組成とし
ては、通常これらの微生物が生育する培地ならば特に制
限されない。例えば炭素源としてグリセロール、Ｄ−ソ
ルビトール、Ｄ−マンニトール等のアルコール類、酢
酸、クエン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、グル
コン酸等の有機酸またはそれらの塩類、Ｄ−グルコー
ス、Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラクトース等の炭水化物
またはそれらの混合物を、窒素源として硫酸アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機窒
素化合物および尿素、ペプトン、カゼイン、酵母エキ
ス、肉エキス、コーンスチープリカー等の有機窒素化合
物とそれらの混合物を挙げることができる。その他、無
機塩としてリン酸塩，マグネシウム塩、カリウム塩、マ
ンガン塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩等、更に必要に応じてビ
タミン類を加えてもよい。上記微生物の培養は常法によ
ればよく、例えばｐＨを５〜９、好ましくは６．５〜
７．０、培養温度は２０〜４０ｏＣ、好ましくは２５〜
３７ｏＣの範囲で好気的に１０〜９６時間行なうことが
好ましい。
ては、通常これらの微生物が生育する培地ならば特に制
限されない。例えば炭素源としてグリセロール、Ｄ−ソ
ルビトール、Ｄ−マンニトール等のアルコール類、酢
酸、クエン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、グル
コン酸等の有機酸またはそれらの塩類、Ｄ−グルコー
ス、Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラクトース等の炭水化物
またはそれらの混合物を、窒素源として硫酸アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機窒
素化合物および尿素、ペプトン、カゼイン、酵母エキ
ス、肉エキス、コーンスチープリカー等の有機窒素化合
物とそれらの混合物を挙げることができる。その他、無
機塩としてリン酸塩，マグネシウム塩、カリウム塩、マ
ンガン塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩等、更に必要に応じてビ
タミン類を加えてもよい。上記微生物の培養は常法によ
ればよく、例えばｐＨを５〜９、好ましくは６．５〜
７．０、培養温度は２０〜４０ｏＣ、好ましくは２５〜
３７ｏＣの範囲で好気的に１０〜９６時間行なうことが
好ましい。
【０００９】ラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブタ
ン酸アルキルエステル化合物に微生物またはその微生物
の産生物を作用させて光学活性４−クロロ−３−ヒドロ
キシブタン酸アルキルエステルおよび光学活性３−ヒド
ロキシ−γ−ブチロラクトンを得るには、本発明に係る
微生物を １）上記培養方法により得た微生物の培養液、 ２）１）の培養液から遠心分離もしくは膜分離により得
た菌体あるいはその菌体処理物（菌体破砕物あるいは菌
体抽出液）、または ３）２）を常法により固定化したものとし、緩衝液に混
合した微生物菌体混合液に、基質を添加する方法があ
る。反応温度は１５〜５０ｏＣが好ましく、そして反応
ｐＨはｐＨ６〜９が好ましいが、使用する基質の安定な
ｐＨや、使用する微生物酵素の至適ｐＨの範囲で行なう
と更に効果的である。反応液中の基質濃度は０．１〜２
０％（ｖ／ｖ）が好ましく、基質は初期に一括して加え
てもよいし、分割添加してもよい。分割添加する場合に
中和に要した塩基の量を指標として、最適添加基質量を
計算し、分解活性に応じて基質を添加してもよい。反応
は通常、撹拌あるいは振盪しながら行い、反応時間は基
質濃度、反応に供する微生物量あるいはその産生物量等
により異なるが２４〜１２０時間で終了するのがよい。
好ましくはガスクロマトグラフィー等の分析により残存
基質量が初期基質濃度に比して５０％で反応を終了する
のがよい。好ましくはガスクロマトグラフィー等の分析
により、生成あるいは残存する光学活性体の光学純度を
測定し終点を決定するのがよく、その生成物あるいは残
存物の光学純度が最大になった時を終点とする。反応中
に立体選択的な脱クロル化反応に伴い生成する塩化水素
酸によるｐＨの低下に対して、水溶性弱塩基性化合物水
溶液、またはアンモニア水溶液により、その反応ｐＨを
微生物あるいはその酵素の至適ｐＨで制御することによ
る高光学純度の光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブ
タン酸アルキルエステルと３−ヒドロキシ−γ−ブチロ
ラクトンを効果的に得ることができる。
ン酸アルキルエステル化合物に微生物またはその微生物
の産生物を作用させて光学活性４−クロロ−３−ヒドロ
キシブタン酸アルキルエステルおよび光学活性３−ヒド
ロキシ−γ−ブチロラクトンを得るには、本発明に係る
微生物を １）上記培養方法により得た微生物の培養液、 ２）１）の培養液から遠心分離もしくは膜分離により得
た菌体あるいはその菌体処理物（菌体破砕物あるいは菌
体抽出液）、または ３）２）を常法により固定化したものとし、緩衝液に混
合した微生物菌体混合液に、基質を添加する方法があ
る。反応温度は１５〜５０ｏＣが好ましく、そして反応
ｐＨはｐＨ６〜９が好ましいが、使用する基質の安定な
ｐＨや、使用する微生物酵素の至適ｐＨの範囲で行なう
と更に効果的である。反応液中の基質濃度は０．１〜２
０％（ｖ／ｖ）が好ましく、基質は初期に一括して加え
てもよいし、分割添加してもよい。分割添加する場合に
中和に要した塩基の量を指標として、最適添加基質量を
計算し、分解活性に応じて基質を添加してもよい。反応
は通常、撹拌あるいは振盪しながら行い、反応時間は基
質濃度、反応に供する微生物量あるいはその産生物量等
により異なるが２４〜１２０時間で終了するのがよい。
好ましくはガスクロマトグラフィー等の分析により残存
基質量が初期基質濃度に比して５０％で反応を終了する
のがよい。好ましくはガスクロマトグラフィー等の分析
により、生成あるいは残存する光学活性体の光学純度を
測定し終点を決定するのがよく、その生成物あるいは残
存物の光学純度が最大になった時を終点とする。反応中
に立体選択的な脱クロル化反応に伴い生成する塩化水素
酸によるｐＨの低下に対して、水溶性弱塩基性化合物水
溶液、またはアンモニア水溶液により、その反応ｐＨを
微生物あるいはその酵素の至適ｐＨで制御することによ
る高光学純度の光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブ
タン酸アルキルエステルと３−ヒドロキシ−γ−ブチロ
ラクトンを効果的に得ることができる。
【００１０】このようにして反応させ、反応液中に残存
する光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アル
キルエステルと３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンを
一般的な方法で単離・精製できる。例えば菌の培養液ま
たは菌体を用いた場合には、反応液から菌体を遠心分離
で除いた後、上清をエバポレーターにより濃縮し、酢酸
エチル等の溶媒で抽出する。抽出液を無水硫酸マグネシ
ウムにより脱水した後、減圧下で溶媒を除去し光学活性
４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステル
と光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンの粗シ
ロップを得ることができる。これを蒸留やシリカゲルを
用いたカラムクロマトグラフィーにより分離精製しても
よい。以下実施例をもって、本発明を詳細に説明するが
本発明はこれらの例に限定されるものではない。なお、
実施例中の％は特に記載のない限り（Ｗ／Ｖ）を表す。
する光学活性４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アル
キルエステルと３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンを
一般的な方法で単離・精製できる。例えば菌の培養液ま
たは菌体を用いた場合には、反応液から菌体を遠心分離
で除いた後、上清をエバポレーターにより濃縮し、酢酸
エチル等の溶媒で抽出する。抽出液を無水硫酸マグネシ
ウムにより脱水した後、減圧下で溶媒を除去し光学活性
４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステル
と光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンの粗シ
ロップを得ることができる。これを蒸留やシリカゲルを
用いたカラムクロマトグラフィーにより分離精製しても
よい。以下実施例をもって、本発明を詳細に説明するが
本発明はこれらの例に限定されるものではない。なお、
実施例中の％は特に記載のない限り（Ｗ／Ｖ）を表す。
【００１１】実施例１ ペプトン、酵母エキス、グリセロールをそれぞれ１．０
％含む栄養培地（ｐＨ７．２）３．０Ｌを入れた５Ｌ容
ジャーファーメンター（培養器）を１２１℃で１５分間
滅菌した。予め供試菌であるEnterobacter sp. DS-S-75
株をペプトン、酵母エキス、グリセロールをそれぞれ
１．０％含む栄養培地１００ｍｌ（ｐＨ７．２）で３０
℃で、１６時間振盪培養して種菌を調製し、上記培地に
２％（ｖ／ｖ）量（６０ｍｌ）無菌的に接種した。そし
て温度３０℃で、通気量１．０Ｌ／ｍｉｎ、回転数５０
０ｒｐｍの条件で約２４時間、通気攪拌培養を行なっ
た。培養終了後、培養液を取り出し遠心分離にて集菌
し、２ｍＭの硫酸マグネシウムを含む２０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７．２）で３回洗浄し、湿重量１００ｇの休
止菌体を調製した。その休止菌体５０ｇを上記同緩衝液
２５００ｍｌを入れた同５Ｌ容のジャーファーメンター
に懸濁し（９．５ ＯＤ（６６０ｎｍでの濁度））、２
００ｇのラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸
メチルエステルを加え、３０℃で攪拌しながら２０時間
光学分割反応を行った。このとき立体選択的な脱クロル
化反応の進行に伴い生成する塩化水素酸により低下する
ｐＨは、７％アンモニア水溶液により中和を行い、ｐＨ
６．７に制御した。その時の反応液中に残存する４−ク
ロロ−３−ヒドロキシブタン酸メチルエステル並びに生
成する３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンをガスクロ
マトグラフィー（カラム担体：ＰＥＧ２０Ｍ，６０−８
０メッシュ）で分析した結果、その残存率は４８％であ
った。また、生成した３−ヒドロキシ−γ−ブチロラク
トンの変換率は４８％であった。
％含む栄養培地（ｐＨ７．２）３．０Ｌを入れた５Ｌ容
ジャーファーメンター（培養器）を１２１℃で１５分間
滅菌した。予め供試菌であるEnterobacter sp. DS-S-75
株をペプトン、酵母エキス、グリセロールをそれぞれ
１．０％含む栄養培地１００ｍｌ（ｐＨ７．２）で３０
℃で、１６時間振盪培養して種菌を調製し、上記培地に
２％（ｖ／ｖ）量（６０ｍｌ）無菌的に接種した。そし
て温度３０℃で、通気量１．０Ｌ／ｍｉｎ、回転数５０
０ｒｐｍの条件で約２４時間、通気攪拌培養を行なっ
た。培養終了後、培養液を取り出し遠心分離にて集菌
し、２ｍＭの硫酸マグネシウムを含む２０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７．２）で３回洗浄し、湿重量１００ｇの休
止菌体を調製した。その休止菌体５０ｇを上記同緩衝液
２５００ｍｌを入れた同５Ｌ容のジャーファーメンター
に懸濁し（９．５ ＯＤ（６６０ｎｍでの濁度））、２
００ｇのラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸
メチルエステルを加え、３０℃で攪拌しながら２０時間
光学分割反応を行った。このとき立体選択的な脱クロル
化反応の進行に伴い生成する塩化水素酸により低下する
ｐＨは、７％アンモニア水溶液により中和を行い、ｐＨ
６．７に制御した。その時の反応液中に残存する４−ク
ロロ−３−ヒドロキシブタン酸メチルエステル並びに生
成する３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンをガスクロ
マトグラフィー（カラム担体：ＰＥＧ２０Ｍ，６０−８
０メッシュ）で分析した結果、その残存率は４８％であ
った。また、生成した３−ヒドロキシ−γ−ブチロラク
トンの変換率は４８％であった。
【００１２】反応終了後、菌体を除去し、約１６０ｍｌ
まで濃縮し、等量の酢酸エチルで抽出した。無水硫酸マ
グネシウムにより脱水後、減圧下溶媒を除去し、９６ｇ
の４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸メチルエステル
と６４ｇの３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンの混合
物を得た。これらの物質の同定および定量は同ガスクロ
マトグラフィーにより行ない、リテンションタイムより
確認した（公開特許公報 特開平９−４７２９６参
照）。このシロップ中の４−クロロ−３−ヒドロキシブ
タン酸メチルエステルをアステック社製のキャピラリー
カラムＧ−ＴＡ（０．２５ｍｍ ｘ ３０ｍ）を用いた
ガスクロマトグラフィーにより光学異性体の分析を行な
った。一方、３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンは無
水トリフルオロ酢酸によりトリフルオロアセチル化した
後、上記ガスクロマトグラフィーにより光学異性体の分
析を行った（公開特許公報 特開平９−４７２９６参
照）。その結果、回収した４−クロロ−３−ヒドロキシ
ブタン酸メチルエステルは光学純度１００％ｅｅのＲ体
であることが判明した。また、回収した３−ヒドロキシ
−γ−ブチロラクトンは光学純度９５．１％ｅｅのＳ体
であることが判明した。このときの立体選択性を示す値
であるＥ値は３００であった。
まで濃縮し、等量の酢酸エチルで抽出した。無水硫酸マ
グネシウムにより脱水後、減圧下溶媒を除去し、９６ｇ
の４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸メチルエステル
と６４ｇの３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンの混合
物を得た。これらの物質の同定および定量は同ガスクロ
マトグラフィーにより行ない、リテンションタイムより
確認した（公開特許公報 特開平９−４７２９６参
照）。このシロップ中の４−クロロ−３−ヒドロキシブ
タン酸メチルエステルをアステック社製のキャピラリー
カラムＧ−ＴＡ（０．２５ｍｍ ｘ ３０ｍ）を用いた
ガスクロマトグラフィーにより光学異性体の分析を行な
った。一方、３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンは無
水トリフルオロ酢酸によりトリフルオロアセチル化した
後、上記ガスクロマトグラフィーにより光学異性体の分
析を行った（公開特許公報 特開平９−４７２９６参
照）。その結果、回収した４−クロロ−３−ヒドロキシ
ブタン酸メチルエステルは光学純度１００％ｅｅのＲ体
であることが判明した。また、回収した３−ヒドロキシ
−γ−ブチロラクトンは光学純度９５．１％ｅｅのＳ体
であることが判明した。このときの立体選択性を示す値
であるＥ値は３００であった。
【００１３】対照として中和に用いる塩基を２５％（ｗ
／ｗ）水酸化ナトリウム（比較例１）および炭酸カルシ
ウム（比較例２）で行った場合と比較した。２０時間後
の光学純度並びにＥ値を表１に示す。Ｅ値は以下の式に
より算出した。 Ｅ値=ｌｎ［１−Ｃ（１+ｅｅｐ）]／ｌｎ［１−Ｃ（１
−ｅｅｐ）］ Ｃ：生成物の変換率 ｅｅｐ：生成物の光学純度
／ｗ）水酸化ナトリウム（比較例１）および炭酸カルシ
ウム（比較例２）で行った場合と比較した。２０時間後
の光学純度並びにＥ値を表１に示す。Ｅ値は以下の式に
より算出した。 Ｅ値=ｌｎ［１−Ｃ（１+ｅｅｐ）]／ｌｎ［１−Ｃ（１
−ｅｅｐ）］ Ｃ：生成物の変換率 ｅｅｐ：生成物の光学純度
【００１４】実施例２−６ 脱クロル化反応に伴い生成する塩化水素酸を中和する塩
基を代えた以外は実施例１と同様の方法で行った。その
結果を実施例１、比較例２の値と共に表１に示す。
基を代えた以外は実施例１と同様の方法で行った。その
結果を実施例１、比較例２の値と共に表１に示す。
【表１】
【００１５】実施例７−１２ 基質をラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸メ
チルエステルからラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシ
ブタン酸エチルエステルに変え、そして中和に要する塩
基を表２に示す化合物に代えた以外は実施例１と同様の
方法で反応を行なった。なお、比較例３についても同様
にして行なった。
チルエステルからラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシ
ブタン酸エチルエステルに変え、そして中和に要する塩
基を表２に示す化合物に代えた以外は実施例１と同様の
方法で反応を行なった。なお、比較例３についても同様
にして行なった。
【表２】
【００１６】実施例１３−１５ 使用する微生物をエンテロバクター属細菌（Enterobact
er sp. DS-S-75株）からキトロバクター属細菌（Citrob
acter freundii DS-S-13株あるいはCitrobacter freund
ii DS-K-40株）、バシラス属細菌（Bacillus sphaericu
s DS-ID-819株）に変更し、基質として４−クロロ−３
−ヒドロキシブタン酸エチルエステルを使用した以外は
実施例１と同様の方法で行った。なお、使用した休止菌
体は５０ｇとした。なお、比較例４−６についても同様
にして行なった。
er sp. DS-S-75株）からキトロバクター属細菌（Citrob
acter freundii DS-S-13株あるいはCitrobacter freund
ii DS-K-40株）、バシラス属細菌（Bacillus sphaericu
s DS-ID-819株）に変更し、基質として４−クロロ−３
−ヒドロキシブタン酸エチルエステルを使用した以外は
実施例１と同様の方法で行った。なお、使用した休止菌
体は５０ｇとした。なお、比較例４−６についても同様
にして行なった。
【００１７】使用菌株Citrobacter freundii DS-S-13株
【表３】
【００１８】使用菌株Citrobacter freundii DS-K-40株
【表４】
【００１９】使用菌株Bacillus sphaericus DS-ID-819
株
株
【表５】
【００２０】実施例１６ ペプトン、酵母エキス、グリセロールをそれぞれ１．０
％含む栄養培地（ｐＨ７．２）２．５Ｌを入れた５Ｌ容
ジャーファーメンター（培養器）を１２１℃で１５分間
滅菌した。予め供試菌であるEnterobacter sp. DS-S-75
株をペプトン、酵母エキス、グリセロールをそれぞれ
１．０％含む１００ｍｌの栄養培地（ｐＨ７．２）で３
０℃で、１６時間振盪培養して種菌を調製し、上記培地
に２％（ｖ／ｖ）量（５０ｍｌ）を無菌的に接種した。
そして温度３０℃で、通気量１．０Ｌ／ｍｉｎ、回転数
５００ｒｐｍの条件で約２４時間、通気攪拌培養を行な
った。培養終了後、培養液中の微生物濃度は約１５ Ｏ
Ｄ（６６０ｎｍでの濁度：湿重量約７５ｇの休止菌体に
相当）、培養液のｐＨは６．２であった。ついで反応液
にｐＨ電極とｐＨコントローラーを装着し、中和用塩基
源として１５％アンモニア水溶液を用い、ｐＨ６．７に
制御し、また反応温度は３０℃に制御した。
％含む栄養培地（ｐＨ７．２）２．５Ｌを入れた５Ｌ容
ジャーファーメンター（培養器）を１２１℃で１５分間
滅菌した。予め供試菌であるEnterobacter sp. DS-S-75
株をペプトン、酵母エキス、グリセロールをそれぞれ
１．０％含む１００ｍｌの栄養培地（ｐＨ７．２）で３
０℃で、１６時間振盪培養して種菌を調製し、上記培地
に２％（ｖ／ｖ）量（５０ｍｌ）を無菌的に接種した。
そして温度３０℃で、通気量１．０Ｌ／ｍｉｎ、回転数
５００ｒｐｍの条件で約２４時間、通気攪拌培養を行な
った。培養終了後、培養液中の微生物濃度は約１５ Ｏ
Ｄ（６６０ｎｍでの濁度：湿重量約７５ｇの休止菌体に
相当）、培養液のｐＨは６．２であった。ついで反応液
にｐＨ電極とｐＨコントローラーを装着し、中和用塩基
源として１５％アンモニア水溶液を用い、ｐＨ６．７に
制御し、また反応温度は３０℃に制御した。
【００２１】その反応液に２％量（５０ｇ）のラセミ体
４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸メチルエステルを
添加し、光学分割反応を開始した。反応が進むにつれて
遊離する塩酸を１５％アンモニア水で中和し、中和に要
したアンモニア水を天秤で定量し、その定量値を基に添
加流加するラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブタン
酸メチルエステルの量を決定した。その値を次式により
求めた。 一定時間内に流加添加するラセミ体４−クロロ−３−ヒ
ドロキシブタン酸メチルエステル（モル数）＝（一定時
間内に中和に要した１５％アンモニア量（ｇ）ｘ ０．
１５）／１７ｘファクター値 ：なお今回のファクター値は４．５で行い、この場合流
加添加反応中の残存４−クロロ−３−ヒドロキシブタン
酸メチルエステルの光学純度は約７０％ｅｅ（Ｒ体）で
あった。最終的に流加添加したラセミ体４−クロロ−３
−ヒドロキシブタン酸メチルエステルは３００ｇであっ
た。約２４時間で反応を終了し、その時の残存Ｒ体４−
クロロ−３−ヒドロキシブタン酸メチルエステルの光学
純度は１００％ｅｅであった。一方、生成したＳ体３−
ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンの光学純度は９５．３
％ｅｅであった。得られた反応液からの光学活性体の回
収は実施例１と同様の方法で行い、１４１ｇのＲ体４−
クロロ−３−ヒドロキシブタン酸メチルエステルと９５
ｇのＳ体３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンの混合シ
ロップを得た。
４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸メチルエステルを
添加し、光学分割反応を開始した。反応が進むにつれて
遊離する塩酸を１５％アンモニア水で中和し、中和に要
したアンモニア水を天秤で定量し、その定量値を基に添
加流加するラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブタン
酸メチルエステルの量を決定した。その値を次式により
求めた。 一定時間内に流加添加するラセミ体４−クロロ−３−ヒ
ドロキシブタン酸メチルエステル（モル数）＝（一定時
間内に中和に要した１５％アンモニア量（ｇ）ｘ ０．
１５）／１７ｘファクター値 ：なお今回のファクター値は４．５で行い、この場合流
加添加反応中の残存４−クロロ−３−ヒドロキシブタン
酸メチルエステルの光学純度は約７０％ｅｅ（Ｒ体）で
あった。最終的に流加添加したラセミ体４−クロロ−３
−ヒドロキシブタン酸メチルエステルは３００ｇであっ
た。約２４時間で反応を終了し、その時の残存Ｒ体４−
クロロ−３−ヒドロキシブタン酸メチルエステルの光学
純度は１００％ｅｅであった。一方、生成したＳ体３−
ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンの光学純度は９５．３
％ｅｅであった。得られた反応液からの光学活性体の回
収は実施例１と同様の方法で行い、１４１ｇのＲ体４−
クロロ−３−ヒドロキシブタン酸メチルエステルと９５
ｇのＳ体３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンの混合シ
ロップを得た。
【００２２】
【発明の効果】本発明によればエンテロバクター属に属
する微生物（Enterobacter sp. DS-S-75株）、キトロバ
クター属に属する微生物（ Citrobacter freundii DS-S
-13株あるいはCitrobacter freundii DS-K-40株）、バ
シラス属に属する微生物（Bacillus sphaericus DS-ID-
819株）を利用した脱クロル化反応によるラセミ体４−
クロロ−３−ヒドロキシブタン酸エステルの光学分割反
応において、その中和反応において水溶性弱塩基性化合
物を用いることにより、高光学純度のＲ体あるいはＳ体
４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステル
とより光学純度の高いＳ体あるいはＲ体３−ヒドロキシ
−γ−ブチロラクトンを効果的に同時に生産することが
できる。
する微生物（Enterobacter sp. DS-S-75株）、キトロバ
クター属に属する微生物（ Citrobacter freundii DS-S
-13株あるいはCitrobacter freundii DS-K-40株）、バ
シラス属に属する微生物（Bacillus sphaericus DS-ID-
819株）を利用した脱クロル化反応によるラセミ体４−
クロロ−３−ヒドロキシブタン酸エステルの光学分割反
応において、その中和反応において水溶性弱塩基性化合
物を用いることにより、高光学純度のＲ体あるいはＳ体
４−クロロ−３−ヒドロキシブタン酸アルキルエステル
とより光学純度の高いＳ体あるいはＲ体３−ヒドロキシ
−γ−ブチロラクトンを効果的に同時に生産することが
できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 中川 篤 大阪府大阪市西区江戸堀１丁目10番８号 ダイソー株式会社内 (72)発明者 樋上 素子 大阪府大阪市西区江戸堀１丁目10番８号 ダイソー株式会社内 Ｆターム(参考） 4B064 AD75 AE45 CA02 CB11 CB30 DA01 DA11
Claims (14)
- 【請求項１】 ラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブ
タン酸アルキルエステル混合物に、該化合物に対して立
体選択的脱クロル化活性を有する微生物または該微生物
の産生物を作用させ、一方の光学活性４−クロロ−３−
ヒドロキシブタン酸アルキルエステルを残存させると共
に、他方の光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクト
ンを生成せしめる方法において、水溶性弱塩基性化合物
の存在下該微生物または該微生物の産生物を作用させる
ことを特徴とするクロロヒドリンの光学分割法。 - 【請求項２】 ラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブ
タン酸アルキルエステル混合物に、該化合物に対して立
体選択的脱クロル化活性を有する微生物または該微生物
の産生物を作用させ、一方の光学活性４−クロロ−３−
ヒドロキシブタン酸アルキルエステルを残存させると共
に、他方の光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクト
ンを生成せしめ、ついで該光学活性４−クロロ−３−ヒ
ドロキシブタン酸アルキルエステルを単離する方法にお
いて、水溶性弱塩基性化合物の存在下該微生物または該
微生物の産生物を作用させることを特徴とする方法。 - 【請求項３】 ラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシブ
タン酸アルキルエステル混合物に、該化合物に対して立
体選択的脱クロル化活性を有する微生物または該微生物
の産生物を作用させ、一方の光学活性４−クロロ−３−
ヒドロキシブタン酸アルキルエステルを残存させると共
に、他方の光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクト
ンを生成せしめ、ついで該光学活性３−ヒドロキシ−γ
−ブチロラクトンを単離する方法において、水溶性弱塩
基性化合物の存在下該微生物または該微生物の産生物を
作用させることを特徴とする方法。 - 【請求項４】 微生物がエンテロバクター属(Enterobac
ter)、キトロバクター属(Citrobacter)またはバシラス
属（Bacillus)に属する菌株である請求項１−３に記載
のいずれかの方法。 - 【請求項５】 水溶性弱塩基性化合物がアンモニア水、
炭酸アンモニウム塩、炭酸水素アンモニウム塩、炭酸ア
ルカリ金属塩または炭酸水素アルカリ金属塩である請求
項１−４に記載のいずれかの方法。 - 【請求項６】 水溶性弱塩基性化合物がアンモニア水、
炭酸アンモニウム塩または炭酸水素アンモニウム塩であ
る請求項１−４に記載のいずれかの方法。 - 【請求項７】 水溶性弱塩基性化合物が炭酸ナトリウム
塩、炭酸水素ナトリウム塩、炭酸カリウム塩または炭酸
水素カリウム塩である請求項１−４に記載のいずれかの
方法。 - 【請求項８】 残存する光学活性４−クロロ−３−ヒド
ロキシブタン酸アルキルエステルがＲ体であり、生成す
る光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンがＳ体
である請求項１−７記載のいずれかの方法。 - 【請求項９】 微生物がエンテロバクター属(Enterobac
ter)、キトロバクター属 (Citrobacter)に属する菌株で
ある請求項８記載の方法。 - 【請求項１０】 微生物がエンテロバクター(Enterobac
ter) sp. DS-S-75株（FERM BP−5494)、キトロバクター
・フレウンディー (Citrobacter freundii）DS-S-13株
（FERM BP-5492)、またはキトロバクター・フレウンデ
ィー(Citrobacter freundii） DS-K-40株（FERM BP-549
3)である請求項８または９記載の方法。 - 【請求項１１】 残存する光学活性４−クロロ−３−ヒ
ドロキシブタン酸アルキルエステルがＳ体であり、生成
する光学活性３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンがＲ
体である請求項１−７記載のいずれかの方法。 - 【請求項１２】 微生物がバシラス属（Bacillus)に属
する菌株である請求項１１に記載の方法。 - 【請求項１３】 微生物がバシラス・スペリカス(Bacil
lus sphaericus） DS-ID-819株（FERM BP-5495)である
請求項１１または１２記載の方法。 - 【請求項１４】 ラセミ体４−クロロ−３−ヒドロキシ
ブタン酸アルキルエステルが４−クロロ−３−ヒドロキ
シブタン酸メチルエステルまたは４−クロロ−３−ヒド
ロキシブタン酸エチルエステルである請求項１−１３記
載のいずれかの方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001175480A JP4061862B2 (ja) | 2001-06-11 | 2001-06-11 | 微生物によるクロロヒドリンの光学分割法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001175480A JP4061862B2 (ja) | 2001-06-11 | 2001-06-11 | 微生物によるクロロヒドリンの光学分割法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002360293A true JP2002360293A (ja) | 2002-12-17 |
| JP4061862B2 JP4061862B2 (ja) | 2008-03-19 |
Family
ID=19016606
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001175480A Expired - Fee Related JP4061862B2 (ja) | 2001-06-11 | 2001-06-11 | 微生物によるクロロヒドリンの光学分割法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4061862B2 (ja) |
-
2001
- 2001-06-11 JP JP2001175480A patent/JP4061862B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4061862B2 (ja) | 2008-03-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4742610B2 (ja) | フマル酸の製造方法 | |
| US20100261251A1 (en) | Microbial kinetic resolution of ethyl-3,4-epoxybutyrate | |
| JP2995870B2 (ja) | 新規微生物 | |
| JP4061862B2 (ja) | 微生物によるクロロヒドリンの光学分割法 | |
| JP3705046B2 (ja) | 微生物による光学活性４−ハロゲノ−１，３−ブタンジオール及びその誘導体の製法 | |
| JP3687497B2 (ja) | 微生物培養法による光学活性１，２−ジオール類の製造法 | |
| US20010003046A1 (en) | Process for preparing (S)-3-halogeno-1,2-propanediol by microorganism | |
| JPS58201992A (ja) | 微生物によるβ−置換プロピオン酸またはそのアミドの製造法 | |
| JP4306453B2 (ja) | 微生物利用によるｓ体１，２−プロパンジオールの製法 | |
| JP3732535B2 (ja) | 光学活性α−メチルアルカンジカルボン酸−ω−モノエステル及びその対掌体ジエステルを製造する方法 | |
| JP3872135B2 (ja) | 光学活性なγ−ブチロラクトン誘導体の製造法 | |
| KR20050072066A (ko) | 미생물을 이용한 광학 활성 3－클로로－2－메틸－1,2－프로판디올의 제조 방법 | |
| JP4042557B2 (ja) | 光学活性テトラヒドロフラン−２−カルボン酸及びそのエステルの製法 | |
| JP4069742B2 (ja) | 微生物によるカルボン酸エステルの光学分割法 | |
| JP4793131B2 (ja) | 光学活性２，３−ジクロロ−２−メチル−１−プロパノールおよび光学活性２−メチルエピクロルヒドリンの製造方法 | |
| JP2002281993A (ja) | シキミ酸の製造方法 | |
| US5824449A (en) | Process for producing D-malic acid | |
| JP3277930B2 (ja) | Ｄ−リンゴ酸の製造方法 | |
| JP3659123B2 (ja) | ４−ハロゲノ−３−アルカノイルオキシブチロニトリルの光学分割方法 | |
| JP3304959B2 (ja) | Ｄ−リンゴ酸の製造方法 | |
| JPH06261787A (ja) | 光学活性β−アミノ酸の製造法 | |
| JP3970898B2 (ja) | 光学活性α−メチルアルカンジカルボン酸−ω−モノエステル及びその対掌体ジエステルを製造する方法 | |
| JP2002017386A (ja) | インドール−３−カルボン酸誘導体の製造法 | |
| JPH07188A (ja) | 新規微生物及びそれを用いるｄ−リンゴ酸の製造法 | |
| JPH11243979A (ja) | ピルビン酸の製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040414 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060829 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20061027 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20070821 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071019 |
|
| A911 | Transfer of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Effective date: 20071112 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20071204 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20071217 |
|
| R150 | Certificate of patent (=grant) or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110111 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110111 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 4 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120111 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 5 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 5 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140111 Year of fee payment: 6 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |