JP2995870B2 - 新規微生物 - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はアルスロバクター(Arthr
obacter)属に属する微生物であるアルスロバクターＳＣ
−６−９８−２８株及びこれを用いた（＋）−菊酸また
は（＋）−3-(2,2- ジクロロビニル)-2,2-ジメチルシク
ロプロパンカルボン酸（以下、ＤＶ酸と略する）の生化
学的製造法に関する。
obacter)属に属する微生物であるアルスロバクターＳＣ
−６−９８−２８株及びこれを用いた（＋）−菊酸また
は（＋）−3-(2,2- ジクロロビニル)-2,2-ジメチルシク
ロプロパンカルボン酸（以下、ＤＶ酸と略する）の生化
学的製造法に関する。
【０００２】更に詳しくは、アルスロバクター・グロビ
フォルミス（Arthrobacter globiformis）ＩＦＯ−１２
９５８株をＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジン（以後ＮＴＧと略称する）処理による突然変異
誘発処理を行って取得した微生物アルスロバクターＳＣ
−６−９８−２８株及び、該微生物を用いた（＋）−菊
酸または（＋）−ＤＶ酸の生化学的製造法に関する。
フォルミス（Arthrobacter globiformis）ＩＦＯ−１２
９５８株をＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジン（以後ＮＴＧと略称する）処理による突然変異
誘発処理を行って取得した微生物アルスロバクターＳＣ
−６−９８−２８株及び、該微生物を用いた（＋）−菊
酸または（＋）−ＤＶ酸の生化学的製造法に関する。
【０００３】
【従来の技術】一般式化３
【化３】 ( 式中、Ｘはメチル基または、塩素原子を表す。本式
は、立体関係を表すものではない。） で表される菊酸または（＋）−ＤＶ酸はアレスリン、テ
トラメスリン、レスメスリン、フラメスリン、フェノス
リン、パーメスリンなどのいゆるピレスロイドと総称さ
れる低毒性で速効性の殺虫性エステル化合物の酸成分を
構成する化合物である。
は、立体関係を表すものではない。） で表される菊酸または（＋）−ＤＶ酸はアレスリン、テ
トラメスリン、レスメスリン、フラメスリン、フェノス
リン、パーメスリンなどのいゆるピレスロイドと総称さ
れる低毒性で速効性の殺虫性エステル化合物の酸成分を
構成する化合物である。
【０００４】菊酸とＤＶ酸には、そのＣ1 位の不斉炭素
に基づき（＋）体と（−）体と呼ばれる２種の異性体が
存在する。 ピレスロイドとしての殺虫効力において
は、（＋）体が有効であり、（−）体は殆ど無効である
ことが知られている（吉岡宏輔、有機合成化学、第３８
巻、第１２号、１９８０年）。 従って、工業的に有利
に（＋）−菊酸または（＋）−ＤＶ酸を製造することが
非常に重要である。
に基づき（＋）体と（−）体と呼ばれる２種の異性体が
存在する。 ピレスロイドとしての殺虫効力において
は、（＋）体が有効であり、（−）体は殆ど無効である
ことが知られている（吉岡宏輔、有機合成化学、第３８
巻、第１２号、１９８０年）。 従って、工業的に有利
に（＋）−菊酸または（＋）−ＤＶ酸を製造することが
非常に重要である。
【０００５】有機合成化学的な分割法により（＋）−菊
酸または（＋）−ＤＶ酸を製造する方法は、高価な光学
活性試薬を必要とする、あるいは煩雑な工程を必要とす
るなどの欠点を有する。
酸または（＋）−ＤＶ酸を製造する方法は、高価な光学
活性試薬を必要とする、あるいは煩雑な工程を必要とす
るなどの欠点を有する。
【０００６】一方、微生物が産生するエステラーゼを一
般式化４
般式化４
【化４】 （式中、ＲはＣ1 〜Ｃ4 のアルキル基を表し、Ｘはメチ
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。） で表される化合物であるラセミ菊酸エステルまたはラセ
ミＤＶ酸エステルに作用させて、これを立体選択的に不
斉加水分解し、（＋）−菊酸（または（＋）−ＤＶ酸）
とその対掌体エステルに分割することを特徴とする
（＋）−菊酸または（＋）−ＤＶ酸の生化学的製造法が
知られている。この生化学的製造法は、有機合成化学的
な製造法に比べて、高価な試薬や煩雑な工程を必要とし
ない点で優れている。
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。） で表される化合物であるラセミ菊酸エステルまたはラセ
ミＤＶ酸エステルに作用させて、これを立体選択的に不
斉加水分解し、（＋）−菊酸（または（＋）−ＤＶ酸）
とその対掌体エステルに分割することを特徴とする
（＋）−菊酸または（＋）−ＤＶ酸の生化学的製造法が
知られている。この生化学的製造法は、有機合成化学的
な製造法に比べて、高価な試薬や煩雑な工程を必要とし
ない点で優れている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らはすでにア
ルスロバクター・グロビフォルミスＩＦＯ−１２９５８
株が、一般式化５
ルスロバクター・グロビフォルミスＩＦＯ−１２９５８
株が、一般式化５
【化５】 （式中、ＲはＣ1 〜Ｃ4 のアルキル基を表し、Ｘはメチ
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。） で示されるラセミ菊酸エステルまたはラセミＤＶ酸エス
テルを立体選択的に不斉加水分解し、光学純度の高い
（＋）−菊酸または（＋）−ＤＶ酸を生成することか
ら、（＋）−菊酸または（＋）−ＤＶ酸の生化学的製造
法において極めて有用な微生物であることを見出した。
（特開昭５９−２１０８９２号、特開昭６３−２５１０
９９号）
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。） で示されるラセミ菊酸エステルまたはラセミＤＶ酸エス
テルを立体選択的に不斉加水分解し、光学純度の高い
（＋）−菊酸または（＋）−ＤＶ酸を生成することか
ら、（＋）−菊酸または（＋）−ＤＶ酸の生化学的製造
法において極めて有用な微生物であることを見出した。
（特開昭５９−２１０８９２号、特開昭６３−２５１０
９９号）
【０００８】しかし、菌体量あたりの加水分解活性は、
必ずしも充分に高くはなく、上記不斉加水分解反応を工
業的に利用するに当たっては、大量の菌体を必要とする
などの問題点があった。
必ずしも充分に高くはなく、上記不斉加水分解反応を工
業的に利用するに当たっては、大量の菌体を必要とする
などの問題点があった。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、アルスロ
バクター・グロビフォルミス（Arthrobacter globif-or
mis）ＩＦＯ−１２９５８株を突然変異誘発処理するこ
とにより、菌体量あたりのラセミ菊酸エステル加水分解
活性が高い微生物を創製すべく鋭意検討を行ってきた。
その結果、アルスロバクター・グロビフォルミス（Ar
throbacter glob-iformis）ＩＦＯ−１２９５８株をＮ
ＴＧ処理による突然変異誘発処理を行った後、ラセミ菊
酸エチルエステルを含有する寒天培地に生育する突然変
異株について、菌体量あたりのラセミ菊酸エチルエステ
ル加水分解活性が高い微生物を取得すべく誠意努力し、
本発明の微生物アルスロバクターＳＣ−６−９８−２８
株を得た。
バクター・グロビフォルミス（Arthrobacter globif-or
mis）ＩＦＯ−１２９５８株を突然変異誘発処理するこ
とにより、菌体量あたりのラセミ菊酸エステル加水分解
活性が高い微生物を創製すべく鋭意検討を行ってきた。
その結果、アルスロバクター・グロビフォルミス（Ar
throbacter glob-iformis）ＩＦＯ−１２９５８株をＮ
ＴＧ処理による突然変異誘発処理を行った後、ラセミ菊
酸エチルエステルを含有する寒天培地に生育する突然変
異株について、菌体量あたりのラセミ菊酸エチルエステ
ル加水分解活性が高い微生物を取得すべく誠意努力し、
本発明の微生物アルスロバクターＳＣ−６−９８−２８
株を得た。
【００１０】本発明の微生物アルスロバクターＳＣ−６
−９８−２８株は工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌寄第11851 号(FERM P-11851 ) として寄託されて
いる。
−９８−２８株は工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌寄第11851 号(FERM P-11851 ) として寄託されて
いる。
【００１１】以下、本発明をさらに詳細に説明する。本
発明において、アルスロバクター・グロビフォルミスＩ
ＦＯ−１２９５８株のＮＴＧ処理による突然変異誘発処
理は常法に従って行った。すなわち、アルスロバクター
・グロビフォルミスＩＦＯ−１２９５８株を公知の液体
培地を用いて、培養し、対数増殖期に達した時に、遠心
分離操作により菌体を分離取得する。この菌体を、適当
な緩衝液で洗浄した後、ＮＴＧ水溶液で処理する。この
後、遠心分離操作により菌体を分離取得し、適当な緩衝
液で洗浄し、ラセミ菊酸エチルエステルを懸濁させた寒
天培地に植菌する。菌体を培養し、生育して集落を形成
した微生物株を釣菌し、再度、ラセミ菊酸エチルエステ
ルを懸濁させた寒天培地に塗布植菌した。ここで生育し
て集落を形成した微生物について、酪酸メチル加水分解
活性を測定し、その活性がアルスロバクター・グロビフ
ォルミス（Arthrobacter globiformis）ＩＦＯ−１２９
５８株より高いものを選抜する。ここで選抜された微生
物について、ラセミ菊酸エチル加水分解活性を測定し、
その活性が最も高かった微生物を選抜し、アルスロバク
ターＳＣ−６−９８−２８株を得た。アルスロバクター
ＳＣ−６−９８−２８株の細菌学的性状はアルスロバク
ター・グロビフォルミスＩＦＯ−１２９５８株とまった
く同じであるが、菌体量あたりの菊酸エチルエステル加
水分解活性はアルスロバクター・グロビフォルミスＩＦ
Ｏ−１２９５８株のそれに比べて、３倍以上高い。ま
た、アルスロバクターＳＣ−６−９８−２８株は、ラセ
ミ菊酸エステル（またはラセミＤＶ酸エステル）に作用
して、（＋）体のエステルを選択的に加水分解し、光学
純度の高い（＋）−菊酸または（＋）−ＤＶ酸を生成す
る。
発明において、アルスロバクター・グロビフォルミスＩ
ＦＯ−１２９５８株のＮＴＧ処理による突然変異誘発処
理は常法に従って行った。すなわち、アルスロバクター
・グロビフォルミスＩＦＯ−１２９５８株を公知の液体
培地を用いて、培養し、対数増殖期に達した時に、遠心
分離操作により菌体を分離取得する。この菌体を、適当
な緩衝液で洗浄した後、ＮＴＧ水溶液で処理する。この
後、遠心分離操作により菌体を分離取得し、適当な緩衝
液で洗浄し、ラセミ菊酸エチルエステルを懸濁させた寒
天培地に植菌する。菌体を培養し、生育して集落を形成
した微生物株を釣菌し、再度、ラセミ菊酸エチルエステ
ルを懸濁させた寒天培地に塗布植菌した。ここで生育し
て集落を形成した微生物について、酪酸メチル加水分解
活性を測定し、その活性がアルスロバクター・グロビフ
ォルミス（Arthrobacter globiformis）ＩＦＯ−１２９
５８株より高いものを選抜する。ここで選抜された微生
物について、ラセミ菊酸エチル加水分解活性を測定し、
その活性が最も高かった微生物を選抜し、アルスロバク
ターＳＣ−６−９８−２８株を得た。アルスロバクター
ＳＣ−６−９８−２８株の細菌学的性状はアルスロバク
ター・グロビフォルミスＩＦＯ−１２９５８株とまった
く同じであるが、菌体量あたりの菊酸エチルエステル加
水分解活性はアルスロバクター・グロビフォルミスＩＦ
Ｏ−１２９５８株のそれに比べて、３倍以上高い。ま
た、アルスロバクターＳＣ−６−９８−２８株は、ラセ
ミ菊酸エステル（またはラセミＤＶ酸エステル）に作用
して、（＋）体のエステルを選択的に加水分解し、光学
純度の高い（＋）−菊酸または（＋）−ＤＶ酸を生成す
る。
【００１２】アルスロバクター・グロビフォルミスＩＦ
Ｏ−１２９５８株及びアルスロバクターＳＣ−６−９８
−２８株の培養は常法に従って液体培養、例えば滅菌し
た液体培地に微生物を接種し、通常２０〜４０℃で１〜
８日間振とう培養を行うことができる。また、必要に応
じて固体培養を行うこともできる。培地の組成について
は、通常の微生物培養に用いられるもので、特に制限は
なく、例えば炭素源および窒素源として、グルコース、
澱粉、デキストリン、糖蜜、油脂類、大豆粉、コーンス
ティープリカー（Corn steep liquor ）などを用いるこ
とができる。また、無気塩類としては、硫安、燐酸二カ
リ、硫酸マグネシウム、尿素などを使用することができ
る。 また、場合によっては、培地中に菊酸エステルま
たはＤＶ酸エステルもしくは脂肪酸エステル類を添加す
ることもできる。
Ｏ−１２９５８株及びアルスロバクターＳＣ−６−９８
−２８株の培養は常法に従って液体培養、例えば滅菌し
た液体培地に微生物を接種し、通常２０〜４０℃で１〜
８日間振とう培養を行うことができる。また、必要に応
じて固体培養を行うこともできる。培地の組成について
は、通常の微生物培養に用いられるもので、特に制限は
なく、例えば炭素源および窒素源として、グルコース、
澱粉、デキストリン、糖蜜、油脂類、大豆粉、コーンス
ティープリカー（Corn steep liquor ）などを用いるこ
とができる。また、無気塩類としては、硫安、燐酸二カ
リ、硫酸マグネシウム、尿素などを使用することができ
る。 また、場合によっては、培地中に菊酸エステルま
たはＤＶ酸エステルもしくは脂肪酸エステル類を添加す
ることもできる。
【００１３】発明の微生物を利用して、一般式化６
【化６】 （式中、ＲはＣ1 〜Ｃ4 のアルキル基を表し、Ｘはメチ
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。） で表される化合物であるラセミ菊酸エステル（またはラ
セミＤＶ酸エステル）の不斉加水分解反応を行うに際、
微生物を培養した培養液、菌体懸濁液、エステラーゼ抽
出液またはその濃縮液などのエステラーゼ含有物、ある
いはこれらの処理物、例えば粗製エステラーゼ、精製エ
ステラーゼを含有する水溶液と、一般式化７
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。） で表される化合物であるラセミ菊酸エステル（またはラ
セミＤＶ酸エステル）の不斉加水分解反応を行うに際、
微生物を培養した培養液、菌体懸濁液、エステラーゼ抽
出液またはその濃縮液などのエステラーゼ含有物、ある
いはこれらの処理物、例えば粗製エステラーゼ、精製エ
ステラーゼを含有する水溶液と、一般式化７
【化７】 （式中、ＲはＣ1 〜Ｃ4 のアルキル基を表し、Ｘはメチ
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。） 。で示されるラセミ菊酸エステルま
たはラセミＤＶ酸エステルを混合し、攪拌または振とう
することにより行われる。
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。） 。で示されるラセミ菊酸エステルま
たはラセミＤＶ酸エステルを混合し、攪拌または振とう
することにより行われる。
【００１４】必要に応じて、微生物またはエステラーゼ
を固定化して用いることも可能である。反応温度として
は２０〜７０℃が適当であり、好ましくは３０〜６０℃
である。反応中のｐＨは、ｐＨ４〜１１、好ましくはｐ
Ｈ７〜１０である。次に、このようにして不斉加水分解
反応を行った後、生成したカルボン酸と未反応のエステ
ルを分離回収する。この分離回収に際しては溶媒抽出、
カラムクロマトグラフィー、分別蒸留などの操作を適宜
採用することができる。例えば、反応液をメチルイソブ
チルケトン、エーテルあるいはトルエンなどの有機溶媒
で抽出し、抽出物を減圧で分別蒸留し、生成した菊酸ま
たはＤＶ酸と未反応のエステルを分離する。 なお、未
反応のエステルはラセミ化などの方法によって原料であ
る一般式化８
を固定化して用いることも可能である。反応温度として
は２０〜７０℃が適当であり、好ましくは３０〜６０℃
である。反応中のｐＨは、ｐＨ４〜１１、好ましくはｐ
Ｈ７〜１０である。次に、このようにして不斉加水分解
反応を行った後、生成したカルボン酸と未反応のエステ
ルを分離回収する。この分離回収に際しては溶媒抽出、
カラムクロマトグラフィー、分別蒸留などの操作を適宜
採用することができる。例えば、反応液をメチルイソブ
チルケトン、エーテルあるいはトルエンなどの有機溶媒
で抽出し、抽出物を減圧で分別蒸留し、生成した菊酸ま
たはＤＶ酸と未反応のエステルを分離する。 なお、未
反応のエステルはラセミ化などの方法によって原料であ
る一般式化８
【化８】 （式中、ＲはＣ1 〜Ｃ4 のアルキル基を表し、Ｘはメチ
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。） で示されるラセミ菊酸エステル（またはラセミＤＶ酸エ
ステル）に導かれる。
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。） で示されるラセミ菊酸エステル（またはラセミＤＶ酸エ
ステル）に導かれる。
【００１５】
【実施例】次に、実施例および参考例により、本発明を
詳細に説明するが、本発明は、この実施例にのみ限定さ
れるものではない。
詳細に説明するが、本発明は、この実施例にのみ限定さ
れるものではない。
【００１６】実施例１ アルスロバクター・グロビフォルミス（Arthrobacter g
lobiformis）ＩＦＯ−１２９５８株を可溶性澱粉１. ５
％、ポリペプトン０. ７％、酵母エキス０. ５％及び燐
酸二カリ０. ５％を含む液体培地を用いて、３０℃で培
養した。対数増殖期に達した時に培養液４ｍｌを採取
し、遠心分離操作により菌体を分離取得した。この菌体
を５ｍｌの０. １Ｍコハク酸−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ
５. ５）で洗浄した後、０. ０４％ＮＴＧ水溶液で２時
間処理した。遠心分離操作により分離取得した菌体を、
５ｍｌの燐酸緩衝液（ｐＨ７. ０）で洗浄し、上記組成
の培地に２％寒天を追加し、１０ｍＭ濃度のラセミ菊酸
エチルエステルを懸濁させた寒天培地に植菌した。３０
℃で培養し、生育して集落を形成した微生物株を釣菌
し、再度、ラセミ菊酸エチルエステルを懸濁させた寒天
培地に塗布植菌した。ここで生育して集落を形成した微
生物について、酪酸メチル加水分解活性を測定し、その
活性がアルスロバクター・グロビフォルミス（Arthroba
cter globiformis）ＩＦＯ−１２９５８株より高いもの
を選抜した。ここで選抜された微生物について、ラセミ
菊酸エチル加水分解活性を測定し、その活性が最も高か
った微生物を選抜し、アルスロバクターＳＣ−６−９８
−２８株を得た。
lobiformis）ＩＦＯ−１２９５８株を可溶性澱粉１. ５
％、ポリペプトン０. ７％、酵母エキス０. ５％及び燐
酸二カリ０. ５％を含む液体培地を用いて、３０℃で培
養した。対数増殖期に達した時に培養液４ｍｌを採取
し、遠心分離操作により菌体を分離取得した。この菌体
を５ｍｌの０. １Ｍコハク酸−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ
５. ５）で洗浄した後、０. ０４％ＮＴＧ水溶液で２時
間処理した。遠心分離操作により分離取得した菌体を、
５ｍｌの燐酸緩衝液（ｐＨ７. ０）で洗浄し、上記組成
の培地に２％寒天を追加し、１０ｍＭ濃度のラセミ菊酸
エチルエステルを懸濁させた寒天培地に植菌した。３０
℃で培養し、生育して集落を形成した微生物株を釣菌
し、再度、ラセミ菊酸エチルエステルを懸濁させた寒天
培地に塗布植菌した。ここで生育して集落を形成した微
生物について、酪酸メチル加水分解活性を測定し、その
活性がアルスロバクター・グロビフォルミス（Arthroba
cter globiformis）ＩＦＯ−１２９５８株より高いもの
を選抜した。ここで選抜された微生物について、ラセミ
菊酸エチル加水分解活性を測定し、その活性が最も高か
った微生物を選抜し、アルスロバクターＳＣ−６−９８
−２８株を得た。
【００１７】実施例２ ５００ml三角フラスコに液体培地（水１Ｌに可溶性澱粉
３０ｇ、ポリペプトン７ｇ、酵母エキス５ｇ及び燐酸二
カリ５ｇを溶解し、ｐＨ5.0 とする。）１００mlを入れ
て滅菌した後、ＳＣ−６−９８−２８株の斜面培養から
１白金耳接種し、３０℃で２４時間回転振とう培養し
た。２. ５Ｌ容の小型発酵槽（丸菱バイオエンジ社製、
ＭＤ２５０型）に滅菌した液体培地（水１Ｌに可溶性澱
粉６０ｇ、ポリペプトン１０ｇ、酵母エキス２ｇ及び燐
酸二カリ５ｇを溶解し、ｐＨ5.0 とする。）１０００ml
を仕込み、そこへ上記の三角フラスコで培養した培養液
１０mlを接種した。３Ｌ／分で通気しつつ、７５０ｒｐ
ｍで攪拌を行い、４３時間培養したところ、培養液の濁
度（ＯＤ660 ）は、１９. ３であった。ここで得られた
培養液の１００mlから遠心分離操作により菌を分離取得
した。得られた菌体を２５mlの０. ５Ｍ炭酸緩衝液（ｐ
Ｈ１０）に懸濁し、ラセミ第一菊酸エチルエステル（ト
ランス体／シス体＝９０／１０）０. ５ｇを加えて、４
０℃で８時間攪拌し、反応させた。反応後、反応液を濃
塩酸でｐＨ2.0 以下とした後、メチルイソブチルケトン
で抽出した。抽出物に内部標準物質（ジメチルフタレー
ト）を加え、ガスクロマトグラフィー（カラム：10% Sh
inchrom F51＋1%燐酸、 2.1m、180 ℃）で分析し、生
成した菊酸のモル量を測定し、下記式により菌体量あた
りの菊酸エチルエステル加水分解活性を求めたところ、
９. ５μmol/hr/ml/ODであった。
３０ｇ、ポリペプトン７ｇ、酵母エキス５ｇ及び燐酸二
カリ５ｇを溶解し、ｐＨ5.0 とする。）１００mlを入れ
て滅菌した後、ＳＣ−６−９８−２８株の斜面培養から
１白金耳接種し、３０℃で２４時間回転振とう培養し
た。２. ５Ｌ容の小型発酵槽（丸菱バイオエンジ社製、
ＭＤ２５０型）に滅菌した液体培地（水１Ｌに可溶性澱
粉６０ｇ、ポリペプトン１０ｇ、酵母エキス２ｇ及び燐
酸二カリ５ｇを溶解し、ｐＨ5.0 とする。）１０００ml
を仕込み、そこへ上記の三角フラスコで培養した培養液
１０mlを接種した。３Ｌ／分で通気しつつ、７５０ｒｐ
ｍで攪拌を行い、４３時間培養したところ、培養液の濁
度（ＯＤ660 ）は、１９. ３であった。ここで得られた
培養液の１００mlから遠心分離操作により菌を分離取得
した。得られた菌体を２５mlの０. ５Ｍ炭酸緩衝液（ｐ
Ｈ１０）に懸濁し、ラセミ第一菊酸エチルエステル（ト
ランス体／シス体＝９０／１０）０. ５ｇを加えて、４
０℃で８時間攪拌し、反応させた。反応後、反応液を濃
塩酸でｐＨ2.0 以下とした後、メチルイソブチルケトン
で抽出した。抽出物に内部標準物質（ジメチルフタレー
ト）を加え、ガスクロマトグラフィー（カラム：10% Sh
inchrom F51＋1%燐酸、 2.1m、180 ℃）で分析し、生
成した菊酸のモル量を測定し、下記式により菌体量あた
りの菊酸エチルエステル加水分解活性を求めたところ、
９. ５μmol/hr/ml/ODであった。
【００１８】加水分解活性は、次の式に従って、算出し
た。加水分解活性( μmol/hr/ml/OD) ＝生成した菊酸の
量( μmol)÷反応時間(hr)÷反応に用いた培養液量(ml)
÷培養液の濁度（ＯＤ660 ）
た。加水分解活性( μmol/hr/ml/OD) ＝生成した菊酸の
量( μmol)÷反応時間(hr)÷反応に用いた培養液量(ml)
÷培養液の濁度（ＯＤ660 ）
【００１９】実施例３ アルスロバクターＳＣ−６−９８−２８株を実施例２と
同様にして、小型発酵槽を用いて２９時間培養した（培
養液の 濁度（ＯＤ660 ）＝１８. １）。 培養液３０
０mlから遠心分離操作により、菌体量あたりのラセミ菊
酸エチルエステル加水分解活性が１０．５μmol /hr/ml
/OD の菌体を得た。 得られた菌体を２５mlの０．５Ｍ
炭酸緩衝液（ｐＨ１０）に懸濁し、ラセミ菊酸エチルエ
ステル（トランス体／シス体＝９５／５）０．４５ｇ
（２．３ｍｍｏｌ）を加えて、４０℃で４６時間攪拌
し、反応させた。 以後、実施例１と同様の操作を行
い、生成した菊酸を定量したところ、０．９５ｍｍｏｌ
であった。ここで得られた菊酸を３，５−ジクロロアニ
リンとのアミド化合物に誘導した後、光学活性カラムを
用いた液体クロマトグラフィー〔カラム：SUMICHIRAL O
A-2100（住化分析センター）、溶媒：ヘキサン／１,２
−ジクロロエタン＝１７／３〕により、立体異性体型比
を分析したところ、（＋）体／（−）体の比は９９．８
／０．２であった。また、すべてトランス体であり、シ
ス体はまったく含まれていなかった。
同様にして、小型発酵槽を用いて２９時間培養した（培
養液の 濁度（ＯＤ660 ）＝１８. １）。 培養液３０
０mlから遠心分離操作により、菌体量あたりのラセミ菊
酸エチルエステル加水分解活性が１０．５μmol /hr/ml
/OD の菌体を得た。 得られた菌体を２５mlの０．５Ｍ
炭酸緩衝液（ｐＨ１０）に懸濁し、ラセミ菊酸エチルエ
ステル（トランス体／シス体＝９５／５）０．４５ｇ
（２．３ｍｍｏｌ）を加えて、４０℃で４６時間攪拌
し、反応させた。 以後、実施例１と同様の操作を行
い、生成した菊酸を定量したところ、０．９５ｍｍｏｌ
であった。ここで得られた菊酸を３，５−ジクロロアニ
リンとのアミド化合物に誘導した後、光学活性カラムを
用いた液体クロマトグラフィー〔カラム：SUMICHIRAL O
A-2100（住化分析センター）、溶媒：ヘキサン／１,２
−ジクロロエタン＝１７／３〕により、立体異性体型比
を分析したところ、（＋）体／（−）体の比は９９．８
／０．２であった。また、すべてトランス体であり、シ
ス体はまったく含まれていなかった。
【００２０】実施例４ 実施例３で得られた培養液４００mlから分離取得した菌
体を２５mlの１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ１０）に懸濁し、こ
れにラセミＤＶ酸エチルエステル（トランス体／シス体
＝５５／４５）０．５５ｇを加え、５０℃で５０時間攪
拌し、反応させた。その後、実施例１と同様の操作によ
り、抽出し、生成したＤＶ酸の立体異性対比を測定し
た。その結果、生成したＤＶ酸の（＋）体／（−）体の
比は９９．６／０．４であり、トランス体／シス体の比
は９５．８／４．２であった。
体を２５mlの１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ１０）に懸濁し、こ
れにラセミＤＶ酸エチルエステル（トランス体／シス体
＝５５／４５）０．５５ｇを加え、５０℃で５０時間攪
拌し、反応させた。その後、実施例１と同様の操作によ
り、抽出し、生成したＤＶ酸の立体異性対比を測定し
た。その結果、生成したＤＶ酸の（＋）体／（−）体の
比は９９．６／０．４であり、トランス体／シス体の比
は９５．８／４．２であった。
【００２１】参考例１ アルスロバクター・グロビフォルミスＩＦＯ−１２９５
８株を実施例２と同様にして、培養し、濁度（Ｏ
Ｄ660 ）１６．０の培養液を得た。その後、実施例２と
同様にして、菌体量あたりの第一菊酸エチルエステル加
水分解活性を求めたところ、３．２μmol/hr/ml/OD で
あった。
８株を実施例２と同様にして、培養し、濁度（Ｏ
Ｄ660 ）１６．０の培養液を得た。その後、実施例２と
同様にして、菌体量あたりの第一菊酸エチルエステル加
水分解活性を求めたところ、３．２μmol/hr/ml/OD で
あった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭59−210892（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−251099（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12P 7/40 C12N 1/20 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (3)
- 【請求項１】アルスロバクター属に属する微生物である
アルスロバクター（Arthrobacter）ＳＣ−６−９８−２
８株(FERM P-11851)、その培養物または微生物菌体を、
一般式化１ 【化１】 （式中、ＲはＣ1 〜Ｃ4 のアルキル基を表し、Ｘはメチ
ル基または、塩素原子を表す。本式は、立体関係を表す
ものではない。）で示されるラセミ菊酸エステルまたは
ラセミ３−（２，２−ジクロロビニル）−２，２−ジメ
チルシクロプロパンカルボン酸エステルに作用させて、
これを不斉加水分解することを特徴とする一般式化２ 【化２】 ( 式中、Ｘはメチル基または、塩素原子を表す。本式
は、立体関係を表すものではない。）で示される（＋）
−菊酸または（＋）−３−（２，２−ジクロロビニル）
−２，２−ジメチルシクロプロパンカルボン酸の生化学
的製造法 - 【請求項２】アルスロバクター属に属する微生物である
アルスロバクター（Arthrobacter）ＳＣ−６−９８−２
８株(FERM P-11851) - 【請求項３】 一般式化１で示されるラセミ菊酸エステル
またはラセミ３−（２，２−ジクロロビニル）−２，２
−ジメチルシクロプロパンカルボン酸エステルがトラン
ス体であり、一般式化２で示される（＋）−菊酸または
（＋）−３−（２，２−ジクロロビニル）−２，２−ジ
メチルシクロプロパンカルボン酸がトランス体である請
求項１に記載の方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP47491A JP2995870B2 (ja) | 1991-01-08 | 1991-01-08 | 新規微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP47491A JP2995870B2 (ja) | 1991-01-08 | 1991-01-08 | 新規微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04234991A JPH04234991A (ja) | 1992-08-24 |
| JP2995870B2 true JP2995870B2 (ja) | 1999-12-27 |
Family
ID=11474779
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP47491A Expired - Fee Related JP2995870B2 (ja) | 1991-01-08 | 1991-01-08 | 新規微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2995870B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| EP0959139A1 (en) * | 1998-05-15 | 1999-11-24 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Method for producing optically active cyclopropanecarboxylic acid |
| JP4501541B2 (ja) * | 2004-06-14 | 2010-07-14 | 住友化学株式会社 | 光学活性シクロプロパンカルボン酸の製造方法 |
| JP4857606B2 (ja) * | 2005-05-27 | 2012-01-18 | 住友化学株式会社 | 光学活性シクロプロパンカルボン酸の製造方法 |
| CN108486170A (zh) * | 2018-03-12 | 2018-09-04 | 江苏扬农化工股份有限公司 | 一种右旋反式二氯菊酸的制备方法 |
| CN108486171A (zh) * | 2018-03-12 | 2018-09-04 | 江苏扬农化工股份有限公司 | 一种右旋反式第一菊酸的制备方法 |
-
1991
- 1991-01-08 JP JP47491A patent/JP2995870B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04234991A (ja) | 1992-08-24 |
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