JP2001519210A - 組織再生誘導に使用する膜 - Google Patents
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- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/06—Materials or treatment for tissue regeneration for cartilage reconstruction, e.g. meniscus
Abstract
Description
で使用するためのコラーゲン膜インプラントに関する。 組織再生では、例えば軟骨病変の場合のように軟骨組織を再構築することは難
しいということが長い間分かっている。例えば膝および足関節のような比較的大
きな関節が最も危険であるけれども、いずれもの関節で軟骨損傷は発生し得る。
そのような損傷はトラウマ、変性疾患または離断性骨軟骨炎から生起し得る。軟
骨損傷は関節症の発症の主要な病理力学的因子である。酵素が遊離すると滑液が
炎症状態になり、次いで軟骨の表皮剥脱および関節表面の破壊が起こる。軟骨欠
損において生体内で関節軟骨を再生するための最近の試みとしては、培養された
自己発生性関節軟骨(CACs)の移植がある。しかし、この技術の成果には限
界があった。
が必要であると一般的には認められており、そしてそのマトリックスの繊維に沿
っておよび繊維間に諸細胞は成長する。つい最近、再吸収性の合成および天然双
方のマトリックスに接種したCACsの使用が提案された。しかし、ポリ乳酸、
ポリグリコール酸およびコラーゲンIまたはIIIをベースとするマトリックスを 用いて軟骨組織を再構築する試みは、移植前に生体外で軟骨細胞と一緒に詰め込
むマトリックスを必要とした。これは軟骨細胞の滅菌培養に関しての合併症、す
なわちインプラントと組織との間の界面における巨大細胞と繊維芽細胞による免
疫学的炎症性反応を生じる。
軟骨の成長により軟骨再生を行う、コラーゲンIIをベースとするマトリックスイ
ンプラントが提案されている。しかし、軟骨組織の完全な再生を行うためのこの
ようなマトリックスの能力は限定されている。
軟骨組織の再生を可能にするようなマトリックスインプラントが必要とされてい
る。そこで本発明者等は軟骨、および究極的には新規な骨組織が、周辺の結合組
織からのみならず、下にある骨または軟骨の欠損からも生体内で保護されるコラ
ーゲンIIマトリックスの使用により再構築され得るということを見いだした。考
えられるところによれば、それ自体がマトリックス中へのあらゆる周辺組織の望
ましくない内方成長を防止することができるか、またはこの効果を達成するため
にその欠損の部位に外科的に移植してもよいような多層膜インプラントを使用す
ることにより、これは成就され得る。
ポンジ様の開放性構造を有するマトリックス層および少なくとも一つの比較的不
浸透性の閉鎖性構造を有するバリヤ層からなる多層膜が提供される。
造を有するバリヤ層の中に浸透したりまたはその層中に入って成長したりするこ
とができないという点にある。
、血管等の天然組織細胞だけでなくあらゆる新規骨組織の、欠損部位中への迅速
な内方成長が防止されることが必要であると信じられている。これは、一方の側
の天然組織細胞の内方成長からコラーゲンマトリックスを保護するのに役立つ本
発明の二重層膜を用いて成就され得る。外科移植中、これは、反対側の天然組織
細胞の内方成長を防止するのに有効である組織移植片例えば骨膜移植片と組み合
わせて使用することができる。すなわち、例えば、骨膜移植片が骨または軟骨欠
損上のおおいになるように、最初にその移植片を正しい位置に縫合することがで
きる。次いで本発明の二重層膜を、これが移植片と接触し、そしてそのマトリッ
クス層が骨欠損に面するような方法で配置され得るようにして欠損部位に移植す
ることができる。より好ましくは、本発明の二重層膜を、バリヤ層が骨または軟
骨欠損に面するようにして、その欠損部位に最初に移植する。次いで骨膜移植片
を、これがマトリックス層に接触しているように配置する。この移植片は例えば
フィブリングルーのような生物学的に適合性の接着剤で付着されるか、または再
吸収性のポリ乳酸の(polylactic)ピンで留めるか、または必要によりもしくは
可能ならば、これが次いでいずれか周辺の結合組織の内方成長に対して不浸透性
バリヤを提供するのに役立つような方法で縫合され得る。
長を防止するのに有効であることがある。すなわち、本発明のさらに別の特徴に
よれば、主としてコラーゲンIIからなり、スポンジ様の開放性構造を有するマト
リックス層が、比較的不浸透性の閉鎖性構造を有する二つのバリヤ層の間に供給
される少なくとも三つの層からなる膜が提供される。
ができ、それにより軟骨組織の再生を行うことが可能である。しかし、軟骨組織
の再生をさらに促進するためには、生体内移植の前または後のいずれかにマトリ
ックス層に軟骨細胞を含浸させるのがよい。移植の直前に、例えば注射によりマ
トリックス層に軟骨細胞を含浸させてもよいが、一般には、その軟骨細胞は、移
植後に軟骨細胞の懸濁液を直接注射することによりマトリックス層中に導入され
得ることが考えられる。
または間葉(間質の)幹細胞から単離される同種異系細胞または自己発生性細胞
を含む細胞源から得ることができる。同種異系細胞は免疫反応および感染性合併
症の可能性を有するので、自己発生性細胞、特に自己発生性関節軟骨から軟骨細
胞を単離する方が好ましい。細胞を収集する技術は知られており、その例として
は酵素による消化または増殖培養がある。次いで収集した細胞を、身体に再導入
する前に細胞培養中で膨張させる。最適な軟骨組織再生を得るには、一般には少
なくとも106個、好ましくは少なくとも107個の細胞をマトリックス層中に含
浸すべきである。
うになり得るような天然媒体を提供するのに役立つグリコサミノグリカン(GA
Gs)、例えばヒアルロン酸、コンドロイチン6−サルフェート、ケラチンサル
フェート、デルマタンサルフェート等を含有するのが望ましい。軟骨からの場合
と同一の組成、分子量および物理学的性質を必ずしも有してはいない種々の供給
源からのグリコサミノグリカンをコラーゲンマトリックス中に混入することは可
能であるが、より好ましいグリコサミノグリカンは軟骨それ自体から抽出される
ものである。一般に、マトリックス層は1〜10重量%、例えば2〜6重量%の
グリコサミノグリカンを含有するのが好ましい。いくらかのグリコサミノグリカ
ンが不浸透性層に存在するかもしれないが、大部分はマトリックス層に存在する
。
(PGs)の一成分として存在する。PGsの形態でのGAGsの使用は、PG
sのタンパク質含有量により惹起され得る潜在的な免疫学的問題を考慮すると望
ましくない。したがって、マトリックス層は実質的にはいずれものプロテオグリ
カンを含まないのが好ましい。好都合には、これはテロペプチド(telopeptide )を含まない精製コラーゲンII物質とグリコサミノグリカンとの混合物からマト
リックス層を製造することにより成就され得る。
骨細胞のコラーゲンII繊維への付着を助けるためのコンドロネクチン、ラミニン
、フィブロネクチン、アルギン酸カルシウムまたはアンコリンII、および成長因
子例えば軟骨誘導因子(CIF)、インスリン様成長因子(IGF)、ホモダイ
マーまたはヘテロダイマーとして存在する形質転換誘発成長因子β(TGFβ)
および骨形態発生因子(BMP)例えば天然または組み換えのヒトBMP−2、
BMP−3(オステオゲニン)、BMP−4およびBMP−7(OP−1、骨形
成性タンパク質−1)を挙げることができる。BMP−2は独立して、骨形成の
二つの経路、すなわち骨の直接的形成並びに後に除去されそして骨に置き換えら
れる軟骨の形成に影響を及ぼす。種々の供給源の皮質骨からの抽出により得られ
る骨マトリックスまたは脱ミネラルされた骨マトリックスを含む、BMPsとコ
ラーゲンとの複合物は、BMP活性またはBMP/NCP軟骨発生誘発に関して
90%コラーゲンおよび10%非コラーゲン性タンパク質(NCP)からなる。
骨マトリックスに不溶性のコラーゲン性マトリックスおよびラミニンまたはフィ
ブロネクチンは、 BMPsのためのキャリヤーとして作用する。いくつかの成長
因子もまた不浸透性層に存在することができる。しかし、大部分はマトリックス
層に存在する。一般に、その膜は100μg〜5mgの成長因子を含有する。
の膜のバリヤ層は、主としてコラーゲンIおよびIIIから作られるのが好ましい 。あるいはまた、これは合成物質、例えばI型コラーゲンおよび/またはIII型 コラーゲンのようなコラーゲン物質で場合により被覆された再吸収性の合成ポリ
マー網状構造からなっていてもよい。
酸(PLA)のホモポリマーおよびコポリマー、グリコリドおよびラクチドのコ
ポリマー、ポリオルトエステルおよびポリカプロラクトンがある。これらの多く
の例は公に、例えばベーリンガーインゲルハイム社からそれらのRESOMER
範囲で入手可能である。約650〜1200の適当な分子サイズおよび余りに迅
速すぎる程ではない劣化を有するワックスとしてのPLAポリマーが好ましい。
特に好ましい生分解性ポリマーは、D−ラクチド対L−ラクチドの比率が70:
30であるポリ(D,L−乳酸)である。このような合成物質の利点は、これら が、引き裂かれずに膜インプラントを複雑な三次元の骨欠損上に伸ばすことを可
能ならしめるような高い機械的安定性を有することができる点にある。このよう
な物質はまた、縫合用にも適している。
バリヤに浸透することができないような長いコラーゲン繊維からなる。これらの
長い繊維は、高い引っ張り強度および引き裂き抵抗性を有するので、その物質は
良好な分離膜であるだけではなく、さらにまた容易に縫合可能でもある。外科に
おいては、膜インプラントは縫合可能であり、または正しい位置にピンで留める
ことが可能であることが重要である。従来提案された膜の多くではこの可能性は
得られない。本発明膜は、移植に外科的に取り扱うことができる程十分に機械的
に安定である。
る。膜のこの層は、通常さらにグリコサミノグリカンも含有するが、激しく膨張
しそして5000%もの多量の液体を吸収することができる。理想的には、この
マトリックス層は、細胞の接着および成長を可能にし、そして接種された細胞が
軟骨特異性タンパク質の合成により特徴づけられる軟骨細胞表現型を維持するこ
とができるような多孔性構造(孔の容量フラクションおよび孔のサイズ)を提供
すべきである。孔のサイズは、コラーゲンIIマトリックスを製造するのに用いる
凍結乾燥工程に左右されるが、しかし10〜120μm、例えば20〜100μm
であると考えられる。場合により、孔のサイズは約85μmであるべきである。 このような孔のサイズは、−5〜−10℃で約24時間徐々に凍結し次いで凍結
乾燥することにより、または凍結乾燥前にスラリーに重炭酸アンモニウムを加え
ることにより容易に得られる。
ゲンII物質によって提供されるのが好ましい。
によるが、一般的には2〜10mm、例えば4〜6mmであると考えられる。バリヤ
層の厚さは0.2〜2mm、例えば0.2〜0.7mmであるのが好ましい。
成物を形成しない。また、このような膜は、湿った状態または乾燥状態のいずれ
でも極めて高い引き裂き強度を有し、それが故に必要により、外科的に縫い合わ
せることができる。湿っている場合には、その物質は非常に弾性があり、それを
不揃いな形の骨欠損上に伸ばすことができる。
、それらは除去されなければならない。このような膜を酵素、溶媒または他の化
学薬品で処理して精製すること、および医薬にこれらの膜を使用することは知ら
れている。これらの物質の大部分は薄すぎるし、しかも使用が特に容易でないこ
とが非常に多い。それらのコラーゲン原繊維はそれらの本来の性質を失ってしま
っており、さらに別の不利点は、その物質が、縫合可能な物質として使用するに
は不十分な強度を有することが多いし、水膨潤性を有していないことが多いし、
しかも平滑な銀面と繊維状の肉面との間に全く相違を与えない点である。テロペ
プチドを含まない精製されたコラーゲンI型またはIII型の繊維状形態は、溶解 性がより少なく、生分解性であり、最も有利なキャリヤー物質になることが見い
だされた。
している子牛または豚の腹膜を挙げることができる。6〜7週令の若い豚(60
〜80kg重量)の腹膜が特に好ましい。 バリヤ層は好ましくは純粋な、天然の(変性されていない)不溶性コラーゲン
からなるべきであり、WO−A−95/18638号に記載の方法にしたがって製造するこ
とができる。すなわち、最初に天然膜をアルカリ例えばNaOH水溶液0.2〜4
重量%の濃度で処理する。これはアルカリに感受性であるいずれもの脂肪および
またタンパク質をケン化するのに役立つ。第2工程はその物質を酸、通常は無機
酸例えばHClで処理することである。これにより酸感受性の汚染物が除去され る。その物質を引き続き、pHが2.5〜3.5になるまで洗浄する。次いでその 膜は、平滑面または銀面、および比較的緩くて、より多く繊維状の面を有する。
その膜を100〜120℃に加熱することによって、いくらか架橋させることが
有利であることがある。
コラーゲンIおよびIIIからなるバリヤ層について上述したのと同様の操作によ って軟骨から得ることができる。アセトンで処理し、次いでn−ヘキサンのよう
な炭化水素で脂肪を抽出することにより軟骨から水を除去するのが好ましい。こ
こでエタノールのようなアルカノール、ジエチルエーテルのようなエーテルまた
はクロロホルムのような塩素化炭化水素またはこれらの混合物を使用してもよい
。次いで脱脂した物質を、いずれもの残留脂肪をケン化しそして存在するタンパ
ク質のいくらかを分解するアルカリでの処理に付す。最後に、その物質を、さら
にタンパク質分解を行う酸で処理する。その物質を水中で膨張させ、次いでコロ
イドミルに通してスラリーを得る。
−A−95/18638号により製造した平滑膜の繊維状面に塗布する。通常、コラーゲ
ンIIスラリーが容易に塗布され得るようにその膜を肉面を有する平滑表面上に、
例えばその膜の繊維状面中にすり込むことによって置く。こうしてそのスラリー
は、コラーゲン膜にしっかりと付着する所望の厚さを有する層を形成する。この
ようにして形成された二重層を次いで凍結および凍結乾燥に付して、所望の孔サ
イズを有する所望のスポンジ様構造を得る。必要により、均一の厚さを有する二
重膜を得るためにマトリックス層のいくつかを除去してもよい。三重層を製造す
るには、次いで第2の平滑膜をマトリックス層と接触するその繊維状面を有する
マトリックス層の頂上に置く。
は2〜3重量%のコラーゲンを含有する。好都合には、この混合物のpH値は2
.5〜4.5、有利には3.0〜4.0に調整されるべきである。
するのが有利である。これもまた、マトリックス層の機械的安定性を増加させそ
して身体によるそれの再吸収速度を減少させるのに役立つ。理想的には、架橋度
はマトリックスの分解速度が組織再生の速度と釣り合うような程度であるべきで
ある。物理的には、架橋は加熱により遂行され得るが、しかしこれは再吸収性の
望ましくない損失を回避するために慎重に行う必要がある。30分から5時間、
100〜120℃に加熱するのが好ましい。より好ましくは、架橋は例えば8時
間までの、UVランプを使用するUV照射により遂行され得る。
リコサミノグリカンは実際にはコラーゲンIIと反応していくらかの架橋を遂行し
、不溶性生成物を製造する。必要により、その物質を加熱することにより、また
は前述のようなUV照射によりさらに架橋を行うことができる。グリコサミノグ
リカンとコラーゲンとの反応は、周囲温度でpH2.5〜3.5において遂行する ことができる。グリコサミノグリカンの量は1〜10重量%であるのがよい。こ
のような処理の直後にその物質を凍結または凍結乾燥に付すことができる。
行ってもよい。この方法ではその物質を約4℃に冷却し、そのpH値を4℃でN
aOHの冷水溶液を添加することによりpH値6.5〜7.5まで徐々に上昇させる
。引き続き、その物質を周囲温度で15〜25時間保持する。この時間の経過後
にスラリーが形成され、そしてスラリー形成後にその物質を凍結または凍結乾燥
させることができる。
次いで空気を除去することである。この混合物を鋳型中に置き、37℃で15〜
20時間インキュベートする。微細スラリーが発生し、それを引き続き凍結し、
凍結乾燥させることができる。
の方法は最も安定な生成物を与える。しかし、沈殿が物質の塊を与えることがあ
り、その方法は極めて慎重に実施しなければならない。第2の方法はソフトで均
一な生成物を与えるが、しかしそれは第1の方法の生成物よりも可溶性である。
ロリジンのような抗菌剤またはゲンタマイシンのような抗生物質をさらに導入す
ることも可能である。
には、凍結を慎重に調整し、凍結の速度および時間、pH値および粒径を正確に 調整しなければならない。非常に小さな孔を得るには、その物質を非常に低い温
度で衝撃凍結するのがよい。
方法で、いくらかの架橋が行われる。その後、凍結乾燥した生体膜をその必要と
される厚さに調整して、マトリックス層の厚さが一般に約2mmとなるようにする
ことができる。次いで二重膜を、例えばγ−照射によりまたはエチレンオキシド
で滅菌する。強い照射、例えば25KGyの用量での60COによる滅菌は、BM Psを不活性化することがある。そのような状況では、移植前にその滅菌マトリ
ックスを滅菌塩水中でBMPsと一緒に含浸させるのがよい。
。バリヤ層は望ましくない細胞増殖を阻止する。 −軟骨欠損すなわち軟骨下プレートに浸透しない病変の修復用としておよび骨
軟骨欠損の修復における物質として。
提供する。膜のコラーゲンII含有量は、軟骨組織の再生に特に適しているが、し
かしまたその他の組織型にも適している。 すなわち、さらに別の特徴を考慮すると、本発明は組織再生誘導インプラント
として使用するための前記の膜を提供する。
を提供する。その方法は前記の膜を欠損に適用することからなるが、その膜はバ
リヤ層が、骨または軟骨の再生領域中における望ましくない組織型の内方成長を
防止するように志向されている。
はない。 実施例中、すべての工程は例えばクリーンルームのような無菌状態の下で実施
されなければならない。
水下で洗浄し、2%NaOH溶液で12時間処理する。次いでその膜を流水下で 洗浄し、0.5%HClで酸性化する。その物質がその全厚さにわたって酸性化 された(約3時間)後に、それをpH3.5になるまで洗浄する。次いでその物 質を7%塩水溶液で縮ませ、1%NaHCO3溶液で中和し、流水下で洗浄する。
次いでその物質をアセトンで脱水し、n−ヘキサンで脱脂する。
、骨および堅い切片から機械的に精製する。引き続き、その物質を流水下で30
分間洗浄する。 次いで、その物質をホモジナイザー中で3回粉砕する。サイズ減少終了時の視
覚による粒径は約8mmであった。 各軟骨片をアセトンで4回、それぞれ8時間ずつ洗浄することにより脱水した
。次いで軟骨をn−ヘキサンで4回抽出することにより脱脂する。各処理は少な
くとも8時間続けた。ヘキサン対軟骨の比率は1:10であった。 脱脂後、軟骨を飲料水中で膨張させた。水対軟骨物質の比率は10:1であっ
た。処理時間は24時間であった。 次いでその物質をNaOH(5重量%)で処理し、その際軟骨対液体の比率は 1:4であり、処理時間は32時間であった。処理中、軟骨の各片を十分に撹拌
した。引き続き、軟骨からアルカリを洗い落とした。これにより最初のpHの1 4は9〜11に減少した。溶解した不純物を完全に洗浄し、軟骨から分離した。
上記アルカリ処理から得られた液体をグリコサミノグリカン回収のために収集し
た。 次いでコラーゲン物質を、最初は1.0以下のpHの強HCl(約3重量%)で 処理した。処理時間は4〜6時間であった。 引き続き、その物質をpH値が3〜3.5に上昇するのに十分な長い時間、冷水
で洗浄した。全ての不純物は除去され、その生成物はスポンジまたは他のコラー
ゲン物質の製造に適した、塩を含まないコラーゲン塊状物であった。その目的に
関して、その軟骨塊状物は意図する結果により、脱脂、凍結ないし凍結乾燥され
得る。 前記アルカリ処理から得た抽出物はグリコサミノグリカン、アルカリ、変性タ
ンパク質および塩を含有した。その抽出物を最初にHClで中和したら、中和後 のpH値は6であった。次いでその抽出物をろ過助剤すなわち珪藻土で処理した
。これは変性タンパク質を除去する効果を有した。0.5重量%の珪藻土を抽出 物中に導入し、ろ過により変性タンパク質と一緒に除去した。 次いで上澄み液を、約10,000ダルトンで切断される分子量を有する膜を 用いた限外ろ過に付した。この方法で塩を除去して、精製グリコサミノグリカン
を得た。 こうして得られたグリコサミノグリカン溶液を前記のコラーゲン物質と混合し
て、グリコサミノグリカンを含有するコラーゲンIIマトリックスを得た。 このコラーゲンII物質は以下の性質: TG=2.8重量% GAG=3重量%(コラーゲン基準で計算された) pH値 3.5 を有した。
、繊維状面を上にしてガラスプレート上に平らに置いた。引き続き、その膜を、
前記(B)のようにして製造したコラーゲンII塊状物で完全に湿らせた。その膜を
、プレートに付着したままで全方向に平らに伸ばした。その際コラーゲンII塊状
物は膜の中にすり込んだ。 上記の非常に厚い塊状物をその膜に塗布し、そのプレートを冷蔵庫中約4℃で
一夜放置した。その後スラリーが形成された。 そのスラリーを下記の条件: 浴の温度=−12℃ 時間=40分 で凍結した。 引き続き、その凍結したスラリーを凍結乾燥し、次いで125℃に加温した。 凍結乾燥時間=14時間 コラーゲンIIマトリックス層を引き続き分割して1mmの厚さにした。
に記載のような諸性質を有する厚いコラーゲンII塊状物をその膜の中にすり込ん
だ。50gのコラーゲンII塊状物を蒸留水で100mlに希釈し、完全に撹拌した
。撹拌中、100mlのグリコサミノグリカン溶液を徐々に加えた。コラーゲンが
GAGと一緒に塊の形態で沈殿した。沈殿後、その塊をホモジネートし、得られ
た分散液をその膜に塗布した。スラリーが一夜で形成し、その処理した膜を実施
例1に記載のようにさらに加工した。
Claims (22)
- 【請求項1】 主としてコラーゲンIIからなり、スポンジ様の開放性構造を
有するマトリックス層および少なくとも一つの比較的不浸透性の閉鎖性構造を有
するバリヤ層からなる多層膜。 - 【請求項2】 単一のバリヤ層からなる請求項1記載の膜。
- 【請求項3】 マトリックス層が二つのバリヤ層の間に供給される請求項1
記載の膜。 - 【請求項4】 マトリックス層が、天然軟骨から誘導されるコラーゲンII物
質によって得られる請求項1〜3のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項5】 コラーゲンII物質が、豚のヒアリン軟骨から誘導される請求
項4記載の膜。 - 【請求項6】 コラーゲンII物質が架橋している請求項4または5記載の膜
。 - 【請求項7】 単数または複数のバリヤ層が、主としてコラーゲンIおよび
IIIから作られる請求項1〜6のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項8】 バリヤ層が、子牛または豚の腹膜から誘導される請求項7記
載の膜。 - 【請求項9】 バリヤ層が、場合によりコラーゲン物質で被覆された再吸収
性の合成ポリマー網状構造からなる請求項1〜6のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項10】 コラーゲン物質がI型および/またはIII型コラーゲンか らなる請求項9記載の膜。
- 【請求項11】 合成ポリマー網状構造がポリエステル、ポリグリコール酸
およびポリ乳酸のホモポリマーおよびコポリマー、グリコリドおよびラクチドの
コポリマー、ポリオルトエステル並びにポリカプロラクトンから選択されるポリ
マーからなる請求項9または10記載の膜。 - 【請求項12】 ポリマーが、D−ラクチド対L−ラクチドの比率が約70:
30であるポリ(D,L−乳酸)である請求項11記載の膜。 - 【請求項13】 マトリックス層が、骨髄由来の関節軟骨細胞、骨膜細胞、
心膜細胞または間葉幹細胞から単離される軟骨細胞で含浸される請求項1〜12
のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項14】 マトリックス層および/またはバリヤ層がグリコサミノグ
リカンで含浸される請求項1〜13のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項15】 グリコサミノグリカンがヒアルロン酸、コンドロイチン6
−サルフェート、ケラチンサルフェートまたはデルマタンサルフェートである請
求項14記載の膜。 - 【請求項16】 マトリックス層およびバリヤ層が実質的にプロテオグリカ
ンを含有していない請求項1〜15のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項17】 マトリックス層および/またはバリヤ層がコンドロネクチ
ン、ラミニン、フィブロネクチン、アルギン酸カルシウム、アンコリンII、成長
因子または骨形態発生因子をさらに含有する請求項1〜16のいずれか一項に記
載の膜。 - 【請求項18】 コラーゲンIIスラリーを、比較的不浸透性の閉鎖性構造を
有するバリヤ膜の表面に塗布し、次いで凍結乾燥して、スポンジ様の開放性構造
を有するマトリックス層を得ることからなる請求項1記載の膜の製造方法。 - 【請求項19】 組織再生誘導に使用するための請求項1〜17のいずれか
一項に記載の膜。 - 【請求項20】 骨または軟骨の組織の再生に使用するための請求項1〜1
7のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項21】 組織再生誘導インプラントの製造における請求項1〜17
のいずれか一項に記載の膜の使用。 - 【請求項22】 骨または軟骨再生領域中への望ましくない組織型の内方成
長をバリヤ層が防止するように志向された請求項1〜17のいずれか一項に記載
の膜を、ヒトまたはヒトでない動物の身体の骨または軟骨の欠損に適用すること
からなる上記欠損の治療方法。
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