JP2001500528A - 新規糖タンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ポリアミド骨格に結合した(ａ)異種抗原性基；または(ｂ)生理学的活性基および巨大分子、巨視的または微視的実体のいずれかを含む、ポリアミド接合体、それらの製造法およびこの接合体の治療組成物における使用。

Description

【発明の詳細な説明】 新規糖タンパク質 本発明は、新規ポリアミド接合体、その製造法および治療組成物におけるその 接合体の使用に関する。 ヒトからヒトへの移植のためのドナー臓器の不足の増加は、異種移植の可能性 への大きな興味を導く(非ヒトからヒトへの移植)。現在、研究においてブタのよ うな簡単に利用できる動物に、臓器の源として焦点を当てている。しかしながら 、ブタからヒトへの異種移植は、一連の障害に打ち勝たなければならず、その最 も即時で著しいのは超急性拒絶(HAR)である。HARは、Ga1α１,３Ga1構造(抗−α Ga1)を含む、殆ど炭水化物細胞表面エピトープに対して指向する、予め形成され た“天然”のポリクローナル抗体によりもたらされる。加えて、ブタ上皮にまた 存在するＮ−グリコシルノイラミン酸構造に対して指向する他の抗体がまた存在 し得る。 長期移植生存を達成するために、異種反応性抗体に対処する戦略が必要である 。一つの試みは、移植組織上への抗体付着の阻害剤として作用し得る、高親和性 リガンドの注射による抗体の除去である。他の試みは、イムノアフェレーシス、 血漿分離交換法の更なる発達、透析と類似の臨床的に確立された方法である。イ ムノアフェレーシスは、最初に血液細胞を分離し、次ぎに血漿を免疫親和性カラ ムを通過させ、血液細胞と抗体枯渇血漿を再混合し、血液を患者に再注入するこ とを含む、体外処理を含む。 従って、改善された親和性で、ポリクローナル異種反応性抗体に、体内的に結 合できるリガンドおよび体外的に結合できるカラム物質の必要性が存在する。 本発明は、ポリアミド骨格に結合した (ａ)異種抗原性基； または(ｂ)生理学的活性基および巨大分子、巨視的または微視的実体 のいずれかを含み、該ポリアミド骨格は式Ｉの構造要素の少なくとも一つを含み、(ｂ)の場合、式II 〔式中、ＡおよびＡ'は、互いに独立して３価架橋基； Ｒ¹およびＲ^1'は、互いに独立して直接結合またはＣ₁−Ｃ₆アルキレン； Ｘ¹およびＸ^1'は、互いに独立して−Ｃ(Ｏ)Ｏ−、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ−、−ＮＲ−、 −Ｓ−または−Ｏ−； Ｒ²およびＲ^2'は、互いに独立して直接結合または２価架橋基； Ｘ²およびＸ^2'は、互いに独立して直接結合または−Ｏ−または−ＮＲ−；ここ で、Ｒは水素、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₂アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シク ロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルケニル、Ｃ₂−Ｃ₇ヘテロシクロアルキル、Ｃ₂ −Ｃ₁₁ヘテロシクロアルケニル、Ｃ₆−またはＣ₁₀アリール、Ｃ₅−Ｃ₉ヘテロア リール、Ｃ₇−Ｃ₁₆アラルキル、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニレンおよびＣ₆−またはＣ₁₀ア リールのＣ₈−Ｃ₁₆アラルケニルまたはジ−Ｃ₆−またはＣ₁₀アリール−Ｃ₁−Ｃ₆ −アルキル；および ＹおよびＹ'は、互いに独立して直接結合または２価架橋基； ただし、Ｒ¹またはＲ^1'が直接結合であるとき、Ｘ¹またはＸ^1'は−ＮＲ−、−Ｓ −または−Ｏ−ではない〕 の構造要素の少なくとも一つを含むものであるポリアミド接合体に関する。 本発明のポリアミド骨格が１個以上の式ＩまたはIIの構造要素を含むとき、こ れらの要素は同一または異なり得る。それはホモポリマーまたはコポリマー、ま たは更に、例えば、他のアミノカルボン酸のコモノマー単位を含むコポリマーで あり得る。コポリマー骨格は、ブロックまたは統計学的ポリマーであり得る。３ 価架橋基がキラルである場合、ポリアミド骨格は、ラセミ体を含む均質または統 計学的混合物として、均質的に、Ｌ−またはＤ−配置を有するか、両方の配置の 構造要素を含む(１：１混合物)。 ポリアミド骨格の構造要素の平均合計[ｎ]は、１０から１０,０００、好まし くは５０から１,５００より好ましくは２５０から１,２００、最も好ましくは９ ００から１２００の範囲であり得る。多分散は、１.００１から２.０、好ましく は１.１から１.５、より好ましくは１.１５から１.２の範囲であり得る。 アルキルおよびアルキレン基または部分は直鎖または分枝鎖であり得る。好ま しくは、アルキルはＣ₁−Ｃ₁₈アルキル、より好ましくはＣ₁−Ｃ₄アルキルであ り、例えばメチル、エチル、ｎ−またはｉ−プロピルまたはｎ−、ｉ−またはｔ −ブチルであり得る。好ましくはアルケニルは２から７個のＣ原子を含む。アリ ールまたはヘテロアリールは、５または６員環または二つの融合環の二環式基で あり得、Ｏ−、Ｎ−およびＳ−原子からなる群から選択された１個またはそれ以 上のヘテロ原子がヘテロアリールに存在する。例は、フェニル、ナフチル、フラ ニル、ピロリル等を含む。アラルキルは、好ましくは７から１２個のＣ原子を有 し、フェニル−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、例えば、ベンジルまたはフェネチルであり得 る。アラルケニルの例は、シンナミルである。 ＡまたはＡ'は、少なくとも３原子価の単一原子、例えばＣ、ＮまたはＳｉで ルケニル、Ｃ₃−Ｃ₇シクロアルキル、フェニルまたはベンジル)。 ２価架橋基としてのＲ²またはＲ^2'は、１から３５、好ましくは１から２０、 特に１から１６個のＣ原子を含み、例えばＣ₁−Ｃ₃₅アルキレン、Ｃ₂−Ｃ₈アル ケニレン、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニレン、Ｃ₃−Ｃ₁₂シクロアルキレン、Ｃ₆−Ｃ₁₀アリ レンまたはＣ₇−Ｃ₃₅アラルキレンであり、アルキレン、アルケニレンおよびア ルキニレン基は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ(Ｏ)-、−ＳＯ₂−および−ＨＮ−から選 択される１個またはそれ以上の基で中断され得る。 架橋基Ｒ²またはＲ²は、例えば式III −Ｒ⁵−Ｘ⁵−Ｒ⁶−Ｘ⁴−Ｒ⁷− （III） 〔式中、Ｘ⁵およびＸ⁴は、互いに独立して直接結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ(Ｏ) −、−Ｃ(Ｏ)Ｏ−、−ＯＣ(Ｏ)−、−ＯＣ(Ｏ)Ｏ−、−ＳＯ₂Ｏ−、−ＯＳ Ｏ₂−、−ＯＳＯ₂Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＨＣ(Ｏ)−、−Ｃ(Ｏ)ＮＨ−、−ＮＨＣ (Ｏ)Ｏ−、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ−、−ＮＨＣ(Ｏ)ＮＨ−、−ＮＨＳＯ₂−、−ＳＯ₂Ｎ Ｈ−、−ＮＨＳＯ₂Ｏ−、−ＯＳＯ₂ＮＨ−または-ＮＨＳＯ₂ＮＨ−； Ｒ⁵およびＲ⁷は、互いに独立して直接結合、Ｃ₁−Ｃ₂₀アルキレン、Ｃ₅−または Ｃ₆−シクロアルキレン、Ｃ₆−Ｃ₁₀アリレンまたはＣ₇−Ｃ₁₂アラルキレン；そ して Ｒ⁶は直接結合、または、所望により１個またはそれ以上、好ましくは２個のＯ 原子で中断されていてもよいＣ₁−Ｃ₂₀アルキレン； ただし、Ｒ⁶が直接結合であるとき、Ｘ⁴もまた直接結合である〕 で例示できる。 好ましくはＲ²またはＲ^2'は、オキシアルキレンまたはポリオキシアルキレン 、より好ましくは２から４個のＣ原子、特に２または３個のＣ原子をアルキレン に含み、２から２０個、好ましくは２から１０個のアルキレン単位を有し、特に オキシプロピレンおよびポリオキシプロピレン、例えば、２から２０個、好まし くは２から１０個のオキシプロピレン単位を含むポリオキシプロピレンである。 異種抗原性基を含み、巨大分子、巨視的または微視的実体を含まないポリアミ ド接合体は、以後“接合体タイプＩ”と呼び、生理学的活性基および巨大分子、 巨視的または微視的実体を含むポリアミド接合体は、以後“接合体タイプII”と 呼ぶ。 接合体タイプＩにおいて、異種抗原基はポリアミド骨格に式Ｉの構造要素Ｙを 介して接合する。接合体タイプＩは、１個またはそれ以上の同一または異なる異 種抗原基を含み得る。 異種抗原基は、例えば、ＵＳ５,６９５,７５９(方法に関するその内容を本明 細書に引用して包含させる)に記載のような方法により同定できる基であり、血 液を異種移植片材料に対して透析し、例えば、異種移植片から結合抗体を除去し 、これらの抗体をエピトープの候補物の、例えば適当な免疫アッセイによるスク リーニングに使用することにより、ヒト血液から単離した異種抗体を含む。 異種抗原性基は、好ましくはα−結合Ｄ−ガラクトピラノースまたはＮ−グリ コシル−ノイラミン酸でその還元末端が終了しているオリゴサッカライド由来で あり得る。 典型的に(そして接合体タイプＩおよびIIに関して)、オリゴサッカライドは、 天然に存在するおよび修飾糖モノマーから選択された、１から２０個、好ましく は１から１５個、特に１から１０個の糖モノマーからなり得る。当業者は、天然 に存在するおよび修飾糖モノマーおよびこれらの糖モノマーを含むオリゴサッカ ライドに、有機化学および生化学の標準の作業、例えば最初にThe Chemical Soc ietyから、そして現在The Royal Society of Chemistry Londonから編集されて いるSpecialist Periodical Reports、例えば、Ferrier et al．Carbohydrate C hemistry 29 The Royal Society of Chemistry London(1997)から熟知している 。 糖モノマーの例は、Ｄ−およびＬ−アルドピラノースおよびＤ−およびＬ−ア ルドフラノース、例えばグリセルアルデヒド、エリスロース、トレオース、リボ ース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グル コース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトースおよびタロース、Ｄ− およびＬ−ケトピラノースおよびＤ−およびＬ−ケトフラノース、例えば、ジヒ ドロキシアセトン、エリスルロース、リブロース、キシルロース、プシコース、 フルクトース、ソルボースおよびタガトース、およびまたＤ−およびＬ−ジケト ピラノース、例えば、ペントジウロースおよびヘキソジウロースを含む。 糖モノマーなる用語は、また例えば、保護、部分的保護または非保護のＤ−お よびＬ−立体配置のデオキシ糖の、例示のものの修飾である糖モノマーを含み、 好ましくはフコース、ラムノースおよびジギトキソースのような２−、３−、４ −、５−および６−デオキシアルドース、グルカール、ガラクタールおよびフカ ールのような１,２−ジデオキシアルドース、および１−、３−、４−、５−お よび６−デオキシケトース、グルコサミン、マンノサミン、ガラクトサミンおよ びフコサミンのようなＤおよびＬ立体配置の２−、３−、４−、５−および６− デオキシアミノ糖、およびＮ−アシルグリコサミン、Ｎ−アシルマンノサミン、 Ｎ−アシルガラクトサミンおよびＮ−アシル−フコサミンのようなデオキシアシ ルアミノ糖、好ましくはそのＣ₁−Ｃ₄アルキルエステルである。加えて、これら の修飾は、グルコン酸またはグルクロン酸のようなアルドン酸、アルダール酸お よびウロン酸を、およびまたアスコルビン酸およびアミノ酸担持糖モノマーを意 味すると理解される。修飾糖モノマーはまた、ヘプトース、オクトース、ノノ ース、ヘプツロース、オクツロースおよびノヌロースのような６個のＣ原子より 長い炭素酸を有するもの、またＮ−アシルノイラミン酸およびＮ−アシルムラミ ン酸のような上記の基準に従って置換されたそれらの対応物も意味するとも理解 される。 もし、２個、３個、４個または５個の上記の同一または異なるモノマーが集合 した場合、得られるサッカライドはジ−、トリ−、テトラ−またはペンタサッカ ライドと呼ばれる。結合は好ましくはα−Ｏ−グリコシジックまたはβ−Ｏ−グ リコシジック、例えば(１→２)−、(１→３)−、(１→４)−、(１→５)−、(１ →６)−、(２→３)−および(２→６)−グリコシジック結合である。ジサッカラ イドの例は、例えばトレハロース、ソフォロース、コジビオース、ラミナリビオ ース、マルトース、セロビオース、イソマルトース、ゲンチビオース、スクロー スおよびラクトース、ならびに誘導体である。トリサッカライドの例は、ラフィ ノースおよびメレチトースである。更に、オリゴサッカライドは、Ｓ−、Ｎ−お よびＣ−グリコシジック結合、例えば−Ｓ−、−ＮＲ¹²−、−ＮＲ¹²Ｃ(Ｏ)−ま たは−ＣＲ¹³Ｒ¹⁴−(式中、Ｒ¹²、Ｒ¹³およびＲ¹⁴は互いに独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₂ アルキル、Ｃ₅−またはＣ₆シクロアルキル、Ｃ₅−またはＣ₆シクロアルキルメ チルまたは−エチル、フェニル、ベンジルまたはフェネチルである)を介して結 合し得る。 接合体タイプＩにおいて、以下の意味が、個々にまたは任意の組合せまたはサ ブコンビネーションで好ましい： (ａ)ＡはＣ₁−Ｃ₆アルカントリル、より好ましくはメタントリル。 (ｂ)Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₆アルキレン、より好ましくは−(ＣＨ₂)₄−； (ｃ)Ｘ¹は−ＮＲ−(式中、Ｒは上記の意味)、より好ましくはＸ¹は−ＮＨ−； (ｄ)Ｒ²は直接結合； (ｅ)Ｘ²は直接結合； (ｆ)Ｙは式IIIの基(式中、Ｒ⁵はＣ₁−Ｃ₈アルキレン、Ｘ⁵は−ＮＨ−、Ｒ⁶は直 接結合、Ｘ⁴は−Ｃ(Ｏ)−、およびＲ⁷はＣ₁−Ｃ₈アルキレン、 好ましくはＹは式IIIａ −(ＣＨ₂)_mＮＨＣ(Ｏ)(ＣＨ₂)₃− （IIIａ） (式中、ｍは１から８、好ましくは１から６)；および 式Ｉに関して−(ＣＨ₂)₃−はＳに結合する； (ｇ)以後Ｒ^3aと呼ぶ異種抗原基は、式IＶa１、IVｂ１、IVｃ１、IVｄ１またはIV ｅ１ 〔式中、個々のＲ^zは、ＯＲ^z1、ＳＲ^z1またはＮＨＸ^zＲ^z1(式中、Ｘ^zは−Ｃ(Ｏ) −、−Ｃ(Ｓ)−、−Ｓ(Ｏ)₂−ｓ、−Ｃ(Ｏ)Ｙ−または−Ｃ(Ｓ)Ｙ−であり、こ こでＹは−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン、−ＮＨ−Ｃ₁ −Ｃ₆アルキレン、−Ｏ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン、−Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン−Ｏ−、 −Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン−Ｓ−、−Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ₁−Ｃ₆アル キレン−Ｏ−Ｃ(Ｏ)Ｏ−、−Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン−Ｓ−Ｃ(Ｏ)Ｏ−または−Ｃ₁ −Ｃ₆アルキレン−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)Ｏ−およびＲ^z1は水素、Ｃ₁−Ｃ₂₀アルキル、Ｃ₂ −Ｃ₂₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₁₅シクロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₅シクロアルケニル、 Ｃ₆−Ｃ₁₀アリール、Ｃ₇−Ｃ₂₀アラルキルまたはＣ₂−Ｃ₉ヘテロアリールであり 、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アラ ルキルおよびヘテロアリールは非置換、またはＯＨ、ハロゲン、ハロ−Ｃ₁−Ｃ_{2 0} アルキル、ニトロ、Ｃ₁−Ｃ₁₈アルキル、Ｃ₁−Ｃ₈アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₈アルケ ニルオキシ、アミノ、モノ−Ｃ₁−Ｃ₁₈アルキルアミノ、ジ−Ｃ₁−Ｃ₁₈アルキル アミノ、ベンジルアミノ、ＳＯ₃Ｈ、ＳＨ、チオ−Ｃ₁−Ｃ₁₈アルキルおよびＮＨ Ｃ(Ｏ)−Ｃ₁−Ｃ₁₈アルキルからなる群から選択される置換 機で選択される；および Ｚ^zは−Ｏ−または−ＮＨＣ(Ｏ)−； 好ましくは式IVａ、IVｂ、IVｃ、IVｄ、IVｅまたはIVｆ 特に好ましいのは、式中、Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅまた はＶｆ の接合体タイプＩである。 好ましいサブグループは、式Ｉ^* 〔式中、Ａ、Ｒ¹、Ｘ¹、Ｒ²、Ｘ²およびＹは上記で定義の通りおよびＲ³は異種 抗原基〕 の少なくとも一つの構造要素、より好ましくは、式Ia1a、最も好ましくは、式Ia a 〔式中、Ｙは式IIIａの基およびＲ^03aは式IVａ、IVｂ、IVｃ、IVｄ、IVｅまたは IVｆの基〕 で示される構造要素を含む接合体タイプＩである。 特に好ましいのは、式中−Ｙ−Ｒ^03aが式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅまた はＶｆである式Iaaの少なくとも一つの構造要素を含む接合体タイプＩである。 本発明に従って、接合体タイプＩは、更に式IV 〔式中、Ａ”、Ｒ^1"、Ｘ^1"、Ｒ^2"およびＸ^2"は、独立して各々Ａ、Ｒ¹、Ｘ¹、Ｒ² およびＸに関して上記で定義の意味を有し、そして Ｒ⁸は極性基、好ましくはポリヒドロキシ−Ｃ₂−Ｃ₁₂アルキルまたは−Ｃ₃−Ｃ_{1 2} シクロアルキル、より好ましくはポリヒドロキシ−Ｃ₂−Ｃ₆アルキルまたは− Ｃ₃−Ｃ₆シクロアルキルであり、１個から６個、好ましくは２個から５個のヒド ロキシ基を有し、最も好ましくは−ＣＨ₂ＣＨＯＨＣＨ₂ＯＨである〕 の少なくとも一つの構造要素を含み得る。 式VIの好ましいサブグループの構造要素は、式VIａ 〔式中、Ｒ⁸は上記で定義の通りである〕 のものである。 特に好ましい式VIの構造要素は、式VIb1 より好ましくは式VIｂ である。 特に好ましくは、少なくとも一つの式Ｉ^*の構造要素および少なくとも一つの 式VIの構造要素を含み、式中Ａ、Ａ”、Ｒ¹、Ｒ^1"、Ｘ¹、Ｘ^1"、Ｒ²、Ｒ^2"、Ｘ² 、Ｘ^2"、Ｙ、Ｒ^3aおよびＲ⁸が上記で定義の意味を有するものである接合体タイ プＩである。 最も好ましいのは、少なくとも一つの式中−Ｙ−Ｒ^03aが式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ 、Ｖｄ、ＶｅまたはＶｆである式Iaaの構造要素および少なくとも一つの式VIｂ の構造要素を含む接合体タイプＩである。 新規接合体タイプＩにおいて、式Ｉ^*および式VIの構造要素の含量は、例えば ０.１から９９.９mol％であり、この価は、接合体タイプＩが式Ｉ^*およびVIの構 造要素のみからなる場合、合計１００％までである。式Ｉ^*の構造要素の場合、 含量は、例えば１から５０％、好ましくは１０から３０％であり得る。式VIの構 造要素の場合、含量は０から９９％、好ましくは７０から９０％であり得る。 好ましい接合体タイプＩは、構造要素の平均合計[ｎ]が２００から３００の範 囲であり、１.１から１.２の多分散を有し、式Iaaの構造要素の比率[ｘ]が５か ら３０％であるもの、または[ｎ]が９００から１２００であり、１.１から１.２ の多分散を有し、[ｘ]が５から５０％であるものである；式VIｂの構造要素の比 率[ｚ]は４５から９４％である；Ｒ^03a−Ｙ−は、同一または異なり得、式Ｖａ 、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、ＶｅおよびＶｆからなる群から選択される。 好ましい接合体タイプＩの例は、 (ａ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖで示される基であるとき、ｎが２５０、[ｘ]が２５％；＋ ７５％[ｚ]； (ｂ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖｃで示される基であるとき、ｎが２５０、[ｘ]が８％；＋ ９２％[ｚ]； (ｃ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖｃで示される基であるとき、ｎが２５０、[ｘ]が１ ６％；＋８４％[ｚ]； (ｄ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖｃで示される基であるとき、ｎが２５０、[ｘ]が４１％； ＋５９％[ｚ]； (ｅ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖｃで示される基であるとき、ｎが２５０、[ｘ]が６１％； ＋３９％[ｚ]； (ｆ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖｄで示される基であるとき、ｎが２５０、[ｘ]が２３％； ＋７７％[ｚ]； (ｇ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖｆで示される基であるとき、ｎが２５０、[ｘ]が２２％； ＋７８％[z]； (ｈ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖｃで示される基であるとき、ｎが１０００、[ｘ]が２４％ ；＋７６％[ｚ]； (ｉ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖｂで示される基であるとき、ｎが１０５０、[ｘ]が２１％ ；＋７９％[ｚ]； (ｊ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖｃで示される基であるとき、ｎが１０５０、[ｘ]が２８％ ；＋７２％[ｚ]； (ｋ)Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖｆで示される基であるとき、ｎが１０５０、[ｘ]が２５％ ；＋７５％[ｚ]；そして (ｌ)第３の式Ｉ^*の構造要素中のＲ^3a−Ｙ−が式Ｖｂ示される基であり、他の一 つが式Ｖｃ示される基、他の一つが式Ｖｆで示される基であるとき、ｎが１０５ ０、[ｘ]が２７％；＋７３％[ｚ]； 特に実施例(ｉ)から(ｌ)であるものである。 新規接合体タイプＩは、式VII （式中、Ａ、Ｒ¹、Ｘ¹、Ｒ²およびＸ²は上記で定義の通りおよびＸ³はハロゲン 、例えば、ＷＯ９７／１９１０５の記載により得られ得る） の少なくとも一つの構造要素を含むポリアミドと、式VIIIａ' Ｒ^3a−Ｙ−ＳＨ （VIIIａ'） （式中、Ｒ^3aおよびＹは上記で定義の通り） のチオールの反応を含む方法により得られる。 チオールは既知であるか、または既知の方法に従って、例えば、アミノ官能化 異種抗原、例えばオリゴサッカライドとチオラクトンを反応させることにより製 造し得る。 異種抗原がサッカライドであるとき、それらは酵素を使用して、または以下の 混合実験により、慣用の化学法に従って製造し得る。オリゴサッカライド誘導体 の製造のための酵素の使用は、例えば、ＷＯ９７／２８１７３およびＷＯ９７／ ２８１７４に記載されている。 更に少なくとも一つの式VIの構造要素を含む接合体タイプＩは、少なくとも二 つの式VIIの構造要素を含むポリアミドと、式VIIIａ'のチオールおよび式IX Ｒ⁸−ＳＨ （IX） 〔式中、Ｒ⁸は上記で定義の意味〕 のチオールからなる群から選択される１個またはそれ以上の化合物との反応を含 む工程により得ることができる。 好ましくは反応は、強い、非求核性塩基、好ましくは少なくとも一つの３級Ｎ 原子を有する有機塩基；特に２環式または多環式アミンの存在下で行い得る。例 は、キヌクリジンおよび１,８−ジアザビシクロ[５.４.０]ウンデク−７−エン( １,５−５)(ＤＢＵ)である。塩基は、少なくとも当モル量、好ましくはわずかに 過剰で用い得る。 反応は、アルカリ金属チオレートＲ^3aＳＭ(式中、Ｍはアルカリ金属、例えば ＬｉまたはＮａ)を使用しても行い得る。 極性、非プロトン性溶媒、好ましくは窒素−ジアルキル化カルボキシイミド、 ラクタム、スルフオキシドまたはスルホン、例えばジメチルホルムアミドを使用 し得る。反応は、水の添加無しまたは、例えば、ポリマーが溶液のままであるま での量で、添加して行い得る。接合体タイプＩの製造の詳細は、実施例ＡからＣ １に記載する。 新規接合体タイプＩは、興味深い特性を有する。特に、それらは体液、例えば 血液に存在するヒトポリクローナル異種反応性抗体に親和性を有し、リガンドま たは枯渇剤として有用である。好ましくは、接合体タイプＩは、異種移植片レシ ピエントへの、移植前および／または後の接合体タイプＩの例えば、注射、注入 または環流による投与を含む、異種抗体の体内的枯渇に使用する。投与量は、０ .０００１から１０、好ましくは０.０１から５、より好ましくは０.２から２mg ／kg体重／注射である。投与は、移植前および／または移植後に、抗体の除去が 治療的利点を有する限り、必要なだけ反復し得る。 新規接合体タイプＩは、異種抗原性エピトープに対する耐容性またはアネルギ ーを誘導するための、または異種抗原レセプターをＢ細胞が特異的に標的とする ための医薬として使用し得る。異種移植片レシピエントに異種移植片の移植前に 、例えば、注射により投与したとき、接合体タイプＩの投与量は、０.０００１ から１０、好ましくは０.００１から５、より好ましくは０.０２から２mg／kg体 重／注射である。投与は、耐容性を達成するまで必要な限り反復し得る。 接合体タイプＩは、単一接合体として、または異なる接合体タイプＩの混合物 それ自体として、または例えば、１個またはそれ以上の薬学的に許容される担体 または希釈剤と共に、静脈注射に適した組成物の形で投与し得る。このような混 合物は、ポリアミド骨格および／または異種抗原性基に関して異なる接合体タイ プＩを含み得る。 好ましいのは、接合体タイプＩが同一または異なる異種抗原性基を含む組成物 か、組成物が、接合体タイプＩの混合物を含み、各接合体が同一または異なる異 種抗原性基を含み、異種抗原性基は、ジサッカライド、好ましくは式IVｂの基、 トリサッカライド、好ましくは式IVｃまたはIVｄの基、またはペンタサッカライ ド、好ましくは式IVえまたはIVｆ由来であるものである。好ましくは、本組成物 は、ジサッカライド由来の基、トリサッカライド由来の基およびペンタサッカラ イド由来の基を、５から０.１：５から０.１：５から０.１、好ましくは１：１ ：１の比で含み、または接合体タイプＩの混合物を含み、各接合体は同一異種抗 原性基を含み、異種抗原性基は、ジサッカライド、トリサッカライドまたはペン タサッカリアド由来であり、接合体は、組成物中に、５から０.１：５から０.１ ：５から０.１、好ましくは１：１：１の比で含まれる。 前記に従って、本発明は更に： (ａ)医薬として、好ましくは、ヒト体液から異種抗体を除去するための薬剤とし て、また耐容性またはアネルギーの誘導における、存在する異種抗原に対するリ ガンドとして、使用する接合体タイプＩ； (ｂ)(ａ)で定義される接合体タイプＩを該体液に体内的に接触させることを含む 、異種移植片レシピエントから異種抗原性抗体を除去する方法； (ｃ)(ａ)で定義の接合体タイプＩの有効量の移植前および／または後の異種移植 片レシピエントへの、例えば、注射、注入または環流による投与を含む、処置を 必要とする患者における、異種抗原性エピトープに対する耐容性またはアネルギ ーの誘導異種抗原レセプターにＢ細胞を特異的に標的化させる方法； (ｄ)体液から異種抗体を除去するための、または異種抗原性エピトープに対する 耐容性またはアネルギーを誘導するための、またはＢ細胞を異種抗原レセプター に特異的に標的化するための方法に使用するための、(ａ)で定義の接合体タイプ Ｉまたは前記のようなこのような接合体タイプＩの混合物を含む組成物 が提供される。 接合体タイプIIにおいて、生理学的活性基は、ポリアミド骨格に式Ｉの構造要 素を介して結合し、巨大分子、巨視的または微視的実体がポリアミド骨格に式II の構造要素のＹ'を介して接合している。接合体IIは、１個またはそれ以上の同 一または異なる生理学的活性基を含み得る。接合体タイプIIは、１個またはそれ 以上の同一または異なる巨大分子、巨視的または微視的実体を含み得る。単一実 体は、１個のまたは同時に、同じポリアミド骨格由来の二個またはそれ以上の構 造要素に結合し得る。あるいは、単一実体は、同時に異なるポリアミド主鎖由来 の１個またはそれ以上の構造要素に結合し得る。 生理学的活性基の例は、アルカロイド、炭水化物、ビタミン、ペプチド、タン パク質、接合タンパク質、脂質、テルペン、オリゴヌクレオチド、抗原および抗 体に由来する基;または好ましくは多価形でそのレセプターまたは細胞性表面を 認識する他のリガンドである。好ましくは、生理学的活性基は、抗原、好ましく は異種抗原、より好ましくは、例えば、接合体タイプＩで前記のように、α−結 合Ｄ−ガラクトピラノースまたはＮ−グリコシル−ノイラミン酸で、還元末端が 終了しているオリゴサッカライド由来である。 巨大分子、微視的および巨視的実体は、血清アルブミンまたはＫＬＨのような 球状タンパク質；ポリアミド、ポリイミド、ポリエチレングリコール、ポリスチ レン、ポリアクリレート、ポリアクリルアミド、それらのコおよびブロックポリ マーおよび修飾ポリサッカライド；ガラスビーズ、シリカゲル、珪藻土および凝 集または架橋脂質単または二相、もしくは多重二相から形成された構造である。 巨大分子、微視的または巨視的実体がポリサッカライドである場合、それらは２ ０個以上の糖モノマーからなり得、分子量は数千から１００,０００,０００まで である。当業者は、循環モノサッカライド単位の性質、それらの鎖の長さおよび 分枝の程度が異なる天然および修飾ポリサッカライドを周知である。修飾天然ポ リサッカライドは、単、二および多官能性試薬またはオキシダントと天然ポリサ ッカライドの反応により得られる誘導体を含み得、それらは実質的にエーテルま たはエステル形成反応または選択的オキシダントによるポリサッカライドのヒド ロキシ基の修飾に基づき得る。特に有用なのは、架橋、好ましくは三次元的架橋 ポリサッカライドである。天然および修飾ポリサッカライドは、天然および修飾 澱粉、セルロース、デキストランおよびアガロースである。架橋、好ましくは三たはＮＨＳ−活性化Sepharose 4 Fast Flow(商品として入手可能)である。 接合体タイプIIにおいて、各Ａ、Ａ'、Ｒ¹、Ｒ^1'、Ｘ¹、Ｘ^1'、Ｒ²、Ｒ^2'、Ｘ² およびＸ^2'は、互いに独立して、個々にまたは任意の組合せまたはサブコンビ ネーションとして接合体タイプＩに関して上記の好ましい定義の一つを有し： (ｇ)Ｙ'は式IIIの基であり、式中Ｒ⁵は直接結合、Ｘ⁵は−ＮＨ−、Ｒ⁶は−[(Ｃ Ｈ₂)₂Ｏ]₂（ＣＨ₂）₂−、Ｘ⁴は−ＮＨＣ(Ｏ)−,およびＲ⁷はＣ₁−Ｃ₈アルキレン ，好ましくはＹ'は式IIIｂ −ＮＨ[(ＣＨ₂)₂Ｏ]₂(ＣＨ₂)₂ＮＨＣ(Ｏ)(ＣＨ₂)₃− （IIIｂ） の基であり、式IIに関して、−(ＣＨ₂)₃−はＳに結合する； (ｈ)以後Ｒ³と呼ぶ生理学的活性基が、上記のように式IVａ１、IVｂ１、IVｃ１ 、IVｄ１またはIVｅ１で示される基、好ましくは上記の式IVａ、IVｂ、IVｃ、IV ｄ、 IVｅまたはIVｆで示される基である； (ｉ)以後Ｒ⁴と呼ぶ巨大分子、巨視的または微視的実体が、好ましくは天然また は修飾ポリサッカライド、より好ましくはセルロース、アガロースまたはセファ ロース、特にＮＨＳ−活性化ＣＨ−Sepharose 4BまたはＮＨＳ−活性化 Sepharose 4 Fast Flow、最も好ましくはＮＨＳ−活性化Sepharose 4 Fast Flow に由来する。 特に好ましいのは、Ｒ³−Ｙ−が上記のように式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖ ｅまたはＶｆの基である接合体タイプIIである。 好ましいサブグループは、少なくとも一つの式Ｉ^** 〔式中、Ａ、Ｒ¹、Ｘ¹、Ｒ²、Ｘ²およびＹは上記で定義の通りおよびＲ³は生理 学的活性基〕 の構成要素、より好ましくは、式Ia1 の構成要素、最も好ましくは式Ｉａ 〔式中、Ｙは式IIIａおよびＲ⁰³はIVａ、IVｂ、IVｃ、IVｄ、IVｅまたはIVｆか らなる基〕 の構成要素を含む接合体タイプIIである。 特に好ましいのは、式中−Ｙ−Ｒ⁰³が式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅまた はＶｆである式Ｉａの構成要素を含む接合体タイプIIである。 特に好ましいのは、式中Ｒ⁴−Ｙ'−が式Ｖｇ の基である接合体タイプIIである。 好ましいサブグループは、少なくとも一つの式II^* 〔式中、Ａ、Ｒ¹、Ｘ¹、Ｒ²、Ｘ²およびＹは上記で定義の通りおよびＲ⁴は巨大 分子、巨視的または微視的実体である〕 の構成要素、より好ましくは、式IIa1 の構成要素、最も好ましくは式IIａ 〔式中、−Ｙ'−Ｒ⁰⁴はＶｇである〕 の構成要素を含む接合体タイプIIである。 本発明に従って、接合体タイプIIのポリアミド骨格は、上記の全ての意味およ び優先性を有する更に少なくとも一つの式VIの構造要素を含む。 特に好ましいのは、少なくとも一つの式Ｉ^**の構造要素、少なくとも一つ恩式 ＩＩ^*の構造要素および、式中Ａ、Ａ'、Ａ”、Ｒ¹、Ｒ^1'、Ｒ^1"、Ｘ¹、Ｘ^1'、Ｘ^1" 、 Ｒ²、Ｒ^2'、Ｒ^2"、Ｘ²、Ｘ^2'、Ｘ^2"、Ｙ、Ｙ'、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁸が上記で定義 の意味および優先性を有する式VIの構造要素を含む接合体タイプIIである。 最も好ましいのは、式中−Ｙ−Ｒ⁰³が式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅまｔた はＶｆの基である少なくとも一つの構成要素、式IIａの少なくとも一つの構成要 素および式VIｂの少なくとも一つの構成要素を含む接合体タイプIIである。 新規接合体タイプIIにおいて、式Ｉ^**、ＩＩ^**およびVIの構造要素の含量は、 例えば０.１から９９.９mol％であり、接合体タイプIIが式Ｉ^**、ＩＩ^*およびVI の構成要素のみを含む場合、足して１００％まであだえる。式Ｉ^**の構造要素の 場合、含量は例えば１から５０％、好ましくは１０から３０％である。式ＩＩ^* の構成要素の場合、含量は例えば０.１から２０％、好ましくは０.１から５％で ある。式VIの構成要素の場合、含量は例えば０から９８.９％、好ましくは５０ から９８.９％である。有用な比率は、以下の表に記載する： 好ましい接合体タイプIIは、構造要素の平均合成[ｎ]が２００から３０であり 、多分散が１.１から１.２、式中Ｒ⁰³−Ｙ−が式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｃｄ、Ｖｅ およびＶｆ式Ｉａの構造要素の比率[ｘ]が５から３０％、および式IIｂ(式IIａ の構造要素の中間体、下記参照) 〔式中、Ｚ-Ｙ"はＨ₂Ｎ[(ＣＨ₂)₂Ｏ](ＣＨ₂)₂ＮＨＣ(Ｏ)(ＣＨ₂)₃−〕 の比率[ｙ]が１から５％； または[ｎ]が９００から１２００の範囲で、多分散が１.１から１.２、[ｘ]が５ から５０および[ｙ]が１か５％であるものである。 好ましい接合体タイプIIの例は (ａ)Ｒ³−Ｙ−が式Ｖｃの基およびｙが２％であるとき、ｎが２５０、ｘが２５ ％；＋７３％[ｚ]； (ｂ)Ｒ³−Ｙ−が式Ｖｃの基およびｙが２.６％であるとき、ｎが２５０、ｘが１ ４％；＋８３.４％[ｚ]； (ｃ)Ｒ³−Ｙ−が式Ｖａの基およびｙが２％であるとき、ｎが２５０、ｘが２１. ５％；＋７６.５％[ｚ]； (ｄ)Ｒ³−Ｙ−が式Ｖｃの基およびｙが２.６％であるとき、ｎが１０５０、ｘが １３％；＋８４.４％[ｚ]； (ｅ)Ｒ³−Ｙ−が式Ｖｂの基およびｙが２.５％であるとき、ｎが１０５０、ｘが １６％；＋８１.５％[ｚ]； (ｆ)Ｒ³−Ｙ−が式Ｖｆの基およびｙが２.５％であるとき、ｎが１０５０、ｘが １２.５％；＋８５％[ｚ]；または (ｇ)Ｒ³−Ｙ−が式Ｖｅの基およびｙが２.５％であるとき、ｎが１０５０、ｘが １６％；＋８１.５％[ｚ]； 特に(ｄ)から(ｇ)であるものである。 新規接合体タイプIIは、上記の少なくとも二つの式VIIの構造要素を含むポリ アミドと、１個またはそれ以上の式VIII Ｒ³−Ｙ−ＳＨ （VIII） 〔式中、Ｒ³およびＹは上記で定義の通り〕 のチオール、式VIIIａ Ｚ−Ｙ"−ＳＨ （VIIIａ） 〔式中、Ｙ"は、Ｒ⁵が直接結合であり、他の意味は上記で定義の通りである式II Iの架橋基、およびＺは水素またはＸ⁴の保護基、好ましくはアミノ保護基〕のチ オールおよび適当な誘導体化巨大分子、巨視的または微視的実体から選択される １個またはそれ以上の化合物または実体と反応させることを含む方法により得る ことができる。 式VIIの構造要素と式VIIIａのチオールの反応により得られる構造要素を含む ポリアミド接合体は、保護基Ｚの除去後、簡便には更に式VIIIのチオールまたは 適当な誘導体化巨大分子、巨視的または微視的実体と反応させ得る。 “適当に誘導体化された巨大分子、巨視的または微視的実体”なる用語は、式 IIｂの構造要素と反応するのに適した少なくとも一つの官能基を担持する巨大分 子、 巨視的または微視的実体を意味すると理解される。大きな実体の結合に有用な官 能基の例は、当業者に既知であり、例えば、GabiusおよびGabius(Eds.)Lectins およびCancer 53ff，Springer Verlag，Berlin Heidelberg(1991)に記載されて いる。例は、アミン／活性化カルボキシレート(Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミ ジルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル)、アミン／エポキシド、アミ ン／イソシアネート、アミン／イソチオシアネート、アミン ミヒャエルアクセ プター(マレイミド)、チオール／チオフィルおよびアミン／アルデヒドである。 誘導体化巨大分子、巨視的または微視的実体は、巨大分子、巨視的または微視 的実体と既知の二官能性リンカーの反応により製造し得る。 式VIIIおよびVIIIａのチオールは、式VIIIａ'のチオールに関して上記のよう にして得られ得る。 更に式VIの構造要素を含む接合体タイプIIは、少なくとも３個の式VIIの構造 要素を含むポリアミドと、上記の式VIIIおよびVIIIａのチオール、適当な誘導体 化巨大分子、巨視的または微視的実体および式IXのチオールからなる群から選択 された１個またはそれ以上の化合物の反応を含む方法により得られる。特に、本 方法は、少なくとも３個の式VIIの構造要素と、上記の式VIII、VIIIａおよびIX からなる群から選択された１個またはそれ以上の化合物または実体と反応させ、 保護基Ｚを除去し、更に得られた化合物と、適当に誘導体化された巨大分子、巨 視的または微視的実体を反応させることを含み得る。 反応条件は、上記接合体タイプＩに関して記載の反応条件に従い得る。 接合体タイプIIの製造に関する非限定的詳細は、実施例ＡからＤに記載する。 新規接合体タイプIIは、興味深い特性を有する。特に、それらはヒトポリクロ ーナル異種反応性抗体に親和性を有し、体液の親和性クロマトグラフィーにおけ る吸着剤として有用である。好ましくは、体液は血液、特に血漿である。 好ましくは接合体タイプIIは、異種移植片レシピエントから、異種移植片移植 前および／または後に抗体含有体液を回収し、予め形成された抗体を接合体タイ プIIを吸着剤として含む親和性クロマトグラフィーを介して液から除去し、抗体 枯渇体液をレシピエントに再挿入することを含む、体液からの抗体の体外的除去 に使用する。 親和性クロマトグラフィーは、好ましくはカラムが、当業者に記載であり、例 えばこのようなカラムの充填、貯蔵および使用を引用して本明細書に包含させる ＵＳ５,１４９,４２５に記載の方法で接合体タイプIIで充填されている、カラム クロマトグラフィーとして行い得る。 接合体タイプIIは、単一接合体または異なる接合体タイプIIの混合物それ自体 として、または親和性クロマトグラフィーに適した組成物の形で使用し得る。こ のような混合物は、ポリアミド骨格、巨大分子、巨視的または微視的実体および ／または抗原性基に関して異なる接合体タイプIIを含み得る。 好ましいのは、接合体タイプIIが、同一または異なる異種抗原性基を含む組成 物か、または組成物が、各接合体が同一または異なる抗原性基を含む接合体タイ プIIの混合物を含み、異種抗原性基は、ジサッカライド、好ましくは式IVｂ、ト リサッカライド、好ましくは式IVｃまたはIVｄ、またはペンタサッカライド、好 ましくは式IVｅまたはIVｆ由来であるものである。 抗体を患者の体液から除去する方法は、既知の方法に従って、例えば、ＵＳ５ ,６９５,７５９の記載に従って行い得る。好ましい接触温度は、５℃から４０℃ 、好ましくは２５℃から４０℃である。体液は、直接連続して再挿入するか、そ れを集め、次いで再挿入し得る。本方法は、移植前および／または移植後に、抗 体の除去が治療的利点を有する限り、必要に応じて反復し得る。 前記に従って、本発明は更に： (ａ)好ましくは、体液の親和性クロマトグラフィーの吸着剤として使用するため の接合体タイプII； (ｂ)体液と(ａ)で定義の接合体IIを体外的に接触させ、体液を患者体内に再挿入 することを含む、ヒト体液から抗体を除去する方法； (ｃ)(ａ)で定義の接合体タイプIIまたは前記のようなこのような接合体タイプII の混合物を含む、好ましくはヒト体液から異種抗体を除去する方法に使用するた めの組成物；および (ｄ)吸着剤として接合体タイプIIまたはそれらの混合物または(ｃ)で定義の組成 物を含む、親和性クロマトグラフィーカートリッジ を提供する。 以下の実施例は、本発明を非限定的に説明する。 以下の略語を実施例中使用する：Ａｃ：アセチル；Ｂｎ：ベンジル；Ｂｚ：ベ ンゾイル；ＤＢＵ：１,８−ジアザビシクロ[５.４.０]ウンデク−７−エン；DMF ：Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド；DMTST：ジメチル−メチルチオ−スルホニウム トリフルオロメチルスルホネート；ｅｑ：当量；G1cNAc：Ｎ−アセチルグルコサ ミン；ｎ：重合度；Sepharose 4 Fast Flow：ＮＨＳ−活性化Sepharose 4 Fast Flow(Pharmacia Biotech)；TESOTf：トリエチルシリルトリフルオロメタン−ス ルホネート；ＵＤＰ−Ｇａｌ：ウリジン−Ｏ(６)−ジホスホリル−α−Ｄ−ガラ クトース；ＲＴ：室温。 SIGMAから商品として入手可能なポリリジンヒドロブロミドの平均分子量(Ｍ) および多分散性は、本化合物のスクシニル誘導体の粘性測定およびSEC-LALLS(サ イズ除外クロマトグラフィー／低角度レーザー光分散)により測定する。 出発化合物の製造 実施例Ａ１：エチルＯ−(２,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラク トピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(４−Ｏ−アセチル−２,６−ジ−Ｏ−ベンゾイ ル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド)３の製造 エチル４−Ｏ−アセチル−２,６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−チオ−β−Ｄ− ガラクトピラノシド １を、対応するメチルチオ誘導体と同様に製造し[Garegg およびOscarson，Carbohyd．Res．136:207−213(1985)]、乾燥ジエチルエーテル (４０ml)および乾燥ジクロロメタン(２５ml)中に溶解(２.１２ｇ、４.４７mmol) する。１mlのTESOTf(２２５μｌ)の乾燥ジエチルエーテル(１０ml)溶液を、−２ ５℃アルゴン下添加する。２,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラ クトピラノシルトリクロロアセトイミデート ２[７.５０ｇ、１１.１８mmol；W egmannおよびSchmidt，J．Carb．Chem．6:357−375(1987)に従って製造]の乾燥 エーテル(２２ml)および乾燥ジクロロメタン(１１ml)溶液を、次いで−２５℃ で７分に渡り添加する。１０分、−２５℃で撹拌後、ＮａＨＣＯ₃(１０％)(５０ ml)を添加し、連続して１０分激しく撹拌する。水(１００ml)を添加し、有機相 を分離する。水性相をジクロロメタン(各８０ml)で２回抽出し、有機相を水(１ ００ml)および飽和食塩水(１００ml)で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、溶媒を減 圧で留去する。粗生産物(１０.２５ｇ)の溶離液としてのヘキサン／酢酸メチル( ５：１)によるシリカゲルクロマトグラフィー(７００ｇ)により、エチルＯ−(２ ,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)− Ｏ−(４−Ｏ−アセチル−２,６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１−チオ−β−Ｄ−ガラ クトピラノシド)３を得る。 実施例Ａ２：(３−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−プロピル６−Ｏ−ベンジ ル−２−デオキシ−２−テトラクロロフタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド １４の製造 (ａ)Castro-PalominoおよびSchmidt[Tetrahedron Lett．36:5343-5346(1995)]に 従って製造した１２.５５ｇ(２０.４mmol)の１,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチ ル−２−デオキシ−２−テトラクロロフタルイミド−Ｄ−グルコピラノース９を ４.１Ｍ ＨＢｒの酢酸(３５ml)溶液で処理する。１８ｈ、ＲＴで撹拌後、混合 物をＣＨＣｌ₃(５０ml)および水性ＮａＨＣＯ₃(１０％)(４００ml)に、氷冷およ び撹拌下、注意深く添加する。１０％ＮａＨＣＯ₃での中和(ｐＨ７)の後、ＣＨ Ｃｌ₃(３回１５０ml)で抽出する。有機相を飽和食塩水(２００ml)で洗浄し、乾 燥させ(Ｎａ₂ＳＯ₄)、溶媒を減圧下留去し、粗１−ブロモ−３,４,６−トリ−Ｏ −アセチル−２−デオキシ−２−テトラクロロフタルイミド−Ｄ−グルコピラノ ース １０を得、それを続く反応に精製せずに使用する。 (ｂ)３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１−プロパノール(８.６１ｇ、４１ . ３mmol)およびシアン化水銀(１０.４５ｇ、４１.３mmol)を粗１０(１３.１５ｇ) の１６５mlの乾燥トルエン溶液に添加する。懸濁液を１８ｈ撹拌し、綿栓を介し て濾過し、溶媒を減圧下蒸発させる。残渣の溶離液としてのヘキサン／酢酸エチ ル(２：１)でのシリカゲルでのクロマトグラフィー(１.３kg)により(３−ベンジ ルオキシカルボニルアミノ)−プロピル３,４,６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デ オキシ−２−テトラクロロフタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド １１を得 る。 (ｃ)２.４mlのナトリウム(８２０mg)の乾燥メタノール(４０ml)溶液をアセテー ト１１(８.１８ｇ、１０.７mmol)の乾燥メタノール(２２０ml)溶液に添加する。 混合物をＲＴで１５分撹拌し、続いてAmberlite 15 H⁺(２.８ｇ)で１５分処理す る。濾過および減圧下での溶媒の蒸発により、(３−ベンジルオキシカルボニル アミノ)−プロピル２−デオキシ−２−テトラクロロフタルイミド-β−Ｄ−グル コピラノシド １２を得る。 (ｄ)ｐ−トルエンスルホン酸一水和物(９６mg)を、粗１２(６.４６ｇ)のアセト ニトリル(６０ml)およびα,α‘−ジメトキシ−トルエン(２ml)の溶液に添加す る。１５分、ＲＴで撹拌後、混合物を酢酸エチル(３５０ml)で希釈し、１０％水 性ＮａＨＣＯ₃(１８０ml)および続いて飽和食塩水(１８０ml)で抽出する。有機 相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、減圧で蒸発させる。残渣(６.６３ｇ)のシリカゲル クロマトグラフィー(８００ｇ)を、ヘキサン／酢酸エチル(２：１)で溶出して、 (３−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−プロピル４,６−ジ−Ｏ−ベンジリデ ン−２−デオキシ−２−テトラクロロフタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド １３を得る。 (ｅ)モレキュラーシーブ４Å(１０ｇ)およびＮａＣＮＢＨ₃(２.９１ｇ、４６.３ ５mmol)をアセタール１３(３.７４ｇ、５.１５mmol)の乾燥ＴＨＦ(１５０ml)溶 液に、０℃でアルゴン下添加する。撹拌下、エーテル性ＨＣｌを、シーズ(cedes )が形成されるまで添加する。１.５ｈ以内に、更に２部のエーテル性ＨＣｌ(各 ５ml)を添加し、０℃の撹拌を１８ｈ続ける。３回の更に５ml部のエーテル性Ｈ Ｃｌを、次いで９０分に渡り添加し、続いて氷−水(２５０ml)に４５分後に注ぐ 。フラスコをジクロロメタンでフラッシュし、混合物を１０分撹拌する。 濾過(Celite)を、ＣＨ₂Ｃｌ₂での抽出に続いて行う。水性相を、２回ＣＨ₂Ｃｌ₂ (１００ml)で抽出し、有機相を飽和食塩水(３００ml)で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾 燥させ、溶媒を減圧下除去する。残渣(５.０３ｇ)のシリカゲルクロマトグラフ ィー(６０ｇ)およびヘキサン／酢酸エチル(１：１)での溶出により、(３−ベン ジルオキシカルボニルアミノ)−プロピル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２ −テトラクロロフタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド １４を得る。 ピーク割り当ては、２−次元的¹Ｈ／¹Ｈ-相関(ＣＯＳＹ)および¹Ｈ／¹³Ｃ−相関 スペクトル分析(ＨＳＱＣ)に基く。 実施例Ａ３：(３−アセトアミドアミノ)−プロピルＯ−(α−Ｄ−ガラクトピラ ノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２− デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシド)Ａ５の製造 実施例Ａ９ｅに従って製造した８(１３mg、０.０２１６mmol)、Ｎ−アセトキ シ−スクシンイミド(３.４mg、０.０３２４mmol)、およびジイソプロピル−エチ ル−アミン(７.３μｌ、０.０４３２mmol)のＤＭＦ(１ml)溶液を、１５ｈ、ＲＴ で撹拌する。減圧での溶媒の留去およびクロマトグラフィー(５ｇのシリカゲル 、クロロホルム／メタノール／水＝３０：３０；２)によりＡ５を得る； 実施例Ａ４：３,４,６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミ ド−β−Ｄ−グルコピラノシルトリクロロアセトイミデート(３７)の製造 (ａ)実施例Ａ２ａに従った１０(１２.３ｇ、１８．７３mmol)のアセトン(１７５ ml)溶液に、水(５５ml)を添加する。１８ｈ、ＲＴでの撹拌後、溶媒を留去し、 残渣の水性溶液をトルエン(３ｘ１００ml)で抽出する。残渣の有機相のクロマト グラフィー(シリカゲル５００ｇ、ＣＨ₂Ｃｌ₂＆２％ＣＨ₃ＯＨ)により、３,４, ６−トリ−Ｏ−アセチル−２-デオキシ−２−フタルイミド−Ｄ−グルコピラノ ース(３６)(殆どβ−アノマー)を得る。 (ｂ)３６(４.０ｇ、６.９８mmol)およびトリクロロアセトニトリル(４.２ml、１ ４.８８mmol)のＣＨ₂Ｃｌ₂(２５ml)溶液に、１８ｇの粉砕乾燥Ｋ₂ＣＯ₃を添 ィー(シリカゲル、５００ｇ、ヘキサン／酢酸エチル＝２：１)により３７(β− アノマー)を得る。 実施例Ａ５：(３−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−プロピルＯ−(２,６−ジ −Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２,３,６− トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシド)３５の製造 (ａ)乾燥ラクトース２８(１００ｇ、０.２８mol)のピリジン(５００ml)懸濁液に 、塩化ベンゾイル(５２０ml、５.０mol)を、０℃および機械的撹拌下、滴下する 。４−(Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ)−ピリジンの添加後、混合物をＲＴで３日、お よび１００℃で更に２日撹拌する。反応混合物を次いで氷−水に注ぎ、酢酸エチ ルで抽出する。有機相を飽和ＮａＨＣＯ₃−溶液および食塩水で洗浄する。Ｎａ₂ ＳＯ₄での乾燥、溶媒の留去、およびピリジンとトルエンの共蒸発により、粗Ｏ −(２,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル) −(１→４)−Ｏ−(１,２,３,６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−グルコピラノー ス)(２９)がアノマー混合物として得られる。 (ｂ)２９(１５０ｇ、０.１２７mol)をジクロロメタン(５００ml)に溶解し、４. １Ｍ ＨＢｒの酢酸(１００ml)溶液を−１０℃で添加する。混合物をゆっくりＲ Ｔまで暖め、変換をＴＬＣ(石油エーテル／酢酸エチル＝３：１)で追跡する。完 了後、混合物を注意深く４Ｎ ＮａＯＨで中和し、氷−水に注ぐ。酢酸エチルで の抽出、抽出物の飽和ＮａＨＣＯ₃−溶液、食塩水、および水での洗浄、溶媒の 蒸発、残渣の高真空での乾燥により、Ｏ−(２,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンゾイ ル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(１−デオキシ−１−ブロモ −２,３,６−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−グルコピラノース)(３０)を得る 。 (ｃ)３０(１８.９ｇ、１６.７mmol)およびＮ−ベンジルオキシカルボニルプロパ ノールアミン(７.０ｇ、３３.５mmol)をトルエン(無水、１５０ml)にＡｒ下溶解 する。撹拌しながら、Ｈｇ(ＣＮ)₂(８.４５ｇ、３３.４５mmol)およびＨｇＢｒ₂ (１.２１ｇ、３.３５mmol)を添加する。混合物をＲＴで１８ｈ撹拌し、次 ／ｎ−ヘキセン／酢酸エチル５：５：２、ｖ／ｖ)で精製し、(３−ベンジルオキ シカルボニルアミノ)−プロピルＯ−(２,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル− β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２,３,６−トリ−Ｏ−ベンゾイ ル−Ｐ−Ｄ−グルコピラノシド)(３１)を得る。 (ｄ)３１(１６.３ｇ、１２.９mmol)を、Ａｒ下、ＲＴでメタノール(無水、９０m l)に溶解する。新たに調製したＮａＯＭｅのメタノール(１Ｎ、３.９ml)溶液を 添加し、本溶液を１６ｈ撹拌する。次いで、更にＮａＯＭｅ溶液(３.９ml)を添 加し、撹拌を更に７ｈ続ける。混合物を酢酸で中和し、蒸発させる。残渣をフラ ッシュクロマトグラフィー(溶離液ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ２：１、ｖ／ｖ)で精製 し、(３−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−プロピルＯ-(β−Ｄ−ガラクトピ ラノシル)−(１→４)−Ｏ−(β−Ｄ−グルコピラノシド)３２を得る。 (ｅ)３２(６.５ｇ、１２.１８mmol)のアセトン(５００ml)溶液に、ｐ−トルエン スルホン酸(７７０mg、４.０６mmol)を環流温度で添加する。２０分後、反応 混合物をＮａＨＣＯ₃−溶液(１０％)で停止させ、溶媒を蒸発させる。残渣を数 回ジクロロメタンで抽出し、水で洗浄し、乾燥および蒸発させる。粗生産物をフ ラッシュクロマトグラフィー(溶離液酢酸エチル／メタノール９：１、ｖ／ｖ)に より精製し、(３−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−プロピルＯ−(３,４−ジ −Ｏ−イソプロピリデン−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(β− Ｄ−グルコピラノシド)３３を得る。 (ｆ)３３(２.２ｇ、３.８４mmol)のピリジン(無水、６０ml)溶液に、塩化ベンゾ イル(６.６８ml、５７.６mmol)を、撹拌しながらＲＴでアルゴン下滴下する。溶 液を１６ｈ撹拌する。混合物を蒸発させ、ジクロロメタンに再溶解する。有機相 を数回１Ｎ ＨＣｌ、水で洗浄し、およびＮａＨＣＯ₃−溶液(１０％)で中和す る。乾燥後、溶媒を蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(溶離液ト ルエン／アセトン１５：１、ｖ／ｖ)で精製して、(３−ベンジルオキシカルボニ ルアミノ)−プロピルＯ−(２,６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−３,４−ジ−Ｏ−イソプ ロピリデン−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２,３,６−トリ− Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシド)(３４)を得る。 (ｇ)３４(３.４ｇ、３.１１mmol)の酢酸／水(６０ml、４：１、ｖ／ｖ)懸濁液を 、アルゴン下１００℃で４０分加熱する。混合物をＲＴに冷却し、蒸発させる。 残渣を数回トルエンと共蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー(溶離液トル エン／アセトン５：１、ｖ／ｖ)で精製し、(３−ベンジルオキシカルボニルアミ ノ)−プロピルＯ−(２,６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル) −(１→４)−Ｏ−(２,３,６−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシ ド)(３５)を得る。 実施例Ａ６：(３−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−プロピルＯ−(α−Ｄ− ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４ )−Ｏ−(２-デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→ ３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(β−Ｄ−グルコピラ ノシド)(Ａ９)の製造 (ｉ)(ａ)３７(乾燥、３.５ｇ、４.８８mmol)および３５(乾燥、２.７ｇ、２.５6 mmol)のジクロロメタン(無水、３０ml)溶液を−２０℃に冷却し、TESOTf(５８μ ｌ、０.１当量)を添加する。３ｈ後、更にTESOTf(０.２当量)を添加する。更に １時間後、反応混合物をトリエチルアミンで中和し、蒸発し、数回トルエンと共 蒸発させる。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(溶離液トルエン／アセトン ７：１、ｖ／ｖ)で精製し、(３−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−プロピル Ｏ−(２−デオキシ−２−テトラクロロフタルイミド−３,４,６−トリ−Ｏ−ア セチル−β−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(２,６−ジ−Ｏ−ベンゾ イル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２,３,６−トリ−Ｏ−ベ ンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシド)３８を得る。 (ｂ)３８(２.６４ｇ、１.６４mmol)のエタノール(無水、８０ml)溶液を、６０℃ でエチレンジアミン(２２０μｌ、３.２８mmol)とアルゴン下処理する。２ｈ後 、更なるエチレンジアミン(１１０μｌ)を添加し、更に１時間後、混合物を蒸発 し、数回トルエンと共蒸発させる。残渣をピリジン／酢酸無水物(１２０ml、２ ：１、ｖ／ｖ)で処理し、ＲＴでアルゴン下６０ｈ撹拌する。混合物を蒸発し、 数回トルエンと共蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(トルエン／ アセトン３：１、ｖ／ｖ)で精製し、(３−ベンジルオキシカルボニルアミノ)− プロピルＯ−(２−デオキシ−２−アセトアミド−３,４,６−トリ−Ｏ−アセチ ル−β−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(４−Ｏ−アセチル−２,６− ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２,３,６ −トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシド)３９を得る。 (ｃ)３９のメタノール(無水、１００ml)を、新たに調製したＮａＯＭｅ(１Ｎ、 １ml)の溶液で処理し、ＲＴでアルゴン下、１６ｈ撹拌する。混合物をＴＦＡで 中和し、蒸発させる。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(ジクロロメタン／ メタノール２：１、ｖ／ｖ)により精製し、(３−ベンジルオキシカルボニルアミ ノ)−プロピルＯ−(２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシ ル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(β−Ｄ− グルコピラノシド)４０を得る。 (ｄ)４０(２３０mg、０.３１２mmol)、ＵＤＰ−Ｇａｌ(２７３mg、０.４４７mmo l)、ＢＳＡ(１７mg)およびＭｎＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ(７３.５mg、０.３１３mmol)の２ ０mlのカコジル酸ナトリウム緩衝液(０.１Ｍ、ｐＨ７.３)の透明溶液に、β−( １→４)−ガラクトシル−トランスフェラーゼ(２.５Ｕ、５００μｌのSigma No G-5507、２５Ｕ／５ml)およびアルカリホスファターゼ(２５μｌ、Boehringer N o 108146、７５００Ｕ／４９８μｌ)を添加し、混合物を３７℃で 長さ)を通し、水で洗浄し、メタノールで溶出して、(３−ベンジルオキシカルボ ニルアミノ)−プロピルＯ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２ −デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→３)−Ｏ−( β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(β−Ｄ−グルコピラノシド)４ １を得る。 (ｅ)ＭｎＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ(３１７.２mg、１.６mmol)のＨ₂Ｏ(１９ml)および０.５ Ｍカコジル酸ナトリウム緩衝液(６.８ml、ｐＨ６.５)の溶液に、２２５mg(０.２ ５０mmol)の４１、ＵＤＰ−Ｇａｌ(２１９mg、０.３６mmol)およびＢＳＡ(２０m g)を添加する。この混合物を、３７℃で２.５mlの組換えα−(１→３)−ガラク トシル−トランスフェラーゼ[３Ｕ／ml、Joziasse et al.，Europ．J．Biochem ．191:75(1990)に従って製造]および２５μｌのウシ腸アルカリホスファターゼ( Boehringer No 108146、７５００Ｕ／４９８μｌ)と４８ｈインキュベー 洗浄し、メタノールで溶出する。残渣のシリカゲルクロマトグラフィー(ＣＨ₂Ｃ ｌ₂／ＣＨ₃ＯＨ／Ｈ₂Ｏ＝１０：２；０.２)により、Ａ９を得る。 (ii)(ａ)Ｏ−(α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラク トピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グ ルコピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)− Ｏ−(β−Ｄ−グルコピラノース)(２３)(Chem．Abstr．Reg．No．177331-58-7、 ５００mg、０.５４mmol)をピリジン(１０ml)に溶解し、酢酸無水物(５ml)をゆっ く り添加する。溶液をＲＴで一晩撹拌する。透明溶液を蒸発させ、数回トルエンと 共蒸留する。残渣を溶解し、シリカゲルのフラッシュ４０システム(溶離液トル エン／アセトン３：２ｖ／ｖ)で精製して、濃縮後、Ｏ−(２,３,４,６−テトラ −Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(２,４,６−ト リ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２−デオキ シ−２−アセトアミド−３,６−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル) −(１→３)−Ｏ−(２,４,６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシ ル)−(１→４)−Ｏ−(１,２,３,６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピ ラノース)(２４)を無色シロップとして得る。 (ｂ)２４(７７０mg、０.４９９mmol)をＤＭＦ(無水、５０ml)にアルゴン下溶解 する。モレキュラーシーブ(４Ａ、１ｇ)を添加し、混合物をＲＴで３０分撹拌す る。次いで、乾燥ヒドラジニウムアセテート(１４０mg、１.５０mmol)を混合物 し、氷水を添加する。生産物を酢酸エチルで抽出し、洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳ Ｏ₄)、溶液を蒸発乾燥させる。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、 Ｏ−(２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１ →３)−Ｏ−(２,４,６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−( １→４)−Ｏ−(２−デオキシ−２−アセトアミド−３,６−ジ−Ｏ−アセチル− β−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(２,４,６−トリ−Ｏ−アセチル− β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２,３,６−トリ−Ｏ−アセチル −β−Ｄ−グルコピラノース)(２５)を得る。 (ｃ)２５(乾燥、５７０mg、０.３８mmol)をジクロロメタン(無水、３ml)にアル ゴン下溶解させる。トリクロロアセトニトリル(６００μｌ)を添加し、続いてＤ ＢＵを、反応混合物が黄色に変わるまで(３−４滴)滴下する。混合物をＲＴで、 ＴＬＣ(トルエン／アセトン、１：１、ｖ／ｖ)で出発物質からより大きな移動を する生産物(Ｒ_f０.４８)への完全な変換が示されるまで撹拌する。溶液を注意深 く蒸発乾燥し、直接フラッシュクロマトグラフィー(溶離液トルエン／アセトン 、１：１、ｖ／ｖ)で精製して、Ｏ−(２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−α −Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(２,４,６−トリ−Ｏ−アセチル −β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２−デオキシ−２−アセトア ミド−３,６−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル)−(１→３)−Ｏ− (２,４,６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ −(２,３,６−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシル)トリクロロアセ トイミデート(２６)が無色シロップとして得られる。 (ｄ)２６(４０mg、２４.３μｍｏｌ)およびＮ−カルボベンジルオキシ−１−プ ロパノールアミン(１５.５mg、７３.０μｍｏｌ)を、アルゴン下ジクロロメタン (無水、１ml)およびｎ−ヘキサン(無水、３ml)に溶解し、約１ｇの挽いたＭＳ( ４Ａ)を次いで添加し、混合物をＲＴで３０分撹拌し、TESOTf(５μl)を添加する 。３０分後、混合物をトリエチルアミンで中和し、蒸発乾燥させる。残渣をフラ ッシュクロマトグラフィー(溶離液トルエン／アセトン３：２、ｖ／ｖ)で精製し 、(３−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−プロピルＯ−(２,３,４,６−テトラ −Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(２,４,６−ト リ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２−デオキ シ−２−アセトアミド−３,６−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル) −(１→３)−Ｏ−(２,４,６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシ ル)−(１→４)−Ｏ−(２,３,６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシ ド)２７を単離する。 (ｅ)２７(５９mg、３４.５μｍｏｌ)をメタノール(無水、１ml)に懸濁する。新 たに調製したナトリウムメチラートのメタノール(１Ｎ、１００μｌ)溶液を添加 し、混合物を一晩、ＲＴでアルゴン下撹拌する。最後に、水(０.５ml)を添加し 、撹拌を続ける。１ｈ後、溶液をＴＦＡ(１０μｌ)で中和し、蒸発乾燥させる。 残渣のフラッシュクロマトグラフィーによる精製により、Ａ９を得る。 実施例Ａ７：[３−(４−メルカプト−ブチロイル)アミノ]−プロピル２−デスオ キシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシド Ａ６の製造 溶液の３−アミノ−プロピル２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グル コピラノシド１８ａ(５００mg、１.８０mmol)およびγ−チオブチロラクトン(１ .８４ｇ、１８mmol)の１５mlの乾燥および無酸素メタノールの溶液に、トリエチ ルアミン(１.８２ｇ、１８mmol)を添加する。溶液を１６ｈ、環流下(アルゴン) 沸騰させる。溶媒を減圧下蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーする 。酢酸エチル／メタノール(３：１)での溶出により、Ａ６を得る。 実施例Ａ８：[６−(４−メルカプト−ブチロイル)アミノ]ヘキシルＯ−(α−Ｄ −ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−ガラクトピラノシド)(Ａ４)の製 造(ａ)実施例Ａ１の３の溶液(１.０ｇ、１.００４mmol)および(６−ベンジルオキ シカルボニルアミノ)−１−ヘキサノール(０.５０４ｇ、２.００８mmol)の４ml の乾燥ジクロロメタンの溶液に、粉末モレキュラーシーブ(２.０ｇ、４Å)をア ルゴン下添加し、懸濁液を２０分、ＲＴで撹拌する。モレキュラーシーブ(２.５ ｇ、４Å)を含む１ml部のDMTST(０.７７８ｇ、３.０１２mmol)のジクロロメタン (９ml)溶液を、１０分間隔で、ＲＴで撹拌し、アルゴン下を持続しながら滴下す る。７部の添加後、混合物を酢酸エチル、１０％水性ＮａＨＣＯ₃、および粉砕 氷に注ぐ。混合物を１０分撹拌し、Celite^TMで濾過する。水性相を分離し、酢酸 エチルで２回抽出する。有機相を１０％水性ＮａＣｌおよび飽和食塩水で洗浄 し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、揮発物を減圧下蒸発させる。残渣(１.６ｇ)の、ト ルエン／酢酸エチル(１０：１)で溶出するクロマトグラフィー(１５０ｇのシリ カゲル)により、(６−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ヘキシルＯ−(２,３, ４,６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ− (４−Ｏ−アセチル−２,６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド )１５を得る。 (ｂ)１５(９２５mg、０.７８１mmol)のメタノール(３０ml)および水(３ml)の溶 液に、ＬｉＯＨ・Ｈ₂Ｏ(３２８mg、７.８１mmol)を添加する。混合物を６０℃に 、アルゴン下６ｈ加熱する。溶媒を減圧下蒸発させ、残渣をＣＨＣｌ₃および水 に分配する。ＣＨＣｌ₃相を分離し、水で洗浄し、水性相をＣＨＣｌ₃で抽出する 。有機相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、蒸発させる。溶離液としてのトルエン／酢酸 エチル(１：１)でのクロマトグラフィー(１００ｇのシリカゲル)により、(６− ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ヘキシルＯ−(２,３,４,６−テトラ−Ｏ− ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピ ラノシド)１６を得る。 (ｃ)１６(４７９mg、０.５１２mmol)のジオキサン(１６ml)および水(９ml)の溶 液に、Ｐｄ(ＯＨ)₂(炭中２０％、３５０mg)をアルゴン下添加する。懸濁液を３ ６ｈ、Ｈ₂下で撹拌する。混合物をCelite^TMで濾過し、濾液を減圧下蒸発させる 。残渣をジオキサン(１６ml)および水(９ml)に再溶解させる。Ｐｄ(ＯＨ)₂(炭中 ２０％、３５０mg)の添加後、懸濁液を１８ｈ、Ｈ₂下撹拌する。濾過(Celite^TM) および溶媒の蒸発を、水中のAcrodisc^TMでの濾過の後に行う。濾液の凍結乾燥に より、６−アミノ−ヘキシルＯ−(α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ −(β−Ｄ−ガラクトピラノシド)１７を得る (ｄ)化合物１７(１００mg、０.２２７mmol)、γ−チオブチロラクトン(１９６μ ｌ、２.２７mmol)、およびトリエチルアミン(３１６μｌ、２.２７mmol)の乾燥 、無酸素ＤＭＦ(７ml)の溶液を２４ｈ、９０℃にアルゴン下加熱する。揮発物の ４０℃での蒸発および残渣(１６０mg)の溶離液としてのクロロホルム／メタノー ル／水(３０：３０：５)でのクロマトグラフィー(１０.５ｇシリカゲル)により 、Ａ４を得る。 実施例Ａ９：[３−(４−メルカプトブチロイル)アミノ]プロピルＯ−(α−Ｄ− ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４ )−Ｏ−(２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシド)(Ａ２) の製造 (ａ)新たに活性化した粉末化モレキュラーシーブ４Å(２.０ｇ)を、３(２.３ｇ 、２.３１mmol)および１４(１.１２ｇ、１.５４mmol)の乾燥ジクロロメタン(１ ０ml)溶液に添加する。懸濁液を３０分、アルゴン下で撹拌後、粉末化モレキュ ラーシーブ４Å(１.５ｇ)を含むDMTST(０.９９ｇ、３.８５mmol)のＣＨ₂Ｃｌ₂( ７.５ml)の溶液を、５部、２０分間隔で添加する。水性ＮａＨＣＯ₃(１０％)(２ ０ml)の添加後、１０分の撹拌および水(５０ml)および酢酸エチル(１５０ml)を 添加する。Celite^TMでの濾過および酢酸エチルでの洗浄後、水性相を分離し、酢 酸エチルで２回抽出する。有機相を飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ 、溶媒を減圧下留去する。粗生産物(３.４３ｇ)のヘキサン／酢酸メチル(３：１ )により溶出するシリカゲルクロマトグラフィー(５５０ｇ)により、(３-ベンジ ルオキシカルボニルアミノ)−プロピルＯ−(２,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンジ ル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(４−Ｏ−アセチル−２,６ −ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(６−Ｏ −ベンジル−２−デオキシ−２−テトラクロロフタルイミド−β−Ｄ−グルコピ ラノシド)４を得る。 (ｂ)４(１.４１２ｇ、０.８５０mmol)、１,２−ジアミノエタン(８６μｌ)、お よびエタノール(４０ml)の混合物を、アルゴン下、６０℃に加熱する。１４０ 分後、更に１,２−ジアミノエタン(３６μｌ)を添加し、加熱を１ｈ続ける。次 いで、溶媒を減圧下蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーする(１７ ０ｇ)。ＣＨ₂Ｃｌ₂／２−プロパノール(１５：１)での溶出により、(３−ベンジ ルオキシカルボニルアミノ)−プロピルＯ−(２,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンジ ル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(４−Ｏ−アセチル−２,６ −ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(６−Ｏ −ベンジル−２−デオキシ−３−アミノ−β−Ｄ−グルコピラノシド)５を得る 。 (ｃ)酢酸無水物(１５ml)を、アミン５(９７５mg、０.６９９mmol)のピリジン(１ ５ml)溶液に添加する。１８ｈ、ＲＴで撹拌後、溶媒および試薬を、４０℃で減 圧下蒸発させる。残渣の(１.２６ｇ)の、溶離液としてのジクロロメタン／２− プロパノール(１５：１)でのシリカゲルクロマトグラフィー(１２５ｇ)により、 (ベンジルオキシカルボニルアミノ)−プロピルＯ−(２,３,４,６−テトラ−Ｏ− ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(４−Ｏ−アセチル− ２,６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−( ３−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセトアミノ−β− Ｄ−グルコピラノシド)６を得る。 (ｄ)水酸化リチウム一水和物(２５５mg、６.０８mmol)を、６(８９８mg、０.６ ０８mmol)のメタノール(２５ml)および水(２.５ml)の溶液に添加する。３時間１ ５分、６０℃で撹拌後、溶媒を濃懸濁液から、減圧下蒸発させる。残渣を酢酸エ チル(１５０ml)に溶解し、溶液を水(３回７０ml)および飽和食塩水(５０ml)で洗 浄する。水性洗浄液を酢酸エチルで１回抽出する。有機相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥さ せ、溶媒を蒸発させる。残渣の(７３２mg)の、ジクロロメタン／２−プロパノー ル(１０：１)、続く酢酸エチル／アセトン／２−プロパノール(５：１：１)で溶 出するシリカゲルクロマトグラフィー(１２０ｇ)により、(３-べンジルオキシカ ルボニルアミノ)−プロピルＯ−(２,３,４,６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ −ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→ ４)−Ｏ−(６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グル コピラノシド)７を得る。 (ｅ)パールマン触媒(１.４６ｇ炭上、２０％Ｐｄ(ＯＨ)₂)を、７(６１０mg、０. ５１４mmol)のジオキサン(５０ml)および水(２８ml)の溶液に添加する。懸濁液 を、Ｈ₂下、２２ｈ激しく撹拌する。濾過(Celite)後、濾液を蒸発させ、残渣を ジオキサン(５０ml)および水(２８ml)に再溶解させる。新しい触媒(１.４６ｇ炭 上、２０％Ｐｄ(ＯＨ)₂)を添加し、Ｈ₂下、撹拌を３日続ける。濾過および減圧 下の溶媒の蒸発により、２９０mg(９３％)の粗(３−アミノ)−プロピルＯ−(α −Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−( １→４)−Ｏ−(２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシド) ８を得る。 (ｆ)１００mg(０.１６６mmol)の化合物８を、５mlの乾燥、無酸素ＤＭＦに溶解 する。γ−チオブチロラクトン(０.１４４ml、１.６６mmol)およびトリエチルア ミン(０.２３１ml、１.６６mmol)の添加後、混合物を９０℃で１８ｈ、アルゴン 下加熱する。溶媒および揮発物を、真空下、４５℃で除去する。残渣(１４０mg) の、クロロホルム／メタノール／水(３０：３０：１０)でのクロマトグラフィー (１５ｇのシリカゲル)により、Ａ２を得る。 実施例Ａ１０：[３−(４−メルカプト−ブチロイル)アミノ]プロピルＯ−(α− Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１ →４)−Ｏ−(β−Ｄ−グルコビラノシド)(Ａ３)の製造 合成的に、ラクトースおよびガラクトースから標準法に従って製造した３−ア ミノプロピルＯ−(α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガ ラ クトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(β−Ｄ−グルコピラノシド)１８(７４mg、０ .１３１９mmol)、γ−チオブチロラクトン(１１４μｌ、１.３１９mmol)、ａお よびトリエチルアミン(１８４μｌ、１.３１９mmol)の乾燥、無酸素メタノール( １０ml)溶液を、環流下、１８ｈ（アルゴン）加熱する。ある不溶性物質(９mg) の濾過による除去および濾液の減圧での蒸発後、残渣(１１９mg)をシリカゲルク ロマトグラフィーする(１５ｇ)。クロロホルム／メタノール／水(３０：３０： １０)での溶出により、Ａ３を得る。実施例Ａ１１：[Ｎ−(４−メルカプトブチロイル)]−グリシノイルＮ−(α−Ｄ −ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→ ４)−Ｏ−(２-デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル)−(１ →３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(１-デオキシ−１ −アミノ−β−Ｄ−グルコピラノシド)(Ａ８)の合成 グリシノイルＮ−(α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ− ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２−デオキシ−２−アセトアミド−β− Ｄ−グルコピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→ ４)−Ｏ−(１−デオキシ−１−アミノ−β−Ｄ−グルコピラノシド)(商品として 入手可能)(２２、２０５mg、０．２２２mmol)、１−チオブチロラクトン(１９２ μｌ、２.２２mmol)、トリエチルアミン(３１０μｌ、２.２２mmol)、およびジ チオ−Ｄ／Ｌ−スレイトール(５１.４mg、０.３３３mmol)の乾燥ＤＭＦ(１０ml) 中の脱気溶液／懸濁液を、３.５ｈ、９０℃にアルゴン下加熱する。揮発物を減 圧下蒸発させ（高度真空）、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーする(２５g) 。クロロホルム／メタノール／水(３０：３０：１０)および凍結乾燥により、Ａ ８ を得る。実施例Ａ１２：[３−(４−メルカプト−ブチロイル)アミノ]−プロピルＯ−(α −Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル） −(１→４)−Ｏ−(２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシ ル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(β−Ｄ− グルコピラノシド)(Ａ１０)の合成 (ａ)Ａ９(２５mg、２３.６μｍｏｌ)を水(５ml)に溶解し、水酸化パラジウム(５ mg)を添加する。混合物を一晩、水素下ＲＴで撹拌する。触媒を、混合物の小パ ッド ノ−プロピルＯ−(α−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガ ラクトピラノシル)−(１→４)−Ｏ−(２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ −グルコピラノシル)−(１→３)−Ｏ−(β−Ｄ−ガラクトピラノシル)−(１→４ )−Ｏ−(β−Ｄ−グルコピラノシド)４２が無色粉末として得られる。 (ｂ)４２(４５０mg、０.４８５５mmol)およびジチオスレイトール(１１２mg、０ .７２８mmol)の乾燥ＤＭＦ(３０ml)の溶液に、４２０μｌのγ−チオブチロラク トンおよび６８０μｌのトリエチルアミンを添加する。脱気後、溶液を１８ｈ、 ９０℃にアルゴン下加熱する。溶媒の５０℃で減圧下での蒸発およびシリカゲル クロマトグラフィー(５０ｇ、クロロホルム／メタノール／水＝３０：３０：１ ０)により、Ａ１０を得る。 実施例Ａ１３：Ｎ−{８−[Ｎ−ジフェニル−(４−メトキシフェニル)−メチル] −アミノ−３,６−ジオキサ−１−オクチル}−４−メルカプト−ブチルアミドＡ ７の合成 (ａ)トリエチレングリコール(３９ｇ、０.２６mol)のエーテル(２００ml)および トリエチルアミン(５０ml)中の０℃に冷却した撹拌乳濁液に、メタンスルホニル クロライド(１０.１ml、０.１３mol)を３ｈの間添加する。混合物をＲＴにし、 撹拌を２０分続ける。溶媒を減圧下蒸発させ、残渣をメタノール／水(９５：５ 、３００ml)に再溶解する。ＮａＮ₃(１８.２ｇ、０.２８mol)の添加後、溶液を １８ｈ、環流下沸騰させる。次いで、溶媒を減圧下蒸発させ、残渣をエーテルお よび飽和食塩水に分配する。乾燥させた(Ｎａ₂ＳＯ₄)有機相の残渣のシリカゲル クロマトグラフィー(２６０ｇ)で、ヘキサン／酢酸エチル(２：１)で溶出し、１ ,８−ジアジド−３,６−ジオキサ−オクタン１９を得る。 (ｂ)ジアジド１９(１４.６７ｇ、０.０７３mol)のＴＨＦ(１００ml)溶液に、１. ５ｇの５％Ｐｔ炭素を添加する。混合物を１２ｈ、水素下撹拌する。Celite^TMで の濾過および減圧での溶媒の蒸発により、１,８−ジアミノ−３,６−ジオキサ− オクタン２０を得る。 (ｃ)２０(１.０ｇ、６.７６mmol)のピリジン(５ml)溶液に、ジフェニル−(４− メトキシフェニル)−メチルクロライド(２.０９ｇ、６.７６mmol)のピリジン(１ ０ml)溶液を、５℃で５分以内に添加する。３ｈ、０℃で撹拌後、溶媒を減圧下 、２０℃で蒸発させる。残渣を酢酸エチルおよび飽和食塩水に分配する。有機相 を分離し、乾燥させ(Ｎａ₂ＳＯ₄)、溶媒を留去させる。残渣(３.１ｇ)のクロマ トグラフィー(１７０ｇのシリカゲル)で、クロロホルム／メタノール／水(６５ ：２５：４)で溶出して、８−[Ｎ−ジフェニル−(４−メトキシフェニル)−メチ ル]−アミノ−３,６−ジオキサ−オクチルアミン２１を得る。 (ｄ)２１(３９５mg、０.９４mmol)、γ−ブチロラクトン(０.８１ml、９.４mmol )、およびトリエチルアミン(１.３１ml、9.４mmol)の乾燥、無酸素メタノール( １７ml)溶液を、１８ｈ、環流下沸騰させる。溶媒を減圧下除去し、残渣(６３５ mg)をシリカゲルクロマトグラフィーする(１００ｇ)。酢酸エチルでの溶出によ り、Ａ７を得る。 Ｂ 活性ポリアミド誘導体の合成 実施例Ｂ１：Ｎ(６)−クロロアセチルーポリ−Ｌ−リジン Ｂ１ａ、Ｂ１ｂおよ びＢ１ｃの合成 (ａ)５００mg(２.３９mmol当量)のポリ−Ｌ−リジン臭化水素酸(Ｍ：３０,００ ０−７０,０００)を、８mlのＤＭＦにアルゴン下懸濁させる。懸濁液を０℃に冷 却し、２.５mlの２,６−ルチジンを添加する。１ｇ(５.８５mmol)のクロロ酢酸 無水物の４mlのＤＭＦ溶液を、１５分以内に滴下する。混合物を続いてゆっくり ＲＴに暖め、５ｈ撹拌する。僅かに黄色で、僅かに濁った溶液を、１００mlのジ エチルエーテル／エタノール(２：１)に添加し、無色沈殿が形成する。濾過(最 初は真空を適用せずに、焼結ガラスフィルターを介して)に続いて、洗浄をエタ ノール、水、エタノールおよび最後にジエチルエーテルで行う。粗生産物をでき るだけ少量のＤＭＦに溶解し、再びジエチルエーテル／エタノールで沈殿させ ０)]を得る。 (ｂ)同様の方法で、Ｎ(６)−クロロアセチル−ポリ−Ｌ−リジンＢ１ｂ[Ｍ：４, ン臭化水素酸塩(Ｍ：４,０００−１５,０００)から、およびＮ(６)−クロロアセ ０)]を５０mg(０.２４mmol)のポリ−Ｌ−リジン臭化水素酸塩(Ｍ：１５０,００ ０−３００,０００)から得る。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、化合物Ｂ１ａと同一 である。 実施例Ｂ２：Ｎ(６)−クロロアセチル−ポリ−Ｄ−リジン Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよ びＢ２ｃの合成 (ａ)実施例Ｂ１(ａ)と同様にして、Ｎ(６)−クロロアセチル−ポリ−Ｄ−リジン 量)のポリ−Ｄ−リジン臭化水素酸塩(Ｍ：３０,０００−７０,０００)から、お よびＮ(６)−クロロアセチル−ポリ−Ｄ−リジンＢ２ｂ[Ｍ：４'０００−１５' 酸塩(Ｍ：４'０００−１５'０００)から得る。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータは 、各々化合物Ｂ１ａおよびＢ１ｂのものと同一である。 (ｂ)ポリ−Ｄ−リジン臭化水素酸塩(４７８mg、２.２９mmol当量；Ｍ：１５０' ０００−３００'０００)の水(５０ml)溶液を、塩基性イオン交換樹脂(Dowex^R 1x 8、２０−５０メッシュ、ＯＨ−形)を充填したカラム(２cm直径、長さ１１cm)を 通す。水でｐＨが７に到達するまで溶出し、続いて１０％水性ｐ−トルエン−ス ルホン酸でｐＨ３まで溶出する。溶出液の凍結乾燥後、残渣をＤＭＦ(１０ml)に 溶解し、２,６−ルチジンならびにクロロ酢酸無水物(８００mg)のＤＭＦ(２ml) 溶液を０℃で添加する。０℃で１８ｈ時間、アルゴン下で撹拌後、混合物をエタ ノール(１００ml)で希釈し、生産物をジエチルエーテル(２５０ml)の添加により 沈殿させる。重力濾過により回収した沈殿を、ＤＭＦ(２０ml)に再溶解し、次い で、溶液を１０分以内にエタノール(８０ml)に添加する。得られる懸濁液を、１ ６ｈ、ＲＴで撹拌し、その後ジエチルエーテル(３００ml)を２０分以内に添加す る。沈殿の減圧(高度真空)での濾過および乾燥によりＢ２ｃ[Ｍ：１５０'０００ ｃのものと同一である。 実施例Ｂ３：Ｎ(６)−クロロアセチル−ポリ−Ｄ／Ｌ−リジンＢ３ａ、Ｂ３ｂお よびＢ３ｃの合成 (ａ)２５０mg(１.１９mmol当量)のポリ−Ｄ／Ｌ−リジン臭化水素酸塩(Ｍ：３０ '０００−７０'０００)を、４mlのＤＭＦにアルゴン下懸濁させる。懸濁液を０ ℃に冷却し、１.２５mlの２,６−ルチジンを添加する。５００mg(２.９３mmol) のクロロ酢酸無水物の２mlのＤＭＦ溶液を１５分以内に滴下する。混合物を続い てゆっくりＲＴに暖め、１６ｈ撹拌する。後処理および精製を実施例Ｂ１ (ｂ)同様の方法で、Ｎ(６)−クロロアセチル−ポリ−Ｌ−リジンＢ３ｂ[Ｍ：４' リジン臭化水素酸塩(Ｍ：４'０００−１５'０００)から、およびＮ(６)−クロロ ５０)]を５００mg(２.３９２mmol当量)のポリ−Ｌ−リジン臭化水素酸塩(Ｍ：１ ５０'０００−３００'０００)から得る。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、化合物Ｂ３ ａのものと同一である。 実施例Ｃ１： 接合体タイプＩの合成 (ｉ)ポリ−Ｎ(６)−クロロアセチル−Ｌ−リジンから出発： (ａ)Ｂ１ａ(１０mg、０.０４８９mmol当量)およびチオールＡ２(１０.３mg、０. ０１４７mmol)を連続して、２.０ml乾燥および無酸素ＤＭＦにＲＴおよびアルゴ ン下で溶解する。ＤＢＵ(７.３μｌ、０.０４８９mmol)を透明溶液に添加する。 ＲＴで１ｈ撹拌後、チオグリセロール(１２.７μｌ、０.１４７mmol)およびトリ エチルアミン(３３.４μｌ、０.２４mmol)を添加し、撹拌を１８ｈ続ける。無色 溶液を１５mlのジエチルエーテル／エタノール(１：１)に滴下する。形成さ れた沈殿を、重力によりフリット漏斗により濾過し、エーテル／エタノール(１ ：１)で洗浄し、水に溶解し、得られた溶液を、ＹＭ−３膜(ＭＷ３０００カット オフ)を備えたAmicon装置を使用して限外濾過する。洗浄を、５回１０ml部の超 純水で行う。水に取りこんだフィルターチャンバーの内容物の凍結乾燥によ より、２５サッカライドの誘導体化％(ｘ＝０.２５)を伴い、得られる。 Ｂ１ａを、種々の量のＡ２、Ａ３、Ａ４またはＡ８およびチオグリセロールで 処理し、¹Ｈ−ＮＭＲ(統合)に従って種々のサッカライド誘導体化の接合体タイ プＩを得る。(ｂ)(ａ)と同様にして、Ｂ１ｂ(２０mg、９７.８μｍｏｌ当量)、Ａ２(２０.７m g、 ド誘導体化：２８％(ｘ＝０.２８)を得る。 (ｃ)Ｂ１ｃを種々の量のＡ２、Ａ４またはＡ８およびチオグリセロールで、上記 のように処理し、¹Ｈ−ＮＭＲ(統合)に従って種々のサッカライド誘導体化の接 合体タイプＩを得る (ii)(ａ)ポリ−Ｎ(６)−クロロアセチル−Ｄ−リジンから出発：Ｂ２ａ(１０mg 、４８.９μｍｏｌ当量)をＡ２(１０.３mg、１４.７μｍｏｌ)およびチオグリセ ロールで実施例Ｃ１(ｉ)ａに記載のように処理する。Acrodisc^TMを通した限外濾 過チャ ０)]が、¹Ｈ−ＮＭＲ(統合)に従って３５％サッカライドの誘導体化％(ｘ＝０. ３５)で得られる。 (ｂ)(ａ)と同様にして、Ｂ２ｃ(１００mg、４８９μｍｏｌ当量)、Ａ２(８６mg 、１ ライド誘導体化：２４％(ｘ＝０.２４)を得る。 (iii)ポリ−Ｎ(６)−クロロアセチル−Ｄ,Ｌ−リジンで出発：Ｂ３ａ(１０mg、 ０.０４８９mmol当量)をＡ２(１０.３mg、０.０１４７mmol)およびチオグリセ ５０)]を、¹Ｈ−ＮＭＲ(統合)に従って２２％サッカライドの誘導体化(ｘ＝０. ２２)で得る。 実施例Ｃ２：接合体タイプIIの前駆体の製造 (ｉ)接合体タイプII(式中、−Ｙ−Ｒ⁰³はＶｃの式(Ａ２由来、トリ))の前駆体 (ａ)ポリ−Ｎ(６)−クロロアセチル−Ｌ−リジン(Ｂ１ａ、２００mg、９７８μ ｍｏｌ当量)、チオールＡ２(１７２mg、２４４μｍｏｌ)およびチオールＡ７(１ ５.３mg、２９.３μｍｏｌ)を、乾燥、無酸素ＤＭＦ(２０ml)に溶解する。ＤＢ Ｕ(１４６μｌ、０.９７８mmol)を透明溶液に添加する。４０分、ＲＴでアルゴ ン下撹拌後、チオグリセロール(２５４μｌ、２.９３４mmol)およびトリエチル アミン(６８２μｌ、４.８９mmol)を添加し、撹拌を１８ｈ続ける。無色溶液を １００mlのエタノールに添加し、ジエチルエーテル(２００ml)を撹拌下滴下する 。形成した沈殿を、重力によりフリット漏斗により濾過して分離し、エタノール ／エーテル (１：２、３ｘ３０ml)で洗浄し、水に溶解する。液を、ＹＭ−３膜(ＭＷ３００ ０カットオフ)を備えたAmicon装置を使用して限外濾過する。水に取りこんだ濾 過チャンバーの内容物の凍結乾燥により、Ｃ６ａＩ[ｘ＝０.２５、ｙ＝０.０３ (ｂ)Ｃ６ａＩ(３６６mg)の水(２５ml)溶液に、トリクロロ酢酸(１.２ｇ)を０℃ で添加する。２ｈ、０℃で撹拌後、溶液を２Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ１１に中 和し、ＹＭ-１０膜(ＭＷ１００００カットオフ)を備えたAmicon装置を使用した 限外濾過に付す。洗浄を、３部の超純水で行う。２Ｎ ＮａＯＨ(１０滴)の濾過 チャンバーへの滴下後、水での洗浄を続ける(６部)。水に取りこんだフィルター チャンバーの内容物の凍結乾燥により、Ｃ６ｂＩ[ｘ＝０.２５、ｙ＝０.０２ ド誘導体化(ｘ＝０.２５)、および、Ｃ６ａＩのＮＭＲ−分析に基いて２％アミ ン誘導体化(ｙ＝０.０２)、Ｃ６ｂＩの¹Ｈ−ＮＭＲのモノメトキシ−トリチルシ グナルの欠失を伴い得る： 異なる重合度のポリ−Ｎ(６)−クロロアセチル−Ｌ−リジンを、チオグリセロ ールおよび種々の量のＡ７およびＡ２で、上記に記載のように処理し、¹Ｈ−Ｎ ＭＲ(統合)に従って種々のサッカライドおよびアミノ誘導体化のＣ６ｂII、Ｃ６ ｂIIIおよびＣ６ｂIVを得る。 (ii)接合体タイプII(式中、−Ｙ−Ｒ⁰³は式Ｖｂの基(Ａ４由来、ジ)、Ｖａ(Ａ６ 由来、モノ)、Ｖｆ(Ａ８由来、ペンタ)またはＶｅ(Ａ１０由来、ペンタ))の前駆 体 ポリ−Ｎ(６)−クロロアセチル−Ｌ−リジンを、チオグリセロールおよび種々 の量のＡ７およびＡ４、Ａ６、Ａ８またはＡ１０で上記(実施例Ｃ２ｉ)のように 処理し、¹Ｈ−ＮＭＲ(統合)に従って、種々のサッカライドおよびアミン誘導体 化であるＣ７ａ、Ｃ７ｂ、Ｃ８ｂＩ、Ｃ９ｂＩおよびＣ１０ｂＩを得る。 Ｄ 接合体タイプIIの製造 実施例Ｄ１：ＣＨ−Sepharose 4Bを含む接合体タイプII (ａ)Ｃ６ｂＩ：４.０ｇ ＮＨＳ−活性化ＣＨ−Sepharose 4B(Pharmacia Biotec h)を１mM ＨＣｌ(８００ml)でフリット漏斗上洗浄(１５分)し、Ｃ６ｂＩ(２０m g)のＮａＨＣＯ₃−緩衝液(０.１Ｍ、ＮａＣｌ中０.５Ｍ、ｐＨ８、６ml溶液に添 加する。２ｈ、ＲＴで振盪後、緩衝液を重力濾過により分離し、ＮａＨＣＯ₃− 緩衝液(０.１Ｍ、ＮａＣｌ中０.５Ｍ、ｐＨ８、３回５０ml)で洗浄し、その後１ Ｍエタノールアミン(ｐＨ８)で１ｈ、ＲＴで処理する。濾過および水(３回２０m l)での洗浄、ＴＲＩＳ−緩衝液(０.１Ｍ、ＮａＣｌ中０.５Ｍ、ｐＨ８、３０ml) 、酢酸緩衝液(０.１Ｍ、ＮａＣｌ中０.５Ｍ、ｐＨ４、３０ml)−３回交互に−２ ０％エタノール(３回５０ml)により、Ｄ１ａが、２０％エタノールに貯蔵された 樹脂mlあたり５μｍｏｌの炭水化物を伴って得られる。 (ｂ)Ｃ７ａ：１.０ｇ ＮＨＳ−活性化ＣＨ Sepharose 4Bを、上記(実施例Ｄ１ ａ)のようにＣ７ａ(２５mg)の０.１Ｍ ＮａＨＣＯ₃(０.５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ ８、６ml)溶液で処理し、Ｄ１ｂが、２０％エタノールに貯蔵された樹脂mlあた り４μｍｏｌの炭水化物を伴って得られる。 実施例Ｄ２：Sepharose 4 Fast Flowを含む接合体タイプII ２−プロパノールに懸濁した１１ml Sepharose 4 Fast Flowを冷却(０℃)１m M ＨＣｌ(６回２０ml)で洗浄し、冷却(０℃)ＮａＨＣＯ₃−緩衝液(０.１Ｍ、Ｎ ａＣｌ中０.０５Ｍ、ｐＨ８、１.５ml)と共に、前駆体Ｃ６ｂＩ(１５０mg)の６m l ＮａＨＣＯ₃−緩衝液(０.１Ｍ、ＮａＣｌ中０.０５Ｍ、ｐＨ８、６ml)の溶液 に０℃で移す。３ｈ、ＲＴで振盪後、混合物を濾過し、残渣を水(５０ml)で洗浄 し、その後１Ｍエタノールアミン(ｐＨ８、２０ml)に懸濁し、ＲＴで１５ｈ振盪 する。樹脂を濾過により分離し、TRIS−緩衝液(０.１Ｍ、ＮａＣｌ中０.５Ｍ、 ｐＨ８、３０ml)および酢酸緩衝液(０.１Ｍ、ＮａＣｌ中０.５Ｍ、ｐＨ４、３０ ml)で交互に３回洗浄し、Ｄ２ａ、２０％エタノールに貯蔵された樹脂mlあたり ５μｍｏｌの炭水化物を伴って得られる。 上記方法に従って、接合体タイプII Ｄ２ｂ、Ｄ３、Ｄ５、Ｄ６、Ｄ７および Ｄ８を製造する： Ｅ 化合物の生物学的活性 実施例Ｅ１：接合体タイプＩの結合親和性 Nunc Polysorpプレート(カタログ＃475094)を、一晩、４℃で０．１ml／ウェ ルの５μｇ／mlの１ｇ(→Ｃ１ｇ−ELISA)またはＣ１ｈ(→Ｃ１ｈ−ELISA)または Ｃ１ｉ(→Ｃ１ｉ−ELISA)のＰＢＳ溶液でカバーする。プレートを０.２５０ml／ ウェルのSEA BLOCK(Pierce、カタログ＃37527)の１０％溶液で２４ｈ、４℃でブ ロックする。プレートを３回、０.２５０mlの０.０２％トゥイン２０含有ＰＢＳ で洗浄する。 貯蔵ヒト血清(Sigma H-1513)を、０.１％トゥイン２０および１０％Blocker B SA(Pierceカタログ＃37525)含有ＰＢＳ緩衝液で１：２０に希釈する。６０μｌ アリコートのヒト血清希釈を、低結合Ｕ型ウェルに入れ、接合体タイプＩの連続 希釈６０μｌを連続して、適当な濃度のシリーズで添加する。 １ｈ、ＲＴでインキュベーション後、０.１００mlの血清混合物を洗浄ポリマ ー被覆ウェルに移す。プレートを１ｈ、ＲＴでインキュベートし、３回、０.０ ２％トゥイン２０含有ＰＢＳで洗浄する。次いで、プレートを０.１００mlの１ ：２５００希釈の抗ヒトＩｇＧ−ペルオキシダーゼ接合体(Jackson Immunoresea rch 109-036-098)または、代わりに抗ヒトＩｇＭ−ペルオキシダーゼ接合体(Jac kson Immunoresearch 109-036-129)を含む、１０％Blocker BSAおよび０.１％ト ゥイン２０含有ＰＢＳ溶液で満たす。プレートを１ｈ、ＲＴでインキュベートし 、次いで５回、０.０２％トゥイン２０含有ＰＢＳで洗浄する。プレートを、０. １００mlのＴＭＢ基質(Sigmaカタログ＃T-3405)で展開し、基質 展開１０分後、５０μｌの２Ｍ Ｈ₂ＳＯ₄で停止させる。吸光度を、４５０−６ ５０nmで、マイクロタイタープレートリーダーを使用して読む。吸光度の分析の ために、値を接合体濃度に対してプロットする。直線状Ｂトリサッカライド(Dex traカタログ＃GN334)を、相対的ＩＣ₅₀の測定のためのスタンダードとして使用 する。 表１：Ｃ１ｇ−被覆プレートで測定した接合体タイプＩの結合親和性 親和性は、相対的結合親和性として表にする(ＲＩＣ₅₀＝ＩＣ₅₀直線Ｂ／ＩＣ₅₀ 化合物) 実施例Ｅ２： カニグイザルから除去した異種抗体 ４匹のカニクイザル(平均体重３kg)に１mg／kg投与量の接合体タイプＩを、０ 、７２および１６８ｈに注射する。動物から種々の間隔で採血し、血清を、ELIS AでＣ１ｇ(実施例Ｅ１)に対する抗−αＧａｌ抗体に関してアッセイする。接合 体タイプＩの一回投与は、抗体力価の鋭い減少を誘導し、続いて、最初の力価よ り低い値まで抗体力価を回復させた。２回目のそして特に３回目の投与により、 抗体力価の回復は、長期間有効に止まった。 表３：Ｃ１ｇの注射を受けたカニクイザルにおける抗体力価 結果は、標準ヒト血清に対する力価として表にする。 実施例Ｅ３：抗体力価の測定 Nunc Polysorpプレート(カタログ＃475094)を、一晩、４℃で、０．１ml／ウ ェルの５μｇ／mlのＣ１ｇまたはＣ１ｈまたはＣ１ｉのＰＢＳ溶液でコートする 。プレートを０.２５０ml／ウェルのSEA BLOCK(Pierce、カタログ＃37527)の１ ０％溶液で２４ｈ、４℃でブロックする。プレートを、３回、０.２５０mlの０. ０２％トゥイン２０含有ＰＢＳで洗浄する。血清サンプルの０.１００mlアリュ ートを、ウェルに連続希釈で添加する。典型的に希釈は以下の通りである：１： ５；１：１５；１：４５；１：１３５；１：４０５；１：１２１５；１：３６４ ５；１：１０９３５等。希釈液は、０.１％トゥイン２０および１０％SEABLOCK 含有ＰＢＳ緩衝液である。プレートを、１ｈ、ＲＴでインキュベートし、３回０ .０２％トゥイン２０含有ＰＢＳで洗浄する。次いで、プレートを、０.１００ml の１：２５００希釈の非ヒトＩｇＧ−ペルオキシダーゼ接合体(Jackson Immunor esearch 109-036-098)、あるいは、抗ヒトＩｇＭ−ペルオキシダーゼ接合体(Jac kson Immunoresearch 109-036-129)の、１０％Blocker BSAおよび０.１％トゥイ ン２０含有ＰＢＳ溶液で満たす。プレートを１ｈ、ＲＴでインキュベートし、５ 回、０.０２％トゥイン２０含有ＰＢＳで洗浄する。プレートを、０.１００mlの ＴＭＢ基質(Sigmaカタログ＃T-3405)で展開し、展開１０分後、５０μｌの２Ｍ Ｈ₂ＳＯ₄で停止させる。吸光度を、４５０−６５０nmで、マイクロタイタープ レートリーダーを使用して読み取る。分析のために、値を希釈係数の対数に対し てプロットし、力価を、Ｘ軸に対する曲線の直線部分の外挿により未る。力価を １に標準化した、標準血清を使用する。 実施例Ｅ４：ヒト血清の免疫親和性クロマトグラフィー 5mlの固定化接合体タイプIIを、カラム(１ｘ３.５cm)に充填する。貯蔵ヒト血 清(Sigma H-1513、０.４μｍフィルターを通して濾過)を、４m1／分の流速でポ ンプ輸送することによりカラムを通す。１０mlの各フラクションを、カラムの後 回収する。フラクションを、抗Ｇａｌα１,３Ｇａｌ異種反応性抗体の存在に 関して、上記実施例Ｅ３に記載のようなELISAアッセイを使用してアッセイする 。実施例Ｄ２の材料を使用して、少なくとも２００mlの貯蔵ヒト血清／mlゲルが 、１回通過で清浄化された。 実施例Ｅ５：Ｄ２ｂ、Ｄ６およびＤ７の結合親和性および抗体特異性の比較 ２ ００ml量の血清を、Ｄ６を充填した第１カラムを通し、ELISAアッセイ(実施例Ｅ ３に従う)で試験する。血清を、続いてＤ２ｂを充填した第２カラムを通し、試 験し、次いでＤ７を充填した第３カラムを通し、再びELISAで試験する。各カラ ム後のサンプルをアッセイする。試験した各々のカラムは、それが担持するオリ ゴサッカライドのタイプに対して、抗体除去に最も優れている。したがって、Ｄ ６はジサッカライド結合抗体の除去に優れており、Ｄ２ｂはとリサッカライド結 合抗体を除去し、そしてＤ７はペンタサッカライド結合抗体を除去する。二つの カラムを通過した血清は、これらのカラムにより担持されている二つのエピトー プに対する抗体が枯渇しているが、第３のエピトープに対する抗体は保持する。 全ての３つのカラムを通過した血清は、全ての３つのサッカライドに対する抗体 が枯渇している。 実施例Ｅ６：混合ベッドカラムの結合親和性および抗体特異性 ２mlのＤ６、２mlのＤ２ｂおよび１mlのＤ７を混合する。物質を、５mlカラム に充填し、２００mlのヒト血清を通す。フラクションは各１０mlである。集めた ２つずつのフラクションをアッセイする。フラクションを、ELISAにより、全３ つのα−ガラクトシル化抗原に対して、およびまたＰＫ１細胞に対する細胞毒性 に関して圧制する。混合ベッドカラムは、実施例Ｅ３に記載のようなELISAアッ セイで測定して、血清から抗−αＧａｌ活性を効果的に除去する。 実施例Ｅ７：ブタ細胞への抗体結合 各カラム(実施例Ｅ５)通過後の血清サンプルを、ブタＰＫ１５細胞(ATCC#CCL- 33)への結合に関してアッセイする。細胞をトリプシン処理し、１ｘ１０⁶細胞を ０.３mlのＰＢＳ／０.１％ＢＳＡに懸濁させる。細胞を０.０４０ml血清サンプ ル(１０分、５６℃で予備処理)を、３０分、氷中でインキュベートする。細胞を ３ml ＰＢＳに取りこみ、遠心し、０.３ml ＰＢＳ ０.１％ＢＳＡに再懸濁さ せる。０.００４mlのアリコートの２次抗体(抗ｈＩｇＧ／ＦＩＴＣ Jackson ImmunoResearch #109-096-098または抗ｈＩｇＭ／ＦＩＴＣ Jackson ImmunoRese arch #109-096-129)を添加し、３０分、氷中でインキュベートする。一度ＰＢＳ 中で洗浄した後、細胞をＦＡＣＳにより分析する。貯蔵ヒト血清の平均蛍光は４ ８０、Ｄ６カラム(実施例Ｅ５)後の血清は１１７、Ｄ６およびＤ２ｂカラム(実 施例Ｅ５)後の血清は８０、Ｄ６、Ｄ２ｂおよびＤ７カラム(実施例Ｅ５)後の血 清は５４および混合ベッドカラム(実施例Ｅ６)後の血清は５２(全て、抗ｈＩｇ Ｇ抗体で得られる)である。同様な結果が、抗ｈＩｇＭ測定で得られる。 実施例Ｅ８：ヒヒにおける抗−αＧａｌ抗体のイムノアフェレーシス ７ml Ｄ６、７ｍｌ Ｄ２ｂおよび５ml Ｄ７の容量を、４５ml Sepharose CL2B(Pharmacia)と、イムノアフェレーシスカラムを製造するために合わせる。 カラムは、Citem 10イムノアフェレーシスシステム(Excorim)を使用し、抗−α Ｇａｌ抗体を２匹のヒヒから除去する(６kg体重)。各々６００mlおよび５００ml 、カラムを通過した後(約２血液容量)、抗−αＧａｌ抗体は、最初のレベルの１ ０％まで落ちる(Ｃ１ｇに対するELISAで測定して、実施例Ｅ３)。

【手続補正書】 【提出日】平成１２年３月２７日（２０００．３．２７） 【補正内容】 (１)明細書 i)１頁下から２行、４頁１７行、１５頁１６行、１９行、２４行、２７行、１６ 頁下から２行および１７頁化学式Ｉ^**の下１行に「生理」とあるを、「生物」と訂正 する。 ii)８頁１行に「機」とあるを、「基」と訂正する。 iii)１９頁３行に「ｔ」とあるを、削除する。 iv)同頁８行に「まであだえる」とあるを、「までである」と訂正する。 v)５２頁下から６行に「未る」とあるを、「見る」と訂正する。 vi)５３頁１０行に「とリサッカ」とあるを、「トリサッカ」と訂正する。 (２)請求の範囲 別紙の通り。 （別紙） 請求の範囲 １．ポリアミド骨格に結合した(ａ)異種抗原性基；または(ｂ)生物学的活性基 および巨大分子性、巨視的または微視的実体 のいずれかを含み、該ポリアミド骨格は式Ｉ の構造要素の少なくとも一つを含み、(ｂ)の場合、更に式II 〔式中、ＡおよびＡ'は、互いに独立して３価架橋基； Ｒ¹およびＲ^1'は、互いに独立して直接結合またはＣ₁−Ｃ₆アルキレン； Ｘ¹およびＸ^1'は、互いに独立して−Ｃ(Ｏ)Ｏ−、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ−、−ＮＲ−、 −Ｓ−または−Ｏ−； Ｒ²およびＲ^2'は、互いに独立して直接結合または２価架橋基； Ｘ²およびＸ^2'は、互いに独立して直接結合または−Ｏ−または−ＮＲ−；ここ で、Ｒは水素、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₂アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シク ロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルケニル、Ｃ₂−Ｃ₇ヘテロシクロアルキル、Ｃ₂ −Ｃ₁₁ヘテロシクロアルケニル、Ｃ₆−またはＣ₁₀アリール、Ｃ₅−Ｃ₉ヘテロア リール、Ｃ₇−Ｃ₁₆アラルキル、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニレンおよびＣ₆−またはＣ₁₀ア リールのＣ₈−Ｃ₁₆アラルケニルまたはジ−Ｃ₆−またはＣ₁₀アリール−Ｃ₁−Ｃ₆ −アルキル；および ＹおよびＹ'は、互いに独立して直接結合または２価架橋基； ただし、Ｒ¹またはＲ^1'が直接結合であるとき、Ｘ¹またはＸ^1'は−ＮＲ−、−Ｓ −または−Ｏ−ではない〕 の構造要素の少なくとも一つを含むものであるポリアミド接合体。 ２．(ａ)ポリアミド骨格が、少なくとも一つの構造要素Iaa 〔式中、Ｒ^03a−Ｙ−が式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、ＶｅまたはＶｆ (Vf)である〕 または (ｂ)ポリアミド骨格が、少なくとも一つの構造要素Ｉａ 式Ｉａ 〔式中、−Ｙ−Ｒ⁰³はＶａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、ＶｅまたはＶｆからなる基〕 および少なくとも一つの構造要素式IIa 式IIa 〔式中、−Ｙ−Ｒ⁰⁴はＶｇ である〕 を含むものである、請求項１記載のポリアミド接合体。 ３．ポリアミド骨格が、更に少なくとも一つの式VIb の構造要素を含む、請求項１記載のポリアミド接合体。 ４．構造要素の平均合計[ｎ]が(ａ)２００から３００の範囲であり、１.１か ら１.２の多分散を有し、式Iaaの構造要素の比率[ｘ]が５から３０％である；ま たは[ｎ]が９００から１２００であり、１.１から１.２の多分散を有し、[ｘ]が ５から５０％である；式VIｂの構造要素の範囲[ｚ]が４５から９４％である；Ｒ^03a −Ｙ−が同一または異なり、式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、ＶｅおよびＶｆか らなる群から選択されるもの；または(ｂ)２００から３００の範囲であり、１. １から１.２の多分散を有し、式中、Ｒ⁰³−Ｙ−が式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、 ＶｅおよびＶｆからなる群から選択される式Ｉａの構造要素の比率[ｘ]が５から ３０％であり、式IIｂ〔式中、Ａ'、Ｒ^1'、Ｘ^1'、Ｒ^2'およびＸ^2'は請求項１で定義の通り、およびＺ −Ｙ"はＨ₂Ｎ[(ＣＨ₂)₂Ｏ](ＣＨ₂)₂ＮＨＣ(Ｏ)(ＣＨ₂)₃−] の比率[ｙ]が１から５％；または９００から１２００の範囲で、多分散が１.１ から１.２、[ｘ]が５から５０および[ｙ]が１か５％であり、式VIｂの構造要素 の比率[ｚ]が４５から９４％である、請求項２記載のポリアミド接合体。 ５．ポリアミド骨格が少なくとも一つの構造要素Ｉaa 〔式中、Ｒ^03a−Ｙ−が式Ｖｃ の基〕 および少なくとも一つの構造要素VIｂ の構造要素を含み、構造要素の平均合計[ｎ]が９００から１２００の範囲であり 、１.１から１.２の多分散を有し、式Iaaの構造要素の比率[ｘ]が５から５０％ である；構造要素VIｂの比率[ｚ]が４５から９４％である；Ｒ^03a−Ｙ−が式Ｖ ｃの基である、ポリアミド骨格に結合した異種抗原基を含む、ポリアミド接合体 。 ６．(ｉ)異種抗体をヒト体液から除去するために、または異種抗原性エピトー プに対する耐容性またはアネルギーの誘導のために、または異種抗原レセプター がＢ細胞を特異的に標的とすることを含む疾病の処置のための、請求項１(ａ)ま たは２(ａ)に記載のポリアミド接合体またはこのような接合体の混合物を含む、 または(ii)ヒト体液から異種抗体を除去することを含む疾病の処置における、請 求項１(ｂ)または２(ｂ)に記載のポリアミド接合体またはこのような接合体の混 合物を含む、医薬組成物。 ７．ポリアミド接合体が、異種抗原性基または生物学的活性基がジサッカライ ドから誘導される少なくとも一つの構造要素、異種抗原性基または生物学的活性 基がトリサッカライドから誘導される少なくとも一つの構造要素および異種抗原 性基または生物学的活性基がペンタサッカライドから誘導される少なくとも一つ の構造要素を１：１：１の比率で含むか、またはポリアミド接合体の混合物を含 み、各接合体が同一の異種抗原性または生物学的活性基を含み、異種抗原性基ま たは生物学的活性基がジサッカライド、トリサッカライドまたはペンタサッカラ イド由来であり、接合体が組成物中に１：１：１の比率で存在する、請求項１ま たは２記載のポリアミド接合体またはこのようなポリアミド接合体の混合物を含 む医薬組成物。 ８．吸着剤として、請求項１(ｂ)または２(ｂ)に記載のポリアミド接合体または これらの混合物を含む、親和性クロマトグラフィーカートリッジ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｂ０１Ｊ 20/26 Ｂ０１Ｊ 20/26 Ｃ０７Ｋ 1/107 Ｃ０７Ｋ 1/107 16/06 16/06 // Ｃ０７Ｈ 15/04 Ｃ０７Ｈ 15/04 Ｅ Ｇ 15/14 15/14 (31)優先権主張番号 ９８０２４５０．８ (32)優先日 平成10年２月５日(1998．2．5) (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 エールライン，ラインホルト ドイツ連邦共和国デー―79618ラインフェ ルデン、バーンホフシュトラーセ68アー番 (72)発明者 トマ，ゲプハルト ドイツ連邦共和国デー―79540レラハ、タ ールベーク32番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ポリアミド骨格に結合した(ａ)異種抗原性基； または(ｂ)生理学的活性基および巨大分子、巨視的または微視的実体 のいずれかを含み、該ポリアミド骨格は式Ｉ の構造要素の少なくとも一つを含み、(ｂ)の場合、式II 〔式中、ＡおよびＡ'は、互いに独立して３価架橋基； Ｒ¹およびＲ^1'、互いに独立して直接結合またはＣ₁−Ｃ₆アルキレン； Ｘ¹およびＸ^1'は、互いに独立して−Ｃ(Ｏ)Ｏ−、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ−、−ＮＲ−、 −Ｓ−または−Ｏ−； Ｒ²およびＲ^2'は、互いに独立して直接結合または２価架橋基； Ｘ²およびＸ^2'は、互いに独立して直接結合または−Ｏ−または−ＮＲ−；ここ で、Ｒは水素、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₂アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シク ロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルケニル、Ｃ₂−Ｃ₇ヘテロシクロアルキル、Ｃ₂ −Ｃ₁₁ヘテロシクロアルケニル、Ｃ₆−またはＣ₁₀アリール、Ｃ₅−Ｃ₉ヘテロア リール、Ｃ₇−Ｃ₁₆アラルキル、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニレンおよびＣ₆−またはＣ₁₀ア リールのＣ₈−Ｃ₁₆アラルケニルまたはジ−Ｃ₆−またはＣ₁₀アリール−Ｃ₁−Ｃ₆ −アルキル；および ＹおよびＹ'は、互いに独立して直接結合または２価架橋基； ただし、Ｒ¹またはＲ^1'が直接結合であるとき、Ｘ¹またはＸ^1'は−ＮＲ−、−Ｓ −または−Ｏ−ではない〕 の構造要素の少なくとも一つを含むものであるポリアミド接合体。 ２．(ａ)ポリアミド骨格が、少なくとも一つの構造要素Iaa 〔式中、Ｒ^3a−Ｙ−が式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、ＶｅまたはＶｆ または (ｂ)ポリアミド骨格が、少なくとも一つの構造要素Ｉａ 式Ｉａ 〔式中、Ｙ−Ｒ⁰³はＶａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、ＶｅまたはＶｆからなる基〕およ び少なくとも一つの構造要素式IIa 式IIａ 〔式中、−Ｙ'−Ｒ⁰⁴はＶｇ である〕 を含むものである、請求項１記載のポリアミド接合体。 ３．ポリアミド骨格が、更に少なくとも一つの式VIb の構造要素を含む、請求項１記載のポリアミド接合体。 ４．構造要素の平均合計[ｎ]が(ａ)２００から３００の範囲であり、１.１か ら１.２の多分散を有し、式Iaaの構造要素の比率[ｘ]が５から３０％であるもの 、または[ｎ]が９００から１２００であり、１.１から１.２の多分散を有し、[ ｘ] が５から５０％であるものおよび(ｂ)２００から３００の範囲であり、１.１か ら１.２の多分散を有し、式中、Ｒ⁰³−Ｙ−が式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅ およびＶｆからなる群から選択される式Ｉａの構造要素の比率[ｘ]が５から３０ ％であり、式IIｂ 〔式中、Ａ'、Ｒ^1'、Ｘ^1'、Ｒ^2'およびＸ^2'は請求項１で定義の通り、およびＺ −Ｙ"はＨ₂Ｎ[(ＣＨ₂)₂Ｏ](ＣＨ₂)₂ＮＨＣ(Ｏ)(ＣＨ₂)₃−〕 の比率[ｙ]が１から５％； または９００から１２００の範囲で、多分散が１.１から１.２、[ｘ]が５から５ ０および[ｙ]が１か５％であり、式VIｂの構造要素の比率[ｚ]が４５から９４％ である、請求項２記載のポリアミド接合体。 ５．異種抗体をヒト体液から除去するために、または異種抗原性エピトープに 対する耐容性またはアネルギーの誘導のために、または異種抗原レセプターがＢ 細胞を特異的に標的とするために使用する、請求項１(ａ)または２(ａ)に記載の ポリアミド接合体を含む組成物。 ６．ポリアミド接合体が、異種抗原性基が取りサッカライドから誘導するもの である少なくとも一つの構造要素、異種抗原性基が取りサッカライドから誘導す る異種抗原性基である少なくとも一つの構造要素および異種抗原性基がペンタサ ッカライドから誘導される少なくとも一つの構造要素を１：１：１の比率で含む か、またはポリアミド接合体の混合物を含み、各接合体が同一の異種抗原性を含 み、異種抗原性基がジサッカライド、トリサッカライドまたはペンタサッカライ ド由来であり、接合体が組成物中に１：１：１の比率で存在する、請求項５記載 の組成物。 ７．ヒト体液から異種抗体を除去する方法に使用する、請求項１(ｂ)または２ (ｂ)に記載のポリアミド接合体またはこのようなポリアミド接合体の混合物を含 む、組成物。 ８．生理学的活性基がジサッカライドに由来する少なくとも一つの構造要素、 生理学的活性基がトリサッカライドに由来する少なくとも一つの構造要素および 生理学的活性基がペンタサッカライドに由来する少なくとも一つの構造要素を１ ：１：１の比率で含むか、またはポリアミド接合体の混合物を含み、各接合体が 同一の異種抗原性を含み、異種抗原性基がジサッカライド、トリサッカライドま たはペンタサッカライド由来であり、接合体が組成物中に１：１：１の比率で存 在する、請求項７記載の組成物。 ９．請求項１(ｂ)または２(ａ)に記載のポリアミド接合体またはそれらの混合 物または請求項７記載の組成物を吸着剤として使用する、親和性クロマトグラフ ィーカートリッジ。 １０．請求項１(ａ)または２(ａ)に記載のポリアミド接合体を該液に体内的に 接触させることを含む、異種移植片レシピエントから異種抗原性抗体を除去する 方法；請求項１(ａ)または２(ａ)に記載のポリアミド接合体の有効量の移植前お よび／または後の異種移植片レシピエントへの、例えば、注射、注入または環流 による投与を含む、処置を必要とする患者における、異種抗原性エピトープに対 する耐容性またはアネルギーの誘導異種抗原レセプターにＢ細胞を特異的に標的 化させる方法；または請求項１(ａ)または２(ａ)に記載のポリアミド接合体を、 該体液に体外的に接触させ、患者体内に体液を再挿入することを含む、ヒト体液 から抗体を除去する方法。