JP2001149096A - ミスマッチ認識分子 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、ＤＮＡやＲＮＡなどの核酸におけ
る塩基対のミスマッチを簡便でしかも高感度で検出しう
る方法及びそのための検出試薬を提供するものである。 【解決手段】 本発明は、正常な塩基対を形成すること
ができない塩基の対において、次の一般式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表されるミスマッチ認識分子を用いて、当該正常な塩基
対を形成することができない塩基の対に疑似的に塩基対
を形成させ、当該疑似的な塩基対の形成を測定すること
からなる正常な塩基対を形成することができない塩基の
対を検出、同定する方法、そのためのキット、ミスマッ
チの検出用試薬及び遺伝子の塩基配列の異常を検出する
方法に関する。
る塩基対のミスマッチを簡便でしかも高感度で検出しう
る方法及びそのための検出試薬を提供するものである。 【解決手段】 本発明は、正常な塩基対を形成すること
ができない塩基の対において、次の一般式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表されるミスマッチ認識分子を用いて、当該正常な塩基
対を形成することができない塩基の対に疑似的に塩基対
を形成させ、当該疑似的な塩基対の形成を測定すること
からなる正常な塩基対を形成することができない塩基の
対を検出、同定する方法、そのためのキット、ミスマッ
チの検出用試薬及び遺伝子の塩基配列の異常を検出する
方法に関する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、正常な塩基対を形
成することができない塩基の対において、当該正常な塩
基対を形成することができない塩基の対に擬似的に塩基
対を形成させ、当該擬似的な塩基対の形成を測定するこ
とからなる正常な塩基対を形成することができない塩基
の対を検出、同定する方法、そのための試薬、それを含
有するキット、その化合物、及びその方法を用いたＤＮ
Ａ又はＲＮＡの塩基配列の異常を検出する方法に関す
る。
成することができない塩基の対において、当該正常な塩
基対を形成することができない塩基の対に擬似的に塩基
対を形成させ、当該擬似的な塩基対の形成を測定するこ
とからなる正常な塩基対を形成することができない塩基
の対を検出、同定する方法、そのための試薬、それを含
有するキット、その化合物、及びその方法を用いたＤＮ
Ａ又はＲＮＡの塩基配列の異常を検出する方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】ＤＮＡやＲＮＡなどの核酸がハイブリダ
イズして２本鎖となる場合には、対をなす塩基が決まっ
ている。例えば、グアニン（Ｇ）にはシトシン（Ｃ）、
アデニン（Ａ）にはチミン（Ｔ）という具合になってい
る。そして、通常は全ての塩基がこのような対を形成し
てハイブリダイズしているのであるが、ときとして塩基
配列の中の一部にこのような対を形成することができな
い場合がある。例えば、あるＤＮＡと他のＤＮＡをハイ
ブリダイズし得る条件下においた場合に、大部分の塩基
はこのような対を形成することができるが、１個又は数
個の一部の塩基はこのような対を形成することができな
い場合がある。このような通常の塩基対を形成すること
ができない塩基対のことを、以下ではミスマッチとい
う。
イズして２本鎖となる場合には、対をなす塩基が決まっ
ている。例えば、グアニン（Ｇ）にはシトシン（Ｃ）、
アデニン（Ａ）にはチミン（Ｔ）という具合になってい
る。そして、通常は全ての塩基がこのような対を形成し
てハイブリダイズしているのであるが、ときとして塩基
配列の中の一部にこのような対を形成することができな
い場合がある。例えば、あるＤＮＡと他のＤＮＡをハイ
ブリダイズし得る条件下においた場合に、大部分の塩基
はこのような対を形成することができるが、１個又は数
個の一部の塩基はこのような対を形成することができな
い場合がある。このような通常の塩基対を形成すること
ができない塩基対のことを、以下ではミスマッチとい
う。
【０００３】一方、最近１個又は２個以上の塩基が異な
ることに起因する各種の遺伝病についての研究が行われ
てきている。例えば、１個の塩基が通常のものとは異な
る遺伝子（ＳＮＰ（Single Nucleotide Polymorphis
m））を有する遺伝病などがあり、係る遺伝病の解明が
注目されてきている。このような遺伝子を正常な遺伝子
とハイブリダイズさせると、大部分の塩基は正常な塩基
対を形成し得ることができるためにハイブリダイズする
ことはするが、１個の塩基対についてミスマッチが起こ
ることになる。現在、このようなミスマッチを検出する
方法は、２本鎖ＤＮＡのハイブリダイゼーション効率を
比較する手法が一般的である。しかし、この方法を用い
るためにはミスマッチを含むＤＮＡの塩基配列をあらか
じめ知っておかなければならないために多大な労力が必
要となり、多くの検体を処理する方法としては不適当で
ある。また、ＭｕｔＳ等のＤＮＡの修復蛋白が遺伝子損
傷箇所に選択的に結合することを利用する手法もある
が、タンパクの活性を維持することが難しい。
ることに起因する各種の遺伝病についての研究が行われ
てきている。例えば、１個の塩基が通常のものとは異な
る遺伝子（ＳＮＰ（Single Nucleotide Polymorphis
m））を有する遺伝病などがあり、係る遺伝病の解明が
注目されてきている。このような遺伝子を正常な遺伝子
とハイブリダイズさせると、大部分の塩基は正常な塩基
対を形成し得ることができるためにハイブリダイズする
ことはするが、１個の塩基対についてミスマッチが起こ
ることになる。現在、このようなミスマッチを検出する
方法は、２本鎖ＤＮＡのハイブリダイゼーション効率を
比較する手法が一般的である。しかし、この方法を用い
るためにはミスマッチを含むＤＮＡの塩基配列をあらか
じめ知っておかなければならないために多大な労力が必
要となり、多くの検体を処理する方法としては不適当で
ある。また、ＭｕｔＳ等のＤＮＡの修復蛋白が遺伝子損
傷箇所に選択的に結合することを利用する手法もある
が、タンパクの活性を維持することが難しい。
【０００４】このように、ハイブリダイズしたＤＮＡな
どにおける一部のミスマッチを検出する方法は大変難し
く、またその感度も不十分なものであり、これを簡便に
且つ高感度で検出できる方法の確立が求められている。
ところで、本発明者らは、２本鎖ＤＮＡ中に生成する不
対塩基（バルジ塩基）を持つＤＮＡ（バルジＤＮＡ）に
特異的に結合し、安定化する分子であるバルジＤＮＡ認
識分子を開発してきた（特願平１１−２６２２０５
号）。このバルジ認識分子は、不対塩基と水素結合をす
るだけでなく、バルジ塩基の存在により生じてくる空間
に、芳香環とバルジ近傍の塩基とのスタッキング相互作
用を利用してインターカーレーションし、安定化されて
いるものである。本発明者らは、このような周辺の塩基
の存在によるスタッキング効果を利用した不対塩基に対
する作用についてさらに研究を行ってきたところ、塩基
対のミスマッチが生じている箇所においても、塩基と対
を形成し得る分子種を２個有する化合物がこのようなス
タッキング効果により比較的安定に取り込まれる得るこ
とを見出した。
どにおける一部のミスマッチを検出する方法は大変難し
く、またその感度も不十分なものであり、これを簡便に
且つ高感度で検出できる方法の確立が求められている。
ところで、本発明者らは、２本鎖ＤＮＡ中に生成する不
対塩基（バルジ塩基）を持つＤＮＡ（バルジＤＮＡ）に
特異的に結合し、安定化する分子であるバルジＤＮＡ認
識分子を開発してきた（特願平１１−２６２２０５
号）。このバルジ認識分子は、不対塩基と水素結合をす
るだけでなく、バルジ塩基の存在により生じてくる空間
に、芳香環とバルジ近傍の塩基とのスタッキング相互作
用を利用してインターカーレーションし、安定化されて
いるものである。本発明者らは、このような周辺の塩基
の存在によるスタッキング効果を利用した不対塩基に対
する作用についてさらに研究を行ってきたところ、塩基
対のミスマッチが生じている箇所においても、塩基と対
を形成し得る分子種を２個有する化合物がこのようなス
タッキング効果により比較的安定に取り込まれる得るこ
とを見出した。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
塩基対のミスマッチを簡便でしかも高感度で検出しうる
方法を提供するものである。より詳細には、２本鎖ＤＮ
Ａ鎖中に存在するミスマッチを高感度でしかも簡便に検
出しうる方法及びそのための検出試薬を提供するもので
ある。
塩基対のミスマッチを簡便でしかも高感度で検出しうる
方法を提供するものである。より詳細には、２本鎖ＤＮ
Ａ鎖中に存在するミスマッチを高感度でしかも簡便に検
出しうる方法及びそのための検出試薬を提供するもので
ある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、正常な塩基対
を形成することができない塩基の対において、次の一般
式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表される、その各々の塩基と対を形成し得る化学構造部
分Ａ及び化学構造部分Ｂ、並びに当該化学構造部分Ａ及
びＢを結合するリンカー部分Ｌを有する化合物を用い
て、当該正常な塩基対を形成することができない塩基の
対に擬似的に塩基対を形成させ、当該擬似的な塩基対の
形成を測定することからなる正常な塩基対を形成するこ
とができない塩基の対を検出、同定する方法に関する。
を形成することができない塩基の対において、次の一般
式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表される、その各々の塩基と対を形成し得る化学構造部
分Ａ及び化学構造部分Ｂ、並びに当該化学構造部分Ａ及
びＢを結合するリンカー部分Ｌを有する化合物を用い
て、当該正常な塩基対を形成することができない塩基の
対に擬似的に塩基対を形成させ、当該擬似的な塩基対の
形成を測定することからなる正常な塩基対を形成するこ
とができない塩基の対を検出、同定する方法に関する。
【０００７】また、本発明は、前記の正常な塩基対を形
成することができない塩基の対に擬似的に塩基対を形成
させ、当該擬似的な塩基対の形成を測定することからな
る正常な塩基対を形成することができない塩基の対を検
出、同定する方法において、正常な塩基対を形成するこ
とができない塩基の対に擬似的に塩基対を形成させるた
めの次の一般式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表される化合物からなる、正常な塩基対を形成すること
ができない塩基の対に擬似的に塩基対を形成させるため
の試薬に関する。本発明は、前記した本発明の試薬、及
び検出、同定用の資材からなる正常な塩基対を形成する
ことができない塩基の対に擬似的に塩基対を形成させ、
当該擬似的な塩基対の形成を測定することからなる正常
な塩基対を形成することができない塩基の対を検出、同
定するためのキットに関する。
成することができない塩基の対に擬似的に塩基対を形成
させ、当該擬似的な塩基対の形成を測定することからな
る正常な塩基対を形成することができない塩基の対を検
出、同定する方法において、正常な塩基対を形成するこ
とができない塩基の対に擬似的に塩基対を形成させるた
めの次の一般式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表される化合物からなる、正常な塩基対を形成すること
ができない塩基の対に擬似的に塩基対を形成させるため
の試薬に関する。本発明は、前記した本発明の試薬、及
び検出、同定用の資材からなる正常な塩基対を形成する
ことができない塩基の対に擬似的に塩基対を形成させ、
当該擬似的な塩基対の形成を測定することからなる正常
な塩基対を形成することができない塩基の対を検出、同
定するためのキットに関する。
【０００８】また、本発明は、次の一般式（II）、
【０００９】
【化４】
【００１０】（式中、Ｒ、Ｒ１は、水素原子、炭素数１
〜１５のアルキル基であって当該アルキル基中の１個又
はそれ以上の炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換さ
れてもよいアルキル基、炭素数１〜１５のアルコキシ基
であって当該アルコキシ基中の１個又はそれ以上の炭素
原子が酸素原子又は窒素原子で置換されてもよいアルコ
キシ基、又は、炭素数１〜１５のモノ若しくはジアルキ
ルアミノ基であって当該アルキルアミノ基中の１個又は
それ以上の炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換され
てもよいモノ若しくはジアルキルアミノ基を示し、Ｒ２
は、炭素数１〜２０のアルキル基であって当該アルキル
基中の１個又はそれ以上の炭素原子が酸素原子、窒素原
子又はカルボニル基で置換されてもよいアルキル基を示
す。）で表される化合物又は当該化合物がプレートや機
器分析用の検出装置などに固定化され得る化学構造に修
飾された固定化物に関する。
〜１５のアルキル基であって当該アルキル基中の１個又
はそれ以上の炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換さ
れてもよいアルキル基、炭素数１〜１５のアルコキシ基
であって当該アルコキシ基中の１個又はそれ以上の炭素
原子が酸素原子又は窒素原子で置換されてもよいアルコ
キシ基、又は、炭素数１〜１５のモノ若しくはジアルキ
ルアミノ基であって当該アルキルアミノ基中の１個又は
それ以上の炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換され
てもよいモノ若しくはジアルキルアミノ基を示し、Ｒ２
は、炭素数１〜２０のアルキル基であって当該アルキル
基中の１個又はそれ以上の炭素原子が酸素原子、窒素原
子又はカルボニル基で置換されてもよいアルキル基を示
す。）で表される化合物又は当該化合物がプレートや機
器分析用の検出装置などに固定化され得る化学構造に修
飾された固定化物に関する。
【００１１】さらに、本発明は、検体となる１本鎖のＤ
ＮＡ又はＲＮＡと、それに対応する正常な塩基配列を有
するＤＮＡ又はＲＮＡとをハイブリダイズさせ、次いで
当該ハイブリダイズしたＤＮＡ又はＲＮＡにおける正常
な塩基対を形成することができない塩基の対を次の一般
式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表される、その各々の塩基と対を形成し得る化学構造部
分Ａ及び化学構造部分Ｂ、並びに当該化学構造部分Ａ及
びＢを結合するリンカー部分Ｌを有する化合物を用い
て、当該正常な塩基対を形成することができない塩基の
対に擬似的に塩基対を形成させ、当該擬似的な塩基対の
形成を測定することからなる正常な塩基対を形成するこ
とができない塩基の対を検出、同定することからなるＤ
ＮＡ又はＲＮＡにおける塩基配列の異常を検出する方法
に関する。なお、以下の説明においては、前記した「正
常な塩基対を形成することができない塩基の対の片方の
塩基と対を形成し得る化学構造部分（一般式（Ｉ）にお
けるＡ及びＢの部分）」のことを単に「塩基認識部位」
ということもある。
ＮＡ又はＲＮＡと、それに対応する正常な塩基配列を有
するＤＮＡ又はＲＮＡとをハイブリダイズさせ、次いで
当該ハイブリダイズしたＤＮＡ又はＲＮＡにおける正常
な塩基対を形成することができない塩基の対を次の一般
式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表される、その各々の塩基と対を形成し得る化学構造部
分Ａ及び化学構造部分Ｂ、並びに当該化学構造部分Ａ及
びＢを結合するリンカー部分Ｌを有する化合物を用い
て、当該正常な塩基対を形成することができない塩基の
対に擬似的に塩基対を形成させ、当該擬似的な塩基対の
形成を測定することからなる正常な塩基対を形成するこ
とができない塩基の対を検出、同定することからなるＤ
ＮＡ又はＲＮＡにおける塩基配列の異常を検出する方法
に関する。なお、以下の説明においては、前記した「正
常な塩基対を形成することができない塩基の対の片方の
塩基と対を形成し得る化学構造部分（一般式（Ｉ）にお
けるＡ及びＢの部分）」のことを単に「塩基認識部位」
ということもある。
【００１２】本発明者らは、２本鎖ＤＮＡ中に生成する
不対塩基（バルジ塩基）を持つＤＮＡ（バルジＤＮＡ）
に特異的に結合し、安定化する分子であるバルジＤＮＡ
認識分子を開発してきた（特願平１１−２６２２０５
号）。このバルジ認識分子は、バルジ塩基の存在により
生じてくる空間に、芳香環とバルジ近傍の塩基とのスタ
ッキング相互作用を利用してインターカーレーション
し、安定化されているものであるが、本発明者らはこの
ようなバルジ認識分子を２分子、リンカーのような結合
鎖で結合させることにより各々のバルジ認識分子が、塩
基対のミスマッチ部分においてバルジ塩基と同様な塩基
対を形成し、しかもこれらのバルジ認識分子の両者が２
本鎖を形成しているＤＮＡやＲＮＡの鎖の中に比較的安
定に取り込まれることを見出した。このような比較的大
きな分子種がＤＮＡやＲＮＡの鎖の中に比較的安定に取
り込まれることは驚くべきことであり、かつこのような
特性を利用することにより、ハイブリダイズしている核
酸の中で塩基対がミスマッチを生じている箇所を簡便に
特定し得ることを見出した。
不対塩基（バルジ塩基）を持つＤＮＡ（バルジＤＮＡ）
に特異的に結合し、安定化する分子であるバルジＤＮＡ
認識分子を開発してきた（特願平１１−２６２２０５
号）。このバルジ認識分子は、バルジ塩基の存在により
生じてくる空間に、芳香環とバルジ近傍の塩基とのスタ
ッキング相互作用を利用してインターカーレーション
し、安定化されているものであるが、本発明者らはこの
ようなバルジ認識分子を２分子、リンカーのような結合
鎖で結合させることにより各々のバルジ認識分子が、塩
基対のミスマッチ部分においてバルジ塩基と同様な塩基
対を形成し、しかもこれらのバルジ認識分子の両者が２
本鎖を形成しているＤＮＡやＲＮＡの鎖の中に比較的安
定に取り込まれることを見出した。このような比較的大
きな分子種がＤＮＡやＲＮＡの鎖の中に比較的安定に取
り込まれることは驚くべきことであり、かつこのような
特性を利用することにより、ハイブリダイズしている核
酸の中で塩基対がミスマッチを生じている箇所を簡便に
特定し得ることを見出した。
【００１３】例えば、グアニンと水素結合を形成し、か
つ周囲の塩基とスタッキング効果により安定化され得る
１，８−ナフチリジン誘導体を用いて、これをリンカー
により結合させた次式（III）で示される二量体を合成
した。
つ周囲の塩基とスタッキング効果により安定化され得る
１，８−ナフチリジン誘導体を用いて、これをリンカー
により結合させた次式（III）で示される二量体を合成
した。
【００１４】
【化５】
【００１５】この化合物は、１，８−ナフチリジン部分
においてグアニンと対を形成する。グアニンがバルジ塩
基となっている場合には、当該グアニンと１，８−ナフ
チリジン誘導体とが対を形成するための空間が充分にあ
るので、この１，８−ナフチリジン誘導体とバルジ塩基
との対の形成は両者の安定性を検討すれば足りるのであ
るが、ミスマッチの場合には、対を形成するための場所
に他の塩基が既に存在していることから空間的な余裕が
充分ではなく、塩基と隣接する塩基との僅かな空間にこ
のような比較的大きな分子種が安定に入り込めるか否か
が大きな問題となる。したがって、核酸の２本鎖中にお
いてグアニン−グアニンのミスマッチが存在している場
合において、このような１，８−ナフチリジン部分を２
個有する化合物がミスマッチしている各々のグアニンと
対を形成して核酸の鎖の中に取り込まれるか否かを検討
した。
においてグアニンと対を形成する。グアニンがバルジ塩
基となっている場合には、当該グアニンと１，８−ナフ
チリジン誘導体とが対を形成するための空間が充分にあ
るので、この１，８−ナフチリジン誘導体とバルジ塩基
との対の形成は両者の安定性を検討すれば足りるのであ
るが、ミスマッチの場合には、対を形成するための場所
に他の塩基が既に存在していることから空間的な余裕が
充分ではなく、塩基と隣接する塩基との僅かな空間にこ
のような比較的大きな分子種が安定に入り込めるか否か
が大きな問題となる。したがって、核酸の２本鎖中にお
いてグアニン−グアニンのミスマッチが存在している場
合において、このような１，８−ナフチリジン部分を２
個有する化合物がミスマッチしている各々のグアニンと
対を形成して核酸の鎖の中に取り込まれるか否かを検討
した。
【００１６】２本鎖のＤＮＡ中にＧＣ塩基対、ＧＡミス
マッチ塩基対、及びＧＧミスマッチ塩基対を有する５’
−３２Ｐでラベルした５２マー（mer）の２本鎖ＤＮＡ
を調製した。その該当する部分の部分配列を次に示す。 ＊１ ＊２ ＊３ ・・・・・ＡＣＣＧＴ・・・・・ＡＣＡＧＴ・・・・・ＴＣＧＧＡ ・・・・・ＴＧＧＣＡ・・・・・ＴＧＧＣＡ・・・・・ＡＧＧＣＴ 上記の２本鎖ＤＮＡにおいて、＊１で示した部分は正常
なＧ−Ｃの塩基対であり、＊２で示した部分はＧ−Ａの
ミスマッチ部分であり、＊３の部分はＧ−Ｇのミスマッ
チの部分である。
マッチ塩基対、及びＧＧミスマッチ塩基対を有する５’
−３２Ｐでラベルした５２マー（mer）の２本鎖ＤＮＡ
を調製した。その該当する部分の部分配列を次に示す。 ＊１ ＊２ ＊３ ・・・・・ＡＣＣＧＴ・・・・・ＡＣＡＧＴ・・・・・ＴＣＧＧＡ ・・・・・ＴＧＧＣＡ・・・・・ＴＧＧＣＡ・・・・・ＡＧＧＣＴ 上記の２本鎖ＤＮＡにおいて、＊１で示した部分は正常
なＧ−Ｃの塩基対であり、＊２で示した部分はＧ−Ａの
ミスマッチ部分であり、＊３の部分はＧ−Ｇのミスマッ
チの部分である。
【００１７】この２本鎖のＤＮＡを用いて、種々の濃度
における式（III）の化合物の存在下における、ＤＮａ
ｓｅＩ（ＤＮＡ加水分解酵素）フットプリンティング滴
定により、ＤＮａｓｅＩによるＤＮＡの切断の阻害場所
を調べた。この結果を図１に示す。図１は、電気泳動の
結果を示す図面に代わる写真である。図１の左から右に
行くに従って、式（III）の化合物の濃度が０から５０
０μＭまで徐々に高くなっている。ＤＮａｓｅＩ（ＤＮ
Ａ加水分解酵素）によって切断された場合には黒く示さ
れ、ＤＮａｓｅＩによる切断が阻害されたところが白く
なって見えている。
における式（III）の化合物の存在下における、ＤＮａ
ｓｅＩ（ＤＮＡ加水分解酵素）フットプリンティング滴
定により、ＤＮａｓｅＩによるＤＮＡの切断の阻害場所
を調べた。この結果を図１に示す。図１は、電気泳動の
結果を示す図面に代わる写真である。図１の左から右に
行くに従って、式（III）の化合物の濃度が０から５０
０μＭまで徐々に高くなっている。ＤＮａｓｅＩ（ＤＮ
Ａ加水分解酵素）によって切断された場合には黒く示さ
れ、ＤＮａｓｅＩによる切断が阻害されたところが白く
なって見えている。
【００１８】例えば、Ｇ−Ｃの正常な塩基対である場合
には、式（III）の化合物の濃度を高くしていっても黒
いまま、即ちＤＮａｓｅＩによって切断が生じているこ
とが示される。ところが、Ｇ−Ｇのようなミスマッチの
サイトでは、式（III）のナフチリジン誘導体の濃度を
高くしていった場合に、次第に白く、即ちその切断が阻
害されてきていることがわかる。このような変化は、Ｇ
−Ａミスマッチのサイトにおいても高濃度の部分におい
て生じてきていることもわかる。このようなＤＮＡ加水
分解酵素に対するＤＮＡの切断阻害作用は、式（III）
の化合物の存在（濃度を含めて）に依存しており、式
（III）の化合物による特異的な作用であると考えられ
る。
には、式（III）の化合物の濃度を高くしていっても黒
いまま、即ちＤＮａｓｅＩによって切断が生じているこ
とが示される。ところが、Ｇ−Ｇのようなミスマッチの
サイトでは、式（III）のナフチリジン誘導体の濃度を
高くしていった場合に、次第に白く、即ちその切断が阻
害されてきていることがわかる。このような変化は、Ｇ
−Ａミスマッチのサイトにおいても高濃度の部分におい
て生じてきていることもわかる。このようなＤＮＡ加水
分解酵素に対するＤＮＡの切断阻害作用は、式（III）
の化合物の存在（濃度を含めて）に依存しており、式
（III）の化合物による特異的な作用であると考えられ
る。
【００１９】図１における切断バンドの強度と加えたナ
フチリジンの濃度との関係をグラフにしたものが図２で
ある。図２の縦軸は切断バンドの強度から得られた切断
の阻害比であり、０．０はほぼ完全に切断されている状
況であり、１．０はほぼ完全に切断が阻害されて状況を
示している。図２の横軸は加えられた式（III）の化合
物の濃度（Ｍ）を示している。図２のグラフ中の黒丸印
（●）はＧ−Ｇのミスマッチサイトのものであり、黒三
角印（▲）はＧ−Ａのミスマッチサイトのものである。
この図２のグラフからも明らかなように、式（III）の
化合物によるＧ−Ｇのミスマッチサイトに対する切断阻
害作用は比較的低濃度から生じ、約１０−５Ｍの濃度以
上でほぼ完全にＧ−Ｇミスマッチに対する切断が阻害さ
れていることがわかる。また、Ｇ−Ａミスマッチサイト
においても、約１０−６Ｍの濃度付近から切断の阻害作
用が始まり、５×１０−３Ｍ（５００μＭ）付近では約
９０％の切断阻害が生じていることがわかる。
フチリジンの濃度との関係をグラフにしたものが図２で
ある。図２の縦軸は切断バンドの強度から得られた切断
の阻害比であり、０．０はほぼ完全に切断されている状
況であり、１．０はほぼ完全に切断が阻害されて状況を
示している。図２の横軸は加えられた式（III）の化合
物の濃度（Ｍ）を示している。図２のグラフ中の黒丸印
（●）はＧ−Ｇのミスマッチサイトのものであり、黒三
角印（▲）はＧ−Ａのミスマッチサイトのものである。
この図２のグラフからも明らかなように、式（III）の
化合物によるＧ−Ｇのミスマッチサイトに対する切断阻
害作用は比較的低濃度から生じ、約１０−５Ｍの濃度以
上でほぼ完全にＧ−Ｇミスマッチに対する切断が阻害さ
れていることがわかる。また、Ｇ−Ａミスマッチサイト
においても、約１０−６Ｍの濃度付近から切断の阻害作
用が始まり、５×１０−３Ｍ（５００μＭ）付近では約
９０％の切断阻害が生じていることがわかる。
【００２０】この結果、式（III）の化合物のＧ−Ｇの
ミスマッチへの結合常数（Ｋａ（ＧＧｍｉｓ））は、
１．１３Ｘ１０７Ｍ−１と求められ、同様にＧ−Ａのミ
スマッチへの結合常数（Ｋａ（ＧＡｍｉｓ））は、１．
６３Ｘ１０４Ｍ−１と求められた。両者の結合常数の比
（（Ｋａ（ＧＧｍｉｓ））／（Ｋａ（ＧＡｍｉｓ）））
は、６９６であり、式（III）がＧ−Ｇミスマッチに対
して特異的に作用していることがわかる。また、式（II
I）の化合物のＧ−Ｇミスマッチ塩基対に対する結合常
数が１０７のオーダーと比較的大きいということは、式
（III）の化合物が想像以上に安定にＧ−Ｇミスマッチ
塩基対部分に取り込まれていることを示している。そし
て、ＤＮＡの２本鎖に取り込まれた本発明のミスマッチ
塩基認識分子は、比較的安定な対を形成し、このような
対の形成により天然の酵素が認識することができない塩
基の配列を新たに形成していると考えられる。
ミスマッチへの結合常数（Ｋａ（ＧＧｍｉｓ））は、
１．１３Ｘ１０７Ｍ−１と求められ、同様にＧ−Ａのミ
スマッチへの結合常数（Ｋａ（ＧＡｍｉｓ））は、１．
６３Ｘ１０４Ｍ−１と求められた。両者の結合常数の比
（（Ｋａ（ＧＧｍｉｓ））／（Ｋａ（ＧＡｍｉｓ）））
は、６９６であり、式（III）がＧ−Ｇミスマッチに対
して特異的に作用していることがわかる。また、式（II
I）の化合物のＧ−Ｇミスマッチ塩基対に対する結合常
数が１０７のオーダーと比較的大きいということは、式
（III）の化合物が想像以上に安定にＧ−Ｇミスマッチ
塩基対部分に取り込まれていることを示している。そし
て、ＤＮＡの２本鎖に取り込まれた本発明のミスマッチ
塩基認識分子は、比較的安定な対を形成し、このような
対の形成により天然の酵素が認識することができない塩
基の配列を新たに形成していると考えられる。
【００２１】本発明の一般式（Ｉ）で示される化合物
（ミスマッチ認識分子）が比較的安定に塩基のミスマッ
チ部分に取り込まれる様子を模式的に示したものが図３
である。図３の左側は、２本鎖のＤＮＡにおいてＧ−Ａ
のミスマッチがある部分を示している。他の箇所では正
常な塩基対が形成されており、Ｇ−Ａの部分においてミ
スマッチがあるにもかかわらず全体としてはハイブリダ
イズしているＤＮＡである。これに、ＮＡ−ＮＧで示さ
れる本発明のミスマッチ認識分子が加えられると、図３
の右側のような状態になるものと考えられる。即ち、ミ
スマッチしている塩基のグアニン（Ｇ）はミスマッチ認
識分子のグアニン認識部位（ＮＧ）と対を形成し、ミス
マッチしている他方の塩基のアデニン（Ａ）はミスマッ
チ認識分子のアデニン認識部位（ＮＡ）と対を形成し、
そしてミスマッチ認識分子のグアニン認識部位（ＮＧ）
とアデニン認識部位（ＮＡ）とは、適当な長さでかつ適
当な自由度のあるリンカー（−）で結合されており、２
本鎖のＤＮＡの鎖の中にほぼ他の正常な塩基対と同様な
形で取り込まれていると考えられる（図３の右側参
照）。
（ミスマッチ認識分子）が比較的安定に塩基のミスマッ
チ部分に取り込まれる様子を模式的に示したものが図３
である。図３の左側は、２本鎖のＤＮＡにおいてＧ−Ａ
のミスマッチがある部分を示している。他の箇所では正
常な塩基対が形成されており、Ｇ−Ａの部分においてミ
スマッチがあるにもかかわらず全体としてはハイブリダ
イズしているＤＮＡである。これに、ＮＡ−ＮＧで示さ
れる本発明のミスマッチ認識分子が加えられると、図３
の右側のような状態になるものと考えられる。即ち、ミ
スマッチしている塩基のグアニン（Ｇ）はミスマッチ認
識分子のグアニン認識部位（ＮＧ）と対を形成し、ミス
マッチしている他方の塩基のアデニン（Ａ）はミスマッ
チ認識分子のアデニン認識部位（ＮＡ）と対を形成し、
そしてミスマッチ認識分子のグアニン認識部位（ＮＧ）
とアデニン認識部位（ＮＡ）とは、適当な長さでかつ適
当な自由度のあるリンカー（−）で結合されており、２
本鎖のＤＮＡの鎖の中にほぼ他の正常な塩基対と同様な
形で取り込まれていると考えられる（図３の右側参
照）。
【００２２】そして、本発明のミスマッチ認識分子が２
本鎖のＤＮＡの鎖の中に比較的安定に取り込まれるもう
ひとつの大きな理由は、ミスマッチ認識分子の塩基認識
部位（例えば、先程の例におけるグアニン認識部位（Ｎ
Ｇ）やアデニン認識部位（Ｎ Ａ））が、前後の塩基によ
るスタッキング効果（塩基同士間の分子間力のようなも
の）により安定化されているということである。図３の
右側における点線はこのような塩基によるスタッキング
効果を示している。このようなスタッキング効果が生じ
る要因のひとつとして、π電子系の相互作用（パイスタ
ッキング効果）が考えられることから、前後の塩基の種
類によりスタッキングの効果には程度の差が生じること
もあるが、本発明の分子とミスマッチサイトの結合を極
端に低下させることはない。したがって、本発明のミス
マッチ認識分子の塩基認識部位（一般式（Ｉ）における
Ａ及びＢの化学構造部分）は、単に目的の塩基と水素結
合ができるということのみではなく、前後又は周囲の塩
基によるスタッキング効果が得られる化学構造であるこ
とが必要である。
本鎖のＤＮＡの鎖の中に比較的安定に取り込まれるもう
ひとつの大きな理由は、ミスマッチ認識分子の塩基認識
部位（例えば、先程の例におけるグアニン認識部位（Ｎ
Ｇ）やアデニン認識部位（Ｎ Ａ））が、前後の塩基によ
るスタッキング効果（塩基同士間の分子間力のようなも
の）により安定化されているということである。図３の
右側における点線はこのような塩基によるスタッキング
効果を示している。このようなスタッキング効果が生じ
る要因のひとつとして、π電子系の相互作用（パイスタ
ッキング効果）が考えられることから、前後の塩基の種
類によりスタッキングの効果には程度の差が生じること
もあるが、本発明の分子とミスマッチサイトの結合を極
端に低下させることはない。したがって、本発明のミス
マッチ認識分子の塩基認識部位（一般式（Ｉ）における
Ａ及びＢの化学構造部分）は、単に目的の塩基と水素結
合ができるということのみではなく、前後又は周囲の塩
基によるスタッキング効果が得られる化学構造であるこ
とが必要である。
【００２３】このように、本発明は、２個の塩基認識部
位を適当な長さでかつ適当な自由度を有するリンカーで
結合させた化合物が、２本鎖の核酸における塩基対のミ
スマッチ部分に特異的にかつ安定に対を形成するという
ことを見出したことを基本的なコンセプトとするもので
あり、前記したＧ−Ｇミスマッチに限定されるものでは
ない。前記した例では、グアニン（Ｇ）−グアニン
（Ｇ）のミスマッチを例に取り、グアニン塩基と安全な
水素結合を形成する１，８−ナフチリジン誘導体を塩基
認識部位に用いたミスマッチ認識分子を示したが、ミス
マッチの認識はＧ−Ｇミスマッチに限定されるものでは
ない。本発明にミスマッチ認識分子における塩基認識部
位は、ミスマッチの塩基の片方を認識し当該塩基とワト
ソン−クリック（Watson-Crick）型の塩基対を形成する
ことができ、周囲の塩基によるスタッキング効果を得ら
れる分子種を選択することにより、例示したグアニンに
限らず、各種の塩基と塩基対を形成し得るものであれば
よい。例えば、ミスマッチの塩基がシトシンの場合に
は、塩基認識部位として２−アミノナフチリジン−４−
オン又はその誘導体などが、ミスマッチの塩基がアデニ
ンの場合には、２−キノロン誘導体、例えば３−（２−
アミノエチル）−２−キノロン又はその誘導体などが、
また、ミスマッチの塩基がチミンの場合には、２−アミ
ノナフチリジン−７−オン又はその誘導体などが用いら
れる。
位を適当な長さでかつ適当な自由度を有するリンカーで
結合させた化合物が、２本鎖の核酸における塩基対のミ
スマッチ部分に特異的にかつ安定に対を形成するという
ことを見出したことを基本的なコンセプトとするもので
あり、前記したＧ−Ｇミスマッチに限定されるものでは
ない。前記した例では、グアニン（Ｇ）−グアニン
（Ｇ）のミスマッチを例に取り、グアニン塩基と安全な
水素結合を形成する１，８−ナフチリジン誘導体を塩基
認識部位に用いたミスマッチ認識分子を示したが、ミス
マッチの認識はＧ−Ｇミスマッチに限定されるものでは
ない。本発明にミスマッチ認識分子における塩基認識部
位は、ミスマッチの塩基の片方を認識し当該塩基とワト
ソン−クリック（Watson-Crick）型の塩基対を形成する
ことができ、周囲の塩基によるスタッキング効果を得ら
れる分子種を選択することにより、例示したグアニンに
限らず、各種の塩基と塩基対を形成し得るものであれば
よい。例えば、ミスマッチの塩基がシトシンの場合に
は、塩基認識部位として２−アミノナフチリジン−４−
オン又はその誘導体などが、ミスマッチの塩基がアデニ
ンの場合には、２−キノロン誘導体、例えば３−（２−
アミノエチル）−２−キノロン又はその誘導体などが、
また、ミスマッチの塩基がチミンの場合には、２−アミ
ノナフチリジン−７−オン又はその誘導体などが用いら
れる。
【００２４】特定のミスマッチの塩基に特異的に認識さ
れる本発明のミスマッチ認識分子における塩基認識部位
は、水素結合を形成するための水素結合部位と、近傍の
塩基にスタッキングされるための平面構造を有している
複素環式芳香族基を有するものが好ましいが、さらに、
塩基に対する選択性を増強するためにある程度の立体障
害を有する置換基を有する複素環式芳香族基が好まし
い。このような置換基としては、例えば、炭素数１〜１
５、好ましくは１〜１０より好ましくは１〜７の直鎖状
又は分枝状のアルキル基、炭素数１〜１５、好ましくは
１〜１０より好ましくは１〜７の直鎖状又は分枝状のア
ルキル基からなるアルコキシ基、炭素数１〜１５、好ま
しくは１〜１０より好ましくは１〜７の直鎖状又は分枝
状のアルキル基でモノ又はジ置換されているモノ若しく
はジアルキルアミノ基などが挙げられる。これらのアル
キル基、アルコキシ基又はモノ若しくはジアルキルアミ
ノ基における１個又はそれ以上の炭素原子は、酸素原子
又は窒素原子で置換されていてもよい。
れる本発明のミスマッチ認識分子における塩基認識部位
は、水素結合を形成するための水素結合部位と、近傍の
塩基にスタッキングされるための平面構造を有している
複素環式芳香族基を有するものが好ましいが、さらに、
塩基に対する選択性を増強するためにある程度の立体障
害を有する置換基を有する複素環式芳香族基が好まし
い。このような置換基としては、例えば、炭素数１〜１
５、好ましくは１〜１０より好ましくは１〜７の直鎖状
又は分枝状のアルキル基、炭素数１〜１５、好ましくは
１〜１０より好ましくは１〜７の直鎖状又は分枝状のア
ルキル基からなるアルコキシ基、炭素数１〜１５、好ま
しくは１〜１０より好ましくは１〜７の直鎖状又は分枝
状のアルキル基でモノ又はジ置換されているモノ若しく
はジアルキルアミノ基などが挙げられる。これらのアル
キル基、アルコキシ基又はモノ若しくはジアルキルアミ
ノ基における１個又はそれ以上の炭素原子は、酸素原子
又は窒素原子で置換されていてもよい。
【００２５】また、本発明の一般式（Ｉ）で表される化
合物におけるリンカー部Ｌとしては、２個の塩基認識部
位を適当な長さで適当な自由度を与えるものであれ特に
制限されるものではないが、例えば、炭素数１〜２０、
好ましくは１〜１５、より好ましくは１〜１２の直鎖状
又は分枝状の飽和又は不飽和のアルキル基であって、当
該アルキル基中の１個又はそれ以上の炭素原子が酸素原
子、窒素原子又はカルボニル基で置換されてもよいアル
キル基が挙げられる。好ましいリンカーとしては、前記
した式（III）の化合物のように両端がアミド結合の部
分を有し、中央部に窒素原子を有するものが挙げられ
る。このリンカー部分は、２個の塩基認識部位を結合さ
せるだけでなく、このリンカー部分から担体に固定化す
るための枝を結合させることもできる。例えば、リンカ
ー中央部付近の窒素原子の箇所からさらに末端に担体と
結合するための官能基などを有するアルキレン基のよう
な枝を延ばして、必要に応じて担体に固定化することも
できる。
合物におけるリンカー部Ｌとしては、２個の塩基認識部
位を適当な長さで適当な自由度を与えるものであれ特に
制限されるものではないが、例えば、炭素数１〜２０、
好ましくは１〜１５、より好ましくは１〜１２の直鎖状
又は分枝状の飽和又は不飽和のアルキル基であって、当
該アルキル基中の１個又はそれ以上の炭素原子が酸素原
子、窒素原子又はカルボニル基で置換されてもよいアル
キル基が挙げられる。好ましいリンカーとしては、前記
した式（III）の化合物のように両端がアミド結合の部
分を有し、中央部に窒素原子を有するものが挙げられ
る。このリンカー部分は、２個の塩基認識部位を結合さ
せるだけでなく、このリンカー部分から担体に固定化す
るための枝を結合させることもできる。例えば、リンカ
ー中央部付近の窒素原子の箇所からさらに末端に担体と
結合するための官能基などを有するアルキレン基のよう
な枝を延ばして、必要に応じて担体に固定化することも
できる。
【００２６】本発明の一般式（Ｉ）における塩基認識部
位Ａ又はＢとリンカー部Ｌとの結合は、炭素−炭素結合
であってもよいが合成の簡便さから官能基による結合が
好ましい。官能基による結合としては、エーテル結合、
エステル結合、アミド結合、リン酸による結合など種々
のタイプのものを選択することができるが、アミド結合
が好ましい。本発明のミスマッチ塩基認識分子におけ
る、Ｇ−Ｇミスマッチに対する好ましい一般式（Ｉ）の
化合物として、次の一般式（II）、
位Ａ又はＢとリンカー部Ｌとの結合は、炭素−炭素結合
であってもよいが合成の簡便さから官能基による結合が
好ましい。官能基による結合としては、エーテル結合、
エステル結合、アミド結合、リン酸による結合など種々
のタイプのものを選択することができるが、アミド結合
が好ましい。本発明のミスマッチ塩基認識分子におけ
る、Ｇ−Ｇミスマッチに対する好ましい一般式（Ｉ）の
化合物として、次の一般式（II）、
【００２７】
【化６】
【００２８】（式中、Ｒ、Ｒ１は、水素原子、炭素数１
〜１５のアルキル基であって当該アルキル基中の１個又
はそれ以上の炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換さ
れてもよいアルキル基、炭素数１〜１５のアルコキシ基
であって当該アルコキシ基中の１個又はそれ以上の炭素
原子が酸素原子又は窒素原子で置換されてもよいアルコ
キシ基、又は、炭素数１〜１５のモノ若しくはジアルキ
ルアミノ基であって当該アルキルアミノ基中の１個又は
それ以上の炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換され
てもよいモノ若しくはジアルキルアミノ基を示し、Ｒ２
は、炭素数１〜２０のアルキル基であって当該アルキル
基中の１個又はそれ以上の炭素原子が酸素原子、窒素原
子又はカルボニル基で置換されてもよいアルキル基を示
す。）で表される化合物又はその固定化物が挙げられ
る。ここにおける「固定化物」とは、前記した化合物が
担体に固定化されている状態のもの又は固定化され得る
ように前記した「枝」をのばした状態の化合物をいう。
なお、Ｒ２におけるアルキル基は、一般式（II）に示さ
れているように２価のアルキル基である。
〜１５のアルキル基であって当該アルキル基中の１個又
はそれ以上の炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換さ
れてもよいアルキル基、炭素数１〜１５のアルコキシ基
であって当該アルコキシ基中の１個又はそれ以上の炭素
原子が酸素原子又は窒素原子で置換されてもよいアルコ
キシ基、又は、炭素数１〜１５のモノ若しくはジアルキ
ルアミノ基であって当該アルキルアミノ基中の１個又は
それ以上の炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換され
てもよいモノ若しくはジアルキルアミノ基を示し、Ｒ２
は、炭素数１〜２０のアルキル基であって当該アルキル
基中の１個又はそれ以上の炭素原子が酸素原子、窒素原
子又はカルボニル基で置換されてもよいアルキル基を示
す。）で表される化合物又はその固定化物が挙げられ
る。ここにおける「固定化物」とは、前記した化合物が
担体に固定化されている状態のもの又は固定化され得る
ように前記した「枝」をのばした状態の化合物をいう。
なお、Ｒ２におけるアルキル基は、一般式（II）に示さ
れているように２価のアルキル基である。
【００２９】また、本発明のミスマッチ塩基認識分子は
これを単独で使用することもできるが、分子中の適当な
位置に、例えばリンカー部分やリンカーから固定化のた
めなどのための延ばされた枝などに、放射性元素を導入
したり、化学発光又は蛍光を発する分子種を導入するな
どして、標識化して使用することもできる。なお、測定
手段としての標識化は、検出対象のＤＮＡやＲＮＡなど
の核酸部分の標識化によることもできる。さらに、本発
明のミスマッチ塩基認識分子の適当な位置においてポリ
スチレンなどの高分子材料と直接又はアルキレン基など
を用いて結合させて、これを固定化して使用することも
できる。
これを単独で使用することもできるが、分子中の適当な
位置に、例えばリンカー部分やリンカーから固定化のた
めなどのための延ばされた枝などに、放射性元素を導入
したり、化学発光又は蛍光を発する分子種を導入するな
どして、標識化して使用することもできる。なお、測定
手段としての標識化は、検出対象のＤＮＡやＲＮＡなど
の核酸部分の標識化によることもできる。さらに、本発
明のミスマッチ塩基認識分子の適当な位置においてポリ
スチレンなどの高分子材料と直接又はアルキレン基など
を用いて結合させて、これを固定化して使用することも
できる。
【００３０】本発明のミスマッチ塩基認識分子は低分子
有機化合物であり、通常の有機合成法により適宜製造す
ることができる。例えば、前記した１，８−ナフチリジ
ン誘導体は、２−アミノ−１，８−ナフチリジン又は２
−アミノ−７−メチル−１，８−ナフチリジンをＮ−保
護−４−アミノ−酪酸の反応性誘導体、例えば酸塩化物
を反応させて、２位のアミノ基をアシル化した後、アミ
ノ基を保護基を脱保護して製造することができる。この
際の保護基としては、塩酸塩やアシル基やアルコキシカ
ルボニル基などのペプチド合成において使用されるアミ
ノ保護基を使用することができる。このようにして得ら
れた塩基認識部位を、両末端にカルボキシル基又はその
反応性誘導体基を有するリンカー用の化合物と反応させ
ることにより目的のミスマッチ塩基認識分子を得ること
ができる。この際に、リンカー用化合物の分子中に窒素
原子などの反応性の基が存在している場合には、前記し
た保護基などで適宜保護して使用することができる。
有機化合物であり、通常の有機合成法により適宜製造す
ることができる。例えば、前記した１，８−ナフチリジ
ン誘導体は、２−アミノ−１，８−ナフチリジン又は２
−アミノ−７−メチル−１，８−ナフチリジンをＮ−保
護−４−アミノ−酪酸の反応性誘導体、例えば酸塩化物
を反応させて、２位のアミノ基をアシル化した後、アミ
ノ基を保護基を脱保護して製造することができる。この
際の保護基としては、塩酸塩やアシル基やアルコキシカ
ルボニル基などのペプチド合成において使用されるアミ
ノ保護基を使用することができる。このようにして得ら
れた塩基認識部位を、両末端にカルボキシル基又はその
反応性誘導体基を有するリンカー用の化合物と反応させ
ることにより目的のミスマッチ塩基認識分子を得ること
ができる。この際に、リンカー用化合物の分子中に窒素
原子などの反応性の基が存在している場合には、前記し
た保護基などで適宜保護して使用することができる。
【００３１】本発明のミスマッチ塩基認識分子は、これ
をミスマッチの塩基の対の検出するための試薬又は検出
剤として使用することができ、また、適当な担体と組み
合わせることによりミスマッチの塩基の対を検出するた
めの組成物とすることができる。また、正常な塩基対を
形成することができない塩基の対に擬似的に塩基対を形
成させるための塩基対生成剤として使用することもでき
る。ここに、「擬似的な塩基対」というのは、天然に存
在する塩基の対とは異なる塩基の対であるという意味で
あり、塩基対の強度を意味するものではない。なお、本
明細書において使用される「正常な塩基対」とは天然に
存在する塩基の対であって、Ｇ−Ｃ、Ａ−Ｔ、又はＡ−
Ｕの塩基対をいう。本発明は、さらに前記した本発明の
ミスマッチ塩基認識分子、及び検出、同定用の資材、例
えば化学発光や蛍光のための試薬や緩衝液などの資材か
らなる、正常な塩基対を形成することができない塩基の
対に擬似的に塩基対を形成させ、当該擬似的な塩基対の
形成を測定することからなる正常な塩基対を形成するこ
とができない塩基の対を検出、同定するためのキットを
提供するものである。さらに、本発明は、本発明のミス
マッチ塩基認識分子又は標識化若しくは固定化された本
発明のミスマッチ塩基認識分子を使用して、ＤＮＡ中の
ミスマッチしている塩基の対を検出、同定又は定量する
ための方法を提供するものである。
をミスマッチの塩基の対の検出するための試薬又は検出
剤として使用することができ、また、適当な担体と組み
合わせることによりミスマッチの塩基の対を検出するた
めの組成物とすることができる。また、正常な塩基対を
形成することができない塩基の対に擬似的に塩基対を形
成させるための塩基対生成剤として使用することもでき
る。ここに、「擬似的な塩基対」というのは、天然に存
在する塩基の対とは異なる塩基の対であるという意味で
あり、塩基対の強度を意味するものではない。なお、本
明細書において使用される「正常な塩基対」とは天然に
存在する塩基の対であって、Ｇ−Ｃ、Ａ−Ｔ、又はＡ−
Ｕの塩基対をいう。本発明は、さらに前記した本発明の
ミスマッチ塩基認識分子、及び検出、同定用の資材、例
えば化学発光や蛍光のための試薬や緩衝液などの資材か
らなる、正常な塩基対を形成することができない塩基の
対に擬似的に塩基対を形成させ、当該擬似的な塩基対の
形成を測定することからなる正常な塩基対を形成するこ
とができない塩基の対を検出、同定するためのキットを
提供するものである。さらに、本発明は、本発明のミス
マッチ塩基認識分子又は標識化若しくは固定化された本
発明のミスマッチ塩基認識分子を使用して、ＤＮＡ中の
ミスマッチしている塩基の対を検出、同定又は定量する
ための方法を提供するものである。
【００３２】本発明のミスマッチ認識分子の塩基認識部
位を用いることにより、１個又は２個以上のミスマッチ
の塩基の対を有するＤＮＡにおいて、特定のミスマッチ
の塩基の対、例えば、Ｇ−Ｇミスマッチ、Ｇ−Ａミスマ
ッチなどの特定のミスマッチをしている塩基と水素結合
を形成させてこれを安定化させるのみならず、近傍、好
ましくは隣接する塩基対にスタックされ、ミスマッチの
塩基の対が存在しているにもかかわらず比較的安定なＤ
ＮＡを得ることができる。したがって、本発明は、本発
明のミスマッチ認識分子の塩基認識部位が、特定のミス
マッチの塩基の対における当該塩基の各々と水素結合を
形成し、当該塩基の近隣に存在する塩基対にスタックさ
れることによりミスマッチの塩基の対が安定化されたミ
スマッチ塩基対を含有するＤＮＡを提供するものであ
る。本発明のこのＤＮＡは、ミスマッチの塩基の対が本
発明のミスマッチ認識分子の塩基認識部位と水素結合に
より塩基対と同様な「対」（擬似的な塩基対）を形成
し、かつミスマッチの塩基と「対」を形成している本発
明のミスマッチ認識分子の塩基認識部位が近傍、好まし
くは隣接の塩基対を形成している塩基にサンドイッチ状
に挟まれてスタックされていることを特徴とするもので
ある。
位を用いることにより、１個又は２個以上のミスマッチ
の塩基の対を有するＤＮＡにおいて、特定のミスマッチ
の塩基の対、例えば、Ｇ−Ｇミスマッチ、Ｇ−Ａミスマ
ッチなどの特定のミスマッチをしている塩基と水素結合
を形成させてこれを安定化させるのみならず、近傍、好
ましくは隣接する塩基対にスタックされ、ミスマッチの
塩基の対が存在しているにもかかわらず比較的安定なＤ
ＮＡを得ることができる。したがって、本発明は、本発
明のミスマッチ認識分子の塩基認識部位が、特定のミス
マッチの塩基の対における当該塩基の各々と水素結合を
形成し、当該塩基の近隣に存在する塩基対にスタックさ
れることによりミスマッチの塩基の対が安定化されたミ
スマッチ塩基対を含有するＤＮＡを提供するものであ
る。本発明のこのＤＮＡは、ミスマッチの塩基の対が本
発明のミスマッチ認識分子の塩基認識部位と水素結合に
より塩基対と同様な「対」（擬似的な塩基対）を形成
し、かつミスマッチの塩基と「対」を形成している本発
明のミスマッチ認識分子の塩基認識部位が近傍、好まし
くは隣接の塩基対を形成している塩基にサンドイッチ状
に挟まれてスタックされていることを特徴とするもので
ある。
【００３３】本発明のミスマッチ認識分子を用いること
により、従来の技術では達成できないミスマッチの塩基
の対を高感度でかつ簡便に検出、同定又は定量すること
が出来、ミスマッチの塩基の対に特異的でかつ安定なＤ
ＮＡを形成することから、ＤＮＡ損傷に伴う各種疾患の
治療、予防又は診断に応用することも可能である。ま
た、本発明のＤＮＡは、ミスマッチの塩基の対を有した
状態で比較的安定に存在することができることから、ミ
スマッチの塩基の対を含有するＤＮＡの安定化や、ミス
マッチの発生原因やミスマッチの修復機構の解明などの
研究材料として利用することも可能である。
により、従来の技術では達成できないミスマッチの塩基
の対を高感度でかつ簡便に検出、同定又は定量すること
が出来、ミスマッチの塩基の対に特異的でかつ安定なＤ
ＮＡを形成することから、ＤＮＡ損傷に伴う各種疾患の
治療、予防又は診断に応用することも可能である。ま
た、本発明のＤＮＡは、ミスマッチの塩基の対を有した
状態で比較的安定に存在することができることから、ミ
スマッチの塩基の対を含有するＤＮＡの安定化や、ミス
マッチの発生原因やミスマッチの修復機構の解明などの
研究材料として利用することも可能である。
【００３４】また、本発明は、検体となる１本鎖のＤＮ
Ａ又はＲＮＡと、それに対応する正常な塩基配列を有す
るＤＮＡ又はＲＮＡとをハイブリダイズさせ、次いで当
該ハイブリダイズしたＤＮＡ又はＲＮＡにおける正常な
塩基対を形成することができない塩基の対を前記した本
発明のミスマッチ認識分子を用いて、当該正常な塩基対
を形成することができない塩基の対に擬似的に塩基対を
形成させ、当該擬似的な塩基対の形成を測定することか
らなる正常な塩基対を形成することができない塩基の対
を検出、同定することからなるＤＮＡ又はＲＮＡにおけ
る塩基配列の異常を検出する方法を提供するものでもあ
る。この方法は、遺伝子の異常の有無を調べたいときな
どに利用することができる。例えば、異常の可能性があ
るＤＮＡ又はその転写産物であるＲＮＡを採取し、これ
と正常な塩基配列を有する相補的なＤＮＡ又はＲＮＡと
ハイブリダイズさせて２本鎖の核酸を生成させる。も
し、採取した遺伝子の塩基配列に異常があれば、当該異
常の箇所の塩基において塩基の対にミスマッチが生じる
ことになる。このミスマッチが生じている２本鎖の核酸
に本発明のミスマッチ認識分子を加えることにより前記
してきた擬似的な塩基の対が形成され、この新たな対が
形成された分子の有無を測定することにより採取された
遺伝子の異常を簡便かつ高感度で検出、同定することが
できる。
Ａ又はＲＮＡと、それに対応する正常な塩基配列を有す
るＤＮＡ又はＲＮＡとをハイブリダイズさせ、次いで当
該ハイブリダイズしたＤＮＡ又はＲＮＡにおける正常な
塩基対を形成することができない塩基の対を前記した本
発明のミスマッチ認識分子を用いて、当該正常な塩基対
を形成することができない塩基の対に擬似的に塩基対を
形成させ、当該擬似的な塩基対の形成を測定することか
らなる正常な塩基対を形成することができない塩基の対
を検出、同定することからなるＤＮＡ又はＲＮＡにおけ
る塩基配列の異常を検出する方法を提供するものでもあ
る。この方法は、遺伝子の異常の有無を調べたいときな
どに利用することができる。例えば、異常の可能性があ
るＤＮＡ又はその転写産物であるＲＮＡを採取し、これ
と正常な塩基配列を有する相補的なＤＮＡ又はＲＮＡと
ハイブリダイズさせて２本鎖の核酸を生成させる。も
し、採取した遺伝子の塩基配列に異常があれば、当該異
常の箇所の塩基において塩基の対にミスマッチが生じる
ことになる。このミスマッチが生じている２本鎖の核酸
に本発明のミスマッチ認識分子を加えることにより前記
してきた擬似的な塩基の対が形成され、この新たな対が
形成された分子の有無を測定することにより採取された
遺伝子の異常を簡便かつ高感度で検出、同定することが
できる。
【００３５】前記した新たな対（本発明のミスマッチ認
識分子とミスマッチの塩基との対）を測定するための手
段としては、化学発光や蛍光、放射性同位体などの標識
化によっても行うことができる。本発明のミスマッチ認
識分子は低分子有機化合物であり、新たな対を形成した
場合にはこの分子が核酸中に取り込まれるので、未反応
の本発明のミスマッチ認識分子と核酸類の両者を比較的
簡便に分離することができる。また、前記したように本
発明のミスマッチ認識分子を担体に固定化して使用する
こともできる。例えば、本発明の各種のミスマッチに特
異的なミスマッチ認識分子をタイタープレートなどのプ
レートに固定化し、これに前記の２本鎖の核酸、好まし
くは標識化された核酸を加え、数分間インキュベートし
た後、核酸類を除去すると本発明のミスマッチ認識分子
と特異的に反応した核酸は固定化された本発明のミスマ
ッチ認識分子にトラップされ、標識により検出、同定す
ることができることになる。
識分子とミスマッチの塩基との対）を測定するための手
段としては、化学発光や蛍光、放射性同位体などの標識
化によっても行うことができる。本発明のミスマッチ認
識分子は低分子有機化合物であり、新たな対を形成した
場合にはこの分子が核酸中に取り込まれるので、未反応
の本発明のミスマッチ認識分子と核酸類の両者を比較的
簡便に分離することができる。また、前記したように本
発明のミスマッチ認識分子を担体に固定化して使用する
こともできる。例えば、本発明の各種のミスマッチに特
異的なミスマッチ認識分子をタイタープレートなどのプ
レートに固定化し、これに前記の２本鎖の核酸、好まし
くは標識化された核酸を加え、数分間インキュベートし
た後、核酸類を除去すると本発明のミスマッチ認識分子
と特異的に反応した核酸は固定化された本発明のミスマ
ッチ認識分子にトラップされ、標識により検出、同定す
ることができることになる。
【００３６】また、本発明のミスマッチ認識分子を表面
プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の検出用チップの金属薄膜上
に固定化することも可能である。このＳＰＲによる場合
には、前記の２本鎖の核酸を含有する試料液を検出用チ
ップの表面に流すだけで、ミスマッチの有無を特異的に
検出することが可能となる。さらに、他のおおくの検出
手段に本発明のミスマッチ認識分子を応用することも可
能であり、本発明はこれらの特定の検出手段に限定され
るものではない。
プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の検出用チップの金属薄膜上
に固定化することも可能である。このＳＰＲによる場合
には、前記の２本鎖の核酸を含有する試料液を検出用チ
ップの表面に流すだけで、ミスマッチの有無を特異的に
検出することが可能となる。さらに、他のおおくの検出
手段に本発明のミスマッチ認識分子を応用することも可
能であり、本発明はこれらの特定の検出手段に限定され
るものではない。
【００３７】
【実施例】次に、具体的な試験例により本発明を詳細に
説明するが、本発明はこれらの具体例に限定されるもの
ではない。 実施例１（式（III）の化合物の合成） 次式に示す化学反応に従って標記の化合物を合成した。
説明するが、本発明はこれらの具体例に限定されるもの
ではない。 実施例１（式（III）の化合物の合成） 次式に示す化学反応に従って標記の化合物を合成した。
【００３８】
【化７】
【００３９】（式中のＢｏｃは、ｔ−ブトキシカルボニ
ル基を示す。） Ｎ−Ｂｏｃ化ジカルボン酸のスクシンイミジルエステル
（３１３ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１
５ｍＬ）に溶かし、２−アミノ−７−メチル−１，８−
ナフチリジン（２９４ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を加え
た。室温で４８時間反応後、後処理によりＢｏｃ化ジナ
フチリジンアミドを得た。これを４Ｎの塩酸を含む酢酸
エチルに溶解し、室温で２時間反応すると、標記のジナ
フチリジンアミドが通算収率１３％で得られた。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ） δ：8.26
(d,2H,J=8.8Hz), 8.14(d,2H,J=8.8Hz), 8.11(d,2H,J=8.
0Hz),7.34(d,2H,J=8.0Hz), 3.20(t,4H,J=6.0Hz), 2.84
(t,4H,J=6.0Hz),2.68(s,6H)； ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ）、ｍ／ｅ（％）： ４４４［（Ｍ
＋Ｈ）＋，１０），２４６（４０），１５４（１０
０）； ＨＲＭＳ 計算値： Ｃ２４Ｈ２６Ｏ２Ｎ７［（Ｍ＋Ｈ）＋］４４４．２１４ ６， 実測値： ４４４．２１４８．
ル基を示す。） Ｎ−Ｂｏｃ化ジカルボン酸のスクシンイミジルエステル
（３１３ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１
５ｍＬ）に溶かし、２−アミノ−７−メチル−１，８−
ナフチリジン（２９４ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を加え
た。室温で４８時間反応後、後処理によりＢｏｃ化ジナ
フチリジンアミドを得た。これを４Ｎの塩酸を含む酢酸
エチルに溶解し、室温で２時間反応すると、標記のジナ
フチリジンアミドが通算収率１３％で得られた。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ） δ：8.26
(d,2H,J=8.8Hz), 8.14(d,2H,J=8.8Hz), 8.11(d,2H,J=8.
0Hz),7.34(d,2H,J=8.0Hz), 3.20(t,4H,J=6.0Hz), 2.84
(t,4H,J=6.0Hz),2.68(s,6H)； ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ）、ｍ／ｅ（％）： ４４４［（Ｍ
＋Ｈ）＋，１０），２４６（４０），１５４（１０
０）； ＨＲＭＳ 計算値： Ｃ２４Ｈ２６Ｏ２Ｎ７［（Ｍ＋Ｈ）＋］４４４．２１４ ６， 実測値： ４４４．２１４８．
【００４０】実施例２ ５’端を３２Ｐでラベルした５２塩基のＤＮＡをＧ−Ｇ
及びＧ−Ａのミスマッチが生じるようにハイブリダイズ
させて２本鎖ＤＮＡとした（図１の右側参照）。この２
本鎖のＤＮＡに種々の濃度の実施例１で得られた化合物
を加えて、ＤＮａｓｅＩフットプリンティング滴定によ
り調べた。即ち、この２本鎖のＤＮＡ（＜４ｎＭストラ
ンド濃度）を、ＮａＣｌ（１００ｍＭ）及びＭｇＣｌ２
（５ｍＭ）を含むトリス塩酸緩衝液（１０ｍＭ，ｐＨ
７．６）で種々の濃度に調整した実施例１で得られた化
合物と共に、４℃で１２時間インキュベートした。これ
に、０．２ＵのＤＮａｓｅＩ（ＤＮＡ加水分解酵素）を
加え、２５℃で８分間インキュベートした。その後、エ
タノール沈殿によりＤＮＡを回収し、これを、１２％ポ
リアクリルアミド及び７Ｍ尿素を含有するゲルを用いて
電気泳動した。この結果を図１に示す。
及びＧ−Ａのミスマッチが生じるようにハイブリダイズ
させて２本鎖ＤＮＡとした（図１の右側参照）。この２
本鎖のＤＮＡに種々の濃度の実施例１で得られた化合物
を加えて、ＤＮａｓｅＩフットプリンティング滴定によ
り調べた。即ち、この２本鎖のＤＮＡ（＜４ｎＭストラ
ンド濃度）を、ＮａＣｌ（１００ｍＭ）及びＭｇＣｌ２
（５ｍＭ）を含むトリス塩酸緩衝液（１０ｍＭ，ｐＨ
７．６）で種々の濃度に調整した実施例１で得られた化
合物と共に、４℃で１２時間インキュベートした。これ
に、０．２ＵのＤＮａｓｅＩ（ＤＮＡ加水分解酵素）を
加え、２５℃で８分間インキュベートした。その後、エ
タノール沈殿によりＤＮＡを回収し、これを、１２％ポ
リアクリルアミド及び７Ｍ尿素を含有するゲルを用いて
電気泳動した。この結果を図１に示す。
【００４１】
【発明の効果】本発明のミスマッチ認識分子を用いるこ
とにより、従来の技術では達成できないグアニン−グア
ニンミスマッチなどのミスマッチしている塩基の対を高
感度でかつ簡便に検出することが出来る。
とにより、従来の技術では達成できないグアニン−グア
ニンミスマッチなどのミスマッチしている塩基の対を高
感度でかつ簡便に検出することが出来る。
【図１】図１は、本発明のミスマッチ認識分子によるミ
スマッチ部位の、ＤＮａｓｅＩによる切断の阻害効果を
示す、図面に代わる写真である。
スマッチ部位の、ＤＮａｓｅＩによる切断の阻害効果を
示す、図面に代わる写真である。
【図２】図２は、本発明のミスマッチ認識分子を用いた
場合のＤＮａｓｅＩによる切断の阻害効果をしめすグラ
フである。
場合のＤＮａｓｅＩによる切断の阻害効果をしめすグラ
フである。
【図３】図３は、本発明のミスマッチ認識分子のミスマ
ッチ部分における作用を模式的に示したものである。
ッチ部分における作用を模式的に示したものである。
フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B024 AA20 CA01 CA11 HA19 4B063 QA01 QA13 QA17 QQ42 QQ52 QR14 QR41 QR54 QS02 QS16 QX01 QX07 4C065 AA04 BB09 CC01 DD02 EE02 HH01 JJ07 KK02 LL01 PP05
Claims (14)
- 【請求項１】 正常な塩基対を形成することができない
塩基の対において、次の一般式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表される、その各々の塩基と対を形成し得る化学構造部
分Ａ及び化学構造部分Ｂ、並びに当該化学構造部分Ａ及
びＢを結合するリンカー部分Ｌを有する化合物を用い
て、当該正常な塩基対を形成することができない塩基の
対に疑似的に塩基対を形成させ、当該疑似的な塩基対の
形成を測定することからなる正常な塩基対を形成するこ
とができない塩基の対を検出、同定する方法。 - 【請求項２】 一般式（Ｉ）で表される化合物の化学構
造部分Ａ及びＢが、塩基と水素結合を形成し、かつ周囲
の塩基とのスタッキング効果により安定化されることに
より塩基と対を形成することを特徴とする化合物である
請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 一般式（Ｉ）で表される化合物の化学構
造部分Ａ及びＢが、塩基との水素結合が可能な２個以上
化学構造部分を含有する複素環式芳香族基を有するもの
である請求項１又は２に記載の方法。 - 【請求項４】 一般式（Ｉ）で表される化合物の化学構
造部分Ａ及びＢの少なくともひとつが、ナフチリジン又
はその誘導体である請求項３に記載の方法。 - 【請求項５】 一般式（Ｉ）で表される化合物における
化学構造部分Ａ及びＢとリンカー部分Ｌとの結合が、カ
ルボン酸アミド結合である請求項１〜４のいずれかに記
載の方法。 - 【請求項６】 一般式（Ｉ）で表される化合物が次の一
般式（II）、 【化１】 （式中、Ｒ、Ｒ１は、水素原子、炭素数１〜１５のアル
キル基であって当該アルキル基中の１個又はそれ以上の
炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換されてもよいア
ルキル基、炭素数１〜１５のアルコキシ基であって当該
アルコキシ基中の１個又はそれ以上の炭素原子が酸素原
子又は窒素原子で置換されてもよいアルコキシ基、又
は、炭素数１〜１５のモノ若しくはジアルキルアミノ基
であって当該アルキルアミノ基中の１個又はそれ以上の
炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換されてもよいモ
ノ若しくはジアルキルアミノ基を示し、 Ｒ２は、炭素数１〜２０のアルキル基であって当該アル
キル基中の１個又はそれ以上の炭素原子が酸素原子、窒
素原子又はカルボニル基で置換されてもよいアルキル基
を示す。）で表される化合物である請求項１〜５のいず
れかに記載の方法。 - 【請求項７】 一般式（Ｉ）で表される化合物が担体に
固定化されている請求項１〜６のいずれかに記載の方
法。 - 【請求項８】 一般式（Ｉ）で表される化合物が標識化
されている請求項１〜７のいずれかに記載の方法。 - 【請求項９】 請求項１〜８のいずれかに記載の正常な
塩基対を形成することができない塩基の対に疑似的に塩
基対を形成させ、当該擬似的な塩基対の形成を測定する
ことからなる正常な塩基対を形成することができない塩
基の対を検出、同定する方法において、正常な塩基対を
形成することができない塩基の対に擬似的に塩基対を形
成させるための次の一般式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表される化合物からなる試薬。 - 【請求項１０】 試薬が、正常な塩基対を形成すること
ができない塩基の対に擬似的に塩基対を形成させるため
の塩基対生成剤である請求項９に記載の試薬。 - 【請求項１１】 請求項９に記載の試薬、及び検出、同
定用の資材からなる正常な塩基対を形成することができ
ない塩基の対に擬似的に塩基対を形成させ、当該擬似的
な塩基対の形成を測定することからなる正常な塩基対を
形成することができない塩基の対を検出、同定するため
のキット。 - 【請求項１２】 次の一般式（II）、 【化２】 （式中、Ｒ、Ｒ１は、水素原子、炭素数１〜１５のアル
キル基であって当該アルキル基中の１個又はそれ以上の
炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換されてもよいア
ルキル基、炭素数１〜１５のアルコキシ基であって当該
アルコキシ基中の１個又はそれ以上の炭素原子が酸素原
子又は窒素原子で置換されてもよいアルコキシ基、又
は、炭素数１〜１５のモノ若しくはジアルキルアミノ基
であって当該アルキルアミノ基中の１個又はそれ以上の
炭素原子が酸素原子又は窒素原子で置換されてもよいモ
ノ若しくはジアルキルアミノ基を示し、 Ｒ２は、炭素数１〜２０のアルキル基であって当該アル
キル基中の１個又はそれ以上の炭素原子が酸素原子又は
窒素原子で置換されてもよいアルキル基を示す。）で表
される化合物又はその固定化物。 - 【請求項１３】 一般式（II）で表される化合物が次の
一般式（III）、 【化３】 である請求項１２に記載の化合物。 - 【請求項１４】 検体となる１本鎖のＤＮＡ又はＲＮＡ
と、それに対応する正常な塩基配列を有するＤＮＡ又は
ＲＮＡとをハイブリダイズさせ、次いで当該ハイブリダ
イズしたＤＮＡ又はＲＮＡにおける正常な塩基対を形成
することができない塩基の対を次の一般式（Ｉ）、 Ａ−Ｌ−Ｂ （Ｉ） （式中、Ａは正常な塩基対を形成することができない塩
基の対の片方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｂ
は正常な塩基対を形成することができない塩基の対のも
う一方の塩基と対を形成し得る化学構造部分、Ｌは化学
構造部分Ａ及びＢを結合するリンカー構造を示す。）で
表される、その各々の塩基と対を形成し得る化学構造部
分Ａ及び化学構造部分Ｂ、並びに当該化学構造部分Ａ及
びＢを結合するリンカー部分Ｌを有する化合物を用い
て、当該正常な塩基対を形成することができない塩基の
対に擬似的に塩基対を形成させ、当該擬似的な塩基対の
形成を測定することからなる正常な塩基対を形成するこ
とができない塩基の対を検出、同定することからなるＤ
ＮＡ又はＲＮＡにおける塩基配列の異常を検出する方
法。
Priority Applications (5)
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|---|---|---|---|
| JP33662099A JP3705975B2 (ja) | 1999-11-26 | 1999-11-26 | ミスマッチ認識分子 |
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| EP00970093A EP1164202B1 (en) | 1999-11-26 | 2000-10-26 | Mismatch-recognizing molecules |
| US09/889,976 US6607890B1 (en) | 1999-11-26 | 2000-10-26 | Mismatch-recognizing molecules |
| PCT/JP2000/007497 WO2001038571A1 (fr) | 1999-11-26 | 2000-10-26 | Molecule reconnaissant les mesappariements |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33662099A JP3705975B2 (ja) | 1999-11-26 | 1999-11-26 | ミスマッチ認識分子 |
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|---|---|
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| JP2003259899A (ja) * | 2002-03-07 | 2003-09-16 | Japan Science & Technology Corp | ミスマッチ検出分子 |
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| WO2005090604A1 (ja) * | 2004-03-19 | 2005-09-29 | Japan Science And Technology Agency | 遺伝子変異検出方法及び遺伝子変異検出用キット |
| JP2006104159A (ja) * | 2004-10-07 | 2006-04-20 | Kyoto Univ | ミスマッチ塩基対検出分子およびミスマッチ塩基対検出方法、並びにその利用 |
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- 2000-10-26 EP EP00970093A patent/EP1164202B1/en not_active Expired - Lifetime
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2002006282A1 (fr) * | 2000-07-17 | 2002-01-24 | Japan Science And Technology Corporation | Molecules capables de liaison au telomere et similaire, et methode d'utilisation desdites molecules |
| US7351531B2 (en) | 2000-07-17 | 2008-04-01 | Japan Science And Technology Corporation | Molecules capable of binding to telomere and the like and method with the use of the same |
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| JP2004275179A (ja) * | 2003-02-28 | 2004-10-07 | Japan Science & Technology Agency | ミスマッチ検出分子およびミスマッチ検出方法、並びにその利用 |
| CN100453547C (zh) * | 2003-02-28 | 2009-01-21 | 独立行政法人科学技术振兴机构 | 阻碍剂 |
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| JP2005013023A (ja) * | 2003-06-24 | 2005-01-20 | Japan Science & Technology Agency | プローブの蛍光標識化方法 |
| WO2005090604A1 (ja) * | 2004-03-19 | 2005-09-29 | Japan Science And Technology Agency | 遺伝子変異検出方法及び遺伝子変異検出用キット |
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