JP2000510513A - 低ステロール且つ高トリグリセライドの微生物性油を得るための極性溶媒によるステロール抽出 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、油を極性溶媒と接触させて溶媒に可溶な少なくとも１種の化合物を抽出すること、および次いでこのように処理した油から化合物を含む溶媒を分離することを含む、油の処理方法に関する。油は微生物由来であり、ヘキサンを用いて発酵ブロスまたはその濾液のいずれかから抽出される。抽出されるべき化合物は通常ステロールまたはジグリセライドである。溶媒は５％までの水を含むエタノールである。油は、例えばアラキドン酸のような炭素数が１８、２０または２２のω-３またはω-６の脂肪酸のような多不飽和脂肪酸を含むことができる。

Description

【発明の詳細な説明】 低ステロール且つ高トリグリセライドの微生物性油を得るための 極性溶媒によるステロール抽出技術分野 本発明は、精製された（例えば抽出）多不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）含有（微生 物性）油、特にトリグリセライド含量が少なくとも９７％および／またはステロ ール含量が１.５％より低いかまたは１０％より高い油に関する。背景技術 種々の発酵工程から得られる多不飽和脂肪酸を含む脂質製品を食材中に含有す るものの傾向が増加しつつある。これは、乳児食処方にある種の多不飽和脂肪酸 を組み込むという最近設定された要求にとって重要なことである。 多不飽和脂肪酸を含有する脂質または油の発酵による製造に関する種々のプロ セスが記載されてきた。例えば、ＥＰ-Ａ-１５５,４２０にはモルティエレラ(Mo rtierella)由来のγ-リノレン酸（ＧＬＡ）含有脂質の生産について、ＥＰ-Ａ- ２２３,９６０、ＥＰ-Ａ-２７６,５４１およびＷＯ-Ａ-９２／１３０８６にはモ ルティエレラ および／またはピシウム（Pythium）由来のアラキドン酸（ＡＲＡ ）含有油の生産について、ＷＯ-Ａ-９１／０７４９８およびＷＯ-Ａ-９１／１１ ９１８にはクリプテコディニウム・コーニイ（Crypthecodinium cohnii）またはトラウストキトリウム (Thraustochytrium)由来のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ） 含有油の生産について、およびＷＯ-Ａ-９１／１４４２７にはニツィア(Nitzsch ia)由来のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）含有油の生産が記載されている。代 表的には,必要とする多不飽和脂肪酸を含有する脂質を産生する微生物種は好適 な媒体中で培養され、そのバイオマスは必要な脂質が得られる前に収穫される。 トリグリセライド含有量の比較的高い脂質濃縮物を得るために、代表的には抽 出工程で脂質用の非極性溶媒（例えばヘキサン）または超臨界ＣＯ₂が用いられ る。例えば、ＥＰ-Ａ-２４６,３２４には、極性または非極性（中性）のどちら かの脂質に富んだそれぞれの抽出物を得るために、モルティエレラ由来の脂質を 単離するための分別抽出方法が記載されている。しかし、中性脂質抽出物はなお 比較的トリグリセライド含量が低く（８９.３％）、ステロール含量が高い（９. ４％）。米国特許第４,８５７,３２９号明細書にはモルティエレラバイオマス由 来の中性脂質を選択的に溶離するために超臨界ＣＯ₂を用いることを含む抽出方 法が記載されている。しかし、脂質抽出物のトリグリセライド含量は８６％を超 えていない。 ヤマダ他著、「インダストリアル・アプリケーション・オブ・シングル・セル ・オイル」第１１８-１３８頁（１９９２）、カイル（Ｋｙｌｅ）およびラトレ ッジ（Ｒａｔｌｅｄｇｅ）編にはヘキサンを用いたモルティエレラ・アルピナ（ alpina）バイオマスから抽出したアラキドン酸を含有する油が記載されている。 精製した油はトリグリセライド含量が９０％である。 このように、目下のところ従来の発酵および抽出技術を用いて高トリグリセラ イド含量、即ち９５％またはそれ以上の含有量の微生物性トリグリセライド油は 得られていない。またステロール含量が特に低い（例えば１.５％より低い）か または特に高い（例えば少なくとも１０％）の油を調製することもできていない 。 発明の開示 本発明は、一般に、微生物バイオマスから抽出され、得られまたは由来する油 を極性溶媒で処理するトリグリセライドを高含有量でおよび「非鹸化性物」を低 含有量で含む（微生物性）油の製造方法に関する。 本発明は、したがって、トリグリセライドを例えば、９５％以上のような高含 量で含む微生物性（または微生物由来の）油を提供することができる。しかし、 この油はトリグリセライド含量が少なくとも９７％、好ましくは９８％以上、最 適には９９％以上であってもよい。この（微生物性）油は、その代わりにまたは それに加えて、ステロール含量が低い（例えば１.５％以下）かまたは高い（例 えば１０％以上）ものであってもよい。ステロールが含量は好ましくは１％以下 、例えば０.６％以下、最適には０.３％以下であってもよい。 本発明の油は、医薬（または治療薬）品、化粧品、家畜の飼料または食品の組 成物（ヒトまたは動物の消費用）のような種々の組成物、特に乳児食処方または 栄養補給組成物中に使用することができる。 したがって、本発明の第１の面は、微生物的に誘導される油（微生物に由来す る油）の処理方法に関するもので、この方法は、溶媒中に可溶な少なくとも１種 の化合物を抽出するために油を極性溶媒と接触させること、および（このように 処理された）油から化合物を含む少なくとも数種類の溶媒を分離することを含む 。 微生物由来の油は１種類以上の微生物によって抽出され、得られまたは産生さ れる。多くの場合これは同種の微生物であろうが、本発明では２種類以上の異な る微生物の混合物も想定されている。したがって、本発明の方法は油そのものの 産生に続くものであってよい。油は微生物によって産生されたものでもよいし、 微生物内部（例えば細胞内部に）存在するものでもよい。あるいはまた、（微生 物の）発酵から得られるまたは発酵の結果である組成物（通常水性）から得ても よい。この（水性）組成物には微生物そのものが含まれていてもよい：その場合 には通常それは発酵ブロスである。微生物（または当業者にバイオマスと呼ばれ ているもの）は（発酵後）多くの方法、例えば、濾過、遠心分離または傾斜法に よって除くことができる。油はこのバイオマスから抽出または得ることができる 。 微生物性油は通常抽出によって得られることになろう。この場合には好ましく は、非極性または好ましくは水と非混和性の溶媒、または少なくとも油状成分を 抽出することができる溶媒を用いて抽出することを含んでいるであろう。このよ うな溶媒は炭素数が６〜１０のアルカン、例えばヘキサン、または（超臨界）二 酸化炭素であってもよい。 異なる微生物は異なる油を産生するであろう。これらは多不飽和脂肪酸の量お よび他の成分が異なることがありうるし、実際、多不飽和脂肪酸類は異なる形、 例えばジグリセライド、トリグリセライドおよび／またはホスホリピドであって もよい。それはそれとして、微生物由来の油でさえ、他の原料（例えば、動物、 魚または植物）から得られた１種以上のこれら多不飽和脂肪酸を含有する油とは かなり異なることがありうる。 考慮されている微生物は、好ましくは１種以上の多不飽和脂肪酸を、例えば発 酵の際に、産生することができるが、広範囲に異なるものである。微生物はバク テリア、藻類、真菌類または酵母でありうる。好適な発酵工程、微生物および多 不飽和脂肪酸含有油は同時係属の国際出願、ＰＣＴ／ＥＰ９７／０１４４８〔ギ スト-ブロケイズビーブイ（Gist-brocades B.V.）の名前で１９９７.３.２１に 出願〕に記載されており、その内容は本発明の一部とする。 好ましい藻類は、クリプテコジニウム（Crypthecodinium）、ポリフィリジニ ウム (Porphyridium)またはニツィア(Nitzschia)属である。好ましい真菌類は、トラウストキトリウム (Thraustochytrium)、モルティエレラ、ピシウム、ムコラ レス (Mucorales)またはエントモフトラ(Entomophthora)属、特にモルティエレラ ・アルピナ 種のものである。 抽出されるべき化合物は、必要とする化合物であってもよいし、その場合には 化合物は精製または単離をもする必要があるし、または油から除去したい不純物 であってもよい。一般的に言えば、抽出されるべき化合物は後者の範疇に属する 。したがって、化合物は「非鹸化性物」、言い換えればアルカリ（例えば苛性ソ ーダ）で処理した後（水に）可溶化されない、したがって塩を形成しない（した がってそれはケン化することができないかもしれない）化合物であってもよい。 他の化合物にはステロール類が含まれ、それらは４個の共役した環状骨格、３個 の芳香族Ｃ₆環および１個のシクロペンタン環を有する脂環式アルコール類（例 えば、デスモステロール、コレステロール）、脂肪族およびテルペンアルコール 類（トコフェロール）、ワックスおよびポリプロピレングリコールのような消泡 剤であってもよくこれらは発酵媒体中に含まれていてもよい。 本発明の第２の面は、少なくとも１種のステロールを含む油の処理方法に関す るものであり、この方法には油を極性溶媒と接触させて溶媒に可溶な少なくとも １種のステロールを抽出すること、およびステロールを含む溶媒の少なくとも数 種のものを油から分離することが含まれる、 好ましいステロールとしては、デスモステロール、例えば５-デスモステロー ルが含まれる。２種以上のステロールが存在する場合は、ステロールの７０〜９ ０％、例えば８０〜８５％がデスモステロールであること（例えばモルティエレ ラ により産生された油の場合）が好ましい。 油は少なくとも１種の多不飽和脂肪酸を含むことが好ましい。通常この多不飽 和脂肪酸はマイクローブまたはマイクロオーガニズムのような微生物によって産 生されているであろう。 本発明の第３の面は、少なくとも１種の多不飽和脂肪酸を含有する油の製造方 法に関するものであり、この方法には、少なくとも１種の多不飽和脂肪酸と少な くとも１種のステロールを含む油を極性溶媒で処理して少なくとも数種の多不飽 和脂肪酸および少なくとも数種のステロールを（溶媒中に）抽出する（多不飽和 脂肪酸もステロールも少なくとも部分的には溶媒に可溶である）こと、油（相） から溶媒（相）を分離すること、および溶媒のいくつかを蒸発または除去してス テロール含量が少なくとも１０％の（残留）油を得ることが含まれる。 このステロール含量は、例えば少なくとも１１％、例えば１４％のように、も っと高くてもよい。 本発明で考慮している多不飽和脂肪酸類は炭素数が２０および炭素数が２２の ω-３および炭素数が１８、２０および２２のω-６多不飽和脂肪酸類である。特 に、これらはγ-リノレン酸（ＧＬＡ）、ジホモ-γ-リノレン酸（ＤＬＡ）、ア ラキドン酸（ＡＲＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエ ン酸（ＤＨＡ）を含むことができる。ＤＨＡは、例えばクリプテコジニウム属の 渦鞭毛性藻類のような藻類または真菌類、または例えばトラウストキトリウム属 の真菌によって産生される。ＧＬＡ、ＤＬＡまたはＡＲＡはモルティエレラ、ピ シウム またはエントモフトラ属のような真菌類によって産生され得る。ＥＰＡはポリフィリジニウム またはニツィア属のような藻類によって産生され得る。油類 には例えば１種またはそれ以上の多不飽和脂肪酸がより少量含まれ得るが、代表 的には、油には１種類の多不飽和脂肪酸が支配成分として含まれるか、１種類の 多不飽和脂肪酸だけが含まれる。 本発明の方法では、溶媒を油に加えた後、通常２相（油および溶媒）に分離す る。それから一方の相を他の相から容易に除去することができる。 本発明の第２の面では、油からステロールを抽出することは実施できるであろ う。これにより低ステロール、例えば１.５％以下のステロール含量の油を得る ことができる。第３の面は、いくらかの油およびステロールが溶解している溶媒 の処理に関する。この溶媒は比較的ステロールに富んでいるであろう：ある程度 の溶媒を除去した後、ステロール含量が少なくとも１０％の「残留」油が残る。 したがって、本発明の第４の面は第１から第３のいずれかの方法によって処理 されまたは製造された油に関する。 第５の面は、微生物により産生され、ステロール含量が１.５％以下である少 なくとも１種の多不飽和脂肪酸を含む油に関する。（全）ステロール含量は現実 には１％以下、例えば０.６％未満であってよい。本発明の方法を用いることに より、ステロール含量０.３％以下が達成され得る。 第６の面は、微生物により産生され、ステロール含量が少なくとも１０％の少 なくとも１種の多不飽和脂肪酸を含む油に関する。 第５の面の油がこの第２の面の方法を用いて製造することができ、一方第６の 面の油が第３の面の方法を用いて製造することができるようになろう。 本発明のそれぞれの油は、例えば、後述するように、異なる溶媒を用い、異な る温度で製造することができる。 したがって、本発明は、１種以上の極性溶媒によって油を処理する（例えば微 生物性の）油の製造方法を提供する。したがって、これらの溶媒により、溶媒に 可溶な１種以上の化合物を除去することができる。これにより、濃縮されたまた は高濃度の油が得られる。したがって、油がトリグリセライドを含有するなら、 油中のトリグリセライドの含量を濃くしまたは増すことができる。即ち少なくと も９７％、例えば少なくとも９８％、そして究極的には少なくとも９９％になり 得る。 トリグリセライド含量の増加とともに、溶媒処理により好ましいことに油から １種以上の不純物を除くことができる。特に、この処理により、「非鹸化性物」 の量を減少させることができる。溶媒処理により除去できる非鹸化性物には上記 したステロール類、脂肪属およびテルペンアルコール類、ワックス類および消泡 剤類が含まれ得る。通常、溶媒処理を行っても多不飽和脂肪酸のプロフィルまた はそのように処理した油を変えないであろう。 極性溶媒としては、好ましくは炭素数が１〜６のアルカノール、例えばエタノ ールが含まれる。しかし、溶媒は水性溶媒であってもよい。したがって、好まし くは溶媒にはアルコール（例えばエタノール）および水が含まれる。しかし、溶 媒には他の液体が含まれてもよく、これらはアセトンおよび／またはイソプロパ ノールであることもできる。 溶媒としてエタノールが含まれる場合、溶媒の水含量は０〜２０％、例えば１ 〜７％、任意に２〜４％であってよい。溶媒としてメタノール、アセトンおよび ／またはイソプロパノール（ＩＰＡ）が含まれる場合、水含量はそれぞれ０〜２ ％、５〜５０％および５〜１５％である。したがって、溶媒は２種以上の液体の 混合物を含んでもよい。少量の水を含むエタノール（例えば９７％のエタノール 、３％の水）は溶媒処理後のトリグリセライドの収量をかなり改善することがで きることが見つかっている。これはトリグリセライドがこれらの特定の溶媒に比 較的不溶性であるためである。溶媒温度が１５〜３０℃、例えば２０〜２５℃の 場合も、溶媒中に溶解するトリグリセライドの量は減少する。 異なる溶媒を使用することにより、抽出されるステロール（または実際には多 不飽和脂肪酸）の量を変えることができる。上記で説明したように、エタノール と水の混合物を使用することにより、この溶媒はステロールを溶解するであろう が、トリグリセライド類はそれに比較的不溶性であるため、トリグリセライドが 高い収率で得られる。 多不飽和脂肪酸は、一般にトリグリセライド類およびジグリセライド類のよう な種々の形で存在する。これらの化合物は実際上１種以上（通常は１種類だけで あるが）の多不飽和脂肪酸がその骨格に付いたグリセロール分子である。トリグ リセライドの形のものが支配的であるものが好ましい。第５の面の油（例えば第 ２の面の方法により得られる油）中では、存在するトリグリセライドの量は、好 ましくは２.２％以下、好ましくは１％未満である。ここで使用される溶媒の温 度は、好ましくは１０〜４０℃、例えば２０〜３０℃である。 第６の面の油中では、トリグリセライド類とジグリセライド類の相対比率は変 動し得る。この油の製造においては、溶媒は、ステロールだけでなく、元の油中 に存在するトリグリセライド類およびジグリセライド類のいくつかをも抽出する ように選択する。したがって、トリグリセライド類の含量は６０％から９０％の 間で変動してもよい。ジグリセライド類の含量は５％から２５％の間で、例えば １２％から２２％の間で変動してもよい。３％の水を含有するエタノールはジグ リセライド類（およびトリグリセライド類）に対する溶媒であり得、したがって この溶媒は第３の面の方法、例えば第３の面の油を製造する方法で使用するに好 適である。この場合溶媒は、好ましくは５０〜７０℃、例えば５５〜６５℃の温 度で使用する。 抽出されるべき化合物の量、即ちトリグリセライド含量はいくつかのプロセス パラメータを変えることにより調整することができる。例えば、油に対する溶媒 の割合、抽出温度および／または抽出工程を反復することにより調整することが できる。２回以上の抽出を行う場合は、向流抽出法が好ましく、それによりトリ グリセライドの損失を最小限にすることができる。 通常、油は適当な溶媒により（例えば乾燥した）微生物性バイオマスから抽出 され、その（水と非混和性の）溶媒を蒸発して得られる粗油であろう。油は本発 明の方法を行うに先だって１回以上の精製工程にかけてもよい。 本発明の油、または第１、第２または第３の方法により得られる油は、更なる 加工を行うことなく種々の目的に使用することができ、あるいは更にひとつ以上 の精製工程を受けることができる。油は添加剤または補充剤として、例えば乳児 食のような食品組成物に使用することができる。しかし、また化粧用あるいは医 薬用組成物中に使用することもできる。したがって、本発明は更なる面として、 食料、飼料または医薬組成物や化粧組成物のような、本発明の油を含み、または それに本発明の油が添加される組成物に関する。好ましい組成物は乳児食または 栄養補充剤のような食品である。 したがって、本発明の油は低ステロール含量および／または低ジグリセライド 含量である。またこれは高トリグリセライド含量であってもよい。このため、油 は栄養目的において特に好適なものとなり、栄養補充剤として用いることができ る。油は、油として用いてもよいし、または例えばゼラチンカプセル中にカプセ ル化してもよい。このように、油はヒトまたは動物の消費用に好適なように食品 、飼料または食材に組み込むことができる。好適な例は健康飲料およびパンであ る。特に狙いとしているのものは乳児食中、または化粧品中での使用である。 本発明のひとつの面の好ましい性質および特徴は、必要であれば修正を加えて 他の面に等しく適用できる点である。発明を実施するための最良の形態 本発明は、以下の実施例によって更に記載するが、これは単に説明の手段とし て記載するものであり、発明を制限するものではない。比較実施例１ モルティエレラ・アルピナ（Mortierella alina）バイオマス由来の粗アラキド ン酸（ARA）油の回収 モルティエレラ・アルピナ発酵により得られた５００リットルのブロスをメン ブレンフィルタープレス（布タイプ：プロペックス ４６Ｋ２）で濾過した。ブ ロスを０.２バールの圧力差で濾過した。平均流量が約２３０ｌ／ｍ²ｈとなるよ うに、５００リットルのブロスを６.３ｍ²の全濾過面積を使って２１分以内に濾 過した。フィルター上のケーキを、ケーキ体積の１０倍の水道水で平均流速３２ ０ｌ／ｍ²ｈで３０分水洗した。 ケーキを５.５バールで３０分間絞り、約４５％の回収バイオマスを含む乾燥 物を得た。 得られたバイオマスケーキを、プロフィルを持ったバレルとユニバーサルスク リューを備えた１軸スクリュー押出機を用いて押出しにかけた。押出しに使用し たダイプレートは直径２ｍｍの穴が開けてある。 押出し物の乾燥は、流動床乾燥機中で空気（８０００Ｎｍ³／ｍ²ｈ）によって 行った。床温度の設定は８0℃とした。乾燥した押出しバイオマスの直径は２ｍ ｍであり、乾燥後の乾燥物中のバイオマス含量は約９６％であった。 次にアラキドン酸含有粗油（ＡＲＡ油）を、溶媒としてヘキサンを用いて押出 し物から抽出した。実施例２および３ １００％エタノールによる微生物性ＡＲＡ油の処理 実施例１の押出し物から１体積の１００％エタノールを用いて１分間ハンドシ ェイク（手振り）することにより５ｍｌの粗ＡＲＡ油を抽出した。次いで５００ ０ｒｐｍで５分間遠心分離して上層と下層を分離した。試料を（６００ＭＨｚ） ＮＭＲによって（トリグリセライド、ジグリセライド、ステロール（デスモステ ロール含量だけを測定した）および消泡剤について）解析した。 粗ＡＲＡ油を、９体積の１００％エタノールで、異なる２つの温度で抽出して 、 ステロールとジグリセライド（ＤＧ）が低濃度でトリグリセライド（ＴＧ）が高 濃度の油を得た（表１参照）。ＴＧの収率は溶媒抽出後の油中に残留するトリグ リセライドのパーセントである。また消泡剤は除去されており、抽出後のエタノ ール中に見出された。しかし、トリグリセライドの収率はＴＧのいくらかはエタ ノール中に溶解しているため低かった（したがってエタノール中に除去された） 。 表１ １００％エタノールによる粗ＡＲＡ油の抽出 処理した油のデータ ＴＧ：トリグリセライド類 ＤＧ：ジグリセライド類 ステロール：デスモステロールとして実施例４〜９ ９７％エタノールによる微生物性ＡＲＡ油の処理 ９７％のエタノールを用い、油に対する体積比を変えた以外は実施例２および ３と同様に行った。 １、３および９体積の９７％エタノールにより粗ＡＲＡ油を抽出してステロー ルとジグリセライド（ＤＧ）が低濃度でトリグリセライド（ＴＧ）が高濃度の油 を得た（表２参照）。 油があまり９７％エタノール中に溶解しないため、トリグリセライドの収率は ９２％以上であった。環境温度（約２０℃）では、より高いトリグリセライド収 率およびジグリセライドとステロールのより良好な除去が観察された。注目すべ きことに、処理後の油中にはエタノールはまったく認められなかった。 表２ ９７％エタノールによる粗ＡＲＡ油の抽出 処理油のデータ ＴＧ：トリグリセライド類 ＤＧ：ジグリセライド類 ステロール：デスモステロールとして ＊エタノールが部分的に油に溶解して、層分離がより困難になったために、下（ 油）層が増加したことによる。 エタノール層も抽出後解析し、ステロールがかなり増加していた。消泡剤（ポ リプロピレングリコール）も抽出し、エタノール中に見出された（表３）。 表３ ９７％エタノールによる粗ＡＲＡ油の抽出 エタノール層のデータ ＴＧ：トリグリセライド類 ＤＧ：ジグリセライド類 ステロール：デスモステロールとして

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｐ 7/64 // Ａ２３Ｄ 9/00 Ａ２３Ｄ 9/00 (Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｒ 1:645） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ， ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者 スハープ，アルベルト オランダ、エヌエル―2993ベーヘー・バー レントレフト、スミットシューク13番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．油を極性溶媒と接触させて溶媒に可溶な少なくとも１種の化合物を抽出する こと、および油から化合物を含む溶媒の少なくともいくらかを分離することを含 む、微生物由来の油の処理方法。 ２．油が発酵により得られる組成物から得られまたは抽出される請求項１に記載 の方法。 ３．組成物が発酵ブロスである請求項２に記載の方法。 ４．油が、組成物中に存在する微生物から由来し、得られまたは抽出される請求 項２または３に記載の方法。 ５．組成物から先ず微生物が除かれる請求項２または３に記載の方法。 ６．微生物が組成物を濾過することにより除かれる請求項５に記載の方法。 ７．油を得る前に微生物を乾燥する請求項３〜６のいずれかに記載の方法。 ８．油がトリグリセライド用の溶媒を用いて抽出されている請求項２〜７のいず れかひとつに記載の方法。 ９．溶媒がヘキサン、超臨界二酸化炭素またはイソプロパノールである請求項８ に記載の方法。 １０．油がバクテリア類、真菌類、酵母または藻類により産生される、または微 生物がバクテリア類、真菌類、酵母または藻類である請求項１〜９のいずれかひ とつに記載の方法。 １１．微生物がクリプテコディニウム（Crypthecodinium）、ムコラレス(Mucora les)、トラウストキトリウム(Thraustochytrium)、モルティエレラ(Mortierella )、ピシウム（Pythium）、エントモフトラ(Entomophthora)、ポリフィリジニウ ム (Porphyridium)またはニツィア(Nitzschia)属である請求項１０に記載の方法 。 １２．油がモルティエレラ・アルピナ（Mortierella alpina）由来である請求項 １〜１１のいずれかに記載の方法。 １３．化合物が微生物によって産生されるかまたは微生物内の細胞内で産生され る請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。 １４．化合物がステロール、脂肪属またはテルペンアルコール、ジグリセライド またはワックスである請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。 １５．化合物がデスモステロールまたはジグリセライドとして存在する多不飽和 脂肪酸（ＰＵＦＡ）であり、および／またはトリグリセライドとして存在する多 不飽和脂肪酸でない請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。 １６．油を極性溶媒と接触させて溶媒に可溶な少なくとも１種のステロールを抽 出すること、およびステロールを含む溶媒の少なくともいくらかを油から分離す ることを含む少なくとも１種のステロールを含む油を処理する方法。 １７．油が少なくとも１種の多不飽和脂肪酸を含む請求項１〜１６のいずれかに 記載の方法。 １８．少なくとも１種の多不飽和脂肪酸および少なくとも１種のステロールを含 む油を極性溶媒で処理して、溶媒に少なくとも部分的に溶解する多不飽和脂肪酸 の少なくともいくらかおよびステロールの少なくともいくらかを抽出すること、 溶媒を油から分離すること、および溶媒のいくらかを蒸発または除去してステロ ール含量が少なくとも１０％の（残留）油を得ることを含む、少なくとも１種の 多不飽和脂肪酸を含む油の製造方法。 １９．ステロールがデスモステロールである請求項１６〜１９のいずれかに記載 の方法。 ２０．多不飽和脂肪酸が炭素数１８、２０または２２のω-３またはω-６の多不 飽和脂肪酸である請求項１６〜１９のいずれかに記載の方法。 ２１．多不飽和脂肪酸がγ-リノレン酸、ジホモ-γ-リノレン酸、アラキドン酸 、エイコサペンタエン酸またはドコサヘキサエン酸である請求項２０に記載の方 法。 ２２．溶媒が炭素数１〜６のアルカノールまたはアセトンを含む請求項１〜２１ のいずれかに記載の方法。 ２３．溶媒がエタノールまたはイノプロパノールである請求項１８〜２２のいず れかに記載の方法。 ２４．溶媒がエタノールおよび１〜５％の水を含む請求項１〜１７のいずれかに 記載の方法。 ２５．抽出に使用される溶媒の量が処理される油の体積の１〜９倍である請求項 １〜２４のいずれかに記載の方法。 ２６．請求項１〜２５のいずれかに記載の方法により処理または製造される油。 ２７．微生物により産生された、少なくとも１種の多不飽和脂肪酸を含み、ステ ロール含量が１.５％以下である油。 ２８．ステロール含量が１％以下である請求項２６または２７に記載の油。 ２９．微生物によつて産生された、少なくとも１種の多不飽和脂肪酸を含み、ス テロール含量が少なくとも１０％である油。 ３０．請求項２６〜２９のいずれかに記載の油の、医薬、化粧、飼料または（ヒ トまたは動物が消費するための）食材組成物中への利用。 ３１．請求項２６〜２９のいずれかに記載の油を含み、またはその油が添加され ている組成物。 ３２．食材、飼料または医薬組成物、またはヒトまたは動物の消費用の栄養補充 剤である請求項３１に記載の組成物。 ３３．乳児食処方である請求項３１または３２に記載の組成物。 ３４．化粧組成物である請求項３１に記載の組成物。