JPS626694A - カビ類または藻類による脂質製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野〕 本発明は、脂質生合成能を有するモルティエレラ属を除
くカビ類もしくは藻類、またはモルティエレラ属を除く
同カビ類もしくは藻類の固定化微生物粒子を用いて脂質
を生成せしめるに際し、反応系に界面活性剤を存在させ
て反応を行なうことを特徴とする脂質製造方法に関する
。

［従来技術］ 微生物菌体の脂質はそれ自体油脂原料として、また脂質
の精製によってえられる各種ステロールや各種高級脂肪
酸などの有用物質は食品用、医薬用、または一般工業用
として幅広い用途に適用できるので、従来より脂質生産
性を高めたり望ましい組成の脂質を生産させる技術に関
して活発な研究開発が続けられてきた。特に最近ではこ
のような脂質から回収される不飽和脂肪酸のうちアラキ
ドン酸やγ−リルン酸が多様な生理活性を有することが
明らかになりつつあり、ますます注目を集めている。従
来このような脂質の製造方法としては、カカオ脂類似の
油脂の製造法（特開昭６０−７５２９２号）、アラキド
ン酸の製造法（特開昭５２−６４４８２号、バイオテク
ノロジー・アンド・バイオエンジニアリング（ＢｉＯｔ
ｅＣｈｎＯＩＯＱｙａｎｄ　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉ
ｎｇ）、２５巻、１０５７（１９８３））およびγ−リ
ルン酸の製造法（特公昭４７−２２２８０号、同５８−
２２１９９号）などを示すことができる。

［発明が解決しようとする問題点］ しかしながら、このような製造方法では各種微生物菌体
内の脂質蓄積量は制限を受け、充分量生産することは不
可能であり、しかも脂質の大部分が菌体内に蓄積される
ので、これらを回収す）ためには菌体を破砕処理したり
酸処理したりするなどの複雑な抽出処理が必要となって
いた。このような抽出処理を用いれば抽出される多量の
不純物の存在によって精製プロセスがきわめて複雑にな
り、工業化を推進するうえで大きな阻害要因となってい
た。したがって、脂質を高収量で製造でき、しかも回収
が容易な新しい製造プロセスの開発が強く望まれていた
。

［問題点を解決するための手段］ 本発明者は、このような観点から鋭意研究を重ねた結果
、反応系に界面活性剤を存在させながら反応を行なえば
菌体内に蓄積した脂質を菌体外に著量移行させることが
でき、脂質が高収量でしかも容易に回収できることを見
出し本発明を完成するにいたった。また、反応系に界面
活性剤を存在させながら反応を行なう際に脂質生合成能
を有するカビ類または藻類の固定化微粒子を用いれば反
応器中の微生物濃度を高′Ｓ度に維持できるのでより高
収量に、また効率よく脂質を生産することができる。

菌体中に生成した有用物質を反応液中に移行せしめよう
とした例には酵母菌体中のグルタチオンの製造方法（特
開昭５４−８６６９１号）があるが、本発明とは微生物
の擾類や蓄積される物質が異なり、脂質を効率よく反応
液中に移行せしめようとする方法は本発明が最初である
。

［作用および実施例］ 本発明は、脂質生合成能を有するモルティエレラ属を除
くカビ類もしくは藻類、またはモルティエレラ属を除く
同カビ類もしくは藻類の固定化微生物粒子を用いて脂質
を生成せしめるに際し、反応系に界面活性剤を存在させ
て反応させることを特徴とする脂質の製造方法であって
、本発明によって反応液中に多山の脂質を蓄積すること
ができる。このような脂質が菌体外にスムーズに移行す
る理由は明らかではないが、界面活性剤を適切な条件下
で反応液中に存在させれば界面活性剤は微生物の生育に
何ら悪影響を与えることなく微生物の細胞表面に作用し
て、細胞膜の透過性を改善するものと思われる。このよ
うにしてえられた反応液中の脂質は従来より公知の抽出
および精製方法によって容易に高純度の油脂、各種ステ
ロールおよび各種高級脂肪酸などを回収することができ
る。

本発明に使用しつる微生物としては、脂質生合成能を有
するカビ類または藻類であればよく任意のものを用いる
ことができるが、（１）アスペルギルス属（ＡｓＤｅｒ
ｏｉｌｌｕｓ）　、（２）フザリウム（ＦｌｌＳａｒｉ
ｕｍ）、（３）ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ａ＋）、（４）ポルピリジウム属（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄ
ｉｕｍ）、（５）ムコール属（Ｈｕｃｏｒｌ　、（６）
リゾブスＩＩ　（Ｐｈｉｚｏｐｕｓ）、（７１アブシデ
イア属（Ａｂｓｉｄｉａ）　、ｆ８）アクチノムコール
１ｉｌ（Ａｃｔｉｎｏｍｕｃｏｒ）　、ｆ９）コアネフ
オラ属（Ｃｈｏａｎｅｐｈｏｒａ）　、ＱＯ）カニンガ
メラ罵（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌ　ｌａ）、（１１）
ピコマイセス属ｔｐｈｙｃｏａ＋ｙｃｅｓ）、（１２）
リゾムコール属（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ）、（１３）へ
！ＪＤス＋５ム１１（Ｈｅｌ　ｉｃｏｓｔｙｌｕｍ）、
（１４）パエシロマイセス属（Ｐａｅｃ　ｉ　Ｉｏｍｙ
ｃｅｓ）、（１５）シンセファラストラム属（Ｓｙｎｃ
ｅｐｈａｌａｓｔｒｕｍ）　、（１６）サルシネラ属（
Ｃ＋ｒＣｉｎｅｌｌａ）、（１７）ゴングロネラ属（Ｇ
ｏｎａｒｏｎｅｌｌａ）　、（１８）バクセラ属（Ｂａ
ＣｋＬＩＳｅｌｌａ）、（１９）ピチウム属（Ｐｙｔｈ
ｉｕｉ）　、（２０）フエネロマイセス属（Ｆｅｎｎｅ
ｌｌｏｍｙｃｅｓ）および（２１）スピルリナ属（Ｓｐ
ｉｒｕｌｉｎａ）をその代表的なものとしてあげること
ができる。特にアラキドン酸については上記のうち（１
）〜（６）に属する微生物、γ−リルン酸については（
５）〜（２１）に属する微生物から選択するのが含有」
の点から好ましい。

本発明に使用しうる微生物をさらに示すと、クラドスポ
リウム属（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）、トリコデルマ
属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）　、ベリキュラリア属（
Ｐｅｌｌｉｃｕｌａｒｉａ）、グリオクラディウム属（
Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ）　、ヒュミコラ属（Ｈｕｍｉ
ｃｏｌａ）、りラビセプス属（Ｃ１ａｖｉｃｅｓｐｓ）
、クロレラ属（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）　、サブロレグニ
ア属（Ｓａｐｒｏｌｅｏｎｉａ）　、カエトミウム属（
Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｎ＋）、マイコソファエレラ属（Ｈ
ｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌ　Ｉａ）、ネウロスボラ属（Ｎ
ｅｕｒＯ３Ｅ１０ｒａ）、ネクトリア属（Ｎｅｃｔｒｉ
ａ）　、ビロネ？　ｌ１Ｉ（Ｐｙｒｏｎｅｏ＋ａ）、ボ
トリティス属（ａｏｔｒｙｔｔｓ）、セファロスポリウ
ム属（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ）、セルコスポラ
属（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ）、クリソスポリウム属（Ｃ
ｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｌ）　、コクリオポラス属（Ｃ
ｏｃｈｌ　１ｏｂｏｌｕｓ）、コプリナス属（Ｃｏｐｒ
ｉｎｕｓ）、フルティシウム属（Ｃｏｒｔｉｃｉｕｓ）
　、コリネスポラ属（Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ）　、ク
ルブラリア属（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ）。

ドラトマイセス属（ＤＯｒａｔＯｌｌＶＣｅＳ）　、エ
チノボドスボラ属（Ｅｃｈｉｎｏｐｏｄｏｓｐｏｒａ）
　、エメリセラ属（Ｅｎ＋ｅｒｉｃｅｌ　Ｉａ）、ギベ
レラ属（Ｇｉｂｂｅｒｅｌ　Ｉａ）、グロメレラ属（Ｇ
１０■ｅｒｅｌｌａ）、ハイポマイセス属（Ｈｙｐｏｍ
ｙｃｅｓ）　、レンティナス属（ＬｅｎｔｉｎｕＳ）、
レビスタ属（ＬｅｌｌｌＳｔａ）　、マクロホマ属（Ｈ
ａｃｒｏｐｈｏｍａ）、メランコニウム属（Ｈｅｌａｎ
ｃｏｎｉｕＩｌｌ）　、ミクロアスカス属（ＨｉＣｒＯ
ａＳＣＵＳ）、ミクロネクトリエラ属（旧ｃｒｏｎｅｃ
ｔｒｉｅｌｌａ）　、モナスカス属（Ｈｏｎａｓｃｕｓ
）、ネオコスモスボラ（Ｎ、ｅｏｃｏｓｍｏｓｐｏｒａ
）　、ネオサルトルヤ属（Ｎｅｏｓａｒｔｏｒｙａ）　
、バネラス属（Ｐａｎｅｌ　１ｕｓ）、ベリコニア属（
ＰｅｒｉＣＯｎ＋ａ）　、ペスタロチオプシス属（Ｐｅ
ｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ）、フィアロフォラ属（Ｐｈ
ｉａｌｏｐｈｏｒａ）　、ビクノボラス属（ＰＶＣｎＯ
Ｉ）ＯｒＵＳ）、ビリキュラリア属（Ｐｙｒｉｃｕｌａ
ｒｉａ）　、リゾクトニア属（ＲｈｉＺＯＣｔＯｎｉａ
）　、チゾビラム属（ＳＣｈｉＺＯｐｈｙ＋１ｕｌ）　
、ソルダリア属（Ｓｏｒｄａｒｉａ）、スポロルミエラ
属（Ｓｐｏｒｏｒ＠ｉｅｌ　Ｉａ）、ステレウム属（Ｓ
ｔｅｒｅｕｇｉ）　、タラロマイセス属（Ｔａｌａｒｏ
ｍｙｃｅｓ）　、ティレチオブシス属（Ｔｉ１１ｅｔｉ
ｏｐｓｉｓ）、トレメラ属（Ｔｒｅｍｅｌｌａ）、トリ
コピトン属（丁ｒ＋ｃｈｏｐｈｙｔｏｎ）、ツバキア属
（Ｔｕｂａｋｉａ）　、ウスチラゴＩ　（Ｕｓｔｉｌａ
ｇｏ）、ヘルテイシリウム属（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕ
ｎ＋）、ワルドマイセス属（Ｗａｒｄｏｍｙｃｅｓ）、
ジゴフィアラ属（２ｙＯｏｐｈｉａｌａ）およびジゴス
ボリウム属（ＺＶＱＯ３ｐＯｒｉｕｌ）などをあげるこ
とができる。

さらに具体的にそれぞれの属に対する代表的菌株例をあ
げれば、アスペルギルス・カンディダス（Ａ、ｃａｎｄ
ｉｄｕｓ）ＩＦＯ４３０９、フザリウム・オキツボラム
（Ｆ、ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）　ＩＦＯ５９４２、ペニシ
リウム・スピヌロサム（Ｐ、ｓｐｉｒｕｌｏｓｕｍ）Ｉ
ＦＯ５７９３、ポルピリジウム番クルエンタム（Ｐ、　
Ｃｒｕｅｎｔｕｌｌ）、ムコール・アンビガウス（Ｈ，
ａｍｂｉａｕｕｓ）ＩＦＯ６７４２、リゾブス・オリゼ
ー（Ｒ，ｏｒｙｚａｅ）　ＩＦＯ５４１８、リゾブス・
ストロニフ７−（Ｒ，５ｔＯＩＯｎｉｆｅｒ）　ＩＦ０
４７８１、アブシディア・コエルレア（Ａ、ｃｏｅｒｕ
ｌｅａ）ＩＦＯ４０１１、アクチノムコール・レベンス
（Ａ、ｒｅｐｅｎｓ）ＨＵＴ　１０４９、コアネフォラ
・シルシナンス（Ｃ，Ｃ１ｒＣｉｎａｎＳ）　ＩＦＯ５
９９１、カニンガメラ・エチヌレータ・エレガンス（Ｃ
，ｅｃｈｉｎｕｌｅｔａ　ｖａｒ。

ｅｌｅｇａｎｓ）ＩＦＯ４４４１、ピコマイセス・ニテ
ンス（Ｐ、ｎ１ｔｅｎｓ）ＩＦＯ５６９４、リゾムコー
ル・ミーヘイ（Ｒ，ｎ＋１ｅｈｅｉ）　ＩＦＯ９７４０
、ヘリコスチラム・ニグリカンス（Ｈ，ｎｉｇｒｉｃａ
ｎｓ）　ＩＦＯ８０９１、パエシロマイセス・バリオチ
（Ｐ、ｖａｒｉｏｔｉ）　ＨＵＴ　４０２８、シンセフ
ァラストラム・ニグリカンス（Ｓ、ｎｉｇｒｉｃａｎｓ
）ＨＵＴ　１２２９、サルシネ５　・ＩＪ　シタ（Ｃ，
ｒｉｏｉｄａ）　ＩＦＯ６４１１、ゴングロネラ・ブト
レリ（Ｇ、ｂｕｔｌｅｒｉ）、ＩＦｏ　８０８Ｇ、バク
セラ・シルシナ（Ｂ、ｃｉｒｃｉｎａ）ＩＦＯ９２３１
、ピチウム・デバリアナム（Ｐ、ｄｅｂａｒｙａｎｕａ
）ＩＦＯ５９１９、フェネロマイセス感リンプリ（Ｆ、
１ｉｎｄｅｒｉ）　ＩＦＯ６４０９およびスピ／Ｌｚ　
ＩＪす・プラテンシス（Ｓ、　ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）が
ある。

このような微生物の培養条件としては各種微生物が生育
できる条件であれば特に制限はなく、カビ類に対しては
グルコース、糖蜜またはシュクロースなどの炭水化物、
エタノール、酢酸やｎ−アルカン、ｎ−デカン、ヘキサ
デカンまたはヘプタデカンなどの炭化水素類を炭素源と
し、その他必要な栄養源を添加した培地が一般的に用い
られ、温度、ｐＨおよび反応時間などの条件は各種微生
物に適した条件に準ずればよい。また藻類に対しても一
般的に知られる無機栄養源を基本培地とし適切な光照射
度、温度、ｐＨおよび反応時間などの培養条件に準ずれ
ばよい。

本発明の反応系に存在させる界面活性剤は陽イオン界面
活性剤、陰イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤また
は両性イオン界面活性剤のいずれも用いることができる
が、陰イオン界面活性剤および非イオン界面活性剤が特
に効果的である。

陰イオン界面活性剤としては（１）カルボン酸型高分子
活性剤、（２ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸
エステル塩、（３）ポリオキシエチレンアルキルアリル
エーテル硫酸エステル塩、（４）ジアルキルスルホコハ
ク酸塩、（５）アルキルベンゼンスルホン酸塩、（６）
アルキル硫酸エステル塩、（７）脂肪酸塩、（８）アル
キルリン酸塩、（９）アルキルナフタレンスルホン酸塩
、（１０）芳香族スルホン酸ホルマリン縮合物および（
１１）ナフタレンスルホン酸ホルマリン綜合物に属する
もののほか、陰イオン界面活性剤の性質を有するものが
用いられるが、特に（１）〜（４）に属するものが効果
的である。具体的に代表的なものをあげれば、（１）に
ついてはデモールＥＰ（商品名、花王石鹸■製）、ボイ
ズ５４０（商品名、花王石鹸■製）、エレミノールＨＢ
Ｎ−１（商品名、三洋化成工業■製）、エレミノールＨ
ＢＮ−２（商品名、三洋化成工業■製）、サンスパール
ＰＳ−８（商品名、三洋化成工業■製）およびポリスタ
ーＯＮ（商品名、日本油脂■製）など、（′２Ｊについ
てはエマール２０Ｃ（商品名、花王石鹸■製）など、（
３）についてはサンノールＮＦＳ　　（商品名、ライオ
ン■製）およびエマールＮＣ（商品名、花王石鹸■製）
など、（４）についてはペレックス０Ｔ−Ｐ　（商品名
、花王石鹸■製）およびラビゾールＢ−３０（商品名、
日本油脂■製）などを示すことができる。

非イオン界面活性剤としては（１）ポリオキシエチレン
ソルビタン脂肪酸エステル、（２）オキシエチレンオキ
シプロピレンブロックポリマー、（３）・ソルビタン脂
肪酸エステル、（４）ポリエチレングリコール脂肪酸エ
ステル、（５）ポリオ、キシエチレンアルキルエーテル
、（６）ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル
、（７）脂肪酸モノグリセライドおよび（８）ポリオキ
シエチレンアルキルアミンに属するもののほか、非イオ
ン界面活性剤の性質を有するものが用いられるが、特に
（１）〜（４）に属するものが効果的である。具体的に
代表的なものをあげれば（１）についてはポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレートとして、たとえばノニ
オンＬＴ−２２１（商品名、日本油脂■製）、レオドー
ルＴｌ４−Ｌｌ２０　　（商品名、花王石鹸ｌｔｓ製）
およびツイーン２Ｇ（商品名、半井化学薬品■製）など
、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテートとし
て、たとえばレオドールＴＷ−Ｐ１２０（商品名、花王
石鹸■製）およびツイーン４Ｇ（商品名、半井化学薬品
■製〉など、ポリオキシエチレンソルビタンモノステア
レートとして、たとえばレオドールＴＷ−３１２０（商
品名、花王石鹸■製）など、ポリオキシエチレンソルビ
タンモノオレエートとして、たとえばノニオン０Ｔ−２
１１（商品名、日本油脂＠Ｊ製）、レオドールＴＷ−０
１２０（商品名、花王石鹸■製）およびツイーン８０（
商品名、半井化学薬品■製）など、ポリオキシエチレン
ソルビタントリオレエートとして、たとえ【ｒレオドー
ルＴＷ−０３２０（商品名、花王石鹸■製）など、（２
］についてはプロノン２０１および１０２（商品名、日
本油脂■製）など、（３）についてはノニオン０Ｐ−８
ＳＲ（商品名、日本油脂■製）、レオドール５Ｐ−０３
０（商品名、花王石鹸■製）およびエマゾール０−３０
（Ｆ）　　（商品名、花王石鹸■製）など、（４）につ
いてはエマノーン４１１０　（商品名、花王石鹸■製）
などを示すことができる。もちろん、これら陰イオン界
面活性剤および非イオン界面活性剤の両方を適切に混合
して使用することもできる。また界面活性剤は反応の初
期から添加してもよく、反応の途中または終期に添加し
効果的に脂質を反応液中に移行させてもよい。もちろん
、これら界面活性剤の添加により発泡がはげしいばあい
には通常用いられる消泡剤を適量添加すればよい。

本発明の反応系に存在させる界面活性剤の量は、陰イオ
ン界面活性剤のばあいには、ｏ、ｏｏｓ重量％以下では
細胞膜に効果的な影響を与えることができず、５重量％
以上では微生物の生育に好ましくない影響を与えるので
、ｏ、　ｏｏｇ〜５重量％、好ましくは０．０１〜１重
置％、非イオン界面活性剤のばあいにも同様の理由で０
．０５〜８重量％、好ましくは０，３〜３重量％であり
、かかる条件下において脂質が反応液中に著量蓄積する
。

本発明においては、通常のサスペンション系での回分、
半回分、連続培養などの各種培養方法はもちろん適用で
きるが、上記微生物を固定化した固定化微生物を用いる
とより効率的である。固定化の方法は、ゲル化剤を用い
る包括固定化法および微生物保持材料を用いる物理吸着
固定化法のいずれをも適用できる。ゲル化剤としては通
常公知の物質が適用でき、具体的にはポリアクリルアミ
ド、アルギン酸、カラギーナン、コラーゲンおよびウレ
タンプレポリマーなどをあげることができる。

微生物保持材料としては、カビ類や藻類の持つ粘着力に
より固定化を可能ならしめる任意の材料が適用できる。

たとえば、高分子発泡材料としては、ポリエチレンまた
はポリプロピレンなとのポリオレフィン系；ブタジェン
またはイソプレンなどのジエン系；ポリウレタン：ポリ
塩化ビニル、アクリルアミドまたはポリスチレンなどの
ビニル系重合体：ポリエーテル、ポリエステル、ポリカ
ーボネートまたはナイロンなどの縮合系：シリコンおよ
びフッ素樹脂などの材料、無機材料としては、セラミッ
クス、ガラス、活性炭、軽石および金属類などが適用で
きるが、いずれの材料においてもカビ類や藻類を良好に
該微生物保持材料に固定化させるためには、空げき率が
７０〜９９％、車位置線長さ当りの孔数が２〜５０個／
Ｃ■の範囲である多孔質材料か、空げき率が７０〜９９
％である金属加工材料などを使用するのが好ましい。

通常、前記にあげた微生物はベレット状または菌糸状な
どの種々の様相を呈するが、上記の特徴を有する保持材
料を適用すれば、微生物が増殖をくり返す過程において
、微生物固有の粘着力や保持材料の包括作用などによっ
て吸着固定化される。このような各種保持材料は、微生
物の種類および反応条件などによって適宜選択でき、形
状についてはたとえば球状、ブロック状、リング状、筒
状またはシート状などに加工し使用することができる、
。寸法については、微生物の種類、反応条件および反応
器の種類などにより決定できるが、おおむね球状のもの
であれば直径１〜１００Ｉｌｆｆｉ、ブロック状のもの
であれば一辺が１〜１００ｍｍのものが使用される。

微生物を上記保持材料に固定化させるには、通常、公知
の回分、半回分、連続培養法などを用いて容易に吸着固
定化させることができる。

１例を示すと、あらかじめ蒸気などで殺菌された空の該
保持材料と微生物を好ましい反応条件下、たとえばムコ
ール・アンビガウスＩＦＯ６７４２をグルコースを基本
培地とし、初発ＥＩＨ６，Ｏ１瀧度３０℃で通気培養す
れば、約１００時間後には該微生物が保持材料に吸着さ
れ、反応に適した固定化微生物が形成される。このよう
な固定化法は他のカビ類や藻類についても同様に、好適
な反応条件下で容易に固定化できる。

このような固定化微生物は、ひきつづき同一反応器で界
面活性剤の存在下において回分、半　　　　−回分また
は連続培養法などにより反応を行なわせうる。すなわち
、回分培養または半回分培養のばあい、培地を新しい培
地と交換し、反応を継続する。このような交換操作をい
く度ちくり返すことによって効率をより高めることがで
きる。また連続培養のばあい、固定化後、新しい培地を
ポンプなどで連続的に送り込み、反応器の一方から連続
的に注入速度と同じ割合で反応液を流出させればよい。

本発明においては、通気は空気、酸素または両者の混合
ガスが用いられ、反応器は撹拌型または無撹拌型の各種
気泡型のあらゆる型式のものが適用できるが、固定化微
生物を用いるばあいには通常無撹拌型の反応器が操作面
およびコスト面からより好ましい。

このようにしてえられた反応液中の脂質は精製する常法
、たとえば溶媒抽出により回収でき、さらに各種高級脂
肪酸やステロール類もクロマトグラフィーなどの公知の
分離精製法により高純度の製品をうることができる。ま
た、残存している菌体中の脂質もホモジナイズなどの処
理を行ない同様に各種有用物質を回収することができる
。

つぎに本発明を実施例によりさらにくわしく説明するが
、本発明はもとよりこれらに限られるものではない。

以下の実施例においては生成した反応液中の脂質はクロ
ロホルムによる溶媒抽出後、常法の重層法によって分析
した。各種高級脂肪は溶媒抽出後、加水分解およびメチ
ルエステル化を施したのち、ガスクロマトグラフィーに
より分析を行なった。菌体中に残存する脂質についても
菌体をホモジナイズしたのち、反応液のばあいと同様の
操作によって分析した。

実施例１ 各種カビ類をグルコースが４％、ＫＨ２ＰＯ４が０．３
％、（ＮＨａ　）２　ＳＯａ　　が　０．２％、（ＮＨ
２）２　ＣＯが　０．１％、８０３０４　φ７Ｂ２０が
０．０５％、Ｆｅ５Ｏａ　・７ＨｔＯが０．００１％、
ＣａＣｌ２・２Ｈ２０がｏ、ｏｏｉ％、ＣｕＳＯ４・５
Ｈ２０が０．００００２％、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０がｏ
、ｏｏｏｉ％、ＨｎＣ＃　２　　・４Ｈ２０が０．００
０１％、ＮａＣｌが０．０１％、酵母エキスが０．０４
％、麦芽エキスが０．０４％およびポリペプトンが０．
０２％の（Ａ）培地、またはグルコースが３％、に８２
ＰＯ４が０，３％、ＮＨＪ０３が０．３％、ＨＱＳ（１
４・７１（２０が０．０３％、酵母エキスが０．０２％
、麦芽エキスが０．０２％、Ｆｅ５Ｏａ　　φ７ＪＯが
０．００１％、ＣａＣｌ　２　　・２Ｈ２０が０．００
０１２％、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２０が０．００００２％お
よび２ｎＳＯ４・７Ｈ２０がｏ、ｏｏｏｉ％の（Ｂ）培
地で初発ｐＨ６，０、温度３０℃にて約１週間振盪培養
を行ない種母を調整した。ｓｏｏｍＩ！容のシェーカー
フラスコに種母調整用培地と同じ（Ａ）培地１００Ｉｄ
または（Ｂ）培地２００ｄを入れ、上記種母とともに初
発ｐＨ６，０、温度３０℃にて界面活性剤の存在下で約
１周間振盪培養を行ない反応液中に脂質を生成させた。

一方、スピルリナ・プラテンシスおよびクロレラ・ピレ
ノイドサについては、Ｎａ（Ｊが０．５％、ＫＣＩが０
．５％、Ｈａ２Ｃ０３が０．８％、ＫＮＯ３が０．１％
、ＨｇＳ　Ｏ，・７Ｈ２０が０．０１％、クエン酸ソー
ダが０，０２％、Ａ５溶液がｌ！ｄ／ｌ硫酸鉄溶液が１
ｄ／Ｕ、土壌浸出液が１００ｄ　／　４１およびビタミ
ンＢ１２が４０Ｈｇ／ｌの（Ｃ）培地５００１１１！に
植菌し、ｐＨ８，０，温度３０℃、螢光燈による照度約
５０００ルツクスで約６日間、ポルピリジウム・クルエ
ンタムについてはＨａＣＩが２．７％、ＫＮＯ３が０．
１％、にＨ２ＰＯ４が０．００７％、ＮａＨＣＯｘが０
．００４％、Ｈｇ５Ｏ＜　　・７Ｈ２０が０９６６％、
ＨＩＪＣＪ２　・６８２０が０．５６％、ＣａＣｌ２・
２■２０が０，１５％、１ｎｃＩが４×１０　％、Ｈ３
ＢＯ４が６Ｘ　１０−５％、ＣｏＣｌ２　　・６Ｈ２０
が１．５Ｘ　１０−６％、ＣｕＣｌ２　　・２Ｈ２０が
４×１０　％、ＭｎＣｌ２・４Ｈ２０が４　Ｘ　１０−
５％、ＨＯが３、７Ｘ　１０−５％、ＦｅＣｌ２・４）
１２０　（２４０１ｎ！＋／　１００ｎｊ！０．０５Ｈ
Ｎａ２ＥＤＴＡ）が１１ｄ／Ｊｌおよび１Ｈトリス−Ｈ
ＣＪ溶液（ｐＨ７，６）が２０ｄ／ρの（ＤＪ培地１０
０ｄに植菌し、温度２０℃、螢光燻による照度約８００
０ルツクスにて約１０日間それぞれ界面活性剤の存在下
で反応させた。界面活性剤は非イオン系に属するレオド
ールＴＷ−０３２０を１．０重量％となるように添加し
、対照としての無添加のばあいと比較した。

ムコール・アンビガウスＩＦＯ６７４２を（Ａ）培地で
、フザリウム・オキツボラムＩＦ０５９４２ヲ（Ｂ）培
地でそれぞれ反応させたばあいの脂質などの分析結果を
第１表に、本発明による反応液中の脂質の脂肪酸組成を
第２表に示す。また・、その他各種微生物の反応液中の
１ｌｌｌ質、アラキドン酸またはγ−リルン酸とそれぞ
れの全量との比を第３表に示す。いずれの表においても
（）内は対照の結果を示す。

また、上記のごとくえられたアラキドン酸とγ−リルン
酸は常法のクロマトグラフィーなどによる分離精製法に
よって９７％以上の高純度の製品かえられた。

なお第３表において１の菌については（Ｂ）培地使用で
反応液中のアラキドン酸と全アラキドン酸との比、２の
菌については（０）培地使用で反応液中のアラキドン酸
と全アラキドン酸との比、３の菌については（Ａｌ培地
使用で反応液中のγ−リルリン酸と全γ−リルン酸との
比、４の菌については（Ｃ）培地使用で反応液中のγ−
リルン酸と全すルン酸との比をそれぞれあられす。

［以下余白］ 実施例２ 各種カビ類を実施例１に示した（Ａ）培地を用い、同一
条件にて脂質を生成させた。反応液中の脂質と全脂質と
の比を第４表に示す。（）内は界面活性剤無添加の対照
の結果を示す。

［以下余白］ 実施例３ ムコール・アンビガウスＩＦＯ６７４２およびフザリウ
ム・オキツボラムＩＦＯ５９４２をそれぞれ実施例１に
示した（Ａ）培地および（Ｂ）培地で実施例１と同様の
手順にしたがってＷＲ盪培養を行ない、各種界面活性剤
の効果を比較した。反応液中の脂質と全脂質との比を無
添加の対照とともに第５表に示す。

［以下余白］ このようにしてえられた脂質中の脂肪酸組成は実施例１
の第２表に示した結果と類似しており、ムコール・アン
ピガウスＩＦＯ６７４２についてはγ−リルン酸含量は
８〜２０％、フザリウム・オキツボラムＩＦＯ５９４２
についてはアラキドン酸含量は１〜４％であった。

実施例４ ムコール・アンピガウスＩＦＯ６７４２およびフザリウ
ム・オキツボラムＩＦＯ５９４２をそれぞれ実施例１に
示した（Ａ）培地および（Ｂ）培地で実施例１と同じ手
順にしたがって振盪培養を行ない種母を調整した。

微生物保持材料を用いるばあい、あらかじめ殺菌された
１辺５ｍｍのブロック状ポリウレタンおよびナイロン（
いずれも空げき率９５〜９８％、孔数３０個／ｃｍ）の
微生物保持材料約１ｆＪを実施例１と同じ培地２！Ｊ中
で上記種母とともに通常の気泡塔にて通気培養した。培
養開始約１００時間後には微生物は保持材料に物理吸着
されたので、ひきつづき界面活性剤の存在下において脂
質を生成させる反応に供した。

ゲル化剤としてアルギン酸を用いるばあい、上記のごと
く調整された種母を遠心分離にて集菌し２％アルギン酸
ナトリウム液に懸濁させた。

あらかじめ撹拌されている０、　１８　ＣａＣｌ　２溶
液中に懸濁液をノズルから滴下させ直径約４ｍｍの球状
ゲルにした。カラギーナンを用いるばあい、同様にカラ
ギーナン水溶液に菌体を懸濁させ、２％ＫＣＩ溶液中に
滴下させて直径約４１ＲＩｌｌの球状ゲルにした。この
ようにしてえられた球状ゲル約１ｇを気泡塔に充填し、
界面活性剤の存在下で脂質を生成させた。

培地成分はいずれも種母調整用培地と同じものを用い、
Ｉ）Ｈ３Ｎ２、温度３０℃、通気量１　ｖｖｍで反応せ
しめ、７日間ごとに３回反応液を交換した。界面活性剤
はレオドールＴＷ−０３２０を１．０重量％となるよう
に添加した。

それぞれのばあいの反応液中の脂質量を分析して第６表
に示したような結果をえた。

このようにしてえられた脂質中のγ−リルン酸やアラキ
ドン酸の含有量は実施例１でえられた結果に類似してお
りムコール・アンビガウスＩＦＯ６７４２についてのγ
−リルン酸組成は９〜１８％、フザリウム・オキツボラ
ムＩＦＯ５９４２についてのアラキドン酸組成は２〜４
％であった。

実施例５ 実施例４と同じ手順にしたがってえられた固定化微生物
（ムコール・アンビガウスＩＦＯ６７４２をブロック状
ポリウレタンにて固定化）を同一気泡塔にて連続培養を
行なった。グルコースが０．４％でその他の組成は実施
例１の（Ａ）培地と同じ新しい培地をポンプで２００ｄ
　／時の速度で連続的に送り込み、気泡塔の一部から連
続的に注入速度と同じ割合で反応液を流出させた。界面
活性剤はレオドールＴＷ−０３２０を反応液中に１．０
重量％となるように添加した。定常状態に達したのち、
流出中の脂質を分析したところ反応液中の脂質濃度およ
びγ−リルン酸濃度はそれぞれ６５ｍΩ／１および８．
２ｕ／４１であった。

［発明の効果］ このように、本発明によれば界面活性剤を添加しないば
あいに比べ脂質を高収量でうろことができ、ざらに精製
工程の簡素化が可能となることから高純度の脂質を高収
量にえられるので工業的に製造するうえできわめて好都
合である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　脂質生合成能を有するモルティエレラ属を除くカビ
   類または藻類を用いて脂質を生成せしめるに際し、反応
   系に界面活性剤を存在させて反応を行なうことを特徴と
   する脂質製造方法。 ２　前記脂質生合成能を有するカビ類または藻類がアス
   ペルギルス属、フザリウム属、ペニシリウム属、ポルピ
   リジウム属、ムコール属、リゾブス属、アブシディア属
   、アクチノムコール属、コアネフォラ属、カニンガメラ
   属、ピコマイセス属、リゾムコール属、ヘリコスチラム
   属、パエシロマイセス属、シンセファラストラム属、サ
   ルシネラ属、ゴングロネラ属、バクセラ属、ピチウム属
   、フェネロマイセス属またはスピルリナ属に属する特許
   請求の範囲第１項記載の方法。 ３　界面活性剤として陰イオン界面活性剤または非イオ
   ン界面活性剤を用いる特許請求の範囲第１項記載の方法
   。 ４　前記陰イオン界面活性剤がカルボン酸型高分子活性
   剤、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステル
   塩、ポリオキシエチレンアルキルアリルエーテル硫酸エ
   ステル塩およびジアルキルスルホコハク酸塩類よりなる
   群から選ばれた１種または２種以上の陰イオン界面活性
   剤である特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５　前記非イオン界面活性剤がポリオキシエチレンソル
   ビタン脂肪酸エステル、オキシエチレンオキシプロピレ
   ンブロックポリマー、ソルビタン脂肪酸エステルおよび
   ポリエチレングリコール脂肪酸エステル類よりなる群か
   ら選ばれた１種または２種以上の非イオン界面活性剤で
   ある特許請求の範囲第３項記載の方法。 ６　脂質生合成能を有するモルティエレラ属を除くカビ
   類または藻類の固定化微生物粒子を用いて脂質を生成せ
   しめるに際し、反応系に界面活性剤を存在させて反応を
   行なうことを特徴とする脂質製造方法。 ７　前記脂質生合成能を有するカビ類または藻類がアス
   ペルギルス属、フザリウム属、ペニシリウム属、ポルピ
   リジウム属、ムコール属、リゾブス属、アブシディア属
   、アクチノムコール属、コアネフォラ属、カニンガメラ
   属、ピコマイセス属、リゾムコール属、ヘリコスチラム
   属、パエシロマイセス属、シンセファラストラム属、サ
   ルシネラ属、ゴングロネラ属、バクセラ属、ピチウム属
   、フェネロマイセス属またはスピルリナ属に属する特許
   請求の範囲第６項記載の方法。 ８　界面活性剤として陰イオン界面活性剤または非イオ
   ン界面活性剤を用いる特許請求の範囲第６項記載の方法
   。 ９　前記陰イオン界面活性剤がカルボン酸型高分子活性
   剤、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステル
   塩、ポリオキシエチレンアルキルアリルエーテル硫酸エ
   ステル塩およびジアルキルスルホコハク酸塩類よりなる
   群から選ばれた１種または２種以上の陰イオン界面活性
   剤である特許請求範囲第８項記載の方法。 １０　前記非イオン界面活性剤がポリオキシエチレンソ
   ルビタン脂肪酸エステル、オキシエチレンオキシプロピ
   レンブロックポリマー、ソルビタン脂肪酸エステルおよ
   びポリエチレングリコール脂肪酸エステル類よりなる群
   から選ばれた１種または２種以上の非イオン界面活性剤
   である特許請求の範囲第８項記載の方法。 １１　ゲル化剤または微生物保持粒子によつてえられる
   固定化微生物粒子を用いる特許請求の範囲第６項記載の
   方法。 １２　前記ゲル化剤がポリアクリルアミド、アルギン酸
   、カラギーナン、コラーゲンまたはウレタンポリマーで
   ある特許請求の範囲第１１項記載の方法。 １３　前記微生物保持粒子がポリオレフィン系、ジエン
   系、ポリウレタン、ビニル系、縮合系、シリコンまたは
   フッ素樹脂の高分子発泡材料よりなる特許請求の範囲第
   １１項記載の方法。 １４　前記微生物保持粒子がセラミックス、ガラス、活
   性炭、軽石および金属類よりなる群から選ばれた多孔質
   材または空隙率が７０〜９９％の金属加工材料である特
   許請求範囲第１１項記載の方法。