JPH03210174A - メバロン酸生産菌 - Google Patents

メバロン酸生産菌

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JPH03210174A JP1094927A JP9492789A JPH03210174A JP H03210174 A JPH03210174 A JP H03210174A JP 1094927 A JP1094927 A JP 1094927A JP 9492789 A JP9492789 A JP 9492789A JP H03210174 A JPH03210174 A JP H03210174A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、メバロン酸生産菌、詳しくは、高収率でメバ
ロン酸を生産することのできる、メバロン酸生産菌に関
するものである。
尚、メバロン酸は酸型とラクトン型の２通りの構造を示
すが、相互に変換することが公知であり、以下本明細書
では特に断らないかぎり、両型を総称してメバロン酸と
いう。
〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕メバロ
ン酸は、ライト等によって始めて単離された物質であり
（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ＾−５ｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉ
ｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ、　７８．５３７３．１９５６）
　、コレステロールを始めとする各種イソプレノイド化
合物の重要な中間体として知られている。
また、メバロン酸は、種々の微生物及び植物に対して成
長促進作用を有する等、生物の代謝に重要な役割を果た
しているため、微生物、植物等の成長促進側として用い
られ、また、ピレスロイド系農薬、ユビキノン（呼吸系
補酵素）、ドリコール（多糖類の生合成必須因子）、及
び脂溶性ビタミン等の前駆体等に用いられている。
従来これらの研究には化学合成されたラセミ体が使用さ
れており、天然型のメバロン酸（Ｒ型）は入手し難いも
のであった。
サッカロマイコプシス・フィブリゲラ等の微生物を用い
て天然型のメバロン酸を製造する方法では、未だ満足の
いく収量を得るに至っていない。
従って、本発明の目的は、高収率でメバロン酸を生産で
きるメバロン酸生産菌を提供することにある。
〔課題を解決するための手段〕
本発明者等は、上記目的を達成すべく鋭意検討を進めた
結果、サッカロマイコプシス・フィブリゲラに属し且つ
特定な化合物に対する耐硅を有する菌株が選択的に高い
メバロン酸生産能を有することを見いだし本発明を完成
するに至った。
即ち、本発明は、サッカロマイコプシス・フィブリゲラ
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ　ｆｉｂｕｌｉｇ
ｅｒａ）に属しＭＬ−２３６Ｂに耐性を有する、メバロ
ン酸生産菌を提供するものである。
以下、本発明のメバロン酸生産菌について詳述する。
本発明のメバロン酸生産菌は、サッカロマイコプシス・
フィブリゲラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ　ｆ
ｉｂｕｌｉｇｅｒａ）に属するメバロン酸生産菌、即ち
メバロン酸生合成の酵素系を有している微生物であって
、且つＭＬ−２３６Ｂに耐性を有するものである。
本発明のメバロン酸生産菌は、上記の基本的性質を有す
る菌株であれば自然界から新たに分離された菌株でも既
存の微生物突然変異誘発法（例えば、紫外線、Ｘ線及び
Ｔ線照射などの物理的処理やニトロソグアニジンなどの
薬剤による化学的処理による方法）で処理することによ
って得られた菌株であってもよい。
そのような性質を具備する菌株の具体例としては、例え
ば、サッカロマイコプシス・フィブリゲラ　Ｉ　Ｆ　Ｏ
０１０７をＭＬ−２３６Ｂで処理することによって得ら
れるＡ　Ｄ　Ｋ　　８１０７株（微工研条寄第２３２０
号、ＦＥＲＭ　ＢＰ−２３２０）及びＡ　Ｄ　Ｋ　　８
１０８株（微工研条寄第２３２１号、ＦＥＲ１’ｌ　Ｈ
Ｐ−２３２１）等をあげることができる。尚、ＩＦＯは
財団法人醗酵研究所保存菌株を示す。
本発明において耐性の対象となるＭＬ−２３６Ｂとは、
特公昭５６−１２１１４号公報及び特公昭５９−４５３
６０号公報等に記載されている、下記式（１）で示され
る構造を有する化学物質である。
本発明において、ｒＭＬ−２３６Ｂに耐性を有する」と
は、その菌株がＭＬ−２３６Ｂ添加培地においても生育
を示すことであり、例えば、ＭＬ−２３６Ｂ０．０００
４重量％、好ましくは０．００３重量％、さらに好まし
くは０．０２重量％の添加培地において、菌を２５℃で
７日間静置培養したと−きの６６０ｎｍ吸光度Ａ、が、
ＭＬ−２３６Ｂ無添加の培地において菌を同様に培養し
たときの６６０ｎｍ吸光度Ａ０の７０％以上である場合
〔即ち（Ａ＋　／　Ａｏ　）　Ｘ　１００≧７０（７）
場合〕、その菌はＭＬ−２３６Ｂに耐性を有するという
。
本発明のメバロン酸生産菌を使用すれば、高収率でメバ
ロン酸を製造することができる。
本発明のメバロン酸生産菌を使用してメバロン酸を製造
するには、サッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ　ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ
）に属しＭＬ−２３６Ｂに耐性を有するメバロン酸生産
菌、好ましくはサッカロマイコプシス・フィブリゲラＩ
　Ｆ　Ｏ０１０７の変異株であるＡ　Ｄ　Ｋ　　８１０
７株（微工研条寄第２３２０号、ＦＥＲＭ　ＢＰ−２３
２０）及び／又はＡ　Ｄ　Ｋ　　８１０８株（微工研条
寄第２３２１号、ＦＥＲＭ　ＢＰ−２３２１）を培養し
、培養液からメバロン酸を採取すれば良い。
具体的には、例えば、米国特許第３．６１７゜４４７号
明細書等に記載されている通常の培養方法によって本発
明の菌を培養した培養液から公知の方法によりメバロン
酸を採取することができるが、下記の製造方法によるの
が、さらに高収率でメバロン酸を製造できるので好まし
い。
まず、使用する培地としては、炭素源５〜１５重量％、
有機態窒素源０．５〜３重量％、所望により細胞膜の可
溶化作用を持つ非イオン界面活性剤０．０２〜０．１重
量％及び水（残部）からなる培地を挙げることができ、
この培地はさらにリン酸塩、カリウム塩、マグネシウム
塩、カルシウム塩等が添加されていてもよいが、これら
の添加物を加える場合は、好ましくは各々０．０１〜５
重量％とするのが良い。
また、合成高分子、シリコーン系の消泡剤も本発明の目
的を逸脱しない範囲内で所望により培地に添加すること
ができる。
次に、上記の培地に本発明の菌を接種し、２０〜４０℃
、好ましくは２５〜３５℃で培養すれば良いが、振盪培
養の場合は、１５０〜２００ｒｐｍの条件で行うのが効
率的で好ましく、また通気攪拌培養の場合は、１００〜
５００ｒｐｍで０．２〜１゜５ｖｖＩＩ、好ましくは２
００〜４００ｒｐｍで０．５〜１、　Ｏｖｖ−の条件で
行うのが効率的で好ましい。
さらに、一定時間振盪培養及び／又は通気攪拌培養後、
培養液中に少なくとも炭素源を含有する基質を一回また
は複数回繰り返し添加して培養を継続すると効率的にメ
バロン酸を得ることができ好ましい。
本発明の菌を使用して製造されたメバロン酸は公知の精
製法により精製することができる。例えば、培養終了後
、培養物を遠心分離濾過、有機合成膜菌体分離等の公知
の方法で菌体を除いた後、公知の精製法を使用すればよ
く、かかる精製法としては、例えば、逆浸透膜、シリカ
ゲル、イオン交換樹脂、ポーラスポリマー樹脂による精
製、更に酢酸エチル、メチルエチルケトン等による溶削
抽出や、減圧渾留、分子蒸留、結晶化等による方法など
を挙げることができる。
〔実施例〕
以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれらに限定
されるものではない。
尚、実施例及び比較例におけるメバロン酸の定量及び菌
の耐性試験は以下のようにして行った。
〔メバロン酸の定量法〕
試料溶液１．０−を試験管にとり５０％（Ｗ／Ｗ）リン
酸を５〜６滴加えて酸性とする。これにＮ　ａ　、Ｓ　
Ｏ，約１ｇを添加し、さらに酢酸エチル２．０艷を加え
て３０秒間攪拌する。これをローターの半径１５ｃｍ、
２５００ｒｐｍにて２分間遠心分離し上層の酢酸エチル
層を別の試験管Ａにとり蒸発乾固させる。下層の水層に
は更に酢酸エチル２゜０＋ｄ加えて３０秒間撹拌する。
これを同様に遠心分離し、上層の酢酸エチル層を前記試
験管Ａにとり再び乾固させる。さらに同様の操作を繰り
返し、合計酢酸エチル層６ｄの乾固物を得る。この乾固
物を、１（ｌａｇ／−のδ−バレロラクトン（アルドリ
ッチ社製）を内部標準として含むイソプロパツール１ｙ
ｄに溶解し高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ
）により定量した。尚、ＨＰＬＣ条件は以下の通りであ
る。
カラム：ヌクレオジル　５Ｎ（ＣＨＩ）！　　（西ドイ
ツ、Ｍ、ナーゲル社製）直径４．６鶴、長さ２５０ｆｉ
、４０℃ 移動相：ｎ−ヘキサン／イソプロパツール＝９／１．２
．　Ｏｄ／ｓｉｎ。
検出器：示差屈折計（昭和電工■製、５Ｅ−６１型） 注入量＝５μｌ 〔耐性試験〕 炭素化合物同化試験用培地（Ｂａｃｔｏ−ｙｅａｓｔ　
ｎ１ｔｒ。
ｇｅｎ　ｂａｓｅ　：　Ｄｉｆｃｏ社製）０．６７重量
％、グルコース０．５重量％及び水（残部）からなる培
地５−とＭＬ−２３６Ｂ水溶液をそれぞれ別に殺菌し、
植菌前に所定のＭＬ−２３６Ｂ？１度となるように混合
する。この培地に、殺菌生理食塩水３１１１に１白金耳
液種した菌体懸濁液０．２−を接種し、２５℃で静置培
養する。対照試験として、ＭＬ−２３６Ｂを含まない培
地を用意し、菌を同様に接種、培養する。
耐性の判定は、対照試験と比較しながら、６６０ｎｍの
吸光度により菌の増殖を経時的に測定することにより行
い、培養７日目においてＭＬ−２３６Ｂを添加したもの
の吸光度Ａ、が対照試験の吸光変人〇の７０％以上の増
殖を示す場合に添加したＭＬ−２３６Ｂに対して耐性が
あると判断した。
実施例１〜２及び比較例１ グルコース１０重量％、ポリペプトン（日本製薬■製）
０．５重量％、コーンステイブリカー（日本食品加工■
製）１．０重量％、ＫＨ，ＰＯ４０，１重置％、Ｍ　ｇ
　Ｓ　Ｏａ・７ＨｆｆｉＯ０，０５重量％、ＣａｃＯｚ
１重量％、ポリエーテル系消泡剤（旭電化工業■製アデ
カノールＬＧ−２９４）　０．０５重量％及び水（残部
）からなる培地２（ｌと２００ｄを用意し、２００＋ｄ
の培地にサッカロマイコプシス・フィブリゲラＡ　Ｄ　
Ｋ　　８１０７株（微工研条寄第２３２０．　ＦＥＲＭ
　ＢＰ−２３２０）を１白金耳接種し２８℃で３日間振
盪培養し、これを上記２０１の培地に接種し、２８℃、
回転数３０Ｏｒｐｍ＋、通気量２０１／分でグルコース
濃度、ｐＨ，溶在酸素濃度を測定しつつ通気攪拌培養を
行った。培養３日目に、グルコースの５０重量％水溶液
を２．０−流加し、さらに培養７日目にグルコースの５
０重量％水溶液２．０　ｋｇを流加し、計１２日間培養
を継続し、培養を終了した。培養終了後、培養物から得
たメバロン酸を、前記定量法により測定したところ、メ
バロン酸の量は１９０００μｇ／−であった（実施例１
）。
また、サッカロマイコプシス・フィブリゲラのＡ　Ｄ　
Ｋ　　８１０７株（微工研条寄第２３２０、ＦＥＲＭ　
ＨＰ−２３２０）をＡ　Ｄ　Ｋ　　８１０８株（微工研
条寄第２３２１、ＦＥＲ−ＢＰ−２３２１）に代えた他
は実施例１と同様にして培養した場合（実施例２）には
、１２日間培養を継続して得られたメバロン酸の量は１
９４００μｇ／−であった。
また、実施例で用いたサッカロマイコプシス・フィブリ
ゲラのＡ　Ｄ　Ｋ　　８１０７株（微工研条寄第２３２
０、ＦＥＲＩ’！　ＢＰ−２３２０）をＩ　Ｆ　Ｏ１７
４５ニ代えた他は実施例１と同様にして培養を行った場
合（比較例１）には、１２日間の培養を継続して得られ
たメバロン酸の量は１０６００μｇ／−であった。
また、各画においてＭＬ−２３６Ｂの耐性についても試
験を行った。下記表−１に、各画のメバロン酸生産量、
及びＭＬ−２３６Ｂ濃度と対照試験に対する吸光度の割
合（（ＡＩ／Ａ＠）Ｘ１００〕を示す。
表 〔発明の効果〕 本発明のメバロン酸生産菌によれば、高収率でしかも効
率的に作業性良（メバロン酸を得ることができる。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）サッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａｃｃ
    ｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ）に属
    しＭＬ−２３６Ｂに耐性を有する、メバロン酸生産菌。
JP1094927A 1989-04-14 1989-04-14 メバロン酸生産菌 Expired - Lifetime JP2792600B2 (ja)

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