JPH01143868A - Ｑ−１０４７ｒ物質および製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、生体内における活性酸素種を除去し、過酸化
脂質の生成の防止乃至低下作用を有するＱ　−１０４７
Ｒ物質および該物質の製造法に関する。

（従来の技術） 生体にとって、酸素はエネルギー産生１伐謝等生命の維
持に必要不可欠である。酸素は、エネルギー産生系での
反応、酵素反応、紫外線や放射線等による反応により酸
素アニオンラジカル、過酸化イオン、ヒドロキシラジカ
ル等の所謂活性酸素種となる。活性酸素種は、酸素添加
酵素、白血球の殺菌作用等の発現に有用である半面、生
体膜のリン脂質を形成するオレイン酸。

リノール酸、リルン酸、アラキドン酸等の過酸化を促進
し、過酸化脂質を形成する。この過酸化脂質は、活性酸
素種と同様に、アルコキシラジカルやヒドロキシラジカ
ルを発生させ、生体膜を攻撃して膜障害を惹起し、また
種々の有用酵素類の失活を招く［代謝、第１５巻、１０
号。

１９７８年、特集活性酸素コ。

スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）。

カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ等の酵素類
およびα−ト９フェロール（ビタミンＥ）を始めとする
抗酸化能を有するビタミン類は、活性酸素種の代謝失活
に関与する生体物質であるが、何らかの理由によりこれ
らの物質による適切な防御機構に欠損が生じたり、また
はこれ等の防御機構の能力を超える活性酸素種の発生や
、過酸化脂質の生成、蓄積が起ることがしばしば認めら
れる。防御機構の欠損等が生じた場合、過酸化が連鎖反
応的に進行し２種々重大な生体障害を惹起する。これら
障害の代表的なものとして血小板凝集による各種疾病、
炎症。

肺障害、動脈硬化、溶血、老化乃至老人性痴呆症、網膜
症、肺障害、或種薬物疋よる心及び肝障害、虚血性血管
疾患等が挙げられている。

一般に抗酸化剤と呼ばれている薬剤は、上記疾病の予防
および治療を目的として開発されたものであり、活性酸
素種が関与する種々の疾患にに対して有用である。

（問題点を解決するための手段） 本発明は、下記理化学的性状および平面化学構造式を有
するＱ　−１０４７Ｒ物質および該物質の製造法に関す
る。

ＣＲ２ Ｑ　−１０４７Ｒ物質は複数の不斉炭素原子および二重
結合を有しており、これらに基づく立体異性体が存在す
る。これらの異性体の中、　Ｑ−１０４７Ｒ−Ａおよび
Ｑ−１０４７Ｒ−Ｂ物質の性状を下表１に示す。

表１ （発明の効果） つぎに１本発明のＱ−１０４７Ｒ物質の抗酸化活性を測
定方法とともに示す。

試験方法ニ 一般に抗酸化剤と呼ばれているものは、安定なラジカル
である　１，１−ジフェニル−２−ピクリル　ヒドラジ
ルを脱色する活性を有しており１本発明化合物（Ｑ　−
１０４７Ｒ−Ａ及び−Ｂ物質）について、以下の如くこ
の活性を測定した。

１．１−ジフェニル−２−ピクリル　ヒドラジルをエタ
ノールに０．１　ｍＭになるように溶解し。

試験化合物と混合し、３０分後に５１７ｎｍの吸光度を
測定した。その結果を第９図に示す。

Ｑ−１０４７Ｒ−Ａ及び−Ｂ物質とも１，１−ジフェニ
ル−２−ピクリル　ヒドラジルの５１７ｎｍにおける吸
光度を減少させる活性を有していた。

（製造法） つぎに９本発明物質の製造法について説明する。Ｑ−１
０４７Ｒ物質は、シェードノカルデイア属に属するこの
物質の生産菌を培養し、培養液から直接この物質を採取
することによって製造することができる。また、上記培
養液中には、Ｑ−１０４７Ｒ物質の対応するキノン体も
産生されているから、このキノン体を採取したのち、つ
いでこれを化学的に還元することによりＱ　−１０４７
Ｒ物質を製造することもできる。

本発明で使用されるシュードノカルデイア属に属する微
生物の一例としては沖縄県座間味群島で採取した土壌か
ら分離されたシュードノカルデイア　ニス０ピー（Ｐｅ
５ｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ　ｓｐ、）　Ｑ　−１０４７
（微工研菌寄第９６２０号）を挙げることができる。以
下Ｑ　−１０４７株の菌学的性質を説明する。

＋１＋　　形態 本菌株は各種合成及び有機培地において生育し、特にシ
ュクロース・硝酸塩寒天培地。

イースト麦芽寒天培地、グリセリンアスパラギン寒天培
地、チロシン寒天培地等で良好である。気菌糸の着生は
シークロース・硝酸塩寒天培地、イースト麦芽寒天培地
、グリセリンアスパラギン寒天培地、チロシン寒天培地
で良好であるが、ベネット寒天培地、ペプトンイースト
鉄寒天培地、栄養寒天培地では着生しない。光学顕微鏡
観察によれば、気菌糸は良く発達した基生菌糸上に着生
し、求頂的な出芽によって菌糸を伸ばし２分芽胞子を形
成する。同時に分断胞子の形成も観察される。

又、基生菌糸上にも胞子の形成が観察される。

電子顕微鏡での観察で、胞子鎖は１０個程度の連鎖を認
め胞子の大きさは０．６〜ｏ、ｓ　ｘ　ｏ、ｓ〜１．０
μｍであり、その表面構造は平滑である。

輪生枝、胞子の５及び菌核形成は認められな℃・。

（２）　　各種寒天培地上の性状 各種寒天培地上の性状は、下表２に示すとおりである。

特に記載しないかぎり、２８°Ｃで２１日間培養し、常
法に従って観察したものである。色調の記載については
１色の標準（日本色彩研究所）によった。

表２ （注）Ｇ：生育及び集落表面の菌叢色 Ａ：気菌糸の着生及びその色相 Ｒ：裏面の色相 Ｓ；可溶性色素 （３）　　生理的性質 至適生育温度　　　　　　　　　　３０−３２’Ｃグル
コース・ペプトン・ ゼラチン（２８°Ｃ）　　　　　　陰性４）硝酸還元作
用　　　　　　　　　　陽性５）スターチの加水分解作
用　　　　　陰性６）メラニン様色素の生成 トリプトン［相］イースト エクストラクトプロス　　　　　陰性 チロシン寒天　　　　　　　　　陰性 ペプトン・イースト 鉄寒天　　　　　　　　　　　　陰性 （注）生育温度は各温度（５、１０，１５，２０，２５
，２８，３０，３３゜３７、４０．４５．５０’Ｃ）で
、７−２１日までの観察結果。

ミルクに対する作用は３７℃で３−２１日までの観察結
果。それ以外は、特に指摘のないかぎり２８°Ｃで２週
間後の観察結果。

（４）炭素源の資化性（プリトノ・ム・ゴドリープ寒天
培地、２８℃培養） Ｌ−７ラビノース　　　　　　　− Ｄ−キシロース　　　　　　　　＋ Ｄ−グルコース　　　　　　　　＋ Ｄ−フラクトース　　　　　　　− シュクロース　　　　　　　　　＋− イノシトール　　　　　　　　　− ラムノース　　　　　　　　　　＋ ラフィノース　　　　　　　　　− Ｄ−マンニトール　　　　　　　＋ トレハロース　　　　　　　　　　＋ Ｄ−ガラクトース　　　　　　　＋− マンノース　　　　　　　　　　− ラクトース　　　　　　　　　　　− ａ−メリピオース　　　　　　　− プリシン　　　　　　　　　　　＋ グリセリン　　　　　　　　＋ スターチ　　　　　　　　　　＋ （５）化学分類 以上の性状を要約すると、Ｑ−１０４７株は気菌糸が求
頂的な出芽によって菌糸を伸ばし２分芽胞子を形成する
と同時に分断胞子の形成も観察される。胞子は基生菌糸
上にも観察される。胞子表面は平滑で輪生糸、胞子嚢な
どは観察されない。また菌体及び細胞壁の化学分析結果
では。

細胞壁タイプＩＶ−Ａに属した。

上記諸性質より２本菌株に類似する既知菌種ヲ、「バー
シーズ・マニュアル０オプ・デタミネティプ・バクテリ
オロジー（Ｂｅｒｇｙ’ｓＭａｎｕａｌ　ｏｆＤｅｔｅ
ｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第
８版、　１９７４年」。

［インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマテ
ィック・バクテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌＪｎｕｒｎａ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第１８巻、２号。

６９−１８９頁、４号、　２７９−３９２頁（１９６ｇ
）、第１９巻４号、　３９１−５１２頁（１９６９）、
第２２巻、４号、２６５−３９４頁（１９７２）　Ｊ及
び其の他の文献より検索した。その結果２本菌株に類似
な菌属としては。

アクチノボリスポラ（Ａｃｔｉｎｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ
　）、　　サツカロポリスポラ（５ａｃｃｈａｒｏｐｏ
ｌｙｓｐｏｒａ　）、　　シェードノカルデイア（Ｐｓ
ｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ　）、フエニ了（Ｆａｅｎｉ
ａ　）が挙げられる。しかし、アクチノボリスポラは耐
塩菌であり、サツカロポリスポラは、胞子表面構造が本
菌株と全く異なっており、気菌糸の１先端にのみ胞子を
形成することにおいても異なっている。又、フエニアは
求頂的気菌糸の形成を行なわず、多くの培地で３５−６
０℃で生育できるのに対し２本菌株の生育温度範囲は２
４−４５℃である。一方、シュードノカルデイア属の菌
は。

胞子を気菌糸及び基生菌糸上に形成し、求頂的　、で長
くシリンダー状の胞子を形成する事等２本菌株の性質と
一致する点が多い。そこで本菌株をシュードノカルデイ
ア属に属する１菌種として位置づけるのが最も妥当であ
ると判断し、とりあえず本菌株をシェードノカルデイア
・ニス・ピーＱ−１０４７株と命名した。

本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌
寄第９６２０号として寄託されている。

なお、微生物は人工的に、また自然に変異を起しやすい
が２本発明のシュードノカルデイアニス・ピーＱ　−１
０４７株は天然から分離された放線菌のほかにこれを紫
外線、Ｘ線、化学薬剤などで人工的に変異させたもの及
びそれらの自然変異株についても、包含されるものであ
る。

Ｑ−１０４７Ｒ物質の発酵法による生産は、つぎの様に
して行うことができる。

シュードノカルデイア　ニス・ピーＱ　−１０４７株を
培地に培養し、培養物より採取することにより行なわれ
る。培養方法は一般微生物の培養方法に準じて行なわれ
るが２通常は液体培地で深部培養を行うのが有利である
。培養に用いられる培地としては、シュードノカルデイ
ア　ニス・ピーＱ　−１０４７株が利用する栄養源を含
有する培地であればよい。

すなわち２合成培地、半合成培地あるいは天然培地が用
いられ、培地の組成は例えば炭素源としてはグルコース
、アラビノース、フラクトース、デンプン、植物油等が
、窒素源としてＧマ肉エキス、ペプトン、グルテンミー
ル、綿実粕。

大豆粉、落花生粉、魚粉、コーンスチープリカー、乾燥
酵母、酵母エキス、硫酸アンモニウム。

硝酸アンモニウム、尿素その他の有機、無機の窒素源が
用いられる。また、金属塩としてＮａ。

Ｋ、　Ｍｇ、　Ｃａ、　Ｚｎ、　Ｆｅなどの硫酸塩、硝
酸塩、塩化物、炭酸塩、燐酸塩などが必要に応じて添加
される。

また、必要に応じてメチオニン、システィン。

シスチン、チオ硫酸塩、オレイン酸メチル、ラード油、
シリコン油、界面活性剤などの抗生物質生成促進物質又
は消泡剤を添加することもできる。

培養条件としては好気的条件下に培養するのが一般的に
有利で、培養温度は約２５〜４５℃の範囲が望ましく、
好ましくは約２８℃附近で行なわれる。培地のｐＨは約
５−１０．　　好ましくは約６〜８の範囲に保存すると
好結果が得られる。

培養期間は培地の組成、温度条件に応じて適宜設定され
る。

培養物より目的とするＱ　−１０４７Ｒ物質を単離採取
するには通常の微生物の培養物より抗生物質を単離する
方法が適用される。目的物は主に培養液中に含有される
ので、遠心分離又は濾過により菌体を除去した後、濾過
液から有効物質の抽出を行なう。すなわち、適当な溶剤
に対する溶解性及び溶解度の差、溶液からの析出性及び
析出速度の差２種々の吸着剤に対する吸着親和性の差、
２種の液相間における分配の差などを利用する一般の抗
生物質の製造に用いられる手段によって１分離、採取、
精製される。これらの方法は必要に応じて単独に用いら
れ、あるいは任意の順序に組合せ、また反覆し適用でき
る。

なお、目的物質のＱ　−１０４７Ｒ物質と、そのキノン
体（Ｑ−１０４７物質）とは、極性が相違しており、こ
の差を利用することにより１例えばシリカゲルによるカ
ラムクロマトグラフィーを行う事によって両物質を容易
に分離できる。

つぎに、Ｑ−１０４７Ｒ物質は、　Ｑ−１０４７物質を
化学的に還元することによっても製造できる。

この化学的還元は、ベンゾキノン類を対応するハイドロ
キノン類に還元する方法が利用できる。

すなわち、還元は、還元剤としてたとえばハイドロサル
ファイドナトリウム、酸性亜硫酸ナトリウム、水素化ホ
ウ素ナトリウムなどを用い。

適当な不活性溶媒中（たとえば、水、メタノール、エタ
ノールなどのアルコール類、酢酸エチルなどのエステル
類の単独または混合溶媒中）で、冷却乃至加温下で行う
。還元剤は、被還元化合物１モルに対し、１〜１００倍
モルが使用される。反応時間は、還元剤２反応温度など
により適宜選択される。目的物質の精製は、抽出。

濃縮、結晶化、シリカゲルクロマトグラフィーによる分
離などが採用できる。

（実施例） 以上２本発明の詳細な説明したが、以下に実施例により
さらに説明する。

実施例　１゜ グルコース１．０％、酵母エキス０．１％、　ＮＺアミ
ンタイプＡＯ１２％、及び肉エキス０．１％を含む培地
（ｐＨ７，３）を炸裂し、これを５００　ｒｎｌ容三角
フラスコに各６０ｍＡずつ分注し、１２０℃で２０分間
滅菌したものに、ベネット寒天培地上に生育させたシュ
ードノカルデイア　ニス・ビー　Ｑ−１０４７の菌糸を
かき取って接種し、２８°Ｃで４８時間振盪培養を行な
い種培養液とする。つぎに、マンニトール３．０％及び
酵母エキス１．０％を含む培地（ｐＨ７，３）を１０１
作裂作裂これを５００ｍ１容三角フラスコに各１００ｍ
ｔずつ分注し、１２０℃で２０分間滅菌したものに種培
養液を３％の割合で植菌した。２８℃で９６時間振盪培
養を続ける。

このように得られた培養液にラジオライト＋　６００（
昭和化学工業製）を加えて攪拌した後、Ｐ遇すると、Ｐ
液８ｔが得られる。このｐ液をｐＨ７，０に調整した後
、　　ＩＯＺの酢酸エチルを加えてよく攪拌する。酢酸
エチル層を分離して、これに無水硫酸ナトリウムを加え
て脱水する。脱水した酢酸エチル層な減圧濃縮すると褐
色粉末３ｇが得られる。

得られた褐色粉末３ｇを少量のクロロホルム：メタノー
ル（５０：１）の混合溶剤に溶解させ、ワコー・ゲルＣ
−２００（和光紬薬製）６０ｇをクロロホルム：メタノ
ール（５０：１）の混合溶剤にて充填したカラムに乗せ
、その後、クロロホルム：メタノール（４０：１）を展
開溶媒とするカラム・クロマトグラフィーを行なう。Ｑ
−１０４７Ｒ物質の検出には簡便なシリカゲル薄層クロ
マトグラフィーを利用した。

すなわち、カラム・クロマトグラフィーの溶出液の各分
画をＴＬＣプレート・シリカゲル６０Ｆ２ｓ＋　（メル
ク社製）にスポットして、クロロホルム：メタノール（
５：１）の混合溶媒で展開して、紫外線ランプ（２５４
ｎｍ）でＲｆ値０．５５を示し、かつ抗酸化活性を有す
るＱ−１０４７Ｒ−Ａ物質を検出する。Ｑ−１０４７Ｒ
−Ａ物質だけが存在するカラムクロマトグラフィーの画
分を集めて減圧濃縮すると、純粋なＱ−１０４７Ｒ−Ａ
物質が無色粉末として２．１ｇを得られた。同様にＲｆ
値０．４６を示し、かつ抗酸化活性を有するＱ−１０４
７Ｒ−Ｂ物質を検出する。Ｑ−１０４７Ｒ−Ｂ物質だけ
が存在するカラム・クロマトグラフィーの画分を集めて
減圧濃縮すると、純粋なＱ−１０４７Ｒ−Ｂ物質が無色
粉末として１２０１１１ｇ得られた。

実施例　２゜ （１）発酵法によろＱ−１０４７物質の採取グルコース
１．０％、酵母０．１％、　ＮＺアミンタイプＡ　Ｏ，
２％、及び肉エキス０．１％を含む培地（ｐＨ７，３）
を作製し、これを５００ｍ１容三′角フラスコに各６０
ｍ１ずつ分注し、１２０°Ｃで２０分間滅菌したものに
。

ベネソト寒天培地上に生育させたシュードカルブイア　
ニス・ピー　Ｑ−１０７４の菌糸をかき取って接種し、
２８℃で４８時間振盪培養を行ない種培養液とする。つ
ぎに、マンニトル１０％、及び酵母エキス０４％を含む
培地（ｐＨ７，３）を１５Ｚ作成し、これを５００ｍｔ
容三角フラスコに各６０ｍｔずつ分注し、１２０℃で２
０分間滅菌したものに種培養液を３０％の割合で植菌し
た。１２０℃で１２０時間振盪培養を続ける。

このようにして得られた培養液にラジオライト≠６００
（昭和化学工業製）を加えて攪拌した後、濾過するとヂ
液１３４が得られる。この戸液をｐＨ７，０に調整した
後、１３ｔの酢酸エチルを加えてよ（攪拌する。酢酸エ
チル層を分離して、これに無水硫酸ナトリウムを加えて
脱水する。脱水した酢酸エチル層を減圧濃縮すると褐色
粉末３．２ｇが得られる。得られた褐色粉末３．２ｇを
少量のクロロホルムに溶解させ、ワコーゲルＣ−２００
（和光紬薬ｆｉ）１００ｇをクロロホルムにて充填した
カラムに乗せ、クロロホルム：メタノール（１ｏｏ：１
）を展開溶媒とするカラム・クロマトグラフィーを行な
う。Ｑ−１０４７物質の検出には簡便なシリカゲル薄層
クロマトグラフィーを利用した。すなわち、カラム・ク
ロマトグラフィーの溶出液の各分画をＴＬＣプレートシ
リカゲル６０Ｆ、５４（メルク社製）にスポットして、
クロロホルム：メタノール（９：　１　）の混合溶媒で
展開して、紫外線ランプ（２５４ｎｍ　）でＲｆ値０．
７２を示し、かつＳＯＤ様活性を示す。Ｑ−１０４７−
Ａ物質を検出する。Ｑ−１０４７−Ａ物質だけが存在す
るカラム・クロマトグラフィーの画分な集めて減圧濃縮
すると純粋なＱ−１０４７−Ａ物質が黄色微結晶性粉末
として１．７ｇ得られた。この黄色微結晶性粉末はヘキ
サン及びクロロホルムの混合溶媒にて結晶化を行うこと
によりＱ−１０４７−Ａ物質が黄色板状晶として得られ
る。

同様に、　　Ｒｆ値０．６７を示し、かつＳＯＤ様活性
を示すＱ−１０４７−Ｂ物質を検討する。Ｑ−１０４７
−Ｂ物質だけが存在するカラムクロマトグラフィーの分
画を集めて減圧濃縮すると純粋な０−１０４７−Ｂ物質
が黄色微結晶性粉末として７０１Ｔ１ｇ得られた。

この黄色微結晶性粉末はヘキサン及びクロロホルムの混
合溶媒にて結晶化を行うことによりＱ−１０４７−Ｂ物
質が黄色板状晶として得られる。

（２＋　　Ｑ−１０４７物質の化学的還元（ａ）　　Ｑ
−１０４７−Ａ物質１ｇを酢酸エチル３００　ｍｌに溶
解し、２％ハイドロサルファイドナトリウム水を１００
ｍｔ加えて１分液ロート中でよく撹拌して　Ｑ　−１０
４７−Ａ物質を還元した。酢酸エチル層を１００ｍ１の
水で２回水洗の後、無水硫酸ナトリウムを加え脱水する
。脱水した酢酸エチル層を減圧濃縮すると、純粋なＱ−
１０４７Ｒ−Ａ物質が無色結晶性粉末として６００ｍｇ
得られた。

（ｂ）　　Ｑ　−１０４７−Ｂ物質５００　ｍｇを酢酸
エチル２００ｍＺに溶解し、２％ハイドロサルファイド
ナトリウム水を５０ｍＡ加えて９分液ロート中でよく攪
拌してＱ−１０４７−Ｂ物質を還元した。酢酸エチル層
を５０ｍｔの水で２回水洗の後、無水硫酸ナトリウムを
加え脱水した酢酸エチル眉な減圧濃縮すると純粋なＱ−
１０４７−Ｂ物質が無色結晶性粉末として３００　ｍｇ
得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、　　Ｑ−１０４７Ｒ−Ａ物質の紫外線吸収ス
ペクトルを示す。 第２図は、　　Ｑ−１０４７Ｒ−Ａ物質の赤外線吸収ス
ペクトルを示す。 第３図は、　　Ｑ−１０４７Ｒ−Ａ物質の１Ｈ−核磁気
共鳴スペクトルを示す。 第４図は、　　Ｑ−１０４７Ｒ−Ａ物質の１３ｃ−核磁
気共鳴スペクトルを示す。 第５図は、　　Ｑ　−１０４７Ｒ−Ｂ物質の紫外線吸収
スペクトルを示す。 第６図は、　Ｑ−１０４７Ｒ−Ｂ物質の赤外線吸収スペ
クトルを示す。 第７図は、　　Ｑ−１０４７Ｒ−Ｂ物質の１Ｈ−核磁気
共鳴スペクトルを示す。 第８図は、　　Ｑ−１０４７Ｒ−Ｂ物質の＋３ｃ−核磁
気共鳴スペクトルを示す。 第９図は、　Ｑ　−１０４７Ｒ−Ａ物質および−Ｂ物質
の抗酸化活性を示す。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記平面化学構造式で表わされる Ｑ−１０４７Ｒ物質 ▲数式、化学式、表等があります▼
2. （２）シュードノカルディア属に属するＱ−１０４７Ｒ
   物質生産菌を培養し、培養液中にＱ−１０４７Ｒ物質を
   蓄積させ、ついで培養液からこの物質を採取することを
   特徴とする下記平面化学構造式で表わされるＱ−１０４
   ７Ｒ物質の製造法▲数式、化学式、表等があります▼
3. （３）シュードノカルディア属に属する菌株がシュード
   ノカルディアエス・ピーＱ−１０４７（微工研菌寄第９
   ６２０号）である特許請求の範囲第（２）項記載の製造
   法。
4. （４）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるＱ−１０４７物質を還元することを特徴とす
   る 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるＱ−１０４７Ｒ物質の製造法。