JPS63216484A

JPS63216484A - メバロン酸の製造方法

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Publication number: JPS63216484A
Application number: JP4962087A
Authority: JP
Inventors: Akira Endo; 遠藤　章; Seiji Koike; 誠治小池
Original assignee: Asahi Denka Kogyo KK
Current assignee: Adeka Corp
Priority date: 1987-03-04
Filing date: 1987-03-04
Publication date: 1988-09-08
Anticipated expiration: 2010-10-04
Also published as: JPH0789938B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明はメバロン酸の製造方法、特に、メバロン酸を高
収率で得る方法に関するものである。

尚、メバロン酸は酸型、とラクトン型の２通りの構造を
示すが、相互に変換することが公知であり、以下本明細
書では特に断らない限り、両型を総称してメバロン酸と
いう。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする問題点〕メバ
ロン酸は、ライト等によって始めて単離された物質であ
り（ＪＡＣ５，皿、　５２７３．１９５６）コレステロ
ールを始めとする各種イソプレノイド化合物の重要な中
間体として知られている。

又、メバロン酸は、種々の微生物及び植物に対して成育
促進作用を有する等、生物の代謝に重要な役割を果たし
ているため、微生物、植物等の成長促進剤として用いら
れ、また、ピレスロイド系農薬、ユビキノン（呼吸系補
酵素）、ドリコール（多Ｉ！類の生合成必須因子）、及
び脂溶性ビタミン等の前駆体等に用いられる。

従来これらの研究には化学合成されたラセミ体が使用さ
れており、天然型のメバロン酸は入手し難いものであっ
た。

天然型のメバロン酸の醗酵法による製造は、アプライド
・マイクロバイオロジー（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒ。

ｂｉｏｌｏｇｙ）　　土工、９６５　（１９６８）や米
国特許第３．６１７．４４７号明細書にサッカロマイコ
プシス・フィブリゲラ　ＮＲＲＬ　　Ｙ−９０６９を用
いた例が記載されているが、その収量は低く、７００〜
１０００μｇ／−にとどまり、工業的な生産には到って
いないのが現状である。

従って、本発明の目的は、工業的に実施可能な程度に収
量の良いメバロン酸の製造方法を提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は、上記の目的を、微生物を培地中で培養するこ
とによりメバロン酸を製造するに際し、培養中の培養物
に少なくとも炭素源を含む基質を添加して培養し、次い
で該培養物からメバロン酸を得ることを特徴とするメバ
ロン酸の製造方法を提供することにより達成したもので
ある。

更に好ましくは本発明のメバロン酸の製造方法は培養中
の培養物における培養液（培養物の濾液）中の炭素源濃
度を２〜１５重量％、特に好ましくは５〜１０重量％に
維持する事により、微生物の速やかな成長と、メバロン
酸の速やかな生成を計ってメバロン酸を多量に得る事を
特徴とするものである。

本発明に使用される好ましい微生物としては、例えばキ
ャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、ギリエモンデラ（Ｇ
ｕｔｌｌｉｅｒｓｏｎｄｅｌｌａ）［、Ａンゼニアスボ
ラ（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ）　％、、　ハンゼヌ
ラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）
属、サッカロマイコプシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏ
ｐｓｉｓ）属、サツカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏ＋＊
ｙｃｅｓ）属、シテロマイセス（Ｃｔｔｅｒｏｍｙｃｅ
ｓ）属、エンドマイコプシス（Ｅｎｄｏｍｙｃｏｐｓｉ
ｓ）属、エンドマイセス（Ｅｎｄｏｍｙｃｅｓ）属、ソ
ルダリア（Ｓｏｒｄａｒｉａ）属からなる群から選ばれ
る微生物が挙げられ、特にキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ）属、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属・ピキア
（Ｐｉｃｈｉａ）属、サッカロマイコプシス（Ｓａｃｃ
ｈａｒｏ＋ｍｙｃｏｐｓｉｓ）属、サツカロミセス（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅＳ）属、エンドマイコプシス（
Ｅｎｄｏｓｙｃｏｐｓ　ｉｓ）属、エンドマイセス（Ｅ
ｎｄｏｍｙｃｅｓ）属、ソルダリア（Ｓ。

ｒｄａｒｉａ）属の微生物を挙げることができ、具体的
には、キャンディダ・シトレア　（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃ
ｉｔｒｅａ）、キャンディダ・フラギコラ（Ｃａｎｄｉ
ｄａ　ｆｌａｇｉｃｏｌａ）、キャンディダ・ラムビカ
（Ｃａｎｄｉｄａ　Ｉａｓ＋ｂｉｃａ）、キャンディダ
・サケ（Ｃａｎｄｔｄａ　５ａｋｅ）　、キャンディダ
・スコチー（Ｃａｎｄｉｄａ　５ｃｏｔｔｉ）　、ハン
ゼヌラ０ジメンネ（）Ｉａｎｓｅｎｕｌａ　ｄｉｍｅｎ
ｎａｅ）　、ハンゼヌラ・カリフォルニカ（Ｈａｎｓｅ
ｎｕｌａ　ｃａｒｉｆｏｒｎｉｃａ）　、ハンゼヌラ・
ホルスチー（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ｈｏｉｓｔｉｉ）　
、ハンゼヌラ・ヘンリシー（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ｈｅ
ｎｒｉｃｉｉ）、ハンゼヌラ・ファビアニ−（Ｈａｎｓ
ｅｎｕｌａ　ｆａｂｉａｎｔｉ）、ハンゼスラ・ミヌタ
（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ｍ１ｎｕｔａ）、ハンゼヌラ・
シルヴイコラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　５ｉｌｖｉｃｏｌ
ａ）　、／’ンゼヌラψカプスラタ（Ｈａｎｓｅｎｕｌ
ａ　ｃａｐｓｕｌａｔａ）　、ハンゼニアスポラ・ペイ
ジェリンキ−（Ｈａｏｓｅｎｉａｓｐｏｒａ　ｐｅｉｊ
ｅｒｉｎｃｋｉｉ）、ピキア番ピヌス（Ｐｉｃｈｉａ　
ｐｉｎｕｓ）、ピキア・メムプラナエファシェンス（Ｐ
ｉｃｈｉａ　ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）　、
ピキア・サイトイ（Ｐｔｃｈｔａ　５ａｔｔｏｉ）　、
サッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｏｐｓｉｓ　ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ）　％サッ
カロマイコプシス・カブスラリス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｏｐｓｉｓ　ｃａｐｓｕｌａｒｉｓ）−、サツカロ
ミセス・ファーメンタテ４　（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ　ｆｓｒｓｅｎｔａｔｉ）ｘサツカロミセス・デル
プルエキ−（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅＳ　ｄｅｌｂｒ
ｕｅｃｋｉｔ）　、サツカロミセス・サイトアヌス（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏＨｃｅｓ　５ａｉｔｏａｎｕｓ）　％サ
ツカロミセス・セレヴイシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サツカロミセス９ヴ
アフエルＣ３ａｃｃｈａｒｏ１１ｙｃｅｓ　　ｖａｆｅ
ｒ）、エンドマイコプシス・フィブリゲラ（Ｅｎｄｏｍ
ｙｃｏｐｓｉｓ　Ｈｂｕｌｉｇｅｒａ）　、エンドマイ
セス・フィブリゲラ（Ｅｎｄｏｓｙｃｅｓ　ｆｉｂｕｌ
ｉｇｅｒａ）、ギリエモンデラ・セレノスポラ（Ｇｕｉ
ｌｌｉｅｒｍｏｎｄｅｌｌａ　５ｅｌｅｎｏｓｐｏｒａ
）、シテロマイセス・マトリテラシス（Ｃｔｔｅｒｏ−
νｃｅｓ　＋１ａｔｒｔｔｅｕｓｉｓ）　、ソルダリア
・フィミコラ（Ｓｏｒｄａｒｉａ　ｆｉｍｉｃ。

ｌａ）等が例示出来、これらの肉量も好ましいのは、サ
ッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Ｓａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｏｐｓｉｓ　Ｈｂｕｌｉｇｅｒａ）であり、これ
らに属する株としでは、例えば、ｒＦｏ　　０１０７、
ＩＦＯ０１０３、ＩＦＯ０１０４、ＩＦＯ０１０５、Ｉ
ＦＯ０１０６、ＩＦＯ０１０９、ＩＦＯｏｌｌｌ、ＩＦ
Ｏ１６６５、ＩＦＯ１７１１゜ＩＦＯ１７４４、ＩＦＯ
１７４５、ＡＨＵ４１１３、ＩＡＭ　　４２４７．０ｔ
ＪＴ　　６０Ｔ１、ＨＵＴ　　７２３４、ＡＴＣＣ２０
８０、ＡＴＣＣ２０８２、ＡＴＣＣ２０８８、ＡＴＣＣ
９９４７、ＡＴＣＣ２０１４５、ＡＴＣＣ２４９４５、
ＡＴＣＣ４４８７２、ＡＴＣＣ４６２５２、ＡＴＣＣ４
６２５３、ＡＴＣＣ４６９４９、ＡＴＣＣ５２９２１，
ＮＲＲＬ　　Ｙ−１０６０、ＮＲＲＬ　　Ｙ−１０６４
、ＮＲＲＬＹ−２３８５、ＮＲＲＬ　　Ｙ−７０６１，
ＮＲＲＬ　　Ｙ−７２２１、ＮＲＲＬ　　Ｙ−７３２４
、ＮＲＲＬ　　Ｙ−７４６４、ＮＲＲＬ　　Ｙ−９０６
９、ＤＳＭ　　７０５５４、ＩＡＭ　　４０２５、ＩＦ
ｏ　　１３４２、ＩＦＯ０８００、ＩＦＯ１８ＢＯＳ　
ＩＦｏ　　０９８０．ＩＦＯ１４７７、ＩＦＯ１２５４
、（ＦＯＱ９’７５、ＩＦＯ０８０７、ＩＦＯ０９８４
、ＴＡＭ　　　４９４５、ＩＦｏ　　　１８５０、　Ｉ
ＡＭ　　　４３０７、　ＩＦＯ０６７２、ＩＡＭ　　　
４７７１％　ＩＡＭ　　　１２２３６、ＩＡＭ　　　１
２２４１、　ＩＦＯ１００２、ＩＦＯ１００３、ＩＦＯ
１６２６、ＩＦＯ１５７２、ＩＦＯ１５’７４、ＩＦＯ
１１４６、ＩＦＯ１２１３、ＩＦＯ１２８７、ＩＦＯ０
９５４、ＩＦＯ０９４１、ＩＦＯ８８１２を挙げること
が出来る。

尚、ｒ　ＦＯ，ＡＴＣＣ，ＮＲＲＬＳＤＳＭ、ＡＨＵ、
Ｉ　ＡＭ、０ＵＴＳＨＵＴは、それぞれ財団法人醗酵研
究所保存菌株、アメリカン・タイプカルチャー・コレク
ション保存菌株、ＡＲ３ノーザンレジロナル・リサーチ
センター保存菌株、トイチェ・ザンムルング・フォノ・
ミクロオルガニズメｖｆｆｌ？ｙ菌株・北海道大学農学
部保存菌株・東京大学応用微生物研究所保存菌株、大阪
大学工学部醗酵工学科保存菌株、広島大学工学部醗酵工
学科保存菌株を示す。

本発明で使用する培地組成としては、通常使用される培
地組成で良いが、培地中に細胞膜の可溶化作用を持つ非
イオン界面活性剤、例えばポリオキシエチレングリコー
ル〜ｐ−ｔ−オクチルフェニルエーテル型（トライトン
系、ノニデソト系として知られている）、ポリオキシエ
チレングリコールアルキルエーテル型（ブリジ系、エマ
ルジエン系として知られている）、ポリオキシエチレン
グリコールアルキルエーテル型（トライトン系、スパン
系として知られている）からなる群から選ばれた１種ま
たは２種以上の界面活性剤、具体的には、トライトン　
Ｘ−１００（登録商標）、トライトン　Ｘ−１１４（登
録商標）、トライトンＸ−１０２（登録商標）、ノニデ
ソト　Ｐ−４°゛′””°；、ζ“Ｊ２３５（ｆＴｈ”
Ｉｉ７’リジ　７６（登　　標）、ブリジ　９６（登録
商標）、ブリジ　５６（登録商標）、エマルジエン１２
０（登録商標）、エマルジエン　１０９Ｐ（登録商標）
、トゥイーン２０（登録商標）、スパン２０（登録商標
）等を添加して培養を行うのが好ましく、特に好ましい
ものはトライトン　Ｘ−１ｏｏ　＜登録商標）であり、
これらを培地の０゜００２〜０．２重量％好ましくは０
．０２〜０．１重量％の割合で添加して培養を行うとメ
バロン酸の収量を一層向上させることができる。細胞膜
を可溶化させると、メバロン酸が細胞の外に出やすくな
るため、収率が上がる。

又、窒素源としては、有機態窒素源である、ペプトン、
イーストエキストラクト、ミートエキストラクト、カゼ
イン、大豆粉を使用し、無機窒素源を使用しない方がよ
り収量を向上できるので好ましい。

本発明で用いる具体的な培地組成の例としては、例えば
炭素源５〜１５重量％、有機態窒素源０．５〜３重量％
、界面活性剤０．０２〜０．１重量％及び水（残部）か
らなる培地を挙げることができ、さらに燐酸塩、カリウ
ム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等の無機塩類を各
々０．０１〜５重量％含むものも挙げることができる。

本発明に於いて、基質の添加は培養中培養物における培
養液（培養物の濾液）中の炭素源濃度が２〜１５重量％
、好ましくは５〜１０重量％に維持されるように行うの
が良い、しかしながら、−船に炭素源濃度の測定には長
時間を要するので、基質添加時期の判断は培養物のｐＨ
又は溶存酸素量を指標とするのが良い。

ｐＨを指標とする場合にはｐＨが７以上となる点が、ま
た、溶存酸素量を指標とする場合には溶存酸素量が一旦
低下し、再度上昇し始めた時点、即ち溶存酸素量の曲線
の（飽和を初期値とする）極小値の通過直後が指標とな
る。

尚、この時添加する基質の量は、予め指標の時点におけ
る炭素源濃度を求めておき、これに応じた量を加えれば
良い。

添加する基質は、少なくとも炭素源を含むものであれば
良く、培養前の培地組成と同一でも異なっていても良い
が、好ましい炭素源としては、例えば、グルコース、フ
ラクトース、マルトース、マルトエキス、グリセリン、
酢酸塩等が挙げられる。また、添加する時の基質の形態
は、無菌状態であれば制限されないが、殺菌の容易性等
から水溶液として用いるのが好ましく、その場合の濃度
も制限されないが、高濃度（例えば、４０％以上）とす
るのが好ましい。

本発明の製造方法の好ましい具体的実施態様は以下の通
りである。

即ち、炭素源、有機態窒素源、細胞膜の可溶化作用を持
つ非イオン界面活性剤及び無機塩類を所定量含有する培
地に微生物を接種し、２０〜４０℃、好ましくは２５〜
３５℃で震盪培養するか、１００〜５００ｒｐｍ、好ま
しくは２００〜４００　ｒｐｍ、０．２〜１．５ＶＶＭ
、好ましくは０．５〜１、ＯＶＶＭで通気攪拌培養し、
所定時間培養した後、培養物における培養液中の炭素源
濃度の測定、ｐＨの測定、又は溶存酸素量の測定により
、前記基質を培養物に流加（添加）する。このような基
質の流加を必要回数行い、それ以上メバロン酸の生産量
が向上しないと判断した時点で培養を終了する。培養終
了後、培養物を遠心分離、濾過等公知の方法で菌体を除
き、逆浸透法、減圧蒸留等により濃縮するか、ブタノー
ルや酢酸エチルを用いた向流分配法或いはシリカゲル、
ダイヤイオン、イオン交換樹脂等を使用したカラムクロ
マトグラフィ法、分子蒸留法、結晶化法等の公知の精製
技術の組合せにより処理してメバロン酸を得ることがで
きる。

尚、本発明の方法における培地には、本発明の目的の範
囲内で、所望により消泡剤等を添加することができる。

また、培養液中の炭素源濃度の測定は、グルコースオキ
シダーゼを用いる酵素法等により行い、この場合の「培
養液」とは、培養物を遠心分離、濾過等により菌体等を
除いた溶液部をいう。

〔実施例〕

以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれらに限定
されるものではない。

尚、実施例、比較例におけるメバロン酸の定量は以下の
ようにして行った）。

〔メバロン酸の定量方法〕

試料溶液０．８−をスピフチ管に取り、Ｉ　Ｎ−ＨＣＸ
溶液を用いてｐＨを２に調整する。これにＮａｚ　５Ｃ
）ａ　１　ｇを加え、更に酢酸エチル２．０　ｍを加え
て攪拌後、上層を取る。下層に更に酢酸エチル２．０−
を加えて攪拌後、上層を取り前回の上層と合わせる。再
度この操作を行い、酢酸エチル層計６．　ＯＮ＆を得、
これを蒸発乾固する。この乾固物を３．４−ジメトキシ
ベンズアルデヒドを内部標準としてガスクロマトグラフ
ィにより定量した。

尚、ガスクロマトグラフィの条件は以下の通り。

カラムサイズ：直径３鶴長さ１０１００Ｏステンレス製
）カラム液相：１０％Ｔｈｅｒｍｏｎ−３０００カラムサ
ポート：ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｂ　　ＷＡＷ−０ＭＣ３８
０〜１００メツシユカラム温度：１８０℃ インジェクシッン温度：２３０℃ キャリアーガス＋Ｎ、（４０ｍ／分）〔実施例１、比較例１〕グルコース１０重量％、マルトエキストラクト１重量％
、ペプトン０．５重量％、イーストエキストラクト０．
１重量％、Ｋ　Ｈｚ　Ｐ　Ｏｓ　０．３重量％、Ｍｇ　
３０４　　・７　Ｈｚ　００．０５重量％、ＣａＣＯ５
１重量％、残部水からなる培地２０Ｉｌと２００ｄを用
意し、該２００艷の培地にサッカロマイコプシス・フィ
ブリゲラＩＦＯ１７４４を１白金耳接種し２８℃で３日
間震盪培養しておいたものを、上記２０１の培地に接種
し、これを２８℃、回転数３０Ｏｒｐｍ、通気量２０１
／分でグルコース濃度、ｐＨ１溶存酸素量を測定しつつ
通気攪拌培養した。

培養３日目に培養液中のグルコース量を測定してグルコ
ース濃度が５％以下になったことを確認した後、この時
点でグルコースの５０重量％水溶液を２．０瞳流加し、
培養を継続した。更に、培養６日目及び培養９日目にそ
れぞれグルコースの５０重量％水溶液を２．０　ｋｇを
流加し、計１２日間培養を１ｉｌＩ続し培養を終了した
。培養終了後、培養物から得たメバロン酸を、前記定量
法により測定したところ、メバロン酸の量は２０１０Ｉ
Ｊｇ／ｄであった。又、グルコースを流加しない場合（
比較例１）には６日後にメバロン酸の量が増加しな（な
り、メバロン酸の量は１１６０μｇ／−であった。

第１図は、上記実施例における培養時間と、溶存酸素！
（飽和−１００とする）、ｐＨ，グルコース量（重量％
）、及びメバロン酸量（重量％）それぞれとの関係を示
すグラフで、このグラフから、培養３日目に培養液中の
グルコース濃度が５％以下となった直後にｐＨが７を越
え、溶存酸素量は極小値を通過している事がわかる。

〔実施例２、比較例２〕実施例１の培地にトライトン　Ｘ−１００（登録商標）
をＯ，ＯＳ重量％添加して、実施例１と同様に１２日間
培養を継続した。その結果得られたメバロン酸の量は２
４３０μｇ／＋ｄであった。又、流加しない場合（比較
例２）は６日後にメバロン酸の蓄積量が増加しなくなり
、得られたメバロン酸の量は１４１０１１ｇ／ｄであつ
た。

〔実施例３、比較例３〕実施例２の培地に更に塩化アンモニウムを０．３重量％
添加して、実施例２と同様に１２日間培養を継続した。

その結果得られたメバロン酸の量は２２７０μｇ／−で
あった。流加しない場合（比較例３）には６日後にメバ
ロン酸の蓄積量が増加しなくなり、得られたメバロン酸
の量は１３２０μｇ／−であった。

〔実施例４、比較例４〕実施例１の培地に更に塩化アンモニウムを０゜３Ｎ量％
添加して実施例１と同様に１２日間培養を継続した。そ
の結果得られたメバロン酸の量は１９６０μｇ／−であ
った。流加しない場合（比較例４）には６日後にメバロ
ン酸の蓄積量が増加しなくなり、得られたメバロン酸の
量は９１０ｇｇ／−であった。

〔実施例５〕実施例２の培地のグルコースに代えてマル）−スを使用
し、ｐＨが７を越えた時点を流加時期として実施例２と
同様に１２日間培養を継続した。

その結果得られたメバロン酸の量は２４１０μｇ／−で
あった。

〔実施例６〕実施例２の培地のグルコースに代えてシェークロースを
使用し、溶存酸素量の極小値通過直後に流加を行って実
施例２と同様に１２日間培養を継続した。その結果得ら
れたメバロン酸の量は２４００μｇ／−であった。

〔実施例７〕実施例２の培地のトライトン　Ｘ−１００（登録商標）
に代えてブリジ　３５　（登録商標）を使用して実施例
２と同様に１２日間培養を継続した。

その結果得られたメバロン酸の量は２２９０μｇ／−で
あった。

〔実施例８〕実施例２の培地１０−を試験管に入れ、１２１℃１５分
で殺菌しサッカロマイコプシス・フィブリゲラ　ＩＦ０
０１０７を１白金耳接種し２８℃、回転数２５Ｏｒｌ）
ｍで培養した。４日目、８日目にそれぞれ５０重量％グ
ルコース水溶液を１．Ｏｇづつ流加して１２日間培養後
、２５００ｒｐｍｌＯ分間遠心分離し、濾液中のメバロ
ン酸を定量した。その結果得られたメバロン酸の量は１
２０１０１１ｇ／−であった。

〔実施例９〕実施例２で得た培養物２５１を回転数５００Ｏｒｐｍで
遠心分離し濾液１７１を得た。これを逆浸透膜を用いて
５Ｉｌに濃縮ｖＩｔＳＯ重量％リン酸水を用いてｐＨ２
とし、５１の酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル層１
５１を得た。これを０，０２Ｎ水酸化ナトリウム水５１
に転溶し、５０重量％リン酸水にてｐＨ２とした後、ダ
イヤイオンＨＰ−２０カラム（１１）を通した。この流
出液を、５１の酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル層
１５１を得た。これを無水硫酸ナトリウムにて脱水後蒸
発乾固させた。この乾固物を少量のアセトン／ベンゼン
（１／７）に溶解させ、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィー（１５０ｇ）により分離した。その後、メバロン
酸を含む両分を乾固し、無色の油状勧賞１９．０ｇを得
た。

この物質は比旋光度〔α）！’−−２１．９゜（Ｃ−３
，８９、エタノール）であった。

〔発明の効果〕

本発明のメバロン酸の製造方法によれば、工業的に実施
可能な程度に高収量でメバロン酸を得ることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の実施例１における培養時間と、溶存
酸素量（飽和−１００とする）、ｐＨ、グルコース量（
重量％）、及びメバロン酸量（重置％）それぞれとの関
係を表すグラフであり、図中、１はメバロン酸量、２は
グルコース量、３はｐＨ１４は溶存酸素量をそれぞれ示
す。培　養　日　数（日）手続補正書昭和６２年　４月　６日１、事件の表示特願昭６２−４９６２０号２、発明の名称メバロン酸の製造方法３、補正をする者事件との関係　　特許出願人（０３Ｂ）旭電化工業株式会社４、代理人東京都港区赤坂九丁目６番２９号自発補正（出願日から１年３ケ月以内の補正）７、補正
の内容（１）第４頁１１行のｒ　（ＪＡＣ３，到、　５２７３
．１９５６）　Ｊを「（ジャーナル・オブ・ジ・アメリ
カン・ケミカル・ソサイエテ４　　（Ｊｏｕｒｎａｌ　
ｏｆ　ｔｈｅ　ＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｏ＋１ｃａｌ　
５ｏｃｉｅｔｙ）　７８巻、５２７３〜５２７５頁、１
９５６年）」と稙正。（２）第１５頁１行の「ダイヤイオン」を「ポーラスポ
リマー奢封脂」と補正。（３）第２１頁１０行〜１１行の「ダイヤイオンＨＰ−
２０Ｊを「ダイヤイオン１（Ｐ−２０（登録商＋り」と
補正。（４）第２１頁１５行〜１６行の「シリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（１５０ｇ）Ｊを「シリカゲルカラム
クロマトグラフィー（ワコーゲルＣ−２００（登録商標
）、１５００ｇ）Ｊと補正。（５）第２２頁９行〜１０行の「メバロン酸量（重量％
）」を「メバロン酸量（μｇ／＋ｍ１）Ｊと補正以上

Claims

【特許請求の範囲】（１）微生物を培地中で培養することによりメバロン酸
を製造するに際し、培養中の培養物に少なくとも炭素源
を含む基質を１回又は複数回添加して培養を継続し、次
いで該培養物からメバロン酸を得ることを特徴とするメ
バロン酸の製造方法。（２）培養液（培養物の濾液）中の炭素源濃度が２〜１
５重量％に維持されるように基質の添加を行うことを特
徴とする特許請求の範囲第（１）項記載のメバロン酸の
製造方法。（３）基質の添加を培養物のｐＨが７以上になった時点
で行うことを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載
のメバロン酸の製造方法。（４）基質の添加を培養物の溶存酸素量（飽和を初期値
とする）を示す曲線が極小値を通過した時点で行うこと
を特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載のメバロン
酸の製造方法。（５）培地中に細胞膜の可溶化作用を持つ非イオン界面
活性剤を添加して培養を行うことを特徴とする特許請求
の範囲第（１）項に記載のメバロン酸の製造方法。（６）非イオン界面活性剤として、ポリオキシエチレン
グリコールオクチルフェニルエーテル型、ポリオキシエ
チレングリコールアルキルエーテル型、ポリオキシエチ
レングリコールソルビタンエステル型からなる群から選
ばれた１種または２種以上の非イオン界面活性剤を使用
することを特徴とする特許請求の範囲第（５）項のメバ
ロン酸の製造方法。（７）非イオン界面活性剤として、トライトン　Ｘ−１
００（Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００、登録商標）を使用す
ることを特徴とする特許請求の範囲第（５）項に記載の
メバロン酸の製造方法。（８）界面活性剤の添加量が培地の０．００２〜０．２
重量％であることを特徴とする特許請求の範囲第（５）
項に記載のメバロン酸の製造方法。（９）培地中の窒素源が、有機態窒素源のみにより構成
されることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記
載のメバロン酸の製造方法。（１０）有機態窒素源として、ペプトン、イーストエキ
ストラクト、ミートエキストラクト、カゼイン大豆粉か
らなる群から選ばれた１種または２種以上の物質を使用
することを特徴とする特許請求の範囲第（９）項記載の
メバロン酸の製造方法。（１１）微生物として、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ
）属、ギリエモンデラ（Ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｅｌ
ｌａ）属、ハンゼニアスポラ（Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏ
ｒａ）属・ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属、ピキ
ア（Ｐｉｃｈｉａ）属、サッカロマイコプシス（Ｓａｃ
ｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ）属、サッカロミセス（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、シテロマイセス（Ｃｉ
ｔｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、エンドマイコプシス（Ｅｎｄ
ｏｍｙｃｏｐｓｉｓ）属、エンドマイセス（Ｅｎｄｏｍ
ｙｃｅｓ）属、ソルダリア（Ｓｏｒｄａｒｉａ）属から
なる群から選ばれる微生物を使用することを特徴とする
特許請求の範囲第（１）項記載のメバロン酸の製造方法
。（２）基質を水溶液として添加することを特徴とする特
許請求の範囲第（１）〜（４）項の何れかに記載のメバ
ロン酸の製造方法。