JP2000502994A - 血管弛緩剤の組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、人蔘の成分の一つであるジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を活用成分として含有する血管弛緩剤に関するものである。本発明による組成物の活性成分であるジンセノサイドＲｇ₃及びＲｇ₅は、内皮依存的に血管弛緩作用を表し、一般的にサポニン成分とは異なる内皮細胞を破壊しない溶血作用や魚に対する毒性などの副作用なしで用いることのできる安全な医薬成分である。ジンセノサイドＲｇ₃及びＲｇ₅は水蔘、白蔘などの人蔘植物には殆ど存在せず、紅蔘の中に極微の量が存在する成分で、人蔘植物を１１０〜１８０℃の高温で０．５〜２０時間加熱することによってその含量が顕著に増加する。

Description

【発明の詳細な説明】 血管弛緩剤の組成物 技術分野 本発明は薬用人蔘の特定の有効成分を活性成分として含有する血管弛緩剤の組 成物に関するものである。より具体的には、本発明は薬用人蔘のサポニン系成分 の中の一つであるジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を活性成分として含有す る血管弛緩剤の組成物に関するものである。 背景技術 薬用人蔘は古来から最も代表的な滋養強壮剤として広く用いられており、最近 にはその成分と薬効に関する多数の研究結果が報告されてその神秘な薬効が現代 科学の脚光を浴びている。 一般的に薬用人蔘は栽培して採取したままの水蔘、水蔘を常温で乾燥させた白 蔘、また、水蔘を９８〜１００℃で加熱処理して製造される紅蔘の形態で用いら れている。この中で特に紅蔘は白蔘より薬効が遥かに優れているものとして知ら されているが、最近に至って紅蔘の特異性成分に関する研究が活発に進められて いる。これらの成分は紅蔘を製造する過程で生成されるものであり、紅蔘の優れ た薬効について説明できる成分として評価されている。 発明の開示 従って、本発明者らは、紅蔘の特異性成分を増加させ、薬用人蔘の薬効を強化 することのできる手段を研究してきたところ、その結果、薬用人蔘を１１０〜１ ８０℃の高温で０．５〜２０時間加熱して処理すれば既存の水蔘や白蔘又は紅蔘 より薬効が遥かに増強された加工人蔘が製造されることを見い出した。かかる加 工人蔘に存在する種々の成分を分離してその薬効を検証する過程で本発明者らは 白蔘や紅蔘には全く存在しなかったり、極微量のみ存在する成分で今までは薬効 が殆ど知らされていなかったジンセノサイドＲｇ₃及びＲｇ₅が優れた血管弛緩効 果を有することを見い出し、本発明を完成するに至った。 したがって、本発明は活性成分としてジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を 含有する血管弛緩剤の組成物に関するものである。 図面の簡単な説明 以下、本発明の特質及び目的を理解するために添付図面を参照して詳細に説明 する。 第１図は、ジンセノサイドＲｇ₃を内皮存在下で単独投与したときの血管弛緩 効果（−●−）を、内皮を除去して技与したとき（−○−）、内皮存在下でＲｇ₃ を１０^-6Ｍのメチレンブルー（ＭＢ）と併用投与したとき（−△−）、及び、 １０^-6ＭのＬ−ニトロアルギニン（Ｌ−ＮＬＡ）と併用投与したとき（−▲−） の血管弛緩効果を比較して表したグラフである。 第２図は、本発明の実施例７で製造した加工パナクスサジオル系サポニン分画 を内皮存在下で投与したとき（−●−）及び内皮を除去して投与したとき（−○ −）の血管弛緩効果を比較して表したグラフである。 第３図は、ＨＵＶＥＣ細胞に対するジンセノサイドＲｇ₃と溶媒に用いたジメ チルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の細胞毒性の実験結果を表したグラフで、細胞に ＤＭＳＯを加えて培養したとき（−○−）及ひジンセノサイドＲｇ₃をＤＭＳＯ に溶解した溶液を加えて培養したとき（−▼−）の細胞の生存率を比較して表し たグラフである。 第４図は、ジンセノサイドＲｇ₅を内皮存在下で単独投与したときの血管弛緩 効果と（−○−）、内皮除去して投与したときの（−■−）、内皮存在下で１０^-6 Ｍのメチレンブルー（ＭＢ）と併用投与したとき（−▼−）、及び、１０^-6Ｍ のＬ−ニトロアルギニン（Ｌ−ＮＬＡ）と併用投与したとき（−△−）の血管弛 緩の効果を比較して表したグラフである。 第５図は、ＨＵＶＥＣ細胞に対するジンセノサイドＲｇ₅と溶媒に用いたジメ チルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の細胞毒性の実験結果を表したグラフで、細胞に ＤＭＳＯを加えて培養したとき（−●−）及びジンセノサイドＲｇ₅をＤＭＳＯ に溶 解した溶液を加えて培養したとき（−■−）の細胞の生存率を比較して表したグ ラフである。 発明を実施するための最善の態様 本発明の組成物（剤組成物）で活性成分として用いられるジンセノサイドＲｇ₃ 及びＲｇ₅は、次のような構造式を有するサポニン化合物で、本発明では純粋な ジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を用いたり、又は、ジンセノサイドＲｇ₃ 及び／又はＲｇ₅成分が強化された加工人蔘又はその抽出物を用いたりすること もできる。 本発明の組成物において、ジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を含有する加 工人蔘抽出物を活性成分として用いる場合には、抽出物の中のＲｇ₃及び／又は Ｒｇ₅の含量は少なくとも１０％（ｗ／ｗ）であるものが好ましい。これは、Ｒ ｇ₃及び／又はＲｇ₅含量が１０％未満の場合には目的とする血管弛緩効果を充分 に得るため、余りにも多量の人蔘抽出物が用いなければならないからである。 本発明の組成物の成分である純粋なジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅、ま たはジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅が強化された人蔘抽出吻は、人蔘又は 人蔘葉などを高温で加熱処理して得られた加工人蔘、又は人蔘抽出物の酸加水分 解物から収得することができる。 ジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅が強化された人蔘抽出物は、人蔘サポニ ンを含有するパナクス属食物、例えばパナクス人蔘（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎ ｇ）、パナクスノト人蔘（Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ）、パナクスク ィンクェホリウム（Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ）、パナクスヤポ ニクス（Ｐａｎａｘ Ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）などや、またはこれら植物の葉っぱ 、これら植物の組織培養物、またはこれらの水並びに低級アルコールによる抽出 物を、１１０〜１８０℃の温度で０．５〜２０時間加熱処理して収得された加工 人蔘を水または適切な有機溶媒、例えばメタノール、エタノールまたはこれらの 混合溶媒で抽出した後、抽出物を減圧下で濃縮させ、水で懸濁させた後、非極性 の有機溶媒、例えばヘキサン、エーテル、ジクロロメタン、クロロホルム、エチ ルアセテートまたはこれらの混合溶媒で抽出した後、残りの水層をブタノールの ような極性有機溶媒で抽出し、この抽出物をクロマトグラフィーすることによっ てＲｇ₃及びＲｇ₅を含有する分画を得たり、Ｒｇ₃及びＲｇ₅を同時に含有する分 画を収得したりすることができる。この際、クロマトグラフィーを繰り返して行 えばジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅の含有量をさらに高めることができ、 含量が高まった分画を適切な溶媒系、例えば水、低級アルコール、低級ケトン、 クロロホルムまたはこれらの混合溶媒のような溶媒系で結晶化させると純粋なジ ンセノサイドＲｇ₃又はＲｇ₅を収得することができる。この方法では人蔘を加熱 処理する過程で人蔘の中に存在するパナクサジオル系サポニンであるジンセノサ イドＲａ、Ｒｂ₁、Ｒｂ₂、Ｒｃ、Ｒｄの２０番炭素に結合する糖が分離されるこ と によって目的とするジンセノサイドＲｇ₃が生成され、Ｒｇ₃が継続的に脱水反応 を起こして２０番位置に２重結合が生成されることによってＲｇ₅が生成される 。場合によっては上記の過程で加熱処理する段階と有機溶媒の抽出段階を変えて 行ったり、高温で加熱処理する代わりに温和な条件下で、例えば、３０〜１００ ℃で、好ましくは７０℃で加熱しながら酸、例えば塩酸、硝酸、過塩素酸などの ような希無機酸、または、酢酸、酒石酸、シュウ酸などのような低級有機酸で酸 処理して行ったりする場合にも同様の結果を得ることができる。 また、上記の過程で人蔘の代わりに公知のジンセノサイド化合物Ｒａ、Ｒｂ₁ 、Ｒｂ₂、Ｒｃ、Ｒｄなどの成分またはこれらの分画を直接上記したような方法 で加熱したり、酸加水分解したりしても同様の結果が得られる。 一方、Ｒｇ₃及び／又はＲｇ₅を含有する人蔘抽出物を製造する場合、人蔘を加 熱する前に有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、ブタノールなどのアルコ ール溶媒、エーテル溶媒、またはこれらの混合溶媒で抽出して望ましくない成分 であるパナクサジオル系サポニン成分を除去するし、パナクサジオル系サポニン 成分を高濃縮で含有する分画を得て、これを上述と同様の方法で加熱処理するこ とによってＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を多量に含有して望まないパナクサジオル系サ ポニン成分を含有しない加工パナクサジオル系サポニン分画を収得して、これを Ｒｇ₃、及び／又はＲｇ₅を含有する加工人蔘抽出物として用いることもできる。 本発明に伴う活性成分としてジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を含有する 組成物は強力な血管弛緩効果を有しており、循環器系の障害による高血圧、動脈 硬化、血液循環障害、糖尿病、性機能障害、記憶力障害などの疾患に対する予防 及び治療剤として有用に用いることができる。 このような目的で臨床的に用いるとき、本発明の組成物は薬剤学的な分野で通 常の担体といっしょに配合して薬剤学的な分野で通常の製剤、例えば錠剤、カプ セル剤、トローチ剤、液剤、懸濁液などの経口投与用の製剤、注射用溶液若しく は懸濁液、または注射時に、注射用蒸留水で再製造して用いることのできる用時 使用形の注射用乾燥粉末などの形態である注射用製剤、軟膏剤、クリーム剤、液 剤などの局所適用の製剤などの多様な剤型に製剤化することができる。 本発明の組成物で用いられる担体は、薬剤学的な分野で通常のものであり、例 えば経口投与用製剤の場合には結合剤、滑沢剤、崩解剤、賦形剤、可溶化剤、分 散剤、安定化剤、懸濁化剤、色素、香料などがあって、注射剤の場合には保存剤 、無痛化剤、可溶化剤、安定化剤などがあり、局所投与用製剤の場合には基剤、 賦形剤、潤滑剤、保存剤などがある。こうして製造された薬剤学的な製剤は経口 的に投与したり、非経口的に、例えば静脈内、皮下、腹腔内投与または局所適用 したりすることができる。また経口投与のとき、薬剤が胃酸によって分解される ことを防止するために制酸剤を併用したり、錠剤などの経口投与用の固形製剤を 腸溶性被膜でコーティングした製剤にして投与することもできる。 本発明に伴うジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅の人体に対する投与量は、 体内での活性成分の吸収度、不活性化率及び排泄速度、患者の年齢、性別及び状 態、治療する疾病の重症度などによって適切に選択されるが、一般的には成人に １日に５〜５００ｍｇ、好ましくは１０〜２００ｍｇの量が投与されるようにす る。従って、本発明の組成物を単位投与形に製造するとき、各々の単位投与形は 上述の有効容量の範囲を考慮してジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を５〜５ ００ｍｇ、好ましくは１０〜２００ｍｇ含有するように剤形化させることができ る。こうして製剤化された単位投与形は必要によって薬剤の投与を監視したり、 観察する専門家の判断と個人の要求によって専門化された投薬法を用いたり、一 定時間の間隔で数回、好ましくは１〜６回分割投与することができる。 本発明に伴う組成物の活性成分であるジンセノサイドＲｇ₃及びＲｇ₅は後述す る実験結果から立証されるように血管内皮に対する損傷なく血管を弛緩させる作 用を示すので、溶血や魚に対する毒（ toxity against fishes）などの副作用が ないのみならず、実験動物に対して急性毒性を表さないので安全に用いることが できる。 本発明は以下の実施例、実験例及び組成物例によってさらに詳しく説明される が、本発明がこれらによって何ら制限されるものではない。実験例１：ジンセノサイドＲｇ₃を含有する人蔘抽出物の製造 密閉された容器に水蔘１００ｇを入れて、１３０℃で２時間加熱処理した。こ の加工人蔘をメタノール２００ｍｌで抽出してメタノール抽出物を得てメタノー ルを蒸発させて除去した後、残りの残渣を水１００ｍｌで懸濁させ、エーテル１ ００ｍｌずつ３回抽出した後、残りの水層を水で飽和されたブタノールを１００ ｍｌずつ３回抽出してサポニンが含有されたブタノール抽出液を得た。このブタ ノール抽出液を乾燥して酢酸エチル／メタノール／水（２０：１：１）の混合溶 媒を溶出剤として用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーさせて目的とする ジンセノサイドＲｇ₃を６０％含有する分画１．５ｇを収得した。実施例２：ジンセノサイドＲｇ₅を含有する人蔘抽出物の製造 実施例１と同様にして、目的とするジンセノサイドＲｇ5を５０％含有する分 画１．０ｇを収得した。実施例３：ジンセノサイドＲｇ₃を含有する人蔘抽出物の製造 乾燥された尾蔘１Ｋｇにメタノール２Ｌを加えて４時間還流させて抽出し、濾 過して収得した人蔘エキスを減圧下で乾燥させた。収得したシロップ状の人蔘抽 出物を加圧減菌器に入れ、１２０℃で４時間加熱した。加熱処理された人蔘抽出 物を実施例１と同様な方法でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、目的 とするジンセノサイドＲｇ₃を６５％含有する分画２０ｇを分離して収得した。実施例４：ジンセノサイドＲｇ₅を含有する人蔘抽出物の製造 実施例３と同様にして、目的とするジンセノサイドＲｇ5を６０％含有する分 画１０ｇを収得した。実施例５：ジンセノサイドＲｇ₃を含有する人蔘抽出物の製造 白蔘１Ｋｇにメタノール２Ｌを加えて４時間還流抽出し、濾過して収得した人 蔘エキスを減圧下で乾燥させた。収得したシロップ状の人蔘抽出物を公知の方法 ［参照：薬学会誌第３５券５号、ＰＰ４３２−４３７、１９９１］によって酸処 理した。より具体的に、人蔘抽出物を水／酢酸（１：１）混合溶媒１１に溶解さ せて７０℃で２時間撹拌しながら、加熱した後、溶媒を除去して得た酸処理され た人蔘抽出物を実施例１と同様な方法でシリカゲルカラムクロマトグラフィーに かけ、目的とするジンセノサイドＲｇ₃を７２％含有する分画２０ｇを分離して 収得した。実施例６：ジンセノサイドＲｇ₅を含有する人蔘抽出物の製造 実施例５と同様にして、目的とするジンセノサイドＲｇ₅を６０％合有する分 画１０ｇを収した。実施例７：加工パナクスサジオル系サポニン分画の製造 人蔘ＩＫｇをメタノール２００ｍｌで抽出してメタノール抽出物を得、メタノ ールを蒸発させ除去した後、残りの残渣を水１００ｍｌで懸濁させ、エーテル１ ００ｍｌずつ３回抽出した。酢酸エチル：ブタノール＝１０：１混合溶媒で３回 抽出し、残りの水層を再びブタノール１００ｍｌで３回抽出してパナクスサジオ ル系サポニン分画を得た。このパナクスサジオル系サポニン分画を実施例１と同 様な方法で１３０℃で３時間加熱処理して加工パナクスサジオル系サポニン分画 およそ４０ｇを収得した。実施例８：ジンセノサイドＲｇ₃の製造 上記の実施例３で収得したジンセノサイドＲｇ₃含有分画１ｇを、酢酸エチル ／メタノール／水（２０：１：１）の混合溶媒を溶出剤として用い、実施例１と 同様な方法でシリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返し行い、目的とする ジンセノサイドＲｇ₃を９２％含有する分画５００ｍｇを収得した。収得された ジンセノサイドＲｇ₃含有分画をメタノールと酢酸エチルの混合溶媒から再結晶 化させて、目的とするジンセノサイドＲｇ₃およそ４００ｍｌを収得した。 収得したジンセノサイドＲｇ₃は文献［参照：日本薬学雑誌，１０３（６）、 ＰＰ６１２−６２２、１９８３、または、薬学会誌第３５巻５号、ＰＰ４３２− ４３７、１９９１］に公知されたものと一致する¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル及び質 量スペクトルを示す。即ち、収得したジンセノサイドＲｇ₃およそ１０ｍｇをピ リジン−ｄ₅（９９．５％）６００μｌに溶解させ、炭素核磁気共鳴スペクトル を測定すると、特徴的なＲｇ₃のピークを表す。また、ジンセノサイドＲｇ₃の質 量スペ クトル（ＦＡＢ＋）は、７８５（［Ｍ＋Ｈ］⁺）や８０７（［Ｍ＋Ｎａ］⁺）の分 子イオンピークを表す。実施例９：ジンセノサイドＲｇ₅の製造 上記の実施例４で収得したジンセノサイドＲｇ₅含有分画１ｇに対して実施例 ８と同様にして、Ｒｇ₅をおよそ９０％含有する分画２００ｍｇ収得し、収得さ れたジンセノサイドＲｇ₅含有分画をメタノール及び酢酸エチル混合溶媒から再 結晶化させて、目的とするジンセノサイドＲ８６をおよそ１５９ｍｇを収得した 。 取得したジンセノサイドＲｇ₅は次のような特性を表す。 ＭＳ（ＦＡＢ＋、ｍ／ｚ）：７８９［Ｍ＋Ｎａ］⁺）、８０５［Ｍ＋Ｋ］⁺）¹³ Ｃ−ＮＭＲ（ｐｐｍ、ピリジン−ｄ₅）：δ１３．０、１６．０、１６．５、 １６．６、１７．０、１７．８、１８．５、２５．８、２６．７ 、 ２７．０、２７．４、２８．１、３２．３、３２．６、３５．３ 、 ３７．０、３９．２、３９．７、４０．２、５０．５、５０．９ 、 ５１．２、５６．４、６２．６、７１．４、７２．４、７２．６ 、 ７７．２、７７．９、７８．１、７８．３、８３．５、８８．９ 、 １０５．２、１０６．１、１２３．５、１２４．６、１３１．２ 、 １４０．２実験例１：ジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅の血菅弛緩作用 血管内の内皮は血流及び血管の緊張度を調節して血小板凝集を抑制するなど体 内恒常性の維持に非常に重要な役割を果たしている。特に、血管の内皮はＥＤＲ Ｆ（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｒｅｌａｘｉｎｇ ｆａｃｔｏ ｒ内皮遊離因子）、即ち、一酸化窒素（ＮＯ）を遊離し、一酸化窒素は血管平滑 筋に作用して可溶性グアニレートサイクラーゼを活性化し、組織内サイクリック ＧＭＰを増加させ、血管を弛緩させることで知らされている。高血圧、高コレス テロール血症などの循環器系の疾患によって内皮の機能が損傷されれば一酸化窒 素の遊離が減少され、正常的な血管調節機能が損失される。ところが、殆どのサ ポニン成分らは内皮細胞まで破壊しながら血管弛緩作用を表し、溶血や魚に対す る毒性などの深刻な副作用を現すので好ましくはなかった。従って、内皮に対す る損傷がなく、血管に対する弛緩作用を表す成分が必要である。 本発明者らは、ジンセノサイドＲｇ₃及びＲｇ₅が通常のサポニン成分とは異な る強力な内皮依存性血管弛緩作用を表すことを確認し、以下ではこれを実験的に 立証する。 １．実験方法： ３００〜４００ｇのスプラグードウーリ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄｏｗｌｅｙ：Ｓ Ｄ）ラットの胸部大動脈を迅速に摘出し、クレプスーリンガー重炭酸ナトリウム 溶液（対照溶液、ＮａＣ１１１８．３：ＫＣｌ ４．７：ＭｇＳＯ₄１．２：Ｋ Ｈ₂ＰＯ₄ １．２：ＣａＣｌ₂ ２．５：ＮａＨＣＯ₃ ２．５：ＣａＥＤＴＡ０ ．０１６：ブトウ糖 １１．１ｍＭ）に移した。 内部の血液と血管周囲の脂肪およそ２〜３ｍｍの長さで大動派をつくり、ｐＨ ７．４の対照溶液で張られた２５ｍ１臓器チャンバーへ垂直に懸垂した。一部の 大動脈環は内部にピンセットを入れて紙タオルの上で７〜８回転がせ、内皮細胞 を除去した血管で用いた。大動脈環の下部は臓器チャンバーに固定させて上部は 鐙子を通じて等尺性張力の記録のためにトランスデュサーカップラー（ｔｒａｎ ｓｄｕｃｅｒ ｃｏｕｐｌｅｒ）に連結した。 臓器チャンバーにフェニルエフェリン（ phenylephrine）１０^-6Ｍを加えて安 定された収縮を示す大動脈環に、ジンセノサイドＲｇ₃又はＲｇ₅のジメチルスル ホキサイド溶液を単独に、またはメチレンブルー（ＭＢ）１０^-6ＭまたはＬ−ニ トロアルキニン（Ｌ−ＮＬＡ）１０^-6Ｍといっしよに加えて血管弛緩作用を観察 した。フェニルエプリン１０^-6Ｍによる収縮度を１００％にし、これを基準にジ ンセノサイドＲｇ₃又はＲｇ₅による弛緩度を％で表した。 ２、実験結果： 第１図及び４図に図示したようにジンセノサイドＲｇ₃及びＲｇ₅は各々内皮に 存在する血管を濃度依存的に弛緩させた。ところが、内皮を除去した血管に対し ては作用を表さず、一酸化窒素合成酵素の阻害剤であるＬ−ニトロアルキニン （Ｌ−ＮＬＡ）及び可溶性グアニルレートサイクラゼ抑制剤であるメチレンブル ー（ＭＢ）によってジンセノサイドＲｇ₃又はＲｇ₅の血管弛緩作用は意味深長に 抑制された。 このような結果からジンセノサイドＲｇ₃及びＲｇ₅は、内皮細胞のある血管で のみ、弛緩作用を表すことがわかる。従って、ジンセノサイドＲｇ₃及びＲｇ₅は 内皮細胞まで破壊する他のサポニン成分とは異なって溶血作用や魚毒性などの副 作用を表さない安全な医薬成分であることがわかる。実験例２：加工サポニン分画の血管弛緩作用 １．実験方法： 前述の実施例７で収得した加工パナクスサジオル系サポニン分画に対して実験 例１の実験方法と同様な方法で血管弛緩作用を測定した。 ２、実験結果： 第２図に図示したように加工パナクスサジオル系サポニン分画は内皮が存在す る血管を濃度依存的に弛緩させた。ところが、内皮を除去した血管に対しては作 用を表さなく、一酸化窒素合成酵素の阻害剤であるニトロ−Ｌ−アルキニン及び 可溶性グアニルレートサイクラゼ抑制剤であるメチレンブルー（ＭＢ）によって 皿管弛緩作用は顕著に抑制された。 このような結果から実施例７で収得された加工パナクスサジオル系サポニン分 画は内皮細胞のある血管でのみ、血管弛緩作用を表すことがわかる。従って、加 工パナクスサジオル系サポニン分画は内皮細胞まで破壊する他のサポニン成分と は異なって溶血作用や魚毒性などの副作用を表さない安全な医薬成分であること がわかる。実験例３：ジンセノサイドＲｇ₃の細胞毒性実験 １．実験方法： Ｍ１９９培地で培養したＨＵＶＥＣ（ヒトの 帯静脈内皮細胞）を細胞２００ ００個／１８０μｌの濃度になるように生理食塩水に懸濁させて細胞懸濁液をつ くり、９６−ウェルプレートにウェル当り１８０μｌずつ加えて溶媒であるジメ チルスルホキサイドとジメチルスルホキサイドに溶解されたＲｇ₃を、２０μｌ 加えた後、３７℃、５％二酸化炭素の細胞培養器で４８時間培養した。続いてリ ン酸塩緩衝液に溶解させたＭＴＴ［３−（４、５−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−ｔｈｉａ ｚｏｌ−２′−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｂ ｒｏｍｉｄｅ］溶液（２ｍｇ／ｍｌ）を、５０μｌずつ加えて再び４時間上記と 同様な条件下で培養した後、上澄液を除去してジメチルスルホキサイドを２００ μｌ加えて５４０ｎｍで吸光度を測定した。吸光度の値を細胞数に換算して溶媒 であるジメチルスルホキサイドの場合とＲｇ₃の場合に細胞成長を５０％抑制さ せる濃度のＩＣ₅₀の値を求めて細胞毒性の指標として用いることができる。 ２．実験結果： ジメチルスルホキサイドの場合（対照郡）は０．６％から細胞毒性を表し始め て、６％では１００％細胞成長を抑制した。従って、溶媒の細胞毒性はその容量 によって左右され、ＩＣ₅₀は１８．４μｇ／ｍｌである。Ｒｇ₃は１〜１００μ ｇ／ｍｌ濃度範囲でジメチルスルホキサイドと同様な細胞毒性を表した。しかし 、Ｒｇ₃のＩＣ₅₀は２６．７μｇ／ｍｌで、これは溶媒の値より却ってやや高い 値を表し、Ｒｇ₃が溶媒よりも更に低い細胞毒性を有する。即ち、Ｒｇ₃投与群は 対照群より細胞の生存率が更に高く、却って細胞成長の促進効果があるものと示 れた（第３図）。実験例４：ジンセノサイドＲｇ₅の細胞毒性実験 １．実験方法： Ｍ１９９培地で培養したＨＵＶＥＣ（ヒトの臍帯静脈内皮細胞）を細胞２００ ００個／１８０μ１の濃度になるように生理食塩水に懸濁させて細胞懸濁液をつ くり、９６−ウェルプレートにウェル当り１８０μｌずつ加えて溶媒である精製 水と精製水に溶解されたＲｇ₅を２０μｌ加えた後、３７℃、５％二酸化炭素の 細胞培養器で４８時間培養した。続いて人蔘塩緩衝液に溶解させたＭＴＴ［３− （４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−ｔｈｉａｚｏｌ−２′−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐ ｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ］溶液（２ｍｇ／ｍｌ）を ５０μｌずつ加えて、再び４時間上記と同様な条件下で培養した後、上澄液を除 去してジメチルスルホキサイドを２００μｌ加えて５４０ｎｍで吸光度を測定し た。 ２．実験結果： 第５図に表したように、ジンセノサイドＲｇ₅投与群は、対照群に比べて統計 的な有意性はなかったが、対照群に比して細胞成長が更に活発だった。従って、 ジンセノサイドＲｇ₅は細胞に対する毒性のないことがわかる。組成物例 以下の組成物の例で、活性成分として用いられたＲｇ₃は、他の活性成分であ るＲｇ₅、Ｒｇ₃及びＲｇ₅によって代替されることができ、Ｒｇ₃を含有する分画 はＲｇ₅、Ｒｇ₃及びＲｇ₅を含有する分画によって代替されることができる。組成例１ 上記の処方によって各成分を均一に混合した後、打錠機で圧縮成形して１錠５ ００ｍｇの錠剤を製造した。この錠剤１錠には実施例１で収得した分画５０ｍｇ が含有されている。成人は１日３〜１０錠を数回に分けて服用する。組成例２ 上記の処方によって結晶性セルロース、１０％ヒドロキシプロピルセルロース エタノール溶液実施例５で収得した分画を均一に混合して通常の方法によって顆 粒器を用いて乾燥させて粉砕した後、カルボキシメチルセルロースカルシウム及 びマグネシウムステアレートを混合し、打錠機で圧縮成形して１錠５００ｍｇの 錠剤を製造した。この錠剤１錠には実施例５で収得した分画５０ｍｇが含有され ている。成人は１日３〜１０錠を数回に分けて服用する。組成例３ 上記の処方によつて実施例８で収得したＲｇ₃をエタノール及び大豆リン脂質 に溶解させてここに注射用蒸留水とグリセリンの溶液を加えて乳化させて注射剤 を製造した。組成例４ 上記の処方によって成分〜を成分に溶解させて液剤を製造した。この液 剤１００ｍｌは実施例１で得た分画２００ｍｇを含有する。組成例５ 上記の処方によってすべての成分らを均一に混合して通常の方法によって顆粒 器を用いて顆粒化し、充填器に充填してカフプセル当り５００ｍｇのカプセル剤 を製造した。このカプセル剤１カプセルにはＲｇ₃５０ｍｇが含有されている。 成人は１日３〜１０錠を数回に分けて服用する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，Ｉ Ｌ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 キム ナク ドゥー 大韓民国ソウル市ドンジャッグ―シンデバ ンドン565―21 シンデバン２チャアパー ト101―1101 (72)発明者 パク ジョン イル 大韓民国ソウル市カンナムグ―イルウォン ボンドンハンソルビラージ301―208 (72)発明者 キム ジョン ムン 大韓民国ソウル市ソンパグ―チャムシル２ ドンジュゴンアパート229―313 (72)発明者 カン スー ヨン 大韓民国ソウル市カナッグ―シンリム２ド ン120―２ (72)発明者 キム ワン ユー 大韓民国ソウル市ソンパグ―カラクドンカ ラクシヨンアパート93―306

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．活性成分としてジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を含有する血管弛緩 剤。 ２．活性成分としてジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅が、純粋なＲｇ₃及び ／又はＲｇ₅であるか、またはＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を１０％以上含有する人蔘 抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の血管弛緩剤。 ３．薬剤学的に許される担体といっしよに単位投与形に製剤化されることを特徴 とする請求項１に記載の血管弛緩剤の組成物。 ４．単位投与形の薬剤学的な剤形が錠剤、硬質または軟質カプセル剤、顆粒剤、 液剤、懸濁液、注射用溶液または懸濁液であることを特徴とする請求項３に記載 の血管弛緩剤。 ５．単位投与形がジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を１０〜５００ｍｇ含有 するように製剤化されることを特徴とする請求項４に記載の血管弛緩剤の組成物 。 ６．パナクス属植物を１１０〜１８０℃の温度で０．５〜２０時間加熱処理し、 収得した加工人蔘を有機溶媒で抽出した後、抽出物をクロマトグラフィー処理し てジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を分離収得する段階を含むことを特徴と するジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅の製造方法。 ７．パナクス属植物を有機溶媒で抽出し、抽出物を１１０〜１８０℃で０．５〜 ２０時間加熱処理した後、クロマトグラフィー処理して、ジンセノサイドＲｇ₃ 及び／又はＲｇ₅を分離収得する段階を含むことを特徴とするジンセノサイドＲ ｇ₃及び／又はＲｇ₅の製造方法。 ８．パナクス属植物を有機溶媒で抽出し、抽出物を５０〜１００℃で酸にて処理 した後、クロマトグラフィー処理して、ジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅を 分離収得する段階を含むことを特徴とするジンセノサイドＲｇ₃及び／又はＲｇ₅ の製造方法。 ９．パナクス展植物を有機溶媒で抽出し、パナクスサジオル系分画を収得してこ の分画を１１０〜１８０℃で０．５〜２０時間加熱処理することを特徴とするパ ナクスサジオル系サポニンの製造方法。