ITMI970362A1 - Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e' incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e - Google Patents

Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e' incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e Download PDF

Info

Publication number
ITMI970362A1
ITMI970362A1 IT97MI000362A ITMI970362A ITMI970362A1 IT MI970362 A1 ITMI970362 A1 IT MI970362A1 IT 97MI000362 A IT97MI000362 A IT 97MI000362A IT MI970362 A ITMI970362 A IT MI970362A IT MI970362 A1 ITMI970362 A1 IT MI970362A1
Authority
IT
Italy
Prior art keywords
liposomes
trehalose
temperature
water
lyophilized composition
Prior art date
Application number
IT97MI000362A
Other languages
English (en)
Inventor
Giovanni Cavallo
Leonardo Marchitto
Original Assignee
Angelini Ricerche Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to IT97MI000362A priority Critical patent/IT1289938B1/it
Application filed by Angelini Ricerche Spa filed Critical Angelini Ricerche Spa
Priority to SK1110-99A priority patent/SK282931B6/sk
Priority to KR10-1999-7007538A priority patent/KR100496802B1/ko
Priority to PCT/EP1998/000817 priority patent/WO1998036736A1/en
Priority to PL98335207A priority patent/PL190628B1/pl
Priority to JP53622898A priority patent/JP4290767B2/ja
Priority to DE69828394T priority patent/DE69828394T2/de
Priority to DK98910659T priority patent/DK0981332T3/da
Priority to CN98802737A priority patent/CN1089581C/zh
Priority to EA199900751A priority patent/EA001637B1/ru
Priority to US09/367,715 priority patent/US6319517B1/en
Priority to CZ19992925A priority patent/CZ295998B6/cs
Priority to AU64969/98A priority patent/AU744115B2/en
Priority to TR1999/02025T priority patent/TR199902025T2/xx
Priority to UA99095150A priority patent/UA70296A/uk
Priority to IL13132798A priority patent/IL131327A/en
Priority to PT98910659T priority patent/PT981332E/pt
Priority to CA002288958A priority patent/CA2288958C/en
Priority to GEAP19984991A priority patent/GEP20022734B/en
Priority to SI9830738T priority patent/SI0981332T1/xx
Priority to AT98910659T priority patent/ATE285754T1/de
Priority to HU0001464A priority patent/HU225593B1/hu
Priority to EP98910659A priority patent/EP0981332B1/en
Priority to ES98910659T priority patent/ES2235320T3/es
Priority to ZA981352A priority patent/ZA981352B/xx
Priority to ARP980100754A priority patent/AR011681A1/es
Publication of ITMI970362A1 publication Critical patent/ITMI970362A1/it
Publication of IT1289938B1 publication Critical patent/IT1289938B1/it
Application granted granted Critical
Priority to BG103738A priority patent/BG64580B1/bg
Priority to HK00105485A priority patent/HK1026148A1/xx

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

DESCRIZIONE
Della Domanda di Brevetto per Invenzione Industriale dal Titolo:
“Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui è incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e procedimento per prepararla”
La presente invenzione riguarda una preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui è incapsulato un principio biologicamente attivo altamente insolubile in acqua ed un procedimento per prepararla.
Più in particolare, la presente invenzione riguarda una preparazione farmaceutica che comprende liposomi liofilizzati in cui è incapsulato un principio biologicamente attivo altamente insolubile in acqua ed è stabile nel tempo. Nel corso della présente descrizione e delle rivendicazioni, il termine “altamente insolubile in acqua” è usato per designare tutti quei composti che hanno una solubilità in acqua < 0,01 % (p/v).
E’ noto che l’uso di liposomi in terapia è stato rallentato dalle difficoltà incontrate per ottenere preparati farmaceutici aventi stabilità adeguata sia durante la liofilizzazione che nel tempo. Tali difficoltà consistono soprattutto nella preparazione di liposomi che non si rompano e non si impacchino. Detto in altri termini, i liposomi dovrebbero rimanere integri e separati gli uni dagli altri.
L'integrità dei liposomi è poi particolarmente sentita nel caso in cui il principio attivo sia altamente insolubile in acqua. Infatti, la rottura dei liposomi durante la liofilizzazione e/o durante la conservazione non impedisce ai principi attivi solubili in acqua di andare in soluzione quando la soluzione acquosa liposomiale viene ricostituita prima della somministrazione al paziente per aggiunta di soluzione fisiologica. Invece, nel caso di rottura di liposomi contenenti principi attivi altamente insolubili in acqua, la ricostituzione del liofilizzato dà una soluzione che contiene meno principio attivo di quello richiesto. Tale differenza fra quantità teorica e quantità effettiva di principio attivo in soluzione è tanto maggiore quanto maggiore è la quantità di liposomi che si è rotta.
La liofilizzazione di liposomi contenenti un principio biologicamente attivo solubile in acqua è descritta da US-A-4 857 319. Questo documento descrive la liofilizzazione di liposomi aventi, preferibilmente, una dimensione media di circa 50-100 nm, con l'aggiunta, come agente conservante, di un disaccaride solo all’interno (con il contenuto liposomiale incapsulato), o solo all’esterno, o sia all'interno che all'esterno. Il rapporto in peso disaccaride/lipidi varia fra 0,1:1 e 4:1. Preferibilmente, il disaccaride è il trealosio. La fase di congelamento viene effettuata alla temperatura dell’azoto liquido (-195,8°C)
Nel suddetto brevetto, le caratteristiche di stabilità durante la liofilizzazione sono state valutate mediante misure di ritenzione del principio attivo incapsulato nei liposomi dopo aver ricostituito il liofilizzato mediante ri-idratazione.
La tabella 2 del suddetto brevetto mostra che si ha un’alta ritenzione (99-100%) solo quando il rapporto trealosio/lipidi è maggiore di 1,76 ed il trealosio è presente sia all'interno che all’esterno dei liposomi. Quando detto rapporto è pari a 0,11 e a 0,19, la ritenzione è pari al 22 e, rispettivamente, al 49% anche se il trealosio è presente sia all’interno che all’esterno dei liposomi. Invece, quando il trealosio è presente solo all'esterno, la quantità di principio attivo trattenuta si riduce drasticamente anche per quantità di trealosio molto elevate. Infatti, con un rapporto trealosio/lipidi pari a 3,9 la quantità trattenuta è solo del 26%.
Tuttavia, i suddetti risultati non sono riproducibili quando il principio biologicamente attivo è altamente insolubile in acqua. Infatti, quando il trealosio viene aggiunto durante la preparazione dei liposomi per incapsularlo all'interno delle vescicole lipidiche, si ottiene una sospensione disomogenea e non estrudibile (Preparazioni di Confronto 1 e 2).
E' stato ora sorprendentemente trovato che liposomi contenenti un principio biologicamente attivo altamente insolubile in acqua rimangono sostanzialmente integri durante la liofilizzazione quando il trealosio viene aggiunto in piccole quantità ai liposomi solo prima della liofilizzazione e quest’ultima viene effettuata realizzando la fase di congelamento ad una temperatura compresa fra - 5°e - 70° C.
Costituisce, quindi, un oggetto della presente invenzione una composizione liofilizzata comprendente trealosio e liposomi lipidici in cui è stato incorporato un principio biologicamente attivo, caratterizzata dal fatto che il principio biologicamente attivo è altamente insolubile in acqua, che il rapporto in peso trealosio/lipidi è ≤ 1,5 e che tutto il trealosio è stato aggiunto all’esterno dei liposomi già formati prima della liofilizzazione.
Dopo ricostituzione per ri-idratazione, detta composizione trattiene in soluzione più del 95% di principio biologicamente attivo altamente insolubile in acqua (Esempi 1, 2 e 3).
Tipici esempi di principi biologicamente attivi altamente insolubili in acqua sono: lonidamina, melatonina, ciclosporina A e bindarit.
I lipidi della composizione liposomiale da sottoporre al procedimento di liofilizzazione secondo la presente invenzione sono preferibilmente scelti dal gruppo comprendente fosfogliceridi, gliceridi, digliceridì, trigliceridi, fosfolipidi, galattosil e glucosillipidi, colesterolo ed i suoi derivati, sfingolipidi e loro miscele. Preferìbilmente i lipidi sono dei fosfolipidi. A sua volta, il rapporto in peso trealosio/lipidi è preferìbilmente compreso fra 1:2 e 1:1.
La dimensione media dei liposomi può essere compresa fra 50 e 250 nm. Preferibilmente, essa è compresa fra 50 e 100 nm.
Un secondo oggetto della presente invenzione è costituito da un procedimento di liofilizzazione caratterizzato dal fatto che:
1) si aggiungono da 0,2 a 1,5 parti in peso di trealosio per ogni parte in peso di lipidi di una composizione liposomiale acquosa in cui la dimensione media dei liposomi è compresa fra 50 e 250 nm e detti liposomi comprendono un principio biologicamente attivo altamente insolubile in acqua; 2) si raffredda detta composizione, mediante il piatto raffreddante del liofilizzatore, ad una temperatura compresa fra - 5° e - 70°C, con una velocità di raffreddamento compresa fra 0,5 e 2°C/min.;
3) raggiunta la temperatura di congelamento prestabilita, si mantiene detta composizione a detta temperatura per un tempo compreso fra 2 e 5 ore; 4) si applica un vuoto compreso fra 5 x 10<'1 >e 8 x 10<‘2 >millibar, lasciando la temperatura del piatto raffreddante alla temperatura di raffreddamento definita nel punto 2) per un perìodo di tempo compreso fra 2 e 5 ore;
5) si porta la temperatura del piatto raffreddante a - 15°C e la si mantiene tale fino a completa asportazione dell’acqua.
Condizioni operative preferite sono:
fase 2
temperatura di congelamento: -20/-30°C,
velocità di raffreddamento: 0,77°C/min.,
fase 3
tempo: 3 ore,
fase 4
vuoto: 6 x 10<'2 >millibar,
fase 5
a) Quando la temperatura di congelamento (fase 2) è inferiore a -15°C, la temperatura del piatto raffreddante viene aumentata fino a -15°C con una velocità compresa fra 0,5 e 2°C e si liofilizza per 20 ore; quindi, si porta la temperatura del piatto raffreddante a -10°C e, dopo un ora, a 5°C e si liofilizza per 16 ore.
b) Quando la temperatura di congelamento (fase 2) è maggiore o uguale a -15°C, si continua la liofilizzazione per 20 ore e poi si porta la temperatura del piatto raffreddante a 5°C e si liofilizza per 16 ore.
Una composizione liposomiale particolarmente preferita secondo la presente invenzione comprende:
Componente % (p/p)
fosfatidilcolina 94
I isofosfatid i I co lina 3
N-acil-etanolammina 1
fosfatidiletanolammina 0,1
trigliceridi 1
acidi grassi liberi 0,75
DL -oc-tocoferolo 0,15
Tipicamente la composizione la composizione liposomiale farmaceutica acquosa della presente invenzione viene preparata:
a) disperdendo un principio biologicamente attivo altamente insolubile in acqua in lipidi ad una temperatura compresa tra 20 e 30°C;
b) sospendendo detta dispersione in una fase acquosa;
c) facendo riposare detta sospensione a temperatura ambiente per un periodo di tempo compreso tra 0 e 48 ore;
d) riscaldando a 30-75°C per 10-40 minuti;
e) congelando a -150/-200°C;
f) ripetendo le fasi d) ed e) per almeno 2 volte non più di 8 volte,
g) filtrando attraverso una membrana filtrante con pori del diametro di 500-1000 nm;
h) estrudendo attraverso una membrana con pori del diametro di 50-400 nm;
e contemporanea
i) eliminazione del principio attivo non intrappolato.
La durata della fase c) dipende dalla quantità di principio attivo altamente insolubile in acqua che si desidera intrappolare nei liposomi. Il tecnico del ramo non incontrerà quindi alcuna difficoltà nel determinare, tramite poche e semplici sperimentazioni routinarie, qual’è il tempo adatto per ogni tipo di principio attivo e di composizione liposomiale.
Preferibilmente la fase acquosa è costituita da soluzione acquosa di cloruro di sodio allo 0,05 - 0,9% (p/v). Tipicamente la quantità di lipide impiegata è di 0,01 - 0,4 parti in peso per ogni parte in peso di soluzione acquosa. A sua volta la quantità di principio attivo è generalmente compresa tra 0,01 e 0,3 parti in peso per ogni parte in peso di lipide.
Generalmente, l’estrusione viene condotta utilizzando, come gas di estrusione, aria compressa o un gas inerte, scelto dal gruppo comprendente azoto, elio ed argon. Preferibilmente il gas inerte è l’elio. Nella fase di estrusione, la pressione è preferibilmente compresa tra 500 e 5500 kPa e la temperatura è preferibilmente compresa 20 e 75°C, ancor più preferibilmente tra 40 e 65°C. Tipici esempi di adatti estrusori sono quelli del tipo Lipex Biomembranes Extruder Thermobarrel oppure del tipo Emulsiflex CC Avestin dotati di membrane di policarbonato Costar™ con pori di grandezza compresa tra 50 e 600 nm.
Operando come descritto più sopra si ottengono composizioni liposomiali acquose contenenti circa 8 mg/ml di melatonina, 3,8 mg/ml di lonidamina, 1 mg/ml di ciclosporina A e 4 mg/ml di bindarit contro una solubilità in acqua di 3x10<'3 >mg/ml (lonidamina) , 1x10<'1 >mg/ml (bindarit) e, praticamente, l’assoluta insolubilità della melatonina (G.S. Shida et al. "J. Pineal Res.” 1994, 16, 198-201) e della ciclosporina A pnsoluble in water”, monografia sulla ciclosporina A in “Analytical Profiles of Drug Substances", 16 , 163, (1987)].
Valgano i seguenti esempi ad illustrare la presente invenzione senza, tuttavia, limitarla.
PREPARAZIONE I
Una composizione liposomiale contenente un principio biologicamente attivo altamente insolubile in acqua è stata preparata come descritto qui di seguito.
100 mg di melatonina sono stati dispersi in 1 g di fosfolipide a 30°C per 10 minuti mediante un omogeneizzatore tipo Ultraturrax™. Subito dopo, tale dispersione è stata sospesa in 10 mi di soluzione acquosa di cloruro di sodio allo 0,9% (p/v) mediante detto omogeneizzatore e quindi riscaldata a bagnomaria a 55°C per 20 minuti.
La sospensione così ottenuta è stata sottoposta al seguente ciclo di raffreddamento e riscaldamento:
- raffreddamento in azoto liquido per 1 minuto,
- riscaldamento a 55°C fino a completa fluidificazione dei fosfolipidi.
Tale ciclo è stato ripetuto per 6 volte.
La sospensione è stata passata due volte su un filtro da 0,6 μηη con l'apparecchio Lipex Biomembranes.
E' stata cosi ottenuta una sospensione di “Multilamellar Large Vescicles” (MLV) che è stata sottoposta a 6 cicli di estrusione continuata mediante un estrusore del tipo Lipex Biomembranes Extruder Thermobarrel da 10 mi con filtri di policarbonato Costar™ da 0,1 pm a 55°C usando, come gas di estrusione, elio ad una pressione compresa tra i 1000 e 4800 kPa.
PREPARAZIONE II
Si è operato come descritto per la Preparazione I utilizzando 2 g di fosfolipidi e 50 mg di lonidamina in luogo di 1 g di fosfolipidi e 100 mg di melatonina.
PREPARAZIONE III
Si è operato come descritto per la Preparazione I utilizzando 2 g di fosfolipidi e 200 mg di melatonina in luogo di 1 g di fosfolipidi e 100 mg di melatonina.
PREPARAZIONE IV
Si è operato come descritto per la Preparazione II solo che l’estrusione è stata effettuata attraverso una membrana di policarbonato 0,2 μιπ anziché 0,1 μηη.
PREPARAZIONE V
30 mg di ciclosporina A sono stati dispersi in 2 g di fosfolipide a 30°C per 10 minuti mediante un omogeinizzatore tipo Ultraturrax™. Subito dopo, tale dispersione è stata sospesa in una soluzione acquosa di cloruro di sodio allo 0,9% (p/v) mediante detto omogeinizzatore e lasciata a riposo a temperatura ambiente per 24 ore. Successivamente la sospensione ottenuta è stata riscaldata a bagno-maria a 65°C per 20 minuti.
La sospensione così ottenuta è stata sottoposta al seguente ciclo di raffreddamento e riscaldamento:
- raffreddamento in azoto liquido per 1 minuto,
- riscaldamento a 65°C fino a completa fluidificazione dei fosfolipidi.
Tale ciclo è stato ripetuto per 6 volte.
La sospensione è stata passata due volte su un filtro da 0,6 pm con l’apparecchio Lipex Biomembranes.
E’ stata così ottenuta una sospensione di “Multilamellar Large Vescicles" (MLV) che è stata sottoposta a 6 cicli di estrusione continuata mediante un estrusore del tipo Lipex Biomembranes Extruder Thermobarrel da 10 mi con filtri di policarbonato Costar da 0,1 μιη a 65°C usando, come gas di estrusione, elio ad una pressione compresa tra i 1000 e 4800 kPa.
PREPARAZIONE VI
Si è operato come descritto per la Preparazione I utilizzando 2 g di fosfolipidi e 50 mg di bindarit in luogo di 1g di fosfolipidi e 100 mg di melatonina.
PREPARAZIONE DI CONFRONTO 1
Preparazione 1A
100 mg di melatonina ed 1 g di trealosio sono stati dispersi in 1 g di fosfolipidi a 30°C per 10 minuti mediante un omogeneizzatore tipo Ultraturrax™. Subito dopo, tale dispersione è stata sospesa in 10 mi di soluzione acquosa di cloruro di sodio allo 0,9% (p/v) mediante detto omogeneizzatore e quindi riscaldati a bagno-maria a 55°C per 20 minuti.
La sospensione così ottenuta è stata sottoposta al seguente ciclo di raffreddamento e riscaldamento:
- raffreddamento in azoto liquido per 1 minuto,
- riscaldamento a 55°C fino a completa fluidificazione dei fosfolipidi.
Tale ciclo è stato ripetuto per 6 volte.
La sospensione è stata passata due volte su un filtro da 0,6 μιη con l’apparecchio Lipex Biomembranes.
E’ stata così ottenuta una massa molto densa. Il tentativo di estruderla mediante un estrusore del tipo Lipex Biomembranes Extruder Thermobarrel da 10 mi con filtri di policarbonato Costar da 0,1 μηπ a 55°C usando, come gas di estrusione, elio ad una pressione compresa tra i 1000 e 4800 kPa, non ha avuto successo.
Preparazione 1B
Si è operato come descritto per la precedente Preparazione 1A solo che è stata omessa la melatonina. E' stata ottenuta una sospensione di “Multilamellar Large Vescicles” (MLV) che è risultata essere perfettamente estrudibile mediante un estrusore del tipo Lipex Biomembranes Extruder Thermobarrel da 10 mi con filtri di policarbonato Costar da 0,1 pm a 55°C usando, come gas di estrusione, elio ad una pressione compresa tra i 1000 e 4800 kPa.
PREPARAZIONE DI CONFRONTO 2
Preparazione 2A
Si è operato come descritto a proposito della Preparazione di Confronto 1A solo che sono stati usati 2 g di fosfolipidi invece di 1.
Anche in questo caso è stata ottenuta una massa molto densa e non estrudibile.
Preparazione 2B
Si è operato come descritto per la precedente Preparazione di Confronto 1 B solo che sono stati usati 2 g di fosfolipidi invece di 1.
Anche in questo caso è stata ottenuta una sospensione di MLV perfettamente estrudibile.
ESEMPIO 1
La Preparazione II è stata suddivisa in quote da 1 mi e ad ogni quota è stato aggiunto del trealosio secondo i rapporti in peso trealosio/lipidi indicati in Tabella 1/1.
La liofilizzazione è stata condotta in un liofilizzatore a piatto come segue: 1) raffreddamento fino a -25°C alla velocità di 0,77°C/min;
2) mantenimento a tale temperatura {- 25°C) per 3 ore,
3) applicazione del vuoto (6 x 10<'2 >millibar) e mantenimento a tale temperatura (-25°C) per 2 ore;
4) riscaldamento a - 15 °C per 20 ore sotto un vuoto di 6 x 10<'2 >millibar;
5) riscaldamento a - 10 °C per 2 ore sotto un vuoto di 6 x 10<'2 >millibar;
6) riscaldamento a 5 °C per 20 ore sotto un vuoto di 6 x 10<'2 >millibar;
7) chiusura del vuoto;
8) immissione aria.
Il liofilizzato (1 mi) è stato ri-idratato con 1 mi di acqua distillata e tenuto a temperatura ambiente per 30 minuti allo scopo di permettere una efficace ricostruzione dei liposomi.
0,5 mi di detta soluzione è stata ulteriormente diluita con 10 mi di soluzione fisiologica per misurare la dimensione media dei liposomi con l'apparecchiatura NICOMP 370.
La Tabella 1/1 mostra i risultati ottenuti.
TABELLA 1/1
Dalla Tabella 1/1 si può notare che l’assenza di trealosio comporta una certo grado di fusione dei liposomi, evidenziato dall’aumento della loro dimensione media. Sorprendentemente, anche l’aumento della quantità di trealosio (trealosio/lipidi 2:1) provoca un certo grado di fusione con conseguente aumento della dimensione media.
Risultati analoghi sono stati ottenuti anche con la Preparazione IV.
Su un certo numero di campioni, preparati di fresco come descritto più sopra, sono stati determinati la dimensione media dei liposomi ed il titolo di lonidamina. Successivamente, essi sono stati riposti in frigorifero a 5°C e prelevati ad intervalli di tempo, ri-idratati per determinare il titolo del principio attivo e la dimensione media dei liposomi. I risultati così ottenuti sono riportati in Tabella 1/2.
TABELLA 1/2
R t t l i /li idi ( / ) 1 2
ESEMPIO 2
La Preparazione III è stata liofilizzata come descritto nel precedente Esempio 1 e la determinazione della dimensione media dei liposomi prima e dopo la liofilizzazione (Tabella 2/1), e la determinazione della dimensione media dei liposomi e del titolo di melatonina nelle preparazioni fresche e in quelle conservate a 5°C, sono state effettuate come descritto nel suddetto Esempio (Tabella 2/2).
TABELLA 2/1
Risultati analoghi sono stati ottenuti anche con la Preparazione I.
TABELLA 2/2
ESEMPIO 3
La Preparazione VI è stata liofilizzata come descritto nel precedente Esempio 1 e la determinazione della dimensione media dei liposomi prima e dopo la liofilizzazione (Tabella 3/1), e la determinazione della dimensione media dei liposomi e del titolo di bindarit nelle preparazioni fresche e in quelle conservate a 5°C, sono state effettuate come descritto nel suddetto Esempio (Tabella 3/2).
TABELLA 3/1
TABELLA 3/2
ESEMPIO DI CONFRONTO 1
La Preparazione II è stata suddivisa in quote da 1 mi e ad ogni quota è stato aggiunto del trealosio secondo i rapporti in peso trealosio/lipidi indicati nella Tabella di Confronto 1.
La Preparazione è stata poi congelata alla temperatura dell’azoto liquido (-195,8°C) e liofilizzata per 20 ore, senza controllo esterno della temperatura.
Il liofilizzato (1 mi) è stato ri-idratato con 1 mi di acqua distillata e tenuto a temperatura ambiente per 2 ore.
0,5 mi di detta soluzione usata ulteriormente diluita con 10 mi di soluzione fisiologica per misurare la dimensione media dei liposomi con l’apparecchiatura NICOMP 370.
I risultati ottenuti sono illustrati nella seguente Tabella di Confronto 1.
TABELLA DI CONFRONTO 1
Dalla Tabella di Confronto 1 si può notare che quando la liofilizzazione viene condotta alla temperatura dell'azoto liquido, sia in assenza di trealosio sia in presenza di trealosio nei rapporti indicati nella Tabella più sopra, si verifica un certo grado di fusione dei liposomi evidenziato dall'aumento della loro dimensione media. Inoltre, i suddetti dati indicano che, quando la liofilizzazione viene condotta alla temperatura dell’azoto liquido, l'andamento della liofilizzazione stessa (per preparati di uguale composizione) non riproduce sempre gli stessi risultati.

Claims (12)

  1. RIVENDICAZIONI 1. Una composizione liofilizzata comprendente trealosio e liposomi lipidici in cui è stato incorporato un principio biologicamente attivo, caratterizzata dal fatto che il principio biologicamente attivo è altamente insolubile in acqua, il rapporto in peso trealosio/lipidi è < 1,5, e tutto il trealosio è stato aggiunto all’esterno dei liposomi già formati prima della liofilizzazione.
  2. 2. Una composizione liofilizzata secondo la rivendicazione 1, caratterizzata dal fatto che il principio biologicamente attivo altamente insolubile in acqua è scelto dal gruppo comprendente lonidamina, melatonina, ciclosporina A e bindarit.
  3. 3. Una composizione liofilizzata secondo la rivendicazione 1 o 2, caratterizzata dal fatto che i lipidi sono scelti dal gruppo comprendente fosfogliceridi, gliceridi, digliceridi, trigliceridi, fosfolipidi, galattosil e glucosillipidi, colesterolo ed i suoi derivati, sfingolipidi e loro miscele.
  4. 4. Una composizione liofilizzata secondo la rivendicazione 3, caratterizzata dal fatto che i lipidi sono fosfolipidi.
  5. 5. Una composizione liofilizzata secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 4, caratterizzata dal fatto che il rapporto in peso trealosio/lipidi è compreso fra 1:2 e 1:1.
  6. 6. Una composizione liofilizzata secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 5, caratterizzata dal fatto che la dimensione media dei liposomi è compresa fra 50 e 250 nm.
  7. 7. Una composizione liofilizzata secondo la rivendicazione 6, caratterizzata dal fatto che la dimensione media dei liposomi è compresa fra 50 e 100 nm.
  8. 8. Un procedimento per liofilizzare una composizione comprendente trealosio e liposomi lipidici in cui è stato incorporato un principio biologicamente attivo caratterizzato dal fatto che: a) si aggiungono da 0,2 a 1,5 parti in peso di trealosio per ogni parte in peso di lipidi di una composizione liposomiale acquosa in cui la dimensione media dei liposomi è compresa fra 50 e 250 nm e detti liposomi comprendono un principio biologicamente attivo altamente insolubile in acqua; b) si raffredda detta composizione, mediante il piatto raffreddante del liofilizzatore, ad una temperatura compresa fra - 5° e - 70°C con una velocità di raffreddamento compresa fra 0,5 e 2°C/min.; c) raggiunta la temperatura di congelamento prestabilita, si mantiene detta composizione a detta temperatura per un tempo compreso fra 2 e 5 ore; d) si applica un vuoto compreso fra 5 x 10<1 >e 8 x 10<‘2 >millibar, lasciando la temperatura del piatto raffreddante alla temperatura di raffreddamento definita nel punto b) per un periodo di tempo compreso fra 2 e 5 ore; e) si porta la temperatura del piatto raffreddante a - 15°C e la si mantiene tale fino a completa asportazione dell’acqua.
  9. 9. Un procedimento di liofilizzazione secondo la rivendicazione 8, caratterizzato dal fatto che, nella fase b), la temperatura di congelamento è compresa fra -20 e -30°C.
  10. 10. Un procedimento di liofilizzazione secondo la rivendicazione 8 o 9, caratterizzato dal fatto che, nella fase b), la velocità di raffreddamento è di 0,77°C/min.
  11. 11. Un procedimento di liofilizzazione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 8 a 10, caratterizzato dal fatto che, nella fase c), il tempo è di 3 ore.
  12. 12. Un procedimento di liofilizzazione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 8 a 11 , caratterizzato dal fatto che, nella fase d), il vuoto è di 6 x 10'2 millibar.
IT97MI000362A 1997-02-20 1997-02-20 Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e' incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e IT1289938B1 (it)

Priority Applications (28)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT97MI000362A IT1289938B1 (it) 1997-02-20 1997-02-20 Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e' incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e
PT98910659T PT981332E (pt) 1997-02-20 1998-02-12 Composicao farmaceutica compreendendo lipossomas liofilizados encapsulando um principio activo essencialmente insoluvel em agua e processo de preparacao desta composicao
KR10-1999-7007538A KR100496802B1 (ko) 1997-02-20 1998-02-12 물에 난용성인 활성성분이 캡슐화 되어 있는 동결 건조된 리포솜들을 함유하는 약학적 제제 및 그 제제의 제조공정
PL98335207A PL190628B1 (pl) 1997-02-20 1998-02-12 Liofilizowana kompozycja zawierająca trehalozę i lipidowe liposomy i sposób liofilizacji kompozycjizawierającej trehalozę i lipidowe liposomy
JP53622898A JP4290767B2 (ja) 1997-02-20 1998-02-12 非水溶性活性成分封入の凍結乾燥リポソームを含む医薬製剤およびその製造方法
DE69828394T DE69828394T2 (de) 1997-02-20 1998-02-12 Pharmazeutische Zusammensetzung mit lyophilisierten Liposomen welche einen unlöslichen aktiven Wirkstoff einschließen, Verfahren zu deren Herstellung
DK98910659T DK0981332T3 (da) 1997-02-20 1998-02-12 Farmaceutisk præparat omfattende frysetörrede liposomer, som indkapsler et aktivt stof, der er stærkt uoplöseligt i vand samt fremgangsmåde til fremstilling af præparatet
CN98802737A CN1089581C (zh) 1997-02-20 1998-02-12 含有包裹了极难溶于水的活性组分的冻干脂质体的药物制剂及其制备方法
EA199900751A EA001637B1 (ru) 1997-02-20 1998-02-12 Фармацевтическая композиция, содержащая лиофилизированные липосомы, включающие инкапсулированный активный ингредиент, практически не растворимый в воде, и способ получения композиции
US09/367,715 US6319517B1 (en) 1997-02-20 1998-02-12 Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing the said preparation
CZ19992925A CZ295998B6 (cs) 1997-02-20 1998-02-12 Farmaceutický přípravek obsahující lyofilizované liposomy enkapsulující aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě a způsob přípravy tohoto přípravku
AU64969/98A AU744115B2 (en) 1997-02-20 1998-02-12 Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing the said preparation
TR1999/02025T TR199902025T2 (xx) 1997-02-20 1998-02-12 Suda ileri derecede ��z�nmez olan bir etken maddeyi hapseden liyofilize lipozomlar i�eren farmas�tik preparasyon ve bu preparasyonu haz�rlamak i�in i�lem.
UA99095150A UA70296A (uk) 1997-02-20 1998-02-12 Фармацевтична композиція, що містить ліофілізовані ліпосоми, які енкапсулюють активний інгредієнт з високим ступенем нерозчинності у воді, і спосіб одержання вказаної композиції
SK1110-99A SK282931B6 (sk) 1997-02-20 1998-02-12 Lyofilizovaná zmes obsahujúca trehalózu a lipidové lipozómy, v ktorých je inkorporovaná biologicky aktívna substancia, a spôsob jej prípravy
PCT/EP1998/000817 WO1998036736A1 (en) 1997-02-20 1998-02-12 Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing the said preparation
CA002288958A CA2288958C (en) 1997-02-20 1998-02-12 Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing the said preparation
GEAP19984991A GEP20022734B (en) 1997-02-20 1998-02-12 Pharmaceutical Preparation Comprising Lyophilized Liposomes Encapsulating an Active Principle Which Is Highly Insoluble in Water, and the Process for Preparing the Said Preparation
SI9830738T SI0981332T1 (en) 1997-02-20 1998-02-12 Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing the said preparation
AT98910659T ATE285754T1 (de) 1997-02-20 1998-02-12 Pharmazeutische zusammensetzung mit lyophilisierten lyposomen welche einen unlöslichen aktiven wirkstoff einschliessen, verfahren zu dessen herstellung
HU0001464A HU225593B1 (en) 1997-02-20 1998-02-12 Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing the said preparation
EP98910659A EP0981332B1 (en) 1997-02-20 1998-02-12 Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing the said preparation
ES98910659T ES2235320T3 (es) 1997-02-20 1998-02-12 Composicion farmaceutica que comprende liposomas liofilizados que encapsulan un principio activo que es muy insoluble en agua, y procedimiento para la preparacion de dicha composicion.
IL13132798A IL131327A (en) 1997-02-20 1998-02-12 A pharmaceutical preparation containing liposomes that have undergone lyophilization that envelops an active ingredient that is soluble in water and the process for preparing this preparation
ZA981352A ZA981352B (en) 1997-02-20 1998-02-18 Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water and the process for preparing the said preparation
ARP980100754A AR011681A1 (es) 1997-02-20 1998-02-20 Una composicion liofilizada que comprende trehalosa y liposomas de lipidos en los cuales se ha incorporado un principio biologicamente activo y un procedimiento para la liofilizacion de una composicion que comprende trehalosa y liposomas de lipidos
BG103738A BG64580B1 (bg) 1997-02-20 1999-09-16 Фармацевтичен състав, съдържащ лиофилизирани липозоми, включващи трудно разтворимо във вода активно вещество и метод за получаването на този състав
HK00105485A HK1026148A1 (en) 1997-02-20 2000-09-01 Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing the said preparation.

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT97MI000362A IT1289938B1 (it) 1997-02-20 1997-02-20 Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e' incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e

Publications (2)

Publication Number Publication Date
ITMI970362A1 true ITMI970362A1 (it) 1998-08-20
IT1289938B1 IT1289938B1 (it) 1998-10-19

Family

ID=11376097

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
IT97MI000362A IT1289938B1 (it) 1997-02-20 1997-02-20 Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e' incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e

Country Status (26)

Country Link
US (1) US6319517B1 (it)
EP (1) EP0981332B1 (it)
JP (1) JP4290767B2 (it)
KR (1) KR100496802B1 (it)
CN (1) CN1089581C (it)
AR (1) AR011681A1 (it)
AT (1) ATE285754T1 (it)
AU (1) AU744115B2 (it)
BG (1) BG64580B1 (it)
CA (1) CA2288958C (it)
CZ (1) CZ295998B6 (it)
DE (1) DE69828394T2 (it)
EA (1) EA001637B1 (it)
ES (1) ES2235320T3 (it)
GE (1) GEP20022734B (it)
HK (1) HK1026148A1 (it)
HU (1) HU225593B1 (it)
IL (1) IL131327A (it)
IT (1) IT1289938B1 (it)
PL (1) PL190628B1 (it)
PT (1) PT981332E (it)
SK (1) SK282931B6 (it)
TR (1) TR199902025T2 (it)
UA (1) UA70296A (it)
WO (1) WO1998036736A1 (it)
ZA (1) ZA981352B (it)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE273516T1 (de) * 1999-06-23 2004-08-15 Cornell Res Foundation Inc Entwässerung/rehydratisierung von markierten liposomen auf einer prüfeinrichtung
US6576460B1 (en) 1999-10-28 2003-06-10 Cornell Research Foundation, Inc. Filtration-detection device and method of use
MXPA05007572A (es) * 2003-01-17 2005-11-17 Threshold Pharmaceuticals Inc Tratamiento de hiperplasia prostatica benigna.
AU2006235478B2 (en) 2005-04-12 2011-07-21 Elan Pharma International Limited Nanoparticulate and controlled release compositions comprising cyclosporine
WO2008036979A2 (en) * 2006-09-22 2008-03-27 Guilford F Timothy Topical application of melatonin directly or in liposomes for the amelioration of itching and histamine and non-histamine related inflammatory skin changes
CN101049504B (zh) * 2007-04-05 2010-05-19 广州立恩生物科技有限公司 一种脂质体药物载体及其制备方法
US9446147B2 (en) 2011-02-24 2016-09-20 The Ohio State University Membrane stabilizing compositions and methods
JP6133308B2 (ja) 2011-10-21 2017-05-24 セレーター ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 凍結乾燥リポソーム
US8999292B2 (en) 2012-05-01 2015-04-07 Translatum Medicus Inc. Methods for treating and diagnosing blinding eye diseases
US20150224221A1 (en) * 2012-08-31 2015-08-13 Chung-Ang University Industry-Academic Cooperation Foundation Method for preparing microspheres for emboli, and method for preparing microspheres to which drug-containing carrier is bound
US11344497B1 (en) 2017-12-08 2022-05-31 Quicksilver Scientific, Inc. Mitochondrial performance enhancement nanoemulsion
US10722465B1 (en) 2017-12-08 2020-07-28 Quicksilber Scientific, Inc. Transparent colloidal vitamin supplement
KR102649069B1 (ko) 2018-05-31 2024-03-19 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 안면 홍조 개선용 조성물
BR112020026629A2 (pt) 2018-06-27 2021-03-23 Breath Therapeutics Gmbh Composições farmacêuticas na forma liofilizada
KR102058961B1 (ko) 2018-07-28 2019-12-24 주식회사 엑소코바이오 엑소좀의 동결건조 방법
KR102163806B1 (ko) 2018-07-30 2020-10-07 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피지분비 감소용 조성물
EA202092892A1 (ru) 2018-12-04 2021-05-27 Брес Терапьютикс Гмбх Ингаляционные композиции, содержащие макроциклические иммуносупрессанты
US11291702B1 (en) 2019-04-15 2022-04-05 Quicksilver Scientific, Inc. Liver activation nanoemulsion, solid binding composition, and toxin excretion enhancement method
CA3144861A1 (en) 2019-06-25 2020-12-30 Translatum Medicus, Inc. Processes of making 2-((1-benzyl-1h-indazol-3-yl)methoxy)-2-methylpropanoic acid and its derivatives
CN111358955B (zh) * 2020-04-01 2023-05-02 重庆理工大学 一种用于治疗脂质代谢疾病的炎症靶向的宾达利纳米粒、制备方法及其应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1173360A (en) * 1979-06-22 1984-08-28 Jurg Schrank Pharmaceutical preparations
FR2542749B1 (fr) * 1983-03-18 1985-07-12 Beghin Say Sa Copolymere allyloligosaccharide-acrylique salifie, procede de preparation du copolymere et application comme super-absorbant
US4857319A (en) * 1985-01-11 1989-08-15 The Regents Of The University Of California Method for preserving liposomes
US4963362A (en) * 1987-08-07 1990-10-16 Regents Of The University Of Minnesota Freeze-dried liposome mixture containing cyclosporin
US5683714A (en) * 1991-04-19 1997-11-04 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Liposomal cyclosporin pharmaceutical formulation
US5817336A (en) * 1993-04-02 1998-10-06 Orion-Yhtyma Oy Composition containing selegiline
GB9320668D0 (en) * 1993-10-07 1993-11-24 Secr Defence Liposomes containing particulare materials
ES2115343T3 (es) * 1993-11-05 1998-06-16 Amgen Inc Metodo de preparacion de liposomas y encapsulacion de material.

Also Published As

Publication number Publication date
BG64580B1 (bg) 2005-08-31
PL190628B1 (pl) 2005-12-30
HU225593B1 (en) 2007-05-02
UA70296C2 (uk) 2004-10-15
HUP0001464A3 (en) 2001-12-28
CN1089581C (zh) 2002-08-28
CZ292599A3 (cs) 2000-01-12
BG103738A (en) 2000-05-31
AR011681A1 (es) 2000-08-30
CZ295998B6 (cs) 2005-12-14
KR20000075479A (ko) 2000-12-15
UA70296A (uk) 2004-10-15
DE69828394T2 (de) 2005-12-08
IL131327A0 (en) 2001-01-28
SK282931B6 (sk) 2003-01-09
EP0981332B1 (en) 2004-12-29
AU744115B2 (en) 2002-02-14
TR199902025T2 (xx) 1999-11-22
IT1289938B1 (it) 1998-10-19
HK1026148A1 (en) 2000-12-08
JP2001519776A (ja) 2001-10-23
ZA981352B (en) 1998-08-19
EA199900751A1 (ru) 2000-10-30
EA001637B1 (ru) 2001-06-25
AU6496998A (en) 1998-09-09
CA2288958A1 (en) 1998-08-27
ATE285754T1 (de) 2005-01-15
PL335207A1 (en) 2000-04-10
GEP20022734B (en) 2002-07-25
JP4290767B2 (ja) 2009-07-08
HUP0001464A2 (hu) 2000-10-28
DE69828394D1 (de) 2005-02-03
EP0981332A1 (en) 2000-03-01
ES2235320T3 (es) 2005-07-01
IL131327A (en) 2004-07-25
WO1998036736A1 (en) 1998-08-27
SK111099A3 (en) 2000-05-16
US6319517B1 (en) 2001-11-20
CA2288958C (en) 2007-08-21
PT981332E (pt) 2005-05-31
KR100496802B1 (ko) 2005-06-22
CN1248163A (zh) 2000-03-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ITMI970362A1 (it) Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e&#39; incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e
JP2022033892A (ja) 凍結乾燥リポソーム
JP2018502870A (ja) トラネキサム酸の多小胞リポソーム処方物
JPS60231609A (ja) リポソ−ム製剤
KR20010053006A (ko) 리포좀 제조방법
WO1992002244A1 (en) Accumulation of amino acids and peptides into liposomes
JPH11507628A (ja) 改良されたリポソーム製剤
HUT75465A (en) Process for enchancing the stability of liposomal suspensions containing hydrophilic active agents
Tardi et al. Erosion and controlled release properties of semisolid vesicular phospholipid dispersions
CA2285985C (en) A method for preparing aqueous liposomal compositions comprising an active ingredient which is highly insoluble in water
CA2279259A1 (en) Pain reducing parenteral liposome formulation
MXPA99007684A (en) Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing thesaid preparation

Legal Events

Date Code Title Description
0001 Granted