CZ295998B6 - Farmaceutický přípravek obsahující lyofilizované liposomy enkapsulující aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě a způsob přípravy tohoto přípravku - Google Patents
Farmaceutický přípravek obsahující lyofilizované liposomy enkapsulující aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě a způsob přípravy tohoto přípravku Download PDFInfo
- Publication number
- CZ295998B6 CZ295998B6 CZ19992925A CZ292599A CZ295998B6 CZ 295998 B6 CZ295998 B6 CZ 295998B6 CZ 19992925 A CZ19992925 A CZ 19992925A CZ 292599 A CZ292599 A CZ 292599A CZ 295998 B6 CZ295998 B6 CZ 295998B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- trehalose
- active substance
- liposomes
- water
- temperature
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Lyofilizovaná směs obsahující trehalózu a lipidové liposomy, v nichž je inkorporována biologicky aktivní substance vysoce nerozpustná ve vodě s rozpustností rovnou nebo menší než 0,01 % (hmotnost/objem), přičemž hmotnostní poměr trehalóza/lipid je roven nebo menší než 1,5 a veškerá trehalóza je vně již vytvořených liposomů přidána před lyofilizací. Dále je popsán způsob výroby této směsi.
Description
Farmaceutický přípravek obsahující lyofilizované liposomy enkapsulující aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě a způsob přípravy tohoto přípravku
Oblast techniky
Vynález se týká farmaceutického přípravku obsahujícího lyofilizované liposomy enkapsulující biologicky aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě, a způsobu přípravy tohoto přípravku.
Obzvláště se vynález týká farmaceutického přípravku obsahujícího lyofilizované liposomy enkapsulující biologicky aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě a stabilní v čase.
V předkládaném popisu a v patentových nárocích je termín „vysoce nerozpustný ve vodě“ používán k popisu všech těch sloučenin, jejichž rozpustnost ve vodě je rovna nebo menší než 0,01 % hmotnost/obj em).
Dosavadní stav techniky
Je známo, že používání liposomů v léčbě bylo ztěžováno obtížemi, které se vyskytují při získávání farmaceutických přípravků, které by byly dostatečně stabilní jak během lyofilizace, tak během času, uvedené obtíže spočívají především v přípravě liposomů, které ani nepraskají, ani se nespojují. Jinými slovy, liposomy by měly zůstat celé a vzájemně oddělené.
Strukturální integrita liposomů je také obzvláště důležitá v tom případě, kdy je aktivní substance vysoce nerozpustná ve vodě. Praskání liposomů během lyofilizace a/nebo během konzervace není ve skutečnosti pro aktivní substance rozpustné ve vodě překážkou pro vstup do roztoku, když je vodný liposomální roztok rekonstituován před podáváním pacientovi přidáním fyziologického roztoku. Na druhou stranu v případě praskání liposomů obsahujících aktivní substance, které jsou vysoce nerozpustné ve vodě, rekonstituce lyofilizátu vede ke vzniku roztoku obsahujícího méně aktivní substance, než je vyžadováno. Čím je větší množství prasklých liposomů, tím je větší rozdíl mezi teoretickým a skutečným množstvím aktivní substance vroztoku.
Způsob lyofilizace liposomů obsahujících ve vodě rozpustné biologicky aktivní substance je popsán v US 4 857 319. Tento dokument popisuje lyofilizaci liposomů nejlépe o průměrné velikosti okolo 50 až 100 nm s přídavkem, disacharidu jako konzervačního činidla pouze na vnitřní straně (spolu s enkapsulovaným obsahem liposomů) nebo pouze na vnější straně nebo na vnitřní i vnější straně. Poměr hmotnostní disacharid/lipid se pohybuje v rozmezí 0,1:1 až 4:1. Výhodně disacharidem je trehalóza. Fáze mrazení se provádí při teplotě kapalného dusíku (-195,8 °C).
Ve výše zmíněném patentu byly stabilní charakteristiky během lyofilizace vyhodnocování prostřednictvím měření zadržení aktivní substance enkapsulované v liposomech po rekonstituci lyofilizátu cestou rehydratace.
Tabulka 2 výše uvedeného patentu ukazuje, že zdržení je vysoké (99 až 100 %) pouze v příkladě, kdy poměr trehalóza/lipid je větší než 1,76 a kdy je trehalóza přítomna jak uvnitř, tak vně liposomů. Když je uvedený poměr roven 0,11 a 0,19, je zadržení rovno 22 % respektive 49 %, i když je trehalóza přítomna jak uvnitř, tak vně liposomů. Oproti tomu, když je trehalóza přítomna pouze vně, je množství zadržené aktivní substance drasticky sníženo, dokonce i když je použito velmi velké množství trehalózy. Pokud je poměr trehalóza/lipid 3,9, pak je ve skutečnosti množství zadržené substance pouze 26 %.
Výše zmíněné výsledky nejsou nicméně reprodukovatelné, je-li biologicky aktivní substance vysoce nerozpustná ve vodě. Když je trehalóza přidána během přípravy liposomů, aby byla
-1 CZ 295998 B6 enkapsulována uvnitř lipidových vesikul, ve skutečnosti se získá nehomogenní, neextrudovatelná suspenze (přípravky pro srovnání 1 a 2).
Podstata vynálezu
Nyní bylo překvapivě zjištěno, že liposomy obsahující biologicky aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě, zůstávající v průběhu lyofílizace v podstatě celé, pokud se k liposomům pouze před lyofilizací přidá trehalóza v malém množství a uvedená lyofílizace se provádí tak, že fáze mrazení probíhá při teplotách v rozmezí -5 až -70 °C.
Předmětem předloženého vynálezu je poskytnutí lyofílizované směsi obsahující trehalózu a lipidové liposomy, v nichž je zahrnuta biologicky aktivní substance, vyznačující se tím, že biologicky aktivní substance je vysoce nerozpustná ve vodě, hmotnostní poměr trehalóza/lipid je roven nebo menší než 1,5 a veškerá trehalóza byla před lyofilizací přidána vně již vytvořených liposomů.
Po rekonstituci rehydratací zadržuje uvedená směs v roztoku více než 95 % biologicky aktivní substance, která je vysoce nerozpustná ve vodě (příklad 1, 2 a 3).
Typickými příklady biologicky aktivní substancí, které jsou vysoce nerozpustné ve vodě, jsou londamin, melatonin, cyklosporin A a bindarit.
Lipidy liposomové směsi, která má být vystavena procesu lyofílizace podle tohoto vynálezu, jsou výhodně zvoleny ze skupiny zahrnující fosfoglyceridy, glyceridy, diglyceridy, triglyceridy, fosfolipidy, galaktosyllipidy a glukosyllipidy, cholesterol a jeho deriváty, sfíngolipidy a jejich směsi. Výhodnými lipidy jsou fosfolipidy. Výhodný hmotnostní poměr trehalóza/lipid leží mezi 1:2a 1:1.
Průměrná velikost liposomů může být v rozmezí 50 až 250 nm. Nejvýhodnější je v rozmezí 50 až 100 nm.
Druhým předmětem tohoto vynálezu je způsob lyofílizace který se vyznačuje tím že:
1) od 0,2 až do 1,5 dílů hmotnostních trehalózy se přidá na každý díl hmotnostní lipidů vodné liposomální směsi, v níž průměrná velikost liposomů leží v rozmezí 50 až 250 nm, a uvedené liposomy obsahují biologicky aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě,
2) uvedená směs se ochladí prostřednictvím chladicí desky lyofilizéru na teplotu v rozmezí -5 až -70 °C, rychlostí chlazení mezi 0,5 až 2 °C/min
3) jakmile je dosaženo předem určené teploty, na niž má být směs ochlazena, uvedená směs se udržuje po dobu mezi 2 až 5 hodinami při této teplotě,
4) směs se vystaví podtlaku v rozmezí 50 až 8 Pa, přičemž teplota chladicí desky se ponechá na hodnotě stanovené v bodě 2) po dobu trvající mezi 2 až 5 hodinami,
5) teplota chladicí desky se upraví na -15 °C a udržuje se do té doby, dokud se voda zcela neodstraní.
-2CZ 295998 B6
Výhodné pracovní podmínky jsou následující:
fáze 2 teplota mrazení: rychlost chlazení:
fáze 3 čas:
fáze 4 podtlak:
-20 až-30 °C
0,77 °C/min hodiny
Pa fáze 5
a) Je-li teplota mrazení (fáze 2) pod -15 °C, zvýší se teplota chladicí desky na -15 °C rychlostí 0,5 až 2 °C a lyofilizace probíhá 20 hodin, potom se teplota chladicí desky upraví na -10 °C a po hodině na +5 °C a lyofilizace probíhá 16 hodin.
b) Je-li teplota mrazení (fáze 2) vyšší nebo rovna -15 °C, pokračuje lyofilizace 20 hodin, po jejichž uplynutí se teplota chladicí desky upraví na +5 °C a lyofilizace probíhá 16 hodin.
Obzvláště výhodné složení liposomu podle tohoto vynálezu obsahuje:
| Složka fosfatidylcholin lysofosfatadylcholin N-acyl-ethanolamin fosfatidylethanolamin triglyceridy volné mastné kyseliny DL- -tokoferol | % hmotnostní 94 3 1 0,1 1 0,75 0,15 |
Typicky se vodná farmaceutická liposomální směs podle tohoto vynálezu připravuje tak, že:
a) biologicky aktivní substance, které je vysoce nerozpustná ve vodě, se disperguje v lipidech při teplotě v rozmezí 20 až 30 °C,
b) uvedená disperze se suspenduje ve vodné fázi,
c) uvedená suspenze se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 0 až 48 hodin,
d) zahřívá se na 30 až 75 °C po dobu 10 až 40 minut,
e) zmrazí se na -150 až -200 °C,
f) fáze d) a e) se opakují přinejmenším dvakrát a ne více než osmkrát,
g) zfiltruje se na filtrační membráně s póry o průměru 500 až 1000 n,
h) podrobí se extruzi na membráně s póry o průměru 50 až 400 nm, a současně
i) se odstraňuje aktivní substance, která nebyla zachycena.
-3CZ 295998 B6
Trvání fáze c) závisí na množství aktivní substance, která je vysoce nerozpustná ve vodě, jež má být v liposomech zachycena. Odborník v oboru nebude tedy při použití několika jednoduchých rutinních experimentů mít žádné potíže při určování vhodného času pro každý typ aktivní substance a liposomální směsi.
Nejvhodnější složení vodné fáze je 0,05 až 0,9 % (hmotnost/objem) vodného roztoku chloridu sodného. Typicky je množství použitých lipidů 0,01 až 0,4 dílů hmotnostních na každý díl hmotnostní vodného roztoku. Množství aktivní substance obecně naopak leží v rozmezí 0,01 až 0,3 dílu hmotnostního na každý díl hmotnostní lipidů.
Extruze se obecně provádí za použití extruzního plynu, jímž je buď stlačený vzduch, nebo inertní plyn ze skupiny plynů zahrnující dusík, helium a argon. S výhodou inertním plynem je helium. Tlak v extruzní fázi je nejvhodnější v rozmezí 500 až 5500 kPa, nejvhodnější teplota leží v rozmezí 20 až 75 °C, ještě výhodnější je rozmezí teplot 40 až 65 °C. Typickými příklady vhodných extrudérů jsou extrudéry typu Lipex Biomembranes Thermobarrel Extruder nebo Emilsiflex CC Avestin s polykarbonátovou membránou Costar™ s póry o průměru mezi 50 až 600 nm.
Podle postupu uvedeného výše se získají vodné liposomální směsi obsahující okolo 8 mg/ml melatoninu, 3,8 mg/ml lonidaminu, 1 mg/ml cyklosporinu A a 4 mg/ml bindaritu, přičemž rozpustnost těchto látek ve vodě je 3xl0'3 mg/ml (lonidamin), 1 x 10'1 mg/ml (bindarit) a prakticky absolutně nerozpustné jsou melatonin (G.S. Snida a kol., J. Pineal Res., 16, 198-201, (1994).) a cyklosporin A [“Insoluble in Water“, monografie o cyklosporinu A v Analytical Profiles of Drug Substance, 16, 163 (1987)].
Následující příklady slouží k ilustraci předloženého vynálezu, aniž by je však omezovaly.
Příklady provedení vynálezu
Přípravek I
Podle níže uvedeného popisu byla připravena liposomová směs obsahující biologicky aktivní substance, která je vysoce nerozpustná ve vodě.
100 mg melatoninu se 10 minut disperguje v 1 g fosfolipidů při teplotě 30 °C pomocí homogenizátoru typu Ultraturrax™. Ihned poté se uvedená disperze pomocí uvedeného homogenizátoru suspenduje v 10 ml 0,9% (hmotnost/objem) vodného roztoku chloridu sodného a potom se 20 minut zahřívá na vodní lázni při teplotě 55 °C.
Takto získaná suspenze se vystaví následujícímu cyklu ochlazování a zahřívání:
- ochlazování v tekutém dusíku po 1 minutu,
- zahřívání na 55 °C dokud fosfolipidy nebudou zcela fluidizovány.
Uvedený cyklus se opakuje šestkrát.
Suspenze se dvakrát zfiltruje filtrem o průměru pórů 0,6 m za použití přístroj Lipex Biomembranes.
Takto byla získána suspenze „multilamelámích velkých vesikul“ [Multilammellar Lrge Vesicle (MLV)] a ta byla podrobena 6 kontinuálním cyklům extruzí za použití 1 Oml extrudéru typu Lipex Biomembranes Thermobarrel s polykarbonátovými filtry Coster™ o průměru pórů 0,1 M při teplotě 55 °C za použití helia jako extruzního plynu při tlaku v rozmezí 1000 až 4800 kPa.
-4CZ 295998 B6
Přípravek II
Postupuje se tak, jak je popsáno u přípravku I s tím rozdílem, že se použije 2 g fosfolipidů a 50 mg lonidaminu místo 1 g fosfolipidů a 100 mg melatoninu.
Přípravek III
Postupuje se tak, jak je popsáno u přípravku I s tím rozdílem, že se použije 2 g fosfolipidů a 200 mg lonidaminu místo 1 g fosfolipidů a 100 mg melatoninu.
Přípravek IV
Postupuje se tak, jak je popsáno u přípravku II s tím rozdílem, že extruze probíhá za použití polykarbonátové membrány s póry o průměru 0,2 m místo 0,1 m.
Přípravek V mg cyklosporinu A se 10 minut disperguje ve 2 g fosfolipidů při 30 °C pomocí homogenizátoru typu Ultraturrax™. Ihned potom se uvedená disperze suspenduje v 0,9% (hmotnost/objem) vodném roztoku chloridu sodného za použití uvedeného homogenizátoru a nechá se stát 24 hodin při teplotě místnosti. Poté se získaná suspenze zahřívá 20 minut na vodné lázni při teplotě 65 °C.
Takto získaná suspenze se vystaví následujícímu cyklu chlazení a zahřívání:
- ochlazování v tekutém dusíku po 1 minutu,
- zahřívání na 65 °C dokud fosfolipidy nebudou zcela fluidizovány.
Uvedený cyklus se opakuje šestkrát.
Suspenze se dvakrát zfíltruje filtrem o průměru pórů 0,6 m za použití přístroje Lipex Boumembranes.
Takto byla získána suspenze „multilamelámích velkých vesikul“ [Multimellar Large Vesicle (MLV)] a ta byla podrobena 6 kontinuálním cyklům extruzí za použití 10 ml extrudéru typu Lipex Biomembranes Thermobarrel s polykarbonátovými filtry Coster™ o průměru pórů 0,1 m při teplotě 65 °C za použití helia jako extruzního plynu při tlaku v rozmezí 1000 až 4800 kPa.
Přípravek VI
Postupuje se tak, jak je popsáno u přípravu I s tím rozdílem, že se použije 2 g fosfolipidů a 50 mg bindaritu místo 1 g fosfolipidů a 100 mg melatoninu.
Přípravek pro srovnání 1
Přípravek IA
100 mg melatoniu a 1 g trehalózy se 10 minut disperguje v 1 g fosfolipidů při teplotě 30 °C pomocí homogenizátoru typu Ultraturax™: Ihned poté se uvedená disperze pomocí uvedeného homogenizátoru suspenduje v 10 ml 0,9% (hmotnost/objem) vodného roztoku chloridu sodného a potom se 20 minut zahřívá na vodní lázni při teplotě 55 °C.
Takto získaná suspenze se vystaví následujícímu cyklu ochlazování a zahřívání:
- ochlazování v tekutém dusíku po 1 minutu,
- zahřívání na 55 °C, dokud fosfolipidy nebudou zcela fluidizovány.
-5 CZ 295998 B6
Uvedený cyklus se opakuje šestkrát.
Suspenze se dvakrát zfiltruje filtrem o průměru pórů 0,6 m za použití přístroje Lipex Biomembranes.
Takto byla získána velmi hustá hmota. Pokud o její extruzí za použití 10 ml extrudéru typu Lipex Biomembranes Thermobarrel s polykarbonátovými filtry Costar™ o průměru pórů 0,1 M při teplotě 55 °C za použití helia jako extruzního plynu při tlaku v rozmezí 1000 až 48 000 kPa byl neúspěšný.
Přípravek pro srovnání 2
Přípravek 2A
Postupuje se tak, jak bylo popsáno pro účely přípravu pro srovnání 1A s tím rozdílem, že namísto 1 g fosfolipidů se použily gramy 2.
V tomto případě se rovněž získala velmi hustá, neextrudovaná hmota.
Přípravek 2B
Postupuje se tak, jak bylo popsáno u přípravku pro srovnání IB s tou výjimkou, že namísto 1 g fosfolipidů se použily gramy 2.
V tomto případě se rovněž získala dokonale extrudovatelná MLV suspenze.
Příklad 1
Přípravek II se rozdělí na alikvotní části o objemu 1 ml a ke každé z nich se přidá trehalóza podle hmotnostního poměru trehalóza/lipid uvedeného v tabulce 1/1.
Lyofilizace se provádí na deskovém lyofílizátoru následujícím způsobem:
1) chladí se na -25 °C rychlostí 0,77 °C/min,
2) uvedená teplotě (-25 °C) se udržuje po 3 hodiny,
3) vystaví se podtlaku (6 Pa) a udržuje se 2 hodiny na uvedené teplotě (-25 °C),
4) 20 hodin se zahřívá na -15 °C za podtlaku 6 Pa,
5) 2 hodiny se zahřívá na-10 °C za podtlaku 6 Pa,
6) 20 hodin se zahřívá na +5 °C za podtlaku 6 Pa,
7) ukončí se podtlak a
8) vpustí se vzduch.
Lyofilizát (1 ml) se rehydratuje 1 ml destilované vody a 30 minut se udržuje za teploty místnost, aby se umožnila účinná rekonstrukce liposomů.
0,5 ml uvedeného roztoku se dále naředí 10 ml fyziologického roztoku, aby se mohla pomocí přístroje NICOMP 370 změřit průměrná velikost liposomů.
Tabulka 1/1 ukazuje získané výsledky.
-6CZ 295998 B6
Tabulka 1/1
Průměrná velikosti liposomů před a po lyofílizaci
| Šarže | Trehalóza/lipidy (hmotnostně) | Před | Po |
| LM/302 | 0 | 102 | 911,7 |
| 1:2 | 102 | 115,9 | |
| 1:1 | 102 | 109,7 | |
| 2:1 | 102 | 167,9 | |
| LM/303 | 0 | 99,2 | 911,7 |
| 1:2 | 99,2 | 98,7 | |
| 1:1 | 99,2 | 109,8 | |
| 2:1 | 99,2 | 291,3 | |
| LM/304 | 0 | 98,6 | 911,8 |
| 1:2 | 98,6 | 94,9 | |
| 1:1 | 98,6 | 105,8 | |
| 2:1 | 98,6 | 794 |
V tabulce 1/1 můžeme vidět, že absence trehalózy vede k jistému stupni fúze liposomů, již lze doložit vzestupem jejich průměrné velikosti. Vzestup množství trehalózy (trehalóza/lipidy 2:1) překvapivě také způsobuje jistý stupeň fúze s následným vzestupem průměrné velikosti.
Podobné výsledky byly rovněž získány s přípravkem IV.
Průměrná velikost liposomů a množství lonidaminu byly stanoveny zjistého počtu vzorků, čerstvě připravených tak, jak bylo popsáno výše. Vzorky byly následně umístěny do chladničky při 5 °C a odebírány v daných intervalech, rehydratovány, aby se stanovilo množství aktivní substance a průměrná velikost liposomů. Takto získané výsledky ukazuje tabulka 1/2.
Tabulka 1/2
Hmotnostní poměr trehalóza/lipid 1:2
| Šarže | Čas (měsíce) | HPLC množství (mg/ml) | Průměrná velikost (nm) |
| LM328 | to | 3,3 | 107 |
| 1 | 3,2 | 110 | |
| 3 | 3,2 | 114 | |
| 6 | 3,1 | 127,2 | |
| LM/329 | to | 3,2 | 103,3 |
| 1 | 3,2 | 101 | |
| 3 | 3,2 | 110,5 | |
| 6 | 3,1 | 115 | |
| LM/330 | to | 3,3 | 99,2 |
| 1 | 3,4 | 99,5 | |
| 3 | 3,2 | 100,5 | |
| 6 | 3,1 | 113,6 |
Příklad 2
Přípravek II se lyofilizoval tak, jak bylo popsáno v příkladě 1 uvedeném výše a průměrná velikost liposomů před a po lyofilizaci (tabulka 2/1), stejně jako průměrná velikost liposomů a množství melatoninu v čerstvých přípravcích a v těch, které byly udržovány při 5 °C, se stanoví tak, jak se popsáno v dříve zmíněném příkladě (tabulka 2/2).
Tabulka 2/1
Průměrná velikost liposomů před a po lyofilizaci
| Šarže | Trehalóza/lipidy (hmotnostně) | Před | Po |
| LM/336 | 0 | 92 | 16 953 |
| 1:2 | 92 | 6875 | |
| 1:1 | 92 | 96,5 | |
| 2:1 | 92 | 109,7 | |
| LM/337 | 1:2 | 92 | 146,3 |
| 1:1 | 92 | 98,8 | |
| 2:1 | 92 | 8319,8 | |
| LM/338 | 1:2 | 92 | 179,7 |
| 1:1 | 92 | 225,7 | |
| 2:1 | 92 | 2984 |
Podobné výsledky byly také dosaženy s přípravkem 1.
Tabulka 2/2
Hmotnostní poměr trehalóza/lipid 1:1
| Šarže | Čas (měsíce) | HPLC množství (mg/ml) | Průměrná velikost (nm) |
| LM/359 | to | 6 | 104 |
| 1 | 6 | 103,2 | |
| 3 | 5,8 | 109,5 | |
| LM/360 | to | 6,5 | 107,2 |
| 1 | 6,5 | 106,3 | |
| 3 | 6,7 | 113,6 | |
| LM/361 | to | 6,2 | 98,4 |
| 1 | 6,3 | 99 | |
| 3 | 6 | 100,5 |
Příklad 3
Přípravek IV se lyofílizuje tak, jak je popsáno v příkladě 1 uvedeném výše a průměrná velikost liposomů před a po lyofilizaci (tabulka 3/1), stejně jako průměrná velikost liposomů a množství bindaritu v čerstvých přípravcích a v těch, které byly udržovány při 5 °C, se stanoví tak, jak je popsáno v dříve zmíněném příkladě (tabulka 3/2).
-8CZ 295998 B6
Tabulka 3/1
Průměrná velikost liposomů před a po lyofilizaci
| Šarže | Trehalóza/lipidy (hmotnostně) | Před | Po |
| LM/342 | 0 | 102,7 | 7524,1 |
| 1:2 | 102,7 | 928 | |
| 1:1 | 102,7 | 109 | |
| 2:1 | 102,7 | 140 | |
| LM/343 | 1:2 | 102,7 | 546,6 |
| 1:1 | 102,7 | 112,3 | |
| 2:1 | 102,7 | 1559,2 | |
| LM/344 | 1:2 | 102,7 | 194,9 |
| 1:1 | 102,7 | 112,2 | |
| 2:1 | 102,7 | 4722 |
Tabulka 3/2
Hmotnostní poměr trehalóza/lipid 1:1
| Šarže | Čas (měsíce) | HPLC množství (mg/ml) | Průměrná velikost (nm) |
| LM/356 | t0 | 3,2 | 135 |
| 1 | 3,1 | 128 | |
| 3 | 3,2 | 131,3 | |
| LM/357 | to | 3,1 | 122 |
| 1 | 3,1 | 121 | |
| 3 | 3,2 | 126,2 | |
| LM/358 | to | 3,1 | 126 |
| 1 | 3,1 | 122,8 | |
| 3 | 2,9 | 121,8 |
Příklad pro srovnání 1
Přípravek II se rozdělí na alikvotní části o objemu 1 ml a ke každé z nich se přidá trehalóza podle hmotnostního poměru trehalóza/lipid uvedeného ve srovnávací tabulce 1.
Přípravek se pak zmrazí na teplotu kapalného dusíku (-195,8 °C) a 20 hodin lyofilizuje, přičemž teplota není zvenčí ovládána.
Lyofilizát (1 ml) se rehydratuje 1 ml destilované vody a 2 hodiny se nechá při teplotě místnosti.
0,5 ml uvedeného roztoku se dále naředí 10 ml fyziologického roztoku, aby se pomocí přístroje NICOMP 370 mohla změřit průměrná velikost liposomů.
Získané výsledky jsou ilustrovány ve srovnávací tabulce 1 uvedené níže.
-9CZ 295998 B6
Srovnávací tabulka 1
Průměrná velikost liposomů před a po lyofilizaci
| Šarže | Trehalóza/lipidy (hmotnostně) | Před | Po |
| LM/302 | 0 | 102 | 911,8 |
| 1:2 | 102 | 254,8 | |
| 1:1 | 102 | 219,3 | |
| 2:1 | 102 | 773,7 | |
| LM/303 | 0 | 99,2 | 911,8 |
| 1:2 | 99,2 | 349,9 | |
| 1:1 | 99,2 | 180,4 | |
| 2:1 | 99,2 | 717,2 | |
| LM/304 | 0 | 98,6 | 911,8 |
| 1:2 | 98,6 | 722,5 | |
| 1:1 | 98,6 | 161,1 | |
| 2:1 | 98,6 | 150 |
Ve srovnávací tabulce 1 může být vidět, že pokud se lyofilizace provádí při teplotě kapalného dusíku, buď za nepřítomnosti trehalózy, nebo za její přítomnosti v poměrech uvedených v tabulce nahoře, dochází k určitému stupni fúze liposomů, což je doloženo vzrůstem jejich průměrně velikosti. Výše uvedené údaje navíc ukazují, že pokud je lyofilizace provádět při teplotě kapalného dusíku, pak samotný průběh lyofilizace (pro přípravky téhož složení) ne vždy vede k reprodukovatelně stejným výsledkům.
Claims (12)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Lyofilizovaná směs obsahující trehalózu a lipidové liposomy, v nichž je inkorporována biologicky aktivní substance, vyznačující se tím, že ona biologicky aktivní substance je vysoce nerozpustná ve vodě, hmotnostní poměr trehalóza/lipid je roven nebo menší než 1,5 a veškerá trehalóza byla přidána vně již vytvořených liposomů před lyofilizaci.
- 2. Lyofilizovaná směs podle nároku 1, vy z n a č uj í c í se tím, že biologicky aktivní substance, která je vysoce nerozpustná ve vodě, je zvolena ze skupiny zahrnující lonidamin, melatonin, cyklosporin A a bindarit.
- 3. Lyofilizovaná směs podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že lipidy jsou zvoleny ze souboru zahrnujícího fosfoglyceridy, glyceridy, diglyceridy, triglyceridy, fosfolipidy, galaktosyllipidy a glukosillipidy, cholesterol a jeho deriváty, sfingolipidy a jejich směsi.
- 4. Lyofilizovaná směs podle nároku 3, vyznačující se tím, že lipidy jsou fosfolipidy.
- 5. Lyofilizovaná směs podle některého z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že hmotnostní poměr trehalóza/lipid je v rozmezí od 1:2 do 1:1.
- 6. Lyofilizovaná směs podle některého z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že průměrná velikost liposomů je 50 až 250 nm.-10CZ 295998 B6
- 7. Lyofilizovaná směs podle nároku 6, vyznaču j icí se t í m, že průměrná velikost liposomů je 50 až 100 nm.
- 8. Způsob lyofilizace směsi obsahující trehalózu a lipidové liposomy, do nichž byla inkorporována biologicky aktivní substance, vyznačující se tím, že:a) od 0,2 až do 1,5 dílů hmotnostních trehalózy se přidá na každý díl hmotnostní lipidů vodného liposomálního přípravku, v němž průměrná velikost liposomů leží mezi 50 až 250 nm, a uvedené liposomy obsahují biologicky aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě,b) uvedený přípravek se ochladí prostřednictvím chladicí desky lyofilizeru na teplotu v rozmezí -5 až -70 °C rychlostí chlazení mezi 0,5 až 2 °C/min,c) jakmile je dosažena předem určená teplota, na nichž má být přípravek ochlazen, uvedená směs se udržuje po dobu mezi 2 až 5 hodinami při této teplotě,d) přípravek se vystaví podtlaku v rozmezí 50 až 8 Pa, přičemž teplota chladicí desky se ponechá na hodnotě stanovené v bodě b) po dobu trvající mezi 2 až 5 hodinami,e) teplota chladicí desky se upraví na -15 °C a udržuje se do té doby, dokud se voda zcela neodstraní.
- 9. Způsob lyofilizace podle nároku 8, vyznačující se tím, že ve fázi b) je teplota chlazení mezi -20 až -30 °C.
- 10. Způsob lyofilizace podle nároku 8 nebo 9, vyznaču j í cí se tí m , že ve fázi b) je rychlost chlazení 0,77 °C/min.
- 11. Způsob lyofilizace podle některého znároků 8 až 10, vyznačuj ící se tím, že čas ve fázi c) je 3 hodiny.
- 12. Způsob lyofilizace podle některého z nároků 8 až 11,vyznačuj ící se tím, že podtlak je 6 Pa.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT97MI000362A IT1289938B1 (it) | 1997-02-20 | 1997-02-20 | Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e' incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ292599A3 CZ292599A3 (cs) | 2000-01-12 |
| CZ295998B6 true CZ295998B6 (cs) | 2005-12-14 |
Family
ID=11376097
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19992925A CZ295998B6 (cs) | 1997-02-20 | 1998-02-12 | Farmaceutický přípravek obsahující lyofilizované liposomy enkapsulující aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě a způsob přípravy tohoto přípravku |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6319517B1 (cs) |
| EP (1) | EP0981332B1 (cs) |
| JP (1) | JP4290767B2 (cs) |
| KR (1) | KR100496802B1 (cs) |
| CN (1) | CN1089581C (cs) |
| AR (1) | AR011681A1 (cs) |
| AT (1) | ATE285754T1 (cs) |
| AU (1) | AU744115B2 (cs) |
| BG (1) | BG64580B1 (cs) |
| CA (1) | CA2288958C (cs) |
| CZ (1) | CZ295998B6 (cs) |
| DE (1) | DE69828394T2 (cs) |
| EA (1) | EA001637B1 (cs) |
| ES (1) | ES2235320T3 (cs) |
| GE (1) | GEP20022734B (cs) |
| HK (1) | HK1026148A1 (cs) |
| HU (1) | HU225593B1 (cs) |
| IL (1) | IL131327A (cs) |
| IT (1) | IT1289938B1 (cs) |
| PL (1) | PL190628B1 (cs) |
| PT (1) | PT981332E (cs) |
| SK (1) | SK282931B6 (cs) |
| TR (1) | TR199902025T2 (cs) |
| UA (1) | UA70296A (cs) |
| WO (1) | WO1998036736A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA981352B (cs) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60012932T2 (de) * | 1999-06-23 | 2005-08-18 | Cornell Research Foundation, Inc. | Entwässerung/rehydratisierung von markierten liposomen auf einer prüfeinrichtung |
| US6576460B1 (en) | 1999-10-28 | 2003-06-10 | Cornell Research Foundation, Inc. | Filtration-detection device and method of use |
| MXPA05007571A (es) * | 2003-01-17 | 2005-11-17 | Threshold Pharmaceuticals Inc | Tratamiento para hiperplasia protatica benigna utilizando agentes energoliticos. |
| JP2008535921A (ja) | 2005-04-12 | 2008-09-04 | エラン・ファルマ・インターナショナル・リミテッド | シクロスポリンを含むナノ粒子および放出調節された組成物 |
| WO2008036979A2 (en) * | 2006-09-22 | 2008-03-27 | Guilford F Timothy | Topical application of melatonin directly or in liposomes for the amelioration of itching and histamine and non-histamine related inflammatory skin changes |
| CN101049504B (zh) * | 2007-04-05 | 2010-05-19 | 广州立恩生物科技有限公司 | 一种脂质体药物载体及其制备方法 |
| US9446147B2 (en) | 2011-02-24 | 2016-09-20 | The Ohio State University | Membrane stabilizing compositions and methods |
| EP2768484B1 (en) | 2011-10-21 | 2019-07-24 | Jazz Pharmaceuticals Research LLC | Lyophilized liposomes |
| US8999292B2 (en) | 2012-05-01 | 2015-04-07 | Translatum Medicus Inc. | Methods for treating and diagnosing blinding eye diseases |
| JP5957610B2 (ja) * | 2012-08-31 | 2016-07-27 | チュンアン ユニバーシティー インダストリー アカデミック コアポレイション ファウンデイション | 塞栓用のミクロスフェアの製造方法及び薬物含有ナノ輸送体が結合されたミクロスフェアの製造方法 |
| US10722465B1 (en) | 2017-12-08 | 2020-07-28 | Quicksilber Scientific, Inc. | Transparent colloidal vitamin supplement |
| US11344497B1 (en) | 2017-12-08 | 2022-05-31 | Quicksilver Scientific, Inc. | Mitochondrial performance enhancement nanoemulsion |
| KR102646145B1 (ko) | 2018-05-31 | 2024-03-11 | 주식회사 엑소코바이오 | 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 모공 축소용 조성물 |
| BR112020026635A2 (pt) * | 2018-06-27 | 2021-04-20 | Breath Therapeutics Gmbh | composições inaláveis compreendendo imunosupressores macrocíclicos |
| BR112020026629A2 (pt) | 2018-06-27 | 2021-03-23 | Breath Therapeutics Gmbh | Composições farmacêuticas na forma liofilizada |
| JP7079984B2 (ja) | 2018-07-28 | 2022-06-03 | エクソコバイオ インコーポレイテッド | エキソソームの凍結乾燥方法 |
| KR102163806B1 (ko) | 2018-07-30 | 2020-10-07 | 주식회사 엑소코바이오 | 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피지분비 감소용 조성물 |
| EA202092892A1 (ru) | 2018-12-04 | 2021-05-27 | Брес Терапьютикс Гмбх | Ингаляционные композиции, содержащие макроциклические иммуносупрессанты |
| US11291702B1 (en) | 2019-04-15 | 2022-04-05 | Quicksilver Scientific, Inc. | Liver activation nanoemulsion, solid binding composition, and toxin excretion enhancement method |
| WO2020261158A1 (en) | 2019-06-25 | 2020-12-30 | Translatum Medicus Inc. | Processes of making 2-((1-benzyl-1h-indazol-3-yl)methoxy)-2-methylpropanoic acid and its derivatives |
| CN111358955B (zh) * | 2020-04-01 | 2023-05-02 | 重庆理工大学 | 一种用于治疗脂质代谢疾病的炎症靶向的宾达利纳米粒、制备方法及其应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1173360A (en) * | 1979-06-22 | 1984-08-28 | Jurg Schrank | Pharmaceutical preparations |
| FR2542749B1 (fr) * | 1983-03-18 | 1985-07-12 | Beghin Say Sa | Copolymere allyloligosaccharide-acrylique salifie, procede de preparation du copolymere et application comme super-absorbant |
| US4857319A (en) * | 1985-01-11 | 1989-08-15 | The Regents Of The University Of California | Method for preserving liposomes |
| US4963362A (en) * | 1987-08-07 | 1990-10-16 | Regents Of The University Of Minnesota | Freeze-dried liposome mixture containing cyclosporin |
| US5683714A (en) * | 1991-04-19 | 1997-11-04 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Liposomal cyclosporin pharmaceutical formulation |
| US5817336A (en) * | 1993-04-02 | 1998-10-06 | Orion-Yhtyma Oy | Composition containing selegiline |
| GB9320668D0 (en) * | 1993-10-07 | 1993-11-24 | Secr Defence | Liposomes containing particulare materials |
| CA2153251C (en) * | 1993-11-05 | 1998-09-01 | David Samuel Collins | Liposome preparation and material encapsulation method |
-
1997
- 1997-02-20 IT IT97MI000362A patent/IT1289938B1/it active IP Right Grant
-
1998
- 1998-02-12 EA EA199900751A patent/EA001637B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 UA UA99095150A patent/UA70296A/uk unknown
- 1998-02-12 HU HU0001464A patent/HU225593B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 TR TR1999/02025T patent/TR199902025T2/xx unknown
- 1998-02-12 CA CA002288958A patent/CA2288958C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-12 JP JP53622898A patent/JP4290767B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-12 KR KR10-1999-7007538A patent/KR100496802B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 EP EP98910659A patent/EP0981332B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 IL IL13132798A patent/IL131327A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 CN CN98802737A patent/CN1089581C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-12 DE DE69828394T patent/DE69828394T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 GE GEAP19984991A patent/GEP20022734B/en unknown
- 1998-02-12 CZ CZ19992925A patent/CZ295998B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 AU AU64969/98A patent/AU744115B2/en not_active Ceased
- 1998-02-12 SK SK1110-99A patent/SK282931B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 US US09/367,715 patent/US6319517B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 ES ES98910659T patent/ES2235320T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 WO PCT/EP1998/000817 patent/WO1998036736A1/en active IP Right Grant
- 1998-02-12 PL PL98335207A patent/PL190628B1/pl unknown
- 1998-02-12 PT PT98910659T patent/PT981332E/pt unknown
- 1998-02-12 AT AT98910659T patent/ATE285754T1/de active
- 1998-02-18 ZA ZA981352A patent/ZA981352B/xx unknown
- 1998-02-20 AR ARP980100754A patent/AR011681A1/es active IP Right Grant
-
1999
- 1999-09-16 BG BG103738A patent/BG64580B1/bg unknown
-
2000
- 2000-09-01 HK HK00105485A patent/HK1026148A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ295998B6 (cs) | Farmaceutický přípravek obsahující lyofilizované liposomy enkapsulující aktivní substanci, která je vysoce nerozpustná ve vodě a způsob přípravy tohoto přípravku | |
| JP2792702B2 (ja) | 乾燥時に改善された安定性を示すリポソームの調製方法 | |
| US4743449A (en) | Drug-containing lipid vesicle preparation and method for preparing them | |
| EP0231261B1 (en) | Multilamellar liposomes having improved trapping efficiencies | |
| JP2022033892A (ja) | 凍結乾燥リポソーム | |
| RU2216315C2 (ru) | Способ получения липосом | |
| JP3267611B2 (ja) | リポソーム−ポリエンプレリポソーム粉末とその製造方法 | |
| JPS6252724B2 (cs) | ||
| JPH08505882A (ja) | リポソーム調製法及び物質のカプセル化方法 | |
| JPH09501169A (ja) | 小胞に生体高分子物質を高度に充填する方法 | |
| US6066331A (en) | Method for preparation of vesicles loaded with biological structures, biopolymers and/or oligomers | |
| JP2001501911A (ja) | 凍結乾燥リポソーム包封両親媒性薬剤組成物およびその調製方法 | |
| Crommelin et al. | Physical stability on long-term storage | |
| AU612631B2 (en) | Dehydrating vesicule preparations for long-term storage | |
| CA2285985C (en) | A method for preparing aqueous liposomal compositions comprising an active ingredient which is highly insoluble in water | |
| Nounou et al. | Influence of different sugar cryoprotectants on the stability and physico-chemical characteristics of freeze-dried 5-fluorouracil plurilamellar vesicles | |
| MXPA99007684A (en) | Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing thesaid preparation | |
| Mobley | The effect of jet-milling on lyophilized liposomes | |
| JPH09501168A (ja) | 生物構造体、生体ポリマー及び／又はオリゴマーを充填した小胞の調製方法 | |
| RU2780489C2 (ru) | Лиофилизированные липосомы | |
| Vacková | Lyofilizace lipozomů pro perorální aplikaci léčiv |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20170212 |