EA001637B1 - Фармацевтическая композиция, содержащая лиофилизированные липосомы, включающие инкапсулированный активный ингредиент, практически не растворимый в воде, и способ получения композиции - Google Patents
Фармацевтическая композиция, содержащая лиофилизированные липосомы, включающие инкапсулированный активный ингредиент, практически не растворимый в воде, и способ получения композиции Download PDFInfo
- Publication number
- EA001637B1 EA001637B1 EA199900751A EA199900751A EA001637B1 EA 001637 B1 EA001637 B1 EA 001637B1 EA 199900751 A EA199900751 A EA 199900751A EA 199900751 A EA199900751 A EA 199900751A EA 001637 B1 EA001637 B1 EA 001637B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- liposomes
- trehalose
- temperature
- water
- composition according
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Лиофилизированная композиция, содержащая трегалозу и липидные липосомы, включающие биологически активный ингредиент, причем биологически активный ингредиент является практически нерастворимым в воде, весовое соотношение трегалоза/липид составляет ≤1,5, и всю трегалозу добавляют с внешней стороны липосом, уже сформированных до лиофилизации.
Description
Изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей лиофилизированные липосомы, включающие инкапсулированный биологически активный ингредиент, который практически нерастворим в воде, и способу получения вышеуказанной композиции.
Более конкретно, изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей лиофилизированные липосомы, включающие инкапсулированный биологически активный ингредиент, который практически нерастворим в воде и стабилен длительное время.
В данном описании и в формуле изобретения термин практически нерастворимый в воде характеризует соединения, имеющие растворимость в воде <0,01% (вес/объем).
Известно, что применение липосом в медицинской практике осложняют трудности, возникающие при приготовлении фармацевтических композиций, которые достаточно стабильны как во время лиофилизации, так и в течение длительного времени. Вышеупомянутые трудности заключаются, прежде всего, в получении липосом, которые не разрываются и не собираются вместе. Другими словами, липосомы остаются целыми и отделяются друг от друга.
Структурная целостность липосом также особенно важна в случае, когда активный ингредиент практически нерастворим в воде. Фактически, разрыв липосом во время лиофилизации и/или во время хранения не препятствует переходу водорастворимых активных ингредиентов в раствор, когда водной раствор липосом восстанавливают добавлением физиологического раствора перед введением пациенту. С другой стороны, в случае разрыва липосом, содержащих активные ингредиенты, которые практически нерастворимы в воде, восстановление лиофилизата приводит к получению раствора, содержащего менее активный ингредиент, чем требуется. Чем больше количество разорванных липосом, тем больше различие между теоретическим и реальным количеством активного ингредиента в растворе.
Способ лиофилизации липосом, содержащих водорастворимый биологически активный ингредиент, описан в патенте США И8-А4 857 319. В этом патенте описана лиофилизация липосом предпочтительного среднего размера приблизительно 50-100 нм, с добавкой в качестве предохраняющего агента дисахарида только внутрь (инкапсулированное содержимое липосом), или только снаружи, или как внутрь, так и снаружи. Весовое соотношение дисахарид/липид колеблется от 0,1:1 до 4:1. Предпочтительно дисахарид является трегалозой. Фазу замораживания проводят при температуре жидкого азота (-195,8°С).
В вышеупомянутом патенте, характеристики стабильности во время лиофилизации оценивают измерением удержания активного ингредиента, включенного в липосомы, после восстановления лиофилизата повторной гидратацией.
В табл. 2 вышеупомянутого патента показано, что удержание оказывается высоким (99100%) только когда соотношение трегалоза/липид составляет более чем 1,76 и трегалоза присутствует как внутри, так и снаружи липосом. Когда вышеупомянутое соотношение равняется 0,11 и 0,19, удержание составляет 22 и 49%, соответственно, даже если трегалоза присутствует как внутри, так и снаружи липосом. Когда трегалоза присутствует только снаружи, количество удержанного активного ингредиента резко снижается, даже при очень больших количествах трегалозы. Действительно, при соотношении трегалоза/липид 3,9 удержанное количество составляет только 26%.
Тем не менее, вышеприведенные результаты являются невоспроизводимыми, когда биологически активный ингредиент практически нерастворим в воде. Действительно, когда трегалозу добавляют во время приготовления липосом для включения ее в липидные везикулы, получают негомогенную невытесняемую суспензию (препараты для сравнения 1 и 2).
Неожиданно было обнаружено, что липосомы, содержащие биологически активный ингредиент, который является практически нерастворимым в воде, по существу остаются целыми во время лиофилизации, когда трегалозу добавляют только в небольших количествах в липосомы перед лиофилизацией, и вышеупомянутую лиофилизацию осуществляют при проведении фазы замораживания при температуре от -5 до -70°С.
Целью данного изобретения является создание лиофилизированной композиции, содержащей трегалозу и липидные липосомы, которые включают биологически активный ингредиент, характеризующийся тем, что биологически активный ингредиент является практически нерастворимым в воде, весовое соотношение трегалоза/липид составляет <1,5, и всю трегалозу добавляют с внешней стороны липосом уже сформированным перед лиофилизацией.
После восстановления посредством повторной гидратации, вышеназванная композиция удерживает в растворе более 95% биологически активного ингредиента, который является практически нерастворимым в воде (примеры 1, 2 и 3).
Типичными примерами биологически активных ингредиентов практически нерастворимых в воде являются: ионидамин, мелатонин, циклоспорин А и биндарит.
Липиды липосомной композиции, которую подвергают лиофилизации согласно изобретению, предпочтительно выбирают из группы, состоящей из фосфоглицеридов, глицеридов, диглицеридов, триглицеридов, фосфолипидов, галактозил- и гликозиллипидов, холестерина и его производных, сфинголипидов и их смесей.
Предпочтительно, липиды представляют собой фосфолипиды. В свою очередь, весовое соотношение трегалоза/липид предпочтительно составляет от 1:2 до 1:1.
Средний размер липосом составляет от 50 до 250 нм. Предпочтительно он составляет от 50 до 100 нм.
Второй целью изобретения является создание способа лиофилизации, характеризующегося тем, что:
1) от 0,2 до 1,5 вес. ч. трегалозы добавляют к каждой весовой части липидов водной липосомной композиции, в которой средний размер липосом составляет от 50 до 250 нм, и вышеназванные липосомы содержат биологически активный ингредиент, который является практически нерастворимым в воде;
2) вышеупомянутую композицию замораживают с помощью холодильных пластин (камер) лиофилизатора при температуре от -5 до -70°С при скорости замораживания между 0,5 и 2°С/мин;
3) как только достигают предопределенной температуры, композицию содержат при указанной температуре в течение периода от 2 до 5 ч;
4) применяют вакуум от 5 х 10-1 до 8 х 10-2 миллибар, оставляя температуру холодильной пластины при температуре замораживания, установленной в п.2 в течение периода времени от 2 до 5 ч;
5) температуру холодильной пластины доводят до -15°С и поддерживают до тех пор, пока полностью не удалят воду.
Предпочтительными условиями проведения процесса являются следующие.
Фаза 2.
температура замораживания: -20°С до -30°С скорость охлаждения: 0,77°С/мин
Фаза 3.
время: 3 ч
Фаза 4.
вакуум: 6 х 10-2 миллибар
Фаза 5.
a) Когда температура замораживания (фаза 2) опускается ниже -15°С, температуру холодильной пластины увеличивают до -15°С со скоростью от 0,5°С до 2°С, и лиофилизация происходит в течение 20 ч; затем температуру холодильной пластины доводят до -10°С и через час до +5°С, и лиофилизация происходит в течение 16 ч.
b) Когда температура замораживания (фаза 2) больше или равна -15°С, лиофилизацию продолжают в течение 20 ч, после чего температуру холодильной пластины доводят до +5°С, и лиофилизация происходит в течение 16 ч.
Данная предпочтительная липосомная композиция согласно изобретению содержит:
| Ингредиент | %(вес/вес) |
| Фосфатидилхолин | 94 |
| Лизофосфатидилхолин | 3 |
| №ацетилэтаноламин | 1 |
| Фосфатидилэтаноламин | 0,1 |
| Триглицериды | 1 |
| Свободные жирные кислоты | 0,75 |
| БЬ-а-токоферол | 0,15 |
Обычно водную фармацевтическую липосомную композицию изобретения получают посредством:
a) диспергирования биологически активного ингредиента в липидах, практически нерастворимого в воде, при температуре от 20 до 30°С;
b) суспендирования вышеупомянутой дисперсии в водной фазе;
c) экспозиции вышеназванной суспензии при температуре окружения в течение периода времени от 0 до 48 ч;
6) нагревания при температуре от 30 до 75°С в течение 10-40 мин;
е) замораживания при температуре от -150 до -200°С;
I) повторения фаз 6) и е), по крайней мере, дважды и не более чем 8 раз;
д) фильтрования через фильтрующие мембраны с порами 500-1000 нм в диаметре;
II) выдавливания через мембрану с порами 50-400 нм в диаметре; и одновременно
ί) удаления незадержанного активного ингредиента.
Продолжительность фазы с) зависит от количества активного практически нерастворимого в воде ингредиента, которое хотят задержать в липосомах. Специалист в данной области посредством нескольких простых рутинных опытов без труда определит приемлемое время для каждого типа активного ингредиента и липосомной композиции.
Предпочтительно водная фаза состоит из 0,05-0,9% (вес/объем) водного раствора хлористого натрия. Обычно количество используемых липидов составляет 0,01-0,4 вес. ч. на каждую весовую часть водного раствора. В свою очередь, количество активного ингредиента обычно составляет от 0,01 до 0,3 вес. ч. на каждую весовую часть липидов.
В основном, выдавливание проводят, используя в качестве газа вытеснения сжатый воздух или инертный газ, выбранный из группы, состоящей из азота, гелия и аргона. Предпочтительно, инертный газ представляет собой гелий. Давление в фазе выдавливания предпочтительно составляет от 500 до 5500 кПа, а температура предпочтительно составляет от 20 до 75°С, более предпочтительно от 40 до 65°С. Примерами приемлемых экструдеров являются экструдеры типа Ырех ВюшешЬтапек Т1егшоЬагге1, или эмульсифлекс СС Ауейш с поликарбонатной мембраной Сойат™ с порами от 50 до 600 нм в диаметре.
Как описано выше, получают водные липосомные композиции, содержащие приблизи тельно 8 мг/мл мелатонина, 3,8 мг/мл ионидамина, 1 мг/мл циклоспорина А и 4 мг/мл биндарита в зависимости от растворимости в воде 3 х 10-3 мг/мл (ионидамин), 1 х 10-1 мг/мл (биндарит) и практически абсолютной нерастворимости мелатонина (С.8. 81пба е! а1. 1. Ртеа1 Век 1994, 16, 198-201) и циклоспорина А [1п5о1иЫе ίη Аа1ег. монография по циклоспорину А в Апа1уйса1 Ргой1ек о! Эгид 8иЬ51апсек, 16, 163, (1987)].
Следующие примеры служат только для иллюстрации данного изобретения, а не для его ограничения.
Препарат I
Липосомную композицию, содержащую биологически активный ингредиент, который является практически нерастворимым в воде, получают, как описывают ниже.
100 мг мелатонина диспергируют в 1 г фосфолипидов при 30°С в течение 10 мин гомогенизатором типа ийгаШггах™. Непосредственно после этого дисперсию суспендируют в 10 мл 0,9% (вес/объем) водного раствора хлористого натрия с помощью вышеназванного гомогенизатора, а затем нагревают в водяной бане при 55°С в течение 20 мин.
Полученную таким образом суспензию подвергают следующему циклу замораживания и нагревания:
- замораживание в жидком азоте в течение 1 мин,
- нагревание при 55°С до полного разжижения фосфолипидов.
Цикл повторяют 6 раз.
Суспензию пропускают дважды через 0,6 мкм фильтр, используя устройство биомембран Ырех.
Таким образом получают суспензию Многослойная большая везикула (МЬУ), которую подвергают 6 циклам непрерывного выдавливания, используя 10-мл экструдер типа Ырех ВюшешЬгапек ТйегшоЬагге1 с 0,1 мкм поликарбонатными фильтрами Сок1аг™ при 55°С, применяя гелий в качестве газа вытеснения при давлении от 1000 до 4800 кПа.
Препарат II
Получают, как описано для препарата I, используя 2 г фосфолипидов и 50 мг ионидамида вместо 1 г фосфолипидов и 100 мг мелатонина.
Препарат III
Получают, как описано для препарата I, используя 2 г фосфолипидов и 200 мг мелатонина вместо 1 г фосфолипидов и 100 мг мелатонина.
ПрепаратIV
Получают, как описано для препарата II, за исключением того, что выдавливание проводят через 0,2 мкм поликарбонатную мембрану вместо 0,1 мкм мембраны.
Препарат V мг циклоспорина диспергируют в 2 г фосфолипидов при 30°С в течение 10 мин гомогенизатором типа иБгаЫггах™. Непосредственно после этого дисперсию суспендируют в 0,9% (вес/объем) водном растворе хлористого натрия, используя вышеуказанный гомогенизатор, и оставляют при температуре окружающей среды в течение 24 ч. Затем полученную суспензию нагревают в водяной бане при 65°С в течение 20 мин.
Полученную таким образом суспензию подвергают следующему циклу замораживания и нагревания:
- замораживание в жидком азоте в течение 1 мин,
- нагревание при 65°С до полного разжижения фосфолипидов.
Цикл повторяют 6 раз.
Суспензию пропускают дважды через 0,6 мкм фильтр, используя прибор Ырех ВюшешЬгапек.
Полученную таким образом суспензию многослойную большую везикулу (МНУ) подвергают 6 циклам непрерывного выдавливания, применяя 10-мл экструдер типа Ырех ВюшешЬгапек ТйегшоЬагге1 с 0,1 мкм поликарбонатными фильтрами Сок1аг™ при 65°С, используя гелий в качестве газа вытеснения при давлении между 1000 и 4800 кПа.
Препарат VI
Получают, как описано для препарата I, используя 2 г фосфолипидов и 50 мг биндарита вместо 1 г фосфолипидов и 100 мг мелатонина.
Препарат для сравнения 1
Препарат 1А.
100 мг мелатонина и 1 г трегалозы диспергируют в 1 г фосфолипидов при 30°С в течение 10 мин гомогенизатором типа иИгаЫггах™. Сразу после этого дисперсию суспендируют в 10 мл 0,9% (вес/объем) водного раствора хлористого натрия, применяя вышеуказанный гомогенизатор, а затем нагревают в водяной бане при 55°С в течение 20 мин.
Полученную таким образом суспензию подвергают следующему циклу замораживания и нагревания:
- замораживание в жидком азоте в течение 1 мин,
- нагревание при 55°С до полного разжижения фосфолипидов.
Цикл повторяют 6 раз.
Суспензию пропускают дважды через фильтр 0,6 мкм, используя прибор Ырех ВюшешЬгапек.
В этом способе получают очень плотную массу. Попытка продавить эту массу с помощью 10-мл экструдера типа Ырех ВюшешЬгапек ТйегшоЬагге1 с 0,1 мкм поликарбонатными фильтрами Сок1аг™ при 55°С, применяя гелий в качестве газа вытеснения при давлении между 1000 и 4800 кПа оказалась неудачной.
Препарат 1В.
Получают, как описано для препарата 1А, за исключением того, что не включают мелатонин. Получают суспензию многослойная большая везикула (МЬУ), которую отлично продавливают с помощью 10-мл экструдера типа Ырех ВютсшЬгапсз Т11сгтоЬаггс1 с 0,1 мкм поликарбонатными фильтрами Сойаг™ при 55°С, с гелием в качестве газа вытеснения при давлении от 1000 до 4800 кПа.
Препарат для сравнения 2
Препарат 2А.
Получают, как описано в случае препарата для сравнения 1А, за исключением того, что используют 2 г фосфолипидов вместо 1 г.
В этом случае также получают очень плотную невыдавливаемую массу.
Препарат 2В.
Получают, как описано для препарата для сравнения 1В, за исключением того, что применяют 2 г фосфолипидов вместо 1 г.
В этом случае также получают отлично продавливаемую МЬУ суспензию.
Пример 1.
Препарат II разделяют на аликвоты по 1 мл и к каждой аликвоте добавляют трегалозу в соответствии с весовым соотношением трегалоза/липид, представленным в табл. 1/1.
Лиофилизацию проводят в пластинчатом лиофилизаторе, следующим образом:
1) замораживание до -25°С при скорости 0,77°С/мин;
2) поддержание вышеназванной температуры (-25°С) в течение 3 ч;
3) применение вакуума (6 х 10-2) миллибар и поддержание при вышеназванной температуре (-25°С) в течение 2 ч;
4) нагревание до -15°С в течение 20 ч под вакуумом 6 х 10-2 миллибар;
5) нагревание до -10°С в течение 2 ч под вакуумом 6 х 10-2 миллибар;
6) нагревание до +5°С в течение 20 ч под вакуумом 6 х 10-2 миллибар;
7) перекрытие вакуума;
8) введение воздуха.
Лиофилизат (1 мл) повторно гидратируют 1 мл дистиллированной воды и хранят при температуре окружающей среды в течение 30 мин для того, чтобы эффективно восстанавливать липосомы.
Затем 0,5 мл вышеуказанного раствора разбавляют 10 мл физиологического раствора для измерения среднего размера липосом с помощью прибора МСОМР 370.
В табл. 1/1 представлены полученные результаты.
Таблица 1/1
| Средний | размер липосом до и после лиофилизации | ||
| Партия | Трегалоза/липиды (по весу) | До | После |
| ЬМ/302 | 0 | 102 | 911,7 |
| 1:2 | 102 | 115, 9 | |
| 1:1 | 102 | 109,7 |
| 2:1 | 102 | 167, 9 | |
| ЬМ/303 | 0 | 99,2 | 911,7 |
| 1:2 | 99,2 | 98,7 | |
| 1:1 | 99,2 | 109,8 | |
| 2:1 | 99,2 | 291,3 | |
| ЬМ/304 | 0 | 98,6 | 911,8 |
| 1:2 | 98,6 | 94,9 | |
| 1:1 | 98,6 | 105,8 | |
| 2:1 | 98,6 | 794 |
Табл. 1/1 показывает, что отсутствие трегалозы вызывает в некоторой степени слияние липосом, подтверждаемое увеличением их среднего размера. Неожиданно, оказалось, что увеличение количества трегалозы (трегалоза/липиды 2:1) также вызывает в некоторой степени слияние с последующим увеличением среднего размера.
Подобные результаты также получают с препаратом IV.
Средний размер липосом и количество ионидамина определяют в некотором количестве проб, свежеприготовленных как описывают выше. Впоследствии образцы помещают в холодильник при 5°С и отбирают пробы через определенные интервалы, повторно гидратируют, чтобы определить количество активного ингредиента и средний размер липосом. Полученные таким образом результаты представлены в табл. 1/2.
Таблица 1/2
Соотношение трегалоза/липид (вес/вес) 1:2
| Партия | Время, месяцы | ИРЬС количество, мг/мл | Средний размер, нм |
| ЬМ/328 | 10* | 3,3 | 107 |
| 1 | 3,2 | 110 | |
| 3 | 3,2 | 114 | |
| 6 | 3,1 | 127,2 | |
| 1.М 329 | Т0 | 3,2 | 103,3 |
| 1 | 3,2 | 101 | |
| 3 | 3,2 | 110,5 | |
| 6 | 3,1 | 115 | |
| ЬМ/330 | Т0 | 3,3 | 99,2 |
| 1 | 3,4 | 99,5 | |
| 3 | 3,2 | 100,5 | |
| 6 | 3,1 | 113,6 |
*1 - время Пример 2.
Препарат III лиофилизируют, как описано в примере 1, и определяют средний размер липосом до и после лиофилизации (табл. 2/1), а также средний размер липосом и количество мелатонина в свежих препаратах и в препаратах, хранившихся при 5°С, как описано в вышеуказанном примере (таблица 2/2).
Таблица 2/1
Средний размер липосом до и после лиофилизации
| Партия | Трегалоза/липиды (вес/вес) | До | После |
| ЬМ/336 | 0 | 92 | 16953 |
| 1:2 | 92 | 6875 | |
| 1:1 | 92 | 96,5 | |
| 2:1 | 92 | 109,7 | |
| ЬМ/337 | 1:2 | 92 | 146,3 |
| 1:1 | 92 | 98,8 | |
| 2:1 | 92 | 8319,8 | |
| ЬМ/338 | 1:2 | 92 | 179,7 |
| 1:1 | 92 | 225,7 | |
| 2:1 | 92 | 2984 |
Подобные результаты получены также с препаратом I.
Таблица 2/2
Соотношение трегалоза/липид (вес/вес) 1:1
| Партия | Время, месяцы | НРЬС количество, мг/мл | Средний размер, нм |
| ЬМ/359 | 1о | 6 | 104 |
| 1 | 6 | 103,2 | |
| 3 | 5,8 | 109,5 | |
| ЬМ/360 | 1о | 6,5 | 107,2 |
| 1 | 6,5 | 106,3 | |
| 3 | 6,7 | 113,6 | |
| ЬМ/361 | 1о | 6,2 | 98,4 |
| 1 | 6,3 | 99 | |
| 3 | 6 | 100,5 |
Пример 3.
Препарат VI лиофилизируют, как описано в примере 1, и определяют средний размер липосом до и после лиофилизации (табл. 3/1), а также средний размер липосом и количество биндарита в свежих препаратах и в препаратах после хранения при 5°С, как описано в вышеуказанном примере (табл. 3/2).
Таблица 3/1
| Средний | размер липосом до и после лиофилизации | ||
| Партия | Трегалоза/липиды (вес/вес) | До | После |
| 1.М 342 | 0 | 102,7 | 7524,1 |
| 1:2 | 102,7 | 928 | |
| 1:1 | 102,7 | 109 | |
| 2:1 | 102,7 | 140 | |
| 1.М 343 | 1:2 | 102,7 | 546,6 |
| 1:1 | 102,7 | 112,3 | |
| 2:1 | 102,7 | 1559,2 | |
| 1.М 344 | 1:2 | 102,7 | 194,9 |
| 1:1 | 102,7 | 112,2 | |
| 2:1 | 102,7 | 4722 |
Таблица 3/2 Соотношение трегалоза/липид (вес/вес) 1:1
| Партия | Время, месяцы | НРЬС количество, мг/мл | Средний размер, нм |
| ЬМ/356 | Ϊ0 | 3,2 | 135,4 |
| 1 | 3,1 | 128 | |
| 3 | 3,2 | 131,3 | |
| ЬМ/357 | Ϊ0 | 3,1 | 122 |
| 1 | 3,1 | 121 | |
| 3 | 3,2 | 126,2 | |
| ЬМ/358 | Ϊ0 | 3,1 | 126 |
| 1 | 3,1 | 122,8 | |
| 3 | 2,9 | 121,8 |
Пример для сравнения 1.
Препарат II разделяют на аликвоты по 1 мл и добавляют трегалозу к каждой аликвоте с соотношением трегалоза/липид по весу, представленном в табл. 1 - сравнение.
Препарат затем замораживают при температуре жидкого азота (-195,8°С) и лиофилизируют в течение 20 ч, не контролируя наружную температуру.
Лиофилизат (1 мл) повторно гидратируют 1 мл дистиллированной воды и сохраняют при температуре окружающей среды в течение 2 ч.
0,5 мл вышеуказанного раствора далее разбавляют 10 мл физиологического раствора для измерения среднего размера липосом с помощью прибора МСОМР 370.
Полученные результаты представляют в табл. 1 - сравнение ниже.
Таблица для сравнения 1
Средний размер липосом до и после лиофилизации
| Партия | Трегалоза/липиды (по весу) | До | После |
| ЬМ/302 | 0 | 102 | 911,8 |
| 1:2 | 102 | 254,8 | |
| 1:1 | 102 | 219,3 | |
| 2:1 | 102 | 773,7 | |
| ЬМ/303 | 0 | 99,2 | 911,8 |
| 1:2 | 99,2 | 349,9 | |
| 1:1 | 99,2 | 180,4 | |
| 2:1 | 99,2 | 717,2 | |
| ЬМ/304 | 0 | 98, 6 | 911,8 |
| 1:2 | 98,6 | 722,5 | |
| 1:1 | 98,6 | 161,1 | |
| 2:1 | 98,6 | 150 |
Таблица - сравнения 1 демонстрирует, что когда лиофилизацию проводят при температуре жидкого азота или в отсутствии трегалозы, или в присутствии трегалозы в соотношениях, представленных в таблице, имеет место некоторое слияние липосом, подтверждаемое увеличением их среднего размера. Кроме того, представленные данные указывают, что когда лиофилизацию проводят при температуре жидкого азота, течение самой лиофилизации (для препаратов той же самой композиции) не всегда воспроизводит одинаковые результаты.
Claims (12)
1. Лиофилизированная композиция, содержащая трегалозу и липидные липосомы, включающие биологически активный ингредиент, отличающаяся тем, что биологически активный ингредиент является практически не растворимым в воде, соотношение трегалоза/липид по весу составляет <1,5 и вся трегалоза добавлена с внешней стороны липосом, уже сформированных перед лиофилизацией.
2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что биологически активный ингредиент, который является практически не растворимым в воде, выбирают из группы, состоящей из ионидамина, мелатонина, циклоспорина А и биндарита.
3. Композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что липиды выбирают из группы, состоящей из фосфоглицеридов, глицеридов, диглицеридов, триглицеридов, фосфолипидов, галактозил- и глюкозиллипидов, холестерина и его производных, сфинголипидов и их смесей.
4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что липиды представляют собой фосфолипиды.
5. Композиция по любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что весовое соотношение трегалоза/липид составляет от 1:2 до 1:1.
6. Композиция по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что средний размер липосом составляет от 50 до 250 нм.
7. Лиофилизированная композиция по п.6, отличающаяся тем, что средний размер липосом составляет от 50 до 100 нм.
8. Способ лиофилизации композиции, содержащей трегалозу и липидные липосомы, включающие биологически активный ингредиент, отличающийся тем, что
a) от 0,2 до 1,5 вес. ч. трегалозы добавляют к каждой весовой части липидов водной липосомной композиции, в которой средний размер липосом составляет от 50 до 250 нм, липосомы содержат биологически активный ингредиент, который является практически не растворимым в воде;
b) вышеуказанную композицию охлаждают с помощью холодильной пластины лиофилизатора до температуры от -5 до -70°С при скорости охлаждения от 0,5 до 2°С/мин;
c) по достижении предопределенной температуры вышеуказанную композицию сохраняют при вышеуказанной температуре в интервале от 2 до 5 ч;
б) осуществляют вакуумирование до давления от 5 х 10-1 до 8 х 10-2 миллибара, оставляя температуру холодильной пластины при охлаждающей температуре, определенной в пункте Ь) в течение периода времени от 2 до 5 ч;
е) температуру холодильной пластины доводят до -15°С и поддерживают до полного удаления воды.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что в фазе Ь) замораживающая температура составляет от -20 до -30°С.
10. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что в фазе Ь) скорость охлаждения составляет 0,77°С/мин.
11. Способ по любому из пп.8-10, отличающийся тем, что в фазе с) время составляет 3 ч.
12. Способ по любому из пп.8-11, отличающийся тем, что в фазе б) вакуум составляет 6 х 10-2 миллибара.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT97MI000362A IT1289938B1 (it) | 1997-02-20 | 1997-02-20 | Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e' incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e |
| PCT/EP1998/000817 WO1998036736A1 (en) | 1997-02-20 | 1998-02-12 | Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing the said preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA199900751A1 EA199900751A1 (ru) | 2000-10-30 |
| EA001637B1 true EA001637B1 (ru) | 2001-06-25 |
Family
ID=11376097
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA199900751A EA001637B1 (ru) | 1997-02-20 | 1998-02-12 | Фармацевтическая композиция, содержащая лиофилизированные липосомы, включающие инкапсулированный активный ингредиент, практически не растворимый в воде, и способ получения композиции |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6319517B1 (ru) |
| EP (1) | EP0981332B1 (ru) |
| JP (1) | JP4290767B2 (ru) |
| KR (1) | KR100496802B1 (ru) |
| CN (1) | CN1089581C (ru) |
| AR (1) | AR011681A1 (ru) |
| AT (1) | ATE285754T1 (ru) |
| AU (1) | AU744115B2 (ru) |
| BG (1) | BG64580B1 (ru) |
| CA (1) | CA2288958C (ru) |
| CZ (1) | CZ295998B6 (ru) |
| DE (1) | DE69828394T2 (ru) |
| EA (1) | EA001637B1 (ru) |
| ES (1) | ES2235320T3 (ru) |
| GE (1) | GEP20022734B (ru) |
| HK (1) | HK1026148A1 (ru) |
| HU (1) | HU225593B1 (ru) |
| IL (1) | IL131327A (ru) |
| IT (1) | IT1289938B1 (ru) |
| PL (1) | PL190628B1 (ru) |
| PT (1) | PT981332E (ru) |
| SK (1) | SK282931B6 (ru) |
| TR (1) | TR199902025T2 (ru) |
| UA (1) | UA70296A (ru) |
| WO (1) | WO1998036736A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA981352B (ru) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE273516T1 (de) * | 1999-06-23 | 2004-08-15 | Cornell Res Foundation Inc | Entwässerung/rehydratisierung von markierten liposomen auf einer prüfeinrichtung |
| US6576460B1 (en) | 1999-10-28 | 2003-06-10 | Cornell Research Foundation, Inc. | Filtration-detection device and method of use |
| MXPA05007572A (es) * | 2003-01-17 | 2005-11-17 | Threshold Pharmaceuticals Inc | Tratamiento de hiperplasia prostatica benigna. |
| AU2006235478B2 (en) | 2005-04-12 | 2011-07-21 | Elan Pharma International Limited | Nanoparticulate and controlled release compositions comprising cyclosporine |
| WO2008036979A2 (en) * | 2006-09-22 | 2008-03-27 | Guilford F Timothy | Topical application of melatonin directly or in liposomes for the amelioration of itching and histamine and non-histamine related inflammatory skin changes |
| CN101049504B (zh) * | 2007-04-05 | 2010-05-19 | 广州立恩生物科技有限公司 | 一种脂质体药物载体及其制备方法 |
| US9446147B2 (en) | 2011-02-24 | 2016-09-20 | The Ohio State University | Membrane stabilizing compositions and methods |
| JP6133308B2 (ja) | 2011-10-21 | 2017-05-24 | セレーター ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 凍結乾燥リポソーム |
| US8999292B2 (en) | 2012-05-01 | 2015-04-07 | Translatum Medicus Inc. | Methods for treating and diagnosing blinding eye diseases |
| US20150224221A1 (en) * | 2012-08-31 | 2015-08-13 | Chung-Ang University Industry-Academic Cooperation Foundation | Method for preparing microspheres for emboli, and method for preparing microspheres to which drug-containing carrier is bound |
| US11344497B1 (en) | 2017-12-08 | 2022-05-31 | Quicksilver Scientific, Inc. | Mitochondrial performance enhancement nanoemulsion |
| US10722465B1 (en) | 2017-12-08 | 2020-07-28 | Quicksilber Scientific, Inc. | Transparent colloidal vitamin supplement |
| KR102649069B1 (ko) | 2018-05-31 | 2024-03-19 | 주식회사 엑소코바이오 | 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 안면 홍조 개선용 조성물 |
| BR112020026629A2 (pt) | 2018-06-27 | 2021-03-23 | Breath Therapeutics Gmbh | Composições farmacêuticas na forma liofilizada |
| KR102058961B1 (ko) | 2018-07-28 | 2019-12-24 | 주식회사 엑소코바이오 | 엑소좀의 동결건조 방법 |
| KR102163806B1 (ko) | 2018-07-30 | 2020-10-07 | 주식회사 엑소코바이오 | 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피지분비 감소용 조성물 |
| EA202092892A1 (ru) | 2018-12-04 | 2021-05-27 | Брес Терапьютикс Гмбх | Ингаляционные композиции, содержащие макроциклические иммуносупрессанты |
| US11291702B1 (en) | 2019-04-15 | 2022-04-05 | Quicksilver Scientific, Inc. | Liver activation nanoemulsion, solid binding composition, and toxin excretion enhancement method |
| CA3144861A1 (en) | 2019-06-25 | 2020-12-30 | Translatum Medicus, Inc. | Processes of making 2-((1-benzyl-1h-indazol-3-yl)methoxy)-2-methylpropanoic acid and its derivatives |
| CN111358955B (zh) * | 2020-04-01 | 2023-05-02 | 重庆理工大学 | 一种用于治疗脂质代谢疾病的炎症靶向的宾达利纳米粒、制备方法及其应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1173360A (en) * | 1979-06-22 | 1984-08-28 | Jurg Schrank | Pharmaceutical preparations |
| FR2542749B1 (fr) * | 1983-03-18 | 1985-07-12 | Beghin Say Sa | Copolymere allyloligosaccharide-acrylique salifie, procede de preparation du copolymere et application comme super-absorbant |
| US4857319A (en) * | 1985-01-11 | 1989-08-15 | The Regents Of The University Of California | Method for preserving liposomes |
| US4963362A (en) * | 1987-08-07 | 1990-10-16 | Regents Of The University Of Minnesota | Freeze-dried liposome mixture containing cyclosporin |
| US5683714A (en) * | 1991-04-19 | 1997-11-04 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Liposomal cyclosporin pharmaceutical formulation |
| US5817336A (en) * | 1993-04-02 | 1998-10-06 | Orion-Yhtyma Oy | Composition containing selegiline |
| GB9320668D0 (en) * | 1993-10-07 | 1993-11-24 | Secr Defence | Liposomes containing particulare materials |
| ES2115343T3 (es) * | 1993-11-05 | 1998-06-16 | Amgen Inc | Metodo de preparacion de liposomas y encapsulacion de material. |
-
1997
- 1997-02-20 IT IT97MI000362A patent/IT1289938B1/it active IP Right Grant
-
1998
- 1998-02-12 DE DE69828394T patent/DE69828394T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 ES ES98910659T patent/ES2235320T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 GE GEAP19984991A patent/GEP20022734B/en unknown
- 1998-02-12 IL IL13132798A patent/IL131327A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 PL PL98335207A patent/PL190628B1/pl unknown
- 1998-02-12 JP JP53622898A patent/JP4290767B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-12 EP EP98910659A patent/EP0981332B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 PT PT98910659T patent/PT981332E/pt unknown
- 1998-02-12 TR TR1999/02025T patent/TR199902025T2/xx unknown
- 1998-02-12 WO PCT/EP1998/000817 patent/WO1998036736A1/en active IP Right Grant
- 1998-02-12 SK SK1110-99A patent/SK282931B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 AT AT98910659T patent/ATE285754T1/de active
- 1998-02-12 CA CA002288958A patent/CA2288958C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-12 CN CN98802737A patent/CN1089581C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-12 AU AU64969/98A patent/AU744115B2/en not_active Ceased
- 1998-02-12 EA EA199900751A patent/EA001637B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 HU HU0001464A patent/HU225593B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 KR KR10-1999-7007538A patent/KR100496802B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 CZ CZ19992925A patent/CZ295998B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 UA UA99095150A patent/UA70296A/ru unknown
- 1998-02-12 US US09/367,715 patent/US6319517B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-18 ZA ZA981352A patent/ZA981352B/xx unknown
- 1998-02-20 AR ARP980100754A patent/AR011681A1/es active IP Right Grant
-
1999
- 1999-09-16 BG BG103738A patent/BG64580B1/bg unknown
-
2000
- 2000-09-01 HK HK00105485A patent/HK1026148A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA001637B1 (ru) | Фармацевтическая композиция, содержащая лиофилизированные липосомы, включающие инкапсулированный активный ингредиент, практически не растворимый в воде, и способ получения композиции | |
| US7718190B2 (en) | Self forming, thermodynamically stable liposomes and their applications | |
| US5993846A (en) | Bioadhesive emulsion preparations for enhanced drug delivery | |
| US5082664A (en) | Prostaglandin-lipid formulations | |
| JP2792702B2 (ja) | 乾燥時に改善された安定性を示すリポソームの調製方法 | |
| US5380531A (en) | Accumulations of amino acids and peptides into liposomes | |
| US5262168A (en) | Prostaglandin-lipid formulations | |
| JP2018150342A (ja) | 凍結乾燥リポソーム | |
| JPS6252724B2 (ru) | ||
| JPH11507628A (ja) | 改良されたリポソーム製剤 | |
| US20020102293A1 (en) | Process for increasing the stability of liposome suspensions that contain hydrophilic active ingredients | |
| WO1989003689A1 (en) | Tocopherol-based pharmaceutical systems | |
| CA2285985C (en) | A method for preparing aqueous liposomal compositions comprising an active ingredient which is highly insoluble in water | |
| MXPA99007684A (en) | Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing thesaid preparation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): BY KZ |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |