HUT77649A - Kalpain és/vagy katepszin B inhibitor hatású N-acil-4-benzil-5-hidroxi-oxazolidin-származékok és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények - Google Patents

Description

Az agy érrendszeri működés hiányából eredő neurológiai sérülések az elhalálozás és a rokkantság egyik fő okának tekinthetők. Az ischemiás neuron elhalás etiológiája feltehetően az, hogy az intracelluláris kálcium koncentráció számos intracelluláris eseményt indukál és így a sejtfunkciót gátolja vagy ebben sérülést okoz [Hong, Seung-Chyul és munkatársai, Síroké, 25, 663-669 t

Λ • · · · **· ·· · (1994); Siesjö, B.K. és munkatársai, J. Cereb. Blood Flow Metab., 9, 127-140 (1989; Siesjö, B.K., J. Neurosurg., 77, 169-184 (1992)]. Fiziológiai körülmények között az intracelluláris kálcium koncentráció szigorúan szabályozott. A kálcium homeostazis vesztés, valamint az ischemia során fellépő' intracelluláris kálcium koncentráció növekedése különféle kálciumra érzékeny mechanizmusok nem megfelelő aktiválását teszi lehetővé, amely folyamatok ezután a sejtfunkciókra igen károsak lehetnek. A kálcium-aktivált semleges proteázok amely proteázok a calpain néven jelzett enzimek folyamatos stimulálása az ischemia során a szubsztrát proteinek körében nem szokásos proteolízist eredményez [Seubert, P. és munkatársai, Brain Rés., 492, 366-370 (1989); Inuzuka, T. és munkatársai; Stroke, 21, 917-922 (1990); Lee, K.S., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 88, 7233-7237 (1991)].

A calpain előnyös szubsztrátjai a sejtváz fehérjék, mint például a mikrocsatornával kapcsolatos 2 protein (MAP2), a spectrin és az idegrost proteinek. Egyéb ilyen szubsztrátok lehetnek a kulcsszerepet betöltő szabályozó enzimek, mint például a protein-kináz C és a kálcium/calmodulin-függő proteinkínáz II. A fenti sejtváz proteinek a folyamat során lebomlanak és a fenti szabályozó enzimek mennyisége az ischemiás epizód után lecsökken. Bármely fenti szerkezet és szabályozó protein nem szabályozott proteolízise súlyosan befolyásolhatja a sejt életképességét. A kálcium-aktivált proteolízis inhibitorai ennélfogva alkalmas terápiás befolyást gyakorolhatnak az ischemiás sejt sérülés kezelésében.

Az utóbbi időben kimutatták, hogy a Cbz-Val-Phe-H dipeptidil-aldehid sejtbe behatoló calpain inhibitor, amely igen alacsony K, értékkel rendelkezik sérült membránú készítményekben és érintetlen sejt rendszerekben is [Mehdi, S., Trends Biochem., Sci., 16,150-153 (1991)]. A CBz-Val-Phe-H alkalmas

63.993/SM

I betegekben a katepszin B inhibiálására; lásd Bey, P. és munkatársai, 0363284 számú 1990. április 11-én közzétett európai szabadalmi bejelentését. Ezen túlmenően a Cbz-Val-Phe-H vegyülettel kezelt patkányok jelentősen kisebb térfogatú agyi infarctust mutatnak, mint a fiziológiás sóoldattal vagy hordozóanyaggal kezelt kontroll állatok. A 30 ng/kg vagy 60 mg/kg Cbz-Val-Phe-H kumulatív dózis intravénás adagolása esetében azt tapasztalták, hogy ez hatásosan csökkentette az infarctust, az ödémát és a kálcium-aktivált proteolízist. A lefejezés utáni ischémia proteolitikus válaszfüggvényét ugyancsak csökkentette a Cbz-Val-Phe-H [Hong, Seoul-Chyul és munkatársai, Stroke, 25, 663-669 (1994)].

Kísérleteink során kimutattuk, hogy a Cbz-Val-Phe-H szubsztituáit-oxazolídin származékai alacsony Kj értékkel rendelkeznek calpainnal, valamint katepszin B enzimmel szemben, ugyanakkor igen jó behatolási képességekkel rendelkeznek sejtekben. A találmány tárgya az ilyen kezelést igénylő betegekben terápiás hatóanyagok calpain és/vagy katepszin B inhibiálására. A találmány tárgya továbbá terápiás szerek, amelyek alkalmasak akut vagy krónikus neurodegenerációs rendellenességben szenvedó'k kezelésére.

A találmány összefoglalása

A találmány tárgya az (I) általános képletű vegyületek és ezek gyógyszerészetileg elfogadható sói, ahol az általános képletben R és Q jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, hidroxilcsoport, 1-4 szénatomos alkilcsoport, 1-4 szénatomos alkoxi-csoport, nitrocsoport, aminocsoport vagy halogénatom;

Rí és R₂ jelentése egymástól függetlenül 1-4 szénatomos alkilcsoport;

R₃ jelentése hidrogénatom, 1-8 szénatomos alkanoil-csoport, (a) képletű csoport, (b) képletű csoport vagy (c) képletű csoport;

63.993/SM • ·

R₄ és R₅ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy benzilcsoport;

R₆ jelentése terc-butiloxi-karbonil-csoport, karbobenziloxi-csoport vagy (d) általános képletű csoport, ahol az általános képletben Z jelentése nitrogénatom vagy CH-csoport; és B jelentése (e) képletű csoport, (f) általános képletű csoport; (g) általános képletű csoport, (h) képletű csoport, (i) képletű csoport, (j) képletű csoport, (k) képletű csoport, (I) képletű csoport vagy (m) képletű csoport, ahol R’ jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

R₇ jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;

R₈ jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport;

m jelentése 0 vagy 1;

n jelentése 0 vagy 1;

p jelentése 0-3 közötti egész szám; és q jelentése 0-3 közötti egész szám.

Az (I) általános képletű találmány szerinti vegyületek calpain és/vagy katepszin B inhibitor hatással rendelkeznek, ennek következtében alkalmasak akut vagy krónikus neurodegenerációs betegségek kezelésében történő felhasználásra, amely betegségek lehetnek ischemiás gutaütés (trombolitikus vagy embólikus eredetű); vérzéses gutaütés és ezt követő véredény rendellenesség; szívizom infarctus; koronaér megbetegedésből, illetve beültetett szerv beültetéséből származó neurológiai következmény; fejtrauma; Alzheimer kór; idős korral járó dementia; véredény dementia; Parkinson kór; amyotrophiás laterális sclerosis és hasonlók.

63.993/SM

• · ·

A találmány részletes leírása

A leírásban az „1-4 szénatomos alkilcsoport” elnevezés alatt egyenes szénláncú, telített vagy elágazó szénláncú telített szénhidrogén csoportokat értünk, amelyek 1-4 szénatomot tartalmazhatnak. Ilyen csoportok lehetnek például metilcsoport, etilcsoport, n-propil-csoport, izopropil-csoport, n-butil-csoport, izobutil-csoport és hasonló csoportok. A leírásban az „1-4 szénatomos alkoxi-csoport elnevezés alatt olyan csoportokat értünk, amelyek telített egyenes vagy elágazó szénláncú 1-4 szénatomos szénhidrogén csoportok, amelyek oxigénatomon keresztül kapcsolódnak. Ilyen csoportok lehetnek például a metoxicsoport, etoxicsoport, propoxi-csoport, n-butoxi-csoport, izobutoxi-csoport, szek-butoxi-csoport, terc-butoxi-csoport és hasonló csoportok. A leírásban „1-8 szénatomos alkanoil-csoport” elnevezés alatt például formilcsoportot, acetil-csoportot, propionil-csoport, butiril-csoport, pentanoil-csoportot, hexanoil-csoportot, 2-etil-hexanoil-csoportot és hasonló csoportokat értünk. A leírásban „halogénatom”, „haló” vagy „halogenid” elnevezések alatt fluoratomot, klóratomot, brómatomot vagy jódatomot értünk.

A leírásban a „Ts” vagy a „tozilát-csoport” elnevezés alatt p-toluol-szulfonát-csoportot értünk, amely az (o) képletű csoport.

A leírásban a „Bn” elnevezés alatt benzilcsoportot értünk, amely a (p) képletű csoport.

A leírásban a „CBz” vagy „karbobenziloxi-csoport” elnevezés alatt karbobenziloxi-csoportot értünk, amely a (q) képletű csoport.

A leírásban a „BOC” vagy „t-butoxi-karbonil-csoport” elnevezés alatt terc-butoxi-karbonil-csoportot értünk, amely az (r) képletű csoport.

A „sztereoizomer” elnevezés alatt általában az olyan molekulákra vonatkozó elnevezést értünk, amelyek csak atomjaik térbeli elrendezésében külön63.993/SM • · böznek egymástól. Ebbe beleértjük a tükörképi izomereket (enantiomereket), a geometriai izomereket (cisz/transz izomerek) és az olyan vegyületek izomerjeit, amelyekben egynél több királis atom található és ugyanakkor egymásnak nem tükörképi izomerjei (diasztereomereket). Az aminosavak esetében az L/D vagy az R/S elnevezés alatt a IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical

Nomenclature, Eur. J. Biochem., 138: 9-37 (1984) közleményben leírtakat értjük.

A „gyógyszerészetileg elfogadható só” elnevezés alatt olyan sókat értünk, amelyek az alkalmazott dózisban, amellyel a kívánt hatást elérik, lényegében nem toxikusak és nem fejtenek ki jelentős farmakológiai aktivitást. Az elnevezésbe beleértett sók például a hidrobromid, a hidroklorid, a kénsavas só, a foszforsavas só, a salétromsavas só, a hangyasavas só, az ecetsavas só, a propionsavas só, a borostyánkősavas só, a glikolsavas só, a tejsavas só, az almasavas só, a borkősavas só, a citromsavas só, az aszkorbinsavas só, az a-keto-glutársavas só, a glutaminsavas só, az aszparaginsavas só, a maleinsavas só, a hidroxi-maleinsavas só, a piruvinsavas só, a fenil-ecetsavas só, a benzoesavas só, a p-amino-benzoesavas só, az antranilsavas só, a phidroxi-benzoesavas só, a szalicilsavas só, a hidroxi-etánszulfonsavas só, etilén-szulfonsavas só, a halo-benzolszulfonsavas só, a toluolszulfonsavas só, a naftilszulfonsavas só, a metánszulfonsavas só, a szulfanilsavas só és hasonlók.

A természetes aminosavak, amelyeket a találmány szerinti leírásban megjelölünk, valamely királis atomot tartalmaznak. Hacsak másképp nem jelöljük, előnyösen alkalmazható vegyületek olyan optikailag aktív aminosavak, amelyek L-konfigurációjúak; azonban a találmány tárgykörébe beleértjük azt,

63.993/SM

- 7 ··· • · · hogy az alkalmazott aminosavak lehetnek D-konfigurációjúak is. Az (I) általános képletű vegyületeken, amelyekben az általános képletben m és n jelentése egész szám, lehetnek D- és L-izomerek keverékei is, beleértve a racém keverékeket. Az α-aminosavak elfogadott rövidítései, amelyek a leírásban alkalmazottak, az 1. táblázatban találhatók.

1. táblázat

Aminosav	Jelzés
Alán in	Alá
Izoleucin	Ile
Leu cin	Leu
Glicin	Gly
Valin	Val
Norvalin	Nva
Norleucin	Nle
Fenil-alanin	Phe
Tirozin	Tyr
p-klór-fenil-alanin	p-CI-Phe
p-nitro-fenil-alanin	p-NO2-Phe
p-NH2-fenil-alanin	p-NH2-Phe

Az (I) általános képletű vegyületek, ahol az általános képletben R₆ jelentése terc-butoxi-karbonil-csoport, karbobenziloxi-csoport vagy (d) általános képletű csoport, ahol a szubsztituensek jelentése a korábban megadott, előállításának kiindulási anyagai vagy kereskedelemben kapható anyagok vagy a szakember könnyen előállíthatja ezeket. Például az olyan vegyületeket, ahol az általános képletben a közbenső termék (d) általános képletű vegyület, ahol Z jelentése korábban megadott és B jelentése (e) csoport, (f) általános képletű csoport, (g) általános képletű csoport, (h) általános képletű csoport, (i) képletű

63.993/SM • · csoport, 0) képletű csoport, (k) képletű csoport, leírták Peet és munkatársai OPI 0529568 számú európai szabadalmi bejelentésben, amelyet 1993. március 3-án tettek közzé. Ezen túlmenó'en az (s) képletű közbenső termékeket az I. reakcióvázlatnak megfelelő eljárással állíthatjuk elő. Valamennyi szubsztituens jelentése, hacsak másképp nem jelezzük, a korábban megadott. A kiindulási anyagok és a reagensek a szakember számára könnyen rendelkezésre állnak.

Az I. reakcióvázlatban leírjuk az általános előállítási eljárást olyan közbenső termékek előállítására, amelyek a (t) általános képlettel jellemezhetők, ahol az általános képletben Z jelentése a korábban megadott.

Az A reakciólépésben az (1) képletű megfelelő 2,5-piridin-dikarbonsav

2-metil-észter (Nippon Kagaku Zasshi, 1967, 88, 563) karboxilcsoportját savkloriddá alakítjuk a szakember számára jól ismert eljárás segítségével. Reagensként például tionil-kloridot alkalmazunk, és így a megfelelő (2) képletű 6-karbo-metoxi-nikotinoil-kloridot nyerjük.

A B reakciólépésben a (2) képletű savkloridot morfolinnal amidáljuk a szakember számára jól ismert eljárás segítségével, így a (3) képletű 5-(morfolin-4-karbonil)-2-piridin-karbonsav, metil-észtert állítjuk elő.

A C reakciólépésben a (3) képletű 5-(morfolin-4-karbonil)-2-piiridin-karbonsav, metil-észtert a szakember számára ismert eljárással hidrolizáljuk és például a hidrolízis során lítium-hidroxid metanolos elegyét alkalmazzuk, így a (4) képletű 5-(morfolin-4-karbonil)-2-piridin-karbonsavat nyerjük.

Ezen túlmenően az (u) általános képlettel leírható közbenső terméket a

II. reakcióvázlat szerinti eljárással állíthatjuk elő, ahol a képletekben valamenynyi szubsztituens jelentése a korábban megadott. A reakciókban alkalmazott reagensek és kiindulási anyagok a szakember számára könnyen rendelkezésre állnak.

63.993/SM ··· • ··

All. reakcióvázlatban bemutatjuk az általános előállítási eljárást a (v) általános képletű közbenső termékek előállítására, ahol az általános képletben Z jelentése a korábban megadott.

Az A reakciólépésben az (1) képletű 2,5-piridin-dikarbonsav 2-metil-észter (Nippon Kagaku Zasshi, 1967, 88, 563) karboxilcsoportját terc-butil-észterré alakítjuk a szakirodalomban jól ismert eljárások segítségével. A reakcióban például diciklohexil-karbodiimid terc-butanolos adduktját alkalmazzuk (Synthesis, 1979, 570). Igya megfelelő (5) képletű 2,5-piridin-dikarbonsav,

2-metil-észter, 5-terc-butil-észtert állítjuk elő.

Például az (1) képletű 2,5-piridin-dikarbonsav, 2-metil-észtert moláris feleslegű diciklohexil-karbodiimid terc-butanollal képzett adduktjával elegyítjük megfelelő szerves oldószerben, amely lehet például diklórmetán. A reakciót általában 0°C-szobahőmérséklet közötti hó'mérsékleten körülbelül 2-24 óra időtartamon át hajtjuk végre. Az (5) képletű 2,5-piridin-dikarbonsav, 2-metilészter, 5-terc-butil-észtert a reakcióelegyből szokásos extrakciós eljárásokkal a szakirodalomban ismertek szerint izoláljuk és kívánt esetben kristályosítás segítségével tisztítjuk.

A B reakciólépésben az (5) képletű 2,5-piridin-dikarbonsav, 2-metil-észter, 5-terc-butil-észtert morfolin segítségével amidáljuk, és így a megfelelő (6) képletű 6-(morfolin-4-karbonil)-nikotínsav, terc-butil-észtert állítjuk elő.

Például az (5) képletű 2,5-piridin-dikarbonsav, 2-metil-észter, 5-terc-butil-észtert moláris feleslegű morfolinnal elegyítjük alkalmas szerves oldószerben, mint például tetrahidrofuránban. A reakciót általában szobahőmérsékleten-visszafolyatás melletti forrás hőmérséklet közötti hőmérsékleten 5 óra-3 nap időtartamon át hajtjuk végre. A (6) képletű 6-(morfolin-4-karbonil)-nikotinsav, terc-butil-észtert a reakcióelegyből szokásos, szakirodalomban ismert

63.993/SM

- 10 ·· · · extraktív eljárásokkal izoláljuk és kívánt esetben kristályosítás segítségével tisztítjuk.

A C reakciólépésben a (6) képletű 6-(morfolin-4-karbonil)-nikotinsav, terc-butil-észtert hidrolizáljuk. A hidrolízisben például sósav nitrometános oldatát alkalmazzuk. így a megfelelő (7) képletű 6-(morfolin-4-karbonil)-nikotinsavat nyerjük.

A VI. reakcióvázlatban alkalmazott kiindulási anyagot, amely az (I) általános képletű vegyület előállítására alkalmas, a III. reakcióvázlat szerinti eljárásnak megfelelően állíthatjuk elő. A reakcióvázlatban, hacsak másképp nem jelöljük, valamennyi szubsztituens jelentése a korábban megadott. Az alkalmazott reagensek és kiindulási anyagok a szakember számára könnyen rendelkezésre állnak.

Alii. reakció vázlat A reakciólépésében a (8) képletű vegyületeket a (9a) általános képletű vegyületekkel kapcsolási reakcióban reagáltatjuk. A reakciót a szakirodalomban a peptid-szintézisben általában alkalmazott eljárásokkal hajthatjuk végre. Például egy szokásos peptid-szintézisben a peptideket úgy hosszabbítjuk meg, hogy az N-terminális savmaradék α-aminocsoportjáról a védőcsoportot eltávolítjuk, majd a vegyülethez a következő N-védett aminosavat peptidkötés segítségével kapcsoljuk. A védőcsoport eltávolítási és kapcsolási eljárást mindaddig ismételjük, amíg a kívánt szekvenciát nem nyerjük. Ezt a kapcsolási reakciót végrehajthatjuk lépésenként az egyes aminosavakkal a

III. reakcióvázlatban leírtaknak megfelelően vagy végrehajthatjuk egyes fragmensek kondenzációjával vagy a két módszer kombinációja révén, végül végezhetjük szilárd fázisú peptid-szintézis segítségével is a Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 1963, 85, 2149-2154 közleményben leírt eljárásnak megfelelően,

63.993/SM • · · · •··· ····

- 11 amely közleményt referenciaként adunk meg. Amennyiben szilárd fázisú szintézist alkalmazunk, a C-terminális karbonsavat oldhatatlan hordozóanyaghoz (általában polisztirolhoz) kapcsoljuk. Ezek az oldhatatlan hordozóanyagok olyan kötést képeznek, amely a szekvencia meghosszabbítási reakciókörülményei között stabilak, azonban később könnyen hasíthatok. Ilyen hordozóanyagok lehetnek például: klór- vagy bróm-metil-gyanta, hidroxi-metil-gyanta és amino-metil-gyanta. Számos fenti gyanta kereskedelemben kapható mégpedig úgy, hogy már tartalmazza a kívánt C-terminális aminosavat is.

A fentieken kívül a peptid szintézist leírták a Stewart és Young, „Solid Phase Peptide Synthesis”, 2nd ec., Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984); Gross, Meienhofer, Udenfriend, Eds., „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology”, Vol. 1,2, 3, 5 és 9, Academic Press, New York, 1980-1987; Bodanszky, „Peptide Chemistry: A Practical Textbook”, Springer-Verlag, New York (1988); és Bodanszky és munkatársai „The Practice of Peptide Synthesis”, Sprinter-Verlag, New York (1984) közleményekben is, amelyeket referenciaként adunk meg.

A két aminosav vagy egy aminosav és egy peptid vagy két peptid fragmens közötti kapcsolási reakciót szokásos kapcsolási eljárásokkal hajthatjuk végre. Ezek lehetnek az azid-eljárás, a vegyes karbonsav anhidrid (izobutil-klór-formiát) eljárás, a karbodiimid eljárás (diciklohexil-karbodiimid, diizopropil-karbodiimid vagy vízoldható karbodiimid), az aktív észter-eljárás (p-nitro-fenil-észter, N-hidroxi-borostyánkősav-imido-észter) eljárás, a Woodward reagens K eljárás, a karbodiimidazol-eljárás, a foszfor reagens-eljárás, amely lehet például BOP-CI vagy az oxidációs-redukciós eljárások. Néhány fenti eljárás (különösen a karbodiimid-eljárás) elősegíthető 1-hidroxi-benzotriazol-ada63.993/SM

- 12 ···· ···· ··· • · « golásával. A kapcsolási reakciókat vagy oldatban (folyékony fázisban) vagy szilárd fázisban hajthatjuk végre.

Az egyes felépítő aminosavak funkciós csoportjait általában a kapcsolási reakciók során védó'csoporttal kell ellátni, azért, hogy a mellékreakciókat elkerüljük. A védőcsoportok például lehetnek a Greene, „Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley & Sons, New York (1981) és „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology”, Vol. 3, Academic Press, New York (1981) közleményekben leírt védőcsoportok, amelyeket referenciaként adunk meg.

A C-terminális savmaradék α-karboxilcsoportját általában észtercsoport védőcsoporttal látjuk el, amelyet ezután hasíthatunk, és így karbonsavat nyerhetünk. Az alkalmazható védőcsoportok például lehetnek 1) alkil-észterek, mint például metilészter és terc-butil-észter; 2) aril-észterek, mint például benzil-észter és szubsztituált benzil-észter vagy 3) enyhe bázikus kezeléssel vagy enyhe redukciós eljárással eltávolítható észterekk, mint például triklór-etil-észter és fenacil-észterek.

Mindenegyes aminosav α-aminocsoportját, amelyet a növekedő peptidlánchoz kapcsolni kívánunk, védőcsoporttal kell ellátni. A szakirodalomban alkalmazott bármely védőcsoport alkalmazható. Ilyen védőcsoportok lehetnek például: 1) acil-típusú védőcsoportok, mint például formilcsoport, trifluor-acetil-csoport, ftaloil-csoport és p-toluolszulfonil-csoport; 2) aromás karbamát-típusú csoportok, mint például benziloxi-karbonil-csoport (CBz vagy Z) és szubsztituált benziloxi-karbonil-csoportok, 1-(p-bifenil)-1-metil-etoxi-karbonil-csoport és 9-fluorenil-metiloxi-karbonil-csoport (Fmoc); 3) alifás-karbamát-típusú csoportok, mint például terc-butoxi-karbonil-csoport (Boc), etoxi-karbonil-csoport, diizopropil-metoxi-karbonil-csoport és alliloxi-karbonil-csoport; 4) ciklusos alkil63.993/SM

-karbamát-típusú csoportok, mint például a ciklopentiloxi-karbonil-csoport és az adamantiloxi-karbonil-csoport; 5) alkil-típusú csoportok, mint például a trifenil-metil-csoport és a benzilcsoport; 6) trialkil-szilil-csoportok mint például trimetil-szilil-csoport; és 7) tiocsoportot tartalmazó csoportok, mint például a feniltio-karbonil-csoport és a ditia-szukcinoil-csoport. Előnyösen alkalmazható a-aminocsoport védőcsoportok a Boc, a Cbz vagy az Fmoc, különösen előnyösen alkalmazható csoport a Boc csoport. Számos aminosav származék, amely alkalmas védőcsoportot tartalmaz és peptid szintézisben alkalmazzák, kereskedelemben kapható.

Az újonnan adagolt aminosav maradék α-aminocsoport védőcsoportját a következő aminosavval végzett kapcsolási reakció előtt el kell távolítani. A védőcsoportok eltávolítás! reakciókörülményeit leírták a Greene, „Protective Groups in Organic Chemistry”, Chapter 7, John Wiley & Sons, New York (1981) közleményben. Amennyiben a vegyületben Boc csoportot alkalmazunk, az eltávolítás! reakciót tiszta trifluor-ecetsavban vagy diklórmetános oldatában végezhetjük vagy végezhetjük sósav dioxános oldatával vagy etilacetátos oldatával is. A kapott ammónium-sót ezután a kapcsolási reakció végrehajtása előtt semlegesítjük vagy in situ semlegesítjük, amennyiben bázikus oldatokat, mint például vizes puffereket vagy tercier-aminok diklórmetános vagy dimetilformamidos oldatát adagoljuk a reakcióelegyhez. Amennyiben védőcsoportként Fmoc csoportot alkalmazunk, a hasítási reakciót végezhetjük piperidin vagy szubsztituált piperidin dimetil-formamidos oldatával, de alkalmazhatunk erre a célra bármely másodrendű-amint vagy vizes bázikus oldatot is. A védőcsoport eltávolítását általában 0°C - szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten hajtjuk végre.

63.993/SM

- 14 • · * ·

Bármely aminosavat, amely oldalláncban funkciós csoportot tartalmaz, a peptid szintézise során védőcsoporttal kell ellátni, amely védőcsoport bármely fenti csoport lehet. A szakember felismeri, hogy a megfelelő védőcsoport kiválasztása és alkalmazása a fenti oldallánc funkciós csoportokon függ az aminosav típusától, illetve a pepiidben található egyéb védőcsoportok típusától. Az ilyen védőcsoportok kiválasztása jelentős, mivel ezek az α-amino-csoport védőcsoport eltávolítása során illetve a kapcsolási reakció során nem hasadhatnak.

Például, amennyiben α-aminocsoport védőcsoportként Boc csoportot alkalmazunk, az aminosavak oldalláncában található hidroxilcsoportokat mint például a Tyr, az Ser vagy a Thr aminosavban található csoportokat benzilcsoport (Bn)-éter védőcsoporttal láthatjuk el.

Amennyiben szilárd fázisú szintézist alkalmazunk, a peptidet a gyantáról általában párhuzamosan hasítjuk le annak során, amikor a védőcsoportokat is eltávolítjuk. Amennyiben a reakcióban Boc védőcsoportot alkalmazunk a vízmentes HF reagenssel történő reakció alkalmas hasításra, amely reaktáns segédanyagokat is tartalmaz, amely lehet dimetil-szulfid, anizol, tioanizol vagy p-krezol. A hasítási reakciót előnyösen 0°C hőmérsékleten végezzük, és így a peptidet a gyantáról eltávolítjuk. A peptid hasítását egyéb savas reagensekkel is végrehajthatjuk, amelyek lehetnek például trifluor-metánszulfonsav/trifluor-ecetsav keverék. Amennyiben Fmoc védőcsoportokat alkalmazunk, az N-terminális Fmoc csoportot a korábban leírt reagensek segítségével hasíthatjuk. A peptid egy gyantáról történő lehasítását, illetve az egyéb védőcsoportok eltávolítását végezhetjük trifluor-ecetsav és különféle adalékanyagok, mint például anizol, stb. alkalmazásával.

63.993/SM • · ·

- 15 • · · · ··« ♦··· ··'« . * · · · « ··

Részletesebben a III. reakcióvázlat eljárása szerint az A reakciólépésben a (Vili) általános képletű α-aminosavat, ahol az általános képletben X jelentése alkalmas α-karboxilesöpört védőcsoport, mint például metilészter, alkalmas vízmentes szerves oldószerben, mint például vízmentes dimetil-formamidban vagy vízmentes diklórmetánban inért atmoszférában, mint például nitrogén atmoszférában oldjuk. Az oldathoz ezután ekvivalens mennyiségű N-hidroxi-benzotriazol hidrátot, egy ekvivalens 1-(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot és 1 ekvivalens (9a) általános képletű védett a-aminosavat adagolunk, amely alkalmas vízmentes szerves oldószerben oldott, mint például vízmentes dimetil-formamidban vagy vízmentes diklórmetánban oldott reagens. A reakcielegyet ezután kb. 1-15 órán át keverjük. A (10) általános képletű kapcsolt terméket ezt követően a szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk és tisztítjuk, amelyek lehetnek extrakciós eljárások, illetve gyorskromatográfia. Például a reakcióelegyet alkalmas szerves oldószerrel, mint péládul etilacetáttal hígítjuk, majd az elegyet vízzel mossuk és vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk. Ezután a keveréket leszűrjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagéien alkalmas eluens, mint például etilacetát/hexán elegy segítségével tisztítjuk, és így a (10) általános képletű kapcsolt terméket nyerjük.

Más eljárás szerint a III. reakcióvázlat A reakciólépésében a (9a) általános képletű alkalmasan védett α-aminosavat alkalmas szerves oldószerben, inért atmoszférában, mint például nitrogén atmoszférában oldjuk. Alkalmazható szerves oldószerek lehetnek petroléterek, valamely klórozott-szénhidrogén, mint például széntetraklorid, diklórmetán, etilén-klorid vagy kloroform; klórozott-aromás oldószer, mint például 1,2,4-triklór-benzol vagy o-diklór-benzol; szén63.993/SM

diszulfid; valamely éter-oldószer, mint például dietil-éter, tetrahidrofurán vagy

1-4-dioxán vagy valamely aromás-oldószer, mint például benzol, toluol vagy xilol. A kapcsolási reakcióban előnyösen alkalmazható oldószer a diklórmetán. Az oldatot ezt követően 1-4 ekvivalens alkalmas aminnal reagáltatjuk. Alkalmazható aminok lehetnek tercier-szerves aminok, mint például tri-(kis szénatomos alkil)-aminok, mint például trietilamin; vagy aromás aminok, mint például pikolinok, kollidinek és piridin. Amennyiben piridint, pikolinokat vagy kollidineket alkalmazunk, ezeket nagy feleslegben is használhatjuk és ezek egyben a reakció oldószereként is szolgálhatnak. Különösen előnyösen alkalmazható a kapcsolási reakcióban az N-metil-morfolin (NMM). Az oldatot ezt követően körülbelül -20°C hőmérsékletre hűtjük, majd az elegyhez 1 ekvivalens izobutil-klór-formiátot adagolunk. Ezután a reakcióelegyet körülbelül 10-30 percen át keverjük, majd 1-4 ekvivalens (8) általános képletű aminosav-észtert adagolunk hozzá (ahol az általános képletben X jelentése észtercsoport, mint például metil-észter- vagy etilészter-csoport és az aminosav lehet savaddíciós só formájú vagy lehet szabad bázikus formájú is). A reakcióelegyet 30 perc - 2 órán át kb. -20°C hőmérsékleten keverjük, majd hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni és 1-3 órán át keverjük. Ezután a (10) általános képletű kapcsolt terméket a szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk és tisztítjuk, amelyek lehetnek például extrakciós eljárások és gyorskromatográfia. Például a reakcióelegyet alkalmas szerves oldószerrel, mint például diklórmetánnal hígítjuk, majd az elegyet vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot szilikagélen alkalmas eluens, mint például etilacetát vagy hexán eluens alkalmazásával gyorskromatográfia segítségével tisztítjuk, és így a (10) általános képletű kapcsolt terméket nyerjük.

63.993/SM ·*»· M'f

- 17 ···· ····

A III. reakcióvázlat A1 reakciólépésében a (10) általános képletű kapcsolt terméken található (Pg) védőcsoportot szakirodalomban ismert eljárások segítségével eltávolítjuk, lásd például a T.W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis”, Chapter 7, 1981, John Wiley % Sons, Inc. közleményt. Ezután az elsőrendű amint R₆ általános képletű vegyülettel kapcsoljuk és így a (11) általános képletű kapcsolt terméket nyerjük. Például amennyiben a (10) általános képletű kapcsolt termékben Pg jelentése tercier-butil-karbamát (Boc), a vegyületet metanolos sósav oldatban oldjuk, majd az oldatot több órán át keverjük és végül vákuumban bepároljuk. A maradékot ezután vízben oldjuk, majd az oldatot telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal semlegesítjük és ezután etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen alkalmas eluens, mint például etilacetát/hexán alkalmazásával tisztítjuk, és így az elsőrendű-amint nyerjük.

Más eljárás szerint, amennyiben Pg jelentése a (10) általános képletű kapcsolt termékben terc-butil-karbamát-csoport (BOC), a vegyületet trifluorecetsavban oldjuk és szobahőmérsékleten 1-12 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet óvatosan vízbe öntjük, majd nátrium-hidrogénkarbonát segítségével semlegesítjük és végül etilacetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves extraktumokat vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd az elegyet leszűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen alkalmas eluens, mint például etilacetát/hexán alkalmazásával tisztítjuk és így az elsőrendű-amint nyerjük.

Alii. reakcióvázlat A2 reakciólépésében előállított elsőrendű-amint az általános képletű R₆ reagenssel reagáltatjuk, és így a (11) általános képletű kapcsolt terméket állítjuk elő. A reakciót a szakirodalomban ismert eljárások63.993/SM ·*» · ·0·· *» · nak megfelelően végezzük. Például amennyiben R₆ jelentése a (9c) általános képletű sav, a (9c) általános képletű savat kapcsolási reakcióban reagáltatjuk a

III. reakcióvázlat A reakciólépésében megadott fent idézett eljárásnak megfelelően. Például a (9c) általános képletű savat alkalmas szerves oldószerben mint például diklórmetánban inért atmoszférában oldjuk. Ezután az elegyet 1-4 ekvivalens alkalmas aminnal, mint például N-metil-morfolinnal reagáltatjuk. Az elegyet ezt követően kb. -20°C hőmérsékletre hűtjük, majd 1 ekv. izobutil-klór-formiátot adagolunk hozzá. A reakcióelegyet ezután kb. 10-30 percen át keverjük, majd 1-4 ekvivalens fent előállított elsőrendű-amint adagolunk hozzá. A reakcióelegyet 30 perc - 2 órán át körülbelül -20°C hőmérsékleten keverjük, majd hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni és 1-3 órán át ezen a hőmérsékleten keverjük. A kapcsolt (11) általános képletű terméket ezután szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk vagy tisztítjuk. Például alkalmazható eljárások az extraktív eljárások és a gyorskromatográfia. Például a reakcióelegyet alkalmas szerves oldószerrel, mint például diklór-metánnal hígítjuk, majd az oldatot vízzel mossuk és vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot szilikagélen alkalmas eluens, mint például etilacetát/hexán alkalmazásával gyorskromatográfia segítségével tisztítjuk, és így a (11) általános képletű kapcsolt terméket nyerjük.

Más eljárás szerint a fent előállított elsőrendű-amint alkalmas vízmentes szerves oldószerben, mint például diklórmetánban inért atmoszférában, mint például nitrogén atmoszférában oldjuk. Az oldathoz 1 ekvivalens N-hidroxibenzotriazol hidrátot, 1 ekvivalens 1-(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid hidrokloridot és 1 ekvivalens megfelelő vízmentes szerves oldószerben, mint például diklórmetánban oldott (9c) általános képletű savat adagolunk. A reakcióelegyet ezután kb. 1-15 órán át keverjük. A (11) általános képletű kapcsolt

63.993/SM

- 19 terméket ezt követően a szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk és tisztítjuk, amelyek lehetnek például extrakciós eljárások és gyorskromatográfia. Például a reakcióelegyet alkalmas szerves oldószerrel, mint például etilacetáttal hígítjuk, majd az oldatot vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen alkalmas eluens, mint például etilacetát/hexán alkalmazásával tisztítjuk és így a (11) általános képletű kapcsolt terméket nyerjük.

A (11) általános képletű kapcsolt terméket közvetlenül is előállíthatjuk a

III. reakcióvázlatban leírt B reakciólépés szerint. A reakció során a (8) általános képletű α-aminosavat, ahol az általános képletben X jelentése alkalmas a-karboxilcsoport-védőcsoport, mint például metilészter-csoport, a (9b) általános képletű α-aminosavval kapcsoljuk. A (9b) általános képletű α-aminosav könynyen előállítható úgy, hogy a (9b’) általános képletű aminosavval az R₆ általános képletű szubsztituenst kapcsoljuk, ahol az általános képletben X jelentése alkalmas α-karboxilcsoport védőcsoport, mint például metilészter-csoport. A kapcsolási reakciót a szakember számára ismert eljárások szerint végezhetjük, mint például a III. reakcióvázlat A reakciólépésében leírt eljárás segítségével hajthatjuk végre. Az így nyert kapcsolt termékben található a-karboxilcsoport-védőcsoportot a szakirodalomban ismert eljárások segítségével lassíthatjuk, és így a (9b) általános képletű α-aminosavat állíthatjuk elő. Például amennyiben X jelentése metilcsoport vagy etilcsoport, a vegyületet etanolban oldjuk, majd egyenlő térfogatú vízzel elegyítjük és az elegyhez 1 ekvivalens lítium-hidroxidot adagolunk. A kapott reakcióelegyet 1-6 órán át keverjük. Ezt követően a kapott savat szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk. Például a szerves oldószert vákuumban elpárologtatjuk, majd a maradék vizes oldatot

63.993/SM •··· ·· · • · • · · · · · • · · · ·

- 20 híg sósav segítségével megsavanyítjuk. A vizes oldatot ezután alkalmas szerves oldószerrel, mint például etilacetáttal extraháljuk, majd az egyesített extraktumokat vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, az elegyet leszűrjük, majd vákuumban bepároljuk. így a (9b) általános képletű α-aminosavat nyerjük.

A III. reakcióvázlat, C reakciólépésében a (11) általános képletű kapcsolt termékből a szakirodalomban ismert eljárások szerint a védőcsoportot eltávolítjuk vagy a terméket a szilárd fázisról lehasítjuk. így a (12) általános képletű savat nyerjük. Például amennyiben a (11) általános képletben X jelentése metilcsoport vagy etilcsoport, a vegyületet alkalmas szerves oldószerben, mint például etanolban oldjuk, majd az elegyet körülbelül azonos térfogatú vízzel keverjük. A kapott oldathoz keverés közben 1-2 ekvivalens lítium-hidroxidot adunk, majd a reakcióelegyet 1-6 órán át keverjük. A kapott savat ezután szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk és tisztítjuk. Például a szerves oldószert vákuumban elpárologtatjuk, majd a maradó vizes oldatot híg sósav segítségével megsavanyítjuk. A vizes fázist ezt követően alkalmas szerves oldószerrel, mint például etilacetáttal extraháljuk és az egyesített szerves extraktumokat vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot ezután gyorskromatográfia segítségével szilikagélen alkalmas eluens, mint például metanol/kloroform elegy segítségével tisztítjuk, és így a (12) általános képletű savat nyerjük.

A (I) általános képletű vegyület előállítására alkalmas VI. reakcióvázlatban alkalmazható további kiindulási anyagokat a IV. reakcióvázlat szerinti eljárással állíthatjuk elő. A reakcióvázlatban, hacsak másképp nem jelöljük, valamennyi szubsztituens jelentése a korábban megadott. A reakcióvázlatban al63.993/SM

- 21 kalmazott reagensek és kiindulási anyagok a szakember számára könnyen rendelkezésre állnak.

A IV. reakcióvázlat A1 reakciólépésében a (10a) általános képletű kapcsolt terméket [amelyet a III. reakcióvázlat szerint állítunk elő, ahol R₈ = R! és R_? jelentése hidrogénatom] olyan reakcióban reagáltatjuk, hogy a védőcsoportot eltávolítjuk és elsőrendű-amint állítunk elő. Az eljárást a III. reakcióvázlat A1 reakciólépésében leírt eljárással analóg módon hajthatjuk végre. A kapott elsőrendű-amint ezután a (9a”) általános képletű védett α-aminosavval kapcsolási reakcióban reagáltatjuk, a reakciót a III. reakcióvázlat A reakciólépésében leírt eljárással analóg módon hajtjuk végre. így a (13) általános képletű kapcsolt terméket nyerjük.

A IV. reakcióvázlat C1 reakciólépésében a fent előállított (13) általános képletű kapcsolt termékből a védőcsoportot eltávolítjuk, és így elsőrendű-amint állítunk elő. A reakciót a III. reakcióvázlat A1 reakciólépésében leírt eljárásnak megfelelően végezzük. A kapott elsőrendű-amint ezután az R₆ reagenssel kapcsolási reakcióban reagáltatjuk. A reakciót a korábban a III. reakcióvázlat A reakciólépésében leírt eljárással analóg módon hajtjuk végre, és így a (14) általános képletű kapcsolt terméket nyerjük.

Más eljárás szerint a (14) általános képletű fenti kapcsolt terméket közvetlenül is előállíthatjuk a IV. reakcióvázlat B1 és B2 reakciólépéseinek megfelelően. A (10a) általános képletű kapcsolt termékből a védőcsoportot eltávolítjuk, és így elsőrendű-amint állítunk elő. A reakciót a III. reakcióvázlat A1 reakciólépésének megfelelően hajtjuk végre. A kapott elsőrendű-amint ezután a (9b”) általános képletű α-aminosavval kapcsolási reakcióban reagáltatjuk (amely aminosavat a III. reakcióvázlat szerinti eljárással állítunk elő, ahol az

63.993/SM

- 22 • · · • ·· általános képletben R_a jelentése R₂). A reakciót a III. reakcióvázlat A reakciólépésének megfelelően hajtjuk végre, így a (14) általános képletű kapcsolt terméket nyerjük.

A IV. reakcióvázlat C reakciólépésében a (14) általános képletű fent előállított kapcsolt termékből a védőcsoportot eltávolítjuk vagy a vegyületet szilárd fázisról lehasítjuk. A reakciót a szakirodalomban jól ismert eljárásoknak megfelelően hajtjuk végre, például a III. reakcióvázlat C reakciólépésében alkalmazott eljárást alkalmazzuk, és így a (15) általános képletű savat nyerjük.

A III. és IV. reakcióvázlatok szerinti eljárásban leírt kapcsolási reakciók, amelyek során az aminosav szekvenciát állítjuk elő, nem limitálják a találmány tárgykörét. A szakember könnyen megállapíthatja, hogy a III. és IV. reakcióvázlatokban leírt kapcsolási szekvencia a kiindulási anyag függvényében változtatható. Például a szubsztituált vagy nem szubsztituált fenil-alanin lehet az utolsó savmaradék, amelyet a lánchoz kapcsolunk a VI. reakcióvázlatban leírt ciklizációs reakció előtt.

A III., IV. és VI. reakcióvázlatokban, amennyiben R_? jelentése metilcsoport, alkalmazott kiindulási anyagok a V. reakcióvázlat szerinti eljárással állíthatók elő. A reakcióvázlatban, hacsak másképp nem jelöljük, valamennyi szubsztituens jelentése a korábban megadott. A reakcióban alkalmazott reagensek és kiindulási anyagok a szakirodalomban jól ismertek és könnyen rendelkezésre állnak.

Az V. reakcióvázlat A reakciólépésében a (16) általános képletű a-aminosavat, ahol az általános képletben X jelentése alkalmas a-karboxilcsoport-védőcsoport, mint például metilészter-csoport, az R₆ általános képletű vegyülettel kapcsolási reakcióban reagáltatjuk. A reakciót a III. reakcióvázlat A reak63.993/SM • · · · • · · · · · ·

- 23 »· ··· · • · · · • « * ··· ciólépésében leírtaknak megfelelően végezzük, és így kapcsolt terméket nyerünk.

Az V. reakcióvázlat B reakciólépésében a kapcsolt termékből a védőcsoportot eltávolítjuk vagy a terméket a szilárd fázisról lehasítjuk. A reakciót a szakirodalomban ismert eljárásokkal hajtjuk végre és például a III. reakcióvázlat C reakciólépésében leírt eljárást alkalmazzuk, így a (17) általános képletű savat nyerjük.

Az V. reakcióvázlat C reakciólépésében a (17) általános képletű savat N-metilezzük, és így a (18) általános képletű N-metilezett terméket nyerjük. Például a (16) általános képletű savat alkalmas szerves oldószerben, mint például tetrahidrofuránban oldjuk, majd körülbelül 0°C hőmérsékletre hűtjük és az elegyet felesleg mennyiségű metil-jodiddal reagáltatjuk. Ezt követően az elegyhez keverés közben 1-3 ekvivalens nátrium-hidridet adagolunk, majd az elegyet 10 percen át 0°C hőmérsékleten keverjük, majd szobahőmérsékletre melegítjük és 24-48 órán át ezen a hőmérsékleten keverjük. A terméket ezt követően a szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk, amely lehet például extrakciós eljárás. Például az elegyhez híg vizes sósavat adagolunk, majd a kapott keveréket alkalmas szerves oldószerrel, mint például etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat ezután egyesítjük, majd 5%-os nátriumtioszulfát oldattal, telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot ezután vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, szilikagél oszlopon leszűrjük, majd vákuumban bepároljuk. így a (18) általános képletű N-metilezett terméket nyerjük.

Más eljárás szerint a (18) általános képletű N-metilezett terméket az V. reakcióvázlat D és E reakciólépésében leírt eljárások szerint állíthatjuk elő. Kiindulási anyagként a (17) általános képletű vegyületet alkalmazhatjuk.

63.993/SM • · · ·

• · ·

Az V. reakcióvázlat D reakciólépésében a (17) általános képletű savat ciklizáljuk és így a (17a) általános képletű oxazolidin-vegyületet nyerjük. Például a (17) általános képletű savat alkalmas szerves oldószerben, mint például benzolban oldjuk és felesleg mennyiségű paraformaldehiddel reagáltatjuk. A reakcióelegyhez kb. 0,2-0,4 ekvivalens p-toluolszulfonsavat adagolunk, majd az elegyet kb. 23 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük, miközben a keletkező vizet Dean-Stark vízelválasztó segítségével elválasztjuk. A reakcióelegyet ezután hagyjuk szobahőmérsékletre hülni, majd a terméket a szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk és tisztítjuk. Például a lehűtött reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot szerves oldószerben, mint például etilacetátban oldjuk. A szerves oldatot telített nátriumhidrogénkarbonát oldattal mossuk. Ezután a szerves fázist vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot ezt követően gyorskromatográfia segítségével szilikagélen, alkalmas eluens, mint például etilacetát/hexán alkalmazásával tisztítjuk, és így a (17a) általános képletű oxazolidint nyerjük.

Az V. reakcióvázlat E reakciólépésében a (17a) általános képletű oxazolidint a szakirodalomban ismert körülmények között redukáljuk, és így a (18) általános képleté N-metilezett-vegyületet állítjuk elő. Például a (16) általános képletű oxazolidin vegyületet alkalmas szerves oldószerben, mint például kloroformban oldjuk, majd az oldatot felesleg trifluor-ecetsavval reagáltatjuk. Az oldathoz ezt követően felesleg mennyiségű trietil-szilánt adagolunk. Az adagolást szobahőmérsékleten keverés közben végezzük. A reakcióelegyet ezután

1-7 napon át keverjük, majd vákuumban bepároljuk, és így a (18) általános képletű N-metilezett terméket nyerjük.

63.993/SM

- 25 ···· ···· • · · · • · · «

• · ·

Az (I) általános képletű vegyületeket, ahol az általános képletben R₃ jelentése hidrogénatom, a VI. reakcióvázlatnak megfelelően állíthatjuk elő. A reakcióvázlatban, hacsak másképp nem jelöljük, valamennyi szubsztituens jelentése a korábban megadott. A (19) általános képletű VI. reakcióvázlatban található sav kereskedelemben kapható vagy például előállítható az l-V. reakcióvázlatokban leírt eljárások segítségével. Az alkalmazott reagensek a szakember számára könnyen rendelkezésre állnak.

A VI. reakcióvázlat A reakciólépésében a (19) általános képletű savat ciklizációs reakcióban reagáltatjuk, és így a (20) általános képletű oxazolidinont állítjuk elő. Például egy (19) általános képletű savat elegyítünk 0,1-0,3 ekvivalens p-toluolszulfonsavval és felesleg mennyiségű (w) általános képletű ketonnal vagy aldehiddel, ahol az általános képletben R₄ és R₅ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, arilcsoport, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy benzilcsoport. Az elegyítést alkalmas szerves oldószerben végezzük. Az alkalmazható keton és aldehid lehet például paraformaldehid, acetaldehid, aceton, propionaldehid, butiraldehid, izobutiraldehid, 2-butanon, valeraldehid, izovaleraldehid, 2-metil-butiraldehid, 2-pentanon, 3-pentanon, 2-hexanon,

3-hexanon, 2-metil-3-pentanon, 3-metil-2-pentanon, 4-metil-2-pentanon,

3-heptanon, 4-heptanon, 5-nonanon, benzaldehid, fenil-acetaldehid és hasonlók. Alkalmazható szerves oldószerek lehetnek például benzol, 1,2-diklór-etán, toluol és hasonlók. Előnyösen alkalmazható szerves oldószer a toluol. A (19) általános képletű sav tömegének körülbelül háromszoros mennyiségű 4A molekulaszitát is adagolhatunk a reakcióelegyhez. A reakcióelegyet ezután 2-24 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük, miközben a keletkezett vizet Dean-Stark vízelválasztó segítségével folyamatosan eltávolítjuk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékletre hűtjük, majd vákuumban be63.993/SM • · · · ···· ····

- 26 pároljuk. A terméket szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk és tisztítjuk. Ezek lehetnek például extrakciós eljárások és gyorskromatográfia. Például a maradékot alkalmas szerves oldószerben, mint például etilacetátban oldjuk, majd az oldatot telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk. Ezután a terméket gyorskromatográfia segítségével szilikagélen alkalmas eluens, mint például hexán/etilacetát elegy alkalmazásával tisztítjuk, és így a (20) általános képletű oxazolidinont nyerjük.

A B reakciólépésben a (20) általános képletű oxazolidinont a szakirodalomban ismert eljárások alkalmazásával redukáljuk, és így az (la) általános képletű oxazolidint nyerjük. Például a (20) általános képletű oxazolidinont alkalmas szerves oldószerben, mint például toluolban oldjuk, majd az oldatot -78°C hőmérsékletre hűtjük. Ezt követően az elegyhez körülbelül 2,1 ekvivalens alkalmas redukálószert, mint például diizobutil-aluminium-hidridet adagolunk. A reakcióelegyet 20 perc-2 órán át -78°C hőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakciót híg vizes sósav oldat adagolásával óvatosan leállítjuk, majd az elegyet hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. Ezután a terméket szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk és tisztítjuk, amelyek lehetnek például extraktív eljárások és gyorskromatográfia. Például a reakcióelegyet alkalmas szerves oldószerrel, mint például etilacetáttal extraháljuk. Ezt követően a szerves extraktumokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk. A terméket ezután gyorskromatográfia segítségével szilikagélen alkalmas eluens, mint például etilacetát/hexán alkalmazásával tisztítjuk, és így az (la) általános képletű oxazolidint állítjuk elő.

63.993/SM

- 27 ·· · · ······· • · · · · · • ·· ·· ··· ··· • ········ · ···· · · ·· ···

Az (I) általános képletű vegyületeket, ahol az általános képletben R₃ jelentése 1-4 szénatomos alkanoil-csoport vagy 4-morfolin-karbonil-csoport, a VII. reakcióvázlat szerinti eljárással állíthatjuk elő. A reakcióvázlatban, hacsak másképp nem jelöljük, valamennyi szubsztituens jelentése a korábban megadott. A reakcióvázlatban alkalmazott kiindulási anyagok és reagensek a szakember számára könnyen rendelkezésre állnak.

A VII. reakcióvázlat szerinti eljárásban az (la) általános képletű oxazolidint O-acilezési reakcióban reagáltatjuk a szakirodalomban jól ismert eljárások alkalmazásával és így az (lb) általános képletű O-acilezett-oxazolidint állítjuk elő. Például az (la) általános képletű oxazolidint alkalmas szerves oldószerben, mint például diklórmetánban oldjuk, majd kis felesleg mennyiségű alkalmas trialkil-aminnal, mint például trietilaminnal reagáltatjuk. Ezután az elegyhez szobahó'mérsékleten felesleg mennyiségű alkilezőszert adagolunk, majd az elegyet szobahőmérsékleten 1-24 órán át keverjük. Alkalmazható O-acilező reagensek például az acetil-klorid, a propionil-klorid, a butiril-klorid, az izobutiril-klorid, a benzoil-klorid, a morfolin-karbonil-klorid, a metil-szukcinil-klorid, a metil-oxalil-klorid, az etil-oxalil-klorid, a 2-etil-hexanoil-klorid, a 4-metoxi-fenil-acetil-klorid és hasonlók. A reakcióelegyet ezután vákuumban bepároljuk, majd a terméket szakirodalomban ismert eljárásokkal izoláljuk és tisztítjuk, amelyek lehetnek például extrakciós eljárások és gyorskromatográfia. Például a maradékot híg vizes sósav oldatban oldjuk, majd alkalmas szerves oldószert, mint például etilacetátot adunk az oldathoz. Ezután a rétegeket elválasztjuk, majd a vizes fázist étilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist és a szerves extraktumot egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségé63.993/SM

- 28 • · · «

··· vei szilikagélen alkalmas eluens, mint például etilacetát/hexán alkalmazásával tisztítjuk, és így az (Ib) általános képletű O-acilezett-oxazolidint nyerjük.

A találmány szerinti eljárást az l-VII. reakcióvázlatok szerint az alábbi példákon részletesen bemutatjuk. A példák nem jelentik a találmány tárgykörének korlátozását. A példákban az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk: „g” gramm; „mmol” millimol; „ml” milliliter; „fp” forráspont; „op” olvadáspont; „°C” Celsius fok; „Hgmm” higanymilliméter; „pl” mikroliter; „pg” mikrogramm; „pm” mikromol; „Cbz” karbobenziloxi-csoport; „DMF” dimetil-formamid; „THF” tetrahidrofurán; „TBAF” tetrabutil-ammónium-fluorid; „NMM” N-metil-mofrolin; „DMSO” dimetil-szulfoxid; „HOBT” hidroxi-benzotriazol; „EDC” 1 -(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid hidroklorid.

1. példa í4S-í3(R*),4a,5B11-(1-íí5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidin1-karbonin-2-metil-propil)-karbonsav, fenil-metilészter (MDL 104,903) (II) előállítása

A reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

4,67 g (11,7 mmol, Sigma Chemical Company, St. Louis, MO 63178 terméke) Cbz-Val-Phe-OH-t elegyítünk 5 g paraformaldehiddel és 500 mg (2,6 mmol) p-toluolszulfonsav monohidráttal 120 ml benzol oldószerben. A reakcióelegyet 23 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük, miközben a keletkező vizet Dean-Stark vízelválasztóval elválasztjuk. Ezt követően a reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk, majd az oldatot 60 ml telített vizes nátrium-hidrogénkarbonát oldattal elegyítjük. Az elegyítést keverés közben végezzük, majd a rétegeket elválasztjuk és a vizes fázist 2 x 50 ml etilacetáttal

63.993/SM

···· · · · * ··· extraháljuk. A szerves fázist és a szerves extraktumokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és rövid szilikagél oszlopon leszűrjük. Ezután a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével hexán/etilacetát 95:5-90:10-80:20 gradiens eluens segítségével szilikagél oszlopon tisztítjuk. így 2,00 g (42% termelés) habos [S-(R*,R*)j-{2-metil-1-[[5-oxo-4-(fenil-metil)-3-oxazolidil]-karbonil]-propil}-karbaminsav, fenil-metil-észtert nyerünk.

[a]²⁰D +113.95 (cO.55, CHCI₃);

IR spektrum m/z 411 (M+H⁺), 367, 268, 234, 206, 178, 162, 91.

Elemanalízis a C23H₂₆N₂O₅ képlet alapján:

számított: C, 67.31; H, 6.38; N, 6.83;

mért: C, 67.12; H, 6.51; N, 6.85.

B reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakcíólépés:

1,93 g (4,7 mmol) előző reakciólépésben előállított [S-(R*,R*)]-{2-metil-1-[[5-oxo-4-(fenil-metil)-3-oxazolidil]-karbonil]-propil}-karbaminsav, fenil-metil-észtert oldunk 60 ml toluolban, majd az oldatot -78°C hőmérsékletre hűtjük.

Ezt követően az oldathoz 10 ml (10 mmol, 1m toluolos oldat DIBAL-H) diizobutil-aluminium-hidridet adagolunk. A reakcióelegyet 30 percen át -78°C hőmérsékleten keverjük. Ezt követően az elegyhez óvatosan hozzáadagolunk 60 ml 1n sósavat, majd hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. A reakcióelegyet ezután 3 x 50 ml etilacetáttal extraháljuk, az egyesített szerves extraktumokat vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot ezt követően gyorskromatográfia segítségével hexán/etilacetát 95:5-90:10-80:20-60:40 eluenssel

63.993/SM ·*·· ····

- 30 • * · « · >

• · · · · · · · »· · • ······· · · ···· · · · * ·te· szilikagélen tisztítjuk. 640 mg (33% termelés) olajos, címbeli vegyületet nyerünk.

[a]²⁰D-46.13 (c 0.98, CHCI₃);

IR spektrum (KBr) 3406 (sz), 3032, 2964, 1710, 1640, 1529, 1454 cm'¹;

MS spektrum m/z 411 (M+H⁺), 383, 339, 275, 91.

Elemanalízis a C23H28N2O5 képlet alapján: számított: C, 66.98; H, 6.83; N, 6.79; mért: C, 66.88; H, 7.07; N, 6.81.

2. példa r4S-f3(R*).4a^n-f1-rr5-(acetiloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinill-karboniH-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (MDL 104,860) (III) előállítása

VII. reakcióvázlat:

250 mg (0,6 mmol) 1. példában előállított címbeli vegyületet és 0,3 ml trietilamint oldunk 20 ml diklórmetánban. Ezt követően az oldathoz szobahőmérsékleten 0,3 ml (4,2 mmol) acetil-kloridot adagolunk. A reakcióelegyet éjszakán át keverjük, majd a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk. A maradékot 30 ml etilacetát és 30 ml 1n sósav elegyében oldjuk. A rétegeket elválasztjuk, majd a vizes fázist 3 x 30 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist és a szerves extraktumokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és rövid szilikagél oszlopon szűrjük. Ezt követően a szűrletet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot preparatív vékonyréteg kromatográfia segítségével hexán/etilacetát 80:20 eluens alkalmazásával szilikagélen tisztítjuk. 200 mg (73% termelés) címbeli vegyületet nyerünk, amely sűrű olajos anyag.

63.993/SM

- 31 *·· [cc]²⁰d -36.13 (c 0.64, CHCI₃);

¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI3) δ 0.7, 0.89, 1.00 (három d, 6H, J=6.6 Hz, CH(CH3)2, rotamerek az amidkötés körül), 1.98 és 1.87 (két s, 3H, C(=O)CH3), 2.00 (m, 1H, CH(CH3)2), 2.73, 2.93 és 3.14 (dd, d, d, 2H, J=13.6, 9.6, 7.1 Hz és 13.8, 3.9 Hz, CH2Ph), 3.89 és 4.01 (kétt, 1H, J=8.4,8.8 Hz, CHCH(CH3)2 valin), 4.43 és 4.77 (dd és t, 1H, J=3;9, 9.5 Hz és 7.4 Hz, CHCH2Ph és NCH2O-), 5.34 és 5.53 (két d, 1H, J=9.0, 10.0 Hz, NH), 5.47 és 6.15 (két d, 1H, arány 1:2.1, J=5.2 és 8.6 Hz, OCHOC(=O)CH3), 7.2-7.5 (m sorozat, 10H, fenil); ¹³C NMR spektrum (75 MHz, CDCI3) δ 171.71 (18.03), 18.97 (19.45), 20.86, 30.93, 35.80 (38.32), 58.08 (58.91), 62.11 (62.28), 66.97 (67.03) 78.38 (78.76),

97.36 (97.92), 156.15 (156.26), 168.66 (169.48), 169.70 (170.89);

IR spektrum (film) 3298 (sz), 3032, 2965, 1750,1715, 1651, 1233 cm'¹;

MS spektrum m/z 455 (M+H⁺), 395, 351, 252, 234, 162, 91.

Elemanalízis a C₂₅H₃₀N₂O₆ képlet alapján:

számított: C, 66.07; H, 6.65; N, 6.16;

mért: C, 65.76; H, 6.60; N, 6.16.

3. példa f4S-[3(R*),4a,5B11-(3-f3-metil-1-oxo-2-ff(fenil-metoxi)-karbonil1-amino1-butil)-4-(fenil-metil)-5-oxazolidinil-észter, 4-morfolino-karbonsav (MDL 105,803) (IV) előállítása

VII. reakcióvázlat:

243 mg (0,59 mmol) 1. példában előállított címbeli vegyületet 30 ml diklórmetánban oldunk. Ezt követően keverés közben az oldathoz adagolunk 10 mg (DMAP) 4-dimetil-amino-piridint. Ezután az elegyhez adagolunk 0,2 ml (1,2 mmol) trietilamint és 0,1 ml (0,86 mmol) 4-morfolin-karbonil-kloridot. A re63.993/SM

4

- 32 444 akcióelegyet kb. 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 50 ml etilacetát és 20 ml 1m sósav elegyében oldjuk. A rétegeket elválasztjuk, majd a szerves fázist 50 ml telített sóoldattal mossuk. Ezután a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd az oldatot rövid szilikagél oszlopon szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradék fehér szilárd anyagot etilacetát/hexán oldószerelegyől átkristályosítjuk, és így 200 ml fehér, szilárd címbeli vegyületet nyerünk.

[a]²⁰D .70.51 (c 0.91, DMSO), IR spektrum (KBr) 3302 (sz), 3030, 2965, 1717, 1659, 1433, 1242 cm'¹.

Elemanalízis a C28H35N3O2 képlet alapján: számított: C, 63.99; H, 6.71; N, 8.00;

mért: C, 63.50; H, 6.70; N, 7.93.

4. példa í4S-[3(R*),4a.5Bn-(1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil1-karbonil1-2-metil-propill-metil-karbonsav, fenil-metilészter (MDL 105,423) (V) előállítása

A reakciólépés

V. reakcióvázlat, D reakciólépés:

5,0 g (20 mmol) Cbz-Val-OH-t 300 mg p-toluolszulfonsavat és 4,0 g paraformaldehidet elegyítünk 200 ml 1,2-diklór-etánban. Az elegyet ezután éjszakán át visszafolyatás melletti forráshőmérsékletre melegítjük, miközben a keletkezett vizet Dean-Stark vízleválasztóval folyamatosan eltávolítjuk. Ezt követően a reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk, majd az oldatot 100 ml telített

63.993/SM

- 33 • · · · · nátrium-hidrogénkarbonát oldattal mossuk. A vizes mosófolyatékot 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük, majd az egyesített oldatot 100 ml telített sóoldattal mossuk és vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk. Ezután az oldatot rövid szilikagél oszlopon szűrjük, majd vákuumban bepároljuk, és így olajos, 5,40 g ciklizált vegyületet nyerünk.

B reakciólépés

V reakcióvázlat, E reakciólépés:

2,63 g (10 mmol) fent előállított ciklizált terméket oldunk 100 ml kloroform és 30 ml trifluor-ecetsav elegyében. Az elegyhez 4,8 ml (30 mmol) trietil-szilánt adagolunk. Az adagolást keverés közben szobahőmérsékleten végezzük. A reakcióelegyet kb. 1 héten át keverjük, majd vákuumban bepároljuk, és így 3,21 g (VI) általános képletű sűrű olajos savat nyerünk.

A fenti savat előállíthatjuk az alábbi eljárások szerint is: [lásd az általános eljárást a Pitzele, B.S. és munkatársai, J. Med. Chem., 37, 888-896, (1994)] közleményben.

C reakciólépés

V reakcióvázlat, C reakciólépés:

g (39,8 mmol) Cbz-Val-OH-t 200 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd az oldatot 0°C hőmérsékletre hűtjük. Ezt követően az oldathoz hozzáadagolunk 5 g (120 mmol, 60%-os olajos diszperzió) nátrium-hidridet. Az elegyet 20 percen át keverjük, majd hozzáadagolunk 3 ml (48,2 mmol) metil-jodidot. A kapott reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérsékleten, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően az elegyhez lassan hozzáadagolunk 100 ml vizet, majd a keveréket 50 ml dietil-éterrel mossuk. A vizes fázist ezután 6n sósavval kb. 3 pH értékre megsavanyítjuk, majd 4 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. Ezután a szerves extraktumokat egyesítjük, majd 100 ml 5%-os

63.993/SM

- 34 nátrium-tioszulfát oldattal, ezután 100 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd az oldatot rövid szilikagél oszlopon szűrjük és vákuumban bepároljuk. A kiindulási anyag és a kívánt sav keverékét nyerjük (8,74 g). A keveréket és további 1,5 g Cbz-Val-OH-t 200 ml tetrahidrofuránban oldjuk. Ezután az oldatot 0°C hó'mérsékletre hűtjük, majd az elegyhez 5 g (120 mmol, 60%-os olajos diszperzió) nátrium-hidridet adagolunk. A kapott keveréket 10 percen át elegyítjük, majd 6 ml (96,4 mmol) metit-jodidot adagolunk hozzá. A reakcióelegyet éjszakán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük. Ezt követően az elegyet szobahőmérsékletre hűtjük, majd lassan hozzáadagolunk 100 ml vizet és 3 g lítium-hidroxid monohidrátot. A kapott elegyet 3 órán át keverjük, majd az elegyet 100 ml dietil-éterrel mossuk. A vizes fázist ezután 6n sósavval kb. 3 pH értékre savanyítjuk, majd 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat egyesítjük, majd 100 ml 5%-os nátrium-tioszulfát oldattal és ezután 100 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd az oldatot rövid szilikagél oszlopon szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot 100 ml tetrahidrofurán és 100 ml víz elegyében oldjuk, majd az oldathoz 3 g lítium-hidroxid monohidrátot adunk. A kapott elegyet 2 napon át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 100 ml dietil-éterrel mossuk, majd 6n sósavval kb. 3 pH értékre savanyítjuk. A vizes fázist 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves oldatokat egyesítjük, majd 100 ml 5%-os nátrium-tioszulfát oldattal és 100 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot ezután magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük és végül a szűrletet vákuumban bepároljuk. így 1,19 g savat nyerünk.

63.993/SM

• · · ·

- 35 D reakciólépés

III, reakcióvázlat, B reakciólépés:

2,92 g (11 mmol) HCI.Phe-OCH₃ vegyületet oldunk 20 ml dimetil-formamidban, majd az oldatot 0°C hőmérsékletre hűtjük. Ezt követően az elegyhez

1,7 ml (12 mmol) trietilamint adunk, majd 10 percen át keverjük. Ezt követően az elegyhez hozzáadagoljuk a fent előállított 10 mmol (100 ml tetrahidrofuránban oldott) savat. A sav lehet bármely fenti eljárással előállított termék. Ezt követően az elegyhez hozzáadagolunk 1,62 g (12 mmol) HOBt reagenst és 2,3 g (12 mmol) EDC reagenst. A reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérsékleten, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az elegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 100 ml 1n sósavban oldjuk. Ezután az oldatot 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat egyesítjük, majd 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és 100 ml telített sóoldattal mossuk. Ezután a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével hexán/etilacetát 95:5, majd 9:1 és 8:2, végül 6:4 eluens alkalmazásával tisztítjuk. 3,65 g (86% termelés) kapcsolt terméket nyerünk.

E reakciólépés

III, reakcióvázlat, C reakciólépés:

3,30 g fent előállított kapcsolt terméket 100 ml tetrahidrofurán és 50 ml víz elegyében oldunk. Ezt követően az elegyhez 900 ml lítium-hidroxid monohidrátot adagolunk, majd a reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a reakcióelegyet dietil-éterrel (100 ml) mossuk. Ezután a vizes fázist 6n sósav segítségével kb. 2 pH értékre savanyítjuk. A kapott savas oldatot 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk, majd a szerves extraktumokat

63.993/SM • · ·

- 36 • · · · · · egyesítjük. A szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük és végül a szűrletet vákuumban bepároljuk. 2,47 g (77% termelés) olajos savat nyerünk.

F reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

2,40 g (5,8 mmol) fent előállított savat, 4,0 g parformaldehidet és 200 mg p-toluolszulfonsavat elegyítünk 200 ml 1,2-diklór-etánban. Az elegyet 6 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük, miközben a keletkezett vizet Dean-Stark vízleválasztó segítségével folyamatosan eltávolítjuk. Ezután az elegyet lehűtjük és további 2,0 g paraformaldehidet adagolunk hozzá. Az elegyet ezt követően éjszakán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük, miközben a vizet folyamatosan eltávolítjuk. Ezt követően a keveréket lehűtjük, majd a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk. A maradékot 200 ml etilacetátban oldjuk, majd az oldatot 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és végül 100 ml telített sóoldattal mossuk. Ezután a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát 9:1, majd 8:2 eluens alkalmazásával tisztítjuk. 980 mg (40% termelés) ragadós olajos ciklizált terméket nyerünk.

G reakciólépés

VI. reakcióvázlat, G reakciólépés:

1,90 g (4,48 mmol) fent előállított ciklizált terméket oldunk 50 ml toluolban, majd az oldatot -78°C hőmérsékletre hűtjük. Ezután az oldathoz keverés közben 6 ml (1m toluolos oldat, 6 mmol) diizobutil-aluminium-hidridet adagolunk. Az elegyet 1 órán át keverjük, majd 20 ml vizet adunk hozzá és a keveréket 100 ml 1n sósavba öntjük. A kapott elegyet 3 x 100 ml etilacetáttal extra63.993/SM

- 37 • · · · ···· háljuk, majd a szerves extraktumokat egyesítjük és telített sóoldattal (100 ml) mossuk. A szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük és a szűrletet bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát 8:2, majd 6:4 eluens alkalmazásával tisztítjuk. így 540 mg olajos címbeli végterméket nyerünk.

[ct]²⁰D -93.49 (d.OO, CHCI₃).

5. példa í4S-f3(R*),4a,5B11-(1-fí5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil1-karbonil1-3-metil-butil)-metil-karbaminsav, fenil-metilészter (VII) előállítása

A reakciólépés

V. reakcióvázlat, C reakciólépés:

5,80 g (21,9 mmol, a Sima Chemical Company terméke) Cbz-Leu anyagot oldunk 150 ml tetrahidrofuránban. Ezt követően az oldathoz 11 ml (176 mmol) metil-jodidot adagolunk, majd az elegyet 0°C hőmérsékletre hűtjük. Az elegyhez 3 g (77 mmol, 60%-os olajos diszperzió) nátrium-hidridet adagolunk, majd a reakciókeveréket 10 percen át keverjük. Ezt követően az elegyet hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni és körülbelül 40 órán át ezen a hőmérsékleten keverjük. A keverékhez 100 ml 1n sósavat adagolunk, majd az elegyet 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat egyesítjük, majd 100 ml 5%-os nátrium-tioszulfáttal, ezután 100 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. így 7,36 g olajos N-metilezett terméket nyerünk.

63.993/SM

- 38 B reakciólépés

III, reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,75 g (22 mmol) HCI.Phe-OCH₃ anyagot oldunk 30 ml dimetil-formamidban. Az oldatot 0°C hőmérsékletre hűtjük, majd az elegyhez hozzáadagolunk

6,2 ml (44 mmol) trietilamint. Ezután az elegyet 10 percen át keverjük, majd hozzáadagoljuk 7,36 g (fent előállított 120 ml dimetil-formamidban oldott) N-metilezett vegyület oldatát. Ezután az elegyhez hozzáadagolunk 2,97 g (22 mmol) HOBt reagenst és 4,2 g (22 mmol) EDC reagenst. A kapott reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérsékleten keverjük, majd hagyjuk éjszakán át szobahőmérsékletre melegedni. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk, és az oldatot 100 ml 1n sósavval mossuk. A vizes mosófolyadékot 2 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk, majd a szerves fázist és a szerves extraktumot egyesítjük. A kapott szerves oldatot 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal, majd 100 ml telített sóoldattal mossuk. Ezután a szerves elegyet vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. 10,26 g olajos kapcsolt terméket nyerünk.

C reakciólépés

III, reakcióvázlat, C reakciólépés:

10,26 g fenti kapcsolt terméket oldunk 100 ml tetrahidrofurán és 100 ml víz elegyében. Az elegyhez ezután 1,0 g lítium-hidroxid monohidrátot adagolunk, majd a keveréket 2 órán át szobahőmérsékleten elegyítjük. A reakcióelegyet ezután 100 ml dietil-éterrel mossuk, majd a vizes fázist 6n sósavval kb.

pH értékre savanyítjuk. A vizes fázist ezután 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat egyesítjük, majd 100 ml telített sóoldattal mossuk és végül vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk. Ezután a

63.993/SM • · · ·· ··· • · · · · • · · ···

- 39 szerves oldatot rövid szilikagél oszlopon szűrjük, majd vákuumban bepároljuk.

7,63 g ragacsos olajos savat nyerünk.

D reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

7,50 g (17,6 mmol) fent előállított savat elegyítünk 6 g paraformaldehiddel, 700 ml p-toluolszulfonsav monohidráttal és 19 g 4A molekulaszitával. Az elegyet 200 ml 1,2-diklór-etánban képezzük. A reakcióelegyet ezután 2,5 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük úgy, hogy a keletkezett vizet folyamatosan Dean-Stark vízelválasztóval elválasztjuk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékletre hűtjük, majd az oldatot rövid szilikagél oszlopon szűrjük, amely szűrést 400 ml etilacetát alkalmazásával végzünk. A szűrletet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen jhexán/etilacetát 95:5, majd 9:1, majd 8:2 eluens alkalmazásával tisztítjuk. 5,19 g (67% termelés) ragacsos olajos ciklizált terméket nyerünk.

E reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fent előállított ciklizált terméket redukálunk az 1. példában leírt eljárásnak megfelelően DIBAL (10 mmol) 60 ml toluolban készült elegyének alkalmazásával és így a címbeli vegyületet nyerjük.

63.993/SM

- 40 ···· ····

6. példa í4S-[3(R*),4a,5B11-f1-H5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil1-karbonil1-3-metil-butil}-karbaminsav, fenil-metilészter (Vili) előállítása

A reakciólépés

III, reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,65 g (18 mmol) HCI.Phe-O-terc-butil-t oldunk 40 ml dimetil-formamidban. A szuszpenziót 0°C hőmérsékletre hűtjük, majd 5,6 ml (40 mmol) trietilamint adagolunk hozzá. Ezután az elegyet 10 percen át keverjük, majd az elegyhez 50 ml tetrahidrofuránt és ezt követően 4,77 g (18 mmol, 100 ml tetrahidrofuránban oldott) Cbz-Leu-OH reagenst, 2,6 g (19 mmol) HOBt reagenst és 3,63 g (19 mmol) EDC reagenst adagolunk. A reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérsékleten, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 100 ml 1n sósavban oldjuk. A vizes oldatot 4 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk, majd a szerves extraktumot egyesítjük és 100 ml telített nátrium-karbonát oldattal, majd 100 ml telített sóoldattal mossuk. Ezután a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. így olajos 9,93 g kapcsolt terméket nyerünk.

B reakciólépés:

III, reakcióvázlat, C reakciólépés:

9,93 g fent nyert kapcsolt terméket oldunk 20 ml diklórmetánban, majd az oldathoz 10 ml trifluor-ecetsavat adagolunk. A reakcióelegyet éjszakát át szobahőmérsékleten keverjük, majd vákuumban bepároljuk, és így ragadós olajos savat nyerünk.

63.993/SM

- 41 C reakciólépés

VI reakcióvázlat, A reakciólépés:

A fent előállított savat 200 ml 1,2-diklór-etánban oldjuk, majd az oldathoz 5 g paraformaldehidet, 500 ml p-toluolszulfnsav monohidrátot és 19 g 4A molekulaszitát adagolunk. A reakcióelegyet ezt követően kb. 18 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük, miközben a keletkezett vizet Dean-Stark vízleválasztó segítségével folyamatosan eltávolítjuk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékletre hűtjük, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, és így olajos maradékot nyerünk. A fenti szilikagél oszlopot 300 ml etilacetáttal mossuk és ezt a fenti olajos anyaggal egyesítjük. Ezután a kapott oldatot 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal, majd 100 ml telített sóoldattal mossuk, a szerves oldatot végül vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorkromatográfia segítségével szilikagéien hexán/etilacetát 9:1, majd 8:2, majd 6:4 eluens alkalmazásával tisztítjuk. 1,04 g habos ciklizált terméket nyerünk.

D reakciólépés

VI. reakcióvázlat. B reakciólépés:

4,7 mmol fent előállított ciklizált terméket redukálunk az 1. példa szerinti eljárásnak megfelelően DIBAL (10 mmol) 60 ml toluolban készült oldatának alkalmazásával és így a címbeli végterméket nyerjük.

63.993/SM

- 42 • ·

7. példa f4S-f3(R*).4oí,5ftTl-N-f1-IT5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinin-karbonil1-2-metil-propil)-4-morfolin-karboxamid (IX) előállítása

A reakciólépés

6,4 g (54,6 mmol) L-valint és 6,6 g (160 mmol) nátrium-hidroxidot elegyítünk 100 ml vízben. Az oldatot 0°C hőmérsékletre hűtjük, majd 8 ml (68,6 mmol) morfolin-karbonil-klorid 100 ml dietil-éterben készült oldatát csepegtetjük keverés közben az oldathoz. A reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérsékleten, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a rétegeket elválasztjuk és a vizes fázist 6n sósavval, kb. 2 pH értékre savanyítjuk. A megsavanyított vizes fázist ezután 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk. 5,88 g kapcsolt terméket nyerünk.

B reakciólépés

III, reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,32 g (20 mmol) HCI.Phe-OCH₃ vegyületet oldunk 20 ml dimetil-formamidban, majd az elegyet 0°C hőmérsékletre hűtjük. Ezt követően az elegyhez 6 ml trietilamint adagolunk, majd 10 percen át keverjük, végül az elegyhez adagoljuk a fent előállított 4,56 g (10,83 mmol, 150 ml tetrahidrofuránban oldott) kapcsolt terméket. Ezután a keverékhez adunk 2,83 g (21 mmol) HOBt reagenst és 4,0 g (21 mmol) EDC reagenst. A reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérséketen, majd szobahőmérsékleten éjszakán át keverjük. A reakcióelegyet ezután vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 100 ml 1n sósavban oldjuk. Az oldatot 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk, majd az extraktumokat egyesítjük. A szerves oldatot 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal,

63.993/SM

- 43 ···· ···· majd 100 ml telített sóoldattal mossuk és ezután vízmentes magnéziumszulfáton megszárítjuk. A kapott szerves oldatot rövid szilikagél oszlopon szűrjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítjuk. 5,60 g (72% termelés) ragacsos olajos kapcsolt terméket nyerünk.

C reakciólépés

III, reakcióvázlat, C reakciólépés:

5,6 g (14,3 mmol) fent előállított kapcsolt terméket oldunk 100 ml tetrahidrofurán és 100 ml víz elegyében. Ezt követően az elegyhez 670 mg (16 mmol) lítium-hidroxid monohidrátot adunk, majd a reakcióelegyet 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az elegyet 100 ml dietil-éterrel mossuk, majd a vizes fázist 6n sósavval, kb. 2 pH értékre savanyítjuk. A savas vizes fázist ezután 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és az oldatot rövid szilikagél oszlopon szűrjük. Ezután a szűrletet vákuumban bepároljuk. 4,58 g (85% termelés) habos szilárd savat nyerünk.

D reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent előállított savat, 4,0 g paraformaldehidet és 200 mg p-toluolszulfonsav monohidrátot elegyítünk 200 ml 1,2-diklór-etánban. Az elegyet 6 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük, miközben a keletkezett vizet Dean-Stark vízelválasztóval folyamatosan eltávolítjuk. Ezután az elegyet leszűrjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 200 ml etilacetátban oldjuk, majd az oldatot 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és 100 ml telített sóoldattal mossuk. Ezután a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük

63.993/SM • · ·*

- 44 és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítjuk, és így a ciklizált vegyületet nyerjük.

E reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,48 mmol fent előállított cilizált vegyületet 50 ml toluolban oldunk, majd az oldatot -78°C hőmérsékletre hűtjük. Ezt követően keverés közben az oldathoz 6 ml (1m toluolos oldat, 6 mmol) diizobutil-aluminium-hidridet adagolunk. Az elegyet 1 órán át keverjük, majd 20 ml vizet adunk hozzá és 100 ml 1n sósav oldatba öntjük. A kapott keveréket 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk, majd a szerves extraktumot egyesítjük és 100 ml telített sóoldattal mossuk. Ezután a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd az oldatot rövid szilikagél oszlopon szűrjük és a szűrletet bepároljuk. A kapott maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítjuk, és így a címbeli végterméket nyerjük.

8. példa f4S-f4a,5Bn-5-hídroxí-4-(fenil-metil)-3-oxazolídin-karbonsav, feníl-metílészter (X) előállítása

A reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

2,5 g Cbz-Phe-OH-t, 5,0 g paraformaldehidet és 500 mg p-toluolszulfonsavat elegyítünk 100 ml toluolban. Az elegyet 20 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük és a keletkezett vizet Dean-Stark vízleválasztó segítségével folyamatosan eltávolítjuk. Ezt követően a reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 100 ml etil63.993/SM »» + · 999 * acetátban oldjuk, majd az oldatot 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és ezután 100 ml telített sóoldattal mossuk. Ezt követően a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon leszűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát 9:1, majd 8:2 eluens segítségével tisztítjuk. Ezután a terméket etilacetát/hexán oldószerelegyből átkristályosítjuk és második adag kristályt is nyerünk, így 2,10 g (81% termelés) fehér szilárd ciklizált vegyületet kapunk.

[a]²⁰D +201.5 (c 1.00, CHCI₃);

IR spektrum (KBr) 3032, 2966, 1792, 1683, 1433 cm’¹.

Elemanalízis a C₁₈H₁₇NO₄ képlet alapján:

számított: C, 69.44; H, 5.50; N, 4.50;

mért: C, 69.30; H, 5.51; N, 4.46.

B reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fent előállított ciklizált terméket az 1. példa szerinti eljárásnak megfelelően redukálunk DIBAL (10 mmol) alkalmazásával 60 ml toluolban. így a végső címbeli vegyületet nyerjük.

9. példa f4S-f3(R*),4oc,5B11-f1-í[5-(butiril-oxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinin-karbonin-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (MDL 103,821) (XI) előállítása

VII. reakcióvázlat

0,6 mmol, 1. példában előállított [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter,

63.993/SM ·*» · «·<, fc

- 46 μ· ^;··· ;\· ···.

* * * * ·»<

0,3 ml trietilamin és 20 ml diklórmetán elegyét képezzük. Ezt követően az oldathoz szobahőmérsékleten 4,2 mmol butirii-kloridot adagolunk, majd a reakcióelegyet éjszakán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 30 ml etilacetát és 30 ml 1n sósav elegyében oldjuk. A rétegeket elválasztjuk, majd a vizes fázist 3 x 30 ml etilacetáttal extraháljuk. Ezután a szerves oldatokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és az elegyet szilikagél oszlopon szűrjük. Ezután a szűrletet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítjuk. A címbeli vegyületet nyerjük.

9A példa í4S-[3(R*).4a,5B11-(1-FÍ5-(butiril-oxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil1-karbonill-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (MDL 103,821) (XII) előállítása

VII. reakcióvázlat

0,375 g (0,909 mmol, 1. példa szerint előállított) [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilésztert oldunk 3,6 ml diklórmetánban. Ezt követően az elegyhez 0,202 g (2,00 mmol) N-metil-morfolint, valamint 0,194 g (1,82 mmol) butiril-kloridot adunk. A reakcióelegyet leforrasztott mikroampullában éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 25 ml 1n sósavval együtt elválasztó tölcsérbe visszük, majd 1 x 25 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal mossuk. Ezután a szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát 2:1 eluens al63.993/SM

- 47 • · · · · · • ·· ·· «·· ··· • ········ · · ···· · · · · ··· kalmazásával tisztítjuk úgy, hogy az anyagot diklórmetán segítségével visszük az oszlopra. 0,328 g viszkózus színtelen olajos címbeli vegyületet nyerünk.

R_f = 0.56; [ct]²⁰D = -56.4 (CHCI₃, c = 0.700).

10. példa í4S-f3(R*),4a^11-(1-íí5-hidroxi-2.2-dimetil-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinin-karbonin-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (XIII) előállítása

A reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

4,67 g (11,8 mmol, Sigma Chemical Company, St. Louis, MO terméke) Cbz-Val-Phe-OH vegyületet, 5 g acetont és 500 mg (2,6 mmol) p-toluolszulfonsav monohidrátot elegyítünk 120 ml benzolban. Ezt követően a reakcióelegyet kb. 23 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük, miközben a keletkezett vizet Dean-Stark vízelválasztó segítségével folyamatosan eltávolítjuk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékletre hűtjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk, majd az oldatot 60 ml vizes telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal mossuk. A vizes mosófolyadékot 2 x 50 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves oldatokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és rövid szilikagél oszlopon szűrjük. Ezután a szűrletet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot gyorskromatográfia segítségével tisztítjuk és így ciklizált vegyületet nyerünk.

63.993/SM

B reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fent előállított ciklizált vegyületet az 1. példa szerinti eljárásnak megfelelően redukálunk DIBAL (10 mmol) alkalmazásával 60 ml toluolban. A végső címbeli vegyületet nyerjük.

11. példa f4S-í3(R*),4a^Tl-(1-fr5-(acetiloxi)-2,2-dimetil-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinill-karbonin-2-metil-propin-karbaminsav, fenil-metilészter (XIV) előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,6 mmol (10. példában előállított) [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-2,2-dimetil-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilésztert és 0,3 ml trietilamint oldunk 20 ml diklórmetánban. Ezt követően az oldathoz szobahőmérsékleten 0,3 ml (4,2 mmol) acetil-kloridot adagolunk. A reakcióelegyet éjszakán át keverjük, majd ezt követően vákuumban bepároljuk. A maradékot 30 ml etilacetát és 30 ml 1n sósav elegyében oldjuk. A rétegeket elválasztjuk, majd a vizes fázist 3 x 30 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist és az extraktumokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és ezután rövid szilikagél oszlopon szűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk és a maradékot gyorskromatográfia segítségével hexán/etilacetát 80:20 eluens alkalmazásával szilikagélen tisztítjuk. A címbeli vegyületet nyerjük.

63.993/SM

- 49 12. példa f2R-f2a,3(R*),4B.5aTl-(1-íf5-hidroxi-2-metil-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinin-karbonill-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (C) és [2S-f2cc,3(R*).4(x,5Bn-(1-[[5-hidroxi-2-metil-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil1-karbonin-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (D) előállítása

A reakciólépés

VI reakcióvázlat, A reakciólépés:

4,67 g (11,7 mmol, a Sigma Chemical Company, St. Louis, MO terméke) Cbz-Val-Phe-OH vegyületet, 5 g acetaldehidet és 500 mg (2,6 mmol) p-toluolszulfonsavat elegyítünk 120 ml benzolban. A reakcióelegyet 23 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük, miközben Dead-Stark vízleválasztó segítségével a keletkezett vizet folyamatosan eltávolítjuk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékletre hűtjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk, majd az oldatot 60 ml telített vizes nátrium-hidrogénkarbonát oldattal mossuk. Ezután a vizes fázist 2 x 50 ml etilacetáttal extraháljuk, majd a szerves fázist és a szerves extraktumokat egyesítjük. A kapott szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük. Ezután a szűrletet vákuumban bepároljuk, és így az A és B izomer keverék ciklizált vegyületet kapjuk.

Az izomereket ezt követően izolálhatjuk külön-külön gyorskromatográfia alkalmazásával. Más eljárás szerint az izomer keveréket a következő reakciólépésbe vihetjük keverék formában és a DIBAL segítségével végzett redukció után választjuk el az egyes izomereket.

63.993/SM

- 50 B reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

A 4,7 mmol A vagy B fenti ciklizált vegyület egyikét vagy A és B fenti izomerek keverékét az 1. példa szerinti eljárásnak megfelelően redukáljuk. A redukcióban 10 mmol DIBAL-t alkalmazunk 60 ml toluolban, és így a C, illetve a D végtermékeket nyerjük.

13. példa r2R-r2a.3(R*),4B.5an-f1-rr5-hidroxi-2-(fenil-metil)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinin-karbonil1-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter (C) és f2S-í2a,3(R*).4a^Tl-(1-n'5-hidroxi-2-(fenil-metil)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidínin-karbonin-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter (D) előállítása

A reakciólépés

VI reakcióvázlat, A reakciólépés:

4,67 g (11,7 mmol, a Sigma Chemical Company, St. Louis, MO 63178 terméke) Cbz-Val-Phe-OH vegyületet, 5 g fenil-acetaldehidet és 500 mg (2,6 mmol) p-toluolszulfonsav monohidrátot elegyítünk 120 ml benzolban. Ezt követően a reakcióelegyet körülbelül 23 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük, miközben a keletkezett vizet folyamatosan Dean-Stark vízelválasztó segítségével elválasztjuk. A reakcióelegyet ezt követően szobahőmérsékletre hűtjük, majd vákuumban bepároljuk. A kapott maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk, majd az etilacetátos oldatot 60 ml telített vizes nátrium-hidrogénkarbonát oldattal mossuk. A vizes mosófolyadékot 2 x 50 ml etilacetáttal extraháljuk. Ezután a szerves fázist és az extraktumokat egyesítjük,

63.993/SM

- 51 majd az oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk. A kapott oldatot ezután rövid szilikagél oszlopon szűrjük, majd a szűrletet vákuumban bepároljuk. így az A és B izomer keverék ciklizált vegyületeket nyerjük.

A fenti izomereket kívánt esetben gyorskromatográfia segítségével külön-külön izolálhatjuk. Más eljárás szerint a reakcióelegyet az izomer keveréket a következő lépésben keverékként redukálhatjuk, majd az izomereket a DIBAL segítségével végzett redukciós lépés után választjuk el egymástól.

B reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol A vagy B külön cilizált izomereket vagy az A és B izomerek keverékét redukáljuk az 1. példa szerinti eljárásnak megfelelően az 1. példa B reakciólépését alkalmazva. A reakcióban 10 mmol DIBAL-t alkalmazunk 60 ml toluolban, és így a C és D címbeli végtermékeket nyerjük.

14. példa f4S-f3(R*),4a^Tl-f1-íf5-hidroxi-4-í(4-hidroxi-fenil)-metiH-3-oxazolidiniri-karbonin-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (XV) előállítása

A reakciólépés

III, reakcióvázlat, B reakciólépés:

mmol HCI.Tyr-O-terc-butilt szüszpendálunk 40 ml dimetil-formamidban. A szuszpenziót 0°C hőmérsékletre hűtjük, majd 5,6 ml (40 mmol) trietilamint adagolunk hozzá. Az elegyet 10 percen át keverjük, majd 50 ml tetrahidrofurán és ezt követően 18 mmol Cbz-Val-OH 100 ml tetrahidrofuránban készült oldatát adagoljuk a keverékhez. A reakcióelegyhez ezt követően 2,6 g (19 mmol) HOBt reagenst és 3,63 g (19 mmol) EDC reagenst adagolunk. A reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérsékleten keverjük, majd éjszakán át szoba63.993/SM

- 52 hőmérsékleten elegyítjük. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 100 ml 1n sósavban oldjuk. A vizes fázist 4 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat egyesítjük, majd 100 ml telített nátrium-karbonát oldattal és ezt követó'en 100 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk, így kapcsolt terméket nyerünk.

B reakciólépés

III, reakcióvázlat, C reakciólépés:

A fenti kapcsolt terméket 20 ml diklórmetánban oldjuk, majd az elegyhez 10 ml trifluor-ecetsavat adagolunk. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük majd vákuumban bepároljuk, és így ragacsos olajos savat nyerünk.

C reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent előállított savat cilizálunk az 1. példa A reakciólépésében leírt eljárásnak megfelelően 4,0 g paraformaldehidet, 200 mg p-toluolszulfonsav monohidrátot és 200 ml 1,2-diklór-etánt alkalmazva. így ciklizált vegyületet nyerünk, amelyet gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítunk.

D reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fenti ciklizált vegyületet redukálunk az 1. példa B reakciólépésében leírt eljárásnak megfelelően. A redukciós eljárásban 10 mmol DIBAL-t és 60 ml toluolt alkalmazunk. így a végtermék címbeli vegyületet nyerjük.

63.993/SM

- 53 ·· · · ······· • · · · · · • ·· ·· · · · ··· • ········ · ···· · · · · · · ·

15. példa r4S-f3(R*),4a.5Bn-(1-lí5-hidroxi-4-í(4-metoxi-fenil)-metil1-3-oxazolidinin-karbonil1-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (XVI) előállítása

A reakciólépés

III, reakcióvázlat, B reakciólépés:

0,339 g (0,7 mmol) N-benziloxi-karbonil-L-valin-anhidridet 15 ml vízmentes diklórmetánban készült oldatához 0,330 g (0,7 mmol) toluol-4-szulfonát-O-metil-L-tirozin benzil-észtert adagolunk és az elegyhez ezután 0,081 g (0,8 mmol) N-metil-morfolint adunk. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen 2:8 etilacetát/ciklohexán eluens alkalmazásával tisztítjuk, és így a kapcsolt vegyületet nyerjük.

B reakciólépés

III, reakcióvázlat, C reakciólépés:

14,3 mmol fent előállított kapcsolt terméket 100 ml tetrahidrofurán és 100 ml víz elegyében oldunk. Ezt követően az elegyhez 670 mg (16 mmol) lítium-hidroxid monohidrátot adagolunk. A reakcióelegyet 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően az elegyet 100 ml dietil-éterrel mossuk, majd a vizes fázist 6n sósav segítségével kb. 2 pH értékre savanyítjuk. A savas vizes fázist 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk, így a sav terméket kapjuk.

63.993/SM

- 54 C reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent előállított savat ciklizálunk az 1. példa A reakciólépésének megfelelő eljárással. Az eljárásban 4,0 g paraformaldehidet, 200 mg p-toluolszulfonsav monohidrátot és 200 ml 1,2-diklór-etánt alkalmazunk. így a kapott terméket gyorskromatográfia segítségével sziliagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítva a ciklizált vegyületet nyerjük.

D reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fenti ciklizált vegyületet az 1. példa B reakciólépésének megfelelő eljárással redukálunk. A redukcióban 10 mmol DIBAL-t és 60 ml toluolt alkalmazunk. így a címbeli végterméket nyerjük.

16. példa f4S-f3(R*),4a,5B11-f1-fí5-hidroxi-4-f(4-nitro-fenil)-metin-3-oxazolidinil1-karbonin-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (XV) előállítása

A reakciólépés

III, reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,80 g (10 mmol) L-valin-anhidrid 50 ml vízmentes diklórmetánban készült oldatához 2,24 g (10 mmol) 4-nitro-L-fenil-alanin metilésztert adagolunk.

A reakcióelegyet szobahőmérsékleten éjszakán át keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen 4:6 etilacetát/ciklohexán eluens alkalmazásával tisztítjuk, így az N-benziloxi-karbonil-L-valil-4-nitro-L-fenil-alanin metilésztert nyerjük.

R_f = 0,32 (etilacetát/ciklohexán 1:1).

63.993/SM

- 55 • · · · · · • ·· ·· · ·· ··· • ········ · · ···· · · · · ···

B reakciólépés

III, reakcióvázlat, C reakciólépés:

14,3 mmo fent előállított N-benziloxi-karbonil-L-valil-4-nitro-L-fenil-alanin metilésztert oldunk 100 ml tetrahidrofurán és 100 ml víz elegyében. Az elegyhez 670 mg (16 mmol) lítium-hidroxid monohidrátot adagolunk, majd a reakcióelegyet 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 100 ml dietil-éterrel mossuk, majd a vizes fázist 6n sósav segítségével kb. 2 pH értékre savanyítjuk. A savanyított vizes fázist 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. így a sav terméket nyerjük.

C reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent előállított savat ciklizálunk az 1. példa A reakciólépésének megfelelő eljárással. Az eljárásban 4,0 g paraformaldehidet, 200 mg p-toluolszulfonsav monohidrátot és 200 ml 1,2-diklór-etánt alkalmazunk. A terméket gyorkromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítjuk, és így a ciklizált vegyületet nyerjük.

D reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fenti ciklizált vegyületet redukálunk az 1. példa B reakciólépésének megfelelő eljárással. A redukciós eljárásban 10 mmol DIBAL-t alkalmazunk 60 ml toluolban. így a címbeli végterméket nyerjük.

63.993/SM

- 56 • · · · ····»··* • · · · · • ·· ·· · · · ··· • ········ · · ··· · · ·· ···

17. példa f4S-f3(R*).4a,5Bn-í1-íf4-f(4-amino-fenil)-metin-5-hidroxi-3-oxazolidinil1-karbonil1-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (XVIII) előállítása

A reakciólépés

0,91 g (2 mmol, 15. példában előállított) N-benziloxi-karbonil-L-valil-4-nitro-L-fenil-alanin metilésztert és 1,56 g (7 mmol) ón(ll)klorid dihidrát 50 ml száraz etanolban és 15 ml Ν,Ν-dimetil-formamidban készült oldatát 4 órán át visszafolyatás melletti forrás hőmérsékletre melegítjük. Ezt követően az elegyet lehűtjük, majd vízzel hígítjuk és nátrium-hidrogénkarbonát segítségével semlegesítjük. Ezután a semleges oldatot 3 x 50 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves extraktumokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. Az amin vegyületet nyerjük.

B reakciólépés

III, reakcióvázlat C reakciólépés:

14,3 mmol fent előállított amin vegyületet reagáltatunk a 16. példa B reakciólépésében leírt eljárásban és így a védőcsoportot eltávolítjuk. A reakcióban 16 mmol lítium-hidroxid monohidrát, 100 ml víz és 100 ml tetrahidrofurán elegyében készült oldatát alkalmazzuk. A sav terméket nyerjük.

C reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent előállított savat ciklizálunk az 1. példa A reakciólépésében leírt eljárásnak megfelelően. A reakcióban 4,0 g paraformaldehidet, 200 mg p-toluolszulfonsav monohidrátot és 200 ml 1,2-diklór-etánt alkalmazunk. A ka63.993/SM

- 57 pott terméket gyorskromatográfia segítségével sziliagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítjuk, és így a ciklizált vegyületet nyerjük.

D reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fent előállított ciklizált vegyületet redukálunk az 1. példa B reakciólépésének megfelelő eljárással. A redukcióban 10 mmol DIBAL-t és 60 ml toluolt alkalmazunk, így a címbeli végterméket nyerjük.

18. példa í4S-í3fR*(1 R*.2R*)1.4a,5RTI-f 14Γ1 -rí5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinill-karboniriMmetil-propin-aminol-karbonilM-metil-butilkarbaminsav, fenil-metilészter (XIX) előállítása

A reakciólépés

III, reakcióvázlat, A reakciólépés:

4,75 g (22 mmol) HCI-Phe-OCH₃ vegyületet oldunk 30 ml dimetil-formamidban. Az oldatot 0°C hőmérsékletre hűtjük, majd 6,2 ml (44 mmol) trietilamint adagolunk hozzá. Az elegyet 10 percen át keverjük, majd 22 mmol (130 ml dimetil-formamidban készült oldat) N-terc-butoxi-karbonil-Val vegyület oldatát adagoljuk hozzá. Ezt követően az elegyhez 2,97 g (22 mmol) HOBt reagenst és 4,2 g (22 mmol) EDC reagenst adagolunk. A reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérsékleten keverjük, majd hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni és éjszakán át ezen a hőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet ezt követően vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk. Az oldatot 100 ml 1n sósavval mossuk. A vizes mosófolyadékot 2 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist és az etilacetátos extraktumokat egyesítjük, majd 100 ml telített vizes nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és ezután 100 ml telített

63.993/SM • * β

- 58 « ·» sóoldattal mossuk. Ezután a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, és így a kapcsolt terméket nyerjük.

B reakciólépés

IV. reakcióvázlat, B1 reakciólépés:

A fenti kapcsolt terméket 20 ml diklórmetánban oldjuk, majd az oldathoz 10 ml trifluor-ecetsavat adagolunk. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd vákuumban bepároljuk, és így a védőcsoport nélküli amin vegyületet nyerjük.

C reakciólépés

IV. reakcióvázlat, B2 reakciólépés:

mmol fent előállított védőcsoport nélküli amint oldunk 30 ml dimetil-formamidban. Az oldatot 0°C hőmérsékletre hűtjük, majd 6,2 ml (44 mmol) trietilamint adagolunk hozzá. Az elegyet 10 percen át keverjük, majd 22 mmol Cbz-lle 130 ml dimetil-formamidban készült oldatát adagoljuk hozzá. Ezután az elegyhez 2,97 g (22 mmol) HOBt reagenst és 4,2 g (22 mmol) EDC reagenst adagolunk. A reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérsékleten keverjük, majd hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni és éjszakán át ezen a hőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet ezután vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk. Az etilacetátos oldatot 100 ml 1n sósavval mossuk. A vizes mosófolyadékot 2 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. Ezután a szerves fázist és a szerves extraktumokat egyesítjük, majd 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és végül 100 ml telített sóoldattal mossuk. Ezután a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, és így a kapcsolt terméket nyerjük.

63.993/SM

- 59 D reakciólépés

IV reakcióvázlat, C reakciólépés:

14,3 mmol fent előállított kapcsolt termékből a védőcsoportot eltávolítjuk a 16. példa B reakciólépésének megfelelő eljárás alkalmazásával. Az eljárásban 16 mmol lítium-hidroxid monohidrát 100 ml víz és 100 ml tetrahidrofurán elegyében készült oldatát alkalmazzuk. így a savas terméket nyerjük.

E reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent előállított savat az 1. példa A reakciólépésének megfelelő eljárással ciklizálunk. A reakcióban 4 g paraformaldehidet, 200 mg t-toluolszulfonsav monohidrátot és 200 ml 1,2-diklór-etánt alkalmazunk. A ciklizált terméket gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítjuk.

F reakciólépés

VI. reakcióvázlat B reakciólépés:

4,7 mmol fent előállított ciklizált vegyületet redukálunk az 1. példa B reakciólépésének megfelelő eljárással. A redukcióban 10 mmol DIBAL-t és 60 ml toluolt alkalmazunk, így a címbeli végterméket nyerjük.

19. példa í4S-r3[R*(1 R*,2R*)1,4a,5B11-f 1 -ΓΓ1 -rr5-(acetiloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil1-karbonil1-2-metil-propil1-amino1-karbonil)-2-metil-butilkarbaminsav, fenil-metilészter (XX) előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,6 mmol (18. példa szerint előállított) [4S-[3[R*(1R*,2R*)],4a^]]-{1-[[1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil]-amino]-karbo63.993/SM ·»ς · ··**

- 60 nil}-2-metil-butilkarbaminsaν, fenil-metilésztert és 0,3 ml trietilamint oldunk 20 ml diklórmetánban. Ezt követően szobahőmérsékleten az oldathoz 0,3 ml (4,2 mmol) acetil-kloridot adagolunk. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az elegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 30 ml etilacetát és 1 n sósav elegyében oldjuk. A rétegeket elválasztjuk, majd a vizes fázist 3 x 30 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist és a szerves extraktumokat egyesítjük, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és rövid szilikagél oszlopon szűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot gyorskromatográfia segítségével hexán/etilacetát 80:20 eluens alkalmazásával szilikagélen tisztítjuk. A címbeli vegyületet nyerjük.

20. példa f4S-r3ÍR*(1 R*)l.4a,5BH-(1 -ÍÍ1 -rr5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinill-karbonin-2-metil-propin-amino1-karbonil)-2-metil-propilkarbaminsav, fenil-metilészter (XXI) előállítása

A reakciólépés

IV. reakcióvázlat, B2 reakciólépés:

mmol a 17. példa B reakciólépésében előállított védőcsoport nélküli amint 30 ml dimetil-formamidban oldunk. Az oldatot 0°C hőmérsékletre hűtjük, majd 6,2 ml (44 mmol) trietilamint adagolunk hozzá. 10 perc elteltével az oldathoz hozzáadagoljuk 22 mmol Cbz-Val 130 ml dimetil-formamidban készült oldatát. Ezután az elegyhez adagolunk 2,97 g (22 mmol) HOBt reagenst és 4,2 g (22 mmol) EDC reagenst. A reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérsékleten keverjük, majd hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni és éjszakán át ezen a hőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk. Az oldatot 100 ml 1n sósavval

63.993/SM

- 61 • · · ·· mossuk. A vizes mosófolyadékot 2 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. Ezután a szerves fázist és a szerves extraktumokat egyesítjük, majd az oldatot 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és 100 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, és így a kapcsolt terméket nyerjük.

B reakciólépés

IV reakcióvázlat, C reakciólépés:

14,3 mmol fent előállított kapcsolt termékből a védőcsoportot eltávolítjuk a 16. példa B reakciólépése szerinti eljárás alkalmazásával. Az eljárásban 16 mmol lítium-hidroxid monohidrát, 100 ml víz és 100 ml tetrahidrofurán elegyében készült oldatát alkalmazzuk és a savas terméket nyerjük.

C reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent előállított savat ciklizálunk az 1. példa A reakciólépésében leírt eljárás segítségével. Az eljárásban 4,0 g paraformaldehidet, 200 ml ptoluolszulfonsav monohidrátot és 200 ml 1,2-diklór-etánt alkalmazunk. A kapott cilizált terméket gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítjuk.

D reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fent előállított ciklizált terméket az 1. példa B reakciólépésében leírt eljárásnak megfelelően redukálunk. A redukciós eljárásban 10 mmol DIBAL-t alkalmazunk 60 ml toluolban készült oldat formájában. így a címbeli végterméket nyerjük.

63.993/SM • ·

- 62 21. példa f4S-í3fR*(1R*)1.4a,5B11-(1-fí1-ff5-(acetiloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinin-karbonin-2-metil-propin-amino1-karbonil}-2-metil-propilkarbaminsav, fenil-metilészter (XXII) előállítása

VII reakcióvázlat:

0,6 mmol 20. példában előállított címbeli vegyületet O-acilezünk a 19. példa szerinti eljárásnak megfelelően. Az acilezési reakcióban 4,2 mmol acetil -kloridot és 0,3 ml trietilamint alkalmazunk 20 ml diklórmetános oldatban. így a címbeli vegyületet nyerjük.

22. példa

A (XXIII) képletű vegyület előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,59 mmol 7. példa szerinti címbeli vegyületet O-acilezünk a 3. példa eljárásának megfelelően. Az acilezési reakcióban 0,86 mmol 4-morfolin-karbonil-kloridot, 10 mg DMAP reagenst és 1,2 mmol trietilamint alkalmazunk 30 ml diklórmetános oldatban. A címbeli vegyületet nyerjük.

23. példa f4S-í3fR*(R*)1,4oc.5Bn-f1-fí5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil1-karbonin-2-metil-propil1-metil-4-morfolin-karboxamin (XXIV) előállítása

A reakciólépés

V. reakcióvázlat, D reakciólépés:

A (XXV) képletű vegyületet 11,7 mmol (7. példa, A reakciólépésében előállított) ciklizáljuk az 1. példa, A reakciólépésnek megfelelő eljárás alkalmazásával. Az eljárásban 5 g paraformaldehidet és 500 mg p-toluolszulfonsav

63.993/SM • · · · · · ·

- 63 • · · · · · • ·· ·· ··· ··· • ········ · · • ··· · · · · ··· monohidrátot alkalmazunk 120 ml benzolos oldatban. A ciklizált vegyületet nyerjük.

B reakciólépés

V. reakcióvázlat, E reakciólépés:

ml fent előállított ciklizált vegyületet a 3. példa, B reakciólépésének megfelelő eljárással redukálunk. A redukciós eljárásban 30 ml trifluor-ecetsavat és 30 mmol trietil-szilánt alkalmazunk 100 ml kloroformos oldatban. így az Nmetilezett vegyületet nyerjük.

C reakciólépés

III, reakcióvázlat, B reakciólépés:

mmol fent előállított N-metilezett vegyületet 11 mmol HCI.Phe-OCH₃ vegyülettel kapcsolunk a 4. példa, D reakciólépésében leírt eljárás segítségével. Az eljárásban 12 mmol trietilamint, 12 mmol HOBt reagenst és 12 mmol EDC reagenst alkalmazunk 20 ml dimetil-formamid és 100 ml tetrahidrofurán elegyében. A kapcsolt terméket nyerjük.

D reakciólépés

III, reakcióvázlat, C reakciólépés:

14,3 mmol fent előállított kapcsolt termékből a védőcsoportot eltávolítjuk a 7. példa, C reakciólépésében leírt eljárás segítségével. Az eljárásban 16 mmol lítium-hidroxid monohidrátot 100 ml víz és 100 ml tetrahidrofurán elegyében alkalmazunk. A sav terméket nyerjük.

E reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent kapott savat a 4. példa, F reakciólépésében leírt eljárásnak megfelelőn ciklizálunk. A ciklizációs reakcióban 4,0 g paraformaldehidet és

63.993/SM ···· ····

- 64 • · · • ·· ·· ··· ··· • ········ · · ···· · · ·· ··· p-toluolszulfonsav monohidrátot alkalmazunk 200 ml 1,2-diklór-etános oldatban. A ciklizált terméket nyerjük.

F reakciólépés

VII. reakcióvázlat, C reakciólépés:

4,48 mmol fent előállított ciklizált vegyületet a 4. példa G reakciólépésében leírt eljárás segítségével redukálunk. A redukciós eljárásban 6 mmol DIBAL 50 ml toluolban készült oldatát alkalmazzuk. A címbeli vegyületet nyerjük.

24. példa

A (XXVI) képletű vegyület előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,59 mmol 23. példában előállított címbeli vegyületet O-acilezünk a 3. példa szerinti eljárás alkalmazásával. Az acilezési eljárásban 0,86 mmol 4morfolin-karbonil-kloridot, 10 mg DMAP reagenst és 1,2 mmol trietilamint alkalmazunk. A címbeli vegyületet nyerjük.

25. példa [4S-f3(R*),4a,5Bn-(1-[f4-f(4-klór-fenil)-metil1-5-hidroxi-3-oxazolidinin-karbonin-2-metil-propill-karbaminsav, fenil-metilészter (XXVII) előállítása

A reakciólépés mmol (a Sigma Chemical Company, St. Louis, MO 63178 terméke) N-BOC-p-klór-L-Phe reagenst oldunk 400 ml dietil-éterben, majd az oldatot 0°C hőmérsékletre hűtjük. Ezután a reakciót kis felesleg diazometánnal (enyhe sárga szín fennmarad) reagáltatjuk. Az elegyhez több csepp híg ecetsavat adagolunk abból a célból, hogy a felesleg diazometánt megbontsuk. A reak63.993/SM

- 65 • · · · ···· cióelegyet ezután 200 ml telített sóoldattal mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk. Az N-BOC-pklór-L-Phe-OCH₃-metilésztert nyerjük.

B reakciólépés

IV. reakcióvázlat, B1 reakciólépés:

A fent előállított metilészterből a védőcsoportot a 18. példa B reakciólépésében leírtak szerint eltávolítjuk. A reakcióban 10 ml trifluor-ecetsav 20 ml diklórmetánban készült oldatát alkalmazzuk, és így a p-klór-L-Phe-OCH₃ védőcsoport nélküli terméket nyerjük.

C reakciólépés

IV. reakcióvázlat, B2 reakciólépés:

mmol fent előállított védőcsoport nélküli vegyületet 22 mmol CBz-Val 130 ml dimetil-formamidban készült oldatával kapcsoljuk. A kapcsolási reakciót a 18. példa C reakciólépésében leírtak szerint végezzük, és 44 mmol trietilamint, 22 mmol HOBt reagenst és 22 mmol EDC reagenst alkalmazunk. A kapcsolt vegyületet nyerjük.

D reakciólépés

IV. reakcióvázlat, C reakciólépés:

14,3 mmol fent előállított kapcsolt termékből a védőcsoportot eltávolítjuk a 7. példa C reakciólépésében leírt eljárásnak megfelelően. A reakcióban 16 mmol lítium-hidroxid monohidrát, 100 ml víz és 100 ml tetrahidrofurán elegyében készült oldatát alkalmazzuk. Sav terméket nyerünk.

E reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent előállított savat az 1. példa A reakciólépésében leírt eljárás segítségével ciklizálunk. A cilizációs reakcióban 4,0 g paraformaldehidet és

63.993/SM ···· ···«

- 66 • · · «··

200 mg p-toluolszulfonsav monohidrátot alkalmazunk 1,2-diklór-etán oldószer felhasználásával. A ciklizált vegyületet nyerjük.

F reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4.7 mmol fent előállított ciklizált vegyületet redukálunk az 1. példa B reakciólépésnek megfelelő eljárás alkalmazásával. A reakcióban 10 mmol DIBAL 60 ml toluolban készült oldatát alkalmazzuk. A címbeli végterméket nyerjük.

26. példa

4-morfolin-karbonsav-r4S-f3(R*),4a.58n-3-(3-metil-1-oxo-2-flYfenil-metoxi)-karbonill-amino1-butil)-4-í(4-klór-fenil)-metin-5-oxazolidinil-észter (XXVIil) előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,59 mmol 25. példában előállított címbeli vegyületet O-acilezünk a 3. példa szerinti eljárásnak megfelelően. A reakcióban 0,86 mmol 4-morfolin-karbonil-kloridot, 10 mg DMAP reagenst és 1,2 mmol trietilamint alkalmazunk 30 ml diklórmetánban. A címbeli vegyületet nyerjük.

27. példa f4S-f3(R*),4a,5Bn-f1-í[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinill-karbonil1-etiD-karbaminsav, fenil-metil-észter (XXIX) előállítása

A reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

11.7 mmol N-CBz-Ala-Phe-OH (a Sigma Chemical Company, St. Louis, MO 62178 terméke) vegyületet ciklizálunk az 1. példa A reakciólépése szerinti eljárással. Az eljárásban 5 g paraformaldehidet és 500 míg p-toluolszulfonsav monohidrátot alkalmazunk benzolos oldatban. Ciklizált vegyületet nyerünk.

63.993/SM

- 67 • · ·

B reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4.7 mmol fent előállított ciklizált vegyületet redukálunk az 1. példa B reakciólpésében leírt eljárásnak megfelelően. A reakcióban 10 mmol DIBAL 50 ml toluolban készült oldatát alkalmazzuk. A címbeli vegyületet nyerjük.

28. példa

4-morfolin-karbonsav-í4S-[3(R*),4a^Tl-3-í1-oxo-2-íí(fenil-metoxi)-karbonin-aminol-propil)-4-(fenil-metil)-5-oxazolidinil-észter (XXX) előállítása

VII reakcióvázlat:

0,59 mmol 27. példa szerinti címbeli vegyületet O-acilezünk a 3. példa szerinti eljárásnak megfelelően. A reakcióban 0,86 mmol 4-morfolin-karbonil-kloridot, 10 mg DMAP reagenst és 1,2 mmol trietilamint alkalmazunk 30 ml diklórmetánban készült oldatban. A címbeli vegyületet nyerjük.

29. példa

F4S-í3(R*),4a,5Bn-í1-fr5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinin-karbonin-2-metil-butil)-karbaminsav, fenil-metilészter (XXXI) előállítása

A reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

11.7 mmol N-CBz-lle-Phe-OH (a Sigma Chemical Company, St. Louis, MO 63178 terméke) vegyületet ciklizálunk az 1. példa A reakciólépésében leírt eljárás szerint. A reakcióban 5 g paraformaldehidet és 500 míg p-toluolszulfonsav monohidrátot alkalmazunk benzolos oldatban. Ciklizált vegyületet nyerünk.

63.993/SM

- 68 • · · · ········ • · · « · · • · · A · ··· ·«· • · · 4 · η ♦· · · ···· · · · * «··

B reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4.7 mmol fent előállított ciklizált vegyületet redukálunk az 1. példa B reakciólépésében leírt eljárás segítségével. A redukciós eljárásban 10 mmol DIBAL 50 ml toluolban készült oldatát alkalmazzuk. A címbeli vegyületet nyerjük.

30. példa

4-morfolin-karbonsaví4S-í3(R*),4a.5eTl-3-(3-metil-1-oxo-2-íí(fenil-metoxi)-karbonin-amino1-fenil}-4-(fenil-metil)-5-oxazolidinil-észter (XXXII) előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,59 mmol 29. példa szerinti címbeli vegyületet O-acilezünk a 3. példa szerinti eljárásnak megfelelően. A reakcióban 0,86 mmol 4-morfolin-karbonil-kloridot, 10 mg DMAP reagenst és 1,2 mmol trietilamint alkalmazunk 30 ml diklórmetánban. A címbeli vegyületet nyerjük.

31. példa í4S-i3(R*),4a,5B11-(1-fí5-hidroxi-4-f(4-hidroxi-fenil)-metin-3-oxazolidinil1-karboniH-3-metil-butil)-karbaminsav, fenil-metilészter (XXXIII) előállítása

A reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

11.7 mmol N-CBz-leu-Tyr-OH (a Sigma Chemical Company, St. Louis, MO 63178 terméke) vegyületet ciklizálunk az 1. példa A reakciólépésnek megfelelően. A reakcióban 5 g parformaldehidet és 500 mg p-toluolszulfonsav monohidrátot alkalmazunk benzolos oldatban. A ciklizált vegyületet nyerjük.

63.993/SM • · · ·

,...

- 69 B reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4.7 mmol fent előállított ciklizált vegyületet redukálunk az 1. példa, B reakciólépésében leírt eljárásnak megfelelően. A reakcióban 10 mmol DIBAL 50 ml toluolban készült oldatát alkalmazzuk. A címbeli vegyületet nyerjük.

32. példa

4-morfolin-karbonsav-f4S-[3(R*).4a,5BTl-3-f4-metil-1-oxo-2-fí(fenil-metoxi)-karbonin-amino1-pentil)-4-f(4-hidroxí-fenil)-metin-5-oxazolidinil-észter (XXXIV) előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,59 mmol a 31. példa szerint előállított címbeli vegyületet O-acilezünk a

3. példa szerinti eljárásnak megfelelően. A reakcióban 0,86 mmol 4-morfolinkarbonil-kloridot, 10 mg DMAP reagenst és 1,2 mmol trietilamint alkalmazunk 30 ml diklórmetán oldószerben. A címbeli vegyületet nyerjük.

33. példa

A (XXXV) képletű vegyület előállítása

A reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

11.7 mmol N-BOC-norLeu-Leu-Phe-OH (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO 63178 terméke) vegyületet ciklizálunk az 1. példa A reakciólépése szerinti eljárásnak megfelelően. A reakcióban 5 g paraformaldehidet és 500 mg p-toluolszulfonsav monohidrátot alkalmazunk benzolos oldatban. A címbeli vegyületet nyerjük.

63.993/SM ···· ····

- 70 • · · · · · • ·· · · ··« · · · • ······»· « · ·«·· · · ·· ···

B reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fent előállított ciklizált vegyületet az 1. példa B reakciólépése szerinti eljárásnak megfelelően redukálunk. A redukciós eljárásban 10 mmol DIBAL 50 ml toluolban készült oldatát alkalmazzuk. A címbeli vegyületet nyerjük.

34. példa

A (XXXVI) képletű vegyület előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,59 mmol 33. példa szerinti címbeli vegyületet O-acilezünk a 3. példa szerinti eljárásnak megfelelően. A reakcióban 0,86 mmol 4-morfolin-karbonil-kloridot, 10 mg DMAP reagenst és 1,2 mmol trietilamint alkalmazunk 30 ml diklórmetános oldatban. A címbeli vegyületet nyerjük.

35. példa

A (XXXVII) képletű vegyület előállítása

A reakciólépés

III, reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,32 g (20 mmol) HCI.PHe-OCH₃ vegyületet 20 ml dimetil-formamidban oldunk, majd az oldatot 0°C hőmérsékletre hűtjük. Ezt követően az oldathoz 6 ml trietilamint adagolunk, majd az elegyet 10 percen át keverjük. Ezután az elegyhez 19,83 mmol N-BOC-N-metil-L-Ala 150 ml tetrahidrofuránban készült oldatát adagoljuk (a vegyület a Sigma Chemical Company, St. Louis, MO 63178 terméke). A reakcióelegyhez eztuán 2,83 g (21 mmol) HOBt reagenst és 4,0 g (21 mmol) EDC reagenst adagolunk. A reakcióelegyet 3 órán át 0°C hőmérsékleten, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 1n sósavban (100 ml)

63.993/SM

- 71 •· · · ········ • · · · · · • ·· ·· ··· ··· • ········ · · ···· · · »· ··· oldjuk. A sósavas oldatot 3 x 100 ml etilacetáttal extraháljuk. Ezt követően a szerves extraktumokat egyesítjük, majd 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és 100 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot vízments magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd rövid szilikagél oszlopon szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen, hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítjuk, és így a kapcsolt terméket kapjuk.

B reakciólépés

III, reakcióvázlat, C reakciólépés:

14,3 mmol fent előállított kapcsolt termékből a védőcsoportot eltávolítjuk a 15. példa B reakciólépése szerinti eljárással. Az eljárásban 16 mmol lítium-hidroxid monohidrát, 100 ml víz és 100 ml tetrahidrofurán elegyében készült oldatát alkalmazzuk. A sav terméket nyerjük.

C reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent előállított savat az 1. példa A reakciólépése szerinti eljárással ciklizálunk. A ciklizációs reakcióban 4 g paraformaldehidet, 200 mg ptoluolszulfonsav monohidrátot és 200 ml 1,2-diklór-etánt alkalmazunk. A kapott ciklizált vegyületet gyorskromatográfia segítségével szilikagélen hexán/etilacetát eluens alkalmazásával tisztítjuk.

D reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fent előállított ciklizált terméket az 1. példa, B reakciólépése szerinti eljárással redukálunk, a redukciós eljárásban 10 mmol Dl BAL 60 ml toluolban készült oldatát alkalmazzuk. A címbeli vegyületet nyerjük.

63.993/SM ···· ···· • · · ·« • · · ·

- 72 36. példa

A (XXXVIII) képletű vegyület előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,59 mmol 35. példa szerinti címbeli vegyületet O-acilezünk a 3. példa szerinti eljárásnak megfelelően. 0,86 mmol 4-morfolin-karbonil-klorid reagenst, 10 mg DMAP reagenst és 1,2 mmol trietilamint alkalmazunk 30 ml diklórmetán oldószerben. A címbeli vegyületet nyerjük.

37. példa

A (XXXIX) képletű vegyület előállítása

A reakciólépés mmol (a Sigma Chemical Company, St. Louis, MO 63178 terméke) N-BOC-O-etil-L-Tyr-OH vegyületet reagáltatunk diazometánnal a 25. példa A reakciólépése szerinti eljárásnak megfelelően. így az N-BOC-O-etil-L-Tyr-OCH₃-metilésztert nyerjük.

B reakciólépés

IV. reakcióvázlat, B1 reakciólépés:

A fent előállított metilészterből a védőcsoportot eltávolítjuk a 18. példa B reakciólépésének megfelelő reakció segítségével. A reakciót 10 ml trifluorecetsav 20 ml diklórmetánban oldatában végezzük. így az O-etil-L-Tyr-OCH₃ védőcsoport nélküli terméket nyerjük.

C reakciólépés

IV. reakcióvázlat, B2 reakciólépés:

mmol fent előállított védőcsoport nélküli vegyületet 22 mmol N-BOC-L-norVal vegyület 130 ml dimetil-formamidban készült oldatával kapcsolási reakcióban reagáltatjuk, amely utóbbi terméke a Sigma Chemical Company,

St. Louis, MO 63178 terméke. A reakciót a 18. példa, C reakciólépésének

63.993/SM • · · • ····*··« · • · · · · · · ♦ · ··

- 73 megfelelően végezzük és ebben 44 ml trietilamint, 22 mmol HOBt reagenst és 22 mmol EDC reagenst alkalmazunk. A kapcsolt terméket nyerjük.

D reakciólépés

IV. reakcióvázlat, C reakciólépés:

14,3 mmol fent előállított kapcsolt termékből a védőcsoportot eltávolítjuk a 7. példa C reakciólépése szerinti eljárásnak megfelelően. A reakcióban 16 mmol lítium-hidroxid monohidrát, 100 ml víz és 100 ml tetrahidrofurán elegyében készült oldatát alkalmazzuk. A sav terméket nyerjük.

E reakciólépés

VI. reakcióvázlat, A reakciólépés:

5,8 mmol fent előállított savat az 1. példa, A reakciólépésében leírt eljárás szerint ciklizációs reakcióban reagáltatunk. A reakcióban 4,0 g paraformaldehidet és 200 mg p-toluolszulfonsav monohidrátot alkalmazunk 1,2-diklór-etán oldószerben. A ciklizált vegyületet nyerjük.

F reakciólépés

VI. reakcióvázlat, B reakciólépés:

4,7 mmol fent előállított ciklizált vegyületet az 1. példa, B reakciólépésének megfelelő eljárással redukálunk. A redukcióban 10 mmol DIBAL 60 ml toluolban készült oldatét alkalmazzuk. így a címbeli vegyületet nyerjük.

38. példa

A (XL) képletű vegyület előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,59 mmol 37. példában előállított címbeli vegyületet O-acilezünk a 3. példa szerinti eljárásnak megfelelően. Az acilezési reakcióban 0,86 mmol 4-morfolin-karbonil-kloridot, 10 mg DMAP reagenst és 1,2 mmol trietilamint alkalmazunk 30 ml diklórmetán oldószerben. A címbeli vegyületet nyerjük.

63.993/SM ···· ····

- 74 • · · · • · · · · · » · · ·· ··· ··· • ········ · ·

39. példa í4S-í3(R*),4«.5Bn-f1-fí5-(propioniloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazloidinil1-karbonin-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (MDL 105,837) (XLI) előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,375 g (0,909 mmol, 1. példában előállított) [4S-[3(R*),4a,5ft]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilésztert oldunk 9 ml diklórmetánban. Az oldathoz 0,276 g (2,73 mmol) N-metil-morfolint és 0,126 g (1,36 mmol) propionil-kloridot adagolunk, majd a reakcióelegyet nitrogén atmoszférában éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 40 ml diklórmetánnal hidgítjuk, majd 2 x 25 ml 1n sósavval, 1 x 25 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal, 1 x 25 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen etilacetát/hexán 1:2 eluens alkalmazásával tisztítjuk. Az anyag felvitelét diklórmetánnal végezzük az oszlopra. így 0,299 viszkózus, színtelen, áttetsző olajos címbeli vegyületet nyerünk.

Rf = 0,56;

[a] ²⁰d = -47.9 (CHCI₃, C = 0.514)

63.993/SM ···· ··*·

- 75 • tv fr t »Μ · · « ···· · · · · ···

40. példa [4S-f3(R*)₁4a.5B11-(1-[f5-(etil-szukcinil-oxi(-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil1-karbonill-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (MDL 105,608) (XLII) előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,57 g (1,38 mmol, az 1. példában előállított) [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilésztert, 0,45 g (2,77 mmol) etil-szukcinil-kloridot és 0,306 g (3,04 mmol) N-metil-morfolint oldunk 5,4 ml diklórmetánban. A reakcióelegyet éjszakán át keverjük, majd vízbe öntjük és az elegyet 2 x 150 ml dietil-éterrel extraháljuk. Az egyesített extraktumot híg sósavval, híg nátrium-hidrogénkarbonát oldattal, vízzel mossuk, majd nátrium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, majd a maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen 25% etilacetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk. A címbeli, vegyületet nyerjük, a három egyesített frakció hozama 468 mg.

41. példa í4S-í3(R*),4a,5en-f1-íí5-(2-etil-hexanoil-oxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinin-karbonil1-2-metil-propil)-karbaminsav, fenil-metilészter (MDL 104,092) (XLIIl) előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,5 g (1,21 mmol, az 1. példában előállított) [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilésztert oldunk 5 ml diklórmetánban. Az oldathoz hozzáadagolunk 0,27 g (2,67 mmol) N-metil-morfolint és 0,39 g (2,4 mmol) 2-etil-hexanoil-kloridot adagolunk. A reakcióelegyet éjszakán át keverjük, majd vízbe öntjük és a vizes

63.993/SM • · ·· ·

- 76 • · · · · « • ·· · · ·»· ··* • *·«··««· · · ·· · · · · ·· ··· elegyet 3 χ 50 ml dietil-éterrel extraháljuk. Az egyesített extraktumokat híg sósavval, nátrium-hidrogénkarbonát oldattal mossuk, majd nátrium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, majd a maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen 25% etilacetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk, és így 120 mg címbeli vegyületet nyerünk.

42. példa f4S-[3(R*),4a,5B1H1-fr5-(4-metoxi-fenil-acetil-oxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinin-karbonin-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter (MDL 105,236) (XLIV) előállítása

VII. reakcióvázlat:

0,5 g (1,21 mmol, az 1. példában előállított) [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilésztert oldunk 5 ml diklórmetánban. Az elegyhez 0,27 g (2,67 mmol) N-metil-morfolint és 0,44 g 4-metoxi-fenil-acetil-kloridot adagolunk, majd a reakcióelegyet éjszakán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet vízbe öntjük, amely vízre dietil-étert rétegezünk. A vizes fázist további 2 x 50 ml dietil-éterrel extraháljuk, majd az egyesített szerves extraktumokat híg sósavval, nátriumhidrogénkarbonát oldattal mossuk és nátrium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószert ezután vákuumban elpárologtatjuk, majd a maradékot gyorskromatográfia segítségével szilikagélen 25% etilacetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk, és így 580 mg címbeli vegyületet nyerünk.

A találmány szerinti (I) általános képletű új vegyületek egyik alcsoportja, ahol az általános képletben R jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport vagy halogénatom; Rí jelentése izopropil-csoport, izobutil-csoport, szek-butil-csoport vagy metilcsoport; R₂ jelentése izobutil-csoport; R₃ jelentése hidrogénatom; R₄ és R₅ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy metilcsoport; R₆ je63.993/SM

- 77 :·· • · » lentése karbobenziloxi-csoport vagy (d) általános képletű csoport, ahol Z jelen tése nitrogénatom vagy CH csoport és B jelentése (e) képletű csoport, (f) általános képletű csoport, (g) általános képletű csoport vagy (h) általános képletű csoport, ahol R’ jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport; R₇ jelentése hidrogénatom; m jelentése 0 vagy 1; és n jelentése 0 vagy 1.

A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek másik alcsoportja, ahol az általános képletben R jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport vagy halogénatom; R₁ és R₂ mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-4 szénatomos alkilcsoport; R₄ és R₅ mindegyikének jelentése egymástül függetlenül hidrogénatom vagy metilfcsoport; R₆ jelentése karbobenziloxi-csoport; m jelentése 0 és n jelentése 1.

Az alábbi vegyületekkel a találmány szerinti vegyületek körét mutatjuk be:

[4S-[3(R*),4cc,5ft]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter;

[4S-[3(R*),4a,5ft]]-{1-[[5-(acetiloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter;

4-morfolin-karbonsav-[4S-[3(R*),4cc,5B]]-3-{3-metil-1-oxo-2-[[(fenil-metoxi)-karbonil]-amino]-butil}-4-(fenil-metil)-5-oxazolidinil-észter; [4S-[3(R*),4a^]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-metil-karbaminsav, fenil-metilészter;

[4S-[3(R*),4a,53]]-(1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-3-metil-butil}-metil-karbaminsav, fenil-metilészter;

[4S-[3(R*),4cx,5R>]]-{1 -[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-3-metil-butilj-karbaminsav, fenil-metilészter;

63.993/SM [4S-[3(R*),4a,5B]]-N-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-4-morfolin-karbarboxamid;

[4S-[4a,5B]]-5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidin-karbonsav, fenil-metilészter; [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-(butiriloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propilj-metil-karbaminsav, fenil-metilészter;

[4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-2,2-dimetil-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav-fenil-metilészter;

[4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-(acetiloxi)-2,2-dimetil-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav-fenil-metilészter;

[2R-[2a,3(S*),4B,5a]]-{1-[[5-hidroxi-2-metil-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav-fenil-metilészter;

[2S-[2a,3(S*),4B,5a]]-{1 -[[5-hidroxi-2-metil-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav-fenil-metilészter;

[2R-[2a,3(S*),4B,5a]]-{1-[[5-hidroxi-2-(fenil-metil)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav-fenil-metilészter;

[2S-[2a,3(S*),4B,5a]]-{1-[[5-hidroxi-2-(fenil-metil)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav-fenil-metilészter;

[4S-[3(R*),4a,5B]]-{1 -[[5-hÍdroxi-4-[(4-hidroxi-fenil)-metilJ-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav-fenil-metilészter;

[4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-[(4-metoxi-fenil)-metil]-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav-fenil-metilészter;

[4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-[(4-nitro-fenil)-metil]-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav-fenil-metilészter;

63.993/SM ·» · * • ♦ · « Λ « * · · · ·· • ···· ··«· ·»* » · · · .

·*«· ····

- 79 ««η [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1 -[[4-[(4-amino-fenil)-metil]-5-hidroxi-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metii-propil}-karbaminsav-fenil-metilészter;

[4S-[3[R*(1R*,2R*),4a,5B]]-{1-[[[1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)]-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil]-amino]-karbonil}-2-metil-butil-karbaminsav-fenil-metilészter;

[4S-[3[R*(1 R*,2R*),4a,5B]]-{1 -[[[1 -[[5-(acetil-oxi)-4-(fenil-metil)]-3-oxazolidini I]-karbonil]-2-metil-propil]-amino]-karbonil}-2-metil-butil-karbaminsav-fenil-metilészter;

[4S-[3[R*(1 R*),4a,5B]]-{1 -[[[1 -[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)]-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil]-amino]-karbonil}-2-metil-propil-karbaminsav-fenil-metilészter;

[4S-[3[R*(1 R*),4a,5B]]-{1 -[[[1 -[[5-(acetil-oxi )-4-(feni l-metil)]-3-oxazolidi n i I]-karbonil]-2-metil-propil]-amino]-karbonil}-2-metil-propil-karbaminsav-fenil-metilészter;

[4S-[3(R*),4a,5B]]-N-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)]-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-metil-4-morfolin-karboxamid;

[4S-[3(R*),4a^]]-{1-[[4-[(4-klór-fenil)-metil]-5-hidroxi-3-oxazolidinil]-karbonil]-2 -metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter;

4-morfolin-karbonsav-[4S-[3(R*),4a,5B]]-3-{3-metil-1-oxo-2-[[(fenil-metoxi)-karbonil]-amino]-butil}-4-[(4-klór-fenil)-metiI]-5-oxazolidinil-észter; [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)]-3-oxazolidinil]-karbonil]-etil]-karbaminsav, fenil-metilészter;

4-morfolin-karbonsav-[4S-[3(R*),4a,5B]]-3-{1-oxo-2-[[(fenil-metoxi)-karbonil]-amino]-propil}-4-(fenil-metil)-5-oxazolidinil-észter;

63.993/SM ·*»· ···« [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1 -[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-butilj-karbaminsav, fenil-metilészter;

4-morfolin-karbonsav-[4S-[3(R*),4a,5B]]-3-{3-metil-1-oxo-2-[[(fenil-metoxi)-karbonil]-amino]-pentil}-4-(fenil-metil)-5-oxazolidinil-észter;

[4S-[3(R*),4a^]]-{1-[[5-hidroxi-4-[(4-hidroxi-fenil)-metil]-3-oxazolidinil]karbonil]-3-metil-butil}-karbaminsav, fenil-metilészter;

4-morfolin-karbonsav-[4S-[3(R*),4cc,5B]]-3-{4-metil-1-oxo-2-[[(fenil-metoxi)-karbonil]-amino]-pentil}-4-[(4-hidroxi-fenil)-metil]-5-oxazolidinil-észter.

A találmány tárgya továbbá eljárás ilyen kezelést igénylő betegben calpain inhibiálására, amelyet a beteg kezelésében alkalmazhatunk, illetve olyan betegek kezelésére alkalmazhatók, amelyek akut vagy krónikus neurodegeneratív betegségben szenvednek, oly módon, hogy az (I) általános képletű vegyület terápiásán hatásos mennyiségét adagoljuk. Az „akut és krónikus neurodegeneratív betegség” elnevezés alatt olyan rendellenességet értünk, amelynek során felnőtt emberek központi idegrendszerében a neuronok nem megfelelő vagy teljes elpusztulása történik, amely betegségek lehetnek nem limitáltam ischemiás gutaütés (trombolitikus vagy embólikus eredetű); vérzéses gutaütés és ezt követő véredény rendellenesség; szívizom infarctus; neurológiai következmény koronaér megbetegedésből, illetve beültetett szerv beültetéséből következően; fejtrauma; Alzheimer kór; idős korral járó dementia; véredény dementia; Parkinson kór; amyotrophiás laterális sclerosis és hasonlók.

Akut neurodegeneratív és krónikus neurodegeneratív betegségek kezelésében előnyösen alkalmazható találmány szerinti vegyületek az alábbiak.

63.993/SM

-81- ···· · ···*···' [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propilj-karbaminsav, fenil-metilészter;

[4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-(acetiloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter;

4-morfolin-karbonsav-[4S-[3(R*),4a,5ft]]-3{3-metil-1-oxo-2-[[(fenil-metoxi)karbonil]-amino]-butil}-4-(fenil-metil)-5-oxazolidinil-észter; [4S-[3(R*),4a^]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propilj-metil-karbaminsav, fenil-metilészter; és [4S-[4a,5B]]-5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidin-karbonsav, fenil-metilészter.

A leírásban a „beteg” elnevezés alatt melegvérű állatokat mint például emlősöket értünk, amelyek valamely akut vagy krónikus neurodegenerációs betegségben szenvednek. Ilyen emlősök lehetnek a tengerimalacok, kutyák, macskák, patkányok, egerek, lovak, szarvasmarhák, birkák és emberek, amelyek a leírásban ennek az elnevezésnek felelnek meg.

A „terápiásán hatásos mennyiség” elnevezés alatt olyan mennyiséget értünk, amely folyamatos infúzió vagy egyetlen vagy többszörös dózisú adagolás esetében a beteg számára hatásos és az akut vagy krónikus neurodegenerációs betegséggel kapcsolatos sérüléseket csökkentik vagy egy javított eredményhez és/vagy a betegség előrehaladásának késleltetéséhez vagy megakadályozásához vezetnek olyan esetekkel összehasonlítva, amikor hasonló kezelést nem alkalmazunk. A „terápiásán hatásos mennyiség” elnevezés alatt nem feltétlenül azt értjük, hogy a betegség teljes eltávolítása vagy kezelése megtörténne. A terápiásán hatásos mennyiség vagy dózis meghatározása során többféle tényezőt figyelembe kell vennie a kezelőorvosnak, amelyek lehetnek nem limitáltan az emlős faja, az emlős mérete, kora és általános egészségi

63.993/SM

- 82 állapota, a kezelt betegség típusa, a betegség foka, illetve súlyossága, az egyes beteg válaszfüggvénye, az adagolt vegyület típusa, az adagolás útja, az adagolt készítmény biológiai felszívódása, a választott dózishatár mértéke, a párhuzamos kezelés alkalmazása és egyéb hasonló tényezők.

Az (I) általános képletű vegyületek terápiásán hatásos mennyisége általában körülbelül 0,1 mg/kg testtömeg/nap (mg/kg/nap) - körülbelül 100 mg/kg/nap közötti. Előnyösen alkalmazható mennyiségek a körülbelül 0,5 - körülbelül 30 mg/kg/nap értékek.

A találmány szerinti vegyületek igen hatásos calpain és katepszin B inhibitorok. A feltételezések szerint a találmány szerinti vegyületek inhibiáló hatásukat úgy fejtik ki, hogy a calpain enzimet inhibiálják, és így megelőzik vagy késleltetik az akut vagy krónikus neurodegenerációs betegségeket, amelyek lehetnek ischemiás gutaütés (trombolitikus vagy embólikus eredetű); vérzéses gutaütés és ezt követő véredény rendellenesség; szívizom infarctus; neurológiai következmény koronaér megbetegedésből, illetve beültetett szerv beültetéséből következően; fejtrauma; Alzheimer kór; idős korral járó dementia; véredény dementia; Parkinson kór; amyotrophiás laterális sclerosis és hasonlók. Azonban a találmány szerinti eljárás nem limitált bármely elméletre vagy javasolt mechanizmusra abból a célból, hogy az alkalmazás hatásosságát magyarázzuk.

A fent leírt betegségekben szenvedő beteg kezelése során az (I) általános képletű vegyületeket bármely úton adagolhatjuk, amely lehetővé teszi, hogy a vegyületek hatásos mennyiségben biológiailag rendelkezésre álljanak és ezek az adagolások lehetnek orális és parenterális úton történő adagolás. Például az (I) általános képletű vegyületeket adagolhatjuk orális, szubkután, intramuszkuláris, intravénás, transzdermális, intranazális, rektális és helyi mó63.993/SM • · · ·

- 83 dón vagy hasonló utakon. Előnyösen alkalmazható adagolási út az intravénás vagy az orális adagolás. A készítmény előállításában járatos szakember könynyen megállapíthatja a megfelelő forma, illetve adagolási út típusát attól függően, hogy a betegség kezelésére, illetve a beteg állapotának kezelésére milyen típusú vegyületet alkalmaz. A betegség állapotát és egyéb hasonló körülményeket is figyelembe kell venni. Remington Pharmaceuticals Science, 18th Ed., Mack Publishing Co. (1990).

A találmány szerinti vegyületek önmagukban is adagolhatok vagy gyógyszerkészítmény formában adagolhatok gyógyszerészetileg elfogadható hordozó- vagy kiszerelőanyagokkal együtt, amely anyagokat olyan mennyiségben alkalmazzuk, hogy a választott vegyület kémiai jellemzőit vagy oldhatóságát megfelelően befolyásolják az adagolás útjától, illetve a szokásos gyógyszerészeti gyakorlattól függően. A találmány szerinti vegyületek önmagukban is hatásosak, azonban gyógyszerészetileg elfogadható sóik formájában is alkalmazhatók és formává alakíthatók, amely sók lehetnek például savaddíciós sók és ezeket általában a készítmény stabilitása, a kristályosítás egyszerűsége, illetve az oldhatóság megnövekedése céljából állítjuk elő.

A találmány tárgya továbbá készítmény, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű vegyületeket keverékben vagy egyéb elegyben egy vagy több inért hordozóanyaggal együtt tartalmazza. Ezek a készítmények például alkalmasak tesztvizsgálati standardként vagy megfelelő tömegben történő szállítás céljára vagy gyógyszerkészítmény-előállítás céljára történő felhasználásra. Az (I) általános képletű vegyület tesztvizsgálati mennyisége olyan mennyiség, amely szokásos standard tesztvizsgálati eljárásokkal és szakirodalomban ismert technikák alkalmazásával könnyen mérhető. A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek teszvizsgálati mennyisége általában körülbelül 0,001

63.993/SM • · ·

- 84 tömeg% - körülbelül 75 tömeg% közötti mennyiség a készítményben. Az inért hordozóanyag bármely olyan anyag lehet, amely az (I) általános képletű vegyülettel kovalens kötést nem képez, illetve nem bomlik le. Alkalmas inért hordozóanyagok lehetnek a víz, a vizes pufferek, mint például azok, amelyeket általában a nagynyomású folyadékkromatográfiás (HPLC) analízisben alkalmaznak; a szerves oldószerek, mint például acetonitril, etilacetát, hexán és hasonlók; továbbá a gyógyszerészetileg elfogadható hordozó- vagy kiszerelőanyagok.

Részletesebben, a találmány tárgya gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű vegyület terápiásán hatásos mennyiségét tartalmazza egy vagy több gyógyszerészetileg elfogadható hordozó- vagy kiszerelőanyaggal keverékben vagy más elegyben.

A gyógyszerkészítményeket a szakirodalomban ismert eljárásokkal állíthatjuk elő. A hordozó- vagy kiszerelőanyag lehet szilárd, félszilárd vagy folyékony halmazállapotú és az aktív hatóanyag számára hordozóanyagként vagy közegként szolgálhat. Az alkalmazható hordozó- vagy kiszerelőanyagok a szakirodalomban jól ismertek. A gyógyszerészeti készítmény lehet orális, parenterális vagy helyi alkalmazásra alkalmas készítmény és a betegnek például tabletta, kapszula, kúp, oldat, szuszpenzió vagy hasonló formában adagolható.

A találmány szerinti vegyületeket adagolhatjuk orálisan, például valamely inért hígító vagy emészthető hordozóanyaggal együtt. A hatóanyag befoglalható zselatin kapszulákba vagy tablettává préselhető. Az orális terápiás adagolás céljára a találmány szerinti vegyületeket kiszerelőanyagokba foglalhatjuk és például tabletta, pilula, kapszula, elixir, szuszpenzió, szirup, ostya, rágógumi és hasonló formában adagolhatjuk. Az ilyen készítmények legalább

63.993/SM

- 85 4 tömeg% találmány szerinti vegyületet tartalmaznak aktív hatóanyagként, de tartalmuk az adott forma függvényében változhat és lehet egységenként 4 tömeg% - 70 tömeg% közötti érték. A készítményekben található aktív hatóanyag mennyisége olyan mértékű, hogy a megfelelő dózisformát nyerjük. Előnyös találmány szerinti készítmények és anyagok úgy állíthatók elő, hogy az orális dózisegység forma 5,0-300 mg találmány szerinti vegyületet tartalmazzon.

A tabletta, pilula, kapszula, labdacs és hasonló formák egy vagy több további segédanyagot tartalmazhatnak: kötőanyagot, mint például mikrokristályos cellulóz, gumi tragakant vagy zselatin; töltőanyagot, mint például keményítő vagy laktóz; dezintegráló szerek, mint például alginsav, Primogel, kukoricakeményítő és hasonlók; kenőanyagokat, mint például magnézium-sztearát vagy Sterotex, csúszást elősegítő anyagokat, mint például kolloid szilicium-dioxid; és édesítőszereket, mint például szukróz vagy szaccharin, továbbá adagolhatok ízesítőanyagok, mint például menta íz, metil-szalicilát vagy narancsíz. Amennyiben a dózisegység forma kapszula, ez a fenti anyagokon túl tartalmazhat folyékony hordozóanyagot, mint például polietilén-glikolt vagy zsírolajat. Egyéb dózisegység formák más hasonló anyagokat is tartalmazhatnak, amelyek a dózisegység fizikai formáját befolyásolják, például tartalmazhatnak bevonatokat. így például a tabletták és pilulák cukorral, shellac-kal vagy egyéb enterikus bevonóanyagokkal bevonhatók. A szirup forma tartalmazhat a jelen találmány szerinti vegyületen kívül szukrózt édesítőanyagként, illetve bizonyos tartósító-anyagokat, színezőanyagokat és színezékeket, valamint ízanyagokat. Az ilyen különféle készítmények előállításában alkalmazott segédanyagok az alkalmazott mennyiségben gyógyszerészetileg tiszták és nem toxikusak legyenek.

63.993/SM

- 86 • · · · * · · · • · · · · • ···· ··· • · · · · · • · · · · · • · · ·♦

A parenterális terápiás adagolás céljából a találmány szerinti vegyületeket oldat vagy szuszpenzió formává is alakíthatjuk. Az ilyen készítmények legalább 0,1 tömeg% találmány szerinti vegyületet tartalmazzanak, azonban tartalmuk 0,1-50 tömeg% érték között változhat. Az ilyen készítményekben a találmány szerinti vegyület mennyisége olyan, hogy a megfelelő dózis értéket elérjük. Előnyösen alkalmazható készítmények, illetve anyagok a találmány szerint úgy állíthatók elő, hogy a parenterális dózisegység forma 5,0-100 mg találmány szerinti vegyületet tartalmazzon.

Az (I) általános képletű találmány szerinti vegyületeket ezen túlmenően helyi úton is adagolhatjuk és amennyiben ezt az adagolást végezzük, a hordozóanyag valamely oldatképző, kenőcsképző vagy gélbázis alapanyag lehet. Az alapanyag lehet például egy vagy több alábbi komponenst tartalmazó anyag: petrolátum, lanolin, polietilén-glikolok, méhviasz, ásványolaj, hígítóanyagok, mint például víz és alkohol, és emulzifikáló, valamint stabilizáló szerek. A topikális készítmények az (I) általános képletű találmány szerinti vegyületet vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóját körülbelül 0,1-10 tömeg/térfogat%ban tartalmazhatják.

Az oldat vagy szuszpenzió formák ezen túlmenően tartalmazhatnak egy vagy több alábbi segédanyagot: steril hígítóanyagot, mint például injektálásra alkalmas víz, fiziológiai sóoldat, fixált oldajok, polietilén-glikolok, clicerin, propilén-glikol vagy egyéb szintetikus oldószerek, antibaketeriális hatóanyagokat, mint például benzil-alkohol vagy metil-parabén; antioxidánsokat, mint például aszkorbinsav vagy nátrium-hidrogénszulfit; kelátképző szereket, mint például etilén-diamin-tetraecetsav; puffereket, mint például acetátok, cifrátok vagy foszfátok és a tonicitást módosító segédanyagokat, mint például nátrium-klorid vagy dextróz. A parenterális adagolású készítmény ampullákba, eldobható

63.993/SM • · · ···· ····

- 87 injekcióstűkbe vagy többdózisú ampullákba, amelyek műanyagból vagy üvegből készülnek, foglalható.

A találmány szerinti vegyületek calpain és/vagy katepszin B inhibiálásában kifejtett hatásosságát és ebből eredően az (I) általános képletű vegyületek alkalmazhatóságát az akut vagy krónikus neurodegenerációs betegségek, beleértve az ischemiás gutaütést (trombolitikus vagy embólikus eredetű); vérzéses gutaütést és ezt követő véredény rendellenességet; szívizom infarctust; neurológiai következmény koronaér megbetegedésből, illetve beültetett szerv beültetéséből következően; fejtraumát; Alzheimer kórt; idős korral járó dementiát; véredény dementiát; Parkinson kórt; amyotrophiás laterális sclerosist és hasonlók kezelésében történő alkalmazási lehetőségét jól ismert in vitro és in vivő model tesztvizsgálatokkal határozhatjuk meg.

43. példa

In vitro teszvizsgálat calpain inhibitorok jelenlétében

Izom és eritrocita calpaint vetettünk alá tesztvizsgálatnak fluorometriás eljárásban szubsztrátként t-Boc-Val-Leu-Lys-7-amino-4-metil-kumarint alkalmazva a Sasaki és munkatársai, J. Bioi. Chem. 259, 12489-12494 (1984) közleménye szerint. A calpain enzim kereskedelemben kapható és a Sigma terméke. A tesztvizsgálati puffer, pH és tesztvizsgálati körülmények, valamint az inhibiáló állandó (K,) számítása hasonló, mint amit leírtak a Mehdi és munkatársai a Biochem. Biophys. Rés. Commun. 157, 1117-1123 (1988) közleményben. A 2. táblázatban összefoglaljuk a találmány szerinti választott vegyületek calpain inhibiálási mértékét.

63.993/SM

- 88 • · ·

2. Táblázat: In vitro calpain ínhibiálás

Vegyület	Enzim
Calpain Κ, (M)
MDL 104,903	3,3 x 10‘ö
MDL104.860	1,45 x 10’b
MDL 105,803	2,0 x 10'b
MDL 105,423	2,1 x 10'b
MDL 103,821	1,3 x 10'b
MDL 105,387	1,2x10'b
MDL 105,608	7,0 x 10'z
MDL 104,092	3,0 x 10'z
MDL 105,236	1,1 x 10'b

44. példa

In vivő neuroprotekció MDL 104,903 segítségével fokális agyi ischemia modelben

Az (I) általános képletű vegyületek hatásosságát az ischemiás gutaügés utáni neurológiai sérülésben és/vagy a calpain in vivő inhibiálásban bemutathatjuk az elfogadott fokális és globális ischemia modelek alkalmazásával, beleértve a permanens időszakos középső agyi artéria elzárás mintát, illetve az ipszilaterális közös carotid artéria elzárást, amelyet a Hong és munkatársai, aStroke 25, 663-669 (1994) közleményben írtak le. A fokális ischemiát, amely permanens és/vagy reverzibilis elzáródást okoz a középső agyi artériában, illetve a bilaterális közös carotid artériában, leírták a Bartus és munkatársai, a Stroke 25, 2265-2270 (1994) közleményben; továbbá alkalmazhatjuk a globális ischemiát, amely reverzibilis elzáródást okoz a közös carotid artériákban és/vagy a vertebrális artériákban, amelyet leírtak a Lee és munkatársai, a Proc. natl. Acad. Sci. 88, 7233-7237 (1991) közleményben.

63.993/SM

- 89 Például 12 hím spontán magas vérnyomású patkányt két csoportra osztottunk: az egyik csoportot hordozóanyaggal kezeltük, a másik csoportot calpain inhibitor hatóanyaggal kezeltük (MDL 104,903; 4 x 30 mg/kg kumulatív dózis). Az ischemiát folyamatos idó'szakos jobb oldali középsó' cerebrális artéria elzárással idéztük elő, illetve jobb oldali közös karotid artéria elzárást végeztünk. Az állatokat a sebészeti beavatkozás után 24 órával elpusztítottuk, majd az infarctus térfogatának kvantitatív mérését végeztük standard hisztológiai eljárások és kvantitatív ábra analízis segítségével. Az ischemia kezdete után 2 óra intervallumokban az 5. perctől kezdődően 4 x 30 mg/kg i.v. dózist kapott állatok (comi vénába) 20,5% infarctus térfogat redukciót mutattak. Az eredményeket az agyi infarctus csökkentésében, illetve ödéma csökkentésében a 3. táblázatban mutatjuk be.

3. Táblázat: MDL 104,903 hatása patkányokban az agyi infarctus csökkentésére

A. Hordozóanyaggal kezelt csoport

Állat száma (n = 12)	Agytérfogat (mm3)	Infarctus térfogata (mm3)	Infarctus térfogat/ Agytérfogat (%)
1	1300,76	206,44	15,87
2	1357,88	210,12	15,47
3	1298,76	207,94	16,01
4	1251,60	201,06	16,06
5	1314,98	191,10	14,53
6	1336,92	214,18	16,02
Átlagérték	1310,15	205,14	15,66
SEM*	14,90	3,32	0,24

* SEM az átlag jelentős standard hibája

63.993/SM • · ·

- 90 B. Inhibitorral kezelt csoport

Állat száma (n = 12)	Agytérfogat (mm3)	Infarctus térfogata (mm3)	Infarctus térfogat/ Agytérfogat (%)
7	1307,52	164,94	12,61
8	1309,36	185,16	14,14
9	1257,24	170,84	13,59
10	1313,62	178,58	13,59
11	1333,44	134,28	10,07
12	1326,46	144,92	10,93
Átlagérték	1307,94	163,12	12,49
SEM*	10,95	8,06	0,67

* SEM az átlag jelentős standard hibája

C. Az infarctus csökkenés százalékának és átlagértékeinek összehasonlítása

	Agytérfogat (mm3)	Infarctus térfogata (mm3)	Infarctus tér- fogata/Agytérfogat (%)	Csökkenés %
Hordozóanyag	1310,15	205,14	15,66
MDL 104,903	1307,94	163,12	12,49	20,24

A szerkezetileg rokon találmány szerinti vegyületek csoportjai általában hatásosak, azonban bizonyos csoportok és konfigurációk előnyösek. Előnyös (I) általános képletű találmány szerinti vegyületek az alábbi csoportok.

Előnyös (I) általános képletű találmány szerinti vegyületek, ahol az általános képletben R jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, különösen előnyösek, ahol R jelentése hidrogénatom.

Előnyös (I) általános képletű vegyületek, ahol az általános képletben R-i és R₂ mindegyikének jelentése egymástól függetlenül metilcsoport, n-propilcsoport, izopropilcsoport, n-butil-csoport, izobutil-csoport vagy szek-butil-csoport, különösen előnyösek, amelyekben ezek jelentése izopropilcsoport.

63.993/SM • · · •··· ····

- 91 Előnyös (I) általános képletű vegyületek, ahol az általános képletben R₃ jelentése hidrogénatom.

Előnyös (I) általános képletű vegyületek, ahol az általános képletben Rí és R₅ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy metilcsoport, különösen előnyösen hidrogénatom.

Előnyös (I) általános képletű vegyületek, ahol az általános képletben R₆ jelentése karbobenziloxi-csoport vagy (d) általános képletű csoport, ahol Z jelentése nitrogénatom vagy CH-csoport; és

B jelentése (e) képletű csoport, (f) általános képletű csoport, (g) általános képletű csoport vagy (h) képletű csoport, ahol

R’ jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport.

A találmány szerinti vegyületeket és eljárást adott példákon részletesen bemutattuk, azonban a szakember számára nyilvánvaló, hogy ez nem jelenti a találmány tárgykörének korlátozását és minden változtatást, alkalmazást vagy módosítást is beleértünk a találmány tárgykörébe, amely nem befolyásolja a találmány lényegét. A változtatásokba beleértjük a különféle fogyasztói gyakor latban a szakirodalomban ismert változtatásokat és amelyek továbbá a találmány igénypontjainak lényegét nem befolyásolják.

Claims (22)

1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. Az (I) általános képletű vegyület és gyógyszerészetileg elfogadható sói, ahol az általános képletben

   R és Q jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, hidroxilcsoport, 1-4 szénatomos alkilcsoport, 1-4 szénatomos alkoxi-csoport, nitrocsoport, aminocsoport vagy halogénatom;

   Rf és R₂ jelentése egymástól függetlenül 1-4 szénatomos alkilcsoport;

   R₃ jelentése hidrogénatom, 1-8 szénatomos alkanoil-csoport, (a) képletű csoport, (b) képletű csoport vagy (c) képletű csoport;

   R₄ és R₅ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy benzilcsoport;

   R₆ jelentése terc-butiloxi-karbonil-csoport, karbobenziloxi-csoport vagy (d) általános képletű csoport, ahol az általános képletben Z jelentése nitrogénatom vagy CH-csoport; és B jelentése (e) képletű csoport, (f) általános képletű csoport; (g) általános képletű csoport, (h) képletű csoport, (i) képletű csoport, (j) képletű csoport, (k) képletű csoport, (I) képletű csoport vagy (m) képletű csoport, ahol R’ jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

   R₇ jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;

   R₈ jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport;

   m jelentése 0 vagy 1;

   n jelentése 0 vagy 1;

   p jelentése 0-3 közötti egész szám; és q jelentése 0-3 közötti egész szám.

   63.993/SM

   - 93
2. 2. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol az általános képletben R₁ és R₂ mindegyikének jelentése egymástól függetlenül metilcsoport, n-propilcsoport, izopropilcsoport, n-butil-csoport, izobutil-csoport vagy szek-butil-csoport és n jelentése 1.
3. 3. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol az általános képletben R₃ jelentése hidrogénatom.
4. 4. A 2. igénypont szerinti vegyület, ahol az általános képletben R jelentése hidrogénatom, R₄ jelentése hidrogénatom, R₅ jelentése hidrogénatom és R₇ jelentése hidrogénatom.
5. 5. A 4. igénypont szerinti vegyület, ahol az általános képletben B jelentése (e) képletű csoport, (f) általános képletű csoport, (g) általános képletű csoport vagy (h) képletű csoport.
6. 6. A 4. igénypont szerinti vegyület, ahol az általános képletben R₆ jelentése karbobenziloxi-csoport.
7. 7. Az 1. igénypont szerinti [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter.
8. 8. Az 1. igénypont szerinti [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-(acetiloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter.
9. 9. Az 1. igénypont szerinti 4-morfolin-karbonsav-[4S-[3(R*),4a,5B]]-3-{3-metil-1-oxo-2-[[(fenil-metoxi)-karbonil]-amino]-butil}-4-(fenil-metil)-5-oxazolidinil-észter.
10. 10. az 1. igénypont szerinti [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-metil-karbaminsav, fenil-metilészter.

    63.993/SM »»k« ···*

    - 94
11. 11. Az 1. igénypont szerinti [4S-[4a,5B]]-5-hidroxi-4-(fenil-metil)-3-oxazolidin-karbonsav, fenil-metilészter.
12. 12. Az 1. igénypont szerinti [4S-[3(R*),4a,5ft]]-{1 -[[5-(butiriloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-metil-karbaminsav, fenil-metilészter.
13. 13. Az 1. igénypont szerinti [4S-[3(R*),4oe,5B]]-{1-[[5-(propionil-oxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-3-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter.
14. 14. Az 1. igénypont szerinti [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[5-(etil-szukciniloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonii]-2-metil-propil}-karbonsav, fenil-metilészter.
15. 15. Az 1. igénypont szerinti [4S-[3(R*),4a,5B]]-{1-[[-(2-etil-hexanoiloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter.
16. 16. Az 1. igénypont szerinti [4S-[3(R*),4oc,5ft]]-{1-[[5-(4-metoxi-fenilacetiloxi)-4-(fenil-metil)-3-oxazolidinil]-karbonil]-2-metil-propil}-karbaminsav, fenil-metilészter.
17. 17. Készítmény, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti vegyületet és valamely hordozóanyagot tartalmaz.
18. 18. Gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti vegyületet és gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot tartalmaz.
19. 19. Az 1-16. igénypont bármelyike szerinti vegyület alkalmazása calpain és/vagy katepszin B inhibitorok előállítására kívánt esetben valamely gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal kombinációban.

    63.993/SM

    - 95
20. 20. Az 1-16. igénypont bármelyike szerinti vegyület alkalmazása akut vagy krónikus neurodegeneratív betegség kezelésére kívánt esetben valamely gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal kombinációban.
21. 21. Az 1-16. igénypont bármelyike szerinti vegyület alkalmazása ischemiás gutaütés kezelésére kívánt esetben valamely gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal kombinációban.
22. 22. Az 1-16. igénypont bármelyike szerinti vegyület alkalmazása vérzéses gutaütés kezelésére kívánt esetben valamely gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal kombinációban.