HU225342B1 - K-252a-derivatives and pharmaceutical composition containing thereof and the novel compounds - Google Patents

K-252a-derivatives and pharmaceutical composition containing thereof and the novel compounds Download PDF

Info

Publication number
HU225342B1
HU225342B1 HU0301425A HU3001425A HU225342B1 HU 225342 B1 HU225342 B1 HU 225342B1 HU 0301425 A HU0301425 A HU 0301425A HU 3001425 A HU3001425 A HU 3001425A HU 225342 B1 HU225342 B1 HU 225342B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
compound
hydrogen
disease
obsession
medicament
Prior art date
Application number
HU0301425A
Other languages
English (en)
Inventor
Michael E Lewis
Jill Roberts-Lewis
Chikara Murakata
Hiromitsu Saito
Yuzuru Matsuda
James C Kauer
Original Assignee
Cephalon Inc
Kyowa Hakko Kogyo Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cephalon Inc, Kyowa Hakko Kogyo Kk filed Critical Cephalon Inc
Publication of HU225342B1 publication Critical patent/HU225342B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/14—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/407—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. ketorolac, physostigmine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/553—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one oxygen as ring hetero atoms, e.g. loxapine, staurosporine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Description

HU 225 342 Β1
A találmány a (III) és (IV) általános képletű K-252aszármazékoknak neuronfunkció erősítésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására történő alkalmazására vonatkozik. A találmány kiterjed az új (IV) általános képletű vegyületekre és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítményekre is. A bejelentés a P9500192 alapszámú bejelentés megosztása.
A proteinkinázok az enzimek nagy csoportját képezik, ezen enzimek az aminosavak foszforilezése révén számos, sejtben lévő fehérjét képesek kémiailag módosítani.
A proteinkinázok inhibitorai szerkezetileg igen eltérőek, és számos (némely esetben ellentmondó) hatást fejtenek ki az idegrendszerre és egyéb szövetekre. Egy adott proteinkináz-inhibitor képes arra, hogy több proteinkinázt is befolyásoljon. így például a K-252a jelű inhibitorról, amely egy alkaloid típusú anyag, amit a Nocardiopsis sp. és Actinomadula sp. táptalajából különítettek el, eredetileg azt állapították meg, hogy proteinkináz C inhibitor, de a továbbiak során azt tapasztalták, hogy ezen anyag a proteinkináz A és G, a miozin könnyű láncú kináz és a trk inhibitálására is képes [a trk rövidítés jelentése az idegsejt-növekedési faktor (NGF) által aktivált tirozinkináz; az idegsejt-növekedési faktor pedig egy neurotróf fehérje, amely a perifériális, érzékszervi és szimpatetikus neuronok idegsejtek - túlélését segíti elő]. Ezen utóbb említett hatással összhangban a K-252a jelű anyag blokkolja az NGF neurotróf hatását a PC-12 jelzésű sejteken [ezek patkányok mellékvesevelősejt-daganataiból levett kromafin sejtek (pheocromocytomák)], és elősegíti a hátsó gyöki ganglionneuronok és a hippocampalis neuronok túlélését. Azonban ez az anyag széles koncentrációtartományban citotoxikusnak mutatkozott, aminek következtében több kutató arra a véleményre jutott, hogy ezen anyagnak in vivő alkalmazása igen korlátozott.
Ismeretes, hogy a staurosporin, ami egy mikrobás eredetű alkaloid típusú, a K-252a anyaggal rokon termék, szintén többféle hatást fejt ki a proteinkinázokra és a különböző típusú sejtekre. Azt találták, hogy a staurosporin az NGF-hez hasonló hatást fejt ki a PC-12 jelzésű sejtek esetében, és védőhatást mutat, megakadályozza, hogy az ischaemiás állapotokat követően károsodás lépjen fel a hippocampusban. Ez az anyag (a staurosporin) képes arra, hogy a patkányok bazális előagyában a kolinerg neuronokbán keletkezett károsodást megszüntesse.
A K-252a jelű anyagot és a staurosporint tumorinhibitorként ajánlják. Ezenkívül a staurosporint inszekticid anyagként is javasolják alkalmazni. A staurosporinszármazékokat, mint például a metil-amin-csoport nitrogénatomján szénhidrogéncsoportot vagy acilcsoportot tartalmazó vegyületeket a következő célokra javasolják alkalmazni: tumorinhibitálásra, gyulladásos állapotok inhibitálására, az immunrendszer befolyásolására, valamint a kardiovaszkuláris és központi idegrendszer megbetegedéseinek kezelésére.
A találmány tárgyát képező új (IV) általános képletű K-252a-származékok képletében
R1, R2, R4, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom és R3 jelentése -CH2CH=CH2 képletű csoport (IV-1 jelű vegyület);
R1, R2, R3, R4, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom (IV-2 jelű vegyület);
R1, R2, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom és R3 és R4 jelentése -CH2CH=CH2 képletű csoport (IV-3 jelű vegyület); vagy
R1, R2, R3, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom és R4 jelentése -CH2CH=CH2 képletű csoport (IV-4 jelű vegyület).
Az új (IV) általános képletű vegyületek lehetnek gyógyászatilag megfelelő sók formájában is. A (IV) általános képletű vegyületeknek gyógyászatilag megfelelő sói közül említjük meg a gyógyászatilag megfelelő savaddíciós sókat, fémsókat, ammóniumsókat, a szerves aminvegyületekkel képzett addíciós sókat, továbbá az aminosavakkal képzett addíciós sókat.
A gyógyászatilag megfelelő savaddíciós sók közül példaként említjük meg a szervetlen savakkal képzett addíciós sókat, mint például a sósavas sót, kénsawal és foszforsawal képzett sókat, továbbá a szerves savakkal képzett addíciós sókat, mint például az acetátokat, maleátokat, fumarátokat, tartarátokat és citrátokat. A gyógyászatilag megfelelő fémsók közül említjük meg az alkálifémsókat, mint például a nátriumsókat és káliumsókat, az alkálifém- és alkáliföldfémsókat, mint például a magnéziumsókat és kalciumsókat, továbbá az alumíniumsókat és cinksókat. A gyógyászatilag megfelelő ammóniumsók közül említjük meg az ammóniumsókat, valamint a tetraetil-ammónium-sókat. A gyógyászatilag megfelelő szerves aminvegyületekkel képzett addíciós sókra példaként említjük meg a morfolinnal és piperidinnel képzett sókat. A gyógyászatilag megfelelő aminosavakkal képzett addíciós sók közül példaként említjük meg a lizinnel, glicinnel, valamint fenil-alaninnal képzett sókat.
A találmány tárgyához tartozik a (Ili) és (IV) általános képletű vegyületek alkalmazása gyógyszerkészítmények előállítására, továbbá az új (IV) általános képletű vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények is - a képletekben a helyettesítők jelentése az 1., 2., 3. és 4. táblázatban meghatározott -, amelyek a kolinerg neuronok, striatumneuronok, érzékszervi neuronok, így például a hátsóideggyökér-ganglionneuronok funkcióit fokozzák. Az ezekkel végzett kezelés során emlősöknek, ideértve a humán betegeket is, terápiás mennyiségű új diszubsztituált staurosporinszármazékot tartalmazó gyógyszerkészítményt adunk be. A gyógyszerkészítmény egy neurotróf faktort is tartalmazhat; neurotróf faktorként szerepelhet e családhoz tartozó vegyületek valamelyike, legelőnyösebben idegsejt-növekedési faktor (NGF). A neurotrófcsalád olyan fehérjecsoportot jelent, amely az NGF jelentős homológjait magában foglalja; idetartozik az NGF mellett az agyból nyert neurotróf faktor is [BDNF; Leibrock és munkatársai: Natúré, 341, 149-152, (1989)]; továbbá a neutrofil-3 [NT-3; Hohn és munkatársai. Natúré 344, 339-341 (1990)]; valamint a neurotróf-5 [NT-5; Berkemeier és munkatársai: Neuron 7, 857-866 (1991)].
HU 225 342 Β1
2. táblázat
A találmányunk szerinti gyógyszerkészítményekkel és a találmányunk szerint előállított gyógyszerkészítményekkel (továbbiakban: találmányunk szerinti gyógyszerkészítmények) a kolinerg neuronok, a corpus striatum neuronjai, az érzékszervi neuronok, így például a hátsó gyöki ganglionneuronok funkciói erősíthetők. Ennek megfelelően ezek a gyógyszerkészítmények például az alábbi betegségek kezelésére alkalmasak: Alzheimer-kór, motorosneuron-megbetegedés, agyérrendszeri betegség, AIDS-szel kapcsolatos dementia, epilepszia, Huntington-kór, az agy vagy gerincagy rázkódásos vagy behatoló sérülésével kapcsolatos betegségek.
A fenti gyógyszerkészítmények terápiás mennyiségű K-252a jelű hatóanyag-származékot tartalmaznak, amely származékokat a (III) és (IV) általános képlettel írhatjuk le, a képletekben a szubsztituensek jelentését az alábbi táblázat foglalja össze.
1. táblázat
Vegyület R1 R2 X R ZKD Z2
111-1 - - - - H
III-2 - - - - O
IV-1<4·9) H H - - H
IV-2<5) Br H - - H
IV-3(«) H H - - H
IV-4(®'9> H H - - H
(1) Z1 és Z2 jelentése egyaránt hidrogénatom, vagy együttes jelentésük egy oxigénatom;
(4) R3 jelentése -CH2CH=CH2; R4 jelentése hidrogénatom;
(5) R3 és R4 jelentése egyaránt hidrogénatom;
(6) R3 és R4 jelentése egyaránt -CH2CH=CH2 csoport;
(7) a vegyület sósavas só formájában van;
(8) R3 jelentése hidrogénatom és R4 jelentése -CH2CH=CH2 csoport;
(9) IV-1 és IV-4 jelentése e két komponens 1,5-1,0 arányú elegye.
Ahogy fentebb említettük, a találmányunk szerinti gyógyszerkészítmények tartalmazhatnak egy neurotróf faktort is, erre a célra a neurotrofincsalád valamely tagját választjuk, legelőnyösebb az idegnövekedési faktor (NGF). Ezek a készítmények Huntington-kór kezelésére is alkalmasak.
Találmányunk egyik előnyös kiviteli alakja olyan (III) általános képletű K-252a-származékot tartalmazó gyógyszerkészítményre vonatkozik, amellyel a hátsó gyöki ganglion idegsejt funkciói erősíthetők. Az ezzel végzett kezelés során valamely emlősnek, ideértve a humán betegeket is, ezen származékok terápiásán hatásos mennyiségét adjuk be. A (III) általános képletben a szubsztituensek jelentését a 2. táblázatban foglaljuk össze.
Vegyület R1 X R Ztó> Z2
111-1 - - - H
ííl-2 - - - O
(1) Z1 és Z2 jelentése egyaránt hidrogénatom, vagy együttes jelentésük egy oxigénatom.
A találmányunk szerinti gyógyszerkészítmény neurotróf faktorként előnyösen a neurotrofincsalád valamely tagját tartalmazza, előnyösen idegsejt-növekedési faktort (NGF) tartalmaz.
A neurotróf faktorként előnyösen a neurotrofincsalád valamelyik tagját, legelőnyösebben idegsejt növekedési faktort (NGF) tartalmazó gyógyszerkészítmények Huntington-kór gyógyítására alkalmasak.
Találmányunk egy másik megvalósítási módja szerint a corpustriatum-idegsejtek funkcióit javító és/vagy emlősöknél (ideértve a humán betegeket is) e sejtek túlélését fokozó hatású gyógyszerkészítményt állítunk elő, amely terápiás mennyiségben egy (III) vagy (IV) általános képletű K-252a-származékot tartalmaz;
a képletben a szubsztituensek jelentését a 3. táblázat foglalja össze.
3. táblázat
Vegyület R1 R2 X R ZKD Z2
111-1 H H - - H
IV-1(2) - H - - H
(1) Z1 és Z2 jelentése egyaránt hidrogénatom;
(2) R3 jelentése CH2-CH=CH2 képletű csoport és R4 jelentése hidrogénatom.
Találmányunk egy másik kiviteli alakját képezi a K-252a jelű speciális funkciós származékok olyan neurológiai betegségek vagy zavarok kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására történő alkalmazása, amely betegségekre jellemző, hogy sérült neuronok, axonális degenerációt mutató neuronok vagy olyan neuronok keletkeznek, amelyeknél a pusztulás veszélye áll fenn. Ezen funkciós származékokat adhatjuk önmagukban vagy egy neurotróf faktorral együtt [előnyösen a neurotrofincsalád egy tagját adjuk, legelőnyösebb az az eset, amikor az idegnövekedési faktorral együtt (NGF) adjuk]. Funkcionális származék alatt olyan K-252a-származékokat értünk, ahol ezen molekula módosított származékáról van szó, ahol a származék kedvező biológiai hatást mutat, amit a továbbiakban neuroprotektív hatásnak nevezünk, ilyen hatás például az idegsejtek túlélését fokozó képesség, vagy az idegszálak (így például axonális) növekedését fokozó képesség, vagy pedig a kolinerg idegsejtek funkcióit javító hatás, vagy az érzékelősejtek, mint például hátsó gyöki ganglionidegsejtek funkcióit javító ké3
HU 225 342 Β1 pesség, vagy a corpus triatum neuronjainak túlélését és/vagy funkcióját fokozó képesség. A molekula ilyen módosítása javíthatja egyidejűleg a vegyület oldékonyságát, abszorpcióját, szállíthatóságát (így például a véráram korlátján és a sejtmembránon keresztül történő szállítását), továbbá növelheti a vegyület biológiai felezési idejét és így tovább. Másik lehetőségként vagy pluszhatásként némely csoportnak a vegyületbe való bevitele csökkentheti a vegyület toxicitását, vagy pedig a vegyület valamely nemkívánatos mellékhatását mérsékelheti, vagy teljesen kiküszöbölheti.
Az ezen kiviteli alakban alkalmazott vegyületeket a (III) és (IV) általános képlettel írhatjuk le; e képletekben lévő szubsztituensek jelentését az alább következő 4. táblázat sorolja fel, szemléltetve a találmány oltalmi köréhez tartozó vegyületeket. A K-252a jelű vegyületnek találmány szerinti funkciós származékait új eljárással, egy kémiai szintézis segítségével állíthatjuk elő, amelynek során ismert módszereket alkalmazunk. így például a (lll) képletű vegyület előállítása ismert módszerekkel történik [Moody és munkatársai: J. Org. Chem. 57, 2105-2114. oldal (1992); Steglich és munkatársai: Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 19, 459-460 (1980); Nakanishi és munkatársai: J. Antibiotics 39, 1066-1071 (1986); a 60-295172 számú japán szabadalmi bejelentés (1985)].
4. táblázat
A K-252a10 jelű vegyület funkciós származékai
Vegyület R1 R2 X R Z1<1) Z2
111-1 - H - - H
III-2 - H - - O
IV-1<4'9> H H - - H
IV-215) Br H - - H
IV-3Í6) H H - - H
IV-4(®'9> H H - - H
(1) Z1 és Z2 jelentése egyaránt hidrogénatom, vagy együttes jelentésük egy oxigénatom;
(4) R3 jelentése -CH2CH=CH2; R4 jelentése hidrogénatom;
(5) R3 és R4 jelentése egyaránt hidrogénatom;
(6) R3 és R4 jelentése egyaránt -CH2CH=CH2 csoport;
(8) R3 jelentése hidrogénatom és R4 jelentése -CH2CH=CH2 csoport;
(9) IV-1 és IV-4 jelentése e két komponens 1,5-1,0 arányú elegye;
(10) a K-252a jelű vegyületben R1 és R2 jelentése hidrogénatom, X jelentése CO2CH3 csoport, R jelentése hidroxilcsoport, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom.
A találmány szerinti gyógyszerkészítményekkel fokozható a kolinerg neuronok funkciója is, az ezekkel végzett kezelés során terápiásán hatásos mennyiségben K-252a hatóanyag-származékot adunk a betegnek; e vegyületet a (lll) és (IV) általános képlettel írhatjuk le; a szubsztituensek jelentését a 4. táblázatban adjuk meg (a K-252a jelű vegyületre vonatkozik a 10. lábjegyzet). E vegyületet a szakirodalomban ismertetett módszerekkel állítjuk elő [lásd Matsuda és munkatársai: 4 554 402 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás; Kasé és munkatársai: J. Antibiotics 37:1059-1065 (1986)]. A leírásban alkalmazott „kolinerg neuronok funkcióinak fokozása kifejezés azt jelenti, hogy elősegítjük a kolinerg idegsejtek túlélését és/vagy az idegszálak (mint például az axonális szálak) növekedését, és/vagy fokozzuk az idegsejtek kolinerg tevékenységét. A K-252a jelű vegyületet alkalmazhatjuk önmagában vagy egy neurotróf faktorral együtt, célszerűen a neurotrofincsalád egy tagja jön számításba, legelőnyösebb, ha az idegnövekedési faktort (NGF) használjuk.
K-252a jelű vegyület funkciós származékait alkalmazhatjuk önmagukban vagy valamely neurotróf faktorral, mint például NGF-fel kombinálva; e vegyületeket terápiás célokra használhatjuk neurológiai betegségek kezelésénél, elsősorban olyan betegségek jöhetnek itt figyelembe, amelyekre jellemző, hogy a sérült, korlátozott, axonális degenerációban szenvedő, vagy pusztulás veszélyének kitett neuronsejtek fokozott szerepet játszanak, vagy olyan neuronsejtek vannak jelen, amelyek csökkent kolinerg hatást mutatnak. E betegségekhez tartoznak azok is, amelyeket a serkentőaminosavak idéznek elő. A találmány szerinti vegyületek bioaktivitását, ideértve a neurotróf faktorokkal való kombinációk bioaktivitását is, ismert módon vizsgáljuk PC-12 jelzésű sejtek tenyészetében az ornitin-dekarboxiláz-módszerrel, továbbá gerincagysejtek tenyészetében kolin-acetil-transzferáz-vizsgálattal, a hátsó gyöki ganglionneuronok túlélésének vizsgálatával, corpustriatum-tenyészetben végzett neurontúlélési vizsgálattal vagy az in vivő körülmények között végzett excitotoxin neurop vizsgálattal, e módszereket az alábbiakban részletezzük. A találmány szerinti vegyületek előnyösen alkalmazhatók a humán páciensek kezelésére vagy egyéb emlősöknél, amelyek neurológiai betegségekben vagy zavarokban szenvednek, amely betegségekre jellemző a neuronsejtek pusztulásának vagy téves működésének fokozott veszélye a fentiekben ismertetettek szerint. Ezen neurológiai betegségek és zavarok közül említjük meg nem korlátozó értelemben az alábbiakat: az Alzheimer-kór; motorosneuron-megbetegedés, ideértve az izomsorvadásos laterális szklerózist; továbbá Parkinson-kór, agyvérzés és az egyéb ischaemiás károsodások; Huntington-féle kór; AIDS-szel kapcsolatos dementia, epilepszia, rázkódásból vagy behatolásból eredő agyi vagy gerincvelő-károsodás, valamint a perifériális neuropátiák.
A találmány szerinti vegyületeket gyógyászati készítményekké alakíthatjuk oly módon, hogy ezeket gyógyászatilag megfelelő nem toxikus segéd- és vivőanyagokkal elegyítjük. Ezen készítményeket alkalmazhatjuk parenterális beadásra, elsősorban folyékony oldatok vagy szuszpenziók formájában; készíthetünk orális beadásra szánt készítményeket, elsősorban tablettákat vagy kapszulákat; továbbá előállíthatunk orron keresztül beadható készítményeket, így például porokat, nazális cseppeket vagy aeroszolokat.
HU 225 342 Β1
A készítményeket előnyösen egységdózis formájában adjuk, előállításuk a gyógyszerészeti technológia ismert módszerei szerint történik, lásd például Remington’s Pharmaceutical Sciences [Mack Pub. Co, Easton, PA, 1980]. A parenterális beadásra szánt készítmények tartalmazhatnak olyan általánosan használt vivőanyagokat, mint steril víz vagy sóoldatok, polialkilénglikolok, mint például polietilénglikol, növényi eredetű olajok, hidrogénezett naftalinszármazékok és így tovább. Különösen előnyös a biokompatibilis, biológiailag lebontható laktidpolimerek, laktid/glikolid kopolimerek vagy poli(oxi-etilén)-poli(oxi-propilén) kopolimerek alkalmazása, amelyek a hatóanyag szabályozott leadását képesek biztosítani. Ezen hatóanyagokhoz alkalmazható egyéb parenterális célra szánt vivőanyagok közül említjük meg az etilén-vinil-acetát kopolimer részecskéket, az implantálható infúziós rendszereket, az ozmotikus szivattyúkat és a liposzómákat. Az inhalálás céljára szánt készítmények tartalmazhatnak vivőanyagként például laktózt, vagy készíthetünk vizes oldatokat, amelyek például poli(oxi-etilén)-9-lauril-étert, glikokolátot vagy dezoxikolátot tartalmaznak, vagy készíthetünk olajos oldatokat, amelyeket nazális cseppek formájában adhatunk a betegeknek, vagy készíthetünk intranazális alkalmazásra szánt géleket. A parenterálisan beadásra szánt készítmények mellett megemlítjük a szájon keresztül beadandó, glikokolátot tartalmazó készítményeket, a metoxi-szalicilátot tartalmazó rektális készítményeket és a citromsavat tartalmazó vaginális készítményeket.
A találmány szerinti hatóanyagokat alkalmazhatjuk egyedüli vegyületként vagy egyéb hatóanyagokkal kombinálva gyógyászati készítmények formájában, így például használhatunk egyéb hatóanyagként növekedést elősegítő faktorokat, amelyek elősegíthetik a neuronális túlélést, vagy a neurológiai betegségek és rendellenességek esetében az axonális növekedést, így például a perifériás neuropátia kezelésénél.
A találmány szerinti vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítményekben a hatóanyagok koncentrációja több tényezőtől függ, ezek közül említjük meg a beadandó gyógyszer dózisát, az alkalmazott vegyület kémiai jellemzőit (így például hidrofób jellegét), továbbá a beadás útját. Általában a találmány szerinti vegyületeket vizes, fiziológiás pufferoldatban adjuk, ahol az oldat 0,1-10 tömeg/térfogat%-os parenterális célra szánt készítmény. Általában a beadandó dózis értéke mintegy 1 gg/kg-tól 1 g/kg testtömeg/nap között változhat; az előnyös dózis mennyisége mintegy 0,01 mg/kg és 100 mg/kg testtömeg/nap érték között van. Az előnyös dózis nagysága több tényezőtől függ, így például a neurológiai betegség mértékétől és előrehaladott állapotától, a kezelt beteg általános egészségi állapotától, valamint a kiválasztott vegyület relatív biológiai hatásától, továbbá a választott készítményformától, a vivőanyagoktól és a beadás módjától.
A találmány szerinti megoldást az alább következő példák szemléltetik. A példákat a korlátozás szándéka nélkül ismertetjük; az oltalmi kört az igénypontok határozzák meg.
Az ábrák ismertetése
Az 1. ábra szemlélteti a K-252a, az 1,6-hexametilén-bisz(karbamoil-staurosporin) (HBCS) és a staurosporin hatását a bazális ornitin-dekarboxiláznak (ODC) a PC-12 jelzésű sejtekben kifejtett működésére. Az ábrán feketével jelöljük az alapszintet, majd felváltva csíkozott és fekete kockával jelöljük a 2 nmol, 20 nmol és 200 nmol/l koncentrációjú oldatokban kapott értékeket.
A 2. ábra szemlélteti a staurosporin, HBCS és a K-252a-nak az NGF-fel stimulált ODC-re kifejtett hatását a PC-12 jelzésű sejtekben. Az ábrákon a jelölések az
1. ábránál megadottal azonosak.
A 3. ábra szemlélteti az NGF-fel fokozott HBCShatást az ODC vonatkozásában a PC-12 jelzésű sejtekben, az ábrán négyzettel jelöljük az NGF nélkül végzett kísérleteket, és rombusszal az NGF jelenlétében végzett kísérleteket.
A 4. ábra szemlélteti a K-252a által a kolin-acetil-transzferázra (ChAT) kifejtett hatást patkányoktól levett embrionális gerincagysejt-tenyészetekben. A vízszintes tengelyen a K-252a növekvő koncentrációját tüntetjük fel. A függőleges tengelyen a ChAT-hatást tüntetjük fel.
Az 5. ábra szemlélteti a K-252a-nak a ChAT-re kifejtett hatását patkányoktól levett embrionális gerincagysejt-tenyészetben az idő függvényében. A vízszintes tengelyen a tenyésztés idejét adjuk meg napokban. A függőleges tengelyen a ChAT-hatást tüntetjük fel.
A 6. ábra szemlélteti a K-252a hatását a csirkeembrió hátsó gyöki ganglionneuronok túlélése tekintetében. A vízszintes tengelyen a K-252a koncentrációját tüntetjük fel. A függőleges tengelyen a relatív fluoreszcenciaértékek láthatók.
A 7. ábra mutatja be a K-252a funkciós származékainak a csirkeembrió hátsó gyöki ganglionneuronok túlélésére kifejtett hatását. A vízszintes tengelyen az NGF-fel indukált hatásnövekedés látható %-ban. A függőleges tengelyen a vizsgált vegyületek szerepelnek. Az ábrán szereplő (II) általános képletű alá tartozó vegyületeket a P9500192 alapszámú magyar bejelentésben ismertették.
A 8. ábra szemlélteti a K-252a funkciós származékoknak a ChAT-re kifejtett hatását patkányembrióktól levett gerincagysejt-tenyészetekben. A vízszintes és függőleges tengelyen a 7. ábránál megadott adatok szerepelnek.
A 9. ábra mutatja be a K-252a hatását a kainát által a patkányhippocampusban létre5
HU 225 342 Β1 hozott károsodás vonatkozásában. A függőleges tengelyen a károsított területek száma látható.
A 10. ábra mutatja be a K-252a által kifejtett hatást a kainát által a patkányoktól levett hippocampusban előidézett spektrinproteolízis vonatkozásában. A függőleges tengelyen a spektrinproteolízis %-os értéke látható a kontrolihoz viszonyítva.
A11. ábra mutatja be a HBCS hatását a kainát által a hippocampusban előidézett károsodás vonatkozásában. A függőleges tengelyen a károsított területek száma látható.
A 12. ábra szemlélteti a K-252a-analógok hatását a kainát által a patkányoktól levett hippocampusban előidézett spektrinproteolízisre. A függőleges tengelyen láthatjuk a spektrinproteolízis mértékét; a vízszintes tengelyen a kísérlethez használt vegyületek szerepelnek.
A 13. ábra szemlélteti a corpus triatum neuronjainak túlélését K-252a jelenlétében. A függőleges tengelyen a sejttúlélés látható (szoros növekedés). A vízszintes tengelyen a K-252a koncentrációja van feltüntetve.
A 14. ábra mutatja be a corpusstriatum-sejtek túlélését K-252a jelenlétében. A függőleges tengelyen a sejtszám látható. A vízszintes tengelyen a tenyésztés időtartamát tüntetjük fel napokban. Feketével jelöljük a kontrollértékeket, vonalkázva jelöljük a K-252a-val kapott eredményeket.
A 15. ábra szemlélteti a corpusstriatum-neuronok túlélését K-252a jelenlétében és anélkül. A 15a. ábrán a kontroll látható, a 15b. ábrán a 75 nmol/l koncentrációjú K-252a jelenlétében kapott eredmény van feltüntetve.
1. példa
A PC-12 jelzésű sejtek patkányok mellékvesevelő-daganatából származó klónozott sejttenyészet, ezen tenyészetet eredményesen alkalmazzák az NGF hatásának tanulmányozására [Guroff: Cell Culture in the Neurosciences, Plenum Publishing Corporation, 8. fejezet, 245-272. oldal (1985)]. Ezen sejttenyészetekben az NGF hatása elsősorban abban nyilvánul meg, hogy az NGF az ornitin-dekarboxiláz (ODC) tevékenységét nagymértékben stimulálja; ezen tevékenységről megállapították, hogy ez 200 nmol/liter koncentrációjú K-252a segítségével eredményesen blokkolható [Koizumi és munkatársai, 1988]. Jelen példában ismertetett kísérleteink során PC-12 jelzésű sejteket [amelyeket Dr. Guroff G.-től kaptunk] tenyésztünk 48 nyílású lemezeken, a nyílásokba 6*104 sejt/cm1 2 sűrűségű szuszpenziót adunk. A nyílásokba staurosporint vagy
HBCS-t, valamint a gyógyszerekhez használt vivőanyagot (0,5 tömeg% DMSO) adunk. A K-252a jelű vegyületet és staurosporint a kereskedelmi forgalomban Kamiya Biomedical cégtől szereztük be. Négy órával a gyógyszer hozzáadása után a sejteket összegyűjtjük ODC-vizsgálat céljára; a vizsgálatot Huff és munkatársai által ismertetett módszer szerint [J. Cell. Bioi. 88, 189-198 (1981)] végezzük.
Mindhárom vegyület fokozza az ODC hatását, azonban a három vegyület hatásossága között lényeges differenciák mutatkoztak (lásd az 1. ábrát). A K-252a jelű vegyület a dózistól függően fokozza az ODC hatását, ami 2 nmol/l koncentrációnál jól észlelhető. A hatás fokozódik egészen a 200 nmol/liter koncentrációnál mért maximumig (36,3-szeres indukálás). Hasonlóképpen a staurosporin hatása jól észlelhető volt 2 nmol/l koncentrációnál, azonban a csúcsértéket már 20 nmol/l koncentrációnál elérjük (34,7-szeres indukálás), és 200 nmol/l koncentrációnál a hanyatlás már jelentősnek mutatkozott. Hasonlóképpen a HBCS 2 nmol/l koncentrációnál észlelhető hatást mutatott, azonban a magasabb koncentrációértékeknél a hatás nem fokozódott, így a maximális hatásosság lényegesen kisebb volt, mint amit a másik két vegyületnél észleltünk (6,5-szeres indukálás). Egy másik kísérletsorozatban összehasonlítottuk a PTCS, PCS és ECS-nek a PC-12 jelzésű sejtekben mért, ODC-re kifejtett aktivitását, és a kapott eredményeket összehasonlítottuk a K-252a jelű vegyülettel elért eredményekkel. Amennyiben a K-252a jelű vegyület 200 nmol/l koncentrációértéknél észlelt hatását 100%-nak vesszük, úgy a PTCS által mutatott érték a K-252a-hoz viszonyítva mindössze 71,4% volt; ugyanakkor a PCS és ECS által mutatott hatás 88,9%-osnak, illetőleg 61,9%-osnak mutatkozott a K-252a-hoz viszonyítva. Meg kell jegyezni azonban, hogy a proteinkináz C H-7 inhibitor 30 pmol/l koncentrációértéknél nem indukálta az ODC aktivitását, amely koncentrációról az vált ismertté, hogy a proteinkináz C aktivitását inhibitálja [Nakadate és munkatársai, Biochem. Pharmacol. 37, 1541-1545. oldal (1988)].
A K-252a jelű vegyület, a staurosporin és HBCS azon képességét, miszerint ezen anyagok az NGF bioaktivitását potencírozzák és/vagy inhibitálják, oly módon vizsgáljuk, hogy 10 pg NGF/ml sejttenyészethez fenti vegyületeket adjuk az előbbiekben megadott koncentrációban; a vizsgálatot a fentiekben leírt, a sejtek ODC-vizsgálata szerint végezzük (az eredményeket a
2. ábra tünteti fel). Az NGF koncentrációját oly módon választjuk meg, hogy az egy közepes indukciós szintet biztosítson, és ezáltal a vizsgált vegyületek inhibitorvagy potencírozóhatása jól kitűnjön. 200 nmol/l koncentrációjú K-252a jelű vegyület inhibitálja az ODC-nek az NGF által előidézett indukcióját, mint ahogy azt Koizumi és munkatársai észlelték (1988), de meglepő módon e vegyület az indukciót alacsonyabb koncentrációértékeknél határozottan potencírozza (2 nmol/liter és 20 nmol/liternél). A staurosporin 2 nmol/l koncentrációértéknél szintén potencírozza az NGF indukciós hatását, azonban ez a hatás magasabb
HU 225 342 Β1 koncentrációértékeknél (20 és 200 nmol/l) eltűnik. A HBCS ezzel szemben az NGF hatását minden koncentrációértéknél potencírozza. Ezt a meglepő hatást szemlélteti a 3. ábra, ahol feltüntetjük az önmagában adott HBCS-nek kismértékű ODC-indukáló hatását is.
2. példa
A K-252a jelű vegyületnek kolin-acetil-transzferázra (ChAT) kifejtett hatását patkányembriók gerincvelőjéből készített tenyészeten standardmódszerekkel ellenőrizzük (lásd az alábbiakban). A ChAT olyan enzim, amely a neuronátvitelnél szereplő acetil-kolin szintézisét katalizálja, és specifikus biokémiai jelzőanyagnak tekinthető a kolinerg neuronok tekintetében. A gerincvelőben a kolinerg neuronok nagyobb része motoros neuron. Ezen enzim vizsgálata tehát felhasználható egy olyan faktor indikátoraként, amely vagy amelyek a kolinerg neuronok túlélését és/vagy ezen enzim szabályozóképességét befolyásolják.
Megadott koncentrációértékben K-252a jelű vegyületet adunk a sejttenyészethez 2-3 óráig tartó inkubációs időt követően, amely idő alatt a sejteknek módjukban állt a szubsztrátumhoz kapcsolódni. 48 óra eltelte után a táptalajban ChAT-aktivitást mérünk. Gerincagytenyészetben a K-252a jelű vegyület dózistól függő növekedést idéz elő a ChAT-aktivitásban, a hatásosság maximuma (2-3-szoros növekedés) 200-300 nmol/liter koncentrációnál lép fel (az eredményeket a 4. ábra tünteti fel). A nagyobb koncentrációértékek esetében a ChAT-aktivitás csökkenése észlelhető (lásd a 4. ábrát). Hosszabb ideig tartó inkubációs idők esetében - egészen 7 napig tartóan - a ChAT-aktivitás tekintetében a vizsgált vegyület 4-5-szörös növekedést eredményezett (lásd az 5. ábrát), ami a ChAT-aktivitás csökkent alapszintjének tulajdonítható. Ebben a táptalajrendszerben növekvő számú motoros neuron degenerálódik vagy pusztul el az alap- (kontroll) körülmények között [McManaman és munkatársai: Developmental Bioi. 125:311-320 (1988)]. A 4. és 5. ábrán feltüntetett eredmények a K-252a jelű vegyülettel egy alkalommal végzett kezeléshez tartoznak, a K-252a jelű vegyületet a táptalaj beoltásának napján adjuk az elegyhez, az eredmények azt mutatják, hogy e vegyület a gerincagy kolinerg neuronjainak túlélésére és/vagy magának az enzim szabályozására tartós hatást fejt ki. Módszerek: Patkányembriótól vett gerincagysejtekkel készült tenyészeten végzünk kísérleteket, ezeket ismert módon hajtottuk végre [Smith és munkatársai: J. Cell. Bioi. 101, 1608-1621. oldal (1985)]. A gerincagyból nyert sejteket ismert módon tettük a vizsgálathoz alkalmassá, 14 napos patkányembriókból kivett gerincagyból ismert módon készítettük el a tenyészetet, tripszint használva a szövet elbontására (Smith és munkatársai, 1985). A sejteket poli-1-ornitinnel bevont műanyag lemezen lévő szövettenyészetekre vittük fel, 6*105 sejt/cm2 mennyiségben; szérummentes N2 táptalajt alkalmaztunk, és az elegyet 37 °C hőmérsékleten inkubáltuk nedves atmoszférában, amelynek összetétele: 5% CO2/95% levegő [Bottenstein and Sato, PNAS 76, 514-517. oldal (1979)], az inkubálást 48 óra hosszat végeztük.
A ChAT-aktivitást a módosított Fonnum-módszer szerint vizsgáltuk [J. Neurochem. 24, 407-409. oldal (1975)], a módosítás Ishida és Deguchi szerint történt [J. Neurosci. 3, 1818-1823. oldal (1983) és McManaman és munkatársai: supra (1988)]. Az aktivitást az összfehéijéhez viszonyítottuk, aminek értékét a bicinchonicsav/Cu++ reakcióval állapítottuk meg [a BCA-fehérje-vizsgálathoz használt reagenst Pierce, Rockland, ll-től szereztük be],
3. példa
A gerincagy-ChAT-vizsgálat segítségével több mint száz K-252a jelű vegyület funkciós származékát vizsgáltuk meg, értékelve a vegyületek relatív hatásosságát. A 8. ábrán feltüntetett adatokból kitűnik, hogy 300 és 30 nmol/liter koncentrációértékeknél az ismert funkciós származékok közül 28 mutatott jelentős ChAT-aktivitás-növekedést 300 nmol/liter koncentrációértéknél. [Az ábrákon szereplő, a (II) általános képlet alá tartozó vegyületeket a P9500192 alapszámú magyar szabadalmi bejelentésben ismertették.] A funkciós származékok közül az egyik, a 11-21. jelzésű vegyület, már 30 nmol/liter értéknél is hatásos volt (a ChAT-aktivitás 30%-os növekedését mértük az alapszint felett). Ez a vegyület hatásosabbnak mutatkozott, mint a K-252a jelzésű vegyület maga, vagy mint a többi analóg származék, minthogy ezen vegyületek egyike sem növelte a ChAT-aktivitást 30 nmol/l értéknél.
Az alábbi 5. táblázatban ismert és új K-252a-származékok hatását mutatjuk be, amit patkány-gerincagytenyészetben a ChAT-aktivitás növekedése alapján állapítottunk meg.
5. táblázat
A K-252a-származékoknak a ChAT-tevékenységre kifejtett relatív hatása patkányoktól levett gerincagysejt-tenyészetben
Vegyület Gerincagysejtben ChAT-tevékenység
300 nmol/l 30 nmol/l
K-252a 100 -
IV-3 77 -
111-1 75 -
IV-1 74 72
IV-2 62 NT
III-2 60 NT
NT: ilyen koncentrációnál nem vizsgáltuk -: ilyen koncentrációnál nem észleltünk hatást
4. példa
Az alábbiakban a K-252a jelű vegyületet, valamint e vegyület funkciós származékait vizsgáltuk és értékeltük a hátsó gyöki ganglionneuronsejt-túlélés vonatkozásában. A sejttúlélés méréséhez calcein AM-et használtunk, ami a fluoreszcén-diacetát-színezék analógja.
HU 225 342 Β1
A calceint az életképes sejtek felveszik, a sejten belül a színezék fluoreszkáló sókká szakad fel, a sók az életképes sejtek intakt sejtfalán belül maradnak. Az életképes neuronok mikroszkópos számlálási eredménye közvetlen összefüggésben áll a fluorimetriás túlélési vizsgálat során kapott relatív fluoreszcenciaértékekkel. Ennek következtében e módszer segítségével egy adott tenyészeten belül megbízható, kvantitatív értékeket kapunk a túlélő sejteknek az összsejtszámhoz viszonyított arányáról.
A hátsó gyöki ganglionneuronok túlélését a K-252a jelű vegyület fokozni képes koncentrációtól függő mértékben; a maximális hatást mintegy 100 nmol/liter értéknél észleltük (lásd a 6. ábrát). A megvizsgált 50 analóg vegyület közül azokat, amelyek hatásosnak bizonyultak a DRG-neuron-túlélés elősegítésében, a 7. ábrán szemléltetjük. Mindezen analóg származékok hatásosnak mutatkoztak a gerincagy-ChAT-aktivitás fokozásában is (lásd az 5. példát és a 8. ábrát). Az eredményeket a 6. táblázat szemlélteti. A hátsó gyöki ganglionneuronok mikroszkópos vizsgálata azt mutatja, hogy ezeket hatásos funkciós származékokkal stimulálva az idegszál-növekedés fokozódott.
Módszer; 8 napos csirkeembrióktól levett hátsó gyöki ganglionokat metszünk ki, és diszpázzal (semleges protáz, Collaborative Research gyártmánya) kezelve sejttenyészetet készítünk. 96 nyílású poli-L-ornitinnel és lamininnel bevont lemezekre neuronokat viszünk fel alacsony sűrűségben (1,8*104 sejt/cm). A sejteket 48 óra hosszat tenyésztjük szérummentes N2 táptalajban [Bottenstein and Sato, (1979)], a tenyésztést 37 °C hőmérsékleten végezzük nedves atmoszférában, ahol az atmoszféra összetétele 5% CO2/95% levegő. 48 óra eltelte után értékeljük a túlélő sejtek számát, ahol is a fentiekben ismertetett túlélő sejtek fluorometriás vizsgálatát végezzük.
6. táblázat
A K-252a-származékoknak a neuronális túlélésre kifejtett hatása csirke hátsó gyöki ganglionneuron-tenyészetben
Vegyület DRG-túlélés
K-252a % NGT %
111-1 NT 69
III-2 NT 61
NT: nem vizsgáltuk
5. példa
Kaininsavból (kainát) (ami egy serkentőaminosav) készült ionfúziót közvetlenül egy rágcsáló agykamrájába adagolva a hippocampus piramidális sejtjei neuronális degenerálódása észlelhető. A neuronális pusztulásra jellemző a spektrin (ami egy sejtvázfehérje) proteolízisének számottevő növekedése. A kainát beadását követően 24 óra eltelte után a spektrin bomlástermékeit ki lehet mutatni a hippocampushomogenátumban. A spektrinnél jelentkező proteolízis nagysága nagymértékben összefügg a hippocampus piramidális sejtjeiben fellépő neuronális pusztulással [Simán és munkatársai, J. Neurosci. 9, 1579-1590. oldal (1989)], így a spektrinnél észlelhető proteolízis kiválóan alkalmazható a serkentőaminosav által előidézett neuronális degeneráció biokémiai jelzésére.
Számos neurológiai megbetegedésnél és rendellenességnél, ideértve az agyvérzést és egyéb ischaemiás bántalmakat is, észlelhető az endogén eredetű serkentőaminosavak nagymértékű felszaporodása; e betegségek és rendellenességek közül említjük meg az agyvérzést és egyéb ischaemiás elváltozásokat; az Alzheimer-kórt, a motorosneuron-betegséget, ideértve az izomsorvadásos laterális szklerózíst, a Parkínson-kórt; a Huntington-féle megbetegedést; az AIDS-eredetű dementiát; epilepsziát; az agy és gerincagy rázkódásos és behatolásos sérüléseit.
A 9. ábra szemlélteti a K-252a jelű vegyületnek a kainát által előidézett neuronális degenerációjára kifejtett hatását a hippocampusban. Hím és nőstény Sprague-Dawley fajtájú patkányokba csövet (kanült) vezetünk be, ezen keresztül az állatoknak 0,4 pg K-252a jelzésű vegyületet vagy a felhasznált vivőanyagot adjuk 30 perccel a kainátinjekció beadása előtt, valamint 3 és 24 órát ezt követően; a kainátból 0,6 pg mennyiséget adagolunk közvetlenül az agy laterális cerebrális kamrájába (icv.). Két héttel a vizsgálatot követően az agyat kiemeljük, fagyasztjuk, felszeleteljük, és szövettani vizsgálathoz megfestjük az alábbiak szerint. Az itt következő adatok minden egyes állatcsoportnál a hippocampus sérült régióinak átlagszámát jelentik istandard hibát. A K-252a jelű vegyület beadásával lényeges mértékben csökkenthető a károsodott felület száma a hippocampus területén, a csökkenés mértéke 3,86±0,78 (K-252a-val végzett kezelés nélkül) értékről 1,18±0,4 értékre (K-252a-val végzett kezelés esetében).
A 10. ábra szemlélteti a K-252a jelű vegyületnek a kainát által indukált spektrinlebomlásra kifejtett hatását a hippocampusban. Nőstény Sprague-Dawley fajtájú patkányoknak 0,4 pg K-252a jelzésű vegyületet, vagy pedig a felhasznált vivőanyagot adjuk; icv. infúzió segítségével az állatoknak neurotoxikus dózisban kainátot (0,6 pg) adunk be. A kontrollállatoknak a vivőanyaggal készült infúziót adjuk kainát vagy K-252a adagolása nélkül. 24 óra eltelte után a hátsó hippocampusból készült homogenátumot vizsgáljuk, és meghatározzuk a spektrinlebomlási termékek mennyiségét. A spektrinproteolízis nagyságát %-ban fejezzük ki, a spektrinlebomlási termékek tömegére számítva, minden egyes vizsgálati csoportra vonatkoztatva megállapítjuk a proteolízis %-át, összehasonlítási alapként a kontrollcsoportban mért értékeket vesszük. A feltüntetett adatok az egyes állatcsoportoknál mért spektrinbomlás átlag százalékos növekedését tstandard hibát mutatja be (ahol a kontrollértékeket 100%-nak vesszük). A K-252a jelzésű vegyületet icv. infúzió formájában beadva a spektrin proteolízise számottevő mértékben csökken 140+15%-ról (K-252a vegyület adagolása
HU 225 342 Β1 nélkül) mintegy 102±10%-ra (K-252a jelű vegyülettel való kezelés esetén) az alapkontrollértékekhez viszonyítva.
6. példa
A 11. ábra szemlélteti a HBCS-nek a kaináttal indukált neuronális degenerációra kifejtett hatását a hippocampusban. Nőstény Sprague-Dawley fajtájú patkányokba bevezetőcsövet (kanült) helyezünk, s ezen keresztül 0,8 μg HBCS-t vagy a felhasznált vivőanyagot adagoljuk 40 perccel a kainát icv. infúziót megelőzően és 4 órával ezt követően; kainátból 0,6 μg dózist adunk be. 2 héttel az infúzió beadását követően a vizsgált állatok agyát kimetsszük, fagyasztjuk, felszeleteljük, és a hisztológiai vizsgálathoz az alábbiak szerint megfestjük. A megadott eredmények minden egyes állatcsoportnál a károsodott hippocampus alrégióinak átlagszámát tstandard hibát jelöl. HBCS adagolásával a károsított területek száma lényegesen csökkenthető a hippocampuson belül, a csökkenés mértéke: 2,5±0,6-ről (HBCS adagolása nélkül) 1,3±0,5-re (HBCS-sel végzett kezelés esetében).
7. példa
A 12. ábra szemlélteti három K-252a funkciós származéknak a kaináttal indukált spektrín lebomlására kifejtett hatását a hippocampusban. Nőstény Sprague-Dawley fajtájú patkányoknak 0,4 pg K-252a jelű vegyületet vagy 111-1 vagy 11-21 vegyületet vagy a vivőanyagot adjuk, egyidejűleg neurotoxikus dózisban kainátot (0,6 pg) viszünk be icv. infúzió alakjában. A kontrolihoz alkalmazott állatok csak a vivőanyagot tartalmazó infúziót kapják, nem adagolunk azonban sem kainátot, sem K-252a jelű származékot. 24 óra eltelte után a hátsó hippocampusból készült homogenátumot vizsgáljuk, mérve a spektrinlebomlási termékek mennyiségét, a vizsgálatot az alábbiak szerint végezzük. A spektrinproteolízis nagyságát százalékban fejezzük ki, a spektrinbomlástermékek mennyiségét összehasonlítjuk minden egyes állatcsoport esetében a kontrollértékekkel. A feltüntetett adatok a spektrinbomlástermékek százalékos növekedését jelzik minden egyes állatcsoportra vonatkoztatva (kontroll=100%) tstandard hiba. A K-252a jelű vegyületet icv. infúzió formájában beadva a spektrinproteolízis mértéke számottevően csökken: mintegy 128±9%-ról (vivőanyaggal végzett kezelés) mintegy 104±4%-ra (K-252a-val végzett kezelés esetében) a kontrollértékekre számítva. A 111-1 és a 11-21 jelzésű K-252a-származékok nem befolyásolták a kainát által Indukált spektrinproteolízist.
A 9-12. ábrák esetében alkalmazott vizsgálati módszerek
Kainátinfúzióval végzett vizsgálat
A K-252a jelű vegyületnek, valamint e vegyület származékainak a kainát által indukált neuronális károsodásra kifejtett hatását a következőképpen értékeljük:
175-250 g testtömegű kifejlett hím vagy nőstény Sprague-Dawley fajtájú patkányokat anesztetizálunk Nembutallal (50 mg/kg, ip.), majd gyógyszert vagy vivőanyagot adunk be 5 pl össztérfogatban a kaináttal végzett kezelés (5 pl) előtt és ezt követően, a kainátot icv. infúzió formájában adjuk be a fentiekben megadott dózisban és sorrendben. A kontrollállatok vivőanyagot kapnak kainát és gyógyszerinfúzió helyett. Az anatómiai vizsgálatok céljából az icv. infúziókat egy bevezetőcsövön (kanülön) keresztül (Plastic One, Roanoke, VA) adjuk, a bevezetőcsövet mintegy 1 héttel az infúziót megelőzően implantáljuk és helyezzük el: a koponyatető elején és hátsó részén, 1,5 mm-re laterálisán a koponyatetőhöz viszonyítva, továbbá 4,4 mm-rel ventrálisan a koponyatetőtől számítva. A kezelés eredményét 2 héttel később állapítjuk meg az alább ismertetett anatómiai vizsgálatok alapján.
A K-252a jelű vegyületnek és e vegyület származékainak a kainát által indukált spektrinproteolízisre kifejtett hatását oly módon vizsgáljuk, hogy anesztetizált patkányoknak 5 pl icv. infúziót adunk, ebben a gyógyszert vagy csak a vivőanyagot adjuk kaináttal egyidejűleg egy 10 pl Hamilton-féle fecskendő segítségével, amelyet fentiekben megadott koordinátákon helyezünk el. 24 órával az infúzió beadását követően a patkányokat leöljük, és biokémiai vizsgálatokat végzünk az alábbiak szerint.
Anatómiai és biokémiai vizsgálatok
Az anatómiai vizsgálatokat az alábbiak szerint végezzük. Az alább következő kezelés után 2 héttel a patkányokat elpusztítjuk fejük levágásával, az agyat gyorsan eltávolítjuk, szárazjégen lefagyasztjuk. Minden egyes agyból koronális metszeteket készítünk, a metszeteket tioninnal megfestjük és mikroszkóp alatt vizsgáljuk. A hippocampus károsodását oly módon határozzuk meg, hogy összegezzük a hippocampus bal és jobb oldalán az agyban a piramidális sejtekben fellépő veszteséget a hippocampus 4 anatómiailag meghatározott régiójában [CA1-4 Lorente de No klasszifikálása szerint, a közlemény megjelent: Shepard, The Synaptic Organization of the Brain, Oxford, 310. oldal (1979), amely közleményt referenciaként tekintjük],
A biokémiai vizsgálatot az alábbiak szerint végezzük: az agyban lévő spektrín Calpain l-szenzitív proteolízisét a hippocampushomogenátumban értékeljük immunobiológiai analízis segítségével [Simán és munkatársai: Neuron, 1, 279-287. oldal (1988), e közleményt referenciaként tekintjük]. Röviden összefoglalva: a kezelés után 24 órával a patkányok fejét levágjuk, ily módon az állatokat elpusztítjuk, a hátsó hippocampust gyorsan kimetsszük az agyból, és homogenizáljuk 20 mmol/l trisz-HCI-ban (pH: 7,4), ahol az oldat 0,1 mmol/l koncentrációban fenil-metil-szulfonil-fluoridot tartalmaz. Minden egyes aliquot részből a fehérjéket elkülönítjük SDS-PAGE segítségével, és minden egyes mintában meghatározzuk a kainát által indukált spektrinbomlástermékek mennyiségét.
8. példa
Vizsgáljuk, hogy a K-252a jelű vegyületek milyen mértékben segítik elő a striatumtenyészetek túlélését. 17 napos patkányembriók corpus striatumát kimetsszük, a sejteket diszpáz segítségével felbontjuk (semleges proteáz, Collaborative Research). 96 nyílá9
HU 225 342 Β1 sú lemezre, ahol a nyílásokat előzőleg poli-1 -ornitinnel és lamininnel vonjuk be, neuronokat helyezünk 5*104/nyílás mennyiségben (1,5*105/cm). A sejteket szérummentes N2 táptalajban tenyésztjük, ahol a táptalaj 0,05% borjúszérum-albumint tartalmaz (Bottenstein és Sato, 1979). Az inkubálást 37 °C hőmérsékleten nedves atmoszférában végezzük, ahol az atmoszféra összetétele 5% CO2/95% levegő. A beoltást követő 5 nap eltelte után értékeljük a sejtek túlélését. A túlélést a 8. példában ismertetett calcein fluorometriás vizsgálattal végezzük.
A corpus striatumból származó neuronális sejtek túlélését a K-252a jelű vegyület fokozza, függően a koncentrációtól. A maximális hatást 75 nmol/liter K-252a-koncentrációnál mértük, a kontrolihoz viszonyítva 3-4-szeres hatás jelentkezett (13. ábra). A kontrolltenyészetekben a neuronok 90%-a elpusztult 5 napon belül, ezzel szemben a K-252a-val kezelt sejtek 50%-a életben maradt (14. ábra). A striatumneuron-sejtek túlélése a tenyészetben 3 nap eltelte után értékelhető, a túlélést legalább 7 napig vizsgáljuk a tenyészetben. Ezek az eredmények a K-252a jelű vegyület egyszeri alkalmazásából származnak, e vegyületet a tenyésztés kezdetének napján adjuk a táptalajhoz, a neuronok bizonyos tenyészetében tartós túlélés jelentkezik.
A 15. ábra két fotomikrogörbét mutat be, ahol az egyik a kontrolltenyészetben kapott eredményeket, a másik 75 nmol/liter koncentrációjú K-252a jelenlétében végzett tenyészetnél kapott eredményeket mutatja be. A 75 nmol/l K-252a vegyület jelenléte esetében a sejttúlélés fokozódása és a neurid elszaporodása volt a tenyészetekben észlelhető.
9. példa
Meghatároztuk a K-252a jelű vegyület funkciós származékainak a corpusstriatum-sejtek túlélését potencírozó képességét, a vizsgálatot a 6. példában leírtak szerint végezve. A 7. táblázat szemlélteti az eredményeket, vagyis hogy ezen vegyületek milyen mértékben segítették elő a corpus striatumban lévő neuronok túlélését.
7. táblázat
A K-252a-származékok hatása a neuronok túlélésére patkányoktól levett corpusstriatum-táptalajban
Vizsgált vegyület Corpusstriatum-sejtek túlélése K-252a adott koncentrációja esetén
25 nmol/l 75 nmol/l 100 nmol/l
K-252a 100
111-1 69 NT -
IV-3 - NT 47
IV-1 - NT 66
II-33 - 82 NT
H-34 118 NT -
NT: nem vizsgáltuk ebben a koncentrációban -: nem hatásos ebben a koncentrációban
10. példa
IV-2 jelű vegyület mg (0,09 mmol) (J) képletű vegyületet [e vegyületet a 120388/87 számú közzétett, de nem vizsgált japán szabadalmi bejelentésben ismertetik; ezen bejelentést referenciaként tekintjük] 0,5 ml trifluor-ecetsav és 50 μΙ 3 n sósavoldat elegyében feloldunk, majd az oldatot szobahőmérsékleten 2 napig keverjük. A keletkezett csapadékot szűréssel elkülönítjük, majd nagy teljesítményű folyadékkromatográfiának vetjük alá (Unisil 5C18; metanol/víz 8:2 térfogatarányú elegye), ily módon 8,4 mg (IV-2) jelű vegyületet kapunk.
1H-NMR (DMSO-d6) δ (ppm): 4,947 (2H, s),
7,300-8,010 (6H, m), 8,249 (1H, s), 9,266 (1H, d,
J=2,0 Hz).
FAB-MS (m/z): 390 (M+1)+.

Claims (12)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. (Ili) vagy (IV) általános képletű vegyület, a képletben
    Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom (111-1 jelű vegyület); vagy
    Z1 és Z2 együttes jelentése oxigénatom (III-2 jelű vegyület); vagy
    R1, R2, R4, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom és R3 jelentése -CH2CH=CH2 képletű csoport (IV-1 jelű vegyület); vagy
    R1 jelentése brómatom és R2, R3, R4, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom (IV-2 jelű vegyület); vagy
    R1, R2, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom és R3 és R4 jelentése -CH2CH=CH2 képletű csoport (IV-3 jelű vegyület); vagy
    R1, R2, R3, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom és R4 jelentése -CH2CH=CH2 képletű csoport (IV-4 jelű vegyület);
    alkalmazása emlősöknél neuronfunkció, mégpedig érzékelési, kolinergiás vagy corpusstriatumneuron-funkció fokozására, továbbá Alzheimer-kór, motorosneuron-megbetegedés, agyérrendszeri betegség, AIDS-szel kapcsolatos elmebaj, epilepszia, Huntington-kór és az agy vagy a gerincagy rázkódásos vagy behatoló sérülésével kapcsolatos sérülések kezelésére alkalmas, adott esetben egy neurotróf faktort is tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás kolinergiás neuronfunkció fokozására alkalmas gyógyszerkészítmény előállítására.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti olyan (III) általános képletű vegyület alkalmazása, amelynek a képletében
    Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom (II1-1 jelű vegyület) vagy
    Z1 és Z2 jelentése oxigénatom (III-2 jelű vegyület); érzékelési neuron, mégpedig hátsó gyöki ganglionneuron funkciójának fokozására alkalmas gyógyszerkészítmény előállítására.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás neurotróf faktort is tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására.
    HU 225 342 Β1
  5. 5. A 3. igénypont szerinti alkalmazás neurotróf faktort is tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására.
  6. 6. A 4. vagy 5. igénypont szerinti alkalmazás neurotrofinek családjába tartozó neurotróf faktort is tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására.
  7. 7. A 6. igénypont szerinti alkalmazás neurotrofinek családjába tartozó idegnövekedési faktort (NGF) is tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására.
  8. 8. Az 1. igénypont szerinti olyan (III) vagy (IV) általános képletű vegyület alkalmazására, amelynek képletében
    Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom (111-1 jelű vegyület); vagy
    Z1, Z2 és R2 jelentése hidrogénatom (IV-1 jelű vegyület) corpus striatum neuronfunkciójának fokozására alkalmas gyógyszerkészítmény előállítására.
  9. 9. A 2., 7. vagy 8. igénypont szerinti alkalmazás Huntington-kór kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmény előállítására.
  10. 10. (IV) általános képletű vegyület, a képletben
    R1, R2, R4, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom, R3 jelentése -CH2CH=CH2 képletű csoport (IV-1 jelű vegyület); vagy
    R1 jelentése brómatom, R2, R3, R4, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom (IV-2 jelű vegyület);
    R1, R2, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom és R3 és
    R4 jelentése -CH2CH=CH2 képletű csoport (IV-3 jelű vegyület); vagy
    R1, R2, R3, Z1 és Z2 jelentése hidrogénatom és R4 jelentése -CH2CH=CH2 képletű csoport (IV-4 jelű vegyület).
  11. 11. Gyógyszerkészítmény, amely egy 10. igénypont szerinti (IV) általános képletű vegyületet, továbbá adott esetben egy neurotróf faktort tartalmaz gyógyászati segédanyagokkal és/vagy adalék anyagokkal összekeverve.
  12. 12. A 11. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, emlősöknél neuronfunkció, mégpedig érzékelési, kolinergiás vagy corpusstriatumneuron-funkció fokozására, továbbá Alzheimer-kór, motorosneuron-megbetegedés, agyérrendszeri betegség, AIDS-szel kapcsolatos elmebaj, epilepszia, Huntington-kór és az agy vagy a gerincagy rázkódásos vagy behatoló sérülésével kapcsolatos sérülések kezelésére, amely gyógyszerkészítmény adott esetben egy neurotróf faktort is tartalmaz.
    HU 225 342 Β1
    Int. Cl.: C07D 498/22 co2ch3 (J)
    HU 225 342 Β1 Int. CLC07D 498/22 stauro- HBCS K-252a -sporin
    1. ábra stauro- HBCS K-252a -sporin
    2. ábra
    HU 225 342 Β1
    Int. Cl.: C07D 498/22
    HU 225 342 Β1 Int. CLC07D 498/22
    11-15
    11-12
    11-17
    7. ábra
    HU 225 342 Β1
    Int. Cl.: C07D 498/22 ii-il ' I
HU0301425A 1992-07-24 1993-07-26 K-252a-derivatives and pharmaceutical composition containing thereof and the novel compounds HU225342B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US92010292A 1992-07-24 1992-07-24
PCT/US1993/006974 WO1994002488A1 (en) 1992-07-24 1993-07-26 BIS-STAUROSPORINE AND K-252a DERIVATIVES

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU225342B1 true HU225342B1 (en) 2006-10-28

Family

ID=25443161

Family Applications (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0301425A HU225342B1 (en) 1992-07-24 1993-07-26 K-252a-derivatives and pharmaceutical composition containing thereof and the novel compounds
HU0301601A HU225341B1 (en) 1992-07-24 1993-07-26 Bis(n-substituted)-staurosporine derivatives, their use and pharmaceutical composition containing thereof
HU9500192A HU225297B1 (en) 1992-07-24 1993-07-26 Bis staurosporin derivatives and pharmaceutical composition containing them
HU0301425A HU0301425D0 (en) 1992-07-24 1993-07-26 K-252a-derivatives and pharmaceutical composition containing thereof
HU0301601A HU0301601D0 (en) 1992-07-24 1993-07-26 Bis(n-substituted)-staurosporine derivatives, their use and pharmaceutical composition containing thereof

Family Applications After (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0301601A HU225341B1 (en) 1992-07-24 1993-07-26 Bis(n-substituted)-staurosporine derivatives, their use and pharmaceutical composition containing thereof
HU9500192A HU225297B1 (en) 1992-07-24 1993-07-26 Bis staurosporin derivatives and pharmaceutical composition containing them
HU0301425A HU0301425D0 (en) 1992-07-24 1993-07-26 K-252a-derivatives and pharmaceutical composition containing thereof
HU0301601A HU0301601D0 (en) 1992-07-24 1993-07-26 Bis(n-substituted)-staurosporine derivatives, their use and pharmaceutical composition containing thereof

Country Status (18)

Country Link
US (1) US5461146A (hu)
EP (4) EP0651754B1 (hu)
JP (3) JP3762427B2 (hu)
KR (1) KR100276008B1 (hu)
AT (3) ATE152111T1 (hu)
AU (1) AU675236B2 (hu)
BR (1) BR9306789A (hu)
CA (1) CA2140924A1 (hu)
DE (3) DE69333874T2 (hu)
DK (3) DK1002534T3 (hu)
ES (3) ES2101331T3 (hu)
GR (2) GR3023817T3 (hu)
HK (1) HK1028206A1 (hu)
HU (5) HU225342B1 (hu)
NO (2) NO305481B1 (hu)
NZ (2) NZ286198A (hu)
PT (1) PT768312E (hu)
WO (1) WO1994002488A1 (hu)

Families Citing this family (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5621101A (en) * 1992-07-24 1997-04-15 Cephalon, Inc. Protein kinase inhibitors for treatment of neurological disorders
US5756494A (en) * 1992-07-24 1998-05-26 Cephalon, Inc. Protein kinase inhibitors for treatment of neurological disorders
DE4243321A1 (de) * 1992-12-21 1994-06-23 Goedecke Ag Aminosäurederivate von Heterocyclen als PKC-Inhibitoren
ES2118414T3 (es) * 1993-05-28 1998-09-16 Cephalon Inc Utilizacion de derivados del indolocarbazol para el tratamiento de la prostata.
US5468872A (en) * 1993-09-16 1995-11-21 Cephalon, Inc. K-252a functional derivatives potentiate neurotrophin-3 for the treatment of neurological disorders
US5624949A (en) * 1993-12-07 1997-04-29 Eli Lilly And Company Protein kinase C inhibitors
US5843935A (en) * 1993-12-07 1998-12-01 Eli Lilly And Company Protein kinase C inhibitors
CN1050844C (zh) * 1993-12-07 2000-03-29 伊莱利利公司 蛋白激酶ｃ抑制剂
IL111851A (en) * 1993-12-07 1998-09-24 Lilly Co Eli Improved synthesis of bisindolylsimilides and process for its preparation
US5541347A (en) * 1993-12-07 1996-07-30 Eli Lilly And Company Synthesis of bisindolylmaleimides
US5723456A (en) * 1993-12-07 1998-03-03 Eli Lilly & Company Therapeutic treatment for cardiovascular diseases
SI0817627T1 (hu) * 1993-12-23 2005-08-31 Lilly Co Eli
AU1911095A (en) * 1994-02-18 1995-09-04 Cephalon, Inc. Aqueous indolocarbazole solutions
KR100464907B1 (ko) * 1994-10-26 2005-07-04 세파론, 인코포레이티드 신경계질환치료용단백질키나아제억제제
US5686444A (en) * 1995-04-05 1997-11-11 Cephalon, Inc. Selected soluble esters of hydroxyl-containing indolocarbazoles
US5650407A (en) * 1995-04-05 1997-07-22 Cephalon, Inc. Selected soluble esters of hydroxyl-containing indolocarbazoles
US5808060A (en) * 1995-12-11 1998-09-15 Cephalon, Inc. Fused isoindolones
US6232299B1 (en) 1996-05-01 2001-05-15 Eli Lilly And Company Use of protein kinase C inhibitors to enhance the clinical efficacy of oncolytic agents and radiation therapy
WO1997041854A1 (en) * 1996-05-07 1997-11-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Inhibitors of glycogen synthase kinase-3 and methods for identifying and using the same
UA67725C2 (en) 1996-06-03 2004-07-15 Cephalon Inc K-252a derivatives and a method for improvement of functioning and cell survival enhancement
US6875865B1 (en) * 1996-06-03 2005-04-05 Cephalon, Inc. Selected derivatives of K-252a
BR9710693A (pt) * 1996-06-25 2000-01-11 Cephalon Inc Uso de um derivado de k-252a para o tratamento do nervo central ou periférico e super produção de citoquinona.
US7144997B2 (en) 1997-07-24 2006-12-05 Curis, Inc. Vertebrate embryonic patterning-inducing proteins, compositions and uses related therto
CN1147317C (zh) † 1997-08-15 2004-04-28 赛福伦公司 含酪氨酸激酶抑制剂和化学阉割剂的组合物及其用于制药的用途
WO1999033836A1 (en) * 1997-12-31 1999-07-08 Cephalon, Inc. 3'-epimeric k-252a derivatives
US6811992B1 (en) * 1998-05-14 2004-11-02 Ya Fang Liu Method for identifying MLK inhibitors for the treatment of neurological conditions
US6127401A (en) * 1998-06-05 2000-10-03 Cephalon, Inc. Bridged indenopyrrolocarbazoles
US6013646A (en) * 1998-07-02 2000-01-11 Bayer Corporation Indolocarbazole derivatives useful for the treatment of neurodegenerative diseases and cancer
US7795246B2 (en) * 1998-08-06 2010-09-14 Cephalon, Inc. Particle-forming compositions containing fused pyrrolocarbazoles
US6200968B1 (en) 1998-08-06 2001-03-13 Cephalon, Inc. Particle-forming compositions containing fused pyrrolocarbazoles
EP1126855B1 (en) 1998-09-25 2007-05-09 Cephalon, Inc. Use of fused pyrrolocarbazoles for preventing/treating damage to sensory hair cells and cochlear neurons
KR20010083884A (ko) 1998-10-13 2001-09-03 세파론, 인코포레이티드 눈 질환 치료제
US6242473B1 (en) * 1999-01-08 2001-06-05 Maxim Pharmaceuticals, Inc. Treatment and prevention of reactive oxygen metabolite-mediated cellular damage
US6841567B1 (en) * 1999-02-12 2005-01-11 Cephalon, Inc. Cyclic substituted fused pyrrolocarbazoles and isoindolones
CA2379149A1 (en) 1999-07-09 2001-01-18 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Neurotrophic pyrrolidines and piperidines, and related compositions and methods
US6323215B1 (en) 1999-07-09 2001-11-27 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Neurotrophic tetrahydroisoquinolines and tetrahydrothienopyridines, and related compositions and methods
AU2576501A (en) * 1999-12-08 2001-06-18 Advanced Medicine, Inc. Protein kinase inhibitors
US20020002169A1 (en) 1999-12-08 2002-01-03 Griffin John H. Protein kinase inhibitors
US7129250B2 (en) 2000-05-19 2006-10-31 Aegera Therapeutics Inc. Neuroprotective and anti-proliferative compounds
AU2001278084A1 (en) * 2000-07-31 2002-02-13 The Regents Of The University Of California Model for alzheimer's disease and other neurodegenerative diseases
DE10113513A1 (de) * 2001-03-20 2002-10-02 Medinnova Ges Med Innovationen Kombinationspräparat zur Prophylaxe und/oder Therapie von Nervenzell- und/oder Gliazellschäden durch ein neues Behandlungsverfahren
GB0117645D0 (en) * 2001-07-19 2001-09-12 Isis Innovation Therapeutic stratergies for prevention and treatment of alzheimers disease
PT1441737E (pt) 2001-10-30 2006-12-29 Dana Farber Cancer Inst Inc Derivados de estrutura como inibidores da actividade do receptor de tirosina cinase flt3
US20050130877A1 (en) * 2003-03-14 2005-06-16 Children's Medical Center Corporation Axon regeneration with PKC inhibitors
US6664266B2 (en) 2002-03-14 2003-12-16 Children's Medical Center Corporation Axon regeneration with PKC inhibitiors
CA2393720C (en) 2002-07-12 2010-09-14 Eli Lilly And Company Crystalline 2,5-dione-3-(1-methyl-1h-indol-3-yl)-4-[1-(pyridin-2-ylmethyl)piperidin-4-yl]-1h-indol-3-yl]-1h-pyrrole mono-hydrochloride
DE10255343B4 (de) * 2002-11-27 2006-09-07 Nad Ag N,N-Verbrückte, Stickstoff-Substituierte Carbacyclische Indolocarbazole als Proteinkinase-Inhibitoren
US20040175384A1 (en) * 2003-12-12 2004-09-09 Mohapatra Shyam S. Protein kinase C as a target for the treatment of respiratory syncytial virus
BRPI0413439A (pt) 2003-08-08 2006-10-17 Novartis Ag combinações compreendendo estaurosporinas
US8592368B2 (en) 2003-12-19 2013-11-26 University Of South Florida JAK/STAT inhibitors and MAPK/ERK inhibitors for RSV infection
NZ548857A (en) 2004-02-27 2010-05-28 Lundbeck & Co As H Crystalline forms of a diazocine pharmaceutical compound for Parkinson's and similar conditions
US20090054358A1 (en) * 2004-07-19 2009-02-26 The John Hopkins University Flt3 inhibitors for immune suppression
CN100513850C (zh) * 2005-08-23 2009-07-15 浙江华夏阀门有限公司 三角截面密封套
MX2008002524A (es) * 2005-08-25 2008-03-14 Creabilis Therapeutics Spa Conjugados polimericos de k-252a y sus derivados.
EP1940395A2 (en) 2005-09-16 2008-07-09 Schering Corporation Pharmaceutical compositions and methods using temozolomide and a protein kinase inhibitor
EP1934599A1 (en) 2005-10-11 2008-06-25 Merck Patent GmbH Egfr dependent modulation of chemokine expression and influence on therapy and diagnosis of tumors and side effects thereof
WO2008130921A1 (en) * 2007-04-16 2008-10-30 Modgene, Llc Methods and compositions for diagnosis and treatment of depression and anxiety
WO2009067221A2 (en) * 2007-11-20 2009-05-28 Cephalon, Inc. Microemulsion containing indolocarbazole compound and dosage forms containing the same
EA037709B1 (ru) 2012-12-21 2021-05-13 Сюкехюсе Сёрланне Хф Способ лечения невропатической боли
US11319320B2 (en) 2017-11-06 2022-05-03 Snap Bio, Inc. PIM kinase inhibitor compositions, methods, and uses thereof
WO2024018245A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of calpain inhibitors for the treatment of the diabetic kidney disease

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4554402A (en) * 1983-12-23 1985-11-19 Aluminum Company Of America Vibration damper for overhead conductor
JPS62102388A (ja) * 1985-10-29 1987-05-12 Toppan Printing Co Ltd Ｉｃカ−ド
JPS62155285A (ja) * 1985-12-27 1987-07-10 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 生理活性物質ｋ−２５２の誘導体
JPS62155284A (ja) * 1985-12-27 1987-07-10 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 生理活性物質ｋ−２５２の誘導体
JPS62220196A (ja) * 1986-03-20 1987-09-28 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 新規物質ｕｃｎ―０１
US4816450A (en) * 1986-09-15 1989-03-28 Duke University Inhibition of protein kinase C by long-chain bases
JPH0826036B2 (ja) * 1987-01-22 1996-03-13 協和醗酵工業株式会社 生理活性物質ｋ−２５２の誘導体
JPH0826037B2 (ja) * 1987-01-22 1996-03-13 協和醗酵工業株式会社 生理活性物質ｋ−２５２の誘導体
US4735939A (en) * 1987-02-27 1988-04-05 The Dow Chemical Company Insecticidal activity of staurosporine
WO1988007045A1 (en) * 1987-03-09 1988-09-22 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Derivatives of physiologically active substance k-252
US5093330A (en) * 1987-06-15 1992-03-03 Ciba-Geigy Corporation Staurosporine derivatives substituted at methylamino nitrogen
IL86632A0 (en) * 1987-06-15 1988-11-30 Ciba Geigy Ag Derivatives substituted at methyl-amino nitrogen
JPH07113027B2 (ja) * 1987-12-24 1995-12-06 協和醗酵工業株式会社 Ｋ−２５２誘導体
JPH0725786A (ja) * 1990-05-16 1995-01-27 Univ Rockefeller アルツハイマー病を伴うアミロイドーシスの治療
JPH06509333A (ja) * 1991-07-03 1994-10-20 リジェネロン　ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド ニューロトロフィン活性に対する方法およびアッセイ系
DE4133605C2 (de) * 1991-10-10 1994-05-11 Siemens Ag Flexibler Roboterarm
CA2123096A1 (en) * 1991-11-08 1993-05-13 Beat J. Knusel Compositions containing k-252 compounds for potentiation of neurotrophin activity
DE4217964A1 (de) * 1992-05-30 1993-12-02 Goedecke Ag Indolocarbazol-Imide und deren Verwendung

Also Published As

Publication number Publication date
AU675236B2 (en) 1997-01-30
HUT71239A (en) 1995-11-28
NO950242D0 (no) 1995-01-23
DE69310178D1 (de) 1997-05-28
EP1002534A1 (en) 2000-05-24
ATE196142T1 (de) 2000-09-15
NO990542L (no) 1999-02-05
DE69329397D1 (de) 2000-10-12
EP1512688A1 (en) 2005-03-09
NZ254662A (en) 1996-11-26
DK1002534T3 (da) 2006-01-23
JP2003113184A (ja) 2003-04-18
NO950242L (no) 1995-03-07
NO307446B1 (no) 2000-04-10
BR9306789A (pt) 1998-12-08
JP3762427B2 (ja) 2006-04-05
KR950702564A (ko) 1995-07-29
ATE152111T1 (de) 1997-05-15
EP0651754A1 (en) 1995-05-10
DK0651754T3 (da) 1997-10-27
DE69329397T2 (de) 2001-03-15
ES2248950T3 (es) 2006-03-16
HU225297B1 (en) 2006-09-28
EP1002534B1 (en) 2005-09-21
ES2151629T3 (es) 2001-01-01
EP0651754B1 (en) 1997-04-23
US5461146A (en) 1995-10-24
DE69333874T2 (de) 2006-05-04
DE69333874D1 (de) 2006-02-02
NO305481B1 (no) 1999-06-07
PT768312E (pt) 2001-03-30
CA2140924A1 (en) 1994-01-25
HU9500192D0 (en) 1995-03-28
EP0651754A4 (en) 1995-08-09
NO990542D0 (no) 1999-02-05
JP2005170955A (ja) 2005-06-30
GR3023817T3 (en) 1997-09-30
HU0301425D0 (en) 2003-07-28
KR100276008B1 (ko) 2000-12-15
DE69310178T2 (de) 1997-09-25
JPH08501080A (ja) 1996-02-06
ATE304848T1 (de) 2005-10-15
GR3034917T3 (en) 2001-02-28
AU4688193A (en) 1994-02-14
NZ286198A (en) 2001-06-29
HK1028206A1 (en) 2001-02-09
EP0768312A3 (en) 1997-06-04
WO1994002488A1 (en) 1994-02-03
EP0768312A2 (en) 1997-04-16
EP0768312B1 (en) 2000-09-06
DK0768312T3 (da) 2000-12-11
HU0301601D0 (en) 2003-08-28
HU225341B1 (en) 2006-10-28
ES2101331T3 (es) 1997-07-01
JP3723533B2 (ja) 2005-12-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU225342B1 (en) K-252a-derivatives and pharmaceutical composition containing thereof and the novel compounds
EP0788501B1 (en) Protein kinase inhibitors for treatment of neurological disorders
US6300327B1 (en) Compositions and methods for potentiation of neurotrophin activity
US5621100A (en) K-252a derivatives for treatment of neurological disorders
US20080069899A1 (en) Pharmaceutical Compositions Comprising Beta-Carboline Derivatives and Use Thereof for the Treatment of Cancer
US20020068692A1 (en) Method for the treatment of neurological or neuropsychiatric disorders
US5292765A (en) Neuroprotection by indolactam V and derivatives thereof
JP2018534259A (ja) 神経変性疾患の処置
Jondorf et al. Increased lifespan of leukemic mice treated with drugs related to (–)-emetine
EP0555149B1 (en) Use of oxazopyrroloquinolines and pyrroloquinolinequinones for the manufacture of nerve growth factor production accelerators
US20220273615A1 (en) Methods of treating pompe disease
KR102181346B1 (ko) 허혈-재관류계 질환의 치료 화합물
EP1461083B1 (en) Combined therapy against tumors comprising substituted acryloyl distamycin derivatives and protein kinase (serine/threonine kinase) inhibitors
KR100487112B1 (ko) 백강잠 101ａ로부터 분리, 정제한 뇌신경성장 촉진물질(4ｅ, 6ｅ, 2ｓ,3ｒ)-2-ｎ-아이코사노일-4,6-테트라데카스핀게닌
GB2337702A (en) The use of staurosporine analogues for enhancing neurotrophin activity
EA042675B1 (ru) Лиганд рецептора гамк-а
ZA200301439B (en) Fused pyrrolocarbazoles against inflammation.
MXPA97003039A (en) Protein kinase inhibitors for the treatment of neurologi disorders