HU218275B

HU218275B - New steroide derivatives, medicaments containing the same and process for their production

Info

Publication number: HU218275B
Application number: HU9302244A
Authority: HU
Inventors: Paul Hakan Andersson; Bengt Axelsson; Ralph Brattsand; Arne Thalen
Priority date: 1991-02-04
Filing date: 1992-01-29
Publication date: 2000-07-28
Also published as: RU2111212C1; WO1992013872A1; BG62211B1; HU9302244D0; CN1140059A; MA22406A1; NO932761D0; IL100532A0; ES2133315T3; DK0570454T3; HUT64973A; ATE178611T1; BG97971A; PL170000B1; CZ281685B6; PT100086A; US5939409A; YU48892B; AU661471B2; YU6592A

Abstract

A találmány tárgyát az (I) általános képletű vegyületek – ahol X2hidrogénatom vagy fluoratom – és 22R- vagy 22S-epimerjeik,hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és azelőállításukra szolgáló eljárások képezik. A találmány szerinti új,(I) általános képletű vegyületek gyulladásellenes és allergiaelleneshatással rendelkeznek. ŕ

Description

A találmány tárgyát új, gyulladásellenes és allergia ellen ható vegyületek és az előállításukra szolgáló eljárás képezi. A találmány tárgyát képezik továbbá hatóanyagként ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és az előállításukra szolgáló eljárás is.

A találmány célkitűzése, hogy az alkalmazás helyén, így a légutakban, a bőrön, a bélrendszerben, az ízületekben vagy a szemben magas aktivitású, gyulladásellenes, immunszuppresszív és antiallergiás glükokortikoszteroidokat vagy azokat tartalmazó gyógyszerkészítményeket szolgáltasson a gyógyszert körülhatárolt célterületre irányítva, ezáltal csak kismértékben kiváltva az egész szervezetre kiterjedő glükokortikoidhatásokat.

Ismeretes, hogy a glükokortikoszteroidok (GCS) felhasználhatók a légutak gyulladásos, allergiás vagy immunológiás megbetegedéseinek (így az asztma, az orrnyálkahártya-gyulladás), a bőr (ekcéma, pikkelysömör) vagy a bélrendszer (fekélyes vastagbélgyulladás, Morbus Crohn) ilyen megbetegedéseinek lokális terápiájára. A lokális glükokortikoszteroid-terápia a klinikai gyakorlatban előnyökkel jár az egész szervezetre kiterjedő terápiával (például glükokortikoszteroid-tabletták alkalmazásával) szemben, különös tekintettel a beteg területen kívüli nemkívánatos glükokortikoid-hatások csökkentésére, minthogy így a szükséges adagot csökkenthetjük. Hogy még nagyobb klinikai előnyöket érjünk el, például súlyos légúti megbetegedéseknél, a glükokortikoszteroidoknak megfelelő farmakológiás profillal kell rendelkezniük. Az alkalmazás helyén nagy intrinzik glükokortikoid-aktivitásuknak kell lenni, de ugyanakkor gyorsan inaktiválódniuk kell az általános keringésbe való bejutás előtt vagy után.

A találmány egyik feladata leírni az új glükokortikoszteroid-vegyületeket. Ezeket magas gyulladásellenes, immunszuppresszív és antianafilaxiás hatás jellemzi az alkalmazás helyén, és különösen jelentős a javított viszony e hatás és a kezelt területen kívül kiváltott glükokortikoszteroid-hatás között.

A találmány szerinti vegyületek az (I) általános képletű - a képletben

X₂ jelentése hidrogénatom vagy fluoratom vegyületek 22R- vagy 22S-epimerjei.

Az (I) általános képletű egyedi 22R- és 22S-epimerek a 22-helyzetű szénatom kiralitása következtében értelmezhetők úgy, hogy az (la) általános képletű vegyületek a 22R-epimerek, és az (Ib) általános képletű vegyületek a 22S-epimerek, ahol X₂ jelentése azonos a fentiekben megadottakkal.

Egy fenti (I) általános képlet szerinti 22R- illetve 22S-epimer alatt definíciószerűen olyan vegyületet értünk, amely 2 tömeg%-nál, előnyösen 1 tömeg%-nál nem tartalmaz többet a másik epimerből.

A találmány szerinti előnyös vegyületek az (Γ) általános képletű vegyület 22R- és 22S-epimerjei.

Az előnyös szteroid R-konfigurációjú a 22-helyzetű szénatomnál.

Az EP-A-262108 számú szabadalmi iratban leírnak egy eljárást pregnánszármazékok 16,17-acetáljai előállításánál az epimerek megoszlási arányának szabályozására. Az összes példa azonban mind 1,4-diének szintézisére vonatkozik; csak egy kettős kötést tartalmazó vegyületek előállítását nem közük.

Az EP-A-0 054 010 számú szabadalmi irat is foglakozik hasonló probléma megoldásával, azonban sem 6-, sem 9-helyzetben fluoratommal szubsztituált származékokkal nem foglalkoznak.

Az US-A-3 928 326 számú szabadalmi irat leír egy eljárást szteroidok sztereoizomer keverékeinek rezolválására, azonban ezek nem a találmány szerinti vegyületekhez hasonlók.

Az Acta Pharm. Sec. 21, 109-124 (1984) és Acta Pharm. Sec. 24, 97-114 (1987) publikációkban közük bizonyos 1,4-dién jellegű szteroidok szintézisét és farmakológiai tulajdonságait.

Az US-A-3 929 768 számú szabadalmi irat fiziológiásán hatásos 1,4-dién típusú szteroidokat ismertet.

Az EP-A-0 164 636 számú szabadalmi iratban közölnek egy eljárást pregnánszármazékok 16,17-acetáljainak előállítására 16,17-acetonidok transzketalizálásával.

A találmány szerinti 9a-fluor- vagy 6a,9a-difluorpregn-4-én-származékok azonban eddig a szakterületen nem ismertek.

Az (I) általános képletű 16a,17a-acetátokat egy (II) általános képletű vegyület - ahol X₂ jelentése azonos a fentebb megadottakkal - butiraldehiddel való reakciójával állítjuk elő. A reakciót úgy hajtjuk végre, hogy a szteroidot az aldehid és valamilyen savas katalizátor, így perklórsav, p-toluolszulfonsav, sósav valamilyen éterrel, előnyösen dioxánnal vagy acetonitrillel készített oldatához adjuk.

Az (I) általános képletű vegyületeket úgy is előállíthatjuk, hogy a megfelelő (III) általános képletű 16_α,17_αacetonidokat - ahol X] és X₂ jelentése azonos a fentiekben megadottakkal - butiraldehiddel reagáltatva átacetálozzuk. A reakciót úgy hajtjuk végre, hogy a szteroidot az aldehid és valamilyen savas katalizátor, így perklórsav, p-toluolszulfonsav, sósav valamilyen éterrel, előnyösen dioxánnal vagy acetonitrillel készített oldatához adjuk.

A reakciót valamilyen szénhidrogénben, így előnyösen izooktánban, amelyben a 16-pregnánszármazék (a 16,17-acetonid vagy 16,17-dioI) oldékonysága 1 mg/litemél kisebb, vagy valamilyen halogénezett szénhidrogénben, előnyösen metilén-dikloridban vagy kloroformban is végrehajthatjuk.

A reakciót valamilyen hidrogén-halogenid vagy valamilyen szerves szulfonsav, például p-toluolszulfonsav katalizálja.

A reakciót valamilyen inért anyag, így üveg, kerámia, megrostált szilícium-dioxid (homok) apró szemcséinek vagy inért fémrészecskéknek, így granulált rozsdamentes acélnak vagy tantálnak (utóbbiak abban az esetben, ha a reakciót valamilyen szénhidrogénben végezzük) a reakcióközegben való jelenlétében hajtjuk végre.

A 22R-epimert így oly tisztán kapjuk, hogy az a költségesebb kromatográfiás eljárás helyett átkristályosítással is megtisztítható annyira, hogy gyógyszerként felhasználható legyen.

HU 218 275 Β

A szénhidrogénekben végrehajtott eljárásnál a szteroid-katalizátor komplex nagy viszkózus tömeget képez, ami lehetetlenné teszi a keverést és a hatásos reakciót. Ezt megakadályozandó apró szemcsés inért anyagot adunk az elegyhez, és erélyes keverést alkalmazunk, hogy így a nagy, ragacsos csomók képződése helyett a szteroid-katalizátor komplexet szétoszlassuk a szemcsék felülete körüli vékony rétegre. Ezáltal a reaktív felület sokkal nagyobb, és a karbonilvegyülettel való reakció nagyon gyorsan végbemegy.

Az eljárásnál alkalmazott inért szemcsés anyag, előnyösen szilícium-dioxid (SiO₂), gördülékeny apró részecskékből álljon. A részecskeméret 0,1 mm és 1,0 mm között, előnyösen 0,1 mm és 0,3 mm között legyen. A reakcióban alkalmazott mennyisége 1:5 és 1:50 között van, előnyösen 1:20.

Hidrogén-halogenid alatt hidrogén-fluoridot, hidrogén-kloridot, hidrogén-bromidot és hidrogén-jodidot, valamint a megfelelő halogén-oxisavakat, így perklórsavat értünk.

Az acetalizálásnál képződő egyes 22R- és 22S-epimereknek gyakorlatilag azonos oldékonysági tulajdonságaik vannak. Ennek megfelelően nem bizonyult lehetségesnek azok szétválasztása és izolálása az epimerelegyből a sztereoizomerek rezolválására használt szokásos módszerekkel, például frakcionált kristályosítással. Az egyes epimerek szétválasztására a fenti (I) általános képletű sztereoizomerelegyekkel oszlopkromatográfiát végzünk, így választjuk el a 22R- és 22S-epimereket egymástól, azoknak az álló fázison mutatott eltérő mozgékonysága alapján. A kromatográfiát végezhetjük például térhálósított Sephadex LH típusú dextrángéleken, így Sephadex LH-20-οη, eluensként valamilyen megfelelő szerves oldószerrel kombinálva. A Pharmacia Fine Chemicals AB (Uppsala, Svédország) által gyártott Sephadex LH-20 gyöngyformájú (hidroxi-propil)-dextrán-gél, amelyben a dextránláncok térhálósítva vannak, így háromdimenziós poliszacharid térhálót képeznek. Mozgó fázisként sikeresen alkalmaztunk halogénezett szénhidrogéneket, például kloroformot vagy heptán: kloroform .etanol 0:50:50 és 100:10:1 közötti, előnyösen 20:20:1 arányú elegyeket.

Más módszer szerint a kromatográfiát elvégezhetjük mikroszemcsés kötött fázisú, például 10 pm részecskeméretű oktadecil-szilán (pBondapak C_i8) vagy pBondapak CN töltetet tartalmazó oszlopokon, mozgó fázisként megfelelő szerves oldószerrel kombinálva. Sikeresen alkalmaztunk 40:60 és 60:40 közötti arányú etanol: víz elegyeket.

A 22R- és 22S-epimereket megkaphatjuk (IV) általános képletű sztereoizomer elegyből is - ahol X₂ jelentése azonos a fentiekben megadottakkal, és R₃ jelentése 1-5 szénatomos, egyenes láncú karbonsavból levezethető acilcsoport, előnyösen a 21-acetát-Sephadex LH-20 töltetű oszlopon, mozgó fázisként megfelelő oldószerrel vagy oldószereleggyel, például heptán: kloroform :etanol 0:50:50 és 10:10:1 közötti, előnyösen 20:20:1 arányú elegyével végzett kromatográfiával történő rezolválással is. Az elválasztott és izolált fenti (IV) általános képletű 22R- és 22S-epimerekkel báziskatalizált hidrolízist végzünk alkálifém-hidroxidokkal, -karbonátokkal vagy -hidrogén-karbonátokkal, így nátrium- vagy kálium-hidroxiddal, nátrium- vagy káliumkarbonáttal vagy nátrium- vagy kálium-hidrogén-karbonáttal; így kapjuk a fenti (II) vagy (III) általános képletű vegyületek 22R- vagy 22S-epimerjeit. Más módszer szerint a hidrolízist elvégezhetjük katalizátorként alkalmazott valamilyen savval, például sósavval vagy kénsavval is.

A (IV) általános képletű vegyületek a P 9302243 számú, T/64 972 számon közzétett magyar szabadalmi bejelentésben leírt módszerek szerint állíthatók elő.

Az (la) és (lb) általános képletű vegyületek előállíthatók még az (la’) vagy (lb’) általános képletű vegyületek katalitikus redukciójával is.

A találmány szerinti vegyületeket a gyulladás helyétől függően a lokális alkalmazás különböző módjaira használhatjuk, így perkután, parenterális vagy inhalációs módszerrel a légutak helyi kezelésére. A készítmény összetételének megtervezésénél fontos szempont az, hogy a szteroid hatóanyag alkotórész optimális biológiai használhatóságát érjük el. Perkután készítményeknél ezt előnyösen akkor valósítjuk meg, ha a szteroid nagy termodinamikai aktivitással van oldva a vivőanyagban. Ez elérhető úgy, hogy önmagukban vagy vízzel kombináltan alkalmas glikolokból, így propilénglikolból vagy 1,3-butándiolból álló megfelelő oldószerrendszert használunk.

Az is lehetséges, hogy a szteroidot szolubilizálóként valamilyen felületaktív anyag segítségével, teljes egészében vagy részlegesen valamilyen lipofil fázisban oldjuk. A perkután készítmények lehetnek kenőcsök, „olaj a vízben” krémek, „víz az olajban” krémek vagy lemosószerek. Az emulziós vivőanyagokban az oldott hatóanyagot tartalmazó rendszer alkothatja a diszperz fázist és az összefüggő fázist is. A szteroid a fenti készítményekben mikronizált szilárd anyagként is jelen lehet.

Szteroidok alkalmazására szánt, nyomás alatt lévő aeroszolok szájon vagy orron át történő inhaláció céljaira készülnek. Az aeroszolrendszer úgy van megalkotva, hogy minden egyes leadott adag 10 pg és 1000 pg közötti, előnyösen 20 pg és 250 pg közötti mennyiségben tartalmazza a szteroid hatóanyagot. A legaktívabb szteroidokat az adagtartomány alsó vége szerinti mennyiségben alkalmazzuk. A mikronizált szteroid lényegileg 5 pm-nél kisebb részecskékből áll, amelyek valamilyen dioktil-szulfoszukcinátsó mint diszpergálószer segítségével egy hajtógázelegyben vannak szuszpendálva.

A szteroid alkalmazható száraz port felhasználó inhalálókészülék segítségével is.

Egy további alkalmazási lehetőség abból áll, hogy a mikronizált szteroidot elkeverjük valamilyen vivőanyaggal, így laktózzal vagy glükózzal. A porelegyet szétosztjuk keményzselatin kapszulákba, amelyek mindegyike a szteroid kívánt adagját tartalmazza. A kapszulát ezután porinhaláló készülékbe helyezzük, így az adag inhalációval a beteg légutaiba jut.

Egy másik lehetőség szerint a mikronizált port apró gömböcskékké dolgozzuk fel, amelyek az adagolási fo3

HU 218 275 Β lyamat során felhasadnak. Az ilyen gömböcskékké feldolgozott (szferonizált) port egy többadagos inhalátor, például egy Turbuhaler típusú inhalátor gyógyszertárolójába töltjük. Egy adagolóberendezés a kívánt adagot adagolja, amelyet azután a beteg inhalál. Ezzel a rendszerrel a szteroidot vivőanyag nélkül juttatjuk a beteg szervezetébe.

A szteroidot gyulladásos bélmegbetegedések szájon vagy a végbélen át való kezelésére szolgáló készítményekbe is bedolgozhatjuk. A szájon át alkalmazandó készítményeket úgy kell összeállítani, hogy a szteroid eljusson a bélrendszer gyulladásos részeihez. Ezt a hatóanyagnak a bélben és/vagy lassan vagy irányított felszabadulását biztosító különböző elvek kombinálásával érhetjük el. A rektális alkalmazásra beöntés típusú készítmény alkalmas.

A találmányt a következő példákkal szemléltetjük, amelyek semmilyen módon nem korlátozzák a találmány oltalmi körét. A példákban a preparatív kromatográfiás eljárások során 2,5 ml/cm² óra ¹ áramlási sebességet alkalmazunk. A molekulatömeget minden példánál kémiai ionizációs tömegspektrometriával állapítjuk meg (reagens gázként metánt használva), az olvadáspontot Leitz-Wetzlar fűthető mikroszkóppal mérjük. A nagynyomású folyadékkromatográfiás (HPLC) elemzéseket pBondapak C_lg-töltetű, 300 mm hosszú, 3,9 mm belső átmérőjű oszlopon végezzük etanol:víz 40:60 és 60:40 közötti arányú mozgó fázissal, 1,0 ml/perc áramlási sebességgel, ha másként külön nem tüntetjük fel.

1. példa

6a,9a-Difluor-11 β, 16α, 17a,21 -tetrahidroxi-pregn4-én-3,20-dion

2,0 g 6a,9a-difluor-16a-hidroxi-prednizolon 1000 ml vízmentes etanollal készített oldatát 2,2 g trisz(trifenil-foszfin)-ródium-klorid 500 ml toluollal készített oldatához adjuk, és szobahőmérsékleten atmoszferikus nyomásnál 7 napig hidrogénezzük. A reakcióelegyet szárazra pároljuk, és a maradékhoz 50 ml metilén-dikloridot adunk. A szilárd anyagot kiszűrjük, és ismételten mossuk metilén-diklorid kis részleteivel, így 1,8 g 6a,9a-difluor-l ^,16a,17a,21-tetrahidroxipregn-4-én-3,20-diont kapunk.

Molekulatömeg: 414 (a számított érték 414,5).

2. példa

6a,9a-Difluor-11 β,21 -dihidroxi-16α, 17a-(izopropilidén-dioxi)-pregn-4-én-3,20-dion

0,9 g trisz(trifenil-foszfin)-ródium-klorid 250 ml gázmentesített toluollal készített szuszpenzióját szobahőmérsékleten és légköri nyomásnál 45 percig hidrogénezzük. Ezután 1,0 g fluocinolon-16a,17a-acetonid 100 ml vízmentes etanollal készített oldatát adjuk hozzá, és a hidrogénezést további 40 órán keresztül folytatjuk. A reakcióelegyet bepároljuk, és a maradékot szilikagélen végzett flash-kromatográfiával tisztítjuk, mozgó fázisként aceton :petroléter elegyet használva, hogy a katalizátor legnagyobb részét így eltávolítsuk. Az eluátumot bepároljuk, és a maradékot Sephadex LH-20 oszlopon (72,5 cm χ 6,3 cm) végzett kromatográfiával, mozgó fázisként kloroformot használva, tovább tisztítjuk. A 3555 ml és 4125 ml közötti frakciót felfogjuk és bepároljuk. így 0,61 g 6a,9a-difluor11 β, 21 -dihidroxi- 16α, 17a-(izopropilidén-dioxi)pregn-4-én-3,20-diont kapunk.

Olvadáspont: 146-151 °C. Tisztaság (HPLC-analízis alapján): 98,5%.

3. példa (22RS)-16α, 17a-(Butilidén-dioxi)-6a,9a-difluor11 β, 21-dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion

0,5 g frissen desztillált butiraldehid és 0,4 ml 70%os perklórsav 100 ml tisztított és szárított dioxánnal készített oldatához kis részletekben, keverés közben 30 perc alatt 1,8 6a,9a-difluor-l ^,16a,17a,21-tetrahidroxi-pregn-4-én-3,20-diont adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten további 5 órán át keverjük. Ezután 600 ml metilén-dikloridot adunk az elegyhez, és az oldatot vizes kálium-karbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk. A bepárlás után kapott nyersterméket Sephadex LH-20 oszlopon (76 cm χ 6,3 cm) végzett kromatográfiával tisztítjuk, mozgó fázisként kloroformot használva. A 3015 ml és 3705 ml közötti frakciót összegyűjtjük és bepároljuk. így 1,5 g (22RS)-16a,17a-(butilidén-dioxi)-6a,9a-difluor-l 1 β,21 -dihidroxi-pregn-4-én3,20-diont kapunk.

Molekulatömeg: 468 (a számított érték: 468,5).

4. példa (22R)-16a, 17a-(Butilidén-dioxi)-6a,9a-difluor11 β,21 -dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion

Szobahőmérsékleten összekeverünk 100 mg 6a, 9a-difluor-11 β,21 -dihidroxi-16a, 17a-(( 1 -metil-etilidén)-dihidroxi-pregn-4-én-3,20-diont, 0,03 ml butiraldehidet, 2 ml finom homokot (szilícium-dioxidot) és 4 ml heptánt. Erélyes keverés közben 0,1 ml 70%-os perklórsavat adunk az elegyhez, amelyet szobahőmérsékleten 5 órán keresztül keverünk, majd lehűtjük és szüljük. A szilárd maradékot mossuk 4 χ 15 ml 10%-os vizes kálium-karbonát-oldattal, majd 4x15 ml vízzel, és utána 4x25 ml metilén-dikloriddal keverjük. Az egyesített extraktumot vízzel mossuk, megszánjuk és bepároljuk. A maradékot oldjuk kevés metilén-dikloridban, és abból 40 °C és 60 °C közötti forráspontú petroléter hozzáadásával kicsapjuk. így 75 mg (22R)16a,17a-(butilidén-dioxi)-6a,9a-difluor-l 1β, 21-dihidroxi-pregn-4-én-3,20-diont kapunk, amely 3%-ban tartalmazza a 22S-epimert. A HPLC-analízissel meghatározott tisztaság 98%.

Molekulatömeg: 468 (a számított érték: 468,5).

5. példa (22R)- és (22S)-16a,17a-(Butilidén-dioxi)-6a,9adifluor-11 β,21 -dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion

1,5 g (22RS)-16a,17a-(butilidén-dioxi)-6a,9a-difluor-11 β,21 -dihidroxi-pregn-4-én-3,20-diont Sephadex LH-20 oszlopon (76 cm χ 6,3 cm) végzett kromatográfiával rezolválunk és 22R- és 22S-epimerekre, mozgó fázisként heptán:kloroform:etanol (20:20:1)

HU 218 275 Β elegyet használva. Összegyűjtjük az 1845 ml és 2565 ml közötti (A), valamint a 2745 ml és 3600 ml és 3600 ml közötti (B) frakciókat, és ezeket bepároljuk. A két terméket metilén-diklorid: petrol éter elegyből kicsapjuk. Az A-frakció terméke (332 mg) Ή-NMR és tömegspektrometriás vizsgálattal (22S)-16a,17a-butilidén-dioxi)-6a,9a-difluor-11 β,21 -dihidroxi-pregn-4én-3,20-dionként azonosítható, míg a B-frakció termék (918 mg) a 22R-epimerként.

Az epimerek a következő tulajdonságokat mutatják:

A 22S-epimer: olvadáspont: 231-244 °C.

A22R-epimer: olvadáspont: 150-156 °C.

Az epimerek HPLC-analízissel meghatározott tisztasága : 95,7% a 22S-epimemél (amely 1,2%-ot tartalmaz a 22R-epimerből) és 98,8% a 22R-epimemél (amely 0,7%-ot tartalmaz a 22S-epimerből).

6. példa (22R)-16α, 17a-(Butilidén-dioxi)-6a,9a-difluor11 β,21 -dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion

4,0 g (22R)-16a,17a-(butilidén-dioxi)-6a,9adifluor-11 β,21 -dihidroxi-pregna-1,4-dién-3,20-dion és 0,40 g trisz(trifenil-foszfm)-ródium-klorid 150 ml vízmentes etanollal készített oldatát szobahőmérsékleten 68 órán keresztül hidrogénezzük. Ezután 150 ml vizet adunk az elegyhez, és azt HV LP 0,45 pm pórusméretű szűrőn szüljük. A szűrletet részlegesen bepároljuk. Az ekkor képződő csapadékot kiszűrjük. így 1,48 g nyersterméket kapunk, amelyet Sephadex LH-20 töltetű oszlopon (75 cm χ 6,3 cm) tisztítunk, mozgó fázisként kloroformot használva. A 3600 ml és 4200 ml közötti frakciókat gyűjtjük, bepároljuk, és Sephadex LH-20 töltetű oszlopon (75 cm χ 6,3 cm) tovább tisztítjuk, mozgó fázisként heptán:kloroform-etanol (20:20:1) elegyet használva. A 9825 ml és 10 500 ml közötti frakciókat gyűjtjük és bepároljuk. így 0,57 g (22R)-16a,17a(butilén-dioxi)-6a,9a-difluor-11 β,21 -dihidroxi-pregn4-én-3,20-diont kapunk.

Molekulatömeg: 468 (a számított érték: 468,5). A HPLC-analízissel meghatározott tisztaság: 96,5%

A fenti szűrlethez újabb 220 ml vizet adunk; így további mennyiséget kapunk a szilárd termékből, amelyet kloroform mozgó fázissal Sephadex LH-20 oszlopon (75 cm χ 6,3 cm) tisztítva, a 3795 ml és 4275 ml közötti frakcióból 1,04 g (22R)-16a,17a-(butilidéndioxi)-6a,9a-difluor-11 β,21 -dihidroxi-pregn-4-én3,20-diont kapunk.

Molekulatömeg: 468 (a számított érték 468,5). A HPLC-analízissel meghatározott tisztaság 98,3%.

7. példa (22R)-16α, 17a-(Butilidén-dioxi)-6a-fluor-11 β,21 -dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion mg (22R)-21-acetoxi-16a,17a-(butilidén-dioxi)6a-íluor-l ^-hidroxi-pregn-4-én-3,20-dion 2 ml etanollal készített oldatához 2 ml 2M sósavat adunk. A reakcióelegyet 60 °C-on 5 órán át keverjük, majd telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal semlegesítjük, és 3 χ 25 ml metilén-dikloriddal extraháljuk. Az egyesített extraktumokat vízzel mossuk, megszárítjuk és bepároljuk. A maradékot Sephadex LH-20 oszlopon (87 cm χ 2,5 cm) kromatografálva tisztítjuk, mozgó fázisként kloroformot használva. A 460 ml és 515 ml közötti frakciókat egyesítjük és bepároljuk. így 8 mg (22R)-16α, 17a-(butilidén-dioxi)-6a-fluor-11 β,21 -dihidroxi-pregn-4-én-3,20-diont kapunk.

Molekulatömeg: 450 (a számított érték: 450,6). A HPLC-analízissel meghatározott tisztaság: 98,4%.

8. példa (22 S)-16α, 17a-(Butilidén-dioxi)-6a-fluor-11 β,21 dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion mg (22S)-21-acetoxi-16a,17a-(butilidén-dioxi)6a-fluor-1 ^-hidroxi-pregn-4-én-3,20-dion 2 ml etanollal készített oldatához 2 ml 2M sósavat adunk. A reakciót, izolálást és a termék tisztítását ugyanúgy hajtjuk végre, mint ahogy a 7. példában leírtuk. A 455 ml és 510 ml közötti frakciókat gyűjtjük, és bepároljuk. így 7 mg (22S)-16a,17a-(butilidén-dioxi)-6a-fluor-l 1β, 21 -dihidroxi-pregn-4-én-3,20-diont kapunk.

Molekulatömeg: 450 (a számított érték:450,6). A HPLC-analízissel meghatározott tisztaság: 98,6%.

9. példa

9a-Fluor-11 β, 16α, 17α,21 -tetrahidroxi-pregn-4-én3,20-dion 3,0 g trisz(trifenil-foszfin)-ródium-klorid 1000 ml gázmentesített toluollal készített szuszpenzióját szobahőmérsékleten és légköri nyomásnál 45 percig hidrogénezzük. Ezután 5,0 g triamcinolon (9a-fluor11β,16α,17α,21 -tetrahidroxi-pregna-l,4-dién-3,20-dion) 500 ml vízmentes etanollal készített oldatát adjuk az elegyhez, és a hidrogénezést 48 órán át folytatjuk. A reakcióelegyet ezután szárazra pároljuk, és a maradékot szuszpendáljuk 50 ml metilén-dikloridban. Szűrés után a szilárd fázist ismételten mossuk metiléndiklorid kis részleteivel. Szárítás után 4,4 g 9a-fluor11β,16α,17α,21 -tetrahidroxi-pregn-4-én-3,20-diont kapunk.

Molekulatömeg: 396 (a számított érték: 396,5).

10. példa (22RS)-16α, 17a-(Butilidén-dioxi)-9a-fluor-11 β ,21 dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion

100 mg frissen desztillált butiraldehid és 0,2 ml 70%-os perklórsav 50 ml tisztított és szárított dioxánnal készített oldatához keverés közben, kis részletekben 340 mg 9a-fluor-l^,16a,17a,21-tetrahidroxi-pregn4-én-3,20-diont adunk 20 perc alatt. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten további 5 órán keresztül keverj ük. Az oldathoz 200 ml metilén-dikloridot adunk, és vizes kálium-karbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. A bepárlással kapott nyersterméket Sephadex LH-20-szal töltött 72,5 cm χ 6,3 cm méretű oszlopon kloroform mozgó fázissal tisztítjuk. A 2760 ml és 3195 ml közötti frakciókat gyűjtjük és bepároljuk. így 215 mg (22RS)-16a, 17 a-(butilidén-dioxi)-9a-fluor-11 β, 21 -dihidroxi-pregn4-én-3,20-diont kapunk.

Molekulatömeg: 450 (a számított érték:450,6). A HPLC-analízissel meghatározott tisztaság: 97,4%.

HU 218 275 Β

11. példa (22R)- és (22S)-16a,17a-(Butilidén-dioxi)-9a-fluor11 β,21 -dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion

200 mg (22RS)-16a,17a-(butilidén-dioxi)-9afluor-1 lfi,21-dihidroxi-pregn-4-én-3,20-diont hep- 5 tán:kloroform:etanol (20:20:1) elegy arányú mozgó fázissal Sephadex LH-20 oszlopon (76 cmx6,3 cm) végzett kromatográfiával rezolválunk. A 7560 ml és 8835 ml közötti (A), valamint a 8836 ml és 9360 ml közötti (B) frakciókat gyűjtjük, és bepároljuk. Az A-frak- 10 cióból kapott 128 mg terméket 'H-NMR- és tömegspektometriás vizsgálattal (22S)-16a,17a-(butilidén-dioxi)-9a-fluor-11 β,21 -dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dionként, míg a B-frakcióból kapott 50 mg terméket a 22Repimerként azonosítjuk. 15

Az epimerek a következő jellemzőket mutatják:

22S-epimer: olvadáspont: 180 -190 °C.

22R-epimer: olvadáspont: 147-151 °C.

Az epimerek tisztaságát HPLC-vizsgálattal határozzuk meg, és így a 22S-epimer tisztasága: 97,6% (1,8% 20 22R-epimer-tartalommal), míg a 22R-epimer tisztasága: 98,2% (0,8% 22S-epimer-tartalommal).

12. példa

Gyógyszerkészítmények 25

A következő, a találmány oltalmi körét nem korlátozó példák lokális alkalmazásra szánt különböző készítményeket mutatnak be. A perkután készítményekben a szteroid hatóanyag általában 0,001 tömeg/tömeg% és 0,2 tömeg/tömeg% közötti, előnyösen 0,01 tömeg/tö- 30 meg% és 0,1 tömeg/tömeg% közötti mennyiségben van jelen.

1. készítmény, kenőcs

Mikronizált szteroid	0,025 g
Paraffinolaj	10,0 g	35
Fehér, lágy paraffinnal kiegészítve	100,0 g-ra
2. készítmény, kenőcs
Szteroid	0,025 g
Propilénglikol	5,0 g
Szorbitán-szeszkvioleát	5,0 g	40

Paraffinolaj 10,0 g

Fehér, lágy paraffinnal kiegészítve 100,0 g-ra

3. készítmény, „olaj a vízben” típusú krém

Szteroid	0,025 g
1-Hexadekanol	5,0 g	45
Glicerin-monosztearát	5,0 g
Paraffinolaj	10,0 g
Cetomakrogol 1000	2,0 g
Citromsav	0,1 g
Nátrium-citrát	0,2 g	50
Propilénglikol	35,0 g
Vízzel feltöltve	100,0 g-ra
4. készítmény, „olaj a vízben ’	’ típusú krém
Mikronizált szteroid	0,025 g
Fehér, lágy paraffin	15,0 g	55
Paraffinolaj	5,0 g
1-Hexadekanol	5,0 g
Szorbimakrogol-sztearát	2,0 g
Szorbitán-monosztearát	0,5 g
Szorbinsav	0,2 g	60

Citromsav	0,1 g
Nátrium-citrát	0,2 g
Vízzel feltöltve	100,0 g-ra
5. készítmény, „ víz az olajban	” típusú krém
Szteroid	0,025 g
Fehér, lágy paraffin	35,0 g
Paraffinolaj	5,0 g
Szorbitán-szekvioleát	5,0 g
Szobinsav	0,2 g
Citromsav	0,1 g
Nátrium-citrát	0,2 g
Vízzel feltöltve	100,0 g-ra

6. készítmény, lemosószer (lotion)

Szteroid 0,25 mg

Izopropil-alkohol 0,5 ml

Karboxi-vinil-polimer 3,0 mg

Nátrium-hidroxid a szükséges mennyiség

Vízzel feltöltve 1,0 g-ra

7. készítmény, infekciós célokra szolgáló szuszpenzió

Mikronizált szteroid 0,05-10 mg (Karboxi-metil)-cellulóz-nátriumsó 7 mg

Nátrium-klorid 7 mg

Poli(oxi-etilén)-(20)-szorbitánmonooleát 0,5 mg

Benzil-alkohol 8 mg

Steril vízzel feltöltve l,0ml-re

8. készítmény, aeroszolszálon és orron át történő inhalációra

Mikronizált szteroid

Szorbitán-trioleát

Fluor-triklór-metán

Tetrafluor-diklór-metán

Difluor-diklór-metán

0,1 tömeg/tömeg% 0,7 tömeg/tömeg% 24,8 tömeg/tömeg% 24,8 tömeg/tömeg% 49,6 tömeg/tömeg%

9. készítmény, porlasztásra szolgáló oldat

Szteroid 7,0 mg

Propilénglikol 5,0 g

Vízzel feltöltve 10,0 g-ra

10. készítmény, inhalációs célokra szolgáló por

Zselatinkapszulát megtöltünk a következő keverékkel: Mikronizált szteroid 0,1 mg

Laktóz 20 mg

A port inhalációs berendezés segítségével inhaláljuk.

11. készítmény, inhalációs célokra szolgáló por

Az apró gömböcskékké feldolgozott (szferonizált) port egy többadagos porinhalátorba töltjük. Minden egyes adag tartalma:

Mikronizált szteroid 0,1 mg

12. készítménv, inhalációs célokra szolgáló por

Mikronizált szteroid 0,1 mg

Mikronizált laktóz 1 mg

13. készítmény, a vékonybél kezelésére szolgáló kapszula

Szteroid

Cukorgolyócskák Aquacoat ECD 30 Acetil-tributil-citrát

1,0 mg 321 mg

6,6 mg 0,5 mg

HU 218 275 Β

Poliszorbát 80	0,1 mg
Eudragit L100-55	17,5 mg
Trietil-citrát	1,8 mg
Talkum	8 mg
MMS-típusú habzásgátló
(Antifoam MMS)	0,01 mg
14. készítmény, a vastagbél kezelésére szolgáló kap-
szula
Szteroid	2,0 mg
Cukorgömböcskék	305 mg
Aquacoat ECD 30	5,0 mg
Acetil-tributil-citrát	0,4 mg
Poliszorbát 80	0,14 mg
Eudragit NE30 D	12,6 mg
Eudragit SÍ00	12,6 mg
Talkum	12,6 mg
75. készítmény, rektális beöntés
Szteroid	0,02 mg
(Karboxi-metil)-cellulóz-nátriumsó	25 mg
Etilén-diamin-tetraecetsav-dinátriumsó	0,5 mg
Metil-4-hidroxi-benzoát	0,8 mg
Propil-4-hidroxi-benzoát	0,2 mg
Nátrium-klorid	7,0 mg
Citromsav, vízmentes	1,8 mg
Poliszorbát 80	0,01 mg
Tisztított vízzel feltöltve	1,0 ml-re
A lokális gyulladásellenes aktivitás szelektivitását a

következő légúti modell segítségével mutathatjuk be.

Az inhalációval bejutott glükokortikoszteroid jelentős része lerakódik a garatban, majd lenyelve, eljut a belekbe. Ez a rész hozzájárul a szteroid nem kívánt mellékhatásainak kialakulásához, minthogy a kezelendő területen (a tüdőn) kívül hat. Ezért előnyös olyan glükokortikoszteroidot használni, amelynek nagy a lokális gyulladásellenes hatása a tüdőben, de csekélyek a glükokortikoszteroid által kiváltott hatások perorális bevitel után. Tanulmányokat végeztünk ezért a glükokortikoszteroid-indukált hatások meghatározására lokális alkalmazás esetén a tüdőben, valamint perorális alkalmazás után, és a kezelt tüdóterületen és azon kívül a glükokortikoszteroid-hatások különbségét a következő módon teszteljük.

Tesztmodellek

A. Tesztmodell a kívánt gyulladásellenes aktivitás meghatározására a légúti nyálkahártyán (bal tüdőlebeny).

250 g testtömegű Sprague Dawley-patkányokat efrannal enyhén érzéstelenítünk, és a nátrium-klorid-oldatban szuszpendált glükokortikoszteroid kísérleti készítményt 0,5 ml/kg testtömeg mennyiségben becsepegtetjük a bal tüdőlebenybe. Két óra elteltével Sephadexszuszpenziót (5 ml/kg mennyiségben, 1 ml/kg térfogatban) csepegtetünk enyhe érzéstelenítés mellett a légcsőbe, jóval a kettéágazódás felett úgy, hogy a szuszpenzió eljusson mind a bal, mind a jobb tüdőlebenybe. Húsz óra elteltével a patkányokat leöljük, a bal tüdólebenyeket kivágjuk, és tömegüket megmérjük. A kontrollcsoportok a glükokortikoszteroid-készítmény helyett nátrium-klorid-oldatot kapnak, és a Sephadex-szuszpenzió helyett is nátrium-klorid-oldatot, hogy így megállapíthassuk a gyógyszerrel nem kezelt állatok Sephadex okozta vizenyőjének tömegét és a normális tüdőtömeget.

B. Tesztmodell a perorálisan a szervezetbe juttatott glükokortikoszteroid nem kívánt szisztémás hatásainak vizsgálatára.

250 g testtömegű Sprague Dawley-patkányokat effánnal enyhén érzéstelenítünk, majd a glükokortikoszteroid kísérleti készítményt 0,5 ml/kg testtömeg mennyiségben adjuk szájon át. Két órával később Sephadex-szuszpenziót (5 mg/kg mennyiségben, 1 ml/kg térfogatban) csepegtetünk a légcsőbe jóval a kettéágazódás felett úgy, hogy a szuszpenzió eljusson mind a bal, mind a jobb tüdólebenybe. Húsz óra elteltével leöljük a patkányokat, és megmérjük a tüdőlebenyek tömegét. A kontrollcsoportok a glükokortikoszteroid-készítmény helyett nátrium-klorid-oldatot kapnak és a Sephadex-szuszpenzió helyett is nátrium-klorid-oldatot, hogy így meghatározhassuk a gyógyszerrel nem kezelt állatok Sephadex okozta vizenyőjének tömegét és a normál tüdőtömeget.

Az összehasonlító vizsgálat eredményeit az 1. táblázat mutatja. A találmány szerinti vizsgált vegyület farmakológiai profilját összehasonlítjuk a budeszonidéval. Az eredmények azt bizonyítják, hogy a 6. példa cím szerinti vegyülete sokkal nagyobb lokális gyulladásellenes aktivitást mutat, mint a budeszonid. Ezen túlmenően az eredmények azt is mutatják, hogy a találmány szerinti vizsgált vegyületnek nagyobb a tüdő iránti szelektivitása, mint a szakterület választott korábbi vegyületének, minthogy a tüdővizenyő kifejlődésének gátlásához szükséges adag (ED₅₀) perorális alkalmazás esetén a fent említett vegyületnél 32-szerese, a budeszonidnál 13-szorosa a tüdővizenyő kifejlődésének megakadályozásához a gyógyszernek a tüdőre való lokális alkalmazásánál szükséges adagnak (a budeszonidnál ezek az adagok: 4000 és 300 nmol/kg; a 6. példa cím szerinti vegyületénél 320 és 10 nmol/kg).

így megállapítható, hogy a találmány szerinti vegyületek igen alkalmasak a bőr és különböző testüregek (így a tüdő, orr, belek, ízületek) gyulladásos megbetegedéseinek lokális kezelésére.

1. táblázat

A vizsgált glükokortikoszteroidok hatása patkányok Sephadex által kiváltott tüdővizenyőjére. Az eredményeket a Sephadexet kapott kontrollcsoportra vonatkoztatva adjuk meg.

Vegyület	ED₅₀ (bal tüdőlebenyre alkalmazva nmol/kg)	ED₅₀ (perorális alkalmazásnál; nmol/kg)
bal tüdőlebeny *)	tüdő *)
Budeszonid	300	4000
A 6. példa cím szerinti vegyülete	10	320

*) ED₅₀=a vizenyő 50%-os csökkentéséhez szükséges glükokortikosztcroid-adag

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Az (I) általános képletű vegyületek - a képletben X₂ jelentése hidrogénatom vagy fluoratom 22R- és 22S-epimerei.
2. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek legfeljebb 2 tömeg% 22S-epimert tartalmazó 22R-epimer formái.
3. Az 1. igénypont szerinti (Γ) képletű vegyületek.
4. Eljárás az (I) általános képletű vegyületek - a képletben

X₂ jelentése hidrogénatom vagy fluoratom 22R- vagy és 22S-epimerei előállítására, azzal jellemezve, hogy

a) egy (II) általános képletű vegyületet - ahol X₂ jelentése azonos a tárgyi körben megadottal - butiraldehiddel reagáltatunk, majd az epimerelegyet annak sztereoizomer komponenseire rezolváljuk; vagy

b) egy (III) általános képletű vegyületet - ahol X₂jelentése azonos a tárgyi körben megadottal - butiraldehiddel reagáltatunk, majd az epimerelegyet annak sztereoizomer komponenseire rezolváljuk; vagy

c) egy (IVa) vagy (IVb) általános képletű vegyületet - ahol

X₂ jelentése azonos a tárgyi körben megadottal, és R₃ jelentése 1-5 szénatomos, egyenes szénláncú karbonsavból levezethető acilcsoport hidrolizálunk; vagy

d) egy (la’) vagy (Ib’) általános képletű vegyületet - ahol

X₂ jelentése azonos a tárgyi körben megadottal redukálunk.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás az (Γ) képletű vegyület 22R- vagy 22S-epimerjének előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási komponenseket alkalmazzuk.
6. A 4. vagy 5. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol a 22-helyzetű szénatom R-konfigurációjú, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási komponenseket alkalmazzuk.
7. Gyógyszerkészítmény, amely hatóanyagként egy 1. vagy 2. igénypont szerinti vegyületet tartalmaz.
8. A 7. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény egységdózis formában.
9. A 7. vagy 8. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely a hatóanyagot egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval kombinálva tartalmazza.
10. A 7., 8. vagy 9. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény kapszula formájában a vastag- vagy vékonybél kezelésére.
11. Eljárás hatóanyagként (I) általános képletű vegyületet - ahol X₂ jelentése hidrogénatom vagy fluoratom - tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy a 4. igénypont szerint előállított hatóanyagot önmagában vagy adott esetben a gyógyszertechnológiában szokásosan használt egy vagy több hordozóval, hígítóval és/vagy egyéb segédanyaggal kombináljuk, és a kombinációt gyógyszerkészítménnyé formázzuk.
12. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kombinációt egységdózissá formázzuk.
13. A 11. vagy 12. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hatóanyagot egy gyógyászatilag elfogadható hordozóval kombináljuk.
14. A 11-13. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kombinációt gyulladásellenes és allergiaellenes hatású gyógyszerkészítménnyé formázzuk.