HU217033B - Védőcsoport, a védőcsoportokat tartalmazó vegyületek, valamint eljárás és berendezés e csoport alkalmazására - Google Patents

Védőcsoport, a védőcsoportokat tartalmazó vegyületek, valamint eljárás és berendezés e csoport alkalmazására Download PDF

Info

Publication number
HU217033B
HU217033B HU9301892A HUP9301892A HU217033B HU 217033 B HU217033 B HU 217033B HU 9301892 A HU9301892 A HU 9301892A HU P9301892 A HUP9301892 A HU P9301892A HU 217033 B HU217033 B HU 217033B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
compound
group
mmol
aromatic
mixture
Prior art date
Application number
HU9301892A
Other languages
English (en)
Inventor
Robert Ramage
Gilles Raphy
Original Assignee
Rhone-Poulenc Chimie
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rhone-Poulenc Chimie filed Critical Rhone-Poulenc Chimie
Publication of HU9301892D0 publication Critical patent/HU9301892D0/hu
Publication of HUT69324A publication Critical patent/HUT69324A/hu
Publication of HU217033B publication Critical patent/HU217033B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/34—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton containing six-membered aromatic rings
    • C07C229/36—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton containing six-membered aromatic rings with at least one amino group and one carboxyl group bound to the same carbon atom of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/22—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C33/00—Unsaturated compounds having hydroxy or O-metal groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C33/34—Monohydroxylic alcohols containing six-membered aromatic rings and other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/96—Esters of carbonic or haloformic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C07K1/045—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers using devices to improve synthesis, e.g. reactors, special vessels
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/02—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems
    • C07C2603/54—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing more than five condensed rings
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Coupling Device And Connection With Printed Circuit (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Liquid Developers In Electrophotography (AREA)
  • Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
  • Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
  • Inorganic Insulating Materials (AREA)
  • Photoreceptors In Electrophotography (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Container Filling Or Packaging Operations (AREA)
  • Packages (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Abstract

A találmány tárgya (I) általánős képletű védőcsőpőrt, amely képletébenAr jelentése 1–5 benzőlgyűrűvel kőndenzált flűőrénból származócsőpőrt; és L jelentése egy, legalább egy őlyan szénatőmőt tartalmazócsőpőrt, amely a védendő csőpőrttal való kötésre képes. Avédőcsőpőrtőkat elsősőrban természetes vagy szintetikűs peptidek vagyaminősavak legalább egy fűnkciós csőpőrtjának védelmére alkalmazzák. ŕ

Description

HU 217 033 Β
A találmány tárgya új védőcsoport és eljárás e csoport elsősorban peptidszintézisben való alkalmazására. A találmány elsősorban olyan védőcsoportokra vonatkozik, amelyek vegyületek, elsősorban peptidek előállítás közben vagy után megvalósított tisztítását segítik elő.
A szerves szintéziseknél, elsősorban a többlépcsős szintéziseknél az előállított termék tisztítása gyakran több gondot okoz, mint maga az előállítás. Ez különösen a rendszeresen védőcsoportokat alkalmazó, kiegészítő szerepet játszó peptidszintéziseknél igaz.
Ezért az aminosavak bizonyos csoportjainak védelmét vagy aktiválását a kétfázisú peptidszintézisben a tisztítási lépcső elősegítésére alkalmazzák. Azonban ezekben az eljárásokban, mint például a Merrifield-eljárásban (J. Amer. Chem. Soc. 1986, 108, 5242) a peptidszintézis tisztítási lépcsője még nem teljesen megoldott. Az egyik legelegánsabb eljárás a probléma megoldására az lenne, ha a pepiidet vagy egyéb védendő molekulát úgy módosítanánk, hogy a továbbfeldolgozás és tisztítás során fizikailag visszafordítható módon egy szilárd anyaghoz kötnénk. Eddig azonban nem ismertettek olyan védőcsoportot, ami ezeknek a követelményeknek megfelelne.
Emiatt a találmány egyik fő célkitűzése a fenti kritériumoknak megfelelő védőcsoport előállítása.
Az 1. és a 2. ábrán a példákban ismertetett találmány szerinti egyik vegyület röntgensugár-kristályszerkezetét mutatjuk be.
A találmány tárgya olyan Ar-L (I) általános képletű védőcsoport, amelyben
Ar jelentése egy 1-5 benzolgyűrűvel kondenzált fluorénból származó csoport; és
L jelentése egy, legalább egy olyan szénatomot tartalmazó csoport, amely a védendő csoporttal való kötésre képes.
Az Ar csoport előnyösen legalább 6 aromás gyűrűt tartalmaz, és ezek az aromás gyűrűk hexagonális felépítésűek. Az Ar csoport előnyösen nem tartalmaz heteroatomot.
Az L csoport lehet például alkilcsoport vagy elsősorban peptidcsoport. Az L csoport általában bármilyen olyan kapcsolórészt vagy elágazást tartalmazhat, amilyet a védőcsoport és a védendő molekula közötti kapcsolat kialakítására szokásosan alkalmaznak. Az L csoport Ar csoporthoz való kötése előnyösen egy szénatommal történik. Az L csoportot úgy választjuk meg, hogy az Ar csoport és a lehasadó csoport között ne legyen konjugáció. Az L csoport előnyös felépítése olyan -CR’-L’- általános képletű csoport, amelyben L’ jelentése azonos a későbbiekben meghatározottakkal, és R’ jelentése előnyösen legfeljebb 4 szénatomos alkilcsoport vagy hidrogénatom.
A találmány azon a tapasztalatunkon alapul, hogy a fenti csoporttal védett molekulák grafit- vagy grafitizált felületekre, köztük aktív szénre nagyon erősen adszorbeálódnak. Emellett, amint azt a továbbiakban ismertetjük, ez az adszorpció reverzibilis.
Minél több aromás gyűrűt tartalmaz a csoport, annál jobb az adszorpció és nehezebb az elúció, és fordítva. Az optimum meghatározását a szakember esetenként könnyen meghatározhatja. Mondhatjuk azonban, hogy a központi gyűrűn kívül alkalmazott 4-8 aromás gyűrű mind a gazdaságossági, mind az adszorpciós és elúciós kritériumok szempontjából kielégítő kompromisszumot nyújt.
A találmány szerinti csoportok előállítási eljárása az fmoc csoportok előállítási eljárásával azonos.
Az fmoc csoportok előállítása jól ismert, például CARPINO - J. Amer. Chem. Soc. 1970, 92, 5748; J. Org. Chem. 1972, 37, 3404; Synthesis 1983, p. 671; F. Org. Chem. 1983, 48, 77; Int. J. Peptide Protein Rés. 1983, 22, 125; és Biopolymers 1983, 22, 2157 irodalmi helyeken ismertetett eljárásokkal történhet.
A fenti csoportok előállítását könnyen megvalósíthatjuk például az 1. reakcióvázlat szerinti vagy azzal egyenértékű reakciósorozattal.
A találmány szerinti csoportokat a fenti eljárásokkal vagy jól ismert eljárásokkal, mint például Friedel-Craftsreakciókkal állíthatjuk elő.
A fenti irodalmi helyeken azt is ismertetik, hogy hogyan valósítható meg a fentiekben ismertetett csoportok védendő funkciós csoportokra való ojtása. Ennek megfelelően ezek a csoportok olyan molekulákat módosítanak, amelyek például sav-, alkohol-, tiol-, aminvagy amid-fünkciós csoportokat tartalmaznak. Ezek a védett molekulák is a találmány tárgyát képezik. Az ilyen eljárásokkal védett molekulák bármilyen típusúak lehetnek, de általában aminosavak vagy peptidek. A peptidek aminosav-összetevői természetes vagy szintetikus eredetűek lehetnek; és a peptidek és/vagy aminosavak védelmét vagy helyettesítését különböző funkciós csoportokon végezhetjük.
Munkánk során azt tapasztaltuk, hogy a fentiekben ismertetett védőcsoportokkal módosított molekulák aktív szenet tartalmazó grafit-, vagy grafitizált anyagból készült oszlopokon nagyon jól visszatarthatok. Az ilyen molekulák a királelválasztáshoz nagyon jól alkalmazhatók.
A leírásban alkalmazott „grafitizált anyagok” kifejezésen a teljes egészében vagy a felületükön szénből felépülő és általában pirolízissel grafitizáló kezelésnek alávetett anyagokat értünk.
A találmány szerinti védőcsoport erős affinitása azt jelenti, hogy ez a csoport elsősorban peptidek tisztítására alkalmas. Az aktív szén alkalmazása a grafittal azonos kötést biztosít, és azért előnyös, mert olcsóbb, mint a grafitizált szén (PGC).
A találmány tárgyát képezik az olyan védővegyületek is, amelyek egy olyan fentiekben ismertetett csoportot tartalmaznak, amely az L vagy L’ csoporton keresztül egy lehasadó csoporthoz, mint például egy nitrogén-, oxigén-, kén-, szelén-, tellúr-, szilícium- vagy halogénatomot tartalmazó csoporthoz kapcsolódnak. Ilyen lehasadó csoportok például a halogénatomok (például fluor-, klór-, bróm- vagy jódatom), vagy hidroxil-, karboxil-, amin-, sav-amid-, ρ-toluol-szulfonsav-, merkapto-, ciano- vagy trimetil-szilícium-csoport.
A találmány szerinti csoportok másik különösen előnyös tulajdonsága, hogy legnagyobb többségük a természetes aminosavaktól eltérően adszorbeálja a látható
HU 217 033 Β vagy ultraibolya tartományú fénysugarakat. Néhány ilyen csoport fluoreszcens viselkedése is eltér a természetes aminosavakétól.
Ez a viselkedés olyan berendezés kialakítását teszi lehetővé, amely tartalmaz egy egymás után vagy egyidejűleg alkalmazható
a) kamrát, például oszlopot, amely valamilyen grafitanyaggal, például grafittal vagy aktív szénnel van megtöltve; és
b) egy ojtókészletet, amely egy fentiek szerinti védőcsoport valamilyen molekulába való ojtására (bevitelére) alkalmas.
A grafit- vagy grafitizált anyag a fentieknek megfelelő, és az ojtókészlet olyan reagenseket tartalmaz, amelyeket egy védőcsoport valamilyen védendő molekulába való ojtására szokásosan alkalmaznak.
A berendezés előnyösen még egy olyan c) frakciógyűjtő rendszert is tartalmaz, amely ultraibolya (UV), látható vagy fluorescens spektroszkópiás detektorral van ellátva.
így például a Tbftnoc csoport olyan fluorescens címkeként viselkedhet, amelynek gerjesztési hullámhossza 383 nm; kibocsátási hullámhossza: 424 nm. Ez a tulajdonság különösen az immunológiában előnyös, ahol a nagyon kis koncentrációban jelen lévő vegyületek nagyon érzékeny eljárásokat igényelnek.
Ennek megfelelően olyan új eljárás kidolgozása vált lehetővé, amely molekulák - elsősorban peptid fragmentek - szintézisére és/vagy elválasztására alkalmas, és a következő lépésekből áll:
- egy vegyületelegy legalább egy vegyületében legalább egy csoport védelme a fentiekben meghatározott csoporttal; és
- a vegyületelegy átvezetése egy grafitanyaggal töltött kamrán.
A találmány tárgyát képezi a fentiekben ismertetett csoport alkalmazása egy molekula legalább egy funkciós csoportjának védelmére.
A következő példákat a találmány részletesebb bemutatására ismertetjük.
Az alkalmazott összes aminosav a Fluka, Aldrich vagy Sigma cégektől beszerezhető. Az olvadáspont meghatározást nyitott kapillárisban vagy elektromosan fütött Büchi-510 olvadáspont-meghatározó berendezésben vagy mikroszkóplemezen, elektromosan fűtött Reichert 7905-lemezen végezzük, és nem korrigáljuk. A vékonyréteg-kromatográfiás (t.l.c.) meghatározást 60 GF-254 típusú, szilikagéllel bevont műanyag lemezeken (Merck 5735) végezzük a következő rendszerekkel:
(A) etil-acetát/benzin (forráspont: 40-60 °C), 1:4 térfogatarányú elegy;
(B) metanol/kloroform, 1:9 térfogatarányú elegy;
(C) toluol;
(D) kloroform;
(E) etil-acetát;
(F) benzol;
(G) diklór-metán;
(H) metanol/kloroform/ecetsav, 1:9:0,5 térfogatarányú elegy;
(I) n-butanol/ecetsav/víz, 3:1:1 térfogatarányú elegy.
A vegyületek vizuális vizsgálatát a következő eljárások megfelelő kombinálásával végezzük: jódgőzvizsgálat, ultraibolya-abszorpció 254 nm-en és 352 nmen, semleges kálium-permanganát és brómfenolkék spray alkalmazás, Mary-reagens- [4,4’-bisz(dimetilamíno)-difenil-karbinol] alkalmazás a szabad aminocsoportokat tartalmazó savfunkciós csoportok és ninhidrincsoport meghatározására. Az optikai forgatás mérésére egy A A 1000 polarimétert, 1 dm-es cellát és az adott példában ismertetett oldószert alkalmazunk. Nagynyomású folyadékkromatográfiás (HPLC) meghatározást vagy egy Waters-berendezésben, amely 2 χ 600 A szivattyúkat, egy UGK injektort, egy 680-as automatikus gradiens-szabályozót, egy 441 modellszámú ultraibolya-detektort tartalmaz; vagy egy Applied Biosystems berendezésben, amely 2 χ 1406 A oldószerelosztó rendszert, egy 1480 A injektor/keverő egységet és egy 1783 A detektor/szabályozó egységet tartalmaz.
Az analitikai elválasztást egy Whatman Partisii -5 ODS-3 (4,6 mm IDx250 mm) és egy ABI (RP18) akvapor OD-300-as, 0,3 pm-es pórusméretű, 7 pm-es gömbszemcsés szilícium-oxid- (4,6 mm IDx220 mm) oszlopon, a példában ismertetett körülmények között végezzük.
A flashkromatográfiás mérést egy 60-as szilikagél(Fluka; 70-35 pm) oszlopon, 60-100 g szilikagél/1 g nyersanyag és 15-20 cm aktív hossz alkalmazásával végezzük.
Az infravörös spektrumok felvételéhez egy Perkin-Elmer 781 spektrofotométert, a példában ismertetett oldószert vagy KBr-korongot és polisztirol standardot (1603 cm1) alkalmazunk. Az ultraibolya-spektrumok felvételét egy Cary 210 spektrofotométerrel, a fluorescens spektrumok felvételét pedig Perkin-Elmer LS-5 luminescens spektrofotométerrel végezzük.
A tömegspektrometriás felvételt egy Kratos MS TC berendezéssel végezzük.
A proton magmágneses rezonancia- (NMR) spektrumot egy Brüker WP 80 (80 MHz), WP 20 (200 MHz) vagy egy WH 360 (360 MHz) berendezéssel, a példában ismertetett oldószerrel tetrametil-szilán belső standard (δ=0,00) alkalmazásával vesszük fel.
A szén-13 NMR-spektrum meghatározására egy Brüker WP 200 (50 MHz) vagy WH 360 (90 MHz) berendezést, a példában ismertetett oldószert és tetrametilszilán belső standardot alkalmazunk. Az elemanalízist egy 1106 modellszámú Cári Erba berendezéssel végezzük.
Az egykristály röntgen-szerkezetmeghatározást egy grafitmonokromatált Stoé Stadi-4 négykörös diffraktométeren végezzük. (CU-Ku-sugárzás; = 1,54184 nm) alkalmazunk.
Az oldószereket felhasználás előtt ledesztilláljuk, és a következő oldószereket a zárójelben megadott reagensekkel szükség esetén megszárítjuk: benzol (nátriumhuzal); kloroform (foszfor-pentoxid); diklór-metán (kalcium-hidrid); díetíl-éter (nátrium-huzal); dioxán (semleges alumínium-oxid vagy nátrium-huzal); metanol (magnézium-jodid); toluol (nátrium-huzal). A benzin
HU 217 033 Β (40-60 °C) olyan frakciót jelent, amelynek forráspontja 40 °C és 60 °C között van.
Az alkalmazott rövidítések jelentései a következők: FMOC: fluorennonil-metoxi-karbonil,
TBFMOC: tetrabenzofluoren-metoxi-karbonil,
TFA: trifluor-ecetsav,
DMF: dimetil-formamid,
DICI: diizopropil-karbodiimid,
HOBt: hidroxi-benzotriazol.
1. példa
13-Hidroxi-metil-dibenzo [a,cjfluor én-előállítás
Az előállítást a 2. reakcióvázlat szerint végezzük a következőknek megfelelően:
Metil-(fenantrén-9-il, fenil)-hidroxi-acetát (25. számú vegyület) előállítása
A (25) metil-(fenantrén-9-il, fenil)-hidroxi-acetát előállítását (23) 9-fenantrenil-lítium és benzoil-hangyasav-metil-észter éterben való reagáltatásával állítjuk elő.
ml vízmentes éterben oldott 2,57 g (10 mmol) 9bróm-fenantrénhez 0 °C hőmérsékleten, nitrogénatmoszférában 8 ml (11 mmol, 1,1 milliekvivalens; 1,38 mol/l-nek titrált) n-butil-lítium hexános oldatot csepegtetünk 10 perc alatt. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékleten keveijük 1 órán át. A kapott szuszpenziót hagyjuk ülepedni, majd a felülúszót fecskendővel eltávolítjuk. A maradékot 5 ml éterben újraszuszpendáljuk. Ezt az oldatot nitrogénatmoszférában 50 ml dietil-éterben 1,64 g (1,4 ml; 10 mmol) benzoil-hangyasav-metilésztert tartalmazó hideg (0 °C) oldathoz adjuk.
A kapott elegyet 2 órán át visszafolyatás közben melegítjük, és egy éjszakán át keverjük. Az elegyhez 50 ml (10 térfogat%-os, pH = 1) híg sósavoldatot adunk, a szerves réteget elválasztjuk, a vizes réteget 2 χ 50 ml éterrel mossuk, és a szerves fázisokat egyesítjük, majd 2 χ 50 ml vízzel mossuk, és magnézium-szulfáton szárítjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és így sárga, olaj szerű terméket kapunk. Az olajat flash-kromatográfiásan tisztítjuk (eluálószer: A), és a kapott sárga olajat benzinnel eldörzsöljük. A kapott fehér szilárd anyagot leszűrjük, vákuumexszikkátorban megszárítjuk, és így 1,75 g (51%-os kitermelés) olyan kívánt vegyületet kapunk, amelynek analitikai eredményei a következők:
Olvadáspont: 143-145 °C.
Elemanalízis a C23HlgO3 képletre számítva:
Számított: C%=80,7, H%=5,26.
Mért: C%=79,7, H%=5,24.
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf (A)=0,32; Rf(B)=0,76; vmax CH2C12 3690 (szabad OH), 3510 (H kötött OH), 3025 (CH elnyúlás, aril), 2960, 2880, 2860 (CH elnyúlás, alkil), 1730 (CO, észter), 1600, 1500 (aromás gyűrűk), 1225, 1185,1170, 1100,1100,1070 (CO elnyúlás) cm1;
Ámax 296 (9832), 284 (9200), 276 (11981), 254 (48450), 248(37620) nm; δΗ (CDC13, 200 MHz), 8,72 (1H, d, 3J=8 Hz, aromás), 8,66 (1H, d, 3J=8 Hz, aromás), 8,16 (1H, d, 3J=8 Hz, aromás), 7,75-7,25 (11H, m, aromás), 4,32 (1H, s, OH), 3,85 (3H, s, CH3); 6C (CDC13), 50 MHz), 175,7 (CO, észter), 141,1,135,6,131,3,130,6,
130,3, 129,8 (kvatemer aromás szenek), 129,1, 128,2,
128.1, 127,3, 127,0, 126,9, 126,6, 126,2, 126,1, 122,9,
122,2 (aromás CH-k), 82,1 (C,, kvatemer), 53,4 (CH3); m/z (El), 342,283,105.
13-Karboxi-metil-dibenzo[a,c]fluorén [(26) számú vegyület] előállítása
A (25) vegyület savas körülmények között végzett kezelése (10 °C hőmérsékleten, koncentrált kénsav, ecetsav) a (26) vegyület gyenge kitermelésű képződését eredményezi.
Ha a (25) vegyület kezelését polifoszforsawal (PPA) végezzük 110 °C hőmérsékleten, meglepő módon a kívánt (26) észter 42%-os kitermeléssel képződik.
g polifoszforsavat mechanikus keverővei való keverés közben 110 °C hőmérsékletre melegítünk. Ehhez 5 g (14,6 mmol) metil-(fenantrén-9-il, fenil)-hidroxiacetátot adunk. Az elegyet 110 °C hőmérsékleten keverjük 1 órán át, majd szobahőmérsékletre hűtjük, 150 ml vízzel hígítjuk és 4x250 ml etil-acetáttal extraháljuk. A szerves rétegeket egyesítjük, és 200 ml 10 térfogat%os nátrium-hidrogén-karbonáttal és 100 ml vízzel mossuk, és magnézium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és így sárga, szilárd anyagot kapunk. Ezt a nyers, szilárd anyagot flashkromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként toluolt alkalmazunk. A kromatográfiás tisztítás után 2,82 g (60%-os kitermelés) kívánt vegyületet kapunk, amelyet dimetil-klorid/benzin (forráspont: 40-60 °C) elegyből átkristályosítunk, és így 1,96 g (42%-os kitermelés) olyan fehér, szilárd anyagot kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 190-191 °C.
Elemanalízis a C23HJ6O2 képletre számítva:
Számított: C%=85,2, H%=4,94.
Mért: C%=85,2, H%=4,93.
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf (C)=0,50; Rf (D)=0,56. vmax (CH2C12), 3040, 3020 (CH elnyúlás, aril), 2970 (CH elnyúlás, alkil), 1730 (CO, észter), 1610, 1600, 1580 (aromás gyűrűk), cm1; Ámax 364 (540), 346 (16200), 322 (18 360), 268 (64800) nm; δΗ (CDC13, 200 MHz), 8,84-8,67 (3H, m, aromás), 8,36 (1H, d, 3J = 7,8 Hz, aromás), 7,98-7,90 (1H, m, aromás),
7,80-7,35 (7H, m, aromás), 5,16 (1H, s, CH), 3,63 (3H, s, CH3); őc (CDClj, 50 MHz), 172,0 (CO, észter),
142,7, 141,9, 137,4, 135,6, 131,1, 130,0, 128,7, 128,4 (kvatemer aromás szenek), 128,1, 127,0, 126,7, 126,3,
126.2, 124,3, 124,1, 123,8, 123,3, 123,2, 122,9 (aromás CH-k), 53,4 (CH3), 52,4 (CH); m/z (El) 324, 265, 262, 132.
13-Hidroxi-metil-dibenzo[a,c]fluorén (21. számú vegyület) előállítása
A (26) éter redukálása 48%-os kitermeléssel valósítható meg úgy, hogy -50 °C-os diklór-metánban három ekvivalens mennyiségű dijód-butil-alumínium-hidridet (DIBAL-H) alkalmazunk.
ml diklór-metánban oldott 0,5 g (1,54 mmol) 13karboxi-metil-dibenzo[a,c]fluorénhez -65 °C hőmérsékleten 4,6 ml (4,62 mmol; 1 mol/l-es diklór-metános oldat) diizobutil-alumínium-hidridet adunk. A reakcióelegyet 3 órán át keverjük, és eközben a hőmérsékletet
HU 217 033 Β (-50)-(-40) °C között tartjuk. így fehér csapadékot kapunk. A reakcióelegyet 30 ml 1:1 térfogatarányú ecetsav/víz eleggyel kezeljük, és 3x60 ml diklór-metánnal extraháljuk. A szerves réteget 50 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldattal és 30 ml vízzel mossuk, és magnézium-szulfáton szárítjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a kapott nyers, szilárd anyagot flashkromatográfiásan, kloroform eluálószer alkalmazásával tisztítjuk. A cím szerinti vegyületet fehér, szilárd anyag formájában kapjuk, amelyet benzinnel mosunk, és így 0,217 g (48%-os kitermelés) olyan terméket kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 167-168°C.
Elemanalízis a C22H16O képletre számítva:
Számított: C%=89,2, H%=5,41.
Mért: C%=89,0, H%=5,39.
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf (D)=0,26; Rf (E)=0,64. vmax (CH2C12) 3610 (szabad OH), 3490 (H, kötött OH), 3060 (CH elnyúlás), 2940, 2890 (CH elnyúlás, alkil), 1610, 1600; 1580 (aromás gyűrűk) cm1; Ámax 366 (888), 338 (12728), 322 (14504), 266 (27232), 246 (31 968) nm; δΗ (CDC13, 200 MHz), 8,88-8,68 (3H, m, aromás), 8,38 (ÍH, d, 3J=7,9 Hz, aromás), 8,14-8,08 (ÍH, m, aromás), 7,81-7,33 (7H, m, aromás), 4,45 (2H, m, Ha, CH2 és He), 3,85 (ÍH, m, Hb, CH2), 1,64 (ÍH, s, OH), őc (CDC13, 50 Hz), 146,7, 142,5, 139,4, 134,9, 130,9, 130,1, 138,7 (kvatemer aromás szenek), 127,5,
126,8, 126,1, 125,9, 125,8, 124,7, 124,2, 124,1, 123,8,
123,4, 122,9 (aromás CH-k), 65,7 (CH2), 50,0 (CH); m/z (El) 296, 265.
Ezzel az eljárással a (21) 13-hidroxi-metil-dibenzo(a,c)fluorének négy lépésben állíthatók elő, és a teljes kitermelés 10%.
Ezután a (21) alkohol és a későbbiekben ismertetésre kerülő 9-fluorén-metanol acetátjait állítjuk elő a PGC-vel töltött HPLC-kolonnákon mutatott viselkedésük összehasonlítására.
A (29) 9-fluorenil-metil-acetát retenciós ideje kloroformmal eluálva 3,3 perc, míg a (30) 13-acetoxi-metildibenzo(a,c)fluorén ugyanilyen körülmények között nem marad vissza teljesen a kolonnán, hanem lassan eluálódik.
13-Acetoxi-metil-dibenzo [a,c]fluorén (30. számú vegyület) előállítása
215,2 mg (0,727 mmol) 13-hidroxi-metil-dibenzo[a,c]fluorént 5 ml ecetsavanhidridben oldunk, majd az oldathoz 1 csepp 2 mol/l-es kénsav vizes oldatot adunk. A reakcióelegyet 30 percig keveijük. A kapott fehér csapadékot leszűrjük, és 150 ml vízzel mossuk. A szilárd anyagot megszárítjuk, a szárítást vákuum-exszikkátorban, foszfor-pentoxidon állandó tömegig végezzük, és így 206,3 mg (84%-os kitermelés) olyan fehér, szilárd 13-acetoxi-metil-dibenzo[a,c]fluorént kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők: Olvadáspont: 135-136 °C.
Elemanalízis a C24H18O2 képletre számítva:
Számított: C%=85,2, H%=5,33.
Mért: C%=84,9, H%=5,33.
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf (D) 0,57; Rf (E) 0,68;
vmax (CH2C12) 3030 (CH elnyúlás, aril), 2980, 2920 (CH elnyúlás, alkil), 1735 (CO, észter), 1610, 1600,
1570 (aromás gyűrűk) cm1;
Ámax 366 (1184), 338 (25160), 322 (27528), 265 (52688), 246 (53020)nm;
Öh (CDC13, 200 MHz), 8,68-8,69 (3H, m, aromás), 9,38 (ÍH, d, 3J=7,9 Hz, aromás), 8,30-8,25 (ÍH, m, aromás), 7,78-7,35 (7H, m, aromás), 5,16 (ÍH, dxd, 3Jac=4,1 Hz, 2Jab= 10,8 Hz, Ha, CH2), 4,56 (ÍH, dxd, 3Jca=4,l Hz, 3Jcb=9,3 Hz, Hc), 3,76 (ÍH, dxd, 2Jba=10,8Hz, 3Jbc=9,3 Hz, H„, CH2), 2,17 (3H, s, CH3); 5C (CDC13, 50 MHz), 171,0 (CO, észter), 146,7, 142,1,138,7,134,8,
131,1, 130,1, 128,7, 128,6 (kvatemer aromás szenek), 127,6, 127,0, 126,8, 126,2, 126,1, 125,7, 124,9, 124,8,
124,3, 123,4, 123,3, 122,9 (aromás CH-k), 67,3 (CH2),
46,5 (CH), 20,9 (CH3); m/z (El) 338, 277,265,139,43. HPLC: oszlop (ODS3-PL5-393, oldószerek: A(H2O), B(CH3CN), körülmények: B(50%) 2 perc perc
B(50%)---> B(95%) λ=254 nm, áramlási sebesség: 1 ml/perc, injektálás: 5 μΐ, C= 1,42 mg/ml, AUFS=2, retenciós idő: 21,6 perc.
9-Fluorenil-metil-acetát (29. számú vegyület) előállítása
0,215 g (1,1 mmol) 9-fluorenil-metanolt 5 ml ecetsavanhidridben oldunk. Ehhez az oldathoz 2 csepp 2 mol/l-es kénsav vizes oldatot adunk. Az elegyet 30 percig keveijük. A tiszta oldatot 20 ml hideg vízbe öntjük. A kapott csapadékot Büchner-szűrőn leszűrjük, és egy vákuum-exszikkátorban, foszfor-pentoxidon állandó tömegig szárítjuk. így 0,175 g (67%-os kitermelés) olyan fehér, szilárd anyagot kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 83-84 °C.
Elemanalízis a C16H)4O2 képletre számítva:
Számított: C%=80,7, H%=5,88.
Mért: C%=80,5, H%=5,98.
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf (D)=0,50; Rf (E)=0,68. vmax (CH2C12) 3030 (CH elnyúlás), 2960,2910 (CH elnyúlás, alkil), 1735 (CO, észter), 1610 (aromás gyűrűk) cm1; Xmax 300 (2476), 290 (2063), 268 (7634) nm; δΗ (CDC13, 80 MHz), 7,83-7,29 (8H, m, aromás), 4,46-4,28 (3H, m, CH, CH2), 2,14 (3H, s, CH3); dc (CDClj, 50 MHz), 170,8 (CO, észter), 143,6, 141,1 (kvatemer aromás szenek), 127,6, 126,9, 124,9, 119,9 (aromás CH-k), 66,2 (CH2), 46,5 (CH), 20,8 (CH3); m/z (El) 238, 178, 165, 149, 60, 43. HPLC: oszlop (ODS3-PL5-393), oldószerek: A(H2O), B(CH3CN). Körülmények: B(50%) 2 perc perc
B(50%)---> B(95%) =254 nm, áramlási sebesség: 1 ml/perc, injektálás: 5 μΐ, C=l,46 mg/ml, AUFS=2, retenciós idő: 8,4perc.
2. példa
17-Hi.droxi-meti.l-tetrabenzo[a,c,q,i]fluorén (31. számú vegyület) előállítása
A (31) tetrabenzo-fluorenil-alkohol előállítását a 3. reakcióvázlat szerint végezzük a következőknek megfe5
HU 217 033 Β lelően: (a) BuLi, Et2O, szobahőmérséklet, 30 perc; EtOOCCOOEt, Et2O, 0-5 °C, 2 óra, 63%; (b) 9-brómfenantrén, BuLi, Et2O, szobahőmérséklet, 30 perc; (32), Et2O, 0-5 °C, 2 óra, 46%; (c) PPA, 140 °C, 4 óra, 49%; (d) DIBAL-H (3 ekvivalens), CH2C12, -65 °C, 1 óra, 73%.
Etil-2-oxo-2-(fenantrén-9'-il)-acetát (32. számú vegyület) előállítása
A (32) α-keto-észtert úgy állítjuk elő, hogy díetíloxalát éteres oldatához 0 °C hőmérsékleten, 20% feleslegben 9-fenantrenil-lítiumot adunk. A reakcióelegyet ezután visszafolyatással melegítjük 2 órán át, majd flashkromatográfiásan tisztítjuk. így 23% kitermelésű terméket nyerünk.
A (32) α-keto-észtert előnyösen úgy is előállíthatjuk, hogy a dietil-oxalát éteres oldatához 20% feleslegben, 0-5 °C hőmérsékleten óvatosan hozzáadjuk a 9fenantrenil-lítiumot, majd a reakcióelegyet szobahőméréskleten keveijük.
ml éterben 5,14 g (20 mmol) 9-bróm-fenantrént tartalmazó oldathoz keverés közben, 0 °C hőmérsékleten, nitrogénatmoszférában, 10 perc alatt hozzácsepegtetünk 16 ml (22 mmol; 1,1 ekvivalens; 1,38 mol/l-nek titrált) normál-butil-lítium hexános oldatot. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten keverjük 1 órán át. A kapott szuszpenziót leülepítjük, és a felülúszót fecskendővel eltávolítjuk. A maradékot 10 ml éterben újraszuszpendáljuk. A szuszpenziót nitrogénatmoszférában, 100 ml éterben 3,4 ml (25 mmol) dietil-oxalátot tartalmazó, hideg (0 °C) oldathoz adjuk. A hőmérsékletet az adagolás alatt 0-5 °C-on tartjuk. A reakcióelegyet ezután 0-5 °C hőmérsékleten keverjük 2 órán át, majd szobahőmérsékleten 2 órán át. Az elegyhez 100 ml híg (10 térfogat%-os) sósav vizes oldatot adunk, a szerves réteget elválasztjuk, és a vizes réteg 3x 100 ml-es etilacetát mosólúgjával egyesítjük. A szerves fázist 100 ml (1 mol/l-es) nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldattal semlegesítjük, 50 ml vízzel mossuk, és magnéziumszulfáton szárítjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a kapott narancssárga olajat 40-60 °C forráspontú benzinnel eldörzsöljük. így szűrés és szárítás után 3,53 g (63%-os kitermelés) olyan cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők :
Olvadáspont: 67-68 °C.
Elemanalízis a C|8H]4O3 képletre számítva:
Számított: C%=77,7, H%=5,04.
Mért: C%=77,5, H%=5,02.
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf (A) 0,56, Rr (D) 0,52. vmax (CH2C12) 3070 (CH elnyúiás, aromás), 2990, 2940, 2910, 2880 (CH elnyúiás, alkil), 1735 (CO, észter), 1680 (CO, keton), 1620, 1575 (aromás gyűrűk) cm i; Ámax 328 (9822), 286 (7784), 252 (34 842) nm; δΗ (CDClj, 200 MHz), 0,94 (1H, m, aromás), 8,62 (2H, m, aromás), 8,23 (1H, s, H10 aromás), 7,92 (1H, d, 3J=7,6 Hz, aromás), 7,78-7,69 (4H, m, aromás), 4,51 (2H, 9, 3J=7,1 Hz, CHJ, 1,48 (H, t, 3J=7,1 Hz, CHj), őc (CDClj, 50 MHz) 188,5 (CO, keton), 164,4 (CO, észter), 137,2 (aromás CH), 132,8 (kvatemer aromás),
130,5, 130,2 (aromás CH-k), 129,2, 128,1 (kvatemer aromás szenek), 128,0, 127,4, 127,1, 126,3, 122,7, 122,6 (aromás CH-k), 62,3 (CHJ, 14,0 (CHJ; m/z (El) 278,
205,177, 176.
Etil-[bisz-(fenantrén-9 ’-il)]-hidroxi-acetát előállítása
A (33) tercier alkoholt a keto-észter-komponens előállításához hasonló körülmények között állítjuk elő a (32) vegyület alkalmazásával, megfelelő kitermeléssel.
ml vízmentes éterben oldott 2,57 g (10 mmol) 9-bróm-fenantrénhez keverés közben, 0 °C hőmérsékleten, nitrogénatmoszférában 8 ml (11 mmol, 1,1 ekvivalens, 1,38 mol/l-nek titrált) n-butil-lítium hexános oldatot csepegtetünk 10 perc alatt. A reakcióelegyet 1 órán át szobahőmérsékleten keveijük, és az oldatot nitrogénatmoszférában, 50 ml éterben oldott 2,78 g (10 mmol) etil-2-oxo-2-(fenantrén-9’-il)-acetáthoz adjuk 0 °C hőmérsékleten. A hőmérsékletet az adagolás alatt 0-5 °Con tartjuk. A reakcióelegyet ezután 2 órán át szobahőmérsékleten keveijük, majd 50 ml híg (10 térfogat%os) sósav vizes oldatot adunk hozzá, és a szerves réteget elválasztjuk, majd egyesítjük a vizes fázis 3x250 ml etil-acetát mosófolyadékával, 200 ml 1 mol/l-es nátriumhidrogén-karbonát vizes oldattal semlegesítjük, 200 ml vízzel mossuk és végül magnézium-szulfáton szárítjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a kapott maradékot flashkromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként 4:1 térfogatarányú kloroform/benzin (forráspont: 40-60 °C) használunk, és a várható terméket az Rr=0,23 értékű frakcióból nyerjük ki. A terméket diklór-metán/benzin (forráspont: 40-60 °C) elegyből átkristályosítjuk, a kapott fehér, szilárd anyagot leszűrjük és szárítjuk. így 2,11 g (46%-os kitermelés) olyan cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 188-189 °C.
Elemanalízis a C32H24O3 képletre számítva:
Számított: C%=84,2, H%=5,26.
Mért: C%=83,1, H%=5,23.
Vékonyréteg-kromatográfia (t.l.c.) Rf (E) 0,71; Rf (D) 0,48.
vmax (CH2C1J 3680 (szabad OH), 3510 (H, kötött OH), 3060 (CH elnyúiás, aromás), 2990, 2940 (CH elnyúiás, alkil), 1735 (CO, észter), 1600 (aromás gyűrű) cm1; Ámax 332 (629), 300 (25080), 288 (23 560), 256 (123 120) nm; δΗ (CDC13, 200 MHz), 8,80-8,69 (4H, m, aromás), 8,51 (1H, s, H10, aromás), 8,47 (1H, s, H10, aromás), 7,72-7,41 (12H, m, aromás), 4,46 (1H, s, OH), 4,41 (2H, 9, 3J=7,1 Hz, CH2), 1,17 (3H, t, 3J=7,1 Hz, CHJ, δ(; (CDC13, 50 MHz), 175,7 (CO, észter), 135,0,
131,4, 130,6, 130,5, 130,1 (kvatemer aromás szenek),
129,2, 128,2, 127,3, 126,6, 126,2, 126,1, 122,9,
122,3 (aromás CH-k), 84,3 (Cb kvatemer), 62,9 (CHJ,
13,8 (CHJ; m/z (El) 383, 206,177,176.
17-Karboxi-etil-tetrabenzo[a,c,q,i]fluorén (34. számú vegyület) előállítása
A (33) vegyület polifoszforsawal, 140 °C hőmérsékleten végzett kezelése a (34) gyűrűs észter kialakulását eredményezi. A képződés 49%-os kitermeléssel, az α-etoxi-karbonil-diaril-kation 4n-elektrociklizálásával megy végbe a 4. reakcióvázlat szerint.
HU 217 033 Β
A (34) termék tisztítása a melléktermékek képződése miatt nehéz. A nyers termék átkristályosítása, valamint az ezt követő flashkromatográfiás tisztítás járható út.
Egy 100 ml-es, háromnyakú, mechanikus keverővei ellátott gömblombikba 20 g polifoszforsavat teszünk. Ehhez 0,402 mg (0,881 mmol) etil-bisz(fenantrén-9’-il)hidroxi-acetátot adunk, és a reakcióelegyet 140 °C hőmérsékleten 4 órán át, majd ezt követően szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük. A reakcióelegyet 50 ml vízzel hígítjuk, és 4x50 ml etil-acetáttal extraháljuk. A szerves réteget 2x30 ml 1 mol/l-es nátriumhidrogén-karbonát vizes oldattal semlegesítjük, 30 ml vízzel mossuk, majd flashkromatográfíásan tisztítjuk, DCM-ből átkristályosítjuk, és így kristályos (31) vegyületet kapunk, amelyet röntgensugár-elemzéssel igazolunk.
ml vízmentes, desztillált diklór-metánban oldott 1,795 g (4,098 mmol) 17-karboxi-etil-tetrabenzo(a,c,g,i)fluorénhez, -65 °C hőmérsékleten hozzácsepegtetünk 12,3 ml (12,3 mmol, 3 ekvivalens, 1 mol/l-es diklór-metános oldat) diizobutil-alumínium-hidridet. A hőmérsékletet az adgolás alatt -65 °C és -60 °C között tartjuk. A reakcióelegyet -65 °C hőmérsékleten, 1 órán át, majd szobahőmérsékleten még 1 órán át keveijük. A reakcióelegyet -30 °C-ra hűtjük. A reakcióelegyhez ezután 50 ml 10 térfogat%-os ecetsav vizes oldatot csepegtetünk, majd a két réteget elválasztjuk. A vizes fázist 3x100 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat 70 ml vízzel mossuk, és nátrium-hidrogén-karbonáttal semlegesítjük. A szerves fázist végül magnézium-szulfáton megszárítjuk, és bepároljuk. így 1,7 g nyers olajat kapunk. Ezt flashkromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként benzolt alkalmazunk. Összegyűjtjük az Rf= 0,14-es anyagokat tartalmazó frakciókat és bepároljuk. A maradékot diklóretán/benzin (forráspont: 40-60 °C) elegyből átkristályosítjuk. így 1,18 g (73%-os kitermelés) olyan sárga, szilárd, cím szerinti terméket kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 202-203 °C.
Elemanalízis a C30H20O képletre számítva:
Számított: C%=90,9, H%=5,05.
Mért: C%=91,2, H%=4,96.
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf(F) 0,15, Rf (A) 0,18, Rr(B) 0,75.
Vmax (CH2C12) 3600 (szabad OH), 3060 (CH elnyúlás, aromás), 2940, 2900 (CH elnyúlás, alkil), 1610, 1500 (aromás gyűrűk), 1045 (CO elnyúlás) cm1;
Xmax 380 (10692), 368 (11484), 302 (27324), 290 (21780), 254 (43 560) nm; H (CDC13, 200 MHz),
8,80-8,63 (6H, m, aromás), 8,27-8,22 (2H, m, aromás), 7,73-7,56 (8H, m, aromás), 5,05 (IH, t, 3J=4,3 Hz, CH), 4,49 (2H, d, 3J=4,3 Hz, CH2), 1,31 (IH, s, OH); öc (CDClj, 50 MHz), 141,6, 137,3, 131,4, 130,4, 128,5, 127,9 (kvatemer aromás szenek), 127,4, 126,9, 126,1,
125,9, 125,0, 124,5, 123,4 (aromás CH-k), 66,5 (CH2),
50,8 (CH); m/z (El) 396 (M+), 366.
A (31) alkohol kristályszerkezete azt mutatja, hogy a két hidroxilcsoport közötti hidrogénkötés két molekulát tart össze. A (31) alkohol kristályszerkezetét az 1. és
2. ábrákon mutatjuk be. Az oxogyűrűs hidroxi-metilcsoport két különböző elrendezést vesz fel, amint az valószínűleg a hidrogénkötésű dimerekhez szükséges. A H8 és H9 közötti kölcsönhatás (d=20,3 nm, a hidrogén Van dér Waals-kötése 12 nm) határozza meg a molekula síktól való eltérésének mértékét. Azonban ez a molekula a találmány célkitűzésének megfelelően sík. Ha ez a molekula a kristályszerkezethez hasonló rögzített irányt vesz fel, a molekula királis. Emiatt alacsony hőmérsékletű oldatban a molekula rögzített irányú és ugyanakkor királis is lehet. A szobahőmérsékleten, CDCl3-ban végzett ‘H-NMR-vizsgálat egy tripletet (5=5,05 ppm), valamint egy kettőződést (5=4,5 ppm) mutat, ami a H(17)-nek, illetve a metiléncsoport két protonjának felel meg. Ez feltehetően azzal magyarázható, hogy a fenontréngyűrűk a felvétel időszakában gyorsan oszcillálnak, és a metiléncsoport protonjai mágnesesen ekvivalensek [mint az aromás protonok méltó páqai, például H(2) és H(15)].
A komponens magrezonancia vizsgálatai kimutatják, hogy a metiléncsoport és a két aromás proton, a H( 1) és H(16) között szoros másodlagos (téren át ható) kölcsönhatás van.
3. példa
17-Acetoxi-metil-tetrabenzo[a,c,g,i]fluorén (35. számú vegyület) előállítása
A (35) 17-acetoxi-metil-tetrabenzo(a,c,g,i)fluorént könnyen, 80%-os kitermeléssel állíthatjuk elő felesleges mennyiségű ecetsavanhidrid és katalitikus mennyiségű kénsav alkalmazásával.
A (35) acetát a várakozásnak megfelelően teljesen visszamarad a PGC-vel töltött és kloroformmal eluált HPLC-oszlopon.
0,207 g (0,522 mól) 17-hidroxi-metil-tetrabenzo(a,c,g,i)-fluorént feloldunk 4 ml ecetsavanhidridben. Ehhez az oldathoz 2 csepp 2 mol/l-es kénsav vizes oldatot adunk, és egy órán át keveijük. így egy sárga, szilárd, cím szerinti vegyületet kapunk, amelyet 80 ml vízzel mosunk, majd vákuum-exszikkátorban foszfor-pentoxidon szárítunk. így 183,3 mg (80%-os kitermelés) olyan cím szerinti terméket kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 209-210 °C.
Elemanalízis a C32H22O2 képletre számítva:
Számított: C% = 87,7, H%=5,02.
Mért: C% = 87,0, H%=5,08.
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf (A) 0,32, Rf(F) 0,22. vmax (CH2C12) 3060 (CH elnyúlás, aromás), 1740 (CO, észter), 1610, 1500 aromás gyűrűk), 1230, 1045 (CO, elnyúlás) cm1; ληι1ιχ 380 (17885), 368 (19345), 302 (45 260), 290 (36865), 254 (72271) nm; δΗ (CDC13, 80 MHz), 8,83-8,57 (6H, m, aromás), 8,29-8,17 (2H, m, aromás), 7,78-7,54 (8H, m, aromás), 5,12 (IH, t, 3J = 5,5 Hz, CH), 4,60 (2H, d, 3J=5,5 Hz, CH2), 1,84 (3H, s, CH3); δε (CDC13, 50 MHz), 170,7 (CO, észter), 141,8, 137,0, 131,5, 130,4, 128,6, 128,0 (kvatemer aromás szenek), 127,4, 126,8, 126,1, 126,0, 125,0,
124,9, 123,5, 123,3 (aromás CH-k), 67,9 (CH2),
47,1 (CH), 20,7 (CH3); m/z (El) 438 (M+), 378, 364.
HU 217 033 Β
4. példa
17-Hidroxi-metil-tetrabenzo[a,c,g,i]'fluorén átalakítása klór-hangyasav-észterré (37. számú vegyület) A (37) klór-hangyasav-észtert az 5. reakcióvázlat szerint állítjuk elő a következőképpen:
A (31) alkoholt 2,5 mólekvivalens N,N’-bisz(trimetil-szilil)-karbamiddal kezeljük, és az így kapott (39) trimetil-szilil-étert foszgénnel reagáltatjuk. A kapott terméket átkristályosítjuk, és így 21% kitermeléssel tiszta terméket kapunk a következők szerint:
(a) lépés: 2,5 mólekvivalens N,N’-bisz(trimetil-szilil)-karbamid, diklór-metán, visszafolyatás, 3 óra, 81%os kitermelés;
(b) lépés: 7,5 mólekvivalens foszgén; diklór-metán; visszafolyatás, 2 óra, 21%-os kitermelés.
17-(Trimetil-szilil)-oxi-metil-tetrabenzo[a, c,g, i]fluorén (39. számú vegyület) előállítása 2 ml diklór-metánban oldott 0,05 g (0,126 mmol)
17-hidroxi-metil-tetrabenzo(a,c,g,i)fluorént és 32,3 mg (0,158 mmol; 2,6 ekvivalens) N,N’-bisz(trimetil-szilil)karbamidot visszafolyatással melegítünk 3 órán át. A kicsapódott karbamidot leszűijük, 2 χ 1 ml diklór-metánnal mossuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a kapott maradékot flashkromatográfiásan tisztítjuk. Eluálószerként 75:25 térfogatarányú benzol/benzin (forráspont: 40-60 °C) elegyet használunk. így olyan cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 130-131 °C.
Elemanalízis a C33H2jiOSi képletre számítva:
Számított: C%=84,6, H%=5,98.
Mért: C%=84,2, H%=6,06.
Vékonyréteg-kromatográfia: Rr (F) 0,58, Rf (A) 0,51, Rf(G) 0,76.
δ„ (CDC13, 80 MHz), 8,86-8,62 (6H, m, aromás), 8,49-8,37 (2H, m, aromás), 7,79-7,51 (8H, m, aromás), 5,11 (1H, t, 3J=5,3 Hz, CH), 4,13 (2H, d, 3J=5,3Hz, CH2), 0,4 (9H, s, 3xCH3); öc (CDC13, 60 MHz), 143,4,
136,5, 131,4, 130,3, 129,0, 128,1 (kvatemer aromás szenek), 127,4, 126,5, 125,9, 125,8, 125,6, 124,9, 123,5, 123,0 (aromás CH-k), 67,2 (CH2), 51,4 (CH), -1,0 (3 χ CH3); m/z (El) 468 (M+), 378,364.
17-Tetrabenzo[a,c,g,i]fluorenil-metil-klór-hangyasav-észter előállítása ml diklór-metánban oldott 0,177 g (0,38 mmol) 17-(trimetil-szilil)-oxi-metil-tetrabenzo(a,c,g,i)-fluorénhez hozzáadunk 1,5 ml (2,9 mmol; 7,5 ekvivalens; 1,93 mol/l-es toluolos oldat) foszgén toluolos oldatot. A reakcióelegyet visszafolyatással melegítjük 2 órán át, majd szobahőmérsékleten, nitrogénatmoszférában keverjük 48 órán át. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, így sárga, szilárd cím szerinti terméket kapunk, amelyet diklór-metán/n-hexán elegyből átkristályosítunk. így
36,9 mg (21%-os kitermelés) olyan cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 188-189 °C.
Elemanalízis a C3|H19O2C1 képletre számítva: Számított: C%=81,1, H%=4,14.
Talált: C%=80,9, H%=4,29, N%=0,45.
vmax (CH2C12) 3060 (CH elnyúlás, aromás), 1775 (CO, klór-hangyasav-észter), 1610, 1500 (aromás gyűrűk), 1160, 1140 (CO elnyúlás) cm1; δΗ (CDC13, 200 MHz), 8,79-8,60 (6H, m, aromás), 8,20-8,15 (2H, m, aromás), 7,76-7,75 (8H, m, aromás), 5,17 (1H, t, 3J=5,7 Hz, CH), 4,77 (2H, d, 3J=5,7 Hz, CH2); δΗ (CDC13, 50 MHz),
150,5 (CO, klór-hangyasav-észter), 140,3, 137,2, 131,6,
130,5, 128,2, 127,7 (kvatemer aromás szenek), 127,5, 127,0, 126,3, 126,2, 125,1, 124,5, 123,5, 123,4 (aromás CH-k, 74,6 (CH2), 46,5 (CH).
5. példa
N(J-I7-Tetrabenzo[a,c,g.i]fluorenil-metoxikarbonil-glicin (Tbfmoc-Gly-OH) előállítása (36. számú vegyület)
A Tbfmoc-Gly-OH-előállítást a (31) alkoholból a (41) p-nitro-fenil-karbonáton keresztül végezzük három lépésben, a 6. reakcióvázlat szerint.
(a) lépés: p-nitro-fenil-klór-hangyasav-észter (2 ekvivalens), Ν,Ν’-dimetil-anilin (1 ekvivalens, diklór-metán, szobahőmérséklet: 72 óra, kitermelés: 80%);
(b) lépés: ecetsav, NH2CH2COOC(Me)3, Ν,Ν’-dimetil-anilin (2 ekvivalens); diklór-metán, szobahőmérséklet, 24 óra, kitermelés: 79%;
(c) lépés: p-toluol-szulfonsav (3 ekvivalens), diklór-metán; visszafolyatás, 5 óra; kitermelés: 90%.
A kereskedelemben beszerezhető, 2 ekvivalens pnitro-fenil-klór-hangyasav-észter, a (31) alkohol, és az Ν,Ν’-dimetil-anilin reakciójával, 80%-os kitermeléssel a (41) vegyes karbonát keletkezik. Ezt az anyagot 2 ekvivalens Ν,Ν’-dimetil-anilin jelenlétében glicin-tercbutil-észter-acetát-sóval reagáltatjuk, és így a (42) védett glicin-terc-butil-észtert kapjuk (79%-os kitermelés). Ezt a vegyületet DCM-ben visszafolyatás mellett p-toluol-szulfonsawal hidrolizáljuk, és így 90%-os kitermeléssel a kívánt (36) savat kapjuk.
Ez az eljárás a Tbfmoc-Gly-OH olyan könnyű előállítását teszi lehetővé, amelyet enyhén lúgos körülmények között, és a (31) alkohol tömegére számítva 57%os kitermeléssel végzünk.
17-Tetrabenzo[a,c,g,i]fluorenil-metil-p-nitro-fenilkarbonát (41. számú vegyület) előállítása 2 ml diklór-metánban oldott 0,05 g (0,126 mmol)
17-hidroxi-metil-tetrabenzo(a,c,g,i)fluorént és 35,5 mg (0,175 mmol; 1,4 ekvivalens) p-nitro-fenil-klór-hangyasav-észtert tartalmazó elegyhez hozzáadunk 16 μΐ (0,126 mmol) Ν,Ν’-dimetil-anilint. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten, nitrogénatmoszférában keverjük 24 órán át. A reakciót további 45 mg (0,223 mmol, 1,7 ekvivalens) p-nitro-fenil-klór-hangyasav-észter hozzáadásával és további 24 órán át szobahőmérsékleten végzett keveréssel fejezzük be. A kapott terméket flashkromatográfiásan, toluol eluálószerrel tisztítjuk, az Rf=0,29 értékű frakciókat bepároljuk, és így sárga olajat kapunk. Ezt benzinben (forráspont: 40-60 °C) eldörzsöljük, és így 56,5 mg (80%-os kitermelés) olyan sárga, szilárd cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 139-140 °C.
HU 217 033 Β
Elemanalízis a C37H23NO5 képletre számítva: Számított: C%=79,1, H%=4,10, N%=2,49.
Talált: C%=77,7, H%=3,94, N%=2,29.
Vékonyréteg-kromatográfía: Rf (C) 0,29, Rf (A) 0,16. vmax (CH2C12) 3060 (CH elnyúlás, aromás), 2960, 2930, 2880 (CH elnyúlás, alkil), 1770 (CO, karbonát), 1620, 1600, 1495 (aromás gyűrűk, 1530, 1350 (konjugált nitro-NO2), 1215 (CO elnyúlás), 860 (CH hajlás, pdiszubsztituált), cm *; λπ1ίιχ 366 (20035), 301 (52092), 289(48085),260 (85 751),252 (88957) nm; δ„ (CDC13, 200 MHz), 8,79-8,76 (4H, m, aromás), 8,61—8,57 (2H, m, aromás), 8,33-8,16 (2H, m, aromás), 7,91 (2H, d, Jab=8,9 Hz, p-nitro-fenil), 7,76-7,56 (8H, m, aromás), 6,64 (2H, d, JAB=8,9 Hz, p-nitro-fenil), 5,14 (1H, t, 3J=4,7 Hz, CH), 4,96 (2H, d, 3J=4,7 Hz, CH2); őc (CDCIj, 50 MHz), 154,9 (CO, karbonát),
151,6 (kvatemer aromás C?), 144,9 (kvatemer aromás C4’), 140,3, 1337,4, 131,5, 130,4, 128,3, 127,7 (kvatemer aromás szenek), 127,4, 127,0, 126,2, 125,1, 124,7, 124,1, 123,5, 121,2 (aromás CH-k), 125,3 (aromás CH2’,6’), 121,4 (aromás CH3’5’), 71,2 (CH2), 46,8 (CH); m/z (El) 378, 139, 44; (FAB) 561 (M+), 379. HRMS 561,15759, C32H23NO5: számított: 561,15761 (.·.) <lppm.
Na-17- Tetrabenzo]a, c,g, ijfluorenil-metoxikarbonil-glicin-terc-butil-észter (42. számú vegyület) előállítása
1,5 ml diklór-metánban oldott 39,2 mg (0,07 mmol) 17-tetrabenzo(a,c,g,i)fluorenil-metil-p-nitro-fenil-karbonátot és 14,7 mg (0,077 mmol; 1,1 ekvivalens) glicin-terc-butil-észter-acetát-sót tartalmazó elegyhez hozzáadunk 18 μΐ (0,14 mmol, 2 ekvivalens) N,N’-dimetil-anilint. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten nitrogénatmoszférában keverjük 72 órán át. Ezután a reakcióelegyhez 10 ml vizet adunk és 2 mol/l-es (pH=l) kálium-hidrogén-szulfát vizes oldattal megsavanyítjuk, majd 3x15 ml diklór-metánnal extraháljuk, 3x20 ml vízzel mossuk, és magnézium-szulfáton szárítjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a kapott narancsszínű olajat éterben eldörzsöljük. A kapott sárga, szilárd anyagot leszűijük, benzinnel (forráspont: 40-60 °C) mossuk és szárítjuk. így 30,6 mg (79%-os kitermelés) olyan cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 170-171 °C.
Elemanalízis a C37H31NO4 képletre számítva: Számított: C%=80,3, H%=5,60, N%=2,53.
Talált: C%=79,7, H%=5,51, N%=2,33.
Vékonyréteg-kromatográfía: Rf (H) 0,79, Rf (I) 0,95. vmax (CH2C12) 3440 (szekunder amid NH), 3060 (CH elnyúlás, aromás), 2940 (CH elnyúlás, alkil), 1725 (CO, uretán, észter és amid I), 1600, 1500 (aromás gyűrűk), 1520 (amid II), 1340 (OH-kötés) cm '; 1220, 1160, 1110 (CO elnyúlás), 865, 850 (síktól kifelé irányuló CHkötés);
Xmax 384 (16323), 367 (17656), 302 (42641), 290 (34313), 262 (62296) nm; δΗ (CDC13, 80 MHz), 8,8-8,60 (6H, m, aromás), 8,39-8,28 (2H, m, aromás),
7,81-7,56 (8H, m, aromás), 5,27 (1H, t, 3J=6Hz, CH), 4,98 (1H, s, széles NH), 4,61 (2H, d, 3J=6Hz, CH2),
3,74 (2H, d, 3J=6 Hz, CH2 glicin), 1,44 (9H, s, CH3x3); őc (CDC13, 50 MHz), 168,7 (CO, észter), 156,1 (CO, uretán), 141,9, 136,7, 131,5, 133j,3, 128,7, 127,9 (kvatemer aromás szenek), 127,4, 126,8, 126,0, 125,8, 125,3,
124,9, 123,5,123,1 (aromás CH-k), 82,0 (kvatemer szén, CMe3), 69,0 (CH2), 47,5 (CH), 43,2 (CH2, glicin),
27,9 (CH3x3); m/z (FAB) 553, 379. HRMS 553,22527, C37H3)NO4: számított: 553,22529 (.·.) <1 ppm.
Na-17-Tetrabenzo[a,c,g,i]fluorenil-metoxikarbonil-glicin; Tbfmoc-Gly-OH (36. számú vegyület) előállítása ml diklór-metánban oldott 0,392 g (0,708 mmol) Να-17-tetrabenzo(a,c,g,i)fluorenil-metoxi-karbonil-glicin-terc-butil-észtert és 39,2 mg (0,206 mmol) p-toluolszulfonsavat tartalmazó elegyet visszafolyatás közben melegítünk 4,5 órán át. Eközben csapadék képződik, amelyet leszűrünk, 2x15 ml diklór-metánnal mosunk, és a kapott anyagot megszárítjuk. így 319 mg (90%-os kitermelés) olyan cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 240-241 °C.
Elemanalízis a C33H23NO4 képletre számítva: Számított: C%=79,7, H%=4,63, N%=2,82.
Talált: C%=77,7, H%=4,5, N%=2,0.
Vékonyréteg-kromatográfía: Rf (H) 0,56, Rf (I) 0,80. vmax (KBr-korong) 3320 (NH elnyúlás), 3060 (CH elnyúlás, aromás), 1735 (CO, sav), 1710 (CO, uretán), 1680 (amid I), 1540 (amid II), 1610, 1500 (aromás gyűrűk), 1435 (CH deformációk, alkil), 1310 (OH elhajlás), 1260,1240,1175,1160,1040 (CO elnyúlás), 1000, 745, 720 (síktól kifelé irányuló CH elhajlás) cm1;
Ámax 382 (21744), 368 (23 297), 303 (55913), 291 (45041), 264 (82005), 255 (88839) nm; Öh (d-dioxán, 200 MHz), 9,05-8,97 (4H, 2xd, aromás), 8,83 (2H, d, 3J = 7,8 Hz, aromás), 8,64 (2H, d, 3J=7,8 Hz, aromás), 7,95-7,74 (8H, m, aromás), 6,53 (1H, t, 3J=5,8Hz, NH), 5,61 (1H, t, 3J=5,1 Hz, CH), 4,78 (2H, d, 3J=5,1 Hz, CH2), 3,96 (2H, d, 3J=5,8 Hz, CH2, glicin); 6C (d-dioxán, 50 MHz), 170,6 (CO, sav), 156,2 (CO, uretán), 142,5, 136,2, 131,3, 130,0, 128,7, 127,7 (kvatemer aromás szenek), 127,0,126,5,125,6, 125,4,124,5,
123,3, 122,8 (aromás CH-k), 68,3 (CH2), 47,6 (CH),
41,5 (CH2, glicin); m/z (FAB) 497, 397. HRMS 498,17053, C33H24NO4 számított: 498,17052 (..) < 1 ppm.
HPLC: oszlop (RP 18), oldószer: A [H2O/TFA (0,1%)], B[CH3CN/TFA (0,1%)]; körülmények: B (75%), A (25%); λ=229 nm, AUFS = 2 vagy X=368nm, AUFS=1; áramlási sebesség: 1 ml/perc; injekció: 25 μΐ, C= 1,3 mg/ml [dioxán/víz (1:1)], retenciós idő: 5,4 perc.
6. példa
Szilárd fázisú szintézis
A védett aminosav-származékok mindegyikét a Novabiochemtől vesszük, és a származékok L-sztereoizomerek. A szilárd fázisú peptidszintézis kivitelezését egy Applied Biosystems 430A peptidszintetizáló berendezésben végezzük. Az alkalmazott peptidszintézishez megfelelő DMF-t a Rathbum Chemicals Ltd. cégtől szereztük be. Mindegyik szekvencia első csoportját (azaz a
HU 217 033 Β
C végcsoportot) a p-alkoxi-benzil-alkohol-gyantához kapcsoljuk. A kapcsolást a szintetizálóberendezésen kívül végezzük. A kapcsolás mértékét úgy ellenőrizzük, hogy a kapcsolt gyantából egy kis mintát védelemmentesítésnek vetünk alá, és a kapott olefint az Fmoc-peptid esetén 300 nm-es ultraibolya spektrofotméteres elemzésnek (UV-elemzés), a Tbfmoc-peptidek esetén pedig 364 nm-es UV-elemzésnek vetjük alá. Mindegyik csoport kapcsolását kétszer (2 ekvivalens) végezzük; először a szimmetrikus anhidrideljárással, másodszor a HOBt aktív észtereljárással (kettős kapcsolás), azzal a kivétellel, hogy az Arg, Asn, Gin csoportokat a HOBt-észterrel kétszeresen, és a Gly csoportot a szimmetrikus anhidriden (4 ekvivalens) keresztül egyszeresen kapcsoljuk. Előre kialakított szimmetrikus anhidrideket Fmoc-amino-savaktól (1 mmol) és DICI-ből (0,5 mmol) 15 perces aktivációs idővel és HOBt-észtereket Fmoc-aminosavból (0,5 mmol), DICI-ből (0,5 mmol) és HOBt-ből (0,5 mmol) 30 perces aktivációs idővel állítunk elő. A kapcsolási reakció kivitelezését 30-60 perc alatt végezzük. A nem reagált amino funkciós csoportok lefedését 6 perc alatt dimetil-formamidban oldott ecetsavanhidrid és piridin alkalmazásával végezzük. Az Fmoc-peptidgyanta védelemmentesítését 20 tömeg%-os piperidin DMF-oldattal, 12 perc (5 + 3 + 3+1 perc) érjük el. A gyantát minden ciklus végén alaposan átmossuk DMFfel. A kapcsolások gyors ellenőrzését úgy végezzük, hogy a védelemmentesített termék oldatát egy UV-detektorba tesszük, és méljük az abszorpcióját. így egy sorozat csúcsot kapunk. A peptideket eltávolítjuk a gyantából, ezzel egyidejűleg az oldallánc-védőcsoportokat eltávolítjuk; ezt úgy végezzük, hogy az elegyet 95:5:5 térfogatarányú trifluor-ecetsav:víz:tisztítóanyag eleggyel 2-3 órán át kezeljük. Az N„-védett peptidek kromatográfiás mérését grafitizált szénnel töltött üvegoszlopon végezzük (PGC220-224; 150-180 ppm, 100 m2/g). A HPLC-mérést egy Waters-rendszerű berendezésben, ABI akvapor Prep 10 C-18 30,0 nm pórusméretű, 20 μιη-es, gömbszemcsés szilícium-oxid (10 mm IDx250 mm) oszlopon végezzük a preparatív elválasztásoknál és ABI RP 18 akvapor OD 3007 pm-es gömbszemcsés szilícium-oxid oszlopon (4,6 mm ID χ 220 mm) az analitikai méréseknél.
A zárójelekben megadott gradienst, valamint az A oldószert (0,1 tömeg% TFA, vízben) és a B oldószert (0,1 tömeg% TFA, acetonitrilben) alkalmazzuk.
Az analitikai HPLC-n alkalmazott áramlási sebesség: 1 ml/perc és a preparatív HPLC-n alkalmazott áramlási sebesség 5 ml/perc. A mintaelúciót 214 nm-en mért ultraibolya abszorpcióméréssel követjük.
Az aminosav-elemzéseket LKB 4150 alfa-aminosav-elemző berendezéssel végezzük; az anyagot ezt követően 110 °C hőmérsékleten, 18-36 órán át, állandó forrásban lévő sósavban, lezárt csőben végzett hidrolízisnek vetjük alá.
Fmoc-Gly-Ser-Met-Val-Leu-Ser-OHés TbfmocGly-Ser-Met-Val-Leu-Ser-OH előállítása és tulajdonságaik összehasonlítása
a) Fmoc-Gly-Ser-Met- Val-Leu-Ser-OH előállítása A (43) Fmoc-Ser(OlBu) Met-Val-Leu-Ser(O*Bu) védett, gyantához kötött peptidet egy peptidszintetizáló berendezésben, ortogonális stratégiával végezzük. Mindegyik aminosav-amin funkciós csoportjának ideiglenes védelmére Fmoc-t alkalmazunk, amelyet mindegyik kapcsolás előtt, 20 tömeg% piperidin DMF-es oldattal eltávolítunk. A terc-butil-csoporttal a szerin oldallánc funkciós csoportot védjük. A kapcsolóeljárásban egy szimmetrikus anhidrid-, majd egy HOBt-kapcsolást alkalmazunk. Az esetleg nem reagált aminofunkciós csoportok acetilálására ecetsavanhidridet és piridint alkalmazunk.
A p-alkoxi-benzil-alkohol-csoport kapcsolására a Merrifield-gyantát alkalmazzuk.
A (44) Fmoc-Gly-Ser-Met-Val-Leu-Ser-OH szintetizálását a (43) gyantához kötött pepiidből végezzük a
7. reakcióvázlat szerinti reakciólépéseken keresztül.
Az Fmoc csoport védelemmentesítés után a peptid aminovégét bázikus körülmények között, dioxánban, a szimmetrikus anhidridjén (3 ekvivalens) keresztül az Fmoc-Gly-OH-hoz kapcsoljuk. A kapcsolás hatásfoka: 88%. A gyantáról TFA alkalmazásával, etil-metil-szulfid és kation-tisztítóanyagként anizol jelenlétében lehasítjuk a hexapeptidet, és eltávolítjuk a tercier-butil-csoportot.
Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és végül a peptidet éterrel kicsapatjuk, leszűijük és megszárítjuk.
Dioxán alkalmazásával (amelyben a peptid körülbelül 1,5 mg/ml mennyiségben oldódik) HPLC-tisztítást végzünk.
A preparatív HPLC-vel (44) peptidet és nyomokban szulfoxid-származékát (amint azt az MH+16+ tömegspektrométeres elemzéssel kimutattuk) kapjuk.
A peptidazonosítást tömegspektrometriás és aminosavas elemzéssel végezzük.
Na-9-Fluorenil-metoxi-karbonil-glicil-szerilmetionil-valil-leucil-szerin, Fmoc-Gly-Ser-MetVal-Leu-Ser-OH (44. számú vegyület) előállítása 5 ml N,N-dimetil-formamidban 20 tömeg% piperidint tartalmazó oldatban 130,5 mg (0,05 mmol) FmocSer-fO'Buj-Met-Val-Leu-SerfO'Bu) gyantához kötött peptidet szonikálunk (ultrahanggal kezelünk), majd leszűijük, és végül Ν,Ν-dimetil-formamiddal, diklór-metánnal és dioxánnal jól átmossuk.
89,2 mg (0,3 mmol; 6 ekvivalens) Fmoc-Gly-OH-t feloldunk 2 ml dioxánban, majd hozzáadunk 47 μΐ (0,3 mmol; 6 ekvivalens) 1,3-diizopropil-karbodiimidet, és a reakcióelegyet 5 percig szonikáljuk. Ezt az oldatot ezután egy előzetesen 1 ml dioxánban duzzasztott, gyantakötött peptidhez adjuk, és a reakcióelegyet
4,5 órán át szonikáljuk. A gyantához kötött peptidet leszűijük, diklór-metánnal és éterrel mossuk, és szárítás után 129,8 mg terméket kapunk. A tennék gyantafunkciós csoportjainak koncentrációja: 0,334 mmol/g; a gyantafelvétel/kapcsolás mértéke: 88%; és A3oonm=O,76 (gyanta-peptid: 2,52 mg).
Egy 126,1 mg (0,042 mmol) gyantapeptidet, 0,25 ml anizolt, 0,25 ml etil-metil-szulfidot és 0,25 ml vizet tartalmazó elegyhez 10 ml trifluor-ecetsavat adunk. A reakcióelegyet 2 órán át szonikáljuk. A gyantát leszűrjük, 2 χ 1 ml trifluor-ecetsawal, 4 ml kloroformmal mossuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk,
HU 217 033 Β és a kapott gyantából a peptidet éter hozzáadásával kicsapatjuk, majd leszűijük, és megszárítjuk. így 42,7 mg olyan, kívánt terméket kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Összetétel: mért: Ser2 1,90, Gly] 1,05, Válj 0,99, Met, 1,02, Leuj 1,01; m/z (FAB) 853, 837, 815 (MH+). HRMS 81,36488, számított (C39H55N6O]|S]): 815,36492 (.-.) <1 ppm.
HPLC: RP 18 oszlop, oldószerek: A [H2O/TFA (0,1%)], B [CHjCN/TRA (0,1%)]; körülmények:
perc
A(90%)--—> A(10%) =229 nm; AUFS=0,2; áramlási seb.: 1 ml/perc; injekció: 25 μΐ [C=0,4 mg/0,5 ml (dioxán)]; retenciós idő:
14,2 perc.
b) Tbfmoc-Gly-Ser-Met-Val-Leu-Ser-OHelőállítása A (43) gyantához kötött peptidből ezután hasonló eljárással (45) Tbfmoc-Gly-Ser-Met-Val-Leu-Ser-OH-t állítunk elő.
A Tbfmoc-Gly-OH kapcsolást dioxánban, 80%-os hatásfokkal végezzük. A peptid gyantától való elválasztását és a terc-butil-csoport hasítását TFA-ban, tisztítóanyag jelenlétében végezzük. A peptidet végül éterrel kicsapatjuk, leszűrjük, és szárítjuk. (Kitermelés: 69%.)
A peptid tisztítását a fentiekben ismertetetteknek megfelelően végezzük. A nyers peptidet tartalmazó friss dioxános oldat HPLC-meghatározással csak egyetlen csúcsot mutat, de ugyanebből az oldatból 30 perces állás után a kívánt peptidnek és a szulfoxidszármazéknak megfelelő két csúcsot kapunk. A metionin szulfoxiddá történő gyors oxidálása a peroxidok dioxánban való jelenlétének tulajdonítható.
A fenti feltételezést a két peptid preparatív HPLCvel való elválasztása után tömegspektrometriás (MH+ és MH+16+) és aminosavas elemzéssel igazoljuk.
Na-17-Tetrabenzo(a,c,g,i)fluorenil-metoxikarbonil-glicil-szeril-metionil-valil-leucil-szerin, Tbfmoc-Gly-Ser-Met-Val-Leu-Ser-OH(45. számú vegyület) előállítása
65,3 mg (0,025 mmol) Fmoc-Ser-fO'Buj-Met-ValLeu-Ser-OBu‘) gyantához kötött peptidet 5 ml 20 tömeg% piperidint tartalmazó dimetil-formamidban szonikáljuk 20 percig.
A gyantához kötött peptidet ezután leszűijük, majd dimetil-formamiddal, diklór-metánnal és dioxánnal jól átmossuk.
74,5 mg (0,15 mmol; 6 ekvivalens) Tbfmoc-Gly-OH 2 ml dioxánban szonikálunk 30 percig, majd 23,5 μΐ (0,15 mmol) 1,3-diizopropil-karbodiimidet adunk hozzá, és a reakcióelegyet 5 percig szonikáljuk. Ezt az oldatot ezután az előzőleg 1 ml dioxánban duzzasztott, gyantához kötött pepiidhez adjuk. A reakcióelegyet 5 órán át szonikáljuk. A gyantát leszűrjük, diklór-metánnal, dioxánnal és éterrel jól átmossuk, és megszárítjuk.
így 58,3 mg olyan terméket kapunk, amelynek jellemzői a következők:
A tennék gyantafunkciós csoportjainak koncentrációja : 0,28 mmol/g.
A gyantafelvétel/kapcsolás mértéke 80%.
A364nm=0,43 (gyanta-peptid: 0,85 mg).
Egy 57,3 mg (0,016 mmol) gyantához kötött peptidet, 0,25 ml anizolt, 0,25 ml etil-metil-szulfidot és 0,25 ml vizet tartalmazó elegyhez 5 ml trifluor-ecetsavat adunk. A reakcióelegyet 2 órán át szonikáljuk. A gyantát leszűijük, majd 1 ml trifluor-ecetsavval és 4 ml kloroformmal mossuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot éterben eldörzsöljük, és így a kívánt peptidet kapjuk sárga, szilárd anyag alakjában, amelyet leszűrünk, éterrel jól átmosunk, és megszántunk. így 17,2 mg (69%-os kitermelés) olyan terméket kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők: Összetétel: mért: Ser2 1,8, Gly] 0,08, Val] 1,00, Met, 0,96, Leu, 1,00; m/z (FAB) 1053, 1037, 1015 (MH+). HRMS 1015,42761; számított (C55H63N6O||S]): 1015,42752 () <1 ppm.
HPLC: RP18 oszlop, oldószerek: A [H2O/TFA (0,1%)]; B [CH3CN/TFA (0,1%)]; körülmények:
perc
A(75%) —--> A(5%) λ=229 nm; AUFS=1; áramlási sebesség: 1 ml/perc; injekció: 25 μΐ [C=0,2 mg/0,2 ml (dioxán)]; retenciós idő: 16,1 perc.
c) A Tbfmoc- és Fmoc-származékok PGC-oszlopon mutatott viselkedése
Az Fmoc-Gly-OH és Tbfmoc-Gly-OH retencióját egy grafitizált szénnel töltött (packed with graphitised carbon=PGC) oszlopon hasonlítjuk össze.
Egy 6 mm átmérőjű, 1,5 g PGC-vel töltött oszlopra 10,2 mg (34,3 μιηοΐ) Fmoc-Gly-OH dioxános oldatot töltünk. A vegyület teljes eluálásához a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálattal való követés szerint csak 15 ml dioxán szükséges. Ezzel ellentétben, ha ugyanolyan körülmények között az oszlopra 10,2 mg (20,5 μιηοΐ) Tbfmoc Gly OH oldatot töltünk, az első 35 ml eluálószerrel ez az anyag egyáltalán nem eluálódik. A vegyület eluálásához gyakorlatilag 300 ml dioxán szükséges.
A (44) Fmoc-Gly-Ser-Met-Val-Leu-Ser-OH grafitizált szén kolonnán mutatott viselkedését a (45) Tbfmoc viselkedéséhez hasonlítjuk. Az összes retenciós idő növelésére mindkét peptid eluálására egy 2:1 térfogatarányú dioxán/víz elegyet alkalmazunk. 9,2 mg (11,3 μιηοΐ) Fmoc-heptapeptidet 2:1 térfogatarányú dioxán/víz elegyben a kolonnára töltünk, és ezután a peptidet 75 ml oldószerelegyben teljesen eluáljuk. Ezzel ellentétben, ha a kolonnára 10,5 mg (10,3 pmol) Tbfinoc-származékot töltünk, az anyag az oldószer első 80 ml-ében egyáltalán nem eluálódik, és ezt követően is csak nagyon lassan eluálódik az oszlopról.
d) A Tbfmoc csoport védelemmentesítése
Ebben a kísérletben a Tbfmoc csoportot leválasztjuk a peptidről, de a grafitizált szénoszlopon visszatartva hagyjuk.
A védelemmentesítést 2:1 térfogatarányú dioxán/víz elegyben 20 tömeg% piperidint tartalmazó oldatban végezzük.
Ilyen körülmények között a Tbfmoc-hexapeptid teljesen védelemmentes lesz. A szabad (46) peptid (HglySer-Met-Val-Leu-Ser-OH) eluálódik. Az eluálást vékonyréteg-kromatográfiás meghatározással követjük, az
HU 217 033 Β amino funkciós csoport kimutatására ninhidrint használunk. A terméket ezt követően egyszerű eljárással elválasztjuk; a piperidint és az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, a peptidet éterrel kicsapatjuk, leszűijük és megszárítjuk. így 85%-os kitermelésű terméket kapunk. A tömegspektrometriás elemzés mind a peptid (MH+), mind a szulfoxidszármazék (MH+16+) jelenlétét mutatja. Az aminosav-elemzés a termék összetételét igazolja.
Glicil-szeril-metionil-valil-leucil-szerin, HGly-SerMet-Val-Leu-Ser-OH(46. számú vegyület) előállítása
Egy 9 mm átmérőjű, 4 g grafitizált szénnel töltött oszlopra 15 ml, 2:1 térfogatarányú dioxán/víz elegyben oldva 29,2 mg (28,8 pmol) Tbfmoc-Gly-Ser-Met-Val-LeuSer-OH-t töltünk. Az oszlopot 60 ml, 2:1 térfogatarányú dioxán/víz eleggyel eluáljuk. A védelemmentesítést úgy végezzük, hogy az oszlopot 20 ml, 2:1 térfogatarányú dioxán/víz elegyben 20 tömeg% piperidint tartalmazó eleggyel eluáljuk. A peptidet tartalmazó frakciókat [összetétel-követés: vékonyréteg-kromatográfiával; Rf=0; 1:9:0,5 térfogatarányú MeOH/CHCl3/CH3COOH elegy; ninhidrinalkalmazás] egyesítjük, és bepároljuk. A maradékból a peptidet éterrel kicsapatjuk, leszűijük és megszárítjuk. így 14,5 mg (85%-os kitermelés) olyan vegyületet kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők: Összetétel: mért: Ser21,92, Gly] 0,98, Val] 1,03, Met] 0,87, Leu, 1,02; m/z (FAB) 609, 593 (MH+). HRMS 593,29689; számított (C24H45O9N6S): 593,29685 (.·.) <1 ppm.
Végül az oszlopról forró dioxános eluálással eltávolítjuk a védelemmentesítő lépésből származó tetrabenzo-fluorén-olefint vagy piperidin-adduktumát.
7. példa
Fmoc-ubiquitin(54- 76)OH és Tbfmocubiquitin(3-76)OHelőállítása és tulajdonságaik összehasonlítása
a) Fmoc-ubiquitin(54-76)OH előállítása
A (47) gyantához kötött Fmoc-ubiquitin(54-76)OHpeptidet egy peptidszintetizáló berendezésben, a 6.a) példában ismertetett körülmények között állítjuk elő. A kapcsolóeljárások legtöbbje egy szimmetrikus anhidrid és utána egy HOBt-észter-kapcsolást tartalmaz, amelyek kivitelezését 1:1 térfogatarányú DMF/dioxán oldószerelegyben végezzük.
b) Tbfmoc-ubiquitin(53- 76)OH előállítása
A (47) gyantához kötött pepiidből (48) Tbfmocubiquitin(53-76)OH-t állítunk elő a 8. reakcióvázlat szerint.
Az Fmoc-ubiquitin(54-76)-gyantához kötött pepiidet először 1:1 térfogatarányú ecetsavanhidrid/piridin eleggyel kezeljük az esetleg jelenlévő aminofunkciós csoportok befedésére. A peptid bázikus körülmények között végzett védelemmentesítése után a peptidet dioxánban olyan, 4 ekvivalens mennyiségű TbfmocGly-OBt-észterrel kapcsoljuk, amelyet in situ DIC- és HOBt-komponensekből állítunk elő. A kapcsolás hatásfoka 88%. A (48) Tbfmoc-ubiquitin peptidet az utolsó hasítás után, amelyet kation tisztítóanyagként alkalmazott anizol és tioanizol jelenlétében, TFA alkalmazásával végzünk, éterrel kicsapatjuk. (Kitermelés: 96%.)
Na-(17-Tetrabenzo(a, c,q, ijfluorenil-metoxikarbonilj-glicil-arginil-treonil-leucil-szerilaszpartil-tirozil-aszparagil-izoleucil-glutaminillizil-glutamil-szeril-treonil-leucil-hisztidil-leucilvalil-leucil-arginil-leucil-arginil-glicil-glicin
Tbfmoc-ubiquitin(53- 76)OH(48. számú vegyület) előállítása ml dimetil-formamidban oldott 150 mg (22,65 μιηοΐ) gyantához kötött Fmoc-ubiquitin(54-76) peptidhez
21,4 μΐ (226 μπιοί; 10 ekvivalens) ecetsavanhidridet és 18,2 μΐ (226 pmol; 10 ekvivalens) piridint adunk. A reakcióelegyet 30 percig szonikáljuk, majd leszűijük. A szűrletet dimetil-formamiddal és éterrel mossuk, és a gyantához kötött peptidet 15 percig 25 ml 20 tömeg% piridint tartalmazó dimetil-formamid-oldatban szonikáljuk. Ezután a gyantához kötött peptidet leszűijük, majd dimetilformamiddal és éterrel jól átmossuk. 45 mg (0,09 mmol, 4 ekvivalens) Tbfmoc Gly OH-t 30 percen át 1,5 ml dioxánban a teljes feloldódásig szonikálunk. Ehhez az oldathoz hozzáadunk 14 μΐ (0,09 mmol, 4 ekvivalens) 1,3-diizopropil-karbodiimidet és 12,2 mg (0,09 mmol, 4 ekvivalens) 1-hidroxi-benzo-triazolt. A reakcióelegyet 2 percig szonikáljuk. Ezt az oldatot az előzőleg 1,5 ml dioxánban, 30 percig duzzasztott gyantához kötött peptidhez adjuk. Az elegyet 3,5 órán át szonikáljuk, majd a gyantához kötött peptidet leszűijük, dioxánnal és éterrel mossuk, és egy éjszakán át vákuum-exszikkátorban szárítjuk. így 148,1 mg terméket kapunk.
Helyettesítés hatékonyságának vizsgálata
A gyantához kötött Tbfmoc-peptidet 30 percig 10 ml dimetil-formamidban 20 tömeg% trietil-amint tartalmazó oldatban szonikáljuk. Megméijük a 364 nm hullámhosszon mutatott fajlagos abszorpciót, és ebből a következő értékeket számoljuk:
-a termék gyantafunkciós csoportjainak száma: 0,133 mmol/g;
- gyantafelvétel/kapcsolás: 88% _ A364nm = 0,505.
(Gyantához kötött peptid: 2,1 mg.) mg gyantához kötött Tbfmoc-peptidhez 75 μΐ vizet, 75 μΐ tioanizolt, 75 μΐ anizolt és 3 ml trifluor-ecetsavat adunk. A reakcióelegyet 2,5 órán át szonikáljuk. A gyantát leszűrjük, 2 χθ,5 ml TFA-val és 2 χ 1 ml kloroformmal mossuk, majd megszárítjuk. így 24 mg terméket kapunk. A szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk, és a kapott maradékot éterrel eldörzsöljük. így sárga, szilárd nyers peptidet kapunk, amit egy éjszakán át hűtünk, majd leszűrjük, és megszárítjuk. így 68,5 mg terméket kapunk.
mg nyers Tbfmoc-ubiquitin(53-76)-ot 12 ml, 0,1 tömeg% TFA-t tartalmazó, 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz elegyben szuszpendálunk, majd az elegyet 2 órán át a teljes feloldódásig szonikáljuk.
A termék tisztítását preparatív HPLC-vel végezzük a következők szerint:
-fordított fázisú C—18 kolonna (10x250 mm, A:B gradienssel, 20-80% B, 25 perc alatt),
- ultraibolya detektálás 214 nm.
HU 217 033 Β így liofilizálás után 4,5 mg olyan tiszta, fehér, por alakú Tbfmoc-ubiquitint(53-76) kapunk, amelynek aminosav-elemzési eredményei a következők:
Asx2 2,14, Thr2 1,94, Ser2 1,87, Glx2 2,38, Gly3 2,73, Val, 1,14, Ile, 0,94, Leu5 5,02, Tyr, 0,94, His, 1,01, Lys, 0,94, Arg3 2,94; m/z (FAB) 3147,4 (MH+), HRMS 3149,64063
C149H219N38O38 összegképletű vegyület: számított: 3149,64048 (.’.) <1 ppm;
HPLC (A:B, perc
A(90%) —--> A(10%)
214 nm; C = 0,2 mg/0,2 ml (A), injekció: 25 μΐ) R,= 18,2 perc.
c) Az Na-acetil-ubiquitin(54-76)OH és a Tbfmocubiquitin(53-76) PGC-oszlopon mutatott viselkedése
A (47) gyantához kötött peptidből (49) Na-acetilubiquitin(54-76)OH-t állítunk elő a következők szerint.
A peptid 20 tömeg%-os piperidin DMF-es oldattal való Fmoc csoport-védelemmentesítése olyan szabad N-vég aminocsoportot eredményez, amelyet 1:1 térfogatarányú (100 ekvivalens) ecetsavanhidrid/piridin eleggyel acilezünk.
A peptid gyantáról való eltávolítását és az oldalláncvédőcsoportok eltávolítását anizol és tioanizol tisztítóanyagok jelenlétében, TFA alkalmazásával végezzük. A nyers (49) Na-acetil-ubiquitin(54-76)OH-t ezután éterrel kicsapatjuk.
Na-(Acetil)-arginil-treonil-leucil-szeril-aszpartiltirozil-aszparagil-izoleucil-glutaminil-lizil-glutamil-szeril-treonil-hisztidil-leucil-valil-leucil-arginil-leucil-arginil-glicil-glicin, N^-acetil-ubiquitin(54-76) (49) számú vegyület)) előállítása 100 mg (0,0151 mól) gyantához kötött Fmoc-ubiquitin(57-76)-t 30 percig, 25 ml dimetil-formamidban készült 20%-os piperidinoldatban szonikálunk, majd leszűijük, és végül dimetil-formamiddal és éterrel mossuk.
ml dimetil-formamidban előzőleg duzzasztott gyantához kötött pepiidhez 143 μΐ (1,51 mmol; 100 ekvivalens) ecetsavanhidridet és 122 μΐ (1,51 mmol; 100 ekvivalens) piridint adunk. A reakcióelegyet 1 órán át szonikáljuk, majd a gyantához kötött peptidet leszűrjük, és dimetil-formamiddal és éterrel mossuk. A gyantához kötött Na-acetil-peptidhez 50 μΐ vizet, 50 μΐ tioanizolt, 50 μΐ anizolt és 2 ml trifluor-ecetsavat adunk. A reakcióelegyet 2,5 órán át szonikáljuk. A gyantát leszűijük, 2 x 0,5 ml TF A-val és 2 χ 0,5 ml kloroformmal mossuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot éterben eldörzsöljük, és a fehér csapadékterméket egy éjszakán át hűtjük, majd leszűrjük, és megszárítjuk. így 43,6 mg terméket kapunk. Ebből a peptidből
23,4 g mennyiséget HPLC preparatív kromatográfiás tisztításnak vetünk alá a következők szerint:
- fordított fázisú C-18 kolonna, A:B gradienssel, 10-60% B, 16 perc alatt;
- UV-detektálás 214 nm-en.
így liofilizálás után 9,7 mg olyan, tiszta fehér Naacetil-ubiquitin(54-76)OH-t kapunk, amelynek aminosav-elemzési eredményei a következők: Asx2 1,98, Thr2 1,82, Ser2 1,69, Glx22,33, Gly2 2,36, Val, 1,14, Ile, 0,91, Leu5 5,06, Tyr, 0,85, His, 1,01, Lys, 0,98, Arg32,87; m/z (FAB) 2712,1 (MH+), HRMS 2712,49903, C,,8H200N37O36 összegképletű vegyület (számított: 2712,49891) (.·.) <1 ppm; HPLC (A:B, perc
A(90%)---> A(10%)
214 nm; c = 0,2 mg/0,2 ml (A), injekció: 25 μΐ), R,= 13,2 perc.
Ezután megvizsgáljuk az Na-acetil- és Tbfinocpeptidek PGC-kolonnán mutatott viselkedését.
Mindkét peptidből egy-egy 5 g peptidet tartalmazó oldatot készítünk, és ezeket különböző oldószerelegyekkel eluáljuk. A frakciókat összegyűjtjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, majd a kapott maradékot a HPLC-elemzés előtt friss oldószerben oldjuk.
A legjobb eredményeket 1:1 térfogatarányú metilcianid/víz eleggyel kapjuk. Ilyen körülmények között az Na-acetil-peptid 30 ml eleggyel teljesen eluálódik, míg a Tbfmoc-peptid visszamarad a kolonnán.
Ezeknek a nagyon közeli rokonságban lévő peptideknek a kromatográfiás eljárással megvalósított teljes szétválása egyértelműen bizonyítja az eljárás hatásfokát, valamint a szilárd fázisú eljárásokkal előállított peptidek tisztítására való alkalmasságát. Mindezek alapvető feltétele az oldószerek gondos kiválasztása.
d) Ubiquitin(53- 76)OH tisztítása
Az első tisztítási lépésben, amint azt a c) lépésben fentiekben ismertettük, egy grafitizált szénnel töltött kolonnán egy egyszeres eluálást végzünk. A PGC-vel (a peptid tömegének 50-szerese) töltött oszlopra egy 1:1 térfogatarányú, 0,5 tömeg% TFA-t tartalmazó metil-cianid/víz elegyben oldott, nyers (48) Tbfmoc-ubiquitin(53-76)OH-t töltünk. A fő szennyező anyagok (feltehetően Na-acetil-ubiquitin(55-76) és nem reagált ubiquitin(54-76) 50 ml, ugyanolyan összetételű oldószereleggyel teljesen eluálódnak. A Tbfmoc-peptidek egyike sem eluálódik, még akkor sem, ha a kolonnát további 50 ml 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz eleggyel mosatjuk át. A Tbfmoc védelemmentesítését 20 tömeg% piperidint tartalmazó, 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz eleggyel végezzük. Ilyen körülmények között csak az ubiquitin(53-76)OH eluálódik. Az elegyből az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és végül a peptidet éterrel kicsapatjuk. A termék ezt követő HPLC-vel való tisztításával összesen 15%-os kitermeléssel tiszta ubiquitin(53-76)OH-t kapunk.
Glicil-arginil-treonil-leucil-szeril-aszpartiTtirozilaszparagil-izoleucil-glutaminil-lizil-glutamil-szeril-treonil-leucil-hisztidil-leucil-valil-leucil-arginil-leucil-arginil-glicil-glicin, ubiquitin(53- 76)OH (50. számú vegyület) előállítása mg nyers Tbfmoc-ubiquitin(53-76)OH peptidet 30 ml 0,5 tömeg% TFA-t tartalmazó, 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz elegyben teljes feloldódásig szonikálunk, majd az elegyet 1,4 g grafitizált szénnel töltött üvegkolonnára (PGC 220-224; 150-180 pm; 100 m2/g; kolonnahossz töltés után: 140 mm) töltjük. A kolonnát először 50 ml 0,5 tömeg% TFA-t tartalmazó, 1:1 térfo13
HU 217 033 Β gatarányú metil-cianid/víz eleggyel eluáljuk. Liofilizálás után 6,1 mg olyan maradékot kapunk, amely HPLCelemzéssel egy fő csúcsot ad [Rt= 13 perc; Na-acetilubiquitin(55-76) vagy ubiquitin(54-76)j. A kolonnát ezután 50 ml 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz eleggyel eluáljuk. Liofilizálás után 0,4 g olyan maradékot kapunk, amely HPLC-elemzéssel szennyeződéseket mutat. A védelemmentesítést 50 ml 20 tömeg% piperidint tartalmazó, 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz eleggyel végezzük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a kapott maradékot éterrel eldörzsöljük, leszűqük és megszárítjuk. így 11 mg nyers peptidet kapunk, amelyet preparatív HPLC-tisztításnak vetünk alá a következők szerint:
fordított fázisú C-18 kolonna (10x250 mm); gradiens (A:B); 10-60% B, 20 perc alatt; detektálás 214 nm.
így liofilizálás után 4,5 mg (15% kitermelés) olyan fehér, szilárd anyagot kapunk, amelynek aminosavelemzésével a következő eredményeket kapjuk: Asx2 2,04, Thr2 1,88, Ser2 1,67, Glx2 2,27, Gly3 3,37, Val, 1,01, Ile, 0,90, Leu5 4,99, Tyr, 0,93, His, 1,01, Lys, 0,96, Arg3 2,95; m/z (FAB) 2727,8 (MH+), HRMS 2727,50986, C,,8H20,N38O36 összegképletű vegyület, számított: 2727,50981 (.’.) <1 ppm; HPLC (A:B, 25 perc
A(90%) —--> A(10%)
214 nm; c = 0,4 mg/0,4 ml = (A), injekció: 25 μΐ, R,= 12,6 perc.
A Tbfmoc-ubiquitin(53-76)OH és az ubiquitin(53-76)OH peptidek azonosítását nagy felbontású tömegspektrométeres elemzéssel és aminosav-elemzéssel végezzük.
8. példa
Ubiquitin(35- 76) előállítása és tisztítása
Ez a peptid problémamentesen tisztítható, és a tisztítás kivitelezését a legkisebb ubiquitin ffagmenttel (50) végezzük; az (52) Tbfmoc-ubiquitin(35-76)OH-előállítást a Tbfmoc-Gly-OBt gyantához kötött ubiquitin(36-76) pepiidhez való in situ kapcsolással végezzük. A kitermelés 75%-os. Az előállítást PGC-kolonnán és preparatív HPLC-berendezéssel folytatjuk, és így a kívánt (51) peptidet kapjuk.
Az (51) peptid azonosítását is tömegspektrometriás és aminosavelemzéssel végezzük. A tisztaságvizsgálatot HPLC-vel folytatjuk le.
Na-(17-Tetrabenzo(a,c,g,i)fluorenil-metoxi-karbonil)-glicil-izoleucil-proliTproliTaszpartil-glutaminil-glutaminil-arginil-leucil-izoleuciTfenil-alaniT alanil-glicil-lizil-glutaminil-leucil-glutamil-aszpartil-glicil-argiml-treonil-leucil-szeril-aszpartiltirozil-aszparagil-izoleucil-glutaminil-lizil-glutamil-szeril-treonil-leucil-hisztidiTleucil-valil-leucilarginil-leucil-arginil-glicil-glicin, Tbfmoc-ubiquitin(35-76)OH (52. számú vegyület) előállítása
109,3 mg (7,88 μιηοΐ) gyantához kötött Fmoc-ubiquitin(36-76)-t 1 ml dimetil-formamidban oldunk, és az oldathoz hozzáadunk 14,8 μΐ (157,6 μηιοί; 20 ekvivalens) ecetsavanhidridet és 12,8 μΐ (157,6 μιηοΐ, 20 ekvivalens) piridint. A reakcióelegyet 1 órán át szonikáljuk. A gyantához kötött peptidet leszűrjük, dimetilformamiddal és éterrel mossuk, majd 15 percig 25 ml 20 tömeg% piperidint tartalmazó oldatban szonikáljuk. A gyantához kötött peptidet ezután leszűqük, és dimetilformamiddal és éterrel jól átmossuk. 1 ml dioxánban
19,6 mg (39,4 pmol; 5 ekvivalens) Tbfmoc-Gly-OH-t szonikálunk 30 percig. Ehhez az oldathoz 6,2 μΐ (39,4 μιηοΐ; 5 ekvivalens) 1,3-diizopropil-karbodiimidet és 5,3 mg (39,4 pmol, 5 ekvivalens) 1-hidroxi-benzotriazolt adunk. A reakcióelegyet 5 percig szonikáljuk. Ezt az oldatot ezután az előzőleg 1 ml dioxánban 1 órán át duzzasztott gyantához kötött pepiidhez adjuk. A reakcióelegyet 19 órán át szonikáljuk. A gyantához kötött peptidet leszűqük, dioxánnal, diklór-metánnal és éterrel mossuk, majd végül vákuum-exszikkátorban 48 órán át szárítjuk. így 102 mg terméket kapunk.
A helyettesítés hatékonyságának vizsgálata
2,9 mg gyantához kötött Tbfmoc-peptidet 30 percig ml 20 tömeg% trietil-amint tartalmazó dimetil-formamid-oldatban szonikáljuk.
364 nm hullámhosszon megmérjük a fajlagos abszorpciót, és ebből a következő eredményeket számoljuk :
- A=0,265;
- a termék gyantafunkciós csoportjainak koncentrációja: 50,51 pmol/l;
- gyantafelvétel/kapcsolás: 70%.
A kapcsolást ezután ugyanilyen körülmények között megismételjük a következők szerint:
- 4-4 ekvivalens Tbfmoc-GlyOH, 1,3-diizopropil-karbodiimid és 1-hidroxi-benzo-triazol;
- reakcióidő: 3,5 óra.
A gyantához kapcsolt peptidet ezután leszűqük, dioxánnal, diklór-metánnal és éterrel mossuk, végül vákuum-exszikkátorban egy éjszakán át szárítjuk. így
99,5 mg terméket kapunk.
A helyettesítés hatékonysága
- A=0,265 (2,7 mg gyantához kötött peptid);
- a termék gyantafunkciós csoportjainak koncentrációja: 54,26 pmol/g;
- gyantafelvétel/kapcsolás: 75%.
96,8 mg gyantához kötött peptidhez 75 μΐ vizet, 50 μΐ tioanizolt és 2,1 ml TFA-t adunk. A reakcióelegyet 2,5 órán át szonikáljuk. A gyantát leszűqük, 2x0,5 ml TFA-val és 2χ 1 ml kloroformmal mossuk és szárítjuk. így 19,1 mg terméket kapunk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a kapott maradékot dietiléterben eldörzsöljük, és az így kapott sárga, szilárd anyagot egy éjszakán át hűtjük, majd éterrel jól átmossuk és végül megszárítjuk. így 49,2 mg olyan terméket kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők: HPLC(A:B;
perc
A(90%) —--> A(10%)
214 nm; c=0,5 mg/0,5 ml [A/B (1:1); injekció: 30 μΐ], R,= 19,2 perc.
Glicil-izoleucil-prolil-prolil-aszpartil-glutaminilglutaminil-arginil-leucil-izoleucil-fenil-alanil-alanil-glicil-lizil-glutaminil-leucil-glutamil-aszpartil14
HU 217 033 Β glicil-arginil-treonil-leucil-szeril-aszpartil-tirozilaszparagil-izoleucil-glutaminil-lizil-glutamil-szeril-treonil-leucil-hisztidil-leucil-valil-leucil-arginil-leucil-arginil-glicil-glicin, ubiquitin(35-76)OH (51. számú vegyület) előállítása ml 0,5 tömeg% TFA-t tartalmazó, 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz elegyben 30 mg nyers Tbftnocubiquitin(35-76)OH-t szuszpendálunk, és az elegyet 20 percen át a teljes feloldódásig szonikáljuk, majd 1,5 g grafitizált szénnel töltött, 5 mm átmérőjű üvegkolonnára (PGC 220-224; 150-180 pm; 100 m2/g, aktív hosszúság: 15 cm) töltjük. A kolonnát először 50 ml 0,5 tömeg% TFA-t tartalmazó, 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz eleggyel eluáljuk. Az eluens liofilezése után 2 mg olyan maradékot kapunk, amely széles HPLC-csúcsot ad [Rt=13,8 perc (szennyeződések)]. A kolonnát ezután 50 ml 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz elegygyel eluáljuk. így 4,5 mg olyan fehér, szilárd anyagot kapunk, amelynek HPLC-elemzése szintén szennyeződések jelenlétére utal (széles csúcs, Rt= 14,1 perc). A kolonnát ismét 50 ml 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz eleggyel eluáljuk, és így liofilizálás után 0,3 mg maradékot kapunk (R,= 14,2 perc). A védelemmentesítést 50 ml 20 tömeg% piperidint tartalmazó 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz eleggyel végezzük, majd az oszlopot 50 ml 1:1 térfogatarányú metil-cianid/víz eleggyel eluáljuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és így barna maradékot kapunk. Ehhez dietil-étert adunk, és a kapott csapadékot egy éjszakán át hűtjük, majd leszűijük és éterrel jól átmossuk, és végül megszárítjuk. így 11,7 mg terméket kapunk. 24,8 mg nyers peptidet végül preparatív HPLC-vel tisztítjuk a következők szerint:
- fordított fázisú C-18 kolonna (10x250 nm), gradiens (A:B), 20-60% B 22 perc alatt;
- detektálás: 214 nm.
így liofilizálás után 4,4 mg olyan fehér, szilárd, tiszta ubíquitin(35-76)OH-t kapunk, amelynek aminosavelemzési eredményei a következők: Asx4 3,98, Thr2 1,83, Ser2 1,75, Glx6 6,67, Pro2 1,91, Gly5 5,10, Alá, 0,96, Val, 1,01, Ile3 2,99, Leu7 7,00, Tyr, 0,94, Phe, 1,04, His, 1,11, Lys2; 1,91, Arg4 3,81; m/z (FAB) 4734,2 (MH+). HMS 4734,57186, C20gH344N63O63 összegképletű vegyület (számított: 4734,57161) (.'.) <1 ppm; HPLC (A:B, perc
A(90%) —--> A(10%) λ=214 nm; c = 0,l mg/0,1 ml (A); injekció: 12 μΐ, Rt=13,8 perc.
9. példa
Tbfmoc-L-Phe-OH előállítása
Először kereskedelemben beszerezhető L-fenilalanin-terc-butil-észter-hidrokloridból trietil-aminnal felszabadítjuk a szabad amin funkciós csoportot. Az amint 20% feleslegben, Ν,Ν’-dimetil-anilin jelenlétében (41) karbonáteleggyel reagáltatjuk. A terc-butil-csoport TFA-val való eltávolításával az (53) vegyületet kapjuk.
Az (53) vegyület kialakítását úgy végezhetjük, hogy a (41) karbonátelegyet β-eltávolításnak vetjük alá, majd a kapott (38) olefinbe 1,2-amino-észtert addicionálunk, és végül a terc-butil-észter-csoportot lehasítjuk.
Na-17-Tetrabenzo(a,c,g,i)fluorenil-metil-L-femlalanin, Tbfm-L-Phe-OH (53. számú vegyület) előállítása
3,6 ml trifluor-ecetsavat és 0,2 ml vizet tartalmazó elegyben oldott 421,1 mg (0,702 mmol) Na-17-tetrabenzo(a,c,g,i)fluorenil-metil-L-fenil-alanin-terc-butil-észtert szobahőmérsékleten szonikálunk 3,5 órán át. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és így barna maradékot kapunk, amelyet dietil-éterben eldörzsölünk, és az így kapott sárga, szilárd anyagot egy éjszakán át hűtjük, leszűijük, majd éterrel mossuk, és végül megszárítjuk, így 352,7 mg (92%-os kitermelés) olyan terméket kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők: Elemanalízis a C39H29NO2 képletre számítva: Számított: C%=86,2, H%=5,37, N%=2,59.
Mért: C%=85,2, H%=5,47, N%=2,57.
[a]D2o=-4O,4° (c=l,TFA).
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf (H) 0,36, Rf (T) 0,62. vmax (KBr) 3090, 3060, 3030 (CH elnyúlás, aril), 1620 (COO), 1500 (aromás gyűrűk), 1240, 1190, 1040 (CO elnyúlás), 750, 725, 700 (CH síktól eltérő deformáció) cm1;
Ámax 384 (18868), 369 (21267), 304 (52447), 292 (41894), 264 (78991), 255 (86346) nm; öc (TFA, 50 MHz), 169,5 (CO, sav), 137,9, 136,9, 136,1, 134,2,
131.8, 131,4, 130,5, 129,8, 126,3, 126,1, 125,8 (kvatemer aromás szenek), 128,7, 127,9, 127,2, 127,0,
126.8, 124,8, 123,44, 123,34, 123,29, 122,2 (aromás CH-k), 62,2 (a, CH), 50,9 (CH2), 43,2 (CH), 34,2 (β, CH2); m/z (FAB) 544 (MH+), 379. HRMS 544,22762, C39H30NO2 összegképletű vegyület: számított: 544,22764 (.·.) <1 ppm.
Mivel a glicin-acetát a Tbfmoc-Gly-OH előállításánál sikeresen alkalmazható, ebben az esetben is ezt alkalmazzuk. Ennek megfelelően az L-fenil-alanin-tercbutil-észter-acetát sóját állítjuk elő.
Az aminosav-észter-hidrokloridsóját trietil-aminnal semlegesítjük, és a kicsapódott trietil-amin-hidrokloridot leszűrjük. Eltávolítjuk az oldószert, és a kapott maradékot a liofilizálás előtt ecetsavban feloldjuk, majd két ekvivalens Ν,Ν’-dimetil-anilin jelenlétében a (41) karbonáteleggyel reagáltatjuk. A kapott terméket flashkromatográfiásan tisztítjuk, és átkristályosítjuk. így 46%-os kitermeléssel (54) Tbfinoc-L-Phe-O’Bu-t kapunk. Végül a terc-butil-észter csoportot 95:5 térfogatarányú TFA/víz eleggyel lehasítjuk, és így nagyon jó kitermeléssel (55) Tbftnoc-L-Phe-OH-t kapunk.
Na-17-Tetrabenzo(a,c,g,i)fluorenil-metoxi-karbonil-L-fenil-alanin-terc-butil-észter, Tbfmoc-PheO'Bu (54. számú vegyület) előállítása 6 ml etil-acetátban szuszpendált 126,7 mg (0,491 mmol) L-fenil-alanin-terc-butil-észter-hidrokloridhoz 68,5 μΐ (0,491 mmol) trietil-amint adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten keveqük 2,5 órán át. A kicsapódott trietil-amin-hidroklorid csapadékot leszűrjük, 2 χ 0,5 ml etil-acetáttal mossuk és megszárítjuk, így 65,3 mg (97%-os kitermelés) terméket kapunk. A szűrletet bepároljuk, és a kapott maradékot ecetsavban
HU 217 033 Β feloldjuk. Ebből liofilizálással 83,9 mg (61%-os kitermelés) fehér, szilárd acetátsót kapunk.
ml diklór-metánban 139,4 mg (0,248 mmol) 17tetrabenzo(a,c,g,i)fluorenil-metil-para-nitro-fenil-karbonátot és 83,9 mg (0,298 mmol; 1,2 ekvivalens) L-fenilalanin-terc-butil-észter-acetátot tartalmazó elegyhez 63 μΐ (0,497 mmol; 2 ekvivalens) N,N’-dimetil-anilint adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten, nitrogénatmoszférában keverjük 120 órán át. A reakcióelegyhez 10 ml vizet adunk, és 2 mólos kálium-hidrogén-szulfáttal pH = 1 -re savanyítjuk, majd 3 χ 20 ml diklór-metánnal extraháljuk.
Az egyesített szerves fázisokat 2x15 ml vízzel pH=6-7-ig mossuk, majd magnézium-szulfáton megszárítjuk. Szűrés után az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk, és így narancssárga olajat kapunk. Ezt flashkromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként toluolt használunk. Az Rr=0,04 értékű frakciókat bepároljuk, és így sárga, szilárd anyagot kapunk. Ezt éter/benzin (forráspont: 40-60 °C) elegyből átkristályosítjuk, és így világossárga, cím szerinti vegyületet kapunk. Ezt leszűrjük, benzinnel mossuk, és végül megszárítjuk. így 73,9 mg (46%-os kitermelés) olyan cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők: Olvadáspont: 158-162 °C (bomlik).
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf (C) 0,04, Rf (H) 0,84. vmax (KBr) 3280 (NH elnyúlás), 3060, 3030 (CH elnyúlás, aril), 2980, 2930 (CH elnyúlás, alkil), 1735 (CO, észter), 1715 (CO, uretán), 1680 (amid I), 1610 (aromás gyűrűk), 1545 (amid II), 1500 (aromás gyűrűk), 1440 (CH deformációk, alkil), 1390, 1370 (CH3, szimmetrikus deformációk), 1290, 1255, 1220, 1155, 1050 (CO elnyúlás), 850, 750, 720, 700 (síktól eltérő CH deformáció) cm >; m/z (FAB) 643 (M+), 379. HRMS 643,27225, C44H37NO4 összegképletű vegyület: számított: 643,27224 (.’.) <1 ppm.
Na-17-Tetrabenzo(a,c,g,i)fluorenil-metoxi-karbonil-L-fenil-alanin, Tbfmoc-L-Phe-OH (55. számú vegyület) előállítása
950 μΐ trifluor-ecetsavat és 50 μΐ vizet tartalmazó elegyben oldva 68,2 mg (0,106 mmol) Na-17-tetrabenzo(a,c,g,i)fluorenil-metoxi-karbonil-L-fenil-alanin-tercbutil-észtert 2,5 órán át szonikálunk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és így bíborszínű maradékot kapunk. Ehhez 1:1 térfogatarányú dietil-éter/benzin (forráspont: 40-60 °C) adunk. A kapott csapadékot egy éjszakán át hűtjük, majd leszűrjük, benzinnel mossuk, és végül vákuum-exszikkátorban foszfor-pentoxidon szárítjuk. így 57,6 mg olyan cím szerinti terméket kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők: Olvadáspont: 137-140 °C.
[a] D 20=-50,8 (c=0,25, CH2C12).
Vékonyréteg-kromatográfia: Rf (H) 0,43, Rf (I) 0,89. vmax (KBr) 3410 (NH elnyúlás), 3060, 3030 (CH elnyúlás, aril), 2960, 2860 (CH elnyúlás, alkil), 1715 (CO, sav és uretán), 1610, 1500 (aromás gyűrűk), 1435, 1420 (CH deformációk, alkil), 1340 (OH görbülés), 1215, 1050 (CO elnyúlás), 750, 730, 700 (síktól eltérő deformáció) cm1; Xmax 384 (15 794), 368 (16896), 302 (39670), 290 (32 324), 262 (59 505), 254 (64647) nm; δΗ (CDC13, 200 MHz), 8,80-8,58 (6H, m, aromás), 8,30-8,19 (2H, m, aromás), 7,65-7,54 (8H, m, aromás), 7,19-7,07 [5H, m, aromás (Phe)], 5,13 (1H, látható t, CH), 4,98 (1H, d, 3J=8,4 Hz, NH), 4,79-4,64 (2H, m, Ha (CH2) és ctCH (Phe), 4,30-4,24 [1H, m, Hb (CH2)], 3,08 [2H, m, β CH2 (Phe)]; őc (CDC13, 90 MHz), 175,8 (CO, sav), 155,8 (CO, uretán), 142,6, 141,0, 136,8, 136,5, 135,3, 131,5, 130,3, 130,1 (kvatemer aromás szenek), 129,0, 128,6, 127,4; 127,3,
127.1, 126,8, 126,6, 125,9, 125,7, 125,1, 124,9, 124,8,
123.4.123.1, 123,0 (aromás CH-k), 69,2 (CH2), 54,4 (a CH), 47,4 (CH), 37,4 (β CH2); m/z (FAB) 587 (M+), 379. HRMS 588,21744, C40H30NO4 összegképletű vegyület: 588,21747 (.·.) <1 ppm.
A következő példákra vonatkozó általános utasítások a következők:
Az összes alkalmazott reakcióközeg HPLC- vagy analitikai tisztaságú. Amennyiben nincs másképp jelezve, a felhasznált anyagok kereskedelmi forrásokból beszerzettek és további tisztítás nélkül kerültek felhasználásra. A vékonyréteg-analíziseket Merck Kieselgel 60F254 alumíniumhátú lemezeken végeztük (0,2 mm). A foltok megjelenítését UV-fénnyel hajtottuk végre, melynek során vagy p-anizaldehid (amely kénsavat és ecetsavat is tartalmaz) etanolos oldatába vagy vizes kálium-permanganát oldatba történő merítést, majd hevítést követően hajtottunk végre.
A nyers terméket száraz flashkromatográfiásan tisztítottuk Merck Kieselgel 60H töltet alkalmazva. Az elemanaliziseket Perkin-Elmer 2400 CHN Elemental Analyzer géppel végeztük.
Az optikai forgatóképességet Optical Activity AA1000 nevű polariméteren mértük, és az adatokat 10 1 ° χ cm2 χ g 1 értékekben adtuk meg.
Az UV-spektrumokat Varian-Cary 210 gépen vettük fel 400-235 nm-en, az IR-spektrumokat pedig BIO-RAD FTS-7 gépen. Az NMR-spektrumokat Brucker AC 250 gépen vettük fel 250 MHz-η *H esetén, és 68,9 MHz-en l3C esetén, amennyiben nincs másképp jelezve. A kémiai eltolódásokat milliomodrészekben (δ) adtuk meg és a J értékeket Hz-ben. A 13C-NMR esetén az 1°, 2°, 3° és 4° jelöli a metil-, metilén- és metincsoportokat, illetve a kvatemer szénatomot.
A tömegspektrumokat Kratos MS 50 TC tömegspektrométerrel vettük fel gyorsatombombázás (FAB) mellett.
A HPLC-berendezés Gilson 305 és 302 pumpával, Rheodyne Laboratory Data Control (LDC) 7125 injektorszeleppel, LDC 1204A detektorral, Hewlett Packard 3390A integrátorral és Kipp & Zonen rekorderrel volt ellátva. A rozsdamentes acéloszlopok 100 mm hosszúak és 4,6 mm-es belső átmérőjűek voltak, melyeket 7 μτη-es Hypercarb töltettel (Shandon HPLC) töltöttünk meg.
10. példa
N-(3,5-Dinitro-benzoil)-tt-fenil-glicil-3-(17tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-propil-amid [(2) általános képletű vegyület, aholn’= 3; továbbiakban: (2a) vegyület]
Az előállítást a 9. reakcióvázlat szerint végezzük a következőknek megfelelően:
HU 217 033 Β
Di(terc-butil)-N-(3-bróm-propil)-amino-dikarboxilát [(15) általános képletű vegyület, ahol n’=3; továbbiakban: (15a) vegyület]
Di(terc-butil)-imino-karboxilátot (969 mg, 4,46 mmol) THF-ben (20 cm3) és DMF-ben (20 ml) oldunk nitrogénatmoszféra alatt. Nátrium-hidridet (137 mg, 80%-os olajban készült diszperzió, 4,57 mól) adagolunk a keverékhez, majd azt 2,5 órán át 65 °C-on hevítjük. 1,3dibróm-propánt (2,00 cm3, 19,7 mmol) adagolunk, majd a keveréket 3 órán át, 65 °C-on hevítjük. Szobahőmérsékletre történő hűtést követően étert (30 cm3) és vizet (30 cm3) adagolunk. Az elválasztott szerves rétegeket vízzel (2x30 cm3) és NaCl-oldattal (20 cm3) mossuk. A kapott oldatot MgSO4-gyel szárítjuk és szűrjük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítva egy barna színű olajat kapunk. A dibromid feleslegét 106 Pa nyomáson végzett desztillációval eltávolítjuk az olajból. A maradékot száraz flashkromatográfiásan tisztítjuk kezdetben 2%-os éter/hexán elegyet alkalmazva. így kapjuk a (15a) vegyületet színtelen olaj formájában (880 mg, 58%).
vmax (tiszta)/cm ' 2980, 2935 (CH), 1791, 1744, 1694 (C=O); δΗ (250 MHz; CDC13), 3,58 (2H, t, J6), 3,26 (2H, t, J6,5), 2,00 (2H, kvintett, J7), 1,37 (18H, s, C(CH3)3); őc (62,9 MHz; CDC13), 152,05 (2x4°, C=O), 82,11 (2x4°, C(CH3)3), 44,86 (2°), 31,83 (2°), 30,11 (2°); 27,73 (6x1°, C(CH3)3)); m/z (FAB) 338 (MH+, 30%), 282(75), 222(85), 146(50), 56(100).
Di(terc-butil)-N-[3-(17-tetrabenzo[a,c,g,i]fluorenil)propil)]-amino-dikarboxilát) [(16 képletű vegyület, ahol n’=3; továbbiakban (16a) vegyület]
A (12b) képletű Tbf-vegyületet (286 mg, 0,78 mmol) refluxáltatás mellett oldjuk 1,4-dioxánban (12 cm3) nitrogénatmoszféra alatt. 40%-os vizes nBu4NOH (0,5 cm3, 0,75 mmol) 1,4-dioxánban (1,5 cm3) készült oldatát adagoljuk a keverékhez refluxáltatás mellett 5 perc leforgása alatt. Hűtést követően a (13) képletű ammóniasót szűréssel eltávolítjuk nitrogénatmoszféra alatt, majd 1,4dioxánnal (kétszer) és éterrel (kétszer) mossuk. Ezt az anyagot további tisztítás nélkül alkalmazzuk a következő lépésben.
A (13) képletű ammóniumsót és a (15a) jelű di(tercbutil)-N-(3-bróm-propil)-amino-dikarboxilátot (300 mg, 0,89 mmol) 1,4-dioxánban (15 cm3) összekeveijük nitrogénatmoszféra alatt, majd a keveréket 14 órán át refluxáltatjuk. Szobahőmérsékletre történő hűtést követően a keveréket szüljük és az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. Étert adagolunk a kapott kiszűrt csapadékhoz, forró éterrel mossuk, majd eldobjuk ezt az anyagot. Az étert csökkentett nyomáson eltávolítva egy vörös színű olajat kapunk. Ezt az anyagot száraz flashkromatográfiásan tisztítjuk Kieselgel H-t alkalmazva töltetként, eluensként pedig kezdetben 50%-os DCM/hexán elegyet használunk 10%-os koncentrációnövekedést alkalmazva. így kapjuk a (16a) vegyületet egy meg nem határozott termékkel keverékben. A keveréket száraz flashkromatográfiásan tisztítjuk Kieselgel H töltetet alkalmazva, ahol eluensként kezdetben 20%-os hexánelegyet használunk. így kapjuk a di(BOC)-(16a vegyület)-et sárga, olajos szilárd anyag formájában. A di(BOC)-vegyületet éterből átkristályosítjuk (-15 °C, egész éjen át), és így egy világosbarna, szilárd anyagot kapunk (190 mg, 39%). Olvadáspont: 190-193 °C. Elemanalízis a C42H41NO3 összegképlet alapján: számított: N% 2,25%;
talált: N%2,48.
λπ1ί1χ (DCM)/nm 382 (ε/dm3 mól-', cm ', 17686), 365 (18256), 301 (44487), 289 (36526), 278 (sh), 260 (67433), 254 (74925), 240 (56662); vmax (DCM mull)/cm 1 2978, 2918 (CH), 1778, 1742 (C=O); δ„ (250 MHz; CDC13) 8,78 (4H, dm, J8), 8,67 (2H, dd, J8 és 2), 8,23-8,12 (2H, m), 7,72-7,41 (5H, m), 5,04 (1H, t, J4), 3,06 (2H, t, J 7,5), 2,62-2,54 (2H, széles m), 1,43 (18H, s, C(CH3)3), 0,67-0,46 (2H, széles m); öc (62,9 MHz; CDC13) 151,77 (2x4°, C = O), 143,59 (2x4°), 136,89 (2x4°), 131,34 (2x4°), 130,47 (2x4°), 128,57 (2x4°), 127,92 (2x4°), 127,47 (2x3°), 126,89 (2x3°), 125,95 (2x3°), 125,09 (2x3°), 124,20 (2x3°),
123,49 (4x3°), 81,48 (2x4°, C(CH3)3)), 46,47 (3°), 45,94 (2°), 30,62 (2°), 27,43 (1°, C(CHC13)3)), 21,91 (2°); m/z (FAB) 623 (M+ 38%), 468 (62), 365 (44), 325 (100), (mért: M+: 623,30353, a C42H41NO4 összegképlet alapján számított: 623,30354).
3-(17-Tetrabenzo[a,c,g,o]-fluorenil)-propil-amin-ptoluol-szulfonsav-só [(17) általános képletű vegyület, ahol n’=3; továbbiakban (17a) vegyület]
Di(terc-butil)-N-[3-( 17-tetrabenzo[a,c,g,il]fluorenil)-propil]-amino-dikarboxilátot (16a vegyület, 192 mg, 0,31 mmol) és p-toluol-szulfonsav-monohidrátot (67 mg, 0,35 mmol) DCM-ben (20 cm3) oldunk nitrogénatmoszféra alatt. A keveréket 20 órán át refluxáltatjuk. Hűtést követően az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A kapott fehér, szilárd anyaghoz DCM-et (2 cm3) és étert (8 cm3) adagolunk, majd a keveréket centrifugáljuk. Az oldószert dekantálással eltávolítjuk. A fentieket addig ismételjük, míg az oldószer már nem vörös színű (háromszori ismétlés). A szilárd anyagot szárítjuk. így a (17a) aminsót fehér, szilárd anyag formájában kapjuk (172 mg, 94%). Olvadáspont: 156-159 °C. Elemanalízis a C39H33NO3S összegképlet alapján: számított: C% 78,63; H% 5,58, N% 2,35; talált: C% 77,99; H% 5,74; N% 2,47.
Ámax (DCM/MeOH) (l:l)/nm 380 (ε/dm3 mól ', cm ', 18263), 365 (19199), 301 (44487), 289 (36526), 278 (sh), 260 (67433), 254 (74925), 240 (56662); vmax (bromoform mull)/cm ' 3457, 3200-2900 (NH), 1608, 1500; δ„ (360 MHz; d6-DMSO), 8,93 (4H, t, J8), 8,56 (2H, d, J8), 8,36 (2H, d, J8), 7,81-7,70 (8H, m), 7,50 (2H, d, J8), 7,24 (3H, széles s, NH3), 7,11 (2H, d, J8), 5,36 (1H, t, J4), 2,65-2,60 (2H, széles m), 2,28-2,20 (5H, széles m), 0,46-0,46 (2H, széles m); öc (50,3 MHz; d^-DMSO), 145,62 (4°), 144,02 (2 x 4°), 137,93 (4°), 136,03 (2x4°), 131,10 (2x4°), 130,08 (2x4°), 128,26 (2x3°), 128,22 (2x4°), 127,59 (2x3°),
127,33 (2x3°), 126,86 (2x3°), 126,78 (2x4°), 126,35 (2x3°), 125,66 (4x3°), 124,83 (2x3°), 124,22 (2x3°), 123,95 (2x3°), 46,09), (3°), 38,76 (2°), 30,51 (2°), 20,94 (1°), 20,63 (2°); m/z (FAB) (595 M+, 0,5%), 424 (100, M+ -C7H7SO3), 365 (47) (mért M+: -C7H7SO3, 424,20655; a C32H26N összegképlet alapján: 424,20651).
HU 217 033 Β
N-(3,5-Dinitro-benzoil)-a-fenil-glicil-3-(17-tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-propil-amid [(2a) vegyület]
A (17a) aminsót (146 mg, 0,25 mmol) metanolban (4 cm3) és DCM-ben (20 cm3) oldjuk. A keveréket 0,4 M vizes NaOH-oldattal (5 cm3), víz (10 cm3) és NaCl-oldattal (5 cm3) mossuk. Az anyagot MgSO4-gyel szárítjuk, majd szűrjük. Az oldószert eltávolítva kapjuk a szabad amint hab formájában, melyet a következő reakciólépésben további tisztítás nélkül használunk fel. A szabad amint THF-ben (5 cm3) nitrogénatmoszféra alatt oldjuk, majd az oldathoz R-N-(3,5-dinitro-benzoil)-fenil-glicint (93 mg, 0,27 mmol), majd EEDQ-t (66 mg, 0,27 mmol) adagolunk. A keveréket szobahőmérsékleten 18 órán át keveijük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítva egy narancssárga, szilárd anyagot kapunk. Ezt DCM-ben (2 cm3) oldjuk, majd hexánt (10 cm3) adagolunk az elegyhez. A kapott narancssárga csapadékot szűrjük, majd hexánnal mossuk. A fentieket megismételjük. A kapott narancssárga, szilárd anyagot szilikagélen abszorbeáltatjuk, majd száraz flashkromatográfiásan tisztítjuk, Kieselgel H-t alkalmazunk töltetként, eluensként pedig 0,2-6% MeOH/DCM-oldatot használva. így kapjuk a (2a) amidot narancssárga, szilárd anyag formájában (131 mg, 71 %), olvadáspont: 167 -170 °C.
Elemanalízis a C47H34N4O6 összegképlet alapján: számított: C% 75,19; H%4,57; N% 7,46; talált: C% 75,22; H%4,80; N% 7,56.
[a]D 24 °C-nál=-51,l (c=4,85x10 3, CHC13); (DCM)/nm 382 (ε/dm3 mól ' cm ', 14489), 365 (15 341), 301 (33239), 289 (29403), 260 (sh), 254 (72869); vmax (DCM mull)/cm ‘ 3394, 3301, 1644 (C=O), 1540; δΗ (200 MHz; CDC13) 8,9 (1H, t, J2), 8,73-8,58 (8H, m), 8,29 (1H, d, J6,5), 8,18-8,09 (2H, m), 7,68-7,59 (8H, m), 7,19-7,04 (5H, m), 5,09 (1H, d, J6,5), 4,98 (1H, t, J4), 4,88 (1H, t, J6), 2,85-2,74 (1H, m), 2,55-2,40 (3H, széles m), 0,46-0,39 (2H, széles m); őc (90,6 MHz; CDC13) 169,35 (4°), 160,50 (4°), 147,29 (2x4°), 43,28 (4°), 142,94 (4°), 136,83 (4°), 136,44 (4°), 136,25 (4°), 135,43 (4°), 130,59 (2x4°), 129,76 (4°), 128,58 (2x3°), 128,24 (3°), 127,92 (2x4°), 127,32 (2x4°), 127,23 (4x3°), 127,05 (3°), 126,77 (3°), 126,64 (3°), 126,23 (2x3°), 125,86 (3°), 125,76 (3°), 125,61 (3°), 124,93 (2x3°), 123,89 (2x3°), 122,96 (4x3°), 120,17 (3°), 56,95 (3°), 45,91 (3°), 39,30 (2°), 30,10 (2°), 21,79 (2°); m/z (FAB) 751 (MH+, 72%), 750, (M+, 40), 433 (100), 365 (62) (mért M+, 751,25 565; C47H35N4O6 képlet alapján számolt: 751,25 564).
11. példa
N-(3,5-Dinitro-benzoil)-U-fenil-glicil-6-(17-tetrabenzo[a,c,g,i]fluorenil)-hexil-amid [(2) általános képletű vegyület, ahol n’=6; továbbiakban (2b) vegyület]
A eljárás
6-(17-Tetrabenzo[a,c,g,ijfluorenil-hexil-amin-ptoluol-szulfonsav
Di(terc-butil)-N-(6-bróm-hexil)-amino-dikarboxilát [(15) általános képletű vegyület, ahol n’ = 6; továbbiakban (15b) vegyület]
Ezt a vegyületet a fentiekben leírt eljárással kapjuk di(terc-butil)-imino-dikarboxilátot (20,64 g, 95,1 mmol), nátrium-hidridet (3,30 g 80%-os olajos diszperzió, 0,11 mól), 1,6-dibróm-hexánt (78,85 g, 0,32 mól), THFet (130 cm3) és DMF-et (130 cm3) alkalmazva. Desztillációt követően a nyers reakciókeveréket száraz flashkromatográfiás tisztításnak vetjük alá, eluensként kezdetben 4%-os éter/hexán elegyet alkalmazva. így kapjuk a (15b) vegyületet színtelen olaj formájában (14,82 g, 40%).
vmax (tiszta)/cm ': 2980, 2930, 2865(CH), 1780, 1746, 1694 (C=O); δπ (250 MHz; CDC13) 3,52 (2H, t, J7), 3,36 (2H, t, J7), 1,82 (2H, q, J7), 1,57-1,24 (24H, m, 1,46-nál (18H, s, C(CH3)3)); őc (62,9 MHz CDC13) 152,24 (2x4°, C=O), 81,53 (2x4°, C(CH3)3), 45,80 (2°, CH2N), 33,19 (2°), 32,28 (2°), 27,66 (6x1°, C(CH3)3), 27,42 (2°), 25,53 (2°), 22,39 (2°); m/z (FAB) 382 (MH+, 11,5%), 380 (MH+; 22), 326 (18), 324 (32), 270 (100), 268 (100), 56 (100). (Mért MH+: 380,14 369, C]6H3i79BrNO3 képlet számított: 380,14 368. Mért: MH+: 380,14369; a C|6H31slBrNO4 képlet alapján számított: 382,14171.)
Di(terc-butil)-N-[6-(17-tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-hexil]-amino-dikarboxilát [(16) általános képletű vegyület, ahol n’=6; továbbiakban (16b) vegyület]
Ezt a vegyületet a fenti eljárással kapjuk (1) képletű Tbf (2,19 g, 5,98 mmol) 1,4-dioxánban (50 cm3) készült oldatát 40%-os vizes nBu4NOH (4,0 cm3, 6,0 mmol) 1,4dioxánban (12 cm3) készült oldatát és (15) jelű di(tercbutil)-N-(6-bróm-hexil)-amino-dikarboxilát 1,4-dioxánban (120 cm3) készült oldatát alkalmazva. A reakció 2 órás refluxáltatás után válik teljessé. A nyers reakciókeveréket száraz flashkromatográfiásan tisztítjuk, eluensként kezdetben 50%-os DCM/hexán oldatot alkalmazva, így kapjuk a (16b) vegyületet sápadtsárga, szilárd anyag formájában (1,48 g, 37%). Olvadáspont: 164-167 °C. Elemanalízis a C45H47NO4 összegképlet alapján: számított: N%2,10;
talált: N% 2,23.
λπι;ιχ (DCM)/nm 382 (ε/dm3 mól·*, cm ', 1,7829), 365 (18312), 302 (41442), 290 (346965), 280 (32286), 262(62645), 254 (68428), 240 (51079); vmax (DCM mull)/cm ' 2980, 2930, 2860 (CH), 1776, 1738, 1692 (C=O); δ„ (250 MHz; CDC13) 8,79 (4H, m), 8,67 (2H, dd, J8 és 1), 8,22 (2H, m), 7,75-7,6 (8H, m), 4,97 (1H, t, J 4,5), 3,20 (2H, t, J7, CH2N), 2,58 (2H, m), 1,35 (18H, s, C(CH3)3)), 1,13 (2H, m), 0,77 (4H, m), 0,35 (2H, m); δ, (62,9 MHz; CDC13), 152,21 (2x4°, C=O), 144,01 (2x4°), 136,45 (2x4°), 131,02 (2x4°), 130,12 (2x4°), 128,48 (2x4°), 127,75 (2x4°), 127,19 (2x3°), 126,51 (2x3°), 125,51 (2x3°), 125,38 (2x3°), 124,74 (2x3°), 124,21 (2x3°), 123,28 (2x3°), 123,24 (2x3°), 81,50 (2x4°, C(CH3)3), 46,73 (3°), 45,88 (2°, CH2N), 29,05 (2°), 28,55 (2°), 27,73 (6x1°, C(CH3)3), 25,99 (2°), 22,22 (2°); m/z (FAB) 665 (M+, 46%), 510 (18,7), 466 (8), 365 (42), 56 (100) (Mért M+: 665,35046; a C45H47NO4 összegképet alapján számított: 665,35 049).
6-(17-Tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-hexil-amin-ptoluol-szulfonsavsó [(17b) vegyület]
A fentiek szerint kapjuk a (16b) jelű di(terc-butil)N-[6-(17-tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-hexil]-amino-di18
HU 217 033 Β karboxilátból (2,86 mg, 0,43 mmol), p-toluol-szulfonsav-monohidrátból (83 mg, 0,44 mmol) és DCM-ből (25 cm3) kiindulva. A (17b) jelű vegyületet fehér, szilárd anyag formájában (277 mg, 98%) izoláljuk. Olvadáspont: 153-155 °C.
B eljárás
Terc-butil-N-(6-hidroxi-hexil)-amino-karboxilát [(18) általános képletű vegyület, ahol n ’=6; továbbiakban (18b) vegyület]
Az előállítást a 10. reakcióvázlat szemlélteti. 6-Amino-hexán-l-olt (24,93 g, 0,21 mól) THF-ben (170 cm3) szuszpendálunk nitrogénatmoszféra alatt. Di(terc-butil)-dikarbonátot (44,11 g, 0,20 mól) adagolunk a szuszpenzióhoz részletekben szobahőmérsékleten. A teljes adagolást követően a keveréket 1 órán át keverjük. A keveréket szűrjük és a THF-et eltávolítjuk. Étert (150 cm3) adagolunk, majd a keveréket 2 mol/literes vizes HCl-oldattal (2 χ 50 cm3), vízzel (50 cm3) és NaCl-oldattal (25 cm3) mossuk. A kapott anyagot MgSO4-gyel szárítjuk és szüljük. Az oldószer csökkentett nyomáson végzett eltávolításával egy olajat kapunk. Ezt az anyagot 106 Pa nyomáson szárítjuk. Hűtőszekrényben végzett hűtéssel kapjuk a (18b) vegyületet fehér, szilárd anyag formájában (42,10 g, 96%), olvadáspont: 35-36,5 °C.
Elemanalízis a CuH23NO3 összegképlet alapján: számított: C% 60,80; H% 10,67; N% 6,45%; talált: C% 60,37; H% 10,99; N%6,14.
vmax (tiszta)/cm-i: 3355 (OH, NH), 1693 (C=O); őjj (250 MHz; CDC13), 4,58 (1H, széles s, NH), 3,58 (2H, t, J6,5, CH2OH), 3,07 (2H, q, J6,5, CH2N), 1,97 (1H, s, D2O-val kicserélődik, OH), 1,55-1,26 (17H, m, 1,40nél: 9H, s, C (CH3)3); öc (62,9 MHz; CDC13), 155,99 (4°, C = O), 78,70 (4°, C(CH3)3), 61,95 (2°, CH2OH), 40,00 (2°, CH2N), 32,23 (2°), 29,71 (2°), 28,14 (3x1°, C(CH3)3)), 26,19 (2°), 25,11 (2°); m/z (FAB) 218 (MH+, 48%), 217 (M+, 3,3), 162 (100), 154 (33,3), 144 (23,2), 138 (15,5), 137 (39), 136 (24,1). (Mért MH+: 218,17 531; a C[ ]H24NO3 összegképlet alapján számított: 218,17562).
Terc-butil-N-(6-j ód-hexil)-amino-karboxilát [(19) képletű vegyület, ahol n’ = 6, továbbiakban (19b) vegyület]
A (18b) jelű terc-Butil-N-(6-hidroxil-hexil)-aminokarboxilátot (27,56 g, 0,127 mól), trifenil-foszfint (40,30 g, 0,154 mól) és imidazolt (12,63 g, 0,186 mól) éter/acetonitril=3:1 arányú elegyben (1000 cm3) oldunk nitrogénatmoszféra alatt alkalmazott mechanikus keverés mellett. A keveréket 0 °C-ra hűtjük jeges vizes fürdővel. Jódot (41,94 g, 0,165 mól) adagolunk, majd a keveréket 0 °C-on 1 órán át keveijük. Vizet (900 cm3) adagolunk. Az elválasztott szerves réteget vízzel (900 ml) telített vizes Na2S2O3 oldattal (250 cm3), vízzel (500 cm3) és NaCl-oldattal (200 cm3) mossuk. A kapott anyagot Na2SO4-gyel szárítjuk és szűrjük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítva egy olajat és egy fehér, szilárd anyagot kapunk. Hexánt (5 χ 50 cm3) adagolunk, majd a fehér, szilárd anyagot dekantálással elkülönítjük. A hexánt eltávolítva egy sárga olajat kapunk. Ezt szilikagélen átszűrjük 10%-os éter/hexán elegyet alkalmazva. így kapjuk a (19b) vegyületet szintén olaj formájában. Ezt 106 Pa nyomáson szárítjuk, majd hűtőszekrényben fehér, szilárd anyagként megszilárdítjuk (37,03 g, 89%). Olvadáspont: 24-25 °C.
Eiemanalízis aCHH22INO2 összegképlet alapján: számított: C% 40,37; H% 6,78; N%4,28; talált: C% 40,25; H% 7,16; N%4,25.
vmax (tiszta)/cm 1: 3354 (NH), 1696 (C=O); δπ (250 MHz; CDC13), 4,52 (1H, széles s, NH), 3,15 (2H, t, J7, CH2I), 3,07 (2H, q, J6,5, CH2N), 1,81 (2H, m), 1,51-1,25 (15H, m, 1,41-nél: 9H, s, (C(CH3)3); Őc (62,9 MHz; CDC13), 155,78 (4°, C=O), 78,71 (4°, C(CH3)3), 40,28 (2°, CH2N) 33,13 (2°), 29,91 (2°),
29,68 (2°), 28,24 (3x1°, C(CH3)3), 25,44 (2°), 6,83 (2°, CH2I); m/z (FAB) 328 (M+, 13,7%), 326 (10,5), 273 (37,5), 272 (100), 270 (25), 228 (53), 226 (35,4), 145 (17,5), 144 (44,4), 137 (22,5), 136 (11,5) (mért MH+: 328,07624; a CnH23INO2 összegképlet alapján számított: 328,07735).
A (13) képletű ammóniumsót a fentiek szerint állítjuk elő (12b) képletű Tbf-ből (20,24 g, 55,30 mmol) kiindulva, gázmentesített 1,4-dioxánt (500 cm3) és 40%-os vizes nBu4NOH-t (36,90 cm3, 55,35 mmol), gázmentesített 1,4-dioxánt (100 cm3) használva.
A (19b) képletű jodidot (18,06 g, 55,23 mmol) melegen gázmentesített 1,4-dioxánban (250 cm3) oldva adagoljuk a (13) képletű ammóniumsóhoz, melyet nitrogénatmoszféra alatt állítottunk elő a fentiek szerint. A keveréket ezt követően refluxáltatjuk, amit az ammóniumsó feloldását követő 5 percig folytatunk. A teljes refluxáltatási idő 12 perc. A keveréket ezt követően jeges vizes fürdőn keverjük addig, amíg kiválik az nBu4NI teljes mértékben, majd ezt követően a keverést 5 percen át szobahőmérsékleten folytatjuk. A kivált csapadékot szüljük és éterrel mossuk. A szűrlet oldószerét csökkentett nyomáson átállítva egy vörös olajat kapunk. Ezt eldörzsöljük hexánnal (4x50 cm3), majd szilikagélen keresztül szűrjük 50% DCM/hexán elegyet alkalmazva. Az oldószer eltávolítását és 106 Pa nyomáson végzett szárítást követően 32,06 g (100%) habot kapunk. Ezen anyag kis mennyiségét kromatográfiásan tisztítjuk jellemzési célokból. Az izolált fő komponens a (20b) képletű mono(BOC) vegyület [olyan (20) általános képletű vegyület, ahol n’ értéke 6] sárga, szilárd anyag formájában. Olvadáspont: 69-72 °C. Elemanalízis a C40H39NO2 összegképlet alapján: számított: C% 84,96; H% 6,95; N%2,48; talált: C% 79,57; H% 6,97; N% 2,38.
λΠΜΧ (DCM)/nm 382 (ε/dm3 mól >, cm1, 17152), 365 (17656), 301 (45401), 288 (43 384), 276 (sh), 262(72138), 254 (756670); vmax (DCM mull)/cm ‘ 3438, 3355 (NH), 1711 (C=O); δΗ (250 MHz; CDC13) 8,80 (4H, dt, J8 és 2), 8,67 (2H, dd, J8 és 1,5), 8,23 (2H, m), 7,72-7,58 (8H, m), 5,00 (1H, t, J4,4), 3,70 (1H, széles s, NH), 2,65 (2H, q, J6,5), 2,61-2,55 (2H, m), 1,36 (9H, s, C(CH3)3), 0,95-0,85 (2H, m), 0,8-0,65 (4H, m), 0,4, m), 0,4-0,25 (2H, m); 6C (62,9 MHz; CDC13), 155,21 (4°, C = O), 144,07 (2x4°), 136,60 (2x4°),
131,20 (2x4°), 130,22 (2x4°), 128,59 (2x4°), 127,86 (2x4°), 127,30 (2x4°), 126,63 (2x4°), 125,74 (2x4°),
HU 217 033 Β
125,50 (2χ4°), 124,87 (2x4°), 124,29 (2χ4°), 123,37 (2χ4°), 123,33 (2x4°), 78,62 (4°, C(CH3)3), 46,70 (3°), 40,07 (2°, CH2N), 22,14 (2°), 29,32 (2°), 28,77 (2°),
28,27 (3x 1°, C(CH3)3), 25,70 (2°), 21,81 (2°); m/z (FAB) 565 (M+, 100%), 510 (43,6, 466 (28,4), 366 (60.8) , 365 (85,3), 364 (87,0), 363 (82,5, 58 (86,6), 56 (40.9) (Mért M+: 565,29883; a C40H39NO2 összegképlet alapján számított: 565,29 808).
A fenti barna habot (31,76 g) DCM-ben (250 cm3) oldjuk nitrogénatmoszféra alatt. P-toluol-szulfonsavmonohidrátot (8,5 g, 0,8 ekvivalensnyi) adagolunk, majd a keveréket 18 órán át refluxáltatás mellett keverjük. A keveréket ezt követően jeges sós fürdőn hűtjük, majd a kivált félszilárd anyagot szűrjük a vörös oldatból. A szilárd anyagot metanolban (125 cm3) oldjuk, szükség esetén szűrjük, majd az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítva egy világosbarna, szilárd anyagot kapunk. DCM-et (60 cm3) adagolunk, majd az oldatot állni hagyjuk. A kapott fehér csapadékot kiszűrjük és DCM-mel mossuk (kétszer). A DCM-et eltávolítjuk, majd újra DCM-et (30 cm3) adagolunk a szilárd anyaghoz. A kapott fehér, szilárd anyagot kiszűrjük és az első termelésben kapottal egyesítjük. Az egyesített 1. és 2. adagot 106 Pa nyomáson 3 órán át szárítjuk. így kapjuk a (17b) aminsót fehér, szilárd anyag formájában (20,48 g, 58%, olvadáspont: 152-155 °C).
Egy harmadik adag anyagot is előállítunk (1,52 g, olvadáspont: 145-149 °C).
A kiindulási vörös szűrlet térfogatát csökkentjük (50 cm3), majd p-toluol-szulfonsav-monohidrátot (1,5 g) adagolunk. A keveréket 5 órán át nitrogénatmoszféra alatt refluxáltatjuk, majd jeges vizes fürdőn hűtjük. A vörös csapadékot kiszűijük és DCM-mel mossuk (3 x); így egy rózsaszín, szilárd anyagot kapunk. Ezt az anyagot forró metanolban (25 cm3) oldjuk. A metanolt csökkentett nyomáson eltávolítjuk, és DCM-et (10 cm3) adagolunk a szilárd anyaghoz, majd a kapott oldatot 1 órán át állni hagyjuk. DCM-et (20 cm3) adagolunk a fehér, szilárd anyaghoz. Ezt az anyagot kiszűrjük, majd DCM-mel mossuk. Szárítást követően (106 Pa) egy fehér, szilárd anyagot kapunk (2,40 g), amely 152-155 °C-on olvad.
A (12b) képletű Tbf-ből (20,24 g, 44,30 mmol) előállított (17b) aminsav teljes tömege 22,72 g (64%), olvadáspont: 152-155 °C.
Elemanalízis a C42H39NO3S összegképlet alapján: számított: C% 79,09; H%6,16; N%2,20; talált: C% 79,08; H% 6,62; N% 2,29.
Xmax (DCM:MeOH l:l)/nm 382 (ε/dm3 mól1, cm1, 15 532), 365 (15700), 301 (35 887), 289 (30504), 278 (sh), 260 (sh), 254 (61008); vmax (DCM mull)/cm 1 3250-2850 (+NH3); δΗ (250 MHz; CDC13) 8,75 (4H, m), 8,63 (2H, d, J7), 8,15 (2H, m), 7,62 (8H, m), 7,39 (2H, d, J8, tozil-H), 6,79 (2H, d, J8, tozil-H), 4,97 (1H, t, J4), 2,47 (2H, m), 2,20 (2H, m), 1,96 (3H, s), 0,86 (2H, m), 0,45 (4H, m), 0,23 (2H, m); m/z (FAB) 637 (M+, 0,6%), 466 (100, M-C7H7SO3).
Mért MH+: 638,27 288; a C42H40NO3S összegképlet alapján számított: 638,27287.
N-(3,5-Dinitro-benzoil)-a-fenil-glicil-6-(17-tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-hexil-amid [(2b) vegyület]
Ezt a vegyületet a fentiek szerint nyerjük a (17b) képletű aminsót (136 mg, 0,21 mmol), R-N-(3,5-dinitrobenzoil)-fenil-glicint (83 mg, 0,24 mmol), EEDQ-t (58 mg, 0,24 mmol) és THF-et (5 cm3) alkalmazva. A terméket a nyers reakcióelegyből izoláljuk száraz flashkromatográfiás módszerrel, kezdetben DCM-mel, majd ezt követően 0,2%-os MeOH/DCM-oldattal végezve az eluálást. így kapjuk a (2b) amidot narancssárga, szilárd anyagként (135 mg, 80%). Olvadáspont: 141-143 °C. Elemanalízis a C50H40N4O6 összegképlet alapján: számított: C% 75,74; H% 5,09; N% 7,07; talált: C% 75,38; H% 5,65; N%7,01.
[a]D (25 °C)=-31,9° (c=6,4x IO 3, CHC13).
Xmax (CHClj)/nm 382 (ε/dm3 mól1, cm1, 17056), 365(17798), 302 (20764), 289 (35596), 278 (sh), 262 (sh), 254 (82315), 240 (70449); vmax (DCM)/™ 1 3402, 3293, 3088 (NH), 1647 (C=O), 1540, 1343 (NO2); δ„ (250 MHz; CDC13) 8,96 (1H, t, J2), 8,76-8,70 (6H, m), 8,61 (3H, td, J7 és 1), 8,19 (2H, m),
7.62 (8H, m), 7,20 (2H, dd, J7 and 2), 7,08-6,94 (3H, m), 5,40 (1H, d, J6), 5,15 (1H, t, J6), 4,99 (1H, t, J4), 2,81-2,65 (2H, m, AB rendszer), 2,54 -(2H, m), 0,76 (2H, kvintett, J7), 0,59 (2H, q, J7), 0,47 (2H, q, J7), 0,20 (2H, m); 5C (62,9 MHz; CDC13), 169,58 (4°, C=O),
161,20 (4°, C=O), 147,84 (2x4°), 144,06 (40), 144,02 (40), 137,13 (40), 136,56 (2x4°), 136,20 (40), 130, 98 (40), 130,15 (40), 130,07 (40), 128,85 (30), 128,52 (40), 127,78 (40), 127,72 (2x30,127,45 (2x3°), 127,28 (2x3°), 127,23 (2x30), 126,93 (2x3°), 126,76 (2x3°), 125,87 (2x30, 125,66 (40), 125,03 (2x30), 124,98 (40),
124.34 (2x30), 124,29 (40), 123,34 (4x30),
120.62 (30), 57,35 (30), 46,84 (30), 39,57 (20), 33,20 (20), 28,82 (20), 28,58 (20), 25,73 (20), 21, 85 (20); m/z (FAB) 793 (MH+, 9%), 466 (4), 365 (10) (Mért M+: 792,29478, a C50H40N4O6 összegképlet alapján számított: 792,29477).
12. példa
N-(3,5-Dinitro-benzoil)-(3.-fenil-glicil-10-(17-tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-decil-amid[(2) általános képletű vegyület, ahol n ’= 10, továbbiakban (2c) vegyület]
Di(terc-butil)-N-(10-bróm-decil)-amino-dikarboxilát [(15) képletű vegyület, ahol n’ = 10; továbbiakban (15c) vegyület]
Ezt a vegyületet a fentiek szerint kapjuk di(terc-butil)imino-dikarboxilátot (4,44 g, 20,5 mmol), nátriumhidridet (682 mg, olajban készült 80%-os diszperzió, 22,7 mmol), 1,10-dibróm-dekánt (25,0 g, 83,3 mmol), THF-et (60 cm3) és DMF-et (60 cm3) alkalmazva. Desztillálást követően a nyers reakcióelegyet száraz flashkromatográfiás módszerrel tisztítjuk, eluensként kezdetben 2%-os éter/hexán elegyet alkalmazva. így kapjuk a (15c) vegyületet színtelen olaj formájában (3,35 g, 37%).
vmax (tisztaj/cm1 2980, 2932, 2855 (CH), 1789, 1748, 1699 (C=O); δΗ (250 MHz; CDC13), 3,41 (2H, t, J7), 3,26 (2H, t, J7), 1,71 (2H, kvintett, J7) 1,37 (18H, s, C(CH3)3), 1,35-1,10 (14H, m); δ, (62,9 MHz; CDC13
152.34 (2x4°, C=O), 81,51 (2x4°, C(CH3)3),46,U (2°),
33,50 (2°), 32,49 (2°), 29,11 (2°), 29,00 (2°), 28,92 (2°),
HU 217 033 Β
28,68 (2°), 28,40 (2°), 27,86 (6x1°, C(CH3)3)), 26,44 (2°); m/z (FAB) 435 (mért+: 0,2%), 380 (10), 324 (67), 246 (65), 56 (100) (mért M+: 435,19844, a C2OH38 79BrNO4 összegképlet alapján számított: 435,19845. Mért M+: 437,19649 a C20H38 *'BrNO4 összegképlet alapján számított: 437,19648).
Di(terc-butil-N-(10-(17-tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-decil)-amino-dikarboxilát [(16) általános képletű vegyület, ahol η’ = 10, továbbiakban (16c) vegyület]
Ezt a vegyületet a fenti eljárással kapjuk (12b) Tbfvegyület (2,8 g, 7,6 mmol) 1,4-dioxánban (50 cm3) készült oldatát (50 cm3), 40%-os nBu4NOH (5,0 cm3, 7,5 mól) 1,4-dioxánban (11 cm3) készült oldatát és (15c) di(terc-butil)-N-( 10-bróm-decil)-amino-dikarboxilát 1,4-dioxánban (120 cm3) készült oldatát alkalmazva. A reakció 2 órán át végzett refluxáltatás után teljessé válik. A nyers reakcióelegyet száraz flashkromatografáljuk, eluensként kezdetben 50%-os DCM/hexán elegyet alkalmazva. így kapjuk a (16c) jelű terméket sápadtsárga, szilárd anyagként (2,31 g, 53%). Olvadáspont: 53-56 °C.
Elemanalízis a C49H55NO4 összegképlet alapján: számított: N% 1,94; talált N% 2,04. ÁIllax (DCM)/nm 382 (ε/dm3 mol l, cm ', 18464), 365 (18904), 301 (42645), 289 (36050), 278 (sh), 260 (65 066), 254 (71220), 240 (53196); vmax (DCM mull)/cm-i 2981, 2932, 2857 (CH), 1782, 1742, 1693 (C = O); δΗ (250 MHz; CDC13), 8,85-8,80 (4H, m), 8,70 (2H, dd, J8 és 2), 8,21 (2H, dd, J8 és 2), 7,71-7,58 (8H, m), 4,92 (1H, t, J4), 3,48 (2H, t, J7), 2,61-2,55 (2H, széles m), 1,49 (18H, s, C(CH3)3), 1,24-0,72 (14H, m), 0,40-0,30 (2H, széles m); 5C (62,9 MHz; CDC13), 152,59 (2x4°, C=O), 144,28 (2x4°), 136,68 (2x4°), 131,18 (2x4°), 130,29 (2x4°), 128,73 (2x4°), 127,96 (2x4°), 127,39 (2x3°), 126,68 (2x3°), 125,77 (2x3°), 125,53 (2x3°), 124,92 (2x3°), 124,10 (2x3°), 123,41 (4x3°), 81,81 (2x4°), C(CH3)3)), 47,09 (3°), 46,38 (2°), 33,47 (2°), 29,37 (2°), 29,15 (2°), 29,04 (2°), 28,94 (2°), 28,85 (2°), 27,83 (2°), 27,98 (6x1°, C(CH3)3)), 26,57 (2°), 22,12 (2°); m/z (FAB) 721 (M+, 50%), 566 (21), 522 (12), 365 (79), 56 (100), (Mért M+: 721,41313, a C49H55NO4 összegképlet alapján számított: 721,41309).
10-(17-Tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-decil-amin-ptoluol-szulfonsavsó [(17) általános képletű vegyület, ahol n’ = 10; továbbiakban (17c) vegyület]
Ezt a vegyületet fentiek szerinti eljárással kapjuk a (16c) jelű Di(terc-butil)-N-(10-(17-tetrabenzo[a,b,g,i]fluorenil)-decil)-amino-dikarboxilátot (351 mg, 0,48 mmol), p-toluol-szulfonsav-monohidrátot (93 mg, 0,49 mmol) és DCM-et (25 cm3) alkalmazva. A (17c) vegyületet nem lehetett a fenti eljárással tisztítani, így ezt a reakciókeverékből izolált formában használtuk a továbbiakban.
N-(3,5-dinitro-benzoil)-a-fenil-glicil-10-(17-tetrabenzo[a,b,g,i]-fluorenil)-decil [(2c) vegyület]
Ezt a vegyületet a fentiek szerint kaptuk szabad amint (164 mg, 0,31 mmol), R-N-(3,5-dinitro-benzoil)fenil-glicint (117 mg, 0,34 mmol), EEDQ-t (83 mg, 0,34 mmol) és THF-et (6 cm3) alkalmazva. A terméket a nyers reakcióelegyből izoláljuk száraz flashkromatográfiás módszerrel, eluensként kezdetben DCM-et, ezt követően 0,2%-os MeOH/DCM-elegyet alkalmazva. így kapjuk a (2c) amidot narancssárga, szilárd anyag formájában (210 mg, 79%), olvadáspont: 125-127,5 °C. Elemanalízis a C45H48N4O6 összegképlet alapján: számított: C% 76,40; H% 5,70; N% 6,60; talált: C% 76,26; H%6,01; N% 6,59.
[a]D (23 °C)=-35,10 (c=6, 8xl03 CHC13); Áimx (CHCl3)/nm 382 (ε/dm3 mól cm-', 17926); 365 (18706), 302 (42088), 290 (36632), 260 (sh), 254 (82618); vmax (DCM mull)/cm 3398, 3306, 1639 (C=O), 1542; (250 MHz; CDC13); 9,12 (1H, d, J7),
8,90 (1H, t, J2), 8,78-8,62 (8H, m), 8,19 (2H, t, J6,5), 7,70-7,56 (8H, m), 7,40-7,36 (2H, m), 7,27-7,20 (3H, m), 5,79 (1H, t, J6), 5,67 (1H, d, J7), 4,93 (1H, t, J4), 3,20-2,95 (2H, m, AB rendszer), 2,55-2,45 (2H, széles m); 1,28-1,17 (2H, széles m), 0,95-0,6 (12H, m), 0,28 (2H, széles s); (62,9 MHz, CDC13); 169,76 (40),
161,37 (40), 147,86 (2x4°), 144,23 (4°), 144,10 (4°), 137,21 (4°), 136,51 (4°), 136,45 (4°), 136,26 (4°), 130,93 (2x4°), 130,08 (40), 130,03 (4°), 128,92 (2x3°), 128,51 (4° és 3°), 27,75 (4°), 127,72 (2x4°), 127,48 (2x3°), 127,21 (2x3°), 126,97 (2x3°), 126,61 (2x3°), 125,70 (2x3°), 125,46 (2x3°), 124,87 (2x3°), 124,32 (30), 124,27 (30),
123,27 (4x3°), 120,60 (3°), 57,52 (3°), 46,91 (3°), 39,88 (2°), 33,37 (2°), 29,23 (2°), 28,81 (3x2°), 28,59 (2x2°), 26,23 (20), 22,01 (20); m/z (FAB) 849 (MH+, 66%), 523 (28), 365 (100) (mért M+: 848,35737, a C54H48N4O6 összegképlet alapján számított: 848,35 737).
13. példa (7) képletű diacetát (R,R)-O,O-diacetil-bórkősav-mono(izopropil-amid)-ot az irodalomban leírtak szerint állítjuk elő [5,709 g, 56%, olvadáspont: 166-167 °C (bomlik)]. [Irodalmiadat: olvadáspont: 176,5-177 °C (bomlik).]
A (17b) aminsót (500 mg, 0,78 mmol) metanolban (4 ml) és DCM-ben (20 ml) oldjuk. A keveréket ezt követően 0,4 mol/literes vizes NaOH-oldattal (5 ml), vízzel (10 ml) és NaCl-oldattal (5 ml) mossuk. Az anyagot MgSO4-gyel szárítjuk, majd szüljük. Az oldószert eltávolítva kapjuk a szabad amint hab formájában, melyet további tisztítás nélkül alkalmazunk. A kapott szabad amint és az (R,R)-O,O-diacetil-borkősav-mono(izopropil-amid)-ot (229, mg, 0,83 mmol) THF-ben (25 ml) oldjuk nitrogénatmoszféra alatt. EEDQ-t (208 mg, 0,84 mmol) adagolunk a keverékhez, majd azt szobahőmérsékleten 24 órán át keverjük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A kapott sárga, szilárd anyagot DCM-ben (4 ml) oldjuk és hexánt (25 ml) adagolunk. A sárga csapadékot kiszűijük és hexánnal kétszer mossuk. A fentieket kétszer megismételjük. A kapott sárga, szilárd anyagot száraz flashkromatográfiásan tisztítjuk Kieselgel H töltetet alkalmazva, eluensként kezdetben DCM-et, majd 1%-os MeOH/DCM-elegyet használva. A diacetátot sárga hab formájában kapjuk (464 mg, 81%). Olvadáspont: 140-143 °C. Elemanalízis a C46H46N2O6 összegképlet alapján: számított: H% 6,42; N% 3,88;
talált: H% 6,72; N% 3,77.
HU 217 033 Β [<X]D és [α]546 (24 °C) (c=10,2x 10 3; CHCl3-ban)= = -4,60° és a -4,43°, a fenti sorrendnek megfelelően.
Xmax (DCM) - 382 (ε 16814), 365 (17308), 301 (38078), 288 (32144), 276 (s), 260 (58353), 254 (63 793), 238 (s); vmax (DCM mull)/cm 1: - 3288 (NH), 2978, 2938 (CH), 1755 (észter C = O), 1650 (amid C=O).
1H (250 MHz, CDC13, δ): - 8,78 (4H, m), 8,66 (2H, dd, 8 és 1 Hz), 8,20 (2H, d, 6,5 Hz), 7,71-7,52 (8H, m), 6,08 (1H, m, NH), 5,96 (1H, m, NH), 5,45 (1H, d, 3,5 Hz), 5,40 (1H, d, 3,5 Hz), 4,98 (1H, m), 5,40 (1H, m, CH (CH3)3), 2,84 (1H, szept, 7Hz), 2,73 (1H, szept, 7Hz), 2,55 (2H, m), 2,02 (3H, s, COCH3), 1,88 (3H, s, COCH3), 1,05 (2H, dd, 7Hz, AB rendszer), 0,91 (2H, m), 0,70 (4H, m), 0,30 (2H, m), >3C (62,9 MHz, CDC13 δ): 169,01 (4°, C=O), 168,92 (4°, C=O), 165,69 (4°, C=O), 165,00 (4°, C=O), 144,07 (2x4°), 136,67 (2x4°), 131,16 (2x4°), 130,27 (2x4°), 128,63 (2x4°), 127,89 (2x4°), 127,35 (2x3°), 126,75 (2x3°), 125,85 (2x3°), 125,60 (2x3°), 124,96 (2x3°), 124,31 (2x3°), 123,41 (4x3°), 72,22 (3°), 72,16 (3°), 46,95 (30), 41,48 (3°), 39,12 (2°), 33,30 (2°), 28,92 (2°), 28,69 (2°), 25,93 (2°), 22,28 (1°), 22,11 (Γ), 21,98 (2°), 20,40 (1°), 20,33 (1°); m/z (FAB) - 722 (M+, 52%), 366 (25,9%), 365 (43,9%), 364 (43,0%), 363 (36,5%), 44 (100%).
HRMS - mért M+: 722,33275; a C46H46N2O6 összegképlet alapján számított: 722,33 559.
14. példa (4) képletű diolvegyület
A (7) képletű diacetátot (495 mg, 0,69 mmol) metanolban (30 ml) oldjuk gyors keveréssel nitrogénatmoszféra alatt. Kálium-karbonátot (493 mg, 3,57 mmol) adagolunk, majd vizet (1 ml) csepegtetünk. A keveréket szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük. Az oldószer nagy részét csökkentett nyomáson eltávolítjuk. DCM-et (50 ml) adagolunk, majd a kapott elegyet vízzel (2 χ 20 ml) és NaCl-oldattal mossuk. A kapott oldatot MgSO4-gyel szárítjuk, majd szüljük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítva egy sárga, szilárd anyagot kapunk. Ezt az anyagot száraz flashkromatográfiás módszerrel tisztítjuk, eluensként kezdetben 2%-os MeOH/DCM elegyet alkalmazva. így kapjuk a (4) képletű dióit sárga, szilárd anyag formájában (402 mg, 92%), olvadáspont: 94-97 °C, [a]D és [tx]546 (24 °C) (c=10,8x 10 3; CDCl3-ban): -5,83° és -5,98°.
Xmax (DCM:MeOH l:l)/nm 382 (ε 14781), 365 (15 125), 302 (34375), 288 (29219), 277 (27500), 262 (53281), 254 (58438), 238 (s).
vmax (DCM mull)/cm ': - 3396, 3302 (OH, NH), 2934, 1650 (amid C=O), 1537.
Ή (250 MHz, CDC13) - 8,81-8,76 (4H, m), 8,67 (2H, dd, 8 és 1,5Hz), 8,22 (2H, dd, 7 és 2Hz), 7,71-7,57 (8H, m), 6,82 (1H, d, 8Hz, NH), 6,75 (1H, t, 6Hz, NH), 5,3 (1H, m, D2O-val kicserélődik, OH), 4,97 (1H, t, 4Hz), 4,17-4,07 (2H, m, 2xCHOH), 3,87 (1H, m, NCH(CH3)2, 2,79 (2H, q, 7Hz), 2,60-2,52 (2H, m), 1,07 (3H, d, 6,5Hz), 0,94 (3H, d, 6,5Hz), 0,95-0,85 (2H, m), 0,71 (4H, széles m), 0,32 (2H, széles m).
I3C (62,9 MHz, CDC13, δ) - 172,32 (4°), 171,68 (4°), 143,89 (2x4°), 136,43 (2x4°), 130,97 (2x4°), 130,07 (2x4°), 128,40 (2x4°), 127,70 (2x4°), 127,17 (2x3°), 126,50 (2x3°), 125,63 (2x3°), 125,40 (2x3°), 124,76 (2x3°), 124,14 (2x3°), 123,24 (4x3°), 71,37 (2x3°, széles), 46,67 (3°), 41,02 (3°), 38,65 (2°), 33,02 (2°), 28,63 (2°), 28,41 (2°), 25,68 (2°), 22,19 (1°), 22,03 (1°), 21,64(2°).
m/z (FAB) - 639 (MH+ 97,7%), 638 (M+ 32,0%), 466 (41,4%), 365 (92,2%), 364 (100%), 363 (99,2%). HRMS - mért M+: 638,31450; a C42H42N2O4 összegképlet alapján számított: 638,31446.
75. példa (8) képletű dikarbamátvegyület
A (4) képletű dióit (59 mg, 0,09 mmol) piridinben (1 ml) oldjuk nitrogénatmoszféra alatt. Fenil-izocianátot (0,150 ml) adagolunk, majd a keveréket szobahőmérsékleten 5 órán át keverjük. A piridint csökkentett nyomáson (133 Pa) eltávolítjuk. A kapott sárga, üveges anyagot hexánban (éterben és DCM-ben) eldörzsöljük. A kapott sárga, szilárd anyagot szilikagélre adszorbeáltatjuk, majd száraz flashkromatográfiás módszerrel tisztítjuk Kieselgel H töltetet alkalmazva, eluensként kezdetben DCM-et, majd ezt követően 1%-os MeOH/DCM oldatot használva. A (8) képletű dikarbamátot sárga, szilárd anyag formájában kapjuk (67 mg, 8%). Az NMR-adatok alapján a termék nem tiszta (a szennyeződés difenil-karbamidnak tűnik).
16. példa (9) képletű dibenzoilátvegyület
A (9) képletű dibenzoilátvegyületet a fentiek szerint állítjuk elő a (17b) képletű tozilsavból (296 mg, 0,46 mmol), kereskedelemből beszerezhető (FLUKA) (-)-O,O-benzoil-L-bórkősav-mono(dimetil-amíd)-ból (190 mg, 0,49 mmol), EEDQ-ból (132 mg, 0,53 mmol) kiindulva. A kapott szilárd anyagot száraz flashkromatográfiás módszerrel tisztítjuk Kieselgel H-t alkalmazva, eluensként kezdetben DCM-et, majd 1%-os MeOH/DCM elegyet használva. így kapjuk a (9) képletű dibenzoilátot sárga hab formájában (368 mg, 95%). Olvadáspont: 103-106 °C.
Elemanalízis a C55H48N2O6 összegképlet alapján: számított: H%5,81; N%3,36; talált: H% 5,67; N%3,30.
[a]D és [a]546 (24 °C)=(c=8,85x IO 3; CDCl3-ban): +7,34° és +9,72°.
Xmax (CDC13) - 382 (ε 14689), 365 (15277), 301 (34 079), 289 (30 556), 266 (54 644), 256 (60 520).
vmax (DCM mull)/cm >: - 3433, 3330 (NH), 2939 (CH), 1730 (észter C=O), 1673 (amid C=O).
Ή (250 MHz, CDC13, Ő): 8,77 (4H, m), 8,66 (2H, d, 8 Hz), 8,16 (2H, m), 7,94 (4H, m), 7,65 (8H, m),
7,50 (1H, m), 7,40-7,23 (7H, m), 6,24 (1H, széles s, NH), 6,22 (1H, d, 6Hz), 5,88 (1H, d, 6Hz), 4,88 (1H, m), 3,14 (3H, s, NCH3), 2,86 (2H, m), 2,77 (3H, s, NCH3), 250 (2H, m), 0,90 (2H, m), 0,67 (4H, m), 0,26 (2H, m), '3C (62,9 MHz, CDC13) δ: - 165,56 (4°, C=O), 165,46 (4°, C=O), 165,11 (4°, C=O), 165,08
HU 217 033 Β (4°, C = O), 143,8 (2x4°), 133,26 (3°), 133,05 (3°),
130.85 (2x4°), 129,94 (2x4°), 129,56 (2x3°), 129,44 (2x3°), 128,49 (4°), 128,39 (4°), 128,14 (2χ3°), 127,96 (2x3°), 127,55 (2x4°), 127,03 (2x3°), 126,46 (2x3°), 125,58 (2x3°), 125,35 (2x3°), 124,70 (2x3°), 124,07 (2χ3°), 123,19 (2x3°), 123,13 (2x3°), 72,37 (3°), 69,09 (3°), 46,54 (3°), 38,88 (2°), 36,70 (1°, NCH3), 35,45 (1°, NCH3), 32,93 (2°), 28,60 (2°), 28,52 (2°), 25,54 (2°), 21,56 (2°).
m/z (FAB): 833 (MH+, 7,4%), 832 (M+, 3,4%), 365 (8,6%), 217 (6,1%), 126 (4,2%), 105 (100%), 91 (14,5%), 77(12,1%),
HRMS: mért M+: 832,35 128, a C55H48H2O6 összegképlet alapján számított: 832,35 124.
17. példa
Az (5) képletűpentahidroxi-amid-vegyület
A megfelelő szabad amint a fentiek szerint kapjuk a (17b) képletű tozilsav sóból (516 mg, 0,81 mmol). A szabad amint 1,4-dioxánban oldjuk nitrogénatmoszféra alatt. Metanolt (19 ml) és glukonsav-ő-laktont (177 mg, 0,99 mmol) adagolunk, majd a keveréket 18 órán át refluxáltatjuk. Hűtést követően az oldószert eltávolítjuk. A kapott szilárd anyagot DCM-ben (4 ml) forraljuk, majd az oldószert dekantáljuk. A fenti lépést megismételjük. A szilárd anyagot vízzel (4 ml) forraljuk, majd az oldószert dekantáljuk. A fenti lépést megismételjük. DCM-et adagolunk, majd a szilárd anyagot szűrjük. A kapott sárga, szilárd anyagot szilikagélre adszorbeáltatjuk, majd szárazon flashkromatografáljuk Kieselgel H töltetet alkalmazva, eluensként kezdetben 2%-os MeOH/DCM elegyet használva. A (24) jelű terméket sárga, szilárd anyag formájában kapjuk (195 mg, 37%). Olvadáspont: 117-120 °C.
Elemanalízis a C4iH41NO6 összegképlet alapján: számított: H% 6,42; N%2,18; talált: H%6,41; N%2,09.
[ct]D és [Ot]546 (24 °C-nál) (c = 6,lxl03, CDC13: MeOH=l:l): +16,39° és+20,49°.
Xmax (CHCl3:MeOH l:l)/nm 382 (ε 21503), 365 (22418), 302 (47 581), 288 (43921), 262 (75031), 254 (81436), 240 (s).
vmax (DCM mull)/cm-i; 3600-3100 (széles, OH), 1644 (amid C=O).
Ή (250 MHz, CDCl3/d3-MeOD, δ): 8,70 (4H, m), 8,56 (2H, d, 8Hz), 8,12 (2H, dd, 6 és 2Hz), 7,62-7,49 (8H, m), 4,88 (1H, s), 3,97 (1H, d, 3Hz), 3,86 (1H, t, 2Hz), 3,31 (2H, s), 2,81-2,60 (2H, m, AB rendszer), 2,49 (2H, m), 0,85 (2H, q, 7Hz), 0,63 (4H, m), 0,20 (2H, m);
33C (62,9 MHz, CDCl3/d3-MeOD, δ): 172,31 (4°, C=O), 143,57 (2x4°), 135-98 (2x4°), 130,63 (2x4°), 129,72 (2x4°), 128,03 (2x4°), 127,30 (2x4°), 126,76 (2x3°), 126,15 (2x3°), 125,29 (2x3°), 124,94 (2x3°),
124,34 (2x3°), 123,83 (2x3°), 122,90 (2x3°), 122,83 (2x3°), 73,29 (3°), 72,36 (3°), 70,90 (3°), 69,5 (3°),
62.85 (2°), 46,25 (3°), 38,21 (2°), 32,75 (2°), 28,44 (2°), 28,14 (2°), 25,50 (2°), 21,44 (2°).
m/z (FAB): 644 (M+, 69,5%), 365 (18%), 217 (82,2%), 109 (34%), 91 (100%).
HRMS: mértM+: 643,29328aC4[H4|NO6összegképlet alapján számított: 643,29339.
18. példa
A (3) képletű glicil-L-prolin-vegyület
A (13) képletű Tbf-ammóniumsót 6-bróm-hexán-lollal reagáltatjuk dioxánban végzett refluxáltatással. így kapjuk a megfelelő alkoholvegyületet 35%-os kitermeléssel. A kapott alkoholt ezt követően trifoszgénnel reagáltatjuk DCM-ben és Ν,Ν-dimetil-anilinban; így kapjuk a klór-formiát-származékot 95%-os kitermeléssel, melyet közvetlenül reagáltatunk a kereskedelemből beszerezhető glikol-L-prolinnal Na2CO3, H2O és dioxán elegyében. így kapjuk a (3) képletű Tbf-hexánoxikarbonil-glicil-L-prolint 80%-os kitermeléssel.
19. példa (6) képletű ionpár
A (17b) képletű aminsót PGC-re adszorbeáltatjuk, majd vizes NaOH-oldattal kezeljük. így kapjuk a szabad amint, amit ezt követően (R)-N-(3,5-dinitrobenzil)-fenil-glicinnel reagáltatva kapjuk a (6) képletű ionpárt.
20. példa
Terc-butil-6-bróm-hexanoát [(21) jelű vegyület, lásd 11. reakcióvázlat]
2-Metil-propán-2-olt (16,04 g, 0,21 mól) és piridint (12 cm3) DCM-ben (75 cm3) feloldunk nitrogénatmoszféra alatt, majd az elegyet 0 °C-ra hűtjük. 6-brómhexanoil-kloridot (14 cm3, 91,5 mmol) adagolunk, majd a reakciókeveréket 0 °C-on 1 órán át, majd szobahőmérsékleten 15 percen át keveijük. 2 mol/literes HCl-oldatot (75 cm3) adagolunk, majd a vizes réteget éterrel (2 χ 50 cm3) extraháljuk. Az egyesített szerves rétegeket vízzel, 2 mol/literes vizes NaOH-oldattal, vízzel és NaCl-oldattal mossuk. A kapott oldatot MgSO4-gyel szárítjuk, majd szüljük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolitva egy narancssárga olajat kapunk. Ezt desztillálva kapjuk a terméket színtelen folyadékként (14,91 g, 65%). Forráspont: 84-94 °C (80 Pa).
vmax (tiszta)/cm-': 1729 (C=O); δΗ (250 MHz; CDClj, 3,36 (2H, t, J7, CH2Br), 2,16 (2H, t, J7, CH2CO), 1,82 (2H, q, J7), 1,56 (2H, m), 1,145-1,35 (11H, m, 1,40-nél: 9H, s, C(CH3)3;
öc (62,9 MHz, CDClj: 172,63 (4°, C=O), 79,91 (4°, C(CHj)3), 35,10 (2°), 33,35 (2°), 32,25 (2°), 27,91 (3x1°), 27,34 (2°), 24,02 (2°).
m/z (FAB) 252 (M+ (>«Br), 4,1%), 250 (M+ (™Br), 5,7), 234 (13,5), 218 (11,3), 197 (16,1), 195 (11,3), 133 (15,7), 130(10,6).
Mért MH+: 251,06433 a C10H2079BrO2 összegképlet alapján számított: 251,06467).
Mért MH+: 251,06330 a C)0H20 8lBrO2 összegképlet alapján számított: 251,06275).
Terc-butil-6-(17-tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-hexanoát [(22) képletű vegyület]
A fentiek szerint előállított (13) képletű ammóniumsót [melyet Tbf (1,23 g, 3,37 mmol), 1,5 mol/1 nBru4NOH (2,25 cm3) és gázmentesített 1,4-dioxán
HU 217 033 Β (57 cm3) felhasználással állítottunk elő], a (21) képletű vegyület (0,58 g, 3,338 mmol) gázmentesített 1,4dioxánban (25 cm3) készült elegyével keverjük össze. A keveréket 30 percen át refluxáltatjuk, amíg az összes szilárd anyag feloldódik, majd a refluxáltatást 15 percen át folytatjuk ezután is. A keveréket hűtjük és az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. Étert (25 cm3) adagolunk és a keveréket eldörzsöljük. A szilárd anyagot kiszűijük és eldobjuk. A szűrlet oldószerét eltávolítva egy vörös olajat kapunk. Ezt hexánnal eldörzsöljük, majd száraz flashkromatográfíásan tisztítjuk.
Eluensként kezdetben 50%-os DCM/hexán elegyet alkalmazva. így kapjuk a (22) képletű vegyületet sárga, szilárd anyag formájában (1,150 g, 63%). Olvadáspont: 63-66°C.
Elemanalízis a C39H36O2 összegképlet alapján: számított: C% 87,28; H% 6,76; talált: C% 87,40; H%7,17.
λπ1Μ (CHCl3)/nm 380 (ε/dm3 mól >, cm > 12201), 364 (12 342), 302 (33 147), 290 (35 333), 260 (56703), 256(57 831).
vmax (DCM mullj/cm-1: 1725 (C=O); δ„ (250 MHz; CDC13) 8,82 (4H, m), 8,68 (2H, dd, J6,5 és 1,5),
8,27 (2H, m), 7,74-7,58 (8H, m), 5,09 (IH, t, J4,5), 2,64 (2H, m), 1,73 (2H, t, J7), 1,54 (3H, s), 1,25 (6H, s), 1,03 (2H, m), 0,97 (2H, m), 0,39 (2H, m);
őc (62,9 MHz, CDC13): (62,9 MHz; CDC13) 172,75 (4°), 143,99 (2x4°), 136,58 (2x4°), 131,09 (2x4°),
130,20 (2x4°), 128,55 (2x4°), 127,82 (2x4°), 127,28 (2x3°), 126,60 (2x3°), 125,69 (2x3°), 125,45 (2x3°), 124,81 (2x3°), 124,22 (2x3°), 123,33 (2x3°), 123,31 (2x3°), 79,43 (4°), 46,84 (3°), 34,97 (2°), 33,26 (2°), 28,75 (2°), 27,77 (3 χ 1°), 24,19 (2°), 21,80 (2°).
m/z (FAB): 536 (M+, 41,8%), 364 (36,6), 363 (47,2),57(85),41 (100).
Mért M+: 536,27154 a C39H36O2 összegképlet alapján számított: 536,27153).
6-(17-Tetrabenzo[a,c,g,i]-fluorenil)-hexánsav [(23) képletű vegyület]
A (22) képletű észtert (0,620 g, 1,16 mmol) DCMben (2 cm3) oldjuk nitrogénatmoszféra alatt. TFA-t (2 cm3) adagolunk, majd a keveréket szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítva egy vörös, szilárd anyagot kapunk. Ezt DCMben (50 cm3) oldjuk, majd háromszor vízzel, majd NaCl-oldattal mossuk. A kapott anyagot MgSO4-gyel szárítjuk és szűrjük. Az oldószert eltávolítjuk és a keveréket száraz flashkromatográfíásan tisztítjuk, eluensként kezdetben 90%-os DCM/hexán elegyet alkalmazva. így kapjuk a (23) képletű terméket sárga hab formájában (519 g, 93%). Olvadáspont: 110-113 °C. (Egy nagyobb méretben végrehajtott reakcióval sárga, szilárd anyagot kaptunk, amelynek olvadáspontja 183-186 °C; ezen anyag proton NMR-je megegyezett a fentiekben kapottéval).
Elemanalízis a C35H28O2 összegképlet alapján: számított: C% 87,47; H% 5,87%; talált: C% 82,90; H% 5,97.
Árnax (CHCl3)/nm 382 (ε/dm3 mól1, cm 4: 13 786), 366 (14 061), 302 (32 035), 290 (29 730), 256 (57 029).
vmax (DCM mullj/cm-*: 1705 (C = O); δΗ (250 MHz; CDC13): 8,79 (4H, m), 8,67 (2H, dd, JS és 1,5), 8,26 (2H, m), 7,73-7,58 (8H, m), 5,08 (IH, t, J4,5), 2,66-2,58 (2H, m), 1,81 (2H, t, J7), 1,04 (2H, kvintett, J7), 0,81 (2H, kvintett, J7), 0,39-0,32 (2H,m).
őc (62,9 MHz, CDC13): 179,78 (4°), 143,89 (2x4°), 136,53 (2x4°), 131,04 (2x4°), 130,15 (2x4°), 128,47 (2x4°), 127,77 (2x4°), 127,24 (2x3°), 126,57(2x3°), 125,67 (2x3°), 125,45 (2x3°), 124,81 (2x3°), 124,16 (2x3°), 123,32 (2x3°), 123,30 (2x3°), 46,71 (3°),
33,34 (2°), 33,08 (2°), 28,58 (2°), 23,60 (2°),
21,68 (2°).
m/z (FAB): 480 (M+, 100%), 364 (84,7), 363 (43,5), 154 (75),41.
Mért M+: 480,20 896 a C35H28O2 összegképlet alapján számított: 480,20893.
21. példa
A (11) képletű Vancomicin-származék
A (23) képletű savat (0,577 g, 1,20 mmol) és Nhidroxi-szukcinimidet (0,1698, 1,47 mmol) THF-ben (7 cm3) feloldunk nitrogénatmoszféra alatt. N,N’-diizopropil-karbodiimidet (0,225 cm3, 1,46 mmol) adagolunk, majd a keveréket szobahőmérsékleten 4 órán át keverjük. Étert (15 cm3) adagolunk, majd a fehér csapadékot szűrjük és éterrel kétszer mossuk. Az egyesített szerves rétegeket kétszer vízzel, telített NaHCO3 vizes oldattal, majd vízzel és NaCl-oldattal mossuk. A kapott anyagot MgSO4-gyel szárítjuk, majd szűrjük. Az oldószert eltávolítva egy sárga habot kapunk. Ezt száraz flashkromatográfíásan tisztítjuk, eluensként 80%-os DCM/hexán elegyet alkalmazva. így kapunk egy sárga habot (0,436 g, 63%).
vmax (DCM mullj/cm1: 1812, 1785, 1740. δ„ (250 MHz; CDC13): 8,80 (4H, m), 8,68 (2H, d,
J7), 8,27 (2H, dd, J7 és 1,5), 7,74-7,59 (8H, m), 5,10 (IH, t, J4,5), 2,72 (4H, s), 2,69-2,62 (2H, m), 1,95-1,74 (2H, m, AB rendszer), 1,28-1,15 (2H, m), 0,96-0,87 (2H,m), 0,43-0,36 (2H, m).
Mind a proton, mind a l3C NMR-ek szennyeződések nyomait mutatják.
Vancomicint (283,8 mg, 0,182 mmol) DMF-ben (5 cm3) szuszpendálunk nitrogénatmoszféra alatt. 0,248 mol/1 vizes NaOH-oldatot (1,2 cm3) adagolunk, majd a keveréket szobahőmérsékleten 4 percen át keverjük. A tiszta oldathoz szilárd NaHCO3-at adagolunk (30 mg, 0,36 mmol), majd a keveréket 2 percen át keverjük. Az aktív észtert 80,1 mg (0,139 mmol) adagoljuk, majd a keveréket 24 órán át keverjük. TFA (0,1 cm3) vízben (10 cm3) készült oldatát adagoljuk, majd a keveréket éterrel extraháljuk (4x50 cm3). Az extrakció során figyelni kell arra, hogy a termék kiválását megakadályozzuk. A keverékből centrifügával eltávolítjuk az éter maradékait, majd a vizes réteget dekantálással eltávolítva egy fehér, szilárd anyagot kapunk. Ezt a fehér, szilárd anyagot vízzel mosva és szárítva 210 mg terméket kapunk.
vmax (DCM mullj/cm 1: 1670,1657.
Vmax: 379, 362, 299, 287, 251,236.
HU 217 033 Β m/z: 1911,62 (M+). A C)01H101Cl2N9O25 összegképlet alapján számított érték: 1911,86.
22. példa [(BocfiLysfo-LysOMe (Lásd 12. reakcióvázlat)
N-a,e-Di(terc-butoxi-karbonil)-L-lizint (3 g, 8,66 mmol) THF-ben (50 cm3) oldunk nitrogénatmoszféra alatt. Et3N-t (1,2 cm3, 8,61 mmol) adagolunk, majd a keveréket -5 °C-ra hűtjük. Etil-klór-formiátot (0,820 cm3, 8,61 mmol) csepegtetünk -5 °C-on keverés mellett. A keveréket -5 °C-on 20 percen át keverjük.
L-lizin-metil-észter-dihidrogén-kloridot (0,837 g, 3,59 mmol) MeOH-ban (20 cm3) oldunk, majd NaOH metanolos oldatát (0,95 mol/1, 7,5 cm3) adagolunk. 5 perces állást követően az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. DCM-et adagolunk, majd a keveréket szűrjük. Az oldószert eltávolítva kapjuk a szabad amint, amelyet THF-ben (5 cm3 és 2 χ 1 cm3) oldunk, majd az elegyet hozzácsepegtetjük 5 °C hőmérsékleten a fentiekben előállított anhidridhez. A keveréket -5 °Con 2 órán át keveijük. Étert (50 cm3) adagolunk, majd a keveréket 2 mol/literes HCl-oldattal, vízzel, vizes NaHCO3-oldattal, vízzel és NaCI-oldattal mossuk. A kapott anyagot MgSO4-gyel szárítjuk és szüljük. Az oldószer csökkentett nyomáson történő eltávolításával egy olajat kapunk. Ezt száraz flashkromatográfiásan tisztítjuk, eluensként kezdetben 0,5%-os MeOH/DCMelegyet alkalmazva. így kapjuk az alcím szerinti terméket fehér, szilárd anyag formájában (2,58 g, 88%). Olvadáspont: 68-70 °C.
[a]D (23,5 °C): -38,6° (c=0,018, CHCl3-ban). Elemanalízis a C39H72N6O)2 összegképlet alapján: számított: C% 67,34; H% 8,88; N% 10,29; talált: C% 56,46; H% 8,83; N% 10,25.
vmax (DCM mull)/cm ': 3330, 3300, 1745, 1700, 1680, 1660.
δΗ (250 MHz, CDC13): 7,64 (1H, széles d, J7,5),
7,28 (1H, széles s), 5,96 (1H, széles d, J7,5), 5,72 (1H, széles d, J7,5), 4,92 (1H, széles s), 4,79 (1H, széles s), 4,42-4,34 (2H, m), 4,20 (1H, m), 3,66 (3H, s, OMe), 3,49-3,46 (1H, széles m), 3,1-2,85 (5H, m), 1,9-1,6 (6H,m), 1,55-1,1 (48H, m).
őc (62,9 MHz, CDC13): 173,33 (4°), 173,28 (4°), 172,16 (4°), 156,14 (4°), 156,05 (4°), 155,74 (2x4°), 79,41 (4°), 79,34 (4°), 78,43 (4°), 78,32 (4°), 53,68 (3°), 53,19 (3°), 52,25 (3°), 51,83 (1°, OMe), 39,85 (2x2°), 38,26 (2°), 32,84 (2°), 32,50 (2°), 30,89 (2°), 28,96 (2°), 28,87 (2°), 28,53 (2°), 28,15 (12x1°, C(CH3)3), 22,93 (2°), 22,53 (2°), 22,18(2°).
m/z (FAB): 817 (MH+, 0,1%), 417 (6,3, M-4xBoc), 84 (59), 57 (100, C4H9).
MértM+-H: 815,51298, a C39H71N6O12 összegképlet alapján számított: 815,51300).
(24) képletű [(Boc)2Lys]2Lys-OH [(Boc)2Lys]2LysOMe-t (788 mg, 0,96 mmol) dioxánban (1,5 cm3) oldunk nitrogénatmoszféra alatt. 1 mol/literes NaOH-oldatot (1,1 cm3) adagolunk, majd a keveréket szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük. A reakcióelegyet 2 mol/literes citromsavoldattal (0,55 cm3) semlegesítjük. A keveréket 0 °C-ra hűtjük és 2 mol/literes citromsavoldatot (2 cm3) adagolunk. Etilacetátot (40 cm3) adagolunk, majd az elválasztott szerves réteget vízzel (2x5 cm3) és NaCI-oldattal mossuk. Az anyagot Na2SO4-gyel szárítjuk, majd szüljük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítva egy habot kapunk. Ezt DCM-ben oldjuk, majd hexánt adagolunk. Az oldószert dekantálással eltávolítjuk, majd a kapott olajat hexánnal mossuk. Ezt az olajat 40 Pa nyomáson szárítjuk. így kapjuk a (24) képletű terméket lényegében 100%-os kitermeléssel.
vmax (DCM mull)/cm>: 3310, 1710, 1690, 1670, 1650, 1640.
Az NMR nehezen elemezhető, mivel a csúcsok szélesek és átfedőek. A kiindulási anyag OMe csoportjához tartozó Ή-NMR jel már nincs jelen.
m/z (FAB): 803 (MH+, 0,4%), 403 (32,1), 57 (79,5).
Mért MH+: 803,51478, a C38H71N6O12 összegképlet alapján számított: 803,51300).
(25) képletű vegyület előállítása
A (24) képletű [(Boc)2Lys]2Lys-OH (302 mg, 0,377 mmol) és Et3N-t (0,060 cm3, 0,430 mmol) THFben (12 cm3) oldunk nitrogénatmoszféra alatt, majd -5 °C-ra hűtjük az elegyet. Etil-klór-formiátot (0,040 cm3, 0,42 mmol) adagolunk, majd a keveréket -5 °C-on 15 percen át keveijük. A (17b) szabad amint (196 mg, 0,427 mmol) THF-ben (5 cm3 és 1 cm3) oldjuk, majd az elegyet a fenti keverékhez adagoljuk -5 °C-on. A keveréket -5-0 °C-on 45 percen át keveijük. Étert (30 cm3) adagolunk, majd a keveréket 2 mol/literes HCl-oldattal, vízzel és NHCl-oldattal mossuk. A kapott anyagot MgSO4-gyel szárítjuk, majd szüljük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítva egy sárga olajat kapunk. Ezt száraz flashkromatográfiásan tisztítjuk, eluensként kezdetben DCM-et alkalmazva. így kapjuk a (25) képletű terméket sárga, szilárd anyag formájában (323 mg, 68%). Olvadáspont: 104-107 °C.
[cc]D (22 °C) (c=10,4x 10 3; CHC13): -39,13°. Elemanalízis a C73H99N7Oh összegképlet alapján: számított: C% 70,11; H% 7,98; N% 7,84; talált: C% 69,50; H% 8,23; N% 7,78.
Ámax (CHCl3)/nm 380 (ε/dm3 mól ', cm ', 17 864), 366 (1834), 302 (40457), 288 (35 728), 254 (72 583).
vmax (DCM mull)/cm-i: 3340, 3280, 1690, 1640. δΗ (250 MHz; CDC13): 8,80 (4H, m), 8,67 (2H, dd,
J8 és 1), 8,26 (2H, dd, J7 és 2), 7,8-7,6 (8H, m), 7,02 (1H, széles d, J6,5), 6,75 (1H, széles s), 6,12 (1H, széles s), 5,82 (1H, széles s), 5,38 (1H, széles m), 5,07 (1H, t, J4,5), 4,72 (2H, széles s), 4,2-3,9 (4H, széles m), 3,5-3,3 (1H, széles s), 3,1-2,95 (5H, széles m), 2,95-2,7 (2H, m), 2,60 (2H, m), 1,8-1,1 (50H, széles m), 1,00 (2H, széles m), 0,74 (4H, széles s), 0,32 (2H, széles m).
Mért M+: 1249,74 330 a C73H99N7O| ] összegképlet alapján számított: 1249,74026).
PGC-tartalmú kamrák, amelyek egy találmány szerinti vegyülettel borítottak, általában nagyon jó stabilitást mutatnak. Amennyiben az oldószert napokon át pumpálják át egy ilyen kamrán, az enantiomerek elválasztása még mindig bekövetkezik.

Claims (14)

1. (I) általános képletű védőcsoport, azzal jellemezve, hogy a képletben
Ar jelentése egy 1 -5 benzolgyűrűvel kondenzált fluorénből származó csoport; és
L jelentése egy, legalább egy olyan szénatomot tartalmazó csoport, amely a védendő csoporttal való kötésre képes.
2. Az 1. igénypont szerinti védőcsoport, azzal jellemezve, hogy az Ar csoport legalább 6 aromás gyűrűt tartalmaz.
3. Az 1. vagy 2. igénypontok bármelyike szerinti védőcsoport, azzal jellemezve, hogy L’ jelentése -CO-, -O-CO-, -S-, -O- vagy olyan -(CH2)m-O-csoport, amelyben m értéke 1-6 vagy egy közvetlen kötés.
4. Védésre alkalmas vegyület, azzal jellemezve, hogy az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti védőcsoportot és egy, az L vagy L’ csoporton keresztül kapcsolódó lehasadócsoportot tartalmaz.
5. A 4. igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy a lehasadócsoport nitrogén-, oxigén-, kén-, szelén-, tellúr-, szilícium- vagy halogénatomot tartalmaz.
6. Az 5. igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy a lehasadócsoport egy halogénatom, hidroxil-, karboxi-, amin-, karbox-amin-csoport, p-toluol-szulfonsav-, tiol-, ciano- vagy trimetil-szilícium-csoport.
7. Védett vegyületek, azzal jellemezve, hogy az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti védőcsoportot a védendő vegyület egyik csoportjához kapcsolva tartalmazza.
8. A 7. igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy a vegyület védendő csoportja egy alkohol-, tiol-, sav-, amin- vagy amidcsoport.
9. A 8. igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy a védendő vegyület valamilyen természetes vagy szintetikus peptid vagy aminosav.
10. Berendezés, azzal jellemezve, hogy egymás után vagy egyidejűleg alkalmazható
a) grafitanyaggal töltött kamrát; és
b) az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti védőcsoport aminosav- vagy peptidmolekulába való ojtására alkalmas készletet tartalmaz.
11. A 10. igénypont szerinti eszköz, azzal jellemezve, hogy a grafitanyag grafit vagy aktív szén.
12. A 10. vagy 11. igénypont szerinti eszköz, azzal jellemezve, hogy tartalmaz még
c) egy olyan frakciógyűjtő rendszert is, amely egy ultraibolya (UV), egy látható spektroszkópiás vagy egy fluoreszcens spektroszkópiás detektorral van ellátva.
13. Eljárás aminosav- vagy peptidvegyületek előállítására vagy elválasztására, azzal jellemezve, hogy a következő lépésekből áll:
- az elválasztandó vegyületelegy legalább egy vegyületének legalább egy csoportját az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti védőcsoporttal védjük; és
- a vegyületelegyet grafitanyaggal töltött kamrán vezetjük át.
14. Eljárás az 1-3. igénypontok szerinti csoportok védelemre való alkalmazására, azzal jellemezve, hogy a védést valamely aminosav- vagy peptidmolekula legalább egy funkciós csoportjára alkalmazzuk.
HU9301892A 1990-12-31 1991-12-31 Védőcsoport, a védőcsoportokat tartalmazó vegyületek, valamint eljárás és berendezés e csoport alkalmazására HU217033B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9028208A GB2251242B (en) 1990-12-31 1990-12-31 Protecting compound

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9301892D0 HU9301892D0 (en) 1993-09-28
HUT69324A HUT69324A (en) 1995-09-28
HU217033B true HU217033B (hu) 1999-11-29

Family

ID=10687684

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9301892A HU217033B (hu) 1990-12-31 1991-12-31 Védőcsoport, a védőcsoportokat tartalmazó vegyületek, valamint eljárás és berendezés e csoport alkalmazására

Country Status (14)

Country Link
EP (1) EP0565607B1 (hu)
JP (1) JP3286316B2 (hu)
KR (1) KR100232396B1 (hu)
AT (1) ATE179180T1 (hu)
AU (1) AU669324B2 (hu)
BR (1) BR9107286A (hu)
CA (1) CA2099120A1 (hu)
DE (1) DE69131168T2 (hu)
DK (1) DK0565607T3 (hu)
ES (1) ES2133313T3 (hu)
GB (1) GB2251242B (hu)
GR (1) GR3030169T3 (hu)
HU (1) HU217033B (hu)
WO (1) WO1992012167A1 (hu)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9307014D0 (en) * 1993-04-02 1993-05-26 Laporte Plc Protecting group for use in oligodeoxyribonucleotide synthesis
GB2299993A (en) * 1995-04-21 1996-10-23 Rhone Poulenc Ltd Chiral polycyclic aromatic compounds and their use as a chiral stationary phase in enantiomeric separations
DE102010001983A1 (de) * 2010-02-16 2011-08-18 peptides&elephants GmbH, 14558 Verfahren zur Erzeugung eines Peptidreinigungsmaterials auf Graphitbasis und Verfahren zur Peptidaufreinigung

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB272528A (hu) * 1900-01-01
GB201786A (en) * 1922-08-24 1923-08-09 Kalle & Co Ag Process for producing vat colouring-matters
GB303389A (en) * 1927-07-01 1929-01-01 Ig Farbenindustrie Ag The manufacture of new carboxylic acids of the fatty-aromatic series
GB327526A (en) * 1929-02-27 1930-04-10 Ig Farbenindustrie Ag Manufacture of aralkyl-benzanthrones
GB469633A (en) * 1935-08-10 1937-07-29 Ig Farbenindustrie Ag The manufacture of polycyclic condensation products
GB824175A (en) * 1955-02-21 1959-11-25 Metal & Thermit Corp Reactions involving grignard reagents
DE2036171A1 (hu) * 1970-07-21 1972-01-27
US3839396A (en) * 1971-07-15 1974-10-01 Shionogi & Co 9-lower alkyl-9-fluorenyl carbonates
DE3133390A1 (de) * 1981-08-24 1983-03-10 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Verfahren zur flaechenmaessigen konzentrierung von licht und neue fluoreszierende verbindungen
DE3711866A1 (de) * 1987-04-08 1988-10-27 Hoechst Ag Synthese von peptidamiden mittels festphasenmethode unter verwendung von saeurelabilen ankergruppen

Also Published As

Publication number Publication date
HUT69324A (en) 1995-09-28
BR9107286A (pt) 1996-01-02
CA2099120A1 (fr) 1992-07-01
ATE179180T1 (de) 1999-05-15
EP0565607A1 (fr) 1993-10-20
ES2133313T3 (es) 1999-09-16
DE69131168D1 (de) 1999-05-27
KR930703346A (ko) 1993-11-29
DK0565607T3 (da) 1999-10-25
GB2251242B (en) 1995-01-11
AU669324B2 (en) 1996-06-06
GB9028208D0 (en) 1991-02-13
GR3030169T3 (en) 1999-08-31
DE69131168T2 (de) 1999-11-18
WO1992012167A1 (fr) 1992-07-23
JPH06506914A (ja) 1994-08-04
HU9301892D0 (en) 1993-09-28
JP3286316B2 (ja) 2002-05-27
AU9170791A (en) 1992-08-17
GB2251242A (en) 1992-07-01
EP0565607B1 (fr) 1999-04-21
KR100232396B1 (ko) 1999-12-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6560382B2 (ja) アマトキシンビルディングブロック及びアマトキシンの合成方法
JP7100034B2 (ja) 多環式ペプチド及びそれらの調製方法
US9493512B2 (en) Solution phase processes for the manufacture of macrocyclic depsipeptides and new intermediates
KR101580729B1 (ko) 거대고리형 뎁시펩티드 및 신규 중간체의 제조 방법
JP7132125B2 (ja) ニューロペプチドｓ受容体（ｎｐｓｒ）アゴニスト
Moreira et al. A high-yielding solid-phase total synthesis of daptomycin using a Fmoc SPPS stable kynurenine synthon
JP7292751B2 (ja) 抗体薬物複合体用薬物リンカーｍｃ－ｍｍａｆの調製方法及びその中間体
TW201420596A (zh) 基於乙縮醛之用於製造巨環縮肽的方法及新穎中間物
Mapelli et al. Synthesis of four diastereomeric enkephalins incorporating cyclopropyl phenylalanine
JP2549704B2 (ja) ペプチド合成用担体
HU217033B (hu) Védőcsoport, a védőcsoportokat tartalmazó vegyületek, valamint eljárás és berendezés e csoport alkalmazására
US5994588A (en) Peptide purification method using novel linker and solid-phase ligand
Chen et al. Total synthesis and a systematic structure-activity relationship study of WAP-8294A2
US6359113B1 (en) Protective group, compound protected by said group and device for grafting the protective group on the compound to protect it
WO2010103857A1 (ja) ケイ素含有保護基を用いた糖ペプチド固相合成方法および合成装置
US5990278A (en) Protective or anchor groups and their use
EP0552368A1 (en) Process for purifying synthetic peptide, and linker and linker-combining solid-phase carrier used in said process
JP2815362B2 (ja) ベンズヒドリルアミン誘導体及びその製法
US5869605A (en) Protected compound comprising a protective group removably attached to a compound to be protected
Fattori et al. A practical approach to the synthesis of hairpin polyamide–peptide conjugates through the use of a safety-catch linker
CN113173891A (zh) 一种钙敏感受体蛋白拮抗剂衍生的分子探针及在甲状旁腺切除手术中的应用
JPH03294253A (ja) 消化管ホルモン拮抗物質
JP4016104B2 (ja) 新規セレニルリンカー及びその用途
Athanassopoulos et al. Model studies towards the applicability of the readily available (S)-N-tritylaspartic anhydride in the synthesis of amino acids and peptides
Jiang et al. Synthesis of α‐factor analogues containing photoactivatable and labeling groups

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee