JP7292751B2 - 抗体薬物複合体用薬物リンカーｍｃ－ｍｍａｆの調製方法及びその中間体 - Google Patents

抗体薬物複合体用薬物リンカーｍｃ－ｍｍａｆの調製方法及びその中間体 Download PDF

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Description

本発明は、有機合成分野に関し、特に、抗体薬物複合体用薬物リンカーＭＣ－ＭＭＡＦの調製方法及びその中間体に関する。
抗体薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，略してＡＤＣ）は、一種の新規抗腫瘍薬物であり、その原理は、細胞毒素を抗体に接続し、抗体による癌細胞表面における特定の抗原の認識によりエンドサイトーシスを介して癌細胞に入り込み、それにより細胞毒素を標的に輸送し、悪性腫瘍の標的治療の目的を達成することである。ＡＤＣは、従来の小分子抗腫瘍薬物と比較して、抗体の標的認識と毒素の高い活性に依存できるため、より特異的で効率的である。
ＡＤＣは、三つの異なる構成部分、すなわち抗体、リンカー及び細胞毒素を含む。抗体は標的化を実現し、リンカーは血液輸送中のＡＤＣの安定性を保証し、作用標的に到達した後、毒素は癌細胞に対して殺傷効果を発揮する。作用機構によっては、ＡＤＣに適した毒素は微小管系阻害剤（Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）、ＤＮＡ損傷剤（ＤＮＡｄａｍａｇｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤（ＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）などに分類される。現在、市場で販売及び臨床試験におけるＡＤＣに採用される毒素は、主に微小管系阻害剤であり、主に例えば、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＤなどの海ウサギ毒素（Ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ－ｂａｓｅｄ）に基づいて設計される化合物及び、例えば、ＤＭ１及びＤＭ４などのマイタンシン（Ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ）に基づいて設計される化合物を含む。リンガーに関しては、例えば、バリン－シトルリン（Ｖａｌｉｎｅ－Ｃｉｔｒｉｌｉｎｅ）やシクロヘキシルギ酸（ＭＣＣ）などの分裂不可型が主に適用され、リソソーム加水分解後も薬物は依然として活性を有し、接続領域を介してアミノ酸残基に結合する。
抗体薬物複合体の形成方式は、複数ある。抗体におけるアミノ基又はメルカプト基と薬物リンカーとの化学反応によって結合してもよく、抗体を修飾し、抗体に特定の機能基を導入した後、薬物リンカーと化学反応させて結合し、又は酵素触媒反応させて結合してもよい。本発明に係る抗体薬物複合体ＭＣ－ＭＭＡＦ構造を以下に示す。
Figure 0007292751000001
現在文献で報告されているＭＣ－ＭＭＡＦの合成経路は、ＭＣ－ＭＭＡＦが得られるように、毒素ＭＭＡＦを用いてＭＣ－ｈｅｘ－Ａｃｉｄ（１－マレイミド－ｎ－ヘキサン酸）と脱水反応させることである。ＭＭＡＦの構造は、
Figure 0007292751000002
 である。
文献で報告されている合成案は、
Figure 0007292751000003
 である。
当該経路ＭＭＡＦのＮ末端バリンは、Ｎにメチル基を有し、立体障害が大きい。この場合、１－マレイミド－ｎ－ヘキサン酸をＭＭＡＦに接続すると反応速度が遅くなり、異なるアミド縮合剤を採用したとしても、ＭＭＡＦのフェニルアラミド基に接続されたキラル炭素のラセミ化を引き起こすことになる。当該経路は、１ｇ未満のＭＣ－ＭＭＡＦ合成に使用され、最終的に高圧逆相調製を適用して異性不純物を除去する必要があり、収率は５０％未満である。
当該反応経路は、拡大生産時に一定の欠陥を示す。例えば、１．当該方法では、縮合剤がＭＭＡＦにおけるカルボキシル基を同時に活性化するため、３０～５０％のラセミ化を引き起こし、除去が困難な異性体不純物を形成し、収率に影響を与える。２．前述の立体障害により、反応時間が長く、不純物が多く、反応の後処理及び精製に困難を引き起こす。３．最終生成物は、異性体を除去するために高圧逆相調製を必要とし、操作コストが増加される。４．原料として毒素ＭＭＡＦを直接適用するため、大量の合成操作に防護を行い、防護装置を選択する必要があり、生産操作に障害をもたらす。
一態様において、従来技術に存在する欠点に対して、本発明によれば、ＭＣ－ＭＭＡＦの合成方法が提供される。当該反応のキーは、ＭＣ－ＭＭＡＦ又はその塩が直接得られるように、構造式が
Figure 0007292751000004
 である化合物を用いて、ＭＭＡＦの構造フラグメントペプチドＤａｐ－Ｐｈｅ－ＯＨと縮合反応させることである。Ｒは水素、スクシンイミド、ペンタフルオロフェニル、ｐ－ニトロフェニル及びフタルイミドから選ばれる一種類又は複数種類である。
Ｄａｐ－Ｐｈｅ－ＯＨの化学構造を以下に示す。
Figure 0007292751000005
本発明の上記目的は、以下の技術的手段により実現される。
Figure 0007292751000006
当該合成方法は、以下のステップを含む。１）ＭＣ－ＭＭＡＦが得られるように、化合物
Figure 0007292751000007
 を適切な溶媒に溶解し、Ｄａｐ－Ｐｈｅ－ＯＨとアミド縮合反応させる。
ステップ１）において、前記適切な溶媒は、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン及び２－メチルテトラヒドロフランから選ばれる一種類又は複数種類であることが好ましい。前記適切な溶媒は、ジクロロメタン及びＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドから選ばれる一種類又は複数種類であることがより好ましい。
ステップ１）において、Ｒが水素である場合、試薬Ｍにより、試薬Ｎを添加し、前記試薬Ｍは、ＤＣＣ、ＤＣＥＰ、ＥＤＣ、ＤＩＣ、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ＨＢＰＩＰＵ、ＨＢＰｙＵ、ＨＳＰｙＵ、ＨＣＴＵ、ＨＯＴＵ、ＨＯＴＴ、ＨＳＴＵ、ＨＤＭＡ、ＴＡＴＵ、ＴＢＴＵ、ＴＣＴＵ、ＴＣＦＨ、ＴＤＢＴＵ、ＴＯＴＵ、ＴＯＴＴ、ＴＰＴＵ、ＴＦＦＨ、ＢＴＦＦＨ、ＴＮＴＵ、ＴＳＴＵ、ＣＯＭＵ、Ｔ３Ｐ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＰｙＢｒＯＰ、ＰｙＣｌＯＰ、ＢｒＯＰ、ＰｙＡＯＰ、ＰｙＣＩＵ、ＣＤＩ、ＴＰＳＩ、ＴＳＴＵ、ＤＥＰＢＴ、ＤＭＴＭＭ、ＥＥＤＱ、ＣＩＰ、ＣＩＢ、ＤＭＣ、ＨＯＢｔ及びＥＤＣＩから選ばれる一種類又は複数種類であることが好ましい。前記試薬Ｍは、ＥＤＣＩ、ＥＤＣ、ＤＩＣ、ＨＯＡｔ及びＨＯＢｔから選ばれる一種類又は複数種類であることがより好ましい。前記試薬Ｍは、ＥＤＣＩ、ＥＤＣ又はＤＩＣとＨＯＡｔ又はＨＯＢｔとの混合物であることがさらに好ましい。前記試薬Ｍは、ＥＤＣＩとＨＯＢｔとの混合物であることが最も好ましい。前記試薬Ｎは、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、ピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－４－ピリジンから選ばれ、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）であることが好ましい。反応温度は－２０℃～４０℃であり、－１０℃～２５℃であることが好ましい。
ステップ１）において、Ｒがスクシンイミド、ペンタフルオロフェニル、ｐ－ニトロフェニル及びフタルイミドから選ばれる一種類又は複数種類である場合、ＭＣ－ＭＭＡＦが得られるように試薬Ｐにより、Ｄａｐ－Ｐｈｅ－ＯＨと反応させることが好ましい。前記試薬Ｐは、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、ピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－４－ピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸リチウム及び炭酸水素リチウムから選ばれる一種類又は複数種類であり、炭酸ナトリウム又はジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）であることが好ましい。反応温度は、０℃～１００℃であり、１５℃～５０℃であることが好ましい。
ステップ１）において、前記反応が完了した後に、ＭＣ－ＭＭＡＦを反応液から分離するステップをさらに含むことが好ましい。
ＭＣ－ＭＭＡＦが得られるように、前記分離は、減圧により溶媒を蒸発乾燥させ、それから、中圧クロマトグラフィーで精製又は再結晶することを含むことが好ましい。
本発明の調製方法によれば、Ｎ末端の反応活性が向上し、それによりラセミ化反応の発生が効果的に制御される。毒素ＭＭＡＦを直接使用せずに、毒性の低いフラグメントペプチドを採用することにより、大量生産における操作の難易度が低減される。逆相調製を必要とせずに、操作が簡便である。上記のように、当該方法によれば、操作の難易度が低減され、品質基準が制御しやすくなり、１００グラムレベルの調製にも適用することができる。
一態様において、本特許によれば、構造式が
Figure 0007292751000008
 であり、
Ｒは、水素、スクシンイミド、ペンタフルオロフェニル、ｐ－ニトロフェニル、フタルアミドから選ばれる一種類であるＭＣ－ＭＭＡＦを合成する中間体化合物がさらに提供される。表１に示すように、以下の化合物であることが好ましい。
Figure 0007292751000009
さらなる態様において、本発明によれば、合成ステップが
Figure 0007292751000010
Figure 0007292751000011
 である
Figure 0007292751000012
 を合成する方法がさらに提供される。
本経路には、重要な中間体Ｄを合成することが含まれており、これまで当該化合物の合成方法に関する報告はない。
化合物Ｄは、保護基を有しないポリペプチドＸでは合成できず、実験によりポリペプチドＸ自体の縮合物が得られる。すなわち、以下に示す合成経路では化合物Ｄを直接合成できない。
Figure 0007292751000013
本発明で採用される技術的手段において、まず、保護基を有するポリペプチドを用いて化合物Ｃを合成し、次に化合物Ｄが得られるように酸性条件下で保護基を脱離させる。しかし、実験では、化合物Ｃと化合物Ｄは酸性条件下で非常に不安定であり、分子の中央のアミド結合が断裂し、収率が非常に低くなることが発見された。さらなる研究により、酸の濃度の上昇は保護基を脱離させる速度を大幅に増加させ、副反応の速度をそれほど増加させないことが発見された。トリフルオロ酢酸濃度（当該濃度は反応液においてジクロロメタンなどの溶媒におけるトリフルオロ酢酸の濃度を指す）範囲は、３０％から５０％であり、３５％であることが好ましい。保護基を脱離させる反応はすばやく完了し、その後、すぐに反応をクエンチし、最終的に化合物Ｄの収率を５％から５０％に向上させることができる。
Figure 0007292751000014
 副反応：
Figure 0007292751000015
酸試薬を選択し、酸濃度の反応条件を制御することにより、化合物Ｄの収率が大幅に向上し、当該経路が生産に適用される可能性を有することになる。
本発明では、従来のＭＭＡＦ合成経路を放棄し、ＭＣ－ＭＭＡＦを全体と見なして合成する。ここで、最大の問題は、ＭＣリンカーが比較的に反応活性の高いフラグメントであり、ＭＣを事前に接続すると合成の難易度が増加されることであり、当業者はこの経路を思い付かない。我々は、多くの研究を通じて、ＭＣフラグメント化合物の事前導入が合成に不安定である問題を解決し、この全体的な合成経路を実現することを可能にした。
本明細書において、一般的に使用される有機物の略語の定義及び対応するＣＡＳ番号を表２に示す。
Figure 0007292751000016
Figure 0007292751000017
Figure 0007292751000018
Figure 0007292751000019
Figure 0007292751000020
Figure 0007292751000021
本発明により合成されたＤＭＴ－３の高速液体クロマトグラムである。 本発明により合成された化合物Ａの液体クロマトグラムである。 本発明により合成された化合物Ａのマススペクトルである。 本発明により合成された化合物Ｃの液体クロマトグラムである。 本発明により合成された化合物Ｃのマススペクトルである。 本発明により合成された化合物Ｄの液体クロマトグラムである。 本発明により合成された化合物Ｄのマススペクトルである。 本発明により合成された化合物Ｆの液体クロマトグラムである。 本発明により合成された化合物Ｆのマススペクトルである。 本発明により合成された対象生成物ＭＣ－ＭＭＡＦの液体クロマトグラムである。 本発明により合成された対象生成物ＭＣ－ＭＭＡＦのマススペクトルである。 本発明により合成された対象生成物ＭＣ－ＭＭＡＦの核磁気共鳴スペクトルである。
以下は、本発明の技術的手段について、具体的な実施形態に基づいてさらに詳細に説明する。なお、以下の実施例は、本発明の技術的概念及び特徴を説明するものに過ぎず、その目的は、当業者が本発明の内容を理解し、実施することができるようにすることであり、本発明の保護範囲を制限するものではない。本説明の精神の本質に基づく同等の変更又は修正は、いずれも本発明の保護範囲内に含まれるべきである。
ＬＣＭＳは液体クロマトグラフィー／質量分析検出法を表し、ＨＰＬＣは高速液体クロマトグラフィー検出法を表する。
本発明に係る各ステップの反応のための原料及び試薬は、市場から購入し、又は本発明に記載の方法に従って調製することができる。
本発明によれば、以下のステップを含むＭＣ－ＭＭＡＦを合成する方法が提供される。
１）ＭＣ－ＭＭＡＦが得られるように、化合物
Figure 0007292751000022
 を、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキシヘキサシクロ及び２－メチルテトラヒドロフランから選ばれる一種類又は複数種類である適切な溶媒に溶解し、構造式が
Figure 0007292751000023
 であるＤａｐ－Ｐｈｅ－ＯＨとアミド縮合反応させる。
ステップ１）において、Ｒが水素である場合、試薬Ｍにより、試薬Ｎを添加し、前記試薬Ｍは、ＤＣＣ、ＤＣＥＰ、ＥＤＣ、ＤＩＣ、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ＨＢＰＩＰＵ、ＨＢＰｙＵ、ＨＳＰｙＵ、ＨＣＴＵ、ＨＯＴＵ、ＨＯＴＴ、ＨＳＴＵ、ＨＤＭＡ、ＴＡＴＵ、ＴＢＴＵ、ＴＣＴＵ、ＴＣＦＨ、ＴＤＢＴＵ、ＴＯＴＵ、ＴＯＴＴ、ＴＰＴＵ、ＴＦＦＨ、ＢＴＦＦＨ、ＴＮＴＵ、ＴＳＴＵ、ＣＯＭＵ、Ｔ３Ｐ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＰｙＢｒＯＰ、ＰｙＣｌＯＰ、ＢｒＯＰ、ＰｙＡＯＰ、ＰｙＣＩＵ、ＣＤＩ、ＴＰＳＩ、ＴＳＴＵ、ＤＥＰＢＴ、ＤＭＴＭＭ、ＥＥＤＱ、ＣＩＰ、ＣＩＢ、ＤＭＣ、ＨＯＢｔ及びＥＤＣＩから選ばれる一種類又は複数種類であることが好ましい。前記試薬Ｍは、ＥＤＣＩ、ＥＤＣ、ＤＩＣ、ＨＯＡｔ及びＨＯＢｔから選ばれる一種類又は複数種類であることがより好ましい。前記試薬Ｍは、ＥＤＣＩ、ＥＤＣ又はＤＩＣとＨＯＡｔ又はＨＯＢｔとの混合物であることがさらに好ましい。前記試薬Ｍは、ＥＤＣＩとＨＯＢｔとの混合物であることが最も好ましい。前記試薬Ｎは、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、ピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－４－ピリジンから選ばれ、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）であることが好ましい。反応温度は－２０℃～４０℃であり、－１０℃～２５℃であることが好ましい。
ステップ１）において、Ｒがスクシンイミド、ペンタフルオロフェニル、ｐ－ニトロフェニル及びフタルイミドから選ばれる一種類又は複数種類である場合、ＭＣ－ＭＭＡＦが得られるように試薬Ｐにより、Ｄａｐ－Ｐｈｅ－ＯＨと反応させることが好ましい。前記試薬Ｐは、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、ピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－４－ピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸リチウム及び炭酸水素リチウムから選ばれる一種類又は複数種類であり、炭酸ナトリウム又はジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）であることが好ましい。反応温度は、０℃～１００℃であり、１５℃～５０℃であることが好ましい。
ステップ１）において、前記反応が完了した後に、ＭＣ－ＭＭＡＦを反応液から分離するステップをさらに含む。ＭＣ－ＭＭＡＦが得られるように、前記分離は、減圧により溶媒を蒸発乾燥させ、それから、中圧クロマトグラフィーで精製又は再結晶することを含むことが好ましい。
本発明によれば、保護基を有するポリペプチド
Figure 0007292751000024
 を用い、まず
Figure 0007292751000025
 と反応させて化合物
Figure 0007292751000026
 を合成し、次に化合物
Figure 0007292751000027
 が得られるように酸性条件下で保護基を脱離させ、
酸濃度範囲が３０％～５０％である酸性条件を提供するためにトリフルオロ酢酸を選択可能である、
Figure 0007292751000028
 を合成する方法がさらに提供される。トリフルオロ酢酸濃度範囲は、３０％から５０％であり、３５％であることが好ましい。保護基を脱離させる反応はすばやく完了し、その後、すぐに反応をクエンチし、最終的に化合物Ｄの収率を５％から５０％に向上させることができる。
（実施例１）
本実施例の反応経路は以下のとおりである。
Figure 0007292751000029
Figure 0007292751000030
３Ｌの三口フラスコに、１．５ＬのジクロロメタンとＤｉｌ．ＨＣｌ（２０２．３ｇ，０．６８３ｍｏｌ １．０ｅｑ）を添加し、磁気で攪拌し、窒素で保護し、Ｚ－Ｖａｌ－ＯＨ（１６３．２３ｇ、０．６５ｍｏｌ、０．９５ｅｑ）及びＨＡＴＵ（３１１．６ｇ、０．８２ｍｏｌ，１．２０ｅｑ）を順次添加し、室温で３０ｍｉｎ攪拌した後に氷浴まで冷却し、温度を１０度に制御し、ＤＩＥＡ（４５２．５ｍｌ，４．０ｅｑ）を滴下し、滴下が完了し、氷浴下で３０ｍｉｎ攪拌した後、室温に移し、１６ｈ反応させ、ＨＰＬＣで検出し、主ピークを製品ピーク（保持時間２９．９８ｍｉｎ）とし、原料Ｄｉｌ．ＨＣｌが完全に反応し、反応が終了する。反応液をクエン酸水溶液で洗浄し（２Ｌ＊１）、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し（２Ｌ＊１）、飽和食塩水で洗浄し（２Ｌ＊１）、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、吸引ろ過し、析出させて粗品５３１ｇが得られる。当該粗品を８００ｍｌのメタノールに溶解し、１．１ｍｌ（１ｍｏｌ／Ｌ）の希塩酸（約１時間）を氷浴撹拌下で滴下し、室温で１２ｈ撹拌し、層状化し、上層水層を分離し、収率が９１％である３２５ｇのＤＭＴ－１が得られるように下層製品をオイルポンプで乾燥させる。
２Ｌの一口フラスコに、８００ｍｌのメタノール、ＤＭＴ－１（ＬＮ１１４－３８，３２５ｇ，０．６６ｍｏｌ）及び１１０ｇのＰｄ（ＯＨ）２／Ｃを添加し、Ｈ２を３回置換し、室温で５ｈ反応させ、ＴＬＣは原料ＤＭＴ－１が完全に反応するのを監視する。フリット漏斗に珪藻土を添加し、吸引ろ過し、１Ｌのメタノールでろ過ケーキを洗浄し、ろ液を収集し、ろ液を蒸発させ、純度が９４％で、収率が９７％である２３０．２ｇのＤＭＴ－２が得られるように製品が泡立たなくなるまでオイルポンプで引き出す。
３Ｌの三口フラスコに、ＤＭＴ－２（ＬＮ１１４－４０－０１，２３０．２ｇ、実際は０．６０ｍｏｌ、１．０ｅｑ）を５００ｍｌのＤＣＭに溶解し、十分に攪拌し、Ｆｍｏｃ－Ｍｅ－ｖａｌ（２０２．６ｇ、０．５７ｍｏｌ、０．９５ｅｑ）及びＨＡＴＵ（２９２．９ｇ，０．７７ｍｏｌ、１．２０ｅｑ）を添加し、さらに１ＬのＤＣＭを添加し、室温で３０ｍｉｎ攪拌した後に氷浴まで冷却し、ＤＩＥＡ（２１２．７ｍｌ，２．０ｅｑ）を滴下し、滴下が完了し、氷浴下で３０ｍｉｎ攪拌した後、室温に移し、１６．０ｈ反応させ、ＨＰＬＣで検出し、主ピークを製品ピーク（保持時間３６．００ｍｉｎ）とし、原料ＤＭＴ－２が完全に反応し、反応が終了する。反応液を水で洗浄し（２．０Ｌ＊１）、クエン酸水溶液で洗浄し（２Ｌ＊１）、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し（２Ｌ＊１）、飽和食塩水で洗浄し（１Ｌ＊１）、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、吸引ろ過し、析出させて粗品６５５ｇが得られる。当該粗品を６５０ｍｌのメタノールに溶解し、３６０ｍｌ（１ｍｏｌ／Ｌ）の希塩酸を攪拌下で滴下し、室温で１２ｈ攪拌し、攪拌を停止し、層状化し、上層水層を分離し、このように二回行う。ＨＰＬＣ純度が９６．７％で、収率が９０％である３７３ｇのＤＭＴ－３が得られるように下層製品をオイルポンプで乾燥させる。
化合物ＤＭＴ－３（５．０ｇ、７．２２ｍｍｏｌ）とジエチルアミン（５ｍＬ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に添加し、窒素保護下で室温で４ｈ攪拌反応させ、ＬＣＭＳが反応液における化合物ＤＭＴ－３が３％未満であることを表示する場合は反応の終了と見なされる。反応液を遠心脱水し、粗品を中圧逆相で精製し（２２０ｇの工業用充填Ｃ１８逆相カラムを使用）、勾配水／アセトニトリル（９０／１０－１０／９０、ｖ／ｖ）を精製し、時間は１時間である。白色固体化合物Ａ（白色固体、３．１５ｇ、収率９３％）が得られるように純粋な製品を収集して凍結乾燥させる。ＭＳ：４７２．２６（Ｍ＋Ｈ＋）
ジクロロメタン（５０ｍＬ）に化合物Ｂ（１．７７ｇ，８．０４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３．８２ｇ，１０．０５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１．７２ｇ，１３．４ｍｍｏｌ）を添加し、窒素保護下で室温で３０分間攪拌反応させ、さらに化合物Ａ（３．１５ｇ、６．６８ｍｍｏｌ）を添加し、窒素保護下で室温で４時間攪拌反応させ、ＬＣＭＳが反応液における化合物Ａが３％未満であることを表示する場合は反応の終了と見なされる。反応液をクエン酸水溶液（５０ｍＬ）、飽和食塩水（５０ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて脱水し、粗品を中圧逆相で精製し（１２０ｇの工業用充填Ｃ１８逆相カラムを使用）、勾配水／アセトニトリル（９０／１０－１０／９０、ｖ／ｖ）を精製し、時間は１時間である。白色固体化合物Ｃ（白色固体、３．８６ｇ、収率８７％）が得られるように純粋な製品を収集して凍結乾燥させる。ＭＳ：６６５．３７（Ｍ＋Ｈ＋）
化合物Ｃ（３．８６ｇ，５．８１ｍｍｏｌ）をジクロロメタンとトリフルオロ酢酸の混合溶媒（２０ｍＬ，２／１，ｖ／ｖ）に溶解し、窒素保護下で室温で２０分間攪拌反応させ、ＬＣＭＳが反応液における化合物Ｃが５％未満であることを表示する場合は反応の終了と見なされる。反応液に４０ｍＬのアセトニトリルを添加して希釈し、約１０ｍＬの体積に低温で濃縮し、中圧逆相で精製し（２２０ｇの工業用充填Ｃ１８逆相カラムを使用）、勾配水／アセトニトリル（９０／１０－１０／９０、ｖ／ｖ）を精製し、時間は２時間である。白色固体化合物Ｄ（１．５９ｇ、収率４５％）が得られるように純粋な製品を収集して凍結乾燥させる。ＭＳ：６０９．３０（Ｍ＋Ｈ＋）
化合物Ｄ（１．５９ｇ，２．６１ｍｍｏｌ）、化合物Ｅ（０．３６ｇ，３．１３ｍｍｏｌ）及び化合物ＥＤＣＩ（０．６０ｇ，３．１３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、窒素保護下で室温で２時間攪拌反応させ、ＬＣＭＳが反応液における化合物Ｄが５％未満であることを表示する場合は反応の終了と見なされる。反応液を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて脱水し、粗品を中圧逆相で精製し（４０ｇの工業用充填Ｃ１８逆相カラムを使用）、勾配水／アセトニトリル（９０／１０－１０／９０、ｖ／ｖ）を精製し、時間は１時間である。白色固体化合物Ｆ（白色固体、１．７９ｇ、収率９７％）が得られるように純粋な製品を収集して凍結乾燥させる。ＭＳ：７０６．３２（Ｍ＋Ｈ＋）
化合物Ｆ（１．７９ｇ，２．５３ｍｍｏｌ）、化合物Ｇ（０．９３ｇ，２．７８ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．７２ｇ，５．５６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、窒素保護下で室温で１８時間攪拌反応させ、ＬＣＭＳが反応液における化合物Ｆが３％未満であることを表示する場合は反応の終了と見なされる。反応液をクエン酸水溶液（２０ｍＬ）と飽和食塩水（２０ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて脱水し、粗品を中圧逆相で精製し（８０ｇの工業用充填逆相カラムを使用）、勾配水／アセトニトリル（９０／１０－１０／９０、ｖ／ｖ）を精製し、時間は１時間である。白色固体化合物ＭＣ－ＭＭＡＦ（白色固体、２．０１ｇ、収率８６％、ＨＰＬＣ純度９９％ｂｙ ＵＶ ２２０ｎｍ）が得られるように純粋な製品を収集して凍結乾燥させる。ＭＳ：９２５．６６（Ｍ＋Ｈ＋）

Claims (4)

  1. 構造式が
    Figure 0007292751000031
     である化合物と構造式が
    Figure 0007292751000032
     である化合物とを溶媒において縮合反応させ、
    Ｒは、スクシンイミドであり、塩基としてのジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）により反応させ、
    前記溶媒は、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン及び２－メチルテトラヒドロフランから選ばれる一種類又は複数種類であり、
    反応温度は０℃～１００℃である、
    ことを特徴とするＭＣ－ＭＭＡＦを合成する方法。
  2. 反応温度は１５℃～５０℃である、
    ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
  3. 前記反応が完了した後に、ＭＣ－ＭＭＡＦを反応液から分離する、
    ことを特徴とする請求項１または請求項２に記載の方法。
  4. 前記分離操作は、減圧により溶媒を蒸発乾燥させ、それから、中圧クロマトグラフィーで精製又は再結晶することを含む、
    ことを特徴とする請求項３に記載の方法。
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