HU212674B - Process for producing novel cyclosporin derivatives and pharmaceutical compositions comprising them - Google Patents

Process for producing novel cyclosporin derivatives and pharmaceutical compositions comprising them Download PDF

Info

Publication number
HU212674B
HU212674B HU913446A HU344691A HU212674B HU 212674 B HU212674 B HU 212674B HU 913446 A HU913446 A HU 913446A HU 344691 A HU344691 A HU 344691A HU 212674 B HU212674 B HU 212674B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
cyclosporin
meleu
mebmt
formula
preparation
Prior art date
Application number
HU913446A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT62337A (en
HU913446D0 (en
Inventor
Pietro Bollinger
Soo Young Ko
Hans Kobel
Brigitte Rosenwirth
Dieter Seebach
Rene P Traber
Roland Wenger
Original Assignee
Sandoz Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27517009&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU212674(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from GB909023859A external-priority patent/GB9023859D0/en
Priority claimed from GB909023970A external-priority patent/GB9023970D0/en
Priority claimed from GB909023971A external-priority patent/GB9023971D0/en
Priority claimed from GB909023972A external-priority patent/GB9023972D0/en
Priority claimed from GB919116836A external-priority patent/GB9116836D0/en
Application filed by Sandoz Ag filed Critical Sandoz Ag
Publication of HU913446D0 publication Critical patent/HU913446D0/hu
Publication of HUT62337A publication Critical patent/HUT62337A/hu
Publication of HU212674B publication Critical patent/HU212674B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A61K38/13—Cyclosporins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/10—Anthelmintics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/645—Cyclosporins; Related peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/27—Cyclic peptide or cyclic protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

A találmány új ciklosporinokra és e vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására vonatkozik.
A ciklosporinok szerkezeti szempontból jól megkülönböztethető. gyűrűs, többszörösen N-melilezett undekapeptidek vegyületesoporiját alkotják, és általában farmakológiailag hatásosak: különösen immunszuppresszív. gyulladáscsökkentő és/vagv paraziták elleni hatásokkal rendelkeznek. Az elsőként izolált ciklosporin természetes eredetű gomba-metabolit. neve ciclosporin vagy eyclosporine. ciklosporin-A néven is ismert: kereskedelmi forgalomból beszerezhető, védjegyzett neve SandimmunR vagy SandimmuneR. Aciklosporin-A szerkezetét az (A) képlet ábrázolja, amelyben MBmt jelentése a (B) általános képletű N-metil(4R)-4-but-2E-en- l-il-4-metil-(L)treonil-csoport, ahol -x-y- jelentése transz-állású -CH=CH- csoport.
A ciklosporin-A felfedezése óta számos, természetes eredetű ciklosporint izolállak és azonosítottak, valamint több. a természetben nem található ciklosporint állítottak elő teljes szintézissel vagy félszintetikus úton vagy módosított tenyészetek segítségével. Ennek következtében a ciklosporinok jelenleg is igen fontos vegyületesoportot alkotnak, és ismertek például a következő típusok: a természetes eredetű. ciklosporin-Atól ciklosporin-Z-ig terjedő sorozat |Traber és munkatársai: Helv. Chim. Acta 60. 1247 (1977); 65. 1655 (1982): Köbei és munkatársai: Europ. J. Applied Microbiology and Biotechnology 14. 273 11982): valamint Wartburg es munkatársai: Progress in Allergy 36. 28 (1986)]; különböző, nem természetes eredetű ciklosporinszármazékok. valamint mesterségesen kialakított, azaz szintetikus ciklosporinok. mint például a dihidrociklosporinok. ahol a MeBmt csoportban [lásd a (B) képletet] az -x-y- csoport telített, azaz jelentése -CH-.CH2- csoport; derivanzált ciklosporinok [például olyan származékok, ahol a MeBmt csoport 3'-0 atomja acilezctt. vagy a 3-as helyzetű szarkoz.ilmaradék α-szénatomjához egy további szubsztituens kapcsolódik): olyan ciklosporinok. ahol a MeBmt maradék izomer alakban van jelen lahol tehát a MeBmt maradék 6'- és 7'-helyzete egymáshoz viszonyítva nem transz-, hanem cisz-lérállású): valamint olyan ciklosporinok. amelyekbe különböző aminosavak vannak beépítve a peptidszekvencia specifikus helyeire: ezek például a ciklosporinok előállítására R. Wcnger által kifejlesztett totálszintetikus módszerrel állíthatók elő |lásd például: Traber és munkatársai fentebb idézett közleményeit, valamint Köbei és munkatársai fentebb idézett közleményét; továbbá a 4 108 985. 4 220. 641, 4 288 431, 4 554 351. 4 396 542 és 4 798 823 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokat, a 0 034 567 A. 0 056 782 A. 0 300 784 A, 0 300 785 A és 0 414 632 A számú európai közrebocsátási iratokat, a WO 86/02080 számú PCT közrebocsátási iratot, valamint a 2 206 119 és 2 207 678 számú nagy-britanniai közrebocsátási iratokat: lásd továbbá: R Wenger: Transpl. Proc 15, Suppl. 1. 2230 (1983); Angevv. Chem. Int. Ed. 24. 77 (1985); és Progress in the Chemistry of Organic Natural Products 50. 123 (1986)].
A ciklosporinok vegyületcsoportja így igen nagy terjedelmű, és magában foglalja például a [Thr]2-, [Val]2-. [Nva]2- és [Nva]2-[Nva]5-ciklosporin-A változatokat (ezek ciklosporin-C, -D, -G és -M néven is ismertek), valamint a [3-0-acetil-MeBmt]'-ciklosporin-A-t (ciklosporin-A-acetát néven is ismert); a [dihidro-MeBmt]l-[Val]2-ciklosporin-A-t (dihidrociklosporin-D néven is ismert), a [(D)Ser]8-ciklosporin-A-t. a [Melle]11-ciklosporin-A-t, a [(D)MeVal]ll-ciklosporinA-t (ciklosporin-H néven is ismert), a [MeAla]6-ciklosporin-A-t, a [(D)Pro]?-ciklosporin-A-t és így tovább.
A ciklosporinok elnevezésére jelenleg használatos nómenklatúra szerint ebben a szabadalmi bejelentésben (és az igénypontokban) az elnevezést a ciklosporin-A-ra vonatkoztatjuk. Ennek során először megadjuk a molekulának azokat a részeit, amelyek a ciklosporin-A molekula megfelelő részeitől eltérnek, és ezt követően a ..ciklosporin-A szó kitételével meghatározzuk a molekulának azokat a részeit, amelyek a ciklosporin-A molekula megfelelő részeivel azonosak. A „dihidro megjelölést akkor alkalmazzuk, ha a fenti (B) képletben -x-y- jelentése -CH2-CH2- képletű csoport, azaz a MeBmt maradék hidrogénezett (dihidro-MeBmt). így például a [Thr]2-eiklosporin-A olyan ciklosporin, amelynek szekvekciáját az (A) képlet ábrázolja, azonban a 2-es helyzetű ocAbu-t Thr helyettesíti; a [dihidroMeBmt |l-[Val]2-ciklosporin-A pedig olyan ciklosporin. amelynek a szekvenciáját szintén az (A) képlet mutatja, azonban az 1-es helyzetű MeBmt maradék hidrogénezett. és a 2-es helyzetű aAbu-t Val helyettesíti.
Az aminosavmaradékok rövidítéseit - például Alá, MeVal. aAbu - a szokásos gyakorlatnak megfelelően használjuk, cs ha erre vonatkozó külön megjegyzést nem teszünk, akkor ezek a maradékok (L)-konfigruációjúak. Az eltérést külön jelöljük, például ,,(D )Ala Ha egy maradék röv idítcsci „Me jelölés előzi meg - például a „MeLeu esetében - akkor ez ot-N-metilezett maradékot jeleni. A ciklosporin-A molekula maradékot szokás szerint az óramutató járásával megegyező irányban, az 1-es helyzetű MeBmt vagy dihidro-MeBmt csoporttól kiindulva számozzuk. Ugyanezt a számozási rendet követjük mind a leírásban, mind az igénypontokban.
Jelenleg megfelelően bizonyított a ciklosporin-A azon hatása, hogy a T-sejt aktiválási folyamatát a TL-2 átírása iniciálásának gátlása útján megzavarja, jóllehet ennek mechanizmusát mindeddig nem derítették fel pontosan. Kimutatták, hogy a ciklosporin-A egy 17 kD (ki!odalton) molekulatömegű citoszöl-fehérjével (cikloí'ilinnel) komplexet képez, ez a ciklofilin számos sejttípusban előfordul, és igazolták, hogy azonos a peptidilprolil cisz-transz izomeráz enzimmel, amely szerepet játszik a fehérjék redőképződésében. Mindeddig azonban nem vált világossá, hogy a ciklofilinnel végbemenő kötődés közvetlenül összefüggésben van-e a ciklosporinok immunszuppresszív hatásával, vagy a ciklofilinnel történő kapcsolódás önmagában is az immunszuppresszív hatékonyság elegendő kritériuma.
A jelen találmány olyan ciklosporinok előállítására vonatkozik, amelyek a HÍV-1 replikációs folyamata ellen hatásosak.
HU 212 674 Β
Az emberi immunhiányt előidéző vírus (immunhiány-vírus. rövidítve: HÍV) elsősorban az immunválaszt elősegítő helper („T-helper; T4) limfocitákat fertőzi, jóllehet különböző más sejttípusokban is replikálódik, különösen a monocitákból eredő törzsekben. Ez a vírus az immunrendszer lassan súlyosbodó (progrediáló) betegségét okozza, amelyre jellemző a T4-sejtek fokozatos lebomlása. A betegség rövidített neve: AIDS. Az AIDS betegséget kísérő további immunológiai abnormalitások: a citotoxikus/szuppresszor (T8) limfociták számának növekedése, az antigén-kialakítási/felismerési folyamat hiánya, valamint a B-sejtek poliklonális aktiválódása. A T4-sejtek lebomlásának mechanizmusa jelenleg még nem világos. Úgy látszik, hogy viszonylag kevés T4 sejt fertőződik, tehát a vírus sejtkárosító (citopátiás) hatása nem lehet a T4-sejtek fogyásának kizárólagos oka. Feltételezték, hogy a T4-sejtek lebomlását egy HIV-termelő vagy HIV-fehérjével bevont T4sejtek által kiváltott autoimmun folyamat megnövelheti. Ez a folyamai antigén-serkentés a T4-sejtek állandó aktiválási állapotához vezethet, ez fokozhatja e sejtekben a HÍV replikációját. és megnövelheti a T-sejtckkel szemben citotoxikus kiónok számát. A nem fertőzött T4-sejtek az exogén vírus-gpl20-nak a CD4 molekuláihoz történő kötődése következtében antigén jellegűvé és így a T-sejtekre nézve citotoxikus válasz célpontjaivá válhatnak.
A 4 814 323 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban kinyilvánítják, hogy a ciklosporin-A AIDS-elleni hatással rendelkezik, és az ..immunszuppress/orként ismert ciklosporinok ezen az indikációs területen alkalmazhatók. Nem közlik azonban, hogy immunszuppresszív hatással nem rendelkező ciklosporinok várhatóan ugy anilyen hatással bírnak.
Meglepő módon azt találtuk, hogy a ciklofilinhez kapcsolódó, azonban immunszuppresszív hatással nem rendelkező ciklosporinok a HIV-1 vírus replikációjára gátló hatást fejtenek ki.
Egy ciklosporint akkor tekintünk ciklofil inhez kötődő ciklosporinnak. ha a rekombináns emberi ciklofilinnel végbemenő kötődése legalább ötöd része a ciklosporin-A kötődésének a kompetitív ELISA mérőmódszer alapján |a módszer leírását lásd: Quesniaux: Eur. J. Immunoi. 17. 1359 (1987)]. E meghatározás során a vizsgálandó ciklosporint a ciklofilinnek a bevont BSA-ciklosporin-A-val végzett inkubálása alatt adjuk az elegyhez, és kiszámítjuk azt a koncentrációt, amelynek alkalmazásával a kompetitív anyag nélkül végbemenő kontrollreakció 50%-ban meggátolható (IC50-érték). Az eredményt kötési arány („binding ratio”. rövidítve: BR) alakjában fejezzük ki: ez az érték a vizsgálandó vegyület 1C5O értéke és a ciklosporin-A párhuzamos vizsgálatban mutatott IC50 értéke hányadosának 10 alapú logaritmusa. Ennek alapján az 1.0 BR-érték az mutatja, hogy a vizsgálandó vegyület tízszer kevésbé kötődik a ciklofilinhez, mint a ciklosporin-A; ha a BR-érték negatív, akkor a vizsgálandó vegyület erősebben kötődik a ciklofilinhez. mint a ciklosporin-A.
A HÍV vírus ellen hatásos ciklosporinok BR-értéke
0,7-nél kisebb (mivel log)0 5 értéke megközelítőleg 0.7). előnyösen zérus vagy még kisebb érték.
Egy ciklosporint akkor tekintünk nem-immunszuppresszív jellegűnek, ha a vegyes limfocita-reakcióban (..mixed lymphocyte reaction. rövidítve: MLR) mutatott hatása a ciklosporin-A hatásának legfeljebb 5%-a, előnyösen legfeljebb 2%-a. A vegyes limfocitareakció leírása megtalálható a következő helyen: T. Meo: ..Immunological Methods, szerk. L. Lefkovits és B. Peris, Academic Press, N. Y„ 227-239. old. (1979). Balb/c törzsű. 8-10-hetes nőstény egerekből származó 0.5x106 lépsejtet öt napon át együtt inkubáltunk CB A törzsű. 8-10-hetes nőstény egerekből származó, 2000 rád erősségű sugárzással vagy mitomicin C-vel kezelt 0,5xl06 lépsejttel. A besugárzott, allogén sejtek burjánzást (proliferációs) választ váltottak ki a Balb/c törzsű lépsejtekben, és ezt jelzett prekurzornak a DNS-be építése útján mértük. Mivel a serkentő (stimuláló) sejteket besugároztuk (vagy mitomicin C-vel kezeltük), azok a Balb/c sejtekkel szemben burjánzást választ nem adtak, hanem megtartották antigén jellegüket.
A vizsgálandó vegyületnek a vegyes limfocita-reakcióban talált IC5()-értékét párhuzamos kísérletben a ciklosporinnal mért értékkel hasonlítottuk össze.
A ciklosporinok HÍV-1 vírus replikációját gátló hatása az alábbi tesztrendszerek alkalmazásával igazolható.
/. ,4 HÍV-1 -kiváltotta sejtkárosító teitopátiás) hatás gátlása MT4-sejtekben
Pauwels és munkatársai mérőmódszerét [J. Virol. Meth. 20. 309 (1988)] alkalmaztuk kisebb módosításokkal. A MTLV-l-vel transzformált T4-sejttörzset (MT4törzset) - amelyről előzőleg kimutatták, hogy HlV-fertőzésre nagyon hajlamos - alkalmaztuk célsejtként. AHIV1, HTLV-IIIB törzs által kiváltott sejtkárosító hatás gátlását úgy határoztuk meg. hogy megmértük egyrészt HIVvírussal fertőzött, másrészt imitáltan fertőzött sejtek életképességét. Az életképességet spektrofotometriásán a 3(4.5-dimelil-tiazol-2-il)-2.5-difeniI-teirazólium-bromid (rövidítve: MTT) in situ redukciójával értékeltük ki. Kísérleteink során vírussal fertőzött és nem fertőzött, hozzáadott vegyületet nem tartalmazó tenyészeteket, valamint hozzáadott vegyületet tartalmazó, nem fertőzött tenyészeteket alkalmaztunk kontrollként. A sejtkoncentrációi úgy választottuk meg, hogy a sejtek száma ml-enként az imitáltan fertőzött tenyészetek 4-napos inkubálása során egy 10-es faktorral növekedjék. A vírusoltványt (inokulumot) úgy méreteztük, hogy 4-napos inkubálás során a célsejtek 90%-ának elhalását idézze elő. A vírust tízszeres mennyiségű koncentrált sejlszuszpenzióra adszorbeáltattuk 37 °C hőmérsékleten 1 órán át. Ezt követően a fertőzött sejteket 1:10 arányban hígítottuk, és a vizsgálandó vegyületet tartalmazó mikrotitráló lemezekre vittük.
2. Sejttoxicitás (citotoxicitás) vizsgálata
Abból a célból, hogy a HÍV elleni potenciális hatást további .sejttörzseken, különösen monocita sejttörzsön (U937) kiértékeljük, előbb meghatároztuk a vizsgálan3
HU 212 674 Β dó vegyületnek ezen sejttörzsekre kifejtett citotoxikus hatását. Jurkat- és U937 (általánosan használt sejtvonalak; beszerezhetők pl. az ATCC-től) sejtszuszpenziókat lxl 05 sejt/ml koncentrációra állítottunk, és a vizsgálandó vegyület különböző koncentrációinak a jelenlétében inkubáltunk. 48 óra elmúltával a sejt/ml értékeket MTT-vel végzett festés útján hasonlítottuk össze. Az MT4-sejtekre kifejtett citotoxikus hatás ugyanilyen módon mérhető.
3. A replikációjának gátlása Jurkat- és
U937 sejtekben
Jurkat T4-sejttörzset és U937 monocita sejttörzset úgy fertőztünk, hogy a sejteket 10-szeres mennyiségű koncentrált vírusoldatban szuszpendáltuk. Az adszorpciós folyamatot 2 órán át 37 °C hőmérsékleten hagytuk végbemenni, majd a sejteket lecentrifugáltuk, az inokulumot eltávolítottuk. és a sejteket az eredeti koncentrációban a vizsgálandó vegyületet tartalmazó, friss tenyésztőközegben ismét szuszpendáltuk. így tehát a vizsgálandó vegyületet az adszorpció után adtuk az elegyhez. A fertőzés után 2. 5. 8. 12. 15. illetve 19 nappal a fertőzött tenyészetekből alikvot részeket vettünk ki. A sejteket lecentrifugáltuk. és a felülúszót összegyűjtöttük. A felülúszóban meghatároztuk a vírusból származó p24 antigén koncentrációját kereskedelmi forgalomból beszerezhető ELISA mérőkészlet (kit) segítségével, és ezt tekintettük a vírusszaporodás paraméterének. Minden egyes alikvot eltávolítása után a sejteket megszámláltuk, és a vizsgálandó vegyületet a megfelelő koncentrációban tartalmazó, friss közeg hozzáadásával 2xlO5 sejt/ml koncentrációra állítottuk.
A találmány szerinti - azaz nem-immunszuppreszszív. ciklofilinhez kötődő HJV-1 vírussal szemben hatásos ciklosporinok közül (hatásos vegyületek) egyesek újak. mások ismertek; az ismert, hatásos vegyületek egy részéről nem nv ilvánították ki. hogy bármilyen farmakológiai hatással rendelkeznének.
Azt találtuk, hogy számos hatásos vegyület szerkezete konkrétan a 4-es és/v agy 5-ös helyzetekben különbözik a ciklosporin-A-étől.
A hatásos vegyületek egyik csoportját alkotják az olyan ciklosporinok. amelyekben a 4-es helyzetű MeLeu csoportot egy másik N-metilezett aminosav - például γhidroxi-Mc-Leu. Melle. MeVal, MeThr vagy MeAla helyettesíti. A Melle-n és MeThr-on kívül a Mealle és MeaThr allo-formák is alkalmazhatók. Az alloformában a β-helyzet sztereokémiái jellege a természetes eredetű aminosav konfigurációjával ellentétes, azaz a normál forma és az allo-forma diasztereoizomer párt képvisel.
A hatásos vegyületek egy másik csoportjában az 5-ös helyzetű Val-t egy N-alkil-. előnyösen N-metil-aminosav helyettesíti. Ez az aminosav előnyösen N-alkilezetl Val vagy Leu. A [Val]5 iminocsoportjának hidrogénatomját előnyösen el nem ágazó 1-6 szénatomos alkilcsoport, célszerűen metil-, etil- vagy n-propil-. különösen metilcsoport helv ettesíti. A hatásos vegyületeknek ez az utóbbi. előnyös csoportja új vegyületekből áll.
Új hatásos és ismert hatásos referencia-vegyületek a következők:
a) [dihidro-MeBmtl'-ly-hidroxi-MeLeulVciklosporinA (Új)
b) [MeVal]4-ciklosporin-A (új)
c) [Melle]4-ciklosporin-A (új)
d) [MeThr]4-ciklosporin-A (új)
e) [y-hidroxi-MeLeu]4-ciklosporin-A (ismert)
f) [Nva]2-y-hidroxi-MeLeu]4-ciklosporin-A (új)
g) [y-hidroxi-MeLeu]4-[y-hidroxi-MeLeu]6-ciklosporin-A (új)
h) [MeVal]5-ciklosporin-A(új)
i) [MeOThr]:-[(D)MeAla]'-ciklosponn-A (új)
j) [S'-hidroxi-MeBmtj'-ciklosporin-A (ismert)
k) [MeAla]6-ciklosporin-A (ismert) és
l) [y-hidroxi-MeLeu]9-ciklosporin-A (ismert)
A fentiek alapján a találmány eljárás a (II) általános képletű új ciklosporin-származékok előállítására - ahol a képletben
W'jelentése MeBmt vagy dihidro-MeBmt-csoport;
X jelentése α-Abu. Val. Thr. Nva vagy MeOThr csoport;
R jelentése Sár vagy (D)-MeAla csoport;
Y jelentése MeLeu. gamma-hidroxi-MeLeu. Melle,
MeVal. MeThr. MeAla. Mealle vagy MeaThr csoport; és
Z jelentése Val. Leu. MeVal vagy MeLeu csoport, azzal a megkötéssel, hogy (1) ha Y MeLeu vagy MeAla csoportot jelent, akkor Z jelentése MeVal vagy MeLeu csoport; és (2) ha W' MeBmt csoportot. R Sár csoportot cs Y gamma-hidroxi-MeLeu csoportot jelent, akkor Z jelentése Val-tól eltérő. A találmány értelmében úgy járunk el. hogy
a) azon (II) általános képletű vegyületek előállítására. ahol W' jelentése MeBmt. X jelentése alfa-Abu, R jelentése Sár csoport. Y jelentése Melle csoport és Z jelentése Val csoport, egy Tolipocladium inflatum fajhoz tartozó törzset megfelelő tápközegben tenyésztünk. majd a termékei a fermentléből elkülönítjük:
b) azon (II) általános képletű vegyületek előállítására, ahol Y jelentése gamma-hidroxi-MeLeu csoport, egy vagy több MeLeu csoportot tartalmazó (I) általános képletű ciklosporint - ahol X. R és Z jelentése a tárgyi körben megadott és Y jelentése gamma-hidroxi-MeLeu kivételével a tárgyi körben megadott -. előnyösen ciklosporin-A-t hidroxilezünk oly módon, hogy egy Sebekia benihana fajhoz tartozó gombatörzs tenyészetéhez adjuk, majd a hidroxilezett termékei a fermentléből elkülönítjük;
c) azon (II) általános képletű vegyületek előállítására. ahol Z jelentése MeVal csoport, egy, az 5-ös helyzetben Val csoportot tartalmazó (1) általános képletű ciklosporint - ahol X, R, Y jelentése a fenti és Z jelentése Val -. előnyösen ciklosporin-A-t vagy ciklosporin-C-t, N-metilezünk;
d) azon (II) általános képletű vegyületek előállítására. ahol W'jelentése dihidro-MeBntt csoport, egy, az 1-es helyzetben MeBmt csoportot tartalmazó (I) általános képletű ciklosporint - ahol X. R. Y és Z jelentése a fenti - hidrogénezünk; vagy elegy, a (II) általános képletnek megfelelő tizenegy aminosavat tartalmazó lineáris pepiidet szintetizálunk és pepiid két végét ciklosporinná kapcsoljuk össze.
HU 212 674 Β
A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint úgy állítunk elő a (II) általános képletű vegyületek szűkebb csoportját képező vegyületeket - ahol a képletben
W'jelentése MeBmt vagy dihidro-MeBmt; X jelentése a-Abu;
Y jelentése gamma-hidroxi-MeLeu, MeVal. MeThr vagy Melle és
Z jelentése Val vagy MeVal. R jelentése Sár; azzal a megkötéssel, hogy ha W' jelentése MeBmt, akkor Y csak gamma-hidroxi-MeLeu-tól eltérő jelentésű lehet hogy a fentebbi a)-e) eljárásváltozatok bármelyike szerint járunk el.
[Melle]4-ciklosporint célszerűen úgy állíthatunk elő. hogy a Tolipocladium inflatum DSM 6627 gombatörzset alkalmas tápközegben tenyésztjük, majd a terméket a fermentléből elkülönítjük.
Az új. hatásos vegyületek egyik előnyös csoportját képviselik azok a vegyületek, amelyek fii) általános képletében X X' csoportot. Y Y' csoportot és Z Z' csoportot jelent, azzal a megkötéssel, hogy ha W' MeBmt csoportot jelent, akkor Y' jelentése a γ-hidroxiMeLeu csoporttól eltérő.
Különösen előnyös új. hatásos vegyületek a fenti
a), b). c). dl. f) és h) vegyületek. Ezek közül egyesek, így a b) és e) vegyület esetében az találtuk, hogy a ciklosporin-A immunszuppresszív hatását úgy gátolják. hogy megakadályozzák a kötődéséi a ciklofilinhez. s így a ciklosporin-A antagonistáiként hatnak.
Miként a fentiekből kitűnik, a hatásos vegyületek több úton állíthatók elő. s ezek az eljárások a következőképpen osztályozhatók:
1. fermentáció.
2. biotranszformáció.
3. származékok kialakítása.
4. részleges szintézis és
5. tolálszintézis.
1. Egyes hatásos vegyületek ciklosporin-A termelő mikroorganizmusok - így a Tolypocladium inflatum Gams eredeti vagy módosított törzseinek fermentációja során melléktermékekként képződnek: ezt az alábbiakban az 1. példában a e ι vegyület előállításával szemléltetjük.
2. Más hatásos vegyületek - közöttük az ismert j) és 1) vegyületek - a cikiosporin-A mctabolitjai. és így eiklosporin-A-val kezelt emberek vagy állatok vizeletéből kromatográfiás úton elkülöníthetők. Ezek és más. ametabolizmus során lejátszódó transzformációk mikroorganizmusok alkalmazásával is elérhetők; erre példa az e) és g) vegyületek előállítása a ciklosporin-A biotranszformációjával, nevezetesen a MeLeu-csoportok hidroxilezésével, amim ezt a 2. és 3. példában ismertetjük; vagy az fj vegyület előállítása ciklosporin-G biotranszformációjával (lásd a 4. példát). E példák új eljárást mutatnak be olyan ciklosporinok előállítására, amelyek egy vagy több γ-hidroxi-MeLeu maradékot tartalmaznak. Ez az eljárás abban áll, hogy új. módosított Sebekia benihana törzset tenyésztünk, a tenyészethez egy vagy több MeLeu maradékot tartalmazó ciklosporint adunk, majd a terméket a fermentléből izoláljuk.
3. Származékok kialakításán (derivatizáláson) azt értjük, hogy természetes eredetű vagy szintetikus ciklospormokat alakítunk hatásos vegyületekké olyan módon. hogy egy vagy több kémiai reakcióval egy vagy több aminosavat (aminosavmaradékot) a peptidkötések felnyitása és ismételt kialakítása nélkül módosítunk, így például a hatásos vegyületeknek egy csoportját ahol az 5-ös helyzetű Val N-alkilezett - előállíthatjuk úgy. hogy a megfelelő. 5-ös helyzetben Val-t tartalmazó ciklosporint előbb butil-lítiummal kezeljük, és az így kapott terméket alkilezőszerrel hozzuk reakcióba. Ezt az eljárást az 5. példában a h) vegyület előállításával. valamint a 6. példában az i) vegyület előállításával szemléltetjük.
További példaként említjük, hogy az a) vegyület előállítható az e) vegyület hidrogénezésével (lásd a 7. példát): és a j) vegyület - amely egyszersmind a ciklosporin-A fő metabolitja - a 8. példa szerint az ismert ciklosporin-A-acetátból kapható.
4. A részleges (parciális) szintézis kémiai reakciók olyan sorát jelenti, amelyben a természetes eredetű eiklosporin gyűrűjét felnyitjuk, egy vagy több aminosavat eltávolítunk, különböző armnosavakat építünk be. majd a gyűrűt ismét zárjuk.
5. A ciklosporinok teljes szintézise (totálszintézise) úgy hajtható végre, hogy előbb egy lineáris undekapeptidet alakítunk ki. és ezt ciklizáljuk R. Wenger leírása szerint (lásd a fentebb idézett helyen). Éne vonatkoznak továbbá a 4 396 542 és 4 798 823 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások is. Elvben bármelyik eiklosporin előállítható teljesen szintetikus úton. azonban ha más módszer is rendelkezésre áll. akkor az a totálszintézisnél célszerűbb lehet. Totálszintézist alkalmazhatunk például a d) vegyület előállítására (lásd a 9. példát), valamint az ismert 1) melabolit-vegyület előállítására.
A k) vegyület ismert, sajátságait Quesniaux és munkatársai ismertették |Mol. Immunoi. 24. 1159 (1987)}. és szintén előállítható totálszintetikus úton. Ilyen szintézist ismertetnek például a 4 914 188 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban.
A találmányt az alábbi, nem korlátozó jellegű példákban részletesen ismertetjük.
/. példa [Melle f-ciklosporin-A [c) vegyidet] előállítása
A termelő törzs
A e) vegyületet a Tolypocladium inflatum Cy E 4556 gombatörzs (amelyet a Deutsche Sammlung für Mikroorganismen intézménynél az 1991. július 24-én DSM 6627 letéti számmal deponáltunk a Budapesti Szerződés előírásai szerint) fermentációjával állítjuk elő. Ez a törzs a Tolypocladium inflatum Gams gombafaj NRRL 8044 törzsének egyik mutánsa, és taxonómiai szempontból az anyatörzzsel azonos, amelyet például az. 1 491 509 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban részletesen ismertettek.
Tenyésztés
I. ,4 kiinduló agartenyészet készítése
A DSM 6627 törzs ferdeagar-tenyészeteit 14 napig
HU 212 674 Β ’C hőmérsékleten növesztjük az alábbi összetételű agarközegen:
élesztőkivonat (Gistex I 4 g malátakivonat (Wander) 20 g agar 20 g ásványmentesített víz: amennyi szükséges lOOOml-hez
A közeg pH-értéke 5,4-5,6. A közeget 20 percig 120 °C hőmérsékleten sterilizáljuk.
2. Előtenyésztés
Négy kiinduló tenyészetből származó micélium spóráit 40 ml 0.9%-os sóoldatban szuszpendáljuk. E szuszpenzió 20 ml-nyi térfogatával oltást végzünk 500 ml-es Erlenmeyer-lombikok sorozatában, amelyek mindegyike 100 ml előtenyésztő közeget tartalmaz. E közeg összetétele a következő:
kazein (Amber EHC) 25 g maltóz 75 g
KHTO4 I g
KCÍ 2.5 g ásványmentesített víz: amennyi szükséges lOOOml-hez
A közeg pH-értékct sósavval 5.2-5.5-re állítjuk, majd 20 percig 120 ’C hőmérsékleten sterilizáljuk. Az előtenyészeteket 24 órán át 27 ’C hőmérsékleten percenként 2(K) fordulatszámmal forgó-rázóasztalon fermentáljuk (a rázóasztal lökethossza 50 mm).
3. Közbenső (intermedier) tenyészet
Húsz liter előtenyésztő közeget tartalmazó 25 literes aeclfermentort 200 ml térfogatú előtenj eszeltei oltunk. A közbenső tenyészetet 5 napig 27 ‘C hőmérsékleten fermentáljuk percenként 150 keverőfordulattal, miközben levegőáramot vezetünk át 0.5 Iitcr/perc/liter közeg sebességgel 50 kPa nyomáson.
4. Főtenxészet
Száz liter előienyésztett közeget 10 liter közbenső tenyészettel oltunk, és 120 literes acclfermcntorban fermentáljuk. Ehhez a közeghez 4 g/liter D-trconint adunk, majd szűréssel sterilizáljuk. A fermentációt 27 ’C-on 14 napig, percenként 70 keverőfordulattal végezzük, miközben 0.4 liter/pere/liter közeg sebességgel 50 kPa nyomáson levegőáramot vezetünk át a fermentáció első 5 napja alatt, majd a keverés sebességét percenkénti 100 fordulatra és a légáram mennyiségét 0.5 liter/percre növeljük a fermentációs időszak hátralevő részében.
Izolálás 50
A micéliumot a tenyésztőközegtől elválasztjuk, és Turrax-berendezésben keverés és őrlés közben háromszor extraháljuk 10 liter 9:1 térfogatarányú metanol-víz eleggyel. Az őrölt micéliumot az oldószertől leszívató szűréssel elkülönítjük, és az egyesített szűrletet váku- 55 untban 40 ’C hőmérsékleten addig pároljuk, amíg már főként csak vízgőzök távoznak. Az így kapott elegyet négyszer extraháljuk 2 liter 1.2-diklór-etánnal. és az egyesített diklór-etános oldatot 40 ’C hőmérsékleten vákuumban bepároljuk. 60
A maradékot szilikagéloszlopon kromatografáljuk (ehhez 10 kg szilikagélt használunk, amelynek szemcsemérete 0,02-0,045 mm. ..Grace típus). Eluálószerként etil-acetát és víz keverékét alkalmazzuk, és 2,5-li5 teres frakciókat veszünk. A 20-23. frakciókat - amelyek [MeIle]4-ciklosporin-A-t tartalmaznak - összegyűjtjük. és szilikagéloszlopon ismételten kromatografáljuk (ehhez 600 g szilikagélt használunk, melynek szemcsemérete 0,04-0,063 mm, Merck gyártmány). 10 Eluálószerként kloroform és metanol 98:2 térfogatarányú elegyét alkalmazzuk, és 300 ml térfogatú frakciókat veszünk. További tisztítást végzünk szilikagéloszlopon (ehhez 400 g szilikagélt használunk, amelynek szemcsemérete 0,04-0.063 mm, Merck 15 gyártmány), eluálószerként diklór-metán és metanol 98:2 térfogatarányú elegyél alkalmazzuk, és 200 ml térfogatú frakciókat veszünk. így amorf, fehér por alakjában tiszta [MeIle]4-ciklosporin-A-t kapunk, op.: 155-158 C. [α)ρ =-235’ (c = 0,68, kloroformban), il20 letve -193’ (c = 0.74. metanolban).
A diklór-metánban felvett IR színképet az 1. ábrán, a CDCL-ban felvett Ή-NMR színképet a 2. ábrán mutatjuk be.
2. példa íy-Hidroxi-MeLeufi-ciklosporin-A le) vegyidet] előállítása
Az e) vegyületet úgy állítjuk elő. hogy a ciklosporin-A-t Sebekia benihana mikroorganizmussal bio30 transzformáljuk. Az alkalmazott eredeti törzs neve NRLL 11 111. a Sebekia benihana fajhoz tartozik (Dietz és Li: Sebekia. az Actinoplanaceae család egy új neme. 82nd Ann. Meet. Amer. Soc. Mierobiol. Atlanta 1982. Konferencia Abstracts 163. old.). Ez a törzs 35 képes a novobiocin (Merck Index 11. Kiadás: 6641) hidroxilczésére. A szubkultúrázott törzset - amelyet az
e) vegyület és rokonvegyületek előállítására alkalmaztunk - a Germán Collection of Microorganisms intézménynél (D-3300 Braunschweig) DSM 6182 letéti 40 számmal deponáltuk. 1990. 09. 20-án.
/. ,t kiinduló agartenyészet
DSM 6182 törzs ferdeagar-tenyészeteit 10 napig 27 ’C hőmérsékleten az alábbi összetételű agarközegen növesztjük:
glükóz 10 g oldható keményítő 20 g élesztőkivonat (Gistex) 5g pepton (N-Z-amine, A típus, Sheff’ield) 5 g
CaCO, 1 g agar(Bacto) 18 g ásvány mentesített víz: amennyi szükséges 1 literhez
A pH értéket nátrium-hidroxiddal vagy kénsavval
7-re közömbösítjük, majd az elegyet 120 ’C-on 20 percig sterilizáljuk.
2. Előtenyészet
Egv kiinduló tenyészet spóráit és micéliumát 10 ml 0.99!-os sóoldatban szuszpendáljuk. E szuszpenzió
HU 212 674 Β τ
ml térfogatával oltást végzünk 200 ml-es Erlenmeyer-lombikok sorozatában, amelyek mindegyike 50 ml előtenyésztő közeget tartalmaz. E közeg összetétele a következő:
glükóz 7 g oldható keményítő 10 g élesztőkivonat (Gistex) 4.5 g malátakivonat (folyékony. Wander) 10 g pepton (N-Z-amine. A típus. Sheffield) 2.5 g
CaCO, 1 g
235. számú nyomelemoldat 1 ml ásványmentesített víz: amennyi szükséges 1 literhez
A közeg pH-értékét nátrium-hidroxiddal vagy kénsavval 7-re állítjuk, és 120 °C-on 20 percig sterilizáljuk.
A 235. számú nyomelemoldat a következő komponensekből áll:
H,BO, 0,1 g
FeSO4.7H2O 5 g
KJ ’ 0.05 g
COC12.H2O 2 g
CuSO4.5H2O 0.2 g
MnCl2.4HiO 2 g
ZnSO4.7H2O 4 g ásványmentesíteti víz: amennyi szükséges 999 ml-hez
97%-os kénsav 1 ml
Az előtenyészeteket 4 napig 27 ’C-on forgó-rázóasztalon percenként 200 fordulattal. 50 mm lökelhosszal fermentáljuk.
3. Közbenső tenyészet
200 ml-es Erlenmeyer-lombikok sorozatát, amelyek mindegy ike 50 ml előtenyésztő közeget tartalmaz. 5 ml előteny észettel oltjuk. A közbenső tenyészetet három napig 27 °C hőmérsékleten forgó-rázóasztalon percenként 200 fordulalszámmal. 50 mm lökethosszal fermentáljuk.
4. Főienyészet
500 ml-es Erlenmeyer-lombikok sorozatát, amelyek mindegyike 50 ml fő-tenyészetközeget (összesen 12 litert) tartalmaz. 5 ml közbenső tenyészettel oltjuk. E tenyészeteket 3 napig 27 °C hőmérsékleten forgó-rázóasztalon 200 percenkénti fordulattal. 50 mm lökethosszal fermentáljuk. 24 óra eltelte után minden egyes főtenyészethez metanolban oldott 7.5 mg ciklosporinA-t adunk (ez 150 mg/liter koncentrációt jelent ).
A fő-tenyésztőközeg komponensei az alábbiak:
cerelóz lOg
dextrin 10 g
oldható keményítő lOg
élesztőki vonat (Gistex) 2.5 g
szójaliszt (Nurupan. Edelsoya) 12,5 g
K,HPO4 0.25 g
kh2po4 0.12 g
MgSO4.7H,O 0.10g
CaCI2.6H2Ó 0.05 g
AC-l jelű nyomelemoldat 1 ml
ásványmentesített víz: amennyi szükséges 1 literhez
A pH értékét kálium-hidroxiddal vagy kénsavval
7.2-7.5-re állítjuk, és az elegyet 120 °C-on 20 percig sterilizáljuk.
Az AC-1 jelű nyomelemoldat összetétele a 235. számú oldatéval azonos, azzal az eltéréssel, hogy 0,2 g (NH4) hMo7O24 vegyületet is tartalmaz.
5. Elkülönítés
A micéliumot a tenyésztőközeghői elkülönítjük, és az így kapott 13 liter térfogatú szűrt tenyészetei háromszor extraháljuk egyenként 1.5 liter 1,2-diklór-etánnal. Az egyesített diklór-etános fázist vákuumban 40 °C-on bepároljuk, és az így kapott nyers maradékot Sephadex LH-20 gyantán gélszűrésnek vetjük alá. Eluálásra metanolt alkalmazunk. A ciklosporin-vegyületeket (összesen 525 mg) tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, és 0.04-0.063 mm szemcseméretű. Merck-gyártmányú 50 g szilikagélen kromatografáljuk. Eluálószerként kloroform és metanol elegyét alkalmazzuk. Ismételt kromatográfia után - aminek során ugyanazt a rendszert alkalmazzuk - amorf, fehér por alakjában tiszta |y-hidroxi-McLeu]4-ciklosporin-A-i kapunk, op.: 150153 C. |a]$ =-225° (c = 0.53. kloroformban), illetve -171 (c = 0.44. metanolban).
3. példa
If-Hidroxi-MeLeii fi-jy-hidioxi-MeLeuR-ciklosporin-A lg) vegyület] előállítása
A |y-hidroxt-MeLeul4-ciklosporin-A tisztításából származó, polárisabb jellegű mellékfrakciókat további elkülönítésnek vetjük alá szilikagélen (szemcsemérete 0.04-0.063 mm) ismételt oszlopkromatográfiával. Eluálószcrkcnt aceton és hexán 2:1 arányú elegyét alkalmazzuk Ezt követően szilikagélen kromatografálunk. és eluálószerként metil-(ierc-butil)éter/metanol/víz 90:9:1 arányú elegyét alkalmazzuk. Az első frakciók |y-hidroxi-Leu]4-ciklosporin-A-t tartalmaznak, amelyet csontszenes derítéssel tisztítunk, és így tiszta terméket kapunk amorf, fehér por alakjában, op.: 162— 164 ’C. |cx|jj = — 221° (c = 0.50. kloroformban), illetve -157’ le = 0.52. metanolban).
A szilikagéloszlopon végzett kromatografálásból származó, későbbi frakciók |y-hidroxi-MeLeu]4-[y-hidroxi-McLcu]6-ciklosporin-A-t tartalmaznak. A további tisztítást csontszenes derítéssel végezzük, s így amorf, fehér por alakjában kapjuk a cím szerinti tiszta terméket. op.: 157-160 °C [a]g’ = -217“ (c = 0.54, kloroformban), illetve -176° (c = 0,42, metanolban).
4. példa /Nva]2-l'{-hidroxi-MeLeu fi-ciklosporin-A ff) vegyidet] előállítása
E vegyületet az e) vegyület előállítása során alkalmazott eljáráshoz hasonlóan állítjuk elő, kiindulási anyagként azonban ciklosporin-G-t ([NVAp-ciklosporin-A-t) használunk. Szilikagéloszlopon végzett ismételt kromatografálással tisztítva, eluálószerként vízzel
I
HU 212 674 Β telített etil-acetátot. valamint aceton és hexán 2:1 arányú elegyét alkalmazva a cím szerinti vegyületet amorf, fehér por alakjában kapjuk, op.: 138-141 ’C [a]§ - -123' (c = 0,69. kloroformban), illetve -168' (c = 0.70. metanolban).
5. példa
IMeValp-ciklosporin-A fh) vegyület] előállítása
0.60 g (0.5 mmol) ciklosporin-A 20 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát 0,63 ml 1,6 mólos hexános butil-lítium-oldattal (1,0 mmol) reagáltatjuk. Az így kapott oldatot 0,1 ml (1.5 mmol) dimetil-szulfáttal -78 'C-on kezeljük, majd a reakcióelegyet lassan szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, és másnapig keverjük.
A cím szerinti vegyületet gyorskromatográfiás úton („flash kromatográfiával) különítjük el. amit szilikagélen végzünk. Eluálószerként 5% metanolt tartalmazó étert használunk. A tisztítást fordított fázisú túlnyomásos kromatográfiával folytatjuk, s így kapjuk a cím szerinti, tiszta terméket, amelyet CDCl?-ban 300 MHz frekvencián felvett 'H-NMR színképével jellemzünk llásd a 3. ábrái).
6. példa
IMeOThrp-ll D)MeAlaf-l Me Va l p-cik lospa fin-A (i) vegyület] előállítása
480 ml absz. tetrahidrofurán és 6.96 g (49.2 mmol) diizopropil-amin elegyét -80 °C-ra hűtjük. és injekciós fecskendővel lassú ütemben 33.5 ml 1.33 mólos hexános hutil-lítium-oldatot (44.5 mmol) adunk hozzá. A reakcióelegyet -80 “C-on 30 percig keverjük, majd injekciós fecskendővel 120 ml absz. tetrahidrofuránban oldott 8 g (6.6 mmol) ciklosporin-C-t ([Thrp-ciklosporin-A-t) adagolunk hozzá 2-3 perc alatt. A tiszta oldatot 1 órán át -80 ‘C-on tovább keverjük, majd lassú ütemben 2.06 ml metiljodidot adagolunk hozzá.
A reakcióelegyet 2 óra alatt szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, majd 40 ml vizel adunk hozzá, és az oldószereket forgóbepárló készülékben 30 'C hőmérsékleten 2 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot víz és éter között megoszlatjuk, az éleres fázist négyszer mossuk félig telített konyhasóoldattal, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, és bepároljuk. Az így kapott. 8.1 g tömegű maradékot 1200 g szilikagélen kromatografáljuk; eluálószerként vízzel telített etilacetátot használunk, és így egy nyers termékhez jutunk. Ezt ismételten kromatografáljuk 200 g szilikagélen, eluálószerként 5% metanolt tartalmazó diklór-metánt alkalmazunk, és így a cím szerinti termékhez jutunk [ö)d = -195° (c = 1.0, kloroformban).
7. példa
IDihidro-MeBnitp -[y-liidroxi-MeLeu fi-ciklosporin-A ja) vegyüldl előállítása 200 mg előzetesen hidrogénezett 10%-os csontszenes palládiumkatalizátor és 4 ml etanol szuszpenziójához 1,2 g [y-hidroxi-MeLeu]4-ciklosporin-A [e) vegyület] 10 ml etanollal készült oldatát adjuk, és az elegyet szobahőmérsékleten a hidrogénfelvétel befejeződéséig hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után kapott oldatot bepároljuk, és így a cím szerinti vegyületet amorf, fehér por alakjában kapjuk, op.: 154-156 °C, [a]o = -225' (c = 0,87. kloroformban), illetve -169° (c = 0.70. metanolban).
8. példa l8-Hidroxi-MeBmt]}-ciklosporin-Α lj) vegyület] előállítása
1. lépés:
[O-Acetil-ta-bróm-MeBmtp-ciklosporin-A előállítása
25.0 g (20 mmol) [O-acetil-MeBmtj'-ciklosporinA [Traber és munkatársai: Helv. Chim. Acta 65, 1653 (1982)]. 4.4 g (25 mmol) N-bróm-szukcinimid és 400 mg azo-bisz(izobutironitril) 250 ml szén-tetrakloriddal készült keverékét 2,5 órán át visszafolyató hűtő alatt forraljuk. Utána az oldószert lepároljuk, éterrel helyettesítjük, a szilárd anyagokat kiszűrjük, az oldatot vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. és szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk. és az eluálásra dietil-éter és etil-acetát 4:1 arányú elegyét alkalmazzuk. így 10.7 g (40%) amorf terméket kapunk, amelyet éter és hexán elegyéből átkristályosítunk. és így 8.4 g hozammal kapjuk az
I. lépés cím szerinti, tiszta termékét, op.: 207-209 ’C. A kromatografálással kapott későbbi frakciók további
II. 2 g. kissé szennyezettebb terméket tartalmaznak.
2. lépés:
IO-Acetil-tí)-acetoxi-MeBmtp-ciklosporin-A előállítása
Az előző' 1. lépésből származó 4.31 g (3.3 mmol) termék (becslés szerint 15-20% kiindulási anyaggal szennyezeti) és 2.1 g (8 mmol) tetraetil-ammómumacetát-tetrahidrát 30 ml metil-etil-ketonnal készült keverékéhez katalitikus mennyiségű nátrium-jodidot adunk, majd a reakcióelegyet olajfürdőn, 105 ’C hőmérsékleten 3 órán át melegítjük, és hét végén szobahőmérsékleten tartjuk. Ezt követően metil-(terc-butil)e'terrel hígítjuk, és előbb vízzel, majd konyhasóoldattal mossuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, bepároljuk, és az így kapott 4,0 g nyers terméket fordított fázisú RP-18 oszlopon tisztítjuk (240 g szorbenst alkalmazunk). így 3.07 g hozammal kapjuk a 2. lépés cím szerinti terméket, op.: 191 — 192 C.
3. lépés
1'f-Hidroxi-MeBmtP-ciklosporin-A előállítása
Az előző 2. lépésből származó 1,72 g (1,3 mmol) termék 75 ml metanollal készült oldatát 1,2 g nátrium 50 ml metanollal készült oldatával keverjük, és a kapott reakcióelegyet 2.5 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd ecetsavval megsavanyítjuk. Az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, a maradékot metil-(terc-butil Péterben oldjuk, és sorrendben előbb vízzel, utána konyhasóoldattal, végül nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. és bepároljuk. Az így kapott 1,6 g nyers terméket
HU 212 674 Β
240 g szorbenssel készült RP-18 oszlopon kromatografáljuk. és eluálószerként metanol és víz 75:15 arányú elegyét alkalmazzuk. így 1,5 g hozammal jutunk a 3. lépés szerinti tiszta termékhez. Ebből egy mintát éter és hexán elegyéből átkristályosítva kristályos anyagot kapunk. op.: 181-183 °C.
9. példa [MeThrfi-ciklosporin-A [d) vegyület] előállítása A ciklosporin-A előállítására a 4 396 542 és
798 823 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban közölt totálszintézist alkalmazzuk, azonban a 4-es helyzetbe MeLeu helyett MeThr-t építünk be. Az így kapott termék forgatóképessége [a|p = -249,6’ (c = 1,0, kloroformban).
ÍO. példa [MeValf-ciklosporin-A ]b) vegyület] előállítása A ciklosporin-A előállítására a 4 396 542 és
798 823 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban közölt totálszintézist alkalmazzuk, azonban a 4-es helyzetbe MeLeu helyett MeVal-t építünk be. Az így kapott termék forgatóképessége [a]§ = -226° (c = 0.358. kloroformban).
11. példa
Hatásos vegyületek ciklosporin-A-hoz viszonyított ininiunsziippresszív hatása és ciklofilin-kötődése Az 1. táblázatban példákat mutatunk be: (I) hatásos vegyületek ELISA mérőmódszerrel meghatározott ciklofilin-kötó'dési arányára (BR-értékére). valamint (2) a hatásos vegyületek ciklosporin-A-hoz viszonyított immunszuppresszív hatására a vegyes limfocita-reakcióval végzett mérés alapján (ez utóbbit a ciklosporin-A hatásának százalékában fejezzük ki; ez az immunsz.uppressz.ív arány, azaz rövidítve: IR-érték). Ezen értékek jelentőségét és e vizsgálatok kivitelezési módszereit fentebb részleteztük.
/. táblázat
A vegyület neve BR-érték <logi0) IR-érték (9Í)
a) [DihidroMeBrruj’-ly-hidroxi-MeLeu]4-ciklosporin-A 0,l <l
b) [MeVal]J-cik- losporin-A 0.1 <I
c) [Melle]4-ciklosporin-A -0.2 <l
e) [γ-Hidroxi-MeLeu]4-ciklosporinA -0.3 <l
f) [Nva]2-|y-hidroxi-MeLeu]J-ciklosporin-A 0,4 <l
h) [MeValf-cik- losporin-A 0.4 5.3
A vegyület neve BR-érték (lóg|0) IR-érték (%)
j) [8'-HidroxiMeBmt]'-ciklosporin-A 0.35 1.8
k) [MeAla]6-cik- losporin-A -0.4 3.2
l) [γ-Hidroxi-MeLeu]9-ciklosporinA 0.15 2,9
12. példa
A hatásos vegyületek HÍV elleni hatása és sejttoxicitása
A II. táblázatban példákat mutatunk be a hatásos vegyületek és a ciklosporin-A HIV-1 replikációjára MT4-sejtekben kifejtett gátló hatására és sejttoxieitására. Ezeknek az értékeknek a jelentőségét és a megfelelő módszereket fentebb ismertettük.
11. táblázat
A vegyület neve Sejttoxicitás (pg/ml) HÍV elleni hatás lCsn-érték
a) [Dihidro-
McBnit 11 -Ιγ-liidroxi-MeLeu]4-ciklo- 16.3 0.12
sporin-A
b) [MeValJJ-ciklosporin-A 5.4 0,064
c)|\1elle]4-ciklü- sporin-A 4.5 0.056
ei (γ-Hidroxi-MeLeu |4-ciklosponn-A -1 15.5 0.34
f) |N\a|2-Ιγ-Hidroχί-MeLeu |4-eiklo- 14.0 0.85
sporin-A
h) |MeVal)'-ciklo- sporin-A 4.4 0.45
i) IMeOThr]2-
[(D)MeAla|’-[Me- Val]5-ciklosponn-A -,— >10 0.45
j) |8'-Hidroxt-
MeBmt | '-ciklosporin-A 10.6 0.56
k) IMeAlaf-ciklo- sporin-A 5,2 1.34
1) [γ-Hidroxi-MeLeu]9-ciklosponn-A >10 0,31
Ciklosponn-A 8,45 0,53
Mindczek alapján indokolt a hatásos vegyületek alkalmazása AIDS megelőzésére tünetmentes, HIV-pozitív betegek eseteiben, valamint AIDS-betegségben szenvedő betegek kezelésére. Olyan betegeken, akiken az AIDS már megnyilvánul, a hatásos vegyületek adagolása megfordíthatja a T-4 sejtek AIDS-betegséggel kapcsolatosan fellépő bomlását, kiválthatja az AIDS9
HU 212 674 Β szel kapcsolatos kóros állapot regresszióját - például a Kaposi-féle szarkóma visszafejlődését - és csökkentheti újabb fertőzések valószínűségét.
A találmány révén lehetőség nyílik módszer kialakítására a szerzett immunhiány tünetcsoportjának kezelésére és megelőzésére, valamint más. HIV-1 vírus által előidézett kóros állapotok kezelésére és megelőzésére egy H1V-1 vírussal fertőzött betegen; e kezelési módszer abban áll. hogy az adott betegnek egy találmány szerinti vegyület hatásos mennyiségét adagoljuk.
A hatásos vegyületet bármely szokásos úton, különösen enterálisan. például orálisan adagolhatjuk például ivólevek, tabletták vagy kapszulák alakjában; vagy adagolhatjuk parenterális úton. befecskendezhető oldatok vagy szuszpenziók formájában. Intravénás adagolás esetén a javasolt napi adag 1-20 mg/kg. előnyösen 3-10 mg/kg lehet; ha az adagolást orálisan végezzük, akkor a javasolt napi adag 1-50 mg/kg, előnyösen 7-20 mg/kg lehet.
Méréseink szerint a hatásos vegyületek toxicitasa a ciklosporin-A toxicitásához hasonló. Mivel a hatásos vegyületek nem immunszuppresszív jellegűek, a ciklosporin-A immunszuppresszióval kapcsolatos egyes mellékhatásai elkerülhetők. A ciklosporin-A alkalmazásával kapcsolatos más mellékhatások azonban - különösen a vesére kifejtett toxikus hatás tartós alkalmazása során - a találmány szerinti hatásos vegyületek alkalmazása során is felléphetnek.
A hatásos vegyületek előnyös galenikus formálása a 2 222 770 A számú nagy-britanniai közrebocsátási iratban ismertetett mikroemulziók segítségével oldható meg; ezek a mikroemulziók például topikusan vagy orálisan alkalmazhatók. A 2 209 671 A számú nagy-britanniai közrebocsátási iratban ismertetett módon zsírsav-szacharid-monoésztert. például szacharóz-monolaurátort tartalmazó szilárd oldatokból orális és befecskendezhető gyógyszerformák állíthatók elő. Az orális adagolás céljára előállított adagolási egységek egyenként például 25200 mg hatásos vegyületet tartalmaznak.
Példák gyógyászati készítmények előállítására
A. példa
Komponensek: mg
Az 1. példa szerinti vegyület 50,0
Glycofurol 75 180,0
Miglyol 812 90.0
Cremophor RH40 180,0 alfa-Tokoferol 0,5
ő. példa
Komponensek: mg
Az 1. példa szerinti vegyület 100.0
Tetraglycol 20,0
Captex 800 20,0
Nikkol HCO-40 860,0
Butil-hidroxi-toluol (BHT) 1,0
C. példa
Komponensek: mg
Az 1. példa szerinti vegyület 25,0
Glycofurol 75 100.0
Miglyol 812 35,0
Cremophor RH40 90,0
Butil-hidroxi-anizol (BHAl 0,2
D. példa
Komponensek: mg
Az 1. példa szerinti vegyület 10,0
Tetraglycol 10,0
Myritol 5,0
Cremophor RH 40 75,0
alfa-Tokoferol 0,1
A fenti gyógyszerformák egyes komponenseit, va-
lamint azok előállítási módszereit részletesen ismerteti a 2 222 770 számú nagy-britanniai közrebocsátási irat, amelynek tartalmára itt hivatkozunk.

Claims (4)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás (II) általános képletű új ciklosporin-származékok előállítására - ahol a képletben W'jelentése MeBmt vagy dihidro-MeBmt-csoport;
    X jelentése alfa-Abu. Val. Thr, Nva vagy MeOThr csoport:
    R jelentése Sár vagy (D)-MeAla csoport;
    Y jelentése MeLeu, gamma-hidroxi-MeLeu. Melle,
    McVal. MeThr. MeAla. Mealle vagy MeaThr csoport; és
    Z jelentése Val. Leu. MeVal vagy MeLeu csoport, azzal a megkötéssel, hogy (1) ha Y MeLeu vagy MeAla csoportot jelent, akkor Z jelentése MeVal vagy MeLeu csoport; és (2) ha W' MeBmt csoportot. R Sár csoportot és Y gamma-hidroxi-MeLeu csoportot jelent, akkor Z jelentése Val-tól eltérő -. azzal jellemezve. hogy
    a) azon (II) általános képletű vegyületek előállítására. ahol W' jelentése MeBmt. X jelentése alfa-Abu, R jelentése Sár csoport. Y jelentése Melle csoport és Z jelentése Val csoport, egy Tolipocladium inflatum fajhoz tartozó törzset megfelelő tápközegben tenyésztünk. majd a terméket a fermentléből elkülönítjük;
    b) azon (II) általános képletű vegyületek előállítására. ahol Y jelentése gamma-hidroxi-MeLeu csoport, egy vagy több MeLeu csoportot tartalmazó (I) általános képletű ciklosporint - ahol X. R és Z jelentése a tárgy i körben megadott és Y jelentése gamma-hidroxiMeLeu kivételével a tárgyi körben megadott előnyösen ciklosporín-A-t hídroxilezünk oly módon, hogy egy Sebekia benihana fajhoz tartozó gombatörzs tenyészetéhez adjuk, majd a hidroxilezett terméket a fermentléből elkülönítjük;
    c) azon (II) általános képletű vegyületek előállítására, ahol Z jelentése MeVal csoport, egy, az 5-ös helyzetben Val csoportot tartalmazó (I) általános képletű ciklosporint - ahol X. R. Y jelentése a fenti és Z jelentése Val előnyösen ciklosporin-A-t vagy ciklosporin-C-t N-metilezünk;
    d) azon (II) általános képletű vegyületek előállítására. ahol W' jelentése dihidro-MeBmt csoport, egy, az 1-es helyzetben MeBmt csoportot tartalmazó (I) általá10
    HU 212 674 Β nos képletű eiklosporint - ahol X. R. Y és Z jelentése a fenti - hidrogénezünk; vagy
    e) egy, a (II) általános képletnek megfelelő tizenegy aminosavat tartalmazó lineáris peptidet szintetizálunk és a peptid két végét ciklosporinná kapcsoljuk össze. (Elsőbbsége: 1991. 11.01.)
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti bármelyik eljárás azon (II) általános képletű vegyületek előállítására, ahol a képletben
    W'jelentése MeBmt vagy dihidro-MeBmt;
    X jelentése alfa-Abu;
    R jelentése Sár;
    Y jelentése gamma-hidroxi-MeLeu. MeVal. MeThr vagy Melle és
    Z jelentése Val vagy MeVal.
    azzal a megkötéssel, hogy ha W' jelentése MeBmt.
    akkor Y csak gamma-hidroxi-MeLeu-lól eltérő jelentésű lehet, azzal jellemezve, hogy a megfelelő a)-e) eljárásváltozat szerint járunk el. (Elsőbbsége: 1991. 11. 01.)
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti a) eljárás, azzal 5 jellemezve, hogy a [Melle]4-ciklosporin előállítására a
    Tolipocladium inflatum DSM 6627 gombatörzset alkalmas tápközegben tenyésztjük, majd a terméket a fermentléből elkülönítjük. (Elsőbbsége: 1991.08. 05.)
  4. 4. Eljárás az AIDS-betegség. valamint az AIDS-be10 tegséggel kapcsolatos kóros állapotok megelőzésére és kezelésére alkalmazható gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy egy 1. igénypont szerinti eljárással előállított ciklosporin-származékot a gyógyszerkészítésben szokásos hígító-, vivő- és/vagy
    15 segédanyagokkal összekeverve gyógyászati készítményekké alakítunk. (Elsőbbsége: 1991. II. 01.)
HU913446A 1990-11-02 1991-11-01 Process for producing novel cyclosporin derivatives and pharmaceutical compositions comprising them HU212674B (en)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB909023859A GB9023859D0 (en) 1990-11-02 1990-11-02 Chemical products
GB909023970A GB9023970D0 (en) 1990-11-05 1990-11-05 New use of a cyclosporin derivative
GB909023971A GB9023971D0 (en) 1990-11-05 1990-11-05 New use of a cyclosporin derivative
GB909023972A GB9023972D0 (en) 1990-11-05 1990-11-05 New use of a cyclosporin derivative
GB919116836A GB9116836D0 (en) 1991-08-05 1991-08-05 Organic compounds

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU913446D0 HU913446D0 (en) 1992-01-28
HUT62337A HUT62337A (en) 1993-04-28
HU212674B true HU212674B (en) 1996-09-30

Family

ID=27517009

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU913446A HU212674B (en) 1990-11-02 1991-11-01 Process for producing novel cyclosporin derivatives and pharmaceutical compositions comprising them

Country Status (25)

Country Link
US (3) US5767069A (hu)
EP (1) EP0484281B2 (hu)
JP (1) JP2740775B2 (hu)
KR (1) KR100203556B1 (hu)
AT (1) ATE148469T1 (hu)
AU (1) AU649277B2 (hu)
CA (1) CA2054590C (hu)
CY (1) CY2159B1 (hu)
CZ (1) CZ280909B6 (hu)
DE (1) DE69124459T3 (hu)
DK (1) DK0484281T4 (hu)
ES (1) ES2095926T5 (hu)
FI (1) FI111730B (hu)
GR (2) GR3022592T3 (hu)
HK (1) HK1005741A1 (hu)
HU (1) HU212674B (hu)
IE (1) IE913824A1 (hu)
IL (1) IL99912A (hu)
MX (1) MX9101869A (hu)
MY (1) MY134806A (hu)
NZ (1) NZ240421A (hu)
PL (1) PL168609B1 (hu)
PT (1) PT99410B (hu)
SA (1) SA92120344B1 (hu)
SK (1) SK278808B6 (hu)

Families Citing this family (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0624093A1 (en) * 1992-01-28 1994-11-17 KARPAS, Abraham The use of a compound for the manufacture of a medicament for the treatment of hiv infection
GB9204466D0 (en) * 1992-03-02 1992-04-15 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
ES2065273B1 (es) * 1993-05-25 1995-09-16 Biogal Gyogyszergyar Procedimiento para la purificacion de ciclosporina a.
US5948693A (en) * 1994-09-01 1999-09-07 Wisconsin Alumni Research Foundation Solid phase synthesis of immunosuppressive agents
US5639852A (en) * 1994-09-01 1997-06-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Immunostimulatory agents
US6696413B2 (en) 1995-06-16 2004-02-24 Hexal Ag Pharmaceutical preparation with cyclosporin A
IL122754A (en) * 1995-07-17 2001-10-31 Chem Ag C History of cyclosporine, their preparation and the pharmaceutical preparations containing them
JP3089350B2 (ja) * 1995-11-20 2000-09-18 ギルフォード ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド シクロフィリンロタマーゼ活性の阻害剤
CA2248192A1 (en) * 1996-03-12 1997-09-18 Picower Institute For Medical Research Treatment of hiv-infection by interfering with host cell cyclophilin receptor activity
CN1130373C (zh) * 1996-09-13 2003-12-10 诺瓦蒂斯有限公司 [3'－脱氧－3'－氧代－MeBmt]'环孢菌素制备方法
FR2757522B1 (fr) * 1996-12-24 1999-01-29 Rhone Poulenc Rorer Sa Derives de cyclosporine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
FR2757520B1 (fr) * 1996-12-24 1999-01-29 Rhone Poulenc Rorer Sa Derive de cyclosporine, sa preparation et les compositions pharmaceutiques qui le contiennent
FR2757521B1 (fr) * 1996-12-24 1999-01-29 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux derives de cyclosporine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
FR2762843B1 (fr) * 1997-04-30 1999-12-10 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux derives de cyclosporine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
ES2256959T3 (es) 1997-10-08 2006-07-16 Isotechnika,Inc. Analogos de ciclosporina deuterados y no deuterados y su uso como agentes inmunomoduladores.
US20030220234A1 (en) * 1998-11-02 2003-11-27 Selvaraj Naicker Deuterated cyclosporine analogs and their use as immunodulating agents
ZA99981B (en) * 1998-02-17 2000-08-08 Du Pont Pharm Co Oral liquid formulations of benzoxazinones HIV reverse transcriptase inhibitors.
GB9811854D0 (en) * 1998-06-02 1998-07-29 Ciba Geigy Ag Organic compounds
FR2780061B1 (fr) 1998-06-22 2001-09-07 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveau procede de preparation de derives de cyclosporine
DK1091975T3 (da) 1998-07-01 2006-04-18 Debiopharm Sa Ny cyclosporin med forbedret aktivitetsprofil
WO2000040219A1 (en) 1998-12-30 2000-07-13 Dexcel Ltd. Dispersible concentrate for the delivery of cyclosporin
US6521595B1 (en) * 1999-11-19 2003-02-18 Lg Chemical, Ltd. Nonimmunosuppressive [γ-hydroxy-methylleucine4] cyclosporin A, hair growth stimulator and external composition for skin using the same
US7732404B2 (en) 1999-12-30 2010-06-08 Dexcel Ltd Pro-nanodispersion for the delivery of cyclosporin
IL158385A0 (en) * 2001-04-20 2004-05-12 Debiopharm Sa Modified cyclosporin which can be used as a pro-drug and use thereof
KR100695611B1 (ko) * 2001-05-17 2007-03-14 주식회사 엘지생활건강 [감마 히드록시 엔-메틸 엘-루신4] 사이클로스포린유도체를 유효성분으로 하는 모발 성장 촉진제
PT1436321E (pt) 2001-10-19 2006-10-31 Isotechnika Inc Sintese de analogos de ciclosporina
ATE437629T1 (de) * 2001-10-19 2009-08-15 Isotechnika Inc Neue cyclosporin-analoge mikroemulsionsvorkonzentrate
WO2003038032A2 (de) * 2001-10-25 2003-05-08 Viromics Gmbh Mittel zur hemmung der synthese von virusproteinen
US7108988B2 (en) * 2001-11-02 2006-09-19 The J. David Gladstone Institutes Methods of identifying agents for inhibiting lentivirus replication
AU2004222306A1 (en) * 2003-03-17 2004-09-30 Albany Molecular Research, Inc. Novel cyclosporins
GB0320638D0 (en) 2003-09-03 2003-10-01 Novartis Ag Organic compounds
US20050059583A1 (en) 2003-09-15 2005-03-17 Allergan, Inc. Methods of providing therapeutic effects using cyclosporin components
EP1742652A2 (en) * 2004-04-08 2007-01-17 Novartis AG Use of cyclosporins for treatment of cerebral ischemia and brain and spinal cord injury
CA2573400A1 (en) * 2004-07-13 2006-01-19 Novartis Ag Cyclosporins to treat alzheimer's disease
ATE497775T1 (de) 2004-07-14 2011-02-15 Novartis Pharma Gmbh Verwendung einer kombination von cyclosporin und pegylierten interferonen zur behandlung von hepatitis c (hcv)
KR100597309B1 (ko) 2004-09-17 2006-07-05 주식회사 핸슨바이오텍 세베키아 베니하나를 이용한 [감마 히드록실메틸루신4] 사이클로스포린 a의 제조방법
US7378391B2 (en) * 2004-09-29 2008-05-27 Amr Technology, Inc. Cyclosporin alkyne analogues and their pharmaceutical uses
EP1804823A4 (en) * 2004-09-29 2010-06-09 Amr Technology Inc NEW CYCLOSPORIN ANALOGUE AND ITS PHARMACEUTICAL APPLICATIONS
US7196161B2 (en) * 2004-10-01 2007-03-27 Scynexis Inc. 3-ether and 3-thioether substituted cyclosporin derivatives for the treatment and prevention of hepatitis C infection
KR101309409B1 (ko) * 2004-10-01 2013-09-23 싸이넥시스, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 감염의 치료 및 예방을 위한 ３-에테르및 ３-티오에테르 치환된 시클로스포린 유도체
US7361636B2 (en) * 2004-10-06 2008-04-22 Amr Technology, Inc. Cyclosporin alkynes and their utility as pharmaceutical agents
US7135455B2 (en) * 2004-11-15 2006-11-14 Allergan, Inc Methods for the therapeutic use of cyclosporine components
US7151085B2 (en) * 2004-11-15 2006-12-19 Allergan, Inc. Therapeutic methods using cyclosporine components
KR100777488B1 (ko) 2004-12-15 2007-11-28 주식회사 핸슨바이오텍 세베키아 베니하나 (Sebekia benihana)배양물로부터 감마-히드록실메틸루신4 사이클로스포린 A를 효과적이고 선택적으로 회수하는 방법
US7897565B2 (en) 2004-12-23 2011-03-01 Novartis Ag Compositions for HCV treatment
JP2008525458A (ja) * 2004-12-23 2008-07-17 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト フラビウイルス科処置用化合物
JP5322647B2 (ja) * 2005-09-30 2013-10-23 スシネキス インク ウイルス感染の治療及び予防のためのシクロスポリンａのアリールアルキル及びヘテロアリールアルキル誘導体
US7696165B2 (en) 2006-03-28 2010-04-13 Albany Molecular Research, Inc. Use of cyclosporin alkyne analogues for preventing or treating viral-induced disorders
US7696166B2 (en) 2006-03-28 2010-04-13 Albany Molecular Research, Inc. Use of cyclosporin alkyne/alkene analogues for preventing or treating viral-induced disorders
UA100666C2 (uk) 2006-04-11 2013-01-25 Новартіс Аг Інгібітори нсv/віл та їх застосування
ATE502633T1 (de) 2006-05-19 2011-04-15 Scynexis Inc Cyclosporins zur behandlung und vorbeugung von augenerkrankungen
EP2027761A1 (fr) * 2006-06-02 2009-02-25 Claude Annie Perrichon Gestion des electrons actifs
WO2008069917A2 (en) * 2006-11-20 2008-06-12 Scynexis, Inc. Novel cyclic peptides
US20080255038A1 (en) * 2007-04-11 2008-10-16 Samuel Earl Hopkins Pharmaceutical compositions
AU2008304313B2 (en) * 2007-09-26 2013-01-10 Oregon Health & Science University Cyclic undecapeptides and derivatives as multiple sclerosis therapies
WO2010002428A2 (en) * 2008-06-06 2010-01-07 Scynexis, Inc. Novel macrocyclic peptides
US20090306033A1 (en) * 2008-06-06 2009-12-10 Keqiang Li Novel cyclic peptides
MX2011001152A (es) 2008-07-30 2011-06-09 Isotechnika Pharma Inc Moleculas de analogo de ciclosporina no-inmunesupresoras.
AU2009334790B2 (en) 2008-12-31 2016-09-08 Scynexis, Inc. Derivatives of cyclosporin A
US11304960B2 (en) 2009-01-08 2022-04-19 Chandrashekar Giliyar Steroidal compositions
US8481483B2 (en) * 2009-02-19 2013-07-09 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Cyclosporin analogues
US8512690B2 (en) 2009-04-10 2013-08-20 Novartis Ag Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
GB0909754D0 (en) * 2009-06-05 2009-07-22 Magnani Mauro Drug delivery systems
WO2011076784A2 (en) 2009-12-21 2011-06-30 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) New inhibitors of cyclophilins and uses thereof
CN102834409A (zh) 2009-12-30 2012-12-19 西尼克斯公司 环孢菌素类似物
CN107007815A (zh) 2010-07-16 2017-08-04 美国科技环球有限公司 新颖的环孢霉素a衍生物在病毒感染的治疗和预防中的应用
CN103153330B (zh) 2010-08-12 2017-08-18 美国科技环球有限公司 新的环孢霉素衍生物在病毒感染的治疗和预防中的应用
WO2012048235A1 (en) 2010-10-08 2012-04-12 Novartis Ag Vitamin e formulations of sulfamide ns3 inhibitors
US9358241B2 (en) 2010-11-30 2016-06-07 Lipocine Inc. High-strength testosterone undecanoate compositions
US9034858B2 (en) 2010-11-30 2015-05-19 Lipocine Inc. High-strength testosterone undecanoate compositions
US20180153904A1 (en) 2010-11-30 2018-06-07 Lipocine Inc. High-strength testosterone undecanoate compositions
US9890198B2 (en) 2010-12-03 2018-02-13 S&T Global Inc. Cyclosporin derivatives and uses thereof
US20120148675A1 (en) 2010-12-10 2012-06-14 Basawaraj Chickmath Testosterone undecanoate compositions
AU2011342284C1 (en) 2010-12-15 2017-07-13 Contravir Pharmaceuticals, Inc. Cyclosporine analogue molecules modified at amino acid 1 and 3
US20120253007A1 (en) * 2011-03-28 2012-10-04 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Navy Synthesis of Cyclosporin H
US20140205566A1 (en) 2012-11-30 2014-07-24 Novartis Ag Cyclic nucleuoside derivatives and uses thereof
WO2016033549A2 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Lipocine Inc. (17-ß)-3-OXOANDROST-4-EN-17-YL TRIDECANOATE COMPOSITIONS AND METHODS OF THEIR PREPARATION AND USE
WO2016033556A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Lipocine Inc. BIOAVAILABLE SOLID STATE (17-β)-HYDROXY-4-ANDROSTEN-3-ONE ESTERS
WO2018098501A1 (en) 2016-11-28 2018-05-31 Lipocine Inc. Oral testosterone undecanoate therapy
CN111449050A (zh) 2019-01-20 2020-07-28 睿诺医疗科技（上海）有限公司 环孢菌素类似物及其用途

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2463138C2 (de) 1973-12-06 1984-07-05 Sandoz-Patent-GmbH, 7850 Lörrach Das Antibiotikum Cyclosporin B (S 7481/F-2), seine Herstellung und Verwendung
US4304855A (en) * 1977-05-05 1981-12-08 The Upjohn Company Allylic methyl-hydroxylated novobiocins
CH667274A5 (de) * 1984-03-23 1988-09-30 Sandoz Ag Cyclosporine, ihre herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen.
EP0194972B1 (en) * 1985-03-11 1992-07-29 Sandoz Ag Novel cyclosporins
US4814323A (en) * 1986-03-25 1989-03-21 Andrieu J M Process for the treatment and the prevention of AIDS and other disorders induced by the LAV/HTLV III virus
EP0283801A3 (en) * 1987-03-27 1990-05-30 Abbott Laboratories Fluorescence polarization assay for cyclosporin a and metabolites and related immunogens and antibodies
US4798823A (en) * 1987-06-03 1989-01-17 Merck & Co., Inc. New cyclosporin analogs with modified "C-9 amino acids"
EP0373260B1 (en) * 1987-06-22 1994-03-09 Merck & Co. Inc. Cyclosporin derivatives with modified "8-amino acid"
GB8717300D0 (en) * 1987-07-22 1987-08-26 Nat Res Dev Cyclosporins
US4981799A (en) * 1987-08-21 1991-01-01 Takeda Chemical Industries, Ltd. Acylamino acid racemase, production and use thereof
US4914188A (en) † 1987-11-16 1990-04-03 Merck & Co., Inc. Novel 6-position cyclosporin analogs as non-immunosuppressive antagonists of cyclosporin binding to cyclophilin
US5081024A (en) * 1988-09-05 1992-01-14 Nissan Chemical Industries, Ltd. Process for producing optically active amino acids
GB2227244A (en) * 1989-01-19 1990-07-25 Merck & Co Inc Immunosuppressive fluorinated cyclosporin analogs
US5122511A (en) * 1990-02-27 1992-06-16 Merck & Co., Inc. Immunosuppressive cyclosporin analogs with modified amino acids at position-8

Also Published As

Publication number Publication date
US6255100B1 (en) 2001-07-03
JP2740775B2 (ja) 1998-04-15
EP0484281A3 (en) 1993-02-24
DK0484281T3 (hu) 1997-02-17
FI915135A0 (fi) 1991-10-30
IE913824A1 (en) 1992-05-22
KR920009390A (ko) 1992-06-25
PT99410B (pt) 1999-04-30
AU649277B2 (en) 1994-05-19
AU8692391A (en) 1992-05-07
FI915135A (fi) 1992-05-03
CZ280909B6 (cs) 1996-05-15
CS329791A3 (en) 1992-05-13
ES2095926T3 (es) 1997-03-01
HK1005741A1 (en) 1999-01-22
ATE148469T1 (de) 1997-02-15
DE69124459T3 (de) 2001-05-31
PL168609B1 (pl) 1996-03-29
HUT62337A (en) 1993-04-28
SK278808B6 (sk) 1998-03-04
IL99912A (en) 1996-09-12
PL292248A1 (en) 1992-07-27
DK0484281T4 (da) 2001-02-05
CA2054590C (en) 2003-09-16
EP0484281B2 (en) 2000-11-22
CA2054590A1 (en) 1992-05-03
GR3022592T3 (en) 1997-05-31
US5981479A (en) 1999-11-09
KR100203556B1 (ko) 1999-06-15
HU913446D0 (en) 1992-01-28
EP0484281A2 (en) 1992-05-06
JPH05208996A (ja) 1993-08-20
MY134806A (en) 2007-12-31
US5767069A (en) 1998-06-16
IL99912A0 (en) 1992-08-18
EP0484281B1 (en) 1997-01-29
DE69124459D1 (de) 1997-03-13
GR3035323T3 (en) 2001-04-30
DE69124459T2 (de) 1997-07-10
SA92120344B1 (ar) 2004-01-24
ES2095926T5 (es) 2001-02-16
MX9101869A (es) 1993-04-01
CY2159B1 (en) 2002-08-23
NZ240421A (en) 1993-04-28
FI111730B (fi) 2003-09-15
PT99410A (pt) 1992-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU212674B (en) Process for producing novel cyclosporin derivatives and pharmaceutical compositions comprising them
CS249542B2 (en) Method of cyclosporines production
US4914188A (en) Novel 6-position cyclosporin analogs as non-immunosuppressive antagonists of cyclosporin binding to cyclophilin
EP0056782B1 (en) Novel cyclosporins
JP4350898B2 (ja) 活性の特徴が改善された新規のシクロスポリン
US5116816A (en) Cyclosporin peptolides having an α-hydroxycarboxylic acid at position 8
US4764503A (en) Novel cyclosporins
GB2207678A (en) Novel immunosuppressive fluorinated cyclosporin analogs
US20040235716A1 (en) Novel cyclosporins
AU702332B2 (en) Organic compounds
EP0360760A2 (en) Pipecolic acid containing cyclopeptolides, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
RU2085589C1 (ru) Циклоспорины
IE914418A1 (en) Antibiotic agent
RO110144B1 (ro) Noi ciclosporine, procedeu de sinteză a acestora și metodă de tratament și prevenire a SIDA
AU596071B2 (en) Novel cyclosporins
NO310028B1 (no) Cyklosporiner, deres anvendelse og fremstilling samt en biologisk ren kilde
EP0327744A1 (en) Oxytocin and vasopressin antagonists
AU603427B2 (en) Oxytocin and vasopressin antagonists
EP1064299A1 (en) Cyclohexapeptide wf14573 or its salt, production thereof and use thereof
JPH0338280B2 (hu)

Legal Events

Date Code Title Description
HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: NOVARTIS AG, CH