HU208028B

HU208028B - Process for producing peptides of bradichinine-antagonistic activity and pharmaceutical compositions containing them

Info

Publication number: HU208028B
Application number: HU911392A
Authority: HU
Inventors: Gerhard Breipohl; Stephan Henke; Jochen Knolle; Bernward Schoelkens; Franz Hock
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1990-04-26
Filing date: 1991-04-25
Publication date: 1993-07-28
Also published as: PT97466A; EP0455133B1; JP2552402B2; ATE149519T1; GR3023172T3; HK1006843A1; FI911978A; CS9101165A2; IL97944A; NO911649L; AU7530491A; RU2056432C1; EP0455133A3; CA2041268C; LV10290B; NZ237928A; CN1034416C; ZA913121B; DE59108573D1; CY2113B1

Description

A találmány bradikinin-antagonista hatású peptidek, valamint az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására vonatkozik.

Bradikinin-antagonista hatású peptidek a WO 86/07 263 szám alatt publikált nemzetközi szabadalmi leírásból ismertek, például olyanok, amelyekben a bradikinin nevű peptidhormon vagy analógjainak 7-es helyzetű L-Pro aminosavát D-aminosav, így D-Phe, D-Thi, D-Pal, CDF, D-Nal, MDY, D-Phg, D-His, DTrp, D-Tyr, D-hPhe, D-Val, D-Ala, D-His, D-Ile, DLeu vagy DOMT helyettesíti.

A találmány feladata új, bradikinin-antagonista hatású peptidek megtalálása volt. Ezt a feladatot az (I) általános képletű peptidek előállításával oldottuk meg

A-£-C-£-Ser-(D)-Tic-G-Arg-OH (I) amelyben

A jelentése (D)- vagy (L)-Arg,

B jelentése Arg;

C jelentése Pro-Hyp-Gly;

E jelentése Leu, Ile, Tbg vagy Cha;

G jelentése (IV) általános képletű heterociklusos gyűrűrendszer,

R⁴ R⁵ O I I II

-N-CH-C- (IV) maradéka - melyben R⁴ és R⁵ trimetilén-csoportot jelent, mely egy hattagú telített szénhidrogén gyűrűvel van orto-kondenzálva -, előnyösen cisz-endo-oktahidroindol-2-karbonsav maradéka.

A találmány a fenti vegyületek fiziológiailag elviselhető sóinak az előállítására is vonatkozik.

Amennyiben mást nem kötünk ki, a sztereojelzés nélküli aminosav rövidítés az L-formát jelenti (vö.: Schröder, Lübke, The Peptides, I. köt., New York 1965, XXIIΧΧΠΙ. old.; Houben-Weyl, Methoden dér oiganischen Chemie, XV/1. és 2. köt., Stuttgart 1974), mint például:

Arg, Gly, Hyp, Leu, Pro.

is lehetnek. A felsoroltakat rajzban is bemutatjuk.

A csoportok alapját képező heterociklusos vegyületek például az alábbi szabadalmi irodalomból ismertek:

US-A 4344949, US-A 4374847, US-A 4350704, EP-A 29 488, EP-A 31741, EP-A 46953, EP-A 49 605, EP-A 49 658, EP-A 50 800, EP-A 51020, EP-A 52 870, EP-A 79 022, EP-A 84164, EP-A 89 637, EP-A 90 341, EP-A 90362, EP-A 105 102, EP-A 109020, EP-A 111873, EP-A 271865 és EP-A 344682.

Az (I) általános képletű vegyületek sóiként főleg az alkáli- és alkaliföldfémsók, a fiziológiailag elviselhető aminokkal képzett sók, valamint a szervetlen és szerves savakkal (HCl, HBr, kénsav, foszforsav, maleinsav, fumársav, citromsav, borkősav, ecetsav) képzett sók jöhetnek számításba.

Különösen előnyösek az alábbi (I) általános képletű vegyületek:

H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Leu-Ser-(D)-Tic-OicArg-OH

H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Cha-Ser-(D)-Tic-OicArg-OH

H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Tbg-Ser-(D)-Tic-OicArg-OH.

A találmány az (I) általános képletű peptidek előállítására vonatkozik. A találmány értelmében az (I) általános képletű vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy

a) az (I) általános képletnek megfelelő, C-terminálisan szabad karboxilcsoportot hordozó, kívánt esetben az oldallánc reakcióképes csoportján védett fragmenst vagy aktivált származékát megfelelő, N-terminálisan szabad aminocsoportot hordozó, kívánt esetben az oldallánc reakcióképes csoportján védett fragmenssel reagáltatjuk, vagy

b) az egyes, az oldallánc reakcióképes csoportján kívánt esetben védett aminosavakat és valamely, a peptidkémiában szokásos műgyantát az (I) általános képletnek megfelelő sorrendben kondenzáljuk, majd adott esetben a kapott vegyületről egy vagy több, a reakcióképes csoportok ideiglenes védelmére bevezetett védőcsoportot és/vagy műgyantát lehasítjuk és kívánt esetben a kapott (I) általános képletű vegyületet fiziológiailag elviselhető savaddíciós sóvá vagy szerves vagy szervetlen bázissal képzett sóvá alakítjuk.

A jelen találmányban szereplő peptideket a peptidkémiában általánosan ismert módszerekkel (pl. Houben-Weyl, Methoden dér organischen Chemie, 15/2. köt.), előnyösen szilárd fázison történő szintézissel (pl. B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85, 2149 (1963), vagy R. C. Sheppard, Int. J. Peptide Protein Rés. 21, 118 (1983)] vagy egyéb ismert, ekvivalens módszerrel állítjuk elő. Az α-aminocsoport védelmére uretánvédőcsoportok, így terc-butoxikarbonil (Boc)-, vagy a fluorenil-metoxikarbonil (Fmoc)-védőcsoportok alkalmazhatók. Amennyiben mellékreakciók elnyomása vagy különleges peptidek szintézise céljából szükségessé válik, az aminosavak oldalláncában lévő egyéb reakcióképes csoportokat alkalmas védőcsoportokkal (pl. T. W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis”) védjük, elsősorban az alábbiak szerint:

Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Arg(Pmc), Ser(Bzl), Ser(But).

A szilárd fázison történő szintézis a peptid C-terminális végén kezdődik azzal, hogy egy védett aminosavat megfelelő gyantához kapcsolunk; a védett aminosavat például észter- vagy amidkötés révén klór-metil-, hidroxi-metil-, benzhidrilamino(BHA)-, metil-benzhidrilamino(MBHA)-csoporttal módosított polisztirolvagy poliakrilamid gyantához kapcsolhatjuk. A hordozóként alkalmazható gyanták a kereskedelemben kapható termékek. BHA- és MBHA-gyantákat többnyire akkor használunk, ha az előállítani kívánt peptid C-terminálisán szabad amidcsoport lesz. Amennyiben a peptid C-terminális végén szekunder amidcsoport lesz, klór-metil-, illetve hidroxi-metil-gyantát alkalmazunk, és a lehasítást a megfelelő aminnal végezzük. Ha például az etilamidot akarunk előállítani, a peptidet etilaminnal hasítjuk le a hordozóról. Az oldalláncban lévő védőcsoportokat ezt követően, más reagensekkel hasítjuk le. Ha a peptid oldalláncán lévő terc-butil-védőcsoportokat meg kívánjuk hagyni, az aminosav a-amino-csoportját ideiglenesen Fmoc-védőcsoporttal blokkoljuk például R.C. Sheppard (J. Chem. Soc., Chem. Comm. 1982,587) módszerével; az arginin guanidino2

HU 208 028 Β csoportját piridínium-perkloráttal végzett protonálás segítségével védjük, és az egyéb, az oldalláncban reakcióképes aminosavakat a katalitikus transzfer-hidrogénezéssel [A. Félix et al., J. Org. Chem. 13, 4194 (1978)] vagy folyékony ammóniában oldott nátriummal [W. Roberts, J. Am. Chem. Soc. 76,6203 (1954)] lehasítható benzilcsoporttal védjük.

A gyantához kapcsolt aminosav amino-védőcsoportjának alkalmas reagenssel (Boc esetén pl. diklórmetános trifluorecetsav, Fmoc esetén 20%-os dimetilformamidos piperidinoldat) végzett lehasítása után a következő védett aminosavakat a kívánt sorrendben kapcsoljuk. A következő aminosav hozzákapcsolása előtt a közbenső termékként keletkező, N-terminálisan védett peptid-gyantán a fent megadott reagensekkel a blokkolást megszüntetjük.

Kapcsolási reagensként a peptid-szintézisben szokásos aktiváló reagenseket (pl. Houben-Weyl, Methoden dér organischen Chemie, 15/2. köt.) alkalmazhatjuk. A karbodiimidek, így az N,N’-diciklohexil-karbodiimid, az Ν,Ν’-diizopropil-karbodiimid vagy az N-etil-N’-(3-dimetil-amino-propil)-karbodiimid különösen előnyös. A kapcsolási műveletet közvetlenül végezhetjük úgy, hogy az aminosav-származékot - az aktiváló reagens és adott esetben a racemálódást viszszaszorító adalék, pl. 1-hidroxi-benzotriazol (HOBt) [W. König, R. Geiger, Chem. Bér. 103, 708 (1970)] vagy 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidrobenzotriazin (HOObt) [W. König, R. Geiger, Chem. Bér. 103, 2054 (1970)] jelenlétében - a gyantához kapcsoljuk. Eljárhatunk úgy is, hogy az aminosav-származék szimmetrikus anhidrid vagy HOBt-, illetve HOOBt-észter képzése révén történő aktiválását külön végezzük és az aktivált vegyületet alkalmas oldószerben adjuk a kapcsolódásra képes gyantához.

Az aminosav-származékok kapcsolása, illetve aktiválása oldószerben történik. Alkalmas oldószerek a dimetil-formamid, az N-metil-pirrolidon, diklór-metán vagy a felsoroltak elegyei. Az aktivált aminosav-származékot általában 1,5-4-szeres feleslegben alkalmazzuk. Ha a kapcsolódás nem teljes, a kapcsolási műveletet ismételjük anélkül, hogy a peptidgyanta α-amino-csoportján a blokkolást megszüntetnénk (ahogy ez a következő aminosav hozzákapcsolása előtt szükséges lenne).

A kapcsolás sikeres lefutását a ninhidrin-reakció segítségével ellenőrizhetjük [ld. pl. E. Kaiser et al., Anal. Biochem. 34 595 (1970)]. A szintézist automatán, például az Applied Biosystem cég Synthesizer 430A típusú automatikus szintézisgépén is végezhetjük, ahol a cég szintézis-programjait, vagy pedig saját programokat alkalmazunk, az utóbbira főleg Fmoc-csoporttal védett aminosav-származékok esetén kerül sor.

A fent leírt szintézis után a pepiidet egy reagenssel, például folyékony hidrogén-fluoriddal (előnyös a Bocmódszerrel előállított peptidek esetén) vagy trifluorecetsav val (előnyös az Fmoc-módszerrel előállított peptidek esetén) lehasíthatjuk. Az említett reagensek nemcsak a pepiidet hasítják le a gyantáról, hanem az aminosav-származékok oldalláncában lévő egyéb védőcsoportokat is. így a peptidet - kivéve BHA- és MBHAgyanták alkalmazása esetén - szabad sav formájában kapjuk. BHA-, illetve MBHA-gyanta alkalmazása esetén a hidrogén-fluoriddal vagy trifluor-metánszulfonsavval végzett lehasítás során a peptidet savamid formájában kapjuk. Peptidamidok előállítására irányuló egyéb eljárások a P 3 711 866.8 és P 3 743 620.1 sz. NSZK-beli szabadalmi bejelentésekből ismertek. Az ott részletezett eljárásokban a peptidamidot a peptidkémiában szokásosan alkalmazott közepesen erős savakkal (pl. trifluor-ecetsavval) végzett kezelés útján hasítják le a gyantáról, amikor is kationfogó reagensként az alábbiakat használják: fenol, krezol, tiokrezol, anizol, tioanizol, etánditiol, dimetil-szulfid, etil-metilszulfid vagy hasonló, a szilárd fázisú peptidkémiában szokásosan alkalmazott kationfogók. A felsoroltak egyikét, vagy pedig kettő vagy több kationfogó elegyét alkalmazzák. A trifluor-ecetsav alkalmas oldószerrel, például diklór-metánnal hígított is lehet.

Amennyiben azt akarjuk, hogy az oldalláncokon lévő tercbutil-, illetve benzil-védőcsoportok megmaradjanak, a különlegesen módosított hordozón szintetizált peptid lehasítása trifluor-ecetsav 1%-os diklór-metános oldatával végezhető e (vő. pl. R. C. Sheppard, J. Chem. Soc., Chem. Comm. 1982, 587). Ha csak egyes terc-butil-, illetve betűcsoportokat akarunk megtartani, a szintézis- és hasítás-lépések alkalmas kombinációjával dolgozunk.

C-terminális amidcsoporttal vagy «-amino-, illetve oo-guanidinoalkil-csoporttal rendelkező peptidek szintézisét szintén a Sheppard által leírt módosított hordozó gyantán végezzük. Szintézis után az oldalláncban teljesen védett peptidet a gyantáról lehasítjuk, és ezt követően a klasszikus oldat-szintézisben reagáltatjuk a megfelelő aminnal, illetve «-aminoalkilaminnal vagy oo-guanidinoalkilaminnal, amikor esetleg meglévő további reakcióképes csoportokat ismert módon ideiglenesen védünk.

oo-aminoalkil-csoportot tartalmazó peptidek szintézisére a 264 802 sz. publikált európai szabadalmi leírás is ismertetett eljárást.

A jelen találmányban szereplő peptidek főleg a szilárd fázisú technika segítségével készültek, a védőcsoportok vonatkozásában két alapvető taktika szerint:

A szintézishez az Applied Biosystems 430A típusú peptid-synthesizer gépét alkalmaztuk, az a-aminocsoport ideiglenes védelmére Boc-, illetve Fmoc-csoportokat használva.

Boc-csoport esetén a szintézis során a gép gyártójának előprogramozott szintézis-ciklusait alkalmaztuk.

A C-terminális végén szabad karboxilcsoportot tartalmazó peptidek előállítását a megfelelő aminosavval aktivált 4-(hidroxi-metil)-fenil-acetamido-metil-polisztirol gyantán [R. B. Merrifield, J. Org. Chem. 43, 2845 (1978)] végeztük. A gyanta az Applied Biosystems terméke. A peptidamidok előállítására MBHAgyantát (szintén Applied Biosystems) alkalmaztunk. Aktiváló reagensként N,N’-diciklohexil-karbodiimid vagy Ν,Ν’-diizopropil-karbodiimid kerültek felhasználásra. Az aktiválás szimmetrikus anhidrid, HOBt-észter vagy HOOBt-észter képzése útján történt, oldószer

HU 208 028 Β gyanánt diklór-metán, diklór-metán és dimetil-formamid elegye vagy NMP jelenlétében. Az aktivált aminosav-származékot 2-4 ekvivalensnyi feleslegben alkalmaztuk. Nem teljes kapcsolódás esetén a lépést ismételtük.

Amikor is az α-aminocsoport ideiglenes védelmét Fmoc-védőcsoportokkal oldjuk meg, a fent említett szintézisgépbe saját szintézis-programjainkat tápláltuk be. Hordozóként ismert módon a megfelelő aminosavval észterezett (E. Atherton et al., J, C.S. Chem. Comm. 1981, 336) p-benziloxi-benzilalkohol gyantát [S. Wang, J. Am. Chem. Soc. 95, 1328 (1973)] alkalmaztunk, amely a Bachem cég terméke. Az aminosav-származék HOBt- vagy HOOBt-észterezéssel történő aktiválását közvetlenül a gép gyártója szállította patronokban végeztük úgy, hogy az aminosav, HOBt vagy HOOBt patronban lévő elegyéhez diizopropil-karbodiimid dimetilformamidos oldatát adtuk. Alkalmazhatunk azonban kész Fmoc-aminosav-OOBt-észtereket is (247 573 sz. publikált európai szabadalmi leírás). A Fmoc-védőcsoportot a reakcióedényben hasítottuk le, piperidin 20%-os dimetil-formamidos oldatával. A reakcióképes aminosav-származék feleslege 1,5-2,5 ekvivalensnyi volt. Ha a kapcsolódás nem volt teljes, ugyanúgy, mint a Boc-módszer esetén is, megismételtük.

Az (I) általános képletű vegyületekből önmagában , ismert módon fiziológiailag elviselhető sókat készíthetünk. A savaddíciós sók előállítására például úgy járunk el, hogy a vegyületet feloldjuk és oldatban a megfelelő sav, például ecetsav enyhe feleslegével reagáltatjuk. A hidrokloridokat előnyösen úgy készítjük, hogy az (I) általános képletű vegyület oldatába száraz sósavgázt vezetünk be. A karboxilcsoportjukkal az (I) általános képletű vegyületek bázisokkal is képezhetnek sókat. Előnyösek az alkálifém-, alkáliföldfém- és aminsók. Sóképzés céljából a két komponenst oldatban reagáltatjuk, szobahőmérsékleten vagy enyhén melegítve, és a sót a szokásos módon, azaz kicsapással vagy a reakcióelegy bepárlásával elkülönítjük, kívánt esetben átkristályosítással tisztítjuk.

Az (I) általános képletű peptidek - egyenként vagy egymással kombinálva - bradikinin-antagonista hatást mutatnak, amelyet különböző modelleken lehet tesztelni (Handbook of Exp. Pharmacol. Vol. 25, Springer Verlag, 1970, 53-55. old.), így például az izolált patkányuteruszon, a tengerimalac ileumán vagy a tengerimalac izolált pulmonális artériáján.

Az izolált Artéria pulmonalison végzett kísérletekhez Dunklin Hartley fajtájú, 400-450 g testtömegű tengerimalacokat tarkón csapással megöltünk. A mellkast felnyitottuk, és az Artéria pulmonalist óvatosan kipreparáltuk. A környező szövetet eltávolítottuk, és az artériát 45°-os szögben spirálszerűen felvágtuk.

A 2,5 cm hosszúságú, 3-4 mm szélességű ércsíkot 10 ml térfogatú szervfürdőben rögzítettük. A fürdő Ringerféle oldattal van töltve, amelynek összetétele az alábbi:

mmól/1

NaCl 154

KC1 5,6

CaCl₂ 1,9

NaHCO₃ 2,4 glükóz 5,0.

Az oldaton keresztül 95 tf% O₂ és 5 tf% CO₂ tartalmú gázelegyet buborékoltattunk, és az oldatot 37 °C-ra melegítettük. A pH 7,4, a csík előterhelése 1,0 g volt.

Az izotónikus összehúzódás változását emelővel HF-modem típusú útmérőre (gyártja: Hugó Sachs) közvetítettük, és kompenzációs írókészülékkel (BEC, Goerz Metrawatt SE 460) regisztráltuk.

Egy órás kiegyenlítődés után a kísérlet kezdődött. Miután az ércsíkok a 2xl0~⁷ mól/1 koncentrációjú bradikininnel szembeni maximális érzékenységüket elérték (bradikinin az ércsík összehúzódását eredményezi), a peptideket őxlO^-8 - lxl0~⁵ dózisokban 10 percen át hatni hagyjuk, és újabb bradikinin-adagolás után a bradikinin hatásának csökkenését vizsgáltuk, és a kontrollal hasonlítottuk össze.

Esetleges parciál-agonista hatás kimutatására a peptideket lxlCP⁵ és lxlCP³ közötti dózisban alkalmaztuk.

A dózis/hatás-görbékből kiszámított IC₅₀-értékeket az alábbi táblázatban adjuk meg.

Táblázat

Vegyület	1C_5O [M]
H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Leu- Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH	5,9xl0~⁹
H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Cha- Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH	3,7/10^-8
H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Tbg- Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH	β,ΟχΙΟ⁶

A találmány szerint előállítható peptidek terápiás alkalmazhatósága az összes olyan kóros állapotra kiterjed, amelyet a bradikinin és rokon hatású peptidek közvetítenek, kiváltanak vagy fokoznak. Ide tartoznak egyebek között a traumák, így sebek, égési sérülések, továbbá kiütések, eritémák, ödémák, angina, artritisz, asztma, allergiák, rinitis, sokk, gyulladások, alacsony vérnyomás, fájdalom, viszketés és a spermiumok megváltozott mozgékonysága.

Ezért a találmány az (I) általános hatóanyagokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására is kiterjed.

A készítmények egy vagy több (I) általános képletű hatóanyagot tartalmaznak hatékony dózisban, a gyógyászatban alkalmazható szerves vagy szervetlen hordozóanyag mellett.

Az alkalmazás enterálisan, parenterálisan - így pl. szubkután, im. vagy iv. -, szublingválisan, epikután, nazálisán, rektál, hüvelyen belül, intrabukkálisan vagy inhalációval történhet. A dózis a melegvérű fajától, testtömegétől, korától és az alkalmazás módjától függ.

A gyógyászati készítményeket ismert oldási, keverési, granulálási vagy drazséképző műveletekkel állítjuk elő.

Orális beadás vagy a nyálkahártyákon keresztül történő alkalmazás céljából a hatóanyagokat a szokásosan ilyen célra alkalmazott hordozóanyagokkal, stabilizátorokkal vagy közömbös hígítószerrel összekeverjük és is4

HU 208 028 Β mert módon alkalmazható készítménnyé alakítjuk. Alkalmas formák például a tabletták, drazsék, kapszulák, vizes, alkoholos vagy olajos szuszpenziók vagy vizes, alkoholos vagy olajos oldatok. Közömbös hordozóként például az alábbiak alkalmazhatók: gumiarábikum, magnézium-oxid, magnézium-karbonát, kálium-foszfát, tejcukor, glükóz, magnézium-sztearil-fumarát vagy keményítő, előnyösen kukoricakeményítő. Az elkészítés során mind száraz, mind nedves granulálási alkalmazhatunk. Olajos hordozó anyagként vagy oldószerként például növényi vagy állati eredetű olajokat, így napraforgóolajat vagy csukamájolajat alkalmazhatunk.

Helyi alkalmazás céljára a készítmény például vizes vagy olajos oldat, lotion, emulzió vagy zselé, kenőcs, zsíros kenőcs vagy amennyiben lehetséges spray (permet) lehet, adott esetben tapadásjavító polimer adalékkal.

Intranazális alkalmazás céljára a hatóanyaghoz az erre a célra alkalmas adalékokat, így stabilizátort vagy közömbös hígítószert adunk és alkalmas készítménnyé, így vizes, alkoholos vagy olajos szuszpenzióvá vagy oldattá alakítunk. Vizes intranazális készítményhez kelátképzőt, etilén-diamin-N,N,N’,N’-tetraecetsavat, citromsavat, borkősavat vagy a felsoroltak sóit adhatjuk. Az oldat adagolása adagoló porlasztó segítségével történhet, vagy a viszkozitást növelő adalékkal ellátott oldatot cseppentetővel adagoljuk, vagy kenhető gélt vagy orrkrémet készítünk.

Inhalációs alkalmazáshoz közömbös nyomógázzal permetezhető készítményt állíthatunk elő.

Intravénás, szubkután, epikután vagy intradermális alkalmazás céljára az aktív vegyületből vagy fiziológiailag elviselhető sójából oldatot, szuszpenziót vagy emulziót készítünk, adott esetben a gyógyszerkészítésben szokásos segédanyagokkal, így izotonikus szerrel, a pH-érték beállításához alkalmas adalékkal, oldódást elősegítő adalékkal, emulgeátorral vagy egyéb segédanyaggal.

Tekintettel arra, hogy az új hatóanyagok közül néhánynak testnedvekben rövid a felezési ideje, célszerű, ha befecskendezhető, késleltetett hatású gyógyszert készítünk. Ilyenek például olajos kristály-szuszpenziók, mikrokapszulák, rodok vagy implantátumok; az utóbbiakhoz szövetbarát polimerek, különösen biológiailag lebontható polimerek alkalmazhatók, amelyek például politejsav-poliglikolsav-kopolimer vagy humán-albumin alapúak lehetnek.

Helyileg és inhalációval alkalmazható készítmények általában 0,01-5 mg/ml, szisztémikus formák 0,01-10 mg/kg hatóanyag tartalmúak.

Az aminosavak rövidítései a peptidkémiában szokásos hárombetűs kódnak felel meg [Europ. J. Biochem. 138, 9 (1984)]. A további rövidítések az alábbi jelentésűek:

Cha ciklohexilalanil-csoport

DMF dimetil-formamid

Fmoc 9-fluorenil-metil-oxikarbonil-csoport

Hyp hidroxiprolin

Mtr 4-metoxi-2,3,6-trimetil-fenilszulfonil-cs.

HOObt . 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidrobenzotriazin Oic cisz,endo-oktahidroindol-2-karbonil-csoport

Tbg terc-butilglicil-csoport

Tic l,2,3,4-tetrahidroizokinolin-3-karbonil-csoport [(IV) képlet].

Az alábbi példákkal a találmány szerint előállítható peptidek szilárd fázison történő szintézisének előnyös módszereit közelebbről ismertetjük anélkül, hogy a találmányt ezekre a példákra korlátoznánk.

Az alábbi aminosav-származékok kerültek alkalmazásra:

Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Boc-(D)-Arg-OH, FmocArg(Pmc)-OH, Fmoc-Hyp-OH, Fmoc-Pro-OOBt, Fmoc-Gly-OOBt, Fmoc-Ser(tBu)-OOBt, Fmoc-(D)Tic-OH, Fmoc-Oic-OH.

1. példa

H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Leu-Ser-(D)-Tic-OicArg-OH

A cim szerinti vegyületet az Applied Biosystems cég 430 A típusú peptid-szintetizáló gépével állítjuk elő az Fmoc-módszer szerint, Fmoc-Arg(Mtr)-OH-val észterezett p-benzil-oxibenzilalkohol-gyantán (gyártja: Novabiochem; terhelés: kb. 0,5 mmól/g gyanta), az Fmoc-módszernek megfelelően módosított szintézisprogram segítségével.

A szintetizáló gép patronjaiba 1 mmól szabad karboxilcsoportos aminosav-származékot és 0,95 mmól HOObt-ot mérünk be. Az aminosav aktiválását közvetlenül a patronban végezzük úgy, hogy az aminosavat 4 ml dimetil-formamidban oldjuk és 2 ml 0,55 mólos dimetil-formamidos diizopropil-karbodiimid-oldatot adagolunk.

A többi aminosav HOObt-észterét 6 ml N-metil-pirrolidinben oldjuk és utána - akár az in situ előaktivált aminosavat - az előzetesen piperidin 20%-os DMF-es oldatával védőcsoportjaitól megszabadított gyantához kötjük. A szintézis befejeztével a peptidet trifluor-ecetsavval, kationfogóként tioanizolt és etándiolt alkalmazva lehasítjuk a gyantáról. A trifluorecetsav eltávolítása után kapott maradékot többszörösen etil-acetátban digeráljuk, majd centrifugáljuk. A maradékot Sephadex LH 20 adszorbensen 10%-os ecetsawal kromatografáljuk. A tiszta peptidet tartalmazó frakciókat egyesítjük és fagyasztva szárítjuk. MS(FAB): 1264,4 (M+H).

Az alábbi peptideket az 1. példa szerint állítottuk elő:

2. példa

H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Cha-Ser-(D)-Tic-OicArg-OH

MS(FAB): 1304,4 (M+H).

3. példa

H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Tbg-Ser-(D)-Tic-OicArg-OH

MS(FAB):1264 (M+H).

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás (I) általános képletű peptidek A-ő-C-£-Ser-(D)-Tic-G-Arg-OH (I), amelyben

HU 208 028 Β

A jelentése (D)- vagy (L)-Arg,

B jelentése Arg;

C jelentése Pro-Hyp-Gly;

E jelentése Leu, Ile, Tbg vagy Cha;

G jelentése (IV) általános képletű heterociklusos gyűrűrendszer,

R⁴ R⁵ O I I II

-N-CH-C- (IV) maradéka - melyben R⁴ és R⁵ trimetilén-csoportot jelent, mely egy hattagú telített szénhidrogén gyűrűvel van orto-kondenzálva -, előnyösen cisz-endo-oktahidroindol-2-karbonsav maradéka, valamint a fenti vegyületek fiziológiailag elviselhető sóinak az előállítására azzal jellemezve, hogy

a) az (I) általános képletnek megfelelő, C-terminálisan szabad karboxilcsoportot hordozó, kívánt esetben az oldallánc reakcióképes csoportján védett fragmenst vagy aktivált származékát megfelelő, N-terminálisan szabad aminocsoportot hordozó, kívánt esetben az oldallánc reakcióképes csoportján védett fragmenssel reagáltatjuk, vagy

b) az egyes, az oldallánc reakcióképes csoportján kívánt esetben védett aminosavakat és valamely, a peptidkémiában szokásos műgyantát az (I) általános képletnek megfelelő sorrendben kondenzáljuk, majd adott esetben a kapott vegyületről egy vagy több, a reakcióképes csoportok ideiglenes védelmére bevezetett védőcsoportot és/vagy műgyantát lehasítjuk és kívánt esetben a kapott (I) általános képletű vegyületet fiziológiailag elviselhető savaddíciós sóvá vagy szerves vagy szervetlen bázissal képzett sóvá alakítjuk.
2. Eljárás gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy egy, az 1. igénypont szerint előállított (I) általános képletű peptidet - az (I) általános képletben A, B, C, E és G jelentése az 1. igénypontban megadott - vagy fiziológiailag elviselhető sóját a gyógyszergyártásban ismert hordozóanyagokkal és egyéb segédanyagokkal összekeverjük és gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.