HU201085B - Process for producing phosphor-containing compounds and pharmaceutical compositions containing them as active components - Google Patents

Process for producing phosphor-containing compounds and pharmaceutical compositions containing them as active components Download PDF

Info

Publication number
HU201085B
HU201085B HU882613A HU261388A HU201085B HU 201085 B HU201085 B HU 201085B HU 882613 A HU882613 A HU 882613A HU 261388 A HU261388 A HU 261388A HU 201085 B HU201085 B HU 201085B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
formula
alkyl
mmol
acid
methyl
Prior art date
Application number
HU882613A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT47123A (en
Inventor
Donald Steven Karanewsky
Michael Christopher Badia
Scott Adams Biller
Erich Michael Gordon
Michael Joseph Sofia
Original Assignee
Squibb & Sons Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Squibb & Sons Inc filed Critical Squibb & Sons Inc
Publication of HUT47123A publication Critical patent/HUT47123A/hu
Publication of HU201085B publication Critical patent/HU201085B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/38—Phosphonic acids [RP(=O)(OH)2]; Thiophosphonic acids ; [RP(=X1)(X2H)2(X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/40—Esters thereof
    • C07F9/4003—Esters thereof the acid moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/4006—Esters of acyclic acids which can have further substituents on alkyl
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/301—Acyclic saturated acids which can have further substituents on alkyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/302—Acyclic unsaturated acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/303—Cycloaliphatic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/306—Arylalkanephosphinic acids, e.g. Ar-(CH2)n-P(=X)(R)(XH), (X = O,S, Se; n>=1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/32—Esters thereof
    • C07F9/3205—Esters thereof the acid moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/3211—Esters of acyclic saturated acids which can have further substituents on alkyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/32—Esters thereof
    • C07F9/3205—Esters thereof the acid moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/3217—Esters of acyclic unsaturated acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/32—Esters thereof
    • C07F9/3205—Esters thereof the acid moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/3241—Esters of arylalkanephosphinic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07F9/572—Five-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07F9/572—Five-membered rings
    • C07F9/5728—Five-membered rings condensed with carbocyclic rings or carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/645—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6503—Five-membered rings
    • C07F9/65031—Five-membered rings having the nitrogen atoms in the positions 1 and 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/645—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6503—Five-membered rings
    • C07F9/6506—Five-membered rings having the nitrogen atoms in positions 1 and 3

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

képletű, új foszfortartalmú vegyületek - ahol R hidroxi-, alkil- vagy alkoxicsoport, 5
X oxigénatom vagy iminocsoport, n =1 vagy 2,
Z olyan (n) általános képletű csoport, ahol R1 olyan -K-Ru általános képletű csoport, amelyben K közvetlen kötés vagy a 1Ü szénatomszámmal az R^-hoz kapcsolódó f H2-0-esoport, és Rla halogénatommal és/vagy alkilcsoporttal szubsztituált, fenilcsoport; és
Rx hidrogénatom vagy alkilcsoport - 15 és sóik, valamint hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására.
A találmány szerint az (I) általános képletű vegyületeket ügy állítják elő, hogy egy (VIT) általános képletű vegyületet - ahol Rc 20 alkil- vagy alkoxicsoport - a szilil-éter kötés felhasításával (VIII) általános képletű észterré alakítanak, majd ezt (VIIIA) általános képletű sóvá, (VIITB) általános képletű savvá, (VIIIC) általános képletű sóvá vagy (VIIID) 25 általános képletű savvá hidrolizálják.
Az (I) általános képletű vegyületek gátolják a koleszterin bioszintézisét, és igy a vér koleszterinszintjét csökkentő hatású szerek hatóanyagaiként hasznosíthatók.
U
I ι
R P — CH,—C —CH,—CO,— Rx
I 2 : 22
X OH <ΪΗ2>η z
Rc—p— CH —CH —CH—C02— alkil X ό (fH2ln C(CH3)?
Z C6H5 C6H5 . ll
R — P — CH — CH — CH,— CO,RX
I 2 i 22
X OH
Z
A leírás terjedelme: 21 oldal, 7.7 rajz, 6! ábra
HU 201085 Β
A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű, új foszfortartalmú vegyületek - a képletben
R jelentése hidroxi-, 1-4 szénatomos alkilvagy 1-5 szénatomos alkoxicsoport;
X jelentése oxigénatom vagy iminocsoport; n értéke 1 vagy 2;
Z jelentése (n) általános képletű csoport, amelyben
R1 jelentése olyan -K-R13 általános képletű csoport, ahol K jelentése közvetlen kötés vagy az R13 csoporthoz a szénatommal kapcsolódó
-CH2-0-csoport, és
R13 jelentése halogénatommal és/vagy 1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált fenilcsoport;
R2 és R23 jelentése 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy halogénatom; és
R* jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport- és sóik, valamint hatóanyagként ilyen vegyületeket tartalmazó, elsősorban a vér koleszterinszintjét csökkentő gyógyszerkészítmények előállítására.
F.M. Singer és munkatársai [Proc. Soc.
Exper. Bioi. Med. 102; 370 (1959)], továbbá F.H. Hulcher [Arch. Biochem. Biophys., 146; 422 (1971)] ismertették, hogy bizonyos mevalonátok származékai gátolják a koleszterin bioszintézisét.
Endo és munkatársai a 4 049 495,
137 322 és 3 983 140 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban ismertetnek egy fermentációs terméket, amelyet a koleszterin bioszintézisét gátló hatásúnak találtak. A vegyületet, amelynek szerkezetét vizsgálva Brown és munkatársai [J. Chem. Soc. Perkin I., 1165 (1976)] megállapították, hogy egy komplex mevalolakton, elnevezték kompaktinnak.
Az 1 586 152 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban hozták nyilvánosságra a (P) általános képletű szintetikus terméket, amelynek képletében E kémiai kötést, illetve 1-3 szénatomos alkilénhidat x’agy viniléncsoportot szimbolizál, a különböző számokkal jelölt R szimbólumok pedig változatos helyettesítőket jelentenek. A vegyület hatása - amint leírták - nem éri el a kompaktinénak 1%-át.
A 4 375 475 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban Willard és munkatársai a (Q) általános képletű, a vér koleszterinszintjét és zsírtartalmát csökkentő vegyületek kidolgozásáról számolnak be. A képletben
A jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
E jelentése közvetlen kémiai kötés, vagy a metilén-, etilén-, trimetilén- és viniléncsoportok bármelyike;
Rí, Rz és R3 jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkil- vagy halogén-alkil-csoport, fenilcsoport, amely halogénatommal, 1-4 szénatomos alkil-, halogén-alkilvagy alkoxicsoporttal, illetve 2-8 szénatomos alkanoil-oxi-csoporttal helyettesített lehet, továbbá egy -OR4 általános képletű csoport, ahol R4 jelentése hidrogénatom, 1-9 szénatomos alkil- vagy 2-8 szénatomos alkanoilcsoport, benzoii-, cinnamil-, fenil- vagy halogén-fenil-csoport, 1-4 szénatomos halogén-alkil-csoport, allilcsoport, valamint cikloalkil-, adamantil-, fenil- vagy szubsztituált fenilcsoportot - a szubsztituensek halogénatom, 1-4 szénatomos alkil-, halogén-alkil- vagy alkoxicsoport lehetnek - viselő 1-3 szénatomos alkilcsoport.
A leírás vonatkozik továbbá a megfelelő dihidroxisavakra, amelyek a laktongyűrű hidrolitikus felnyilása során keletkeznek, vulamint ezeknek a savaknak a gyógyszerészetileg elfogadható sóira és észtereire, ahol az észteresítő csoport fenil-, 1-3 szénatomos alkil-, valamint dimetil-amino- vagy acetil-amino-csoporttal helyettesített 1-3 szénatomos alkilcsoport lehet. Az előzőekben meghatározott valamennyi vegyület esetében azokról az enantiomerekról van szó, amelyeknél a (Q) általános képletű transz-racemát tetrahidropirán gyűrűje (4R)-konfigurációjú.
A 413 668 sorszámú, valamint a 548 850 sorszámú, amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentéseken alapuló, WO 84/02131 (PCT/EP83/00308) nemzetközi szabadalmi bejelentés révén az (R) általános képletű, heterociklusos mevalolakton analógok váltak ismertté - a képletben
R és Ro szimbólumok közül az egyik jelentése (a) általános képletű aromás csoport, míg a másik 1-6 szénatomos primer vagy szekunder alkilcsoportot, 3-6 szénatomos cikloalkilcsoportot, vagy egy fenil-(CH2)n- általános képletű csoportot jelent, ahol az általános képletekben
R-i jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, 1-4 szénatomos alkilvagy alkoxicsoport, a terc-butoxi-csoport kivételével, trifluoi— -metil-, fenoxi- vagy benzil-oxi-csoport;
Rs jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, 1-3 szénatomos alkilvagy alkoxicsoport, trifluor-metil-, fenoxi- vagy benzil-oxi-csoport;
Rsa jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, 1-2 szénatomos alkil— vagy alkoxicsoport; és
HU 201085 Β m értéke 1, 2 vagy 3 lehet, azzal a feltétellel, hogy ha R-j hidrogénatomot jelent, akkor Rs és Rsa jelentése is csak hidrogénatom lehet; ha Rs hidrogénatomot jelent, akkor Rsa jelentése is csak hidrogénatom lehet; valamint ha az R·) és Rs szimbólumok közül egyik jelentése trifluor-metil-, fenoxi- vagy benzil-oxi-csoport, akkor a másik csak attól eltérő jelentésű lehet;
R2 jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, 1-4 szénatomos alkil— vagy alkoxicsoport, a terc-butoxi-csoport kivételével, 3-6 szénatomos cikloalkilcsoport, továbbá trifluor-metil-, fenoxivagy benzil-oxi-csoport;
R3 jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, 1-3 szénatomos alkilvagy alkoxicsoport, továbbá trifluor-metil-, fenoxi- vagy benzil-oxi-csoport lehet, azzal a feltétellel, hogy ha R2 jelentése hidrogénatom, akkor R3 jelentése is csak hidrogénatom lehet, valamint ha az Rz és R3 szimbólumok közül egyik trifluor-metil-, fenoxi- vagy benzil-oxi-csoportot jelent, a másik csak attól eltérő jelentésű lehet;
X jelentése -(CH2)n- általános képletű szénhidrogénlánc, ahol n értéke 0, 1, 2 vagy 3, illetve viniléncsoport;
Z jelentése (b) általános képletű molekularész - R6 hidrogénatomot vagy 1-3 szénatomos alkilcsoportot jelent - szabad sav formájában, vagy fiziológiásán hidrolizálható és elviselhető észterként, illetve sóként, vagy delta-lak tönként.
A 2 162 179 számú nagy-britanniai közrebocsátási iratból ismertek az (S) általános képletű, a koleszterin bioszintézisének gátlására alkalmas mevalolakton naftil-analógok. A képletben Rí jelentése 1-3 szénatomos alkilcsoport, míg Z jelentése (Zi), illetve (Z2) képletű szubsztituens, ahol R7 hidrogénatomot, hidrolizálható észteresoportot, vagy valamilyen kationt szimbolizál.
Az 164 698 számú európai szabadalmi leírás bizonyos laktonok előállítását ismerteti, amelyek a vér kórosan megnövekedelt koleszterinszintjének kezelésére alkalmasak. A [B] reakcióvázlat értelmében - a képletekben X jelentése halogénatom;
Pr jelentése egy védőcsoport, amely tercier hidroxilcsoport megvédésére alkalmas;
R1 jelentése hidrogénatom vagy mct.ilcsoport;
R3 és R4 jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport, amely egy fenilcsoportot is viselhet, és a fenilcsoport 1-3 szénatomos alkil- vagy alkoxicsoporttal, illetve halogénatommal tetszőlegesen szubsztituált;
R2 jelentése a (c) és (d) általános képletű csoportok valamelyike lehet, ahol
Q egy RG csoportot és egy hidrogénatomot, illetve egy R6 csoportot és egy a gyűrű síkja alatt elhelyezkedő metilcsoportot viselő szénatomot szimbolizál, és R6 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport;
R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport; a, b, c és d adott esetben kettős kötést szimbolizálhat;
R7 jelentése benzil-oxi- vagy fenilcsoport, ahol a gyűrű adott esetben 1-3 szénatomos alkilcsoporttal vagy halogénatommal helyettesített;
R8 és R9 jelentése 1-3 szénatomos alkilcsoport vagy halogénatom; és
R5 jelentése 1-3 szénatomos alkilcsoport, fenil-, valamint 1-3 szénatomos alkilcsoporttal mono- vagy diszubsztituált fenilcsoport úgy járunk el, hogy a megfelelő amidot egy R5-SO2-X általános képletű szerves szulfonil-halogeniddel reagáltatják, majd eltávolítják a védöcsoportot.
A (T) általános képletű mevalolakton naftil-analógokat a 3 525 256 számú német szövetségi köztársasági közrebocsátási iratban tették közzé. A képletben Z jelentése (Zi), illetve (Z2) általános képletű csoport, ahol R7 hidrogénatomot vagy hidrolizálható észteresitö csoportot szimbolizál. Ezek a vegyületek a koleszterin bioszintézisének inhibitoraiként hasznosíthatók, és alkalmasak az atherosclerosis, vagyis az érelmeszesedés kezelésére.
A WO 8402-903 számú nemzetközi szabadalmi bejelentésben, amely a 460 600 sorszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésen alapul, a vérben található zsírfehérjék mennyiségét csökkentő hatású mevalolakton analógokat írtak le. Ezek a vegyületek az (U) általános képlettel jellemezhetők, ahol a két
Ro szimbólum együttesen tetrametilén-, illetve (e) általános képletű szénhidrogénláncot jelöl, és
R2 jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, 1-4 szénatomos alkilvagy alkoxicsoport, a terc-butoxi-csoport kivételével, valamint trifluor-metil-, fenoxi- vagy benzil-oxi-csoport;
R3 jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, 1-3 szénatomos alkíl-35
HU 201085 Β vagy alkoxicsoport, valamint trifluor-metil-, fenoxi- vagy benzil-oxi-csoport lehet, azzal a feltétellel, hogy ha az R2 és R3 szimbólumok közül valamelyik trifluor-metil-, 5 fenoxi- vagy benzil-oxi-csoportot jelent, a másik csak attól eltérő jelentésű lehet;
Rí jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, valamint benzil-oxi-, vagy 1-6 10 szénatomos alkilcsoport;
R4 jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, 1-4 szénatomos alkil- vagy alkoxicsoport, a terc-butoxi-csoport kivételével, valamint trifluor-metil-, fenoxi- 15 vagy benzil-oxi-csoport;
Rs jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, 1-3 szénatomos alkil- vagy alkoxicsoport, valamint trifluor-metil-, fenoxi- vagy benzoil-oxi-csoport; 20
Rsa jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom, valamint 1-2 szénatomos alkilvagy alkoxicsoport lehet, azzal a feltétellel, hogy ha az R4 és Rs szimbólumok közül bármelyik jelentése trifluor- 25 -metil-, fenoxi- vagy benzil-oxi-csoport, a másik csak attól eltérő jelentésű lehet;
X jelentése -(CH2)n- vagy (f) általános képletű csoport, ahol n értéke 0, 1, 2 30 vagy 3, mig a q jelzőszámok közűi mindkettő értéke 0, vagy az egyik értéke 0 és a másiké 1 lehet;
Z jelentése egy (g) általános képletű csoport, ahol R6 hidrogénatomot vagy 35 1-3 szénatomos alkilcsoportot jelent.
További általános feltételként szerepel, hogy az -X-Z szimbólummal jelölt szubsztituens, valamint az R4 helyettesitőt viselő fenilcsoport egymáshoz képest orto-helyzetűek. 40
A 127 848-A számú szabadalmi bejelentésben közreadott (W) általános képletű, 5-helyzetben kénatomot tartalmazó 3-hidroxi-alkánsav-származékok - a képletben Z jelentése a (h) és (i) általános 45 képletű csoportok valamelyike; n értéke 0, 1 vagy 2;
E jelentése metilén-, etilén-, trimetilén, valamint 1-, illetve 2-propenilén-csoport; 50
R1, R2 és R3 jelentése többek között hidrogén-, fluor-, klór- vagy brómatom, metil-, fenil-, illetve helyettesített fenilcsoport, valamint egy -OR7 képletű cső- 55 port lehet, ahol R7 például hidrogénatomot, 2-8 szénatomos alkanoil-, vagy 1-9 szénatomos alkilcsoportot, benzil-, fenil-, helyettesített fenil-, 60 cinnamil-, allil- vagy 1-4 szénatomos halogén-alkil-csoportot, továbbá helyettesitőként cikloalkil-, adamantilvagy fenilcsoportot viselő, 1-3 65 szénatomos alkilcsoportot jelenthet;
R4, R5 és R6 jelentése hidrogén-, fluor-, klór- és brómatom, vagy 1-3 szénatomos alkilcsoport; és végül
X jelentése például hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport, valamint alkálifém- vagy ammóniumion lehet azon tulajdonságuknál fogva, hogy a (3-hidroxi-3-metil-glutaril)-koenzim A (HMG-CoA) reduktáz működését gátolni képesek, a vér károsan magas koleszterinszintjét csökkentő, és ezen kívül gombaellenes hatásúak.
A 2 596 393-A számú franciaországi szabadalmi bejelentés az (X) általános képletű (2-hidroxi-3-karboxi-propil)-foszfonsav-származékokat - beleértve azok sóit is - ismerteti, amelyek a vér fokozott zsírtartalmát csökkentő gyógyszerek hatóanyagokként hasznosíthatók. A képletben
Rí és R2 jelentése hidrogénatom, rövidszénláncú alkilcsoport, vagy tetszőlegesen szubsztituált aralkilcsoport;
R3 és R4 jelentése hidrogénatom, rövidszénláncú alkilcsoport, vagy tetszőlegesen szubsztituált aril-, illetve aralkilcsoport.
Ezek a vegyületek - amint azt közölték - a koleszterin-, triglicerid- és foszfolipidszintet csökkentő hatás tekintetében felülmúlják a meglutolt.
A mevinolinhoz hasonló, (Y) általános képletű vegyületek - a képletben R1 jelentése például hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport;
R jelentése etilén-, vinilén- vagy polimetilénhíd; és
Z jelentése a (j) vagy (k) általános képletű csoportok bármelyike lehet, amelyeknél X oxigénatomot, vagy egy
R9 helyettesitőt viselő nitrogénatomot szimbolizál, és R9 hidrogénatomot vagy 1-3 szénatomos alkilcsoportot jelent;
R7 jelentése 2-8 szénatomos alkilcsoport;
R8 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
R10, R11 és R12 jelentése egymástól függetlenül, például hidrogén- vagy halogénatom, valamint 1-4 szénatomos alkilcsoport lehet a 142 146-A számú európai szabadalmi bejelentésből ismertek.
A fentiekben vázolt előzmények ismeretében, jelen találmány célja olyan foszfortartalmú vegyületeknek a gyógyítás szolgálatába állítása, amelyek gátolják a (3-hidroxi-3-metil-glutaril)-koenzim A reduktáz működését, és ezáltal a vér koleszterinszintjét csökkentő
HU 201085 Β hatású gyógyszerek hatóanyagaiként hasznosíthatók. Ezeknek a vegyületeknek mindegyikében megtalálható az (in) általános képletü a képletben X jelentése oxigénatom vagy iminocsoport, n értéke 1 vagy 2, és Z egy hidrofób molekularészt szimbolizál - molekularész. A .hidrofób molekularész meghatározás e helyütt egy lipofil csoportra utal, amely a hidroxi-metil-glutársavhoz hasonló felső lánchoz egy megfelelő összekötő taggal (.X) kapcsolódva, képes az enzim felületén, egy hidrofób kötőhelyen, amely a HMG-CoA szubsztrát számára közömbös, megtapadni, és ezáltal a molekula hatékonysága megnövekszik azokhoz a vegyűletekhez képest, amelyeknek képletében Z helyén hidrogénatom áll.
A találmány tárgya tehát eljárás az (I) általános képletű vegyületek - a képletben R jelentése hidroxicsoport, valamint 1-4 szénatomos alkil- vagy 1-5 szénatomos alkoxicsoport;
R* jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport;
X jelentése oxigénatom vagy iminocsoport; n értéke 1 vagy 2;
Z jelentése (n) általános képletű csoport, amelyben
R1 jelentése olyan -K-R1® általános képletű csoport, ahol K jelentése közvetlen kötés vagy az R1® csoporthoz a szénatommal kapcsolódó -Cll2-0-csoport, és
Rla jelentése halogénatommal és/vagy 1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált fenilcsoport;
R2 és R2® jelentése 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy halogénatom valamint sóik, elsősorban gyógyszerészetileg elfogadható sóik előállítására.
A só meghatározás alatt jelen esetben a szerves vagy szervetlen bázisokkal képzett sókat kell érteni. Ezek közé tartoznak többek között az ammóniumsók, az alkálifémsók, beleértve a nátrium-, lítium- és káliumsókat - amelyek egyébként előnyősnek tekintendők -, az alkáliföldfémekkel képezett sók, például kalcium- és magnéziumsók. A szerves bázisok, amelyeknek sóiról szó van, például a következők lehetnek: diciklohexil-amin, benzatin(N,N’-dibenzil-etilén-diamin), N-metil-D-glükamin[l-(metil-amino)-l-dezoxi-szorbit), hidrabamin[N,N’-bisz(dehidroabetil)-etiléndiamin], aminosavak, köztük az arginin, lizin és más hasonlók. A nem mérgező, gyógyszerészetileg elfogadható sók általában előnyösebbnek tekinthetők, azonban például a termék izolálása vagy tisztítása során más sók is hasznosak lehetnek.
Az úgynevezett .hidrofób molekularészre rátérve, a jelen találmány értelmében a hidrofób molekularész egy (n) általános képletű csoport, amelyben
R1 jelentése olyan -K-Ru általános képletű csoport, ahol K jelentése közvetlen kötés vagy az R1® csoporthoz a szénatommal kapcsolódó -CH2-0-csoport, és
R1® jelentése halogénatommal és/vagy 1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált fenilcsoport;
R2 és R2® jelentése 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy halogénatom.
Az (I) általános képletű vegyületek két nagy csoportja az (IA), illetve (IB) általános képletekkel jellemezhető.
Az (I) általános képletű vegyületek közül mindenekelőtt azok részesitendők megkülönböztetett figyelemben, amelyek (II) általános képletűek, és a képletben
R jelentése hidroxicsoport, vagy egy oxigénatomon keresztül kapcsolódó lítiumatom;
R* jelentése hidrogén vagy lítiumatom;
X jelentése oxigénatom vagy iminocsoport;
Z jelentése (n) általános képletü csoport, ahol
R1 fenilcsoportot - amely alkilcsoporttal és/vagy halogénatommal szubsztituált - vagy benzil-oxi-csoportot - amely halogénatommal helyettesített jelent;
R2 és R2® jelentése azonos vagy különböző, és halogénatomot vagy 1-4 szénatomos alkilcsoportot jelent.
A találmány értelmében az (I) általános képletü vegyületeket az [A] reakcióvázlat szerint állíthatjuk elő. Amint látható, az első lépés egy Arbuzov-reakció. Egy (A) általános képletü jódvegyületet egy (III) általános képletű - a képletben R® jelentése rövid szénláncú alkil- vagy alkoxicsoport - foszfonit/foszfit-származékkal, az Arbuzov-reakció körülményeinek megfelelően reagáltatunk melegítés közben, aminek eredményeképpen egy (IV) általános képletü foszfinát, illetve foszfonát keletkezik.
A (IV) általános képletü származékok új, eddig még le nem írt vegyületek.
A következő lépésben elhasítjuk a foszforatomhoz kapcsolódó alkoxicsoportokat, ami ügy történik, hogy a megfelelő (IV) általános képletü vegyület inért szerves oldószerrel, például metilén-dikloriddal készült oldatához egymást követően N,N-bisz(trimetil-szilil)-trifluor-acetamidot és (trimetil-szilil)-bromidot adunk, inért atmoszférában, például argongáz alatt. A reakció eredményeképpen (VA) általános képletű foszfinsav keletkezik, ha a (IV) általános képletben R® jelentése rövidszénláncú alkilcsoport, és (VB) általános képletű vegyület a reakciótermék, ha a (IV) általános képletben R® rövidszénláncú alkoxicsoportot jelent. Mind az (VA), mind az (VB) általános
HU 201085 Β képletű közbenső termékek új, eddig még le nem irt vegyületek.
Ha az előző lépés reakcióterméke (VB) általános képletű vegyület, azt mielőtt tovább lépnénk, észteresiteni kell, amelynek során úgy járunk el, hogy egy (VC) általános képletű alkohollal - a képletben Rb jelentése rövidszénláncú alkilcsoport - vízmentes piridinben, inért atmoszférában, például argongáz alatt, diciklohexil-karbodiimid jelenlétében reagáltatjuk.
Az így keletkezett (VI) általános képletű foszfonsav-észtert, illetve az előző reakciólépésben kapott (VA) általános képletű foszfinsav-észtert ezután inért szerves oldószerben, például metilén-dikloridban, benzolban vagy tetrahidrofuránban feloldjuk, és inért atmoszférában, például argongáz alatt dietil— -(trimetil-szilil)-amint adunk hozzá, majd keveredni hagyjuk. Az elegyet ezután bepároljuk, és újból feloldjuk metilén-dikloridban vagy más megfelelő inért szerves oldószerben. Az oldatot lehűtjük 0 és 25 °C közötti hőmérsékletre, oxalil-dikloridot adunk hozzá és bepároljuk, aminek eredményeképpen a keletkezett nyers klór-foszfonát marad viszsza. Ezt feloldjuk valamilyen inért szerves oldószerben, például metilén-dikloridban, benzolban, piridinban vagy tetrahidrofuránban, és -20 °C-tól 0 °C-ig terjedő hőmérséklet-tartományban egy megfelelő (B) általános képletű vegyülettel reagáltatjuk. A (VI), illetve (VA) általános képletű vegyület és a (B) reagens mólaránya 0,5:1 és 3:1 értékek közé, előnyösen 1:1 és 2:1 értékek közé esik. A megfelelő mennyiségű (B) általános képletű reagens beadagolása után trietil-amint és katalitikus mennyiségű 4-(dimetil-amino)-piridint adunk az elegyhez; ilyen módon egy (VII) általános képletű adduktot kapunk, ahol Rc jelentése rövidszénláncú alkil- vagy alkoxicsoport.
A következő lépésben elhasítjuk a szilil-éter kötést, amelyet úgy végezhetünk, hogy a (VII) általános képletű adduktot feloldjuk inért szerves oldószerben, például tetrahidrofuránban, és tömény ecetsavat, majd tetrabutil-ammónium-fluoridot adunk az oldathoz. A kapott termék egy (VIII) általános képletű vegyület, ahol R* jelentése alkilcsoport.
A (VIII) általános képletű észtert ezt követően a megfelelő savvá, vagy alkálifémsóvá hidrolizálhatjuk, amikor is a kapott termék képletében Rx jelentése hidrogén- vagy alkálifém-atom. A hidrolízist valamilyen erős bázissal, például lítium-hidroxiddal, dioxánban, tetrahidrofuránban vagy más inért szerves oldószerben, inért atmoszférában, például argongáz alatt, 25 °C-on végezhetjük úgy, hogy a (Vili) általános képletű észter minden egyes móljára 1-1,1 mól bázist számítunk. Ilyen módon a megfelelő (VIIIA) általános képletű alkáliféinsót kapjuk, amelynek képletében R jelentése rövidszénláncú alkil— vagy alkoxicsoport.
A (VIIIA) általános képletű sóból valamilyen erős savval, például sósavval állíthatjuk elő a megfelelő (VIIIB) általános képletű savat.
A (Vili) általános képletű észtereket, amelyeknek képletében R jelentése rövidszénláncú alkoxicsoport, (VIIIC) általános képletű alkálifém kettős sókká alakíthatjuk, ha valamely erős bázissal 50-60 °C-on reagáltatjuk, és a bázis-észter mólarányt úgy választjuk meg, hogy az 2:1 és 4:1 közötti érték legyen.
A (VIIIC) általános képletű disókat átalakíthatjuk ezután egy olyan megfelelő (I) általános képletű savvá, ahol R jelentése hidroxicsoport, azaz egy (VIIID) általános képletű vegyületté. Az átalakítást erős savakkal, például sósavval végezhetjük.
A fenti reakciósor kiindulási anyagát, az (A) általános képletű jodidot a (C) általános képletű brómvegyületből - amely ismert vegyület, és előállítását leírták: Tetrahedron Lett. 26: 2951 (1985) - kaphatjuk meg, ha azt Ν,Ν-dimetil-formamidban feloldva, imidazol és
4-(dimetil-amino)-piridin jelenlétében, inért atmoszférában, például argongáz alatt, (terc-butil-difenil-szilil)-kloriddal reagáltatjuk. Az igy kapott termék egy (D) általános képletű vegyület, amelyet inért szerves oldószerben, például etil-metil-ketonban, vagy Ν,Ν-dimetilforniamidban feloldunk, és inért atmoszférában, például argongáz alatt nátrium-jodidot adva az elegyhez, állítjuk elő az (A) általános képletű jodidot.
Egy (B) általános képletű kiindulási vegyületet, attól függően, hogy Z és X milyen jelentéssel bírnak, az alábbiak szerint állíthatunk eló:
Ha a (B) általános képletben Z jelentése egy (n) általános képletű csoport, és X jelentése oxigénatom, vagyis a vegyület (Bl) általános képlettel írható le, akkor úgy járunk el, hogy egy (E) általános képletű aldehidet valamilyen redukálószerrel, például lÍtium-(tetrahidrido-aluminát)-tal vagy nátrium-! tetrahidrido-borát)-tal redukálunk.
Egy olyan (B) általános képletű vegyületet, amelynek képletében Z jelentése (n) általános képletű csoport, és X iminocsoportot szimbolizál, vagyis egy (B2) általános képletű vegyületet úgy állíthatunk eló, hogy egy (E) általános képletű aldehidet oxidálunk, például olyan módon, hogy az acetonos oldatához Jones-reagenst adunk, majd a keletkezett (P) általános képletű savat metilén-dikloridban szuszpendálva oxalil-dikloriddal a megfelelő savkloriddá alakítjuk, amelyet azután valamilyen inért szerves oldószerben, például tetrahidrof uránban tömény ammónium-hidroxiddal reagáltatunk. A reakció eredményeképpen egy (G) általános képletű savamidhoz jutunk, amelyet valamilyen redukálószerrel, például lítium-(te trahidro-aluminát)-tal redukálva kapjuk a megfelelő (B2) általános képletű vegyületet.
-611
HU 201085 Β
A találmány szerinti ejárással a szóban forgó vegyületeket előállíthatjuk racem elegy formájában, amelyből azután rezolválással juthatunk az előnyösebb (S)-izomerhez, de eljárhatunk úgy is, amint azt a példákban majd részletesen bemutatjuk, hogy közvetlenül a megfelelő (S)-izomer keletkezzék.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek a (3-hidroxi-3-metil-glutaril)-koenzim A (HMG-CoA) reduktáz inhibitorai, és mint ilyenek, a koleszterin bioszintézisét gátló hatású szerként hasznosíthatók. Ennek bizonyítása az alábbi vizsgálatokkal történt.
1) Patkánymáj HMG-CoA reduktáz
A patkánymáj HMG-CoA reduktáz aktivitását az Edwards által leirt módszer [Edwards, P.A. és munkatársai, J. Lipid Rés. 20: 40 (1979)] módosított változatával végeztük. A patkánymáj mikroszomális frakcióját használtuk enzimforrásként, és az enzim aktivitását a [14C(HMG-CoA szubsztrát)14C] mevalonsavvá átalakított mennyiségéből határoztuk meg.
a) Mikroszomális frakció elkülönítése
2-4 darab kolesztiraminnal etetett, Sprague Dawley patkány fejét a törzsétől elválasztjuk, a májakat kioperáljuk, és .A foszfát pufferoldattal (kálium-foszfát: 0,04 mól, pH = 7,2; kálium-klorid: 0,05 mól; szacharóz: 0,1 mól; etilén-diamin-tetraecetsav: 0,03 mól; aprotinin: 500 kallikrein inaktivátor egység mililiterenként) homogenizáljuk. -A homogenizátumot 16 000 g-vel, 4 °C hőmérsékleten, 15 percig centrifugáljuk, a felülúszót leszívatjuk, és az elsővel azonos körülmények között még egyszer centrifugáljuk. A második centrifugálás során kapott felülúszót ezután 4 °C-on, 70 percen át, 100 000 g-vel centrifugáljuk. Az összetömörült mikroszómákat minimális térfogatú, májanként számítva
3-5 ml .A pufferoldalban felszuszpendáljuk, és egy üveg/üveg homogenizáló berendezésben homogén szuszpenziót készítünk, amelyhez 10 mmól koncentrációban ditiotreitolt adunk. A preparátumot egyenlő részekre osztjuk, acetonos szárazjégben lefagyasztjuk, és -80 °C hőmérsékleten tároljuk.
Az általunk elkülönített mikrószomális frakció fajlagos aktivitása percenként 0,68 nmól mevalonsav/nig fehérje volt.
b) Az enzimaktivitás mérése
A reduktáz aktivitását 0,25 ml térfogatban, az alábbi összetevőket tartalmazó közegben mértük (a megadott értékek a végső koncentrációra vonatkoznak):
0,04 mól kálium-foszfát, pH = 7,0
0,05 mól kálium-klorid
0,10 mól szacharóz
U,uJ moi e tilén- diamin-tetraecetsav
0,01 mól ditiotreitol
3,5 mól nátrium-klorid
1% d imetil-szulfoxid
50-200 pg mikroszomális fehérje
100 μηιόΐ DL-(14C)HMG-CoA (0,05 pCi, 30-60 mCi/mmól)
2,7 mmól NADPH (nikotinamid-adenin-dinukleotid-foszfót)
A reakcióelegyet 37 °C-on inkubáltuk. A megadott körülmények között az enzimaktivitás 300 jug mikroszomális fehérje mennyiségig lineárisan növekszik, és ugyancsak lineárisan változik az átalakított szubsztrát mennyisége az idővel, 30 percig.
A standard inkubációs idő a vizsgálati anyag esetében 20 perc volt, ez idő alatt a HMG-CoA szubsztrát 12-15%-a alakult át mevalonsavvá. 100 pmól DL-HMG-CoA szubsztrátot alkalmaztunk minden egyes meghatározáshoz, ami az adott körülmények között az enzim telítési koncentrációjának kétszerese. A NADPH-t feleslegben alkalmaztuk, és koncentrációja 2,7-szerese volt annak az értéknek, amely a maximális átalakulási sebesség eléréséhez szükséges lett volna.
Az inhibitorhatás kiértékelését az alábbi standardizált mérési eljárással végeztük:
A mikroszomális enzimet NADPH jelenlétében, 37 °C hőmérsékleten, 15 percen ót inkubáljuk. Ezután hozzáadjuk a megfelelő mennyiségű dimetil-szülfoxidot, amely vagy tartalmazza a vizsgálandó vegyületet, vagy nem, és folytatjuk az inkubálást 37 °C-on további 15 percen át. Az enzimaktivitás mérése a (14C)HMG-CoA szubsztrát hozzáadásával indul. 20 perc időtartamú, 37 °C-on folytatott inkubálás után a reakciót 25 pl 33%-os kálium-hidroxid hozzáadásával leállítjuk, beadagolunk, 0,05 pCi (3H) mevalonsavat, és szobahőmérsékleten 30 percen át állni hagyjuk az elegyet. Ezután, hogy a keletkezett mevalonsavat laktonná alakítsuk, 15 μΐ 5N sósavat, majd ezt követően brómfenolkék indikátort adunk az elegyhez, biztosítva ezáltal, hogy a megfelelő pH-csökkenést érzékeljük. A laktonná alakítás időtartama szobahőmérsékleten 30 perc, aminek elteltével az elegyet 15 percen át 2800-as fordulatszámmal centrifugáljuk. A felülúszót ezután egy 2 g AG 1-X8 anioncserélő gyantát tartalmazó (Biorad, formiát fázisú), 0,7 cm belső átmérőjű oszlopra rétegezzük, és az oszlopot 2 ml vizzel eluáljuk. Az első 0,5 ml eluátumot elöntjük, majd az eztán következő 1,5 ml-t felfogjuk, és 10,0 ml Opti-fluor szcintillóciós folyadékban megmérjük mind a trícium, mind a 14-szén radioaktivitásét. Az eredményt a 20 perc alatt keletkezett mevalonsav nmól-ban kifejezett mennyiségével adjuk meg, amelyet a trícium visszanyeréséből számított értékkel korrigálunk. A vizsgálati anyag hatását Iso értékként (az a koncentráció, amely 50%-os enzimaktivitás csökkenést okoz) adjuk meg,
-713
HU 201085 Β amelyet több mérés összesített eredményéből, 95%-os megbízhatósági határok között számítunk ki.
Ha a vizsgálandó anyag lakton formában van, akkor azt úgy alakítjuk ét nátriumsóvá, hogy dimetil-szulfoxidban feloldjuk, és 10-szeres moláris feleslegben nátrium-hidroxidot adunk hozzá, majd 15 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az elegyet ezután részlegesen, 7,5-8,0 pH-ra semlegesítjük 1 N sósavval, és megfelelő hígításban adjuk az elegyhez, amelyben az enzimreakciót végezzük.
2) Koleszterin szintézise frissen izolált patkánymáj sejtekben
Azokat a vegyületeket, amelyek a HMG-CoA reduktéz működését gátolták, megvizsgáltuk, hogy vajon ugyancsak képesek-e gátolni a (14C) ecetsav beépülését a koleszterinbe, patkányok frissen izolált májsejtjeiben. A vizsgálati módszert eredetileg Capuzzi és munkatársai közölték [Capuzzi, D. M. és Margolis, S. Lipids, 6: 602 (1971)].
a) Patkányok májsejtjeinek izolálása
180-220 g-os, Sprague uawiey patkányok Nembutol 50 mg/kg-os dózisával altatunk. Felnyitjuk a hasat, és a portális véna első elágazását kötéssel elzárjuk. Ezután 100-200 egység heparint fecskendezünk közvetlenül a hasi cavalis vénába. A portális véna egy távolabbi szakaszán egyetlen záróöltést helyezünk el, majd az öltés és az első elágazás között kanült vezetünk az érbe. A májon ezt követően 20 ml/perc sebességgel 37 “C-ra előmelegített és oxigénnel dúsított .A' pufferoldatot (HBSS = Hanks-féle kiegyensúlyozott sóoldat, amely kalciumot és magnéziumot nem, viszont 0,05 mól etilén-diamin-tetraecetsavat tartalmaz) áramoltatunk át, miután előzőleg a cavalis vénát elmetszettük, hogy az effluens elvezetése biztosítva legyen. A máj perfúzióját később 200 ml előmelegített ,B pufferoldattal [HBSS = Hanks-féle sóoldat, amely 0,05% bakterium(os) eredetű kollagenázt tartalmaz] folytatjuk, majd a májat kioperáljuk, kifejtjük a burkából, és 60 ml Waymouth-féle tápoldatban diszpergáljuk a sejteket. Ezután szobahőmérsékleten, kis sebességgel, 50 g-vel 3 percig centrifugálva az elegyet, elkülönítjük a májsejteket, amelyeket még egyszer mosunk Waymouth-féle tápoldattal. A sejtek életképességét tripánkékkel végzett festéssel állapítjuk meg. A fenti módon készített dúsított sejtszuszpenziőban az életképes sejtek aránya általában 70 és 90% között van.
b) f^C) Ecetsav beépülése a koleszterinbe
A májsejteket ismételten felszuszpendáljuk inkubációs oldatban (0,02 mól Tris-hidroklorid, pH = 7,4; 0,1 mól kálium-klorid;
3,3 mmól nátrium-citrát; 6,7 mmól nikotinamid; 0,23 mmól NADP; 1,7 mmól glükóz-6-foszfát), olyan töménységben, hogy a sejtek száma 2 mililiterenként 5xl06 legyen.
A vizsgálandó anyagot feloldjuk dimetil-szulfoxidban vagy dimetil-szulfoxid és viz 1:3 arányú elegyében. A dimetil-szulfoxid végső koncentrációja az inkubációs oldatban nem haladja meg az 1,0%-ot, és ezért gyakorlatilag nem befolyásolja a koleszterin szintézisét.
Az inkubálást a megfelelő (14C) acetát (58 mCi/mmól, 2 pCi/ml) hozzáadásával indítjuk el, majd a sejtszúszpenziót, amelynek térfogata 2 ml, egy 35 mm-es szövettenyésztő edényben 2 óra hosszat 37 °C hőmérsékleten tartjuk. Az inkubálás végeztével a szuszpenziót áttöltjük egy üvegből készült centrifugacsőbe, és 3 percen át 50 g-vel, szobahőmérsékleten centrifugáljuk. Az összetömörödött sejtfrakciót 1 ml vízben felszuszpendáljuk, miáltal egyúttal el is roncsoljuk, majd jégfürdőbe helyezzük. A zsírok kiextrahálását lényegében E.G. Bligh és W.J. Dyer módszerével [Can. J. Biochem. and Physiol., 37: 911 (1959)] végezzük. A felső szerves fázist elválasztjuk és nitrogénáramban szárazra pároljuk, majd a maradékot 100 pl 2:1 arányú kloroform-metanol-elegyben felszuszpendáljuk. A teljes mintát felcseppentjük szilikagél vékonyréteg-kromatográfiás lemezre, majd a kromatogramot hexán, dietil-éter és ecetsav 75:25:1 arányú elegyében kifejlesztjük. A lemezt egy BioScan automata sugárzásmérő készülékkel letapogatjuk, és a 0,28 Rf-értéknél található koleszterin radioaktivitását meghatározva, annak értékét az extraktum összes radioaktivitásának százalékában fejezzük ki. A rutinszerűen elvégzett vizsgálatok során a koleszterincsúcs radioaktivitása 800-1000 cpm-nek adódott, ami a lipid-extraktum őszszes radioaktivitásának 9-20%-a. Az eredmény jó egyezést mutat a Capuzzi és munkatársai által megadott értékekkel; ók az extrahálható radioaktivitás 9%-át találták a koleszterinben.
A vegyületek hatását, vagyis a koleszterin szintézisét gátló hatást úgy állapítjuk meg, hogy meghatározzuk a koleszterinbe beépült nyomjelző nukleid százalékos menynyiségét a vizsgálandó minta jelenlétében, illetve anélkül. Két vagy több kísérlet mérési eredményeiből megszerkesztjük a dózis-hatás diagramot., amelyből megállapíthatjuk 95%-os megbízhatósági határokkal az Iso értékét.
3) Koleszterinszintézis az emberi bór kötőszöveti sejtjeiben
A vegyületek kiválasztása során, a májszövetben kifejtett gátló hatás mértéke alapján állapíthatjuk meg az adott vizsgálati mintáról, hogy rendelkezik-e koleszterin szintézisét gátló hatással. Mindazonáltal a máj sejtjeiben gátló hatásúnak bizonyult ko9
-815
HU 201085 Β leszterinszintézis inhibitorokat megvizsgáltuk, hogy ugyancsak inhibitorai-e a kötőszöveti tenyészetben végbemenő koleszterinszintézisnek.
a) Emberi bór kötőszövet! sejtjeinek tenyészete
Emberi bőr kötószöveti sejtjeit (7-27 alkalommal átoltott) Eagles-féle minimál táptalajon, amely 10% magzati borjúsavót tartalmaz, szaporítjuk. Minden egyes kísérlethez törzstenyészetet készítünk, amelyet tripszinnel kezelünk, hogy az egysejtréteget diszpergáljuk, majd sejtszámlálás után a két mililiterenként 5xl05 sejtet tartalmazó tenyészetet szétterítjük egy 35 mm-es tenyésztő tálban. A tenyészetet ezután 37 °C hőmérsékleten, 5% szén-dioxid és 95% nedvesített szobalevegőből álló atmoszférában inkubáljuk 18 óra hosszat. A koleszterin bioszinté2iséért felelős enzimeket úgy indukáljuk, hogy eltávolítjuk a savótartalmú tápoldatot, az egysejtréteget mossuk, és 1,0 ml, 1% zsírsavaktól mentes szar vasmar ha-szérumalbumint tartalmazó
Eagle-féle minimál tápoldatban további 24 órán át inkubáljuk a tenyészetet.
b) 0*0 Ecetsav beépülése a koleszterinbe
Az indukált kötőszöveti sejttenyészetet Earle-féle minimál tápoldattal mossuk. A vizsgálandó anyagot dimetil-szulfoxidban, vagy dimetil-szulfoxid és Earle-féle minimál tápoldat 1:3 arányú elegyében feloldjuk (a dimetil-szulfoxid végső koncentrációja a sejttenyészetben nem haladja meg az 1%-ot), az oldatot a tenyészethez adjuk, amelyet ezután 37 °C hőmérsékleten, 5% szén-dioxidot és 95% nedvesített szobalevegöt tartalmazó atmoszférában, 30 percen át előinkubálunk. A vizsgálati anyaggal végzett előinkubálás után nátrium-(l-14C)acetátot (2,0 uCi/ml, 58 uCi/mmól) adunk a tenyészethez, és folytatjuk az inkubálást még négy óra hosszat. Ezután a tápoldatot eltávolítjuk, és az egysejtréteget (200 ug fehérje tenyészetenként) 1 ml vízbe kaparjuk. Az elroncsolódott sejtekből a lipideket kloroform-metanol-eleggyel extraháljuk, követve a méjsejtszuszpenzió feldolgozásával kapcsolatban leírtakat. A szerves fázist nitrogéngáz alatt beszáritjuk és a maradékot újból felszuszpendáljuk 100 ul kloroform-metanol 2:1 arányú eleggyel. A teljes mintát felcsöppentjük szilikagél vékonyréteg-kromatográfiás lemezre, és elvégezzük az analízist a méjsejtes kísérletnél leírt módon.
A koleszterin szintézisét gátló hatást úgy értékeljük ki, hogy meghatározzuk a koleszterinbe beépült nyomjelző nukleid százalékos mennyiségét a vizsgálandó minta jelenlétében, illetve anélkül. Két vagy több kísérlet mérési eredményeiből megszerkesztjük a dózis-hatás diagramot, és leolvassuk az I» értéket. A 95%-os megbízhatósági intervallulü mot ugyancsak a dózis-hatás diagramból számítjuk.
Jelen találmány tárgyaként tekintjük továbbá mindazoknak a gyógyszerészeti készítményeknek az előállítását, amelyek a gyógyszerészetben szokásos hordozó- és hígítóanyagokon kívül a találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületekből legalább egyet tartalmaznak. A megfelelő gyógyszerészeti készítményt általánosan ismert szilárd vagy folyékony hordozó- és higítóanyagok, illetve más gyógyszeradalékok felhasználósával állítjuk eló, amelyek alkalmasak arra, hogy a kívánt kezelési módnak megfelelő gyógyszerformát elkészítsük. A vegyületeket bejuttathatjuk a szervezetbe orálisan - például tabletta, kapszula, granulátum vagy por formájában - vagy parenterálisan, injekciós készítmény formájában. A különböző adagolási formák hatóanyag-tartalma adagonként 1 és 2000 mg között lehet. A beadandó dózis függ az egységnyi dózistól, a tünetekből, továbbá a beteg korától és testtömegétől.
Az (I) általános képletű vegyületeket más, a koleszterin bioszintézisének gátlására javasolt gyógyszerekhez - ilyen például a lovastatin - hasonlóan alkalmazhatjuk emlősök, beleértve az embert, kutyát, macskát és más hasonlókat, kezelésére. Ennek megfelelően, a találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket beadhatjuk egyetlen, 4-2000 mg hatóanyagot tartalmazó dózisban, vagy egyénre szabott dózisokban, például naponta négyszer l-től 100 mg-ig terjedő adagban, előnyösen 4-200 mg-ot, napi négy 0,5 és 50 mg közötti adagban. Végezhetjük továbbá a kezelést a vegyületeket hosszú idő alatt szabaddá tevő gyógyszerformával is.
A találmány előnyös kiviteli módjait szemléltető eljárási változatokat mutatjuk be a következő példádk során. A példák leírásában, ha más jelölés nem utal rá, a hőmérsékletet °C-ban adjuk meg. A flash-kromatográfiás elválasztást Merck 60 vagy Whatmann LPS-I szilikagélen végeztük. A fordított fázisú kromatográfiához CHP-20 MCI gél gyantát - a Mitsubishi Ltd. gyártmánya - alkalmaztunk.
1. példa
Litium-(S)-{4-[/{2-(4-f]uor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzil}-oxi/-iaetoxi-foszfonil ]-3-hidroxi-bu tirá t}
A) N-(2,4-Dimetil-benzilidén)-fenil-amin
Irodalom: Merck, 4 375 475 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, 39. oldal
6,97 ml (50 mmól) frissen desztillált 2,4-dimetil-benzaldehid (Aldrich), 4,56 ml (50 mmól) desztillált anilin (Aldrich) és 80 ml
-9η
HU 201085 Β vízmentes toluol elegyét 3 órán át, argongáz atmoszférában, egy Dean-Stark-készülékkel ellátott visszacsepegő hütő alatt forraljuk.
Az elegyet lehűtjük, vákuumban bepároljuk, és a visszamaradó nyersterméket, ami egy 5 sárga olaj, vákuumban, golyóscső típusú desztillálókészülékben ledesztilláljuk. A termék 0,5 Hgmm-en 160-180 °C forráspontú világossárga olaj, amely állás közben alacsony olvadáspontú szilárd anyaggá kristályosodik. 10 Tömege 8,172 g, a számítottnak 78,1%-a. A hexán-aceton 4:1 elegyben kifejlesztett, és ultraibolya fényben, illetve jódgőzben előhívott vékonyréteg-kromatogramon az anyag foltja 0,67 és 0,77 Rf-értékeknél található 15 (geometriai izomerek).
B) Az (ac) képletű palládiumkoplex előállítása
Irodalom: Merck, 4 375 475 számú amerikai 20 egyesült államokbeli szabadalmi leírás, 39. oldal
Az A) pont alatti módon előállított benzilidén-származék 6,0 g-ját (28,7 mmól) feloldjuk 144 ml jégecetben, hozzáadunk 6,44 g 25 (28,7 mmól) palládium(II)-acetátot, majd a tiszta, homogén, vörös oldatot argongáz atmoszférában egy óra hosszat visszacsepegó hűtű alatt forraljuk. A keletkezett zavaros oldatot melegen átszűrjük egy 1-1,5 cm vas- 30 tag Celit rétegen, és 900 ml vízhez adjuk. A kicsapódott narancssárga szilárd terméket szűrőre gyűjtjük, és vákuumban, foszfor(V)-oxid felett 16 órán át szárítjuk. Az így kapott palládiumkomlex tömege 10,627 g (85,5%), 35 olvadáspontja 194-196 °C. (Az irodalom szerint az átkristályosított analitikai minta 203-205 °C-on olvad.)
Cj 2-(4-Fluor—3-metH-fenil)-4,6-dimetil-benz- 40 aldehid (1) (4-Fluor-3-metil-fenil )-magnézium-bromid
Irodalom: Merck, 4 375 475 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi 45 leírás, 37. és 38. oldal
A Grignard-reagenst úgy állítjuk elő, hogy 22,5 g (60,9 mmól) 5-bróm-2-fluor-toluolt (Fairfield Chemical Co.) cseppenként, olyan ütemben, ami elégséges ahhoz, hogy az 50 elegyet forrásban tartsa, 70,0 ml vízmentes dietil-éteres közegben, 1,35 g (55,4 mmól, 8 ekvivalens) magnéziumforgácshoz adagolunk.
A reakciót ultrahang-készülékkel indítjuk be, és amikor a brómvegyület adagolása befeje- 55 zódött, az elegyet argongáz alatt 1 óra hoszszat szobahőmérsékleten keveredni hagyjuk, majd 15 percen át visszacsepegó hűtő alatt forraljuk, és végül hagyjuk visszahűlni szobahőmérsékletre. 60
2) 2-(4-Fluor-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzaldehid
Egy lombikban a B) pont szerint előállított palládium komplex 3,0 g-ját (6,92 mmól), 14,52 g (55,4 mmól, 8 ekvivalens) trifenil-foszfint és 100 ml vízmentes benzolt szobahőmérsékleten argon alatt, 30 percen át kevertetünk. Ezután fecskendővel egyszerre hozzáadjuk a C(l) pont szerinti Grignard-reagens üveggyapoton megszűrt oldatát, és az elegyet szobahőmérsékleten, argongáz alatt, 1,5 órán át keveredni hagyjuk. Ezt követően beadagolunk 35 ml 6,0 N sósavat, egy további órán át keverjük az elegyet szobahőmérsékleten, majd egy hozzávetőlegesen 1,5 cm-es Celit rétegen átszűrjük. A szűrletet extraháljuk 250 ml dietil-éterrel, az extraktumot mossuk kétszer 100 ml nátrium-klorid-oldattal, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk é§ vákuumban bepároljuk, aminek eredményeként 13,35 g sűrű, narancsszínű, állás közben bekristélyosodó olajat kapunk. A narancsszínű nyersterméket 700 g szilikagélen flash-kromatográfiával tisztítjuk. Az eluálást hexánnal kezdjük, majd 95:5 arányú hexán-dietil-éter-eleggyel folytatjuk. A terméket tartalmazó frakciókat bepárolva 1,507 g (89,9%), a címben megnevezett aldehidet kapunk világossárga kristályos formában, amelynek olvadáspontja 72-75 °C. (Az irodalom az anyag olvadáspontjaként 73-74 °C-ot ad meg.) Vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke 0,40, ha a kromatogramot 95:5 arányú hexán-dietil-éter-elegyben fejlesztjük ki. Kiértékelés céljából a kromatogramot ultraibolya fényben vizsgáljuk, illetve foszformolibdénsav reagensoldattal bepermetezzük.
D) [2-(4-Fluor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzil]-alkohol
259 mg (6,82 mmól,' 0,55 ekvivalens) lítium—(tetrahidro—aluminát)—ot 15 ml vízmentes dietil-éterben szuszpendálunk, majd 0 °C-on, jégfürdővel hűtve a reakcióedényt, a szürke szuszpenzióhoz cseppenként 3,0 (12,4 mmól), a C) pont szerinti aldehid 15 ml vízmentes dietil-éterrel készült oldatát adjuk. Az elegyet szobahőmérsékleten, argongáz alatt 30 percen át keveredni hagyjuk, majd visszahűtjük 0 °C-ra, és a komplex megbontása céljából, egymás után, cseppenként beadagolunk 260 ul vizet, 260 pl 15%-os nátrium-hidroxid-oldatot és megint vizet, 780 μΐ-t. A szuszpenziót meghígítjuk etil-acetáttal, átszűrjük Celitre rétegzett vízmentes nátrium-szulfáton, majd a színtelen szűrletet vákuumban bepároljuk, aminek eredményeképpen
2,99 g (98,8%) fehér szilárd anyagot kapunk. A nyersterméket hideg hexánnal eldörzsölve, 2,467 g (81,6%), 102-103 °C-on olvadó, fehér szilárd termék formájában kapjuk a kívánt alkoholt. A vékonyréteg-kromatogramot hexán és etil-acetát 9:1 arányú elegyében fejleszt11
-1019
HU 201085 Β jük ki, és ultraibolya fényben, illetve foszformolibdénsavval tesszük a foltot láthatóvá. Rf = 0,24.
E) Metil-(S)-{3-[ (terc-butil-difenil-szilil)-oxi ]-4-(hidroxi-nietoxi-foszfonil)-butirátj (1) Metil-(S)-(4-bróni-3-hidroxi-butirát) (la) Kalcium-ÍR-flf,!?)]-( 2,3,4-trihidroxi-butirát)-hidrát
Irodalom: Carbohydrate Research, 72: 301-304 (1979).
44,0 g (250 mmól) D-izoaszkorbinsav
625 ml vizes oldatához 50 g kalcium-karbonátot adunk, a szuszpenziót jégfürdóvel 0 °C-ra hűtjük, és részletekben beadagolunk 100 ml 30%-os hidrogén-peroxidot. Az elegyet olajfürdővel melegítve 30-40 °C hőmérsékleten keverjük 30 percen át, majd 10 g Darco aktivált szenet adunk hozzá, és gőzfürdőn az oxigéngáz-fejlődés befejeztéig melegítjük. A szuszpenziót ezután Celiten átszűrjük, vákuumban, 40 °C hőmérsékletű fürdőn bepároljuk, majd a maradékot 50 ml vízben felvesszük, és gőzfürdőn melegítve addig adunk hozzá metanolt, amíg az oldat megzavarosodik. A kicsapódó gumiszerü anyagot kiszűrve és levegőn megszáritva a kapott kalciumsó fehér por, amelynek tömege 30,836 g, a számítottnak 75,2%-a. A vegyűlet Rf-értéke az izopropil-alkohol-aramónium-hidroxid-viz 7:2:1 eleggyel kifejlesztett kromatogramon 0,19. Az előhívószer foszformolibdénsav.
(lb) Metil-[S-( IP,^))-(2,4-dibróm-3-hidroxi-butirát)
Irodalom: K. Bock és munkatársai, Acta Chemica Scandinavica (B), 37: 341-344 (1983)
Az (la) pont szerinti kalciumsó 30 g-ját feloldjuk 210 ml 30-32%-os ecetsavas hidrogén-bromid oldatban, és az elegyet 24 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a barna oldathoz 990 ml metanolt adunk, és folytatjuk a keverést éjszakán át. Másnap az oldatot bepárolva narancsszínű olajat kapunk, amelyet 75 ml metanolban 2 órán át visszacsepegő hűtő blatt forralunk, majd bepárolunk. A maradékot 100 ml etil-acetát és víz elegyére öntjük, a szerves fázist kétszer vízzel, majd nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. Az így kapott nyers dibrómvegyület világos, narancsszínű olaj, tömege 22,83 g, a számítottnak 90,5%-a. Vékonyrétegkromatogramot etil-acetát és hexán 1:2 arányú elegyével készítünk, amelyen az ultraibolya fénnyel, illetve foszformolibdénsavval előhívott folt 0,69 Rf-értéknél található.
(le) Metil-(S)-(4-bröm-3-hidroxi-butirát)
Irodalom: az (lb) pont alatt megadott.
20,80 g (75,4 mmól) fenti dibrómszármazék és 21,0 g vízmentes nátrium-acetát 370 ml etil-acetáttal, valamint 37 ml vízmentes ecetsavval készített, és előzőleg argongázzal átfúvatott oldatához 1,30 g 5%-os csontszenes palládium-katalizátort adunk, és a fekete szuszpenziót hidrogéngáz atmoszférában, a hidrogénfogyás állandó regisztrálása mellett kevertetjük. Két óra elteltével, amikor a hidrogéngáz felvétele befejeződött, az elegyet Celiten átszűrjük, a szűrletet mossuk telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és nátrium-klorid-oldattal, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A kapott nyers bróm-észter barna olaj, amelyet egy másik, 36,77 g dibrómvegyületból készített nyerstermékkel egyesítve vákuumban ledesztillálunk. Az 1,33 kPa-on 79-80 °C-on forró párlat tömege 25,77 g (61,3%). A címben megnevezett bróm-észter ami a desztilláció végterméke egy világos olaj; az etil-acetát-hexán 1:1 elegyben kifejlesztett, és foszformolibdénsavval előhívott vékonyréteg-kromatogramon 0,44 Rf-értéknél jelenik meg.
(2) Metil-(S)-(4-bróm-3-[(terc-butil-difenil-szilil)-oxi]- b u tirát)
4,0 g (20,4 mmól), az E(l) pont szerinti bróm-hidroxi-vegyület, 6,94 g (5,0 ekvivalens) imidazol, 12 mg (0,005 ekvivalens) 4-(dimetil-amino)-piridin és 40 ml vízmentes Ν,Ν-dimetil-formamid elegyéhez 5,84 ml (1,1 ekvivalens) (terc-butil-difenil-szilil)-kloridot adunk, majd a homogén oldatot argongáz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán át keveredni hagyjuk. Másnap az elegyet 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldat és etil-acetát keverékére öntjük, a szerves fázist elválasztjuk és mossuk vízzel, valamint nátrium-klorid-oldattal, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk, aminek eredményeként tiszta, viszkózus olaj formájában 9,32 g (100%) nyers szilil-étert kapunk. A hexán-etil-acetát 3:1 arányú elegyében kifejlesztett vékonyréteg-kromatogramon a vegyűlet Rf-értéke 0,75. A kromatogramot ultraibolya fényben, illetve foszformolibdénsav reagensoldattal bepermetezve értékeljük.
(3) Metil-(S)-{3-[( tere-b u til-difenil-szilil)-oxi ]-4-jód-butirát)
9,32 g (201 mmól), az E(2) pontban leírtak szerint előállított nyers brómvegyületet feloldunk 60 ml, 4 A molekulaszitán szárított etil-metil-ketonban, és az oldathoz 15,6 g (100,5 mmól, 5,0 ekvivalens) nátrium-jodidot adunk. A sárga szuszpenziót argongáz atmoszférában 5 órán át visszacsepegó hütő alatt forraljuk, majd lehűtjük és etil-acetáttal meghígítva szűrjük, a szűrletet hígított
-1121
HU 201085 Β nátrium-hidrogén-szulfit-oldattal elszíntelenítjük, majd azt követően nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A nyerstermék 10,17 g sárga olaj, amelyet flash-kromatográfiával 600 g szilikagélen, hexán és metilén-diklorid 3:1 arányú elgyével eluálva, tisztítunk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk, aminek eredményeként 7,691 g (74,2%-os kitermelés a két lépésre) tiszta, színtelen, sűrű olaj formájában kapjuk a címben megnevezett jódvegyületet. A vékonyréteg-kromatogramon, amelyet hexán és etil-acetát 3:1 arányú elegyével fejlesztünk ki, a termék foltja 0,75 Rf értéknél a kiindulási brómvegyülettel együtt jelenik meg. Előhívószerként foszformolibdénsavat alkalmazunk, illetve ultraibolya fényben vizsgáljuk a kromatogramot.
(4) Metil-(S)-{3-[(tei'c-butil-difenil-szilil)-oxi]-4-(dietoxi-foszfonil)-butirát}
7,691 g fenti jódvegyület és 20 ml trietil-foszfit elegyét argongáz alatt, 155 °C hőmérsékletű olajfűrdón, 3,5 órán át melegítjük. Az elegyet ezután lehűtjük, és a felesleges trietil-foszfitot, amelynek forráspontja 0,66 kPa-on 75 °C, vákuumban ledesztilláljuk. Az igy kapott, mintegy 8,0 g tömegű sárga olajat 400 g szilikagélen flash-kromatográfiával tisztítjuk, amelynek során az eluálást 4:1 arányú hexán-aceton-eleggyel végezzük. A terméket tartalmazó frakciókat bepárolva 3,222 g (41,1%) tiszta, színtelen, viszkózus olajként a címben megnevezett foszfonátot kapjuk. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke 1:1 arányú hexán-aceton-elegyben 0,51. A kromatogramot ultraibolya fényben, illetve foszformolibdénsav előhívó reagenssel értékeljük ki.
A reakcióból kinyert terméken kívül 2,519 g kiindulási jódvegyületet kapunk viszza, és így a kitermelés 61,1%.
(5) Metil-(S)-{3-[ (terc-butil-difonil-szilil)-oxi]-4-foszforul- b u tirá t}
9,85 g (20 mmól) fenti foszfonát 60 ml vízmentes metilén-dikloriddal készített oldatához egymást követően 5,31 ml (32 mmól, 1,6 ekvivalens) N,N-bisz(trimetil-szilil)-trifluor-acetamidot és 6,60 ml (50 mmól, 2,5 ekvivalens) (trimetil-szilil)-bromidot adunk, majd a tiszta oldatot argongáz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán át keveredni hagyjuk. Másnap 80 ml 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldatot adunk az elegyhez és etil-acetáttal extraháljuk. A vizes fázist nátrium-kloriddal telítve még egyszer extraháljuk etil-acetáttal, majd az egyesített szerves fázist nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk, aminek eredményeképpen a nyers foszfonsav-származékot viszkózus olaj formájában kapjuk. Izopropil-alkohol, ammónium-hidroxid és viz 7:2:1 arányú elegyével vékonyréteg-kromatogramot készítünk, amelyen ultraibolya fényben, illetve foszformolibdénsavval tesszük a foltokat láthatóvá. A termék Rf-értéke 0,30.
(6) Metil- (S)-{3-[( terc-bu til-difenil-szilil )-oxi ]-4-(hidroxi-metoxi-foszfonil)-bu tirét}
Hozzávetőlegesen 20 mmól fenti nyers foszfonsav-származékot feloldunk 25 ml vízmentes piridinben, hozzáadunk 1,62 ml (40 mmól 2,0 ekvivalens), 3 Á molekulaszitán szárított metanolt és 4,54 g (22,0 mmól, 1,10 ekvivalens) diciklohexil-karbodiimidet, majd az így kapott fehér szuszpenziót argongáz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán át keveredni hagyjuk. Másnap a piridint vákuumban ledesztilláljuk, majd 2x15 ml benzollal azeotróp desztillációt végzünk. A maradék olajat feloldjuk etil-acetátban, szűrjük, mossuk 0,1 N sósavval és nátrium-klorid-oldattal, majd vízmentes nátrium-szulfáton megszáritva vákuumban bepároljuk. Az így kapott 8,272 g nyers észter egy olaj, amely kevés szilárd kiválást, diciklohexil-karbamidot tartalmaz. A termék vékonyréteg-kromatogramját 7:2:1 arányú izopropil-alkohol-ammónium-hidroxid-víz-eleggyel fejlesztjük ki, és ultraibolya fényben, valamint foszfor-molibdénsavval hívjuk eló. Rf-értéke 0,60.
F) Metil-(S)-{3-[( terc-butil-difenil-szilil)-oxi]~4-[/{2-(4-fluor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzil }-oxi/-metoxí-foszfonil]-butirát}
6,595 g (14,7 mmól) E) pont szerinti foszfonsav-monometil-észtert feloldunk 30 ml vízmentes metilén-dikloridban, hozzáadunk 5,60 ml (29,4 mmól, 2,0 ekvivalens) dietil-(trimetil-szilil)-amint, és argongáz alatt, szobahőmérsékleten, 1 óra hosszat kevertetjük. Az ilegyet ezt követően vákuumban bepároljuk, majd a maradékból 30 ml benzolt desztillálunk le és vákuumban megszárítjuk. Az így kapott világossárga viszkózus olajat feloldjuk 30 ml vízmentes metilén-diklorid és 2 csepp molekulaszitán szárított N,N-dimetil-formamid elegyében, az éles oldatot só-jég-keverékkel, -10 °C-ra hűtjük, és egy fecskendő segítségével, cseppenként 1,41 ml (16,2 mmól, 1,1 ekvivalens) desztillált oxalil-dikloridot adunk hozzá. Élénk gázfejlődés észlelhető, és az oldat sőtétebb sárga színűvé válik. Az oldatot ezután argon alatt, 10 °C-on 15 percet, majd szobahőmérsékleten 1 órán át hagyjuk keveredni, vákuumban bepároljuk, a maradékról ledesztillálunk 30 ml benzolt és vákuumban megszáritjuk. Az így kapott nyerstermék egy sárga olaj, amelyet 10 ml vízmentes metilén-dikloridban feloldunk, és cseppenként hozzáadjuk 2,06 g
-1223
HU 201085 Β (8,43 mmól), a D) pontban leírt módon előállított, megfelelően szubsztituált benzil-alkohol 15 ml vízmentes piridinnel készített oldatát. Az elegyet ezután argongáz alatt, szobahőmérsékleten, 16 óra hosszat kevertetjük, szárazra pároljuk, és a maradékot 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldat és etil-acetát keverékére öntjük. A szerves fázist mossuk telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és nátrium-klorid-oldattal, vízmentes nátrium-szulfáton megszáritjuk, majd vákuumban bepároljuk, aminek eredményeként 8,290 g barna olajat kapunk. A nyersterméket 370 g szilikagélen flash-kromatográfiával tisztítjuk, eluensként 7:3 arányú hexán-aceton-elegyet használva. A terméket tartalmazó frakciókat ezután egyesítjük és bepároljuk, aminek eredményeként 3,681 g (66%) halványsárga olaj formájában kapjuk a címben megnevezett foszfonátot. A vékonyréteg-kromatográfiás oldószerelegy hexán-aceton 3:2, araikor is a vegyület Rf-értéke 0,59.
A kromatogramok kiértékelését ultraibolya fényben és foszformolibdénsav reagensoldattal végezzük.
H) Litium-(S)-{4-[/{2-(4-fl uor-3-me til-fenil)-4,6-dimetil-benzil}-oxi/-metoxi- fősz fonil]-3-hidroxi-butirét}
184 mg (0,420 mmól), a fenti G) pont szerinti metil-észtert feloldunk 5,0 ml dioxánban, és az oldathoz 0,50 ml' (1,2 ekvivalens) 1,0 n litium-hidroxid-oldatot adunk, majd argongáz alatt, szobahőmérsékleten, 3 órán át keveredni hagyjuk. A reakcióelegyet ezután vízzel meghigitjuk, átszűrjük egy 0,4 μπι-es polikarbonát membránon és vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk 75 ml vízben, lefagyasztjuk és liofilizáljuk, majd az igy kapott nyersterméket újra feloldjuk minimális mennyiségű vízben, felviszszük egy 100 ml-es CHP-20 gyantából készült oszlopra és kromatografáljuk. Az eluálást víz és acetonitril oldószerelegy lineáris gradiensét alkalmazva végezzük. A terméket tartalmazó frakciókat bepároljuk, a maradékot feloldjuk 50 ml vizben, átszűrjük egy 0,4 pm-es polikarbonát membránon, majd liofilizáljuk, aminek eredményeként 174 mg (89,1%) fehér szilárd formában kapjuk a címben megnevezett monolitiumsót. A só 1,95 mól vizet tartalmaz, relatív molekulatömege 465,46.
A vegyület foltja a 7:2:1 arányú izopropil-alkohol-ammónium-hidroxid-víz elegyben kifejlesztett vékonyréteg-kromatogramon 0,58 Rf-értéknél található. A kiértékelést ultraibolya fényben, illetve foszformolibdénsav szinreagenssel végezzük.
Ή-NMR spektruma (400 MHz):
1,74-2,08 ppm (2H, m, -PO(OCH3)-CH2-]
2,30 [3H, s, aromás gyűrűhöz kapcsolódó metil]
2,32 [3H, d, a fluoratomhoz oC- helyzetű aromás gyűrűhöz kapcsolódó metil, Jhf=2,2 Hz]
2,35-2,62 [2H, m, -CH2-CO2-LÍ]
2,46 [3H, s, aromás gyűrűhöz
3,57 és kapcsolódó metil]
3,63 [3H, 2 dublett, -POfOCHa)-,
2 diasztereomer, Jhp=-
10,3 Hz]
4,28 [1H, m, -CHz-CH(OH)-CH2-
-COz-Li]
4,97 [2H, m, Ph-CH2-O-PO(OCH3>-R]
6,87-7,25 (5H, m, aromás protonok]
példa
Dilitium-(S)-{4-[/{2-(4-fluor-3-metil- fenil )-4,6-dime til-benzil}-oxi/- foszfonáto]-3-hi droxi- buti rét}
Az 1. példabeli diészter 374 mg-ját (0,853 mmól) 8 ml dioxánban, 50 °C-os olajfürdőn, argongáz alatt, 2,6 ml (3,0 ekvivalens) 1,0 N lítium-hidroxid-oldattal melegítjük 5 órán át. A reakció közben fehér csapadék kiválását észleljük. Az elegyet ezután vízzel meghigitjuk, szűrjük és dietil-éterrel extraháljuk. A vizes fázist átszűrjük egy 0,4 pm-es polikarbonát membránon, vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 100 ml CHP-20 gyantán, víz és acetonitril elegyével lineáris grádienselúciót alkalmazva, tisztítjuk. A terméket tartalmazó frakciókat vákuumban bepároljuk, a maradékot feloldjuk 50 ml vízben, ismét átszűrjük egy 0,4 pm-es polikarbonát membránon és liofilizáljuk, aminek eredményeként 260 mg (67,1%) fehér szilárd, 1,77 mól kristályvíz tartalmú anyagként kapjuk a címben megnevezett dilítiumsót. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke 0,47. A kromatogramot izopropil-alkohol, ammónium-hidroxid és víz 7:2:1 arányú elegyével fejlesztjük ki, majd ultraibolya fényben, valamint foszformolibdénsav szinreagenssel hívjuk elő.
A vegyület ’H-NMR-spektruma (400 MHz,
CD3OD):
δ 1,69 ppm [2H, m, -O-PO-CH2-CH(OH)~]
2,26-2,42 [2H, m, -CH2-CO2LÍ]
2,30 [3H, s, aromás gyűrűhöz kapcsolódó metil]
2,31 [3H, d, a fluoratomhoz oC-helyzetű, aromás gyűrűhöz kapcsolódó metil, Jhf=- 1,9 Hz]
2,38 [3H, s, aromás gyűrűhöz kapcsolódó metil]
4,22 [1H, m, -CH(OH)-CH2-]
4,75 [2H, m, Ph-CHz-O-PO-]
6,86-7,23 [5H, m, aromás protonok]
-1325
HU 201086 β
3. példa
L,itium-(S)-{4-[/{2-(4-fluor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzil}-oxi/-metil-foszfinil ]-3-hidroxi- butirát)
A) Metil-(S)-{3-[(terc-b util-difenil-szilil)-oxi)-4-klór-meti]-foszfinil)-butiré t)
Ezt a vegyületet a 6. példa B) pontja alatt, az első három paragrafusban leírtak szerint állítjuk elő.
B) Metil-(S)-{3-[(terc-butil-difenil-szilil)-oxi]-4-[/\2-(4-fluor-3-me til-fenil )-4,6-dimetil-benzil\-oxi/-metil-foszfinil]-butirát}
2,2 mmól, az A) pont szerinti klór-foszfinát, 429 mg (2,2 mmól, 1,0 ekvivalens), az 1. példa C(2) pontja szerint előállított, megfelelően szubsztituált benzil-alkohol és 10 ml vízmentes metilén-diklorid elegyéhez 425 pl (3,04 mmól, 1,4 ekvivalens) trietil-amint és 27 mg (0,22 mmól) (4-dimetil-amino)-piridint adunk, majd a kapott narancsszínű oldatot éjszakán át argongáz alatt keveredni hagyjuk. Az elegyet ezután 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldat és etil-acetát keverékére öntjük, a szerves fázist mossuk nátrium-klorid-oldattal, vízmentes nátrium-szulfáton megszárítjuk és bepároljuk, aminek eredményeként 1,1 g narancsszínű olajat kapunk. A nyersterméket flash-kromatográfiás módszerrel, 44 g LPS-1 szilikagéllel töltött oszlopon, etil-acetát és hexán 1:1 arányú elegyét alkalmazva eluensként, tisztítjuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk. A visszamaradó halványsárga olaj a címben megnevezett vegyület, amelynek tömege 298 mg, a számítottnak 21%-a. Visszakapunk ezen kívül 460 mg kiindulási vegyületet, vagyis a megfelelően szubsztituált benzil-alkoholt, és ezzel számolva a konverzió 67%-nak adódik. A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatot etil-acetát-hexán 1:1 arányú oldószereleggyel végezzük. A 0,18 Rf-értéknél jelentkező foltot ultraibolya fényben, vagy foszformolibdénsav színreagens segítségével tesszük láthatóvá.
C) Metil-(S)-{4-[/{2-(4-fluor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzil}-oxi/~ metil- fősz finil]-3-hi droxi- b u tirá t)
298 mg (0,46 mmól), a B) pontban leírt szilil-éter 6 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatához 110 pl (1,84 mmól, 4,0 ekvivalens) vízmentes tömény ecetsavat és
1,43 ml (3,1 ekvivalens) 1,0 M tetrahidrofurános tetrabutil-ammónium-fluorid-oldatot adunk, majd a kapott oldatot argongáz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán ét keverjük. A reakcióelegyet hideg víz és etil-acetát keverékére öntjük, a szerves fázist mossuk telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd nátrium-klorid-oldattal, izzított nátrium-szulfáton megszáritjuk és bepároljuk. 273 mg sárga olaj marad vissza, amelyet 11 g LPS-1 szilikagéllel töltött oszlopra viszünk, és 3:2 arányú hexán-aceton-eleggyel eluálva flash-kromatografáljuk. A terméket tartalmazó tiszta frakciókat bepárolva 150 mg (80%), a címben megnevezett vegyületet kapunk viszkózus olaj formájában, amelynek vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke 0,23, ha a kromatogramot hexán és aceton 1:1 arányú elegyével fejlesztjük ki. Az előhívószer foszformolibdénsav, illetve ultraibolya fény.
D) Litium-(S)-{4-[/{2-(4-fluor-3-metil-fenil)~
-4,6-dimetil-benzil}-oxi/-metil-foszfinil]-3-hidroxi-butirát}
150 mg (0,367 mmól), a C) pont szerinti metil-észtert feloldunk 3 ml dioxánban, és hozzáadunk 0,44 ml (1,2 ekvivalens) 1,0 N litium-hidroxid-oldatot, majd az igy kapott szuszpenziót argongáz alatt, szobahőmérsékleten 2 óra hosszat keveredni hagyjuk. A reakcióelegyet ezután vizzel meghígítjuk, egy 0,4 pm-es polikarbonát membránon átszűrjük és vákuumban bepároljuk, aminek eredményeként színtelen üvegszerű maradékot kapunk.
A nyersterméket minimális mennyiségű vízben felvesszük, 100 ml HP-20 gyantával töltött oszlopra visszük és viz-acetonitril lineáris gradiens eleggyel eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat bepároljuk, a maradékot 50 ml vízben feloldjuk, és egy 0,4 pm-es polikarbonát membránon megszűrjük, majd liofilizáljuk, aminek eredményeként 130 mg (79%) lítiumsót kapunk fehér szilárd anyagként. A só 1,73 mól kristályvizet tartalmaz. A termék vékonyréteg-kromatogramját metilén-diklorid, metanol és ecetsav 8:1:1 arányú oldószereleggyel fejlesztjük ki, és ultraibolyafényben, illetve foszformolibdénsav színreagenssel értékeljük ki. A vegyület Rf-értéke 0,52, ’H-NMR-spektruma (400 MHz) a következő:
é 1,49 ppm [3H, d, -O-PO(CHa)- Jhp=14,7]
1,83-2,00 [2H, m, -PO(CH3)-CH2-]
2,27-2,40 [2H, m, -CH2-COzLif
2,30 [6H, β, 2, aromás gyűrűhöz kapcsolódó metil]
2,44 [3H, s, aromás gyűrűhöz kapcsolódó metil]
4,26 [IH, m, -CH2-CH(OH)-CHz- -CO2LÍ]
4,87 [2H, m, Ar-CHz-O-PO(CH3)-]
6,90-7,20 [5H, m, aromás protonok]
-1427
HU 201085 Β
4. példa
Lítium-(S)-{4-[/{2-(4-fliior-benzil)-oxi-4,6-diklór~benzil}-oxi/-metoxi-foszforul ]-3-hÍdroxÍ-butirát}
A) 2-[(4-Fluor-benzil)-oxi]~4,6-diklór-benzaldehid
Irodalom: J. Med. Chem., 29: 167 (1986)
13,77 g (72,5 mmól) 2-hidroxi-4,6-diklór-benzaldehidet 100 ml N,N-dimetil-fór mamidban kevertetünk, és hozzáadunk 12,02 g (87 mmól, kálium-karbonátot. Az elegyet hozzávetőlegesen 70 °C hőmérsékleten 1 órán át melegítjük, majd beadagolunk 11,7 ml (4-fluor-benzil)-bromidot. Az így kapott oldatot további 3,5 órán át keverjük 70 °C-on, majd 1,5 1 jeges vízre öntjük, a kivált csapadékot szűrjük, vízzel mossuk és végül dietil-éter és petroléter elegyéből átkristályositjuk. 17,88 g (83%) piszkosfehér kristályos terméket kapunk, amelynek olvadáspontja 107-108 °C.
B) 2-[(4-Fluor-benzil)-oxi]~4,6-diklór-benzil-alkohol ml 0 °C-ra hűtött, vízmentes dietil— -éterben 158 mg (4,16 mmól, 0,6 ekvivalens) lítium-(tetrahidro-aluminát)-ot szuszpendálunk, majd cseppenként beadagoljuk a fenti aldehid 2,06 g-jának (6,93 mmól) 10 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készült oldatát. Az elegyet szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni és argongáz alatt, 1 óra hosszat keverjük, majd visszahűtjük 0 °C-ra és egymást követően 160 pl vizet, 160 ul 15%-os nátrium-hidroxid-oldatot, végül további 475 wl vizet adunk hozzá. A kicsapódott sókat úgy távolítjuk el, hogy az elegyet vízmentes nátriumszulfátra rétegezett Celiten átszűrjük, majd a tiszta éles oldatot bepároljuk. Az így kapott alkohol fehér kristályos anyag, amelynek tömege 2,052 g (98,9%). A nyersterméket hideg hexánnal eldörzsölve 1,892 g (91,2%) tiszta terméket kapunk fehér kristályok formájában, amelyek 72-73 °C-on olvadnak. A vegyület vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke 0,31, hexán-aceton 4:1 rendszerben. A foltokat ultraibolya fényben vizsgáljuk, vagy foszformolibdénsavval hívjuk elő.
C) Metil-(S)-{3-[(terc-butil-difenil-szilil)-oxi]-4-[/{2-!(4-fluor-benzil)-oxi!-4,6-diklór-benzil}-oxi/-metoxi-foszfonil]-butirát}
3,84 mmól, az 1. példa E(6) pontja szerint előállított metil-észtert feloldunk 10 ml vízmentes metilén-dikloridban, és hozzáadunk 1,46 ml (7,68 mmól, 2,0 ekvivalens) desztillált dietil-(trimetil-szilil)-amint, majd a kapott oldatot argongáz alatt, szobahőmérsékleten keverjük 1 órán át. Ezután az elegyet vákuum16 bán bepároljuk, 20 ml benzolt adunk a maradékhoz és ismét bepároljuk, aminek eredményeként színtelen olaj formájában kapjuk a nyers szililezett foszfonsav-monometil-észtert.
A nyers észtert (3,84 mmól) 10 ml vízmentes metilén-dikloridban oldjuk, 1 csepp vízmentes Ν,Ν-dimetil-formamidot adunk hozzá, és az elegyet só-jég-fürdöben -10 °C-ra hütjük. Cseppenként beadagolunk 368 wl (4,22 mmól, 1,1 ekvivalens) desztillált oxalil-dikloridot, amikor is élénk gázfejlődés indul meg a tiszta sárga oldatban. A reakcióelegyet argongáz alatt, szobahőmérsékleten 1 óra hosszat keveredni hagyjuk, majd vákuumán bepárolva a maradékról ledesztillálunk 2x20 ml benzolt, aminek eredményeképpen viszkózus olaj formájában kapjuk a nyers klór-foszfonátot. A fenti, mintegy 3,84 mmól nyers klór-foszfonátot feloldjuk 10 ml vízmentes metilén-dikloridban, és 0 °C hőmérsékleten egymás után beadagolunk 1,15 g (3,84 mmól, 1,0 ekvivalens), a B) pontban leírtak szerint előállított, megfelelően szubsztituált benzil-alkoholt, 805 ml (5,76 mmól, 1,5 ekvivalens) trietil-amint és 47 mg (0,384 mmól, 0,1 ekvivalens) 4-(dimetil-amino)-piridint. Az így kapott barna reakcióelegyet argongáz alatt, szobahőmérsékleten éjszakán át kevertetjük, majd 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldat és etil-acetát keverékére öntjük. Az oldószeres fázist nátrium-klorid-oldattal mossuk, izzított nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk, aminek eredményeként 3,197 g barna olajat kapunk. A nyersterméket 160 g szilikagéllel töltött oszlopon flash-kromatográfiával tisztítjuk, amelynek során az eluálást 7:3 arányú hexán-etil-acetát-eleggyel végezzük. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk, aminek eredményeként 594 mg (21,1%) sárga olajként marad vissza a címben megnevezett foszfonót. Ezen kívül visszanyerünk 688 mg kiindulási benzil-alkoholt, és ezt számításba véve a kitermelés 52,4%. A terméket vékonyrétegen hexán-aceton 1:1 rendszerben kromatografálva 0,29 Rf-értéknél jelenik meg a foltja. A kromatogram kiértékelését ultraibolya fényben, illetve foszformolibdénsavval végezzük.
D) Metil-(S)-{4-[/{2-,'( 4-fluor-benzil)-oxil-4,6-diklór- benzil}-oxi/-metoxi- foszfonil]-3-hid roxi- b u tirá t}
578 mg (0,788 mmól) fenti szilil-éter és ml vízmentes tetrahidrofurán elegyéhez 180 ul (3,2 mmól, 4,0 ekvivalens) vízmentes tömény ecetsavat, majd 2,36 ml (2,36 mmól, 3,0 ekvivalens) 1,0 M tetrahidrofurános tetrabutil-ammónium-fluorid-oldatot adunk. Az így kapott halványsárga oldatot argongáz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán át kevertetjük, majd hideg vízre öntjük és extraháljuk kétszer egymás után etil-ecetáttal. A szerves fázist mossuk telített nátrium-hidro-1529
HU 201085 Β gén-karbonát-oldattal és nátrium-klorid-oldattal. Vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A visszamaradó 625 g sárga olajat flash-kromatográfiával tisztítjuk 31 g szilikagélen, 7:3 arányú hexán-aceton-elegygyel eluálva. A terméket tartalmazó frakciókat bepároljuk, aminek eredményeként 339 mg (86,9%) színtelen viszkózus olaj formájában kapjuk a kívánt alkoholt. A vegyület vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke hexán-aceton 1:2 rendszerben 0,25. A kromatogramot ultraibolya fényben, illetve foszformolibdénsav reagenssel bepermetezve hívjuk eló.
E) Lítium-(S)-{4-[/{2-,'(4-fluor-benzil)-oxi!-4,6-diklór-benzil}-oxi/-metoxi-foszfonil]-3-hidroxi-butirát}
132 mg (0,267 mmól) D) pont szerinti foszfonát és 2,5 ml dioxán elegyéhez 0,32 ml (1,2 ekvivalens) 1,0 N lítium-hidroxid-oldatot adunk, majd az elegyet argongáz alatt, szobahőmérsékleten, 4 óra hosszat hagyjuk keveredni, miközben fehér csapadék képződik. A reakcióelegyet ezután vízzel meghígitjuk, szűrjük, és a szürletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 100 ml HP-20 gyantán, lineáris grádiens mellett víz és acetonitril elegyével eluálva kromatografáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk, a maradékot vízben feloldjuk és az oldatot átszűrjük egy 0,4 jum-es' polikarbonát membránon majd liofilizáljuk. Ilyen módon a címben megnevezett, 1,42 mól vizet tartalmazó lítiurasót kapjuk, amelynek tömege 108 mg, a számítottnak 79%-a. Rf-értéke 0,41, ha a vékony rété g-kromatogramot metilén-diklorid, metanol és ecetsav 20:1:1 arányú elegyével fejlesztjük ki. A kiértékelést ultraibolya fényben, illetve foszformolibdénsav színreagenssel végezzük.
A vegyület íH-NMR-spektruma (400 MHz):
é 1,98-2,11 ppm [2H, m, -O-PO(OCH3)-CH2-CH(OH)-]
2,26-2,45 [2H, m, -CH(OH)-CHz-CO2Li].
3,63 és
3,62 [3H, 2 dublett, 2 diasztereomer, -O-PO(OCH3)-CH2-, Jhp=11 Hz]
4,23 [1H, m, -CH2-CH(OH)-CH2-CO2Lí]
5,16 [2H, s, F-Ph-CH2-O-]
5,24 [2H, d, Ar-CH2-O-P-, Jhp= =6,2 Hz]
7,13-7,53 [6H, m, aromás protonok]
5. példa
Dilitium-(S)-{4-[/{2-!(4-fluor-benzil)-oxi!-4,6-diklór-benzil}-oxi/-foszfonáto]-3-hidroxi- b u tiré t}
210 mg (0,424 mmól), a 4. példa D) pontjában leírt diészter és 4 ml dioxán elegyéhez
1,30 ml (3,0 ekvivalens) 1,0 N litium-hidroxid-oldatot adunk, és a színtelen oldatot 50 °C hőmérsékletű olajfürdón, argongáz alatt, 3,5 órán át melegítjük. 15 perc múlva fehér kiválás jelenik meg. A reakcióidő lejártával az elegyet vízzel meghígítjuk, szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot minimális mennyiségű vizben feloldjuk, és 100 ml HP-20 gyantával töltött oszlopon kromatografáljuk. Víz és acetonitril elegyével lineáris grádiens mellett végezzük az eluálást, majd a terméket tartalmazó frakciókat egyesítve és bepárolva, a maradékot feloldjuk 50 ml vízben, az oldatot 0,4 ym-es polikarbonát membránon átszűrjük és liofilizáljuk. 175 mg (81%) fehér szilárd anyagot kapunk, amely a címben megnevezett,
1,70 mól kristályvizet tartalmazó dilitiumsónak felel meg. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke 0,07, a kromatográfiás rendszer metilén-diklorid-metanol-ecetsav 8:1:1. Az előhívást foszformolibdénsavval, illetőleg ultraibolya fénnyel végezzük.
íH-NMR-spektruma (400 MHz):
1,73-1,92 ppm [2H, m, -O-PO(O-Li)-CH2-
2,27 -CH(OH)-] [1H, két dublett, -CH(OH)-
2,39 -CH2-CO2LÍ, Jhh=8,8 Hz] [1H, két dublett, -CH(OH)-
4,26 -CH2-CO2LÍ, Jhh=4,4 Hz] [IH, m, -CH2-CH(OH)-CH2-
5,08 -CO2LÍ] [2H, s, (F-Ph-CHz-O-Ar)]
7,03-7,53 [6H, m, aromás protonok]
példa
Metil-(S)-{4-[/{2-!(4-fluor-benzil)-oxi!~ -4,6-diklór-benzil}-oxi/-metil-faszfinil]-3-hidroxi- b u tiré t}
A) Metil-(S)-{3-[(terc-butil-difenil-szilil)-oxi]-4-(etoxi-metil-foszfinil)-butirát}
4,68 g (9,18 mmól) az 1. példa E(3) pontjában leirt jodidot 5,0 g (36,7 mmól) dietoxi-metil-foszfinnal argongéz alatt, 100 °C hőmérsékletű olajfürdőn melegítjük 2,5 órán át, majd 150 °C-ra emeljük a fürdő hőmérsékletét, és folytatjuk a melegítést további három óra hosszat. A reakció közben, a sárga oldatból lassan fehér csapadék válik ki. A foszfin feleslegét 0,5 Hgmm-es vákuumban ledesztilláljuk és a visszamaradó nyersterméket szilikagélen flash-kromatografáljuk, hexán és aceton 64:35 arányú elegyével végez17
-1631
HU 201085 Β ve az eluálást. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk, aminek eredményeképpen 1,590 g (38%), a címben megnevezett foszfinsav-észtert kapunk, tiszta viszkózus olaj formájában. A két diasztereomer vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke hexán-aceton 3:2 rendszerben 0,19., illetve 0,22. A foltokat ultraibolya fényben, vagy foszfor-molibdénsav reagensoldattal tesszük láthatóvá.
B) Metil-(S)-{3-[(terc-butil-difenil-szilil)-oxi]-4-[/{2-!(4-fluor-benzil)-oxi!-4,6-diklór-benzil}-oxi/-metil-foszfinil]-butirát)
605 mg (1,3 mmól) fenti foszfinsav-észtert feloldunk 6 ml vízmentes metilén-dikloridban és hozzáadunk 280 pl (1,05 mmól, 0,8 ekvivalens) N,N-bisz(trimetil-szilil)-trifluor-acetamidot, valamint 210 pl (1,57 mmól, 1,2 ekvivalens) (trimetil-szilil)-bromidot. Az így kapott oldatot argongáz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán át keveredni hagyjuk, majd hozzáadunk 15 ml 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldatot és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist mossuk nátrium-klorid-oldattal, izzított nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk, aminek eredményeként színtelen olajként kapjuk a nyersterméket. A hozzávetőlegesen 1,3 mmól-nyi fenti foszfinsavat feloldjuk 6 ml metilén-dikloridban, hozzáadunk 270 pl (1,44 mmól, 1,1 ekvivalens) desztillált dietil-(trímetil-szilil)-amint, és az így kapott elegyet argongáz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán át keveredni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékról ezután 15 ml benzolt desztillálunk le, majd végül vákuumban megszárítjuk.
A fenti szilil-foszfinsavat feloldjuk 6 ml vízmentes metilén-dikloridban, 1 csepp N,N- dimetil-formamidot adunk hozzá, majd az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és jeges hűtés közben, egy fecskendővel cseppenként beadagolunk 130 pl (1,44 mmól, 1,1 ekvivalens) desztillált oxalil-dikloridot. Az adagolást gázfejlódés követi. Egy óra hosszat argongáz alatt, szobahőmérsékleten kevertetjük az elegyet, majd vákuumban bepároljuk, és a maradékot 2x15 ml benzollal ismételten bepároljuk, végül vákuumban megszárítjuk. A nyers klór-foszfinát sárga olaj, amelyhez 0 °C hőmérsékleten az 1. példa E(6) pontja szerint előállított megfelelően szubsztituált alkohol 392 mg-ját (1,3 mmól) adjuk 6,0 ml vízmentes metilén-dikloridban oldva. Ezt követően beadagolunk még 275 pl (1,97 mmól, 1,5 ekvivalens) trietil-amint és 16 mg, (0,13 mmól, 0,1 ekvivalens) 4-(dimetil-amino)-piridint, majd a reakcióelegyet argongáz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán át keveredni hagyjuk. Másnap 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldat és etil-acetát keverékére öntjük, az oldószeres fázist mossuk nátrium-klorid-oldattal, izzított nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk, aminek eredményeként 908 mg sötét olajként kapjuk a nyesterméket. 45 g szilikagélen flash-kromatográfiával tisztítjuk az anyagot, amelynek során hexán és etil-acetát 3:2 arányú elegyével eluálunk. Bepároljuk a tiszta terméket tartalmazó frakciókat, és így 266 mg (28,3%), a címben megnevezett vegyületet kapunk színtelen olajként. A reakcióelegyből ezen kívül még 197 mg kiindulási alkoholszármazékot nyerünk vissza, amelyet számításba véve, a kitermelés 57%.
C) Metil-(S)-{4-[/{2-!(4-fluor-benzil-)-oxi!-4,6-diklór-benzil}-oxi/-nietil-foszfinil]-3-hi droxi- butirát]
275 mg (0,38 mmól), a B) pont szerinti szilil-étert feloldunk 6 ml vízmentes tetrahidrofuránban, hozzáadunk 90 pl (1,53 mmól, 4,0 ekvivalens) vízmentes, tömény ecetsavat, valamint 1,2 ml (3,1 ekvivalens) 1,0 mólos tetrahidrofurános tetrabutil-ammónium-fluorid-oldatot. Az így kapott oldatot argongáz atmoszférában, éjszakán át, szobahőmérsékleten keveredni hagyjuk, majd hideg víz és etil-acetát keverékére öntjük. Az oldószeres fázist mossuk telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és nátrium-klorid-oldattal, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk, aminek eredményeként 258 mg sárga olajat kapunk. A nyersterméket 8 g LPS-1 szilikagélen flash-kromatográfiával tisztítjuk, amelynek során az oszlopot hexán és aceton 1:1 arányú elegyével eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk, amikor is a címben megnevezett vegyületet kapjuk színtelen, tiszta olaj formájában. Kitermelés 142 mg (77%). A vegyület vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke hexán-aceton 1:1 rendszerben 0,20. A kromatogramot foszformolibdénsavval hívjuk elő, illetve ultraibolya fényben vizsgáljuk.
D) Lítium-(S)-{4-[/{2-!(4-fluor-benzil)-oxi!-4,6-diklór-benzil}-oxi/-metil-foszfinil]-3-h i droxi- b u tirá t}
A C) pontban leírt metil-észter 142 mg-nyi mennyiségét (0,296 mmól) feloldjuk 3,0 ml dioxánban és az oldathoz adunk 0,36 ml (1,2 ekvivalens) 1,0 n litium-hidroxid-oldatot. Az igy kapott fehér szuszpenziót argongáz alatt, szobahőmérsékleten, 2 óra hosszat keveredni hagyjuk, majd vízzel meghlgitjuk, átszűrjük egy 0,4 pm vastag polikarbonát membránon és vákuumban bepároljuk.
A nyersterméket minimális mennyiségű vízben oldjuk és 100 ml HP-20 gyantára visszük, amelyről víz és acetonitril lineáris gradiens elegyével eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk, majd a maradékot vízben feloldva ismét átszűrjük egy polikarbonát membránon és ezt követően liofilizáljuk. A lítiumsó fehér szilárd, 1,38 mól vizet tartalmazó anyag, amely-1733
HU 201085 Β nek tömege 93 mg (63%). Metilén-diklorid-metanol-ecetsav 8:1:1 oldószerelegyben kifejlesztve a vékonyréteg-kromatogramot, a vegyidet foltja 0,51 Rf-értékig mozdul el. A foltokat ultraibolya fényben vizsgáljuk, illetve foszformolibdénsavval hívjuk eló.
A vegyűlet ‘H-NMR-spektruma (400 MHz):
é 1,53 ppm [3H, d, -O-PO(CH3)-CH2-,
Jhp=14,6 Hz)
1,87-2,10 [2Η, m, -O-PO(CH3)-CH2-]
2,27 [IH, kettős dublett, -CH(OH)-CH2-CO2LÍ, Jhh=8,4 Hz, Jhp= =1,1 Hz]
2,38 [IH, két dublett, -CH(OH)-CH2-CO2LÍ, Jhh=4,7 Hz, Jhp= =1,1 Hz]
4,29 [IH, m, -CH2-CH(OH)-CH2- -CO2LÍ]
5,16-5,18 [4H, m, A1—CH2-O-P és F-Ph-CH2-O-]
7,11-7,52 [6H, m, aromás protonok]
7. példa
Lítium-(S)-{4-[/{2- (4-fluor-3-metil-fenil)-4,6-dintetil-benzil}-ainino/-metoxifoszfonil]-3-hidroxi- buti rét)
A) 2-(4-Fluor-3-metil-fenil )-4,6-dimetil-benzoesav
1,0 g (4,13 mmól), az 1. példa C(2) pontjában leirt aldehidet feloldunk 10 ml acetonban, az oldathoz 0 °C-on, jeges hűtés mellett, cseppenként 4,1 ml 8,0 n Jones-reagenst adunk, majd a kapott barnászöld szuszpenziót argongáz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán át keverjük. A felesleges oxidálószert 10 ml izopropil-alkohollal elbontjuk, és a kivált krómsókat eltávolítjuk úgy, hogy az elegyet Celit rétegen átszűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot felvesszük etil-acetátban, az oldatot mossuk kétszer egymás után 1,0 N sósavval, telített ammónium-klorid-oldattal és nátrium-klorid-oldattal, végül vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A kapott zöld kristályos anyag tömege 1,011 g, olvadáspontja 153-154 °C. A nyersterméket diciklohexil-aminsóján keresztül tisztítjuk, amit úgy végzünk, hogy a savat 5,0 ml etil-acetátban oldjuk, 823 pl (1,0 ekvivalens) diciklohexil-amint adunk hozzá, az oldatot hexánnal meghigitjuk, és a kivált kristályokat szűrjük. Ilyen módon 997 mg (55% az aldehidre számolva), 181-183 °C-on olvadó, piszkosfehér színű kristályos sót kapunk.
A savat úgy kapjuk vissza, hogy a sót 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldat és etil— -acetát keverékével összerázzuk, az oldószeres fázist nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk, aminek eredményeként
554 mg (52% az aldehidre számolva), a címben megnevezett savat kapunk. A vegyűlet vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke metilén-diklorid-metanol 9:1 rendszerben 0,37. A foltokat foszformolibdénsavval, illetve ultraibolya fénnyel tesszük láthatóvá.
B) 2-(4-Fluoi—3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzamid
554 mg (2,14 mmól) fenti savat feloldunk 6,0 ml vízmentes metilén-dikloridban, 1 csepp vízmentes Ν,Ν-dimetil-formamidot adunk az oldathoz, majd 0 °C-on, jeges hűtés mellett, egy fecskendő segítségével, cseppenként beadagolunk 205 μΐ (2,35 mmól, 1,1 ekvivalens) desztillált oxalil-dikloridot. A tiszta, sárga reakcióelegyet argongáz alatt, szobahőmérsékleten, 1 óra hosszat kevertetjük, majd vákuumban bepároljuk, a maradékról kétszer egymás után benzolt desztillálunk le és végül vákuumban megszárítjuk.
A nyers savklorid sárga olaj, amelyet 3,0 ml tetrahidrofuránban feloldunk, és cseppenként 3,0 ml tetrahidrofurán és 2,0 ml tömény ammónium-hidroxid 0 °C-ra hűtött elegyéhez adjuk. Az élénk narancsszínű oldatot argongéz alatt, szobahőmérsékleten, 1 órán át keverjük, víz és etil-acetát keverékével összerázzuk, majd a szerves fázist telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel és nátrium-klorid-oldattal mossuk. Az oldatot megszáritjuk vízmentes nátrium-szulfáton és bepároljuk, aminek eredményeként világos narancsszínű kristályok formájában 528 mg (96,1%) nyers savamid marad vissza. A nyersterméket etil-acetát és hexán elegyéből átkristályosítva 435 mg (79,1%) halványsárga tűkristályokat kapunk. A tisztított savamid 197-198 °C-on olvad, vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke 0,83, ha kromatogramot dietil-éter-aceton 1:1 elegyben fejlesztjük ki. A foltokat foszformolibdénsavval, illetve ultraibolya fénnyel tesszük láthatóvá.
C) [2-(4-Fluor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzil ]-amin
5,0 ml 0 °C-ra hűtött vízmentes tetrahidrofuránba beadagolunk 125 mg (3,3 mmól) lítium-(tetrahidrido-aluminát)-ot, és a szürke szuszpenzióhoz adjuk 5 perc alatt, cseppenként, 424 mg (1,65 mmól), a B) pont szerinti amid 5,0 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát. A szuszpenziót argongáz alatt, szobahőmérsékleten 2,5 órán át keverjük, majd viszszacsepegő hűtő alatt forraljuk 45 percig. Ezután az elegyet jeges fürdővel 0 °C-ra hűtjük, az alábbi sorrendben 125 μΐ vizet, 125 μΐ 15%-os nátrium-hidroxid-oldatot és további 375 μΐ vizet adunk hozzá, majd a kicsapódott alumíniumsót kiszűrjük úgy, hogy az oldatot Celit és vízmentes nátrium-szulfát rétegen engedjük át. A tiszta éles szűrletet vákuumban bepároljuk, aminek eredménye19
-1835
HU 201085 Β ként a nyers amint olajként kapjuk. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke dietil-éteraceton 7:3 rendszerben 0,60. A foltokat foszformolibdénsavval, illetve ultraibolya fénnyel tesszük láthatóvá. Az amint sósavval képzett sóján keresztül tisztítjuk.
A nyers amint, amelynek mennyisége hozzávetőlegesen 1,65 mmól, 8,0 ml vízmentes etanolban feloldjuk, hozzáadunk 1,52 μΐ (1,82 mmól) tömény sósavat, és az elegyet argongáz alatt, szobahőmérsékleten, 15 percen át keverjük, majd vákuumban bepároljuk. Ilyen módon fehér kristályos maradékot kapunk, amelyet hideg dietil-éterrel eldörzsölünk, a kristályokat kiszűrjük és vákuumban megszáritjuk. A címben megnevezett amin hidrokloridja finom fehér kristályos anyag, tömege 426 mg (92,4%).
D) Metil-(S)-{3-[(terc-butil-difenil-szilil)-oxi]-4-[/{2-(4-fluor-3-niet.il-fen il)-4,6- dimetil-benzil}-amino/-me toxi- foszfonil]- butira t)
2,0 mmól, az 1. példa E(6) pontjában leírt módon előállított metil-észtert feloldunk 5,0 ml vízmentes metilén-dikloridban, hozzáadunk 758 μΐ (4,9 mmól, 2,0 ekvivalens) dietil-(trimetil-szilil)-amint, és a tiszta éles oldatot argongáz alatt, szobahőmérsékleten, 1 óra hosszat keverjük. Az elegyet ezután bepároljuk, 15 ml benzolt adunk hozzá és ismét bepároljuk, majd végül vákuumban megszáritjuk. A nyers szilil-foszfonátot feloldjuk 7 ml vízmentes metilén-dikloridban, lehűtjük 0 °C-ra és először egy csepp N,N-dimetil-formamidot, majd 192 μΐ (2,2 mmól, 1,1 ekvivalens) desztillált oxalil-dikloridot csepegtetünk az oldathoz. A világossárga elegyben szemmel látható gázfejlődés indul meg. 1 órányi szobahőmérsékleten végzett keverés után az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékról kétszer 15 ml benzolt desztillálunk le, majd végül vákuumban megszárítjuk, aminek eredményeként kapjuk a nyers klór-foszfonátot sárga viszkózus olajként.
A fenti klór-foszfonát és 416 mg (1,49 mmól), a C) pontban leírtak szerint előállított amin sósavval képzett sójának 10 ml vízmentes metilén-dikloriddal készült oldatához 641 μΐ (4,6 mmól, 2,3 ekvivalens) trietil-amint és 24 mg (0,2 mmól, 0,1 ekvivalens) 4-(dimetil-amino)-piridint adunk, majd a kapott sárga éles oldatot argongáz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán át kevertetjük. Az elegyet ezután 5%-os kálium-hidrogén-szulfát oldat és etil-acetát keverékével öszerázzuk, a szerves fázist mossuk nátrium-klorid oldattal, vízmentes nátrium-szulfáton megszáritjuk és vákuumban bepároljuk. A maradék 1,1 g sárga olaj, amelyet 60 g szilikagélen flash-kromatográfiával tisztítunk meg.
Az eluens hexán és aceton 7:3 arányú elegye. A terméket tartalmazó frakciókat bepárolva 588 mg (59,5% tiszta foszfonamidot kapunk, amely egy sárga viszkózus olaj. Vékonyréteg-kroniatográfiás Rf-értéke hexán-aceton 7:3 rendszerben 0,20. A kromatogram kiértékelését ultraibolya fényben, illetve foszformolibdénsav szinreagenssel végezzük.
E) Metil-(S)-{4-[/{-2-(4-fluor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzil}-amino/-metoxi-foszfonil ]-3-híd roxi- butirát}
588 mg (0,888 mmól) D) pont szerinti szilil-étert 10 ml vízmentes tetrahidrofuránban oldunk, hozzáadunk 203 μΐ (3,55 mmól, 4,0 ekvivalens) vízmentes, tömény ecetsavat, valamint 2,66 ml (2,66 mmól, 3,0 ekvivalens), 1,0 mólos tetrahidrofurános tetrabutil-ammónium-fluorid-oldatot, és argongéz alatt, szobahőmérsékleten, éjszakán át kevertetjük. Másnap az elegyet hideg vízre öntjük, extraháljuk etil-acetáttal, majd a szerves fázist mossuk telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és nátrium-klorid-oldattal, végül vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk, aminek eredményeképpen 605 mg narancsszínű olaj marad vissza. A nyersterméket 36 g szilikagéllel töltött oszlopon flash-kromatografáljuk, hexán és aceton 1:1 arányú elegyét használva eluensként. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk. 196 mg (50,4%), a címben megnevezett vegyületet kapunk, ami egy világos, narancsszínű olaj, vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke hexán-aceton 1:1 rendszerben 0,16. A folt ultraibolya fényben látható, illetve foszformolibdénsavval előhívható.
F) Lítium-(S)-{4-[/{2-(4-fluor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzil}-amino/-metoxi- foszfonil ]-3-hidroxi-butirát}
105 mg (0,240 mmól), az E) pontban megadottak szerint előállított diésztert feloldunk 2,0 ml dioxánban, az oldathoz adunk 288 μΐ (1,2 ekvivalens) 1,0 N lítium-hidroxid-oldatot, és a fehér szuszpenziót argongáz alatt, szobahőmérsékleten, 4 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet ezután vizzel meghigítjuk, szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot 100 ml HP-20 gyantára visszük, és víz-acetonitril lineáris grádiens eleggyel eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk, a maradékot felvesszük 50 ml vizben, az oldatot átszűrjük egy 0,4 um-es polikarbonát membránon és liofilizáljuk, aminek eredményeként 70 mg (62,7%) fehér, szilárd halmazállapotú lítiumsót kapunk. Elementáranalízis alapján a vegyület 2,41 mól vizet tartalmaz. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke 0,19, ha a kromatogramot metil-diklorid, metanol és ecetsav 20:1:1 arányú elegyével fejlesztjük ki. A foltokat ultraibolya fénnyel, illetve foszformolibdénsav színreagenssel tesszük láthatóvá.
-1937
HU 201085 Β
A vegyület ‘H-NMR-spektruma (400 MHz):
1,79-1,97 ppm [2H, m, -PO(OCH3)-CH3-]
2,26-2,44 [2H, m, -CHz-COzLi]
2,29 [3H, s, aromás gyűrűhöz kapcsolódó metil]
2,31 [3H, d, a fluorhoz oC-helyzetű, aromás gyűrűhöz kapcsolódó metil, Jhf=1,4 Hz]
2,47 [3H, aromás gyűrűhöz kapcsolódó metil]
3-,46-3,50 [3H, 2 dublett, 2 diasztereomer, Jhp=10,5 Hz]
3,96 [2H, ni, Ph-CHz-NH- -PO(OCHz)-]
4,17 [1H, m, /-CHz-CH(OH)-CH2-COzLi/]
6,84-7,21 [5H, m, aromás protonok]
SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (5)

1. Eljárás az (I) általános képletű vegyületek - a képletben
R jelentése hidroxi-, 1-4 szénatomos alkilvagy 1-5 szénatomos alkoxicsoport;
X jelentése oxigénatom vagy iminocsoport; n értéke 1 vagy 2;
Z jelentése (n) általános képletű csoport, amelyben
R1 jelentése olyan -K-R1® általános képletű csoport, ahol K jelentése közvetlen kötés vagy az R1® csoporthoz a szénatommal kapcsolódó -CHz-O-csoport, és
R1® jelentése halogénatommal és/vagy 1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált fenilcsoport;
R2 és R2® jelentése 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy halogénatom; és
R* jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport és szervetlen vagy szerves bázisokkal képzett sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy egy (VII) általános képletű vegyületet - a képletben
Rc jelentése 1-4 szénatomos alkil- vagy 1-5 szénatomos alkoxicsoport;
alkil jelentése 1-4 szénatomos alkilcsoport; és X, Z és n jelentése a tárgyi körben megadott a szilil-éter kötés felhasításával az (I) általános képletű vegyületek körébe tartozó (VIII) általános képletű észterré - a képletben RS X, Z és n jelentése az előbbi; és
R* jelentése 1-4 szénatomos alkilcsoport alakítunk; majd kívánt esetben
i) egy (VIII) általános képletű észtert az (I) általános képletű vegyületek körébe tartozó megfelelő (VIIIA) általános képletű sóvá, majd (VIIIB) általános képletű savvá - a képletekben
X, Z és n jelentése a tárgyi körben megadott; és
R jelentése 1-4 szénatomos alkilvagy 1-5 szénatomos alkoxicsoport alakítunk; vagy ii) egy olyan (VIII) általános képletú észtert - amelynek képletében
Rc jelentése 1-5 szénatomos alkoxicsoport az (I) általános képletű vegyületek körébe tartozó megfelelő (VIIIC) általános képletű disóvá, majd (VIIID) általános képletű kétértékű savvá - a képletekben
X, Z és n jelentése a tárgyi körben megadott - alakítunk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, amelyek képletében X jelentése oxigénatom és R jelentése 1-5 szénatomos alkoxicsoport, az21
-2039 HU 201085 Β zal jellemezve, hogy megfelelő kiindulási vegyületeket használunk.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, amelyek képletében X jelentése iminocsoport 5 és R jelentése 1-5 szénatomos alkoxicsoport, azzal jellemezve, hogy megfelelő kiindulási vegyületeket használunk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás (S)-4-{[2-(4-fluor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil- 10 -benzil-oxi]-metoxi-foszfonil}-3-hidroxi-vajsav metil-észtere vagy monolitiumsója;
(S)-4-{[2-(4-fluor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzil-oxi]-hidroxi-foszfonil}-3-hidroxi-vajsav-dilitiumsó, 15 (S )-4-{[2-(4-fluor-3-metil-fenil)-4,6-dimetil-benzil-oxi]-metil-foszfinil}-3-hidroxi-vajsav-monolítiumsó, (S )-4-{[2-(4-fluor-benzil-oxi)-4,6-diklór-benzil-oxi]-metoxi-foszfonil}-3-hidroxi-vajsav-mo- 20 nolitiumsó, (S)-4-{[2-(4-fluor-benzil-oxi)-4,6-diklór-benzil-oxi]-hidroxi-foszfonil}-3-hidroxi-vajsav-dilítiumsó, (S)-4-{[2-(4-fluor-benzil-oxi)-4,6-diklór-ben- 25 zil-oxi]-metil-foszfinil}-3-hidroxi-vajsav vagy metil-észtere, vagy (S)-4-{[ 2- (4-fluor-3-metil-fenil )-4,6- dimetil-benzil]-amino}-metoxi-foszfonil}-3-hidroxi-vajsav-lítiumsó előállítására, 30 azzal jellemezve, hogy megfelelően szubsztituált kiindulási vegyületeket használunk.
5. Eljárás hatóanyagként' (I) általános képletű vegyületeket - a képletben
R, X, η, Z és Rx jelentése az 1. igénypontban 35 megadottakkal azonos vagy ezek gyógyászatilag elfogadható sóit tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-4. igénypontok bármelyike szerint előállított hatóanyagot 40 a gyógyszerek készítésénél szokásosan hígító-, töltő-, Ízesítő- és/vagy egyéb segédanyagokkal kombinálva gyógyszerkészítménynyé feldolgozzuk.
Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: dr. Szvoboda Gabriella osztályvezető R 4959 - KJK
90.3345.66-13-2 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Szabó Viktor vezérigazgató
-21Int Cl5
HU 201085 B C 07 F 9/32
HU882613A 1987-05-22 1988-05-20 Process for producing phosphor-containing compounds and pharmaceutical compositions containing them as active components HU201085B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US5323887A 1987-05-22 1987-05-22
US10968187A 1987-10-19 1987-10-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT47123A HUT47123A (en) 1989-01-30
HU201085B true HU201085B (en) 1990-09-28

Family

ID=26731613

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU882613A HU201085B (en) 1987-05-22 1988-05-20 Process for producing phosphor-containing compounds and pharmaceutical compositions containing them as active components

Country Status (24)

Country Link
JP (1) JPH01139589A (hu)
KR (1) KR880013959A (hu)
CN (1) CN1030761A (hu)
AU (2) AU610174B2 (hu)
BE (1) BE1002251A3 (hu)
CH (3) CH675582A5 (hu)
DE (1) DE3817298C2 (hu)
DK (1) DK277388A (hu)
ES (1) ES2009919A6 (hu)
FI (1) FI87927C (hu)
FR (1) FR2615516B1 (hu)
GB (1) GB2205838B (hu)
GR (1) GR880100332A (hu)
HU (1) HU201085B (hu)
IE (1) IE63715B1 (hu)
IL (1) IL86463A (hu)
IT (1) IT1217684B (hu)
NL (1) NL8801331A (hu)
NO (1) NO882219L (hu)
NZ (1) NZ224734A (hu)
PH (2) PH25581A (hu)
PL (1) PL157761B1 (hu)
PT (1) PT87540B (hu)
SE (3) SE501541C2 (hu)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2205837B (en) * 1987-05-22 1991-11-20 Squibb & Sons Inc Phosphorus-containing hmg-coa reductase inhibitors
IE903606A1 (en) * 1989-10-10 1991-04-24 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
US5025000A (en) * 1990-03-02 1991-06-18 E. R. Squibb & Sons, Inc. Phosphorus-containing HMG-CoA reductase inhibitor compounds
US5124453A (en) * 1990-03-02 1992-06-23 E. R. Squibb & Sons, Inc. Process for preparing certain 5,6,7,8-tetrahydroindolizinyl (ethyl or ethynyl)-hydroxy or methoxy-phosphinyl-3-hydroxy-butanoates and derivatives thereof
CA2042526A1 (en) * 1990-06-11 1991-12-12 Adeoye Y. Olukotun Method for preventing a second heart attack employing an hmg coa reductase inhibitor
CA2043525A1 (en) * 1990-06-24 1991-12-25 Donald S. Karanewsky Phosphorus-containing hmg-coa reductase inhibitors, new intermediates and method
DE4023308A1 (de) * 1990-07-21 1992-01-23 Bayer Ag Substituierte pyrido-oxazine
DE4025818A1 (de) * 1990-08-16 1992-02-20 Bayer Ag Phenylsulfonamid substituierte pyridinalken- und -aminooxyalkancarbonsaeure-derivate
NZ241574A (en) * 1991-02-22 1993-08-26 Ishihara Sangyo Kaisha Substituted phenyl derivatives of hydrazone and pesticidal compositions
US5202327A (en) * 1991-07-10 1993-04-13 E. R. Squibb & Sons, Inc. Phosphorus-containing hmg-coa reductase inhibitors
US5256692A (en) * 1992-01-07 1993-10-26 E. R. Squibb & Sons, Inc. Sulfur-containing HMG-COA reductase inhibitors
US20010006644A1 (en) 1997-07-31 2001-07-05 David J. Bova Combinations of hmg-coa reductase inhibitors and nicotinic acid and methods for treating hyperlipidemia once a day at night
AU2003218758A1 (en) * 2002-03-14 2003-09-22 Syngenta Participations Ag Derivatives of 1-phenyl-3-phenylpyrazole as herbicides
JP4407237B2 (ja) * 2002-12-24 2010-02-03 三菱化学株式会社 非水系電解液及びそれを用いる非水系電解液二次電池
JP4485169B2 (ja) 2003-05-16 2010-06-16 花王株式会社 腸管ミネラル吸収能改善剤
CN1760363B (zh) * 2004-10-14 2010-04-28 蒋继宏 杜仲3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a还原酶蛋白编码序列
WO2007081019A1 (ja) * 2006-01-16 2007-07-19 Sankyo Agro Company, Limited （３－硫黄原子置換フェニル）ピラゾール誘導体

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR339233A (fr) * 1903-12-23 1905-01-26 Cyanidgesellschaft Mit Beschra Nouveau procédé pour l'obtention d'explosifs
DE803645C (de) * 1949-10-11 1951-04-05 Dynamit Act Ges Vormals Alfred Schagwettersichere Sprengkapsel in Verbindung mit elektrischen Zuendern
DE918196C (de) * 1952-12-23 1954-09-20 J G W Berckholtz Fa Masse zur Erzeugung von farbigem Rauch
US3274035A (en) * 1964-06-15 1966-09-20 Lohr A Burkardt Metallic composition for production of hygroscopic smoke
US3862866A (en) * 1971-08-02 1975-01-28 Specialty Products Dev Corp Gas generator composition and method
DE2841815C2 (de) * 1978-09-26 1985-02-21 Buck Chemisch-Technische Werke GmbH & Co, 7347 Bad Überkingen Verfahren zur Herstellung einer Geschoßfüllung
US4438700A (en) * 1982-07-19 1984-03-27 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army White smoke spotting composition for training ammunition
FR2596393B1 (fr) * 1986-04-01 1988-06-03 Sanofi Sa Derives de l'acide hydroxy-3 dihydroxyoxophosphorio-4 butanoique, leur procede de preparation, leur application comme medicament et les compositions les renfermant
GB2205837B (en) * 1987-05-22 1991-11-20 Squibb & Sons Inc Phosphorus-containing hmg-coa reductase inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
SE8801904L (sv) 1988-11-23
IT1217684B (it) 1990-03-30
GB8811931D0 (en) 1988-06-22
FI87927C (fi) 1993-03-10
FR2615516A1 (fr) 1988-11-25
JPH01139589A (ja) 1989-06-01
GR880100332A (el) 1989-02-23
PH25581A (en) 1991-08-08
PH26578A (en) 1992-08-19
AU610174B2 (en) 1991-05-16
CH675582A5 (hu) 1990-10-15
SE9201588D0 (sv) 1992-05-20
AU1650288A (en) 1988-11-24
AU7126691A (en) 1991-05-02
IL86463A (en) 1994-10-07
SE9201587A0 (sv) 1992-05-14
IE881544L (en) 1988-11-22
CH678625A5 (hu) 1991-10-15
FI87927B (fi) 1992-11-30
IE63715B1 (en) 1995-06-14
DE3817298C2 (de) 1997-02-13
NO882219D0 (no) 1988-05-20
DE3817298A1 (de) 1988-12-01
SE9201588A0 (sv) 1992-05-20
HUT47123A (en) 1989-01-30
IT8820681A0 (it) 1988-05-20
CN1030761A (zh) 1989-02-01
IL86463A0 (en) 1988-11-15
SE8801904D0 (sv) 1988-05-20
CH678626A5 (hu) 1991-10-15
DK277388D0 (da) 1988-05-20
NL8801331A (nl) 1988-12-16
SE9201587D0 (sv) 1992-05-20
PT87540B (pt) 1992-09-30
DK277388A (da) 1988-11-23
GB2205838A (en) 1988-12-21
BE1002251A3 (fr) 1990-11-06
PL157761B1 (pl) 1992-06-30
NZ224734A (en) 1991-04-26
GB2205838B (en) 1991-12-11
FR2615516B1 (fr) 1991-04-12
AU643501B2 (en) 1993-11-18
FI882385A (fi) 1988-11-23
SE501541C2 (sv) 1995-03-06
ES2009919A6 (es) 1989-10-16
FI882385A0 (fi) 1988-05-20
PT87540A (pt) 1989-05-31
KR880013959A (ko) 1988-12-22
NO882219L (no) 1988-11-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4904646A (en) Phosphorus-containing HMG-COA reductase inhibitors
HU201085B (en) Process for producing phosphor-containing compounds and pharmaceutical compositions containing them as active components
US5017716A (en) Phosphorous-containing HMG-CoA reductase inhibitors, new intermediates and method
AU705206B2 (en) Compounds and pharmaceutical compositions containing them
JP2680347B2 (ja) 酵素抑制化合物
US5128331A (en) Method for lowering plasma lipid levels or blood pressure
De Lombaert et al. N-Phosphonomethyl dipeptides and their phosphonate prodrugs, a new generation of neutral endopeptidase (NEP, EC 3.4. 24.11) inhibitors
US5447922A (en) α-phosphonosulfinic squalene synthetase inhibitors
US5025000A (en) Phosphorus-containing HMG-CoA reductase inhibitor compounds
AU653681B2 (en) Phosphonic diester derivative
AU2005207856B2 (en) Novel inhibitors of chymase
IE58749B1 (en) Pharmaceutical compositions containing geminal diphosphonates
MXPA98000189A (en) Compounds and pharmaceutical compositions that contains them
Magnin et al. 1, 1-Bisphosphonate squalene synthase inhibitors: interplay between the isoprenoid subunit and the diphosphate surrogate
US5374628A (en) Aryl and heteroaryl(phosphinylmethyl)phosphonate squalene synthetase inhibitors and method
EP0463456A1 (en) Phosphorus-containing HMG-CoA reductase inhibitors, new intermediates and their use
EP0356788A2 (en) Quinoline and pyridine anchors for HMG-CoA reductase inhibitors
US5006515A (en) Pharmaceuticals, phosphorus-containing 2-isoxazolines and isoxazoles contained therein
KR20010031269A (ko) 신규한 메틸렌비스포스폰산 유도체
US5124453A (en) Process for preparing certain 5,6,7,8-tetrahydroindolizinyl (ethyl or ethynyl)-hydroxy or methoxy-phosphinyl-3-hydroxy-butanoates and derivatives thereof
GB2235924A (en) Phosphorus-containing 3-hydroxy-butanoic acid intermediates
MXPA06004880A (en) Novel phosphorus-containing thyromimetics

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees