HU187396B - Process for the improvement of the multiplication efficiency of cultural plants in in vitro tissue cultures - Google Patents

Process for the improvement of the multiplication efficiency of cultural plants in in vitro tissue cultures Download PDF

Info

Publication number
HU187396B
HU187396B HU813840A HU384081A HU187396B HU 187396 B HU187396 B HU 187396B HU 813840 A HU813840 A HU 813840A HU 384081 A HU384081 A HU 384081A HU 187396 B HU187396 B HU 187396B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
plants
formula
compound
dichloroacetyl
vitro
Prior art date
Application number
HU813840A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Tibor Farkas
Ferenc Foeglein
Ibolya Horvath
Janosne Nagy
Laszlo Vigh
Annamaria Meszaror
Istvan Toth
Original Assignee
Eszakmagyar Vegyimuevek
Mta Szegedi Biolog Koezponti
Rozmaring Kerteszeti Mtsz
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eszakmagyar Vegyimuevek, Mta Szegedi Biolog Koezponti, Rozmaring Kerteszeti Mtsz filed Critical Eszakmagyar Vegyimuevek
Priority to HU813840A priority Critical patent/HU187396B/hu
Priority to AU91708/82A priority patent/AU555018B2/en
Priority to US06/449,071 priority patent/US4554252A/en
Priority to BE1/10664A priority patent/BE895365A/fr
Priority to BG8258926A priority patent/BG37679A3/xx
Priority to FR8221176A priority patent/FR2518531A1/fr
Priority to CS829321A priority patent/CS239936B2/cs
Priority to GB08235949A priority patent/GB2112413B/en
Priority to BR8207370A priority patent/BR8207370A/pt
Priority to JP57221755A priority patent/JPS58165714A/ja
Priority to NL8204874A priority patent/NL8204874A/nl
Priority to PH28293A priority patent/PH20018A/en
Priority to DD82246174A priority patent/DD208795A5/de
Priority to DE19823246864 priority patent/DE3246864A1/de
Priority to IL67506A priority patent/IL67506A/xx
Priority to PL1982239589A priority patent/PL132926B1/pl
Priority to CA000418014A priority patent/CA1179858A/en
Priority to SU823526204A priority patent/SU1417787A3/ru
Publication of HU187396B publication Critical patent/HU187396B/hu

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018Culture media for cell or tissue culture
    • C12N5/0025Culture media for plant cell or plant tissue culture

Landscapes

  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

A találmány kultúrnövények in vitro szövettenyésztéses szaporítása során a szaporítás hatásfokának megjavítására szolgáló eljárás, amelynél a hatásfok megjavítását az (I.) általános képletű N-szubsztituált-acetamid vegyületekkel végzett kezeléssel éri el. - Az (I.) általános képletben a szubsztituensek jelentése a következő: R lehet metil-, klórmetil-, diklór-metil- vagy triklór;metil-gyök; R2 és R2 lehet egyező vagy eltérő, s jelenthet 1-8 szénátomos alkil-, 2-6 szénatomos alkenil-, 3-6 szénatomos cikloalkil-, fenil-, benzil-gyököt; jelenthet hidrogénatomot azzal a megkötéssel, hogy R2 és R2 egyidejűleg hidrogénatom nem lehet; Rj és R2 együttesen a nitrogénatommal hexametilén-imino csoportot alkothat.
Az in vitro körülmények között lefolytatott szövettenyésztéses növényszaporítási eljárások az elmúlt két évtizedben terjedtek el a gyakorlatban. Az Amerikai Egyesült Államokban több mint húsz laboratóriumi szaporító nagyüzem működik, s Nyugat-Európában is számos olyan laboratórium üzemel, ahol száz-kétszázezer növényt állítanak elő havonta szövettenyésztéses mikroszaporítássul.
Gyakorlati szempontból a szövettenyésztéses szaporítás lényege abban ájl, hogy a növényi hajtáscsúcsok, gyökércsúcsok merisztémikus szöveteiből steril körülmények között mindenféle növényi kórokozóktól mentes növények szaporíthatok el a hagyományos szaporítóanyag-termelés gyorsaságát több nagyságrenddel meghaladó sebességgel, lényegesen kisebb területfelhasználással, s ezek következtében gazdaságosabban.
Magyarországon a szövettenyésztéses növényszaporítási eljárás nagyüzemi elterjedése napjainkban van folyamatban. Bár a szövettenyésztéses szaporítás a hagyományos szaporítási módszereknél gazdaságosabb, a benne rejlő lehetőségeket mégsem tudták kihasználni az eddigi eljárások különféle fogyatékosságai miatt.
Az eljárások legnagyobb fogyatékossága, hogy míg in vitro körülmények között a növények kor-1 látlanul szaporodnak, addig a talajba történő átültetés során - növénykultúrától függően - a steril körülmények között nevelt növények 20-60%-a elpusztul az új, a korábbinál kedvezőtlenebb in vivő körülmények között [Broome; Zimmermann; Hort. Science, 13, 151-153 (1978); Earle; Langhans; Hort. Science, 10, 608-610 (1975); Sutter, Langhans; J. Am. Soc. Hort. Science, 104, 494-496 (1979)]. Bár a témával foglalkozó kutatók törekedtek arra, hogy az in vitro nevelés technikai feltételeinek javításával (kisebb hőmérséklet-ingadozás, magas relatív páratartalom stb.) segítsék elő a szaporítás hatékonyságát, azonban ezek az intézkedések nem jártak a kívánt sikerrel.
A szövettenyésztéses szaporítási eljárás vizsgálatára irányuló kutatásaink célja volt annak felderítése, hogyjnik okozzák a lombikból kikerülő növények rossz alkalmazkodóképességét, az átültetett növények jelentékeny pusztulását.
Kutatásaink célja volt továbbá olyan eljárás kidolgozása, amellyel a szövettenyésztéses szaporítás hatékonysága lényegesen megjavítható, az in vitro körülmények között szaporított növények túlnyomó hányada in vivő körülmények között is életképes, erőteljesen fejlődő legyen.
Kutatásaink során tanulmányoztuk üvegházi és szabadföldi kísérletekben több kultúrnövény (szegfű, gerbera, szőlő, páfrány) viaszainak és membránlipidjeinek összetételét, valamint ezen sejtalkotórészek bioszintézisének folyamatát.
Kísérleteink eredményeként megállapítottuk, hogy az említett sejtalkotórészek szerkezetében jelentős változások mutathatók ki a szövettenyésztéssel szaporított növényeknél. Kiderült, hogy a lombikban nevelt növények leveleinek felületét bevonó viaszok szintézise gátolt. Megállapítottuk, hogy míg a hagyományos tenyésztésű növényeknél a sejtmembrán lipofíl alkotórészeiben a nagyobb telítetlenségű zsírsavak szintetizálódtak, addig a szövettenyésztéssel szaporított növényeknél a nagyobb telítetlenségű zsírsavak szintézise gátolt. Ennek következménye, hogy a sejtmembránok törékenyek lesznek, s nem tudják ellátni megfelelően a különböző membránfunkciókat. Egyik kisérletsorozatunkban izotóp-technikával vizsgáltuk a hagyományos tenyésztési eljárással és az in vitro szaporítási eljárással nevelt növények viaszkomponenseinek összetételét. A növényeket 10 μ Ci/μ mól aktivitású C 14-el jelzett ecetsav oldattal 25 °C-on 4 órán át inkubáltuk, majd a viaszkomponenseket vékonyréteg kromatográfiával szétválasztva, arányaikat a fajlagos aktivitás alapján határoztuk meg.
Kísérleteink eredményeit a következő táblázatban foglaltuk össze:
viaszkomponensek %-os megoszlása
sav hidro- xidike- ton I. r. alkohol II. r. alkohol alde- hid észter Szén- hidr.
Kontroll 31,13 3,32 19,44 1,53 14,33 5,40 24,84
in vitro 42,56 nyo- mok- ban 3,24 2,04 20,95 2,71 28,48
Ezekből a mérési adatokból megállapítható, hogy az in vitro körülmények között szaporított növények viaszaiban a komponensek megoszlása értékelhetően eltér a kontrollnövényekéhez képest. A savak felhalmozódása növeli a levél felületének permeábilitását, s hasonlóan hat az I. rendű alkoholok mennyiségének csökkenése.
Ez a két jelenség egyszerre játszódik le, s hatására az in vitro tenyésztett növények a szabadba (in vivő)-kiültetve nem képesek a sejtek víztartalmát megőrizni.
Ugyancsak vizsgáltuk kísérleteinkben a kétféle módon nevelt növényekből izolált totál lipidek zsírsav összetételét.
A vizsgálatok eredményeit a következő táblázatban foglaltuk össze.
~>
187 396 lipidek %-os zsírsav összetétele
név palmi- tinsav palmí- toleil sav olajsav nnsav J linol- sav lino- lénsav
szénatomsz. 16 16 18 18 18 18
telítetlen kötés 0 1 0 1 2 3
Kontroll 14,72 0,79 0,59 5,53 30,29 48,07
in vitro 25,82 3,52 7,11 27,97 17,18 18,04
A zsírsavösszetétel változása azt mutatja, hogy az in vitro tenyésztett növény lipidjében nagymértékben felhalmozódik az olajsav. Feltehetően az olajsavból linolénsawá végbemenő deszaturácips lépések valamilyen oknál fogva gátoltak. A többszörösen telítetlen zsírsavaknak (így a linói- és linolénsavnak) a sejtmembránok flexibiljtásában, s ezen keresztül a növények alkalmazkodóképességében van jelentős szerepük. Amennyiben a telítetlen zsírsavak hiányoznak a sejtmembránokból, ez azt eredményezi, hogy a növények alkalmazkodóképessége jelentős mértékben csökken.
Ezek a kísérletek azt bizonyították, hogy az in vitro szaporított növényekben a levélfelszíni viaszok és az elsősorban sejtmembránokban található zsírsavak bioszintézise károsodást szenved, melynek következményeként a lombikból kiültetett növények nem képesek még a kis hőmérséklet-ingadozást sem elviselni, s a membrán sérülése miatt még magas relatív páratartalmú környezetben is kiszáradnak, s jelentős részük elpusztul.
Mindezek ismeretében kutatásaink arra irányultak, hogy milyen módon lehetne befolyásolni az in vitro szaporítás során a viaszkomponensek összetételét, valamint a lipidek zsírsavainak arányát, bioszintézisüket.
Kutatásaink célja volt olyan eljárás kidolgozása, amellyel az in vitro nevelt növények kiültetés utáni károsodását jelentősen csökkenthetjük, javíthatjuk a növények alkalmazkodóképességét.
Széles körben folyatatott kutatásaink során azt találtuk, hogy ha az ismert szövettenyésztéses szaporítási eljárás során a szaporodó növényeket az (I.) általános képletű N-szubsztituált-acetamid vegyületek valamelyikének, vagy azok keverékének vizes oldatával kezeljük, akkor az in vitro nevelt növények kiültetése után szignifikánsan csökken az in vivő körülmények közötti növénypusztulás, lényegesen több növény éli túl a kiültetést, s a túlélő növények fejlődése is erőteljesebb lesz.
Az (I.) általános képletű N-szubsztituált-acetamid vegyületekkel való kezelés történhet úgy, hogy a vegyületet 1-20 mg/1 koncentrációban a gyökereztető táptalajban oldjuk fel; de történhet úgy is, hogy a gyökereztető táptalajon nevelt növénykék gyökérzetét az (I.) általános képletű vegyület 20-50 mg/1 koncentrációjú vizes oldatába merítjük be a kiültetés előtt. A kezelést úgy is elvégezhetjük, hogy az in vitro nevelt növénykéket az (I.) általános képletű vegyületek vizes oldatával átitatott földkeverékbe ültetjük ki. Eljárhatunk úgy is, hogy az in vitro nevelt növény kéket á kiültetést követően az (I.) általános képletű vegyületek 1-20 mg/1 koncentrációjú vizes oldatával permetezzük, adott esetben több alkalommal.
Az (I.) általános képletben a szubsztituensek jelentése lehet: R jelenthet metil-, klór-metil-, diklórmetil- vagy triklór-metil-gyököt; Rj és R2 lehet egyező vagy eltérő, s jelenthet 1-8 szénatomos alkil-, 2-6 szénatomos alkenil-, 3-6 szénatomos cikloalkil-, fenil- és benzil-gyököt; jelenthet hidrogénatomot azzal a megkötéssel, hogy egyidejűleg nem lehet mindkettő hidrogénatom; Rj és R2 a nitrogénatommal együttesen hexametilén-iminocsoportot alkothat.
A továbbiakban kutatásaink arra irányultak, hogy megvizsgáljuk az (I.) általános képletű N-szubsztituált-acetamid vegyület vizes oldatával kezelt, in. vitro szövettenyésztéses technikával szaporított növények legfontosabb viaszkomponensei hogyan változnak a kezeletlen növényhez viszonyítva, valamint a kezelés milyen befolyást gyakorol a növény totál lipidjeinek zsírsavösszetételére.
Kísérleteink során az alábbi összetételű táptalajt alkalmaztuk a növények in vitro nevelésére: [Murashige, T., Skoog, F,; Physiol. Plánt. 15, 473-497
(1962)].
CaCl2 x 2H2O 439,300 mg/1 Zn2SO4 x 7H2O 8,600 mg/1
CoCl2 x 2H2O 0,025 mg/1 cukor 3-45 000 g/1
CuSO4x5H2O 0,025 mg/1 inozit 100 000 mg/1
FeNa EDTA 336 600 mg/1 nikotinsav 10Ό00 mg/1
HjBOj 6 200 mg/1 thíamin sósavas sója 30 000 mg/1
KH2PO4 170 000 mg/1 pyridoxin sósavas sója 10 000 mg/1
KJ 0,830 mg/1 adenin szulfát x 2H2O 0-80 000 mg/1
KNOj 1 900 000 mg/1 indolecetsav 0-10 000 mg/1
Mg SO4 x 7H2O 370 600 mg/1 kinetin 0-30 000 mg/1
MnSO4 x 4H2O NaH2PO4x 2H2O 22 300 mg/1 agar-agar 96 000 mg/1 7-10 000 g/1
Na2MoO4 x 2H2O nh4no3 0,250 mg/1 1 650000 mg/1. t
A felsorolt anyagokat desztillált vízben feloldottuk, az oldat pH-ját 5,8-ra állítottuk be, majd az agar-agart hozzáadva a táptalajt felfőztük tisztulásig és steril körülmények között lombikokba töltöttük szét, amelyeknek száját papírdugóval zártuk le. A lombikokat ezután autoklávba helyeztük, s a táptalajt 121 ’C hőmérsékleten sterilizáltuk.
Első kísérletsorozatunkban vizsgáltuk az (I.) általános képletű vegyületek közül a diklór-acetilhexametilén-imin hatását a szegfű növény legfontosabb viaszkomponenseinek szintézisére. Párhuzamosan tenyésztettünk hagyományos technikával is növényeket, valamint in vitro szövettenyésztéses technikával az előzőekben közölt összetételű táptalajon, illetve olyan táptalajon, amelybe 6 mg/1 mennyiségben adagoltunk diklór-acetil-hexametilén-imint a táptalaj sterilizálása előtt. A növények fejlődésének azonos időszakában - korábban már ismertetett módszerrel - meghatároztuk a két legfontosabb viaszkomponens %-os mennyiségét. A mért értékeket a következő táblázat mutatja.
187 396 lenvés/lési mód viaszkomponensek % savak
I. r.
alkoholok hagyományos (kontroll) 32,11 20,55 in vitro 45,21 3,05 a találmány szerinti in vitro 30,73 22,18
A kísérleti eredmények jól mutatják, hogy a diklór-acetil-hexametilén-imin hatására az in vitro IC nevelt szegfű növényekben a viaszkomponensek összetétele a hagyományos módon nevelt növényekéhez hasonló szintre állt be.
Egy következő kísérletsorozatban vizsgáltuk, hogy az (I.) általános képletű vegyületek közül a 15 diklór-acetil-hexametilén-imin különböző koncentrációban való alkalmazása hogyan befolyásolja az in vitro nevelt szegfűnövény totál lipidjeinek zsírsavösszetételét. A kísérletek során a már korábban leírt táptalajon, valamint annak 250-250 ml-nyi 20 mennyiségein, amelyekbe a diklór-acetil-hexametilén-imin különböző mennyiségeit mértük be, neveltünk in vitro szegfűnövénykéket, amelykben azonos fejlettségi stádiumban megvizsgáltuk a leírásunkban már ismertetett módszerrel a totál lipidek 25 zsírsavösszetételét. A mérések eredményeit a következő táblázat mutatja.
zsírsav %
Kezelési konccnt. mg/1 palmi- tinsav palmito-í leil sav jztearin- sav olajsav linolsav linolén- sav
0,00 25,82 3,89 7,11 27,97 17,18 18,04
15,60 25,16 - 3,09 18,94 32,85 23,96
30,S0 23,08 - 4,37 18,53 25,18 28,85
61.60 24,61 - 2,50 16,68 32,85 23,26
154,00 21,13 - 3,38 19,15 29,20 27,04
308,00 26,57 - 4,00 25,71 25,29 18,43
A mérési eredmények jól szemléltetik, hogy a 40 különböző koncentrációban alkalmazott diklóracetil-hexametilén-imin hatására a zsírsav összetétel a telítetlen zsírsavak irányába tolódott el.
A találmány szerinti eljárást az itt következő példákon mutatjuk be, melyekre nem korlátozódik 45 a szabadalmi igény.
1. példa
Szegfű szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítása. Az ismert eljárás szerint üvegházban nevelt szegfüdugványok merisztéma szöveteit steril körülmények között kipreparáltuk és a már leírt Murashige-Skoog táptalajon szaporítottuk. A szegfű- 55 merisztémák először növekedni kezdtek, majd pedig osztódtak. Minden hajtáscsúcsból a táptalajra helyezést követő 6 hét múlva 10-15 hajtás keletkezett, amelyek szétszedve, új, friss táptalajra ültetve továbbszaporitásra alkalmasak. A hajtások szapo- θθ rodási sebessége 10—15 hajtás volt havonta.
A szegfűhajtások osztódó fázisa után külön táptalajon következett be a gyökérképződés indukciója, amelyhez az ötszörösére hígított koncentrációjú alaptáptalajt használtuk azzal az eltéréssel, hogy a θ táptalajhoz 0,1 mg/1 koncentrációban indolecetsavat adtunk.
A táptalajból különböző mennyiségű diklóracetil-hexametilén-imin hozzáadásával koncentráció sorozatot készítettünk, s a tenyésztést ezeken a táptalajokon folytattuk le. Amikor a gyökérképződés elérte a kívánt mértéket, a szegfűnövénykéket üvegházba telepítettük át in vivő körülmények közé palánta nevelésére.
Az átültetett növénykék különböző mértékben alkalmazkodtak az in vivő nevelés körülményeihez, voltak amelyek elpusztultak, voltak amelyek alkalmazkodtak, túlélték az átültetést és fejlődésnek indultak.
Az in vivő szaporítás során megszámoltuk a különböző táptalajon nevelt növénykék közül az elpusztultak, illetve túlélőek számát, amelyeket %-osan az itt következő táblázatba foglaltuk össze.
táptalaj diklór-acetilhexametilén-imin tartalma mg/1 túlélés %-ban
1 45
2 48
• 4 64
6 96
8 87
10 75
12 70
14 50
20 43
0 (kontroll) 46
A mérési adatokból kitűnik, hogy a szegfű esetében a diklór-acetil-hexametilén-imin táptalajhoz való adagolásával a szegfüpalánták üvegházi túlélése a 6 mg/1 koncentrációnál 96%-ra növelhető, tehát a szaporítási technika hatékonysága több mint 100%-kal (kétszeresére) fokozható, ami az eljárás gazdaságosságát nagymértékben javítja.
Megfigyelhető volt, hogy a találmány szerinti eljárással nevelt növénykék zöld színe mélyebb tónusú volt, száraik és leveleik erősebbek voltak, mint a kontrollnövénykéké, s emellett leveleik felületét vastagabb viaszréteg borította.
2. példa
Nz előző példához hasonlóan szegfű szaporítóanyagot állítottunk elő, melynek során a merisztéma szöveteit ugyancsak az ismertetett Murashige-Skoog táptalajon szaporítottuk el, majd a gyökérképződés indukálásához ötszörösére hígított, 0,1 mg/1 indolecetsavat tartalmazó táptalajra ültettük át. Az ezen a módon in vitro nevelt növénykéket olyan földkeverékbe ültettük át üvegházban, amelyet a találmány szerinti (L) általános képletű vegyületek közül a diklór-acetil-hexametilén-imin oldatával itattunk át a következők szerint. 5 g diklór-acetil-hexametilén-imint 500 ml 70%-os etilalkoholban feloldottunk, majd 19,51 vízbe belekevertük. Az így készített 20 1 oldatot 1 m3 földkeverékhez adagoltuk többszöri átlapátolás mellett. - Az így elkészített talajba, valamint az (I.) általános
187 396 képletű vegyületet nem tartalmazó talajba ültettük el az in vitro nevelt növénykéket, s megfigyeltük üvegházban in vivő növekedésüket.
Megállapítottuk, hogy míg a kezeletlen talajon a növénykék 58%-a elpusztult (tehát 42% élte túl az 5 átültetést), addig a diklór-acetil-hexametilén-imint tartalmazó talajon a növénykéknek csak 8%-a pusztult el, 92%-uk erőteljes fejlődésnek indult.
3. példa
Az előző példához hasonló módon szegfű szaporítóanyagot állítottunk elő, s a növénykéket a gyökérzet kifejlődése után üvegházba, in vivő nevelésre 15 ültettük át, kezeletlen talajba.
Ezután a növény kék felét az (I.) általános képletű vegyületek közül a diklór-acetil-hexametilénimint tartalmazó permetezőszerrel kezeltük a kiültetést követően, majd még három alkalommal 3-4 20 napos szünetekkel.
A permetezőszer egy litere 10 mg diklór-acetilhexametilén-imint, 0,1 ml Tween 80 emulgeálószert és 0,05M Tris HCI puffért tartalmazott, s pH-ja 6,5 volt. Készítésénél úgy jártunk el, hogy a diklór- 25 acetil-hexametilén-imint néhány csepp 70%-os etilalkoholban feloldottuk, majd így beadagoltuk a puffért tartalmazó vízbe, s ehhez kevertük az emulgeátort.
Kísérleteink azt mutatták, hogy míg a permete- 3θ zéssel kezelt növénykék 88%-a túlélte az átültetést, addig a nem kezeiteknek csak 42%-a maradt meg.
4. példa 35
Gerbera szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítása. Gerberanövényeket szaporítottunk in vitro a már ismert, a szaporításra és gyökereztetésre Murashige és munkatársai [J. Hort. Sci. 9, 175-180 40 (1974)] által kidolgozott módszer szerint. A gyökereztető táptalaj egy részéhez 10 mg/1 koncentrációban diklór-acetil-hexametilén-imint adagoltunk, s a növénykék felét ezen a táptalajon gyökereztettük.
Az in vitro nevelt növénykéket ezután üvegházba 45 kiültettük, s az in vivő körülmények között továbbnevelteknél megszámoltuk az elpusztult, illetve túlélő palántákat.
Megállapítottuk, hogy míg a diklór-acetil-hexa- . metilén-imint 10 mg/1 koncentrációban tartalmazó 50 táptalajon gyökereztetett növények 98-100%-ban túlélték a kiültetést, addig a kezeletlen kontroll táptalajon gyökereztetett növények 30-35%-a elpusztult.
A gerbera lombiknövény habitusa is jelentős vál- 55 tozást mutatott, ugyanis a kezelt növények zömökebbek, leveleik keményebbek és fejlettebbek voltak, mint a kezeletlenek.
5. példa
Szegfű szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítását végeztük az 1. sz. példában leírtai szerint, azzal az eltéréssel, hogy az ötszörösére hígított 55 alaptáptalajhoz a gyökérképzés indukciója érdekében a 0,1 mg/1 koncentrációjú indol-ecetsav helyett 0,1 mg/1 koncentrációban p-klór-fenoxi-ecetsavat adagoltunk.
Ezek után a különböző I. általános képletű vegyületeket különböző koncentrációban (2, 5, 10,20 mg/1) a táptalajhoz kevertük, majd a növényeket a gyökérzet kifejlődéséig a táptalajon neveltük.
A gyökérzet kiültetésre alkalmas méretének elérésekor a növénykéket üvegházba telepítettük és neveltük.
A növénykék különbözőképpen alkalmazkodtak az in vivő körülményekhez.
Az egyenletes és biztos fejlődés után megvizsgáltuk és megszámoltuk az elpusztult és a túlélő növénykék számát, ill. arányát.
Eredményeinket az alábbi táblázatban foglaltuk össze:
I. ált. képletű vegyület kémiai neve megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os részaránya ha az I. képletű vegyület koncentrációja mg/1 5 mg/1 10 mg/1 20 mg/1
Kezeletlen kontroll 61 61 61 61
N-acetil-hexametilén-imin 80 81 80 81
N-(klór-acetil)-hexametilén- 76 76 76 70
imin
N-(diklór-acetil)-hexameti- lén-imin 100 100 100 100
N-(triklór-acetil)-hexametilén- Jmin 65 65 63 63
N-(diklór-acetil)-diizobutil- amid 68 66 77 61
N-(diklór-acetil)-izopropil- amid 72 71 71 71
N-(diklór-acetil)-terc.butil- amid 71 72 72 72
N-(diklór-acetil)-hexil-amin 94 95 98 100
A táblázat adataiból jól látható egyrészt, hogy az indol-ecetsav helyett alkalmazott p-klór-fenoxiecetsav a szegfűpalánták túlélési %-kát 46-ról 61-re emelte, másrészt, hogy a találmány szerinti I. ált. képletű N-szubsztituált-acetamid vegyületek oldatainak alkalmazása tovább fokozta a kiültetés utáni életképességet.
Megfigyeltük továbbá, hogy a találmány szerinti eljárással nevelt szegfűnövénykék szárai, levelei erősebbek, sötétebb zöld színűek, mint a kezeletlen kontrollnövényeké.
6. példa
Gerbera szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítását végeztük az 5. példában leírtak szerint. Az alkalmazott I. ált. képletű vegyületek nevét, alkalmazási koncentrációját és a kiültetés utáni túlélési %-kot az alábbi táblázatban foglaltuk össze:
I. ált. képletű vegyület kémiai neve megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os részaránya ha az I. képletű vegyüld koncentrációja mg/1 5 mg/1 10 mg/1 20 mg/1
Kezeletlen kontroll 63 63 63 63
N-acetil-hexametilén-iiiiin 93 94 93 92
N-(klór-acetil)-hexametilén- 78 82 79 80
imin
187 396
1. ált. képletű vegyület kémiai neve megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os részaránya ha az I. képletű vegyület koncentrációja mg/l 5 mg/l 10 mg/l 20 mg/l
I. ált. képletű vegyület kémiai neve
N-(di k lór-acetil)-hexametilén-imin
N-(diklór-acetil)-hexametiIcn-imin
N-(diklór-acetil)-diizobutilamid
N -(diklór-acetil)-izopropilamid
N-(diklór-acetil)-terc.butilamid
N-(t ri k lór-acet il)-hexil-amin
100 100 100 100
70 69 68 68
73 72 70
75 73 74 73
85 85 85 82
100 100 100 100
megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os részaránya ha az I. képletű vegyület koncentrációja mg/l 5 mg/l 10 mg/l 20 mg/l
N-(diklór-acetiI)-izopropil- amid 72 72 71 69
N-(diklór-acetil)-terc. butilamid 82 82 80 80
N-(díklór-acetil>hexil-amin 100 100 100 100
7. példa
9. példa
Az 5. példa szerinti eljárást alkalmaztuk vírusmentesitett alma-alany szaporításánál is. Az alkalmazott vegyületek, koncentrációk és a túlélési %-ok az alábbi táblázatban láthatók.
Az 5. példában leírt eljárást alkalmaztuk tüske nélküli szedemővénykék esetében. Mérési eredményeinket az alábbi táblázatban foglaltuk össze:.
I. ált. képletű vegyület kémiai neve
I. ált. képletű vegyület kémiai neve megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os részaránya ha az I. képletű vegyület koncentrációja mg/l 5 mg/l 10 mg/l 20 mg/l megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os részaránya ha az I. képletű vegyület koncentrációja mg/l 5 mg/l 10 mg/l 20 mg/l
Kezeletlen kontroll N-acetil-hexametilén-imín N -(klór-acetil)-hexametilénimin
N-(diklór-acetil)-hexametilén-imin
N-(triklór-acetil)-hexametilén-imin
N-(diklór-acetil)-diizobutilamid
N-(diklör-acetil)-izopropilamid
N-(diklór-acetil)-terc. butilamid
N -(d i k lór-acetil)-hexil-amin
65 65 65 65
95 96 96 96
80 82 81 80
100 100 100 100
70 70 70 70
70 68 65 65
75 76 75 74
86 88 86 85
100 100 100 100
Kezeletlen kontroll
N-acetil-hexametilén-imin
N-(klór-acetiI)-hexametilénimin
N-(diklór-acetil)-hexametilén-imin
3Q N-(triklór-acetil)-hexametilén-imin , N-(diklór-acetil)-diizobutilamid
N-(diklór-acetil)-izopropilamid , __ N-(diklór-acetil)-terc. butil35 amid
N-(diklór-acetil)-hexil-amin
70 70 70 70
93 95 95 95
83 79 79 75
100 100 100 100
74 78 78 72
80 82 80 80
80 81 80 79
90 91 90 89
100 100 100 100
8. példa
Szőlő szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítását végeztük az 5. példában leírtak szerint. Az alkalmazott I. ált. képletű vegyületek, koncentrációk és a tapasztalt túlélési %-ok az alábbi táblázatban láthatók.
10- Példa
Szegfű szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítását végeztük az 5. példában leírtak szerint. Az alkalmazott I. ált. képletű vegyületek nevét, alkalmazási koncentrációját és a kiültetés utáni túlélési 45 %-ot az alábbi táblázatban foglaljuk össze:
I. ált. képletű vegyület kémiai neve
I. ált. képletű vegyület kémiai neve megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os részaránya ha az I. képletű vegyület koncentrációja mg/l 5 mg/l 10 mg/l 20 mg/l
Kezeletlen kontroll 62 62 62 62
N-acetil-hexametilén-imin 91 94 94 95
N-(klór-acetil)-hexametilén- 73 72 70 68
imin
N-(diklór-acetil)-hexameti- 100 100 100 100
léií-irnin
N-(Íriklór-acetil)-hexameti- 65 65 63 63
lén-imin
N-(diklór-acetil)-diizobutil- 72 70 , 68 66
amid megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növény kék %-os részaránya ha az I. képletű vegyidet koncentrációja
2 mg/l 5. mg/l 10 mg/l 20 mg/l 50 mg/l
Kezeletlen kontroll 61 61 61 61 61
N-(diklór-acetil)-ciklohexil- 93 94 96 98 100
amid
N-(diklór-acetil)-alliI-amid 74 75 75 76 76
N-(diklór-acetil)-anilin 80 81 83 85 85
N-(diklór-acetil)-n-butil- 75 76 78 80 80
amid
N-(diklór-acetil)-di-n-butil- 63 65 68 73 75
amid
N-(diklór-acetil)-benzil- 86 87 90 90 90
amid
N-(diklór-aceliI)-N-metil- 91 94 97 99 100
N-benzil-amid
187 396
11. példa
Gerbera szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítását végeztük az 5. példában leírtak szerint. Az alkalmazott I. ált. képletű vegyületek nevét, alkal- 5 mazási koncentrációját és a kiültetés utáni túlélési %-ot az alábbi táblázatban foglaltuk össze:
I. ált. képletű vegyüiet kémiai neve megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os.részaránya ha az I. képletű vegyüiet koncentrációja
2 mg/1 5 mg/1 . 10 mg/1 20 mg/1 50 mg/1
Kezeletlen kontroll 63 63 63 63 63
N-(dikIór-acetil)-ciklohexil- amid 94 96 100 100 100
N-(diklór-acetil)-allil-amid 75 77 80 ' 78 76
N-(diklór-acetil)-anilin 82 83 83 85 85 '
N-(diklór-acetil)-n-butil- amid 77 79 82 83 . 83
N-(diklór-acetil)-di-n-butil- araid 75 77 78 78 80
N-(diklór-acetiI)-benzil- amid 83 ' 85 90 95 95
N-(diklór-acetil)-N-metil- 95 98 100 100 100
N-benzil-amid
A találmány szerinti eljárás eredményesen használható mind kultúrnövények, mind dísznövények szövettenyésztéses szaporítási hatásfokának javítására, valamint a növénykék kiültetés utáni túlélőképességének fokozására. Emellett á kezelt növénykék szára, levele erősebb, fejlettebb, színe erőteljesebb, mint a kezeletleneké, a levelek viaszrétege vastagabb.
A találmány szerinti eljárás előnye az is, hogy az I. ált. képlet szerinti N-szubsztituált-acetamid vegyületek oldatával kezelt növények kiültetés után hamarabb kezdtek növekedni és mintegy két héttel előbb érték el a kereskedelmi méretet.
12. példa
A 10. példa szerinti eljárással és készítményekkel 30 tüske nélküli szeder, szőlő, vírusmentesitett almaalany szaporítóanyagokat állítottunk elő.
Az I. ált. képletű vegyületeket 2; 5; 10; 20; és 50 mg/1 koncentrációban alkalmazva azt tapasztaltuk, hogy a megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő nö- 35 vénykék %-os aránya nem függ a koncentrációtól, ezért az alábbi táblázatban az alkalmazott vegyületeket és a növénykéknél tapasztalt túlélési %-okat adjuk meg.
I. ált. képletű vegyüiet kémiai neve megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os részaránya
szeder szőlő alma
Kezeletlen kontroll 65 62 70
N-(diklór-acetil)-ciklohe- xil-amid 100 100 100
N-(diklór-acetil)-allil- amid 75 78 85
N-(diklór-acetil)-anilin 79 80 90
N-(diktór-acetil)-n-butil- amid • 78 95 96
N-(diklór-acetil)-di-n- butil-amid 80 100 100
N-(diklór-acetil)-benzil- amid 90 100 100
N-(diklór-acetil)-N- 100 100 100
metil-N-benzil-amid

Claims (5)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Eljárás kultúrnövények in vitro szövettenyésztéses szaporítási hatásfokának megjavítására azzal jellemezve, hogy a mikroszaporitás során és/vagy az ezt követő kiültetéskor a növényeket, a növények egyes részeit vagy a talajt az (I) általános képletű N-szubsztituált acetamid - amely képletben R jelenthet metil-, klór-metil-, diklór-metil vagy triklór-metil-gyököt; R, és R2 lehet egyező vagy eltérő és külön-külön jelenthet hidrogénatomot, 1-8 szénatomos alkil-, 2-6 szénatomom alkenil-, 3-6 szénatomos cikloalkil-, fenil-, benzilgyököt; jelenthet hidrogénatomot azzal a megkötéssel, hogy Rj és R2 egyidejűleg hidrogénatom nem lehet; Rj és R2 együttesen a nitrogénatommal hexametilén-imino csoportot alkothat - vegyület(ek) 1-50 mg/1 koncentrációjú oldatával kezeljük.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás folyékony táptalajon történő szaporításnál azzal jellemezve, hogy a folyékony táptalaj az ismert összetevők mellett 1—20 mg/1 koncentrációban tartalmazza az (I) általános képletű vegyülete(ke)t - amely képletben a szubsztituensek jelentése a fentivel megegyező.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a folyékony táptalajon szaporított növények gyökérzetét kiültetés előtt az (I) általános képletű - amely képletben a szubsztituensek jelentése a fentivel megegyező - vegyület(ek) 20-50 mg/1 koncentrációjú oldatában áztatjuk.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az in vitro szaporított növényeket olyan talajba ültetjük ki, amely az (I.) általános képletű - amely képletben a szubsztituensek jelentése a fentivel megegyező - vegyülete(ke)t 2—10 mg/1 koncentrációban tartalmazza.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemez ve, hogy az in vitro szaporított növényeket a kiültetési követően az (I.) általános képletű - amely képletben a szubsztituensek jelentése a fentivel megegyező - vegyület(ek) 1-20 mg/1 koncentrációjú oldatával permetezzük.
HU813840A 1981-12-18 1981-12-18 Process for the improvement of the multiplication efficiency of cultural plants in in vitro tissue cultures HU187396B (en)

Priority Applications (18)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU813840A HU187396B (en) 1981-12-18 1981-12-18 Process for the improvement of the multiplication efficiency of cultural plants in in vitro tissue cultures
AU91708/82A AU555018B2 (en) 1981-12-18 1982-12-12 Efficiency improvement of in vitro tissue cultivation
US06/449,071 US4554252A (en) 1981-12-18 1982-12-13 Plant tissue cultivation process
BE1/10664A BE895365A (fr) 1981-12-18 1982-12-16 Procede d'amelioration du rendement dans la multiplication in vitro de plantes cultivees
BG8258926A BG37679A3 (en) 1981-12-18 1982-12-16 Method for reproduction of plants by cultivating tissues
FR8221176A FR2518531A1 (fr) 1981-12-18 1982-12-17 Procede d'amelioration du rendement dans la multiplication in vitro de plantes cultivees
CS829321A CS239936B2 (en) 1981-12-18 1982-12-17 Agent for improving effectiveness of growing plants in vitro
GB08235949A GB2112413B (en) 1981-12-18 1982-12-17 Process for the improvement of the efficiency of the in vitro tissue cultivating propagation of cultivated plants
BR8207370A BR8207370A (pt) 1981-12-18 1982-12-17 Processo para a melhoria da eficiencia da propagacao do cultivo de tecido im vitro de plantas cultivadas
JP57221755A JPS58165714A (ja) 1981-12-18 1982-12-17 栽培植物の組織培養繁殖の効率の改良方法
NL8204874A NL8204874A (nl) 1981-12-18 1982-12-17 Werkwijze voor de verbetering van de doelmatigheid van de vegetatieve vermenigvuldiging in vitro van cultuurplanten.
PH28293A PH20018A (en) 1981-12-18 1982-12-17 Process for the improvement of the efficiency of the in vitro tissue cultivating propagation of cultivated plants
DD82246174A DD208795A5 (de) 1981-12-18 1982-12-17 Verfahren zur verbesserung des wirkungsgrades bei der in vitro vermehrung von kulturpflanzen
DE19823246864 DE3246864A1 (de) 1981-12-18 1982-12-17 Verfahren zur verbesserung des wirkungsgrades bei der in vitro vermehrung von kulturpflanzen
IL67506A IL67506A (en) 1981-12-18 1982-12-17 Process for improving the efficiency of the in vitro tissue cultivating propagation of cultivated plants,comprising treatment of the plant with acetamides and/or dialkanoic acid diamides
PL1982239589A PL132926B1 (en) 1981-12-18 1982-12-17 Agent for use in the process of propagation of cultivated plants in tissue culture in vitro
CA000418014A CA1179858A (en) 1981-12-18 1982-12-17 Process for the improvement of the efficiency of the in vitro tissue cultivating propagation of cultivated plants
SU823526204A SU1417787A3 (ru) 1981-12-18 1982-12-18 Способ размножени культурных растений IN VIтRо

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU813840A HU187396B (en) 1981-12-18 1981-12-18 Process for the improvement of the multiplication efficiency of cultural plants in in vitro tissue cultures

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU187396B true HU187396B (en) 1985-12-28

Family

ID=10965724

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU813840A HU187396B (en) 1981-12-18 1981-12-18 Process for the improvement of the multiplication efficiency of cultural plants in in vitro tissue cultures

Country Status (18)

Country Link
US (1) US4554252A (hu)
JP (1) JPS58165714A (hu)
AU (1) AU555018B2 (hu)
BE (1) BE895365A (hu)
BG (1) BG37679A3 (hu)
BR (1) BR8207370A (hu)
CA (1) CA1179858A (hu)
CS (1) CS239936B2 (hu)
DD (1) DD208795A5 (hu)
DE (1) DE3246864A1 (hu)
FR (1) FR2518531A1 (hu)
GB (1) GB2112413B (hu)
HU (1) HU187396B (hu)
IL (1) IL67506A (hu)
NL (1) NL8204874A (hu)
PH (1) PH20018A (hu)
PL (1) PL132926B1 (hu)
SU (1) SU1417787A3 (hu)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU182177B (en) * 1980-08-13 1983-12-28 Eszakmagyar Vegyimuevek Composition for influencing plant growth
GB8616685D0 (en) * 1986-07-09 1986-08-13 Ici Plc Micropropagation process
US4813997B1 (en) * 1987-04-06 1995-07-18 Cpc International Inc Method for regulating plant growth

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4021224A (en) * 1971-12-09 1977-05-03 Stauffer Chemical Company Herbicide compositions
GB2097375A (en) * 1981-03-30 1982-11-03 Murphy Chemical Ltd Agricultural treatment using guanidated aliphatic polyamines

Also Published As

Publication number Publication date
JPS58165714A (ja) 1983-09-30
AU555018B2 (en) 1986-09-11
PH20018A (en) 1986-09-01
PL132926B1 (en) 1985-04-30
US4554252A (en) 1985-11-19
DD208795A5 (de) 1984-04-11
IL67506A (en) 1986-02-28
BR8207370A (pt) 1983-10-18
CA1179858A (en) 1984-12-27
IL67506A0 (en) 1983-05-15
DE3246864A1 (de) 1983-06-30
FR2518531A1 (fr) 1983-06-24
BG37679A3 (en) 1985-07-16
CS239936B2 (en) 1986-01-16
GB2112413A (en) 1983-07-20
SU1417787A3 (ru) 1988-08-15
PL239589A1 (en) 1983-06-20
BE895365A (fr) 1983-06-16
AU9170882A (en) 1983-06-23
NL8204874A (nl) 1983-07-18
GB2112413B (en) 1985-07-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH08112045A (ja) フリチラリア属植物種苗の大量生産方法
Seyring In vitro cloning of Helleborus niger
EP0171593A1 (en) Sunflower regeneration through embryogenesis and organogenesis
Barna et al. Effects of thidiazuron on micropropagation of rose
EP0317512B1 (de) Eine leistungsfähige Methode, Baumwolle aus kultivierten Zellen zu regenerieren
EP0172377A1 (en) Sunflower regeneration through embryogenesis
HU187396B (en) Process for the improvement of the multiplication efficiency of cultural plants in in vitro tissue cultures
JP3706085B2 (ja) アツモリソウ属植物用培地
EP2332405B1 (en) Media comprising gellan gum and methods for promoting maturation of conifer somatic embryos
Saito et al. In vitro propagation from axillary buds of Acacia mangium, a legume tree in the tropics
Nel et al. In vitro propagation of Persea indica
Hawkes et al. In vitro organogenesis of Cyclamen persicum Mill. seedling tissue
US5059531A (en) Process for the preparation of pilocarpine from in vitro cultures of pilocarpus
Koilpillai et al. In vitro Propagation of Graptophyllum pictum L.(Acanthaceae)-A Medicinal plant.
JP2632631B2 (ja) ワサビの培養法
JP2750148B2 (ja) クロトン属植物幼苗の増殖法
US7381562B2 (en) Methods for producing cotyledonary pine embryos utilizing a gibberellin
JPH02312530A (ja) ギョウジャニンニクの大量増殖法
JP2931675B2 (ja) シクラメンの不定芽の増殖用培地および増殖方法
JP2967968B2 (ja) シネラリア植物の種苗生産方法
SU888861A1 (ru) Способ регенерации растений клевера IN VIтRо
JPH01151504A (ja) 殺線虫剤の製造法
JPH07264942A (ja) エニシダ属植物の矮性植物作出法
JPH0837971A (ja) ウイルスフリー化ホップ棒苗の製造方法
JPH06169662A (ja) シクラメンの幼苗の大量生産方法およびカルスの増殖方法

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee