FI93510C

FI93510C - Mikrobisidinen koostumus ja sen käyttö

Info

Publication number: FI93510C
Application number: FI894351A
Authority: FI
Inventors: Jemin Charles Hsu
Original assignee: Rohm & Haas
Priority date: 1988-09-15
Filing date: 1989-09-14
Publication date: 1995-04-25
Also published as: IE892729L; CA1316104C; AU4121889A; IE63521B1; FI894351A0; AU623172B2; KR900004256A; DK453589D0; BR8904618A; IL91641A; FI894351A; ES2054012T3; DK453589A; IL91641A0; ZA896673B; PT91717B; ATE88610T1; DE68906231D1; NO893628D0; MX168330B

Description

9351 0

Mikrobisidinen koostumus ja sen käyttö - Mikrobicidisk sam-mansättning och dess användning 5 Tämä keksintö koskee biosidikoostumuksia, jotka sisältävät 5-kloori-2-metyyli-4-isotiatsolin-3-onia (tunnetaan myös nimellä 5-kloori-2-metyyli-3-isotiatsoloni) ja 2-metyyli-4-isotiatsolin-3-onia (tunnetaan myös nimellä 2-metyyli-3-isotiatsoloni) , joilla ei erityisillä käyttötasoilla ole aino-10 astaan synergiaa, vaan myös odottamattoman alhainen herkis-tämistiheys.

Jatkuvasti haetaan keinoja biosideille herkistymisen alentamiseksi. Kaikki, tai lähes kaikki kaupallisesti saatavat an-15 tiseptiset aineet saattavat aiheuttaa ihoherkistymistä.

Joukko teollisia kemikaaleja, kosmeettisia tuoksuja ja terapeuttisia aineita, kuten myös useat luonnollisesti esiintyvät aineet, kuten myrkkysumakki, saattaa aiheuttaa viivästy-20 neen kosketusihotulehduksen eläimissä ja ihmisissä. Nämä herkistäjät kuuluvat eri kemiallisiin luokkiin yksinkertaisista epäorgaanisista metalleista, kuten nikkeli, monimutkaisiin orgaanisiin kemikaaleihin.

25 Biosidit, joita tämä keksintö koskee, ja niiden valmistus, on esitetty US-patenttijulkaisuissa A-3 761 488; 4 150 026; 4 396 413; 4 505 889 ja 3 769 315.

Kathon-biosidi (886), laajalti käytetty, laajakirjöinen an-30 timikrobiaalinen aine sisältää vaikuttavina ainesosina (a.i.) 5-kloori-2-metyyli-4-isotiatsolin-3-onin ("651") ja 2-metyyli-4-isotiatsolin-3-onin ("573") seoksen summittaisessa 3:1-suhteessa magnesiumkloridin (9 %) ja magnesiumnit-raatin (16 %) ollessa läsnä stabiloijina. "Kathon" on Rohm 35 and Haas Companyn kauppamerkki, joka on laajalti rekisteröity kaikkialla maailmassa. Biosidi on tehokas antiseptinen aine toalettitarvikevalmistuksissa ja kosmeettisissa - ja kotitalouden puhdistustuotteissa. Sitä käytetään myös jois- 9351 0 2 sain raskaan teollisuuden sovellutuksissa, kuten jäähdytys-tornivedessä, metallintyöstönesteissä ja lateksiemulsioissa.

Useat artikkelit, jotka kuvailevat kokeiden suorittamista ja 5 jotka liittyvät isotiatsoloneihin, ovat: "Demonstration of Kathon CG in some commercial products", Contact Dermatitis 1986: 15: 24-27; "Allergic contact dermatitis due to a biocide containing 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one", Contact Dermatitis 1986: 14: 201-204; "Patch test sensitive-10 ty to Kathon CG", Contact Dermatitis 1986: 14: 155-157; "Contact allergy to the preservative Kathon CG", Contact Dermatitis 1986: 14: 85-90; "Immediate and delayed reactions to cosmetic ingredients", Contact Dermatitis 1985: 13: 258-265; "Diagnostic patch test concentration for Kathon CG", 15 Contact Dermatitis 1985: 13: 242-245; "Biocide pate tests", Contact Dermatitis 1985: 12: 99-103; ja "Patch tests with fragrance materials and preservatives", Contact Dermatitis 1985: 12: 87-92.

20 Yrityksissä löytää keino herkistymisen alentamiseksi säilyttäen tehon hyväksyttävällä tasolla on keksitty, että on mahdollista käyttää erityisiä 651:n ja 573:n yhdistelmiä, jotka alentavat herkistymistä tekijällä noin 15 - 20 alentaen vaikutusta tekijällä vain noin 3. Edelleen keksittiin, että 25 koostumuksella oli odottamatonta tehoa määrätyillä käyttöta-soilla.

Tämä keksintö koskee erityisesti antimikrobiaalista koostumusta, jolla on samat käyttökohteet kuin nykyisillä kaupal-30 lisillä isotiatsoloneilla ja joka käsittää (a) 5-kloori-2-metyyli-4-isotiatsolin-3-onin (651) ja (b) 2-metyyli-4-iso-tiatsolin-3-onin (573) synergisen seoksen. Synergisissä koostumuksissa on noin 1,2 - noin 25,4 % 5-kloori-2-metyyli- 4-isotiatsolin-3-onia (651) määrän noin 2,3 - noin 8,5 % 35 65l:tä ollessa edullinen ja määrän noin 2,3 - noin 4,5 % 651:tä ollessa edullisin, prosenttiosuuksien ollessa kahden komponentin painon perusteella.

li 93510 3

Keksintö antaa edelleen käyttöön menetelmän bakteerien, sienten tai levien kasvun estämiseksi bakteereilla, sienillä tai levillä saastuneessa kohteessa, joka käsittää 65l:n ja 573:n synergisen yhdistelmän lisäämisen kohteeseen määrän, 5 joka on tehokas vaikuttamaan bakteerien, sienten tai levien kasvuun heikentävästi.

Keksinnön koostumus voidaan muodostella vesiliuoksiksi.

Vaikka kyseessä olevan koostumuksen määrä muodostellussa 10 liuoksessa saattaa vaihdella laajalla alueella, voidaan liuokset muodostella sisältämään noin 20 - noin 100 ppm koostumusta liuoksessa, edullisen alueen ollessa noin 25 -50 ppm. Liuoksia muodosteltaessa voidaan käyttää muita veden kanssa sekoittuvia liuottimia, kuten etyylialkoholi, propyy-15 lialkoholi, isopropyylialkoholi, dietyleeniglykoli, dipropy-leeniglykoli, polyetyleeniglykoli, dietyleeniglykolietyyli-eetteri ja sellaiset auttamaan vaikuttavien komponenttien liuottamisessa. Edelleen voidaan käyttää erilaisia muita tavanomaisia lisäaineita, kuten pinta-aktiivisia aineita, 20 dispergoivia aineita, korroosiönestoaineita ja sellaisia.

Näiden synergisten yhdistelmien yleisten käyttösovellutusten mahdolliset alueet ovat antimikrobiaaliset aineet, saniteet-tiaineet, puhdistusaineet, hajunpoistajat, neste- ja jauhe-25 saippuat, ihonpoistoaineet, öljyn- tai rasvanpoistoaineet, elintarvikkeidenkäsittelykemikaalit, elintarvikkeiden säilöntäaineet, karjan rehun säilöntäaineet, puunkyllästysai-neet, orgaanisten polymeerien vesidispersiot, maali, lazu-res, värit, homesieniä tuhoavat aineet, metallintyöstö-30 fluidit, jäähdytysvesi, ilmanpesurit, bensiininvalmistus, paperinkäsittely, paperitehtaan limasienenestoaineet, maaöl-jytuotteet, liimat, tekstiilit, pigmenttisuspensiot, lateksit, nahkan- ja vuodankäsittely, bensiini, lämmitysöljy, pesuloiden saniteettiaineet, maatalouden valmisteet, paino-35 musteet, huovikkeet, öljysäiliöt, kumi, sokerinkäsittely, tupakka, uima-altaat, kosmeettiset tuotteet, toilettituot-teet, kemialliset WC:t, kotitalouden tekstiilienpesutuot-teet, dieselpolttoaineen lisäaineet, vahat ja kiilloitusai- 9351 0 4 neet ja monet muut sovellutukset, joissa vesi ja orgaaniset materiaalit joutuvat kosketuksiin olosuhteissa, joissa ei-toivottu mikro-organismien kasvu on mahdollista.

5 Tämän keksinnön isotiatsolonien kanssa voidaan yhdistää edullisesti muita tunnettuja biosideja antamaan biosidi, jolla on laajempi vaikutus.

Tämän keksinnön tuotteet ovat erityisen käyttökelpoisia säi-10 löntäaineina tuotteissa, jotka saattavat joutua kosketuksiin ihon kanssa, kuten kosmeettiset aineet, toilettituotteet ja muut sellaiset ei - farmaseuttiset tuotteet.

Synergistiset 573/651-yhdistelmät antavat käyttöön pitkäai-15 kaisen vaikutuksen kontrolloimaan laajaa mikro-organismien kirjoa pienillä konsentraatio-osilla verrattuna joko 573:a tai 651:tä yksinään käytettäessä tarvittaviin.

Yhdistelmien valmistus 20 Seuraavat esimerkit kuvaavat keksinnön koostumusten valmistusta, jotka voidaan valmistaa sekoittamalla olennaisen puhtaat 651 ja 573 tai lisäämällä olennaisen puhdasta 573:a 886:een. Kaikki prosenttiosuudet ja suhteet esimerkeissä ovat painon perusteella ellei toisin ole ilmoitettu.

25

Esimerkki 1: 179 g:aan monoklooribentseeniä (MCB) syötettiin samanaikaisesti klooria ja 25-% N-metyyli-3-merkaptopropionamidin (MMPA) liuosta MCB:ssä moolisuhteessa noin 1,4 noin 105 mi-30 nuutissa 50 °C:ssa sekoittaen hyvin kunnes oli syötetty 1,5 moolia MMPA:ta. Yhdessä syöttämisen jälkeen kloorin syöttämistä jatkettiin loppumoolisyöttösuhteeseen 2,0.

Klooraussuspensio suodatettiin, pestiin sopivalla liuotti-35 mella ja kuivattiin tuottamaan hydrokloridisuolan, jossa oli: 573 = 61,3 % 651 = 2,74 % suhde = 95,7:4,3 5 93510

Edellä olevat hydrokloridituotteet suspendoitiin veteen ja neutralisoitiin pH-arvoon 4 lisäämällä vaiheittain kiinteää natriumkarbonaattia. Liuos suodatettiin tuotteen saamiseksi, joka sisälsi: 5 573 = 28,8 % 651 = 1,2 % suhde = 96:4

Esimerkki 2 10 1,0 moolin sekoitettuun 25-% MMPA-liuokseen MCB:ssä ohjattiin 1 mooli vedetöntä kloorivetyä 45 °C:ssa 1 h. Seuraavaksi seos kloorattiin lisäämällä 2 moolia klooria 2,5 h aikana sekoittaen ja pitäen panoksen lämpötila noin 45 °C:ssa. Klooi'auksen lopussa seoksesta poistettiin kaasua 20 min ajan vapaan kloo-15 rivedyn poistamiseksi. Klooraussuspensio suodatettiin, pestiin MCB:llä ja kuivattiin, jolloin saatiin hy&rokloridisuo-la, jossa oli: 573 = 60,4 % 651 = 3,0 % 20

Edellä oleva hydrokloridisuola suspensoitiin veteen ja neutralisoitiin pH-arvoon 6,5 lisäämällä vaiheittain natriumbikarbonaatti jauhetta 20 °C:ssa, jolloin saatiin tuotteen vesi-liuos : 25 573 =29,8 % 651 = 1,5 % suhde = 95,2:4,8

Esimerkki 3 30 Käyttäen esimerkin 1 menetelmä mutta korvaten MMPA ekvimolaa-risella määrällä puhdasta N,N' -dimetyyliditiodipi'opionamidia ja syöttämällä samanaikaisesti klooria moolisuhteessa 2,25 ja jatkaen kloorin syöttöä loppumoolisyöttösuhteeseen 3,0, saatiin hydrokloridituote: 35 573 = 60,3 % 651 = 3,2 % suhde = 95:5 6 93510

Hydrokloridituote neutralisoitiin kuten edellä olevassa esimerkissä 1, jolloin saatiin vesiliuos, jossa oli 573:651-suhde 95:5.

5 Esimerkki 4 Käyttämällä edellä olevassa esimerkissä 2 käytettyä menetelmää mutta korvaamalla MMPA ekvimolaarisella määi-ällä puhdasta N,N'-dimetyyliditiopropionamidia ja lisäämällä 3 ekvivalenttia klooria 2 ekvivalentin sijasta saatiin hydrokloridisuola, 10 joka suodatettiin, pestiin ja suspendoitiin uudelleen veteen. Vesisuspensio neutralisoitiin, jolloin saatiin vesituote, jolla oli seuraava koostumus: 573 = 30,5 % 651 = 0,9 % 15 suhde = 97:3

Esimerkki 5

Suodatettu ja pesty klooraussuspensio esimerkistä 4 suspendoitiin uudelleen sopivaan liuottimeen ja neutralisoitiin 20 vedettömällä ammoniakilla. Ammonium]·;!oridi suodatettiin pois ja pestiin liuottimella. Suodos ja pesuliuos yhdistettiin ja stripattiin (35 °C/10 mm Hg), jolloin saatiin yhdistelmä, jossa oli 92,1 % 573:a ja 4,8 % 651:tä (suhde 95:5).

25 Esimerkki 6

Liuottamalla 1,45 g olennaisen puhdasta 573:a (katso esimerkki 7) ja 0,045 g 886:a 98 g veteen valmistettiin seuraavan koostumuksen omaava yhdistelmä: 573 = 1,466 % 30 651 = 0,055 % suhde = 96,4:3,6

Esimerkki 7

Olennaisen puhtaan 573-liuoksen valmistus 35 Esimerkissä 1 saatu hydrokloridi liuotettiin 500 g:aan kiehu-vaaa metanolia ja jäähdytettiin vaiheittain 10 °C:een. Kiteinen suspensio suodatettiin ia pestiin kylmällä liuottimella ja kuivattiin tyhjiössä, jolloin saatiin 132,8 g 573-hydrok- 7 93510 loridia, jossa oli 74,9 % vapaata emästä ja 24,1 % HCl (99,0 %), eikä lainkaan 651:tä.

45 g edellä olevaa hydrokloridisuolaa liuotettiin 135 g:aan 5 vettä ja neutralisoitiin pH-arvoon 4,2 lisäämällä 20-% natriumkarbonaatin vesiliuosta, jolloin saatiin vesiliuos, jossa oli: 573 = 12,5 % 651 = <0,1 % 10 4,5-dikloori-2-metyyli-4-isotiat.solin-3-onia = <0,1 %

Esimerkki 8

Olennaisen puhtaan 573:n valmistus

Suspensio, jossa oli 354 g (1,5 mol) N,N’-dimetyyliditiodi-15 propionamidia 2 l:ssa butyyliasetaattia jäähdytettiin -20 °C:een ja sen pinnan alle ohjattiin 335 g (4,72 mol, 3,14 ekv. ) klooria 100 minuutin aikana. Seos sai lämmetä 15 °C:een kun vaihtoreaktio tapahtui. Panoksen lämpötila pidettiin alle 50 °C:n ja annettiin seistä huoneenlämpötilassa 1 h. Seuraa-20 vaksi seos suodatettiin ja kostea kakku pestiin 200 ml :11a butyyliasetaattia ja kuivattiin tyhjiössä. 472 g raakaa hydrokloridisuolaa uudelleenkiteytettiin metanolista, jolloin saatiin olennaisen puhdas hydrokloridisuola (99-%).

25 Tämä liuotettiin veteen ja neutralisoitiin kaliumkai-bonaatil-la pH-arvoon 7,5, jolloin saatiin tuotteen 25-% liuos.

Edellä oleva liuos uutettiin etyleenidikloridilla (EDC, 1 x 800 ml, 2 x 300 ml). EDC-uutteet yhdistettiin ja liuotin 30 poistettiin, jolloin saatiin 241 g 99,7-% puhdas 573:a.

Esimerkki 9

Olennaisen puhtaan 651:n valmistaminen

Kloox-aussuspensio, joka oli saatu klooraamalla N-metyyli-3-35 merkaptopropionamidi tolueenissa syöttämällä siihen klooria moolisyöttösuhteella 3,0, suodatettiin, pestiin ja kuivattiin, jolloin saatiin hydrokloridisuola, jossa oli: 573 = 19,8 % 8 93510 651 = 57,8 % suhde = 25,5:74,5

Hydrokloridisuola (225 g) suspendoitiin 870 ml:aan etyylieet-5 teriä ja siihen lisättiin tipoittain 54,3 g pyridiiniä (0,686 g, vaadittu määrä neutralisoimaan 80 % 651-hydrokloridista). Seos suodatettiin ja kiinteä aines pestiin etyylieetterillä. Suodos ja pesut yhdistettiin ja stripattiin (35 °C/ 20 mm Hg), jolloin saatiin 90 g vaaleankeltaista kiteistä kiinteää 10 ainetta, jossa oli 98,5 % 651:t.ä.

Synergian arviointi

Yhdistelmien synergiaa havainnollistettiin testaamalla laajat muodostettujen kahden komponentin konsentraatioalueet ja suh-15 teet kasvuväliaineen (Trypticase Soy Broth eli TSB, Difco) 2-kertaisilla sarjalaimennoksilla 573:lie yhteen suuntaan ja 886: lie toiseen suuntaan seuraavien 12 mikro-organismien seoksia vastaan: Escherichia coli (ATCC 11229), Candida albicans (ATCC 11651), Pseudomonas oleovarans (ATCC 8062), Pseu-20 domonas aeruginosa (ATCC 15442), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Enterobacter aerogenes (ATCC 15038), Pseudomonas cepacia (ATCC 17765), Pseudomonas putida (ATCC 795), Aspergillus niger (ATCC 6275), Talaromyces luteus (ATCC 10465), Penicil-lum oxalicum (ATCC 24784) ja Serratia marcescens (shampoosta 25 eristetty). Kukin yksittäinen viljelmä siirrostettiin TSB-agarvinopinnoille ja inkuboitiin 2 päivää 30 °C:ssa C. albicans 1 in ja kaikkien bakteerien kohdalla paitsi E. coli ja S. aureus, jotka olivat 37 °C:ssa, ja sienikantoja inkuboitiin 10 - 14 päivää 25 °C:ssa. Sitten bakteerit ja sienet 30 pestiin vinopinnoilta fosfaattipuskui'illa (0,125 M, pH 7,2 ) ja siirrostettiin kuhunkin koeputkeen, jossa oli määrätty 573:n ja 886:n konsentraatio ja suhde lopulliseen soiukon-sentraatioon noin 2 x ΙΟ"'' bakteeria ja 2 x 10*. sientä ml:ssa. Kahden komponentin alhaisin konsentraatio, ollessaan yhdessä 35 tai seoksessa, joka silmin havaittavasti esti solukasvun 30 °C:ssa 7 päivän aikana, oli pienin inhiboiva konsentraatio (MIC). 7 päivää siirrostuksen jälkeen 5 μΐ näytettä kustakin koeputkesta (sisältäen noin 10“ bakteeria ja 10'“ sientä alku- 9 93510 peräissiirroksesta) poistettiin ia niiden elävät mikro-organismit määritettiin 1:50-laimennoksella TSB-väliaineeseen ia tarkastettiin uudelleenkasvu. Koeputkissa, joissa MIC:t havaittiin, ei ollut näkyviä organismeja. Siten MIC:t osoitti-5 vat erittäin hyvän kontrollin näille organismeille ia otettiin aktiivisuuden päätepisteinä. Kukin koeputki siirrostet-tiin edelleen kahdesti (yhteensä 3 siirrostusta) yhdistelmien kapasiteetin ia pitkäaikaisvaikutuksen määrittämiseksi.

10 Taulukko 1 käsittelyt (ppm) Koe numero 1 koe no. 2 suhde kasvu siirros- kasvu siii'ros- tuksen jälkeen t.uksen jälkeen 15 573 (A) 886(B) R/B 1^ 1+. L·. L·. 1+.

500.0 0,0 a - 250.0 0,0 a - + + 125.0 0,0 a + + + 62.5 0,0 a + + + + + + 20 31,2 0,0 a + + + + + + 15.6 0,0 a + + + + + + 9.8 0,0 a + + + + + + 3.9 0,0 a + + + + + + 2,0 0,0 a + + + + + + 25 1,0 0,0 a + + + + + + 0,5 0,0 a + + + + + + 250.0 0,3 1000 -++--- 250.0 0,5 500 125.0 0,3 500 + + + --- 30 250,0 1,0 250 ------ 125.0 0,5 250 -++--- 62,5 0,3 250 + + + + + + 250.0 2,0 125 ----- - 125.0 1,0 125 - ++ - - - 35 62,5 0,5 125 + + + + + + 31,2 0,3 125 + + + + + + 250.0 4,0 62,5 ------ 125,5 2,0 62,5 ------

9351 O

_ f 10 62.5 1,0 62,5 + 44--- 71.2 0,5 62,5 + + 4 4 4 4 15.6 0,3 62,5 + + + + + 4 250.0 8,0 31,2 ------ 5 125,0 4,0 31,2 ------ 62.5 2,0 31,2 ------ 31.2 1,0 31,2 4 4 4 --- 15.6 0,5 31,2 + + + + + 4 7.8 0,3 31,2 4 4 4 4 4 4 10 250,5 16,0 15,6 ------ 125.0 8,0 15,6 ------ 62.5 4,0 15,6 ------ 31.2 2,0 15,6 ------ 15.6 1,0 15,6 + + + 4 4 4 15 7,8 1»5 15,6 4 4 4 4 4 4 3.9 0,3 15,6 + + + 4 4 4 125.0 16,0 8 ----- - 62.5 8,0 8 ----- 31.2 4,0 g ----- - 2015,6 2,0 8 - + 4 - 4 4 7.8 1,0 8 + + 4 4 4 4 3.9 0,5 8 + + 4 4 4 4 2.0 0,3 8 + + 4 4 4 4 62.5 16,0 4 ----- - 25 31,2 8,0 4 ----- - 15.6 4,0 4 - 4 4 - 4 4 7.8 2,0 4 - + + + + 4 3.9 1,0 4 + + + + + 4 2.0 0,5 4 + + + + + + 301,0 0,3 4 + + + + + + 31.2 16,0 2 ----- - 15.6 8,0 2 - - + - + + 7.8 4,0 2 - 4 4 - 4 4 3.9 2,0 2 + 4 4 4 4 4 35 2,0 1,0 2 + 4 4 4 4 4 1.0 0,5 2 + 4 4 4 4 4 0,5 0,3 2 + 4 4 4 4 4 15.6 16,0 x ----- 4 11 93510 7.8 8,0 !_ + + - + + 3.9 4,0 !_ + + + + + 2,0 2,0 1+ + + + + + 1,0 1,0 1+ + + + + + 5 0,5 0,5 1 + + + + + + 7.8 16,0 0,5 - + + - + + 3.9 8,0 0,5 - + + + + + 2.0 4,0 0,5 + + + + + + 1.0 2,0 0,5 + + + + + + 10 0,5 1,0 0,5 + + + + + + 3.9 16,0 0,25 -++-++ 2.0 8,0 0,25 _ + + + + + 1.0 4,0 0,25 + + + + + + 0,5 2,0 0,25 + + + + + + 15 2,0 16,0 0,13 - + + - + + 1.0 8,0 0,13 + + + + + + 0,5 4,0 0,13 + + + + + + 1.0 16,0 0,06 -++-++ 0,5 8,0 0,06 + + + + + + 20 0,5 16,0 0,03 - + + - + + 0,0 32,0 0 0,0 16,0 0- + + - + + 0,0 8,0 0 + + + + + + 0,0 4,0 0 + + + + + + 250,0 2,0 0 + + + + + + 0,0 1,0 0+ + + + + + 0,0 0,5 0 + + + + + + 0,0 0,3 0 + + + + + + 0,0 0,0 0 + + + + + + 30 - kasvu estyi + kasvu ei estynyt

Synergia märitettiin teollisuuden omaksumalla menetelmällä, 35 jonka kuvailivat Kull, F.C.; Eisman, P.C.; Syl vestrowi.cz, H.D. ja Mayer, R.L. julkaisussa Applied Microbiology 9:538-541 (1961) käyttäen suhdetta, joka määritellään 12 9351 0

Qa + Qb = synergiaindeksi (SI) QA QB jossa QA = yhdisteen A konsentraatio, joka yksin vaikuttaessaan sai 5 aikaan loppupisteen, yksikössä miljoonasosa (ppm)

Qa = yhdisteen A konsentraatio, joka seoksessa sai aikaan loppupisteen, yksikössä ppm 10 QB = yhdisteen B konsentraatio, joka sai yksin vaikuttaessaan aikaan loppupisteen, yksikössä ppm

Qb = yhdisteen B konsentraatio, joka sai seoksessa aikaan loppupisteen, yksikössä ppm 15

Kun summa Qa/QA plus Qb/QB on suurempi kuin 1, on kyseessä antagonismi. Kun summa on 1, on kyseessä additiivisuus, ja kun summa on alle 1, on kyseessä synergia.

20 Koetulokset 573:n ja 651:n synergian havainnollistamiseksi on esitetty taulukossa 1. Kuten nähdään, testattiin laaja joukko konsentraatioita. Tärkeämpää on, että kaikki kriittiset lop-pupisteaktiivisuudet sisältyivät kokeeseen. Yhdistelmiä, jotka kokeiden mukaisesti antoivat kontrollin kaikissa kolmessa 25 siirrostuksessa, voidaan pitää tehokkaimpina. Siten loppupis-teaktiivisuudet perustuvat yhdistelmätuotteen määrätyn suhteen pienimpään konsentraatioon, joka estää kasvun kaikissa kolmessa siirrostuksessa.

30 Taulukossa 2 esitetään 573:n ja 651:n yhdistelmien synergioiden laskelmat. Loppupisteaktiivisuus (MIC yksikössä ppm) on taulukosta 1.

QA on 573:n loppupisteaktiivisuus yksinään, 35 QB on 886:n loppupisteaktiivisuus yksinään,

Qa on 573:n loppupisteaktiivisuus 573:n ja 886:n seoksessa,

Qb on 886:n loppupisteaktiivisuus 573:n ja 886:n seoksessa.

li 13 93510

Koska 886:ssa on 25 % 573:a ja 75 % 651:tä, on kokonais-573 (Qa1) yhdistelmissä Qa - 25% Qb, ja kokonais-651 (Ob') yhdistelmissä on 75 % Qb. 573:n ja 651:n kokonaiskonsentraatio seoksessa on Qa' ja Qb'. 573:n prosenttiosuus seoksessa on 5 Qa'/(Qa'+Qb'), ja 651:n prosenttiosuus seoksessa on Qb'/(Qa'+Qb').

Synergiaindeksi (SI)-laskelmat 573:n ja 651:n yhdistelmille perustuvat taulukon 1 tietoihin, jotka osoittavat, ettei 573 10 vaikuta hyvin pienillä konsentraatioilla (<8 ppm) merkittävästi 886:n kokonaisaktiivisuuteen. Toisin sanoen, 886:n aktiivisuus suositeltavammilla käyttötasoilla (<30 ppm) on olennaisesti 651:n aktiivisuutta. Sen vuoksi synergiaindeksi (SI) lasketaan Qa'/QA + Qb’/0,75QB. Edullisin 573:n ja 651:n 15 yhdistelmien synergia nähdään kohdalla 2,3 - 4,5 % 651:tä. Mikäli synergiaindeksi alle 0,5 katsotaan merkittävimmäksi, ovat 651:n määrä alueella 2,3 - 8,5 % 573/651-yhdistelmissä edullinen.

20 Seuraavasta taulukosta 2 ilmenevät loppupisteet, ja laskelmien tulokset.

9351 0 14 I ontoHoinoiNv^N omcoHOttNcovo »-j oinmnHHrinvmo οκινηπ^γό \ r-tOOOOOOOOOi-t rHOOOOOO·-) « cc C onic>otsveroinr>oo ommvommoo v oooooor-tcNmino οοοοπίΝΐηο • ···»·»····* ········

X OOOOOOOOOOi—( OOOOOOOrH

a C ooammioior^r-^rt-M oominvor-coio \ OLTIinCNfHOOOOOO ΟΙΠΓΜΓΜΓΜΓΜΓΝΟ

flj r-tOOOOOOOOOO iHOOOOOOO

I ®

+3 I

c onwNnminnvftO ONrnininnvo H ·*· H ...................

<n in ooOHN^oominMn OHisvcoinmin tJ \ να r-t PM m Γ- «Η ΓΜ Γ" <0 I1 -y (0 Φ

E or"» BMnmp»iOHO ooMnirtMCO

Hji rH ...................

4) «*> r~l OCTiOlOMflHTMfNin ΟβΜΛΗ^^ΐη m H οσισισισιοηη μ i w in Ρ-» ^

<D HJ

C Ή > (Mltn X oooomcNrN(M(Nvoo oimnnnnino ! c ...................

Sj'd) 1 + o m in n ίο n n n <» ro rn NifirmmnvfO

S-H _ innNH «—t RJ 1 ^ E.

g® ! ·§,*3 ft -P : * E-ι w H oiMninintnooooo oror-moooo Η» ........... ........

r -p ιηχ oOHHHHmioNNTr οοοηπιον^

> χ VOC ΗΗΝ ιΗ IN

>· g ^ I ΟΓΝίηιηοΓ'ΜΝΝίοο oi^^r'NNNo ιΛ j ...................

VO ! <η (Η οοοιηπΗΝηιηοίο inNrHHnntnco •Ρ r-cj ommiNionnnnH nncrmnnn <0 I rC ΙΛ ” ιΛ (N CM Η f-ι •n I . - 1

di J

.. m XI Or-tCNCNCMCM^COVOVOCN Οι-ί.-ΙΡΜ'ΤΟΟνΟΓΜ CO i 3 Cl H H fO H Π £ PE 1

^ I 12 n i OOOOinCMNNNlOO O ΙΛ N (M (N CN N O

> 0 J ...................

: ,*j <q OOOinCNHHrlHinO inNHHHHHO <*> J‘.Ϊ g ouiinnnonnnnH niBnnnnn in ! | inNCNH fi r- | ^:0 y.

m rij J NCMCMCMCMNNNCMfMN NfMCMfMfNfMCMCM

m pnmmmmmmmromro mmnpncnmmro n tn X M 0 •w > I „ a " ? ΓΤ ooooooooooo ininmininminin * *r ~ <s_ ooooooooooo nncnncmncmn cq q ^ C ininminininirunininm ηηηηηηηη Ot »-H ^

O

C r-i PM

®

O

λ: 15 93510

Uudella yhdistelmällä on edullinen käyttötaso 20 - 100 ppm ja edullisesti noin 25 - noin 50 ppm. Se saattaisi olla korkeampi; mahdollisuus herkistymiseen kasvaisi kuitenkin tason noustessa.

5 651:n prosenttiosuus 573/651-yhdistelmässä, jolla on synergiaa, on 1,2 - 25,4%, edullisemman 651:n prosenttiosuuden 573/651-yhdistelmässä ollessa noin 2,3 - noin 8,5 % ja edullisin 651:n prosenttiosuus 573/651-yhdistelmässä on alueella 10 noin 2,3 - 4,5 %.

Nämä 651:n tasot ovat edullisia (se on, 2,3 - 8,5 % ja 2,3 - 4.5 %) koska niillä 651:n määrä on pienin ja synergia voimakkain.

15

Herkistvskokeet Nämä kokeet suoritettiin määrittämään synergisen yhdistelmän 3.5 % 651:tä ja 96,5 % 573:a herkistyspotentiaalin. Tuloksia verrattiin 886:n (sisälsi 25 % 651 ja 25 % 573) ja puhtaan 20 573:n herkistyspotentiaaleihin.

Nämä tulokset esitetään taulukossa 3.

Buehlerin teoksessa Current Concepts in Cutaneous Toxicology, 25 (New York: Academic Press 1970), s. 25-40, esittämää umpi-laastarikoetta käytetään materiaalien herkistyspotentiaalin tutkimiseksi marsussa. Yhdistelmää (vaikuttavaa ainetta yhteensä 1,5 %) konsentraatioilla 1000, 5000, 10000 ja 15000 ppm a.i.vedessä, 886:a (yhteensä 13,9 % vaikuttavaa ainetta) 30 konsentraatioilla 250, 500 ja 750 ppm a.i. vedessä ja 573:a (kiinteä aine, joka käsitti yhteensä 99,5 % vaikuttavaa ainetta) konsentraatioilla 5000, 15000 ja 30000 pm a.i. vedessä lisättiin paikallisesti marsujen iholle umpinaisten laasta-reiden avulla (0,4 ml laastaria kohden). Kaikki marsut (10 35 ryhmää kohden jokaisella konsentraatiolla) saivat yhteensä kymmenen 6-h induktioaltistusta 22 päivän aikana. Lisäksi ryhmä marsuja käsiteltiin ainoastaan kuivilla laastareilla ja nämä toimivat luonnollisena kontrollii-yhmänä. Kaksi viikkoa 93510 16 viimeisen induktiokäsittelyn jälkeen yhdistelmällä indusoidut marsut altistettiin 3:11a yhdistelmän konsentraatiolla tislatussa vedessä (1000, 5000 ja 15000 ppm a.i.), 886:11a indusoidut altistettiin 3:lie 886:n konsentraatiolle tislatussa 5 vedessä (100, 250 ja 750 ppm a.i.) ja ainoastaan 573:11a indusoidut altistettiin 3:lie 573:n konsentraatiolle tislatussa vedessä (1000, 5000 ja 15000 ppm a.i.). 24 ja 48 h myöhemmin altistusannosten jälkeen antokohtien punehdusreaktiot tutkittiin ja arvosteltiin asteikolla 0-3 etukäteen päätetyllä 10 arvostelujärjestelmällä. Reaktiot, jotka arvioitiin l:ksi tai yli arvosteltiin ihoherkistysreaktioiksi.

Luonnollisessa kontrolliryhmässä ei havaittu punehdusta altistuksen jälkeen 15000 ppm:lle yhdistelmä-a.i.:tä, 750 15 ppm:lie a.i. 886:a ja 15000 ppm a.i. 573:a -korkeimmat altistukseen käytetyt konsentraatiot kultakin materiaalilta (taulukko 1). Yhdistelmän konsentraatioilla 1000 - 10000 ppm a.i. altistetuissa marsuissa havaittiin punehdusvasteitä altistuksen jälkeen 5000 ja 15000 ppm a.i. yhdistelmää (2/10 - 7/10 20 tapausta), muttei 1000 ppm:llä a.i. 15000 ppm:llä a.i. yhdistelmällä indusoidut eläimet osoittivat pienimmän vasteen 1000 ppm:llä a.i. altistuksella (1/10), kuten myöskin vasteet 5000 (4/10) ja 15000 ppm a.i. (7/10) altistuksella.

25 886-biosidilla 250 ppm:llä indusoiduissa marsuissa punehdus-vasteita havaittiin 250 (1/10) ja 750 ppm a.i. vasteilla (4/10), muttei 100 ppm a.i. altistuksella. 886:11a 500 ja 750 ppm:llä a.i. indusoidut eläimet osoittivat positiivisia vasteita 100, 250 ja 750 ppm:llä a.i. biosidia (1/10 - 6/10), 30 paitsi eläimet, jotka oli indusoitu 750 ppm:llä a.i ja altistettu 250 ppm:llä a.i.

573:11a 5000 ja 15000 ppm:llä a.i. indusoiduissa marsuissa ei havaittu punehtumista altistuksen jälkeen 1000 ppm:llä 35 a.i. 573 ja minimaalinen/alhainen punehdustapausten määrä havaittiin altistuksen jälkeen 5000 ja 15000 ppm:llä a.i.

573 (se on, 1/10 - 3/10 tapausta). 30000 ppm:llä a.i. 573 indusoidut eläimet ilmaisivat minimaalisen/alhaisen punehdus- li 17 9351 0 ten määrän kaikilla 573:n altistuskonsentraatioilla (1/9 -3/9) .

Synergisen yhdistelmän herkistyspotentiaalin vertailusta 5 886:n vastaavaan ilmenee, että yhdistelmä on 1/20 - 1/15 kertaa niin voimakas herkistäjä kuin 886. Käytettiin tilastollista menetelmää vertaamaan yhdistelmällä indusoitujen (5000, 10000 ja 15000 ppm a.i.) ja altistettujen (15000 ppm a.i.) eläinten vasteiden esiintymistiheyttä ja vakavuutta 10 verrattuna eläimillä, jotka oli indusoitu (250, 500 ja 750 ppm a.i.) ja altistettu (750 ppm a.i.) 886:11a. Ihoreaktio-pisteiden jakauma 886-induktioryhmässä ei eronnut tilastollisesti (p<0,20) synergisen yhdistelmän induktiox'yhmästä (se on, 20 kertaa suuremmilla konsentraatioilla) suurimmilla an-15 noksilla altistuksen jälkeen. Samoin 573:n herkist.yspoten-tiaali oli suunnilleen 1/3 - 1/2 yhdistelmän potentiaalista (se on, induktio 5000 ja 15000 ppnv.llä ja altistus 1000, 5000 ja 15000 pprrr.llä kullakin testimateriaalilla, kokonaistapaus-määrä oli 23 mahdollisesta 60:stä (synergisellä yhdistelmäl-20 lä) ja 7 mahdollisesta 60:stä-(573:11a)).

Yhteenvetona, synerginen yhdistelmä aiheutti marsuissa viivästynyttä kosketusliikaherkkyyttä, mutta herkistyspotentiaa-li tämän kokeen yhdistelmällä oli 1/20 - 1/15 veikattuna 25 886:n potentiaaliin.

18 9351 0

Taulukko 3 herkistysvasteet 1 tai yli 24 h ja/tai 48 h kohdalla 5 _induktio vaihe" _äiti s tu svaihefc‘---- synerginen yhdistelmä 886 573

käsittely annos ( ρριπ ) 15000 ppm 7 50 ppm 15000—PPID

luonnoll.

10 kontrolli" --- --- 0/10 0/10 0/10 synei-ginen yhdistelmä käsittely annos (ppm) 1000 ppm 5000 ppm 1.5000—PPG) synerginen 1000 0/10 2/10 2/10 15 yhdistelmä 5000 0/10 4/10 7/10 " " 10000 0/10 3/10 6/10 " " 15000 1/10 4/10 7/10 886 886 886 20 käsittely annos (ppm) 110 ppm 250 ppm 750 pian 886 250 0/10 0/10 4/10 886 500 1/10 2/10 6/10 886 750 2/10 0/10 6/10 25 573 573 573 käsittely annos (ppm) 1000 ppm 5000 ppm 15000—KPffl 573 5000 0/10 1/10 2/10 573 15000 0/10 1/10 3/10 573 30000 1/9 2/9 3/9 30 "Marsut saivat kymmenen (6-h) imnduktiota kymmenellä materiaalilla (0,4 ml altistusta kohden) 22 päivän aikana.

Kaikki marsut saivat 0,4 ml määriteltyä altistusannosta 2 35 viikkoa viimeisen induktioannoksen jälkeen.

"Marsut saivat ainoastaan näennäiskäsittelyn.

Il

Claims

93510

1. Mikrobisidinen koostumus, tunnettu siitä, että se käsittää (a) 1,2-25,4 % 5-kloori-2-metyyli-4-isotiatsolin-3-onia ja (b) 74,6-98,8 % 2-metyyli-4-isotiatsolin-3-onia, 5 prosenttiosuuksien ollessa kahden komponentin painon perusteella.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että (a):n määrä on 2,3-8,5 % ja (b):n määrä on 91,5- 10 97,7 %.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että (a):n määrä on 2,3-4,5 % ja (b):n määrä on 95,5- 97,7 %. 15

4. Menetelmä bakteerien, sienten tai levien kasvun estämiseksi bakteereilla, sienillä tai levillä saastuneessa kohteessa, tunnettu siitä, että kohteelle tai kohteeseen lisätään jonkin edeltävistä patenttivaatimuksista mukaista koos- 20 tumusta määrä, joka on tehokas vaikuttamaan heikentävästi bakteerien, sienten tai levien kasvuun.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kohde on (i) vesiväliaine, (ii) kosmeettinen val- 25 miste tai muu ei-terapeuttinen valmiste, joka on tarkoitettu kontaktiin ihmisen ihon kanssa.

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että patenttivaatimuksen 1 mukaiseen vesiväliaineeseen 30 lisätään määrä 20-100 osaa (a):ta ja (b):tä miljoonaa veden osaa kohden.

7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lisätty määrä on 25-50 ppm. 35

8. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukaisen mikrobisidi-sen koostumuksen käyttö, tunnettu siitä, että tuote, jossa 93510 koostumusta käytetään, sisältää 20-100 ppm (a):ta ja (b):tä niiden yhteismääränä ilmoitettuna.

9. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukaisen mikrobisidi-5 sen koostumuksen käyttö, tunnettu siitä, että tuote, jossa koostumusta käytetään, sisältää 25-50 ppm (a):ta ja (b):tä niiden yhteismääränä ilmoitettuna.

10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen mikrobisidisen koostu-10 muksen käyttö, tunnettu siitä, että tuote on kosmeettinen tai muu ei-farmaseuttinen tuote, joka on tarkoitettu kontaktiin ihmisen ihon kanssa.