FI88583B - Foerfarande foer framstaellning av fettemulsioner, som innehaoller prostaglandin i2 - Google Patents

Description

1 88583

Menetelmä prostaglandiini Ia: a sisältävien rasvaemulsioiden valmistamiseksi Förfarande för framställning av fettemulsioner, som innehaller prostaglandin Ia

Keksintö kohdistuu prostaglandiineja Ia sisältävien rasvaemulsioiden valmistamiseen. Erityisemmin keksintö kohdistuu uusiin rasvaemulsiohin, jotka sisältävät aktiivisena aineosana prostaglandiineja Ia, jotka vaikuttavat veritukosten liukenemista edistävästi ja ovat lisäksi käyttökelpoisia sydänverisuoni-järjestelmän häiriötilojen hoidossa.

Prostaglandiineilla on laaja fysiologisten vaikutusten alue ja niillä on ollut laajaa käyttöä lääkinnässä johtuen niiden erilaisista ja käyttökelpoisista biologisista vaikutuksista, joista mainittakoon ääreisverenkierron parantaminen, verisuonien laajentaminen, haavaumia estävä vaikutus, verenpainetta alentava vaikutus, synnytyksen aloittaminen, veritukosten liukenemista edistävä vaikutus ja astmaa ehkäisevä vaikutus. Viime vuosina näitä yhdisteitä on tutkittu tarkoituksena mah-I ' : dollisesti löytää uusia vaikutuksia kuten syöpää ehkäisevä : vaikutus, luiden aineenvaihdunnnan parantaminen, virusten vastainen vaikutus, maksaa suojaava vaikutus, virtsaneritys. Erityisesti luonnossa esiintyvä prostasykliini on paikallinen hormoni, joka pääasiallisesti muodostuu in vivo valtimoiden verisuonien seinämissä. Johtuen sen tehokkaista fysiologisista vaikutuksista, kuten verihiutaleiden kasautumista estävä vaikutus ja verisuonia laajentava vaikutus, tämä paikallinen hormoni muodostaa tärkeän tekijän, joka säätää solujen toimintaa in vivo, ja siksi on pyritty käyttämään luonnollisesti esiintyvää prostasykliiniä sellaisenaan farmaseuttisena tuotteena (P. J. Lewis, J. 0. Grady et ai., Clinical prostacyclin, Raven Press, N. Y. (1981)).

Toisaalta kun näitä käyttökelpoisia prostaglandiineja käytetään farmaseuttisina tuotteina esiintyy kuitenkin erilaisia ongelmia johtuen prostaglandiineissa luonnostaan esiintyvästä 2 B 8 583 in vivo epästabiilisuudesta, niiden laajan alueen käsittävän fysiologisten vaikutusten aiheuttamista sivuvaikutuksista ja niiden kemiallisesta epästabiilisuudesta johtuvista formulointi vaikeuksista.

Siten on suoritettu intensiivisiä kokeita sekä kotimaassa että ulkomailla tarkoituksena saada kemiallisesti stabiileja synteettisiä prostasykliinijohdannaisia, jotka olisivat verrannollisia luonnollisesti esiintyvään prostasykliiniin biologisten vaikutusten suhteen.

On myös pyritty stabiloimaan kemiallisesti epästabiilia pros-tasykliiniä annosmuodoissa sekä parantamaan sen lääketehok-kuutta. On esimerkiksi ehdotettu menetelmää prostasykliinin stabiloinnin suorittamiseksi klatraattiyhdisteenä käyttäen syklodekstriiniä (Joseph Scesitri et ai., japanilainen kuulutus julkaisu Showa 54-56685), menetelmää prostasykliinin stabi-loimiseksi pinta-aktiivisilla aineilla (Moo Yang Chou et ai. , japanilainen kuulutusjuikaisu Showa 55-15470), farmaseuttisen valmisteen tuottamista muodostamalla ensin prostasykliinin uusi esterijohdannainen, joilla on suurempi liukoisuus rasvaan, emulgoimalla tämä esterijohdannainen rasvaan ja ylläpitämällä sen aktiivisuus verrannollisena alkuperäisen prostasykliinin aktiivisuuteen (Fukaya et ai., japanilainen kuulu-tusjulkaisu Showa 60-13779), jne.

PGEi ja PGAi sisältäviä rasvaemulsioita on äskettäin ehdotettu käytettäviksi stabiloituina prostaglandiinin rasvavalmisteina, joilla on verisuonia laajentava, verihiutaleiden kasautumista estävä ja verenpainetta alentava vaikutus (Mizushima et ai., japanilainen kuulutusjuikaisu Showa 58-222014 ja japanilainen kuulutusjulkaisu Showa 59-141518; ja Mizushima et ai., Ann. Rheum. Diseases, 4_1, 263 (1982); Pharm. Pharmacol., 35, 398 (1983)). Tällaisia tekniikoita sovelletaan kasvaintenvastäisten aineiden valmistuksessa. On esitetty myös ehdotus, joka koskee parannusta syövänvastaisten lääkkeiden selektiivisessä saattamisessa kohde-elimeen (Okamoto et ai., japanilainen kuulutusjulkaisu Showa 59-122423).

3 88583

Keksijät huomasivat ylläesitetyt tosiseikat ja suorittivat intensiivistä tutkimusta eräillä kemiallisesti stabiileilla synteettisillä Prostaglandiineilla Is tarkoituksena pidentää niiden vaikutusta ja parantaa niiden lääkinnällistä tehokkuutta. Tämän seurauksena valmistettiin mainitut stabiileja prostaglandiineja Is sisältävät rasvaemulsiot ja huomattiin, että nämä valmisteet olivat täyttäneet nämä tarkoitukset. Keksijät näin ollen päätyivät esillä olevaan keksintöön, jonka tunnusmerkit ilmenevät oheisista patenttivaatimuksista.

Näin ollen keksinnön kohteena on menetelmä prostaglandiini Is: a sisältävän, lääkinnällisesti tehokkaan rasvaemulsion valmistamiseksi, jossa menetelmässä emulgoidaan seos, joka käsittää 5. . . 50 % (w/v) kasviöljyä, 1. . . 50 osaa fosfolipidiä 100 osaa kasviöljyä kohti, 1,0 mg/ml ... 0,2 ug/ml vähintään yhtä prostaglandiini Ia: a ja loput vettä.

Keksinnön mukaiset rasvaemulsiot sisältävät seuraavan kaavan (I) edustamia prostaglandiineja Ia z/^/^COOR1 V rv .7. (r^*2 ···«> HO ΐ

OH

jossa X tarkoittaa happiatomia tai metiiniryhmää, ΐ on hiili-atomi, Z tarkoittaa metyleeni- tai metiiniryhmää; kun X on happiatomi, Y-Z-sidosmuoto on hiili-hiili-kaksoissidos; ja kun X on metiiniryhmä, X-Y-sidosmuoto on hiili-hiili-kaksoissidos ja Z on metyleeniryhmä; Ri tarkoittaa vetyatomia tai alkyyli-ryhmää, Ra tarkoittaa vetyatomia tai fluoriatomia, Rs tarkoittaa vetyatomia, metyyliryhmää, etyyliryhmää tai vinyyliryhmää. R« tarkoittaa substituoitua tai substituoimatonta 1...10 hii-liatomia sisältävää alkyyliryhmää, substituoitua tai substituoimatonta 2...10 hiiliatomia sisältävää aikenyyliryhmää, substituoitua tai substituoimatonta 2. . . 10 hiiliatomia sisäl- 4 88583 tävää aikynyyliryhmää tai substituoitua tai substituoimatonta 3. . . 8 hiiliatomia sisältävää sykloalkyyliryhmää; ja n on nolla (0) tai kokonaisluku, jonka arvo on 1.

Keksinnön mukaiset rasvaemulsiot ovat uusia rasvaemulsioita, jotka sisältävät kemiallisesti stabiileja prostaglandiineja Ia. Tällaisilla rasvaemulsioilla on pitempivaikutteinen teho, parantunut prostaglandiinien Ia stabiilisuus, alentunut sivuvaikutusten esiintyminen ja niillä on samanaikaisesti tehokkaat farmakologiset vaikutukset ja niitä voidaan käyttää valmisteina, jotka on tarkoitettu suonensisäistä annostamista varten.

r

Useimmat prostaglandiinit Ia edellä mainitussa kaavassa (I) ovat niitä yhdisteitä, joiden tunnetaan olevan stabiloituja prostaglandiineja Ia (japanilainen kuulutusjulkaisu Showa 58-150583, jonka hakemusnumero on Showa 57-32981).

Edellä mainitussa kaavassa (I) X tarkoittaa happiatomia tai metiiniryhmää, Y on hiiliatomi, Z tarkoittaa metyleeni- tai metiiniryhmää; kun X on happiatomi, Y-Z-sidosmuoto on hiili-hiili -kaksoissidos, ja kun X on metiiniryhmä, X-Y-sidosmuoto on hiili-hiili-kaksoissidos ja Z on metyleeniryhmä. Näistä määritelmistä lähtien tässä keksinnössä oleva aktiivinen aineosa ilmoitetaan seuraavan kaavan (Ia) mukaisena i s okarbas ykli i ni nä f— COOR1 \ / R _ ...(ia) )-J3 (CH2}n^R4

CH

(jossa Ri, Rs, R«i ja n tarkoittavat samaa kuin edellä; Rai tarkoittaa vetyatomia), tai seuraavan kaavan (Ib) mukaisena 7-fluoriprostasykliininä: 5 88583 ^ COOR1

xU

^_/ R3 ...(lb)

Hdf (CH2)n ^R4

OH

(jossa Ri, R3, R4 ja n tarkoittavat samaa kuin edellä; R22 tarkoittaa fluoriatomia).

Edellä esitetyssä kaavassa (I) Ri on vetyatomi tai alkyyli-ryhmä. Alkyyliryhmänä voi olla 1...10 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, kuten metyyli-, etyyli-, propyyli-, butyyli-, pentyyli-, heksyyli-, oktyyli- ja dekyyliryhmä. Ri on edullisesti vetyatomi tai metyyliryhmä.

R4 tarkoittaa substituoitua tai substituoimatonta 1...10 hiiliatomia sisältävää alkyyliryhmää, substituoitua tai substituoimatonta 2...10 hiiliatomia sisältävää alkenyyliryhmää, substituoitua tai substituoimatonta 2...10 hiiliatomia sisältävää alkynyyliryhmää tai substituoitua tai substituoimatonta 3.. .10 hiiliatomia sisältävää sykloalkyyliryhmää. Substituoi-maton 1...10 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä voi olla esimerkiksi metyyli-, propyyli-, butyyli-, pentyyli-, heksyyli-, oktyyli- tai dekyyliryhmä, jne. Substituoimaton 2...10 hiili-atomia sisältävä alkenyyliryhmä voi olla esimerkiksi vinyyli-, 2- propenyyli-, 3-butenyyli-, 2-pentenyyli-, 2-metyyli-3-pente-nyyli-, 2-heksenyyli-, 5-metyyli-4-heksenyyli-, 2,6-dimetyyli- 5-heptenyyliryhmä, jne. Substituoimaton 2...10 hiiliatomia sisältävä alkynyyliryhmä voi olla esimerkiksi 2-butynyyli-, 3- butynyyli-, l-metyyli-2-pentynyyli-, l-metyyli-3-penty-nyyli-, 2-heksynyyli-, 4-heksynyyliryhmä, jne. Substituoimaton 3.. .8 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyliryhmä voi olla esimerkiksi syklopropyyli-, syklopentyyli-, sykloheksyyliryhmä, jne.

6 88583 Näiden alkyyli-, alkenyyli-, alkynyyli- ja sykloalkyyliryhmien substituentteina voivat olla esimerkiksi halogeeniatomit kuten fluori ja kloori, alemmat alkoksiryhmät kuten metoksi-, etok-si-, propoksi- ja butoksiryhmät, halogeenialkyyliryhmä kuten tr ifluorimetyyli, substituoitu tai substituoimaton fenoksi- ryhmä, joka on mahdollisesti substituoitu halogeeniatomilla tai alemmalla alkoksiryhmällä, jne.

Kaavan (I) mukaiset prostaglandiinit I2 voidaan valmistaa esimerkiksi menetelmillä, jotka on selitetty japanilaisessa kuulutusjulkaisussa Showa 58-150583 ja japanilaisessa kuulutus j ulkaisussa Showa 57-32981.

Edellä esitetyn kaavan (I) edustamat stabiilit prostaglandiinit I2 ovat erityisesti lueteltu alla seuraavasti: (1) isokarbasykliini (2) 16,17,18,19,20-pentanor-15-syklopentyyli-isokarbasykliini (3) 16,17,18,19,20-pentanor-15-sykloheksyyli-isokarbasykliini (4) 17,20-dimetyyli-isokarbasykliini (5) 15-deoksi-16-hydroksi-isokarbasykliini (6) 15-deoksi-16-hydroksi-16,20-dimetyyli-isokarbasykliini (7) 7-fluoriprostasykliini (8) 7-fluor i-16,17,18,19,20-pentanor-15-syklopentyyliprostasykliini (9) 7-fluori-16,17,18,19,20-pentanor-15-sykloheksyyliprostasykliini (10) 7-fluori-17,20-dimetyyliprostasykliini (11) 7-fluori-16,16-dimetyyliprostasykliini (12) 7,16-difluoriprostasykliini (13) 15-deoksi-16-hydroksi-7-fluoriprostasykliini (14) 15-deoksi-16-hydroksi-7,16-difluoriprostasykliini (15) Edellisten kohtien (1)...(14) metyyliesterit.

Keksinnön mukaiset rasvaemulsiot käsittävät pääasiallisina komponentteina kaavan (I) mukaisia prostaglandiineja 12» 5...50 % w/v (paino/tilavuus) kasvisöljyä, 1...50 osaa, edul- 7 88583 lisesti 5...10 osaa fosfolipidiä 100 osaa kohti kasvisöljyä, sekä sopivan määrän vettä.

Kasvisöljy voi olla soijapapuöljyä, puuvillansiemenöljyä, sesamöljyä, safloriöljyä ja maissiöljyä, mutta se on edullisesti soijapapuöljyä.

Soijapapuöljyn paras valinta on erittäin puhdas raffinoitu soijapapuöljy. Se on edullisesti erittäin hyvin puhdistettua, raffinoitua soijapapuöljyä, joka on saatu edelleen puhdistamalla tavallista raffinoitua soijapapuöljyä esimerkiksi höyry-tislaamalla.

Fosfolipidinä on puhdistettu fosfolipidi, kuten munankeltuisen lesitiiniä ja soijapapulesitiiniä. Voidaan käyttää fosfolipidiä, joka on valmistettu fraktionoimalla käyttäen orgaanista liuotinta tavanomaisella tavalla, toisin sanoen lisäämällä hitaasti, sekoittaen asetonia raakaan munankeltuaisfosfolipi-diin, joka on liuotettu n-heksaanin ja asetonin kylmään seokseen, keräämällä liukenematon aines suodattamalla, toistamalla liuotuskäsittely, jota seuraa seostaminen ja lopuksi poistamalla liuotin tislaamalla. Tuote käsittää pääasiallisina komponentteinaan fosfatidyylikoliinia ja fosfatidyylietanoli-amiinia. Muut fosfolipidit voivat olla fosfatidyyli-inosito-- .·. lia, fosfatidyyliseriiniä, sfingomyeliiniä, jne.

Keksinnön mukaan rasvaemulsioon voidaan tarvittaessa lisätä edelleen emulgoimisen apuainetta, stabilointiainetta, suuren molekyylipainon omaavia aineita, isotonoivia aineita jne.

Emulgoitumisen apuaineina voivat esimerkiksi olla jopa 0,3 % w/v (paino/tilavuus) 6...22, edullisesti 12...20 hiiliatomia sisältäviä rasvahappoja tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja, jne. Mitä tahansa 6...22 hiiliatomia sisältävää rasvahappoa voidaan käyttää mikäli niitä voidaan lisätä farmaseuttiseen tuotteeseen. Tällaiset rasvahapot ovat joko suora-ketjuisia tai haaroittuneita. Edullisia ovat steariini-, e 88583 oleiini-, linoli-, palmitiini-, linoleeni- ja myristiinihapot. Nämä suolat voivat olla suoloja alkalimetallien kuten natriumin ja kaliumin kanssa, maa-alkalimetallien kuten kalsiumin kanssa, jne.

Stabilisoivana aineena voi esimerkiksi olla alle 0,5 % w/v, edullisesti alle 0,1 % w/v kolesterolia, alle 5 % w/v, edullisesti alle 1 % w/v fosfatidihappoa, jne.

Suuren molekyylipainon omaavina yhdisteinä voi olla esimerkiksi 0,1...5 paino-osaa, edullisesti 0,5...1 paino-osaa albumiinia, dekstraania, vinyylipolymeeriä, ei-ionisia pinta-aktii-visia aineita, gelatiinia, hydroksietyylitärkkelystä, jne. prostaglandiinien I2 yhtä paino-osaa kohti.

Albumiinina voi edullisesti olla ihmisestä peräisin oleva albumiini, vinyylipolymeerinä voi olla polyvinyylipyrrolidoni, jne. Ei-ionisina pinta-aktiivisina aineina voivat olla esimerkiksi polyalkyleeniglykolit, polyoksialkyleenikopolymeerit, kovetetun risiiniöljyn polyoksialkyleenijohdannaiset, risiiniöljyn polyoksialkyleenijohdannaiset, jne.

Prostaglandiinien I2 pitoisuutta rasvaemulsioissa voidaan sopivasti suurentaa tai vähentää riippuen emulsioiden ja annostapojen muodosta. Yleensä erittäin pieni määrä, esimerkiksi 1,0 mg...0,2 jjg/ml rasvaemulsiossa on riittävä määrä.

Keksinnön mukaiset rasvaemulsiot valmistetaan esimerkiksi seuraavalla tavalla:

Ennalta määrätyt määrät kasvisöljyä, fosfolipidiä ja prostaglandiineja I2 ja muita lisäaineita sekoitetaan keskenään ja seosta lämmitetään liuoksen muodostamiseksi. Liuos homogenisoidaan esimerkiksi käyttämällä suurella suihkutuspaineella toimivan tyyppistä homogenisaattoria, ultraäänihomogenisaat-toria, jne. Homogenaatti homogenoidaan uudelleen sen jälkeen kun on lisätty tarpeellinen määrä vettä keksinnön mukaisten 9 88583 rasvaemulsioiden valmistamiseksi. Valmistusolosuhteissa lisäaineet kuten stabilointiaine ja isotonisointiaine voidaan lisätä sen jälkeen kun rasvaemulsio on muodostettu.

Rasvaemulsioita voidaan antaa ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta kuten esimerkiksi ruiskeena, edullisimmin suonensisäisesti. Prostaglandiineja I2 annetaan esimerkiksi suonensisäisesti jatkuvana nesteruiskeena kerran päivässä annostason ollessa 0,01...0,1 ;ug/kg tai 0,01...0,1 ng/kg/min. Keksinnön mukaisilla rasvaemulsioilla on erittäin tehokas vaikutus. Ne toimivat kauan pitkäaikaisen vapautumisen johdosta ja kohdistuvat selektiivisesti vammoihin; siten pienten annosten antaminen mahdollistaa tehokkaan hoidon.

Koska aineita voidaan antaa suonensisäisesti, voidaan odottaa, että vaikutus alkaa nopeasti, lääkkeen tehokkuus on tasainen, ja koska annokset ovat pieniä, on sivuvaikutusten ilmeneminen pienempi.

Valmisteen osaset ovat lisäksi äärimmäisen pieniä ja niiden keskimääräinen koko on alle 1,0 /1. Varmuus (stabiilisuus) varastoinnissa on hyvä.

Viitaten seuraaviin esimerkkeihin selitetään parhaat menetelmät keksinnön soveltamiseksi.

Esimerkki 1

Isokarbasykliiniä (yhdiste I) sisältävän rasvaemulsion valmistaminen 10 grammaan raffinoitua soijapapuöljyä lisättiin 1,2 g munan-keltuaislesitiiniä ja 1000 jug isokarbasykliiniä. Seosta kuumennettiin 60...80 °C:ssa liuokseksi. Liuokseen lisättiin 50 ml tislattua vettä ja tämän jälkeen 2,5 g glyserolia. Ruisketta varten lisättiin tislattua vettä siten että liuoksen määrä 10 8 8583 nousi 100 mlsaan. Liuos homogenoitiin karkeasti homo-sekoitti- messa.

Käyttäen Manton-Gaulin homogenaattoria raaka emulsio emulgoi-tiin sitten edelleen johtamalla se 10 kertaa laitteen läpi ensimmäisen vaiheen paineen ollessa 120 kg/cm2 ja kokonaispai-neen ollessa 500 kg/cm2. Näin saatiin homogenoitu, hienojakoi-sesti dispergoitunut 10 % soijapapuöljyä sisältävä rasvaemul-sio, joka sisälsi isokarbasykliiniä (yhdistettä I) lopullisen konsentraation ollessa 10 /jg/ml.

Esimerkki 2

Rasvaemulsioiden valmistaminen kun emulsiot sisälsivät 16,17,18,19,20-pentanor-15-pentyyli-isokarbasykliiniä (yhdistettä II), 7-fluori-16,17,18,19,20-pentanor-15-syklopentyyli-prostasykliinin metyyliesteriä (yhdistettä III) ja vastaavasti isokarbasykliinin metyyliesteriä (yhdistettä IV) Käyttäen yhdisteitä II, III ja IV 10 % soijapapuöljyä sisältävät rasvaemulsiot valmistettiin samalla tavalla kuin esimerkissä 1, jolloin kukin emulsioista sisälsi yllämainittua yhdistettä niin paljon, että lopullinen konsentraatio oli 5 yug/ml, 5 jug/ml ja vastaavasti 10 yug/ml.

Esimerkit 5...16 Lääkinnällisen vaikutuksen arviointi käyttäen ihmisen verihiutaleita

Keksinnön mukaisen rasvaemulsion kykyä muodostaa syklistä AMP:tä ajan kuluessa määritettin käyttäen ihmisen verihiutaleita ja näitä arvoja verrattiin emulgoimattoman yhdisteen vastaavaan kykyyn. 50 ml ihmisen verta kerättiin käyttäen 1 osaa 3,8 prosenttista natriumsitraattia 9 osaa verta kohti. Verinäyte sentrifugoitiin nopeudella 1300 kierr/min 10 minuuttia. Ylempi kerros otettiin talteen PRP:nä (verihiutalerikkaa- l li 8 8 58 3 na plasmana) ja sentrifugoitiin nopeudella 3000 kierr/min 20 minuuttia. Näin saatu saostuma (verihiutaleet) suspendoitiin 2 ml:aan Tris-puskuroitua suola-glukoosi-EDTA-liuosta (TSG-EDTA) (pH 7,4).

Rasvaemulsioon, joka oli aikaisemmin siirretty 350 /il TSG-EDTA:ta ja 50 /ai verihiutalesuspensiota sisältävään muoviputkeen ja inkuboitu 37 °C:ssa, lisättiin 50 /ai suolaliuokseen liuotettua 5 mM isobutyylimetyyliksantiinia, ja 2 minuuttia tämän jälkeen reaktiot keskeytettiin 0,5 ml:lla 10 prosenttista trikloorietikkahappoa (TCA). Solut rikottiin sulattamalla lyo£ilisoitu näyte solunsisäisen syklisen AMP: n (C-AMP) vapauttamiseksi. TCA poistettiin vedellä kyllästetyllä eetterillä, minkä jälkeen C-AMP-pitoisuus määritettiin radio-immunologiatekniikan (radioimmunoassay technique) avulla.

Tulokset on esitetty Taulukossa 1. Kuten näistä tuloksista selvästi ilmenee, todettiin, että rasvaemulsion C-AMPsn tuotantokyky pysyi tyydyttävänä pitemmän ajan.

Taulukko 1. Rasvaemulsion kyky tuottaa ja ylläpitää syklistä AMP:tä

Esimerkit Yhdisteet Aika C-AMP tuotanto Suhteellinen _(min) (pikomooli) arvo (%)

Esim. 5 Rasvaemulsio (I) 0 80 100 "6 Rasvaemulsio (I) 30 100 125 " 7 Rasvaemulsio (I) 60 100 125

Vertailu 1 Yhdiste (I) 0 320 100 " 2 Yhdiste (I) 30 200 63 " 3 Yhdiste (I) 60 100 31

Esim. 8 Rasvaemulsio (ID 10 130 100 " 9 Rasvaemulsio (II) 30 190 146 " 10 Rasvaemulsio (II) 60 100 76 12 88583

Vertailu 4 Yhdiste (II) 10 430 100 " 5 Yhdiste (II) 30 320 74 " 6 Yhdiste (II) 60 120 27

Esim. 11 Rasvaemulsio (III) 30 55 100 " 12 Rasvaemulsio (III) 60 30 55 " 13 Rasvaemulsio (III) 120 30 55

Vertailu 7 Yhdiste (III) 30 100 100 " 8 Yhdiste (III) 60 90 90 " 9 Yhdiste (111)120 40 40

Esim. 14 Rasvaemulsio (IV) 30 40 100 " 15 Rasvaemulsio (IV) 30 45 111 11 16 Rasvaemulsio (IV) 120_28_70

Esimerkki 17

Verihiutaleiden kasautumista estävän vaikutuksen arviointi 50 μΐ Esimerkeissä 1 ja 2 saatuja rasvaemulsioita siirrettiin kutakin 950 puijaan suolaliuosta tai 2 prosenttista härän seerumin albumiinia (BSA) ja inkuboitiin 37 °C:ssa 1, 3 ja 10 minuuttia. Tämän jälkeen PRP:n ADP verihiutaleiden kasautumista estävä vaikutus määritettiin käyttäen suodatetta, joka oli läpäissyt 0,025 /im suodattimen. Tietty määrä ennen suodattamista laimennettua liuosta lisättiin PRP:hen ja inkuboitiin 37 °C:ssa minuutin ajan. Tämän jälkeen aiheutettiin ADP-kasautu-minen annosta vastaavan käyrän tuottamiseksi. Tästä käyrästä laskettiin verihiutaleiden kasautumista estävä vaikutus. Tulokset on esitetty Taulukossa 2.

13 88 583

Taulukko 2. Verihiutaleiden kasautumista estävä vaikutus

Olosuhteet Verihiutaleiden kasautumista _estävä vaikutus (%)_

Liuottimet Inkubointi- Rasva- Yhdiste Rasva- Yhdiste aika (min) emulsio (IV) emulsio (I) _UYJ_{1}_ 2 % BSA 1 13,7 65,4 87,5 100,1

3 23,1 NT 83,5 NT

10 27,1 56,2 90,6 107,7

Suolaliuos_10_-_-_14,1_41,1

Kuten Taulukosta 2 ilmenee keksinnön mukaisissa rasvaemul-sioissa oleva aktiivinen aineosa, prostaglandiini I2* vapautuu vähitellen ja siten annosmuodot aikaansaavat pitkäaikaisen annostuksen.

Tuleva teollinen käyttö

Keksinnön mukaisilla, prostaglandiineja I2 sisältävillä rasva-emulsioilla on tehokkaat vaikutukset, ne aikaansaavat pitkäaikaisesti vapautuvan annostuksen, ja ne ovat selektiivisiä vammoja kohti. Tästä johtuen ne voivat aikaansaada tehokkaan hoidon pieninä annoksina ja ne ovat erittäin käyttökelpoisia erilaisten sydänverisuonitautien, kuten veritukossairauksien hoidossa.

Claims (9)

1. Menetelmä prostaglandiini Ia: a sisältävän, lääkinnällisesti tehokkaan rasvaemulsion valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että emulgoidaan seos, joka käsittää 5...50 % (w/v) kasviöljyä, 1. ..50 osaa fosfolipidiä 100 osaa kasviöljyä kohti, 1,0 mg/ml ... 0,2 ug/ml vähintään yhtä seuraavan kaavan (Ia) mukaista prostaglandiini Ia: a ja loput vettä j--COOR1 ί Λ ...da) HO I missä R1 on vetyatomi tai alkyyliryhmä; Ra1 on vetyatomi; R1 2 on vetyatomi, metyyliryhmä, etyyliryhmä tai vinyyliryhmä; R·* on substituoitu tai substituoimaton 1. . . 10 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, substituoitu tai substituoimaton 2. . . 10 hiiliatomia sisältävä alkenyyliryhmä, substituoitu tai substituoimaton 2...10 hiiliatomia sisältävä aikynyyliryhmä, tai substituoitu tai substituoimaton 3...8 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyliryhmä, ja n on 0 tai 1, missä mainitut alkyyli-, alkenyyli-, alkynyyli- ja sykloalkyy-liryhmien substituentit on valittu ryhmästä, joka koostuu halogeenista, alemmasta alkoksista, halogeenialkyylistä, substi-tuoimattomasta fenoksista, halogeenisubstituoidusta fenoksista ja alemmalla alkoksilla substituoidusta fenoksista. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä prostaglandiinia I2: a sisältävän rasvaemulsion valmistamiseksi, tunnet- 2 t u siitä, että mainittu substituentti on fluori, kloori, metoksi, etoksi, propoksi, butoksi tai trifluorimetyyli. ‘s 38583

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä prostaglandiini a Ia: a sisältävän rasvaemulsion valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että R4 on substituoitu tai substituoimaton 1...10 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, tai substituoitu ja substituoimaton 3. . . 8 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyliryhmä.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä prostaglandiinia Ia: a sisältävän rasvaemulsion valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että R4 on substituoimaton 1. . . 10 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai substituoimaton 3...8 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyliryhmä.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä prostaglandiinia Ia: a sisältävän rasvaemulsion valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että Rl on alkyyliryhmä.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä prostaglandiinia Ia: a sisältävän rasvaemulsion valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että R1 on alkyyliryhmä, R21 on vetyatomi, R3 on vetyatomi, R4 on 1. . . 10 hiiliatomia sisältävä substituoimaton alkyyliryhmä tai 3. . .8 hiiliatomia sisältävä substituoimaton s ykloalkyyli ryhmä.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä prostaglandiinia Ia: a sisältävän rasvaemulsion valmistamiseksi, tunnettu siitä, että R1 on metyyliryhmä, R21 on vetyatomi, R3 on vetyatomi, R4 on pentyyliryhmä ja n on 0.

8. Menetelmä prostaglandiinia Ia: a sisältävän, lääkinnällisesti tehokkaan rasvaemulsion valmistamiseksi, tunnettu siitä, että emulgoidaan seos, joka käsittää 5...50% (w/v) kasviöljyä, 1...50 osaa fosfolipidiä 100 osaa kasviöljyä kohti, 1,0 mg/ml ... 0,2 ug/ml vähintään yhtä seuraavan kaavan (Ib) mukaista prostaglandiini Ia:a ja loput vettä 15 8 8 583 COOR1 rC A.J—R \ 7 r3 ...(lb) 4s r4 OH missä R1 on vetyatomi tai alkyyliryhmä; Raa on fluoriatomi; R3 on vetyatomi, metyyliryhmä, etyyliryhmä tai vinyyliryhmä; R4 on substituoitu tai substituoimaton 1...10 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, substituoitu tai substituoimaton 2. . . 10 hiiliatomia sisältävä aikenyyliryhmä, substituoitu tai substituoimaton 2. . . 10 hiiliatomia sisältävä alkynyyliryhmä, tai substituoitu tai substituoimaton 3...8 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyliryhmä, ja n on 0 tai 1, missä mainitut alkyyli-, alkenyyli-, alkynyyli- ja sykloalkyy-liryhmien substituentit on valittu ryhmästä, joka koostuu halogeenista, alemmasta alkoksista, halogeenialkyylistä, subs-tituoimattomasta fenoksista, halogeenisubstituoidusta fenok-sista ja alemmalla alkoksilla substituoidusta fenoksista.

9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä prostaglandiini I2:a sisältävän rasvaemulsion valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että mainittu substituentti on fluori, kloori, metoksi, etoksi, propoksi, butoksi tai trifluorimetyyli. i 17 88583