FI87568C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt verkande penemfoereningar - Google Patents

Description

2 87568

Menetelmä valmistaa terapeuttisesti vaikuttavaa peneemiyhdis-tettä - Förfarande för framställning av terapeutiskt verkan-de penemföreningar

Esillä olevan keksinnön kohteena on menetelmä valmistaa penee-miyhdisteitä, joiden yleiskaava on

OH

s njrL/cvA a) o°2r (jossa R on vety tai ai 1yy1iryhmä, A on alifaattinen 5- tai 6-jäseninen heterosyklinen ryhmä), ja niiden farmakologisesti hyväksyttäviä suoloja.

Edellä olevan yleiskaavan (1) esittämät yhdisteet ovat uusia. Niillä on erittäin huomattava vaikutus hoidettaessa gram-positiivisten ja gram-negatiivisten bakteereiden aiheuttamia infektioita, ja niitä voidaan käyttää laajalti lääkeaineina sekä ihmisille että eläimille.

Yleisesti tunnettua on, että monenlaatuisia antibiootteja on keksitty ja käytetty Fleming'in keksimän penisilliinin jälkeen ja sen jälkeen, kun Florey on käyttänyt penisilliiniä kemote-rapeuttisena aineena.

Japanissa käytetyistä antibiooteista laajimmin käytettyjä ovat β-1aktaamiyhdisteet, joiden osuus on yli 80 % kaikista käytetyistä antibiooteista.

β-1aktaamiantibioottien laajan käytön syitä ovat bakteereiden-vastaisen aktiivisuuden voimakkuus ja bakteereidenvastaisen kirjon leveys sekä näiden antibioottien suuri turvallisuus. Eräs lisäsyy on, että niitä voidaan saada fermentoimalla.

Mikro-organismien tuottamiin β-laktaami-aineisiin kuuluvat penisilliinit, kefaiosporiinit, nokardisiinit, klavulaani- 2 87568 happo, karbapeneemit jne. Monia karabapeneemi-yhdis^eitä on jo valmistettu fermentoimalla Actinomycetes-sieniä tai bakteereita. Peneeemi-yhdisteet eivät kuitenkaan ole luonnollinen β-laktaamityyppi, ja niitä ei ole vielä löydetty luonnonlähteistä.

Peneemi-runko vastaa runkoa, jossa kabapeneemi-rungon 1-asemassa sijaitseva metyleeniryhmä on korvattu rikki-atomilla, kuten on esitetty seuraavassa kaavassa; Ϊ"

Il (n 5 S . 2 ' r. 1 1 0 , ! ’ ja molemmat rungot ovatkin rakenteeltaan hyvin analogisia. Penisilliinin penaami-runko aiheuttaa suuren jännityksen renkaaseen. Kefalosporiinien kefeemi-rungon stabiilisuu-öen estää kuusi -jäsenisen renkaan kaksoissidos, joka reagoi transpeptidaasin kanssa, joka liittyy soluseinämän synteesiin ja joka inhiboi entsyymin aktiivisuuden.

Näistä syistä uskottiin myös peneemi-rungon olevan voimakkaasti aktiivisen. Itse asiassa voimakas aktiivisuus on havaittu 1 -tiatienamysiinissä /S. OHYA et ai., Antimicrob. Agents Chemoter., 2_1, 492, (1982) ja Sch 29482 (A.K.

Ganguly et ai., J. Antimicrob. Chemother., (Suppl.

C) 9, 1 (1982)/ jne.

Edellä jo mainittiin, että monia peneemi-yhdisteitä on syntetisoitu sellaisista syistä kuin rungon samankaltaisuus penisilliinin kanssa. Esimerkkejä voivat olla esimerkiksi japanilaiset patenttihakemukset 207387/1986, 88291/1979, 25110/1981, 25111/1981 jne.

Mitä tulee näiden peneemi-yhdisteiden syntetisoimiseen, tästä on o hMiiassa monia tapoitte ja, esimerkiksi A. Longo 3 87568 et ai. [Gazz. Chim. Ital., 111, 371-77, (1981)], V.M. Girija-vallabhan et ai, [Tetrahedron Letters, 22, 3485 (1981)].

Tarkoituksella kehittää uusia antibiootteja tämän keksinnön keksijät kohdistavat tavoitteensa β-1aktaami-antibiootteihin.

β-laktaami-antibiooteista ovat peneemi-yhdisteet yleisesti sanoen kemiallisesti pysyviä ja pysyvämpiä kuin karbapeneemi munuaisen dehydropeptidaasin I suhteen, vaikkakin niiden biologinen arviointi on vielä monin osin epäselvä.

Esillä olevan keksinnön keksijät ovat suorittaneet tutkimuksia löytääkseen peneemi-yhdisteitä, joilla on edellä mainittujen etujen lisäksi voimakkaita aktiivisuuksia hyvin erilaisiin gram-positiivisiin ja gram-negatiivisiin bakteereihin ja joita voidaan käyttää jopa oraalisesti. Näin keksijät ovat päätyneet esillä olevaan keksintöön.

Esillä olevan keksinnön kohteena on siis peneemiyhdiste, jolla on yleiskaava

: ' I CH.. A

. : 1— ' : : - O i

CO,R

• * /.

jossa R on vety tai ai 1yyliryhmä, ja A on alifaattinen 5- tai 6-jäseninen heterosyklinen ryhmä, jossa on renkaassa yksi tai kaksi happiatomia, sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai opitinen isomeeri.

4 S 7 5 68

Edellä olevan yleiskaavan (1) mukaiset peneemiyhdisteet voidaan syntetisoida seuraavilla menetelmillä.

Ensimmäiseksi kuvataan atsetidinoni-yhdisteiden (2) valmistusmenetelmä. Nämä ovat prekursoreita peneemiyhdisteiden valmistuksessa.

OK 1 1 H2 Λ

r T

_ < < ( 2) 0' (]· / I 2

COOK

(jossa R·*· on hydroksyyliryhmän suojaryhmä, R2 on allyyli tai karboksyyliryhmän suojaryhmä, A tarkoittaa samaa kuin edellä ja Z on happiatomi, triaryylifosfonioryhmä tai trial kyy1ifos-fonioryhmä). Yleiskaavan (2) mukaiset yhdisteet voidaan saada tunnetuista yleiskaavan (2') mukaisista yhdisteistä OP.1 : Λ, ^ * | l <2'> 7 - (jossa R^· tarkoittaa samaa kuin edellä ja X on hai ogeeniatomi, asetoksiryhmä, aryy1isulfonyy1iryhmä tai aikyylisulfonyy1iryh-mä). Yhdisteitä (2’) on kuvattu esimerkiksi japanilaisessa patenttihakemuksessa 207373/1986.

Yleiskaavan (2) mukaisissa atsetidinoni-johdoksissa on kaksi isomeeriä. Nämä isomeerit ovat l'R,3S,4R, yhdiste (2a) ja l'R,3R,4S yhdiste (2b).

5 87568 OR1

4 < . til , -\ £-L * j.’Ss /CH,-A

V Mi' "ic· Tl'Y

" M . 1 o^Nvz I , I 2

- ()UR ' COOR

(2a) (l'R,)S,4R yhdiste) (2b) (l'R,3R,4S yhdiste) (jossa R*, R^, A ja Z tarkoittavat samaa kuin edellä).

Edellisellä isomeerillä on sama steerinen konfiguraatio kuin tienamyslini 1lä. Nämä kaksi isomeeriä voidaan erottaa hyvin helposti kiteyttämällä uudelleen.

Yleiskaavan (2) mukaiset atsetidinoni-johdokset voidaan valmistaa esimerkiksi seuraavassa kuvatulla menetelmällä: 6 87568 r1? fisc- C H -A R °1

I . Λ 2 X. ,S CO - CH - A

_ x 0 (li.) ' ζ 2 (| Menetelmä 1 o^ (2-) . (3) V1111 2 (13 )ws^r f'11- Menetelmä 2 R 1 0 , R 1 0 1 SCO- CII. - A sco-ch2-a I T ----i Π

^ N - Oil Menetelmä 3 —H ^ / Y

0 f 1 2

III '·η 1 (5) co2R

^--'"'Menetelmä 4

Rl0 Η*0 Λ sun OH,-A Cl£-CHfA i SAg

Γ f <___1_Liii I I

0^- N- z Menetelmä 5 -Ν'^=Ζ in r:o H2 (6) C02R2 \ Menetelmä 6 \ \ \ lip

1 SCO-CH -A

' Ί

J- N

i) ' ·ρ=*Ζ co2r2 ( 8 ) 1 2 (jossa R , R , Z, X, R ja A tarkoittavat samaa kuin edellä, ja Y on halogeeniatomi, kuten kloori, bromi jne.).

7 87568

Seuraavassa on annettu esimerkkejä symbolin A esittämän ryhmän konkreettisesta rakenteesta: m (/'> Γ | ,3) r^l (4) ο-Λ ' ° ^ (5) ° (6)Y^ j <?> ^ n " 0

Asymmetrisistä hiilistä johtuen edellä mainitun yleiskaavan (1) mukaisissa yhdisteissä on optisia ja steerisiä isomeerejä, vaikkakin ne eivät kaikki käy ilmi tasokaa-vasta. Esillä olevan keksinnön piiri ei rajoitu tasokaa-vaan. Kuitenkin on mahdollista valita yhdiste, jossa peneemirungon 5-aseman hiiliatomilla on R-konfiguraatio ja 6-aseman hiiliatomilla on S-konfiguraatio. Mitä taas tulee 1-hydroksietyyliryhmään, joka on substituentti 6-asemassa, R-konfiguraatio on suositeltava. Ryhmän A 2-, 3- tai 4-aseman hiiliatomin suhteen on eräissä tapauksissa R-konfiguraatio suositeltava, joka konfiguraatio on sama kuin mitä esillä olevan keksinnön keksijät ovat jo raportoineet (japanilainen patenttihakemus 207373/1986). Esillä olevilla yhdisteillä on kuitenkin itse asiassa samanlaisia vaikutuksia sekä R- että S-konfiguraatioissa, joten hiiliatomin konfiguraatio ei ole erityisesti rajoitettu ja kummankin konfiguraa-tioiden seosta voidaan käyttää. Tämä on eräs esillä olevan keksinnön tunnusmerkeistä.

Menetelmässä 1 saadaan yleiskaavan (3) mukainen tiokarbok-syylihappoesteri. Yleiskaavan (2) mukainen atsetidinoni- β 87568 johdos kondensoidaan 1-2 ekvivalentin kanssa yleiskaavan (14) mukaista tiohiilrhappoa sopivan emäksen läsnäollessa. Suositeltuja emäksiä ovat alkalimetallihydroksidi, kuten natriumhydroksidi, kaliumhydroksidi jne., alkali-metallikarbonaatti, kuten natriumvetykarbonaatti, kalium-vetykarbonaatti jne. tai alkalimetallialkoholaatti, kuten natriummetylaatti, natriumetylaatti. Reaktio suoritetaan nestemäisessä mediumissa, esimerkiksi vedessä ja alkoholissa, kuten metanolissa, etanolissa jne., ketonissa, kuten asetonissa, metyylietyyliketonissa jne. tai eetterissä, kuten tetrahydrofuraanissa, dioksaa-nissa jne. tai halogenoidussa hiilivedyssä, kuten metyleeni-kloridissa, kloroformissa jne. Reaktio voidaan suorittaa pH-arvossa 8 - 12. Reaktion tapahduttua seos uutetaan veden kanssa sekoittumattoman liuottimen kanssa, minkä jälkeen orgaaninen kerros pestään vedellä. Orgaaninen kerros kuivataan kuivausaineella ja kerroksen sisältämä orgaaninen liuotin tislataan pois, jolloin saadaan yhdiste (3).

Yhdiste (3) voidaan saada tässä reaktiossa myös käyttämällä emäksenä orgaanista amiinia, kuten trietyyliamiinia, pyridiiniä, lutidiinia jne., metallihydridiä, kuten litiumhydridiä, natriumhydridiä jne. tai metallikarbo-naattia, kuten natriumbikarbonaattia, kaliumvetykarbo-naattia jne., käyttämällä liuottimena alkoholia, kuten metanolia, etanolia jne., halogenoitua hiilivetyä, ‘1 kuten metyleenikloridia, kloroformia jne., hiilivetyä, kuten bentseeniä, tolueenia jne., eetteriä, kuten eetteriä, tetrahydrofuraania jne., ketonia, kuten asetonia, metyyli-.*.· etyyliketonia jne., tai nitrometaania, dimetoksietaania, asetonitrii1iä jne. ja sekoittamalla seosta ilman veden mukanaoloa 30 - 80°C:ssa.

Tämän reaktion tuotteita voidaan käyttää seuraavassa menetelmässä puhdistamatta. Tuotteet voidaan kuitenkin i 9 87568 vielä puhdistaa pylväskromatograafisesti, ohutlevykromato-grafian avulla, uudelleenkiteyttämällä jne.

Menetelmässä 2 valmistetaan yleiskaavan (4) mukainen N-hydroksyy1iesteri-yhdiste kuumentamalla ja refluksoimalla yleiskaavan (3) mukaista yhdistettä yleiskaavan (15) mukaisen glyoksyylihappoesterin kanssa liuottimessa, esimerkiksi eetterissä, kuten tetrahydrofuraanissa, dioksaanissa jne. tai aromaattisessa hiilivedyssä, kuten bentseenissä, tolueenissa ja ksyleenissä jne. tai halogenoidussa hiilivedyssä, kuten metyleenikloridissa, kloroformissa jne. Tässä reaktiossa voidaan seokseen lisätä emästä, kuten trimetyyliamiinia, 2,6-lutidiinia.

Tämän menetelmän tuote voidaan saada tislaamalla liuotin pois reaktioseoksesta. Monissa tapauksissa tuote voidaan käyttää seuraavassa menetelmässä sitä enempää puhdistamatta. Tarvittaessa se voidaan kuitenkin puhdistaa pylväskromato-graafisesti, kiteyttämällä uudelleen jne.

Menetelmässä 1 valmistetaan yleiskaavan (5) mukainen yhdiste. Tämän menetelmän reaktio voidaan suorittaa liuottamalla yleiskaavan (4) mukainen yhdiste halogenoi-tuun hiilivetyyn, kuten metyleenikloridiin, kloroformiin jne., aromaattiseen hiilivetyyn, kuten bentseeniin, : : tolueeniin jne. tai eetteriin, kuten eetteriin, tetrahydro- • furaaniin jne. ja saattamalla kosketuskeen tionyylihalo- . .·. genidin, kuten tionyylikloridin, tionyylibromidin jne., fosforihalogenidin, kuten fosforipentakloridin jne., 1Γ ‘ fosforioksihalogenidin, kuten fosforioksikloridin jne.

. tai metaanisuJfonyylihalogenidin, kuten metaanisulfonyyli- • bromidin jne. kanssa emäksen, kuten trietyyliamiinin, pyridiinin, 2,6-lutidiinin, isopropyylietyyliamiinin jne. läsnäollessa. Tämä reaktio voidaan suorittaa lämpötilassa 40 0°c. Reaktio tapahtuu monissa tapauksissa muutamassa tunnissa.

10 87 568 Tämän menetelmän tuote voidaan saada laimentamalla reaktioseos veden kanssa sekoittumattomalla liuottimena, pesemällä liuos natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja sen jälkeen vedellä, kuivaamalla pesty liuos lisäämällä kuivausainetta ja poistamalla liuotin tislaamalla. Näin saatua tuotetta voidaan käyttää enempää puhdistamatta seuraavassa menetelmässä. Se voidaan kuitenkin puhdistaa pylväskromatografiän tapaisella menetelmällä. Monissa tapauksissa seuraavassa menetelmässä voidaan käyttää puhdistamatonta tuotetta, joka on saatu vain suodattama 11a reaktioseos liukenemattomien ainesten poistamiseksi ja väkevöimällä suodos.

Menetelmässä 4 valmistetaan yleiskaavan (7) mukainen fosforianilideeni-yhdiste. Tämän menetelmän reaktiota suoritettaessa sekoitetaan yleiskaavan (6) mukainen yhdiste orgaanisen liuottimen kanssa, seokseen lisätään triaryylitosfiinia, kuten trifenyylifosfiinia jne. tai trialkyylifosfiittia, kuten trietyylifosfiittia, minkä jälkeen seos käsitellään lämmöllä emäksen läsnäollessa. Suositeltu reaktiolämpötila on huoneen lämpötilasta 100°C:een. Tavallisesti käytetystä emäksestä ovat esimerkkejä trietyy1iamiini, di-isopropyylietyyliamiini, pyri-diini, 2,6-lutidiini jne. Suositeltu liuotin on eetteri, kuten tetiahydrofuraani, dioksaani jne., aromaattinen hiilivety, kuten bentseeni, tolueeni, ksyleeni jne. tai alifaattinen hiilivety, kuten heksaani, sykloheksaani jne.

Reaktion tapahduttua erotetaan liukenematon aines reaktio-seoksesta suodattamalla, suodos pestään peräkkäin laimealla hapolla, laimealla alkalilla ja vedellä, kuivataan kuivausainee11a ja väkevöidään, jolloin saadaan tuote (7). Tuote (/) voidaan tarvittaessa puhdistaa jollakin menetelmällä, kuten pylväskromatograafisesti, preparatii-visella ohut: 1 evykromatograf iällä , kiteyttämällä uudelleen jne.

11 87568

Menetelmässä 5 kondensoidaan yleiskaavan (6) mukainen tunnettu yhdiste (japanilainen patenttihakemus 25110/1981) yleiskaavan (16) mukaisen happokloridin kanssa (jossa A tarkoittaa samaa kuin edellä), jolloin saadaan sama tuote kuin menetelmässä 4.

Tämän menetelmän reaktio suoritetaan laimentamalla yleiskaavan (6) mukainen yhdiste liuottimena, esimerkiksi halogenoidulla hiilivedyllä, kuten metyleeniklori-dilla, kloroformilla jne., aromaattisella hiilivedyllä, kuten bentseeni1lä, tolueenilla, ksyleenillä jne. tai eetterillä, kuten eetterillä, tetrahydrofuraanilla jne. ja lisäämällä liuokseen yleiskaavan (16) mukaista happokloridia liuotettuna samaan liuottimeen, kuin mitä käytettiin edellä mainitussa laimentamisessa.

Reaktio voidaan suorittaa lämpötilassa 0°C - huoneen lämpötila. Reaktio tapahtuu muutamassa tunnissa.

Reaktion tapahduttua poistetaan reaktioseoksesta liukenematon aines suodattamalla. Suodos pestään vedellä, kuivataan kuivausaineella ja väkevöidään, jolloin saadaan tuote (7). Tämä tuote voidaan käyttää seuraavassa menetelmässä puhdistamatta. Se voidaan kuitenkin puhdistaa jollakin menetelmällä, kuten pylväskromatograafisesti, ...· kiteyttämällä uudelleen jne.

: Ennenkuin menetelmää 6 selitetään, havainnollistetaan : seuraavassa valmistusmenetelmiä, joilla päästään edellä " mainituista yhdisteistä (7) ja (8) käsillä oleviin peneemiyhd.i st o i s i Ln (1) ( 7 ) (8) 12 87568

vMenetelmä 8 ' HO

Menetelmä 7 ^ S

^ Ί“π >CHr* ' — N'r « o (10) CO^R2 I 1 /c|o-‘ / O ’ I' Menetelmä 10 ( ’ CO^R'1 / ho y A e

(!) t02R

(jossa R1, [Γ , R ia A tarkoittavat samaa kuin edellä).

Menetelmässä b saadaan yleiskaavan (8) mukainen yhdiste poistamlla yleiskaavan (7) mukaisen yhdisteen hydroksyy-liryhmän suojaryhmä. Seuraavassa menetelmässä (7) saadaan yleiskaavan (10) mukainen peneemiyhdiste syklisoimalla yleiskaavan (8) mukainen yhdiste. Nämä kaksi peräkkäistä menetelmää voidaan tehdä samalla tavoin vastakkaisessa : järjestyksessä, jolloin saadaan yleiskaavan (10) mukainen :.· peneemiyhdiste.

Peneemiyhdiste (10) voidaan nimittäin saada syklisoimalla yleiskaavan (7) mukainen yhdiste menetelmässä (8) ja sen jälkeen poistamalla suojaryhmä menetelmässä (9).

Menetelmässä 6 tai 9 poistetaan peneemiyhdisteen (7) tai (9) hydieksyyliryhmän suojaryhmä. Suojaryhmän poistamiseen käytetty menetelmä vaihtelee riippuen kunkin i ib 87568 suojaryhmän Laadusta. Esimerkiksi siinä tapauksessa, että suojaryhmä on silyyliryhmä, kuten tert-butyylidimetyy-lisilyyli jne., laimennetaan kaavan (7) tai (9) mukainen yhdiste liuottimella ja saatetaan kosketukseen tetrabu-tyyliammoniumfluot idin kanssa, jolloin reaktio tapahtuu helposti. Reaktiolämpötila voi olla lähellä huoneen lämpötilaa. Suositeltu liuotin on eetteri, kuten dioksaani, tetrahydrofuraani jne.

Reaktion tapahduttua reaktioseos laimennetaan veden kanssa sekoittumattoman liuottimen kanssa, pestään peräkkäin laimealla alkalilla ja vedellä, kuivataan kuivausaineella ja väkevöidään, jolloin saadaan yhdisteestä (7) yhdiste (8) tai yhdisteestä (9) yhdiste (10). Tuotetta voidaan käyttää seuiaavassa menetelmässä sitä puhdistamatta. Se voidaan kuitenkin puhdistaa jollakin menetelmällä, kuten pylväskiomatograafisesti, preparatiivisella ohutlevy-kromatografia 1la, kiteyttämällä uudelleen jne.

Menetelmässä 7 tai 8 syklisoidaan lämmön avulla yhdiste (8) tai (7), jolloin saadaan peneemiyhdiste, jolla on yleiskaavan (10) tai (9) mukainen rakenne.

Menetelmää toteutettaessa ei reaktiossa käytettyä liuotinta ole erityisesti rajoitettu. Hyvänä pidettyjä liuottimia : : : ovat aromaattinen hiilivety, kuten bentseeni, tolueeni, : -'· ksyleeni jne. ja eetteri, kuten dioksaani, dietoksietaani : . jne.

Reaktion tapahduttua voidaan menetelmän tuote saada tislaamalla liuotin pois reaktioseoksesta.

Näin saatu yhdiste (10) ja (9) voidaan edelleen tarvittaessa puhdistaa jollakin menetelmällä, kuten pylväskro-matograafisesti, preparatiivisella ohutlevykromatogra-fialla, kiteyttämällä uudelleen jne.

14 87 568

Menetelmässä 10 valmistetaan yleiskaavan (1) mukainen peneemiyhdiste. Menetelmässä poistetaan yleiskaavan (10) mukaisen peneemijohdoksen karboksyyliryhmän suoja-ryhmä .

Suojaryhmän poistamismenetelmä vaihtelee riippuen ryhmän laadusta. Se voidaan yleisesti sanoen poistaa jollakin tällä alalla tunnetulla menetelmällä.

Esimerkiksi siinä tapauksessa, että suojaryhmä on aralkyy-liryhmä, kuten bentsyyli tai p-nitrobensyyli, esimerkkejä menetelmistä ovat vedyn ja hydrogenolyysikatalyytin, kuten palladium/hiilen saattaminen reagoimaan keskenään tai alkalimetallisulfidin, kuten natriumsulfidin saattaminen reagoimaan peneemijohdoksen kanssa.

Siinä tapauksessa, että suojaryhmä on allyyli, menetelmästä ovat esimerkkejä triaryylifosfiinin ja tetra kis(triaryylifosfiini)palladiumin käyttäminen ja myös menetelmä, joss akäytetään tetrakis(triaryylifosfiini)-palladiumia, tri-n-butyylitina-hydridiä ja etikkahappoa.

Siinä tapauksessa, että suojaryhmä on a,a ,a-trikloori-etyyliryhmä, esimerkkinä on menetelmä, jossa sinkki saa-tetaan reagoimaan peneemi johdoksen kanssa pH-arvossa 3 “ 1 ·

Reaktio suoiitetaan liuottimen läsnäollessa. Tätä liuotinta ei ole erityisesti rajoitettu, koska se on reaktiossa ·.·. epäoleellinen.

Siinä tapauksessa, että suojaryhmänä käytetään aralkyyli-ryhmää tai .,- , u-tiikloorietyyliryhmää, suositeltuja liuottimia ovat alkoholi, kuten metanoli, etanoli jne., eetteri, kuten eetteri, tetrahydrofuraani jne., esteri, kuten metyyliasetaatti, etyyliasetaatti, alifaattinen happo, kuten etikkahappo jne. ja edellä mainitun liuot-...* timen (liuottimien) ja veden seos. Reaktiota voidaan i 15 87568 tarvittaessa nopeuttaa säätämällä reaktioseoksen pH sopivaan arvoon i - H.

Siinä tapauksessa, että suojaryhmä on allyyliryhmä, suositeltuja liuottimia ovat eetteri, kuten eetteri, tetrahydro-furaani jne. tai esteri, kuten metyyliasetaatti, etyyliasetaatti jne., ja reaktio suoritetaan tavallisesti ilman veden mukanaoloa.

Siinä tapauksessa, että suojaryhmä on aralkyyli- tai allyyliryhmä, reaktioseos säädetään heikosti alkaliseksi reaktion tapahduttua, saatu orgaaninen kerros poistetaan ja vesikerros väkevöidään, jolloin tuotteet (1) saadaan suoloina. Myös siinä tapauksessa, että suojaryhmä on allyyliryhmä, tuotteet (1) saadaan suoloina kiteinä, jotka voidaan seostaa lisäämällä alifaattisen hapon alkali-metallisuolaa, kuten natrium 2-etyyliheksanoaattia, kalium 2-etyyliheksanoaattia jne. suoraan reaktioseokseen.

Kun suojaryhmä on <i,« , a-trikloorietyyliryhmä, reaktio suoritetaan happamissa olosuhteissa. Reaktion tapahduttua seoksen orgaaninen kerros erotetaan, pestään vedellä, kuivataan kuivausaineella ja väkevöidään, jolloin tuotteet (1) voidaan saada vapaina happoina.

16 87 568

Tuotteet (1) voidaan tarvittaessa puhdistaa edelleen jollakin menetelmällä, kuten pylväskromatograafisesti, preparatiivisella ohutlevykromatografiällä, kiteyttämällä uudelleen jne.

Edellisen synteesitien kautta saatu välituote (9) voidaan myös valmistaa käyttämällä muita tunnettuja synteesimenetelmiä (esim. A. Afonso et ai., J. Am. Chem. Soc., 104, p. 6138 (1982); A. Yoshida et ai., Chem. Pharm. Bull., 31, p. 768 ( 1983 ) /.

I I / I .

UM, V

scorn,·» z o, . J I -------'<»>

Menetelmä 11 1--» 0 Menetelmä 14

ClO-R2 Λ 1 I ) AgN03

Mentelmä 13 \ 2) C1C-CH2-A

R1U ('OCl (1 1 S ΙΊ donR2 , I 2 R10

I > I

(| ^ U Menetelmä 12 ^ STr (IM —. u w 0^ N^f=0 - (13) C02R2 (jossa R1, R2, Z ja A tarkoittavat samaa kuin edellä;

Tr on trifenyyl imetyyliryhmä) .

Jäljempänä on selitetty edellä kuvattuja menetelmiä järjes-tyskessä.

Menetelmässä 11 saadaan yleiskaavan (11) mukainen yhdiste .· kondensoima J 1 a edellä kuvattu yleiskaavan (3) mukainen · · m 17 87568 yhdiste yleiskaavan (17) mukaisen oksalyylikloridi-mono-esterin kanssa. Tämä menetelmä voidaan suorittaa laimentamalla yhdiste (1) liuottimena ja lisäämällä siihen tipot-tain sopivan emäksen läsnäollessa yhdiste (17) liuottimena laimennettuna.

Suositeltu reaktio lämpötila on -40 - 20°C. Emäksenä voidaan käyttää alkalimetallihydridiä, kuten natriumhydridiä, litiumhydridiä jne., alkalimetallialkoholaattia, kuten natriummetylaattia, natriumetylaattia jne., alifaattista amiinia, kuten trietyyliamiinia, di-isopropyylietyyli-amiinia jne. Hyvinä pidettyjä emäksiä ovat aromaattiset amiinit, kuten pyridiini, 2,6-lutidiini jne.

Liuotinta ei ole erityisesti rajoitettu niin kauan kuin se on epäoleellinen reaktion kannalta. Hyvänä pidettyjä liuottimia ovat eetteri, kuten tetrahydrofuraani, diok-saani jne., halogenoitu hiilivety, kuten metyleenikloridi, kloroformi jne. ja aromaattinen hiilivety, kuten bentseeni, tolueeni, ksyleeni jne.

Reaktion tapahduttua erotetaan liukenematon aines reaktio-seoksesta suodattamalla ja liuotin tislataan pois suodok-sesta, jolloin tuoteyhdisteet voidaan saada. Tarvittaessa suodos, joka on saatu poistamalla liukenematon aines :.· i suodattamalla, pestään peräkkäin laimealla alkalilla ja vedellä, kuivataan kuivausaineella ja väkevöidään, : jolloin myös voidaan saada tuotteet (11).

. Näin saatua yhdistettä (11) voidaan käyttää puhdistamatta seuraavassa menetelmässä. Se voidaan kuitenkin puhdistaa pylväskromatograafisesti käyttämällä silikageeliä, jonka aktiivisuutta on pienennetty.

Tässä menetelmässä saadut yhdisteet voidaan myös saada menetelmien 12 ja 13 jatkuvalla menetelmällä, jota on 18 87 568 kuvattu seuraavassa:

Menetelmässä 12 saadaan yleiskaavan (13) mukainen yhdiste kondensoimalla yleiskaavan (12) mukainen tunnettu yhdiste (vrt. japanilainen patenttihakemus 25110/1981) yleiskaavan (17) mukaisen oksalyylikloridi-monoesterin kanssa. Tämä menetelmä voidaan suorittaa samalla tavoin kuin menetelmä 11.

Menetelmässä 13 muunnetaan yhdiste (13) yleiskaavan (11) mukaiseksi yhdisteeksi. Menetelmässä 12 saatu yhdiste (13) muunnetaan väliaikaisesti hopeamerkaptidi-yhdisteeksi, joka välittömästi kondensoidaan yleiskaavan (16) mukaisen happokloridin kanssa.

Tätä menetelmää suoritettaessa yhdiste (13) laimennetaan orgaanisella liuottimena, siihen lisätään sopivan emäksen läsnäoiessa hopeanitraattia, joka on liuotettu samaan liuottimeen kuin edellä, ja seosta sekoitetaan ja tähän lisätään sopivalla liuottimella laimennettu happokloridi (16) ja sekoitetaan mieluummin 110°C:ssa - huoneen lämpötilassa, jolloin saadaan tuote (11).

Reaktiossa käytetty liuotin tarvitaan liuottamaan hopea-; nitraatti eikä se ole oleellinen reaktiolle. Hyvänä pidetty liuotin on eetteri, kuten tetrahydrofuraani, dimetoksi-etaani jne., nitrometaani tai asetonitriili.

Emäksenä voi olla alifaattinen amiini, kuten trietyyli-amiini, di-isopropyyliamiini jne., aromaattinen amiini, kuten pyridiini, 2,6-lutidiini jne. ja diamiini, kuten 1,5diatsabisyklo/4,30/-5-eeni, 1,8-diatsabisyklo/5,4,0/-undese-7-eeni jne.

Happokloridin laimentamiseksi voidaan käyttää reaktiolle epäoleellista liuotinta. Suositeltuja liuottimia ovat is 37568 edellä olevassa reaktiossa käytetyt liuottimet, so. eetterit, joista edellä on annettu esimerkkejä, nitrometaani, aseto-nitriili jne. Hyvinä pidettyjä ovat myös halogenoitu hiilivety, kuten metyleenikloridi, kloroformi jne. ja aromaattinen hiilivety, kuten bentseeni, tolueeni jne.

Tämän menetelmän tuote on sama kuin menetelmän 11 tuote. Reaktion tapahduttua se voidaan saada samalla tavoin kuin menetelmässä 11.

Tällä menetelmällä valmistettu yhdiste (11), joka on sama kuin menetelmässä (11) saatu yhdiste (11), voidaan käyttää monissa tapauksissa seuraavassa menetelmässä puhdistamatta. Se voidaan kuitenkin puhdistaa jollakin menetelmällä, kuten pylväskromatograafisesti jne.

Näin saatu yhdiste (11) derivatisoidaan seuraavassa menetelmässä 14 yleiskaavan (9) mukaiseksi, aikaisemmin mainituksi peneemi- yhdisteeksi.

Yhdiste (11) sekoitetaan triaryylifosfiinin, kuten tri-fenyylifosfiinin jne. tai trialkyylifosfiitin, kuten trietyylifosfIitin, t.rimetyylifosf iitin jne. kanssa ja sen jälkeen seos laimennetaan liuottimena ja seosta sekoitetaan huoneen - 140°C:ssa, jolloin saadaan tuote ... (19). Suositeltuja liuottimia ovat halogenoitu hiilivety, kuten metyleenikloridi, kloroformi jne., eetteri, kuten ·'/ tetrahydrof uraani , dioksaani jne., aromaattinen hiilivety, kuten bentseeni, tolueeni, ksyleeni jne. ja alifaattinen : hiilivety, kuten heksaani, sykloheksaani jne. Tapauksesta riippuen voidaan reaktioseokseen lisätä antioksidanttia, : : · kuten hydrokinonia.

Tässä reaktiossa saatu tuote (9) on sama kuin menetelmässä 8 saatu tuote. Se voidaan puhdistaa samalla tavoin kuin menetelmässä 8.

Esillä olevan keksinnön ala on tällä hetkellä voimakkaan tutkimuksen kohteena ja peneemiyhdisteiden valmistusmene telmistä on julkaistu monia raportteja.

2° 87568

Sen vuoksi on syytä olettaa, että käsillä oleva yhdiste voidaan valmistaa käyttämällä jotakin näistä menetelmistä. Käsillä olevien yhdisteiden valmistaminen ei rajoitu tässä yhteydessä selitettyihin menetelmiin.

Käsillä olevien yhdisteiden edellä mainitussa valmistusmenetelmässä ei viitata stereokemiaan. Kuitenkin on luonnollista, että menetelmää voidaan soveltaa samalla tavoin synteesiin käyttämällä vastaavaa optisesti aktiivista yhdistettä.

Käsillä olevilla yhdisteillä on erityisesti seuraavat tunnusmerkit:

Siinä tapauksessa, että jokin yleiskaavan (2) mukaisista laktaamiyhdisteistä, yleiskaavan (14) mukaisista tiohiili-happo-yhdisteistä ja yleiskaavan (16) mukaisista happo-kloridiyhdisteistä on optisesti aktiivinen yhdiste, voidaan saada optisesti aktiivinen yhdiste, vaikka toinen reagoiva yhdiste on dl-yhdiste. Tämä johtuu siitä, että optinen erottaminen suoritetaan menetelmän 1, 8, 9 tai 14 tuotteen puhdistamisen yhteydessä.

Suositeltavia keinoja optiseen erottamiseen ovat uudelleen-kiteyttäminen, pylväskromatografia tai preparatiivinen ·· ohutlevykromatograf ia.

Käsillä oleva yleiskaavan (1) mukainen yhdiste, jossa R on vety, voidaan muuntaa tarvittaessa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi. Suoloista esimerkkejä ovat metallisuo1 a, kuten litium-, natrium-, kalium-, kalsium-tai magnesiuinsuola, aminohapposuola, kuten lysiinisuola 2i 87568 jne. tai ammoniumsuola. Suositeltuja ovat natrium- tai kaliumsuola.

Vaikkakin käsillä olevilla yleiskaavan (1) mukaisilla peneemiyhdisteillä on voimakas antibakteriaalinen aktiivisuus rasemaatteina, esimerkki kaikkein parhaimpana pidetystä isomeerimuodosta on yhdiste, ]olla on (5R,6S)-konfiguraatio ja jolla on R-konfiguraatio 6-asemassa sijaitsevan 1-hydroksietyyli-substituentin suhteen.

Käsillä olevat yhdisteet ovat uusia, ja niillä on voimakas antibakteriaa J itien aktiivisuus. Tämä käy selvästi ilmi, kun verrataan antibakteriaalista aktiviisuutta in vitro muihin yhdisteisiin, jotka esillä olevan keksinnön keksijät ovat erikseen syntetisoineet.

Käsillä olevilla yhdisteillä on antibakteriaalinen aktiivisuus, joka voidaan määrittää in vitro standardisoidulla laimen-nusmenetelmä1lä.

Tällaista standardisoitua mikrobiologista menetelmää käytettäessä havaittiin, että annoksilla 0,025 - 12,5 ug/ml olivat käsillä olevat yhdisteet testissä aktiivisia seuraavia vastaan: gram-positiiviset bakteerit, kuten Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, jne.; gram-negatiiviset bakteerit, kuten Eschrichia coli, Klebsiell pneumonia, Serratia marcescens, Proteus morganii,

Enterobactor colacea, Alkaligenes faecalis jne.; Proteus vulgaris; anaerobiset bakteerit, kuten Bacterioides fraqilis ' ja Fusobacteiium varium.

Käsillä olevat, yleiskaavan (1) mukaiset yhdisteet ovat huomattavan pysyviä munuaisen dehydropeptidaasia vastaan, niillä on alhaiset toksisuusarvot (LD5Q) in vivo vastaten yleisesti peneemiyhdisteitä ja niitä voidaan määrätä *'· oraaliseen, parenteraaliseen ja ulkoiseen antamistapaan.

22 87568

Vaikkakin käsillä olevien yhdisteiden annos riippuu monista tekijöistä, aikuiselle on tyypillinen päiväannos 50 mg --5 g. Tämä annetaan mieluummin jaettuna päiväannoksena 100 mg - 4 g. Se voidaan yleensä antaa annosyksikkönä, joka sisältää sopivan määrän aktiivista ainesosaa ja biologisesti hyväksyttävää kantajaa tai laimenninta.

Oraaliseen antamiseen voidaan käyttää tabletteja tai kapseleita, jotka sisältävät aktiivista ainesosaa sekä laimenninta, esimerkiksi laktoosia, glukoosia, sakkaroosia, mannitolia, sorbitolia tai selluloosaa, ja voiteluainetta, kuten talkkia, steariinihappoa tai sen suolaa. Tabletit voivat lisäksi sisältää sideainetta, esimerkiksi magnesium-silikaattia, tärkkelystä jne.

Parenteraaliseen antamiseen on sopivaa käyttää isotonista vesiliuosta tai emulsiota.

Käsillä olevia yhdisteitä voidaan käyttää ihmisten lisäksi myös eläimillä.

Käsillä olevien yhdisteiden synteesissä käytetty suoja-ryhmä voi olla mikä tahansa suojaryhmä, jota tavallisesti käytetään β-laktaami-yhdisteillä.

Sopiva esimerkki hydroksyyliryhmän suojaryhmästä voi olla t-butyylidimetyylisilyyliryhmä, t-butoksikarbonyyli-ryhmä, p-nitrobentsyy1ioksikarbonyyliryhmä, 2,2,2-trikloori-etoksikarbonyyliryhmä jne.

Sopiva esimerkki karboksyyliryhmän suojaryhmästä voi olla allyyliryhmä, 2,2,2-trikloorietyyliryhmä, t-butyyli-ryhmä, p-nitrobentsyyliryhmä jne. Mieluummin käytetään allyyliryhmää.

·.*. Aktiivinen ainesosa voi seuraavissa formulointiesimer- 23 8 7 568 keissä olla esimerkiksi natrium (5R,6S)-6-(1(R)-hydroksi-etyyli )-2-(3-tet rahydrofuranyyli)metyylipeneemi-3-karbonaatti tai ekvi va.Lenttimäärä mitä muuta tahansa käsillä olevaa yhdistettä.

Formulointiesimerkki 1 (Kapselit) N:o Ainesosat mg/kapseli mg/kapseli 1 Aktiivinen ainesosa 250 100 2 Maissitärkkelys 20 10 3 Magnesiumstearaatti 5 2

Kokonaismäärä 275 112

Menetelmä:

Ainesosat 1 ja 2 sekoitettiin sopivassa sekoituslaitteessa, tähän lisättiin ainesosa 3 ja seosta sekoitettiin edelleen. Sekoitetut ainesosat käytettiin kapseleihin käyttämällä kapseleiden täyttökonetta.

Formulointiesimerkki 2 (Tabletit) N:o Ainesosat mg/tabletti 1 Aktiivinen ainesosa 250 2 Laktoosi 55 3 Maissitärkkelys 40 : ‘ : 4 Magnesiumstearaatti_5

Kokonaismäärä 350

Menetelmä:

Ainesosat 1 - ) sekoitettiin sopivassa sekoituslaitteessa ja tähän lisättiin ainesosa 4 ja sekoitettiin edelleen useita minuutteja. Seos puristettiin sopivassa tabletoin-tikoneessa määrätyn kokoiseksi ja painoiseksi.

24 87568

Formulointiesimerkki 3 ( Ampullit)

Ainesosa Määrä (g) ampullissa

Aktiivienn ainesosa 1,0 g 0,5 g 0,25 g

Menetelmä:

Aktiviisen ainesosan steriloitu vesiliuos täytettiin 20 ml, 10 ml tai 5 ml ampulleihin niin, että kukin ampulli saatiin sisältämään aktiivista ainesosaa 1,0 g, 0,5 g tai 0,25 q, ia ampullit suljettiin.

Vertai lues inter kk i 1 (3S ,4R)- 1-(1-allyylioksikarbonyyli-2-trifenyylifosforany-lideenimetyy1i)- 3 -/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli-2-okso-4-/(2-tetrahydrofuranyyli)metyylikarbonyyli-tio/atsetidiini (2) ')K|r 1 SACJ Γ---η I i,v-Cc°Cl -> " f J ("°2 C- I'Mj. | |

: . . 1 scociii-, 1 J

I I

• : J N. , nPh i tr' 'f' J : . . C()2 Nsi2 c λ (3S,4R)-1-(1-allyylioksikarbonyyli-2-trifenyylifosforany-lideenimetyyli)- 1 -1(R)-1-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-okso-4-hopeatioatsetidiinia (1) (0,97 g) liuo-. . lettiin moiy huuti k loiidiin (7 ml) ja liuokseen lisättiin 25 87568 0°C:ssa sekoittaen tetrahydrofuraani-2-asetyylikloridin (0,223 g) ja metyleenikloridin (1 ml) seos. Sekoitettiin 90 minuuttia samassa lämpötilassa, minkä jälkeen liukenematon aines erotettiin suodattamalla ja suodos pestiin peräkkäin natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja vedellä ja sen jälkeen kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla ja saatu jäännös puhdistettiin pylväskromatograafisesti, jolloin saatiin 0,596 g kohdeyhdistettä (2) värittömänä amorfisena aineena.

Vertailuesimerkki 2 (3S,4R)-1-(1-ailyylioksikarbonyyli-2-trifenyylifosforany-lideenimetyyI i ) - 3 - / ( R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-okso-4-|/2(R)-tetrahydrofuranyyli/-metyyli-karbonyylitiotatsetidiini (3).

Hopea-merkaptidiyhdistettä (1) (1,88 g) ja (R)-tetrahydro-furaani-2-asetyylikloridia (0,46 g) käsiteltiin vertailu-esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 0,83 g kohdeyhdistettä (3) kellertävänä öljymäisenä aineena.

Vertailuesimerkki 3 (3S,4R)-.l-(l-aL]yyl ioksikarbonyyli-2-trif enyylif osf oranyli-deenimetyy1i)- 2-/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-okso-4-‘( 3-tgetrahydrofuranyyli)metyylikarbonyyli- :· tio/atsetidiini (4).

:V: Hopea-merkaptidiyhdistettä (1) (1,88 g) ja tetrahydrofuraa- ni-3-asetyylikloridia (0,46 g) käsiteltiin vertailuesimer-kissä 1 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 0,738 g kohde-yhdistettä (4) värittömänä amorfisena aineena.

26 87 568

Vertailuesimerkki 4 (3S,4R) -1-{l a 1lyy1ioksikarbonyyli-2-trifenyylifosforanyli-deenimetyyli) -3-/(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli/-2-okso-4-/(2-tetrahydropyranyyliImetyylikarbonyylitio/-atsetidiini (5).

Hopea-merkaptidiyhdistettä (1) (1,453 g) ja tetrahydropyra-nyyliasetyylikloridia (0,325 g) käsiteltiin vertailuesi-merkissä 1 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 0,354 g kohdeyhdistettä (5) keltaisena öljymäisenä aineena.

Vertai luesimet kkι 5 (3 S,4 R)- 1 -( 1 ai 1yy1i oksi karbonyyli-2-trifenyylifosforanyli-deenimetyy1i ) 3-/(K)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi- etyyli/-4-/(1,3-dioksolan-2-yyli)metyylikarbonyylitio/-2-oksoatsetidiini (6).

Hopea-merkapt idiyhdistettä ( .1) (1,71 g) ja (1,3-dioksolan-2-yyli)asetyylikloridia (0,80 g) käsiteltiin vertailuesi-merkissä 1 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 0,32 g kohdeyhdistettä (6) kellertävänä öljymäisenä aineena.

. . Vertailuesimerkki 6 [ (3S,4R)-1 -(1 - aLlyyiioksikarbonyyli-2-trifenyylifsforanyli- deenimetyyli)-3-/l(r)-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli/- 4-/(1,4-dioksan-2-yyii)metyylikarbonyylitio/-2-oksoatseti-diini (7)

Hopea-merkaptidiyhdistettä (1) (1,453 g) ja (1,4-dioksan-2-yyli)asetyylikloridia (0,329 g) käsiteltiin vertailu-esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 0,432 g kohdeyhdistettä (7) keltaisena öljymäisenä aineena.

27 87568

Vertailuesimerkki 7

Allyyli (5R,6s ) - 6-/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyyli-oksietyy11/-2-(2-tetrahydrofuranyyli)metyylipeneemi- 3-karboksylaatti (8)

^S1T SCOC112-CP ^Si5-rrS\ cli_Q

yi 002^^ 8 2 (3S,4R)- 1- ( I-allyyLioksikarbonyyli-2-trifenyylifosforanyli-deenimet yy1i) - 3-/(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyl.i/-2-oksi)-4-/(2-tet t ahydrofuranyyli )metyylikarbonyyli-tio/atsetidiinin (2) (5350 mg, 0,75 millimoolia) ja tolueenin (55 ml) seosta sekoitettiin 7 tuntia 120°C:ssa. Seos väkevöitiin jäähdyttämisen jälkeen alipaineessa ja jäännös puhdistettiin silikageelillä pylväskromatograafisesti, jolloin saatiin 306 mg (90 %) kohdeyhdistettä värittömänä kiinteänä aineena.

.'Vertai lues imer kki 8 • : : Allyyli (5R,6s)-6-/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi- etyyli/-2-/2(R)-tetrahydrofuranyyli/metyylipeneemi-3-karboksylaatti (9) (3S,4R)-1-( 1-allyylioksikarbonyYli-2-trifenyylifosforanyli-deenimetyyli)-3-/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-okso-4-( /2(R)-tetrahydrofuranyyli/metyylikar-. . bonyylitie)at set idiinia (3) (806 mg, 1,1 millimoolia) ja tolueenia (81 ml) käsiteltiin vertailuesimerkissä 7 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 346 mg (69 %) kohde- 28 87568 yhdistettä (9) värittömänä kiinteänä aineena.

Vertailuesnneikki 9

Ailyyli (5R,bS)-b-/(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/- 2 - ( 3-tetiahydrofuranyyli)metyylipeneemi-3-karboksy-laatti (10) (3S,4R)-1-(1-ailyylioksikarbonyyli-2-trifenyylifosforanyli-deenimetyyli)-3-/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli/-2-okso-4-/(3-tetrahydrofuranyyli)metyylikarbonyylitio/atse-tidiinia (4) (704 mg, 0,96 millimoolia) ja tolueenia (70 ml) käsiteltiin vertailuesimerkissä 7 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 302 mg kohdeyhdistettä (10) värittömänä kiinteänä aineena.

Vertailuesimerkki 10

Allyyli (5R,6S)- 6 -/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/- 2 -(2 -1et rahydropyranyyli)metyylipeneemi-3-karboksy-laatti (11) (3 S,4R)-1-(1-allyylioksikarbonyyli-2-trifenyylifosforanyli-deenimetyyli)- 3-/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-okso-4-/(2-tetrahydropyranyyli)metyylikarobnyyli-tio/atsetidiinia (S) (354 mg, 0,47 millimoolia) ja toluee-. nia (30 ml) käsiteltiin vertailuesimerkissä 7 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 124 mg (56 %) kohdeyhdistettä (11) keltaisena öljymäisenä aineena.

Vertailuesimerkki 11

Allyyli (5R,6S)-6-/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli / - 1 - ( 1 , 3 -d i oksi > I an-/-γγ 1 i Imrstyylipeneemi-i-karboksy-laatti (12) 1 i · » * 29 B7568 (3 S,4R)-1-(l-allyylioksikarbonyyli-2-trifenyylifosforanyli-deenimetyy1i)-3-/l(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli)metyy1ikarbonyylitio/-2-oksoatsetidiinia (6) (309 mg, 0, 42 millimoolia) ja tolueenia (30 ml) käsiteltiin vertailuesimerkissä 7 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 150 mg (79 *) kohdeyhdistettä (12) värittömänä kiinteänä aineena.

Vertailuesimerkki 12

Allyyli (5R,6S)-6-/(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-(1,4-dioksan-2-yyli)metyylipeneemi-3-karboksy-laatti (13) (3S,4R)-1-(1-allyylioksikarbonyyli-2-trifenyylifosforanyli-deenimetyyli)-3-/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-4-/(1,4-dioksan-2-yyli)metyylikarbonyylitio/-2-oksoatsetidiinia (7) (432 mg, 0,577 moolia) ja tolueenia (30 ml) käsiteltiin vertailuesimerkissä 7 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 87 mg (32 %) kohdeyhdistettä (13) keltaisena öljymäisenä aineena.

Vertailuesimerkki 13 -·; Allyyli (5R,6S)-6-/(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi- : .·. etyyli/-2-(2-tetiahydrofuranyyli)metyylipeneemi-3-karbok- sylaatti (8) i\’ ST' Π 8 « · · 14 ” 30 8 7 568 (1) (3S,4R)-3--/l(R) -tert-butyylidimetYylisilYYlioksietyyli/- 2-okso-4-trifenyylimetyylitioatsetidiinia (14) (2,02 g, 4 millimoolia) liuotettiin metyleenikloridiin (16 ml) ja liuokseen lisättiin 0°C.ssa sekoittaen di-isopropyyli-etyyliamiinia (2,26 g, 18 millimoolia). Tämän jälkeen lisättiin allyylioksalyylikloridin (2,61 g, 18 millimoolia) ja metyleenikloridin (16 ml) seos samassa lämpötilassa. Reaktioseosta sekoitettiin 25 minuuttia, minkä jälkeen se pestiin peräkkäin kaliumvetysulfaatin 5-prosenttisella vesiliuoksella, uatriumvetykarbonaatin kyllästetyllä liuoksella ja vedellä ja kuivattiin vedettömällä natrium-sulfaatilla. Liuotin poistettiin alipaineessa, jolloin saatiin (3S,4R)-l-allyylioksioksalyyli-3-/l(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli/-2-okso-4-trifenyylimetyylitioatsetidiinia ruskeana öljymäisenä aineena.

Yhdiste käytettiin seuraavassa reaktiossa sitä puhdistamatta .

(2) Edellä kuvattu puhdistamaton yhdiste liuotettiin asetonitrii1iin (8 ml) ja liuokseen lisättiin 0°C:ssa sekoittaen pyridiinin (0,32 g) ja asetonitriilin (4 ml) seos, minkä jälkeen lisättiin samassa lämpötilassa hopea-nitraatin (1,08 g) liuos asetonitriilissä (8 ml). Seosta sekoitettiin 2 tuntia 0°C:ssa ja sekoitettiin samassa lämpötilassa tetrahydrofuranyyliasetyylikloridin (0,95 g, : 6,2 millimoolia) kanssa, minkä jälkeen sekoitettiin vielä . 25 minuuttia. Liukenematon aines erotettiin suodattamalla ja suodos laimennettiin etyyliasetaatilla (15 ml). Tämän * jälkeen pestiin peräkkäin natriumvetykarbonaatin kylläs- . " tetyllä vesiliuoksella ja kaliumvetysulfaatin 5-prosent tisella vesiliuoksella. Liuos kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa, jolloin saatiin (3S,4R)-1-allyyliokso-oksalyyli- 3- -l(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli/-2-okso-4-/ (2- let t ahydrofuranyyli )metyylikarbonyylitio/atse-tidiinia iuskcana öljymäisenä aineena. Yhdiste käytettiin » · * · · 31 „ „ ,.

87568 seuraavassa reaktiossa sitä puhdistamatta.

(3) Seosta, joka muodostui edellä kuvatusta puhdistamatto-masta tuotteesta, ksyleenistä (17,6 ml) ja trietyylifos-fiitista (3,6 ml), sekoitettiin 3 tuntia 130 - 140°C:ssa ja jäähdyttämisen jälkeen seos väkevöitiin. Jäännös puhdistettiin silikageelillä pylväskromatograafisesti, jolloin saatiin 0,959 g kohdeyhdistettä (8) kellertävänä öljymäisenä aineena. Yhdisteen spektriarvojen havaittiin täydellisesti sopivan yhteen vertailuesimerkissä 7 saadun yhdisteen spektrien kanssa.

Vertailuesimerkki 14

Allyyli (5R,6S)-6-/l(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-Ί -: 2 (S)-tetrahydrofuranyyli/metyylipeneemi-3-karboksylaatti (15) (3S,4R)- 3 -/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli/-2-okso-4-trifenyylimetyylitioatsetidinonia (14) (4,04 g, 8 millimoolia), di-isopropyylietyyliamiinia (4,52 g, 35 millimoolia), allyylioksalyylikloridia (5,22 g, 35 millimoolia), pyridiiniä (0,64 g), hopeanitraattia (2,04 g), (S)-tetrahydrofuxaani-2-asetyylikloridia (1,83 g, 12,3 millimoolia), ksyleeniä (35,2 mg) ja trietyylifosfiittia (7,2 ml) käsiteltiin vertailuesimerkissä 13 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 2,46 g kohdeyhdistettä (15) • kellertävänä öljymäisenä aineena.

32 8 7 5 6 8

•H

UI

O O

N I , T r-| B m tel r~ r— eri u m m -

π II /'s 00 ,H

r-i -| ' ' *-3 Π - ' -v Tf-

O o ' 14 N - Θ un H N

• I T 04 33 Tj I - 04 1-03 on . — o τ) 1 15 U31 m a a n , r— · . H H u — m

k"'- r- in i m s) oi ^ HB m.N

«H ( ' H, K II in --Hm 00 ra I ^ i a

'Ioni a -r O oi H ^ ·. rN U H H

— |_j lo o - \ on - - (N II

H I H n · I 1) in 'OI V N dl - r~ l-J

10 - in <3· ' - —s' .— v- O N H B -H <N ~ . >H a) H 04 Ό ι a ω n en <n — ui a i h m u> ό

υ U 00 - in \ tö O - I - (ö O

i T il r-4 ^ h i i —' u· n . i —- a Π - l-J 1411-3--- _U (N m h ai a G h ai n * | \ rt) -sr. i ai p >- h a u * ^ U a Tl O \ - Ό g fnUA § ^ Il ' nam - a d i / p - - £ ali ö S ai -I m N H - I L ( H m $ u 1 / % - - a u~- a * W *'· ' W ^ - Μη O'-ι - -r n ie N 04 Bl Q - m n u 1 > I—λ Ό II n un v a x u a T, - w i o - ^ a ·- - m ι— H l - ai 04 | m -m Wy a ίο m n n - a u ml »n n a - u h a n a 4-j rj n 44 H -"N U‘ Oj - N I '— - oj .

- - h a — - il n * a a ' ·» a -'a

— Ό Ό in -T a W a — -ö nm 6 in h —Ό H

7- TJ n H m - U o O - — v - » —' O - o — a- - .a-·. MBHNam-3· ir a * h

Cj n a r| m rl 0 (N CJn Ha H ui Un·- a h — n a - il ~ - -i ~ · - ru μ «r ^ ( \ a , ui m ι-j |1 -T (4 il -r -- m in n 01 fN H I () H I 44 14 J;! n H II aj «n p ---1/1-1 · - ’U S · . - - a p - —

m r-4 o [ - o -ro- „ H I t) -f (J ^ in Ή B I

<K <n rt U I -r a S Ό T 04 0) — - - ai Ό ·-! - 04 — - cr> - 1 04 ai — -BO! cd —.m Π - n n χ o —- r- B 1 a I U o ~ H n o«n Ta H o «n - H y It en m — - ,. r- - N oo I - r-- - -H — o Q a m - in n

o H B — N - — H m H a molU H B H

r σ o4 a * 31 · m — σι - m *- - - a - - Γ - — a a ' 1 -r n V. 04 - — ~ . -r B N — « oi ~- 3 ~ oo lHi h m r4 m a — oo n - B 04 ^ <n O 00 I 6 - ' I - U 0 00 r~\ - a r- a O OO 1 \ e I -04/ h V. * - a - , « -1,0 - — oi h y II -Ip .5 u o a-^ 3 ·ί I - ai u o ml/ -- 04 — * n. u ® \r S i -s ΐ - i " v 1 ^f>Ä - 3 s1 f - sn % I w a ^ * «/ V <o B P « B ^ fo ^ « B 2 « ^ a i3 a a $lpm m § a i b awl· w - 1 i - - a ^ a 0 ni S w - “ - υ- a - a a σ oo 04 N n - - U u ή or- oo n · e · n m. » · · σι oh a I a a o o r-o ma a aaoa 0 a a r-- ^ . r-4 CJ -I n - I < f— v «-a 04 i H 4 r- >-»-404 r-l 004 T g in id >-4o Ή '—I — ir — m ,-j o ' ' v-> «Ο *0 *Ol ,-1 . _ 1—4 —- *-4 —- I f-, in in • 2 ! a 5 δ H % tj| äj s 0 °

fl'l IU

.

. . _jjH______ ____________ e wc ' ® ^ a)·'

•P

+J

u > ” 87568

OJ - N «N

O rf , rf W wl

- < 00 ^ TJ TV

· Η in c *“ w flu

rj m * m 01-0 1-}¾ I

m -rw r-l-Ot.-U ' m N

ο- <* 1¾ ~ ' -P ‘ oa«N

| — ~ tr» W co - N -3- ~ ~ ~ il N φ t — o I o r-| .h W W ·* M -<r u> U Ml oo H —. (N in «- — κ r-l f" oi cm ιβ MU' / n '· ' mr-rf— ,-ι— — v .

v 5 m - \ Mrin ό ό o ^ o* ~ r- oi I

rtm — Mj - ‘ ·. » rH N m — cofl » 0 π I - a — n — v W U -< -- U n W « — c/j - — rs H n cm in r-( n LO ·& * σ> H N W Q Ö B \ W - wl wl II Wl Ο τΐ s — W| T - W H 6 — U'U'^sU W . - m 3 3 Ö 3 V « i%i? t E; -V ' 5 ^ ^ η ε wl n Wl ^ ~V Wl V Ö ‘ w gl * ij * md) G o U ^ rn U · - I W »Ή U^ l , ... O Wl-.arH-H'-' ' ^ £ I II (ö N ^ - UN - wl --1 N ^ <t) *2, W a- - W W U cn o w ' - £ co . I id I . W N m α· O on *- id— in^ W -0 m · 1 W I W H - - ^ id - ·* w -0 in N iD.iDgm vdW-^

tt .w I n — II N O 1 II O

W ι-j Oi r- 2 O W *> W - *"> I

. 3 El . .. co E . in n· rM — . WI Wl I

_ — r-4 - · d n - <1> — -Oil w^rM VD Ό U U m

010-- Ο * μ· ΙΛ O - U I cd · WI co — ^ D

Η η « n w n bw‘I«-ö**ow «»o W »s in u m - , U n tJ - Ϊ m u n S U n n in — all — — -ö n m· W U — J" ΰ rJi — in μ rn ' m M H * co U *· n W B n

\n ui rlaiM.W^Mtd ·. , - ·« n «-I * I

σ! — w ,. in io -0 U $ · 3 -n .JS ^ m ^ -a— W —t — - •ll.'ih —· — W ® *n O' » n W cm m -f Id Wl ¢) co - ·—* »—J ' tn ’"'t ΓΓ ^

Owl ^ . m N U -> v oo — id -H rg aJ ' ~ '

ri M 03 — 1. - \ V o -r· ·· W E “ 'T 1/1 S

I Wl ¥ O u|n-H0Ho»m I ^ U 0) O « Π a r- · -H ^ k f- * - w nJ ' i ^ i που hw iuiHW^a-fO - ^ ^ 2 J , C: r- v . oi'QinrH cn — g: — - ·-* m — I _ t^n » W nt — oo io [ill tn n — « ν' oj W »-I m —

o td h W O en I u H 9 m I ft) 9 IT ' O — irT

'Ö-NHun ► ^ V u - m, T, n NV ^ m in.

- .y U o IN . — 1D U o wl ml fN w o - 5 ? p g β· I , , i J 1 s % -i -i^·? n Τ3·« β<ΐΐη0^ϊ <u w « t-N fl '^"’“’«ΪΤ ίιΙ

+J o} Ä “ 4J ‘ . - m m V - m W - — ^ ,; 5 ! fT

e i\ »w-i w wouoo -¾ w ή -m w ,—: κ « 5 3 u 2 u* J> Jl I1 T) rj iS ID id m v .. ,3 ID - ·- -H / N W ^ ® " V £ a m iö ^ m ^ S ^ Ö. ^ σ r- W W «» ^ » g 5 o fi\ “ ai id g ^ « o ^ ° t I D ^ O - g - 8 . ^ 3 10 *o *° -Γ ΐό ^ ~ - I in 1 - r? B q 8 o Si g "1 y M1 - I g § VI a I jl!_ “I— ------ “— - 'i° 3 :! - 3

>1 C

E

ΙΛ

Q O j I

...I cn CJ □ lJ

v c! -I ^ M

u I

·* 34 87568

CN

n *· H ^ σ\ in - n o •f. M ^ Ή M » I rH vo in Ti m - H -O o *- r — v ·. o >n 1 uj B 3 <»· I -<r ?in — —.- I a» I ΙΟ γμ ·- "V 7 t r6' R " b 3. : i> - 9

* 3 pD 0 II

B H \ y - B £

m o 7 m U E

—' ·, | H (N Q) en i l (Ί Bl w m td I m U <

» - u m O

_ , ) . . - i O 0 N m 0 m H , * B * - u Ib ti· · a n

m H I in M

r^ 00 1—' w l-l

u o tj· h o «f II

<u · ^ B r~ ® »ί ti Ή . QD · * ^ m H m *· *d s i , 2 ~ i a Γ' » O B - •H Bo - I ao id P tn 00 B - m m Ό - n H - 5 ττ in S f * . 3 S . .

p <j o ~ £-- ~ •H a m ^ W ΓΊ s 1 9 a _ i 9#'l ft -¾ b ® Ia n i u u w * s io l? b ‘ ‘ >— — · m 0 0 0 m r~ -I i * ' > 1

oo o N B B B

Γ' ‘I ill N N ^ r-l O U r-ί — ·— —

* ‘ O

rH

'g ir «— u

I H B

g 1

Ti o *']

Λ ·· H

.·.' >h C

. . __ m o «e u >

Esimerkki 1 35 87568

Allyyli (5R,6S)-6-/l(R)-hydroksietyyli/-2-(2-tetrahydro-furanyyli)metyylipeneemi-3-karboksylaatti (16) i) s i f.. »«y ' I L)c!l,jl °1 L2 ^ 0 16

Allyylin (5R,6S)-6-/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyyiioksi-etyyli/-2-(2 -tetrahydrofuranyyli)metyylipeneemi-3-karboksy-laattia (8) (249 mg, 0,55 millimoolia) liuotettiin tetrahydrof uraani i n (0,5 ml) ja liuokseen lisättiin etikkahappoa (0,28 ml) ja tetrabutyyliammoniumfluoridia (1,65 ml, 1,65 millimoolia). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 12 tuntia ja sen jälkeen väkevöitiin alipaineessa. Saatu jäännös puhdistettiin preparatiivisella ohutlevykromato-grafiällä, jolloin saatiin 177 mg (95 %) kohdeyhdistettä (16) värittömänä öljymäisenä aineena.

Esimerkki 2 ··; Allyyli ( 5R,6s)-6-/1(R)-hydroksietyyli/-2-/2(R)-tetrahydro- furanyyli/metyyiipeneemi-3-karboksylaatti (17)

Allyyli ( 5R, 6s) -6-/1 (R) -tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-/2(R)-tetrahydrofuranyyli/metyylipeneemi-3-karboksylaattia (9) (238 mg, 0,52 millimoolia), etikkahappoa (0,27 ml) ja tetrabutyyliammoniumfluoridia (1,58 ml, 1,58 millimoolia) käsiteltiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, _ - jolloin saatiin n 2 mg (80 %) kohdeyhdistettä värittömänä öljymäisenä aineena.

Esimerkki 3 36 87568

Allyyli (5R, 6S)-6-/1(R)-hydroksietyyli/-2/2(S)-tetrahydro-furanyyli/metyyl ipeneemi-3-karboksylaatti (18 ) .

Allyyli ( 5R, h s ) - b - / .1 ( R) - tert-butyy 1 id ime tyylisi lyylioksi-etyyli/-2-/ 2 ( s )-tetrahydrofuranyyli/metyylipeneemi-3-karboksylaattia (15) (2,27 g, 50 millimoolia), etikkahappoa (2,34 ml) ja tetrabutyyliammoniumfluoridia (15,2 ml, 15,2 millimoolia) käsiteltiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 0,677 g kohdeyhdistettä (18) kellertävänä öljymäisenä aineena.

Esimerkki 4

Allhyyli ( 5R, 6S ) -6- /1 (R) -hydroksietyyli/-2-(3-tetrahydro-furanyyli)metyyiipeneemi-3-karboksylaatti (19)

Allyyli (5R,6S)-6-/l(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/- 2-(1-t et rahydrofuranyyli)metyylipeneemi-3-karboksy-laattia (10) (270 mg, 0,60 millimoolia), etikkahappoa (0,31 ml) ja tetrabutyyliammoniumfluoridia (1,79 ml, 1,79 millimoolia) käsiteltiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 137 mg (68 %) kohdeyhdistettä (19) värittö-. . mänä kiinteänä aineena.

Esimerkki 5

Allyyli (5R,6S)-6-/1(R)-hydroksietyyli/-2-(2-tetrahydro-- pyranyyli)metyylipeneemi-3-karboksylaatti (20)

Allyyli (5R,6S)-6-/l(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-(2-tetrahydropyranyyli)metyylipeneemi-3-karboksy-;; laattia (11) (124 mg, 0,264 millimoolia), etikkahappoa . (0,132 ml) ja tetrabutyyliammoniumfluoridia (0,793 ml, 0,793 millimoolia) käsiteltiin esimerkissä 1 kuvatulla 37 87568 tavalla, jolloin saatiin 93,2 mg (100 %) kohdeyhdistettä (20) kellertävänä kiinteänä aineena.

Esimerkki 6

Allyyli (5R,6S)-6-/1(R)-hydroksietyyli 1-2-(1,3-dioksolan- 2-yyli)metyylipeneemi-3-karboksylaatti (21)

Allyyli (5R,6S)-6-/l(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-(1,3-dioksolan-2-yyli)metyylipeneemi-3-karboksy-laattia (12) (130 mg, 0,29 millimoolia), etikkahappoa (0,143 ml) ja tetrabutyyliammoniumfluoridia (0,855 ml, 0,855 millimoolia) käsiteltiin samalla tavalla kuin esimerkissä 1, jolloin saatiin 66 mg (68 %) kohdeyhdistettä (21) kellertävänä kiinteänä aineena.

Esimerkki 7

Allyyli (5R,6S)-6-/l(R)-hydroksietyyli/-2-(1,4-dioksan- 2-yyli)metyy1ipeneemi-3-karboksylaatti

Allyyli (5R,6S)-6-/l(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-(1,4-dioksan-2-yyli)metyylipeneemi-3-karboksy-laattia (13) (86,6 mg, 0,184 millimoolia), etikkahappoa (0,09 ml) ja tetrabutyyliammoniumfluoridia (0,553 ml, 0,553 millimoolia) käsiteltiin esimerkissä 1 kuvatulla : tavalla, jolloin saatiin 65 mg (99 %) kohdeyhdistettä : (22) kellertävänä kiinteänä aineena.

38 87 568 ΙΟ

- H N

m n 1 - r- K Γ" CTl — tä ^ 1d ^ 00 LO Γ' ·-

♦> Β να oio <N H ·1 N

ro Q rN - H H - (N lO H - ^ S I

T ,·· Xj I M Ml -v M O in ^ . cq I m - γμ h h u in m ~ h -

n1 I □ m a h - ϊ ^ r-voliN

81 ' i - H -j in o r- m m I n ό h a ~\ <N I. - — '11 ·. f" U I ! 1-3 - - r-l

I O aa g eo U tr v 1 ' tr xj H

cn / · «. H io vo - tr N oo xj ·· 1o

Ml·/ ro M £ ·. r~~ XJ »2 r- Ό · B -

0' H W m i x5 - i H f. ·. ^ — H XJ

- “2 H' - B « H « H B E ~ ‘ ~ H > tÖ Il “ Ή - in « fl B m rt ~ ~ - H m ie »-a "> - -r a N h >,«.·. »x li N IN r. —r-l Ό 1· —»ΓΟΟνΙ·»1-- «Btr^tqlm S tr — v xj | fl h " m σι — tr cn t/i H M ·. (N -tr tr >- m - v h m O'—" 1 O) f f OW -.en Λ- ΟΜόγο-κ

Ivoin · > m Wl h h <o t ' H n II H “k -3 »n O «N oo U □ U " ro -t " m U — ' ^ '7\ ·- 1. ft ' 1 t 00 Β lO H rt Tn1· h cNnH IINÖ H ve ~ q O «N H h u> , 5 ~ .

L| S m m > L ·. I—V 4Λ I · h} )-i L i V I ™ N Hl

« . , tr U r- Β ω H I O ml m S'-1 I ° > Ml W

t! 1 1 «nh3^ Ly IN U xj £ Ly h rt u u 2 -win— a S , ’ ί cd ctj α γ Äior-— y H» rn I 04 - - - m " I CN κ -U mml

ao in ie Ο-αιη M | ro E -H >-l in · BI tr W u U

O 1- 1» ι^Λί - xJ·. r^r-U - 4-i — σου ? - j-

r-HmlTN-vor-tr - 'Www r~- m 1 - > n E

H Vtd I HB r-l - N— Hmm H l» N — W

* u rt r-l H a B -t > ** H B E f" M

^ ^ .—- T r—| — 1 - m »Hmm - m » » h H

-t o » - o — - h w m m -— » h m u · " O I J—V 0 H n· r- O -M - -p O -t - m b N tr

T m Q »m - fo Π O N --- tr (/] — Il O N "UMO

U -G 17 mmm., u I M oi m «N U I B m I h .H T I H II in M r- oo I > Ml .H M en m CN II m

£ a ro M " I-) e -U li - 1 U e -u li 1» »I

S | M ml r- t - - | I B ro Y ~ $ 1 ^ ^ X «ί i

jj^UUHXlcN -tmro.. m » B m 2 h O 2 I

m Id - - ·- '3 ml m £ ml ό . h ii u m £ nl xj , 1 10 _ n SN-tUi % öxi I -m-yig u xj I n - co rH m - m I ™ - 1 tr U N n .-H - mm. « “ ^ 10 b ί r-l m " n m ^ rsimml" n m <» tr h ·» Ή tr » tN '"Um o m ί-l ve » B | r1» U o m H vo h " m

Hoove — i . c erv ve —· v — UH » m f — - H

H t~- K o\Hh'H§ r- Il < m .—1 O HB H M h ro n tr » "H i-jfNo.ttr/i H U σν ΓΧ-β-Ή^ο Μ Λ· rj a> ί . ^ ^ 2 . - - I υ m ν ta ► »· v m m m

.-·-. O. XJ m tr > Xj (N rt I ai ta Ό H « xj ro — Il I

^ ii | „ L-U tr - — r~ 4-3 - ' S Mi - , ϋ m B m I—i i h m tr m ffl - | v ' -r1. <0

m I -tl - - O m ^ o - - Hl o O m - Ofl «E

— " a x3N""B Ly s n " s " " e I—/ ό wi 0 vo m oo ^ vö t a o m - I · a H ιώ m m 1 I J V M oo ro cd m vo mm m ro W rN B m tr (Nrom JN M JJ. <0 tr ·. ^ r-1 t, r-1 II tr ·- ro ml rH II 1» I ^ v^ ro ml h m

ro H (N — t-} m rH — U, "Um ro H " U " U

. . I1»· ···· O VO ^t 1° '· ·' f _ i t ί -

B J 8 S B H

Z- n " u ; 7 x ί h 2 u fl tIiu rj ta I 1 a 1 ta 1 __o________aJ_aJ- xj C VO [H 5 ;;££ H _"__ EC h cn ^ •H · wc ω » · * 1 · · ,39 87568

(N

N 3 - ^ — T, m r' m ml ._. tn

Tt 3 H 'No 33, 00 /\ o

en H II — \ - M N r- O O ' I

v t m 33 H 0 — oo n νγ1_ Ό oi O m hi - r- 0--- vo v -o· IX - 00 331 n· m oj —- N T in ffl nro -33 vo o iOv iri - n s ml in rl <. n l n o

Mm | || 33 33 oi Uv— n - )33- m - v m H 0 /V m m m o g oi - t* - — (f - - o - , ta II o - - — f" τ} H ώΙ — Θ - v 1 o- m < — 33 1 /-O *. tj tj* y 33 - —. vo OO vo -n OQin I / I m > - . O 33 oi N+-1 N_\ — \ y 33 m a 1 h m 1 KiStt-- I·» r- I - H - 33 — y I 33l £ W — (N oo en (N — — - 33 -U o M CJ ^ H (N 331 <331 a n - rl m m |J1 vo — — 331 U n· MU I [ - Oi 331 — G co nj O 33 o O - - - 331 Ti Utt-v 33 O MH- B 1 -e Tr yo - am mi i - 33 ^ - ! ^ - ixj II ► H I - H vo 331 m U 33 33 —. B 33 E m vo 33 33 ~ - U - u —v oi oi 0 - (N 5 , □ 3 ·? ‘ m ~ O N - n II O - vo fta'-'W1 *. Il en r- — 33 U 33¾ - - 3! Ml II oi v.

UHO «Tl H | U < H f" I O N· o- 0 r- U U m τ* — O vo 33 in·- Ti Il - ' y ' .

H ΓΝ < I vo H r- n II Ti v y H N M γΛ H e E m

hi r- m vo ·, H m ^ ^ m b ‘ w ^ S ^ m S T

01 v ^ n « - - ,(fl ?! τ> h — 5 ^ a i! , i tj H y '3 m tn Ό — , ^ w Ί3 II o m ^ Ϊ ?

S I ui <u ,—* I <U oi *· Ή m ™ - — <u I

— , o- — tj - — 33 / n W — a - r> ffl 33 tt — rs 33l o I vo -10-,-- n m \ / o ffl o H tJ tj· Ημοοογ-u O r- N Π 33 ta O — INI M — Ό !«“*'? h- tt v ni T M I N N· - k n o- oi - . [A m vo r- (N -

M m (N m m I — Mm gm-MMW f >. ·^ h S

v Il Μ Γ" < - Ό *- H < ' , ' M - h m (N ifl -mb}-* n — 00 - m | - — 3

— _ 1 - - g — H — W — (N M II —OH

?- S Tl Ö m oi o — a oi o - r* •'tn v °! o I ""

— * -d · W Jl - Tf W \ Y —- V·'* V ^ 00 r» _Pl S

" ? 3 j : · i1 p ° ~ ° - T. a u,v χ "V 3 i -8 s 3 s H Λ § o - 8' S 1 -Θ ; ^ 8ί V · S ” g S r.r.: - s v . °. .1 & ^SS1 5; ' ν.,-π - n > m '—1 - M - - -f t-MIOOÄ^ . >5 r ^ — N fflr-1— 33 en 33 — — N U ' ·“* 33 vom ’Π o 33 | - l (fl — o vo - N 33 m W - I M M m in < · H r-. vp —, vJooo — m— I oo o- N - -Mg co vo τη Ή f-- Ken goovovo O- n r~ ^1133 0/^11(1)0^11

Hm mm - H (0 - M en - co ίο H m m ' .¾ ^ 1/1 --l Oi •g - -ö fN q Ti -Mö^ai ' ^ n — m i-—-- ^irltrl-M-ll — 33 i 33 iti 33 33 ¾ m - 33 VO 33 33 33 w “ n — O ' Sl^Ommo^H -Om“ • : : ^ ^ e , a Π ω - — — — Il < tJ -— n — — O vo - n' V οι Π o m N-MI m m m <* ' m Λ o m rn :.'· Oi n 33 33 331 ϊ I- m r- VO n oi n - 5 -. V m v • - ; tj. »«M ιηΠώη < <>-tj· — Tl I ^ „ I m _i « [] nM— -HömMmTiOnMtS ' m M n «> -Γ M~" *° f' * t s '8 5 > 5 j 3 " a“a θ Is§ g § I a-a a §______ _____fi_JL_________S_Jä__|A_g__ •o , oi Ό ·· m o m ,-g • Λ e H Oi Oi

>H

O r- M ·· TT m «5

t/1 C W

40 87568 m cm ' l I 0' <1) m ” 7 a in '-r - n N o ra o ^o

fM

A 1

* VO Tj GO

a ·"

r—I

^ T

in s

m (0 E

- <u — . w

IN ftJ

? J,

8 N

* « a n 4J »

Ο « H

Ό N H

<U ~ •h w>

+J N· TJ

'5 " S

M I ^ Φ _ :“: w “Ί --1 ... IN io . . . (.

; ; ; m m ;.; : m

. · H

U

O

- U

Ö ° (N

£ a M

e •Η O' r- m ·· w c " ,

Esimerkki 8 4i 87568

Kalium (5R,6S)-6-/1(R)-hydroksietyyli/-2-(2-tetrahydro-furanyyli)metyylipeneemi-3-karboksylaatti (23)

" io2 ^ C0.2K

L6 (23)

Allyyli (5R,6S)-6-/l(R)-hydroksietyyli/-2-(2-tetrahydrofu-ranyyli)metyylipeneemi-3-karboksylaattia (16) (140 mg, 0,41 millimoolia) liuotettiin tetrahydrofuraaniin (5 ml) ja liuokseen lisättiin -10°C:ssa sekoittaen tetrakis-trifenyylifosfiinipalladiumia (9 mg) ja tri-n-butyylitinahyd-ridiä (0,13 ml). Seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 25 minuuttia, minkä jälkeen sen kanssa sekoitettiin etikka-happoa (27 ui) ja tämän jälkeen sekoitettiin vielä 10 minuuttia. Seos väkevöitiin ja konsentraatin kanssa sekoitettiin vettä (1,8 ml) ja etyyliasetaattia (1,2 ml).

:"· Tämän jälkeen pH säädettiin arvoon 8,1 lisäämällä 2M

: kaliumvetykarbonaattia. Vesikerros erotettiin ja väkevöi- ’ V tiin lyofilisoimalla. Saatu kiinteä jäännös puhdistettiin pylväskromatograafisesti XAD 2-hartsilla, jolloin saatiin ·;’ : 50 mg (36 %) kohdeyhdistettä kellertävänä jauhemaisena : ” aineena. Sen spektriarvojen havaittiin vastaavan täydelli- sesti yhdisteen 24 vastaavia arvoja.

Esimerkki 9

Natrium ( 5R,6S) - 6-/1 (R) -hydroksietyyli/-2 -( 2-tetrahydro-furanyyliImetyylipeneemi-3-karboksylaatti (24) 1— - 42 87568 7 i > ‘’°2 ^ C02Na 16 (24)

Allyyli (5R,6S)-6-/l(R)-hydroksietyyli/-2-(2-tetrahydro-furanyyli)metyylipeneemi-3-karboksylaatin (16) (138 mg, 0,41 millimoolia), natrium 2-etyyliheksanoaatin (68 mg), tetrakis(trifenyylifosfiini{palladiumin (6,2 mg), trifenyylifosfiinin (6,2 mg) ja etyyliasetaatin (0,41 ml) seosta sekoitettiin 2 tuntia huoneen lämpötilassa.

Väkevöimällä saatu jäännös puhdistettiin ODS-pylväskromato-graafisesti, jolloin saatiin 45 mg (34 %) kohdeyhdistettä (24) värittömänä jauheena.

/a/p8 C M 12° (c = 0f345, H2)

Esimerkki 10

Natrium (5R,6S)-6-/1(R)-hydroksietyyli/-2-/2(R)-tetrahydro-furanyyli/metyylipeneemi-3-karboksylaatti (25)

Allyyli ( 5R, 6S)-6-/1 (R)-hydroksietyyli-2-/(R)-tetrahydro-: furanyyli/metyylipeneemi-3-karboksylaattia (17) (260 mg, 0,77 millimoolia), natrium 2-etyyliheksanoaattia (128 mg), tetrakis (trifenyylifosf iini )palladiumia (112 mg), trifenyylifosfiinia (112 mg) ja etyyliasetaattia (0,8 ml) käsiteltiin esimerkissä 9 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 38 mg (15 %) kohdeyhdistettä (25) valkoisena j auhe^na.

• /a/^8 C Hb4° (c-0,192, H20)

Esimerkki 1J.

43 87568

Natrium (5R,bS)-6-/l(R)-hydroksietyyli/-2-(2(S)-tetrahydro-furanyyli/met yylipeneemi-3-karboksylaatti (26 )

Allyyli (5R,hS)-6-/l(R)-hydroksietyyli/- 2 -/1(S)-tetra-hydrofuranyy I i /rnetyylipeneemi-3-karboksylaattia (18 ) (509 mg, 1,5 mi 11imoolia), natrium 2-etyyliheksanoaattia (263 mg), tetiakis(trifenyylifosfiini)palladiumia (38 mg), trifenyy1ifosfiinia (38 mg) ja etyyliasetaattia (1,5 ml) käsiteltiin esimerkissä 9 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 209 mg (43 %) kohdeyhdistettä (26) valkoisena j auhegna.

M/^8 C t 1 2 1° ( c: 9 , V77 , H20)

Esimerkki 12

Natrium (5R,6S)-6-/l(R)-hydroksietyyli/-2-(3-tetrahydro-furanyyliImet yy1ipeneemi-3-karboksylaatti (27)

Allyyli (5R,bs)- 6-/K R)-hydroskietyyli/-2-(3-tetrahydro-furanyyli)metyy1ipeneemi-3-karboksylaattia (19) (115 mg, 0,34 mi 11imoolia), natrium 2-etyyliheksanoaattia "··*' (57 mg), teti akis (trifenyylifosf iini )palladiumia (48 . mg), trifenyyl ifosf iinia (48 mg) ja etyyliasetaattia (0,35 ml) käsiteltiin esimerkissä 9 kuvatulla tavalla, · jolloin saat iin tt mg (30 %) kohdeyhdistettä (27) valkoisena jauheena.

/a/^8 c H 2 1 ’' (c-0,269, H20)

Esimerkki 1j . . Natirum (bR,b:;) b /l(R)-hydroksietyyli/-2-(2-tetrahydro- pyranyyliImetyy1ipeneemi-3-karboksylaatti (28)

Allyyli (SR,bs)-6-/UR)-hdyroksietyyli/-2-(tetrahydro-pyranyyliImetyy1ipeneemi-3-karboksylaattia (23) (33,3 mg, 44 87 568 0,1 millimoo 1 i a ) natrium'2-etyyliheksanoaattia (16 mg), tetrakis(trilenyylifosfiini)palladiumia (3 mg), trifenyyli-fosfiinia (3 mg) ja etyyliasetaattia (3 ml) käsiteltiin esimerkissä 9 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 11,4 mg (38 %) kohdeyhdistettä (28) valkoisena jauheena.

Esimerkki 14

Natrium (5R,hs)- h-M(R)-hydroksietyyli/-2-(1,3-diokso-lan-2-yyli) met yy1ιpeneemi-J-karboksylaatti (29)

Allyyli (5F,6s)-6 -/1(R)-hydroksietyyli/-2-(1,3-dioksolan-2-yyli)metyy1i peneemi- 3-karboksylaatti (21) (58 mg, 0,17 millimoolia), natrium 2-etyyliheksanoaattia (30 mg), tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumia (7,8 mg), trifenyyli-fosfiinia (7,H mg) ja etyyliasetaattia (0,17 ml) käsiteltiin esimerkissä 4 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 10 mg (18 %) kohdeyhdistettä (29) ruskehtavana kiinteänä aineena.

Esimerkki 15

Natrium (5R,6s)-6-/1(R)-hydroksietyyli/-2-(1,-4dioksan-·"*: 2-yyli) metyy1ipeneemi-3-karboksylaatti (30) . .·. Allyyli (5R,6S)-6-/1(R)-hydroksietyyli/-2-(1,4-dioksan- 2-yyli)metyy1ipeneemi-3-karboksylaattia (11,5 mg, 0,03 .1' ' millimoolia), natiium 2-etyyliheksanoaattia (55 mg), tetrakis (t i i f-enyy 1 i tosfi ini Ipalaldiumia (1 mg), trifenyyli-fosfiinia (1 mg) ja etyyliasetaattia (1 ml) käsiteltiin esimerkissä 4 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 3,3 mg (33 %) kohdeyhdistettä (30) valkoisena jauheena.

45 87568 "s E E E CC r>

- '-I '•Il H H

CC CC N in PC N — *n m co m CC m CC rvi τ — h — m Ό — in ό m m*. o H ' m H *> i oh· o - CC o 'CC <—I — * V v N i—I k N i—I ^ tN r-ι CC — tN pc — . ' h | vo in oo oo 1 CC o , ι II h ι II h rg v 1 m I ö * h—- h en ».in ' in h o co*> m t3 m Ό ·νθ- vo m ίο Ό - vo tC H -v .— - s ' — ·- ' — mg

H ' — H PC E h PC E

— CC Ή ' H '-'.PC

' E* '-'-PC ' — K -h I h __ CTN tN -·— 00 tN +J —- g erj g tn — 0 o — w vo tn

- m rö -vin * ·%. o U vf oo K

PC — g m in H CC m rvi > v - I

H tN d> «H v. <—I ** rtjrvim --00(/) — -h — 'H (0 in * rti tn —. m — 4j'|g vo m m . vo I w — > <d ^ i s | v * *» I V ' (0 E w h m Hlö Hlö >"<»nj I - _7 IN I_f m PC m i 'd , I en I I tn H *v I co ’tN" ’ (N ·“ '—· ml meö KI m PCI m O vo tn tN*. H oo U "tr U I h » *

nm- m · - 'Τ'- CC --- N

- m v. n —. — d — -CJ m E PC

ή -tt H PC E H K E I ' ™

tj< in m . pc II

„ in -— ' H DC — - H PC — PC I I H O

O — I—v O — ' H O — - m O U —

Il O O' Il ON— Il ON — ΙΙ'ΟΟΟΌ Ö I I / u I CC en OIWm o n in h '

® I ppf-t- -h PC m co -n PC " *- DC

‘0 ~U fN I—\ 'i — U II ~ §-UB * g vo fN m H

§ I pel I O 1 I m 2 1 ö m ™ D

£ l £ϊ 4 ke ! £I « . S *51 « , S 2 »5 ,2 U E asUoI te O Ό I π)ΌΕ s ^ιβν^.ιβν» -h - * -h V ^ VO m 5 ^ N cc ^ Cd· n PC N· — N PC oo — PC PC n) ΤΙ opctN'^ocCHin σ ® H in in tN H ·- vo t- —- vo vo ^ »>. vo r- ^ ^ in \ w' ro *—«*

Pr- il in CC r^ Horn r- || vo m cc r- m h PC

rj HOHQHOOO .—- r—i O vo IH— o “9

Jr k '· T - — 'CO v s v h k λ | o ^ ό " g« ^ Ό 01 - 1 ^ M - te j: hv m 0 S1 6 2 S ' 7§ s - R» 3 2 5 - Q S 8 " 1 ö i o co cn 'in ίο i—\ I «m i- I—\ " f <ö o vo oo *· in rH vo CC r- HIO n Λ r- 2 H °° 4^*5

n - in m — 1_T pc I m * I_J PCI I 't v *" M H

m^nrvi — m H I U m H I O m m H H CJ — - to - *o - _p *° H ^ H _ Y ^ '8 2. 8 % 8 §. 8 | ill ¢: Oi aj __±d_E__td ... a__b—a--b—S- i° Ά m vo r-

5 G

E en o pj ^

-HO cH * H

w ·· ω e 46 87568

K

a ? «Ν'1

El s — E

(N κ U ro E .-H n· - o H / S I — σ\ g - ro k k E ro (N g o (N S3 O Γ ' , 1 (Ö ·1 r—( I I ^ E / l g UO —

K I ro h OOH — (N

cj -- m - o o <-t

n 00 , N I rd -—- V / K

KI oo ’ M in 03 In·

U ^ N El I O (N

- cn oo n· U x> l El , N U3 El ui E - ~ | N N U -

N· — ro! E E ' V g OO

O· tn in 1 o

tn Ή - 6 E

O - N -H N

pj v. N E E — I Λ N E -H Ι-t t~- T3 Oi rt tn II'-' r- —.

- El 7~ v ' Il O m ·' B

E U / X ^> ' Ή ~ <n

cn A γ__^ ' TJ - E E

\ a 1—'/^v. xs ro n· i I oo - a 'v—.< ' e . (tf vo r-r-IQlE E Ή I e noo Ή ' ' Ή— m to1.

tn E S -— ^ 00 tn “ ro ^

i—I Γ' cn n r~ o J cn E

v ^ E cn ^ ^ I

-CNrnr-i ·>. ΓΟ N· '1 — m — CN I ^ <1 E , Λ ro m E o p —. O f noo —~ ^ „ o <N Jr; OI 1- O " ,_, (N cn Tl O I ·> Hi

Il Ä r-t t m II E ΓΛ E K - Il E ro ^ u-uvo 1 — U O O O U"U E U —U ω

•n I v Γ E E N/ I I rl I

e m cn (N Ι α-υ I O O ^ c ro — | «El ro ro 5 I ΓΜ_ν^οο5Εΐ ro oo g (¾ ro El I N· co U O O -

ti - — ro r- dl +J El U ' 1· +J ' Uy TJ

-p m n a ^ ^ U ' B ro n |

O •-•E - ' m (tj « »N - JS E <N E

T3 ^ (N E — -Ct N E E - — tr» EI Ή O) o II vo__ ' tn E ro n — tn - U — H N· O — / y. ^ VO VO r—I ,- ro N· - 00 4j r- - tn \ / E I f'- Il ' m f \ n II a h t) Γ" N—{ I tn i—l v-j n cn o O ·—l O ' - ^ - s I - 'E ·» >wrt- -Ero

j_> « E Ή ro Tl'T>roro ia - Ό H

P'-fM EI rö ' — - H - — - " ^ E \ | U e E E E I N E E N· ~

X O ro I 'mr-IOro - E O ro O E

£ - ~ aw-'-r-'O >n ~ - O

1 o tn n· ' fQ tn o r' t) tn Il o vo ro i n ή o E Tf o H ' r~ h> n· ro El

ΓΟ ·1. «^ r-l I "'N1 s E **· 'N· I U

ro >—I ro '--voinrOrHi—Iro -pro»—I /V

__ -o ^ “O

JT 10 Ή H

I — I — I —

6 0 B Ö BO

Π cn U (N U (N

— Q — Q " O

S ä “ S 8 ~ SS- g e«B g a«e § • oo cn o Ό O cn cn ro E3 ·· >c C ________ g m n· ro -H O r-f Ή Ή ω ·· w c 47 87568

Vertailuesimer kk i 15 ( 3S , 4R ) - 1 - / I ( R ) i oi t -butyylidimetyylisilyylioksietyyli/-2-okso-4-/ ( 3 - let i ahydrof uranyyli Jmetyylikarbonyylitio./ -atsetidi ini ( li ) ^Slr «»A, «~>Si9 SCOCH2__r"\

11 · ςΓ’"”- jX

η ,, X) cr 31 32 33 (3R,4S)-4-asetoksi- 3-/1(R)-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli/-2-oksoatsetidiinia (31) (25,2 g, 90 millimoolia) liuotettiin tf?t i ahydrof uraaniin (730 ml) ja liuokseen lisättiin .sekoittaen ja peräkkäin vettä (438 mg) ja tetra-hydrofui aani ( -1ioetikkahappoa (32) (15,4 g, 105 millimoolia). Tämän jälkeen pH säädettiin arvoon 7,6 lisäämällä tipottain IN natriumhydroksidia ja sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Seokseen lisättiin etyyliasetaattia ja seos pestiin vedellä ja sen jälkeen kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alipaineessa ja jäännös puhdistettiin pylväskromatograa-\ fisesti, jolloin saatiin 27,6 g (82 %) kohdeyhdistettä : (33) välittömänä kiteisenä aineena. 1

· · vur - I

IR (cm ): 1700(laktaami c=0), 1695(esteri c=0) • ·· max NMR(CDCl^) λ: 0,077( 3H,s) , 8,085(3H,s), 0,88(9H,s), 1,21 MH,d,J=6Hz,CH3-C-OSi), 1,50 - l,65(lH,m), 2,06 - 2,20(1H,m), 2,57 - 2,76(3H,m), 1,16(lH,dd,J = 3Hz,4Hz,3-asema-H), 3,39 -1,46(1H,m), 3,70 - 3,96(3H,m), 4,20 - 4,31 ( 1 H , m, >CH-()si), 5,31(0,5H,d,J=l,3Hz,4- : asema-H), 5,32(0,5H,d,J=2,6Hz, 4-asema-H), 6, 3 0 ( 1H, lev.s. ,NH) 48 8 7 5 6 8

Vertai lues imet kki _1_6

Triklooriet yy 1 i ( SH, 6S )-6-/1(R)-tert-butyylidimetyyli-silyylioksietyyί i. - 2-(3-tetrahydrofuranyyli)metyylipeneemi- 3-karboksy1aatti (14) *> T 1 )' rs fy j i „ - * JXtCH2 >' 11 C02CH2CC13 M 3-i (3S,4R)-3-/l-(R)-tert-butyy1idimetyylisilyylioksietyyli/-2-okso-4-/( ί tetrahydrofuranyyli)metyylikarbonyylitio/-atsetidiinin 133) (1,87 g, 5 millimoolia) ja 2,6-lutidiinin (0,804 g, 7 , millimoolia) seos liuotettiin ksyleeniin (10 ml) ja liuokseen lisättiin 0°C:ssa sekoittaen ja tipottain oksalyylikloridin (0,952 g, 7,5 millimoolia) liuos ksyleenissä (5 ml). Liuosta sekoitettiin 20 minuuttia, minkä jälkeen sen kanssa sekoitettiin α,α ,a-trikloorietanolin (1,49 g, 10 millimoolia), pyridiinin (0,59 g, 7,5 millimoolia) ja ksyloenin (10 ml) seosta 0°C:ssa ja reaktion : annettiin tapahtua tunnin ajan.

:: Kiteytynyt suola (Motettiin suodattamalla ja suodos pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Kuivausaine poistettiin suodattamalla ja suodos sekoitettiin trietyylifosfiit in (4 ml) kanssa, minkä jälkeen kuumennettiin tefluksoiden 23 tuntia 140°C:ssa. Liuotin poistettiin alipaineessa ja jäännös puhdistettiin pylväs-kromatograafisesti, jolloin saatiin 0,602 g (22 %) kohde-yhdistettä (14) kellertävänä kiinteänä aineena.

i 49 8 7 5 6 8 IRPuhdas . 17901laktaami C=0), 1730(esteri C=0) max NMR(CDC13) λ : 0,08(6H,s), 0,89(9H,s), 1,25(3Hd,J=7Hz, CH3-C-Osi), 1,47 - 1,74(lH,m), 2,02 - 217 (lH,m) , 2,42 - 2,56 (1H, m, ~£o) , 2,76 -

H

3,17{2H,m, *-CH2<), 3,40 - 3,50(lH,m), 3,70(1H,dd,J=2Hz,4Hz,6-asema-H), 3,67 -3,96(3H,m), 4,18 - 4,30(lH,m, >CH-OSi), 4,85(2H,s,-CH2CC13), 5,60(lH,d,5-asema-H)

Esimerkki 16

Trikloorietyyli (5R,6S)-6-/l(R)-hydroksietyyli/-2-(3-tetrahydrofuranyyli)metyylipeneemi-3-karboksylaatti (35) ^, , -s γλ *—rv «,-Ο

J. I, > - J-U

On~CH,(-CK CO2CH2CCI3 34 35

Triklooerietyyli (5R,6S)-6-/1(R)-tert-butyylidimetyyli-silyylioksietyyli/-2-(3-tetrahydrofuranyyli)metyylipeneemi- * · · ·...· 3-karboksylaattia ( 34 ), ( 3,74 g, 6,87 millimoolia) liuotet- :.· ! tiin tetrahydrof uraaniin ( 6 ml) ja liuokseen lisättiin : : · peräkkäin etikkahappoa (3,25 ml) ja n-tetrabutyyliammonium- ::. fluoridia (IM liuos tetrahydrofuraanissa) (20,6 ml), minkä jälkeen sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa.

Seos laimennettiin etyyliasetaatilla ja liuos pestiin peräkkäin natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella, kaliumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alipaineessa ja jäännös puhdistettiin pylväskromatograa- so 87 568 fisesti, jolloin saatiin 1,813 g (58 %) kohdeyhdistetä (35) kellertävänä amorfisena aineena.

IRS^idaS< 1 > ·* 3 3 7 5(OH) , 1790( laktaami C=0), 1725(esteri C=0) ITld λ NMR(CDC13) 6: 1,37(3H,d,J=7Hz,CH3~C-OH); 1,50 - 1,72 (1H,m), 1,90 - 2,08(2H,m), 2,40 - 2,58 r° (lH,m,-£—' ), 2,78 - 3,15 ( 2H,m, ;>-CH2-< ), 3,39 - 3,50(lH,m), 3,65 - 3,96(4H,m), 4,15 - 4,3 3(lH,m, >CH-OH), 4,83(1H,dd,J= 2Hz,12HZ,CH2CC13), 4,91(lH,dd,J=4Hz,12Hz, CHCCl3), 5,62(lH,d,J=2Hz,5-asema-H)

Esimerkki 17 (5R,6S)-6-/1(R)-hydroksietyyli/-2-(3-tetrahydrofuranyyli)-metyylipeneemi-3-karboksyylihappo (36) ^ 3 O ΟΛ μ C02CII2CCl3 2 35 36

Trikloorietyyli (5R,6S)-6-/1(R)-hydroksietyyli/-2-(3-tetrahydrofuranyyli)metyylipeneemi-3-karboksylaattia (35) (1,63 g, 3,55 millimoolia) liuotettiin tetrahydrofu-raaniin (16,3 ml) ja liuokseen lisättiin IM kaliumdivety-fosfaattia (32,6 ml) ja sinkkiä (3,26 g), minkä jälkeen sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia. Liukenematon aines erotettiin suodattamalla ja suodos uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin : poistettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen i si 87568 etyyliasetaatista, jolloin saatiin 0,856 g (80 %) kohdeyh-distettä (36) värittöminä kiteinä.

IRmaxdaS,cm"1 ): 3 3 50(OH), 1780(laktaami C=0), 1700(karboksyy- lihappo) NMR(CDC13) A : 1,28(3H,d,J=lHz,CH3-C-OH), 1,51 - 1,72 (lH,m), 1,93 - 2,12(2H,m), 2,36 - 2,51 (lH,m, -Cc, 2,72 - 3,18(2H,m, >-CH0<),

H

3,31 - 3,44(1H,m), 3,60 - 3,87(4H,m), 4,06 - 4,18(lH,m), 5,67(1H,5-asema-H)

Sp.: ^33 - 134°C

/C : +328° (c=0,155, asetoni)

Terapeuttinen vaikutus kokeellisesti aiheutettuun infektioon hiirillä

Esillä olevan keksinnön mukaisesti saaduista uusista yhdisteistä käytettiin yhdsitettä (27) terapeuttisessa kokeessa, jossa käytettiin infektoituja eläimiä. Koe-eläimenä käytettiin ICR-kannan uroshiiriä (ikä 5 viikkoa, paino 23 - 27 g). Hiiret siirrostettiin intraperitoneaa-lisesti E. coli KC-14-kannalla ja 2 tuntia myöhemmin annettiin yhdistettä (27) subkutaanisti tai oraalisesti.

·; Terapeuttisen vaikutuksen vertaamiseen käytettiin 5 päivän ·· - kuluttua havaittuja eloonjäämisiä tai kuolemantapauksia käyttämällä kontrollina yhdistettä (39). Tulokset on . ‘ esitetty taulukossa 5.

52 87568 /Taulukko 5/

Testimikrobi Siirrostettujen Antamis- ED^g (mg/kg mikrobisolujen tapa - _määrä_Yhd.(27) Yhd,(39) E.coli KC-14 4,8 x 105 Subkut. 3,0 3,9 (pesäkkeiden Oraali 9,5 15,1 muodostusyks.) S.auerus 3,8 x 10^ Subkut. 1,11 1,0 - 2,0

Smith (pesäkkeiden muodostusyks.

Akuutin toksisuuden testi

Esillä olevan keksinnön mukaisesti saaduista uusista yhdisteistä valittiin yhdiste (27) akuutin toksisuuden testiin. Yhdiste annettiin oraalisesti ja intravenöösisti ICR-kannan hiirille (ikä 4 viikkoa), joita käytettiin koe-eläiminä.

Uros- ja naarasryhmien kaikkien hiirten, joille oli annettu 3 g/kg yhdistettä (27), havaittiin jääneen eloon intravenöösisti yhdistettä annettaessa. Myös uros- ja naarasryhmien hiirten havaittiin kaikkien jääneen eloon, kun yhdistettä annettiin oraalisesti 5 g/kg.

Pienimmän estokonsentraation mittaaminen

Esillä olevan keksinnön uusista yhdisteistä ja vertailu-./ : esimerkissä saadusta yhdisteestä määritettiin pienin '·. estokonsentraatio (MIC) agarmalja-laimennusmenetelmän avulla käyttämällä standardimenetelmää MIC Measurement Standard Method, Chemotherapy Society of Japan. Kunkin g mikrobin siirrostusmäärä oli 10 pesäkkeidenmuodostusyk-sikköä. Pienin konsentraatio, joka esti testattujen mikro-. . bien kasvun sen jälkeen, kun oli inkuboitu 18 tuntia 37°C:ssa, annettiin q/ml. tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.

53 87 568 o mm m mcooom e Tf * r-1 O r-H CM (N r- Γ- Csi ^ - ....

r^^^ooofOoioo^oo^oo^ m m cn m mm m i A A A A A ftf ^ m v i-ι n — m * m m co romrocou)co^(N ^ pirAcr>oor--~HfHCNMr-mr-roorsir^ ^ .

O ή fc 'W Mi

™ OOOOrOU>COOrHOOOOO -H I

^ · 10 <N

g ίο ® m (n m h m m h ” m In ^ ^ 11 H

lj h oocNcomcNincNmmcoocNm ^-1) o << i

.. Tl* rH (N »H (N i—I CN CN rH (fl w rO CJN

2 E ' <o on ro m ro on m m ^ to co ·- ro

Ί· K (O (Ί r-H in (M ,H CO CN (N 10 M IN ^ ID

25 on r-~ - ' - - ~ ~ -—- h E

RrHcooomromcNmtommcootoio - ·- ,—ι - h

Ui cn cn ή cn in in 0 o ^ to to

TT r-H -rH ' <D

io ro φ Φ in m 00 ·—«C

(NiNinminHininmiNiNiNNr- ro · >i ro r-

O-'V''-'''-'--' m £ ΪΗ to ro ON

COOOCNrHCNCOrHiHCNiOcOOOO Hi-ιΛ; H“ ^1-1 H r-, (fl p o ·· LO 0) U-l H r-v .

oiDininiocoooninico' co - o Ό vo to CNCNrHinCNCNint^rHr-HrHOinCO rj- l_| | T ' O' '· v v v m tJ co CNOOCOrHlOlOrHOCOCOCOOrHO CN>1 - σ\ (Tl

Z H σ' CO

O' CO (O 10 CTi O · ' Oj r-HI

Φ 00 1—1 cn co h h 0 m (N (N M CO Ui 11 O ·- ti ™ o O O ro' ro r-ί n O O O ~ * Φ < CU n .h ctn >, h-> ω -· O mm co >1 1 ' —' >1 ? cn cn on 10 on on 00 00 00 m m u, co ·** >, " r-oor^rHmrocNeor-r-r-oor-H .. -3 _j .j e

niS

OOOOr-HOOOOOOOOO ^ ^ 11 * ™ m m on ui *c £ -u> p cn m co co m co m coin on ,_i >73 .Hcon-i

to o ή cn t~- r-tmr^(NmrHOHro ^ ^W.HI

; o o m o cOr-nomcNcoooo _ ^ in m "O to rH 2 Λ H ^ £

. . n Ui >1 II

... _ _ (O Φ +J · O' 3 m co w m oi co co co to m m ^ h- ai E <n er· mocN^-cocNcotNr-r-r^moocN I * h , ^ (NJ TT+J-i-i -r-l -·' ΟΟΟΟΌΟΟΟΟΟΗΟΟΟ CO ON 1 CO ·- «5 CO ON (N ID ^ 4J ω I—I · rH Xj . mmuDcomoocr»oo«r)UDmmm ^ ^ . <\s ^orsimr--r-‘for-rHmrHOO'H _ ^ ^ . Jr c

.. OJ <.^vv(~sjvv*^«.vvvv ** W

OOrHOrHOOOCOrHCOOOO N· 0j <; (N >, H

on ω g ·' to 10 H . - « ^ 4) ^

• - <H CO -cr (0 ON ^~n Ui H H

O CN r—( CO rH CN ro r,S 5 ^ T* 'Tl ►O O H· rHrHrHONOrH 2 t0 £ ft >r O >1 rH id Σ CD rH CN CN rH O I Ή D3£roO>itO>i

Cu Ν' ¢(0 CO ON O O O tn to H to U C Ui

ON CO CN Η-l n rH (Q tfl Γ' r~ 00 in m τ-ι»· .H

· O ON I O O co E E (NOO S m uj (N OCUlOUUlOOlEtECSl It 1) . >1 M K Ή

UO 3hSs!nN00>U C-^-rrHjC^C-rO

fC p 4) S noo U CO n rH ffl O Ui

gfi O # U h tl (O ro to to tO E1 3N· Ui H CO TJ

rtj CC -H W H (0 to m to h -H H Ä ¢) n fsj · u_i T3 ro >i •H HCtiCU-HCOlOU i—( r-H , c rii I r* jaaS3z9°2rt5r-,SSiOHHE m H n, ^ , Jh m o3p e ui σ o ro σσσ3 top(u-HHJ^*-»ro

UiIDD HProUi^HO-H HnCQ H HUHU I - ^ Ui ^ ^ o S έ g o o 5 2 S « Sron^^^^t; O -I -I ·| ·| 4> UJ C n .1 -I Ui ·| ·Ι ·| P jG Ό >.1 ^ cn| ai w| td en cul ω c ω| ωι cul tai tul &ul +< m >h cn c < c ch 54 8 7 5 6 8

Kontrolleina käytetyillä yhdisteillä 3J_, 3a edellä olevassa taulukossa esitetyt mikrobienvastaiset aktiivisuudet.

"V «Ϋ „ r^\

Xl^o XJJ^O

C02K C02K

37 38 CO 2 K 3 9

Vertailuesimerkki 17 (Stabiilisuustesti munuaisen dehydropeptidaasia vastaan) Menetelmä: 0,325 μ/ml (loppukonsentraatio) puhdistettua ihmisen munuaisen dehydropeptidaasia ja 100 jiM (loppukonsentraatio) ! kutakin testattavaa yhdistettä kuumennettiin 37°C:een 50 mM Tris/HCl-puskurissa (pH 7,0) ja näytteet otettiin etukäteen suunniteltuina tunteina. Näytteiden vielä sisältämät yhdistemäarät analysoitiin kvantitatiivisesti ja jokaiselle yhdisteelle laskettiin puoliintumisaika.

Tulokset:

Tr s t , 11 1 il yhdiste Puoliintu- Jäljellä oleva m isäikä määrä 9 h jälkeen (t1/2 h) tyig/ml)

Imipeneemi 3,02 14,7

Sch 29482 1,44 4,9

Yhdiste 27 3,81 70,8 55 87568

Taulukosta havaitaan, että yhdiste 27 on stabiilimpi kuin Sch 29482 ja imipeneemi. Yhdisteen 27 9 tunnin jälkeen jäljellä oleva määrä eroaa huomattavasti Sch 29482:n ja imipeneemin vastaavista arvoista.

Claims (3)

1. 56 87 568 Patenttivaatimus Menetelmä valmistaa terapeuttisesti vaikuttavaa peneemiyhdis-tettä, jolla on yleiskaava r (! I ! / ,H>A c°2r jossa R on vety tai ai 1yyliryhmä, ja A on alifaattinen 5- tai 6-jäseninen heterosyklinen ryhmä, jossa on renkaassa yksi tai kaksi happiatomia, sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai opitinen isomeeri, tunnettu siitä, että N-ketoesteri-yhdiste, jonka yleiskaava on OR ’
2. 1. CH?- A I f l 0^ H ""C=0 io2R2 jossa A tarkoittaa samaa kuin edellä, Rl on hydroksyyliryhmän suojaryhmä, R^ on ailyyliryhmä tai karboksyyliryhmän suojaryhmä, saatetaan reagoimaan triaryylifosfiinin tai trialkyylifosfiitin kanssa, minkä jälkeen kuumennetaan, jolloin saadaan yhdiste, jonka yleiskaava on r- . - s I /~0H 2 - Λ J N—ff 0^ 1 ? COOR ^ 57 8 7 568 jossa
3. 1 O R , R ja A tarkoittavat samaa kuin edellä, ja haluttaessa kohdistetaan näin saatuun yhdisteeseen reaktiot, joilla poistetaan hydroksyyl iryhmän suojaryhmät R·^ ja karboksyyl iryhmän suojaryhmät R*, jolloin hydroksyyli- ja karboksyyliryhmät saadaan takaisin, ja sen jälkeen tarvittaessa muunnetaan näin saatu yhdiste suolakseen. 58 87568 Förfarande för att framställa en terapeutiskt effektiv penem-förening med den allmänna formeln ?" S J l } i"·’A cn0R där R är väte eller en allylgrupp, och A är en alifatisk 5- eller 6-medlems heterocyklisk grupp, som i ringen har en eller tva syreatomer, dess farmaceutiskt god-tagbara sait eller optiska isomer, kännetecknad därav, att en N-ketoesterförening med den allmänna formeln OR 1 1 ^s^c,,rA I 1 » l o x N . 0' c:o2r2 där A avser samma som ovan, R1 är hydroxylgruppens skyddsgrupp, R2 är allylgrupp eller karboxylgruppens skyddsgrupp, omsättes med triarylfosfin eller trialkyl fosfit, varvid efter uppvärm-ning erhälles en förening med den allmänna formeln 59 87 568 Τ' - ' __ ,- s ! Voii2-a J N // 0^ 1 j C00R l där R-*-, och A avser samma som ovan, och vid behov underkastas den sä erhällna föreningen reaktioner, genom vilka hydroxyl-grup[>ens skyddsg r upp R·*· och ka rboxy Lgruppons skyddsgrupp R^ avlägsnas, varvid hydroxyl- och karboxylgruppen fas tillbaka, varefter vid behov den sä erhallna föreningen omvandlas tili sitt sait.