FI84472B

FI84472B - Foerfarande foer framstaellning av kollagenasinhibitorer pao basis av hydroxiaminosyra.

Info

Publication number: FI84472B
Application number: FI863607A
Authority: FI
Inventors: Geoffrey Kneen; David Keith Donald; Jonathan Philip Dickens; William Roger Mckay
Original assignee: Searle & Co
Priority date: 1985-09-10
Filing date: 1986-09-08
Publication date: 1991-08-30
Also published as: AU588362B2; DK427686D0; DE3671891D1; NO863581D0; FI863607A0; IE862404L; NO164092B; NO164092C; IE58770B1; GR862286B; IL79971A0; EP0214639A3; JPH0764800B2; PT83328A; DK169029B1; CA1329397C; FI863607A; PT83328B; EP0214639A2; FI84472C

Description

1 84472

Menetelmä hydroksiaminohappoon perustuvien kollagenaasi-inhibiittorien valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää kollagenaasi-inhibiitto-5 rien valmistamiseksi, jotka perustuvat hydroksiaminohappoon ja joilla on kaava (I), 0 0 R2 0

li II I II

HOHN-C-A-CNH-CH-CNHR' (I) 10 a jossa R' on Cj-Cg-alkyyli, R2 on C^-Cg-alkyyli, bentsyyli, hydroksibentsyyli, bentsyylioksibentsyyli tai (C1-C6-alkok-si)bentsyyli, a on kiraalinen keskus, jossa on valinnanva-15 raisesti R- tai S-stereokemia, A on ryhmä -(CHR3-CHR4)- tai -(CR3=CR4)-, joissa b ja c ovat kiraalisia b c keskuksia, joissa on valinnanvaraisesti R- tai S-stereokemia, R3 on vety, C^-Cg-alkyyli tai fenyyli ja R4 on vety, 20 C^-Cg-alkyyli, fenyyli (Cj-Cg-alkyyli) tai sykloalkyyliiC^-C6-alkyyli), jolloin sykloalkyylirenkaassa on 5 tai 6 hiiliatomia, ja niiden isomeerien valmistamiseksi.

Tässä käytettynä termi "Ci-Cg-alkyyli" tarkoittaa suoraa tai haaraketjuista alkyyliryhmää, jossa on 1-6 hii-25 liatomia, mukaanlukien esimerkiksi seuraavat: metyyli, etyyli, propyyli, isopropyyli, butyyli, t-butyyli, pen-tyyli, heksyyli jne.

Termi "C1-C6-alkoksi" tarkoittaa suoraa tai haara-ketjuista alkoksiryhmää, jossa on 1-6 hiiliatomia, esi-30 merkiksi metoksi, etoksi, propoksi, butoksi, t-butoksi, pentoksi, heksoksi jne.

Kaavan I mukaisissa yhdisteissä on useita kiraalisia keskuksia asymmetristen hiiliatomien läsnäolon takia.

Asymmetristen hiiliatomien takia esiintyy diaste-35 reomeerejä, joissa on sopiva R- tai S- stereokemia kussa- 2 84472 kin kiraalisessa keskuksessa. Keksinnön ymmärretään sisältävän kaikki tällaiset diastereomeerit ja niiden seokset.

Tämän keksinnön edullinen muoto ksäittää yhdisteet, joilla on kaava 5 OCH., . Φ 10 |j o CH2 o HOHNC - CHR3 - CHR4 - CNH - CH - CNHR1 (II) a jossa R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä ja kiraalisessa keskuksessa a on S-stereokemiaa. Tämän keksinnön 15 edullisin muoto käsittää kaavan (II) mukaiset yhdisteet, joissa R4 on 2-metyylipropyyli.

On kuvattu lukuisia yhdisteitä, jotka ovat sinkkiä sisältävien metalloproteinaasientsyymien kompetitiivisiä reversiibelejä inhibiittoreita. Tällaisiin kompetitiivi-20 siin reversiibeleihin inhibiittoreihin lukeutuvat esimerkiksi angiotensiinia muuttavien entsyymien (ACE) inhibiittorit. Tämä inhibiittori estää dekapeptidiangiotensiini I:n konversion angiotensiini II:ksi, joka on voimakas verenpainetta kohottava aine. ACE-inhibiittoreita käytetään 25 hypertension hoidossa. Tämän tyyppisiä yhdisteitä kuvataan esimerkiksi EP-hakemusjulkaisussa A 12401. Enkefalinaasi-entsyymin vastaavia inhibiittoreita kuvataan EP-hakemus-julkaisussa 54862.

Tässä kuvatut kaavan (I) mukaiset yhdisteet toimi-30 vat nisäkkään kollagenaasin (EC.3.4.24.7.) inhibiittoreina, joka kollagenaasi aloittaa kollageenin hajoamisen. On todisteita (ks. esimerkiksi Arthritis and Rheumatism 20 (1977) 1231-1239), jotka osoittavat sinkkimetalloprotei-naasin, kollagenaasin, toimimisen yhtenä avainentsyymeistä 35 nivelruston ja luun hajoamisessa nivelreumatismissa. Koi- 3 84472 lageeni on yksi ruston ja luun proteiinimatriisin pääkom-ponenteista. Voimakkaat kollagenaasi-inhibiittorit ovat hyödyllisiä nivelreuman ja siihen liittyvien sairauksien hoidossa, joissa kollagenolyyttinen aktiivisuus on edistä-5 vä tekijä. Näihin sairauksiin lukeutuvat sarveiskalvon haavaumat, osteoporoosi, hampaan juurikalvontulehdus, ientulehdus, kasvainten muodostuminen ja dystroofinen rakkula-ihotauti .

US-patentissa 4 511 504 kuvataan luokkaa uusia kar-10 boksialkyylipeptidijohdannaisia, jotka ovat hyödyllisiä kollagenaasi-inhibiittoreina US-hakemuksessa nro 06/703 973, 2. helmikuuta, 1985, kuvataan luokkaa tioli-pohjäisiä kollagenaasi-inhibiittoreita, jotka ovat hyödyllisiä sellaisten sairauksien hoidossa, joissa kollagenaa-15 sin edistämä kollageenin hajoaminen on aiheuttava tekijä.

Kaavan 3 mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa keksinnön mukaisella menetelmällä, jolle on tunnusomaista, että a) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden val-20 mistamiseksi, joissa A on ryhmä -(CHR3-CHR4)-, b c substituoitu happo, jonka kaava on (III),

0 0 5 II 3 4 II

25 R OC-CHR -CHR -COH (III) jossa R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä ja R5 on C6-alkyyli tai bentsyyli, saatetaan reagoimaan amidin kanssa, jonka kaava on (IV), 30 R2 0 I « ! H2N-CH-CNHR (IV) jossa R1 ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, kytkentäai-neen kuten N,N’-disykoheksyylikarbodi-imidin läsnäollessa 35 yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on (V), 4 84472

O O R2 O

5 H 3 4 H I II 1 R OC-CHR -CHR -CNH-CH-CNHR (V) 5 jossa R1, R2, R3, R4 ja R5 tarkoittavat samaa kuin edellä ja joka hydrolysoidaan emäksen kuten natriumhydroksidin läsnäollessa tai hydrataan katalysaattorin läsnäollessa, vastaavan hapon saamiseksi, jonka kaava on (VI), 10 0 0 R2 0 H 3 4 H Ιί i HOC-CHR -CHR -CNH-CH-CNHR (VI) joka muutetaan kaavan (I) mukaiseksi hydroksiaminohappo-johdannaiseksi kytkemällä O-bentsyylihydroksyyliamiinin 15 kanssa, minkä jälkeen suoritetaan hydraus, tai vaihtoehtoisesti kytkemällä happo suoraan hydroksyyliamiiin kanssa käyttämällä kytkentäainetta kuten etyyliklooriformaatti, ja että näin saatu yhdiste haluttaessa erotetaan isomee-reikseen, tai 20 b) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden val mistamiseksi, joissa A on -(CR3=CR4)-, yhdisteestä, jonka kaava on (XIII),

O O R2 O

5 I 3 4 I I II 1 25 ROC-CR=CR -CNH-CH-CNHR (XIII) jossa R1, R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä ja R5 on bentsyyli, poistetaan suojaryhmä R5 siirtohydraamalla käyttämällä syklohekseeniä ja palladiumia hiilellä sopi-30 vassa liuottimessa kuten etanolissa hapon saamiseksi, jonka kaava on (XIV), 0 0 R2 0

Il 3 4 II I H i HOC-CR =CR -CNH-CH-CNHR (XIV) jossa R1, R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä ja 35 5 84472 joka kytketään O-bentsyylihydroksyyliamiinin kanssa, minkä jälkeen suoritetaan hydraus, tai vaihtoehtoisesti kytketään hydroksyyliamiinin kanssa käyttämällä kytkentäainetta kuten etyyliklooriformiaattia.

5 Haluttaessa kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan eristää erillisiksi isomeereiksi kromatografisesti.

Kohdassa a) esitetyssä yleisessä menetelmässä käytetyt lähtöaineet ja reagenssit ovat yleensä kaupallisesti saatavia tai niitä voidaan valmistaa standarditekniikoille) la. Esimerkiksi kaavan (II) substituoitu happo voidaan valmistaa antamalla esterin, jonka kaava on Y1 0 3 I >5 R -CH-COR (VII) 15 jossa Y1 on halogeeni ja R3 ja R5 ovat yllä määriteltyjä; reagoida trietyylifosfiitin kanssa, jolloin saadaan yhdistettä, jonka kaava on 20 0 COR5

R3-C

\ ^'OC2H5 (VIII) 25 0 OC_Hc z o

Kaavan (VIII) yhdisteen annetaan reagoida ketohap-poesterin kanssa, jonka kaava on 30 0 0 4 il II 6 R-C-COR (IX) jossa R6 on suojausryhmä, kuten bentsyyli, ja R4 on yllä määritelty; ja natriumhydridin tai muun sopivan emäksen 35 kanssa sopivan liuottimen, kuten tolueenin läsnäollessa, jolloin saadaan yhdistettä, jonka kaava on 6 84472 o o 5 (I 3 4 II 6 R OC-CR =CR -COR (X)

Kaavan (X) yhdisteet, joissa R5 on C^-Cg-alkyyli, 5 hydrataan, jolloin saadaan kaavan (III) yhdisteitä.

Kaavan (VI) yhdisteitä voidaan lisäksi valmistaa hapon, jonka kaava on

O O 4 II D

10 R-C-COH (XI) reaktiolla kaavan (IV) amidin kanssa amidisidosta muodostavan aineen, kuten N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidin läsnäollessa, jolloin saadaan yhdistettä, jonka kaava on 15

0 0 R2 O

4 II H I II n R -C-CNH-CH-CNHR (XII)

Kaavan (XII) yndisteiden annetaan reagoida kaavan 20 (VIII) yhdisteen kanssa emäksen, kuten kalium-t-butoksidin läsnäollessa, dimetyyliformamidissa, jolloin saadaan yhdistettä, jonka kaava on 0 0 R2 0 5 I 3 4 II I II i 25 R OC-CR =CR -CNH-CH-CNHR (XIII)

Kaavan (XIII) yhdisteet, joissa R5 on bentsyyli, hydrataan, jolloin saadaan kaavan (VI) yhdisteitä.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan siis valmistaa 30 menetelmillä, jotka ovat yleisesti tunnettuja peptidike-miassa analogisille yhdisteille. Erityisesti on ymmärrettävä, että reaktiiviset ryhmät, jotka eivät osallistu kyseiseen reaktioon (esim. amino, karboksi, hydroksi jne.), voidaan suojata menetelmillä, jotka ovat tavanomaisia pep-35 tidikemiassa, muiden ryhmien reaktioita, ja sen jälkeen suojaus voidaan poistaa.

7 84472

Lisäksi on huomattava, että kun A on -fCR3=CR4H sekä cis- että trans -isomeerit sisältyvät keksinnön laajuuteen.

Kaavan I mukaiset yhdisteet toimivat nisäkkään kol-5 lagenaasin, joka aloittaa kollageenin hajoamisen, inhibiittoreina. Laaja proteolyyttinen entsyymin edistämä nivelruston ja -luun hajoaminen liittyy niveltuhoon nivelreumassa. Kollageeni on nivelruston ja -luun pääkomponent-teja. Reumakudosten histologiset havainnot ovat osoitta-10 neet, että tällaisille kudoksille on luonteenomaista syno-viaalisten sisussolujen kasvu ja sitä seuraava neovaskula-risaatio ja plasmasolujen, makrofagien ja T-lymfosyyttien invaasio, jolloin muodostuu pehmytkudosta tai "pannus". Tällaisen pehmytkudoksen tärkeys niveleroosiossa on hyvin 15 osoitettu.

Evanson ja hänen työtoverinsa esimerkiksi havaitsivat, että pehmytkudos tuottaa suuria määriä neutraalia kollagenaasia (Evanson, J.M. et ai., J. Clin. Invest. 47 (1968) 2639-2651). Myöhemmin muut ovat vahvistaneet, että 20 neutraalilla kollagenaasilla on tärkeä hajoittava vaikutus roolia koe-eläimissä (katso Cambray et ai., Rheumatol Int. 1 (1981) 11-16 ja 17-20) ja ihmisissä (Cawston et ai., Arthritis & Rheum. 27 (1984) 285-290).

Monospesifistä antiseerumia puhdistettua synoviaa-25 lista kollagenaasia vastaan on käytetty entsyymin paikal listamiseksi reumakudoksissa (Wooley et ai., Eur. J. Bio-chem. 69 (1976) 421-428). Immuunireaktiivista kollagenaasia havaittiin suurena tiheytenä ruston pehmytkudosliitok-sessa (Wooley, et ai., Arthritis & Rheumatsim 20 (1977) 30 1231-1239), Wooley, et ai. (Science 200 (1978) 773-775) ovat edelleen identifioineet synoviaalisolujen alapopulaa-tion, joka aiheuttaa kollagenaasituotannon.

Edellä olevat huomiot ovat näin ollen antaneet vakuuttavat todisteet siitä, että kollagenaasi suoraan vai-35 kuttaa nivelten eroosioprosessissa, joka nähdään nivelreumassa. Kollagenaasia tuottaa myös viljelty luukudos (Vaes.

β 84472

Biochem. J. 126 (1972) 275-289) ja se vaikuttaa kollegee-nisen luumatriisin hajoamiseen luun resorption aikana.

Kaavan I mukaiset yhdisteet, jotka spesifisesti inhiboivat nisäkkään kollagenaasia, ovat näin ollen farma-5 kologisesti hyödyllisiä nivelreuman ja vastaavien sairauksien hoidossa, joissa kollagenolyyttisella aktiivisuudella on merkitystä, kuten esimerkiksi sarveiskalvon haavauma, osteoporoosi, hampaan juurikalvontulehdus, ientulehdus, kasvainten invaasio, dystroofinen rakkulaihotauti, systee-10 miset haavaumat, ihohaavat, mahahaava jne.

Yhdisteillä ei ole oleellisesti ollenkaan angio-tensiinia muuttavaa entsyymiä (ACE) inhiboivaa aktiivisuutta. ACE on karboksidipeptidaasi - se lohkaisee pepti-disubstraatin kaksi jäännöstä C-päätteestä. Sen seuraukse-15 na C-päätteinen karboksyylihappo on pääasiallinen tunnis-tuskohta sekä substraatille että inhibiittoreille; tämän ryhmän poistaminen vähentää suuresti inhiboivaa tehoa. Toisaalta kollagenaasi on endopeptidaasi ja sellaisena sillä ei ole vaatimusta sitomis-vuorovaikutukseen. Lisäksi 20 kollageenin rakenne eroaa oleellisesti angiotensiini-l:s-tä, joka on dekapeptidi ja lohkeaa fenyylialaniini-histi-diini -sidoksesta oktapeptidiksi (angiotensiini-II) ja dipeptidiksi (histidyylileusiini). Kollageeni on paljon monimutkaisempi, se on kolminkertainen kierre, jossa kukin 25 kierteen rihma sisältää noin 1000 aminohapporyhmää, ja aminohapposekvenssi kollagenaasin lohkaiseman kohdan ympärillä on täysin erilainen kuin angiotensiini I:n lohkea-mispaikan ympärillä oleva. Kollagenaasi lohkaisee noin kaksi kolmannesta ketjusta N-päätteestä lähtien. Amidisi-30 dos, jonka kollagenaasi lohkaisee, on joko glysiini-leu-siini tai glysiiniisoleusiinisidos.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan antaa millä tahansa sopivalla annostustavalla, edullisesti farmaseuttisen yhdistelmän muodossa, joka on sovitettu tähän annos-35 tustapaan, ja riittävässä määrin aiotun vaikutuksen saavuttamiseksi. Kaavan I mukaisten yhdisteiden terapeutti- 9 84472 sesti tehokkaat annokset, jotka vaaditaan ehkäisemään tai pysäyttämään lääketieteellisen tilan eteneminen, pystyy alan ammattimies helposti selvittämään.

Farmaseuttisia valmisteita voidaan helposti muodos-5 taa yhdistämällä yhtä tai useampaa kaavan I mukaista yhdistettä yhden tai useamman myrkyttömän, farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan ja/tai laimentimen ja/tai lisäaineen kanssa (kutsutaan kollektiivisesti "kantaja"-aineiksi) ja haluttaessa muiden aktiivisten aineosien kanssa. 10 Yhdisteitä ja yhdistelmää voidaan annostaa esimerkiksi suonensisäisesti, vatsaontelon sisäisesti, ihonalaisesti, lihaksensisäisesti tai pinnallisesti.

Oraaliseen annostukseen farmaseuttinen yhdistelmä voi olla esimerkiksi tabletin, kapselin, suspension tai 15 nesteen muodossa. Farmaseuttinen yhdistelmä valmistetaan edullisesti annosyksikön muotoon, jossa on tietty määrä aktiivista aineosaa. Esimerkkejä tällaisista annosyksi-köistä ovat tabletit tai kapselit. Nämä voivat edullisesti sisältää aktiivista aineosaa noin 1-250 mg, edullisesti 20 noin 25-150 mg. Sopiva päivittäinen annos nisäkkäälle voi vaihdella laajalti riippuen potilaan kunnosta ja muista tekijöistä. Kuitenkin annos, joka on noin 0,1 - 300 mg/kg ruumiin painoa, erityisesti noin 1-100 mg/kg ruumiin painoa, voi olla sopiva.

25 Aktiivinen aineosa voidaan annostaa myös injektiol la yhdistelmänä, jossa voidaan käyttää esimerkiksi suolaliuosta, dekstroosia tai vettä sopivana kantajana. Sopiva päivittäinen annos on noin 0,1 - 100 mg/kg ruumiinpainoa injektoituna päivässä useina annoksina riippuen hoidetta-30 vasta sairaudesta. Edullinen päivittäinen annos olisi noin 1-30 mg/kg ruumiin painoa.

Annostustapa sairaustilan hoitamiseksi kaavan I mukaisilla yhdisteillä ja/tai yhdistelmillä päätetään erilaisten tekijöiden perusteella, muunmuassa potilaan tyyp-35 pi, ikä, paino, sukupuoli ja lääketieteellinen tila; in- 10 84472 fektion vakavuus; annostusmuoto; ja käytetty yhdiste, ja se voi näin ollen vaihdella suuresti.

Terapeuttisiin tarkoituksiin kaavan I mukaiset yhdisteet yhdistetään tavallisesti yhden tai useamman lisä-5 aineen kanssa, joka sopii aiottuun annostustapaan. Mikäli se tapahtuu per os, yhdisteet voidaan sekoittaa laktoosin, sakkaroosin, tärkkelyspulverin, alkaanihappojen selluloo-saesterien, selluloosa-alkyyliesterien, talkin, steariini-hapon, magnesiumstearaatin, magnesiumoksidin, fosfori- ja 10 rikkihappojen natrium- ja kalsiumsuolojen, gelatiinin, akaasian, natriumalginaatin, polyvinyylipyrrolidonin ja/ tai polyvinyylialkoholin kanssa ja sitten tabletoida tai kapseloida mukavan annostuksen aikaansaamiseksi. Vaihtoehtoisesti yhdisteet voidaan liuottaa veteen, polyetyleeni-15 glykoliin, propyleeniglykoliin, etanoliin, maissiöljyyn, puuvillansiemenöljyyn, maapähkinäöljyyn, seesamiöljyyn, bentsyylialkoholiin, natriumkloridiin ja/tai erilaisiin puskureihin. Muut lisäaineet ja annostusmallit ovat hyvin ja laajalti tunnettuja farmaseuttisella alalla. Sopivat 20 annokset missä tahansa tilanteessa riippuvat tietenkin hoidettavan tilan luonteesta ja vakavuudesta, annostustavasta ja kyseessä olevasta nisäkäslajista, mukaanlukien sen koon ja yksilölliset idiosynkrasiat.

Edustaviin kantajiin, laimentimiin ja lisäaineisiin 25 lukeutuvat esimerkiksi vesi, laktoosi, gelatiini, tärkke lykset, magnesiumstearaatti, talkki, kasvisöljyt, kumit, polyalkyleeniglykolit, vaseliini jne. Farmaseuttiset yhdistelmät voidaan valmistaa kiinteään muotoon, kuten rakeiksi, pulvereiksi tai supoiksi, tai nestemäiseen muo-30 toon, kuten liuoksiksi, suspensioiksi tai emulsioiksi.

Farmaseuttisille yhdistelmille voidaan tehdä tavanomaisia farmaseuttisia operaatioita, kuten sterilointi ja/tai ne voivat sisältää tavanomaisia farmaseuttisia lisäaineita, kuten säilöntäaineita, stabilointiaineita, kostuttavia 35 aineita, emulgointiaineita, puskureita jne.

il 84472 Käytettäväksi nivelreuman hoitoon kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan annostaa millä tahansa mukavalla tavalla, edullisesti sellaisen farmaseuttisen yhdistelmän muodossa, joka on sovitettu tähän tapaan ja annoksena, joka 5 on tehokas aiottua hoitoa ajatellen. Artritiksen hoitoon annostus voi edullisesti tapahtua oraalista tietä tai injektiolla nivelensisäisesti haluttuun liitokseen. Päivittäinen annos 70 kilon nisäkkäälle on välillä 10 mg - 1 g.

Kuten mainittiin riippuu annettu annos ja hoito-10 suunnitelma esimerkiksi sairaudesta ja sen vakavuudesta sekä hoidettavasta potilaasta ja hänen reaktiostaan hoitoon, ja voi siksi vaihdella suuresti.

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä on siis kollagenaa-sia inhiboiva vaikutus. Tämä määritettiin noudattamalla 15 Cawstonin ja Barrettin menetelmää (Anal. Biochem. 99 (1979) 340-345), jolloin 1 mM testattavaa inhibiittori-liuosta tai sen laimennosta inkuboidaan 37°C:ssa 16 tuntia natiivin kollageenin ja kollagenaasin (puskuroitu Tris-HCl-CaCl2:11a, pH 7,6) läsnäollessa. Kollageeni on asetyy-20 li-14C-kollageeni. Näytteet sentrifugoidaan ei-hajotetun kollageenin saostamiseksi, ja radioaktiivisen päällä olevan nesteen erä poistetaan analysoitavaksi tuikelaskurilla hydrolyysin mittana. Kollagenaasin aktiivisuutta 1 mM:n inhibiittoria tai sen laimennosta läsnäollessa, verrataan 25 kontrollinäytteen aktiivisuuteen, jossa ei ole inhibiittoria, ja tulokset raportoidaan sellaisena inhibiittorin konsentraationa, joka aiheuttaa 50 % kollagenaasi-inhibi-tion. Taulukko I kuvaa kaavan I mukaisten yhdisteiden aktiivisuutta.

30 i2 84472

Taulukko I. Kollagenaasi-inhibitio IC50 */uM)

Esimerkki nro Ihmisen reumatoidin 5 (isomeeri) synoviaalinen kolla- -3- qenaasi _

1 Ö7I

2(A) 0.02 2(B) 40 3(A) 04 3(B) 20, 0 in 3(C) 0,02 3(D) 0,3 4(A) 06 4(B) 1,0 5 100-1000 6 > 1000 7 0,7 8(A) 0.15 15 9(A) 0,037 9(B) 0.52 11(A) 0.02 11(B) 4,0 12(A) 0,03 12(B) 10 13(A) 5,0 . 13(B) >100 20 18(A) 0,2 18(B) >100 19(A) 100 19(B) 0,3 20 1,0 i3 84472

Seuraavat esimerkit annetaan kuvaamaan edelleen tätä keksintöä. Esimerkeissä kaikki osat ovat paino-osia ellei ole toisin esitetty.

Esimerkki 1 5 N- [3- (N' -hydroksikarboksiamido)-2-( 2-metyylipropyy- li)propanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi (a) E ja Z-bentsyyli-3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-me-tyylipropyyli)propenoaatti

Etoksikarbonyylimetyleenitrifenyylifosforaania 10 (53,8 g, 0,155 mol) liuotettiin kuivaan dikloorimetaaniin (400 ml) ja saatu liuos jäähdytettiin 0°C:seen. Jäähdytettyyn liuokseen lisättiin bentsyyli-4-metyyli-2-oksopenta-noaatin (34,0 g, 0,155 mol) liuosta kuivassa dikloorime-taanissa (100 ml) 25 minuutin aikana, ja sitten reaktio-15 seosta kuumennettiin palautusjäädyttäen 1 tunti. Liuotin poistettiin reaktioseoksesta haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin valkoinen kiinteä aine. Kiinteä aine uutettiin heksaanilla (3x200 ml) ja liuotin poistettiin yhdistetyistä heksaaniuutoksista, jolloin saatiin raaka 20 tuote keltaisena öljynä. Raaka tuote puhdistettiin tislaamalla (0,6 mmHg), jolloin saatiin E- ja Z-bentsyyli-3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli)propenoaattia (41,0 g), joka otettiin talteen 137-142°C:n lämpötilassa.

(b) 3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli)pro- 25 paanihappo E- ja Z-bentsyyli-3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli )propenoaattia (25,0 g, 0,09 mol) liuotettiin etanoliin ja hydrattiin 50°C:ssa 2,6 bar (37,5 psi) paineessa, kun läsnä oli 5 % palladiumia hiilellä (2,5 g).

30 Saatu seos suodatettiin Celiten läpi ja liuotin poistet tiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin 3-(etoksikarbonyyli )-2-(2-metyylipropyyli)propaanihappoa isomeerien seoksena paksun öljyn muodossa.

(c) N-[3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli)- 35 propanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi i4 84472

Seos, jossa oli 3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyyli-propyyli)propaanihappoa (17,4 g, 0,087 mol), N-metyylimor-foliinia (28,7 ml, 0,26 mol) ja dimetyyliformamidia (0,25 ml) liuotettiin kuivaan dikloorimetaaniin (200 ml), ja 5 saatu seos jäähdytettiin 0°C:seen. Reaktioseokseen lisättiin liuos, jossa oli oksalyylikloridia (7,6 ml, 0,087 mol) kuivassa dikloorimetaanissa (50 ml). Seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 10 minuuttia ja jäähdytettiin sitten -70°C:n lämpötilaan. Reaktioseokseen lisättiin 0-10 metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia (20,0 g, 0,096 mol) kuivassa dikloorimetaanissa (100 ml) 30 minuutin aikana. Saadun seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin 2,5 vrk. Seos suodatettiin ja suodos pestiin kylläistetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella 15 (2x200 ml), laimealla sitruunahapolla (2x150 ml) ja kui vattiin sitten vedettömällä natriumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin-N-[3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli)pro-panoyyli]-0-metyy1i-L-tyrosiini-N-metyyliamidia isomeerien 20 seoksena (20,7 g), kiinteän aineen muodossa.

(d) N-[3-(karboksi-2-(2-metyylipropyyli)propano-yyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi N-[3-(etoksikarbonyyli )-2-( 2-metyylipropyyli )pro-panoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia (4,7 g, 25 0,012 mol) suspendoitiin metanoliin (25 ml), joka sisälsi kaliumhydroksidiliuosta (12 ml, IM). Seosta sekoitettiin yön yli ja liuotin poistettiin haihduttamalla, jolloin saatiin kumia. Kumi jaettiin dietyylieetteriin (50 ml) ja natriumbikarbonaattiliuokseen (50 ml). Vesifaasi erotet-30 tiin, pestiin etyylieetterillä (50 ml) ja pH säädettiin arvoon 2 lisäämällä laimeaa vetykloridihappoa. Vesipitoinen seos uutettiin dikloorimetaanilla (3x100 ml) ja uutokset yhdistettiin ja kuivattiin sitten vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin poistettiin haihduttamalla vakuu-35 missä, jolloin saatiin kumia (3,3 g). Kumi kiteytettiin is 84472 dikloorimetaanin ja heksaanin seoksesta, jolloin saatiin N-[3-karboksi-2-( 2-metyylipropyyli )propanoyyli] -O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia valkeana kiinteänä aineena, joka oli kahden diastereomeerin seos (sp. 92-96°C).

5 C19H28N205 · 0,3 H20

Havaittu: C, 61,7; H, 7,6; N, 7,5 %.

Laskettu: C, 61,7; H, 7,8; N, 7,6 % (e) N-[3-(N'-hydroksikarboksiamido)-2-(2-metyyli-propyyli )propanoyyli] -O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi 10 N-[3-karboksi-2-(2-metyylipropyyli)propanoyyli]-0- metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidiin (0,73 g, 0,002 mol), joka oli liuotettu kuivaan tetrahydrofuraaniin (10 ml) lisättiin trietyyliamiinia (0,24 g), ja saatu seos jäähdytettiin 0°C:seen. Reaktioseokseen lisättiin etyylikloori-15 formaatin (0,26 g, 0,0024 mol) liuosta kuivassa tetrahyd-rofuraanissa (4 ml), ja seosta sekoitettiin sitten 0,5 h 0°C:ssa ja annettiin sitten lämmetä huoneen lämpötilaan. Hydroksyyliamiini-hydrokloridia (0,69 g, 0,01 mol) lisättiin reaktioseokseen. Saatu seos jäähdytettiin 0°C:seen, ja 20 lisättiin trietyyliamiinia (1,1 g, 0,012 mol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (2 ml). Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin yön yli. Liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, ja saatu takertuva kiinteä aine otettiin etyyliasetaattiin (50 ml). Etyyli-25 asetaattiliuos pestiin laimealla sitruunahapolla (2x4 ml) ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin raaka tuote. Raaka tuote puhdistettiin kromatografisesti normaalifaasi-piidioksidilla eluoiden dikloorimetaani/me-30 tanoli/etikkahappo -seoksella (43:6:1), jolloin saatiin N-[3-(N'-hydroksikarboksiamido)-2-(2-metyylipropyyli)propa-noyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia diastereo-meerien seoksena, valkeana kiinteänä aineena (sp. 165-167°C).

35 C19H29N305 · 0,2 H20 ie 84472

Havaittu: C, 59,7; H 7,7; N, 10,7 %

Laskettu: C, 59,6; H, 7,7; N, 11,0 %, jota esittää seuraa-va yleinen rakennekaava 5 °CH2 °Ύ>> ¢) 0 CH o CH o

10 11 I II I II

HOHNC - CH - CH - CNH - CH - CNHCH,

R tai S S J

Esimerkki 2 N- [ 3- (N' -hydroksikarboksiamido )-2-( 2-metyylipropyy-15 li)propanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi (a) N-(4-metyyli-2-oksopentanoyyli)-0-metyyli-L- tyrosiini-N-metyyliamidi 4-metyyli-2-oksopentaanihappoa (31,3 g, 0,24 mol) liuotettiin kuivaan dikloorimetaaniin (50 ml), ja saatu 20 liuos jäähdytettiin 0°C:seen. Liuokseen lisättiin tipoit-tain oksalyylikloridia (23,2 ml, 0,265 mol) ja sen jälkeen dimetyyliformamidia (0,5 ml). Saatua seosta sekoitettiin 0°C:n lämpötilassa 1 tunti, kuumennettiin sitten palautus-jäähdyttäen 5 minuuttia, ja annettiin jäähtyä. 0-metyyli-25 L-tyrosiini-N-metyyliamidia (50,0 g, 0,24 mol) ja trietyy- liamiinia (37,1 ml, 0,265 mol) liuotettiin dikloorimetaaniin (120 ml) ja saatu liuos lisättiin tipoittain jäähdytettyyn reaktioseokseen. Seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin yön yli. Seos kaadettiin 30 veteen (50 ml) ja orgaaninen kerros poistettiin. Vesipitoinen kerros uutettiin dikloorimetaanilla (30 ml), yhdistetyt uutokset kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin karkea tuote keltaisena kiinteänä aineena (85,1 35 g). Raaka tuote kiteytettiin tertiäärisestä butyylietyyli- i7 84472 eetteristä, jolloin saatiin -N-(4-metyyli-2-oksopentanoyy-li)-0-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia (55,6 g), (sp. 152-158°C).

^17^24^2^4 5 Havaittu: C, 63,2; H, 7,6; N, 8,8 %

Laskettu: C, 63,4; H, 7,6; N, 8,7 % (b) E ja Z N-[3-(bentsyylioksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli )propenoyyli] -O-metyyli-L-tyrosiini-N-me-tyyliamidi 10 Kalium-tertiääristä butoksidia (2,1 g, 0,0188 mol) suspendoitiin kuivaan dimetyyliformamidiin (50 ml). Suspensioon lisättiin bentsyylidimetyylifosfonietanoaattia (4,6 g, 0,0187 mol) huoneen lämpötilassa. Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 0,5 tuntia. N-(4-metyy-15 li-2-oksopentanoyyli)-0-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliami-dia (3,0 g, 0,00913 mol) lisättiin annoksittain reaktio-seokseen 10 minuutin aikana, jolloin saatiin punainen liuos. Punaista liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia, ja kaadettiin sitten veteen (500 ml). Saatu seos 20 uutettiin etyyliasetaatilla (2x100 ml) ja etyyliasetaatti- uutos pestiin vedellä (2x25 ml), suolavedellä (25 ml) ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Etyyliasetaatti poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin raaka kiinteä tuote (4,2 g). Raaka tuote puhdistet-25 tiin uudelleenkiteyttämällä etyyliasetaatin ja heksaanisen seoksesta, jolloin saatiin E ja Z N-[3-(bentsyylioksikar- bonyyli)-2-(2-metyylipropyyli)propenoyy1i-0-metyy1i-L-ty-rosiini-N-metyyliamidia vaaleanruskeana kiteisenä kiinteänä aineena (sp. 167-169°C).

30 ^25^30^2^5

Havaittu: C, 68,3; H, 7,1; N, 6,3 %

Laskettu: C, 68,5; H, 6,9; N, 6,4 % (c) N-[3-karboksi-2-(2-metyylipropyyli)propanoyy-li-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi 35 E- ja Z-N-[3-(bentsyylioksikarbonyyli)-2-(2-metyy- lipropyyli )propenoyyli] -O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyli- ie 84472 amidia (1,7 g, 0,0039 mol) hydrattiin 50°C:ssa ja 4,1 bar (60 psi) paineessa 5 tuntia metanolin (50 ml) ja 10 % palladiumia hiilellä läsnäollessa (0,5 g). Saatu seos suodatettiin Celiten läpi ja liuotin poistettiin haihduttamalla 5 vakuumissa, jolloin saatiin N-[3-karboksi-2-(2-metyylipro- pyyli )propanoyyli] -O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidin diastereomeeriseos, kiinteä väritön tuote (1,4 g), joka erotettiin kromatografiala, normaalifaasi-piidioksidilla, jolloin saatiin isomeerit A ja B, joita esittää seuraava 10 yleinen rakennekaava 0CH3 /«. 6

” S f", ° V

11 | 2 II I 2 II

HOC - CH - CH - CNH - CH -CNHCH-1 R tai S S 3 20 (d) N-[3-(N'-hydroksikarboksiamido)-2-(2-metyyli- propyyli)propanyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi Esimerkissä 1(e) kuvatuilla menetelmillä erotetut N-[3-karboksi-2-( 2-metyylipropyyli) pr opanoyyli ] -0-me tyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidin isomeerit muunnettiin vastaa-.·. 25 viksi hydroksaamihapoiksi, jolloin saatiin isomeerit A ja B, joita esittää yleinen rakennekaava 0CH3 30 ™3\ /CH3 lii XCB/ 'w-1

g ?H2 0 CH0 O

Il I 2 II I 2 Ϊ HOUNC - CII2 - CH - CNII - CII - CNHCII, R tai S S 3 35 i9 84472

Isomeeri A (sp. 190-195°C).

^19^29^3()5 · 0,2 H20

Havaittu: C, 59,5; H, 7,5; N, 10,6 %

Laskettu: C, 59,6; H, 7,5; N, 11,0 % 5 NMR (d6-DMSO) 0,7-0,9 ( 6H,m, {CH3}2CH); 1,3 (lH,m, (CH3}2CH); 1,9-2,2 (3H, 2xm, CH2CH); 2,50 (3H,m, CHCH2CO+CH2CHCO); 2,6 ( 2H,m, ArCH2); 2,6 (3H,d,NHCH3); 3,7 (3H,s,OCH3); 4,3-4,4 (1H,m,ArCH2CH); 6,75-7,1 (4H,2xd, 10 J=8Hz,aromaattinen); 7,9 (1H,m,NHCH3); 8,05 (1H,d,CONHCH); 8,65 (1H,s,NHOH (D20-vaihto)); 10,4 (1H,s,NHOH {D20 vaihto}).

Isomeeri B (sp. 179-182°C).

C19H29N305 · 0,9H20 15 Havaittu: C, 57,6; H, 7,8; N, 10,4 %

Laskettu: C, 57,7; H, 7,9; N, 10,6 % NMR (d6-DMSO) 0,5-0,8 ( 6H,m, {CH3 )2CH) ; 1,1-1,25 (lH,m, {CH3}2CH); 1,9-2,2 (3H, 2xm,CH2CH); 2,5 (3H,m,CH2CHCO); 2,60 20 ( 2H, m, ArCH2); 2,65 (3H,d, NHCH3); 3,70 (3H, s,OCH3), 4,3-4,4 (lH,m,ArCH2CH); 6,8 ja 7,15 (4H,2xd, J=8Hz,aromaattinen); 7,9 (lH,m,NHCH3); 8,35 (1H,d,CONHCH); 8,8 (1H,s,NHOH {D20 vaihto}); 10,5 (lH,s,NHOH (D20-vaihto}) Esimerkki 3 25 N-13-(N' -hydroksikarboksiamido )-2-( 2-metyylipropyy- li)butanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi (a) etyyli-2-(dietyylifosfoni)propanoaatti Etyyli-2-bromipropanoaattia (30,0 g) ja trietyyli- fosfiittia (70,0 g) lämmitettiin yön yli 150°C:n lämpöti-30 lassa, ilmajäähdyttimen alla. Saatu raaka seos puhdistet tiin tislaamalla, etyyli-2-(dietyylifosioni)propanoaatti otettiin talteen 66-68°C:n lämpötilassa, 0,3 - 0,5 mmHg paineessa.

(b) E- ja Z -bentsyyli-3-(etoksikarbonyyli)-2-(2- 35 metyylipropyyli)butenoaatti 20 84472

Etyyli-2-(dietyylifosfoni)propanoaattia (23,9 g) lisättiin kuivaan tolueeniin (250 ml), joka sisälsi 80 % natriumhydridiä mineraaliöljyssä (3,0 g) huoneen lämpötilassa. Saatu seos lämmitettiin 50-60°C:n lämpötilaan 5 mi-5 nuutiksi ja jäähdytettiin sitten -30 - -40°C:seen. Jäähdytettyyn seokseen lisättiin bentsyyli-4-metyyli-2-oksopen-tanoaattia (20 g) ja saadun seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan 1 tunnin aikana. Tolueeniliuos pestiin laimealla sitruunahapolla (50 ml), vedellä (2x50 ml) ja 10 kuivattiin sitten vedettömällä natriumsulfaatilla. Toluee-ni poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin E- ja Z -bentsyyli-3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli Jbutenoaattia isomeerien seoksena öljyn muodossa.

(c) 3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli)bu- 15 taanihappo E- ja Z -bentsyyli-3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli )butenoaatt ia (5,0 g) hydrattiin 8,2 bar (120 psi) paineessa 60°C:n lämpötilassa metanolissa (50 ml), kun läsnä oli 10 % palladiumia hiilellä (0,25 g), 48 tuntia. 20 Saatu seos suodatettiin Celiten läpi, ja liuotin poistet tiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin 3-(etoksikarbonyyli )-2-( 2-metyylipropyyli )butaanihappoa isomeerien seoksena, paksun öljyn muodossa.

(d) N-[3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli)- 25 butanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi

Seosta, jossa oli 3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli )butaanihappoa (7,5 g, 0,037 mol) ja dikloorime-taania (70 ml), sekoitettiin ja jäähdytettiin 0°C:n lämpötilaan. Seokseen lisättiin tipoittain liuosta, jossa oli 30 N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (7,6 g, 0,37 mol) di-kloorimetaanissa (20 ml), ja reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Liuosta, jossa oli O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia (7,7 g, 0,037 mol) dikloorime-taanissa (45 ml), lisättiin reaktioseokseen, ja saatua 35 seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Kylläs- 21 84472 tettyä natriumbikarbonaattiliuosta (100 ml) lisättiin reaktioseokseen, ja saatua seosta sekoitettiin vielä tunti. Reaktioseos suodatettiin ja orgaaninen kerros otettiin talteen ja kuivattiin sitten vedettömällä natriumsulfaa-5 tiliä. Liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin tarttuva ruskea kiinteä aine. Kiinteä aine puhdistettiin kromatografisesti normaalifaasin piidioksidilla eluoiden 20 % heksaanilla etyyliasetaatissa, jolloin saatiin N-[3(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli)buta-10 noyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia 4 diastereo- meerin seoksena.

(e) N-[3-(karboksi-2-(2-metyylipropyyli)butanoyy-li]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi N-[3-(etoksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli)buta-15 noyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia (2,0 g, 0,0051 mol) hydrolysoitiin lisäämällä metanolia (30 ml), joka sisälsi 0,1M natriumhydroksidiliuosta (6 ml, 0,006 mol). Liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, ja saatu kumi pestiin dietyylieetterillä (2x25 ml). Kumi teh-20 tiin happamaksi 0,1M vetykloridihappoliuoksella, ja seos uutettiin dikloorimetaanilla (2x50 ml). Yhdistetyt uutokset kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin N-[3-karboksi-2-(2-metyylipropyyli)butanoyyli]-O-metyyli-L-25 tyrosiini-N-metyyliamidia isomeerien seoksena, ei-valkoi- sena kiinteänä aineena (1,9 g, 0,0052 mol).

(f) N-[3-(N'-hydroksikarboksiamido)-2-(2-metyylipropyyli )butanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi N- [3-karboksi-2-( 2-metyylipropyyli )butanoyyli ] -0-30 metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidin isomeerien seosta (1,5 g, 0,0041 mol), O-bentsyylihydroksyyliamiinihydrokloridia (0,09 g, 0,0061 mol), N-etyyli-N*-(3-dimetyyliaminopropyy-li)karbodi-imidi-hydrokloridia (1,17 g, 0,0061 mol) sekoitettiin yön yli tetrahydrofuraanissa (10 ml) huoneen läm-35 pötilassa. Liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa.

22 8 4 4 72 jolloin saatiin keltainen kumi, joka jaettiin dikloori-metaaniin (50 ml) ja laimeaan natriumbikarbonaattiliuok-seen (50 ml). Orgaaninen faasi pestiin laimealla sitruuna-hapolla (25 ml) ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaa-5 tiliä. Liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin O-bentsyylihydroksaanihapon 4 diastereomeerin seos kumin muodossa. Seos liuotettiin etanoliin (20 ml) syklohekseenin kanssa (15 ml), ja 10 % palladiumin hiilellä kanssa (150 mg), ja saatua seosta kuumennettiin pa-10 lautusjäähdyttäen 10 minuuttia. Seos suodatettiin Celiten läpi, ja liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin N-[3-(N'-hydroksikarboksiamido)-2-(2-me-tyylipropyyli )butanoyyli] -O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyli-amidin 4 diastereomeeriä valkoisena kiinteänä aineena, 15 jota esittää rakennekaava 0CH3 “V- ό 20 I j

i? 9H3 ?H? 0 CH_ O

„ Il I I 2 II | 2 II

HOHNC - CH - CH - CNH - CH - CNHCH

R tai S R tai S S 3 25 Isomeerien seos erotettiin kahdella pylväskromato- grafia-operaatiolla normaalifaasi-piidioksidilla eluoiden ensimmäisessä pylväässä 5 % metanolilla etyyliasetaatissa ja toisessa pylväässä dikloorimetaani/metanoli/etikkahap-po/heksaani -seoksella (20:5:1,5:20).

30 4 isomeeriä merkittiin isomeereiksi A, B, C ja D

kuvaamaan niiden euloitumista kolonnista.

Isomeeri A (sp. 158-162°C).

^20^31^3()5

Havaittu: C, 58,4; H, 7,6; N, 10,3 % 35 Laskettu: C, 58,4; H,8,1; N, 10,2 % 23 84472 NMR (d6-DMSO) 0,53-0,71 (6H, m, {CH3)2CH); 0,73 (1H, m, (CH3}2CH); 0,82 (2H, m, CHCH2CH); 1,02 (3H, d, J=7Hz, CH3CH); 2,15 (1H, m, CH3CH); 2,31 (1H, m, CH3CHCH); 2,55 (2H, m, ArCH2); 2,65 (3H, d, J=5Hz, NHCH3); 3,71 (3H, s, 5 OCH3); 4,30 (1H, m, ArCH2CH); 6,80 ja 7,12 (4H, kaksi d:tä, J = 8Hz,aromaattinen); 7,51 (1H, m, NHCH3); 8,36 (1H, d, J=8Hz, CONHCH); 8,84 (1H, s, NHOH {D20 vaihto}); 10,68 (1H, s, NH0H{D20 vaihto}).

Isomeeri B (sp. 168-174°C). Havaittu: tarkka massa 394,2359 10 C2oH3iN3°5 (M+l) edellyttää 394,2342.

NMR (d6-DMS0) 0,72-0,90 (7H, m, (CH3)2CH); 105 (2H, m, CHCH2CH); 1,45 (3H, m, CH3CH); 2,15 (1H, m, CH3CH); 2,44 (1H, m, CHjCHCH); 2,58 (2H, m, ArCH2); 2,64 (3H, d, J=4Hz, NHCH3); 3,71 (3H, s. 0CH3); 4,26 (1H, m, ArCH2CH); 6,82 ja 15 7,16 (4H, kaksi d:tä, J=7Hz,aromaattinen); 7,25 (1H, m, NHCH3); 8,26 (1H, d, J=7Hz, CONHCH); 8,83 (1H, s, NHOH {D20-vaihto} ); 10,64 (1H, s, NHOH {D20-vaihto} ).

Isomeeri C (sp. 179-184°C. Havaittu: tarkka massa 394,2359, C2oH31N305 (M+l) edellyttää 394,2342.

20 NMR (d6-DMSO) 0,64-0,92 (9H, m, {CH3}2CHCH2); 1,30 (3H, m, CH3CH); 2,20-2,40 (2H, m, CH3CH ja CH3CHCH); 2,45 (2H, m, ArCH2); 2,55 (3H, d, J=4Hz, NHCH3); 3,68 (3H, s, OCH3 ); 4,45 (1H, m, ACH2CH); 6,80 ja 7,16 (4H,kaksi d:tä, J=7Hz,aromaattinen); 7,72 (1H, m, NHCH3); 8,18 (1H, d, J=7Hz, 25 CONHCH3); 8,72 (1H, s, NHOH {D20-vaihto}); 10,37 (1H, s, NHOH (D20-vaihto})

Isomeeri D (sp. 215-220°C).

C20H3iN3O5

Havaittu: C, 60,7; Η, 7,9; N, 10,4 % 30 Laskettu: C, 61,0; H, 7,9; N, 10,7 % NMR (d6-DMSO) 0,52-0,70 (7H, m, (CH3}2CH); 0,72 (2H, m, CHCH2CH); 0,90 (3H, d, J=6Hz, CH3CH); 2,08 (1H, m, CH3CH); 2,40 (1H, m, CH3CHCH); 2,50-2,90 (2H, m, ArCH2); 2,60 (3H, d, J=4Hz, NHCH3); 3,70 (3H, s, 0CH3); 4,45 35 (1H, m, ArCH2CH); 6,80 ja 7,17 (4H,kaksi d:tä, J=7Hz, aro- 24 84472 maattinen); 7,90 (1H, in, NHCH3); 8,28 (1H, d, J=8Hz, CONHCH); 8,75 (1H, s, NHOH {D20-vaihto}); 10,46 (1H, s, NHOH {D20-vaihto}).

Esimerkit 4-6 5 Seuraavat yhdisteet valmistettiin esimerkissä 3 käytetyillä menetelmillä käyttämällä sopivia lähtöaineita: Esimerkki 4 N-[3-(N' -hydroksikarboksiamido )-2-( 2-metyylipropyy-li )-3-fenyylipropanoyyli]-0-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyli-10 amidi, jota esittää yleinen rakennekaava 0CH3 ' /“3 [Λ

15 f,] I V

ί V T2 ? T2 f

HOHNC - CH - CH - CNH - CH - CNIICH R tai S R tai S S J

20 Isomeeri A (sp. 196-200°C).

C25H33N305 - 0,2 H20

Havaittu: C, 65,5; H, 7,3; N, 9,1 %

Laskettu: C, 65,4; H, 7,3; N, 9,1 %

Isomeeri B (sp. 179-182eC).

25 C25H33N305 ♦ 0,5 H20

Havaittu: C, 65,0; H, 7,4; N, 8,7 %

Laskettu: C 64,6; H, 7,4; N, 9,1 %

Esimerkki 5 N- [3-(N' -hydroksikarboksiamido )-2-metyylipropanoyy-30 li]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi, jota esittää yleinen rakennekaava OCH, 0

° 9H3 0 CH O

HOIINC - CH2 - CH - CNH - CH - CNIICH R tai S S

35 25 84 4 72 (sp. 184°C). Havaittu: tarkka massa 338,1723; C16H24N305 (M+l) edellyttää: 338,1716.

Esimerkki 6 N- [3- (N' -hydroksikarboksiamido )propanoyyli ] -O-me-5 tyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi, jota esittää yleinen rakennekaava OCH- Φ ° 0 CH o i il i il

HOHNC - CH - CH0 - CNH - CH - CNHCH

^ S 3 15 (sp. 213°C). Havaittu: tarkka massa 324,1559; C15H22N305 (M+l) edellyttää 324,1559.

Esimerkki 7 N- [3- (N' -hydroksikarboksiamido) -2- (2-metyylipropyy-20 li)propenoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi (a) E- ja Z-N-[3-karboksi-2-(2-metyylipropyyli)pro-penoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi E- ja Z-N-[3-(bentsyylioksikarbonyyli)-2-(2-metyy-lipropyyli ] propenoyyli ] -O-me tyyli - L- tyrosi ini -N-metyyl i -25 amidia (3,0 g) kuumennettiin palautusjäähdyttäen 2 tuntia etanolissa (60 ml) ja syklohekseenissä (30 ml), kun läsnä oli 10 % palladiumia hiilellä (0,75 g). Saatu reaktioseos suodatettiin Celiten läpi, ja liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin kumia. Tämä kumi ki-30 teytettiin metanoli/vesi-seoksesta, jolloin saatiin E- ja Z-N- [3-karboksi-2-( 2-metyylipropyyli )propenoyyli] -0-metyy-1i-L-tyrosiini-N-metyy1iamidia.

(b) N-[3-(N'-hydroksikarboksiamido)-2-(2-metyyli-propyyli)propenoyyli-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi 35 E- ja Z-N-[3-karboksi-2-(2-metyylipropyyli)prope- noyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia (0,2 g, 26 84472 0,00055 mol) liuotettiin veden (3 ml) ja dimetyyliformami-din (5 ml) seokseen. O-bentsyylihydroksyyliamiini-hydro-kloridia (0,137 g, 0,00083 mol) lisättiin seokseen. Saatuun seokseen lisättiin N-etyyli-N'-(3-dimetyyliaminopro-5 pyyli)karbodi-imidi-hydrokloridia (0,164 g, 0,00083 mol), ja seoksen pH säädettiin arvoon 4,5 lisäämällä 2M natrium-hydroksidiliuosta. Seosta sekoitettiin 1 tunti huoneen lämpötilassa ja uutettiin etyyliasetaatilla (3x25 ml). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutokset pestiin laimealla sit-10 ruunahapolla (25 ml), kyllästetyllä natriumbikarbonaatti-liuoksella (2x15 ml) ja suolavedellä (25 ml), ja kuivattiin sitten vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin valkea kiinteä aine (0,22 g). Kiinteää ainetta kuumennettiin pa-15 lautusjäähdyttäen 30 minuuttia etanolin (8 ml), syklohek-seenin (4 ml) ja 10 % palladiumin hiilellä (200 mg) seoksessa. Reaktioseos suodatettiin Celiten läpi ja liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin väritön kiinteä aine. Kiinteä aine puhdistettiin käänteis-20 faasi-kromatografialla eluoiden 60 % metanolilla vedessä, jolloin saatiin N-[3-(N'-hydroksikarboksiamido)-2-(2-me-tyylipropyyli)propenoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyy-liamidia (sp. 183-187°C).

^19^27^3^5 25 Havaittu: C, 60,9; H, 7,6; N, 10,8 %

Laskettu: C, 60,5; H, 7,2; N, 11,1 %, jota esittää yleinen rakennekaava: 0CH3 y/"3 φ 9 CH o CH_ o

Il I 2 II I 2 II

HOHNC - CH = c - CNH - CH - CNHCH-,

35 S J

27 84472

Esimerkit 8-17

Seuraavat yhdisteet valmistettiin esimerkissä 2 käytetyllä menetelmällä käyttämällä sopivia lähtöaineita. Esimerkki 8 5 N- [ 3 - (N' -hydroksikarboksiamido )-2-( 2-metyylipropyy- li)propanoyyli]-L-alaniini-N-metyyliamidi, jota esittää yleinen rakennekaava CH» CH» X / d 10 0 CH O CH»0

Il I II I 3« HOHN-C-CH2-CH-C-NH-CH-C-NHCH3

Isomeeri A (sp. 186-187°C).

Ci2H23N304 ♦ 0,2 H20 15 Havaittu: C, 52,2; H, 8,2; N, 15,0 %

Laskettu: C, 52,0; H, 8,5; N, 15,2 %

Isomeeri B (sp. 181-182°C).

c12h23n304 · 0,1 h2o

Havaittu: C, 52,5; H, 8,5; N, 15,3 % 20 Laskettu: C, 52,3; H, 8,5; N, 15,3 %

Esimerkki 9 N- [3-(N' -hydroksikarboksiamido)-2-( 2-metyylipropyy-li)propanoyyli]-L-tyrosiini-N-metyyliamidi, jota esittää yleinen kaava

25 OH

<!>

on ° CH O CH» O

30 H i il I 2 n

HOHNC - CH2 -CH-C-NH-C-C- NHCH3 Isomeeri A

^18^27^3^5 35 Havaittu: C, 59,3; H, 7,7; N, 10,6 %

Laskettu: C, 59,2; H, 7,4; N, 11,5 % 28 84472 NMR (d6-DMSO): 0,74 ( 6H,m, [CH3]2CH); 0,90-1,06 (1H, m, [ CH3 ] 2CH); 1,19-1,43 (2H, m, CHCH2CH); 1,94-2,24 (2H, m, COCH2CH); 2,59 (3H, d, J = 6Hz, NHCH3); 2,60-3,02 (3H, m, CH2CH ja CH2Ar); 4,29 (1H, m, NHCH[CH2]CO); 6,61 ja 6,99 5 (4H, AA1 BB1 systeemi, JAB = 8 Hz, Ar); 7,88 (1H, m, CONHCH); 8,00 (1H, d, J=7Hz, NHCH3); 8,80 (1H, s, nHOH); 9,15 (1H, s, ArOH); 10,44 (1H, s, NHOH).

Isomeeri B C18H27N305 · 0,25 H20 10 Havaittu: C, 58,6; H, 7,4; N, 10,9 %

Laskettu: C, 58,4; H, 7,5; N, 11,3 % NMR (d6-DMS0): 0,62 ja 0,73 (kukin 3H, kukin d, J=5Hz, [CH3]2CH); 0,75-0,87 (2H, m, CHCH2CH); 2,20 (1H, m, [ CH3 ] 2CH); 1,91-2,24 (2H, m, COCH2CH); 2,45-2,60 (2H, m, 15 CH2Ar); 2,63 (3H, d, J=5Hz, NHCH3); 3,12 (1H, m, CH2CH[CH2]CO); 4,28 (1H, m, NHCH[CH2]CO); 6,61 ja 7,01 (4H, AA1 BB1 systeemi, JAB=8Hz, Ar); 7,91 (1H, d, J=5Hz, CONHCH); 830 (1H, d, J=7Hz, NHCH3); 8,79 (1H, s, NHOH); 9,16 (1H, s, ArOH); 10,55 (1H, s, NHOH).

20 Esimerkki 10 N- [3 -(Ν' -hydroksikarboksiamido)-2-(2-metyylipropyy-li Jpropanoyyli]-O-bentsyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi, jota esittää yleinen rakennekaava: 25 ί " CH2 CH., CHn ^ / 3 M)

CH

n K ft ?h2 jj 30 HOHNC - CH2 - CH - c - NH - CH - 'c - NHCH^

Isomeeri A ^25^33^3^5 * 0,6 H20

Havaittu: C, 64,5; H, 7,2; N, 8,4 % 35 Laskettu: C, 64,4; H, 7,4; N, 9,0 % 29 84 472

Rf=0,26 normaalitaasi-piidioksidilla, ohutkerros-kromato-grafiällä 9:1 dikloorimetaani/metanoli -seoksessa. Isomeeri B C25H33N3O5 · 0,3 H20 5 Havaittu: C, 65,1; H, 7,2; N, 8,8 %

Laskettu: C, 65,1; H, 7,3; N, 9,1 % NMR (d6-DMS0): 0,63 ja 0,73 (3H kukin, kukin s, [CH3]2CH; 0,78-0,90 (2H, m, CHCH2CH); 2,24 (1H, m, tCH3]2CH); 1,94-2,28 (2H, m, C0CH2CH); 2,64 (3H, d, J=5Hz, 10 NHCH3); 2,45-2,60 (2H, m, CH2C6H4); 3,11 (1H, m, CH2CH[CH2]C0); 4,38 (1H, m, NHCH [CH2]C0); 5,08 (2H, s, 0Η206Η5); 6,92 ja 7,19 (4H, AA1 BB1 systeemi, JAB = 8Hz, C6H4); 7,32-7,48 (5H, m, C5H5); 7,98 (1H, d, J=4Hz, CONHCH) ; 8,39 (H, d, J=8Hz, NHCH3); 8,86 (1H, m, NHOH); 10,60 (1H, 15 s NHOH).

Esimerkki 11 N-[3-(N'-hydroksikarboksiamido)-2-(2-metyylipro-pyyli)propanoyyli]-L-fenyylialaniini-N-metyyliamidi, jota esittää yleinen rakennekaava 20 y· 9

P CH_ 0 CH O

25 II I 2 H I 2 S

H0HNC - CH2 - CH - C - NH - CH - C - NHCH^

Isomeeri A (sp. 157-166°C).

C18H27N304 30 Havaittu: C, 61,8; H, 7,8; N, 11,5 %

Laskettu: C, 61,9; H, 7,8; N, 12,0 % NMR (d6-DMS0): 0,71 (3H, d, J=6Hz, [CH3]2CH); 0,76 (3H, d, J=6Hz, [CH3]2CH); 0,92 (1H, m, [CH3]2CH); 1,26 (2H, m, CHCH2CH); 1,95 (2H, m, COCH2CH); 2,50-2,85 (1H, m, 35 CH2CH[CH2]CO); 2,57 (3H, d, J=5,5Hz, NHCH3); 2,76-3,08 (2H, 30 84472 m, CH2Ar); 4,37 (1H, m, NHCH(CH2CO); 7,21 (5H, m, Ar); 7,92 (1H, d, J = 4,5Hz, CONHCH); 8,07 (1H, d, J=8Hz, CONHCH3) ; 8,79 (1H, s, CONHOH); 10,42 (1H, s, NHOH).

Isomeeri B (sp. 150-152°C). Havaittu: tarkka massa 5 350,20857; C18H28N304 (M+l) edellyttää 350,20798.

Esimerkki 12 N- [3-(Ν' -hydroksikarboksiamido)-2-(2-butyyli )propa-noyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi, jota esittää yleinen rakennekaava

10 OCH

Γ Φ

O (CH-)_ O CH- O

15 II I 2 II I 2 II

Η0ΗΝΗ - C - CH2 - CH C - NH - CH - C - NHCH-j

Isomeeri A (sp. 195-196°C). Havaittu: tarkka massa 380,2124, CigH30N3O5 (M+l) edellyttää 380,2185.

20 NMR (d4-metanoli): 0,86 (3H, t, J=7Hz, CH3); 1,0-1,5 (6H, M, 3x CH2); 2,0-2,4 (2H, m, CH2CH); 2,5-2,7 (1H, m, CH2CH); 2,8-3,2 (2H, m, -CH2ArOMe); 3,76 (3H, s, OCH3); 4,46 (1H, m, CHCH2Ar); 6,84 (2H, d, J=7Hz, ArH); 7,14 (2H, d, J=7Hz, ArH).

25 Isomeeri B (sp. 164-165°C). Havaittu: tarkka massa 380,2150, C19H30N305 (M+l) edellyttää 380,2185.

Esimerkki 13 N- [ 3- (N' -hydroksikarboksiamido) -2-bentsyylipropano-yyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi, jota esittää 30 yleinen rakennekaava OCH3 9 9

35 II ?H2 ,9 CH_ O

Il I II I 2 II

HOHNC - CH2 - CH — C - NH - CH — C - NHCH3 3i 84472

Isomeeri A (sp. 172-173°C, haj.) C22H2VN305 · 0,2 H20

Havaittu: C, 63,4; H, 6,6; N, 10,1 %

Laskettu: C, 63,4; H, 6,6; N, 10,1 % 5 NMR (d6-DMS0): 1,8-2,2 (2H, m, CH2CH), 1,52 (3H, d J=4Hz, CH3NH); 1,6-3,0 (5H, m, CH2Ar, CH2Ph, CHCO); 3,70 (3H, s, 0CH3) 4,28 (1H, m, CH CH2 Ar): 6,84-7,24 (4H kukin d, J=7Hz, C6H4); 7,04 (5H, M, C6H5); 7,40 (1H, m, NHCH3); 8,10 (1H, d, J=7Hz, CONHCH); 8,80 (1H, s, CONHOH); 10,44 10 (1H, s, NHOH).

Isomeeri B (sp. 154-155°C, haj ).

C22H27N305 - 0,2 HzO

Havaittu: C, 63,3; H, 6,6; N, 10,1 %

Laskettu: C, 63,4; H, 6,6; N, 10,1 % 15 Havaittu: tarkka massa 414,1960, C22H28N305 edellyttää 414,2029.

Esimerkki 14 N- [3-(N' -hydroksikarboksiamido) -2-fenetyylipropa-noyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi, jota esittää 20 yleinen rakennekaava och3 25 ^ φ o (CH.) 9 CH o

Il I 2 2 II | 2 II

HOHNC - CH2 - CH — C - ΝΗ - CH — c - NHCH.J

30 Isomeeri A (sp. 200-202°C).

C23H29N305 -0,4 H20

Havaittu: C, 63,4; H, 6,8; N, 9,6 %

Laskettu: C, 63,5; H, 6,9; N, 9,7 %

Isomeeri B (sp. 215-216°C) 35 C23H29N305 32 84472

Havaittu: C, 64,5; H, 6,8; N, 98,8 %

Laskettu: C, 64,6; H, 6,8; N, 9,8 %

Esimerkki 15 N-[3-(N'-hydroksikarboksiamido)-2-metyylisyklohek-5 syylipropanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi, jota esittää yleinen rakennekaava OCH3 9 ό

0 CH- O CH„ O

Il I 2 11 T 2 II

HOHNCCH - CH — C - NH - CH — C - NHCH

z 3 15

Isomeeri A (sp. 174-176°C).

^22^33^3^5 * 0 / ^ H20

Havaittu: C, 62,6; H, 8,0; N, 9,9 %

Laskettu: C, 62,5; H, 8,0; N, 9,9 % 20 Isomeeri B (sp. 168-170°C).

C22H33N305 ‘0,2 H20

Havaittu: C, 62,5; H, 7,8; N, 10,0 %

Laskettu: C, 62,5; H, 8,0; N, 9,9 %

Esimerkki 16 25 N- [3-N' -hydroksikarboksiamido )-2-( 3-etyyli )butyyli- propanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi, jota esittää yleinen rakennekaava OCH3 30 CH3CH^/C«2CK3 fj| n 9H2 9 CH, 0

Il I 2 II I 2 11

HOHN - C - CH2 ~ CH — C - NH - CH — C - NHCH

35 3 33 8 4 4 7 2

Isomeeri A (sp. 186-187°C). c21h33n3o5

Havaittu: C, 61,9; H, 8,1; N, 10,3 %

Laskettu: C, 61,9; H, 8,2; N, 10,3 % Havaittu: tarkka mas-5 sa 408,24955, C21H32N306 (M+l) edellyttää 408,2498 Isomeeri B (sp. 188-190°C).

c21h33n3o5

Havaittu: C, 61,6; H, 8,1; N, 10,2 %

Laskettu: C, 61,9; H, 8,2; N, 10,3 % 10 Esimerkki 17 N-[3-(N'-hydroksikarboksiamido)-2-metyylisyklopen-tyylipropanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini, jota esittää yleinen rakennekaava 1C OCH, 15 I 3 ? 9

Il ί 2 H f2 I? 20 Η0ΗΝ - C - CH2 - CH - S . N„ . £„ _ H . NHCH3

Isomeeri A (sp. 172-174°C).

C21H31N305 25 Havaittu: C, 61,8; H, 7,7; N, 10,2 %

Laskettu: C, 61,9; H, 7,7; N, 10,3 %

Isomeeri B (sp. 165-166°C).

C21H31N305 · 0,7 H20

Havaittu: C, 60,3; H, 7,5; N, 10,0 % 30 Laskettu: C, 60,3; H, 7,8; N, 10,1 %

Esimerkit 18 ja 19

Seuraavat yhdisteet valmistettiin esimerkissä 3 käytetyllä menetelmällä käyttäen sopivia lähtöaineita. Esimerkki 18 35 N- [3-(N' -hydroksikarboksiamido)-2-(2-metyylipropyy- li)heptanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi,jota 34 84472 esittää yleinen rakennekaava 0CH3 f, 6 »H. J -Ϊ - CH - ! „ f’ 8 | H C - NH - CH — C - NHCH3 f2

ίο I

CH

/ \ CH3 CH3

Valmistettiin neljän isomeerin seoksena 15 C23H37N3°5 * 0,2 H2°

Havaittu: C, 62,9; H, 8,6; N, 9,4 %

Laskettu: C, 62,9; H, 8,6; N, 9,6 %

Esimerkki 19 N- [3- (N' -hydroksikarboksiamido)-2- ( 2-metyylipropyy-20 li)butanoyyli]-L-alaniini-N-metyyliamidi, jota esittää yleinen rakennekaava CH3\ ^CH3

CH

25 0 CHo0 CHo0 H I 2|l I 3 II H0HN-C-CH-CH-C-NH-CH-C-NHCHo I 3 CH3

Isomeeri A (sp. 166-170°C).

30 C13H25N304 · 0,7 H20

Havaittu: C, 52,1; H, 8,4; N, 13,8 %

Laskettu: C, 52,0; H, 8,9; N, 14,0 %

Isomeeri B (sp. 230°C).

C13H25N304 . 0,3 H20 35 Havaittu: C, 53,2; H, 8,6; N, 14,0 %

Laskettu: C, 53,3; H, 8,8; N, 14,3 %.

35 84472

Esimerkki 20 N- [3-(N' -hydroksikarboksiamido )-2-( 2-metyylipropyyli )-A2'3-butenoyyli-0-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi (a) E- ja Z-N-[3-(etyylioksikarbonyyli)-2-(2-metyy-5 lipropyyli)-A2'3-butenoyyli] -O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyy- liamidi

Kalium-tertiääristä butoksidia (1,78 g, 0,016 mol) suspendoitiin kuivaan dimetyyliformamidiin (50 ml). Suspensioon lisättiin etyyli-2-(dietyyl if ostoni )propanoaattia 10 (3,8 g, 0,016 mol) huoneen lämpötilassa. Reaktioseosta se koitettiin huoneen lämpötilassa 0,5 tuntia. N-(4-metyyli-2-oksopentanoyyli )-0-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia (1,28 g, 0,004 mol) lisättiin annoksittain reaktioseokseen 10 minuutin aikana, jolloin saatiin punainen liuos. Liuos-15 ta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia ja kaadettiin sitten veteen (500 ml). Saatu seos uutettiin etyyliasetaatilla (2x100 ml) ja tuote liuotettiin uudelleen veteen (100 ml), ja emäksinen vesiliuos uutettiin eetterillä (2x100 ml). Vesiliuoksen pH säädettiin arvoon 4 lisäämällä 20 0,1N vetykloridihappoa ja uutettiin sitten uudelleen di- kloorimetaanilla (4x100 ml). Dikloorimetaaniuutokset kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, ja liuotin poistettiin vakuumissa, jolloin saatiin E-ja Z-N-[3-kar-boksi-2-( 2-metyylipropyyli )-A2,3-butenoyyli] -0-metyyli-L-25 tyrosiini-N-metyyliamidia (0,9 g, 0,0023 mol).

(b) N-[3-(N’-hvdroksikarboksiamido)-2-(2-metyylipropyyli )-A2’3-butenoyyli-0-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyli-amidi E- ja Z-N-[3-karboksi-2-( 2-metyylipropyyli )-Δ2'3-30 butenoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi (0,6 g, 0,0015 mol) liuotettiin tetrahydrofuraaniin (10 ml). 0-bentsyylihydroksyyliamidi-hydrokloridia (0,36 g, 0,0025 mol) lisättiin ja sen jälkeen N-etyyli-N’-(3-dimetyyliami-nopropyyli)karbodi-imidi-hydrokloridia. Seoksen pH säädet-35 tiin arvoon 4,5 lisäämällä 2M natriumhydroksidiliuosta. Seosta sekoitettiin 1 tunti huoneen lämpötilassa ja uutet- 36 84472 tiin etyyliasetaatilla (3x25 ml). Yhdistetyt etyyliase-taattiuutokset pestiin vedellä (2x25 ml), suolavedellä (25 ml) ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Etyyliasetaatti poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jol-5 loin saatiin raaka kiinteä tuote. Tämä kiinteä aine puhdistettiin kromatograafisesti normaalifaasin piidioksidilla, jolloin saatiin puhdasta E- ja Z-N-[3-(etyylioksikar-bonyyli) -2- (2-metyylipropyyli) - A2-3-butenoyyli] -O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia (1,2 g, 0,003 mol).

10 (c) E- ja Z-N-[3-karboksi-2-(2-metyylipropyyli)- Δ2/3-butenoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidi Tätä N-[3-(etyylioksikarbonyyli)-2-(2-metyylipropyyli ) -A2'3-butenoyyl i ] -0-metyyli - L- tyros i ini -N-metyyl iami -din isomeerien seosta (1,2 g, 0,003 mol) kuumennettiin 15 palautusjäähdyttäen 8 tuntia 0,1N kaliumhydroksidin (40 ml) ja metanolin (80 ml) seoksessa. Liuottimet poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin raaka tuote.

(3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidi-hydrokloridia (0,48 g, 0,0025 mol) liuotettiin veteen (2 ml). Seoksen pH 20 säädettiin arvoon 4,5 lisäämällä trietyyliamiinia. Seosta sekoitettiin 2 päivää huoneen lämpötilassa. Seos kaadettiin veteen (50 ml) ja saatu liuos uutettiin etyyliasetaatilla (3x50 ml). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutokset kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin 25 poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin raaka tuote valkoisena kiinteänä aineena. Kiinteä aine puhdistettiin kromatografisesti normaalifaasi-piidioksi-dilla, jolloin saatiin puhdasta tuotetta (0,35 g) valkeana kiinteänä aineena. Kiinteätä ainetta kuumennettiin palau-30 tusjäähdyttäen 0,5 tuntia etanolin (20 ml), sykloheksaanin (10 ml) ja 10 % palladiumin hiilellä (200 mg) seoksessa. Reaktioseos suodatettiin Celiten läpi, ja liuottimet poistettiin haihduttamalla vakuumissa, jolloin saatiin valkea kiinteä aine. Kiineä aine puhdistettiin hiertämällä etyy-35 liasetaatin (10 ml) kanssa, ja sen jälkeen suodatettiin ja 37 84 472 kuivattiin, jolloin saatiin (c) yhtenä isomeerinä (0,15 g) (sp. 120-129 °C).

c20h29o5h2o

Havaittu: C, 58,6; H, 7,6; N, 10,3 % 5 Laskettu: C, 58,7; H, 7,6; N, 10,3 %, jota esittää yleinen rakennekaava 0CH3 v,j 6

0 1 I

(? ?H2 9 CH 0

1 I 2 II

HOHNC - C=C — c_N„ H

| C NH - CH — c - NHCH3

CH

15 20

Claims

38 84472

1. Menetelmä kollagenaasi-inhibiittorien valmistamiseksi, jotka perustuvat hydroksiaminohappoon ja joilla 5 on kaava (I),

0. R2 0 Il II IX HOHN-C-A-CNH-CH-CNHR' (I) a 10 jossa R* on C^-Cg-alkyyli, R2 on C1-C6-alkyyli, bentsyyli, hydroksibentsyyli, bentsyylioksibentsyyli tai (C^-Cg-alkok-si)bentsyyli, a on kiraalinen keskus, jossa on valinnanvaraisesti R- tai S-stereokemia, A on ryhmä 15 -(CHR3-CHR4)- tai -(CR3=CR4)-, joissa b ja c ovat kiraalisia b c keskuksia, joissa on valinnanvaraisesti R- tai S-stereokemia, R3 on vety, Ci-Cg-alkyyli tai fenyyli ja R4 on vety, C^-Cg-alkyyli, fenyyli (C^-Cg-alkyyli ) tai sykloalkyyliiCj-20 C6-alkyyli), jolloin sykloalkyylirenkaassa on 5 tai 6 hiiliatomia, ja niiden isomeerien valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa A on ryhmä -(CHR3-CHR4)-, 25. c substituoitu happo, jonka kaava on (III), O 0

5 IL 3 4 M R OC-CHR -CHR -COH (III) 30 jossa R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä ja R5 on C^-C6-alkyyli tai bentsyyli, saatetaan reagoimaan amidin kanssa, jonka kaava on (IV),

35 R2 0 I ! H2N-CH-CNHR (IV) 39 84472 jossa R1 ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, kytkentäai-neen kuten N,N'-disykoheksyylikarbodi-imidin läsnäollessa yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on (V), 5 0 0 R2 0 5. ii 3 a II I K i ROC-CHR -CHR -CNH-CH-CNHR (V) jossa R1, R2, R3, R4 ja R5 tarkoittavat samaa kuin edellä ja joka hydrolysoidaan emäksen kuten natriumhydroksidin läs-10 näollessa tai hydrataan katalysaattorin läsnäollessa, vastaavan hapon saamiseksi, jonka kaava on (VI),

0. R2 O Il o 4 II I II 1 HOC-CHR -CHR -CNH-CH-CNHR (VI) 15 joka muutetaan kaavan (I) mukaiseksi hydroksiaminohappo-johdannaiseksi kytkemällä O-bentsyylihydroksyyliamiinin kanssa, minkä jälkeen suoritetaan hydraus, tai vaihtoehtoisesti kytkemällä happo suoraan hydroksyyliamiiin kanssa 20 käyttämällä kytkentäainetta kuten etyyliklooriformaatti, ja että näin saatu yhdiste haluttaessa erotetaan isomee-reikseen, tai b) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa A on -(CR3=CR4)-, yhdisteestä, jonka 25 kaava on (XIII),

0. R2 0 5. ii 3 4 II I H i R 0C-CR=CR -CNH-CH-CNHR (XIII) 30 jossa R1, R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä ja R5 on bentsyyli, poistetaan suojaryhmä R5 siirtohydraamalla käyttämällä syklohekseeniä ja palladiumia hiilellä sopivassa liuottimessa kuten etanolissa hapon saamiseksi, jonka kaava on (XIV), 35 0 0 R2 0 Il 3 4 II I II i HOC-CR =CR -CNH-CH-CNHR (XIV) 40 84472 jossa R1, R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä ja joka kytketään O-bentsyylihydroksyyliamiinin kanssa, minkä jälkeen suoritetaan hydraus, tai vaihtoehtoisesti kytketään hydroksyyliamiinin kanssa käyttämällä kytkentäainetta 5 kuten etyyliklooriformiaattia.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan N-[3-(Ν’-hydroksikar-boksiamido)-2-metyylisykloheksyylipropanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiini-N-metyyliamidia.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan N-[3-(N'-hydroksikar-boksiamido)-2-metyylisyklopentyylipropanoyyli]-O-metyyli-L-tyrosiinia. 4i 84472