FI77872C - Foerfarande foer framstaellning av nya, terapeutiskt anvaendbara i 11 -staellning substituerade steroidderivat. - Google Patents

Description

1 77872

Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten liA substituoitujen steroidijohdannaisten valmistamiseksi Tämän keksinnön kohteena on menetelmä yhdisteiden 5 valmistamiseksi, joiden kaava on (I') R2 R1 Δ I ? (I,) jossa on orgaaninen, 1-18 hiiliatomia sisältävä orgaa-15 ninen radikaali, joka sisältää vähintään yhden typpiato-min tai piiatomin, kuitenkin niin, että hiiliatomin viereinen atomi on hiiliatomi, R2 on 1-3 hiiliatomia sisältävä hiilivetyradikaali, X on viisiatominen, mahdollisesti substituoidun ja mahdollisesti tyydyttämättömän sidoksen 20 sisältävä syklinen radikaali, asemassa 3 oleva ryhmä A on vapaa tai ketaalimuodossa oleva suojattu oksoryhmä tai ryhmä NOH ja B ja C muodostavat yhdessä kaksoissidoksen tai epoksidisillan.

R2 on tyydytetty suoraketjuinen tai haarautuva 1-3 25 hiiliatomia sisältävä alkyyliradikaali, esim. metyyli-, etyyli-, n-propyyli- tai butyyliradikaali.

- . Keksinnön piiriin kuuluu luonnollisesti myös kaa van (I') mukaisten yhdisteiden happoadditiosuolojen valmistaminen, esimerkiksi kloorivetyhapon, bromivetyhapon, 30 typpihapon, rikkihapon, fosforihapon, etikkahapon, muurahaishapon, propionihapon, bentsoehapon, maleiinihapon, fumaarihapon, meripihkahapon, viinihapon, sitruunahapon, - · oksaalihapon, glyoksyylihapon, asparagiinihapon, alkaani- sulfonihappojen kuten metaani- tai etaanisulfonihapon, 35 aryylisulfonihappojen kuten bentseeni- tai paratolueeni-sulfonihapon ja aryylikarboksyylihappojen avulla muodostettujen additiosuolojen valmistamiseksi.

2 77872

Keksinnön kohteena on etenkin menetelmä niiden kaavan (I') mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joiden kaava on (I): Rl *2 ί-VY (i) jossa R^, R2, X ja A ovat samat kuin edellä.

10 Keksinnön kohteena on erityisesti menetelmä niiden kaavan (I1) yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R2 on metyyliradikaali.

Keksinnön kohteena on aivan erityisesti menetelmä niiden kaavan (I') yhdisteiden valmistamiseksi, joissa X 15 on syklinen radikaali, jolla on kaava: R2 ^R3 jossa R2 on sama kuin edellä, pisteviiva asemassa 16-17 20 merkitsee, mahdollisen kaksoisidoksen läsnäoloa, Y on ra-

Rc : dikaali ^ , , . , , . „ - C - , jossa n on kokonaisluku 1 tai 2, R(. on ve-

R, D

L 61 n tyatomi, 1-8 hiiliatomia sisältävä alkyyliradikaali, 2-8 hiiliatomia sisältävä alkenyyli- tai alkynyyliradikaali, 25 6-14 hiiliatomia sisältävä aryyliradikaali tai 7-15 hiili-

atomia sisältävä aralkyyliradikaali, Rg on sama tai erilainen kuin R^, jolloin sillä voi olla joku R5:n merkityksistä tai se voi yhtä hyvin olla hydroksyyliradikaali, R^ ja R^ ovat samat tai erilaiset ja ne tarkoittavat joko 30 vetyatomia, hydroksyyliradikaalia,radikaalia Oalc4, tai O-CO-alc^, jolloin alc4 ja alc^ ovat 1-8 hiiliatomia sisältäviä alkyyliradikaale ja tai 7-15 hiiliatomia sisältäviä aralkyyliradikaaleja, tai sitten 2-8 hiiliatomia sisältävää alkenyyli- tai alkynyyliradikaalia, tai sitten . O

35 radikaalia_£_cH , tai radikaalia -COCH2OCOalCg, jossa alCg on 1-8 hiiliatomia sisältävä, mahdollisesti substituoitu alkyyliradikaali tai 7-15 hiiliatomia 3 77872 sisältävä aralkyyliradikaali, tai sitten radikaalia C0-C02 tai radikaalia CO-Ct^alc^, jossa alc7 on 1-8 hiiliatomia sisältävä alkyyliradikaali, tai sitten radikaalia H tai radikaalia NHalc0,

I I O

5 -C=0, -C

jossa alCg on 1-8 hiiliatomia sisältävä alkyyliradiaa-li tai 7-15 hiiliatomia sisältävä aralkyyliradikaali, tai sitten radikaalia -C=N, tai sitten Rg ja muodostavat yhdessä radikaalin CHg 10 HC-0 Z

i 1 -C - Z, i ^ jossa Z^ on vetyatomi, 1-8 hiiliatomia sisältävä alkyy-li- tai asyyliradikaali ja Z2 on 1-8 hiiliatomia sisäl-15 tävä alkyyliradikaali.

Rg on mieluimmin erilainen kuin Rg.

Kun Rg tai Rg on alkenyyliradikaali, se on tällöin mieluimmin vinyyli-, isopropenyyli- tai allyyli-radikaali.

20 Kun Rg tai Rg on alkynyyliradikaali, se on täl- - löin mieluimmin etynyyli- tai propynyyliradikaali.

Kun Rg tai Rg on aryyli- tai aralkyyliradikaali, se on tällöin mieluimmin fenyyli- tai bentsyyliradikaa-li.

25 Kun Rg tai R^ on radikaali Oalc^ tai OCOalCg, alc4 ja alCg ovat tällöin mieluimmin metyyli-, etyyli-, n-propyyli, butyyli-, pentyyli-, heksyyli- tai bentsyy-li-radikaaleja.

Kun Rg tai R^ on alkenyyliradikaali, se on täl-30 löin mieluimmin vinyyli-, isopropenyyli-, allyyli- tai 2-metyyliallyyliradikaali.

Kun Rg tai R^ on alkynyyli-radikaali, se on tällöin mieluimmin radikaali -C=CH, tai -C=C-alCg, jossa alCg on mieluimmin metyyli-, etyyli-, propyyli-, iso-35 propyyli-, isopropenyyli-, butyyli-, bentsyyli- tai trifluorimetyyliradikaali.

77872

AlCgtlla, alc^:llä ja alcg:lla on mieluimmin joku alc^rn tai alc^sn merkityksistä.

Suositeltavimpia yhdisteitä ovat ne, joissa radikaalit ja ovat erilaiset lukuun ottamatta 5 tapausta, jossa R3 ja R^ ovat molemmat vetyatomeja.

Radikaalin suositeltavista merkityksistä

Xr3 10 voidaan mainita radikaalit: X, ! “f""·»,,, ’ „c = C_CP ; '•e = C-CH3 T ä CH c - C CF3 15 yi - ch2oh - ch2oh >c-nh(ch2)2ch3 ...........0 ; -f".......5 ’V tai

"0H -H

20 fl T _^CH3 yr oz , jossa on vetyatomi, 1-8 hiiliato- "f"1"·......z Z2 25 mia sisältävä alkyyliradikaali, 2-8 hiiliatomia sisältävä asyyliradikaali, esimerkiksi asetyylioksi- tai bentsyyliradikaali ja Z2 on 1-8 hiiliatomia sisältävä alkyyliradikaali, esimerkiksi metyyliradikaali.

Keksinnön kohteena on etenkin menetelmä sellais-30 ten kaavan (I') yhdisteiden valmistamiseksi, joissa rengas D ei sisällä lainkaan tyydyttämätöntä etyleenisi-dosta, Rg ja Rg ovat vetyatomeja ja n on yhtä kuin 1, sekä niiden yhdisteiden valmistamiseksi, joissa C=A on oksoryhmä.

5 77872

Keksinnön kohteena on aivan erityisesti menetelmä niiden kaavan (I') yhdisteiden valmistamiseksi, joissa on 1-18 hiiliatomia sisältävä hiilivetyra-dikaali ja sisältää vähintään yhden typpiatomin.

5 Näistä yhdisteistä voidaan erityisesti mainita ne, joissa on primaarinen, sekundaarinen tai tertiaari-nen 1-8 hiiliatomia sisältävä alkyyliradikaali, joka sisältää yhden tai useampia hapen, typen ja rikin käsittävästä ryhmästä valittuja heteroatomeja, joista ai-10 nakin yksi on typpiatomi.

Alkyyliradikaalilla tarkoitetaan mieluimmin metyyli-, etyyli-, n-propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, isobutyyli-, terbutyyli-, pentyyli-, heksyyli-, syklo-propyyli, syklobutyyli-, syklopentyyli- tai syklohek-15 syyliradikaalia.

Vähintään yhden typpiatomin sisältävistä hetero-syklisistä radikaaleista voidaan mainita 3,4- tai 2-pyri-dyyliradikaali, tiatsolyyliradikaali ja piperidinyyli-radikaali.

20 Niin ikään voidaan mainita keksinnön mukaisella menetelmällä saaduista yhdisteistä suositeltavina ne yhdisteet, joissa R^ on vähintään yhden typpiatomin sisältävä heterosyklinen radikaali, joka on mahdollisesti substituoitu 1-8 hiiliatomia sisältävällä alkyylira-25 dikaalilla.

Heterosyklisellä radikaalilla tarkoitetaan mieluimmin jotain yllä mainituista radikaaleista.

Kun R^ on vähintään yhden typpiatomin sisältävä heterosyklinen alkyyliradikaalilla substituoitu radi-30 kaali, se on tällöin substituoitu mieluimmin metyyli-, etyyli- tai n-propyyliradikaalilla.

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetuista suositeltavista yhdisteistä voidaan niin ikään mainita ne, joissa R, on aryyliradikaali tai aralkyylira-

X

35 dikaali jossa on substituenttina aminoryhmä 7, jossa R^ ja Rg tarkoittavat 1-8 hiiliatomia sisäl- 8 vää alkyyliradikaalia, tai 1-8 hiiliatomia sisältävää 6 77872 primaarista, sekundaarista tai tertiääristä alkyyliradikaa-lia, ja jotka sisältävät yhden tai useampia hapen, typen ja rikin käsittävästä ryhmästä valittuja heteroatomeja, joista ainakin yksi on typpi, tai ovat substituoituja vä-5 hintään yhden typpiatomin sisältävällä heterosyklisellä radikaalilla.

Alkyyliradikaalilla tarkoitetaan mieluimmin jotain yllä mainituista radikaaleista.

Aryyli- tai aralkyyli-radikaalilla tarkoitetaan mie-10 luimmin fenyyli- tai bentsyyliradikaalia.

Heterosyklisellä radikaalilla tarkoitetaan mieluimmin jotain yllä mainituista heterosyklisistä radikaaleista.

Keksinnön kohteena on aivan erityisesti menetelmä niiden yhdisteiden valmistamiseksi, joissa on 2,-3- tai 15 4-pyridyyli-radikaali, radikaali -(CH,) -N<T . ... , Δ Π ΙΠ ... CH, tH3 radikaali 3 /ΓΛ 0/^N:H3 -i \_/ radikaali \ / S. » 20 \ CH3 radikaali -~ tai radikaali ^~CH3 25

Keksinnön kohteena on niin ikään erityisesti menetelmä niiden kaavan (I1) yhdisteiden valmistamiseksi, joissa on radikaali uu

Keksinnön mukaisella menetelmällä saaduista yhdisteistä voidaan vielä mainita ne yhdisteet, joissa R^ sisältää 35 hapetetun typpiatomin sekä ne, joissa B ja C muodostavat yhdessä epoksisillan.

7 77872

Keksinnön mukaisella menetelmällä saaduista edullisista yhdisteistä voidaan mainita vielä erityisesti yhdisteet, joiden valmistus on esitetty jäljempänä tekstin kokeellisessa osassa ja etenkin juuri esimerkkien 1,3,4,8,10, 5 11,12,14,16,17,20,22,28 ja 29 yhdisteet.

FR-patentissa 2 377 417 on kuvattu steroideja, joissa on 3-asemassa suojattu ketoniradikaali, 5oCrasemassa hyd-roksiradikaali, (9-10)-asemassa kaksoissidos ja lljö-asemassa R^-radikaali, joka on 1-12 hiiliatomia sisältävä, tyydytet-10 ty, suoraketjuinen tai haarautunut alkyyliradikaali, 2-8 hiilivetyä sisältävä tyydyttämätön alifaattinen hiilivety-radikaali, joka voi olla substituoitu, 7-13 hiilivetyä sisältävä aralkyyliradikaali, joka voi olla substituoitu tai heterosyklinen radikaali, joka sisältää yhden tai useampia 15 rikki- tai happiatomeja.

FR-patentissa 2 377 418 on kuvattu 3-keto-Δ-4,9-steroideja, joissa on 11/5-asemassa radikaali R^, joka on sama kuin FR-patentin 2 377 417 kuvattujen yhdisteiden R^.

Edellä esitetyissä FR-patenteissa ei ole kuvattu yh-20 disteitä, joissa R^ sisältäisi typpiatomin.

Kaavan (I') yhdisteet sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävillä hapoilla muodostetut additiosuolat ovat erityisen kiinnostavia farmakologisina tuotteina; niillä on etenkin merkittävää antiglukokortikoidista vaikutusta, 25 kuten liitteenä olevat testitulokset osoittavat.

Tuotteiden testaus hormonaalisilla reseptoreilla on osoittanut niiden progestomimeettiset tai antiprogestomi-meettiset vaikutukset sekä androgeeniset tai anti-andro-geeniset vaikutukset.

30 Kaavan (I') yhdisteitä sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävillä hapoilla muodostettuja additiosuoloja voidaan siis käyttää lääkkeinä etenkin glukokortikoidien sekundaaristen vaikutusten torjumiseen; niitä voidaan käyttää myös glukokortikoidien liikaerityksen aiheuttamien 35 vaivojen torjumiseen ja etenkin vanhenemisesta aiheutu- β 77872 vien vaivojen hoitoon yleensä ja aivan erityisesti korkean verenpaineen, arteroskleroosin, luun huokoistumisen, diabeteksen, liikalihavuuden sekä immuniteetin alenemisen ja unettomuuden hoitoon.

5 Niitä kaavan (I*) yhdisteitä sekä niiden farma seuttisesti hyväksyttävillä hapoilla muodostettuja additiosuoloja, joilla on antiprogestomimeettisiä ominaisuuksia, voidaan käyttää alkuperäisten ehkäisyainei-den valmistamiseen; niitä voidaan yhtä hyvin käyttää 10 hormonaalisten häiriöiden hoitoon ja lisäksi niillä saattaa olla merkitystä hormoneista riippuvaisten syövän lajien hoidossa.

Tietyillä kaavan (I1) yhdisteillä sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävillä hapoilla muodostetuil-15 la additiosuoloilla voi olla myös progestomimeettisiä ominaisuuksia ja niitä voidaan siten käyttää kuukautisten puutteen, kuukautishäiriöiden ja keltarauhasen vajaatoimintaisuuden hoitoon.

Niitä kaavan (I') yhdisteitä sekä niiden farma-20 seuttisesti hyväksyttävillä hapoilla muodostettuja additiosuolo ja, joilla on anti-androgeenisiä ominaisuuksia, voidaan käyttää liikakasvun ja eturauhassyövän hoitoon sekä hyperandrogenian, anemian, liikakarvaisuuden ja aknen hoitoon.

25 Kaavan (I1) farmaseuttisesti hyväksyttäviä eli käytetyillä annoksilla myrkyttömiä yhdisteitä sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävillä hapoilla muodostettuja additiosuoloja voidaan siis käyttää lääkkeinä.

Käytetty annostus vaihtelee hoidettavan sairau-30 dentilan ja antamistavan mukaan; se voi olla esimerkiksi 10 mg - 1 g ja mieluimmin 100 mg - 1 g päivässä aikuisella suun kautta annettuna.

Edellä määriteltyjä kaavan (I1) uusia yhdisteitä sekä niiden suoloja voidaan käyttää sellaisten farma-35 seuttisten yhdistelmien valmistamiseen, jotka sisältävät pääasiallisena vaikuttavana aineena vähintään yhtä mainituista yhdisteistä.

9 77872

Kaavan (I1) yhdisteitä voidaan antaa ruoansulatuskanavan kautta, parenteraalisesti tai paikallisesti. Niitä voidaan määrätä yksittäisinä tai rakeiksi hienonnettuina tabletteina, geelihelminä, rakeina, peräpuikkoina, 5 ruiskevalmisteina, pomadoina, voiteina, geeleinä, joita voidaan valmistaa tavanomaisilla menetelmillä.

Pääasiallinen vaikuttava aine tai aineet voidaan yhdistää tavallisesti farmaseuttisissa yhdistelmissä käytettyihin täyteaineisiin kuten talkkiin, arabikumiin, lak-10 toosiin, tärkkelykseen, magnesiumstearaattiin, kaakaovoi-hin, vettä sisältäviin tai sisältämättömiin kantoainei-siin, eläin-tai kasviperäisiin rasvoihin, parafiinijohdannaisiin, glykoleihin, erilaisiin kostutusaineisiin, dispergointiaineisiin tai emulgointiaineisiin sekä säily-15 tysaineisiin.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle kaavan (I') mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi on tunnusomaista, että a) yhdiste, jonka kaava on (II) R1 R~ 20 2 xxr "

- 25 * S

OH

jossa K on ketaali-, tioketaali-, oksiimi- tai metyyli-oksiimuodossa suojattu ketoniryhmä, R^, R£ ja X tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan dehydratoin-30 tiaineen kanssa, joka vapauttaa ketoniryhmän, yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on {I * )

A

R1 R2 :: ” .XXJ - 77872 10 tai b) yhdiste (II) saatetaan reagoimaan dehydratoin-tiaineen kanssa yhdisteen (I'A) saamiseksi, joka saatetaan reagoimaan ketaalin muodostavan aineen kanssa, yh- 5 disteen saamiseksi, jonka kaava on (I' )

B

Rl R2 “

Ketal jossa ketoniryhmä asemassa 3 on suojattu ketaalimuodossa, 15 tai c) yhdiste (II) saatetaan reagoimaan dehydratoin-tiaineen kanssa yhdisteen (I'A) saamiseksi, joka saatetaan reagoimaan hydroksyyliamiinin NHjOH kanssa, yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on (I'c) 20 R1 R2

JCU

HON

ja että näin saatu kaavan (I'A), (I * β) tai (I'c) mukainen yhdiste haluttaessa saatetaan reagoimaan hapon kanssa suo-30 lan saamiseksi tai hapettimen kanssa, jolloin siinä tapauksessa, että R^ sisältää typpiatomin, saadaan johdannainen, jossa asemassa lly6 on radikaali, jonka typpiato-mi on hapetettu, ja jossa johdannaisessa radikaalit B ja C mahdollisesti muodostavat epoksidisillan, tai siinä ta-35 pauksessa, että ei sisällä typpiatomia, saadaan johdannainen, jossa radikaalit B ja C muodostavat epoksidisillan, 11 77872 ja että yhdiste, jossa samanaikaisesti radikaali sisältää hapetetun typpiatomin ja B ja C muodostavat epoksidisillan, haluttaessa pelkistetään selektiivisesti radikaalin sisältämä typpioksidi ja yhdiste saatetaan 5 mahdollisesti reagoimaan hapon kanssa suolan saamiseksi.

Keksinnön kohteena on aivan erityisesti edellä määritellyn mukainen menetelmä sellaisten kaavan (I*) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa X on syklinen radikaali, jonka kaava on 10 R2 R- '-Zf' R‘ jossa R2, R^, R4, Y ja asemassa 16-17 oleva pisteviiva 15 ovat merkitykseltään samat kuin edellä.

Menetelmän suositeltavassa suoritusmuodossa keto-niryhmän vapauttamaan pystyvä dehydrausaine on sulfoni-hartsi (happomuodossa), esimerkiksi kaupallinen polysty-reeniperustainen tai styreeni/divinyylibentseenipolymee-20 ri-perustäinen sulfonihartsi; mutta yhtä hyvin voidaan käyttää epäorgaanista happoa kuten kloorivetyhappoa tai rikkihappoa alemmassa alkanolissa tai perkloorihappoa etikkahapossa tai sitten sulfonihappoa kuten paratoluee-nisulfonihappoa.

25 Ketaalimuotoon saattava aine on mieluimmin alkoho li tai dialkoholi orgaanisen hapon kuten oksaalihapon tai paratolueenisulfonihapon läsnäollessa.

Ketoniryhmän pelkistävä aine on mieluimmin alka-limetallihydridi. (Tästä aiheesta lähemmin E.R. Walkis'in 30 artikkelissa julkaisussa Chemical Society Reviews, 1976, Voi. 5, no 1, sivu 23).

Eetteröintiaine on mieluimmin alkyylihalogenidi jonkin emäksen läsnäollessa.

Esteröintiaine on mieluimmin karboksyylihappojoh-35 dannainen, esimerkiksi kloridi tai anhydridi jonkin emäksen kuten pyridiinin läsnäollessa.

12 77872

On itsestään selvää, että kun toinen edellä saatujen kaavan (I') yhdisteiden radikaaleista ja R4 on hydroksyyliradikaali, mainittu kaavan (I') tuotteiden radikaali OH voidaan saattaa reagoimaan eetteröintiaineen 5 tai esteröintiaineen kanssa.

Tämä eetteröintiaine tai esteröintiaine on mieluummin joku edellä jo mainituista.

Kun R^ tai R^ on asemassa 17 oleva asyylioksira-dikaali, tämä asyylioksiryhmä voidaan haluttaessa saip-10 puoida. Saippuointiaineena käytetään mieluimmin jotakin emästä, kuten natriumhydroksidia, kaliumhydroksidia, ka-liumamidia tai kalium-tertbutylaattia ja mainittu saip-puontireaktio suoritetaan mieluimmin alemmassa alkoholissa kuten metanolissa tai etanolissa, saippuointiaine voi 15 myös olla litiumasetylidi etyleenidiamiinissa.

Hapetusaine on mieluimmin jokin perhappo, kuten metaklooriperbentsoehappo, peretikkaappo tai perftaali-happo tai sitten pelkkä vetyperoksidi tai vetyperoksidi heksakloori- tai heksafluoriasetonin läsnäollessa. Kun 20 halutaan saada sellainen yhdiste, jossa ainoastaan yksi radikaalin R^ typpiatomi on hapetettu, hapetusainetta käytetään ekvivalenttinen määrä. Kun halutaan saada sellainen yhdiste, jossa B ja C lisäksi muodostavat epoksi-sillan, hapetusainetta käytetään kaksi ekvivalenttia.

25 N-oksidi-ryhmän selektiivinen pelkistysaine on mieluimmin trifenyylifosfiini ja reaktio voidaan suorittaa esimerkiksi etikkahapossa.

Keksinnön kohteena on niinikään menetelmä yhdisteiden valmistamiseksi, joiden kaava on II ja jotka ovat 30 käyttökelpoisia välituotteina kaavan (I1) mukaisten yhdisteiden valmistuksessa.

Tälle menetelmälle on tunnusomaista, että yhdiste, jonka kaava on (III) i 13 77872 ΐ2 s iQX3 (ιιι) 10 saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on (Rl^CuLi, RjMgHal tai R^Li, joissa R^ on sama kuin edellä ja Hai on halogeeniatoni, haluttaessa kuprohaloge-nidin läsnäollessa.

Keksinnön mukaisen menetelmän suositeltavassa 15 suoritusmuodossa: - reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa, - kaavan (III) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan RjMgHal mukaisen yhdisteen kanssa kuprosuo-lojen läsnäollessa.

20 Keksinnön kohteena on niinikään menetelmä yhdis teiden valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia välituotteina kaavan (I') mukaisten yhdisteiden valmistuksessa ja joiden kaava on (II') 25 R2 R\ /^R'3 3o 4 (II,)

OH

35 14 77872 jossa R^, R2 ja K ovat samat kuin edellä, R'^ on hydrok- syyliradikaali tai radikaali OR , jossa R on eetteri- c o ryhmän tähde alk^ tai esteriryhmän tähde Coalk2# jolloin alk^ ja alk2 tarkoittavat 1-8 hiiliatomia sisältävää 5 alkyyliä tai 7-15 hiiliatomia sisältävää aralkyyliä ja R'4 on vetyatomi tai alkenyyli- tai alkynyyliradikaali, joka sisältää 2-8 hiiliatomia.

Menetelmälle on tunnusomaista, että yhdiste, jonka kaava on (IV) 10 R2 20 saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on (Rl^CuLi, Regnal tai R^Li, joissa kaavoissa R^ ja Hai ovat samat kuin edellä, haluttaessa kuprohalogenidin läsnäollessa, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava on (V): 25 R-

Ri 2 (V)

OH

35 is 77872 joka yhdiste saatetaan joko reagoimaan pelkistysaineen kanssa, jolloin saadaan vastaava 17-hydroksi-yhdiste, tai reagoimaan sopivan magnesiumyhdisteen kanssa, jolloin saadaan vastaava 17-hydroksi-17o6-substituoitu 5 yhdiste, tai reagoimaan orgaanisen metalliyhdisteen, esimerkiksi litiumyhdisteen tai kaliumjohdannaisen kanssa, jolloin saadaan vastaava 17/3 -hydroksi-17<X-substituoitu yhdiste, tai a) reagoimaan syanidointiai-neen kanssa, jolloin saadaan vastaava 17,/?>-syano-17tX -10 hydroksi-yhdiste, josta suojataan hydroksyyliryhmä ja joka sen jälkeen b) saatetaan reagoimaan edellä kuvatunlaisen orgaanisen metalliyhdisteen kanssa, jolloin saadaan vastaava 17/5-hydroksi-17^-substituoitu yhdiste, minkä jälkeen haluttaessa saatetaan jokin edellä 15 saaduista 17-hydroksi-yhdisteistä reagoimaan esteröin- ti- tai eetteröintiaineen kanssa ja haluttaessa saatetaan jokin edellä saaduista 17-substituoiduista yhdisteistä, joissa asemassa 17 oleva substituentti sisältää kolmoissidoksen, reagoimaan pelkistysaineen kanssa, jol-20 loin saadaan vastaava etyleenisidoksen sisältävä yhdiste .

Keksinnön mukaisen menetelmän suositeltavassa suoritusmuodossa kaavan (IV) yhdisteen reaktio kaavan R^MgHal, (R1) 2CuLi tai R^Li yhdisteen kanssa suorite-25 taan edellä jo kuvatuissa olosuhteissa.

Ne erilaiset reagenssit, joita saatetaan reagoimaan kaavan (V) yhdisteen kanssa, ovat steroidi-kemiassa hyvin tunnettuja. Jäljempänä olevassa kokeellisessa osassa kuvataan eräitä kaavan (V) yhdisteen 30 reaktioita.

Kaavan (III) mukaiset yhdisteet ja niiden joukosta etenkin kaavan (IV) mukaiset yhdisteet, joita käyte-tetään kaavan (II) tai kaavan (V) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, ovat yleisesti tunnettuja yhdis-35 teitä, joita voidaan valmistaa saattamalla vastaavat 16 77872 Δ 5(10), 9(11) yhdisteet reagoimaan sellaisen aineen kanssa, joka epoksoi selektiivisesti asemassa 5(10) olevan kaksoissidoksen. Näin ollen yhdisteet Δ5(ΐο), 9(11) voidaan saattaa reagoimaan esimerkiksi vetyperok-5 sidin kanssa heksaklooriasetonin tai heksafluoriaseto-nin läsnäollessa FR-patentissa 2 423 486 kuvatun menetelmän mukaisesti. 3,3-/l,2-etaani-diyyli-bis-(oksiO-17 o£”(l-propynyyli)-estr-9-(11)-eeni-5 *i,10o<. -epoksi-17/^-olia ei ole kuvattu, mutta sen valmistus on esi-10 tetty jäljempänä tekstin kokeellisessa osassa.

Keksintöä havainnollistetaan seuraavin esimerkein:

Esimerkki 1: 17 Λ-hydroksi-170¢ - (prop-l-ynyyli) -li/* - (4-pyridyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni 15 Vaihe A : 11/3 -(4-pyridyyli)-3,3-/J»2-etaanidi- yyli-bis (oksi 117-17o6 —£prop-l-ynyyli7-estr-9-eeni-5od ,17,^ -dioli Lisättiin 20°C:ssa 100 cm"* 4-klooripyridinyyli-magnesiumbromidin tetrahydrofuraaniliuosta (liuos 0,5 -20 0,6M, valmistettu 15 g:sta 4-klooripyridiiniä ja 6 g:stä magnesiumia) liuokseen, joka sisälsi 6,16 g dimetyyli- 3 sulfidi-kuprobromidi-kompleksia 40 cm :ssä tetrahydro-furaania. Sekoitettiin 20 minuuttia huoneen lämpötilassa inertissä kaasukehässä ja lisättiin 10 minuutin ai-25 kana liuos, joka sisälsi 3,7 g 3,3-ΛΓ,2-etaanidiyyli- bis- (oksi)J7 “ 5 οό , 10 oC-epoksi-17cxl - (prop-l-ynyyli) -estr-9(11)-eeni-17/3-olia. Sekoitusta jatkettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa ja kaadettiin reaktioseos sitten kylmän veden ja ammoniumkloridin seokseen. Reaktioseos-30 ta sekoitettiin sitten puolen tunnin ajan huoneen lämpötilassa ja uutettiin se sitten eetterillä. Uutteet pestiin natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, ; kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa pai neessa. Saatiin 6 g tuotetta, joka puhdistettiin kroma-35 tografisesti silikageelillä eluoiden metyleenikloridin 17 77872 ja asetonin 1:1-seoksella, joka sisälsi yhden promille trietyyliamiinia. Näin eristettiin 3,15 g tuotetta, joka kuivattiin vakuumissa paineen ollessa 0,1 mm/Hg ja lämpötilan 60°C. Näin saatiin haluttu tuote, = -52° 5 + 1,5° (c = 1 % CHC13).

Vaihe B; 17/0 -hydroksi-17%6* (prop-l-ynyyli) -11/5 -(4-pyridyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni Sekoitettiin 3 tunnin ajan huoneen lämpötilassa inertissä kaasukehässä liuosta, joka sisälsi 2,9 g vai- 3 3

10 heessa A saatua tuotetta, 14 cm metanolia ja 7 cm 2N

kloorivetyhappoa. Sitten lisättiin liuos, joka sisäl-3 3 si 200 cm eetteriä ja 90 cm happaman natriumkarbonaatin kyllästettyä liuosta. Sekoitettiin vielä 15 minuuttia huoneen lämpötilassa, dekantoitiin ja uutettiin 15 eetterillä. Uutteet pestiin natriumkloridin kylläste tyllä liuoksella, kuivattiin ne ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Saatiin 2,3 g tuotetta, joka puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden metyleenikloridin ja asetonin 6:4-seoksella. Eristet-20 tiin 1,7 g tuotetta, joka kuivattiin vakuumissa paineen ollessa 0,1 mm/Hg 24 tunnin ajan, joista 8 tuntia 80°C: ssa. Näin saatiin haluttu tuote, = + 30,5° ' +30,5° + 1° (c = 1 % CHC13).

Samalla tavalla valmistettiin 17/0 -hy droks i-17·^,-25 (prop-l-ynyyli)-11^-(3-pyridyyli)-estra-4,9-dieeni- 3-oni &?D * +14°' C * 1 % CHC13) ja 17/0 -hydroksi-17«£-(prop-l-ynyyli)-13^ -(2-pyridyyli)-estra-4,9-dieeni- 3-oni = -2°, c = 1 % CHClj) .

Esimerkki 2; 17y0-hydroksi-11/0 -/3-(Ν,Ν-dimetyyliamino) -30 propyyli/-17e£* (prop-l-ynyyli) -estra-4,9- dieeni-3-oni

Vaihe A; 11/0-/3-(Ν,Ν-dimetyyliamino)-propyyli/” 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis- (oksi) /-17mlr (prop-l-ynyyli)-estr-9-eeni-5*(, 17/0 "dioli 35 Lisättiin 5 minuutin aikana 0°C:ssa 12,33 g dime- 3 tyylisulfidi-kuprobromidi-kompleksia 141 cm :iin 3-(N,N- 18 77872 dimetyyliamino)-propyyli-magnesiumbromidiliuosta (0,85 M liuos, valmistettu 42 g:sta kloori-3-N,N-dimetyyliamino-propaania ja 10,5 g:sta magnesiumia). Sekoitusta jät-kettiin 25 minuuttia 0°C:ssa ja lisättiin sitten tipoit-5 tain 3,70 g 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis (oksi)/5«£, 10«4-epok-si-l?^- (1-propynyyli)-estr-9(11)-eeni-17/> -olia liuotet- 3 tuna 50 cm :iin tetrahydrofuraania. Reaktioseoksen sekoittamista jatkettiin 3 tuntia 0°C:ssa ja kaadettiin se sitten seokseen, joka sisälsi 40 g ammoniumkloridia 3 10 ja 200 cm jäävettä. Sekoitettiin 15 minuuttia huoneen lämpötilassa ja uutettiin sitten eetterillä. Uutteet pestiin natriumkloridin kyllästetyllä liuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Saatiin 4,6 g tuotetta, joka puhdistettiin kromatogra-15 fisesti silikageelillä eluoiden metyleenikloridin ja metanolin 8:2-seoksella. Näin eristettiin 2,55 g haluttua tuotetta. = -86° +1,5° (c = 1 % kloroformis sa) .

Vaihe B: 17/) -hydroksi-ll/^-/3- (N,N-dimetyyli-20 amino) -propyyli/-17·^-(1-propynyyli) - estra-4,9-dieeni-3-oni

Sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tunnin ajan inertissä kaasukehässä seosta, joka sisälsi 2,4 g vai- 3 heessa A valmistettua tuotetta, 14 cm metanolia ja 7 3 3 25 cm 2N kloorivetyhappoa. Sitten lisättiin 200 cm iso- 3 propyylieetteriä ja 90 cm natriumvetykarbonaatin kyllästettyä liuosta. Sekoitettiin puoli tuntia huoneen lämpötilassa, dekantoitiin ja uutettiin eetterillä. Uutteet pestiin natriumkloridin kyllästetyllä liuoksella 30 ja kuivattiin. Uutteet haihdutettiin sitten kuiviin alennetussa paineessa ja saatiin näin 1,8 g tuotetta, joka puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden kloroformin ja metanolin 8:2-seoksella. Näin saatiin 1,30 g tuotetta, joka kuivattiin 30-40°C:ssa paineen olles-35 sa 0,1 mm/Hg. Näin saatiin 1,25 g haluttua tuotetta.

(*Qd = -114° + 2,5° (c = 1 % CHC13).

19 77872

Esimerkki 3: ll/> -/4-(Ν,Ν-dimetyyliamino-etyylioksi)- fenyyli/-17^ -hydroksi-17©(- (1-propynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni

Vaihe A: 3,3-etaani-dieyyli-bis(oksi)-11/9 -5 /4-(N,N-dimetyyliamino-etyylioksi)- fenyyli/-17«(- (1-propynyyli) -estra- 9-66111-5,(, 17/9 -dioli a) 4-(Ν,Ν-dimetyyliamino-etyylioksi)-bromibentsee-nin magnesiumyhdiste 10 Lisättiin tipoittain 45 minuutin aikana liuos, joka sisälsi 24 g liuosta 4-(N,N-dimetyyliamino-etyyli- 3 oksi)-bromibentseeniä 90 cm :ssä vedetöntä tetrahydro- 3 furaania. Reaktio katalysoitiin lisäämällä 0,2 cm 1,2-dibromietaania. Kun lisäys oli päättynyt, sekoitusta jat-15 kettiin vielä tunnin ajan 25°C:ssa. Näin saatiin 0,7 M liuos, joka käytettiin sellaisenaan.

b) Kondensointi

Lisättiin edellä saatu liuos toiseen liuokseen, joka sisälsi 6,16 g dimetyylisulfidi-kuprobromidi-komp- 3 20 leksia 20 cm :ssä tetrahydrofuraania. Sekoitettiin 20 minuuttia huoneen lämpötilassa ja lisättiin sitten tipoittain muutamien minuuttien aikana 3,7 g 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis (oksi)/-5p(, 10p(-epoksi-17·^-(1-propynyyli) - 3 estr-9(11)-eeni-17y>-Olia 50 cm :ssä tetrahydrofuraania. 25 Sen jälkeen sekoitettiin tunnin ajan inertissä kaasukehässä ja kaadettiin reaktioseos sitten liuokseen '* ' 3 joka sisälsi 15 g ammoniumkloridia ja 200 cm jäävettä.

.·.- Seos uutettiin eetterillä ja pestiin uutteet natrium- kloridin kyllästetyllä vesiliuoksella. Kuivattiin ja 30 haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Näin saatiin 18,3 g öljymäistä tuotetta, joka puhdistettiin kro-matografisesti alumiinioksidilla eluoiden kloroformilla, jolloin saatiin 4,5 g haluttua tuotetta. W0 - -“40 ♦ 1,5° (c » 1 % CHCl,).

20 7 7 8 7 2

Vaihe B: 11^-/4-(Ν,Ν-dimetyyliamino-etyylioksi) - f eny y 1 i / -17^ -hy dr ok si-17«£-(l-p r opy nyy - li)-estra-4,9-dieeni-3-oni 3

Lisättiin 9,5 cm 2N kloorivetyhappoa liuokseen, 5 joka sisälsi 4,5 g vaiheessa A valmistettua tuotet- 3 ta 20 cm metanolia. Liuosta sekoitettiin jatkuvasti 2 tunnin ajan huoneen lämpötilassa ja lisättiin siihen 3 3 sitten 260 cm eetteriä ja 110 cm natriumvetykarbonaatm kyllästettyä vesiliuosta. Jatkettiin sekoitusta vielä 15 10 minuuttia huoneen lämpötilassa, dekantoitiin seos ja uutettiin eetterillä. Uutteet kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Saatiin 3,3 g tuotetta, joka puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden metyleenikloridin ja metanolin 92,5:7,5-seok-15 sella. Näin saatiin 1,8 g haluttua tuotetta amorfisena.

fiffO = + 71° (c = 1 % CHCI3).

Esimerkki 4: 17/3-hydroksi-ll/3 -(4-dimetyyliaminofenyy- li) -17«£- (1-propynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni Vaihe A: 11^ -(4-dimetyyliaminofenyyli)-3,3-/1,2-20 etaanidiyyli-bis (oksi) /-17o£-( 1-propynyy li) -etra-9-eeni-5e£, 17^ -dioli Lisättiin liuos, joka sisälsi 38 millimoolia p-dimetyyliaminofenyyli-magnesiumbromidia tetrahydro- furaanissa, suspensioon joka sisälsi 4,1 g dimetyyli- 3 25 sulfidi-kuprobromidikompleksia 20 cm :ssä tetrahydro- furaania. Sitten lisättiin 2,45 g 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis (oksi) /5^ 10*£epoksi-17%£- (1-propynyyli) -estr-9 (11) -eeni-17^ -olia tetrahydrofuraaniin liuotettuna. Reak-tioseosta sekoitettiin jatkuvasti 10 minuuttia, hydroly-30 soitiin 50 emeillä ammoniumkloridin kyllästettyä vesi-liuosta. Dekantoitiin, uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi vedellä ja kuivattiin. Liuottimet haihdutettiin alennetussa paineessa ja saatiin näin 11 g haluttua yhdistettä raakatuotteenä, joka sitten puhdis-35 tettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden syklo- 21 77872 heksaanln ja etyyliasetaatin 6:40-seoksella. Näin saatiin 1,8 g haluttua tuotetta (11 vt) ja 750 mg tuotetta 11^. Tuote kiteytettiin uudelleen isopropyylieette-rin ja etyyliasetaatin seoksesta. Sp = 210°C, &Ώ -5 -66,5° (1 % CHC13) .

Vaihe B: 17^ -hydroksi-11^-(4-dimetyyliamino-fenyyli) -17*£-(1-propynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni 3

Lisättiin 2 cm konsentroitua kloorivetyhappoa 10 liuokseen, joka sisälsi 1,53 g vaiheessa A valmistettua 3 tuotetta ja 60 cm metanolia. Sekoitettiin 30 minuuttia 3 huoneen lämpötilassa ja lisättiin sitten 150 cm eette- 3 riä ja sen jälkeen 50 cm natriumhydroksidin IN vesi-liuosta. Reaktioseosta sekoitettiin 15 minuutin ajan ja 15 dekantoitiin ja kuivattiin orgaaninen faasi. Liuottimet haihdutettiin alennetussa paineessa ja saatiin näin 1,4 g raakatuotetta, joka puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden sykloheksaanin ja etyyliasetaatin 7:3-seoksella. Saatiin 0,932 g haluttua tuotetta, 20 sp = 150°C, = +138,5° (c = 0,5 % CHC13>.

Esimerkki 5; 17/£-hydroksi-17»(r (1-propynyyli) -11^ /4-trimetyyli-silyyli)-fenyyli/-estra-4,9-dieeni-3-oni

Vaihe A: 11^ -/(4-trimetyylisilyyli)-fenyyli/-25 3,3-/l,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-17«{- (1-propynyyli) -estr-9-eeni-5e(, 17^-dioli Lisättiin -30°C;ssa inertissä kaasukehässä 45 cm^:iin 4-trimetyylisilyyli-fenyyli-magnesiumbromi-din 0,65M tetrahydrofuraaniliuosta 200 mg kuprokloridia 30 ja sen jälkeen tipoittain pitäen lämpötila alle -20°C:ssa liuos, joka sisälsi 3,3 g 3,3-^1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)) -5^ 10e^-epoksi-17*t (1-propynyyli) -estr-9 (11) -eeni- 17/* - 3 olia ja 25 cm tetrahydrofuraania. Tunnin kuluttua reak-tioseos hydrolysoitiin ammoniumkloridin vesiliuoksella, 35 uutettiin eetterillä, kuivattiin ja haihdutettiin liuot- 22 77872 timet kuiviin alennetussa paineessa. Tuote puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden metyleeniklo- ridin ja asetonin 94:6-seoksella, joka sisälsi 0,1 % trietyyliamiinia. Näin erotettiin 2,087 g haluttua tuo- 5 tetta, joka puhdistettiin kiteyttämällä uudestaan iso- propyylieetteristä ja sitten etyyliasetaatista, sp.

= 226°C. = - 60°C + 1,5° (c = 0,9 % CHCI3) .

Vaihe B: 17/£ -hydroksi-17o<-(1-propynyyli)-11/^- /(4-trimetyylisilyyli)-fenyyli/-estra- 10 4,9-dieeni-3-oni

Lisättiin 1,7 g Redex-sulfonihartsia liuokseen, joka sisälsi 1,68 g vaiheessa A valmistettua tuotet-3 ta 17 cm :ssä 90 %:ista kiehuvaa alkoholia. Reaktioseos-ta keitettiin palautusjäähdyttäen 30 minuutin ajan, ero-15 tettiin hartsi, huuhdeltiin se metyleenikloridilla ja haihdutettiin suodos kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös otettiin talteen metyleenikloridiin, kuivattiin ja poistettiin liuotin alennetussa paineessa. Saatu jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden 20 bentseenin ja etyyliasetaatin 85:15-seoksella. Näin saatiin 1,217 g haluttua tuotetta, joka suli 212°C:ssa.

(wi}O = + 94° (c = 0,9 % CHCI3).

Samalla tavalla valmistettiin 17^-hydroksi-17*£-(1-propynyyli) -11^-/ (3-trimetyylisilyyli) -fenyyli/-25 estra-4,9-dieeni-3-oni. = 52,5° + 2° (c = 1 % CHCI3).

Valmistus: 3,3-/l,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-17*£-(1-propynyyli)-estr-9(11)-eeni-5,10-epoksi-17/J -oli 30 Vaihe A: 3,3-/l,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-17*£-(l“ propynyyli)-estra5(10),9(11)-dieeni-17^ -oli Jäähdytettiin 0°C:seen Scunalla sekoittaen 207 cm 1,15 %:ista etyyli-magnesiumbromidin tetrahydrofuraani-'i 35 liuosta ja annettiin sitten ennalta kalsiumkloridilla kuivatun propyynikaasun kuplia liuokseen 1 tunnin 23 7 7 8 7 2 ja 30 minuutin ajan. Annettiin seoksen lämpötilan kohota jälleen huoneen lämpötilaan ja jatkettiin sekoitusta vielä 1 tunnin ajan antaen kaasuvirran koko ajan kuplia seokseen. Sitten lisättiin 20-25°C:ssa puolen 5 tunnin aikana liuos, joka sisälsi 30 g 3,3-/1,2-etaa-nidiyyli-bis(oksi)/-estra-5(10), 9(11)-dieeni-17-onia 3 120 cm :ssä vedetöntä tetrahydrofuraania, sekä yksi tippa vedetöntä trietyyliamiinia. Sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tunnin ajan ja kaadettiin reaktioseos 10 tislatun veden, ammoniumkloridin ja jään seokseen. Reaktioseos uutettiin kolme kertaa etyylieetterillä. Orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös kuivattiin vakuumissa. Saatiin 35,25 g haluttua tuotetta.

15 NMR-spektri, CDCl^, ppm 0,83 asemassa 18 olevan metyylin vety 1,85 asemassa 0=0-01^ olevan metyylin vety 5,65 asemassa 11 olevan hiilen vety 4 etyleeniketaalin vety 20 Vaihe B: 3,3-/1,2-etyleenidioksi-bis(oksi)/-17^- (1-propynyyli) -estr-9 (11) -eeni-5^, 10·^· epoksi-17^-oli

Lisättiin samalla sekoittaen ja antaen typpikaasun kuplia liuottimeen 30 g vaiheessa A valmistettua 3 25 tuotetta 150 cm :iin metyleenikloridia. Liuos jäähdytettiin 0°C:seen ja lisättiin sitten yhdellä kertaa 1,8 cm^ heksafluoriasetonin seskvihydraattia ja sen jälkeen sa- 3 maila sekoittaen 4,35 cm 85 %:ista vetyperoksidia. Reaktioseosta sekoitettiin jatkuvasti ja annettiin typ-30 pikaasun kuplia siihen 0°C:ssa 72 tunnin ajan. Sen jälkeen reaktioseos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 250 g 3 3äätä ja 500 cm 0,2N natriumtiosulfaattia. Sekoitettiin jonkin aikaa ja uutettiin seos sitten metyleeniklo-ridilla. Orgaaninen faasi pestiin tislatulla vedellä, 35 kuivattiin natriumsulfaatilla pyridiinin läsnä ollessa ja haihdutettiin sitten kuiviin alennetussa paineessa.

24 7 7 8 7 2 Jäännös kuivattiin alennetussa paineessa. Saatiin 31,6 g ~ tuotetta, joka puhdistettiin kromatografisesti silika-geelillä eluoiden bentseenin ja etyyliasetaatin 90:10-seoksella. Näin saatiin haluttu tuote.

5 NMR-spektri CDCl-j ppm 0,82 asemassa 18 olevan metyylin vety 1,83 radikaalin CsC-CH^ metyylin vety 6,1 asemassa 11 olevan hiilen vety 3,92 ketaalin vety.

10 Esimerkki 6: 17/9 -etynyyli-17oC-hydroksi-ll/^ - (4-dime- tyyliarainofenyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni Vaihe A: 3,3-dimetoksi-5o^ 10«tepoksi-17o£-hydroksi-11/5 -(4-dimetyyliaminofenyyli)-17^) -etynyyli-estr-9-eeni 15 Sekoitettiin keskenään inertissä kaasukehäs sä 2,8 g 3,3-dimetoksi-5ekl0e£epoksi-17y£-etynyyli-17»£-hydroksi-estr-9(11)-eeniä, 56 cm^ vedetöntä tetrahydro-furaania ja 80 mg vedetöntä kuprokloridia. Sekoitettiin 5 minuuttia huoneen lämpötilassa ja asetettiin reaktio- 3 20 astia sitten jäähauteeseen ja lisättiin tipoittain 33 cm (4-dimetyyliaminofenyyli)-magnesium-bromidin 0,95M tet-rahydrofuraaniliuosta. Reaktioseoksen annettiin sen jälkeen lämmetä huoneen lämpötilaan.

: Suspensioon, joka sisälsi kuprobromidi-dimetyyli- 3 25 sulfidikompleksia (6,15 g) 30 cm :ssä vedetöntä tetra- 3 hydrofuraania, lisättiin 63 cm (4-dimetyyliaminofenyyli)-magnesium-broraidia siten, että lämpötila pysyi alle 28,5°C: ssa. Sekoitettiin 30 minuuttia ja lisättiin sitten tipoittain edellä saatu liuos. Sekoitusta jatkettiin 18 tuntia 30 huoneen lämpötilassa, kaadettiin reaktioseos kyllästettyyn ammoniumkloridiliuokseen, sekoitettiin 10 minuuttia, uutettiin kloroformilla, pestiin orgaaninen faasi vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös *- puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden 35 petroolieetterin ja etyyliasetaatin 1:1-seoksella, joka 77872 25 sisälsi 1 promillen trietyyliamiinia, ja saatiin näin 1,28 g tuotetta. Tämä tuote puhdistettiin uudestaan kromatografisesti eluoiden samalla seoksella ja saatiin näin 0,84 g haluttua tuotetta.

5 Vaihe B: 17/£ -etynyyli-17o£-hydroksi- 11/9-(4- dimetyyliaminofenyyli)-estra-4, 9-dieeni- 3-oni

Sekoitettiin keskenään 0,76 g vaiheessa A saatua 3 3 tuotetta ja 15 cm metanolia ja 1,6 cm 2N kloorivety-10 happoa. Sekoitettiin 1 tunnin ja 30 minuutin ajan ja kaadettiin seos sitten natriumbikarbonaatin kyllästettyyn vesiliuokseen, uutettiin kloroformilla, kuivattiin orgaaninen faasi ja haihdutettiin liuotin kuiviin.

Saatiin 0,76 g raakatuotetta, joka puhdistettiin kroma-15 tografisesti silikageelillä eluoiden petroolieetterin ja etyyliasetaatin 1:1-seoksella ja sen jälkeen etyyli-eetterin ja petroolieetterin 3:1-seoksella. Saatiin 0,435 g haluttua tuotetta, joka kiteytettiin isopropyy-lieetteristä. Sp. = 142°C. = + 235,5° + 4,5° 20 (c = 0,45 % kloroformissa)

Vaiheen A lähtötuote valmistettiin seuraavalla tavalla:

Vaihe a: 3,S-dimetoksi-lToC-hydroksi-l?^ -etynyyli-estra-5(10) 9(ll)-dieeni 25 Sekoitettiin 5 minuutin ajan huoneen lämpötilassa, joka sisälsi 16,8 g 3,3-dimetoksi-17y£-hydroksi-17e^-ety- 3 nyyli-estra-5(10), 9(11)-dieeniä, 175 cm vedetöntä tetrahydrofuraania, 4,35 g litiumbromidia ja jäähdytettiin seos sitten -60°C:seen ja lisättiin siihen 37 cm3 30 butyylilitiumin 1,35 M heksaaniliuosta. Sekoitusta jatkettiin 30 minuuttia ja lisättiin sitten 3,9 cm3 metaani-sulfonyylikloridia ja sekoitettiin vielä 1 tunti -60°C: 3 ssa. Reaktioseos kaadettiin sitten 500 cm :iin ammonium-kloridin kyllästettyä vesiliuosta, sekoitettiin 10 minuut-35 tia, uutettiin metyleenikloridillä, kuivattiin orgaani- 3 77872 26 nen faasi, lisättiin 2,5 cm pyridiiniä ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa 0°C:ssa. Lisättiin 3 75 cm tetrahydrofuraania saatuun jäännökseen 3a sit- 3 ten 0,75 g hopeanitraattia liuotettuna 1,25 cm :iin 5 vettä. Reaktioseosta pidettiin 18 tuntia -30°C:ssa ja sen jälkeen vielä 4 tuntia huoneen lämpötilassa. Sen 3 jälkeen se kaadettiin 500 cm :iin ammoniumkloridin puolikyllästettyä vesiliuosta, johon oli lisätty 5 g natriumsyanidia. Sekoitettiin 30 minuuttia 20°C:ssa, 10 uutettiin seos kloroformilla, pestiin uutteet natrium-kloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin. Jäännös puhdistettiin kromato-grafisesti silikageelillä eluoiden petroolieetterin ja etyyliasetaatin 9:1-seoksella. Saatiin 3 g haluttua 15 tuotetta. Sp. 150°C. = + 125° + 2,5° s 1 % kloroformissa).

Vaihe b: 3,3-dimeoksi-5^, 10ot*eP°ksi-17y^-ety- nyyli-l^-hydroksi-estr-9 (11) -eeni.

Sekoitettiin keskenään 2,6 g vaiheessa a saatua 3 20 tuotetta, 12 cm metyleenikloridia ja tippa pyridiiniä.

Jäähdytettiin seos 0°C:seen, lisättiin 0,12 cm^ heksa- 3 klooriasetonia ja 0,65 cm vetyperoksidia (200 tila- vuusosaa). Sekoitettiin tunnin ajan ja lisättiin sen 3 jälkeen 13 cm kloroformia ja jatkettiin sekoitusta 3 25 vielä 18 tuntia. Reaktioseos kaadettiin sitten 100 cm : iin natriumtiosulfaatin kyllästettyä liuosta, sekoitettiin 10 minuuttia, uutettiin kloroformilla, pestiin orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin. Saatiin 2,8 g 30 haluttua tuotetta, joka käytettiin sellaisenaan seuraa-vassa vaiheessa. (Tuote sisälsi vähäisen määrän epoksi-dia ji) .

27 7 7 8 7 2

Esimerkki 7 : 1Ί/& -hydroksi-17e£-fenyyli-ll/£ - (4-dimetyy-liaminofenyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni Vaihe A: 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-11^ -(4-dimetyyliaminofenyyli)-estr-9-eeni-5 5«t-hydroksi-17-oni a) Magnesiumyhdisteen valmistaminen Sekoitettiin inertissä kaasukehässä keske- 3 nään 29 g magnesiumlastuja ja 50 cm vedetöntä tetra-hydrofuraania. Lisättiin 2 ja puolen tunnin aikana 10 pitäen lämpötila koko ajan 35 + 5°C:ssa seos, joka si- 3 sälsi 200 g 4-dimetyyliamino-bromibentseeniä 950 cm :ssä vedetöntä tetrahydrofuraania. Näin saatiin halutun magnesiumyhdisteen 0,8M liuos.

b) Magnesiumyhdisteen lisääminen 15 Sekoitettiin inertissä kaasukehässä keske nään 25 g 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis (oksi)/-5*^, 10#£-epok- 3 si-estr-9(11)-eeni-17-onia, 500 cm vedetöntä tetrahydrofuraania ja 0,757 g kuprokloridia. Jäähdytettiin seos 0 - +5°C:seen ja lisättiin tipoittain 1 tun- 3 20 nin ja 15 minuutin aikana 284 cm edellä valmistettua magnesiumyhdisteen liuosta. Sekoitettiin sitten 15 minuuttia, kaadettiin seos kyllästettyyn ammoniumkloridi-liuokseen, uutettiin etyyliasetaatilla, pestiin orgaaninen faasi ensin ammoniumkloridin kyllästetyllä vesi-25 liuoksella ja sen jälkeen natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Saatiin 46 g raa-katuotetta, joka puhdistettiin kromatografisesti silika-geelillä eluoiden petroolieetterin ja etyyliasetaa-30 tin 1:1-seoksella, joka sisälsi 1 promillen trietyyli-amiinia, ja saatiin näin 17,76 g haluttua tuotetta.

Sp. = 178°C.

Saadun tuotteen epäpuhtaat fraktiot käsiteltiin uudelleen kromatografisesti silikageelillä eluoiden 35 petroolieetterin ja asetonin 8:2-seoksella, joka sisälsi 1 promillen trietyyliamiinia. Saatiin vielä 6,36 g haluttua tuotetta. Sp. = 176°C. Näin saatu tuote käytet- 28 77872 tiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.

Vaihe B: 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis (oksi)/-5^, 17/0 -dihydroksi-11/^ -(4-dimetyyliaminofenyyli)-17«^-fenyyli-estr-9-eeni 5 Lisättiin 30 minuutin aikana 25°C:ssa 33,3 cm^: iin fenyylilitiumliuosta (1,5 M) toinen liuos, joka 3 sisälsi 4,51 g vaiheessa A saatua tuotetta ja 45,1 cm vedetöntä tetrahydrofuraania. Sekoitettiin 4 tunnin ajan huoneen lämpötilassa, kaadettiin reaktioseos sit-10 ten ammoniumkloridin kyllästettyyn vesiliuokseen, uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi natriumklori-din kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Saatiin 5,6 g raakatuotetta, joka puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä 15 eluoiden metyleenikloridin ja asetonin 9:1-seoksella, joka sisälsi 1 promillen trietyyliamiinia. Saatiin 1,16 g haluttua tuotetta, joka kiteytettiin sitten metyleenikloridin ja isopropyylieetterin seoksesta. Sp. = 240°C.

= + 53° + 2,5° (c * 0,5 % kloroformissa).

20 Vaihe C: 17/^-hydroksi-17e4:fenyyli-lly/5-(4- dimetyyliaminofenyyli)-estra-4,9-di-eeni-3-oni

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 1,5 g vai- 3 heessa B saatua tuotetta 45 cm :iin metanolia. Seos 25 jäähdytettiin 0, +5°Csseen ja lisättiin 3 cm"* 2N kloori- vetyhappoa. Sekoitusta jatkettiin vielä tunti 0, + 5°C: 3 3 ssa, minkä jälkeen lisättiin 90 cm eetteriä ja 90 cm natriumbikarbonaatin 0,25M vesiliuosta. Sekoitettiin 5 minuuttia, dekantoitiin, uutettiin eetterillä, pestiin 30 orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesi- liuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin.

Saatiin 1,30 g tuotetta, joka puhdistettiin kromatogra- gisesti silikageelillä eluoiden petroolieetterin ja etyyliasetaatin 1:1-seoksella. Saatiin 0,93 g haluttua 35 tuotetta, joka kiteytettiin metyleenikloridin ja 29 77872 isopropyylieetterin seoksesta. Sp. = 226°C.

= +151,5° (c = 0,4 %, kloroformissa)

Vaiheen A lähtötuote valmistettiin seuraavalla tavalla: 5 Sekoitettiin keskenään 11,18 g 3,3-/1,2-etaani- diyyli-bis(oksi)/-estr-5(10), 9(11)-dieeni-17-onia 3 ja 56 cm metyleenikloridia, lisättiin 2 tippaa pyri-diiniä, jäähdytettiin seos 0°C:seen ja lisättiin 4,3 cm heksafluoriasetonin seskvihydraattia ja sen jälkeen 1,6 10 cm^ 85 %:ista vetyperoksidia. Sekoitusta jatkettiin inertissä kaasukehässä 0°C:ssa 23 tuntia. Sen jälkeen 3 reaktioseos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 200 cm natriumtiosulfaatin 0,5M liuosta ja 200 g jäätä. Sekoitusta jatkettiin vielä 30 minuuttia ja uutettiin 15 seos sitten metyleenikloridilla, joka sisälsi vähäisen määrän pyridiiniä. Orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Saatiin 11,4 g haluttua tuotetta, joka käytettiin sellaisenaan seu-raavassa vaiheessa.

20 Esimerkki 8: 11/9 -(4-dimetyyliaminofenyyli)-17/>-hydrok- si-23-metyyli-(17,{j-19,21-dinorkola-4,9,23-trieeni-20-yyni-3-oni

Vaihe A: 3,3 - (1,2-etaani-diyyli-bis (oksi) /-11/31 -(4-dimetyyliaminofenyyli)-23-metyyli-25 (17JJ-19,21-dinorkola-9,23-dieeni-20- yyni-5efe-17^ -dioli

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 4,5 g kalium- 3 terbutylaattia 90 cm :iin vedetöntä tetrahydrofuraania. Seos jäähdytettiin -10°C:seen ja lisättiin 10,61 cm^ 30 2-metyyli-l-buteeni-3-yyniä. Sekoitettiin 15 minuuttia -10°C:ssa ja lisättiin sen jälkeen 15 minuutin aikana liuos, joka sisälsi 4,5 g esimerkin 7 vaiheessa A saatua tuotetta ja 4 5 cm"* vedetöntä tetrahydrofuraania. Sekoitettiin 30 minuutin ajan -10°C:ssa ja sen jäl-35 keen 4 tuntia 0, +5°C:ssa. Reaktioseos kaadettiin 500 3 cm :iin ammoniumkloridin kyllästettyä vesiliuosta, uutet- 3° 77872 tiin etyyliasetaatilla, pestiin orgaaninen faasi nat-riumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Saatiin 5,56 g haluttua tuotetta raakatuotteena. Sp. = 205°C. Tuote käytettiin 5 sellaisenaan synteesin seuraavassa vaiheessa.

Raakatuote, puhdistettuna kromatografisesti sill-kageelillä eluoiden metyleenikloridin ja etyyliasetaatin 9:1-seoksella joka sisälsi 1 promillen trietyyli-amiinia, ja kiteytettynä uudelleen etyyliasetaatissa, 10 suli 215°C:ssa.

Vaihe B; llfl -(4-dimetyyliaminofenyyli)-17/3 - hydroksi-23-metyyli-(17«0 “19,21-dinorko-la-4,9,23-trieeni-20-yyni-3-oni

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 5 g vaihees- 3 3 15 sa A saatua tuotetta 300 cm :iin metanolia ja 10 cm : iin 2N kloorivetyhappoa. Sekoitettiin 15 minuuttia 20°C: ssa, lisättiin 300 cm^ metyleenikloridia ja sen jäl- 3 keen 300 cm natriumbikarbonaatin 0,25M liuosta. Sekoitusta jatkettiin vielä 10 minuuttia ja dekantoitiin seos 20 sitten, uutettiin vesifaasi metyleenikloridilla, pes tiin orgaaninen faasi vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Saatiin 4,5 g haluttua tuotetta raakatuotteena, joka puhdistettiin kromatografisesti silikagee-lillä eluoiden petroolieetterin ja etyyliasetaatin 1:1-25 seoksella. Uudelleen kiteyttämällä di-isopropyylioksi- dista saatiin 2,01 g haluttua tuotetta. Sp. = 185°C.

= +88,5° +1,5° (c = 1 % kloroformissa).

Esimerkki 9: 11/3 - (4-dimetyyliaminofenyyli) -17//3-metok- si-23-metyyli-(17*0 -19,21-di-norkola-4,9,2 3-30 trieeni-20-yyni-3-oni

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 4,5 g kalium-tertbutylaattia 90 cm^:iin vedetöntä tetrahydrofuraania. Suspensio jäähdytettiin -10°C:seen ja lisättiin sen 3 jälkeen tipoittain 10,61 cm 2-metyyli-l-buteeni-3-yyniä. 35 Sekoitettiin 15 minuutin ajan -10°C:ssa ja lisättiin sen jälkeen 15 minuutin aikana 4,5 g esimerkin 7 vaihees- 31 7 7872 3 sa A saatua tuotetta 45 cm :ssä vedetöntä tetrahydro-furaania. Sekoitettiin 30 minuuttia -10°C:ssa ja sen jälkeen 4 tuntia 0, +5°C:ssa. Sitten lisättiin 7,5 cm-3 metyylijodidia ja pidettiin reaktioseosta sitten jää-5 hauteessa 30 minuutin ajan samalla sekoittaen. Sen 3 jälkeen reaktioseos kaadettiin 500 cm :iin 0,IN kloori-vetyhappoa. Sekoitettiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa, uutettiin etyyliasetaatilla, pestiin orgaaninen faasi natriumbikarbonaatin kyllästetyllä vesiliuok-10 sella ja sen jälkeen natriumkloridin kyllästetyllä vesi-liuoksella .

Orgaaninen faasi kuivattiin ja liuotin haihdutettiin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden metyleenikloridin ja etyyliasetaa-15 tin 95:5-seoksella. Saatiin 2,7 g haluttua tuotetta, joka kiteytettiin uudelleen metanolista. Sp. = 105°C. Esimerkki 10: 21-kloori-17/9 -hydroksi-11/^ -(4-dimetyyli-aminofenyyli) -(17.0 -19-nor-pregna-4,9-di-eeni-20-yyni-3-oni 20 Vaihe A: 21-kloori-3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)- /11/} -(4-dimetyyliaminofenyyli)-(17 )-19-nor-pregna-9-eeni-20-yyni-5e(, Π/b -dioli

Litiumyhdisteen valmistaminen 25 Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 77,5 cm^ bu- 3 tyylilitiumin IM heksaaniliuosta 310 cm :iin vedetöntä etyylieetteriä. Liuos jäähdytettiin 0, +5°C:seen ja 3 lisättiin 45 minuutin aikana liuos, joka sisälsi 7 cm 3 trikloorietyleeniä ja 28 cm vedetöntä etyylieetteriä.

30 Sekoitettiin tunnin ajan ja annettiin lämpötilan samalla kohota 20°C:seen.

Kondensointi

Edellä saatu seos jäähdytettiin 0, +5°C:seen ja lisättiin tipoittain 30 minuutin aikana liuos, joka 35 sisälsi 7 g esimerkin 7 vaiheessa A saatua tuotetta 3 32 7 7 8 7 2 ja 70 cm tetrahydrofuraania. Sekoitettiin 30 minuuttia 0, +5°C;ssa ja annettiin lämpötilan sitten kohota 20°C:seen, kaadettiin reaktioseos sitten hitaasti ammoniumkloridin kyllästettyyn vesiliuokseen, dekan-5 toitiin, uutettiin metyleenikloridilla, pestiin orgaaninen faasi vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Saatiin 8,5 g raakatuotetta (Sp. = 220°C), 3 joka sekoitettiin 42,5 cm :iin di-isopropyylioksidia. Sekoitettiin 30 minuutin ajan, erotettiin tuote ja saa-10 tiin näin 6,38 g haluttua tuotetta. Sp. = 230°C.

Tuote puhdistettiin kromatografisesti silikagee-lillä eluoiden bentseenin ja etyyliasetaatin 7:3-seoksella, joka sisältää 1 promillen trietyyliamiinia. Liuottamalla tämä tuote metyleenikloridiin ja lisää-15 mällä di-isopropyylioksidia saatiin kiteinen tuote, joka suli 240°C:ssa. = -83,5°C + 1,5 (c = 1 % klo roformissa) .

Vaihe B: 21-kloori-17^-hydroksi-11^-(4-dime-tyyliaminofenyyli)-(17^)19-nor-pregna-20 4,9-dieeni-20-yyli-3-oni

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä keskenään 6,38 g edellisessä vaiheessa saatua tuotetta ja 191,4 3 3 cm 95 %:ista etanolia. Lisättiin 15 cm 2N kloorivety- 3 happoa, sekoitettiin 1 tunnin ajan, lisättiin 300 cm 3 25 metyleenikloridia ja sitten 200 cm natriumbikarbonaatin 0,25M vesiliuosta. Faasit erotettiin dekantoimalla, vesifaasi uutettiin metyleenikloridilla, pestiin orgaaninen faasi vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Saatiin 6 g raakatuotetta, joka puhdistet-30 tiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden bentseenin ja etyyliasetaatin 7:3-seoksella. Saatiin 3,95 g haluttua tuotetta, joka kiteytettiin etyyliasetaatista. Sp. = 240°C = +111° + 2° (c = 1 %, CHCl3) .

33 7 7 8 7 2

Esimerkki 11: 21-kloori-17/^ -hydroksi-ll/&-(4-dimetyy-liaminofenyyli) - (17d) 19-nor-pregna-4,9-dieeni-20-yyni-3-onin N-oksidi Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 1,2 g esi- 3 5 merkissä 10 saatua tuotetta 24 cm :iin metyleeniklo-ridia. Seos jäähdytettiin 0, +5°C:seen ja lisättiin seos, joka sisälsi 0,54 g metaklooriperbentsoehappoa 3 (85 %) 10,8 cm :ssä metyleenikloridia. Sekoitettiin 1 tunti 0, +5°C:ssa, kaadettiin reaktioseos natriumtiosul-10 faatin 0,2N liuokseen, uutettiin metyleenikloridilla, pestiin orgaaninen faasi natriumnatriumbikarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja sen jälkeen vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Saatiin 1,3 g raakatuotetta. Tämä tuote puhdistettiin kromatografises-15 ti silikageelillä eluoiden metyleenikloridin ja meta-nolin 7:3-seoksella. Saatiin 1,15 g haluttua tuotetta.

= +47,5° + 2,5° (c = 0,7 % kloroformi).

Esimerkki 12; 21-kloori-9ot-10pirepoksi-17/5 -hydroksi-11^-(4 -dimetyyliaminofenyyli) (17*4) 20 19 -nor -pr egna-4 -een i -2 0 -yyn i -3 -on ia N-oksidi

Liuotettiin 1,18 g esimerkissä 10 saatua tuotet-3 ta 23,6 cm :iin metyleenikloridia, jäähdytettiin seos 0, +5°C:seen ja lisättiin 15 minuutin aikana seos, 25 joka sisälsi 1,17 g metaklooriperbentsoehappoa (85 %: 3 ista) 23,4 cm :ssä metyleenikloridia. Sekoitusta jatkettiin 2 tuntia 20°C:ssa, lisättiin uudestaan 0,117 g metaklooriperbentsoehappoa, sekoitettiin vielä 1 tunti, kaadettiin reaktioseos natriumtiosulfaatin 0,2N vesi-30 liuokseen, uutettiin metyleenikloridilla, pestiin orgaaninen faasi natriumbikarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja sitten vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Saatiin 1,14 g raakatuotetta.

Sp. = 220°C.

35 Tuote puhdistettiin kromatografisesti silika geelillä eluoiden metyleenikloridin ja metanolin 8:2- 34 7 7 8 7 2 seoksella ja saatiin 1 g haluttua tuotetta. Sp. =270°C.

= +39,5° + 2,5° (c = 0,5 %, kloroformi).

Esimerkki 13; 21-kloori-9*i.-10*£-epoksi-17/$ -hydroksi-11/® -(4-dimetyyliaminofenyyli) (UJO 19-nor-5 pregn-4-eeni-20-yyni-3-oni

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 0,65 g esi- 3 merkissä 12 saatua tuotetta 6,3 cm :iin etikkahappoa. Lisättiin 0,34 g trifenyylifosfiinia, sekoitettiin 45 minuuttia huoneen lämpötilassa, kaadettiin reaktioseos 10 veteen, uutettiin metyleenikloridilla, pestiin orgaaninen faasi vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin. Saatiin 0,9 g tuotetta, joka puhdistettiin kromatogra-fisesti silikageelillä eluoiden petroolieetterin ja etyyliasetaatin 1:1-seoksella. Näin saatu tuote kitey-15 tettiin uudelleen metyleenikloridin ja isopropyylieet-terin seoksesta ja saatiin 0,346 g haluttua tuotetta.

Sp. = 265°C. = +45° + 2° (c = 0,8 % kloroformi).

Esimerkki 14: 17/i -hydroksi-11^ -(4-dimetyyliaminofenyyli) -21-fenyyli (17ol) 19-nor-pregna-20 4,9-dieeni-20-yyni-3-oni

Vaihe A; 21-fenyyli-3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis- (oksi)/-11/*-(4-dimetyyliaminofenyyli)-5*C-17/*-dihydroksi- (17pt) 19-norpregn-9-eeni-20-yyni 25 Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 4,17 g kalium- 3 terbutylaattia 83 cm :iin vedetöntä tetrahydrofuraania. Sekoitettiin 5 minuuttia ja jäähdytettiin seos sitten -10°C:seen ja lisättiin tipoittain 4,5 cm3 fenyyli-asetyleeniä. Suspensiota sekoitettiin 5 minuuttia ja 30 lisättiin sitten tipoittain -10°C:ssa liuos, joka sisälsi 4,17 g esimerkin 7 vaiheessa A saatua tuotetta 3 ja 41 cm vedetöntä tetrahydrofuraania. Lisäyksen päätyttyä lämpötilan annettiin kohota 0°C:seen ja sitten 1 tunnin kuluttua kaadettiin reaktioseos ammoniumklori-35 din kyllästettyyn vesiliuokseen. Uutettiin eetterillä, 35 77872 pestiin orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin, haihdutettiin kuiviin ja saatiin näin 4,7 g tuotetta, joka puhdistettiin kroraatografisesti silikageelillä eluoiden metyleeniklo-5 ridin ja asetonin 95:5-seoksella. Saatiin 3,71 g haluttua tuotetta. Sp. = 168°C. {<tfD = -119,5° + 2° (c = 1 % kloroformi).

Vaihe B: ll/b-hydroksi-ll^-(4-dimetyyliaminofe-nyyli) -21-fenyyli- (17</.) 19-nor-pregna-10 4,9-dieeni-20-yyni-3-oni

Liuotettiin 3,49 g edellisessä vaiheessa saatua 3 3

tuotetta 68 cm :iin metanolia ja lisättiin 6,3 cm 2N

kloorivetyhappoa. Sekoitettiin reaktioseosta 30 minuuttia ja kaadettiin se sen jälkeen seokseen, joka sisäl-3 3 15 si 180 cm etyylieetteriä ja 90 cm natriumbikarbonaatin 0,25M liuosta. Sekoitettiin 5 minuuttia, dekantoi-tiin, uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi 0,25 M natriumbikarbonaattiliuoksella. Kuivattiin, haihdutettiin liuotin ja saatiin näin 4,35 g tuotetta, 20 joka puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä elu oiden metyleenikloridin ja asetonin 95:5-seoksella.

Saatiin 2,13 g haluttua tuotetta kiteyttämällä isopro-pyylieetteristä. = +22,5° + 1° (c = 1 %, kloro formi) .

25 Esimerkki 15: 17/^-hydroksi-ll/^-(4-dimetyyliaminofenyy- li)-17^- (propa-1,2-dienyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni

Vaihe A: 11^-(4-dimetyyliaminofenyyli)-3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-17Jr(propa-1,2-30 dienyyli) -estr-9-eeni-5e/, 17/^ -dioli ja ll/£-(4-dimetyyliaminofenyyli)-3,3-/1,2-etaanidiyyli) -bis (oksi)/-17o4-(prop-2-ynyyli) -estr-9-eeni-5o(, 17/^ -dioli

Litium-yhdisteen valmistaminen 3 35 Annettiin propadieenin kuplia 50 cm :iin 0-5-asteis- ta tetrahydrofuraania kunnes sitä oli absorboitunut kaik- 36 7 7 8 7 2 kiaan 2,1 g. Seos jäähdytettiin sitten -70°C:seen ja lisättiin 15 minuutin aikana 23,9 cm^ butyylilitiumin 1,3M heksaaniliuosta. Saatua seosta sekoitettiin 15 minuutin ajan -70°C:ssa.

5 Kondensointi

Edellä saatuun litiumyhdisteen liuokseen lisättiin -70°C:ssa 25 minuutin aikana liuos, joka sisälsi 3,5 g esimerkin 7 vaiheessa A saatua tuotetta se-kä 35 cm vedetöntä tetrahydrofuraania. Sekoitettiin 10 1 tunnin ajan -70°C:ssa, kaadettiin seos hitaasti ammo- niumkloridin jääkylmään kyllästettyyn vesiliuokseen. Uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi natrium-kloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Saatiin 3,4 g tuotetta, 15 joka puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden petroolieetterin ja etyyliasetaatin l:l-seok-sella, joka sisälsi 1 promillen trietyyliamiinia.

Näin saatiin: a) 1,73 g 17*£-(propa-1,2-dienyyli)-isomeeriä 20 Sp. = 178°C. = -32° + 2° (c = 0,7 % kloroformi).

b) 1,5 g 17o(r (prop-2-ynyyli) -isomeeriä

Sp. = 150°C = -15° + 2° (c = 0,9 % kloroformi).

Vaihe B: lift -hydroksi-11/0 - (4-dimetyyliamino-fenyyli) -17·^- (propa-1,2-dienyyli) -25 estra-4,9-dieeni-3-oni

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä keskenään 1,73 g vaiheessa A saatua 17o<.- (propa-1,2-dienyyli) - 3 3

isomeeriä, 51,8 cm 95 %:ista etanolia ja 3,5 cm 2N

kloorivetyhappoa. Sekoitettiin 20°C:ssa 1 tunnin ajan, 3 3 30 lisättiin 50 cm metyleenikloridia ja sitten 50 cm 0,25M natriumbikarbonaatin 0,25M liuosta; dekantoitiin, uutettiin metyleenikloridilla, pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin. Saatiin 1,51 g tuotetta, jo- 3 ka liuotettiin 10 cm :iin kuumaa metyleenikloridia.

3 35 Sitten lisättiin 15 cm isopropyylieetteriä, konsentroi- 37 7 7 8 7 2 tiin ja jätettiin liuos seisomaan. Näin saatiin 1,23 g haluttua tuotetta, joka kiteytettiin uudelleen mety-leenikloridin ja isopropyylieetterin seoksesta. Lopulta saatiin 1,11 g haluttua tuotetta. Sp. = 228°C.

5 1 = +139,5° + 3° (c = 0,8 % kloroformi).

Esimerkki 16: 17/9-hydroksi-11^ -(4-dimetyyliaminofe-nyyli) -YhJL- (prop-2-ynyyli) -estra-4,9-di-eeni-3-oni

Sekoitettiin keskenään 0,94 g esimerkin 15 vai- 3 10 heessa A saatua 17^tr (prop-2-ynyyli)-isomeeriä, 28,2 cm 3 95 %:ista etanolia sekä 2 cm 2N kloorivetyhappoa. Sekoitettiin 1 tunnin ajan 20°C:ssa, lisättiin 50 cm^ 3 metyleenikloridia ja 50 cm natriumbikarbonaatin 0,25M liuosta, sekoitettiin 5 minuuttia, dekantoitiin ja uutet-15 tiin metyleenikloridilla. Pestiin orgaaninen faasi vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin.

Saatu tuote puhdistettiin kromatografisesti silikagee-lillä eluoiden petroolieetterin ja etyyliasetaatin 1:1-seoksella. Näin saatiin 0,42 g haluttua tuotetta 20 amorfisena. ^ei7D = +143° + 3° (c = 0,8 % kloroformi).

Esimerkki 17: 17*(.-etynyyli-17/9 -hydroksi-11/9 - (4-dime-tyyliaminofenyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni Vaihe A: 17^ -syano-11/δ -(4-dimetyyliaminofenyy-li)-3,3-/1,2-etaanidietyyli-bis(oksi)/-25 17%(- (trimetyylisilyylioksi) -estr-9- eeni-54roli

Suspensioon, joka sisälsi 2,05 g kupribromidi-dimetyylisulfidikompleksia ja 10 cm^ vedetöntä tetra-hydrofuraania, lisättiin inertissä kaasukehässä huoneen 30 lämpötilassa 18 millimoolia (4-dimetyyliaminofenyyli)-magnesiumbromidia vedettömään tetrahydrofuraaniin liuotettuna, sekoitettiin sitten 20 minuuttia ja lisät- 3 tiin 20 cm vedetöntä trietyyliamiinia. Sen jälkeen lisättiin 0,95 g 17/9-syano-17,^-(trimetyylisilyyli-35 oksi)-3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis (oksi)/-5^ 10o(-epoksi- 38 7 7 8 7 2 estr-9(11)-eeniä liuotettuna vedettömään tetrahydro-furaaniin, sekoitettiin 15 tuntia huoneen lämpötilassa, 3 kaadettiin reaktioseos 50 cm :iin ammoniumkloridin kyllästettyä liuosta, dekantoitiin, uutettiin eetteril-5 lä, pestiin orgaaninen faasi vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kroma-tografisesti silikageelillä eluoiden bentseenin ja etyyliasetaatin 8:2-seoksella. Saatiin 1,1 g haluttua tuotetta, joka kiteytettiin vielä uudelleen isopropyylieet-10 teristä. Sp. = 247°C. = -12,5° (c = 1 % kloroformi).

Vaihe B: 17oiretynyyli-3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis-(oksi) - (4-dimetyyliaminofenyyli) - estr-9-eeni-5^,17/fc -dioli Lisättiin 1 g litiumetyleenidiamiinin asetyli-15 dikompleksia 0,8 g:aan vaiheessa A saatua tuotetta 3 joka oli liuotettu 8 cm :iin etyleenidiamiinia, ja sekoitettiin reaktioseosta sitten inertissä kaasukehässä noin 50°C:ssa puolitoista tuntia. Jäähdytettiin seos 20°C:seen ja kaadettiin se sitten ammoniumkloridiliuok-20 seen. Uutettiin eetterillä ja metyleenikloridillä.

Orgaaninen faasi kuivattiin ja haihdutettiin liuotin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden bentseenin ja etyyliasetaatin 3:3-seoksella, kiteytettiin saatu tuote uudelleen isopropyylieetteris-25 tä ja saatiin näin 0,43 g haluttua tuotetta. Sp. = 199°C. = -43° +1,5° (c = 1 % kloroformi).

Vaihe C: 17«C-etynyyli-17/3 -hydroksi-11/5 -(4-di-metyyliaminofenyyli)-estra-4,9-dieeni- 3-oni 30 Liuokseen, joka sisälsi 0,25 g vaiheessa B saatua 3 3 tuotetta ja 6 cm metanolia, lisättiin 1 cm 2N kloori- vetyhappoa. Sekoitettiin 40 minuuttia 20°C:ssa, kaadettiin seos veteen, johon oli lisätty 2,5 cm^ IN natrium-hydroksidia, uutettiin eetterillä, kuivattiin orgaani-35 nen faasi ja haihdutettiin kuiviin liuotin. Jäännös 39 7 7 8 7 2 puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden bentseenin ja etyyliasetaatin 7:3-seoksella ja saatiin näin 0,25 g haluttua tuotetta.

Analyysi: C20 H33 NO2 (415,54) 5 Laskettu: C % 80,92 H % 8,00 N % 3,37

Saatu: C%80,7 H%8,1 N%3,1.

Esimerkki 18: 17eC-etynyyli-17y^ -hydroksi-1]^ -(4-dime- tyyliaminofenyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni

Vaihe A: 11^ -(4-dimetyyliaminofenyyli)-3,3-/1,2- 10 etaanidiyyli-bis(oksi)/-5^,17/^ -dihydrok- si-17*(.-etynyyli-estr-9-eeni

Liuotettiin inertissä kaasukehässä 6 g esimer- 3 kin 7 vaiheessa A saatua tuotetta 180 cm :iin tetra-hydrofuraania, ja lisättiin sitten 12,25 g litium-ety-15 leenidiamiinin asetylidikompleksia. Seos kuumennettiin 55°C:seen, sekoitettiin sitä 4 tuntia ja kaadet- 3 tiin se sitten 600 cm :iin jääkylmää kyllästettyä ammo-niumkloridiliuosta. Uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin. 20 Saatu jäännös puhdistettiin kromatografisesti so.

silikageelillä eluoiden bentseenin ja etyyliasetaatin 3:3-seoksella, joka sisälsi 1 promillen trietyyliamii-nia ja saatiin näin 4,5 g haluttua tuotetta, joka kiteytettiin uudelleen metyleenikloridin ja di-isopropyyliok-25 sidin seoksesta. Sp. = 202°C. fiO^ = -47,5° (c = 1 % kloroformi).

Vaihe B: 17«£-etynyyli-17,^ -hydroksi-11/9 - (4-di-metyyliaminofenyyli)-estra-4,9-dieeni- 3-oni 30 Sekoitettiin 2 g vaiheessa A saatua tuotetta 50 3 3 cm :iin 95 %:ista etanolia. Suspensioon lisättiin 5 cm 2N kloorivetyhappoa. Sekoitettiin jatkuvasti 1 tunnin o 3 ajan 20 C:ssa, lisättiin 100 cmJ etyylieetteriä ja sitten 100 cm"* natriumbikarbonaatin 0,25M liuosta. Dekan-35 toitiin, uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi 40 7 7 8 7 2 natriurakloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesta silikageelillä eluoiden petroolieette-rin ja etyyliasetaatin 6:4-seoksella ja saatiin näin 5 1,52 g haluttua tuotetta, joka kiteytettiin uudelleen di-isopropyylioksidista. Sp. = 172°C.

^7d = +182° + 2,5° (c = 1 % kloroformi).

Esimerkki 19: 17/4 -hydroksi-11/4 -(3-dimetyyliaminofe-nyyli) -17·!- (prop-l-ynyyli) -estra-4,9-10 dieeni-3-oni

Vaihe A; 11/4 -(3-dimetyyliaminofenyyli)-3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis (oksi) /-17«^- (prop-l-ynyyli) -estr-9-eeni-S^, 17/J-dioli Magnesiumyhdisteen valmistaminen 15 Sekoitettiin inertissä kaasukehässä keske nään 1,46 g magnesiumia ja 5 cm^ vedetöntä tetrahydro-furaania. Lisättiin 45 minuutin aikana pitäen lämpötilaa samalla 50°C:ssa, 10 g metabromidimetyylianilii-nia 45 cm3:ssä vedetöntä tetrahydrofuraania. (Reaktio 20 lähti käyntiin lisättäessä dibromimetaania). Sekoitusta jatkettiin 1 tunnin ajan ja näin saatiin halutun magnesiumyhdisteen 0,95M liuos.

Kondensointi

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä keskenään 25 3,7 g 3,3-/1,2-etyleenidioksi-bis (oksi)/-17e/r (prop-l- ynyyli)-estr-9-(11)-eeni-Sol, 10»(repoksi-17/>-olia, 74 3 cm vedetöntä tetrahydrofuraania ja 99 mg kuprokloridia. Seos jäähdytettiin 0, +5°C:seen, kaadettiin se ammonium-kloridin kyllästettyyn vesiliuokseen, uutettiin eette-30 rillä, pestiin orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuos kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden metyleenikloridin ja asetonin 9:1-seoksella, joka sisälsi 1 promillen trietyyli-35 amiinia. Saatiin 3,5 g haluttua tuotetta. Sp. = 262°C.

= -64° + 1,5° (c = 1 % kloroformi).

41 77872

Saatiin niin ikään 0,66 g vastaavaa 5 fr-0H-isomeeria. Sp. = 210°C, = +32,5° + 1° (c = 0,8 % kloroformi).

Vaihe B; 17^ -hydroksi-11,/* - (3-dimetyyliamino-5 fenyyli)-17^-(prop-l-ynyyli)-estra-4,9- dieeni-3-oni

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 3,3 g vaiheessa A saatua tuotetta 100 cm3:iin metanolia, jäähdytettiin seos 0,+5°C:seen ja lisättiin 10 cm3 2N kloori- 10 vetyhappoa. Sekoitettiin 1 tunnin ajan 0,+5°C:ssa, 3 3 lisättiin 200 cm dietyylioksidia ja sitten 200 cm natriumbikarbonaatin 0,25M liuosta. Sekoitettiin 5 minuuttia, dekantoitiin, uutettiin dietyylioksidilla, pestiin orgaaninen d faasi natriumkloridin kyllästetyllä 15 liuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Saatiin 3 g tuotetta, joka puhdistettiin kromatografisesta silikageelillä eluoiden bentseenin ja etyyliasetaatin 7:3-aseoksella. Näin saatiin 1,43 g haluttua tuotetta amorfisena. - +43° + 2,5° (c = 1 % klo- 20 roformi).

Esimerkki 20: Π fr-hydroksi-11fr -(4-dimetyyliaminofe-nyyli) -17©^-(prop-l-ynyyli) -estra-4,9-di-eeni-3-onin N-oksidi

Sekoitettiin 1,5 g esimerkissä 4 saatua tuotetta 25 30 cm3:iin metyleenikloridia. Jäähdytettiin seos 0,+5°C: seen ja lisättiin siihen 10 minuutin aikana 0,71 g me-taklooriperbentsoehappoa (85 %:ista) liuotettuna 14,2 cm3:iin metyleenikloridia. Sekoitettiin 0,+5°C:ssa 1 3 tunnin ajan, kaadettiin seos 100 cm :iin 0,2 N natrium-30 tiosulfaattiliuosta, dekantoitiin, uutettiin metyleeni- kloridilla, pestiin orgaaninen faasi 0,5M natrium-bikarbonaattiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin 3 liuotin kuiviin. Jäännös liuotettiin 20 cm :iin mety- 3 leenikloridia ja lisättiin 20 cm di-isopropyylioksi-35 dia. Käynnistettiin kiteytyminen, jätettiin liuos lepäämään, erotettiin muodostuneet kiteet ja kuivattiin ne. Saatiin 1,4 g haluttua tuotetta. Sp. = 210°C. frC)p = +73,5° + 2° (c = 1 % kloroformi).

42 77872

Esimerkki 21: 11^ -(4-dimetyyliaminofenyyli)-17^ -hydrok-si-estra-4,9-dieeni-3-oni Sekoitettiin 1 g esimerkin 7 vaiheessa A saatua 3 tuotetta 20 cm :iin tetrahydrofuraania, joka sisäl- 5 si 10 % vettä. Liukenemisen tapahduttua lisättiin 106 mg natriumboorihydridiä, sekoitettiin 1 tunnin ajan, kaadettiin seos 200 cm3:iin vettä, uutettiin metylee- nikloridilla, pestiin orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutet- 10 tiin 1,3 g 5^, 17/^ -dihydroksituotetta.

Lisättiin 0,63 g yllä saatua tuotetta seokseen, 3 3 joka sisälsi 12 cm metanolia ja 2,4 cm 2N kloorivety-happoa. Sekoitettiin 1 tunnin ja 30 minuutin ajan huoneen lämpötilassa, kaadettiin seos natriumbikarbonaatti-15 liuokseen, uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden petroolieetterin ja etyyliasetaatin 6:4-seoksella.

20 Jäännös trituroitiin petroolieetterillä, erotettiin ja saatiin näin 0,38 g haluttua tuotetta. Sp. = 130°C.

= +277° + 5° (c 0,5 % kloroformi).

Esimerkki 22: llfö-hydroksi-11/5 -(4-dimetyyliaminofenyy-li) -17,/7 (prop-2-enyyli) -estra-4,9-dieeni-25 3-oni

Vaihe A: 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-11/^ -(4-dimetyyliaminofenyyli) -17o(r(prop-2-enyyli)-estr-9-eeni-5«£, 17y£> -dioli 3

55,5 cm :iin allyyli-magnesiumbromidin 0,7 M

30 eetteriliuosta lisättiin inertissä kaasukehässä 20°C:ssa 15 minuutin aikana liuos, joka sisälsi 3,5 g esimerkin 3 7 vaiheessa A saatua tuotetta ja 35 cm tetrahydrofu-raania. Sekoitettiin 1 tunnin ajan 20°C:ssa, kaadettiin seos ammoniumkloridin kyllästettyyn vesiliuok-35 seen, uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi i 43 77872 natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Saatu jäännös 3 liuotettiin 10 cm :iin metyleenikloridia. Liuokseen 3 lisättiin 15 cm di-isopropyylioksidia, konsentroi-5 tiin ja jätettiin se seisomaan. Muodostuneet kiteet erotettiin, huuhdeltiin di-isopropyylioksidilla, kuivattiin ja saatiin näin 2,76 g haluttua tuotetta.

Sp. = 198°C.

Analyysi (493,69) 10 Laskettu: C % 74,42 H % 8,78 N % 2,83

Saatu: C % 74,0 H % 8,7 N % 2,9.

Vaiheessa B: 17/J -hydroksi-11/^ -(4-dimetyyliamino-fenyyli) -17qir (prop-2-enyyli) -estra- 4,9-dieeni-3-oni 15 Suspentoitiin 2,2 g vaiheessa A saatua tuotetta 3 3

66 cm :iin metanolia ja lisättiin sitten 4,5 cm 2N

kloorivetyhappoa. Sekoitettiin 30 minuuttia 20°C:ssa, 3 3 lisättiin 132 cm dietyylioksidia ja sitten 132 cm natriumbikarbonaatin 0,25M vesiliuosta. Dekantoitiin, 20 uutettiin dietyylioksidilla, pestiin orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin silikageelillä eluoiden bentseenin ja etyyliasetaatin 7:3-seoksella, otettiin saatu jäännös tal- 3 25 teen seokseen, joka sisälsi 15 cm di-isopropyyliok- 3 sidia ja 7,5 cm metyleenikloridia, konsentroitiin liuos ja jätettiin se seisomaan. Saadut kiteet erotettiin ja huuhdottiin di-isopropyylioksidilla ja saatiin näin 1,365 g haluttua tuotetta. Sp. = 182°C.

30 = +206,5° +3° (c = 1 % kloroformi).

44 7 7 8 7 2

Esimerkki 23; 17β -hydroksi-11/^ -/4-(Ν,Ν-dimetyyliamino-metyyli) -fenyyli/-17o(,- (prop-l-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni

Vaihe A; 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-11^ -5 /4-(Ν,Ν-dimetyyliaminometyyli)-fenyyli/- 17«t-(prop-l-ynyyli) -estr-9-eeni-i*/, 17/£ -dioli

Magnesium-yhdisteen valmistaminen Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 5,5 g mag- 3 10 nesiumia 10 cm :iin vedetöntä tetrahydrofuraania. Pitäen seoksen lämpötilaa 45-50°C:ssa lisättiin 1 tunnin ja 30 minuutin aikana 42,8 g 4-(N,N-dimetyyliaminome- 3 tyyli)-bromibentseeniä 190 cm :ssä vedetöntä tetrahydro-furaania. Reaktio pantiin käyntiin lisäämällä dibromi-15 etaania. Kun reaktio oli päättynyt, sekoitusta jatkettiin vielä 1 tunnin ajan. Näin saatiin halutun magnesium-yhdisteen 0,85 M liuos.

Lisääminen epoksidiin

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä keskenään 20 10 g 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis (oksi) /-17-/.-(prop-l-ynyyli) - estr-9 (11) -eeni-5o(, lO-irepoksi-l^ -olia, 200 cm^ vedetöntä tetrahydrofuraania ja 0,27 g kuprokloridia. Seos jäähdytettiin 0,+5°C:seen ja lisättiin siihen 1 tunnin 3 aikana 127 cm edellä valmistettua magnesiumyhdisteen 25 liuosta. Sekoitettiin 15 minuuttia, kaadettiin seos am-moniumkloridin kyllästettyyn vesiliuokseen, uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromato-30 grafisesti silikageelillä eluoiden metyleenikloridin ja metanolin 9:1-seoksella, joka sisälsi 1 promillen tri-etyyliamiinia. Saatiin 10,1 g tuotetta, joka kiteytettiin liuottamalla se ensin metyleenikloridiin ja lisäämällä sitten muutama cm^ metanolia ja lopuksi di-iso-35 propyylioksidia. Konsentroidun liuoksen annettiin sitten seistä 6 tuntia, minkä jälkeen erotettiin tuote, saaden näin 7,37 g haluttua tuotetta. Sp. = 186°C.

45 77872 - -63° + 2,5° (c = 0,5 % kloroformi).

Vaihe B: \1 Jb -hydroksi-iy^ -/4-(N,N-dimetyyli-aminometyyli) -f enyy li/-17^.- (prop-1-ynyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni 5 Sekoitettiin inertissä kaasukehässä keske- ' nään 7,37 g vaiheessa A saatua tuotetta, 147,4 cm"* me-tanolia ja 15 cm3 2N kloorivetyhappoa. Sekoitettiin 20°C: 3 ssa 1 tunnin ajan, lisättiin 300 cm dietyylioksidia 3 ja 300 cm natriumbikarbonaatin 0,25M vesiliuosta, de-10 kantoitiin, uutettiin dietyylioksidilla, pestiin orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Saatu tuote kiteytettiin uudelleen liuottamalla se di-isopro-pyylioksidin ja metyleenikloridin seokseen, konsentroi-15 maila liuos ja jättämällä se sitten seisomaan. Näin saatiin 3,74 g haluttua tuotetta. Sp. = 190°C.

= -84,5° + 2° (c = 0,8 % kloroformi).

Esimerkki 24: 1 -hydroksi-11/2»- (4-pyrrolidinyyli-fe-nyyli)-17^- (prop-l-ynyyli)-estra-4,9-20 dieeni-3-oni

Vaihe A; 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-11/b -(4-pyrrolidinyylifenyyli) -17o&-(prop-l-ynyyli) -estr-9-eeni-S,^, 17/5* -dioli Magnesiumyhdisteen valmistaminen 25 Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 4 g magne- 3 siumia 10 cm :iin vedetöntä tetrahydrofuraania. Lisättiin tunnin aikana pitäen lämpötilaa 45-50°C:ssa 34 g 3 4-pyrrolidinyyli-bromibentseeniä 140 cm :ssä vedetöntä tetrahydrofuraania. Reaktio käynnistettiin lisää-30 mällä dibromietaania. Näin saatiin halutun magnesium-yhdisteen IM liuos.

Kondensointi epoksidin kanssa

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä keskenään 8 g 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis (oksi) /-5 JL, 10*irepoksi-17«<-35 (prop-l-ynyyli)-estr-9(11)-eeni-17/^ -olia, 160 cm3 4« 7 78 72 vedetöntä tetrahydrofuraania ja 216 mg kuprokloridia.

Seos jäähdytettiin 0,+5°C:seen ja lisättiin siihen 3 sitten 1 tunnin ja 30 minuutin aikana 86,4 cm edellä valmistettua magnesiumyhdisteen liuosta. Sekoitettiin 1 5 tunnin ajan, kaadettiin seos ammoniumkloridin kyllästettyyn vesiliuokseen, uutettiin dietyylioksidilla, pestiin orgaaninen faasi ensin ammoniumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella ja sitten natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin 10 kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silika-geelillä eluoiden metyleenikloridin ja asetonin 95:5-seoksella, joka sisälsi 1 promillen trietyyliamiinia.

Näin saatiin 8,3 g haluttua tuotetta, joka kiteytettiin uudestaan metyleenikloridin ja isopropyylieetterin 15 seoksesta. Sp. = 185°C. = -67° + 1,5° (c = 1 % kloroformi).

Vaihe B: 17/£ -hydroksi-11fr-(4-pyrrolidinyyli-fenyyli) (prop-l-ynyyli) -estra- 4,9-dieeni-3-oni 20 Liuotettiin 6,4 g vaiheessa A saatua tuotet- 3 3 ta 128 cm :iin metanolia ja lisättiin sitten 13 cm 2N kloorivetyhappoa. Sekoitettiin 1 tunti 20°C:ssa ja 3 3 lisättiin sitten 256 cm dietyylioksidia ja 256 cm natriumbikarbonaatin 0,25 M vesiliuosta. Dekantoitiin, 25 uutettiin dietyylioksidilla, pestiin orgaaninen faasi natriumbikarbonaatin 0,25M vesiliuoksella ja sen jälkeen natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden 30 petroolieetterin ja etyyliasetaatin 1:1-seoksella ja saatiin näin 5,25 g haluttua tuotetta, joka kiteytettiin uudelleen metyleenikloridin ja di-isopropyylioksi-din seoksesta. Sp. = 190°C. = “120° + 2,5° (c = 1,2 % kloroformi).

47 7 7 8 7 2

Esimerkki 25; 17/¾ -hydroksi-11/*-(4-dimetyyliaminofe- nyyli) -17«4-etenyyli-estra-4,9-dieeni-3-oni Vaihe A: 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-11/¾ -(4-dimetyyliaminofenyyli) -17«£-etenyyli-5 estr-9-eeni-5e6 17/^-dioli

Sekoitettiin 3 g esimerkin 17 vaiheessa B saatua 3 tuotetta 60 cm :iin vedetöntä pyridiiniä ja lisättiin 0,6 g palladiumin 5 %:ista kalsiumkarbonaattiseos-ta. Johdettiin vetykaasua seokseen huoneen lämpötilas-10 sa 1 tunnin ajan. Erotettiin katalysaattori, haihdutettiin suodos kuiviin, otettiin jäännös talteen toluee-niin ja haihdutettiin uudelleen kuiviin. Näin saatiin 2,94 g haluttua tuotetta, joka käytettiin sellaisenaan synteesin seuraavassa vaiheessa. Sp. = 181°C.

15 Tuote voidaan puhdistaa edelleen kiteyttämällä se uudelleen metyleenikloridin ja di-isopropyylioksidin seoksesta. Sp. = 182°C. (tij = -6,5° + 2° (c = 0,7 % kloroformi) .

Vaihe B: 17^-hydroksi-11ft -(4-dimetyyliamino-20 fenyyli) -17«(-etenyyli-estra-4,9-dieeni- 3-oni

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 2,94 g vai- 3 heessa A saatua tuotetta 60 cm :iin metanolia ja li- 3 sättiin sitten 6,2 cm 2N kloorivetyhappoa. Liuosta 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 sekoitettiin 20°C:ssa 1 tunnin ajan, lisättiin 120 cm^ 2 3 3 eetteriä ja 120 cm natriumbikarbonaatin 0,25M vesi- 4 liuosta, jatkettiin sekoitusta 10 minuuttia, dekantoi-tiin ja uutettiin eetterillä. Orgaaninen faasi pestiin 5 natriumbikarbonaatin 0,25M vesiliuoksella ja sitten 6 natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella. Kuivat 7 tiin orgaaninen faasi ja haihdutettiin liuotin kuiviin.

8

Saatiin 2,65 g tuotetta, joka puhdistettiin kromatogra 9 fisesta silikageelillä eluoiden bentseenin ja etyyliase 10 taatin 7:3-seoksella ja kiteytettiin tuote vielä di-iso- 11 propyylioksidin ja metyleenikloridin seoksesta. Saatiin 4" 77872 1,51 g haluttua tuotetta. Sp. = 150°C.

= -243° + 3° (c = 0,8 % kloroformi) .

Esimerkki 26: 17^-hydroksi-ll/>-(4-dietyyliaminofenyyli)-17*(r (prop-l-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3 -oni 5 Vaihe A: 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/- 11/*- (4-dietyyliaminofenyyli) -17o£- (prop-1-ynyyli) -estr-9-eeni-5«£, 17/£ -dioli Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 3,9 g mag- 3 nesiumia 10 cm :iin tetrahydrofuraania. Lisättiin tipoit-10 tain liuos, joka sisälsi 34,2 g 4-(Ν,Ν-dietyyliamino)- 3 bromibentseeniä ja 110 cm tetrahydrofuraania pitäen lämpötila noin 35°C:ssa. Saatiin halutun magnesiumyhdisteen IM liuos.

Kondensointi 15 Liuotettiin 7,4 g 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)- /5J^ 10 Tepoksi-17^- (prop-l-ynyyli) -estr-9- (11) -eeni-17/fr -olia 150 cm :iin vedetöntä tetrahydrofuraania. Lisättiin sitten 0,25 g kuprokloridia. Sekoitettiin 0,+5°C: 3 ssa inertissä kaasukehässä ja lisättiin hitaasti 80 cm 20 edellä valmistettua magnesiumyhdisteen liuosta. Sekoitusta jatkettiin 17 tuntia 20°C:ssa ja kaadettiin sen jälkeen reaktioseos ammoniumkloridin vesiliuokseen, uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutet-25 tiin liuotin kuiviin. Jäännös lietettiin petrooli- eetteriin ja käsiteltiin sitten aktiivihiilellä eetterissä ja kiteytettiin isopropyylieetteristä. Näin saatiin 4 g haluttua tuotetta. ^7D = -61° + 2,5° (c = 0,7 % kloroformi).

30 Vaihe B: 17/£-hydroksi-11^ -(4-dietyyliaminofe- nyyli) -17e(- (prop-l-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni

Liuokseen, joka sisälsi 3,12 g vaiheessa Ά saatua 3 3 tuotetta ja 45 cm metanolia, lisättiin 8 cm 2N kloori-35 vetyhappoa ja sekoitettiin sitä 45 minuutin ajan inertissä kaasukehässä 20°C:ssa. Seos kaadettiin veteen, neut- 49 77872 raloitiin lisäämällä 2N natriumhydroksidia, uutettiin metyleenikloridilla, kuivattiin uutteet ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin silikagee-lillä y eluoiden bentseenin ja etyyliasetaatin 1:1-5 seoksella ja saatiin näin 1,34 g haluttua tuotetta.

^ - +144,5° +3° (c = 0,8 % kloroformi).

Analyysi: N02 (457,63)

Laskettu: C % 81,36 H % 8,59 N % 3,06 Saatu: C%81,7 H%8,8 N % 2,09.

10 Vaiheessa A lähtöaineena käytetty 4-(N,N-dietyy- liamino)-bromibentseeni valmistettiin seuraavalla tavalla .

Liuokseen, joka sisälsi 86 g N,N-dietyyliani- 3 liinia ja 400 cm etikkahappoa, lisättiin tipoittain 15 93 g bromia. Lisäyksen päätyttyä reaktioseos kaadet tiin veden ja jään seokseen, uutettiin metyleeniklori-dilla, pestiin orgaaninen faasi natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Saatiin 125 g haluttua tuotetta. Kp:0,6 = 97°C. 20 Esimerkki 27: 17/>-hydroksi-ll/^ -/4-/metyyli-(3-metyyli- butyyli) -amino/-fenyyli/-17«t·(prop-1-ynyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni Vaihe A: 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-11/?-/4-/metyyli-(3-metyylibutyyli)-amino/-25 fenyyli/-17e£- (prop-l-ynyyli) -estr-9- eeni-5o(, 17^-dioli Magnesium-yhdisteen valmistaminen Sekoitettiin inertissä kaasukehässä keske- 3 nään 4,12 g magnesiumia ja 10 cm tetrahydrofuraania.

30 Lisättiin muutama cm^ N-metyyli-N-(3-metyylibutyyli)-4-bromi-bentseeniamiinia liuotettuna tetrahydrofuraaniin 3 ja käynnistettiin reaktio lisäämällä 0,2 cm 1,2-dibro-mietaania. Sitten lisättiin 40 minuutin aikana loput N-metyyli-N-(3-metyylibutyyli)-4-bromi-bentsamiinin 3 35 vedettömästä tetrahydrofuraaniliuoksesta (32,6 g 90 cm : ssä). Reaktioseoksen lämpötilan annettiin palata huoneen so 778 72 lämpötilaan ja jatkettiin sitten sekoitusta 1 tunnin ajan. Näin saatiin halutun magnesiumyhdisteen 0,9M liuos.

Kondensointi 5 Sekoitettiin keskenään 8 g 3,3-/1,2-etaanidiyyli- bis (oksi) /5«(, 10Tepoksi-17*£- (prop-l-ynyyli) -estr-9 (11) -eeni-17/>-olia, 90 cm^ vedetöntä tetrahydrofuraania ja 3,77 g kuprokloridia. Sekoitettiin 20 minuuttia +5°C:ssa inertissä kaasukehässä ja lisättiin sit- 3 10 ten 100 cm edellä valmistettua magnesiumyhdisteen liuosta. Sen jälkeen reaktioseos kaadettiin ammonium-kloridin vesiliuokseen, uutettiin eetterillä, johon oli lisätty hieman trietyyliamiinia, ja sitten hieman trietyyliamiinia sisältävällä metyleenikloridilla. Yhdis-15 tetyt orgaaniset faasit pestiin natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Saatiin 31,2 g haluttua tuotetta, joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. Tuote voidaan puhdistaa kromatografisesti silikageelillä eluoiden mety-20 leenikloridin, asetonin ja trietyyliamiinin 96,5:4,5:0,5-seoksella. ^SC/D = -59,5° + (c = 0,7 % kloroformi).

Vaihe B: 17/£-hydroksi-ll/^-/4-/metyyli-(3-metyy-libutyyli) -amino/-fenyyli/-17a£- (prop-l-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni 25 Liuotettiin 26 g vaiheessa A saatua tuotetta 200 3 3 cm :iin metanolia ja lisättiin sitten 52 cm 2N kloori- vetyhappoa. Sekoitettiin 1 tunnin ajan ja kaadettiin reaktioseos sitten natriumbikarbonaatin vesiliuokseen, uutettiin eetterillä, ja sitten metyleenikloridilla, pes-30 tiin yhdistetyt orgaaniset faasit natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Tuote puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden tolueenin ja etyyliasetaatin 92:8-seoksella ja saatiin näin 3,23 g haluttua tuotetta. 35 = +125° + 3,5° (c = 0,6 % kloroformi).

7 78 72

Analyysi: C33 H^3 N02 (485,71)

Laskettu: C % 81,6 H % 8,92 N % 2,88

Saatu: C % 81,4 H % 9,0 N%2,7.

Vaiheessa A lähtöaineena käytetty amiini valmis- 5 tettiin seuraavalla tavalla:

Vaihe a: N-metyyli-N-(3-metyylibutyyli)-aniliini

Sekoitettiin keskenään 86 g N-metyyli-aniliinia, 3 500 cm vedetöntä bentseeniä ja 81 g vedetöntä trietyy-liamiinia. Lisättiin tipoittain 121 g isoamyylibromi-10 dia ja keitettiin reaktioseosta palautusjäähdyttäen 100 tuntia. Seos suodatettiin, pestiin suodos vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös tislattiin ja saatiin näin 90 g haluttua tuotetta.

Kp: 18 = 132°C.

15 Vaihe b: N-metyyli-N-(3-metyylibutyyli)-4-bromi- aniliini

Sekoitettiin 64 g vaiheessa a saatua tuotetta 3 300 cm :iin etikkahappoa 3a lisättiin sen jälkeen tipoittain 1 tunnin aikana noin 15°C:ssa 58 g bromia liuo-3 20 tettiin 60 cm :iin etikkahappoa. Reaktioseos kuumennettiin 80°C:seen, sekoitettiin 8 tuntia ja kaadettiin sitten jääveteen, uutettiin metyleenikloridillä, pestiin orgaaninen faasi ensin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja sen jälkeen vedellä, kuivattiin ja haihdutet-25 tiin liuotin kuiviin. Tislaamalla jäännös saatiin 70 g haluttua tuotetta. Kp: 0,5 = 119°C.

Esimerkki 28: 17^-hydroksi-11^-/4-(N,N-dimetyyliamino-etyylitio) -fenyyli/-17oiC- (prop-l-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni 30 Vaihe A: 3,3-/1,2-etaani-diyyli-bis (oksi)-/ll/£ - /4-(N,N-dimetyyliaminoetyylitio)-fenyy-li/-17o&- (prop-l-ynyyli) -estr-9-eeni-5*17/* -dioli

Magnesium-yhdisteen valmistaminen 35 Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 2 g magne- 1 siumia 15 cm^:iin vedetöntä tetrahydrofuraania. Sitten 52 7 7 8 7 2 lisättiin 45 minuutin aikana antaen lämpötilan kohota 56°C:seen asti liuos, joka sisälsi 20 g 4-(N,N-di- 3 metyyliaminoetyylitio)-1-bromi-bentseeniä ja 40 cm vedetöntä tetrahydrofuraania. Reaktio käynnistettiin 5 lisäämällä 1,2-dibromietaania. Reaktioseoksen annettiin sitten jäähtyä 20°C:seen ja jatkettiin sitten sekoitusta vielä 45 minuuttia inertissä kaasukehässä. Näin saatiin halutun magnesiumyhdisteen 1,05M liuos.

Kondensointi 3 10 38 cm edellä saatua magnesiumyhdisteen liuosta jäähdytettiin -20°C:seen. Sitten liuokseen lisättiin 1,730 g kuprokloridia, jätettiin sekoitusta 20 minuuttia ja lisättiin 5 g 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis(oksi)-/5JL, lO^-epoksi-llJk: (prop-l-ynyyli) -estr-9 (11) -eeni-17^ - 3 15 olia 50 cm :ssä vedetöntä tetrahydrofuraania. Seosta pidettiin inertissä kaasukehässä 20°C:ssa 2 tuntia ja 45 3 minuuttia. Sitten reaktioseos kaadettiin 600 cm :iin jää-vettä, joka sisälsi 60 g ammoniumkloridia. Sekoitettiin 45 minuuttia, dekantoitiin, uutettiin vesifaasi 20 dietyylioksidilla, johon oli lisätty hieman trietyyli- amiinia, pestiin yhdistetyt orgaaniset faasit natrium-kloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesta alumiinioksidilla eluoiden metyleeniklo-25 ridin ja asetonin 95:5-seoksella, jolloin saatiin 10,3 g haluttua tuotetta.

XR-spektri

Absorptiovyöt 3600 cm ^ (OH), 2240 cm ^ (C=C) 1705 ja 1670 cm ^ (CO ja konjugoitu CO) 1615 ja 1490 cm ^ 30 (aromaattiset).

Vaihe B: 17/> -hydroksi-ll/>-/4-(N,N-dimetyyli-aminoetyylitio)-fenyyli/-17^- (prop-l-ynyyli)-estra-4, 9-dieeni-3-oni

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 10,3 g vai- 3 35 heessa A saatua tuotetta 72 cm :iin metanolia ja lisät- 3 53 7 7 8 7 2 tiin sitten 20,6 cm 2N kloorivetyhappoa. Sekoitusta jatkettiin 20°C:ssa 1 tunti ja 15 minuuttia, neutraloitiin reaktioseos sitten lisäämällä natriumbikarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta ja lisättiin sen jälkeen 200 3 5 cm dietyylioksidia, dekantoitiin, uutettiin dietyyliok- sidilla, pestiin yhdistetyt orgaaniset faasit natrium-kloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromato-grafisesti silikageelillä eluoiden metyleenikloridin 10 ja metanolin 9:1-seoksella, jolloin saatiin 3 g haluttua tuotetta, joka sitten kiteytettiin Imettämällä se di-isopropyylioksidiin. Sp. = 145°C. Mv - -125 +2° (c = 1 % kloroformi).

Vaiheessa A lähtöaineena käytetty amiini valmis-15 tettiin seuraavalla tavalla:

Liuotettiin 20 g natriumhydroksidirakeita 500 3 cm :iin etanolia. Sitten liuotettiin 23,5 g kloori- 3 etyylidimetyyliamiinin hydrokloridia 75 cm :iin etano- 3 lia ja lisättiin tähän liuokseen 160 cm edellä valmis- 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 tettua natriumhydroksidiliuosta. Sitten liuotettiin 30 g 2 3 3 parabromitiofenolia 100 cm :iin etanolia ja lisättiin 4 3 5 tähän liuokseen 160 cm edellä valmistettua natriumhydroksidiliuosta. Sen jälkeen lisättiin 2 minuutin aikana 20°C:ssa edellä valmistettu amiiniliuos. Keitettiin 6 palautusjäähdyttäen 3 tuntia, haihdutettiin liuotin, 7 lisättiin vettä, uutettiin metyleenikloridilla, pes 8 tiin orgaaninen faasi natriumhydroksidin 0,1N vesi- 9 liuoksella ja sen jälkeen vedellä, kuivattiin ja haih 10 dutettiin liuotin kuiviin. Jäännös tislattiin ja saa- 11 tiin näin 35,5 g haluttua tuotetta. Kp. 0,1 = 110°C.

12

Esimerkki 29: ll/> - (4-dimetyyliaminofenyyli) -17/>^-hydrok- 13 si-21-(trimetyylisilyyli) -(17«£) -19-nor- 14 pregna-4,9-dieeni-20-yyni-3-oni 15

Vaihe A: 11/l· -(4-dimetyyliaminofenyyli)-3,3-/1,2- 16 etaanidiyyli-bis(oksi)/-21-trimetyylisi- lyyli) - (17«l) -19-nor-pregn-9-eeni-20-yyni-5e(, 17 ^-dioli 54 77872 3

Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 13 cm etyy-limagnesiumbromidin 1,6M tetrahydrofuraaniliuosta 13 3 cm :iin vedetöntä tetrahydrofuraania. Sekoitettiin 5 minuuttia 0,+5°C:ssa ja lisättiin sitten tipoittain 3,4 3 5 cm trimetyylisilyyliasetyleeniä. Lämpötilan annet tiin kohota 20°C:seen, minkä jälkeen sekoitusta jatkettiin vielä 20 minuuttia ja lisättiin sitten tipoittain 1,12 g esimerkin 7 vaiheessa A saatua tuotetta 3 liuotettuna 10 cm :iin vedetöntä tetrahydrofuraania.

10 Sekoitusta jatkettiin 16 tuntia huoneen lämpötilassa ja kaadettiin reaktioseos sitten ammoniumkloridin vesi-liuokseen, sekoitettiin 10 minuuttia huoneen lämpötilassa, uutettiin metyleenikloridilla, pestiin orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, 15 kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoi-den petroolieetterin ja etyyliasetaatin 6:4-seoksella, jolloin saatiin 680 mg haluttua tuotetta.

= -76,5° + 3° (c = 0,5 % kloroformi).

20 Vaihe B: ll/>-(4-dimetyyliaminofenyyli)-Ylft - hydroksi-21-(trimetyylisilyyli) -(17«l) - 19-nor-pregna-4,9-dieeni-20-yyni-3-oni

Sekoitettiin keskenään 562 mg vaiheessa A saatua 3 3 tuotetta, 15 cm metanolia ja 1 cm 2N kloorivetyhappoa. 25 Sekoitettiin huoneen lämpötilassa 40 minuuttia, kaadettiin reaktioseos natriumbikarbonaatin vesiliuokseen, uutettiin eetterillä, pestiin orgaaninen faasi natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin 30 kromatografisesti silikageelillä eluoiden petrooli eetterin ja etyyliasetaatin 6:4-seoksella, jolloin saatiin 364 mg haluttua tuotetta.

= +97,5° + 3° (c = 0,35 % kloroformi)

Analyysi: t^Si (487,76) 35 Laskettu: C % 76,33 H * (,47 N % 2,87 saatu: C % 76,4 H % 8,7 N % 2,8.

55 77872

Esimerkki 30: 1Ίfö -hydroksi-11/9 -/4-(N,N-dimetyyliamino-metyyli) -fenyyli/-17«fc- (prop-l-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni

Liuotettiin 1,4 g esimerkissä 23 saatua tuotet- 3 5 ta 28 cm :iin metyleenikloridia ja lisättiin sitten 15 minuutin aikana 0,+5°C:ssa 0,64 g metaklooriperbentsoe- 3 happoa liuotettuna 12,8 cm :iin metyleenikloridia. Reaktioseosta sekoitettiin 1 tunnin ajan 0,+5°C:ssa ja kaadettiin se sitten natriumtiosulfaatin 0,2N vesi-10 liuokseen, dekantoitiin, uutettiin metyleenikloridilla, pestiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kroma-tografisesti silikageelillä eluoiden metyleenikloridin ja metanolin 8:2-seoksella, jolloin saatiin 1,28 g ha-15 luttua tuotetta, joka sitten liuotettiin metyleenikloridin ja di-isopropyylioksidin seokseen. Muodostuneet kiteet erotettiin ja kuivattiin ja saatiin näin 1,075 g haluttua tuotetta. Sp. = 215°C.

(jQD = +74,5° + 2,5° (c - 0,7 % kloroformi).

20 Esimerkki 31: 17/? -hydroksi-ll©W4-(Ν,Ν-dimetyyliamino- metyyli) -fenyyli/-17»4-(prop-l-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-onin hemifumaraatti

Sekoitettiin 1,44 g esimerkissä 23 saatua yh-3 distettä 2,88 cm :iin etanolia ja lisättiin sitten 3 25 seos, joka sisälsi 0,378 g fumaarihappoa 4,54 cm :ssä etanolia. Suspensiota sekoitettiin 30 minuuttia 60°C:ssa, annettiin lämpötilan laskea 20°C:seen ja jatkettiin sekoitusta. Liuotin haihdutettiin, jäännös otettiin talteen eetteriin, erotettiin tuote ja saatiin 1,70 g 30 haluttua tuotetta. Sp. = 160°C.

- +70,5° + 2,5° (c = 0,8 % kloroformi) .

56 7 7 8 7 2

Esimerkki 32: 17^ -hydroksi-ll/9-/4-(Ν,Ν-dipropyyliami-no)-fenyyli/-17et (prop-l-ynyyli)-estra- 4,9-dieen i-3-on i

Vaihe A; 3,3-/1,2-etaanidiyyli-bis (oksi)/-11/fr -5 /4-(Ν,Ν-dipropyyliamino) -fenyyli/-17»tr (prop-l-ynyyli)-estr-9-eeni-S^17/0-dioli Magnesiumyhdisteen valmistaminen Sekoitettiin inertissä kaasukehässä 5 g magne- 3 siumia 15 cm :iin vedetöntä tetrahydrofuraania. Lisät-10 tiin tipoittain liuos, joka sisälsi 52 g 4-bromi-N,N-di- 3 propyylianiliinia ja 110 cm tetrahydrofuraania pitäen lämpötila 40°C:ssa. Näin saatiin halutun magnesiumyhdisteen 1,1M liuos.

Kondensointi 15 Sekoitettiin inertissä kaasukehässä liuosta, joka sisälsi 5,55 g vaiheessa A esimerkin 7 vaiheessa A saatua 3,3-/l,2-etaanidiyyli-bis(oksi)/-5»^,10Urepoksi-17«£-(prop-l-ynyyli)-estra-9 (11)-eeni-17/0-olia ja 200 mg kuprikloridia. Sekoitettiin 0,+5°C:ssa ja lisättiin 3 20 sitten 15 minuutin aikana 50 cm edellä saatua magnesiumyhdisteen liuosta. Sekoitettiin 1 tunnin ajan 20°C: ssa, kaadettiin reaktioseos ammoniumkloridin kyllästettyyn vesiliuokseen, uutettiin eetterillä, kuivattiin orgaaninen faasi ja haihdutettiin liuotin kuiviin. JäMn-25 nös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä elu-oiden tolueenin ja etyyliasetaatin 7:3-seoksella ja saatiin näin 6,3 g haluttua tuotetta.

[atyD = -56° +2° (c = 0,8 % kloroformi).

Analyysi: N0^ (547,75) 30 Laskettu: C % 76,74 H % 9,02 N % 2,56

Saatu: C%76,6 H%9,2 N%2,5.

57 778 72

Vaihe B; Π/P -hydroksi-11/? -/4 - (N, N-dipropyyli-amino) -fenyyli/-17.£· (prop-l-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni

Liuokseen, joka sisälsi 5,83 g vaiheessa A saatua 5 tuotetta ja 80 cm metanolia, lisättiin 10 cm 2N

kloorivetyhappoa ja sekoitettiin 50 minuuttia 20°C:ssa. Liuos neutraloitiin lisäämällä IN natriumhydroksidia, haihdutettiin liuotin alennetussa paineessa ja otettiin jäännös talteen metyleenikloridiin. Orgaaninen 10 faasi pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä eluoiden tolueenin ja etyyliasetaatin 75:25-seoksella ja saatiin näin 3,81 g haluttua tuotetta.

15 IR-spektri (kloroformi)

Absorptiovyöt: 3600 cm ^ (OH), 1654 cm~^ (C=0), 1610-1595-1558 ja 1517 cm ^ (Δ4,9 + aromaattiset absorptiovyöt), 2240 cm-1 (C=C).

Seuraavat yhdisteet ovat esimerkkejä muista 20 keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettavissa olevista tuotteista: - ll/^-/4-(N-etyyli-N-metyyliamino)-fenyyli/-17/^-hydrox-si-17et (prop-l-ynyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni (sp.= 174°C, = 149° + 2,5° c = 1 % CHC13) 25 - 17/£-hydroksi-ll/5 -/N-metyyli-2,3-dihydro-lH-indoli- 5-yyli/-17 -(prop-l-ynyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni (sp. = 176°C; = -133° + 3°, c = 0,8 % CHCI3);

- 11/P - (4-dimetyyliaminofenyyli) -3-hydroksi-imino-17o£-(prop-l-ynyyli)-estra-4,9-dieeni-17/J -oli, isomeeri Z

30 (sp. = 260°C; = 141° + 3,5°, c = 0,8 % CHCI3) ; - 11/P -(4-dimetyyliaminofenyyli)-3-hydroksi-imino-17*&- (prop-l-ynyyli)-estra-4,9-dieeni-17/>-oli, isomeeri E (sp. = 220°C; = +164° + 3,5°, c = 0,8 % CHCI3)? - 17/9 -hydroksi-ll/J - (4-pyrrolidinyylifenyyli) -17«£- 35 (prop-l-ynyyli)-estra-4,9-dieeni-3-onin N-oksidi 58 7 7 8 7 2 (sp. = 220°C; Ρ2ώ = +88° + 2,5°, c = 0,75 % CHCI3); - 17^-hydroksi-ll/^-/4-N-metyyli-N-(1-metyylietyyli) -aminofenyyli/-17o>C- (prop-1-ynyyli) -estra-4,9-dieeni- 3-oni &JO = -140° + 3,5°, c = 0,5 % CHCl-j) ; 5 - 11 y£-/4-(Ν,Ν-dimetyyliaminoetyylioksi)-fenyyli/- 17-hydroksi-17·^· (prop-1-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-onin N-oksidi = +60,5°, c = 1,2 % CHCl3) - 17/2-hydroksi-lly2 -/(N-metyyli)-2,3-dihydro-lH-indoli- 5-yyli/-17ot- (prop-1-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-onin 10 N-oksidi = +103° + 2,5°, c = 0,8 % CHCl-j) ; - 17/? -hydroksi-ll>^-/4-(N-metyyli-N-trimetyylisilyyli-metyyli)-aminofenyyli/-17*4r (prop-1-ynyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni; - 17/?-hydroksi-ll/? -/4-(N-metyyli-N-dimetyyliaraino- 15 etyyli)-aminofenyyli/-17«£- (prop-1-ynyyli)-estra-4,9- dieeni-3-oni; - 17/2 -hydroksi-11/?-/4-(N-metyyli-piperatsiini-l-yyli)-fenyyli/-!?^ (prop-l-ynyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni; - 17-hydroksi-imino-ll/? -(4-dimetyyliaminofenyyli)- 20 estra-4,9-dieeni-3-oni, = +207,5° + 3,5° (c = 1 % CHC13); - 3(E)-hydroksi-imino-17-hydroksi-imino-ll^-(4-dime-tyyliaminofenyyli)-estra-4,9-dieeni-3-oni, (^St/D = -195° + 3°, c = 1 % CHC13); 25 - 3(Z)-hydroksi-imino-17-hydroksi-imino-ll/J -(4-dimetyyliaminofenyyli) -estra-4,9-dieeni-3-oni =+163° + 2,5°, c = 0,6 %, CHCl3).

59 77872

Farmakologinen tutkimus

Tuotteiden aktiivisuuden tutkiminen hormonaalisilla reseptoreilla.

Rotan munuaisten mineralokortikoidinen 5 reseptori

Urospuoliset 140-160 g painavat Sprague-Dawley EOPS-rotat, joilta oli 4-8 vuorokautta aikaisemmin poistettu lisämunuainen, tapettiin ja niiden munuaiset valutettiin läpi Tris lOmM sakkaroosi 0,25M, HCl pH 7,4-10 puskurilla. Sen jälkeen munuaiset irroitettiin, niistä poistettiin munuaiskotelo ja ne homogenisoitiin 0°C:ssa Potter polytetrafluorietyleeni-lasin avulla (1 g kudosta 3 ml:aa puskuria kohden). Homogenaattia sentrifugoi-tiin sitten 10 minuuttia voimakkuudella 800 g 0°C:ssa.

15 Jotta tritiumia sisältävän aldosteronin kiinnit tyminen glukokortikoidireseptoriin estyisi supernatant-tiin lisättiin ainoastaan glukokortikoidireseptoriin kiinnittyvää 11 /> , 17^-dihydro-21-metyyli-pregna-l, 4,6-trieeni-3-yyni-3-oni-steroidia siten, että lopullinen 20 pitoisuus oli 10 ^M. Tätä supernatanttia ultrasentrifu-goitiin voimakkuudella 105 000 g 60 minuutin ajan 0°C: ssa. Näin saadusta supernatantista otettuja näytteitä inkuboitiin 0°C:ssa tritiumia sisältävän aldosteronin pitoisuuden ollessa vakio(T) samalla kun läsnä oli -9 25 kasvavina (0-2500 x 10 M) pitoisuuksina kylmää aldo-steronia tai testtavaa yhdistettä. Tietyn inkubointi-ajan(t) kuluttua kiinnittyneen tritiumia sisältävän aldosteronin pitoisuus (B) mitattiin hiili-dekstraani-absorptiotekniikalla.

30 Rotan eturauhasen androgeenireseptori

Urospuolisia 160-200 g painavia Sprague Dawley EOPS-rottia kastroitiin. 24 tuntia kastraation jälkeen eläimet taptettiin, eturauhaset poistettiin, punnittiin ja homogenoitiin Potter-polytetrafluorietyleeni-lasin 35 avulla puskuriliuoksessa TS (Tris lOmM, sakkaroosia 0,25M, HCl pH 7,4) (1 g kudosta 5 ml TS kohden).

60 77872

Sen jälkeen homogenaattia ultrasentrifugoitiin (105 000 g x 60 min) 0°C:ssa. Näin saadusta supernatantista otettuja näytteitä inkuboitiin 0°C:ssa kaksi tuntia siten, että tuotteen P (17^-hydroksi-17«4-metyyli-estra-4,9,11- 5 trieeni-3-oni) pitoisuus oli vakio (T) ja läsnä oli kas- -9 vavia pitoisuuksia (0 - 1000 10 M) joko kylmää tuotetta P tai kylmää testosteronia tai testattavaa tuotetta. Kiinnittyneen tritiumia sisältävän tuotteen P pitoisuus (B) mitattiin kustakin inkubaatista hiili-dekstraa-10 niabsorptiotekniikalla.

Kaniinin kohdun progestogeenireseptori 1 kg:n painoisille naaraskaniineille, jotka eivät vielä olleet saavuttaneet sukukypsyyttä, annettiin ihon kautta 25 ^ug estradiolia. 5 vuorokautta tämän 15 käsittelyn jälkeen eläimet tapettiin; kohdut poistet tiin, punnittiin ja homogenoitiin 0°C:ssa Potter-poly-tetrafluorietyleeni-lasin avulla puskuriliuoksessa TS (Tris lOmM, sakkaroosi 0,25M, HC1 pH 7,4) (1 g kudos ta 50 ml TS kohden).

20 Homogenaattia ultrasentrifugoitiin sen jälkeen (105 000 g x 90 min) 0°C:ssa. Näin saadusta supernatantista otettuja näytteitä inkuboitiin 0°C;ssa tietty aika (t) siten että läsnä oli vakio pitoisuus (T) tritiumia sisältävää tuotetta R (17,21-dimetyyli-19-nor-4,9-25 pregnadieeni-3,20-dioni) sekä kasvavina pitoisuuksina joko kylmää progesteronia tai testtavaa kylmää tuotetta. Kiinnittyneen tritiumia sisältävän tuotteen R pitoisuus (B) mitattiin sitten kustakin inkubaatista hiili-dekstraani-absorptiotekniikalla.

30 Rotan kateenkorvan glukokortikoidireseptori

Urospuolisilta 160-200 g painavilta Sprague Dawley EOPS-rotilta poistettiin lisämunuainen. 4-8 vuorokautta tämän toimenpiteen jälkeen jälkeen eläimet tapettiin, niiltä poistettiin kateenkorvat, homogeni-35 soitiin ne 0°C;ssa puskuriliuoksessa TS (Tris 10 mM, 77872 61 sakkaroosi 0,25M, ditiotreitol 2 mM, HC1 pH 7,4), Potter-polytetrafluorietyleeni-lasin avulla (1 g kudosta 10 ml TS kohti). Sen jälkeen homogenaattia ultra-sentrifugoitiin (105 000 g x 90 min) 0°C:ssa. Näin saa-5 dusta supernatant!sta otettuja näytteitä inkuboitiin 0°C:ssa tietty aika (t) siten että läsnä oli vakio pitoisuus (T) tritiumia sisältävää deksametasonia sekä -9 kasvavina pitoisuuksina (0 - 2500 x 10 M) joko kylmää deksametasonia, tai testattavaa tuotetta. Kiinnitty-10 neen tritiumia sisältävän deksmatasonin pitoisuus (B) mitattiin sitten kustakin inkubaatista hiili-dekstraani-absorptiotekniikalla.

Hiiren kohdun estrogeenireseptori Tapettiin 18-21 vuorokauden ikäisiä naarashiiriä, 15 jotka eivät vielä olleet saavuttaneet sukukypsyyttä; eläimiltä poistettiin kohtu ja kudokset homogenisoitiin 0°C:ssa Potter-polytetrafluorietyleeni-lasin avulla puskuriliuoksessa TS (Tris 10 mM, sakkaroosi 0,25M, HCl pH 7,4) (1 g kudosta 25 ml TS kohden). Homogenaat- 20 tia ultrasentrifugoitiin sitten (105 000 g x 90 min) 0°C:ssa. Näin saadusta supernatantista otettuja näytteitä inkuboitiin sitten 0°C:ssa tietty aika (t) siten, että läsnä oli vakiopitoisuus (T) tritiumia sisältävää estradiolia sekä kasvavina pitoisuuksina (0 - 1000 x -9 25 10 M) joko kylmää estradiolia tai testattavaa yhdis tettä. Kiinnittyneen tritiumia sisältävän estradiolin pitoisuus (B) mitattiin sitten hiili-dekstraani-asorp-tiotekniikalla.

Kiinnittymisen suhteellisen affiniteetin 30 laskeminen

Kiinnittymisen suhteellisen affiniteetin laskutapa on sama kaikille respetoreille.

Laadittiin 2 seuraavanlaista käyrää: kiinnittyneen tritiumia sisältävän hormoonin prosentuaalinen määrä B 35 verrattuna kylmän vertailuhormonin pitoisuuden logaritmiin sekä B verrattuna kylmän testatun tuotteen pitoi- 77872 62 suuden logaritmiin.

Määritettiin suora yhtälölle 1^« = (B maks + B

T T

min)/2. B maks = kiinnittyneen tritiumia sisältävän T

hormoonin prosentuaalinen määrä inkuboitaessa tätä 5 tritiumia sisältävää hormoonia pitoisuudella (T).

B min = kiinnittyneen tritiumia sisältävän hormonin T

määrä inkuboitaessa tätä tritiumia sisältävää hormoonia pitoisuudella (T), kun läsnä oli suuri ylimäärä kylmää hormoonia (2500 x 10 9M).

10 Suoran ja käyrien leikkauskohdista arvioi tiin ne kylmän vertailuhormoonin (CH) ja testatun kylmän tuotteen (CX) pitoisuudet, jotka estävät 50 %:isesti tritiumia sisältävän hormonin kiinnittymisen reseptoriin. Testatun tuotteen kiinnittymisen suhteellinen 15 affiniteetti saadaan yhtälöstä ARL = 100

Saadut tulokset olivat seuraavanlaiset: 63 7 7 8 7 2 ® I I I I I I I I I I I ]

H <N

! x 1 1 1 ! ........

’ I * fa gg oo oo ooooooo o W ΓΜ I ...........................................

"d m mm xj« t-~ cm ^ οί eg oo m r-π xr y ^ vo ro σι vo σ\ >—im»·!—I eg o

H (N tNCN rH <N <N VO rH (NtH

^ oovvorg^oooco 8.J jb r~r~ xj1 iH m oo «. r-π co oo σι S fl Ä (N (N (N CN <N m - t"- t"

j2 ι-H r~ rH

3 Jg

Ο <N · I I I I I I I I I I I

o h οοοΓ'- ηνοχτοηιηη oo ‘d S xj< m m vo vo - vo ».»·>· xs* m SJ van (NCN'ToofHo^rcNco

$ i 1 1 I I I I ! I I I I

01 E

<1) xr .

& ro eg p „ tj-,η ,-h r-H oo ^tnmoi-Hm - JH * oo xr oo r-· vo eg * »—t - r~ m

^ ^ fH O r-H r—I rH

Γ~

„ o CO O x CN 00 OOCOCN VO

•h5 cm vo xj.co-<yi---co·.

3(^ rH (Ti Cg CN Γ- (N **

8* 5 I I I I I I I I I I I I

3 * I I I I t I I I I ! I I

•H I t'' 00 . CO

p E OO OOO-O-'xO

H S rH O O

i

^ » 1 I I I I I I I I I I I

qj ^ X»

g ,§ eg 1 < I I I I I I I 1 I I

»· ·# ·» *’ » * «· ·· «, «· M |# M m

\ · S

\ i* \p \H (0

jjj \ e t-~ xTOOOrHVOtNVOOCN O

h\ (H rH HHHH fNCNtN

5 \ •5 \ Ί \ 77872 64

Johtopäätökset:

Tutkituilla tuotteilla ja etenkin esimerkkien 4, 17, 10, 16, ja 22 tuotteilla ilmeni erittäin merkittävää taipumusta kiinnittyä glukokortikoidi- ja progestogee-5 nireseptoreihin sekä vähäistä taipumusta kiinnittyä androgeenireseptoriin. Sitä vastoin niillä ei ilmennyt minkäänlaista aktiivisuutta mineralokortikoidi- ja estrogeenireseptoreihin nähden.

Saaduista tuloksista voidaan vetää se johtopää-10 tös, että tuotteilla voi olla agonistinen tai antagonistinen vaikutus glukokortikoideihin, progestogeenei-hin ja androgeeneihin.

II - Esimerkin 4 tuotteen tulehdusta vastustavan vaikutuksen tutkiminen 15 Tulehdusta vastustava vaikutus tutkittiin klassi sella granulooma-testillä.

Käytetyssä tekniikassa, joka oli R. MEIERin et Coll menetelmän (Experientia, 1950, 6, 469) muunnos, tavallisille 100-11 g painaville naaraspuolisille 20 Wistar-rotille implantoitiin kullekin kaksi 10 mg:n pumpulipellettiä nahan alle rintakehään. Heti tämän implantaation jälkeen alkava ihonalainen käsittely kesti 2 vuorokautta ja käsitti 2 ruisketta vuorokaudessa; kuudentoista tunnin kuluttua viimeisestä ruiskeesta eli 25 kolmantena päivänä eläimet tapettiin.

Muodostuneen granuloomakudoksen ympäröimät pelletit punnittiin ensin sellaisinaan ja toisen kerran sen jälkeen kun niitä oli pidetty 18 tuntia 60°C:ssa: granu-looman paino saatiin vähentämällä pumpulin alkuperäinen 30 paino.

Eläimiltä poistettiin niin ikään kateenkorva tuotteen tymolyyttisen vaikutuksen määrittämiseksi.

Annoksella 50 mg/kg ihonalaisesti annettuna esimerkin 4 tuote ei osoittanut minkäänlaista glukokor-35 tikoidista tulehduksia vastustavaa tai tymolyyttistä vaikutusta.

65 7 7 8 7 2 III - Antlglukortikoidinen vaikutus Käytetty tekniikka seurasi Daunen et Coll julkaisussa Molecular Pharmacology 13, 948-955 (1977) artikkelissa "The relationship between glucocorticoid 5 structure and effects upon thymocytes" hiirien tymosyy-teille kuvaamaa menetelmää.

Rotilta, joilta oli poistettu lisämunuainen, otettiin tymosyytteja ja inkuboitiin niitä 37°C:ssa 3 tunnin ajan ravintoliuoksessa, joka sisälsi 5 x 10 M 10 deksametasonia, joko tutkittavan tuotteen eri pitoisuuksien läsnä ollessa tai ilman tutkittavaa tuotetta. Lisättiin tritiumpitoista uridiinia ja jatkettiin inku-bointia vielä 1 tunti. Inkubaatit jäähdytettiin ja ne käsiteltiin trikloorietikkahapon 5 %:isella liuoksella, 15 suodatettiin ne Whatman GF/A-paperilla, pestiin ne kolme kertaa trikloorietikkahapon 5 %:isella liuoksella. Suodattimeen jäänyt radioaktiivisuus määritettiin.

Glukokortikoidit ja etenkin deksametasoni saavat aikaan tritiumpitoisen uridiinin kiinnittymisen vähemi-20 tä. Testatut tuotteet ja aivan erityisesti esimerkkien 4, 14, 8, 10, 11, 16, 6, 20 ja 22 vastustavat tätä vaikutusta.

66 77872 . . — : s } Esimerkin . 5 x 10 M deksametascni + . Deksametasonin vaikutuksen < ( tuote ! testattava tuote prosentuaalinen estyminen j ( : ) [-:-e-:--1 ^ ; io m ; 30 j ( 4 : 10"7I4 : 70 ) i ; io"6h ; 90 j (-i-5--:-) | ; 1o_8m ; 18 Ϊ ( 14 : 10"7M : 57 ) ( ; 10"6M * * Ϊ (-i-ö-!-) ( : 10 11 : 22 ) | 8 ; io"7m ; 53 ) ( : 10“6M : * ) (-:-o--:-1 ( : 10 ÖM : 57 ) [ 1 o : 1o"7m ; '85 ] (_:_10~6H_:_*___) ( Ϊ TCf 8M 14 ] ζ 11 ; io_7m ; 34 j ( : 10-6M : 75 ) (-.-—-;---:-) : ( : 10 M : 28 ) | 16 ; 10_7m ; 6o j (_\_10~6M_I_ 99_) { : 10"8M : 5j 6 ; 10-^M ; 83 ]

l_:__10~η__I_______J

( : 10“8M · 4 { | 20 ; 10“7M ; 21 j f_:_1 0~8M___________________50_________________) | \ 10“ÖM : 16 Ϊ ( 22 10"7M : 69 ) ( I 10"6H * ] “6 * Annoksella 10 M deksametasonin vaikutuksen estyminen oli täydellinen.

67 7 7 8 7 2

Lisäksi on todettu, että yksinään käytettyinä testatut tuotteet eivät aiheuta minkäänlaista glukokor-tikoidi-tyyppistä vaikutusta.

Johtopäätös: 5 Tutkituilla tuotteilla on erittäin selvä anti- glukokortikoidinen vaikutus ja niiltä puuttuu täysin glukokortikoidivaikutus.

Farmakologiset vertailukokeet

Kaniinin kohdun progestogeenireseptori ja rotan ka-10 teenkorvan glukokortikoidireseptori tutkittiin edellä selostetuilla menetelmillä. Tunnetuilla yhdisteillä saatiin tällöin seuraavat tulokset: ----

Testatut yhdisteet Progestogeeni ' Glukokortikoidi 15 --;--

2 H 24 H 4 H 24 H

Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet 4 74 640 270 265 20 17 81 351 279 235 8 81 268 212 167 DE-hakemuksesta 2 801 416 tunnetut yhdisteet 25 esim. 15 70 85 130 63 " 33 38 35 50 23

Farmaseuttiset yhdistelmät ^ Valmistettiin tabletteja seuraavan kaavan mukaan:

Esimerkin 4 tuotetta 50 mg Täyteainetta (talkkia, tärkkelystä, magne-siumstearaattia q.s. jotta tabletin painoksi tulee 120 mg.

35

Claims (5)

77872 68

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten uusien yhdisteiden valmistamiseksi, joiden kaava on (I') 5 ^X 10 jossa on 1-18 hiiliatomia sisältävä orgaaninen radikaali, 15 joka sisältää vähintään yhden typpi- tai piiatomin, kuitenkin niin että hiiliatomin 11 viereinen atomi on hiili-atomi, R2 on 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyliradikaali, X muodostaa viisiatomisen renkaan, joka voi olla substi-tuoitu ja sisältää tyydyttämättömän sidoksen, asemassa 3 20 oleva ryhmä A on vapaa tai ketaalimuodossa oleva suojattu oksoryhmä tai ryhmä NOH, ja B ja C muodostavat yhdessä kaksoissidoksen tai epoksidisillan, sekä niiden happoadditiosuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 25 a) yhdiste, jonka kaava on (II) Rj^ R2 i. 35 jossa K on ketaali-, tioketaali-, oksiimi- tai metyyli- oksiimimuodossa suojattu ketoniryhmä, R^, R2 ja X tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan dehydratoin- 69 77872 tiaineen kanssa, joka vapauttaa ketoniryhmän, yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on (I'A) R2 ri (I'A> 10 o tai b) yhdiste (II) saatetaan reagoimaan dehydratoin-tiaineen kanssa yhdisteen (I'A) saamiseksi, joka saatetaan reagoimaan ketaalin muodostavan aineen kanssa, yh- 15 disteen saamiseksi, jonka kaava on (Ι'β) R2 20 jossa ketoniryhmä asemassa 3 on suojattu ketaalimuodossa, 25 tai c) yhdiste (II) saatetaan reagoimaan dehydratoin-tiaineen kanssa yhdisteen (I'A) saamiseksi, joka saatetaan reagoimaan hydroksyyliamiinin NH2oh kanssa, yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on (1' ) “ -1 *2 (I'c’ ” JXJ 77872 70 ja että näin saatu kaavan (I'A), (I'B) tai (I'c) mukainen yhdiste haluttaessa saatetaan reagoimaan hapon kanssa suolan saamiseksi tai hapettimen kanssa, jolloin siinätapauk-sessa, että R^ sisältää typpiatomin, saadaan johdannainen, 5 jossa asemassa iV1 on radikaali, jonka typpiatomi on hapetettu, ja jossa johdannaisessa radikaalit B ja C mahdollisesti muodostavat epoksidisillan, tai siinä tapauksessa, että R^ ei sisällä typpiatomia, saadaan johdannainen, jossa radikaalit B ja C muodostavat epoksidisillan, 10 ja että yhdiste, jossa samanaikaisesti radikaali sisältää hapetetun typpiatomin ja B ja C muodostavat epoksidisillan, haluttaessa pelkistetään selektiivisesti radikaalin R^ sisältämä typpioksidi ja yhdiste saatetaan mahdollisesti reagoimaan hapon kanssa suolan saamiseksi.

2. Menetelmä yhdisteiden valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia välituotteina patenttivaatimuksen 1 mukaisessa menetelmässä ja joiden kaava on (II) R1 R2 20 dD

25 K : OH jossa R^, Rj, X ja K tarkoittavat samaa kuin patenttivaatimuksessa 1, tunnettu siitä, että yhdiste, jonka kaava on (III)

30 R2 jQt) 71 77872 saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on (Rl^CiiLi, R^MgHal tai R^Li, joissa kaavoissa R^ tarkoittaa samaa kuin patenttivaatimuksessa 1 ja Hai on ha-logeeniatomi, mahdollisesti kuprohalogenidin läsnäolles-5 sa.

3. Menetelmä yhdisteiden valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia välituotteina patenttivaatimuksen 1 mukaisessa menetelmässä ja joiden kaava on (II') R~ _, 10 p 2 R*3 (II1) i OH jossa R^, R2 ja K tarkoittavat samaa kuin patenttivaatimuksessa 1, R'2 on hydroksyyliradikaali tai radikaali 20 0RC' jossa Rc on eetteriryhmän tähde alk^ tai esteriryh-män tähde COalk2, jolloin alk^ ja alk2 tarkoittavat 1-8 hiiliatomia sisältävää alkyyliradikaalia tai 7-15 hiili-atomia sisältävää aralkyyliradikaalia ja R*4 on vetyatomi tai 2-8 hiiliatomia sisältävä alkenyyli- tai alkinyyliradi- 25 kaali, tunnettu siitä, että yhdiste, jonka kaava on (IV) r2 30 (IV) 1 saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on (R^)CuLi, RjMgHal tai R^Li, joissa kaavoissa R^ ja Hai 72 77872 tarkoittavat samaa kuin kuin patenttivaatimuksessa 2, mahdollisesti kuprohalogenidin läsnäollessa, yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on (V)

5 K1 ___^ I m 10 OH ja joka saatetaan reagoimaan pelkistimen kanssa vastaavan 17-hydroksiyhdisteen saamiseksi, tai magnesiumyhdisteen 15 kanssa vastaavan 17/3-hydroksi-l"fc<-substituoidun yhdisteen saamiseksi tai orgaanisen metalliyhdisteen, esimerkiksi litium- tai kaliumyhdisteen kanssa vastaavan 17/*-hydroksi-17^-substituoidun yhdisteen saamiseksi tai syanidointi-aineen kanssa vastaavan 17/3-syano-17*-hydroksiyhdisteen 20 saamiseksi, josta suojataan hydroksyyliryhmä ja joka sen jälkeen saatetaan reagoimaan edellä esitetyn orgaanisen metalliyhdisteen kanssa vastaavan ^/Vhydroksi-lltf'-subs-tituoidun yhdisteen saamiseksi, minkä jälkeen jokin saaduista 17-hydroksiyhdisteistä mahdollisesti saatetaan 25 reagoimaan esteröinti- tai eetteröintiaineen kanssa, ja että jokin saaduista 17-substituoiduista yhdisteistä, joissa asemassa 17 oleva substituentti sisältää kolmois-sidoksen, mahdollisesti saatetaan reagoimaan pelkistimen kanssa vastaavan etyleenisidoksen sisältävän yhdisteen 30 saamiseksi.

4. Yhdisteet, jotka ovat käyttökelpoisia patenttivaatimuksen 1 mukaisessa menetelmässä ja joiden kaava on (II) 35 77872 73 R \ /- J i| (II) OH 10 jossa R^, R2» X ja K tarkoittavat samaa kuin patenttivaatimuksessa 1.

5. Yhdisteet, jotka ovat käyttökelpoisia välituotteina patenttivaatimuksen 3 mukaisessa menetelmässä ja joiden kaava on (V) 15 (^jdbr' - 20 6h jossa R^, R2 ja K tarkoittavat samaa kuin patenttivaati-25 muksessa 1. 5 77872 74