FI73442C - Foerfarande foer framstaellning av nya, terapeutiskt anvaendbara (6r,7r)-7-/2-(2-amino-4-tiazolyl)-2- hydroxiimino)acetamido/-3-//(substituerad-as-triazin-3-yl)tio/metyl/ -8-oxo-5-tia-1-azabicyklo/4.2.0/okt-2-en-2-karboxylsyror. - Google Patents

Description

1 73442

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten (6R,7R)~ Ί-£λ-(2-amino-4-tiatsolyyli)-2-(hydroksi-imino)asotamido7-3-^£lsubstituoitu-as-triatsin-3-yyli) tio7-metyy li7~8-okso-5-tia-1-atsabisyklo/7.2.07okt-2-eeni-2-karboksyylihappojen 5 valmistamiseksi.

Keksintö koskee menetelmää uusien kaavan I mukaisten (6R,7R)-7-/2~(2-amino-4-tiatsolyyli)-2-(hydroksi-imino)-asetamidq7-3-/Z"( substituoitu-as-tr iatsin-3-yy 1 i) tio7~metyy-1 0 li7-8-okso-5-tia-1 -atsabisyklo/^3.2.07okt-2-eeni-2-karbok-syylihappojen, niiden helposti hydrolysoituvien estereiden, helposti hydrolysoituvien eettereiden ja suolojen sekä kaavan I mukaisten yhdisteiden ja niiden estereiden, eettereiden ja suolojen hydraattien valmistamiseksi, 15

H H

1 i/ S x HON=C-CONH T-J | ]>Λ }-n^J-ch2-s-x H.l/^S' C°°» 20 2 jossa kaavassa X on 1,2,5,6-tetrahydro-2-metyyli-5,6-diokso-as-triatsin-3-yyli-ryhmä tai sen vastaava tautomeerinen muoto, 2,5-dihydro-6-hydroksi-2-metyyli-5-okso-as-triatsin-2-25 yyliryhmä, jolloin yhdisteet ovat syn-isomeerien muodossa tai seoksen muodossa, jossa syn-isomeeri on vallitseva. Näillä yhdisteillä on bakterisidinen vaikutus.

On yllättäen havaittu, että uusilla kaavan (I) mukaisilla hydroksi-jminovhdisteillä on huomattavasti pitempi 30 puoliintumisaika kuin esimerkiksi FI-patenttijulkaisusta 65 434 tunnetuilla metoksi-iminoyhdisteillä. Siten esimerkiksi jäljempänä kuvatun uuden yhdisteen A puoliintumisaika on 140 minuuttia, kun taas mainitun FI-julkaisun esimerkissä 1 kuvatun yhdisteen puoliintumisaika on vain 35 minuuttia.

35 Metoksi-iminoryhmän korvaaminen hydroksi-iminoryhmällä pidetään siis huomattavasti puoliintumisaikaa, mitä on pidettävä erittäin yllättävänä. Pidentyneen puoliintumisajan johdosta kaavan (I) mukaiset yhdisteet pysyvät veressä 2 73442 paljon kauemmin kuin mainitut tunnetut yhdisteet. Tämä merkitsee sitä, että käytettäessä kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan antoväliä pidentää ja annosta huomattavasti pienentää.

5 Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden helposti hydrolysoi tuvilla estereillä tarkoitetaan kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joiden karboksiryhmä on helposti hydrolysoituvan esteriryhmän muodossa. Esimerkkejä tällaisista tavanomaisista estereistä ovat alemmat alkanoyylioksialkyyliesterit, 10 esim. asetoksimetyyli-, pivaloyylioksimetyyli-, 1-asetoksi-etyyli- ja 1-pivaloyylioksietyyliesteri; alemmat alkoksi-karbonyylioksialkyyliesterit, esim. metoksikarbonyylioksi-metyyli-, 1-etoksikarbonyylioksietyyli- ja 1-isopropoksi-karbonyylioksietyyliesteri; laktonyyliesterit, esim. ftali-15 dyyli- ja tioftalidyyliesteri; alemmat alkoksimetyylieste-rit, esim. metoksimetyyliesteri; ja alemmat alkanoyyliami-nometyyliesterit, esim. asetamidometyyliesteri. Muita sopivia estereitä ovat esim. bentsyyli- ja syanometyyliesterit.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden helposti hydrolysoi-20 tuvilla eettereillä tarkoitetaan kaavan (I) mukaisia yhdisteitä joissa X merkitsee 2,5-dihydro-6-hydroksi-2-metyyli- 5-okso-as-triatsin-3-yyliryhmää, jonka enolinen OH-ryhmä on helposti hydrolysoituvan eetteri ryhmän muodossa. Eet-teriryhminä tulevat kysymykseen samat ryhmät, jotka jo 25 mainittiin edellä helposti hydrolysoituvien esteriryhmien kohdalla. Tällaisia eettereitä ovat siis esimerkiksi alemmat alkanoyylioksialkyylieetterit, esim. asetoksimetyyli-, pivaloyylioksimetyyli-, 1-asetoksietyyli- ja 1-pivaloyyli-oksietyylieetteri; alemmat alkoksikarbonyylioksialkyyli-30 eetterit, esim. metoksikarbonyylioksimetyyli-, 1-etoksikarbonyylioksietyyli- ja 1-isopropoksikarbonyylioksietyyli-eetteri; laktonyylieetterit, esim. ftalidyyli- ja tioftali-dyylieetteri; alemmat alkoksimetyylieetterit, esim. metok-simetyylieetteri; ja alemmat alkanoyyliaminometyylieette-35 rit, esim. asetamidometyylieetteri.

Esimerkkejä kaavan (I) mukaisten yhdisteiden suoloista ovat alkalimetallisuolat, kuten natrium- ja kaliumsuola; ammoniumsuola; maa-alkalimetallisuolat, kuten kalsiumsuola; 3 73442 suolat orgaanisten emästen kanssa, kuten suolat amiinien kanssa, esim. suolat N-etyylipiperidiinin, prokaiinin, di-bentsyyliamiinin, N,N'-dibentsyylietyleenidiamiinin, alkyy-liamiinien tai dialkyyliamiinien kanssa, sekä suolat amino-5 happojen kanssa, kuten esim. suolat argiinin tai lysiinin kanssa. Suolat voivat olla monosuoloja tai myös disuoloja. Toinen suolanmuodostus voi tapahtua hydroksiryhmän kanssa yhdisteessä, joissa on 2,5-dihydro-6-hydroksi-2-metyyli-5-okso-as-triatsin-3-yyliryhmä.

10 Kaavan (I) mukaiset yhdisteet muodostavat samoin ad- ditiosuoloja orgaanisten tai epäorgaanisten happojen kanssa. Esimerkkejä tällaisista suoloista ovat hydrohalogenidit, esim. hydrokloridit, hydrobromidit, hydrojodidit, sekä muut mineraalihapposuolat, kuten sulfaatit, nitraatit, fosfaatit 15 ja vastaavat, alkyyli- ja mono-aryylisulfonaatit, kuten etaanisulfonaatit, tolueenisulfonaatit, bentseenisulfonaa-tit ja vastaavat ja myös muut orgaaniset happosuolat, kuten asetaatit, tartraatit, maleaatit, sitraatit, bentsoaatit, salisylaatit, askorbaatit ja vastaavat.

20 Kaavan (I) mukaiset yhdisteet (mukaanluettuna niiden suolat, helposti hydrolysoitavat esterit ja eetterit) voivat olla hydratoituja. Hydratointi voi tapahtua valmistusmenetelmän yhteydessä tai vähitellen lähinnä vedettömän tuotteen hygroskooppisten ominaisuuksien seurauksena.

25 Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voivat olla syn-iso- meerisessä muodossa, N t C—CONH-k /Tl ‘ 30 tai anti-isomeerisessä muodossa,

JO

tai näiden molempien muotojen seoksena. Esillä oleva keksintö koskee syn-isomeerien ja sitä vallitsevana sisältävän seoksen valmistusta.

4 73442

Edullisia yhdisteitä ovat: (6R, 7R) -7-£2- (2-amino-4-tiatsolyyli) -2- (Z-hydroksi-imino) -asetamido7-3-/fZ"(2,5-dihdyro-6-hydroksi-2-metyyli-5-okso-as-triatsin-3-yyli)tiq7-metyyli7”8-okso-5-tia-1-atsabisyklo-5 /3.2.Q7okt-2-eeni-2-karboksyylihappo ja sen suolat sekä vas taavat hydraatit.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä, niiden helposti hydrolysoituvia estereitä, helposti hydrolysoituvia eettereitä ja suoloja sekä kaavan I muiaisten yhdisteiden ja niiden 10 estereiden, eettereiden ja suolojen hydraatteja voidaan valmistaa siten, että yhdiste, jonka kaava

H H

HON=C~CONH—f-Y >

CO J—„J~ch2-s-x' II

1c CH„ T

13 I 1 COOH

Hai 1 1 jossa X tarkoittaa samaa kuin X tai X on helposti hydrolysoituvaksi eetteriksi eetteröity 2,5-dihydro-6-hydroksi- 2-metyyli-5-okso-as-triatsin-3-yyliryhmä ja Hai on bromi 20 tai kloori, tai sen suola tai karboksyylisuojattu johdannainen, jolloin kaavan II mukainen yhdiste, sen suola tai karboksyylisuojattu johdannainen on syn-isomeerin muodossa tai seoksen muodossa, jossa syn-isomeeri on vallitsevana, saatetaan reagoimaan tiourean kanssa ja mahdollinen karboksyyli-25 suojaryhmä lohkaistaan; ja haluttaessa saatu kaavan I mukainen karboksyylihappo tai enoli esteröidään tai eetteröi-dään ja/tai saatu yhdiste muutetaan suolaksi tai hydraatik-si ja/tai suola muutetaan hydraatiksi.

Kaavan (II) mukaisessa lähtöaineessa oleva karboksi-30 ryhmä voidaan suojata valinnan mukaan esim. esteröimällä helposti lohkaistavaksi esteriksi, kuten silyyliesteriksi, esim. trimetyylisilyyliesteriksi. Kysymykseen tulevat myös edellä esitetyt, helposti hydrolysoitavat esterit. Karbok-siryhmä voidaan myös suojata muodostamalla suola epäorgaani-35 sen tai tertiäärisen orgaanisen emäksen kanssa, kuten tri-etyyliamiinin kanssa.

Il 5 73442

Kaavan II mukaisia lähtöaineita voidaan valmistaa esim. N-asyloimalla vastaaava 7-aminoyhdiste siten, että yhdiste, jonka kaava on

5 H H

h2n—f-f "l J_N CH2-S-X1 111

COOH

10 jossa X merkitsee samaa kuin edellä ja karboksiryhmä ja/tai aminoryhmä voi olla suojattu, muutetaan diketeenillä ja vastaavalla halogeenilla (bromi tai kloori) vastaavaksi 4-halogeeniasetoasetamidojohdannaiseksi, jonka kaava on

15 H H

h2c-c°nh—F—f ^

CO J-N J— CH2-S-x' IV

CH '

| 2 COOH

Hai 20 jossa X^ ja Hai merkitsevät samaa kuin edellä, ja tätä tuotetta käsitellään nitrosointiaineella.

Kaavan III mukaisessa 7-aminoyhdisteessä oleva karboksiryhmä voidaan suojata edellä kaavan II mukaisen lähtöaineen yhteydessä kuvatulla tavalla. Kaavan III mukaisen 25 yhdisteen aminoryhmä voidaan suojata esim. silyylisuojaryh-mällä, kuten trimetyylisilyylillä.

Diketeeniä tai bromia (tai klooria), joita tarvitaan yhdisteiden IV valmistukseen yhdisteestä III, käytetään edullisesti ekvimolaarisissä määrissä. Reaktio tapahtuu 30 edullisesti inertissä orgaanisessa liuottimessa, esim. me-tyleenikloridissa, kloroformissa, tetrahydrofuraanissa tai näiden seoksissa alhaisessa lämpötilassa, esim. -50°C -0°C:ssa. Saadun kaavan IV mukaisen yhdisteen nitrosointi suoritetaan käsittelemällä yhdistettä typpihapokkeella tai 35 sen esterillä, esim. metyyli-, etyyli- tai amyylinitriilil-lä, tai nitrosyylikloridilla. Reaktio suoritetaan edullises- 6 73442 ti inertissä liuottimessa, esim. vedessä, etikkahapossa, dioksaanissa, tetrahydrofuraanissa, asetonitriilissä tai näiden seoksissa noin -20°C:een ja 50°C:een välisessä lämpötilassa, edullisesti huoneen lämpötilassa. Näissä olosuhteissa 5 saadaan kaavan II mukainen lähtöaine syn-muodossa (Z-muoto) tai seoksena, jossa syn-muoto on vallitsevana.

Kaavan II mukaisen halogenidin tai sen suolan reaktio tiourean kanssa suoritetaan edullisesti inertissä liuottimessa, kuten alemmassa alkoholissa, esim. etanolissa, alem-10 massa ketonissa, kuten asetonossa, eetterissä, kuten tetra-hydrofuraanissa, dioksaanissa, dimetyyliformamidissa, dime-tyyliasetamidissa, vedessä tai näiden seoksissa. Reaktio-lämpötila on yleensä noin 0-60°C, edullisesti huoneen lämpötila. Voidaan käyttää kaavan II mukaista vapaata happoa, 15 mutta myös sen suolaa, jolloin kysymykseen tulevat samat suolat kuin mitä edellä esitettiin kaavan I mukaisten yhdisteiden suolojen yhteydessä.

Reaktion jälkeen lohkaistaan mahdollisesti reaktio-tuotteessa oleva karboksisuojaryhmä. Jos suojaryhmä on si-20 lyyliryhmä (silyyliesteri), voidaan tämä ryhmä lohkaista erityisen helposti käsittelemällä reaktiotuotetta vedellä. Alemmat alkanoyylioksialkyyli-, alkoksikarbonyylioksialkyy-li-, laktonyyli-, alkoksimetyyli- ja alkanoyyliaminometyyli-esterit lohkaistaan edullisesti entsymaattisesti sopivan 25 esteraasin avulla (noin 20-40°C:ssa). Jos karboksyyliryhmä on suojattu suolanmuodostuksella (esim. trietyyliamiinilla), niin silloin voi tämän suolaa muodostavan suojaryhmän loh-kaisu tapahtua käsittelemällä hapolla. Happona voidaan tällöin käyttää esim. suolahappoa, rikkihappoa, fosforihappoa 30 tai sitruunahappoa.

Kaavan I mukaisten karboksyylihappojen helposti hydrolysoitavien esterien valmistamiseksi annetaan karboksyyli-hapon reagoida edullisesti vastaavan, esteriryhmän sisältävän halogenidin kanssa, edullisesti jodidin kanssa. Reak-35 tiota voidaan kiihdyttää emäksen, esim. alkalimetallihydrok-sidin tai -karbonaatin tai orgaanisen amiinin, kuten tri-etyyliamiinin avulla. Kun X on enolinen 2,5-dihydro-6-hyd- 7 73442 roksi-2-metyyli-5-okso-as-triatsin-3-yyliryhmä, voidaan täxnS eetteröidä muodostamalla vastaava, helposti hydrolysoitavissa oleva eetteri. Edullisesti käytetään tällöin ylimäärää vastaavaa halogenidia. Esteröinti-/eetteröinti-5 reaktio suoritetaan edullisesti intertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten dimetyyliasetamidissa, heksametyyli-fosforihappotriamidissa, dimetyylisulfoksidissa tai edullisesti dimetyyliformamidissa. Lämpötila on edullisesti noin 0-40°C.

10 Kaavan I mukaisten yhdisteiden suolojen ja hydraat- tien tai näiden suolojen hydraattien valmistus voi tapahtua sinänsä tunnetulla tavalla, esim. antamalla kaavan I mukaisen karboksyylihapon reagoida ekvivalenttisen määrän kanssa haluttua emästä sopivasti liuottimessa, kuten vedes-15 sä tai orgaanisessa liuottimessa, kuten etanolissa, meta-nolissa, asetonissa tai vastaavassa. Käytettäessä toista ekvivalenttia emästä tapahtuu suolanmuodostus myös mahdollisesti esiintyvässä tautomeerisessä enolimuodossa (2,5-dihydro-6-hydroksi-2-metyyli-5-okso-as-triatsin-3-yyliryhmä 20 X), jolloin muodostuu disuola. Suolanmuodostuslämpötila ei ole kriittinen. Yleensä käytetään huoneen lämpötilaa, mutta voidaan myös käyttää vähän sen ylä- tai alapuolella olevaa lämpötilaa, suunnilleen alueella 0° - +50°C.

Hydraattien muodostus tapahtuu useimmiten automaatti-25 sesti valmistuksen yhteydessä tai lähinnä vedettömän tuotteen hygroskooppisten ominaisuuksien seurauksena. Hydraatin valmistamiseksi voidaan kokonaan tai osittain vedetön tuote (kaavan I mukainen karboksyylihappo, tai sen esteri, eetteri tai suola) panna kosteaan atmosfääriin, esim. noin +10°C -30 +40°C:ssa.

Edellä kuvattuja kaavan III mukaisia 7-aminoyhdistei-tä voidaan valmistaa yhdisteistä, joiden kaava on

H H

H2N-f-f"3xl

35 j-N J-CH2-Y V

COOH

8 73442 jossa Y on poistuva ryhmä ja karboksyyliryhmä on mahdollisesti suojattu muodostamalla suola epäorgaanisen tai ter-tiäärisen orgaanisen emäksen kanssa, kaavan V mukainen yhdiste saatetaan veden läsnäollessa reagoimaan tiolin kanssa, 5 jonka kaava on

HS-X1 VI

jossa X merkitsee samaa kuin edellä. Tämä reaktio suoritetaan sinänsä tunnetulla tavalla, esim. noin 40 - 80°C:ssa, 10 sopivasti noin 60°C:ssa, vedessä tai puskuriliuoksessa, jonka pH-arvo on noin 6-7, edullisesti 6,5.

Saadun kaavan III mukaisen yhdisteen karboksiryhmä ja/tai aminoryhmä voidaan mahdollisesti suojata, esim. es-teröimällä tai karboksiryhmän suolanmuodostuksella tai si-15 lyloimalla.

Kaavan VI mukaiset tiolit ovat tautomeerisessä tasapainossa vastaavien tionien kanssa seuraavasti: H3cv^ v*1 2o FT ;

S' HS N^O

H t 2 VI a1 VI & jolloin R*^ on vety tai (yhdessä hapen kanssa) helposti hyd-25 rolysoitavissa oleva eetteriryhmä.

i 2 1

Jos kaavoissa VI a ja VI a R merkitsee vetyä, ovat nämä 6-hydroksiyhdisteet tautomeerisessä tasapainossa vastaavien 6-oksoyhdisteiden kanssa seuraavien kaavojen mukaisesti: 30 Η3^Ν/ΝγΟΗ VN/γο l VI b1 H ° VIb 1L· 11 35 H3C''N/tW0H _^ H3C''n/N'V:> ηΛνΛ) VI b1 VI b4 9 73442 6-asemassa eetteröityjen kaavan VI mukaisten tiolien (tionien) valmistus kuvataan esimerkissä 2. Yleensä liitetään eetteritähde siten, että annetaan S-suojatun (esim. bentshydryylillä) tiolin reagoida eetteriryhmän sisältävän 5 halogenidin, edullisesti jodidin kanssa, inertissä orgaanisessa liuottimessa happoa sitovan aineen, esim. kalium-karbonaatin läsnäollessa, edullisesti noin 10° - 50°C:ssa, ja suojaryhmä lohkaistaan (bentshydryyli voidaan lohkaista anisolilla ja trifluorietikkahapolla huoneen lämpötilassa). 10 Mahdollisesti saatu, kaavan I mukaisen yhdisteen syn/anti-seos voidaan erottaa tavanomaisella tavalla vastaaviksi syn- ja antimuodoiksi, esim. uudelleenkiteyttä-mällä tai kromatograafisin menetelmin käyttäen sopivaa liuotinta tai liuotinseosta.

15 Kaavan I mukaiset yhdisteet sekä vastaavat helposti hydrolysoitavat esterit, eetterit ja suolat tai näiden tuotteiden hydraatit vaikuttavat antibioottisesti, erityisesti bakterisidisesti. Niillä on laaja vaikutusspektri, joka käsittää grampositiiviset ja gramnegatiiviset mikro-organis-20 mit, mukaanluettuna β-laktamaasia muodostavat stafylokokit ja erilaiset ^-laktamaasia muodostavat gramnegatiiviset bakteerit, kuten esim. Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus influenzae, Escherichia coli, Serratia marcescens, Proteus-, Neisseria- ja Klebsiella-lajit. Erityisenä tunto-25 merkkinä on tuotteiden yllättävän korkea puoliintumisaika in vivo (aika, jonka kuluessa vaikutusainetiitteri alenee veriplasmassa puoleen), mikä tuo mukanaan tärkeän edun, nimittäin sen, että lukuunottamatta eroja spesifisessä bakterisidisessä vaikutuksessa verrattuna muihin tuottei-30 siin, joilla on alhaisemmat puoliintumisajät, tarvitaan vähäisempi vaikutusainemäärä vastaavan infektion hoitamiseksi; edelleen voidaan sallia vaikuttavan aineen halutun minimi-tiitterin ylläpitämiseksi veressä, pitempiä väliaikoja eri antokertojen välillä.

35 Kaavan I mukaisia yhdisteitä sekä vastaavia helposti hydrolysoitavia estereitä, eettereitä ja suoloja tai näiden 10 73442 tuotteiden hydraatteja voidaan käyttää infektiotautien hoitoon ja ennaltaehkäisyyn. Aikuisella tulee kysymykseen päivittäinen annos, joka on noin 0,1 kg - noin 2 kg. Kaavan I mukaisten yhdisteiden parenteraalista annostelutapaa pide-5 tään erittäin edullisena.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden antimikrobisen vaikutuksen osoittamiseksi yhdisteet tutkittiin eri taudinaiheuttajien suhteen. Kokeissa tutkittiin seuraavat yhdisteet: Tuote A: (6R,7R)-7-72-(2-amino-4-tiatsolyyli)-2- 10 (Z-hydroksi-imino) asetamidq7“3-7~(2,5-di- hydro-6-hydroksi-2-metyyli-5-okso-as-triastin-3-yyli)tiq7metyyli7-8-okso-5-tia-1-atsabisyklo^4.2.07okt-2-eeni-2-karboksyylihappo-dinatriumsuola 15 Tuote B: (6R,7R)-7-[2-(2-amino-4-tiatsolyyli)-2- (Z-hydroksi-imino)asetamidq7-3-/772,5-dihydro-2-me tyyli-5-okso-6-/”(pivaloyy li-oksi) -as-triatsin-3-yyll7tio7metyyli7- 8-okso-5-tia-1-atsabisyklo^.2.07okt-2-20 eeni-2-karboksyylihapponatriumsuola

Tuote C: metyleeni-(6R,7R)-7-T?~(2-amino-4-tiatso- lyyli)-2-(Z-hydroksi-imino)asetamidq7“ 3-CCB-, 5-dihydro-2-metyyli-5-okso-6-Tlpivaloyylioksi)metoksi7-as-triatsin-3-25 yyliJtiQ7metyyli7-8-okso-5-tia-1-atsa- bisykloTi.2.Q7okt-2-en-2-karboksylaatti-pivalaatti

Seuraavat tulokset tarkoittavat pienintä estävää konsentraatiota in vitro (/ug/ml) : n 73442

Tuote A, testi in vitro Pienin estävä konsentraatio ______(yug/jmi)______

Staphylococcus aureus kanta 1 0,62 5 kanta 2: 1,2 Λ-laktamaasia aiheuttava

Escherichia coli kanta 1 1,2 kanta 2 1 ,2 kanta 3 2,5 kanta 4 0 ,31 10 Klebsiella pneumoniae kanta 1 0,02

Serratia raarcescens kanta 1 0,16 kanta 2 0 ,31 kanta 3 0 ,31 kanta 4 0,63 15 kanta 5 0,31 kanta 6 0 ,31 kanta 7 0,31 kanta 8 0,31 kanta 9 0 ,16

Enterobacter cloacae , . , kanta 1 20 20 kanta 2 >80

Citrobacter treundii kanta 1 80

Proteus vulgaris . . . _ ,, kanta 1 0,31 kanta 2 0,31 kanta 3 0 ,63

Proteus morganii kanta 1 >0,04 25

Proteus rettgeri kanta 1 0,63

Proteus inconstans kanta 1 0,08

Proteus mirabilis kanta 1 0,02

Pseudomonas aeruginosa kanta 1 >80 kanta 2 >80 20 kanta 3 40 kanta 4 80 kanta 5 >80 kanta 6 10 kanta 7 5 kanta 8 20 kanta 9 80 35 kanta 10 10 kanta 11 5 kanta 12 >80 kanta 13 80 12 73442 kanta 14 >80 kanta 15 80 kanta 16 >80 kanta 17 >80

Neisseria meningitidis kanta 1 0,0025 5 kanta 2 0 ,0025 kanta 3 0,0025 kanta 4 0 ,0012

Neisseria gonorrhoeae kanta 1 0 ,0012 kanta 2 0 ,0012 kanta 3 0 ,02 , n kanta 4 0,01 kanta 5 0 ,04 kanta 6 0 ,0006

Haemophilus influenzae kanta 1 0,63 kanta 2 0 ,04 kanta 3 0 ,04 kanta 4 0,04 15 kanta 5 0 ,04 kanta 6 0 ,02 kanta 7 0,04

II

n 73442

Tuotteet A ja B/testi in vitro _Pienin estävä konsen- , , traaticf—- _A_B_ 5 Staphylococcus aureus kanta 3 1,60,4 kanta 4 1,60*8 kanta 5 1,610,4 kanta 6 3,10,8

Staphylococcus epidermidis 1,6 04

Streptococcus faecalis kanta 1 25 6-3 10 kanta 2 >25 >25

Streptococcus pyogenes kanta 1 0,1 ! 0,025 kanta 2 0,05 ' 0,025

Streptococcus pneumoniae 0,4 0,1

Streptococcus viridans 1,6 g,4

Escherichia coli kanta 5 ' 0,4 I 0,4 15 kanta 6 0,2 0*2 kanta 7 0,025 0*05 kanta 8 0,05 0,8

Proteus mirabilis kanta 2 0,025 0,4 kanta 3 0,051,6 kanta 4 0,025 0,8 20 ^roi:eus inconstans kanta 2 0,1 0,2 kanta 3 f 0,02 5 ^0 * 02 5

Proteus vulgaris kanta 4 3,! 12,5 kanta ^ 0,1 0,8 kanta 6 0,050,8

Proteus morganii kanta 2 0,05 1,6 25 Proteus rettgeri kanta 2 0,05 0,4

Klebsiella pneumoniae kanta 2 0,1 1,6 kanta 3 0,025 0*4 kanta 4 0,050,8

Serratia marcescens kanta i0 0,8 6,3 lamta 11 6,3 12,5 kanta 12 0,1 1,6

Enterobacter cloacae kanta 3 >25 >25 kanta 4 12,5 6,3

Enterobacter aerogenes kanta 1 0102 kanta 2 0:8 i;6

Citrobacter freundii kanta 2 6,3 31 kanta 3 0,2 0,4 35 14 73442

Kaavan X mukaisten yhdisteiden pitkän puoliintumisajan osoittamiseksi annettiin rotille 20 mg yhdistettä A/kg kohden intravenöösisti. Tällöin todettiin puoliintumisajaksi 140 minuuttia.

5 Kaavan I mukaisten tuotteiden pitkä viipymisaika eli mistössä käy myös ilmi annettaessa hiirille subkutaanisesti yhdisteitä A ja C 5 tuntia ennen testattavalla mikro-organismilla tapahtuvaa tartuttamista, jolloin saadaan seuraa-vat ED,-Q-arvot.

10 Aiheuttaja ED50 ihon kautta annettuna_

A C

Streptococcus pyogenes 0,15 0,45

Serratia marcescens 0,89 * 15 Escherichia coli 5,6 *

Annettu 24 tuntia ennen infektiota

Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat myrkyttömiä, kuten seuraavat yhdisteiden A ja B 24-tunnin arvot osoittavat: Annostelutapa Kuolettava Siedetty 20 annos mg/kg annos mg/kg

A AB

Suun kautta >5000 5000 >5000 ihon kautta >4000 >4000 intravenöösisti 1000 500 25 Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää esim.

farmaseuttisina valmisteina, jotka sisältävät niitä tai niiden suoloja seoksena enteraaliseen tai parenteraaliseen antoon soveltuvien farmaseuttisten, orgaanisten tai epäorgaanisten interttien kantaja-aineiden kanssa, kuten esim.

30 veden, gelatiinin, arabikumin, maitosokerin, tärkkelyksen, magnesiumsteraatin, talkin, kasvisöljyjen, polyalkyleeni-glykolien, vaseliinin jne. kanssa. Farmaseuttiset valmisteet voivat olla kiinteässä muodossa, esim. tabletteina, lääkeraikeina, peräpuikkona, kapseleina; tai nestemäisessä 35 muodossa, esim. liuoksina, suspensioina tai emulsioina.

Ne voivat olla steriloituja ja/tai sisältää apuaineita,

II

15 73442 kuten säilöntä-, stabilointi-, kostutus- tai emulgointiai-neita, suoloja osmoottisen paineen muuttamiseksi, kipulääkkeitä tai puskuriaineita. Ne voivat myös sisältää muita terapeuttisesti arvokkaita aineita. Kaavan I mukaiset yhdis-5 teet ja niiden suolat tai hydraatit tulevat edullisesti kysymykseen parenteraalisessa annostelussa ja ne valmistetaan tätä tarkoitusta varten edullisesti lyofilisaateiksi tai kuivajauheiksi tavanomaisilla aineilla, kuten vedellä tai isotonisella keittosuolaliuoksella laimennusta varten.

10 Kaavan I mukaisten yhdisteiden helposti hydrolysoitavat esterit tai eetterit ja niiden suolat tai hydraatit tulevat myös kyseeseen enteraalisessa, esim. oraalisessa annostelussa .

Esimerkki 1 15 (6R, 7R) -1-0. - (2-amino-4-tiatsolyyli) -2- (Z-hydroksi- imino)asetamidgJ-S-ZZl2,5-dihydro-6-hydroksi-2-metyyli-5-okso-as-triatsin-3-yyli)tio7metyyli7-8-okso-5-tia-1-atsa-bisykloZ?.2.Q7okt-2-eeni-2-karboksyylihapon dinatriumsuo-lan valmistus: 20 10 g (6R,7R)-7-/l-bromi-2-(Z-hydroksi-imino)-aseto- asetamidQ7”8-okso-3-Z"iT( 1/2,5,6-tetrahydro-2-metyyli-5,6-diokso-as-triatsin-3-yyli)tio7metyyli7-5-tia-1-atsabi-syklo^.2.Q7okt-2-eeni-2-karboksyylihappoa liuotetaan 50 ml:aan asetonia ja lisätään liuokseen, jossa on 3,5 g tio- 25 virtsa-ainetta 150 ml:ssa asetonia. Tällöin heti saostuva hydrobromidi imusuodatetaan ja pestään asetonilla ja alhaalla kiehuvalla petrolieetterillä. Saadaan roosan värinen hydrobromidi raakatuotteena. Tarkoituksena muuttaa dinatriumsuo-laksi liuotetaan se seokseen, jossa on 100 ml vettä ja 100 30 ml metanolia ja lisätään 40 ml 2N 2-etyylikapronihappo- natriumsuola-liuosta etikkaesterissä. Oranssinväristä liuosta sekoitetaan sen jälkeen kun on lisätty aktiivihiiltä, 1 tunnin ajan 25°C:ssa, sitten suodatetaan ja suodosta laimennetaan metanolilla, kunnes saavutetaan tilavuudeksi 2 1.

35 Suodatetaan pienestä määrästä saostunutta ainetta (fraktio 1, ruskea). Suodos tiivistetään vakuumissa 40°C:ssa noin is 73442 800 ml:ksi, ja saostunut aine (fraktio 2, keltainen) suodatetaan. Suodos tiivistetään noin 200 ml:ksi, laimennetaan 1 litralla metanolia, jolloin aine saostuu, ja se suodatetaan (fraktio 3, keltainen). Suodos tiivistetään vakuumissa 5 40°C:ssa noin 300 ml:n tilavuuteen ja saostunut aine suodatetaan (fraktio 4, keltainen). Suodokseen lisätään 1 litra etanolia ja amorfisena saostuva aine suodatetaan (fraktio 5, beigen värinen). Ohutkerroskromatografisen ja NMR-ana-lyysin mukaan ovat fraktiot 2, 3 ja 4 identtisiä ja ovat 10 haluttu yhdiste; fraktiot 1 ja 5 ovat sitävastoin vahvoja seoksia ja heitetään pois. Sen jälkeen kun fraktioita 2, 3 ja 4 on kuivattu suurvaakumissa 40°C:ssa yön yli saadaan keltainen, amorfinen otsikonyhdiste, jolloin &J^ - -133,2 (c 1 vedessä). Aine sisältää 4 % vettä ja 3 % metanolia.

15 Edellä olevassa menetelmässä lähtöaineena käytetty (6R,7R)-7-£4-bromi-2-(Z-hydroksi-imino)asetoasetoamido7~8-okso-3-/£( 1,2,5,6-tetrahydro-2-metyyli-5,6-diokso-as-tri-atsin-3-yyli)tio7metyyli7-5-tia-1-atsabisyklo/l.2.Q7okt-2-eeni-2-karboksyylihappoa voidaan valmistaa seuraavasti: 20 5,44 g diketeeniä liuotetaan 25 ml:aan dikloorimetaa- nia ja - 30 - -40°C:ssa lisätään tipoittain liuos, jossa on 10,4 g bromia 25 ml:ssa dikloorimetaania noin 15 min. sisällä. Väritön liuos jäähdytetään -50°C:een ja noin 10 min. sisällä tiputetaan -20°C:ssa liuokseen, joka on val-25 mistettu siten, että 18,5 g:aan (7R)-7-amino-3-desasetoksi- 3-£^2,5-dihydro-6-hydroksi-2-metyyli-5-okso-as-triatsin-3-yyli)tio7“kefalosporaanihappoa 300 ml:ssa abs. tetrahydro-furaania lisätään 50 ml Ν,Ο-bis-(trimetyylisilyyli)-aseta-midia 30 min. sisällä. Reaktioseosta sekoitetaan jäähdyttä-30 mättä 30 min. ajan, jolloin lämpötila kohoaa 0°C:een. Orans-sinruskea seos kaadetaan sitten 2 litraan etyyliasetaattia ja sekoitetaan voimakkaasti 500 ml:n vettä kanssa. Tällöin muodostunut välikerros suodatetaan ja heitetään pois. Oranssinvärinen orgaaninen faasi pestään kolme kertaa kulloin-35 kin 500 ml:11a vettä ja lopuksi sekoitetaan ilman kuivausta 10 g:n aktiivihiiltä kanssa 1 1/2 tunnin ajan. Sen jälkeen 17 73442 kun hiili on suodatettu kuivataan vaaleankeltainen suodos natriumsulfaatilla ja tiivistetään vakuumissa 40°C:ssa noin 100 ml:n tilavuuteen. Tällöin kiteytynyt aine imusuodatetaan ja pestään pienellä määrällä etyyliasetaattia. Saadaan puh- 5 das, beigenvärinen (6R,7R)-7-(4-bromiasetoasetoamido)-8- okso-3-/'/~( 1,2,5,6-tetrahydro-2-metyyli-5,6-diokso-as-tri- atsin-3-yyli) tiq7metyyli7-5-tia-1 -atsabisyklo/l . 2.O/okt-2- eeni-2-karboksyylihappo. Emäliuoksesta saadaan saostamalla 20 eetterillä edelleen väritön, amorfinen puhdas aine. CdJ~ 10 -247,3° (c = 1 dimetyyliformamidissa).

46,4 g (6R,7R)-7-(4-bromiasetoasetamido)-8-okso- 3-[£{ 1,2,5,6-tetrahydro-2-metyyli-5,6-diokso-as-triatsin- 3-yyli)tiq7metyyli7-5-tia-1-atsabisyklo/4.2.07okt-2-eeni-2-karboksyylihappoa suspendoidaan 100 ml:aan jääetikkaa ja 15 10-15°C:ssa lisätään liuos, jossa on 2,5 g natriumnitriit- tiä 10 ml:ssa vettä noin 15 min. sisällä. Reaktioseosta sekoitetaan 1 1/2 tunnin ajan 10°C:ssa. Näin muodostunut, oranssinvärinen liuos kaadetaan 1 litraan etyyliasetaattia, pestään kerran 600 ml :11a 0,16N rikkihappoa, sitten 3 ker-20 taa kulloinkin 500 ml:11a vettä, kuivataan natriumsulfaatilla ja tiivistetään vakuumissa 40°C:ssa voimakkaasti. Konsentraattiin lisätään eetteriä, jolloin aine saostuu amorfisena. Tämä imusuodatetaan, pestään peräjälkeen eetterillä ja alhaalla kiehuvalla petrolieetterillä ja kuivataan 25 vakuumissa 25°C:ssa. Saadaan beigenvärinen (6R, 7R)-7-/1-bromi-2- (Z-hydroksi-imino) asetoase tamido7-8-okso-3-/7~( 1,2, 5,6-tetrahydro-2-metyyli-5,6-diokso-as-triatsin-3-yyli)- tio7metyyl47-5-tia-1-atsabisyklo/1.2.Q7okt-2-eeni-2-karbok- 2 0 syylihappo, jolloin ZÄ7d = -279,2°, (c = 1 dimetyyliform-30 amidissa).

Esimerkki 2 (6R,7R)-7-/2“(2-amino-4-tiatsolyyli)-2-(Z-hydroksi-imino) -asetamidq73-/7Z2,5-dihydro-2-metyyli-5-okso-6-/"(pivaloyylioksi) metoks4j-as-triatsin-3-yyl t7tio/metyyli7-35 8-okso-5-tia-1-atsabisyklo/1.2.Q7 okt-2-eeni-2-karboksyyli-hapon natriumsuolan valmistus: is 73442 5/4 g (6R/7R)-7-£4-bromi-2-(Z-hydroksi-imino)-aseto-asetoantido7“3“/YZ2 / 5-dihydro-2-metyyli-5-okso-6-/lpivaloyy-lioksi)metoksi7-as-triatsin-3-yyli7tlQ7inetyyli7”8-okso-5-tia-1-atsabisyklo/^. 2.07okt-2-eeni-2-karboksyylihappoa sus-5 pensoidaan 70 ml:aan etanolia ja lisätään 1,2 g tiovirtsa-ainetta. Muodostunutta keltaista liuosta sekoitetaan 25 min. ajan 25°C:ssa. Sitten lisätään 9 ml 2N 2-etyylikapronihappo-natriumsuola-liuosta etyyliasetaatissa, jolloin aine saostuu erittäin puhtaassa muodossa. Sen jälkeen kun on lisätty 10 300 ml metanolia ja 130 ml etanolia suodatetaan lievästi samea liuos ja vaaleankeltainen suodos tiivistetään vakuu-missa 40°C:ssa noin 100 ml:n tilavuuteen. Tällöin saostunut aine imusuodatetaan, pestään etanolilla ja alhaalla kiehuvalla petrolieetterillä ja kuivataan yön ajan suurvakuumissa 15 40°C:ssa. Saadaan puhdas beigenvärinen, amorfinen otsikon- yhdiste, jolloin = -133,3° (c = 1 vedessä). NMR-spekt- ri ja mikroanalyysi vastaavat ilmoitettua rakennetta.

Edelläolevassa menetelmässä lähtöaineena käytetty (6R, 7R) -7-<£4-bromi-2- (Z-hydroksi-imino) asetoasetamido/-3-20 ΓΓΓΪ, 5-dihydro-2-metyyli-5-okso-6-,£l[pivaloyylioksi)metoksi7“ as-triatsin-3-yyli7tio7metyyli7-8-okso-5-tia-1-atsabisyklo-£4.2.Q7okt-2-eeni-2-karboksyylihappoa voidaan valmistaa seuraavasti: a) Tetrahydro-2-metyyli-5,6-diokso-3-tiokso-as-tri-25 atsin-1(2H)-karboksyylihappobentsyyliesterin valmistus: 39,79 g 1,2,5,6-tetrahydro-5,6-diokso-2-merkapto-2-metyyli-as-triatsiiniä liuotetaan 500 ml:aan dimetyyliform-amidia ja lisätään 35 ml trietyyliamiinia. 15 min. sisällä tiputetaan 39 ml bentsyylioksikarbonyylikloridia, jolloin 30 reaktioseoksen lämpötila kohoaa 45°C:een, trietyy1iamiini-hydrokloridi saostuu ja suspensio värjätään keltaiseksi. Seosta sekoitetaan 2 1/2 tunnin ajan 25°C:ssa ja lopuksi haihdutetaan vakuumissa 70°C:ssa. öljyistä haihdutusjäännöstä sekoitetaan 500 ml:n vettä kanssa 1 tunnin ajan, 35 jolloin tämä tulee kiinteäksi. Saatu kiinteä aine imsuoda-tetaan ja pestään 50 ml:n vettä kanssa. Keltaista suodatin- 19 73442 kakkua sekoitetaan hyvin 250 ml:n etanolia kanssa, imusuo-datetaan, pestään etanolilla ja kuivataan vakuumissa 40°C:ssa. Saadaan väritön raakakiteytymä, joka kiteytetään uudelleen metanolista ja saadaan väritön puhdas aine, jonka 5 sp. on 150-153°C.

b) 3-£{difenyylimetyyli)tio7“5,6-dihydro-2-metyyli-5,6-diokso-as-triatsin-1/2H)-karboksyylihappo-bentsyylies-terin valmistus: 13,2 g tetrahydro-2-metyyli-5,6~diokso-3-tiokso-as-10 triatsin-1(2H)-karboksyylihappo-bentsyyliesteriä liuotetaan 500 ml:aan etikkaesteriä ja lisätään liuos, jossa on dife-nyylidiatsometaania 90 ml:ssa alhaalla kiehuvaa petrolieet-teri. Aluksi violetinvärisen reaktioliuoksen annetaan seistä 40 tunnin ajan 25°C:ssa, jolloin väri muuttuu vaaleanpunai-15 seksi. Lisätään 3 ml jääetikkaa, ja seos haihdutetaan 1 tunnin kuluttua vakuumissa 40°C:ssa. Haihdutusjäännöksenä saadaan keltainen öljy. Tämä erotetaan pylväskromatgrafiän avulla käyttäen silikageeliä sekä eluointiaineina bentsee-niä, bentseeni/etyyliasetaattia 95:5 ja bentseeni/etyyli-20 asetaattia 90:10. Haluttua ainetta sisältävät fraktiot kerätään ja haihdutetaan vakuumissa 40°C:ssa. Saadaan, sen jälkeen kun on kiteytetty uudelleen etanolista, väritön puhdas aine, jonka sp. on 90-92°C.

c) 3-£Idifenyylimetyyli)tiq7-1,2-dihydro-2-metyyli-as-25 triatsiini-5,6-dionin valmistus: 6,9 g kohdassa b) valmistettua ainetta liuotetaan 100 ml:aan etyyliasetaattia ja sekoitetaan läpikotaisin 30 ml:n vesipitoista 7 %:sta ammoniakkiliuosta kanssa 25°C:ssa 15 min. ajan. Etyyliasetaattifaasi erotetaan ja 30 heitetään pois. Vesipitoiseen faasiin lisätään 7 ml kons. suolahappoa ja sekoitetaan 30 min. ajan jäähauteessa. Tällöin saostunut aine imusuodatetaan, pestään vedellä ja kiteytetään heti uudelleen etanolista. Saadaan väritön puhdas aine, jonka sp. on 180-182°C.

20 73442 d) 3~£7difenyylimetyyli) tiq7-6-pivaloyylioksimetoksi- 2-metyyli-as-triatsin-6(2H)-onin valmistus: 3,25 g kohdassa c) valmistettua yhdistettä liuotetaan 40 ml:aan dimetyyliformamidia ja lisätään 1,52 g kaliumkar-5 bonaattia. Tähän seokseen lisätään yhdellä kertaa 2,66 g pivaloyylioksimetyylijodidia, jolloin muodostuu vaaleankeltainen liuos. Reaktioseosta sekoitetaan 4 tunnin ajan 25°C:ssa ja lisätään vielä kerran 2,66 g pivaloyylioksimetyyli jodidia. Tätä seosta sekoitetaan 15 tunnin ajan 25°C:ssa 10 ja lopuksi haihdutetaan suurvaakumissa 35°C:ssa. Tulokseksi saatava haihdutusjäännös jaetaan 100 ml:n vettä ja 100 ml:n etyyliasetaattia välillä. Vesipitoinen faasi uutetaan vielä 2 kertaa kulloinkin 50 ml :11a etyyliasetaattia. Yhdistetyt etyyliasetaatti-faasit kuivataan natriumsulfaatilla ja haih-15 dutetaan vakuumissa 35°C:ssa. Jäljellejäävä keltainen öljy kromatografioidaan silikageelipylväällä käyttäen etyyliasetaattia eluointiaineena. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot kerätään ja haihdutetaan vakuumissa 35°C:ssa. Jäljellejäävää vaaleansinistä öljyä kuivataan suurvakuumissa 25°C:ssa 20 1 tunnin ajan, jolloin saadaan puhdas aine vaaleansinisenä hartsina.

e) 2,3,4,5-tetrahydro-2-metyyli-5-okso-3-tiokso-as-triatsin-6-yyli)oksi7metyyli-pivalaatin valmistus: 3,6 g kohdassa d) valmistettua yhdistettä sekoitetaan 25 18 ml:ssa anisolia ja 18 ml:ssa trifluorietikkahappoa 2 1/2 tunnin ajan 25°C:ssa. Liuos haihdutetaan sitten vakuumissa 50°C:ssa. öljyistä jäännöstä sekoitetaan 50 ml:n alhaalla kiehuvaa petrolieetteriä kanssa, jolloin tapahtuu kiteytyminen. Kiteytymä imusuodatetaan ja pestään alhaalla kiehu-30 valla petrolieetterillä. Saadaan valkoisia kiteitä, joista saadaan tulokseksi sen jälkeen kun on kiteytetty uudelleen eetteri/alhaallakiehuvasta petrolieetteristä, valkoinen kiteinen puhdas aine, jonka sp. on 112-113°C. NMR-spektri ja mikroanalyysi vastaavat ilmoitettua rakennetta.

21 7 34 4 2 f) (6R, 7R) -7-amino-3-//^2,5-dihydro-2-metyyli-5-okso- 6-^(pivaloyylioksi)metoksi7-as-triatsin-3-yyli7tiq7metyyli7- 8-okso-5-tia-1-atsabisyklo/3.2.07okt-2-eeni-2-karboksyyli-hapon valmistus: 5 3,0 g kohdassa e) valmistettua yhdistettä suspendoi- daan yhdessä 2,72 g:n kanssa 7-aminokefalosporaanihappoa 50 ml:aan vettä. Suspension pH saatetaan typpikaastuksen alaisena 1N natronlipeällä arvoon 6,5 ja sekoitetaan 4 tunnin ajan pH:n ollessa 6,5-7 ja lämpötilan ollessa 55-60°C.

10 Haluttu yhdiste saostuu ja imusuodatetaan sen jälkeen kun seos on jäähdytetty 25°C:een. Sen jälkeen kun on pesty vedellä, asetonilla ja alhaalla kiehuvalla petrolieetterillä ja kuivattu yön ajan suurvakuumissa 40°C:ssa saadaan puhdas aine, jonka mikroanalyysi ja NMR-spektri vastaavat ilmoi-15 tettua rakennetta.

g) 6R, 7R) -7-/3”t>romi-asetoasetoamido7-3-/f/rZ^ , 5-di-hydro-2-metyyli-5-okso-6-ZT(pivaloyylioksi) metoksi7-as-tri-atsin-3-yyli7tiQ7metyyli7-8-okso-5-tia-1-atsabisyklo-/4.2.Q7okt-2-eeni-2-karboksyylihapon valmistus: 20 Ensiksi liuotetaan 4,35 g diketeeniä 20 ml:aan mety- leenikloridia ja -30 - -40°C:ssa lisätään tipoittain liuos, jossa on 8,32 g bromia 20 ml:ssa metyleenikloridia noin 15 min. sisällä. Happobromidia sisältävä väritön liuos jäähdytetään -50°C:een ja tiputetaan noin 10 min. sisällä 25 -20°C:ssa seuraavalla tavalla valmistettuun liuokseen: 19,42 g kohdassa f) valmistettua yhdistettä suspensoidaan 400 ml:aan etyyliasetaattia ja lisätään 40 ml N,0-bis-(tri-metyylisilyyli)-asetamidia. Suspensiota sekoitetaan 30 min. ajan 35-40°C:ssa, kunnes ruskehtava liuos on muodostunut.

30 Tämä jäähdytetään -20°C:een edellä kuvatulla tavalla valmistetulla happobromidilla asylointia varten. Sen jälkeen kun happobromidi-liuos on tiputettu, sekoitetaan reaktio-seosta vielä 1 tunnin ajan ilman jäähdytystä. Tämän jälkeen lisätään 200 ml vettä. Saostunut, reagoimaton lähtöaine 35 imusuodatetaan ja heitetään pois. Vesipitoinen faasi erotetaan. Oranssinvärinen orgaaninen faasi pestään kaksi ker- 22 7 3 4 4 2 taa kulloinkin 250 ml :11a vettä, kuivataan natriumsulfaatil- la ja tiivistetään vakuumissa 40°C:ssa. Sen jälkeen kun on lisätty eetteriä saostuu reaktiotuote amorfisena. Imusuoda- tetaan, pestään eetterillä ja alhaalla kiehuvalla petroli- 5 eetterillä ja kuivataan vakuumissa 25°C:ssa. Saadaan raaka amorfinen aine, joka saostetaan uudelleen puhdistamista varten etyyliasetaatti/eetteristä. Täten saadaan beigenvä-

2 S

rinen otsikonyhdiste, jolloin Z&7D = -159,3° (c = 1 kloroformissa) .

10 h) (6R,7R)-7-/4“bromi-2-(Z-hydroksi-imino)-aseto- asetamidoZ-S-ZZT^, 5-dihydro-2-metyyli-5-okso-6-/Opival°yyli~ oksi)metoksi7-as-triatsin-3-yyli7 tig7metyyli7-8-okso-5-tia-1-atsabisyklo/4.2.Q7okt-2-eeni-2-karboksyylihapon valmistus : 15 13 g kohdassa g) valmistettua yhdistettä liuotetaan 65 mlraan etikkahappoa. Tähän liuokseen lisätään tipoittain 10-15°C:ssa noin 45 min. sisällä liuos, jossa on 1,65 g natriumnitriittiä 7 ml:ssa vettä. Reaktioliuosta sekoitetaan 1 1/4 tunnin ajan 10-15°C:ssa edelleen, kunnes ei enää 20 voida osoittaa jodi-tärkkelyspaperin avulla typpihapoketta. Punertava liuos kaadetaan sitten 500 ml:aan etyyliasetaattia. Tämä seos pestään 2 kertaa laimennetulla natriumklori-di-liuoksella. Orgaaninen faasi kuivataan natriumsulfaatil-la ja tiivistetään vakuumissa 40°C:ssa voimakkaasti. Jäl-25 jellejäävään siirappimaiseen jäännökseen lisätään eetteriä, jolloin aine saostuu amorfisena. Tämä imusuodatetaan, pestään eetterillä ja alhaallakiehuvalla petrolieetterillä ja kuivataan yön ajan vakuumissa 40°C:ssa. Saadaan ruskehtava amorfinen jauhe, jota sekoitetaan puhdistamisen vuoksi 30 100 ml:ssa isopropanolia, jolloin ensiksi muodostuu liuos, josta sitten erottuu hyytelömäinen massa, joka kiteytyy sen jälkeen kun on sekoitettu noin 45 min. ajan 25°C:ssa. Kiteinen aine imusuodatetaan, pestään pienellä määrällä isopropanolia, eetterillä ja alhaalla kiehuvalla petrolieet-35 terillä ja kuivataan suurvaakumissa 40°C:ssa. Saadaan valkoinen, kiteinen puhdas aine, jolloin = -284,6° (c = 1 kloroformissa). NMR-spektri vastaa ilmoitettua rakennetta.

23 73442

Esimerkki 3

Metyleeni-(6R ,7R) -Ί-£1 - (2-amino-4 -tiatsolyyli ) - 2- (Z-hydroksi-imino) asetamido7-3-//72 ,5-di-hydro-2-metyyli-5-okso-5/T(pivaloyylioksi) metok-5 si7-as-triatsin-3-yyli7 tio7metyyli7-8-okso-5- tia-l-atsabisyklo/f4 ,2 ,Q7okto-2 -eeni-2-karboksy-laatti-pivalaatin valmistus: 1,35 g (6R ,7R)-7-/2-(2-amino-4-tiatsolyyli)-2-(Z-hydroksi-imino)asetamido7-3-CC{2 ,5-dihydro-2-metyyli -10 5 -oks 0.-6-/"(pivaloyy li oksi) metoksi_7 -as-triatsin-3 -yyli/ - tio) metyyli7-5-okso-4-tia-1-atsabisyklo/7 ,2 ,Q7okt-2-eeni-2-karboksyylihapon natriumsuolaa liuotetaan 25 ml: aan dimetyyliformamidia ja lisätään 1 g pivaloyylioksi-metyylijodidia 0-5°C:ssa. Seosta sekoitetaan 30 min.

15 ajan 0-5°C:ssa typpi-kaasutuksen alaisena. Tämän jäl keen kaadetaan se 400 ml:aan etyyliasetaattia, pestään peräjälkeen kaksi kertaa kulloinkin 100 ml:11a vettä, kaksi kertaa kulloinkin 50 ml :11a 8 %:sta natriumve-tykarbonaattiliuosta , kerran 100 ml:lla 5 %:sta natrium-20 tiosulfaatti-liuosta ja kaksi kertaa kulloinkin 100 ml: 11a vettä ja lopuksi kuivataan natriumsulfaatilla. Etyyliasetaattiliuos tiivistetään sitten vakuumis-sa 40°C:ssa ja lisätään 150 ml eetteriä, jolloin aine saostuu amorfisena. Tämä imusuodatetaan, pestään eet-25 terillä ja alhaalla kiehuvalla petrolieetterillä ja kuivataan yön ajan suurvakuumissa 40-45°C:ssa. Saadaan beigenvärinen puhdas aine, jolloin = 0,57 DC-sys-teemissä käytettäessä butanoli/etikkahappo/vettä 4:1:1 silikageeli-F2^^-valmislevyillä. NMR-spektri vastaa 30 ilmoitettua rakennetta.

Claims (4)

24 73442

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten (6R,7R)-7-£>-(2-amino-4-tiatsolyyli)-2-(hydrok-5 si-imino) asetamido_7-3-/7T( substituoitu-as-triatsin-3-yyli) -tio7-metyyli7-8-okso-5-tla-1-atsabisyklo£3.2.0_7okt-2-eeni~ 2-karboksyylihappojen, niiden helposti hydrolysoituvien es-tereiden, helposti hydrolysoituvien eettereiden ja suolojen sekä kaavan I mukaisten yhdisteiden ja niiden estereiden, 10 eettereiden ja suolojen hydraattien valmistamiseksi, H H HON=C-CONH-- jri COOK h2n jossa kaavassa X on 1,2,5,6-tetrahydro-2-metyyli-5,6-diokso-as-triatsin-3-yyliryhmä tai sen vastaava tautomeerinen muo-20 to, 2,5-dihydro-6-hydroksi-2-metyyli-5-okso-as-triatsin-3-yyliryhmä, jolloin yhdisteet ovat syn-isomeerin muodossa tai seoksen muodossa, jossa syn-isomeeri on vallitsevana, tunnettu siitä, että yhdiste, jonka kaava a h £

25 HON=C-CONH --Y ^ IX CO J-ti J-h:h2-s-x1 CH T Hai C00H , 1. jossa X tarkoittaa samaa kuin X tai X on helposti hydro- 30 lysoituvaksi eetteriksi eetteröity 2,5-dihydro-6-hydroksi- 2-metyyli-5-okso-as-triatsin-3~yyliryhmä ja Hai on bromi tai kloori, tai sen suola tai karboksyylisuojattu johdannainen, jolloin kaavan II mukainen yhdiste, sen suola tai karboksyylisuojattu johdannainen on syn-isomeerin muodossa tai 35 seoksen muodossa, jossa syn-isomeeri on vallitsevana, saatetaan reagoimaan tiourean kanssa ja mahdollinen karboksyyli-suojaryhmä lohkaistaan; ja haluttaessa saatu kaavan I mu- 25 73442 kainen karboksyylihappo tai enoli esteröidään tai eetteröi-dään ja/tai saatu yhdiste muutetaan suolaksi tai hydraatik-si ja/tai suola muutetaan hydraatiksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä (6R,7R)- 5 1-£λ-(2-amino-4-tiatsolyyli)-2-(Z-hydroksi-imino)-asetamido7~ 3-/7T(2,5-dihydro-6-hydroksi-2-metyyli-5-okso-as-triatsin- 3-yyli)tiq7-metyyli7-8-okso-5-tia-1-atsabisyklo-£4.2.0_7-okt-2-eeni-2-karboksyy 1 Ihapcn, sen suolan tai hydraatin tai suolan hydraatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 10 lähtöaineena käytetään vastaavasti substituoitua kaavan II mukaista yhdistettä.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä (6R,7R)~ l-£l-(2-amino-4-tiatsolyyli)-2-(Z-hydroksi-imino)-asetamido7- 3-£££2,5-dihydro-2-metyyli-5-okso-6-£7pivaloyylioksi) -metok- 15 si7-as-triatsin-3-yyli7tiq7metyyli7-8-okso-5-tia-1-atsabi-syklo^ . 2.07okt-2-eeni-2-karboksyylihapon, sen suolan tai hydraatin tai suolan hydraatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että lähtöaineena käytetään vastaavasti substituoitua kaavan II mukaista yhdistettä.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä metyleeni- (6R,7R)-7-£2"(2-amino-4-tiatsolyyli)-2-(Z-hydroksi-imino)-astamido73-/2Z2,5-dihydro-2-metyyli-5-okso-6-/"(pivaloyyli-oksi)metoksi7~as-triatsin-3-yyli7-tio7metyyliJ-8-okso-5-tia-1-atsabisyklo/3.2. Q7-okt-2-eeni-2-karboksilaatti-piva-25 laatin, sen suolan ja hydraatin sekä suolan hydraatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että lähtöaineena käytetään vastaavasti substituoitua kaavan II mukaista yhdistettä. 26 7 3442