FI70670C - Foerfarande foer framstaellning av en stabil koncentrerad cisplatin-loesning i ett loesningsmedel - Google Patents

Description

1 70670

Menetelmä stabiilin, väkevän cisplatin-liuoksen valmistamiseksi liuottimeen

Keksinnön kohteena on menetelmä stabiilin, väkevän 5 cisplatin-liuoksen valmistamiseksi liuottimeen, erityisesti vesipitoiseen polyetyleeniglykoliin, metoksipolyetyleeni-glykoliin tai niiden seoksiin, jotka sisältävät kloridi-ioneja luovuttavaa ainetta.

Platinayhdisteet ovat ainutlaatuinen ryhmä yhdisteitä 10 kasvaintenvastaisten aineiden joukossa. Rosenberg ja hänen kollegansa havaitsivat ensiksi 1965 niillä olevan antibioottista tehoa /Rosenberg, B. et ai. Nature (Lontoo) 205 (1965) 698-6997 ja sen jälkeen Rosenberg kollegoineen huomasi niiden olevan tehokkaita kasvaintenvastaisia aineita eläimille 15 /Rosenberg, B. et ai., Nature (Lontoo) 222 (1969) 385-3867·

Rakenteeltaan ne ovat kompleksiyhdisteitä, joiden kes-kusatomina on platina ja tämän ympärillä erilaisina järjestelminä klooriatomeja tai ammoniakkiryhmiä joko cis- tai trans-asennossa tasoon nähden. Kahden eniten tutkitun plati-20 nayhdisteen diagrammit ovat seuraavat:

Cl

Cl NH0 /-7 3 Cl NH0 /*7 /** / 25 Cl NH3 C1 'nh3

Cl

Cis-platina(II)diammono- Cis-platina(IV)diammonotetra- dikloridi kloridi 30

Kuten voidaan nähdä ovat cis-platina(II)diammono-dikloridi-yhdisteen kaikki klooriatomit ja ammoniakkiryhmät samassa tasossa. Tätä yhdistettä, joka nykyään tunnetaan Yhdysvalloissa hyväksytyllä nimellä (United States Adopted 35 Name, USAN) cisplatin, on syntetisoitu seuraavan reaktion mukaisesti: 70670 2 NH .Cl 4 K2Z"PtCl47 + 2NH3 -> cis-/Pt (NH3) 2C127 + 2KC1 /*ks. Kauffman, G.B. et al.f Inorganic Synthesis, J. Kleinberg 5 (toim.), sivut 239-245, McGraw-Hill Book Co., Inc., New York, 19637.

Breusova-Baidala, Y.G. et ai. käsittelevät julkaisussa Akademia Nauk SSSR, nro 6, sivut 1239-1242 (kesäkuu 1974) cis-platina(II)diammonodikloridin hidasta isomeroitumista 10 trans-muotoon vesiliuoksessa.

Reishus, J.W. ja Martin, D.S. (Journal of the American Chemical Society 83 (1961) 2457-2462) kuvaavat cisplatinin hapanta hydrolyysiä 25°C:ssa ja 35°C:ssa. Näissä tutkimuksissa käytettiin vesiliuoksia, joiden pitoisuudet olivat 15 1,5 x 10 3 M, 2,5 x 10 3 M ja 5,0 x 10 3 M, jotka vastaavat pitoisuuksia 0,45, 0,75 ja 1,5 mg/ml. Kirjoittajat esittävät, että hydrolyysikäyrien alun (toisin sanoen nolla-kohdan) määrittämisessä oli epäselvyyttä, koska näytteiden täydelliseen liukenemiseen tarvittiin 10-30 minuuttia näinkin pienissä pi-20 toisuuksissa.

Rozencweig, M. et ai., esittävät julkaisussa Annals of Internal Medicine 86 (1977) 803-812 yhteenvedon tuloksista, joita saatiin erilaisissa esikliinisissä ja kliinisissä tutkimuksissa cisplatinin käytöstä eläinten kokeellisissa 25 kasvaimissa sekä ihmisten erityyppisissä kasvaimissa. He esittävät, että tutkimuksissa käytetty lääke, joka on ammattitaitoisten tutkijoiden saatavissa laitoksen The Investigational Drug of the Cancer Therapy Evaluation Program of the National Cancer Institute kautta, toimitettiin valkoi-30 sena lyofilisoituna jauheena lääkepulloissa, jotka sisälsivät 10 mg cisplatinia, 90 mg natriumkloridia, 100 mg mannito-lia (U.S.P.) ja suolahappoa pH:n säätämiseksi. Lisättäessä tuote 10 ml:aan steriiliä vettä ruiskeita varten (U.S.P.) saatiin liuos, jossa oli 1 mg cisplatinia, 10 mg mannitolia 35 ja 9 mg NaCl.

Julkaisussa Cancer Chemotherapy Reports 57 (1973) 465-471 Talley, R.W. et ai., kuvaavat tuloksia, joita he 3 70670 saivat kliinisen tutkimuksensa ensimmäisessä vaiheessa cisplatinin käytöstä käsitellessään sillä 65 ihmispotilasta, joilla oli erilaisia kasvaimia. Samoin kuin edellisessäkin julkaisussa National Cancer Institute toimitti lääkkeen heil-5 le pulloissa, jotka sisälsivät 10 mg cisplatinia, 90 mg natriumkloridia ja 100 mg mannitolia, jotka käytettiin lisäten 10 ml steriiliä vettä.

Russof, A.H. et ai., kuvaavat julkaisussa Cancer 30 (1972) 1451-1456 tuloksia, jotka he saivat käyttäessään 10 cisplatinia 31 ihmispotilaalle, joilla oli erityyppisiä kasvaimia. He ilmoittavat National Cancer Instituten toimittaman lääkkeen valmistajan olleen Ben Venue Laboratories, Inc. ja että se sisälsi pulloa kohti 10 mg cisplatinia, 10 mg (sic) mannitolia ja 9 mg (sic) NaCl:a ja että kellervän valkoinen 15 jauhe liukeni helposti 8-10 ml:aan steriiliä vettä.

Joitakin cisplatinin kemiaa ja farmaseuttisia muotoja koskevia tietoja on esitetty sivuilla 1-5 ja 31-32, julkaisussa "Clinical Brochure, cis-platinum (II) diamminedichloride (NSC-119875)", H. Haldelsman et ai.. Investigational Drug 20 Branch, Cancer Chemotherapy Evaluation Program, Division of Cancer Treatment, National Cancer Institute (tarkistettu painos elokuu 1974). Julkaisun sivut 31 ja 32 käsittelevät cisplatin-valmistetta, jota N.C.I. toimittaa ilmaiseksi tutkijoille näiden suorittamia syövän kemoterapian kliinisiä 25 tutkimuksia varten ja ne kuuluvat seuraavasti:

Farmaseuttiset tiedot NSC-119875 cis-diammonodiklooriplatina (II)

Annosmuoto : Jokaisen 20 ml:n piilasipullon sisältö 10 mg/pullo on lähes valkoisena lyofilisoituna kak- 30 kuna. Kukin pullo sisältää 10 mg NSC- 119875:ä; 90 mg natriumkloridia; 100 mg mannitolia sekä suolahappoa pH:n säätämiseksi .

Liuoksen valmistus : Saatettaessa pullon sisältö käyttömuo-35 10 mg/pullo toon 10 ml:lla steriiliä vettä ruiskei ta varten (Sterile Water for Injection, USP) yksi ml saatua liuosta sisältää 4 70670 1 mg:n yhdistettä NSC-119875, 10 mg mannitolia ja 9 mg natriumkloridia ja sen pH on alueella 3,5 - 4,5.

Säilytys : Kuivat, avaamattomat pullot tulisi säi- 5 lyttää jääkaappilämpötilassa (4-8°C).

Pysyvyys : Vioittumattomien pullojen varastointi- stabiilisuus on yksi vuosi kun ne säilytetään jääkaappilämpötilassa (4-8°C). Stabiilisuussuosituksia saatetaan tar-10 kistaa sen jälkeen kun kaksivuotinen varastointitutkimus on saatettu loppuun. Saatettaessa käyttömuotoon suosituksen mukaisesti on tuloksena vaaleankeltainen liuos, joka on huoneenlämpötilassa 15 (22°C) pysyvä vain yhden tunnin normaa lissa huonevalaistuksessa ja vain kahdeksan tuntia huoneenlämpötilassa (22°C) valolta suojattuna. Käyttömuotoon saatetut liuokset voivat muodostaa sakkaa 20 tunnin kuluessa jääkaappilämpötilassa (4-8°C).

Varoitus : Lyofilisoidut annostusmuodot eivät si sällä säilöntäaineita ja sen vuoksi neuvotaan hylkäämään liuokset kahdek-25 san tunnin kuluttua niiden saattamises ta käyttömuotoon.

Elokuu, 1974

Clinical Drug Distribution Section Drug Development Branch 30

Julkisessa GB-patenttihakemuksessa nro 2 021 946A kuvataan cisplatinin stabiileja vesiliuoksia, joiden cisplatin-pitoisuus on noin 0,1-1,0 mg/ml ja pH alueella 2,0-3,0. Liuokset voivat sisältää myös myrkytöntä, farmaseuttisesti hyväk-35 syttävää, epäorgaanista kloridi-ioneja muodostavaa ainetta kuten natriumkloridia ja lisäainetta kuten mannitolia.

Vaikkakin tällaisessa vesiväliaineessa voidaan saada 5 70670 aikaan huoneenlämpötilassa cisplatinin stabiileja liuoksia, joiden cisplatin-pitoisuus voi olla jopa noin 1 mg/ml, voi cisplatin kiteytyä kylmässä jos cisplatin-pitoisuus on olennaisesti yli 0,5 mg/ml. Tämän kiteytyneen cisplatinin uudel-5 leen liuottamista ei voida suorittaa helposti ravistelemalla huoneen lämpötilassa vaikkakin voidaan saada uudelleen liuos lämmittämällä 37°C:een. Koska lämpötiloja kuljetuksen aikana ja myynnin jälkeisen varastoinnin aikana ei voida valvoa ja koska cisplatinin kiteytyminen pulloissa aiheuttaisi 10 hankalia ongelmia sitä käyttävälle lääkärille, on cisplatinin maksimipitoisuus tällaisessa vesiväliaineessa käytännössä noin 0,5 mg/ml.

Nyt on yllättäen havaittu, että keksinnön mukaisella menetelmällä, jolle on tunnusomaista, että liuottimeen liuo-15 tetaan cisplatinia 2,5-22 mg/ml, edullisesti 10-15 mg/ml, jolloin liuotin sisältää 31-90 % polyetyleeniglykolia, jonka keskimääräinen molekyylipaino on noin 150-9000, tai metoksi-polyetyleeniglykolia, jonka keskimääräinen molekyylipaino on noin 300-6000, tai näiden seosta, ja 69-10 % vettä sekä aina-20 kin yhtä myrkytöntä, farmaseuttisesti hyväksyttävää kloridi-ioneja luovuttavaa ainetta määrän, joka on vähintään noin ekvivalenttinen liuoksessa olevan cisplatin-määrän kanssa, saadaan stabiili väkevä cisplatin-liuos.

Tämä keksinnön mukaisella menetelmällä saatava 25 cisplatin-liuos voi sisältää jopa 22 mg cisplatinia millilit-rassa liuosta vaikkakin suositeltava maksimi on noin 15 mg/ml. Esillä olevan keksinnön mukaisesti saatavia cisplatin-liuok-sia, jotka ovat sisältäneet 15 mg cisplatinia/ml, on säilytetty 4°C:n lämpötilassa 12 kuukauden ajan cisplatinin kitey-30 tymättä. Tällaisia liuoksia on myös jäädytetty -60°C:ssa ja sen jälkeen sulatettu huoneen lämpötilassa eikä cisplatinin saostumista ole ilmennyt. Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettujen liuosten cisplatin-pitoisuudet voivat siten käytännössä olla 30 kertaisia verrattuna aikaisemmin tunnetun 35 tekniikan mukaisesti valmistettujen vesiliuosten pitoisuuksiin.

Lisäksi keksinnön mukaisella menetelmällä saatavien 6 70670 väkevien cisplatin-liuosten vaatimat kuljetus-, varastointeja muut kustannukset yksikköannosta kohti ovat alemmat kuin tunnetuilla vesiliuoksilla. Vaikkakin tunnetun lyofilisoidun kiinteän tuotteen kuljetus- ja varastointikustannukset myös 5 ovat alhaisemmat, ovat lyofilisointiin tarvittavat aika ja kustannukset jopa suuremmat kuin tämä säästö.

Esillä olevan keksinnön edullisessa suoritusmuodossa liuotin sisältää 90 % polyetyleeniglykolia, jonka keskimääräinen molekyylimassa on noin 350-450, ja noin 10 % vettä.

10 Edullisesti liuos sisältää noin 5-20 mg cisplatinia/ml ja edullisimmin noin 10-15 mg/ml. Myrkytöntä, farmaseuttisesti hyväksyttävää kloridi-ioneja luovuttavaa ainetta on läsnä edullisesti ainakin noin kaksi ekvivalenttia liuoksessa olevaa cisplatin-ekvivalenttia kohti. Voidaan käyttää kloridi-15 ionipitoisuuksia, jotka ovat jopa 50 ekvivalenttia tai enemmänkin yhtä cisplatin-ekvivalenttia kohti riippuen cisplatin-pitoisuudesta, läsnä olevan veden prosentuaalisesta määrästä ja kulloinkin kysymyksessä olevasta kloridi-ionien luovutta-jareagenssista, mutta tavallisesti näin suuret kloridi-ioni-20 pitoisuudet eivät ole tarpeen eivätkä toivottuja. Alan ammattimiehet tulevat huomaamaan, että cisplatin-pitoisuuden ollessa suuri ja veden osuuden ollessa pieni olisi mahdotonta liuottaa kloridi-ioneja luovuttavaa ainetta kuten esim. natriumkloridia riittävä määrä 50 kloridi-ioniekvivalentin 25 saattamiseksi liuokseen yhtä cisplatin-ekvivalenttia kohti. Edelleen, epäorgaanisen kloridisuolan kyllästetty tai lähes kyllästetty liuos ei ole suositeltava, koska tällöin on mahdollista kiteytyminen kylmässä. Yllä esitetty tilanne, 50 ekvivalenttia kloridi-ioneja cisplatin-ekvivalenttia kohti, 30 voitaisiin saavuttaa käyttäen suolahappoa kloridi-ionilähtee-nä, mutta tällöin saataisiin liuos, jonka happamuus olisi toivottua suurempi, toisin sanoen pH toivottua alempi. On havaittu, että ylimäärin happamet liuokset ovat jonkin verran vähemmän stabiileja kuin kohtuullisemmin happamet liuokset.

35 Liuosten pH on edullisesti noin 1,5-4,5. Katsotaan edulliseksi käyttää noin 2-10 ekvivalenttia kloridi-ioneja cisplatin-ekvivalenttia kohti ja edullisimmaksi noin 3-7 ekvivalenttia 1 70670 kloridi-ioneja cisplatin-ekvivalenttia kohti.

Kloridi-ioneja voidaan saattaa liuokseen lisäämällä suolahappoa, myrkytöntä farmaseuttisesti sopivaa metalli-halogenidia kuten natriumkloridia, kaliumkloridia, kalsium-5 kloridia tai magnesiumkloridia, tai myrkyttömän, farmaseuttisesti hyväksyttävän amiinin kuten trietyyliamiinin hydro-kloridisuolaa, tai näiden seoksia. Edullinen kloridi-ioneja muodostava reagenssi on suolahappo, natriumkloridi tai näiden seos.

10 Polyetyleeniglykoleilla ja metoksipolyetyleeni- glykoleilla on yleiset kaavat

H (0CH„CHo) OH ja CH-, (0CHoCHo) OCHQ

z z n J 5 z l n 3 15 vastaavasti, ja niitä on saatavana kaupallisesti CARBOWAX-polyetyleeniglykoleina ja CARBOWAX-metoksipolyetyleeni-glykoleina. Pidetään parhaimpana käyttää CARBOWAX-polyetylee-niglykolien SENTRY-laatuja, jotka täyttävät ravinto- ja lääkeaineille asetetut U.S.P.-, N.F.- ja F.C.C.-laatuvaatimuk-20 set. Joukolle CARBOWAX-polyetyleeniglykoleja ja CARBOWAX- metoksipolyetyleeniglykoleja on annettu tyypilliset molekyy-limassa-alueet taulukoissa 1 ja 2.

Taulukko 1 CARBOWAX Tyypillinen molekyylimassa- 25 Polyetyleeniglykoli alue 200 190 - 210 300 285 - 315 400 380 - 420 600 570 - 630 30 1000 950 - 1050 1540 1300 - 1600 4000 3000 - 3700 6000 7000 - 9000

Taulukko 2 CARBOWAX Tyypillinen molekyylimassa-

Metoksipolyetyleeniglykoli alue 8 70670 350 335 - 365 5 550 525 - 575 750 715 - 785 2000 1815 - 2150

Polyetyleeniglykolien tiedetään muodostavan komplek-10 seja joidenkin epäorgaanisten suolojen kanssa. Siten polyetyleeniglykolien reaktio ammoniumkobolttitiosyanaatin kanssa, jolloin muodostuu sininen kompleksi, on perusta kolori-metriselle menetelmälle polyetyleeniglykolien pitoisuuden määrittämiseksi erilaisissa seoksissa. Uskotaan, että 15 cisplatinin ainutlaatuinen pysyvyys esillä olevan keksinnön mukaisissa liuoksissa voi johtua cisplatinin ja polyetyleeni-glykolin välille muodostuneesta kompleksista, mutta tämä on vain teoria eikä ole keksinnön osa. Osoituksia kompleksin muodostumisesta on havaittu TLC-menetelmässä. Käytettäessä 20 alla kuvattua tekniikkaa muodostaa vesiliuoksessa oleva cisplatin täplän suunnilleen kohtaan Rf 0,65. Käytettäessä cisplatinin liuosta, jossa liuottimena on 90 % polyetyleeni-glykoli 400:aa ja 10 % 1^0 (tai 10 % 0,5-N HC1) saadaan kuitenkin täplä Rf-arvoon 0,3, josta johtaa juovia kohtaan noin 25 Rf 0,65. Laimentaminen huomattavilla vesimäärillä näyttää välittömästi rikkovan kompleksin, koska yllä mainitun PEG-I^O (tai HC1)-liuoksen laimentaminen viidellä tilavuusosalla vettä saa aikaan sen, että cisplatin-täplä on vain kohdassa Rf 0,65.

30 Ohutkerroskromatografia (TLC)

Laitteet ja reaqenssit (a) TLC-levyt - EM Laboratories silica gel 60-levyt, luettelo nro 5763, tai vastaavat.

(b) Eluentti - asetoni/1 N HNO^ (9:1). Valmistetaan päi- 35 vittäin.

(c) Kehite - Liuotetaan 5,6 g stannokloridia 10 mitään väkevää HC1. Lisätään 90 ml tislattua vettä ja 0,2 g 9 70670 KI. Sekoitetaan hyvin. Valmistetaan päivittäin.

(d) Laboratoriolämpökaappi asetettuna 100°C:een.

Menetelmä (a) Näyte laimennetaan viisinkertaisella tilavuudella 5 dimetyyliformamidia (DMF) £Burdick and Jackson, tis lattu lasiastiassa.7.

(b) TLC-levylle viedään 5 mikrolitran näytetäplät ja 5 mikrolitran täplät standardiliuosta, joka sisältää cisplatinia (ja transplatinaa ja platina B:tä mikäli 10 se katsotaan tarpeelliseksi) pitoisuutena, joka on suunnilleen sama kuin analysoitavan näytteen pitoisuuden oletetaan olevan. Kehitetään 10 cm:n korkeuteen TLC-säiliössä, joka on etukäteen tasapainotettu eluen-tilla. Kuivatut levyt kehitetään juurivalmistetulla 15 kehiteliuoksella ja pannaan lämpökaappiin 100°C:een 10 minuutiksi. Havaitaan keltaiset/purppuranpunaiset vyöhykkeet.

(c) Likimääräiset Rf-arvot: 0,65 - cisplatin 20 0,76 - transplatina 0,9 - platina B.

Tämän keksinnön mukaisten liuosten HPLC-kokeet cisplatin-pitoisuuden määrittämiseksi voidaan suorittaa niiden menetelmien mukaisesti, jotka on kuvattu kollegojemme 25 tekemässä julkisessa GB-patenttihakemuksessa nro 2 021 946A. Edullinen liikkuva faasi on etyyliasetaatti/metanoli/dimetyy-liformamidi/tislattu vesi (25/16/5/5). Vertailunäytteenä on edullisesti dimetyyliformamidiin liuotettu cisplatin, pitoisuutena 1 mg/ml. Analysoitavat näytteet laimennetaan dimetyy-30 liformamidilla cisplatinin likimääräiseen pitoisuuteen 1 mg/ml.

Tämän keksinnön mukaiset liuokset voivat haluttaessa sisältää tavanomaisia, fysiologisesti hyväksyttäviä lisäaineita kuten esim. mannitolia, vaikkakaan niiden läsnäolosta ei ole havaittu olevan erityistä etua.

35 Tähän mennessä suoritettujen stabiilisuuskokeiden pe rusteella on tämän keksinnön mukaisten liuosten ennakoitu stabiilisuus (määriteltynä tehon vähenemisenä 10 %:lla) yli 10 70670 kaksi vuotta huoneenlämmössä.

Tämän keksinnön edullisen suoritusmuodon mukaan liuokset ovat steriilejä ja pyrogeenittomia ja ne on pakattu ste-riileihin, pyrogeenittomiin säiliöihin. Tällaiset liuokset 5 voidaan sitten laimentaa esimerkiksi ruiskeisiin tarkoitetulla steriilillä vedellä (Sterile Water for Injection, U.S.P.) tai steriilillä normaalisuolaliuoksella (Sterile Normal Saline Solution U.S.P.) ja antaa lihakseen tai laskimonsisäisesti. Näiden liuosten sterilointikeinot ovat hyvin tunnettuja alal-10 la. Pidetään edullisena liuosten suodattamista steriilin, pyrogeenittoman 0,22 mikronin Millipore-suotimen läpi aseptista tekniikkaa noudattaen steriilissä typpikehässä.

Millipore on Millipore Corporation-yhtymän rekisteröity tavaramerkki membraanisuotimille. Steriili suodos otetaan sterii-15 leihin, pyrogeenittomiin säiliöihin ja sillä täytetään lopuksi, haluttuja määriä käyttäen, sopivat steriilit pyrogeenit-tomat lääkepullot, jotka suljetaan steriileillä, pyrogeenit-tomilla tulpilla, (edullisesti teflon-pinnoitteisilla) ja peitetään alumiinikansin.

20 Käytettäessä väkeviä liuoksia syövän hoitoon ne lai mennetaan haluttuun pitoisuuteen (tyypillisesti 1 mg cisplatinia ml:ssa) esimerkiksi ruiskeisiin tarkoitetulla steriilillä vedellä (U.S.P.), steriilillä normaalisuolaliuoksella (U.S.P.) tai steriilillä glukoosiliuoksella (Sterile 25 Glucose Solution) ja käytetään injektioina lihakseen tai laskimoon, tai intravenöösinä infuusiona, jotka ovat ennestään tunnettuja cisplatin-valmisteiden käyttötapoja alalla. Yleisesti käytetyt annokset, joiden hyväksyttävä myrkyllisyys on 2 lievästä kohtuulliseen, ovat alueella 60-100 mg/M intravenöö- 30 sisti joko kerta-annoksena tai jaettuna 3-5 vuorokauden ajal- 2 le ja ne toistetaan 4 viikon välein. Annos 60 mg/M vastaa karkeasti ottaen annostusta 1,5 mg/kg, joka puolestaan vastaa karkeasti määrää 105 mg potilaalle, joka painaa 70 kg. Joskus käytetään samanaikaisesti hoitoa muilla kemoterapeut-35 tisilla aineilla parhaiden tulosten saavuttamiseksi.

Tässä ja patenttivaatimuksissa käytetyillä sanonnoil- 11 70670 la "ekvivalentteja" kloridi-ionia "ekvivalenttia" kohti cisplatinia tarkoitetaan mooliekvivalentteja. Siten esimerkiksi käytettäessä suositeltavia määriä noin 3-7 ekvivalenttia kloridi-ioneja yhtä cisplatin-ekvivalenttia kohti 5 käytettäisiin noin 3-7 moolia NaCl:ää yhtä cisplatin-moolia kohti mutta noin 1,5-3,5 moolia CaC^Jta cisplatin-moolia kohti, jne.

Platina B on mielivaltaisesti valittu ilmaisu, jota käytetään tässä tarkoitettaessa cisplatinin hapanta reak-10 tiotuotetta, joka on puolet tunnetusta Magnus red-komplek-sista ja jonka rakenteen on oletettu olevan seuraavanlainen : s4n © cfl Cl © 15 \\

Pt Ν^Ν\ι 20 Tätä keksintöä valaistaan seuraavilla esimerkeillä.

Esimerkki 1

Stabiili väkevä cisplatinliuos (10 mq/ml), liuottimena 25 90 % polyetyleeniqlykoli 400 - 10 % 1 N HC1

Cisplatin (500 mg) lietettiin liuokseen, jonka muodostivat 5 ml 1 N HC1 ja 45 polyetyleeniglykoli 400:aa.

Kun oli sekoitettu 2,5 vuorokauden ajan huoneenlämmössä (astian ollessa suojattu valolta alumiinifoliolla), saatiin 30 kirkas keltainen liuos. Liuos jaettiin eriin, jotka pantiin kullanruskeisiin lääkepulloihin, suljettiin teflon-pinnoit-teisilla tulpilla ja tiivistettiin alumiinikansin ja käytettiin varastointistabiilisuuskokeissa eri lämpötiloissa.

Kahden viikon varastoinnin jälkeen 45°C:ssa ohutkerroskro-35 matografia (TLC) osoitti jälkiä transplatinasta ja noin 1 % platina B:tä. Kaksiviikkoisen varastoinnin jälkeen 56°C:ssa TLC osoitti näytteessä olevan < 1 % transplatinaa 12 70670 ja noin 3 % platina B:tä. Näytteet, joita oli varastoitu kaksi viikkoa 56°C:ssa laimennettiin 4-, 9- ja 19-kertai-silla tilavuusmäärillä vettä, jolloin saatiin kirkkaat liuokset, jotka sisälsivät cisplatinia 2, 1 ja 0,5 mg/ml 5 vastaavasti. Heikko samennus muodostui kuhunkin laimennettuun näytteeseen, kun niitä oli pidetty noin 13 tuntia huoneenlämpötilassa.

Esimerkki 2

Stabiili, väkevä cisplatin-lluos (10 mg/ml), liuot-10 timena 90 %, polyetyleeniglykoli 400 - 10 % 0,5 N HC1 5 ml puhdistettua vettä (U.S.P.) ja 5,0 ml IN HC1 sekoitettiin ja liuokseen lisättiin 90,0 ml polyetyleeniglykoli 300:aa. Saatuun liuokseen lisättiin 500 mg cisplatinia, seos suojattiin valolta alumiinifoliolla ja se-15 koitettiin huoneen lämpötilassa 24 tunnin ajan, jolloin saatiin kirkas liuos. Juuri valmistetun liuoksen TLC osoitti ainoastaan cisplatin-vyöhykkeen ja mahdollisesti jälkiä transplatinasta. 2 ml:n erät liuosta pantiin kullanruskeisiin 17 ml:n lääkepulloihin, suljettiin teflon-pinnoittei-20 silla tulpilla, peitettiin alumiinikansilla ja niille tehtiin varastointistabiilisuuskokeet eri lämpötiloissa. Yksi näytepullo jäädytettiin kuivassa jää-asetonihauteessa tunnin ajan, minkä jälkeen sen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Saatiin kirkas liuos, jossa ei ollut jälkiä 25 saostumasta. Kun näytteitä oli varastoitu kolme kuukautta 37°C:ssa ja 45°C:ssa, TLC osoitti näytteissä olevan 1-2 % platina B:tä ja mahdollisia jälkiä transplatinasta. Kun näytteitä oli varastoitu kuukauden ajan 56°C:ssa, osoitti TLC platina B:tä olevan yli 5 % mutta vähemmän kuin 10 % 30 ja jälkiä transplatinasta. Näytteet, joita oli säilytetty 37°C:ssa ja 45°C:ssa kolme kuukautta ja 56°C:ssa kuukausi, laimennettiin nelinkertaisella tilavuusmäärällä puhdistettua vettä (U.S.P.), jolloin saatiin kirkkaat liuokset, jotka sisälsivät cisplatinia 2 mg/ml. Laimennetut liuokset säi-35 lyivät kirkkaina 24 tuntia kestäneen säilytyksen aikana 13 70670 huoneenlämpötilassa.

Esimerkki 3

Stabiili, väkevä cisplatinin (10 mg/ml) ja CaCl2:n (20 mg/ml) liuos, liuottimena 90 % polyetyleeniglykoli 5 400:aa - 10 % 0,5 N HC1 2 g "reagent grade" vedetöntä CaCljia liuotettiin seokseen, jossa oli 5 ml puhdistettua vettä (U.S.P.) ja 5 ml LN HC1. Polyetyleeniglykoli 400:aa (89 ml) lisättiin niin, että tilavuudeksi tuli 100 ml. 50 ml:aan tätä liuos-10 ta lisättiin 550 mg cisplatinia, seos suojattiin valolta alumiinifoliolla ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa 24 tunnin ajan, jolloin saatiin kirkas liuos. Juuri valmistetun liuoksen TLC:ssa oli ainoastaan cisplatin-vyöhyke ja mahdollisesti jälkiä transplatinasta. 2 ml:n erät liuosta 15 pantiin 17 ml:n kullanruskeisiin lääkepulloihin, suljettiin teflon-pinnoitteisin tulpin, peitettiin alumiinikansilla ja niille tehtiin varastointistabiilisuuskokeet eri lämpötiloissa. Yksi näytepullo pantiin kuivaan jää-asetonihau-teeseen 0,5 tunniksi ja näyte jäätyi kirkkaaksi geeliksi.

20 Sen annettiin sitten lämmetä huoneen lämpötilaan ja saatiin kirkas liuos. Kolmikuukautisen varastoinnin jälkeen 37°C:ssa TLC osoitti, että läsnä oli 1-2 % platina B:tä ja mahdollisia jälkiä transplatinasta. Kolmikuukautisen varastoinnin jälkeen 45°C:ssa TLC osoitti läsnä olevan noin 25 5 % platina B:tä ja mahdollisia jälkiä transplatinasta.

Kun oli varastoitu kuukauden ajan 56°C:ssa osoitti TLC, että näytteessä oli 8-10 % platina B:tä ja jälkiä transplatinasta. Näytteet, joita oli säilytetty 37°C:ssa ja 45°C:ssa kolme kuukautta ja 56°C:ssa kuukausi, laimennet-30 tiin nelinkertaisella tilavuusmäärällä puhdistettua vettä (U.S.P.), jolloin saatiin kirkkaat liuokset, jotka sisälsivät cisplatinia 2 mg/ml. Laimennetut liuokset säilyivät kirkkaina 24 tuntia kestäneen säilytyksen aikana huoneen lämpötilassa.

14 70670

Esimerkki 4

Stabiili, väkevä cisplatinin (noin 22 mg/ml) ja CaC^in (25 mg/ml) liuos, liuottimena 90 % polyetyleeni- glykolia - 10 % 0,5 N HC1 5 3 ml:aan liuosta, jossa oli 90 % polyetyleenigly- koli 400:aa ja 10 % 0,5 N HC1 lisättiin 45 mg cisplatinia ja seosta sekoitettiin noin tunnin ajan huoneen lämpötilassa, jolloin saatiin kirkas liuos. Lisättiin vielä 30 mg cisplatinia (kaikkiaan 25 mg/ml) ja seosta sekoitet-10 tiin noin 45°C:ssa tunnin ajan ja sitten huoneen lämmössä 18 tuntia, jolloin tapahtui melkein täydellinen liukeneminen. Vähäinen määrä liukenematonta ainesta poistettiin suodattamalla. Suodoksen TLC:ssa oli ainoastaan cisplatin-vyöhyke ja mahdollisesti jälkiä transplatinasta. Jäljelle 15 jäänyt suodos pantiin 17 ml:n lääkepulloon, suljettiin teflon-pinnoitteisella tulpalla, peitettiin alumiinikannella ja pidettiin 45°C:ssa kolme kuukautta. Kun näytettä oli pidetty kolme kuukautta 45°C:ssa osoitti TLC, että näytteessä oli 1-2 % platina B:tä eikä lainkaan transplatinaa.

20 Laimennettaessa säilytetty liuos puhdistetulla vedellä (U.S.P.) cisplatin-pitoisuuteen 2mg/ml saatiin kirkas liuos, joka säilyi kirkkaana oltuaan huoneenlämpötilassa 24 tuntia.

Esimerkki 5 25 Stabiili, väkevä cisplatinin (12 mg/ml) ja NaCl:n (10 mg/ml) liuos liuottimena 90 % polyetyleeniglykoli 400:aa ja 10 % 0,5 N HCl

Natriumkloridi (100 mg) liuotettiin liuokseen, jossa oli 5 ml puhdistettua vettä (U.S.P.) ja 5 ml 1 N HCl.

30 Tähän liuokseen lisättiin 90 ml polyetyleeniglykoli 400:aa ja seosta sekoitettiin 15 minuuttia. 50 ml:aan näin saatua liuosta lisättiin 500 mg cisplatinia ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa pimeässä 3 vuorokautta, jolloin saatiin kirkas liuos. Juuri valmistetun liuoksen 35 TLC:ssa oli ainoastaan cisplatin-täplä. Juuri valmistetulle 70670 liuokselle suoritettu tehokkaasti erottava nestekromatog-rafia (high performance liguid chromatography, HPLC)-koe osoitti sen sisältävän 12 mg cisplatinia millilitrassa. Näyte-erät suljettiin 17 ml:n kullanruskeisiin pulloihin 5 kuten esimerkissä 3 on kuvattu ja niille tehtiin varastoin-tistabiilisuuskokeet eri lämpötiloissa. Kun näytettä oli säilytetty kolme kuukautta 37°C:ssa, osoitti TLC että siinä oli platina B:tä alle 1 % eikä lainkaan transplatinaa. Kun näytettä oli säilytetty kuukauden ajan 56°C:ssa, TLC 10 osoitti että siinä oli 1-2 % platina B:tä eikä lainkaan transplatinaa. Laimennettaessa varastoidut näytteet puhdistetulla vedellä (U.S.P:) cisplatinin-pitoisuuteen 2 mg/ml saatiin kirkkaat liuokset, jotka säilyivät kirkkaina oltuaan huoneenlämpötilassa 24 tuntia.

15 3 kuukautta 45°C:ssa, 6 kuukautta 37°C:ssa ja 8 kuukautta huoneenlämpötilassa varastoiduille näytteille suoritetut HPLC-kokeet osoittivat vastaaviksi tehohäviöiksi 6,6 %, 6,1 % ja 2,3 %.

Esimerkki 6 20 Stabiili, väkevä cisplatinin (11,4 mg/ml) ja NaCl:n liuos, liuottimena 90 % polyetyleeniglykoli 400:aa -_ 10 % vettä

Liuokseen, jossa oli 50 mg NaCl, 5 ml puhdistettua vettä (U.S.P.) ja 45 ml polyetyleeniglykoli 400:aa lisät-25 tiin 500 mg cisplatinia ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa pimeässä 6 tuntia, jolloin saatiin kirkas liuos. Juuri valmistetun liuoksen TLC:ssa oli ainaostaan cisplatin-täplä; HPLC osoitti sen sisältävän 11,4 mg cisplatinia ml:ssa. Näyte-erät suljettiin 17 ml:n kullan-30 ruskeisiin pulloihin kuten on kuvattu esimerkissä 3 ja niille tehtiin varastointistabiilisuuskokeet eri lämpötiloissa.

-Kun näytteitä oli säilytetty 37°C:ssa ja 45°C:ssa 3 kuukautta, TLC osoitti, että niissä oli 1 % platina B:tä eikä lainkaan transplatinaa. Kun näytettä oli säilytetty 56°C:ssa 35 yksi kuukausi, osoitti TLC että siinä oli 2-3 % platina B:tä 1« 70670 eikä lainkaan transplatinaa. Laimennettaessa varastoidut näytteet puhdistetulla vedellä (U.S.P.) cisplatin-pitoi-suuteen 2 mg/ml saatiin kirkkaat liuokset, jotka säilyivät kirkkaina oltuaan huoneenlämpötilassa 24 tuntia.

5 3 kuukautta 45°C:ssa, 6 kuukautta 37°C:ssa ja 7 kuu kautta huoneenlämpötilassa säilytettyjen näytteiden HPLC-kokeet osoittivat vastaaviksi tehohäviöiksi 6,1 %, 7,0 % ja 0,9 %.

Esimerkki 7 10 Stabiili, väkevä cisplatin-liuos (10 mg/ml) liuotti mena 90 % polyetyleeniglykoli 600:aa - 10 % 0,5N HC1 Liuokseen, jossa oli 2,5 ml puhdistettua vettä (U.S.P), 2,5 ml IN HC1 ja 45 ml polyetyleeniglykoli 600:aa, lisättiin 500 mg cisplatinia ja seosta sekoitettiin huoneen 15 lämpötilassa pimeässä 5 tuntia, jolloin saatiin kirkas liuos. Juuri valmistetun liuoksen TLCrssa oli ainoastaan cisplatin-täplä. Näytteet juuri valmistetusta liuoksesta laimennettiin 1-, 2-, 3-, 4-, 5- ja 9-kertaisilla tilavuus-määrillä puhdistettua vettä (U.S.P); näissä laimennetuissa 20 liuoksissa ei ilmennyt merkkejä kiteytymisestä kun niitä oli säilytetty 16 tuntia huoneenlämpötilassa tai 4°C:ssa. Näyte-erät juuri valmistetusta liuoksesta suljettiin 17 ml:n kullanruskeisiin lääkepulloihin kuten on esitetty esimerkissä 3 ja niille tehtiin varastointistabiilisuuskokeet eri 25 lämpötiloissa. Kun näytteitä oli säilytetty 37°C:ssa ja 45°C:ssa kolme kuukautta, osoitti TLC että niissä oli 1 % platina B:tä eikä lainkaan transplatinaa. Kuukauden pituisen varastoinnin jälkeen 56°C:ssa osoitti TLC platina B:tä olevan 3,4 % eikä lainkaan transplatinaa. Laimennettaessa 30 varastoidut näytteet puhdistetulla vedellä (U.S.P) cisplatin-pitoisuuteen 2 mg/ml saatiin kirkkaat liuokset, jotka säiluivät kirkkaina oltuaan huoneenlämpötilassa 24 tuntia.

17 70670

Esimerkki 8

Stabiili/ väkevä cisplatinin (10 mg/ml) ja NaCltn (10 mg/ml) liuos liuottimena 90 % polyetyleeniglykoli 400:aa - 10 % 0,2 N HC1 5 Liuokseen, jossa oli 0,5 g NaCl, 4 ml puhdistettua vettä (U.S.P.), 1 ml 1 N HC1 ja 45 ml polyetyleeniglykoli 400:aa, lisättiin 250 mg cisplatinia ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa pimeässä 4 tuntia, jolloin saatiin kirkas keltainen liuos. Juuri valmistetun liuoksen TLC:ssa 10 oli ainoastaan cisplatin-täplä. Laimennettaessa juuri valmistettu liuos 1-, 2-, 3-, 4-, 5- ja 9-kertaisilla tilavuusmäärillä puhdistettua vettä saatiin kirkkaat liuokset, jotka säiluivät kirkkaina oltuaan huoneenlämpötilassa 24 tuntia. 1-, 2-, 3-, 4- ja 5-kertaisissa laimennoksissa 15 ei ilmennyt kiteytymistä, kun niitä pidettiin 4°C:ssa 24 tuntia. Näyte-erät juuri valmistetusta liuoksesta suljettiin 17 ml:n kullanruskeisiin lääkepulloihin kuten on kuvattu esimerkissä 3 ja niille tehtiin varastointistabiili-suuskokeet eri lämpötiloissa. Kolmikuukautisen varastoinnin 20 jälkeen 37°C:ssa TLC osoitti, että näytteessä oli 1 % platina B:tä ja mahdollisesti jälkiä transplatinasta. Kolmikuukautisen varastoinnin jälkeen 45°C:ssa TLC osoitti, että näytteessä oli 5 % platina B:tä ja mahdollisesti jälkiä transplatinasta. Kuukauden ajan 56°C:ssa säilytetyn 25 näytteen TLC osoitti, että läsnä oli 2-3 % platina B:tä eikä lainkaan transplatinaa. Laimennettaessa varastoidut näytteet puhdistetulla vedellä (U.S.P.) cisplatin-pitoisuu-teen 2 mg/ml saatiin kirkkaat liuokset, jotka säilyivät kirkkaina oltuaan huoneenlämpötilassa 24 tuntia.

30 Esimerkki 9

Stabiili, väkevä cisplatin (2,5 mg/ml), NaCl:n (9 mg/ml) ja mannltolin (12,5 mg/ml) liuos, liuottimena happameksi tehty polyetyleeniglykoli 6000:n 31-prosenttinen (paino/tilavuus) vesiliuos 35 Natriumkloridia (0,9 g), mannitolia (1,25 g) ja polyetyleeniglykoli 6000:a (31,3 g) liuotettiin sellaiseen 18 70670 määrään puhdistettua vettä (U.S.P:) että saatiin 100 ml liuosta ja liuos tehtiin sitten happameksi pH-arvoon 2,2 1 N suolahapolla (0,7 ml). Lisättiin cisplatin (255 mg) ja seosta sekoitettiin pimeässä 3 vuorokautta huoneen 5 lämpötilassa, jolloin saatiin kirkas liuos. Juuri valmistetun liuoksen TLC:ssa oli ainoastaan cisplatin-vyöhyke. Näyte-erät juuri valmistetusta liuoksesta suljettiin 17 ml:n kullanruskeisiin lääkepulloihin kuten on kuvattu esimerkissä 3 ja niille tehtiin varastointistabiilisuuskokeet 10 45°C:ssa ja 56°C:ssa. Kun näytteitä oli varastoitu kaksi kuukautta 45°C:ssa ja 56°C:ssa, osoitti TLC että niissä oli platina B:tä alle 1 % eikä lainkaan transplatinaa. Laimennettaessa varastoidut näytteet yhtä suurilla tilavuus-määrillä puhdistettua vettä (U.S.P.) saatiin kirkkaat 15 liuokset jotka säilyivät kirkkaina oltuaan 24 tuntia huoneenlämpötilassa .

Esimerkki 10

Stabiili, väkevä cisplatinln (15,8 mg/ml) ja NaCl:n (10 mg/ml) liuos, liuottimena polyetyleeniglykoli 400:n 20 90-prosenttinen vesiliuos

Polyetyleeniglykoli 400 (90 ml) liuotettiin liuokseen, jossa oli 1,0 g NaCl:a 10 ml:ssa puhdistettua vettä (U.S.P.). 60 ml:aan saatua liuosta lisättiin 900 mg cispla-tinia, ja seosta sekoitettiin pimeässä 5 tuntia huoneen-25 lämpötilassa, jolloin saatiin kirkas liuos. Juuri valmistetun liuoksen TLCsssa oli ainoastaan cisplatin-vyöhyke? HPLC-koe osoitti sen sisältävän 15,8 mg cisplatinia ml:ssa. Laimennettaessa juuri valmistettu liuos nelinkertaisella tilavuusmäärällä puhdistettua vettä(U.S.P.) saatiin kirkas 30 liuos, joka säilyi kirkkaana oltuaan huoneenlämpötilassa 24 tuntia. Näyte-erät juuri valmistetusta liuoksesta suljettiin 17 ml:n kullanruskeisiin näytepulloihin kuten on kuvattu esimerkissä 3 ja niille tehtiin varastointistabiilisuuskokeet eri lämpötiloissa. Kun näytettä oli varastoitu 35 kaksi kuukautta 45°C:ssa osoitti TLC 1,5 % platina B:tä 19 70670 eikä lainkaan transplatinaa. Kuukauden kestäneen varastoinnin jälkeen 56°C:ssa TLC psoitti 2 % platina B:tä eikä lainkaan transplatinaa. 56°C:ssa varastoitu näyte laimennettiin pitoisuuteen 2 mg/ml steriilillä ruiskeisiin tarkoi-5 tetulla vedellä ja 45°C:ssa varastoitu näyte laimennettiin cisplatin-pitoisuuksiin 2,5 ja 5,0 mg/ml steriilillä ruiskeisiin tarkoitetulla vedellä. Ne molemmat muodostivat kirkkaat liuokset, jotka säilyivät kirkkaina oltuaan huoneenlämpötilassa 24 tuntia.

10 HPLC-kokeet näytteistä, joita oli varastoitu 3 kuu kautta 45°C:ssa, 6 kuukautta 37°C:ssa ja 8 kuukautta huoneenlämpötilassa osoittivat vastaaviksi tehohäviöiksi 7,6 %, 7,6 % ja 0 %.

Esimerkki 11 15 Stabiili, väkevä cisplatinin (15 mg/ml) ja CaC^sn (25 mg/ml) liuos, liuottimena polyetyleeniglykoli 400:n 90-prosenttinen vesiliuos

Liuokseen, jossa oli 2,5 g CaC^sa 10 ml:ssa puhdistettua vettä (U.S.P.), lisättiin 90 ml polyetyleeniglykoli 20 400:aa ja saatua liuosta sekoitettiin 10 minuuttia. 50 ml:aan yllä mainittua liuosta lisättiin 750 mg cisplatinia ja seosta sekoitettiin pimeässä 5 tuntia huoneenlämpötilassa, jolloin saatiin kirkas liuos. Juuri valmistetun liuoksen TLC:ssa oli ainoastaan cisplatin-vyöhyke. Laimennettaessa 25 juuri valmistettu liuos 1-, 2-, 5- ja 10-kertaisilla tila-vuusmäärillä puhdistettua vettä (U.S.P.) saatiin kirkkaat liuokset. Näyte-erät juuri valmistetusta liuoksesta suljettiin 17 ml:n kullanruskeisiin lääkepulloihin kuten on kuvattu esimerkissä 3 ja niille tehtiin varastointistabiili-30 suuskokeet 45°C:ssa ja 56°C:ssa. Kaksi kuukautta kestäneen varastoinnin jälkeen 45°C:ssa TLC osoitti 1,5 % platina B:tä eikä lainkaan transplatinaa. Kuukauden pituisen varastoinnin jälkeen 56°C:ssa TLC osoitti 2,5-5 % platina B:tä eikä lainkaan transplatinaa. 56°C:ssa varastoitu näyte 20 7 0 6 7 0 laimennettiin pitoisuuteen 2 mg/ml ja 45°C:ssa varastoitu näyte laimennettiin cisplatin-pitoisuuksiin 2,5 ja 5,0 mg/ml steriilillä, ruiskeisiin tarkoitetulla vedellä.

Ne muodostivat kirkkaat liuokset, jotka säilyivät kirk-5 kaina oltuaan huoneen lämpötilassa 24 tuntia.

Esimerkki 12

Steriili, stabiili, väkevä cisplatin-liuos liuottimena 90 % polyetyleeniglykoli 400:aa - 10 % 0,5 N HC1 (etikettimerkintä on 15 mg/ml tehokasta cisplatinia).

10 Huomautus: Cisplatin on mahdollinen karsinogeeni.

Koko menetelmän suorittamisen ajan täytyy käyttää suoja-vaatetusta, - käsineitä, -naamaria, -silmälaseja ja -päähinettä. Kaikki työskentelyalueet ja laitteet täytyy puhdistaa huolellisesti, jotta vältytään saasteelta myö-15 hemmin.

Resepti 1 ml:ssa liuosta 10,0 mlrssa liuosta Cisplatin 0,015 g ^ 0,150 g

Natriumkloridi 0,015 g 0,150 g 20 0,5 N suolahappo^ 0,10 ml 1,0 ml

Polyetyleeniglykoli 400 (SENTRY grade) q.s. 1,0 mlsksi q.s. 10,9 ml:ksi ^ Tämä cisplatin-määrä vastaa tehokkuutta 1000 ^ug/mg. Tarvittavan cisplatin-määrän laskemiseksi käytetään 25 seuraavaa kaavaa: 1000 x 0,015 g_ _ tarvittava cisplatin-määrä, g

Cisplatin teho, ^,ug/mg (2)

Litra 0,5 N suolahappoa valmistetaan seuraavasti: 30 1. Pannaan 957,25 ml steriiliä, ruiskeisiin tarkoitettua vettä (U.S.P.) puhtaaseen 1 litran erlen-meyer-pulloon.

2. Sekoittaen tehokkaasti lisätään hitaasti ja varovasti 42,75 ml väkevää suolahappoa. Sekoitetaan 10 minuuttia. Suljetaan pullo puhtaalla butyylikumitulpalla.

21 70670

Työskentelyohjeet valmistettaessa 1 litra steriiliä liuosta 1. Pannaan 100 ml 0,5 N suolahappoa puhtaaseen, kalibroituun Erlenmeyer - pulloon, jossa on sopiva sekoitin 5 kuten esimerkiksi 6 cm:n teflon-pinnoitteinen magneetti-sekoitin.

2. Lisätään tasaisesti sekoittaen 15,0 g natrium-kloridia. Sekoitetaan kunnes suola on täysin liuennut.

3. Lisätään nopeasti sekoittaen 750 ml polyetyleeni-10 glykoli 400:aa (SENTRY grade) ja sekoitetaan 5 minuutin ajan.

4. Poistetaan magneettisekoitin ja valutetaan siitä nesteylimäärä takaisin pulloon.

5. Lisätään varovasti 15,0 g aktiivista cisplatinia.

15 6. Lisätään polyetyleeniglykoli 400:aa (SENTRY grade) 1 litran merkkiin saakka (kaikkiaan tarvitaan 880 ml polyetyleeniglykoli 400:aa).

7. Pannaan teflonsekoitin takaisin seokseen ja suljetaan pullo puhtaalla butyylikumitulpalla.

20 8. Kääritään pullo alumiinifolioon sen suojaamiseksi tarkoin valolta.

9. Sekoitetaan tehokkaasti 24-48 tunnin ajan tavallisessa huoneenlämpötilassa. Pitäisi muodostua kirkas liuos. Jos 48 tunnin kuluessa ei muodostu kirkasta liuosta, voidaan 25 seosta lämmittää 37-40°C:ssa 2-6 tuntia valolta ja ilmalta suojattuna, jolloin jäljellä oleva cisplatin liukenee nopeasti. Jäähdytetään 23-27°C:een.

10. Käyttäen aseptista tekniikkaa suodatetaan tumman keltainen liuos täysin steriilissä typpikehässä sopivan, 30 steriilin pyrogeenittoman 0,22 mikronin Millipore-suotimen läpi. Otetaan steriili suodos steriiliin, pyrogeenittomaan Erlerftieyer-pulloon. Suljetaan pullo steriilillä, pyrogee-nittomalla butyylikumitulpalla. Liuosta voidaan säilyttää pimeässä.

35 11. Steriilit, pyrogeenittomat kullanruskeat lääke- 22 70670 pullot täytetään halutuilla määrillä steriiliä liuosta. Lääkepullot suljetaan steriileillä, pyrogeenittomilla teflon-tulpilla. Tiivistetään steriileillä alumiinikansilla.

12. Lääkepullot tulisi varustaa seuraavalla varoi-5 tusetiketillä:

Ei käytettäväksi suoraan intramuskulaaristi tai intravenöösisti x x PEG-400-liuos voidaan laimentaa 14 osalla steriiliä vettä ruiskeita varten (Sterile Water for 10 Injection, U.S.P.) tai steriiliä normaalisuolaliuosta (Sterile Normal Saline Solution, U.S.P.), jolloin saadaan pitoisuudeltaan 1 mg/ml cisplatin-liuos.

Jos halutaan suurempia pitoisuuksia, voidaan käyttää vastaavasti pienempiä steriili vesi- tai suolaliuos-15 määriä. Laimennettuja liuoksia voidaan käyttää intravenöösisti ja ne ovat stabiileja tavanomaisessa huoneenlämpötilassa (22-26°C) vähintäin 48 tuntia. Laimennettuja liuoksia ei pidä jäähdyttää jääkaappi-lämpötilaan, koska tällöin voi muodostua kiteitä.

20 13. Lääkepullot säilytetään pimeässä.

Esimerkki 13

Stabiili, väkevä cisplatinln (2,5 mg/ml), NaCl:n (9 mg/ml) CaCl?:n (15 mg/ml) ja mannltolin (10 mg/ml) liuos, liuottimena happameksl tehty polyetyleeniglykoli 400;n 25 31-prosenttinen vesiliuos

Natriumkloridia (0,9 g), CaC^ (1,5 g) ja mannitolia (1,0 g) liuotettiin seokseen, jossa oli 31,25 ml polyetyleeniglykoli 400:aa ja 40 ml puhdistettua vettä (U.S.P.). Liuos tehtiin happameksi pH-arvoon 2,2 1 N HCltlla (0,4 ml), 30 lisättiin 255 mg cisplatinia, tilavuus saatettiin 100 ml:ksi lisäämällä puhdistettua vettä (U.S.P.) ja seosta sekoitettiin pimeässä 5 tuntia huoneenlämpötilassa, jolloin saatiin kirkas liuos. Juuri valmistetun liuoksen TLC:ssa oli ainoastaan cisplatin-vyöhyke.

23 70670

Esimerkki 14

Toistetaan esimerkin 5 mukainen yleinen menetelmä paitsi että siinä käytetty natriumkloridi korvataan ekvivalentilla määrällä magnesiumkloridia, jolloin saadaan 5 stabiili, väkevä cisplatin-liuos.

Esimerkki 15

Toistetaan esimerkin 5 mukainen yleinen menetelmä paitsi että siinä käytetty natriumkloridi korvataan ekvivalentilla määrällä trietyyliamiinihydrokloridia, jolloin 10 saadaan stabiili, väkevä cisplatin-liuos.

Esimerkki 16

Toistetaan esimerkin 5 mukainen yleinen menetelmä paitsi että siinä käytetty polyetyleeniglykoli 400 korvataan ekvivalenteilla tilavuuksilla polyetyleeniglykoleja 200 ja 15 300, vastaavasti, jolloin saadaan stabiilit, väkevät cisplatin-liuokset.

Esimerkki 17

Toistetaan esimerkin 9 mukainen yleinen menetelmä paitsi että siinä käytetty polyetyleeniglykoli 6000 korva-20 taan ekvivalenteilla painomäärillä polyetyleeniglykoleja 1000 ja 4000, vastaavasti, jolloin saadaan stabiilit, väkevät cisplatin-liuokset.

Claims (2)

24 70670

1. Menetelmä stabiilin, väkevän cisplatin-liuoksen valmistamiseksi liuottimeen, tunnettu siitä, että 5 liuottimeen liuotetaan cisplatinia 2,5-22 mg/ml, edullisesti 10-15 mg/ml, jolloin liuotin sisältää 31-90 % polyetyleeni-glykolia, jonka keskimääräinen molekyylipaino on noin 150-9000, tai metoksipolyetyleeniglykolia, jonka keskimääräinen molekyylipaino on noin 300-6000, tai näiden seosta, ja 69-10 10 % vettä sekä ainakin yhtä myrkytöntä, farmaseuttisesti hyväksyttävää kloridi-ioneja luovuttavaa ainetta määrän, joka on vähintään noin ekvivalenttinen liuoksessa olevan cisplatin-määrän kanssa.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n -15 n e t t u siitä, että liuottimeen liuotetaan cisplatinia 10-15 mg/ml ja NaClsää 10-15 mg/ml, jolloin liuotin sisältää 90 % polyetyleeniglykolia, jonka keskimääräinen molekyyli-paino on noin 350-450, ja 10 % vettä.