FI67865B - Foerfarande foer framstaellning av en komposition av sulfatgrupper innehaollande polysackarider - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av en komposition av sulfatgrupper innehaollande polysackarider Download PDFInfo
- Publication number
- FI67865B FI67865B FI811469A FI811469A FI67865B FI 67865 B FI67865 B FI 67865B FI 811469 A FI811469 A FI 811469A FI 811469 A FI811469 A FI 811469A FI 67865 B FI67865 B FI 67865B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- heparin
- solution
- methanol
- aqueous
- precipitate
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Obesity (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
67865
Menetelmä sulfaattiryhmiä sisältävien polysakkaridien seoksen valmistamiseksi
Kyseessä olevan keksinnön kohteena on menetelmä uusien sul-faattiryhmiä sisältävien polysakkaridien seoksen valmistamiseksi, joiden keskimääräinen molekyylipaino on alhaisempi kuin hepariinin ja joita voidaan käyttää antikoaguloivina ja antitromboottisina aineina tromboosien ehkäisyssä ja hoidossa sekä hypolipeemisinä aineina.
Hepariini on eläinkunnasta peräisin olevien sulfaattiryhmiä sisältävien mukopolysakkaridien seos, jota käytetään paljon sen antikoaguloivien ja antitromboottisten ominaisuuksien ansiosta, erityisesti ehkäisemään leikkauksen jälkeisiä laskimotrombeja, ja sen hypolipeemisten ominaisuuksien ansiosta. Tiedetään, että se vaikuttaa koaguloitumisproses-sissa aktivoivasti veressä olevaan luonnolliseen koaguloitu-mista ehkäisevään aineeseen, antitrombiini III:een. Tämän proteiinin aktivoiminen vaikuttaa kahden proteaasin, yhtäältä X-aktivoidun tekijän (tekijä Xa) ja toisaalta trombiinin, vaikutusta ehkäisevästi.
Hepariinin antikoaguloimisvaikutus in vitro mitataan tavallisesti farmakopeoiden virallisten menetelmien mukaan, erityisesti amerikkalaisen, englantilaisen tai ranskalaisen farmakopean mukaan vertaamalla kansainväliseen vertailukohteeseen. Mutta nykyään on mahdollista mitata sen ominaisvaikutuksia in vitro, yhtäältä tekijän Xa suhteen ja toisaalta trombiinin suhteen (vrt. esimerkiksi A. Teien et ai., Thrombosis Research, 11, 107, 1977).
Kaupasta saatavat hepariinit ovat polysakkaridien seoksia, joiden keskimääräinen molekyylipaino on yli 10 000 67865 daltonia ja molekyylipainojen hajauraa on suunnilleen 4000 - 45 000 daltonia, ja niillä on seuraavat in vitro vaikutukset: - Antikoaguloiva vaikutus mitattuna ranskalaisen farmakopean mukaan, kahdeksas painos, hepariinin erikoistutkimus, verraten kolmanteen kansainväliseen vertailumal-liin (eli antikoaguloiva vaikutus codex): 140-200 k.y./mg.
- Anti-Xa-vaikutus mitattuna edellä mainitun Teien et ai. menetelmän mukaan, verraten kolmanteen kansainväliseen vertailumalliin: 160-180 k.y./mg.
- A.P.T.T.-vaikutus (Actived Partial Thromboplastin Time) mitattuna Teien et ai. aikaisemmin siteeratulla menetelmällä, ja verraten kolmanteen kansainväliseen vertailumalliin: 150-170 k.y./mg.
Hepariinia annetaan lääkkeeksi ehdottomasti parenteraali-sesti (käytännössä subkutaanisesti) ja sen vaikutusaika on suhteellisen lyhyt, mistä johtuvat sen kaksi pääasiallista varjopuolta: sitä on annettava kolme kertaa päivässä ja post-operatiivisia verenvuotoja sattuu suhteellisen useasti.
Tiedetään (vrt. Johnson et ai., Thrombos. Haemostas. Stuttg., 1976, 35, 586-591; Lane et ai., Thrombosis Research 16, 651-662, Pergamon Press Ltd., 1979; Lasker, Chiu, Annals. N.Y. Acad. Sei., 222, 1973, 971-977;
Lasker, Adv. Exp. Med. Biol. 52, 1975, 119-130), että voidaan saada fraktiomalla hepariinia, esimerkiksi suodattamalla Sephadex geelin päältä fraktioita, joiden keskimääräinen molekyylipaino on pienempi kuin hepariinin ja molekyylipainojen hajauma on pienempi kuin hepariinilla. Kuten in vitro ja in vivo suoritetut kokeet osoittavat, ovat tällaiset fraktiot yhtäältä suhteellisesti tehokkaampia X-aktivoidun tekijän suhteen 67865 kuin trombiinin suhteen (eli niillä on suhde anti-Xa-vaikutus .. , . . , . ,.
antitr5Sbriii^iIk5tS5 selvästi suurempi kuin 1) 3a toisaalta ne absorboituvat verenkiertoon helpommin sub-kutaanisesti ruiskutettaessa kuin itse hepariini, josta johtuu voimakkaampi plasmavaikutus ja pitempi vaikutuksen kesto kuin hepariinilla.
Samoin tiedetään (vrt. edellä siteerattu Lasker ja Chiu; US-patentti 3 766 167; Periin et ai., Carbohydrate Research, 18, 1971, 185-194), että on mahdollista valmistaa hepariinia entsymaattisesti hydrolysoimalla depoly-meroituja aineita, joiden keskimääräinen molekyylipaino on alhainen (käytännössä 5300-4500 daltonia, määrättynä ultrasentrifugoimalla) ja joiden antikoaguloimisvaiku-tus, mitattuna U.S.P. n:o XVII menetelmällä, on noin 70 k.y./mg. Näitä depolymeroituneita aineita voidaan fraktioida suodattamalla Sephadex geelin päältä fraktioihin, joiden keskimääräiset molekyylipainot ultrasentri-fugoimalla määrättynä, ovat 3200-5900 daltonia, ja anti-koaguloitumisvaikutukset 45-95 k.y./mg (U.S.P. menetelmä). Nämä depolymeroituneet aineet ja niistä saadut fraktiot ovat tehokkaita oraalisesti annettuina yhtä hyvin kuin parenteraalisesti annettuina.
Tunnetaan myös (vrt. Lasker, jota edellä siteerattu), että voidaan valmistaa depolymeroimalla hepariinia askor-biinihapon ja vetysuperoksidin avulla alhaisen keskimääräisen molekyylipainon cmaävia aineita. Askorbiinihapon ja vetysuperoksidin avulla depolymeroimalla saadaan alkoholilla fraktioimisen jälkeen fraktioita joiden keskimääräinen molekyylipaino on 4000-7100 daltonia ja anti-koaguloiva vaikutus 12-100 k.y./mg (U.S.P. menetelmä).
Lopuksi on vielä tunnettua (vrt. brittiläistä patenttihakemusta 2 002 406 A) valmistaa uudelleen sulfatoimalla hepariinin depolymeroimistuotteita, joilla ei ole anti-koaguloimisvaikutusta, oligosakkarideja, joiden keski- 67865 määräinen molekyylipaino Somoqyn menetelmän avulla määrättynä on 2600-5500 daltonia, ominaiskiertokyky mitattuna vesi-liuoksessa 20°C:ssa on +40° - +50°, ja antikoaguloiva vaikutus alle 50 k.y./mg (U.S.P.-menetelmä) , jotka olisivat tehokkaita yhtä hyvin oraalisesti annettuina kuin parenteraa-lisesti annettuina tromboosin ehkäisyssä.
Keksintö koskee menetelmää sulfaattiryhmiä sisältävien polysakkaridien seoksen valmistamiseksi, joilla polysakkarideilla on hepariinin aineosina olevien polysakkaridien yleinen rakenne ja joilla on natriumsuolan muodossa seuraavat tyypilliset fysikaaliset ominaisuudet: - rikkipitoisuus prosenteissa: 9-13,5 % - typpipitoisuus prosenteissa: 1,8-2,5 % - uronihappopitoisuus prosenteissa: 20-30 % - keskimääräinen molekyylipaino: 2000 - 10 000 daltonia - ominaiskiertokyky vesiliukoisessa 20°C:ssa: : +25° - +55°, joiden seosten aineosina olevat polysakkaridit vastaavat erityisesti seuraavaa kaavaa: R CH2~R1
)r~o _ . /I O
/oh. h - o 1-G-O-U-i 0— 'H \) H, OH (I) w 1 J- Tr 1 I il HR' K NH-R2 jossa R merkitsee vetyatomia tai karboksyyliryhmää, hapon muodossa tai suolan muodossa, R' merkitsee OH-ryhmää tai sulfaattiryhmää, hapon muodossa tai suolan muodossa, R^ merkitsee OH-ryhmää tai sulfaattiryhmää, hapon muodossa tai suolan muodossa, R2 merkitsee sulfonaattiryhmää, hapon muodossa tai suolan muodossa, tai asetyyliryhmää, -0- merkitsee happisiltaa, ketjun renkaat G merkitsevät glukoosi-amiinien tyypillisiä ketjun renkaita, joita esiintyy hepariinin rakenteessa, renkaat U merkitsevät uronihapon tyyppisiä ketjun renkaita (D-glukuronihappo, 1,-iduronihappo, sulfatoitu L-idu-ronihappo), joita on hepariinin rakenteessa, ja n on kokonaisluku 3-20, ja polysakkaridien happamat ryhmät ovat vapaassa muodossa tai suolan muodossa.
S 67865
Keksinnön mukainen menetelmä on tunnettu siitä, että hepariiniesteri, joka on saatu hepariinin karboksyylihappo-ryhmien osittaisella tai täydellisellä esteröimisellä saatetaan reagoimaan reaktio-olosuhteissa liukoisen epäorgaanisen tai orgaanisen emäksen kanssa 20-80°C:n lämpötilassa joko vesiväliaineessa, jos esteri on liukoinen veteen, ja eristetään täten saatu depolymerointituote, tai esteriin nähden inertissä liuottimessa ja eristetään täten saatu depolymerointituote alkalisuolana, joka sitten hydrolysoidaan natrium-hydroksidin vähintään IN vesiliuoksella 0-5°C:n lämpötilassa.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä emäksen konsentraatio vesiväliaineessa on 0,1-0,6, emäksenä käytetään alkalihydrok-sidia, alkalikarbonaattia, trietyyliamiinia, trietyleenidi-amiinia, kinuklidiniinia, diatsa-1,5-bisyklo/4.3.0/noneenia-5 tai diatsa-1 , 5-bisyklo/^5.4 .£/undekeenia-5 .
Rikki- typpipitoisuudet ja kiertokyky, jotka on ilmoitettu edellä, on määrätty ranskalaisen farmakopean menetelmien mukaan, kahdeksas painos, hepariinin erikoistutkimus.
Uronihappojen pitoisuus on määrätty N. Blumenkrantzin et ai. menetelmän mukaan (Analytical Biochemistry, 54, 484, 1973). Keskimääräinen molekyylipaino on määrätty kromatografisesti geeli-geeli-permeanssin avulla polyakryyliamidi-agaroosissa vertailumallien perusteella, jotka ovat tunnetun keskimääräisen molekyylipainon omaavia hepariineja Anderssonin et ai. menetelmän avulla (Thrombosis Research, 9575, 1 976).
Keksinnön mukaisten polysakkaridien seosten valmistuksessa lähtöaineena käytetyt hepariinin esterit voivat olla ei-se-lektiivisiä tai selektiivisiä estereitä. Ei-selektiivisillä estereillä tarkoitetaan kyseessä olevan keksinnön piirissä niitä hepariinin estereitä, joissa ilman erotusta ovat este-röityneet D-glukuronihapon, ei-sulfatoituneen L-iduronihapon ja sulfa-toituneen L-iduronihapon renkaiden karboksyyliryhmät. Selektiivisillä 6 67865 estereillä tarkoitetaan kyseessä olevan keksinnön piirissä niitä hepariinin estereitä, joissa ovat esteröity-neet, osittain tai täydellisesti, joko ainoastaan D-gluku-ronihapon renkaiden karboksyyliryhmät, tai ainoastaan D-glukuronihapon ja ei-sulfatoidun L-iduronihapon renkaiden karboksyyliryhmät, tai vielä yksinomaan ei-sulfa-toidun L-iduronihapon ja sulfatoidun L-iduronihapon renkaiden karboksyyliryhmät, tai lopuksi yksinomaan sulfatoidun L-iduronihapon renkaiden karboksyyliryhmät.
Sopivista hepariinin estereistä, joita voidaan käyttää lähtöaineena keksinnön mukaisissa menetelmissä voidaan mainita erikoisesti ranskalaisessa patentissa 2 150 724 ja brittiläisessä patentissa 1 501 095 mainitut hepariinin esterit, samoin kuin hepariinin metyyli-, etyyli-, etoksikarbonyylimetyyli-, syanometyyli-, bentsyyli- ja substituoidut bentsyyliesterit (erikoisesti kloori-4-bentsyyli, nitro-4-bentsyyliesteri). Lähtöaineena käytetään mieluimmin hepariinin bentsyyli- tai substituoitua bentsyyliesteriä. Keksinnön mukaisissa menetelmissä lähtöaineena käytetyt hepariinin esterit voivat olla mitä tahansa alkuperää olevasta hepariinista johdettuja (härän keuhkoista, sian limakalvoista jne. peräisin oleva hepariini).
Hepariinin ei-selektiivisiä metyyli-, etyyli-, etoksikarbonyylimetyyl i- , syanometyyli-, bentsyyli- ja substituoitua bentsyyliesteriä voidaan saada esimerkiksi antamalla hepariinin neutraalin kvaternäärisen ammoniumsuo-lan tai hepariinin amiinisuolan reagoida halogenoidun johdannaisen kanssa, jonka kaava on Hal-C^-R (II), jossa Hai merkitsee kloori-, bromi- tai jodiatomia ja R merkitsee vetyatomia tai metyyli-, etoksikarbonyyli-, syano-, femyyli- tai substituoitua fenyyliryhmää. Tämä reaktio tapahtuu liuoksessa tai suspensiossa jossakin inertissä liuottimessa kuten dimetyyliformamidissa, metyleeniklo-ridissa, dimetyylisulfoksidissa, tetrahydrofuraanissa tai asetonissa lämpötilavälillä -20°C - +60°C.
7 67865
Hepariinin metyyli-, etyyli-, etoksikarbonyylimetyyli-, syanometyyli-, bentsyyli- ja substituoitua bentsyyli-esteriä, joissa ovat esteröityneet, osittain tai kokonaan, joko yksinomaan D-glukuronihapon renkaiden karboksyyli-ryhmät, tai yksinomaan D-glukuronihapon ja ei-sulfatoi-tuneen L-iduronihapon renkaiden karboksyyliryhmät, saadaan antamalla kaavan II mukaisen halogeenijohdannaisen, joka on määritelty edellä, reagoida hepariinin happamen kvaternäärisen ammoniumsuolan kanssa, jossa ovat suolan muodossa paitsi sulfaattiryhmät, joko yksinomaan D-glukuronihapon renkaiden karboksyyliryhmät, tai yksinomaan D-glukuronihapon ja ei-sulfatoidun L-iduronihapon renkaiden karboksyyliryhmät, ja muut karboksyyliryhmät ovat hapon muodossa. Tämä reaktio suoritetaan samoissa olosuhteissa kuin kaavan II mukaisen halogeenijohdannaisen reaktio hepariinin neutraalin kvaternäärisen ammoniumsuolan kanssa.
Hepariinin happamia kvaternäärisiä ammoniumsuoloja, joissa ovat suolan muodossa paitsi sulfaattiryhmät, ainoastaan D-glukuronihapon renkaiden karboksyyliryhmät, saadaan antamalla kvaternäärisen ammoniumsuolan vaikuttaa hepariinin vesiliuoksessa pH-arvolla 3-4.
Hepariinin happamia kvaternäärisiä ammoniumsuoloja, joissa ovat suolan muodossa, paitsi sulfaattiryhmät, yksinomaan D-glukuronihapon ja ei-sulfatoidun L-iduronihapon renkaiden karboksyyliryhmät, saadaan antamalla kvaternäärisen ammoniumsuolan vaikuttaa hepariiniin vesiliuoksessa riittävän alhaisella pH-arvolla, niin että muodostuu hepariinin kvaternäärinen ammoniumsuola, jossa ovat suolan muodossa vain sulfaattiryhmät (käytännössä pH-arvolla 2-2,5) ja sen jälkeen neutraloidaan selektiivisesti näin saadun aineen D-glukuronihapon ja ei-sulfatoidun L-xduronihapon renkaiden karboksyyliryhmät lisäämällä laskettu määrä kvaternääristä ammoniumhydroksidia dime- 8 67865 tyyliformamidi-väliaineessa. Tämä määrä lasketaan mainitun aineen jonkin määrätyn painomäärän neutralointikäy-rästä dimetyyliformamidi-vällaineessa.
Hepariinin metyyli-, etyyli-, etoksikarbonyylimetyyli-, syanometyyli-, bentsyyli- ja substituoituja bentsyylies-tereitä, joissa ovat esteröityjä, osittain tai kokonaan, joko yksinomaan sulfatoidun L-iduronihapon renkaiden karboksyyliryhmät tai yksinomaan ei-sulfatoidun L-iduronihapon ja sulfatoidun L-iduronihapon renkaiden karboksyyliryhmät, valmistetaan antamalla alkoholin, jonka kaava on HO-CI^-R III, jossa R on vetyatomi tai metyyli-, etoksikarbonyyli-, syano-, fenyyli- tai substituoitu fenyyli, vaikuttaa hepariiniin vesiliuoksessa, jossa on mukana kondensoitumista edistävää ainetta, joka on vesiliukoisen karbodi-imidin tyyppiä, kuten esimerkiksi etyyli-1-(dimetyyliamino-3-propyyli)-3-karbodi-imidiä, ja väliaineen pH on säädetty arvoon 3,5-4,5 ensimmäisessä tapauksessa ja arvoon 2-3 toisessa tapauksessa. Kaavan III mukaisena alkoholina voidaan käyttää varsinkin meta-nolia ja etanolia, ja tällöin saadaan vastaavasti hepariinin selektiivisiä metyyli- ja etyyliesteritä.
Keksinnön mukaisen menetelmän avulla, jossa käytetään epäorgaanisen tai orgaanisen emäksen ja hepariinin esterin reaktiota, joka on saatu β-eliminoimisen kautta, voidaan saada aikaan hepariinin osittainen ja kontrolloitu depo-lymeroituminen muuttamatta sen yleistä rakennetta.
Keksinnön mukaiset sulfaattiryhmiä sisältävien polysakkaridien seokset omaavat antikoaguloivia ja antitromboot-tisia ominaisuuksia ja hypolipeemisen vaikutuksen. Seoksilla, joiden keskimääräinen molekyylipaino on riittävän alhainen (käytännössä alle tai yhtä suuri kuin 7000 daltonia) on antitromboottinen vaikutus voimakkaampi kuin antikoaguloiva vaiktuus. Keksinnön mukaiset seok- 6 7 8 6 5 set ovat vain hyvin vähän toksisia. Esimerkin 9 yhdiste esimerkiksi on atoksinen annoksen ollessa 300 mg/kg rotalla ja hiirillä kun se annetaan intravenööttisesti ja sen toksisuus on identtinen hepariinin toksisuuden kanssa silloin kun sitä annetaan subkutaanisesti.
Keksinnön mukaisia sulfaattiryhmiä sisältävien polysakkaridien seoksia, joissa polysakkaridien happamet ryhmät ovat farmaseuttisesti vaarattomien suolojen muodossa, erikoisesti natrium-, kalsium- tai magnesiumsuolojen muodossa, voidaan käyttää antikoaguloivina ja antitromboottisina aineina trom-boosien estämiseen ja hoitoon. Niitä voidaan samaten käyttää hyperlipemian hoitoon. Niitä voidaan edullisesti käyttää hepariinin korvaamiseen tällaisissa tarkoituksissa. Subku-taanisesti annettaessa niillä on pitempi vaikutusaika kuin hepariinilla, minkä ansiosta voidaan vähentää ruiskeiden antokertoja. Lisäksi niillä on vähemmän sivuvaikutuksia (hemorragioiden aiheuttaminen) kuin hepariinilla.
Niitä voidaan antaa lääkkeeksi farmaseuttisesti soveltuvan liuottimen kanssa intravenööttisesti, subkutaanisesti, keuhkojen kautta (inhalaatio), rektaalisesti ja riittävän alhaisen molekyylipainon omaavia seoksia (erityisesti III kategorian seoksia) oraalisesti. Annokset ovat riippuvaisia antotavasta ja halutusta vaikutuksesta (antitromboottinen tai hypolipeeminen vaikutus).
Vaikka kyseessä oleva keksintö koskee kaikkia edellä määriteltyjä seoksia, sen kohteena ovat erityisesti ne seokset, joilla on natriumsuolan muodossa alla olevassa taulukossa A, kategorioissa I, II ja III esitetyt tyypilliset fysikaaliset lisäominaisuudet.
10 67865
Taulukko A
Katego- Katego- Katego-
ria I ria II ria III
Keskimääräinen molekyy- 8000 - 3000 - 2000 - lipaino (daltoneissa) 10 000 8000 7000
Antikoaguloiva vaiku- 130-160 80-140 10-80 tus in vitro Codex
Anti-Xa-vaikutus in 130-180 120-250 80-250 vitro Α.Ρ,Τ.Τ—vaikutus in 100-150 80-120 10-80 vitro
Suhde: anti-Xa-vaikutus in vitro A.P.T.T.-vaikutus in vitro ^ ^ 2 10
Taulukossa A ilmoitettu antikoaguloiva vaikutus Codex on määrätty ranskalaisen farmakopean menetelmän avulla, 8. painos, hepariinin erikoistutkimus. Taulukossa A samoin kuin myöhemmin taulukoissa B ja C ilmoitetut anti-Xa ja A.P.T.T. vaikutukset on määrätty Teien et ai. (edellä siteeratun) menetelmän mukaan alla selostettuja työskentelytapoja noudattaen: a) Anti-Xa-vaikutuksen mittaaminen: Tämä vaikutus määrätään levyjen väliin pannusta härän plasmasta kromogeenisen substraatin S 2222 avulla /kromo-geeninen peptidi, joka on rakenteeltaan (N-bentsoyyli)-Ile-Glu-Gly-Arg-(p-nitro) anilid_i/ ja vertailemalla kolmanteen kansainväliseen vertailumalliin.
100 yUl:aan testattavaa ainetta tai vertailuainetta puskurin vesiliuoksessa Tris/EDTA pH 8,4, joka vastaa 0,02-0,08 yUq ainetta tai vertailuainetta, lisätään 100 ^ul härän plasmaa, jossa on sitraattia ja joka on etukäteen 1 1 67865 laimennettu suhteessa 2/5 käyttämällä edellä olevaa puskuria tris/EDTA. Inkuboidaan 3 min ajan 37°C:ssa ja lisätään 100 ^ul härän tekijä Xa:n vesiliuosta, joka vastaa tekijän Xa 7 n Kat. Inkuboidaan 30 sekä ja lisätään 200 yUl S 2222:n vesiliuosta, joka vastaa 0,2 ^urnol S 2222:a. Inkuboidaan 3 min ajan ja lisätään 300 yUl etikkahappoa ja luetaan liuoksen optinen tiheys aallonpituudella 405 nm tislattuun veteen verrattuna.
Kun piirretään käyrät, jotka esittävät optista tiheyttä yhtäältä testattavan aineen konsentraation funktiona, toisaalta vertailuaineen konsentraation funktiona, saadaan kaksi suoraa, toinen joka vastaa testattavaa ainetta ja toinen joka vastaa vertailuainetta. Testattavan aineen vaikutus ilmoitettuna kansainvälisinä yksikköinä mg kohti, saadaan kaavasta: 173 testattavaa ainetta vastaavan suoran kaltevuus vertailumailta vastaavan suoran kaltevuus luku 173 vastaa kolmannen kansainvälisen vertailumallin vaikutuksen arvoa. Edellä oleva kahden suoran kaltevuuksien suhde on yhtä suuri kuin samaa optista tiheyttä vastaavien, testattavan aineen ja vertailuaineen kon-sentraatioiden käänteissuhde.
b) A.P. T.T.-vaikutuksen mittaaminen:
Testattavaa ainetta ja kolmatta kansainvälistä vertailu-ainetta liuotetaan 0,15 M natriumkloridin vesiliuokseen, sen jälkeen niitä laimennetaan levyjen väliin pannulla härän plasmalla, jossa on sitraattia niin että saadaan testattavan aineen (tai vertailuaineen) konsentraatiot 0-4 ^ug/ml.
100 yUl:aan näin valmistettua liuosta lisätään 100 ^,ul rea-genssia "automated APTT Precibio" (reagenssi, joka perustuu kanin aivojen fosfolipideihin ja mikronisoituun piidioksidiin) ja inkuboidaan 5 min 37°C:ssa ja lisätään 12 67865 100 ^ul kalsiumkloridin 0,025 M vesiliuosta. Mitataan koaguloitumiseen kuluva aika fibrometrin Bio-Meri§ux avulla .
Kun piirretään käyrät, jotka esittävät koaguloitumis-ajan logaritmia yhtäältä testattavan aineen ja toisaalta vertailumallin konsentraation funktiona, saadaan kaksi suoraa. Testattavan aineen vaikutus ilmoitettuna kansainvälisinä yksikköinä mg kohti, saadaan kaavasta: testattavaa ainetta vastaavan suoran kaltevuus vertailumailla vastaavan suoran kaltevuus luku 173 vastaa kolmannen kansainvälisen vertailumallin vaikutuksen arvoa.
Kaikki taulukoissa, A, B ja C esiintyvät vaikutukset on ilmoitettu kansainvälisinä yksikköinä mg:aa kohti (k.y./mg) verrattuina kolmanteen kansainväliseen vertailumalliin.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä sitä rajoittamatta.
Lähtöaineena esimerkeissä 1-3, 10, 12-15 käytetty hepariinin neutraali bentsetoniumsuola eli bentsetoniumheparinaatti on peräisin sian sisälmyksistä saadusta hepariinista, ja sen tyypilliset fysikaaliset ominaisuudet ovat seuraavat: - keskimääräinen molekyylipaino: 16 000 daltonia 13 67865 ominaiskiertokyky vesiliuoksessa 20°C:ssa: / ^_/D = + 41 - antikoaguloimistehokkuus Codex = 157 k.y./mg.
Esimerkeissä 4-9 ja 11 lähtöaineena käytetty hepariinin neutraali bentsetoniumsuola eli bentsetoniumheparinaatti on peräisin härän sisälmyksistä saadusta hepariinista, ja sen tyypilliset fysikaaliset ominaisuudet ovat seuraa-vat: keskimääräinen molekyylipaino = 11 400 daltonia /~«7d° = +37° - antikoaguloitumistehokkuus Codex = 128 k.y./rng.
Esimerkissä 16 lähtöaineena käytetty hepariinin neutraali bentsetoniumsuola eli bentsetoniumheparinaatti on peräisin sian limakalvoista saadusta hepariinista, ja sen keskimääräinen molekyylipaino on 16 000 daltonia, ominaiskiertokyky vesiliuoksessa 20°C;ssa = +44° ja antikoaguloitumistehokkuus Codex on 180 k.y./mg.
Esimerkeissä 17-19 lähtöaineena käytetty hepariinin nat-riumsuola vastaa edellä mainittua sian limakalvosta saatua hepariinia.
Esimerkki 1
Liuokseen, jossa on 30 g bentsetoniumheparinaattia 600 ml:ssa dimetyyliformamidia, lisätään 30 g (kloori-4)-bentsyylikloridia. Liuottua annetaan olla kontaktissa 60 h ajan ympäristön lämpötilassa (noin 20°C:ssa), ja lisätään sitten 600 ml 10-prosenttista natriumasetaatin metanoliliuosta. Muodostunut sakka erotetaan suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 10,75 g hepariinin kloori-4-bentsyyli-esteriä natriumsuolan muodossa.
Saatu esteri pannaan kontaktiin sekoittaen 269 ml:n 14 67865 kanssa natriumhydroksidin 0,4 N vesiliuosta, joka on 25-asteista. 2 h kuluttua neutraloidaan lisäämällä kloorivetyhapon 0,4 N vesiliuosta ja saostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia (eli kaksinkertainen määrä vesifaasiin nähden). Erotetaan suodattamalla 8,46 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 2
Liuokseen, jossa on 30 g bentsetoniumheparinaattia 600 mlrssa dimetyyliformamidia, lisätään 30 g bentsyyliklo-ridia. Liuottua annetaan olla kontaktissa 60 h ajan ympäristön lämpötilassa, sitten saostetaan lisäämällä 600 ml 10-prosenttista natriumasetaatin metanoliliuosta. Erotetaan sakka suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa. Tällä tavoin saadaan 11,4 g hepa-riinin bentsyyliesteriä natriumsuolan muodossa.
Pannaan kontaktiin 2 h ajaksi sekoittaen 3 g edellä saatua esteriä 75 ml:n kanssa natriumhydroksidin 0,4 N vesiliuosta lämpötilassa 20-25°C. Sitten neutraloidaan lisäämällä kloorivetyhapon 0,4 N vesiliuosta ja saostetaan lisäämällä 2 volyymiä metanolia. Näin eristetään 2,23 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 3
Liuokseen, jossa on 10 g bentsetoniumheparinaattia 250 ml:ssa dikloorimetaania, lisätään 10 g bentsyyliklori-dia.
Liuottua annetaan jäädä seisomaan 24 h ajaksi ympäristön lämpötilaan, sitten haihdutetaan liuotin vakuumissa. Jäännös liuotetaan 150 ml:aan dimetyyliformamidia ja saostetaan lisäämällä 150 ml 10-prosenttista natriumasetaatin liuosta metanolissa. Erotetaan suodattamalla 3,67 g hepariinin bentsyyliesteriä natriumsuolan muodossa.
15 67865 2 g edellä saatua esteriä käsitellään sekoittaen 2 h ajan 50 ml:n kanssa natriumhydroksidin 0,1 N vesiliuosta 60°C:ssa. Jäähdyttyä neutraloidaan lisäämällä 0,1 N kloorivetyhapon vesiliuosta, sitten saostetaan lisäämällä 2 volyymiä metanolia. Näin saadaan 1,54 g depoly-meroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 4
Liuokseen, jossa on 5 g bentsetoniumheparinaattia 125 ml:ssa dikloorimetaania, lisätään 5 g etyyliklooriase-taattia ja liuottua annetaan jäädä kontaktiin 3 vrk ajaksi ympäristön lämpötilassa. Liuotin haihdutetaan va-kuumissa, otetaan jäännös 75 mlraan dimetyyliformami-dia ja saostetaan lisäämällä 75 ml 10-prosenttista nat-riumasetaatin metanoliliuosta. Sakka, joka on erotettu suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan sitten vakuumissa. Näin saadaan 1,72 g hepariinin karbetoksi-metyyliesteriä natriumsuolan muodossa.
1,7 g edellä saatua esteriä käsitellään 43 ml:an kanssa natriumhydroksidin 0,1 N vesiliuosta 60°C:ssa sekoittaen 2 h ajan. Jäähdyttyä neutraloidaan lisäämällä 0,1 N kloorivetyhapon vesiliuosta ja saostetaan lisäämällä 2 volyymiä metanolia. Erotetaan suodattamalla 1,33 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 5
Liuokseen, jossa on 10 g bentsetoniumheparinaattia 250 ml:ssa dikloorimetaania lisätään 10 g (kloori-4)-bent-syylikloridia, joka liuotetaan sekoittamalla. Liuos jätetään 24 h ajaksi ympäristön lämpötilaan seisomaan ja sitten haihdutetaan liuotin vakuumissa. Jäännös otetaan 150 ml:aan dimetyyliformamidia ja saostetaan lisäämällä 150 ml 10-prosenttista natriumasetaatin metanoliliuosta. Suodatetaan, pestään sakka metanolilla ja kuivataan vakuumissa, jonka jälkeen eristetään 3,84 g 16 67865 hepariinin kloori-4-bentsyyliesteriä natriumsuolan muodossa .
Käsitellään 2 g edellä saatua esteriä 50 ml:Ila natrium-hydroksidin 0,1 N vesiliuosta 60°C:ssa sekoittaen 2 h ajan. Kun on jäähdytetty ja neutraloitu kloorivetyhapon 0,1 N vesiliuoksella, saostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia. Sakka erotetaan suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 1,38 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa .
Esimerkki 6
Liuokseen, jossa on 5 g bentsetoniumheparinaattia 125 ml:ssa dikloorimetaania, lisätään 5 g (nitro-4)-bentsyy-likloridia, joka liuotetaan sekoittamalla. Sen jälkeen jätetään liuos 3 vrk ajaksi seisomaan huoneen lämmössä, sitten haihdutetaan liuotin vakuumissa ja liuotetaan jäännös 75 ml:aan dimetyyliformamidia. Muodostunut esteri saostetaan lisäämällä 75 ml 10-prosenttista natriumasetaatin metanoliliuosta. Sakka otetaan talteen suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 1,89 g hepariinin nitro-4-bentsyyli-esteriä natriumsuolan muodossa.
Käsitellään 1,85 g edellä olevaa esteriä 46 mitan kanssa 0,1 N natriumhydroksidin vesiliuosta 60°C:ssa 2 h ajan sekoittaen. Jäähdytetään ja neutraloidaan sitten lisäämällä 0,1 N kloorivetyhapon vesiliuosta, sitten saostetaan lisäämällä 2 volyymiä metanolia. Sakka eristetään suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 1,13 g depolymeroitua hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 7
Liuokseen, jossa on 30 g bentsetoniumheparinaattia 500 ml:ssa dikloorimetaania lisätään 30 g bentsyyliklo- •t* ‘ 6 7 8 6 5 ridia, joka liukenee sekoittaen. Liuos jätetään sitten seisomaan huoneen lämmössä 24 h ajaksi, sitten haihdutetaan liuotin vakuumissa ja otetaan jäännös 400 mitään eetteriä. Liukenematon osa erotetaan suodattamalla. Näin saadaan 30 g hepariinin bentsyyliesteriä bentsetonium-suolan muodossa. Tämä esteri liuotetaan 200 mitään dikloo-rimetaania, joka sisältää 8 ml diatsa-1,5-bisyklo/4,3,0/-noneeni-5:ttä. Pidetään pystyjäähdytysolosuhteissa 3,5 h ajan, ja haihdutetaan sitten liuotin vakuumissa. Jäännös liuotetaan 450 mitään dimetyyliformamidia ja lisätään yhtä suuri volyymi 10-prosenttista natriumasetaatin metanoliliuosta. Sakka otetaan talteen suodattamalla ja pestään metanolilla. Sitten käsitellään sitä 0°Ctssa yhden tunnin ajan 1 N natriumhydroksidin vesiliuoksella. Neutraloidaan ja saostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia. Sakka eristetään suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa.
Saadaan 6,6 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuo-lan muodossa.
Esimerkki 8
Liuokseen, jossa on 10 g bentsetoniumheparinaattia 250 mltssa dikloorimetaania, lisätään 10 g (kloori-4)-bentsyylikloridia, joka liukenee sekoittaen. Liuos jätetään seisomaan ympäristön lämpötilassa 24 h ajaksi, sitten haihdutetaan liuotin vakuumissa. Jäännös otetaan 200 ml:aan eetteriä ja eristetään suodattamalla muodostunut sakka. Näin saadaan 10 g hepariinin kloori-4-bentsyyliesteriä natriumsuolan muodossa.
Liuotetaan 5 g tätä ainetta 100 ml:aan dikloorimetaania, joka sisältää 1,5 ml diatsa-1,5-bisyklo-/4,3 ,j)7-noneeni-5:ttä ja pidetään sitä pystyjäähdytysolosuhteissa 4 h ajan. Sitten haihdutetaan liuotin vakuumissa, otetaan jäännös uudestaan 30 ml:aan dimetyyliformamidia ja li- 18 67865 sätään 100 ml natriumasetaatin 10-prosenttista metanoliliuosta. Muodostunut sakka eristetään suodattamalla, pestään metanolilla ja käsitellään sitten 24 ml:an kanssa natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta 1 h ajan 0°C:ssa. Neutraloidaan lisäämällä 1 N kloorivetyhapon vesiliuosta ja saostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia. Sakka erotetaan suodattamalla. Pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa ja saadaan 1 g depoly-meroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 9
Liuokseen, jossa on 30 g bentsetoniumheparinaattia 600 ml:ssa dimetyyliformamidia, lisätään 30 g bentsyyli-kloridia. Liuottua jätetään kontaktiin 60 h ajaksi ympäristön lämpötilassa, sitten saostetaan muodostunut esteri lisäämällä 1200 ml 10-prosenttista natriumasetaatin metanoliliuosta. Sakka eristetään suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 11,4 g hepariinin bentsvyliesteriä natriumsuolan muodossa.
10 g edellä olevaa esteriä käsitellään 250 ml:an kanssa 0,1 N natriumhydroksidin vesiliuosta 60°C:ssa 2 h ajan sekoittaen. Jäähdytetään ja neutraloidaan sitten kloorivetyhapon 0,1 vesiliuoksella ja saostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia. Sakka suodatetaan, pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 6,65 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 10
Liuokseen, jossa on 120 g bentsetoniumheparinaattia 2,4 l:ssa dimetyyliformamidia, lisätään 120 g (kloori-4)-bentsyylikloridia, joka liukenee sekoittaen. Sitten jätetään liuos seisomaan ympäristön lämpötilassa 60 h ajaksi, sitten lisätään 2,4 1 10-prosenttista natriumasetaatin metanoliliuosta. Muodostunut sakka erotetaan 19 67865 suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan vakuu-missa. Näin saadaan 46 g hepariinin kloori-4-bentsyyli-esteriä natriumsuolan muodossa.
20 g edellä olevaa esteriä käsitellään 500 ml:an kanssa 0,1 N natriumhydroksidin vesiliuosta 60°C:ssa 2 h ajan sekoittaen. Jäähdyttyä neutraloidaan ja saostetaan lisäämällä 2 volyymiä metanolia. Eristetään suodattamalla 11,7 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 11
Liuokseen, jossa on 30 g bentsetoniumheparinaattia 750 ml:ssa dikloorimetaania, lisätään 30 g metyylijodidia, joka liukenee sekoittaen. Jätetään liuos 48 h ajaksi ympäristön lämpötilaan, sitten haihdutetaan liuotin va-kuumissa. Jäännös otetaan 450 ml:aan dimetyyliformami-dia ja saostetaan lisäämällä 450 ml 10-prosenttista natriumasetaatin metanoliliuosta. Suodatetaan, sakka pestään metaolilla ja kuivataan vakuumissa. Näin eristetään 10,5 g hepariinin metyyliesteriä natriumsuolan muodossa.
Käsitellään 2 g edellä olevaa esteriä 50 ml:n kanssa 0,1 N natriumhydroksidin vesiliuosta 60°C:ssa sekoittaen 2 h ajan. Jäähdyttyä säädetään liuoksen pH arvoon suunnilleen 4,5 sekoittaen vaihtohartsin kanssa jossa on H+-muodossa olevia karboksyylihapon ioneja. Hartsi erotetaan sitten suodattamalla ja pestään vedellä. Yhdistetyt vesifaasit neutraloidaan lisäämällä laimeata natriumhydroksidin vesiliuosta, ja sitten lyofilisoidaan. Näin saadaan 2 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 12 Käsitellään 3 g esimerkissä 10 saatua hepariinin kloori- 4-bentsyyliesteriä 120 ml:an kanssa 10-prosenttista di- 6 7 8 6 5 20 natriumkarbonaatin vesiliuosta 60°C:ssa 2 h ajan sekoittaen. Jäähdyttyä neutraloidaan 0,4 N kloorivetyhapon vesiliuoksella ja seostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia. Eristetään suodattamalla 1,57 g depolymeroi-tunutta hepariinia natriumsuclan muodossa.
Esimerkki 13
Liuokseen, jossa on 30 g bentsetoniumheparinaattia 600 mltssa dimetyyliformamidia, lisätään 30 g etyyli-klooriasetaattia. Liuottua annetaan olla kontaktissa 60 h ajan ympäristön lämpötilassa, sitten lisätään 600 ml 10-prosenttista natriumasetaatin liuosta metanolissa. Muodostunut sakka erotetaan suodattamalla, pestään me-tanolilla ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 10,78 g hepariinin karbetoksimetyyliesteriä natriumsuolan muodossa .
Pannaan kontaktiin sekoittaen 3 g edellä olevaa esteriä 100 ml:an kanssa 3-prosenttista trietyyliamiinin vesi-liuosta 60°C:en lämpötilassa. 5 h kuluttua neutraloidaan lisäämällä kloorivetyhapon vesiliuosta, sitten saostetaan lisäämällä 2 volyymiä metanolia. Eristetään suodattamalla 2,5 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 14
Liuokseen, jossa on 5 g bentsetoniumheparinaattia 125 ml:ssa dikloorimetaania lisätään 5 g klooriasetonitrii-liä, joka liukenee sekoittamalla. Liuos jätetään 48 h ajaksi ympäristön lämpötilaan, sitten haihdutetaan liuotin vakuumissa. Jäännös liuotetaan 75 ml:aan dimetyyliformamidia ja saostetaan lisäämällä 75 ml 10-prosent-tista natriumasetaatin metanoliliuosta. Sakka erotetaan suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 1,63 g hepariinin syanometyyli-esteriä natriumsuolan muodossa.
: .7 .
6 7 8 6 5
Saatua esteriä käsitellään 40 mitan kanssa 0,1 N nat-riumhydroksidin vesiliuosta 60°C:ssa sekoittaen 2 h ajan. Jäähdyttyä neutraloidaan lisäämällä 0,1 N kloori-vetyhapon vesiliuosta, sen jälkeen seostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia. Eristetään suodattamalla 1,33 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 15
Liuotetaan sekoittaen 3 g hepariinin kloori-4-bentsyyli-esteriä, joka on saatu esimerkissä 10, 120 mitään 10-prosenttista dinatriumkarbonaattiliuosta. Sekoitetaan 2 h ajan lämpötilavälillä 20°C - 25°C ja säädetään liuoksen pH arvoon 6 lisäämällä kloorivetyhapon N vesi-liuosta, sen jälkeen lisätään kaksinkertainen volyymi metanolia vesiliuoksen volyymiin nähden. Eristetään suodattamalla muodostunut sakka ja saadaan näin 2,1 g hepariinin kloori-4-bentsyyliesteriä.
Käsitellään sekoittaen 2 h ajan 2 g edellä olevaa esteriä 50 mitan kanssa natriumhydroksidin 0,1 N vesiliuosta 60°C:ssa. Jäähdyttyä neutraloidaan lisäämällä kloorivetyhapon 0,1 N vesiliuosta, sitten seostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia. Näin saadaan 1,4 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Edellä olevissa esimerkeissä 1-10 ja 12-15 on säädetty, ennen muodostuneen tuotteen saostamista kaksi volyymiä metanolia lisäämällä, vesifaasin NaCl-konsentraatio 10 %:iin lisäämällä natriumkloridia.
Esimerkki 16
Liuokseen, jossa on 10 g bentsetoniumheparinaattia 250 mltssa dikloorimetaania, lisätään 10 g (kloori-4)-bentsyylikloridia, joka liuotetaan sekoittamalla. Liuos jätetään ympäristön lämpötilaan 24 h ajaksi, sitten saos-tetaan muodostunut esteri lisäämällä natriumasetaatin 10-prosenttista metanoliliuosta. Sakka suodatetaan, A ' ‘ 22 67865 pestään metanolilla. Näin saadaan 3,72 g hepariinin kloori-4-bentsyyliesteriä natriumsuolan muodossa.
Käsitellään 60°C:ssa 5 h ajan liuosta, jossa on 0,500 g edellä olevaa esteriä 10 ml:ssa formamidia, 0,5 ml:an kanssa diatsa-1,5-bisyklo-/4,3,0/-noneeni-5:ttä. Jäähdyttyä saostetaan lisäämällä 70 ml asetonia. Näin saadaan 0,364 g ainetta, josta käsitellään 0°C:ssa 2 h ajan 6 ml:an kanssa natriumhydroksidin N vesiliuosta. Vesi-faasi neutraloidaan lisäämällä kloorivetyhapon N vesi-liuosta ja sen NaCl-konsentraatio säädetään 10 %:iin lisäämällä natriumkloridia. Saostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia. Näin saadaan eristetyksi 0,263 g depolymeroitumitta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 17
Liuokseen, jossa on 10 g hepariinia (natriumsuolaa) 40 ml:ssa vettä, lisätään 2,5 ml etikkahappoa, sitten hitaasti ja sekoittaen 150 ml bentsetoniumkloridin 10-pro-senttista vesiliuosta. Sakka, joka muodostuu, otetaan erilleen sentrifugoimalla, pestään vedellä ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 19,67 g hapanta bentseto-niumheparinaattia.
11 g edellä olevaa ainetta käsitellään 11 g:an kanssa (kloori-4-)-bentsyylikloridia joka on liuotettuna 110 ml:aan dimetyyliformamidia, 48 h ajan ympäristön lämpötilassa. Lisätään 220 ml 10-prosenttista natrium-asetaatin metanoliliuosta. Muodostunut sakka suodatetaan ja pestään metanolilla. Näin saadaan 4,70 g hepariinin (kloori-4-)-bentsyyliesteriä natriumsuolan muodossa.
4 g edellä olevaa ainetta liuotetaan 20 ml:aan vettä ja lisätään hitaasti sekoittaen 40 ml bentsetoniumkloridin 20-prosenttista vesiliuosta. Muodostunut sakka otetaan talteen sentrifugoimalla, pestään vedellä ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan hepariinin (kloori-4)-bentsyyliesteriä bentsetoniumsuolan muodossa.
23 67865 1 g edellä olevaa esteriä bentsetoniumsuolan muodossa liuotetaan 20 mitään dimetyyliformamidia ja käsitellään 1 mitan kanssa diatsa-1,5-bisyklo-/4,3 ,^)/-noneeni-51 ttä 60°Ctssa 5 h ajan. Jäähdyttyä saostetaan lisäämällä 5 ml natriumasetaatin 10-prosenttista metanoliliuosta. Näin saadaan 0,346 g ainetta, jota käsitellään 0°Cissa 2 h ajan 5,8 mitan kanssa natriumhydroksidin N vesiliuosta. Vesifaasi neutraloidaan lisäämällä kloorivetyhapon N vesiliuosta ja sen NaCl-konsentraatio säädetään 10 %tksi lisäämällä natriumkloridia. Saostetaan lisäämällä 2 volyymiä metanolia. Suodatetaan ja pestään metanolilla sakka ja saadaan 0,253 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 18
Liuokseen, jossa on 10 g hepariinia (natriumsuolaa) 40 mltssa vettä, lisätään 2,5 ml muurahaishappoa ja sitten hitaasti ja sekoittaen, 150 ml bentsetoniumkloridin 10-prosenttista vesiliuosta. Otetaan talteen sakka sent-rifugoimalla, pestään vedellä ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 20,5 g hapanta bentsetoniumheparinaattia. Edellä olevaa ainetta liuotetaan 2,95 g 60 ml:aan dimetyyliformamidia, sitten lisätään 5,9 ml tetrabutyyliam-moniumhydroksidin 0,1 N liuosta n-propanoli/metanolin seoksessa.
Kun on lisätty 2,95 g (kloori-4)-bentsyylikloridia, jätetään liuos 5 vrk ajaksi huoneen lämpöön. Lisätään 74 ml natriumasetaatin 10-prosenttista metanoliliuosta. Eristetään suodattamalla 1,32 g hepariinin (kloori-4)-bentsyyliesteriä natriumsuolan muodossa.
Edellä oleva esteri liuotetaan 6,4 ml:aan vettä ja lisätään hitaasti ja sekoittaen 12,8 ml 20-prosenttista bentsetoniumkloridin vesiliuosta. Muodostunut sakka otetaan talteen sentrifugoimalla, pestään vedellä ja 24 67865 kuivataan vakuumissa. Näin saadaan hepariinin kloori-4-bentsyyliesteriä bentsetoniumsuolan muodossa.
1 g edellä olevaa esteriä bentsetoniumsuolan muodossa liuotetaan 20 ml:aan dikloorimetaania ja lisätään 1 ml diatsa-1,5-bisyklo-/4,3, ()/-noneeni-5: ttä. Kuumennetaan pystysjäähdytysolosuhteissa 5 h ajan, sitten haihdutetaan liuotin vakuumissa, otetaan jäännös 15 mitään dimetyyli-formamidia ja lisätään 20 ml 10-prosenttista natriumase-taatin metanoliliuosta. Muodostunut sakka eristetään suodattamalla ja pestään metanolilla.
Näin saadaan 0,405 g ainetta, jota käsitellään 0°C:ssa 2 h ajan 6 ml:an kanssa N natriumhydroksidin vesiliuosta. Vesifaasi neutraloidaan lisäämällä kloorivetyhapon N vesiliuosta ja sen NaCl-konsentraatio säädetään 10 %:ksi lisäämällä natriumkloridia. Saostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia. Suodatetaan ja pestään sakka metanolilla ja saadaan 0,355 g depolymeroitunutta hepariinia natriumsuolan muodossa.
Esimerkki 19
Liuotetaan 0,600 g hepariinia (natriumsuolaa) 7 mitään vettä ja säädetään liuoksen pH 3,5:ksi lisäämällä kloorivetyhapon N vesiliuosta. Sitten lisätään 0,300 g etyy- li-1-(dimetyyliamino-3-propyyli)-3-karbodi-imidiä ja sen liuottua jätetään liuos 1 h ajaksi ympäristön lämpötilaan. Lisätään 2,5 ml natriumkloridin vesiliuosta, jossa on 280 g/1, sitten 15 ml metanolia. Muodostunut sakka eristetään suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan vakuumissa. Näin saadaan 0,527 g hepariinin metyyliesteriä natriumsuolan muodossa, jonka karboksyyli-happojen esteröitymisaste on 50 %.
0,300 g edellä olevaa esteriä liuotetaan 7,5 ml:aan natriumhydroksidin 0,1 N vesiliuosta ja kuumennetaan 60°C:ssa 2 h ajan. Jäähdyttyä neutraloidaan lisäämällä kloori- 67865 vetyhapon 0,1 N vesiliuosta, säädetään NaCl-konsentraa-tio väliaineessa 10 %:ksi lisäämällä natriumkloridia ja seostetaan lisäämällä kaksi volyymiä metanolia. Näin saadaan 0,200 g depolymeroitunutta hepariinia natrium-suolan muodossa.
Seuraavissa taulukoissa B ja C ovat esimerkeissä 1-19 valmistettujen aineiden (depolymeroidut hepariinit natrium-suolan muodossa) tyypilliset fysikaaliset ominaisuudet. Rikin, typen ja uronihappojen prosenttimäärät, vesiliuosten ominaiskiertokyvyt 20°C:ssa, keskimääräiset molekyyli-painot ja vaikutukset, jotka on ilmoitettu tässä taulukossa, on määrätty edellä mainittuja menetelmiä käyttäen. Molekyylipainojen hajauma-sarakkeessa ovat seosten aineosina olevia polysakkaridien molekyylipainojen likimääräiset ääriarvot, jotka on määrätty kromatograa-fisesti geeli-geeli-permeanssin avulla polyakryyliamidi-agaroosissa. Viskositeetti-sarakkeessa ovat viskositeetit 25°C:ssa vesiliuoksilla, jotka sisältävät 10 % ainetta. UV-absorptio-sarakkeessa ovat 1 cm:n paksuisten kerrosten absorptiot liuoksilla, jotka sisältävät 1 % ainetta 0,01 N Helissä, ja absorptio on mitattu maksimi-absorptiona alueella 220-232 nm.
Taulukko C
Esi- Keskimääräinen Absorptio Antikoaguloiva vaikutus merkki molekyylipaino Anti- APTT Codex (daltoneissa) UV Xa in in in vitro ________vitro vitro___ 16 4200 6 140 63 60 17 5500 7,96 165 80 70 18 4400 6,3 110 60 40 19 5000 10,9 150 45 50 26 67865
Taulukko B
Esi- Uroni- _ ___ Keskimaa- Molekyyli- merk- happoja % S % N / a_/ räinen painojen ki % molekyy- hajauma lipaino (dalto- _ _____ _ _ _ neissa) __ 1 23,0 11,5 2,1 +44° 7300 1600-12 000 2 26,0 11,6 2,0 +44° 6500 1800-13 000 3 25,4 12,0 2,2 +44° 6400 3000-11 000 4 23,9 10,9 2,1 +35° 5500 2200-13 000 5 22,8 12,2 2,2 +39° 5000 2000-13 000 6 24,5 10,8 2,3 +33° 4200 1000-10 000 7 25,2 11,3 2,0 +33° 4100 1700-10 000 8 23,7 11,1 2,2 +35° 4500 1000-10 000 9 26,0 11,8 2,2 +38° 4000 2000-10 000 10 25,2 10,9 2,1 +41° 3800 1000-9000 11 23,8 11,0 2,3 +27° 2800 1000-8000 12 23,9 11,5 2,0 +40° 4000 2000-9000 13 24,3 11,8 2,2 +45° 9000 3000-20 000 14 25,6 12,0 2,1 +44° 8500 3000-20 000 15 25,3 11,8 2,3 +45° 4000 200 0-20 000 67865
Taulukko B (j atkoa)
Esi- Viskosi- Absorp- Antikoa- Anti- A.P.T.T.- merk- teetti tio guloimis- Xa-vai- vaikutus ki (centi- vaikutus kutus in vitro poisea) UV Codex in vitro (k.y./mg) in vitro (k.y./mg) (k.y./mg) 1 2,37 7,5 127 180 105 2 2,25 7,8 116 148 100 3 2,08 7,9 112 163 89 4 1,93 8,2 83 130 52 5 1,91 9,7 75 118 43 6 1,74 12,5 60 140 33 7 1,64 15,0 50 130 30 8 1,61 16,4 54 110 33 9 1,62 14,0 80 159 45 10 1,57 15,4 62 159 40 11 1,50 22,8 40 90 20 12 1,60 14,4 75 140 35 13 2,60 5,9 135 140 130 14 2,50 6,1 138 130 130 15 1,65 10,64 110 170 86
Esimerkki 20
On annettu lääkkeeksi yhtäältä esimerkin 1 ainetta ja toisaalta kaupasta saatavaa hepariinia, eri vaiheissa ihonalaisesti viidelle vapaaehtoiselle terveelle henkilölle annoksen ollessa 5000 k.y. Codex. Verinäytteistä 1, 3, 5 ja 7 h kuluttua lääkkeen antamisesta on mitattu antikoaguloimisvaikutus plasmassa anti-Xa- ja A.P.T.T.-kokeilla, jotka on määritelty edellä. Saadut tulokset on ilmoitettu kansainvälisinä yksikköinä ml/plasmaa kohti kalibrointikäyrään verraten, joka on piirretty vertailu plasman kokeiden perusteella joissa plasmaan on lisätty tunnetut määrät vertailuhepariinia (kolmas kansainvälinen vertailumain) .
'•I';’ V
28 67865
Keskimääräiset saadut tulokset on koottu seuraavaan taulukkoon D:
Taulukko D
Aika lääk- Anti-Xa-vaikutus A.P.T.T.-vaikutus keen anta- Esi- Kaupasta Esi- Kaupasta misen ja näyt- merkin saatava merkin saatava teen ottami- l aine hepariini 1 aine hepariini sen välillä 1 h 0,20 0,04 0,04 0,05 3 h 0,27 0,08 0,05 0,04 5 h 0,28 0,06 0,03 0,02 7 h 0,22 0,05 0,02 0,01
Havaitaan, että esimerkin 1 aineella on paljon voimakkaampi anti-Xa-vaikutus kuin kaupallisella hepariinilla.
f.:’·· *
Claims (4)
- 67865
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8010791 | 1980-05-14 | ||
| FR8010791A FR2482611B1 (fr) | 1980-05-14 | 1980-05-14 | Nouveaux polysaccharides sulfates, procedes pour leur preparation et leur utilisation comme medicaments |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI811469L FI811469L (fi) | 1981-11-15 |
| FI67865B true FI67865B (fi) | 1985-02-28 |
| FI67865C FI67865C (fi) | 1985-06-10 |
Family
ID=9241965
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI811469A FI67865C (fi) | 1980-05-14 | 1981-05-13 | Foerfarande foer framstaellning av en komposition av sulfatgrupper innehaollande polysackarider |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0040144B1 (fi) |
| JP (1) | JPS6051482B2 (fi) |
| KR (1) | KR840001753B1 (fi) |
| AR (1) | AR229510A1 (fi) |
| AT (1) | AT384428B (fi) |
| AU (1) | AU535791B2 (fi) |
| CA (1) | CA1181744A (fi) |
| DE (1) | DE3165361D1 (fi) |
| DK (1) | DK168824B1 (fi) |
| DZ (1) | DZ294A1 (fi) |
| ES (1) | ES502199A0 (fi) |
| FI (1) | FI67865C (fi) |
| FR (1) | FR2482611B1 (fi) |
| GR (1) | GR82283B (fi) |
| HU (1) | HU188667B (fi) |
| IE (1) | IE51283B1 (fi) |
| IL (1) | IL62866A (fi) |
| IN (1) | IN152828B (fi) |
| MA (1) | MA19143A1 (fi) |
| NO (1) | NO156129C (fi) |
| NZ (1) | NZ197081A (fi) |
| PT (1) | PT73024B (fi) |
| ZA (1) | ZA813176B (fi) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2548672A1 (fr) * | 1983-07-04 | 1985-01-11 | Pharmuka Lab | Oligosaccharides sulfates et leur utilisation comme medicaments |
| DE3422407A1 (de) * | 1984-06-16 | 1986-03-06 | B. Braun Melsungen Ag, 3508 Melsungen | Verwendung von heparinderivaten zur selektiven extrakorporalen praezipitation von low-density-lipoproteinen aus vollserum oder plasma |
| FR2584728B1 (fr) * | 1985-07-12 | 1987-11-20 | Choay Sa | Procede de sulfatation de glycosaminoglycanes et de leurs fragments |
| EP0209924A1 (en) * | 1985-07-12 | 1987-01-28 | Akzo N.V. | New anti-trombosis agent based on glycosaminoglycan, process for its preparation, and pharmaceutical compositions |
| ES2003197A6 (es) * | 1987-01-05 | 1988-10-16 | Rovi Lab Farmaceut Sa | Procedimiento de despolimerizacion de la heparina para la obtencion de una heparina de bajo peso molecular dotada de actividad antitrombotica |
| EP0337327A1 (en) * | 1988-04-09 | 1989-10-18 | Bioiberica, S.A. | Process for the preparation of new oligosaccharide fractions by controlled chemical depolimerization of heparin |
| IT1230582B (it) | 1988-10-21 | 1991-10-28 | Opocrin S P A Lab Farmabiologi | Oliogosaccaridi di dermatan solfato ed eparina aventi attivita' antiaterosclerotica |
| IT1234826B (it) * | 1989-01-30 | 1992-05-29 | Alfa Wassermann Spa | Derivati eparinici e procedimento per la loro preparazione |
| US5340932A (en) * | 1989-08-18 | 1994-08-23 | Ajorca S.A. | Substances with heparin-like structure and their method of production |
| DE4121115B9 (de) * | 1990-06-26 | 2005-09-29 | Aventis Pharma S.A. | Gemische sulfatierter Polysaccharide mit der Grundstruktur der das Heparin bildenden Polysaccharide und mit niedrigem Molekulargewicht, deren Herstellungsverfahren und Verwendung |
| FR2663639B1 (fr) * | 1990-06-26 | 1994-03-18 | Rhone Poulenc Sante | Melanges de polysaccharides de bas poids moleculaires procede de preparation et utilisation. |
| USRE38743E1 (en) | 1990-06-26 | 2005-06-14 | Aventis Pharma S.A. | Mixtures of particular LMW heparinic polysaccharides for the prophylaxis/treatment of acute thrombotic events |
| US5707973A (en) * | 1991-04-23 | 1998-01-13 | Rhone-Poulenc Rorer S.A. | Sulfated polysaccharids for treatment or prevention of thromboses |
| IT1256236B (it) * | 1992-12-23 | 1995-11-29 | Mediolanum Farmaceutici Srl | Oligosaccaridi aventi attivita' biologica e procedimento per la loro preparazione di glicosaminoglicani |
| ES2077533B1 (es) * | 1994-02-28 | 1996-07-01 | Bioiberica | Procedimiento de obtencion de fracciones de oligosacaridos por despolimerizacion quimica de heparina. |
| ES2230624T5 (es) * | 1996-11-27 | 2010-10-25 | Aventis Pharmaceuticals Inc. | Composicion farmaceutica que comprende un compuesto que tiene actividad anti-xa y un compuesto antagonista de la agregacion plaquetaria. |
| AUPO556297A0 (en) * | 1997-03-11 | 1997-04-10 | Australian National University, The | Sulfated oligosaccharides having anticoagulant/ antithrombotic activity |
| JP4897991B2 (ja) * | 1999-07-23 | 2012-03-14 | ラボラトリオス ファルマセウティコス ロビ ソシエダッド アノニマ | 超低分子量ヘパリン組成物 |
| FR2811992B1 (fr) * | 2000-07-21 | 2003-07-04 | Aventis Pharma Sa | Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
| US6969705B2 (en) * | 2000-07-21 | 2005-11-29 | Aventis Pharma S.A. | Compositions of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| ES2282368T3 (es) * | 2002-06-20 | 2007-10-16 | Chemi S.P.A. | Procedimiento para la preparacion de esteres de heparina. |
| US20040171819A1 (en) | 2002-10-10 | 2004-09-02 | Aventis Pharma S.A. | Mixtures of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| FR2845686B1 (fr) | 2002-10-10 | 2013-08-30 | Aventis Pharma Sa | Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
| JP2006096668A (ja) * | 2002-11-08 | 2006-04-13 | Ono Pharmaceut Co Ltd | エラスターゼ阻害剤と血液凝固系および／または線溶系酵素阻害剤との組み合わせからなる医薬 |
| DE10260958A1 (de) * | 2002-12-20 | 2004-07-08 | Sustech Gmbh & Co. Kg | Kompositmaterialien aus Calciumverbindungen und Glucuronsäure- und/oder Iduronsäurehaltigen Polysacchariden |
| US7956046B2 (en) | 2003-07-24 | 2011-06-07 | Aventis Pharma S.A. | Oligosaccharide mixtures derived from heparin, preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them |
| ITMI20031679A1 (it) * | 2003-08-29 | 2005-02-28 | Opocrin Spa | Processo per la produzione di eparine a basso peso |
| EP1582531A1 (en) | 2004-03-24 | 2005-10-05 | Aventis Pharma S.A. | Process for oxidizing unfractionated heparins and detecting presence or absence of glycoserine in heparin and heparin products |
| US20050261241A1 (en) | 2004-05-19 | 2005-11-24 | Celsus Biopharmaceuticals, Inc. | Use of dermatan sulfates and/or desulfated heparins to treat or prevent heparinoid-induced autoimmune responses |
| ATE552004T1 (de) | 2005-11-30 | 2012-04-15 | Istituto G Ronzoni | Oral verabreichbare heparinderivate |
| ES2340902B1 (es) * | 2008-07-01 | 2011-05-03 | Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. | Composicion farmaceutica con glicosaminoglicanos y su uso en tratamiento de ulceras cronicas. |
| KR101794877B1 (ko) * | 2010-09-14 | 2017-11-07 | 고쿠리츠 다이가쿠 호징 미야자키 다이가쿠 | 고순도 헤파린 및 그 제조방법 |
| CN111670204B (zh) | 2017-12-11 | 2022-07-29 | 生物E有限公司 | 低分子量肝素的制备方法 |
| WO2022015794A1 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-20 | Optimvia, Llc | Methods for synthesizing non-anticoagulant heparan sulfate |
| EP3997238A1 (en) | 2019-07-09 | 2022-05-18 | Optimvia, LLC | Methods for synthesizing anticoagulant polysaccharides |
| CN114072430B (zh) | 2020-04-27 | 2023-07-28 | 罗威制药股份有限公司 | 低分子量肝素获取程序以及由此获得的低分子量肝素 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3835112A (en) * | 1970-06-08 | 1974-09-10 | Etude Et D Exploit De Marques | Heparin esters |
| CA1136620A (en) * | 1979-01-08 | 1982-11-30 | Ulf P.F. Lindahl | Heparin fragments having selective anticoagulation activity |
-
1980
- 1980-05-14 FR FR8010791A patent/FR2482611B1/fr not_active Expired
-
1981
- 1981-05-08 DE DE8181400728T patent/DE3165361D1/de not_active Expired
- 1981-05-08 EP EP81400728A patent/EP0040144B1/fr not_active Expired
- 1981-05-08 GR GR64889A patent/GR82283B/el unknown
- 1981-05-11 MA MA19352A patent/MA19143A1/fr unknown
- 1981-05-12 HU HU811300A patent/HU188667B/hu unknown
- 1981-05-12 PT PT73024A patent/PT73024B/pt unknown
- 1981-05-13 IE IE1074/81A patent/IE51283B1/en not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 FI FI811469A patent/FI67865C/fi not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 ES ES502199A patent/ES502199A0/es active Granted
- 1981-05-13 NO NO811632A patent/NO156129C/no not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 DZ DZ816189A patent/DZ294A1/fr active
- 1981-05-13 IL IL62866A patent/IL62866A/xx not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 ZA ZA00813176A patent/ZA813176B/xx unknown
- 1981-05-13 DK DK211981A patent/DK168824B1/da not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 AT AT0213681A patent/AT384428B/de not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 AU AU70519/81A patent/AU535791B2/en not_active Expired
- 1981-05-13 KR KR1019810001640A patent/KR840001753B1/ko active
- 1981-05-13 NZ NZ197081A patent/NZ197081A/en unknown
- 1981-05-14 JP JP56072858A patent/JPS6051482B2/ja not_active Expired
- 1981-05-14 IN IN513/CAL/81A patent/IN152828B/en unknown
- 1981-05-14 AR AR285321A patent/AR229510A1/es active
- 1981-05-14 CA CA000377577A patent/CA1181744A/fr not_active Expired
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI67865B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en komposition av sulfatgrupper innehaollande polysackarider | |
| FI104490B (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten sulfatoitujen polysakkaridiseosten valmistamiseksi | |
| US5296471A (en) | Method for controlling o-desulfation of heparin and compositions produced thereby | |
| US5808021A (en) | Method for controlling O-desulfation of heparin | |
| US20190030066A1 (en) | Antithrombin-heparin compositions and methods | |
| JPH0629282B2 (ja) | 解重合及び超硫酸化ヘパリン、その製造方法並びに製薬組成物 | |
| US20030100487A1 (en) | Glycosaminoglycan-antithrombin III/heparin cofactor II conjugates | |
| WO1996006867A9 (en) | Method for controlling o-desulfation of heparin and compositions produced thereby | |
| PT90817B (pt) | Processo para a preparacao de novos derivados de heparina | |
| US6150342A (en) | Heparin derivatives for treatment of angina pectoris | |
| US8518909B2 (en) | Sulfated heptasaccharide and its use as an antithrombotic agent | |
| JPH08508540A (ja) | 循環血液量減少性ショックおよび関連ショック症候群の治療のための非抗凝血性の化学修飾したヘパリン様物質 | |
| WO1992002232A1 (en) | Heparin fragment showing complement inhibition activity | |
| US20100075922A1 (en) | Heparins including at least one covalent bond with biotin or a biotin derivative, method for preparing same and use thereof | |
| JP2643950B2 (ja) | ヘパリン誘導体 | |
| JPH11166001A (ja) | 過硫酸化コンドロイチン硫酸、その製造方法及びそれを有効成分として含有する抗血液凝固剤 | |
| JPH02124902A (ja) | 血液凝固抑制剤 | |
| US20050096294A1 (en) | Novel anti-coagulant | |
| BR102013010818A2 (pt) | Sulfated branches with anticoagulant agent |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |
Owner name: PHARMINDUSTRIE |