JPH08508540A

JPH08508540A - 循環血液量減少性ショックおよび関連ショック症候群の治療のための非抗凝血性の化学修飾したヘパリン様物質

Info

Publication number: JPH08508540A
Application number: JP7519167A
Authority: JP
Inventors: ショードリー、アーシャド・ハッサン; ホルム、ケビン・ロス
Original assignee: グリコメド・インコーポレイテッド
Priority date: 1994-01-12
Filing date: 1995-01-12
Publication date: 1996-09-10
Also published as: AU694177B2; EP0688221A1; AU1727695A; WO1995019176A1; CA2158052A1; EP0688221A4; US5583121A

Abstract

(57)【要約】ヘパリンに一般に付随する出血の問題を伴うことなく、実質的に非抗凝血性のヘパリン様物質を投与することによる循環血液量減少性ショックおよび関連ショック症候群の治療方法；かかる症候群には、微小血管構造の劣化、免疫および消化管機能不全、および多臓器不全が含まれる。例としては、ＡＴIIIアフィニティー分画化によって得られるＮＡＣ組成物が挙げられる。

Description

【発明の詳細な説明】循環血液量減少性ショックおよび関連ショック症候群の治療のための非抗凝血性の化学修飾したヘパリン様物質発明の技術分野本発明は、実質的に非抗凝血性の化学修飾したヘパリン様物質（heparinoids ）を用いたある種の形態のショック、循環血液量減少性ショックおよび関連症候群の治療および予防に関する。これらヘパリン様物質は、心臓、肝臓、腎臓および胃腸管の機能を維持し、微小血管系を劣化から保護し、出血によって誘発されたショックの後の免疫機能を改善する。発明の背景技術ヘパリンおよびヘパラン硫酸ヘパラン硫酸は、多糖のグリコサミノグリカンファミリーの成員である。これらグリコサミノグリカンは直鎖状のポリマー性炭水化物鎖であり、該鎖は、細胞外マトリックスの重要な構造上および機能上の成分であるプロテオグリカン分子のグリカン部分である。ヘパラン硫酸とヘパリン様化合物とは生合成経路が共通しており、ウロン酸残基にａ−（１−４）結合した２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（グルコサミン、ＧｌｃＮ）からなる繰り返し二糖単位を特徴とする。グルコサミンは、２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（ＧｌｃＮＡｃ）、２−デオキシ−２−スルファミノ−Ｄ−グルコース（ＧｌｃＮＳ）および２−デオキシ −２−スルファミノ、６−Ｏ−サルフェート−Ｄ−グルコース（ＧｌｃＮＳ６Ｓ）の形態で存在しうる。ウロン酸残基はβ−Ｄ−グルクロン酸（ＧｌｃＡ）かまたはα−Ｌ−イズロン酸（ＩｄｏＡ）のいずれかでありうる。後者はまた、２− Ｏ−硫酸形態（ＩｄｏＡ２Ｓ）で存在しうる。ヘパラン硫酸の正確な組成は、採取源、さらには細胞増殖の段階によってさえも有意に変わる。ヘパリンは、ヘパラン硫酸の一層広範に変形された生合成形態であることが示されている。ヘパリンはＩｄｏＡ２ＳおよびＧｌｃＮＳ６Ｓ残基の含有比率が高く、それゆえ、硫酸化の度合いの一層高い物質である。ヘパリンは生体内ではマスト細胞と結合して認められており、ヘパラン硫酸のように脈管化組織の細胞外マトリックスと結合しては認められていない。ヘパリンは、抗凝血剤および抗血栓症剤として一般に用いられている。市販のヘパリンは、通常、ブタまたはウシの粘膜、またはウシの肺組織から単離される。ヘパリンの抗凝血作用は、主として、循環タンパク質である抗トロンビンIII （ＡＴ−III）の活性と相互作用し該作用を高める能力にあることが示されている。ＡＴ−IIIはセリンプロテアーゼインヒビターであり、血液凝固カスケードに関与するセリンプロテアーゼの多く、とりわけトロンビン（第IIａ因子）および第Ｘａ因子を抑制する。ヘパリンはＡＴ−IIIと相互作用して複合体を形成し、これがトロンビンおよびＸａをＡＴ−III単独の場合よりもはるかに効果的に抑制する。ヘパリンは、特定の高親和性五糖配列（ヘパリン鎖の小部分を表すに過ぎない）を通じてＡＴ−IIIと相互作用する。ヘパリンはまた、他のセリンプロテアーゼインヒビターであるヘパリンコファクターIIとも相互作用してトロンビンの抑制を高める。ＨＣ−IIとの相互反応は異なる構造上の要件によって作動し、ＡＴ−III相互反応と同じ程度の特異性を有しているとは思えない。ヘパリンの強力な抗凝血に関連する作用は、残念ながら他の可能な適応症の多くへの使用を排除している。とりわけ、ヘパリンの抗凝血作用は、他の治療上の利益を与える投与量で投与した場合に出血や出血性合併症へ導くことがある。この要因によって、ヘパリン分子の他の生物学的特性から該分子の抗凝血作用を選択的に切り離すことへの関心がもたらされている。この切り離し戦略はまた、他の所望の選択的および治療学的特性を選択的に切り離しまたは保持することへも応用しうる。選択性の一層高い薬剤は、毒性および／または禁忌作用の危険を減少させるであろう。また、特異性は全体的なバイオアベイラビリティーおよびヘパリンとの相対における該薬剤の効能を高めることができるであろう。ヘパリン／ヘパラン硫酸は、多数の広範囲のタンパク質と相互作用することが示されており、数多くの生物学的機能および活性を伴う。この多薬剤性（poly-p harmacy）は、ヘパリン様物質が無数の細胞外マトリックス存在物および循環しているレセプター、タンパク質および酵素の作用に結合および抑制または刺激する能力によって媒体される。ヘパリンおよび関連化合物の広範な薬理作用は、多数の適応症、とりわけ心血管関連疾患において相当の治療上の関心が寄せられている。止血および血栓症に関連する疾患状態へのヘパリンに基づく治療の有用性について相当数の先例が存在し、最近ではアテローム性動脈硬化症、血管形成、転移および炎症に関連する状態における関心が広がっている。血栓性および増殖性の血管疾患を治療するため、ヘパリンに基づく治療を開発することに多大の努力が払われている。しかしながら、かなりのインビトロおよび逸事の多いインビボでの証拠にも拘わらず、ヘパリン由来の物質を抗炎症に使用することには比較的関心が払われていなかった。ヘパリン由来化合物の抗炎症特性の幾つかには、補体活性の抑制、ヘパラナーゼ依存性Ｔリンパ球移動の抑制、白血球血小板相互作用の抑制が含まれる。加えて、ヘパリンおよび誘導体は、ＤＴＨ、ＥＡＥ、虚血再潅流および喘息の動物モデルにおいて活性が示され、喘息および虚血（心筋梗塞）を患うヒトにおける利益についても逸事の多い記載がなされている。上記のように、強力な抗凝血作用のために心血管性疾患の治療に使用することが躊躇されている。特に、ヘパリンの抗凝血作用は、治療学的投与量で投与したときに出血および出血性合併症に導く。ショックの病理学一般に、ショックは、血液容量または心拍出量または血液の再分布の減少の結果、有効循環容量が不適切となることによる細胞および組織に広がった低灌流として記載されうる。ショックは、通常、主として該状態に導く血行力学的障害に基づいて４つのタイプに分類される：（１）心原性ショック；（２）循環血液量減少性ショック；（３）敗血症性ショックおよび（４）神経原性ショック。広範な研究の結果、ショックに関連する病的状態に導く一般的メカニズムが理解されるようになっている。しかしながら、該病的状態を媒体する無数の生化学的プロセスに至っては理解され始めたばかりである。これは炎症に関連した事象の複雑なカスケードに関係し、循環血液量減少性ショックおよび敗血症性ショックと関連して研究されたものである。これらショックは、内皮その他の器官細胞、白血球および血小板の細胞膜への毒性障害、内因系および外因系血液凝固経路の活性化、補体活性化および血管作用性および化学走化性断片Ｃ５ａおよびＣ３ａの生成をもたらす。循環血液量減少性ショック（２）および該状態の研究モデルが、ショードリー（Chaudry）およびアヤラ（Ayala）の「Immunological Aspects of Hemmorrhage 」（ランデス（R.G.Landes Co.）、オースチン、テキサス、１９９２）に記載されている。一般に、血液の喪失に伴う血流の減少による循環血流量減少性ショックの場合、血流の「軟泥化（sludging）」および赤血球による毛細管の「詰まり（plugging）」を生じる。このことが今度は細胞および組織への酸素および栄養物の不充分な提供、他の代謝物の不充分なクリアランス、および好中球および血小板の活性化に導く。この酸化体ストレス（低酸素症）および内皮およびマクロファージからの他の因子の放出がアラキドン酸カスケードおよび化学誘引物質および炎症メディエーターの産生を刺激し、さらに好中球の浸潤をもたらす。好中球、血小板、マクロファージおよび補体カスケードの活性化は、サイトカインを含む数多くの生物学的に活性な因子の放出へと導く。これら因子は内皮、好中球および白血球の表面上の接着分子の発現を刺激し、これによって好中球および白血球を結合させ、最終的に細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および血管および毛細管の基底膜を通して移行させる。この移行または管外遊出は、活性化好中球、白血球および／または血小板によって放出されるマトリックスメタロプロテイナーゼ、セリンプロテアーゼおよびエンドグリコシダーゼ（すなわち、ヘパリナーゼ）を含む数多くの細胞外マトリックス分解酵素の作用によるものである。ＥＣＭおよび基底膜の損傷の結果、血管透過性の増大、および好中球および白血球による器官への浸潤を生じる。類似の一連の事象が敗血症性ショックの場合に起こるが、最も重要なことに、炎症応答の基本メディエーターは循環血液量減少性ショックを引き起こすものとは同じではない点が異なる。敗血症性ショックにおける初期血液容量の減少は、内毒素が好中球活性化および炎症を媒体するサイトカイン（ＴＮＦ、ＩＬ−１およびＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β等）の放出を刺激した後に血液貯留の結果として起こる。循環血液量減少性ショックと敗血症性ショックとは異なる疾患であることを心に留めておくことは重要である。循環血液量減少性ショックは、循環系に対する外傷（たとえば、銃の狙撃による傷、自動車での怪我、火傷、剌し傷等）を含む多くの事象によって引き起こされうる循環系の全身虚脱である。これに対し、敗血症性ショックは細菌感染によって引き起こされる。それゆえ、上記のように、これら疾患の原因は区別すべきものである。虚血／再潅流障害（Ｉ／ＲＩ）は、減少した血流状態（虚血）の後に炎症に媒体された細胞および器官の損傷を生じる他の例である。循環血液量減少性ショックに伴う血管障害およびその結果としての種々の器官への好中球および白血球の浸潤は、組織損傷、そして最終的には多臓器不全（ＭＯＦ）および急性呼吸障害症候群（ＡＲＤＳ）へと導く。破壊性の因子およびメディエーターは数多く、サイトカイン、酵素および種々の他の炎症性因子が含まれる。ＭＯＦおよびＡＲＤＳは重篤なショックで起こり、しばしば死に至る。ショックに有効な治療剤であるためには、微小血管系および種々の器官（肝臓、腎臓、心臓、脾臓および腸）を不全から保護することができなくてはならない。出血性ショックおよびＩ／ＲＩ損傷における胃腸機能の保護および回復の重要性が報告されており、敗血症性合併症の減少、および長期の生存と関係付けられている。ヘパリンとショックショードリーら（Am.J.Physiol.２５９（Regulatory Integrative Comp.Physi ol.２８）Ｒ６４５−Ｒ６５０、１９９０およびJ.of Trauma（１９９２）３２（４）：４２０〜４２６）は、前ヘパリン処理（pre-heparinization）が、ＭＯＦ、そしてしばしば死に至らしめる循環血液量減少性ショックの結果としての有害な全身作用を変調しうることを示ている。この効果は、ラットの出血性ショックモデル（循環血液量減少性ショックまたは外傷性ショック）（ショードリーら、Circ.Shock （１９８９）２７：３１８）で示されている。このモデルは、ショックを誘発する前に動物をヘパリン処理しない（臨床現場で一層代表的な状況である）点で主として他の出血性ショックモデルと異なる。このモデルでは、前ヘパリン処理した動物は、ヘパリン処理せずに他の点では出血性ショックに供し同様に蘇生させた動物に比べて器官機能が有意に改善していることが観察された。蘇生の間に投与したヘパリンも同様の有利な効果を有することが後に示され、保護のために前以てヘパリン暴露する必要はないことが示された。ヘパリンがショックの有害な病理状態を変調させるメカニズムはまだよくわかっていない。ヘパリンおよび関連するヘパラン硫酸構造が無数の循環するタンパク質および酵素、および多数の細胞表面レセプターと相互作用することが知られている。ヘパリン／ヘパラン硫酸のこれら生物学的活性および機能は、多数の化学的、組成的および物理的特性に依存しており、それには（１）糖の組成；（２）官能基の分布；（３）電荷密度；（４）硫酸／カルボン酸比；および（５）分子量が含まれる。後者については、出血性ショックモデルにおいてヘパランの変調効果がヘパリンポリマーの分子量に直接的に関係しないことが示されている。というのは、低分子量（ＬＭＷ）のヘパリン（平均ＭＷ３〜４ｋＤａ）がほぼ等価な効果を有するからである（ショードリーら、Circ.Shock（１９９１）３４：２５）。血小板機能を調べたヘパリンを用いた循環血液量減少性ショックモデルにおいて、ヘパリンの抗凝血作用はその作用の直接の原因ではないと結論された（ラナ（Rana）ら、J.of Trauma（１９９２）３２（４）４２０）。このことは、ＬＭＷヘパリンデータによって、およびヘパラン硫酸（低い抗凝血活性を有し、ショック後に腸機能を保持するのに有効であることがわかった）を用いた研究から得られたデータによって支持された（シング（Singh）ら、J.of Trauma（１９９３）３４：６４５）。残念ながら、上記に示した仕事にも拘わらず、これら研究のいずれも、非抗凝血性組成物が循環血液量減少性ショックを治療または予防するのに有効であるための基本的な構造上の要件を解明していないことを心に止めておくことは重要である。非抗凝血性（ＮＡＣ）ヘパリン最もよく知られたヘパリンの作用である抗凝血作用は、多数の可能な臨床応用に使用することを妨げている。それゆえ、抗凝血作用およびインビボでの出血特性が減少した治療学的使用のためのヘパリン様化合物を同定するための相当の努力がなされ、現在もなされ続けている。一般に、２つのアプローチがなされている。第一のアプローチは、抗凝血作用を失った天然のヘパリンの形態を同定することである。このカテゴリーに包含されるものとしては、解重合および標準的なクロマトグラフィー分離法によって、またはＡＴIIIアフィニティー分画化によって得られたヘパリン断片がある。第二のアプローチは、ヘパリンを化学的または酵素的に修飾してその抗凝血作用を減少させるものである。これら研究のあるものにおいては、ヘパリン断片は化学的修飾の前または後に調製することができる。この後者のアプローチに用いる方法としては、（１）Ｎ−脱硫酸、Ｎ−修飾；（２）Ｎ，Ｏ−脱硫酸およびＮ−修飾；（３）過度の硫酸化（oversulfation ）；（４）カルボキシル還元または硫酸化；および（５）過ヨウ素酸酸化および還元が挙げられる。ＮＡＣヘパリンを生成するための上記アプローチのすべてが、治療学的有効量で投与したときに低い抗凝血作用および出血時間に対する限られた効果という治療学的基準を達成する化合物に導くというわけではない。ある種の組成物はこれら基準を達成するかもしれないが、それら組成物はまたしばしば目的の作用を失っている。他の場合には、抗凝血作用は減少させることができるが、出血に対するインビボでの効果は有用な投与量では上昇したままである。これらの幾つかは、補体活性化の抑制およびＣ５ａ、細胞外マトリックス劣化酵素（エラスターゼ、カテプシンＧおよびヘパリナーゼ）の抑制に関係することが報告されており、幾つかのものはショックの治療に有用であるとして提唱されている。たとえば、米国特許第４,９１６,２１９号明細書（抗凝血作用が減少した抗補体医薬組成物を記載）を参照。これら組成物は、ヘパリンをヘパリナーゼで解重合して６糖単位から約２４糖単位にすることによって製造されたヘパリンの小さな鎖断片からなる。データは示されていないが、かかる組成物は敗血症性ショックの治療に有用であろうことが示唆された。かかる組成物を循環血液量減少性ショックの治療に用いることについては記載がない。ＮＡＣヘパリンに関して、殆どの場合に、特定のヘパリン関連作用の正確な要件は知られていないこと、および修飾したヘパリンの作用は予測できないものであることを心に止めておくことは重要である。非抗凝血性の解重合した低分子量ヘパリンの一例が米国特許第４,９９０,５０２号に記載されている。それは、ヘパリンを過ヨウ素酸で処理し、ついで塩基で解重合し、過ヨウ素酸処理で生成したアルデヒドを還元することを示している。得られた物質は、１７〜３３残基を含有し、式：ＩｄｏＡ−ＧｌｃＮＡｃ２ＳまたはＩｄｏＡ−ＧｌｃＮＳ２Ｓ（式中、グルコサミン残基は３および／または６位で任意の仕方で硫酸化されており、ＩｄｏＡ残基の幾つかは過ヨウ素酸酸化の結果得られる開裂したＩｄｏＡまたはＧｌｃＡで置換されていてよい）で示される複数の残基を含有するポリマーの混合物を含むとされている。これら短くなったポリマー鎖は、ＡＴIIIへの結合部位を欠くが平滑筋増殖を抑制することができ、組織修復の促進、じゅく腫形成性病変の予防、および転移の展開の予防を含む生理学的作用を有するとされている。かかる組成物はまた、ショックの状態の予防にも有用であると言われている。しかしながら、かかる組成物を循環血液量減少性ショックの治療に用いることについては何ら記載がない。ヘパリン／ヘパラン硫酸を過ヨウ素酸で処理することはまた他の研究者によっても報告されている。たとえば、フランソン（Fransson,L.−A.）およびルイス（Lewis,W.）（ＦＥＢＳＬett（１９７９）９７：１１９〜１２３）は、ヘパリン／ヘパラン硫酸の過ヨウ素酸処理および水素化ホウ素ナトリウムによる還元またはアルカリ性媒体中での断片化に関する種々の条件を記載している。さらに、フランソンら（Carbohydrate Res（１９８０）８０：１３１〜１４５）は、過ヨウ素酸を用いて製造した種々の形態のヘパリンの化学を研究した。一つの研究において、過ヨウ素酸で処理した後、塩基中でβ−脱離させて断片化を得ている。彼らはさらに、ヘパリンを過ヨウ素酸で処理した後、部分酸加水分解して鎖の断片化および官能基の部分的破壊を行うことを報告している。非抗凝血性ヘパリンの他の例はカス（Casu,B.）らによって記載されている（A rzneim Forsch/Drug Res （１９８６）３６：６３７〜６４２）。彼らは、過ヨウ素酸酸化がヘパリンの抗脂血症（リポタンパクリパーゼ放出）作用に及ぼす効果を研究した。この研究では、ヘパリンを過ヨウ素酸で酸化し、生成物を水素化ホウ素で還元した。著者らは生成物が出発物質と同じ分子量を有すると述べているが、該論文中に示された図面から有意の解重合が起こっていることは明らかである。ＰＣＴ／ＳＥ９２／００２４３は、出発物質のヘパリンよりも大きな分子量を有し、過ヨウ素酸酸化、アルカリによる部分解重合、およびその後の水素化ホウ素還元によって製造される非抗凝血性ヘパリンを示している。ＰＣＴＷＯ／９２／１７１８８（１９９２年１０月１５日発行）には、ヘパリンを試薬で処理してＮ−脱アセチル化し、ついでビシニルジオールおよびビシニルＯＨ／ＮＨ２を完全にアルデヒドに変換する条件下で過ヨウ素酸で処理し、ついで該アルデヒドを断片化が回避される条件下でアルコールに還元することによって製造されるＮ−脱アセチル化ヘパリン様物質が記載されている。ＰＣＴＷＯ／９２／１７１８７（１９９２年１０月１５日発行）には、ヘパリン／ヘパリン硫酸を過ヨウ素酸で酸化してジオールをジアルデヒドに変換し、得られたアルデヒドを断片化が回避される条件下で還元することによって製造されるＮＡＣヘパリン様物質が記載されている。米国特許第４,８４７,３３８号には、ヘパリンをヘパリナーゼで解重合することによって製造させる、ヘパリンに比べて抗凝血作用ガ減少したある種のヘパリンオリゴ糖が記載されている。データは示されていないが、かかる断片は敗血症性ショックおよび免疫疾患の治療に有用であると言われている。ジャセジャ（Jaseja,M.）ら（Can.J.Chem.（１９８９）６７：１４４９〜１４５６）によって記載された２−Ｏ脱硫酸ヘパリン組成物は非抗凝血作用を有しない。上記ＮＡＣヘパリンのうち、過ヨウ素酸酸化の後に塩基解重合かまたはヘパリナーゼを用いた解重合によって生成した断片のみがショックまたはショック関連症候群の治療に治療学的に有用であることが示唆されている。米国特許第４,９１６,２１９号および同第４,９９０,５０２号参照。しかしながら、これら組成物がかかる作用を有することを実際に示すデータは示されていない。かかる組成物がショックの治療に有用であるかもしれないことは、抗補体作用を唯一の前提としている。この作用とショックまたはショック関連症候群を治療するための有利な効果との相関は示されていない。補体活性化の抑制が補体断片Ｃ５ａおよびＣ３ａの生成を妨げることは注意する価値がある。これら断片は、ショックに関与すると思われる少なくとも十数個の異なるメディエーターの一つである。今日、Ｃ５ａおよびＣ３ａの生成の単なる抑制は、敗血症性ショックの治療に有利であるとは示されていない。さらに、これら組成物を循環血液量減少性ショックの治療に用いることについては記載がない。上記報告とは異なり、今日、ヘパリンの化学修飾によって製造される実質的に解重合されていないポリマーからなる、循環血液量減少性ショックまたはショック関連症候群の治療に有用なＮＡＣヘパリン組成物に関する報告は存在しない。さらに、化学修飾したヘパリンの解重合の結果得られるかまたはヘパリン断片の直接化学修飾によって製造される、かかる治療に有用なタイプのＮＡＣヘパリン断片に関する報告は存在しない。循環血液量減少性ショックまたはショック関連症候群の治療に有利に応用できるＮＡＣヘパリン組成物をさらに利用できるようにすることが、医者がこれら疾患を治療するための広範囲の薬剤を提供することになるであろうことが理解されるであろう。発明の要約本発明の第一の目的は、実質的に抗凝血作用を欠くある種の化学的に修飾したヘパリン様物質の組成物を有効量投与することによる、循環血液量減少性ショックまたはショック関連症候群の治療方法を記載することである。本発明の第二の目的は、実質的に抗凝血作用を欠くある種の化学的に修飾したヘパリン様物質の組成物であって実質的に解重合されていない化学修飾ヘパリンポリマーからなるものを有効量投与することによる、循環血液量減少性ショックの治療方法を記載することである。本発明の第三の目的は、実質的に抗凝血作用を欠くある種の化学的に修飾したヘパリン様物質の組成物であって修飾したヘパリン断片からなるものを有効量投与することによる、循環血液量減少性ショックの治療方法を記載することである。本発明の第四の目的は、実質的に抗凝血作用を欠く循環血液量減少性ショックの治療に有用なある種の化学的に修飾したヘパリン様物質の組成物であって、実質的にＮ−アセチル化されているか、またはヘパリンを過ヨウ素酸酸化した後に水素化ホウ素還元することによって得られたものではないものを記載することである。本発明の第五の目的は、心臓、肝臓、腎臓、胃腸管の機能を含むある種の器官の機能の回復、または微小血管構造の劣化の保護および免疫機能の改善を含む、循環血液量減少性ショック、ショック症候群のある種の個々の臨床的側面について治療学的に望ましい結果を得る方法を記載することである。かかる有利な結果は、本明細書に記載するＮＡＣヘパリン投与計画単独またはその一部として実現することができる。図面の簡単な説明図１Ａは、出血後に晶質（crystalloid）蘇生の開始後３時間および５時間に偽操作した（sham-operated）（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、ヘパリン処理した（ヘパリン）、および２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理したラットにおけるインドシアニングリーン（ＩＣＧ）のクリアランス（能動輸送プロセス）の最大速度（Ｖ_max）の変化を示す棒グラフである。外傷−出血および蘇生プロトコールおよびヘパリンまたは修飾ヘパリンIII注入法は実施例３に記載してある。データは平均±ＳＥとして示してあり、一方向（one-way）ＡＮＯＶＡおよびチューキー試験（Tukey's test）により比較してある。偽操作群と比べて＊Ｐ＜０.０５；食塩水処理群と比べて＊Ｐ＜０.０５。図１Ｂは、出血後に晶質蘇生の開始後３時間および５時間に偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、ヘパリン処理した（ヘパリン）、および２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理したラットにおけるインドシアニングリーン（ＩＣＧ）移行の効率（Ｋ_m）の変化を示す棒グラフである。詳細については図１Ａの説明を参照。図２Ａは、晶質蘇生の開始後３時間および５時間に偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、ヘパリン処理した（ヘパリン）、および２−Ｏ− 脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理したラットにおける平均動脈圧（ＭＡＰ）の変化を示すグラフである。外傷−出血、ジルチアゼム投与、および心拍出量（ＣＯ）測定については材料および方法において記載してある。「ＯＮ」および「ＯＦＦ」は、１ｍｌの通常食塩水、ヘパリン、または２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣヘパリン溶液の注入の開始および完了を示す。各群には６匹の動物を用いた。外傷−出血および蘇生プロトコールおよびヘパリンまたは２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣヘパリン注入法は実施例３に記載してある。データは平均±ＳＥとして示してあり、一方向ＡＮＯＶＡおよびチューキー試験により比較してある。偽操作群と比べて＊Ｐ＜０.０５；食塩水処理群と比べて＊Ｐ＜０.０５。図２Ｂは、晶質蘇生の開始後３時間および５時間に偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、ヘパリン処理した（ヘパリン）、および２−Ｏ− 脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理したラットにおける心拍数（ＨＲ）の変化を示すグラフである。詳細については図２Ａの説明を参照。図３にはグラフＡ、ＢおよびＣが含まれ、晶質蘇生の開始後３時間および５時間に偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、ヘパリン処理した（ヘパリン）、および２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理したラットにおける心拍出量（ＣＯ、Ａ）、１回拍出量（ＳＶ、Ｂ）、および全末梢抵抗（ＴＰＲ、Ｃ）の変化を示す。詳細については図２Ａの説明を参照。図４にはグラフＡ、Ｂ、ＣおよびＤが含まれ、晶質蘇生の開始後３時間および５時間に偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、ヘパリン処理した（ヘパリン）、および２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理したラットにおける肝臓（Ａ）、腎臓（Ｂ）、脾臓（Ｃ）、および小腸（Ｄ）での器官表面の微小血管血流量（ＭＢＦ）の変化を示す。詳細については図２Ａの説明を参照。図５Ａは、出血および蘇生後に偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、ヘパリン処理した（ヘパリン）、ヘパリン硫酸処理した（ヘパリン硫酸）、デルマタン処理した、２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣヘパリン、およびＮ−アセチル化ヘパリン処理した（Ｎ−アセチルヘパリン）動物における２時間後のＤ−キシロース吸収の変化を示すグラフである。図５Ｂは、図５Ａと同じ一般型の出血４時間後のＤ−キシロース吸収の変化を示すグラフである。図６は、乳酸加リンゲル注射液による蘇生の終了２時間および４時間後における偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、および２−Ｏ,３− Ｏ脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理した群における心拍数（ＨＲ、Ａ）、１回拍出量（ＳＶ、Ｂ）および心拍出量（ＣＯ、Ｃ）における変化を示す。各群には６匹の動物を用いた。データは平均±ＳＥとして示してあり、一方向ＡＮＯＶＡおよびチューキー試験により比較してある。図７は、乳酸加リンゲル注射液による蘇生の終了２時間および４時間後における偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、および２−Ｏ,３− Ｏ脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理した群における平均動脈圧（ＭＡＰ、Ａ）および全末梢抵抗（ＴＰＲ、Ｂ）における変化を示す。各群には６匹の動物を用いた。データは平均±ＳＥとして示してあり、一方向ＡＮＯＶＡおよびチューキー試験により比較してある。図８は、乳酸加リンゲル注射液による蘇生の終了２時間および４時間後における偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、および２−Ｏ,３− Ｏ脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理した群における肝臓（Ａ）、腎臓（Ｂ）、脾臓（Ｃ）および小腸（Ｄ）での器官表面の微小血管血流量（ＭＢＦ）の変化を示す。各群には６匹の動物を用いた。データは平均±ＳＥとして示してあり、一方向ＡＮＯＶＡおよびチューキー試験により比較してある。図９は、乳酸加リンゲル注射液による蘇生の終了２時間および４時間後における偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、および２−Ｏ,３− Ｏ脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理した群におけるイドシアニングリーン（ＩＣＧ）クリアランスの最大速度（Ｖ_max、Ｂ）および移行効率（Ｋ_m、Ｂ）における変化によって測定される肝機能における変化を示す。各群には６匹の動物を用いた。データは平均±ＳＥとして示してあり、一方向ＡＮＯＶＡおよびチューキー試験により比較してある。図１０は、乳酸加リンゲル注射液による蘇生の終了２時間および２時間後における偽操作した（シャム）、通常食塩水処理した（食塩水）、および２−Ｏ,３ −Ｏ脱硫酸ＮＡＣヘパリン処理した群におけるキシロース吸収によって測定される腸機能における変化を示す。各群には６匹の動物を用いた。データは平均±ＳＥとして示してあり、一方向ＡＮＯＶＡおよびチューキー試験により比較してある。図面中の略語は以下のように定義される：「２−ＯＮＡＣ」は２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣを表し、「２−Ｏ,３−ＯＮＡＣ」は２−Ｏ,３−Ｏ脱硫酸ＮＡＣを表す。発明の詳細な記載本明細書中に言及し引用する全ての刊行物および特許出願は、各個々の刊行物または特許出願がその全体において明確かつ個別に記載されたと同程度に参照のために引用されていると理解すべきである。本発明の循環血液量減少性ショックまたはショック症候群の治療方法を開示および記載する前に、本発明が記載した特定の手順および処方に限られるものでないことを理解すべきである。というのは、かかる手順や処方はもちろん、当業者には理解されるであろうように変更可能だからである。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書に使用する術語は特定の態様を記載する目的でのみ使用するものであって本発明を限定することを意図するものではないことも理解すべきである。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用する単数形の表示は、特に断らない限り複数の表示を包含することにも注意すべきである。それゆえ、本発明の開示内容を読む当業者には明らかであるように、たとえば、「ヘパリン様物質」はヘパリン様物質の混合物を包含し、「方法」は本明細書に開示および記載した一般的方法に等価な１または２以上の方法を包含する。本発明の理解は、本明細書に使用したある種の術語を簡単に解説することによって容易になるであろう。本明細書において使用する「治療」なる語は、ショックの有害作用を予防、減少またはいずれかの仕方で改善するために循環血液量減少性ショックの１または２以上の臨床的兆候を患う動物、好ましくはヒトに適用する方法として定義される。循環血液量減少性ショックなどの多くの疾患のメカニズムは複雑であり、複数の原因の結果である。従って、本明細書において使用する「治療」とは、１または２以上の原因または事象を妨害し、それによって治療しようとする個体に有利な影響を有する方法を示す。循環血液量減少性ショックの「治療」には、おそらく実際にはショックの原因を完全に取り除くことなく、兆候の開始を予防、遅延またはいずれかの仕方で減少させることを包含することが理解されるべきである。従って、本発明の組成物を用いた治療は、治療を受けている個体が最終的にショックに屈服するとしても、寿命を延ばしおよび／または生活の質を改善することができる。本発明による治療は、非抗凝血性ヘパリン様化合物の単一の投与であってもよいし、または適当な流体蘇生の後の所定の期間にわたって該化合物を何回か投与してもよい。本発明の方法は主として循環血液量減少性ショックの治療に用いるものであるが、該疾患の発病のハイリスクにある患者において該ショックの予防に適用可能であることも注意する必要がある。たとえば、出血、外傷、火傷、多尿、嘔吐、および下痢を含むある種の状態は循環血液量減少性ショックを発病するハイリスクを有する。Circulatory Shock、９１：７を参照。それゆえ、これら状態の一つのために入院している患者は、循環血液量減少性ショックを予防するために本発明の組成物を投与することができる。従って、本明細書において循環血液量減少性ショックの治療方法を言及しているが、ショックの予防方法をも包含することが当業者によって理解されるであろう。「ヘパリン／ヘパラン硫酸」または「ヘパリン」は、抗凝血剤としてのヘパリンを調製するための常法によって組織から得られたかまたは他の仕方で合成して組織から得られたものに対応する調製物を意味する。コンラッド（Conrad,H.E. ）、Heparin and Related Polysaccharides、Vol.５６、ｐ１８、ニューヨークアカデミーオブサイエンス、１９８９年６月７日（参照のため本明細書中に引用する）参照。この調製物は、ヘパラン硫酸の特性としてＤ−グルクロン酸（ＧｌｃＡ）残基、およびヘパリンの特性としてＬ−イズロン酸（ＩｄｏＡ）残基を含有していてよい。しかしながら、ＧｌｃＡおよびＩｄｏＡは両方ともヘパラン硫酸およびヘパリンの両者に含まれるけれども、これらは異なる比率の量で含まれる。ＩｄｏＡ／ＧｌｃＡ比はヘパラン硫酸がヘパリン様になるにつれて上昇する。上記背景技術において記載したように、Ｄ−グルクロン酸のＬ−イズロン酸への変換はヘパラン型中間体中のＧｌｃＡ残基の５炭素でのエピマー生成（epimer ization）の結果である。かかるエピマー生成および変換に関与する工程の結果は当該技術分野で理解されている。ヘパリン断片または低分子量ヘパリンとは、平均分子量が５〜３０ｋＤａの範囲のヘパリン調製物を平均分子量が２〜６.５ｋＤａの範囲の組成物に解重合させる数多くの試薬の一つおよび方法で処理したヘパリンを意味する。そのような試薬および方法は当該技術分野で知られており、その例としては亜硝酸解重合、ベンジル化後にアルカリ解重合する方法、過ヨウ素酸解重合、アルカリ処理、およびヘパリナーゼを用いた酵素的解重合が挙げられる。ハーシュ（Hirsh,J.）およびレビン（Levine,M.）、Blood（１９９２）７９：１〜１７、および米国特許第４,９９０,５０２号規則的構造を有する低分子量ヘパリン、その製造およびその生物学的使用、発明者はロルモー（Lormeau）ら；および米国特許第５,１１０ ,９１８号ＥＤＴＡ不含ヘパリン、ヘパリンフラクションおよび断片の製造法、発明者はカスら参照。「ヘパリン／ヘパラン硫酸」または「ヘパリン」調製物は、所望ならヒト組織を含む種々の噛乳動物組織から得ることができる。一般に、ブタまたはウシの採取源を用いるが、脈管化組織が好ましい。ヘパリン出発物質の好ましい採取源はブタの腸粘膜であり、この組織採取源から調製した「ヘパリン」と表示した調製物は市販されている。一般に、ヘパリン出発物質は、選択した組織源を自己消化させ、組織をアルカリで抽出し、ついでタンパク質を沈殿させ、ついで上澄み液から酸処理によってヘパリン−タンパク質複合体を沈殿させることによって調製する。この複合体を、エタノールやアセトンまたはその混合物などの極性非水溶媒を用いて再沈殿させ、ついでエタノールなどの有機溶媒で抽出した脂肪を除去し、トリプシンなどのタンパク質分解酵素で処理してタンパク質を除去することによって回収する。ヘパリン出発物質の適当な調製法は、たとえば、チャールズ（Charles,A.F.）らのBiochem J ３０：１９２７〜１９３３に記載されており、この基本手順の変法もまた、コイン（Coyne,E.）のChemistry and Biology of Heparin （１９８１）エルセビエ・パブリッシャーズ（Elsevier Publishers）、ノースホランド、ニューヨーク、ランブラッド（Lunblad,R.L.）ら編などに記載されたものによって知られている。「ＮＡＣ」および「ＮＡC組成物」は、本明細書において非抗凝血性ヘパリン様物質をいうものとして同じ意味で用いられる。ＮＡＣ組成物は、ヘパリンの特性の幾つかを有するが実質的に非抗凝血性であるヘパリン、ヘパリン断片である。詳しくは、本発明のＮＡＣ組成物は、標準アッセイ手順によって明らかなように、また市販のヘパリンと比較されるように、ヘパリンに比べて抗凝血作用が実質的に減少した化学的に修飾したヘパリンまたはヘパリン断片またはその誘導体である。そのようなＮＡＣ化合物は、ヘパリンの抗凝血作用の約８５％を欠くのが好ましい。最後に、本明細書において、ＮＡＣ化合物はヘパリンの化学修飾によって製造される。そのような「化学修飾」は、適当な試薬および反応条件を用いたヘパリンの直接的な化学反応、酵素反応、遺伝子操作した細胞の使用等によるものであってよく、実際、ヘパリンが所望のＮＡＣ化合物に修飾されるいかなる手段をも包含することを意図するものである。また、この定義に包含されるものとして、ヘパリン結合性タンパク質を用いたアフィニティー分画化によって得られるＮＡＣ化合物が含まれ、その場合、かくして得られた画分はＮＡＣ組成物である。この略語以下の略語を単糖またはオリゴマー中に含まれる単糖残基に対して用いる：Ｄ −グルクロン酸＝ＧｌｃＡ；Ｌ−イズロン酸＝ＩｄｏＡ；Ｄ−グルコサミン＝ＧｌｃＮＨ₂；Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン＝ＧｌｃＮＡｃ；Ｄ−グルコサミンＮ−サルフェート＝ＧｌｃＮＳ；２,５−アンヒドロマンノース＝Ａｍａｎ；２,５−アンヒドロマンニトール＝ＡＭａｎＨｈ。本明細書に記載するヘパリン組成物の分析において得られた二糖残基を示すのに用いる略語は以下の通りである：ＩＳＭＳはＩｄｏＡ（２−サルフェート）− ＡＭａｎＨ（６−サルフェート）と定義される；ＧＭＳ₂はＧｌｃＡ−ＡＭａｎＨ（３,６−ジサルフェート）と定義される；ＩＳはＩｄｏＡ（２−サルフェート）−ＡＭａｎＨ（６−サルフェート）＋ＩｄｏＡ（２−サルフェート）−ＡＭａｎＨと定義される。各糖残基の表示に際して、適当な略語の下に、Ｏ−結合した硫酸残基の位置を「Ｓ」および該糖残基上の酸素に硫酸残基が結合している硫酸化の位置の数字によって示してある。また、ヘパリン構造の表示において、アルファおよびベータアノマー結合に関与する位置はヘパリンに通常認められるもの、−（グルコサミン−ウロン酸）および−（ウロン酸−グルコサミン）であり、ＤまたはＬ配置も通常関与するものである。サルフェー卜の位置はそれが適用される糖の略語の下に示してあり、それゆえ、たとえば、ＩｄｏＡ−ＧｌｃＮＳ２Ｓ６ＳはＬ−イズロン酸とＤ−グルコサミンＮ−サルフェートとが（１−４）結合した二糖からなり、糖残基の２および６位にそれぞれサルフェートが結合していることを示す。最も一般的な形態において、本発明は、循環血液量減少性ショックまたはショック関連症候群の治療を必要とする動物に実質的に抗凝血作用を欠くある種のヘパリン様物質の有効量を投与することによる該疾患の治療法に関する。ＮＡＣ化合物は種々の手順によって得ることが可能であり、一般的には（これに限られるわけではないが）、市販のヘパリン（一般にブタまたはウシ由来）を出発物質として用い、ついで以下の手順の１または２以上を行うことにより得られる：（１）解重合；（２）Ｎ−脱硫酸、Ｎ−修飾；（３）Ｏ−脱硫酸；（４）Ｎ,Ｏ−脱硫酸およびＮ−修飾；（５）過度の硫酸化；（６）カルボキシル還元；（７）過ヨウ素酸酸化および還元；および（８）ＡＴIIIアフィニティー分画化。ＰＣＴ特許出願ＷＯ９２／０１００３およびＷＯ９２／０２２３２（ある種の非抗凝血性ヘパリンを示す）を参照。それゆえ、本発明のＮＡＣ化合物は、ヘパリンまたはヘパリン硫酸を本明細書に記載する１または２以上の化学的処理に供することによって得ることができる。たとえば、解重合を亜硝酸の存在下で行うことができる。脱アシル化を酵素で処理することによって行うことができる。ＰＣＴＷＯ／９２／１７１８７−８は、かかる化学的処理手順を開示および記載するものとして参照のため本明細書中に引用する。かかるＮＡＣヘパリンの他の例としては、部分的または完全にＮ−脱アセチル化したヘパリン（グオ（Y.Guo）およびコンラッド（H.E.Conrad）、Anal.Bioche m .（１９８９）１７６：９６〜１０４；およびシャックリー（Shaklee）およびコンラッド、Biochem J.（１９８４）２１７：１８７〜１９７）を出発物質とし、ついで（ａ）適当なＮ−硫酸化試薬でＮ−硫酸化して（アヨット（L.Ayotte）およびパーリン（A.S.Perlin）、Carbohydr.Res.（１９８６）１４５：２６７〜２７７）スルファミノ含量の高い、従ってよりアニオン性の類似物を得るか、（ｂ）無水物（Ｒ（ＣＯ）₂Ｏ（式中、Ｒ＝−（ＣＨ₂）_nＨおよびアリール））でＮ−アシル化して親水性置換基（親水性相互作用により生物学的に活性なタンパク質への結合を促進）を有する類似物を得ることによって調製したＮ−修飾ヘパリンが挙げられる。別のＮ−修飾類似物は、公知の手順を用いてヘパリンを部分的または完全にＮ−脱硫酸し（アヨットおよびパーリン、Carbohydr.Res.（１９８６）１４５：２６７〜２７７）、ついで無水物（Ｒ（ＣＯ）₂Ｏ（式中、Ｒ＝ −（ＣＨ₂）_nＨおよびアリール））でＮ−アシル化してアニオン電荷の減少したヘパリン組成物を得ることによって調製することができる。本発明の一つの側面が、患者の循環血液量減少性ショックを治療するためにＮＡＣヘパリンを選択する場合に好ましいある種の特徴および化学的特性の予期せぬ発見にあることを認識するのは重要である。たとえば、本発明者らは、Ｎ− アセチル化ヘパリンが不活性であることを示す実験によって明らかにされるように、実質的にＮ−硫酸化した組成物が有効であることを発見した。第二に、ある種の実質的に解重合していない過ヨウ素酸酸化し水素化ホウ素還元したＮＡＣヘパリン組成物もまた不活性である。以下に記載するアッセイにおいて実質的に不活性であることが示された組成物は、米国特許出願第７５３,２９９号明細書（１９９１年９月３日出願）に記載されている。それゆえ、本発明において用いるＮＡＣヘパリン組成物は、実質的にＮ−硫酸化されたものであり、実質的に解重合されておらず過ヨウ素酸酸化され水素化ホウ素還元されたものである。従って、この最後のクラスを除いてＮＡＣまたはＮＡＣヘパリンの定義はそのような組成物をすべて包含することを意図する。米国特許出願第９４４,８０４号明細書に記載された２−０,３−Ｏ脱硫酸したＮＡＣヘパリン組成物は好ましい組成物である。さらに好ましいのは、本明細書に記載する２−０,３−Ｏ脱硫酸したヘパリン断片である。そのような断片はサイズが減少しているため、非常に低い抗凝血作用を示し、有利なバイオアベイラビリティーおよび薬動学的特性を有する。実質的に断片化していない２−０,３−Ｏ脱硫酸ヘパリンかまたは２−０,３− Ｏ脱硫酸ヘパリン断片のいずれかを含む非抗凝血性ヘパリン様物質の投与は、一般にグリコサミノグリカン組成物に適した経路によって行われ、一般に注射などの全身投与を含む。長期間にわたる連続注射を容易に続けることができるので、静脈注射が特に好ましい。同様に好ましいのは、管腔内投与によるまたは浸透ポンプまたはインプラントを用いた外膜投与による脈管系への導入である。典型的なインプラントは、コラーゲン、ポリラクテート、ポリアセテート／ポリグリコシド混合物などの生分解性の物質を含む。これらはパッチ剤またはビーズ（beads）として調合することができる。典型的な投与量は、５〜３０日、好ましくは７〜１４日の期間にわたる定量にて０.１〜１０ｍｇ／ｋｇ／時の範囲である。特に好ましい投与量は、約０.３ｍｇ／ｋｇ／時、または７０ｋｇの成人に対しては２１ｍｇ／時または約５００ｍｇ／日である。他の投与法は好ましくはないが、一層便利ではある。低投与量での皮下注射、または静脈注射よりもわずかに高い投与量での経口投与、局所的な損傷のための経膜または経皮その他の局所投与もまた有効である。外傷部位にアクセス可能である場合には、おそらく脈管移植物質中に含まれる支持マトリックスなどの連続放出デバイスによる局所投与は特に有用である。上記投与法に適した調合は当該技術分野で知られており、適当な調合の大要はRemington's Pharmaceutical Sciences 、マック・パブリッシング・カンパニー（Mack Publishing Company）、イーストン、ペンシルベニア、最新版に記載されている。上記のように、好ましいＮＡＣ非抗凝血性ヘパリン様物質は、硫酸化のレベルが減少したヘパリン誘導体であって、実質的に硫酸化されていないウロン酸残基（ＩｄｏＡおよびＧｌｃＡ）を含有しヘパリンの抗凝血作用をほんの少ししか有しない点でヘパリン、ヘパラン硫酸および他の修飾ヘパリンと異なっているヘパリン誘導体である。それは、ヘパリンと同等またはそれ以上の循環血液量減少性ショックの治療における有効性を有する。このヘパリン誘導体は、実質的に断片化されていない２−０,３−Ｏ脱硫酸ヘパリン、または２−０,３−Ｏ脱硫酸ヘパリン断片の組成物である。以下に記載する方法（同時継続中の米国特許出願第０７／９９４,８０４号（１９９２年１２月２２日出願）明細書にも開示されており、参照のため本明細書中に引用する）は、２−０,３−Ｏ脱硫酸のパーセントの制御を可能にする。実施例以下の実施例は、有用な治療学的ヘパリン様物質組成物の製造法および該組成物の循環血液量減少性ショックの治療における投与についての完全な開示および記載を当業者に提供するために記載するものであるが、本発明者らが発明であると認めるものの範囲を限定することを意図するものではない。使用した数字（たとえば、量、温度など）に関しては正確さを確保すべく努力したが、若干の実験誤差および偏差は考慮されるべきである。特に断らない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧もしくはその近傍である。特に定義しない限り、本明細書において用いるすべての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって普通に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載する方法および材料と同様のまたは等価な方法および物質を本発明の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法および材料を記載する。実施例１２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣヘパリンの調製ヘパリン（１ｇ、１６５Ｕ／ｍｇブタ粘膜、ミング・ハン（Ming Han））を脱イオン水（２００ｍｌ）中に溶解し、１.０ＮＮａＯＨを用いてｐＨを１２.８に調節した。ついで、水を加えて全量を２５０ｍｌとし、最終ヘパリン濃度を０ .４％とした。ついで、この溶液を凍結させ、凍結乾固した。得られた外皮様の黄色の残渣を脱イオン水（１００ｍｌ）中に溶解し、５％酢酸水溶液を用いてｐＨを７に調節した。ついで、この溶液を透析し、凍結乾燥して最終生成物（０. ８ｇ）を得た。生成物の¹Ｈ−ｎｍｒスペクトルは、同様にして調製した化合物の特性データ（ジャセジャら、Can J.Chem.、６７：１４４９（１８８９））と一致した。このことは、出発物質のヘパリン中の２−Ｏ硫酸化ＩｄｏＡ残基の＞９０％が生成物中の硫酸化されていないＩｄｏＡ残基に変換されたことを支持した。この生成物の抗凝血作用は、ａＰＴＴ凝血アッセイによって決定されるように、出発物質のヘパリン（１６５Ｕ／ｍｇＵＳＰ活性）に比べて１０〜１５％であった。実施例２ヘパリン未処理動物における循環血液量減少性ショックに対する２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣヘパリンの効果この実験は、ヘパリン未処理動物において出血によって誘発されたショック後の蘇生の間に全身投与（静脈内注射、注入または他の適当な経路により）した場合の循環血液量減少性ショックの治療における非抗凝血性ヘパリン様物質に関する。ショードリーら、Circ.Shock（１９８９）２７：３１８参照。その後の論説には、動物を前ヘパリン処理した場合（ワング（Wang）ら、Am.J.Physiol.２５９（Regulatory Integrative Comp.Physiol.２８）Ｒ６４５〜Ｒ６５０、１９９０およびラナら、J．of Trauma（１９９２）３２（４）：４２０〜４２６）、および循環血液量減少性ショックの後にヘパリンを投与した場合に、該モデルにおいて有利な効果が観察されることが記載されている。２−Ｏ−脱硫酸ＮＡＣヘパリンは実施例１の記載に従って調製した。このモデルにおいてラットを出血させ、流した血液容量の４０％が乳酸加リンゲル注射剤（ＲＬ）の形で戻るまで、平均動脈圧（ＭＡＰ）を４０ｍｍＨｇに維持した。ついで、ラットを４回、所定量（〜４５ｍｌ／ラット）の最大出血（ma ximum bleedout）（ＭＢ）でＲＬにより６０分間かけて頸部テーテルを介して蘇生させ、以下のパラメーターをモニターした：（１）肝細胞の機能（インドシアニングリーンクリアランスに伴うＫ_mおよびＶ_max）（図１ＡおよびＢ）；（２）平均動脈圧（ＭＡＰ）および心拍数（ＨＲ）（図２ＡおよびＢ）；心臓機能｛心拍出量（ＣＯ）、１回拍出量（ＳＶ）および全末稍抵抗（ＴＰＲ）（図３Ａ、ＢおよびＣ）｝；（４）肝臓、腎臓、脾臓および小腸における微小血管血流（ＭＢＦ）（それぞれ、図４Ａ、Ｂ、ＣおよびＦ）；および（５）消化管機能（キシロース吸収）（図５ＡおよびＢ）。図１〜５において、データは、（１）偽（シャム）操作（陽性コントロール）、（２）食塩水処理（陰性処理）、（３）ヘパリン処理、および（４）ＮＡＣ処理からなる４つの異なる実験群について示してある。肝細胞の機能はインドシアニングリーンクリアランスの動力学を用いてモニターしたが、その際、Ｋ_mおよびＶ_maxはそれぞれ能動輸送の効率およびクリアランスの速度と相関している。蘇生開始３時間後の最大クリアランス速度（Ｖ_max、図１）は食塩水群に比べてＮＡＣ群では高く、シャムレベルの約８５％であった。その効果は５時間後ではわずかに低かったが、それでも食塩水処理動物の２倍であった。３時間におけるヘパリンおよびＮＡＣ群についての能動輸送の効率（Ｋ_m ）はシャム群よりも高かった（１５０〜１６０％）。５時間ではＮＡＣ群はシャム近くまで減少したが（１２５％）ヘパリン群は上昇したままであった。ＮＡＣ群の心臓機能は、食塩水処理した陰性コントロール動物およびヘパリン処理した動物に比べて改善された。食塩水処理した動物およびヘパリン処理した動物の両方の平均動脈圧（図２Ａ）は７０から約７５ｍｍＨｇにわずかに上昇しただけであったが、ＮＡＣ群は７０から９０ｍｍＨｇに確実に上昇し、シャム群は約１１０ｍｍＨｇに確実に上昇した。ＮＡＣ群の心拍数（図２Ｂ）は蘇生の間にわずかに高く、ヘパリン処理動物および食塩水処理動物に比べて上昇したままであったが、シャムよりは低かった。ＮＡＣ群の心拍出量（図３Ａ）は循環血液量減少性ショックの後５時間にわたってシャムコントロールを上回るレベルまで増加したが、ヘパリン群はシャム群の８０％を回復した。ＮＡＣ動物群の１回拍出量（図３Ｂ）は、食塩水群、ヘパリン群およびシャム群よりも高いレベルに増加した。ＴＰＲ（図３Ｃ）は、食塩水群に比べてＮＡＣ群およびヘパリン群で蘇生後において低かったが、ヘパリン処理動物ではＴＰＲは一層迅速に増加したのに対してＮＡＣ群は５時間まで効果が持続した。全体として、これら結果は、ＮＡＣ群およびヘパリン群において心臓機能が回復されることを支持しているが、ＮＡＣ群のみが改善されたＣＯおよびＳＶおよびＴＰＲを示す。微小血管血流（ＭＢＦ）の測定は、図４Ａ〜Ｄに示すように蘇生の開始３時間および５時間後に行った。データはすべて、ＮＡＣ群が食塩水群に比べてＭＢＦが上昇していること、およびヘパリンと同じかまたはそれよりも高いことを示している。一般に、ＭＢＦは、ＮＡＣを用いた場合はシャムの８０〜１００％内に回復されたのに対して、食塩水では５０〜６０％、ヘパリンでは６５〜８５％であった。調べた器官のうち、腎臓は回復が最も悪かった。しかしながら、この器官の場合、回復が遅いのはよくあることである。消化管機能の測定において、ＮＡＣヘパリン様物質は食塩水群に比べて１００％の増加を示したが、出血後２時間においてシャム群の５５％にすぎなかった。ヘパリンも同様の効果を有していたが、ヘパラン硫酸の方が効果が大きかった。蘇生４時間においては、ヘパリン様物質群は吸収レベルを維持したが、ヘパリンおよびヘパラン硫酸は２時間のときの値よりも若干減少した。これら結果は、循環血液量減少性ショックの後の心血管機能の評価において、２−Ｏ−脱硫酸ヘパラン誘導体（ＮＡＣ）がヘパリンと同等かまたはそれ以上の効果を示すことを示している。消化管機能の研究において、ＮＡＣは蘇生２時間ではわずかに効果が低かったが、４時間では同等の効果であった。ヘパリンと比べたＮＡＣの等価もしくはそれより優れた作用は、化学組成および生物学的活性が異なることに鑑みると驚くべきことである。特に、天然のヘパリンおよびヘパリン様分子（すなわち、ヘパラン硫酸）と異なり、化学的に修飾したＮＡＣは低い抗凝血作用および出血作用を有し、それゆえヘパリンに付随する血液学的毒性が減少し、一層高い投与量を利用することが可能となる。最も重要なことは、循環血液量減少性ショックモデルに直接関係するＮＡＣの生物学的特性が、構造上の修飾またはその結果としての生物学的活性のスペクトルの変化によって影響されないことである。実施例３血流力学および肝細胞機能外傷−出血および蘇生（Ｒｓ）に対する２−０,３− Ｏ脱硫酸ＮＡＣヘパリン断片の効果２−０,３−Ｏ脱硫酸ＮＡＣヘパリン断片を、実質的に米国特許第９４４,８０４号明細書（１９９２年１２月２２日出願）の記載に従って製造した。しかしながら、５ｋＤａの分子量を有する断片の代わりに３〜４ｋＤａの分子量を有する断片を脱硫酸した。簡単に説明すると、低分子量（５ｋＤａ）のブタ粘膜ヘパリン（セルサス・ラボラトリーズ（Celsus Laboratories）より入手）（１.０ｇ）を０.１Ｍ水酸化ナトリウム溶液（２００ｍｌ）中に溶解した。この溶液を凍結させ、凍結乾固して外皮様の黄色残渣を得た。この残渣を水（５０ｍｌ）中に溶解し、溶液に２０％酢酸溶液を加えてｐＨを６〜７に調節した。ついで、固体重炭酸ナトリウムを加えてｐＨを８〜９とした。この溶液を充分に透析し、凍結乾燥後、固体生成物（０.７７ｇ）として単離した。％抗凝血作用は＜２であった。ＩｄｏＡ２−ＳおよびＧＭＳ₂は検出することができず、ヘパリン出発物質は＞９５％または９９％脱硫酸されたことを示していた。２−０,３−Ｏ脱硫酸ＮＡＣ処理群（７ｍｇ／ｋｇ／時）の心臓機能は、食塩水処理コントロール動物に比べて有意に改善されていた。ＮＡＣ群の心拍数（図６Ａ）は、蘇生２時間後ではわずかに高かったが、４時間までにシャムレベルまで減少した。ＮＡＣ動物群の１回拍出量（図６Ｂ）は食塩水群よりも有意に高くはなく、シャム群よりもわずかに低かった。ＮＡＣ群の心拍出量（図６Ｃ）は、循環血液量減少性ショックの後４時間にわたって、殆どシャムコントロールに等価なレベルまで増加した。食塩水処理動物およびＮＡＣ処理動物の両方の平均動物圧（図７Ａ）は、約１１０ｍｍＨｇのＭＡＰを有するシャム群に比べて約７０〜約７５ｍｍＨｇであった。全末梢抵抗（ＴＰＲ）（図７Ｂ）は、蘇生後に食塩水処理に比べてＮＡＣ群で低く、４時間まで効果が持続した。全体として、これら結果は、ＮＡＣ群およびヘパリン群において心臓機能が回復されることを支持しているが、ＮＡＣ群のみが改善されたＣＯおよびＳＶおよびＴＰＲを示す。肝臓、腎臓、脾臓および腸における微小血管血流（ＭＢＦ）の測定を、それぞれ図８Ａ〜Ｄに示すように蘇生の終了２時間および４時間後に行った。データはすべて、ＮＡＣ処理群が食塩水群に比べてＭＢＦが上昇していること、および試験したすべての器官においてシャム群とほぼ同等であることを示している。一般に、ＭＢＦは、ＮＡＣを用いた場合はシャムの８０〜１００％内に回復されたのに対して、食塩水では６０％であった。肝細胞の機能はインドシアニングリーンクリアランスの動力学を用いてモニターしたが、その際、Ｖ_maxおよびＫ_mはそれぞれ能動輸送の効率およびクリアランスの速度と相関している（それぞれ、図９Ａおよび９Ｂ）。蘇生終了２時間後の最大クリアランス速度（Ｖ_max）は食塩水群に比べてＮＡＣ群では高く、シャムレベルと等価であった。その効果は４時間後ではわずかに低かったが、それでもシャムの９０％であり食塩水処理動物の３倍であった。２時間におけるＮＡＣ群についての能動輸送の効率（Ｋ_m）はシャム群よりも高かった（〜２００％）。４時間ではＮＡＣ群はシャム近くまで減少した（１２５％）。消化管機能の測定において（図１０）、ＮＡＣはシャム群に比べて７０％増加したが、食塩水群に対しては５５％にすぎなかった。蘇生４時間後に消化管機能は２時間のときの値よりも若干減少したが、シャム群の約６０％であり、食塩水群はシャム群の４０％であった。実施例４外傷−出血および蘇生（Ｒｓ）後の血流力学および肝細胞機能に対する２−０, ３−Ｏ脱硫酸した実質的に完全なＮＡＣヘパリンの効果２−０,３−Ｏ脱硫酸ヘパリンを、実質的に米国特許第９４４,８０４号明細書（１９９２年１２月２２日出願）の記載に従って製造する。簡単に説明すると、ブタ粘膜ヘパリン（１.０ｇ）を水（１８０ｍｌ）中に溶解し、１ＭＮａＯＨ（２０ｍｌ）を加えて０.１ＭＮａＯＨ、および０.５％ヘパリンとした。この溶液を凍結させ、凍結乾固する。得られた外皮様の黄色残渣を水（５０ｍｌ）中に溶解し、２０％酢酸溶液を加えてｐＨを６〜７に調節する。固体重炭酸ナトリウムを加えてｐＨを８〜９とする。この溶液を充分に透析し、凍結乾燥して固体生成物（０.７３ｇ）を得る。この生成物を、ａＰＴＴの決定および二糖分析を含む種々のアッセイに供する。表示した値はヘパリン出発物質との相対値である。バクスター・ラボラトリーズ（Baxter laboratories）から得た市販のキットを用いてａＰＴＴ値を決定する。該キットの使用に関する製造業者の指示は以下の通りである。これら値は、ヘパリンと比べた％ａＰＴＴとして表してある。これらアッセイを用い、上記単離した生成物は以下の％抗凝血作用（ａＰＴＴ）、ＩｄｏＡ２−Ｓ、およびＧＭＳ₂、それぞれ１０.０、１.１、および＜１を示した。上記実施例で測定した生理学的パラメーターを２−０,３−Ｏ脱硫酸した実質的に完全なＮＡＣについても同様に測定する。心臓機能に関しては、２−０,３−Ｏ脱硫酸した実質的に完全なＮＡＣで処理した群（７ｍｇ／ｋｇ／時）は、食塩水で処理したコントロール群に比べて顕著な改善を示す。ＮＡＣ群の心拍数は蘇生２時間後にわずかに高いが、４時間までにシャムレベルまで減少する。ＮＡＣ動物群の１回拍出量は食塩水群よりも有意に高くはなく、シャム群よりもわずかに低い。ＮＡＣ群の心拍出量は、循環血液量減少性ショックの後４時間にわたってシャムコントロールとほぼ等価なレベルに増加する。食塩水処理動物およびＮＡＣ処理動物の両方の平均動脈圧は、約１１０ｍｍＨｇのＭＡＰを有するシャム群に比べて約７０〜約７５ｍｍＨｇである。全末梢抵抗（ＴＰＲ）はＮＡＣ群では食塩水処理群に比べて蘇生後に低下し、４時間まで効果が持続する。全体として、これら結果は、ＮＡＣ群およびヘパリン群において心臓機能が回復されることを支持しているが、ＮＡＣ群のみが改善されたＣＯおよびＳＶおよびＴＰＲを示す。肝臓、腎臓、脾臓および腸における微小血管血流（ＭＢＦ）の測定を、蘇生の終了２時間および４時間後に行う。データは、ＮＡＣ処理群が食塩水群に比べてＭＢＦが上昇していること、および試験したすべての器官においてシャム群とほぼ等価であることを示している。一般に、ＭＢＦは、ＮＡＣを用いた場合はシャムの８０〜１００％内に回復されるのに対して、食塩水では５０〜６０％である。ヘパリンは、シャムＭＢＦの約６５〜７０％を回復することが知られている。肝細胞の機能に関しては、蘇生終了２時間後の最大クリアランス速度（Ｖ_max ）は食塩水群に比べてＮＡＣ群では高く、シャムレベルと同等である。その効果は４時間ではわずかに低いが、シャムの９０％であり、食塩水処理動物の３倍であった。２時間におけるＮＡＣ群についての能動輸送の効率（Ｋ_m）はシャム群よりも高い（〜２００％）。４時間ではＮＡＣ群の値はシャム群の値近くまで減少する（１２５％）。消化管機能に関しては、ＮＡＣの値はシャム群に比べて７０％増加するが、食塩水群に対しては５５％にすぎなかった。蘇生４時間後に消化管機能は２時間のときの値よりも若干減少するが、シャム群の約６０％であり、食塩水群はシャム群の４０％である。

───────────────────────────────────────────────────── 【要約の続き】

Claims

【特許請求の範囲】１．実質的に非抗凝血性のヘパリン様物質（ＮＡＣ）組成物の有効量を動物に投与することを特徴とする、動物における循環血液量減少性ショックの治療方法。２．該ＮＡＣ組成物が実質的に完全なポリマーを含む請求項１に記載の方法。３．該ＮＡＣ組成物が該ポリマーの断片を含む請求項２に記載の方法。４．該組成物を構成する該ＮＡＣ断片が約２〜６.４ｋＤａの平均分子量を有する請求項３に記載の方法。５．該ＮＡＣが、解重合またはＯ−脱硫酸によってヘパランまたはヘパリン硫酸から得られたヘパランまたはヘパリン硫酸よりなる群から選ばれたものである請求項１に記載の方法。６．Ｏ−脱硫酸によって得られるＮＡＣが、実質的に断片化されていない２− Ｏ脱硫酸ヘパリンおよび２−Ｏ脱硫酸ヘパリン断片よりなる群から選ばれたものである請求項５に記載の方法。７．Ｏ−脱硫酸によって得られるＮＡＣが、実質的に断片されていない２−０ ,３−Ｏ脱硫酸ヘパリンおよび２−０,３−Ｏ脱硫酸ヘパリン断片よりなる群から選ばれたものである請求項５に記載の方法。８．該ＮＡＣが、２−Ｏおよび３−Ｏ位においてそれぞれ５０％〜９９％および５０％〜７５％の量で脱硫酸されている請求項７に記載の方法。９．投与が静脈内投与である請求項１に記載の方法。１０．該ＮＡＣが、薬理学的に許容しうる賦形剤中にＮＡＣを含む注射可能な医薬組成物として投与される請求項１に記載の方法。１１．該治療を、循環血液量減少性ショックに伴う血管障害を予防するために行う請求項１０に記載の方法。１２．該治療を、循環血液量減少性ショックに伴う器官機能を改善するために行う請求項１０に記載の方法。１３該治療を、循環血液量減少性ショックに伴う心臓機能を改善するために行う請求項１０に記載の方法。１４．該非抗凝血性ヘパリン様物質の投与を、肝臓、腎臓、脾臓および小腸よりなる群から選ばれた器官における微小血管血流を改善するに充分な治療学的有効量にて行う請求項１０に記載の方法。１５．該非抗凝血性ヘパリン様物質の投与を該動物を前ヘパリン処理することなく行う請求項１０に記載の方法。