NO156129B - Fremgangsmaate for fremstilling av blandinger av sulfaterte polysakkarider med en generell heparinpolysakkarid-struktur. - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av blandinger av sulfaterte polysakkarider med en generell heparinpolysakkarid-struktur. Download PDFInfo
- Publication number
- NO156129B NO156129B NO811632A NO811632A NO156129B NO 156129 B NO156129 B NO 156129B NO 811632 A NO811632 A NO 811632A NO 811632 A NO811632 A NO 811632A NO 156129 B NO156129 B NO 156129B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- heparin
- solution
- methanol
- ester
- salt
- Prior art date
Links
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 title claims description 122
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 115
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 title claims description 98
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 74
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 63
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 46
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 43
- -1 heparin ester Chemical class 0.000 claims description 40
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 31
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 16
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 14
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 7
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 4
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 4
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 claims description 3
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 2
- 229910001854 alkali hydroxide Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 195
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 63
- 239000000047 product Substances 0.000 description 52
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- SIYLLGKDQZGJHK-UHFFFAOYSA-N dimethyl-(phenylmethyl)-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethyl]ammonium Chemical class C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SIYLLGKDQZGJHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 25
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 21
- 229960003872 benzethonium Drugs 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 description 18
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 18
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 18
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 16
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 15
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 11
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 10
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 8
- SGUVLZREKBPKCE-UHFFFAOYSA-N 1,5-diazabicyclo[4.3.0]-non-5-ene Chemical compound C1CCN=C2CCCN21 SGUVLZREKBPKCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- JQZAEUFPPSRDOP-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-4-(chloromethyl)benzene Chemical compound ClCC1=CC=C(Cl)C=C1 JQZAEUFPPSRDOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 7
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 7
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 6
- AEMOLEFTQBMNLQ-CLQWQSTFSA-N l-iduronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-CLQWQSTFSA-N 0.000 description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 4
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001858 anti-Xa Effects 0.000 description 4
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 4
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 4
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 4
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 4
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 3
- 230000000055 hyoplipidemic effect Effects 0.000 description 3
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 3
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 229940127090 anticoagulant agent Drugs 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 229960004676 antithrombotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Chemical compound BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 2
- VEUUMBGHMNQHGO-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroacetate Chemical compound CCOC(=O)CCl VEUUMBGHMNQHGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium hydroxide Chemical compound [OH-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006283 4-chlorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1Cl)C([H])([H])* 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 1
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N Chlorine Chemical compound ClCl KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RENMDAKOXSCIGH-UHFFFAOYSA-N Chloroacetonitrile Chemical compound ClCC#N RENMDAKOXSCIGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 206010021024 Hypolipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 206010051077 Post procedural haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical class [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000288 alkali metal carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008041 alkali metal carbonates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003931 anilides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003524 antilipemic agent Substances 0.000 description 1
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 1
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000003130 blood coagulation factor inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 159000000011 group IA salts Chemical class 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- KGCNHWXDPDPSBV-UHFFFAOYSA-N p-nitrobenzyl chloride Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(CCl)C=C1 KGCNHWXDPDPSBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006503 p-nitrobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1[N+]([O-])=O)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000009291 secondary effect Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 229940061706 sulfated mucopolysaccharides Drugs 0.000 description 1
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid group Chemical group S(O)(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Obesity (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår fremstilling av blandinger av sulfaterte polysakkarider med en generell heparinpolysakkarid-struktur med lavere midlere molekylvekt enn heparin, og som kan brukes som antikoagulerende og antitrombotiske midler for å hindre eller behandle tromboser og som hypolipemiske midler.
Heparin er en blanding av sulfaterte mukopolysakkarider
av animalsk opprinnelig, og som i alt vesentlig brukes på grunn av sine antikoagulerende og antitrombotiske egenskaper, da særlig for å hindre postoperativ venetromboser, og på grunn av sine hypolipemiske egenskaper. Det er kjent at heparin virker under koaguleringsprosessen ved at det aktiverer en naturlig koaguleringsinhibitor som finnes i blodet, dvs. antitrombin III. Aktiveringen av dette protein har den effekt at man hindrer virkningen av to proteaser, dvs. X-aktivert faktor (faktor Xa) på den ene side og trombin på den andre.
Heparinets antikoagulerende aktivitet in vitro blir vanligvis målt ved de fremgangsmåter som er beskrevet i forskjel-<1->lige farmakopeer, da .spesielt den amerikanske, engelske eller franske farmakope, idet man her bruker en internasjo-nal standard. Det er imidlertid nå mulig å måle dets spesifikke aktivitet in vitro på den ene side med hensyn til faktor Xa og på den annen side med hensyn til trombin (se f.eks. A. Teien et al., "Thrombosis Research", 11,
107, 1977).
Kommersielle hepariner som er en blanding av polysakkarider hvor den midlere molekylvekten ligger over 10.000 dalton og hvor molekylvektsfordelingen går fra 4.000 til ca.
45.000 dalton, har følgende aktivitet in vitro:
Antikoaguleringsaktivitet, målt ved den fremgangsmåte som er •beskrevet i fransk farmakope, 8. utgave, under heparin, ved henvisning til den 3. internasjonale standard og "Codex": 140 til 200 i.e./mg.
Anti-Xa-aktivitet målt ved Teien's fremgangsmåte og ved referanse til den 3. internasjonale standard 16 til 180 i.e./mg.
APTT-aktivitet (Aktivert partiell Tromboplastin-tid) målt ved Teien's metode, ved referanser til den 3. internasjonale standard: 150 til 170 i.e./mg.
Heparin tilføres alltid parenteralt (vanligvis subkutant)
og virkningen er relativt kortvarig, noe som gjør at man har de to følgende ulemper: det er nødvendig å tilføre heparinet minst tre ganger pr. døgn, og at man har relativt høy frekvens av post-operative blødninger.
Det er kjent (cf. Johnson et al, "Thrombos. Haemostas", Stuttgart, 1976, 35, 586-591; Lane et al, "Thrombosis Research" 16, 651-662, Pergamon Press Ltd. 1979; Lasker, Chiu, "Annals N.Y. Acad. Sei., 222, 1973, 971-977; Lasker, "Adv. Exp. Mod. Biol." 52, 1975, 119-130) at man ved fraksjonering av heparin, f.eks. ved filtrering over "Sephadex"-gel, får fraksjoner med en midlere molekylvekt som er mindre enn det man har for heparin, og hvor molekylvekt-fordelingen er snevrere enn for heparin. De prøver som er utført in vitro og in vivo med slike fraksjoner viser på den ene side en relativt mer aktiv X-aktivert faktor enn på trombinet (dvs. at de har et forhold anti-Xa-aktivitet
anti-trombin-aktivitet
som er vesentlig over 1), og at nevnte fraksjoner på den annen side lettere absorberes i blodet ved en subkant injek-sjon enn for heparin, hvorved man får en høyere og mere langvarig aktivitet i plasma enn man har for heparinet selv.
Det er også kent (cf. Lasker og Chiu som sitert ovenfor, Lasker som sitert ovenfor; US-PS 3.766.167; Perlin et al., "Carbohydrate Research", 18, 1971, 185-194), at man ved enzymatisk hydrolyse av heparin kan fremstille depolymeriseringsprodukter med lav midlere molekylvekt (fra 5.300 til 4.500 dalton, slik dette kan bestemmes ved ultrasentrifugering) og med en antikoaguleringsaktivitet, slik dette kan bestemmes ved metoden USP nr# XVII,
denne metode er beskrevet i den amerikanske Pharmacopée, sidene 609-611, artikkelen "Natriumheparin") på ca. 70 i.e./mg. Disse depolymeriseringsprodukter kan frak-sjoneres ved filtrering over "Sephadex"-gel til fraksjoner med en midlere molekylvekt, slik dette kan bestemmes ved ultrasentrifugering,på fra 3.2 00 til 5.900 dalton og med en antikoaguleringsaktivitet fra 45 til 95 i.e./mg ( USP-metode). Disse depolymeriseringsprodukter og fraksjoner er aktive, både oralt og parenteralt.
Det er også kjent (kfr. Lasker som sitert ovenfor) at man ved depolymerisering av heparin ved hjelp av askorbinsyre og hydrogenperoksyd, kan fremstille produkter med lav midlere molekylvekt. Depolymerisering ved hjelp av askorbinsyre og hydrogenperoksyd vil etter en fraksjonering i alkohol gi fraksjoner med en midlere molekylvekt på fra 4.000 til 7.100 dalton og en antikoaguleringsaktivitet på fra 12 til 100 i.e./mg (uSP-metoden).
Til slutt er det også kjent (GB-PS 2.002.406) at man ved
en resulfatering av depolymeriseringsprodukter av heparin uten antikoaguleringsaktivitet, kan få fremstilt oligo-polysakkarider med en midlere molekylvekt, slik dette kan bestemmes ved Somogy-metoden, (denne metode er beskrevet i GB-PS 2.002.406 og i "Clinical Chemistry", 1960, vol.6, s. 21) på fra 2.600 til 5.500 dalton, en spesifikk rotasjon, målt i en vandig oppløsning ved 20° på fra +40°C til +50°C, og en antikoaguleringsaktivitet på mindre enn 50 i.e./mg (USP-metoden), og som kan tas enten oralt eller parenteralt for å hindre tromboser.
Foreliggende oppfinnelse har til hensikt å forbedre den kjente teknikk og angår således en fremgangsmåte for fremstilling av
blandinger av sulfaterte polysakkarider med en generell heparir polysakkaridstruktur med lavere midlere molekylvekt enn heparir der de sure grupper foreligger i. fri eller saltdannet form, dei polysakkaridene i blandingene har en etylenisk dobbeltbinding
ved en av kjedeendene og der blandingene i natriumsalttilstand oppviser følgende karakteristika:
prosentandel svovel: 9 til 13,5,
prosentandel nitrogen; 1,8 til 2,5, prosentandel uronsyre: 20 til 30,
midlere molekylvekt 20000 til 10.0000 dalton, spesifikk rotasjon i vandig oppløsning: (a)<20> = +25 til +55°,
D
og denne fremgangsmåte karakteriseres ved at en heparinester oppnådd ved partiell eller total forestring av karboksylsyregruppene i heparin omsettes med en alkali- eller organisk
base ved en temperatur av 20 til 80°C enten i vandig miljø hvis heparinesteren er oppløselig i vann eller i et inert oppløsning middel for esteren, det således oppnådde depolymeriseringsprodukt isoleres som alkalisalt og det sistnevnte hydrolyseres ved hjelp av en vandig, minst 1 N natriumhydroksyoppløsning ved en temperatur av 0 til 5°C.
Svovel- og nitrogeninnholdet samt den ovenfor angitte rotasjon, er bestemt ved de fremgangsmåter som er beskrevet i 8. utgave av fransk farmakope under heparin. Innholdet av uronsyre ble bestemt ved den fremgangsmåte som er beskrevet av N. Blumen-'krantz et al. ("Analytical Biochemistry", 54,. 484, 1973). Den midlere molekylvekt ble bestemt ved såkalt gelpermeasjonskroma-tografi på en gel av polyakrylamidagarose idet man brukte en standard av heparin med kjent molekylvekt, ifølge fremgangsmåte til Andersson et al. ("Thrombosis Research", 9, 575, 1976).
Polysakkaridbestanddelen i blandingene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse har mere spesielt følgende formel:
hvor R er et hydrogenatom eller en karboksylsyregruppe, som fri syre eller i form av et salt, R' er en OH-gruppe eller sulfatgruppe, i fri syreform eller i form av et salt, R^ er en OH-gruppe eller en sulfatgruppe, i fri syreform eller i form av et salt, R2 er en sulfonsyre-gruppe i fri syreform eller i form av et salt, eller en acetylgruppe, -0- er en oksygenbro, G-bindingen er bindingen av glukosamintypen som er tilstede i heparinets struktur, U-bindingene er bindinger av uronsyretypen
(D-glukuronsyre, L-iduronsyre, sulfatert L-iduronsyre)
av samme type som i heparin, og n er et helt tall fra 3 til 20.
I formel I kan syregruppene i polysakkaridene være i fri form eller i form av et salt, da spesielt et natrium-, kalsium- eller magnesiumsalt.
Skjønt foreliggende oppfinnelse angår alle blandinger som definert ovenfor, så angår den mere spesielt de blandinger som i form av natriumsaltet viser de tilleggs-egenskaper som er angitt for kategoriene I, II og III
i Tabell A nedenfor:
(kromogent peptid med følgende struktur: (N-benzoyl)-Ile-Glu-Gly-Arg-(p-nitro)anilid), idet man henviser til
3. internasjonale standard.
100 yl sitratbehandlet okseplasma, fortynnet fra 2 til
5 ganger med en vandig buffer, tris(EDTA, pH 8,4, ble tilsatt 100 yl av en oppløsning av det produkt som skulle prøves, eller av standarden i vandig buffer, tris/EDTA,
pH 8,4, og hvor nevnte 100 yl tilsvarer 0,02 til 0,08 yg produkt eller standard. Etter 3 minutters inkubering ved 37°C tilsatte man en vandig oppløsning av Xa-faktor fra okse som tilsvarte 7 n Kat(der n Kat angir nanokatal der katal er den enhet enzymer som katalyserer transformasjonen av 1 mol substrat pr. sek. under standardiserte betingelser for substrat, temperatur og pH-verdi) av faktor Xa. Etter'30 sekunders inkuberingsperiode tilsatte man 200 yl av en vandig oppløsning av S 2222, som tilsvarer 0,2 ymol av S 2222. Etter tre minutters inkubasjonsperiode tilsatte man 300 yl eddiksyre, hvoretter man målte oppløsningens optiske densitet ved 405 nm i sammenligning med destillert vann.
Ved å avsette den optiske tettheten som en funksjon av konsentrasjonen av produktet eller standarden, oppnår man to rette linjer, en som angår det produkt som er under prøv-ing, mens den annen angår standarden. Produktets aktivitet uttrykt i internasjonale enheter (i.e.) pr. mg er da gitt ved følgende formel:
idet tallet 173 tilsvarer verdien for aktiviteten til den tredje internasjonale standard.
I den tredje internasjonale heparinstandard er et heparin, hvis aktivitetsverdi er 173 internasjonale enheter pr. mg. Denne enhet er gitt av "National.Institute of Biological Standards and Control " i London.
b) Bestemmelse av APTT- aktivitet
Det produkt som skal prøves og den tredje internasjonale
standard ble oppløst i en 0,15 M vandig oppløsning av natriumklorid, og deretter fortynnet med et sitratbehandlet okseplasma, fritt for blodplater, slik at man fikk en produktkon-sentrasjon (eller for nevnte standard) på fra 0 til 4 yg/ml.
100 yl av reagenset "automatert APTT Precibio" (reagens basert på fosfolipider av kaninhjerne og mikronisert s.ilisium-dioksyd) ble tilsatt til 100 yl av den fremstilte oppløsningen. Etter fem minutters inkubering ved 37°C tilsatte man 100 yl
av en 0,025 M oppløsning av kalsiumklorid. Sammenklebningstiden ble så målt ved hjelp av et "Bio-Mérieux"-fibrometer.
Ved å avsette logaritmen for sammenklebningstiden som en funksjon av produktskonsentrasjonen eller av standarden, oppnår man to rette linjer, en som angår det produkt som er under
n
prøving, og den annen som angar stadarden. Produktets aktivitet uttrykt i internasjonale enheter pr. mg. er da gitt ved følgend formel:
der "173" er som angitt ovenfor.
Alle de aktiviteter som er angitt i tabellene A, B og C er uttrykt i internasjonale enheter pr. mg. (i.e./mq), idet det henvises til den tredje internasjonale standard. Blandingen fremstilles ifølge foreliggende oppfinnelse som nevnt ved at man lar en alkali- eller organisk base virke på en heparinester, hvorved man får en delvis eller total forestring av karboksylsyregruppene i heparinet.
I denne ester vil de syregrupper av heparinet som ikke er forestret (dvs. svovelsyre-grupper og eventuelt delvis kar-boksylsyregrupper) enten være i form av frie syrer eller i form av salter, da spesielt et alkalimetallsalt så som natriumsalt, et jordalkalimetallsalt, så som kalsiumsalt, et magnesiumsalt eller et kvaternært ammoniumsalt med en lang kjede så som benzetoniumsaltet.
I de tilfelle hvor heparin-esteren er oppløselig i vann, (f.eks. når de ikke-forestrede syregruppene er i form av natriumsaltet), så kan reaksjonen mellom esteren og basen utføres i vann ved temperaturer mellom 20 og 80°C, idet basens molare konsentrasjon i mediet fortrinnsvis ligger mellom 0,1 og 0,6. Baser som kan brukes er slike som er oppløselige i vann og da spesielt natriumhydroksyd, kalium-hydroksyd, alkalimetallkarbonater, trietylamin, og 1,5-dia-zabicyklo (4,3,0)5-nonen. så snart reaksjonen er over kan depolymeriseringsproduktet isoleres, f.eks. ved utfelling ved å tilsette natriumklorid og deretter metanol.
Reaksjonen mellom esteren og basen kan også utføres, spesielt når de ikke-forestrede syregrupper i esteren er i form av et kvaternært ammoniumsalt med en lang kjede i et inert organisk oppløsningsmiddel for nevnte ester, f.eks. diklormetan, dimetylformamid, formamid eller tetrahydrofuran, ved temperaturer mellom 20 og 80°C. Baser som kan brukes er baser som er oppløselig i det brukte oppløsningsmiddel, og da spesielt 1,5-diaza-bicyklo(4,3,0)-5-nonen.
Så snart reaksjonen er over, kan depolymeriseringsproduktet hvor karboksylsyregruppene enda er forestret, isoleres i form av et alkalisk salt, og kan så hydrolyseres ved hjelp av en vandig oppløsning av et alkalimetallhydroksyd, da spesielt natriumhydroksyd med en styrke på minst 1 N, ved en lav temperatur fra 0°C til 5°C.
Det endelige produkt kan utskilles, f.eks. ved utfelling, ved at man tilsetter natriumklorid og deretter metanol.
Heparinestere som kan brukes som utgangsprodukter for fremstilling ifølge foreliggende oppfinnelse av blandinger av polysakkarider kan være ikke-selektive estere eller selektive estere. Ved ikke-selektive estere forstås blant annet heparinestere hvor karboksylgruppene i D-glukuronsyre-, de usulfaterte L-iduronsyre- og de sulfaterte L-iduronsyrebindingene er vilkårlig forestret. Ved selektive estere forstås heparinestere som er helt eller delvis forestret, enten bare på karboksylgruppene i D-glukuronsyrebindingene eller bare karboksylgruppene i D-glukuronsyre-og de usulfaterte L-iduronsyrebindingene, eller bare karboksylgruppene i de usulfaterte L-iduronsyre- og de sulfaterte L-iduronsyrebindingene, eller bare karboksylgruppene i sulfaterte L-iduronsyrebindinger.
Heparinestere som kan brukes som utgangsprodukter for foreliggende fremgangsmåter, er spesielt de heparinestere som er beskrevet i FR-PS 2.150.724 og GB-PS 1.501.095, så vel som metyl-, etyl-, etoksykarbonylmetyl-, cyanometyl-, benzyl- og substituerte benzyl (spesielt 4-klor-benzyl- og 4-nitrobenzyl)-estere av heparin. De som fortrinnsvis brukes som utgangsprodukter er benzyl- eller substituerte benzylestere av heparin. De heparinestere som brukes som utgangsforbindelser i foreliggende fremgangsmåte kan komme fra heparin av enhver opprinnelse (enten lungeheparin, heparin fra svinemembraner, heparin fra tarmkanalen hos kveg etc.).
De ikke-selektive metyl-, etyl-, etoksykarbonylmetyl-, cyanometyl-, benzyl- og substituerte benzylestere av heparin kan f.eks. fremstilles ved at man omsetter et nøytralt kvaternært ammonium- eller aminosalt av heparin med et halogenert derivat med formel
hvor Hal representerer et klor-, brom- eller jodatom og R representerer et hydrogenatom eller en metyl-, etoksykarbonyl-, cyano-, fenyl- eller substituert fenylgruppe. Denne reaksjonen utføres i en oppløsning eller en suspensjon i et inert oppløsningsmiddel, som dimetylformamid, metylenklorid, dimetylsulfoksyd, tetrahydrofuran eller aceton, ved temperaturer mellom -20°C og +60°C.
Metyl-, etyl-, etoksykarbonylmetyl-, cyanometyl-, benzyl-eller substituerte benzylestere av heparin som enten helt eller delvis er forestret, enten bare med karboksylgruppene i D-glukuronsyrebindingene eller bare med karboksylgruppene i D-glukuronsyre- eller usulfaterte L-iduronsyrebindinger, kan fremstilles ved at et halogenderivat med ovennevnte formel (II) omsettes med et surt,kvaternært ammoniumsalt av heparin i hvilket foruten sulfatgruppene, enten bare karboksylgruppene av D-glukuronsyrebindingene, eller bare karboksylgruppene av D-glukuronsyre1-og usulfaterte L-iduronsyrebindinger er saltdannet, mens de andre karboksylgruppene er i form av frie syrer. Denne reaksjonen utføres ved de samme betingelser som for reaksjonen mellom halogenderivater med formel (II) og nevnte nøytrale, kvaternære ammoniumsalt av heparin.
De sure,kvaternære ammoniumsalter av heparin hvor foruten sulfatgruppene bare karboksylgruppene i D-glukuronsyrebindingene er saltdannet, fremstilles ved å omsette et kvaternært ammoniumsalt med heparin i et vandig medium ved en pH-verdi mellom 3 og 4.
De sure, kvaternære' ammoniumsalter av heparin, i hvilke foruten sulfatgruppene bare karboksylgruppene i D-glukuronsyre- og de usulfaterte L-iduronsyrebindingene er saltdannet, fremstilles ved å omsette et kvaternært ammoniumsalt med heparin i et vandig medium med tilstrekkelig lav pH-verdi til at man får dannet et kvaternært ammoniumsalt av heparin hvor bare sulfatgruppene er saltdannet (i praksis bruker man en pHr<y>ecdifra 2 til 2,5), hvoretter man selektivt nøytraliserer karboksylgruppene i D-glukuronsyre- og de usulfaterte L-iduronsyrebindingene i produktet ved å tilsette en forutbestemt mengde av et kvaternært ammoniumhydroksyd, i et dimetylformamid-medium.
Den mengde kvaternært ammoniumhydroksyd som tilsettes beregnes ut fra nøytralisasjonskurven i et dimetylformamid-medium for en prøve av nevnte produkt med en kjent vekt.
Metyl-, etyl-, etoksykarbonylmetyl-, cyanometyl-, benzyl-og substituerte benzylestere av heparin hvori enten bare karboksylgruppene i de sulfaterte L-iduronsyrebindingene eller bare karboksylgruppene i de usulfaterte L-iduronsyre- og sulfaterte L-iduronsyrebindingene er helt eller delvis forestret, fremstilles ved å omsette en alkohol med formelen HO-CI^-R (III), hvor R er et hydrogenatom eller en metyl-, etoksykarbonyl-, cyano-, fenyl- eller substituert fenylgruppe, med heparin i et vandig medium, og i nærvær av et vannoppløselig kondensasjonsmiddel av karbo-diimidtypen, f.eks. l-etyl-3-(3-dimetyl-aminopropyl)-karbodiimid, og hvor mediets pH-verdi justeres til 3,5 - 4,5 i det første tilfelle og i området fra 2 - 3 i det annet tilfelle. Som alkohol med formel (III) kan man f.eks. bruke metanol eller etanol, og i disse tilfelle vil man oppnå henholdsvis en selektiv metylester av heparin og en selektiv etylester av heparin.
Fremgangsmåtenifølge foreliggende oppfinnelse hvor man
bruker en mineralsk eller organisk base på en heparinester, og hvor man får en såkalt 6-eliminering, vil gi en partiell og regulert depolymerisering av heparin uten at man endrer dets generelle struktur.
Blandingen av sulfaterte polysakkarider som oppnås ifølge foreliggende oppfinnelse har antikoagulerende og antitrombotiske virkninger, og hypolipemisk virkning. For blandinger med tilstrekkelig lav midlere molekylvekt (i praksis mindre eller lik 7000 dalton), vil den antitrombotiske virkningen være lavere enn den antikoagulerende virkningen. Blandinger fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse har liten toksisitet. For eksempel var produktet fra eksempel 9 ikke toksisk i en dose på 300 mg/kg kroppsvekt ved intravenøs tilførsel til rotter og mus. Når blandingene ble tilført subkutant, var toksisiteten den samme som for heparin.
Blandinger av sulfaterte polysakkarider fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse hvor syregruppene i polysakkaridene er i form av farmasøytisk akseptable salter, spesielt i form av natrium-, kalsium- eller magnesium-salter, kan brukes som antikoagulerende og antitrombotiske midler, for å hindre eller å behandle tromboser. De kan også brukes for be-handling av hypolipemi. De kan med fordel brukes i stedet for heparin i slike forbindelser. Når de tilføres subkutant, viser de mere langvarig virkning enn heparin, noe som gjør at injeksjonsfrekvensen kan senkes. Videre frembringer de mindre sekundære effekter (blødningseffekter) enn heparin.
De kan administreres i blanding med farmasøytisk akseptable fortynningsstoffer eller bærere, det være seg intravenøst, subkutant, via lungene (inhalering) eller i rektum, og for blandinger med tilstrekkelig lav midlere molekylvekt, (blandinger av kategori III) også oralt. De doser som administreres vil være avhengig av administreringsvei og den ønskede effekt (antitrombotisk eller hypolipemisk effekt).
Følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen, idet den antikoagulerende virkning bestemmes ved metoden ifølge den franske farmakopé , 8. utgave, artikkelen "Heparin" (se side 6, avsnittet efter tabellen) "Codex".
Det nøytrale benzetonium-saltet av heparin eller benzetonium-heparinat som brukes som utgangsforbindelse i eksemplene 1 til 3, 10, 12 til 15 ble fremstilt fra svine-tarmheparin med følgende egenskaper:
- midlere molekylvekt.: 16.000 dalton
- spesifikk rotasjon i vandig oppløsning
ved 20°C: (a)<20>: +41°C
- antikoaguleringsaktivitet, "Codex": 157 i.e./mg.
Det nøytrale benzetoniumsalt for heparin eller benzetonium-heparinatet som ble brukt som utgangsprodukt i eksempel 4 til 9 og 11 kom fra et heparin fra storfeinnvoller med følgende egenskaper:
- midlere molekylvekt: 11.400 dalton
(a)<2>°s +37°C
- antikoaguleringsaktivitet "Codex": 128 i.e./mg.
Det nøytrale benzetoniumsaltet av heparin eller benzé-toniumheparinatet som ble brukt som utgangsprodukt i eksempel 16, kom fra et svine-slimhinneheparin med følgende egenskaper:
- midlere molekylvekt på 16.000 dalton
(a)<20> : +44°C - antikoaguleringsaktivitet, "Codex": 180 i.e./mg.
Det natriumsalt av heparin som ble brukt som utgangsprodukt i eksemplene 17 til 19 tilsvarer ovennevnte svineslimhinneheparin.
EKSEMPEL 1
30 g (4-klor)benzylklorid ble tilsatt til en oppløsning
av 30 g benzetoniumheparinat i 600 ml dimetylformamid. Etter at oppløsningen var hensatt i 60 timer ved romtemperatur (ca. 20°C), tilsatte man 600 ml av en 10% oppløsning av natriumacetat i metanol. Bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 10,75 g av 4-klor-benzyl-esteren av heparin i form av natriumsaltet.
Det fremstilte ester ble under røring tilsatt 269 ml
0,4N vandig oppløsning av natriumhydroksyd ved 25°C.
Etter 2 timer ble blandingen nøytralisert ved å tilsette 0,4N, vandig oppløsning av saltsyre, hvoretter utfelling ble utført ved å tilsette to volumer (det dobbelte volum i forhold til den vandige fasen) metanol. Ved filtrering isoleres 8,46 g depolymerisert natriumheparinat.
EKSEMPEL 2
30 g benzylklorid ble tilsatt til en oppløsning av 30 g benzetoniumheparinat i 600 ml dimetylformamid.
Etter henstand i 60 timer ved romtemperatur ble utfelling utført ved å tilsette 600 ml av en 10%-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 11,4 g av benzylesteren av heparin i form av natriumsaltet.
3 g av denne ester ble blandet med 75 ml av en 0,4N vandig
oppløsning av natriumhydroksyd ved 20 til 25°C, og blandingen ble hensatt i to timer. Den ble deretter nøytra-lisert ved å tilsette 0,4N, vandig oppløsning av saltsyre og utfelling ble utført ved å tilsette to volumer metanol. Man fikk fremstilt 2,2 3 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 3
10 g benzylklorid ble tilsatt til en oppløsning av 10 g benzetoniumheparinat i 250 ml diklormetan.
Blandingen ble hensatt i 24 timer ved romtemperatur, hvoretter oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i 150 ml dimetylformamid, og utfelling utført ved å tilsette 150 ml av en 10 %-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Man frafiltrerte 3,67 g av benzylesteren av heparin i form av natriumsaltet. 2 g av denne ester ble behandlet i 2 timer med 50 ml av en 0,1N, vandig oppløsning av natriumhydroksyd ved 60°C. Etter avkjøling ble oppløsningen nøytralisert ved å tilsette en 0,1N, vandig oppløsning av saltsyre, hvoretter utfelling ble utført ved å tilsette 2 volumer metanol.
Man fikk fremstilt 1,54 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltdt.
EKSEMPEL 4
5 g etylkloracetat ble tilsatt til en oppløsning av 5 g benzetoniumheparinat i 125 ml diklormetan, hvoretter blandingen ble hensatt i 3 døgn ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, hvoretter resten ble oppløst i 75 ml dimetylformamid, og utfelling utført ved å tilsette 75 ml av en 10 %-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 1,72 g av karbetoksymetylesteren av heparin i form av natriumsaltet.
1,7 g av denne ester ble behandlet med 43 ml av en 0,1N, vandig oppløsning av natriumhydroksyd ved 60°C i to timer. Etter avkjøling ble oppløsningen nøytralisert ved å til-
sette en 0,1N, vandig oppløsning av saltsyre, hvoretter utfelling ble utført ved å tilsette 2 volumer metanol.
Ved filtrering fikk man isolert 1,33 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 5
10 g (4-klor)benzylklorid ble tilsatt til en oppløsning av 10 g benzetoniumheparinat i 250 ml diklormetan. Opp-løsningen ble hensatt i 24 timer ved romtemperatur, hvor. etter oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i 150 ml dimetylformamid, og produktet utfelt ved å tilsette 150 ml av en 10%-ig oppløsning av natriumacetat 1 metanol. Bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum, hvorved man fikk 3,84 g av (4-klor)-benzylesteren av heparin i form av natriumsaltet. 2 av denne ester ble behandlet med 50 ml av en 0,1N, vandig oppløsning av natriumhydroksyd ved 60°C i to timer. Etter avkjøling og nøytrålisering med en 0,IN r vandig oppløsning av saltsyre, ble produktet utfelt ved å tilsette 2 volumer metanol. Bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 1,38 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 6
5 g (4-nitro)benzylklorid ble tilsatt til en oppløsning av 5 g benzetoniumheparinat i 12 5 ml diklormetan og opp-løst under omrøring. Oppløsningen ble hensatt i 3 døgn ved romtemperatur, hvoretter oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, og resten oppløst i 75 ml dimetylformamid.
Den dannede ester ble utfelt ved å tilsette 75 ml av en 10%-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Bunnfallet
ble frafiltrert, vasket i metanol og tørket i vakuum.
Man fikk fremstilt 1,89 g av (4-nitro)benzylesteren i
form av natriumsaltet.
1,85 g av denne ester ble behandlet med 46 ml av en 0,1N, vandig oppløsning av natriumhydroksyd ved 60°C i to timer under omrøring. Etter avkjøling ble oppløsningen nøy-tralisert ved å tilsette en 0,lN, vandig oppløsning av saltsyre,, og produktet ble utfelt ved å tilsette to volumer metanol. Produktet ble isolert ved filtrering, vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 1,13 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 7
30 g benzylklorid ble tilsatt til en oppløsning av 30 g benzetoniumheparinat i 500 ml diklormetan og oppløst ved omrøring. Oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur i 14 timer, hvoretter oppløsningsmidlet ble fordampet i vakuum og resten oppløst i 400 ml eter. Uoppløselig bunnfall ble filtrert fra. Man fikk fremstilt 30 g av benzylesteren av heparin i form av benzetoniumsaltet.
Denne esteren ble oppløst i 200 ml diklormetan inneholdende 8 ml 1,5-diaza-bicyklo (4,3,0)5-nonen. Oppløsningen ble kokt under tilbakeløp i 34 timer, hvoretter oppløsnings-midlet ble fordampet i vakuum. Resten ble oppløst i 450 ml dimetylformamid og man tilsatte et tilsvarende volum av 10%-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Bunnfallet ble frafiltrert og vasket i metanol. Det ble så i 1 time ved 0°C behandlet med en IN, vandig oppløsning av natriumhydroksyd. Etter nøytralisering ble produktet utfelt ved å tilsette to volumer metanol. Produktet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 6,6 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 8
10 g (4-klor)benzylklorid ble tilsatt til en oppløsning av 10 g benzetoniumheparinat i 250 ml diklormetan under om-røring. Oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur i 24 timer, hvoretter oppløsningsmidlet ble fordampet i vakuum. Resten ble oppløst i 200 ml eter og det dannede bunnfall ble isolert ved filtrering. Man fikk fremstilt 10 g av (4-klor)benzylesteren av heparin i form av benzetoniumsaltet. 5 g av dette produkt ble oppløst i 100 ml diklormetan inneholdende 1,5 ml 1,5-diaza-bicyklo(4,3,0)5-nonen og deretter kokt under tilbakeløp i 4 timer. Oppløsnings-midlet ble så fjernet i vakuum, resten oppløst i 30 ml dimetylformamid, hvoretter man tilsatte 100 ml av en 10%-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og så behandlet med 24 ml av en IN, vandig oppløsning av natriumhydroksyd i 1 time ved 0°C. Oppløsningen ble nøytralisert ved å tilsette en IN oppløsning av saltsyre og produktet utfelt ved å tilsette to volumer metanol. Produktet ble frafiltrert og etter vasking med metanol og tørking i vakuum, fikk man 1 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 9
30 g benzylklorid ble tilsatt til en oppløsning av 30 g benzetoniumheparinat i 600 ml dimetylformamid. Etter opp-løsning ble reaktantene hensatt i 60 timer ved romtemperatur hvoretter den fremstilte esteren ble utfelt ved å tilsette 1200 ml av en 10%-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 11,4 g av benzylesteren av heparin i form av natriumsaltet. 10 g av denne ester ble behandlet med 250 ml av en 0,1N, vandig oppløsning av natriumhydroksyd ved 60 oC i to timer under omrøring. Etter avkjøling ble oppløsningen nøy-tralisert ved hjelp av en 0,1N, vandig oppløsning av saltsyre og produktet utfelt ved å tilsette to volumer metanol. Bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 6,65 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 10
120 g (4-klor)benzylklorid ble tilsatt til en oppløsning av 120 g benzetoniumheparinat i 2,4 1 dimetylformamid under omrøring. Oppløsningen ble så hensatt ved romtemperatur i 6o timer, hvoretter man tilsatte 2,4 1 av en 10%-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Det dannede bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 46 g av (4-klor)-benzylesteren av heparin i form av natriumsaltet. 20 g av denne ester ble behandlet med 500 ml av en 0,1N, vandig oppløsning av natriumhydroksyd ved 60°C i to timer under omrøring. Etter avkjøling og nøytralisering ble utfelling utført ved å tilsette 2 volumer metanol. 11,7 g depolymerisert heparin ble isolert ved frafiltrering i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 11
30 g metyljodid ble tilsatt til en oppløsning av 30 g benzetoniumheparinat i 750 ml diklormetan under omrøring. Oppløsningen ble hensatt i 48 timer ved romtemperatur, hvoretter oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i 450 ml dimetylformamid og utfelling utført ved å tilsette 450 ml av en 10%-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Etter frafiltrering ble bunnfallet vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 10,5 g av metylesteren av heparin i form av natriumsaltet. 2 g av denne ester ble behandlet med 50 ml av en 0,1N, vandig oppløsning av natriumhydroksyd ved 60°C anderomrøring i to timer. Etter avkjøling ble oppløsningens pH-verdi justert til 4,5 ved omrøring med en karboksylioneveksler-harpiks i H+<->formen. Harpiksen ble så utskilt ved filtrering og vasket med vann. De samlede vandige faser ble nøytrali-sert ved å tilsette en fortynnet vandig oppløsning av natriumhydroksyd, hvoretter den ble lyofilisert. Man fikk fremstilt 2 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 12
3 g av den (4-klor)benzylester av heparin som ble fremstilt som beskrevet i eksempel 10, ble behandlet med 120 ml av en 10%-ig vandig oppløsning av natriumbikarbonat i to timer ved 60°C under omrøring. Etter avkjøling ble oppløsningen nøytra-lisert ved hjelp av en 0,4N, vandig oppløsning av saltsyre, og produktet utfelt ved å tilsette 2 volumer metanol. Man fikk fremstilt 1,57 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 13
30 g etylkloracetat ble tilsatt til en oppløsning av 30 g benzetoniumheparinat i 600 ml dimetylformamid. Etter opp-løsning ble de to forbindelsene hensatt i kontakt i 60 timer ved romtemperatur, hvoretter man tilsatte 600 ml av en 10%-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Det dannede bunnfall ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum.
Man fikk fremstilt 10,78 g av karbetoksymetylesteren av heparin i form av natriumsaltet. 3 g av denne ester ble kontaktet med 100 ml av en 3%-ig vandig oppløsning av trietylamin ved 60°C. Etter 5 timer ble oppløsningen nøytralisert ved å tilsette en vandig saltsyreoppløsning, hvoretter produktet ble utfelt ved å tilsette 2 volumer metanol. Man fikk ved filtrering isolert 2,5 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet..
EKSEMPEL 14
5 g kloracetonitril ble tilsatt til en oppløsning av 5 g benzetoniumheparinat i 12 5 ml diklormetan og oppløst under omrøring. Oppløsningen ble hensatt i 48 timer ved romtemperatur, hvoretter oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Residuet ble oppløst i 75 ml dimetylformamid og produktet utfelt ved å tilsette 75 ml av en 10%-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Bunnfallet ble frafiltrert,
vasket med metanol og tørket. Man fikk fremstilt 1,63 g av cyanometylesteren av heparin i form av natriumsaltet.
Den fremstilte esteren ble behandlet med 40 ml av en
0,1N, vandig oppløsning av natriumhydroksyd ved 60°C under omrøring i 2 timer. Etter avkjøling ble oppløsningen nøytralisert ved å tilsette en 0,1N, vandig oppløsning av saltsyre, hvoretter utfelling ble utført ved å tilsette to volumer metanol. Man fikk fremstilt 1,33 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 15
3 g (4-klor)benzylesteren av heparin fremstilt som
beskrevet i eksempel 10, ble oppløst under omrøring i 120 ml 10% vandig oppløsning av natriumbikarbonat. Etter to timers omrøring ved 20 til 25°C, ble oppløsningens pH-verdi justert
til 6 ved å tilsette en IN, vandig oppløsning av saltsyre, hvoretter man tilsatte det dobbelte volum metanol. Bunnfållet ble frafiltrert, og man fikk fremstilt 2,1 g (4-klor)benzylester av heparin.
2 g av denne ble under omrøring behandlet i to timer med
50 ml av en 0,1N, vandig oppløsning av natriumhydroksyd ved 60°C. Etter avkjøling ble oppløsningen nøytralisert ved å tilsette en 0,1N, vandig oppløsning av saltsyre, hvoretter produktet ble utfelt ved å tilsette det dobbelte volum metanol. Man fikk fremstilt 1,4 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
I de forutgående eksempler 1 til 10 og 12 til 15, ble konsentrasjonen av NaCl i den vandige fasen justert til 10% ved å tilsette natriumklorid før man utfelte det dannede produkt ved å tilsette de to volumer av metanol.
EKSEMPEL 16
10 g (4-klor)benzylklorid ble under omrøring oppløst i en oppløsning av 10 g benzetoniumheparinat i 250 ml diklormetan. Oppløsningen ble hensatt i 2 4 timer ved romtemperatur, hvoretter man tilsatte en 10%-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Det dannede bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol, hvorved man fikk fremstilt 3,72 g (4-klor)benzylester av heparin i form av natriumsaltet.
En oppløsning av 0,500 g av denne ester i 10 ml formamid ble ved 60°C i 5 timer behandlet med 0,5 ml 1,5-diaza-bicyklo(4,3,0)5-nonen . Etter avkjøling tilsatte man 70 ml aceton. 0,364 g bunnfall ble frafiltrert, deretter ved 0°C i to timer, behandlet med 6 ml av en IN, vandig oppløs-ning av natriumhydroksyd. Den vandige fasen ble nøytra-lisert ved tilsetning av en IN saltsyreoppløsning og konsentrasjonen av NaCl i mediet ble justert til 10% ved ved tilsetning av natriumklorid. Utfellingen ble utført ved hjelp av det dobbelte volum av metanol. Man fikk fremstilt 0,263 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet .
EKSEMPEL 17
2,5 ml eddiksyre og deretter 150 ml av en 10 %-ig vandig oppløsning av benzetoniumklorid ble under røring til-
satt til en oppløsning av 10 g heparin (natriumsalt) i 40 ml vann. Bunnfallet ble frasentrifugert, vasket med vann og tørket. Man fikk fremstilt 19,67 g surt benzetoniumheparinat.
11 g av dette produkt ble oppløst i 110 ml dimetylformamid hvoretter man tilsatte 11 g (4-klor)benzylklorid. Blandingen ble hensatt i 48 timer ved romtemperatur, hvoretter man tilsatte 220 ml 10 %-ig natriumacetat i metanol. Bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket i vakuum. Man fikk fremstilt 4,70 g (4-klor)benzylester av heparin i form av natriumsaltet. 4 g av denne ester ble oppløst i 20 ml vann hvoretter man langsomt under omrøring tilsatte 40 ml av en 20 %-ig vandig oppløsning av benzetoniumklorid. Det dannede bunnfall ble frafiltrert, vasket med vann og tørket i vakuum. (4-klor)benzylesteren av heparin ble oppnådd i form av benzetoniumsaltet. 1 g av denne ester (benzetoniumsalt) ble oppløst i 20 ml dimetylformamid og ved 60°C og i løpet av fem timer behandlet med 1 ml 1,5-diaza-bicyklo-(4,3,0)5-nonen. Etter av-kjøling tilsatte man 50 ml av en 10 %-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. 0,346 g bunnfall ble frafiltrert og behandlet ved 0°C i 2 timer med 5 ml av en IN, vandig oppløsning av natriumhydroksyd. Den vandige fasen ble nøytralisert ved tilsetning av en IN, vandig oppløsning av saltsyre, og konsentrasjonen av NaCl i mediet ble justert til 10% ved tilsetning av natriumklorid. Utfelling ble frafiltrert, vasket med metanol, og man fikk fremstilt 0,253 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet .
EKSEMPEL 18
2,5 ml maursyre og 150 ml 10 %-ig, vandig oppløsning av benzetoniumklorid ble tilsatt til en oppløsning av 10 g heparin (natriumsalt) i 40 ml vann. Bunnfallet ble frasentrifugert, vasket med vann og tørket under vakuum.
Man fikk fremstilt 20,5 g surt benzetoniumheparinat.
2,95 g av dette produkt ble oppløst i 60 ml dimetylformamid, hvoretter man tilsatte 5,9 ml av en 0,IN oppløsning av tetrabutylammoniumhydroksyd i n-propanol/metanol.
Etter tilsetning av 2,95 g (4-klor)benzylklorid ble opp-løsningen hensatt i 5 døgn ved romtemperatur. 74 ml 10 %-ig oppløsning av natriumacetat i metanol ble så tilsatt. Man fikk frafiltrert og isolert 1,32 g (4-klor)-benzylester av heparin i form av natriumsaltet.
Denne ester ble oppløst i 6,4 ml vann og man tilsatte langsomt under omrøring 12,8 ml av en 20 %-ig vandig opp-løsning av benzetoniumklorid. Bunnfallet ble fraseparert, vasket med vann og tørket i vakuum. Den fremstilte (4-klor)-benzylesteren av heparin ble oppnådd i form av benzetonium-saltet.
1 g av denne ester ble oppløst i 20 ml diklormetan, og man tilsatte 1 ml 1,5-diaza-bicyklo(4,3,0)5-nonen. Oppløsningen ble kokt under tilbakeløp i.5 timer, hvoretter oppløsningsmidlet ble fordampet under vakuum, og resten oppløst i 15 ml dimetylformamid og man tilsatte 20 ml av en 10 %-ig oppløsning av natriumacetat i metanol. Bunnfallet ble frafiltrert og vasket med metanol. Man fikk fremstilt 0,405 g produkt som ved 0°C i 2 timer ble behandlet med 6 ml av en IN, vandig oppløsning av natriumhydroksyd. Den vandige fasen ble nøytralisert ved å tilsette en IN, vandig oppløsning av saltsyre, og konsentrasjonen av natriumklorid. Produktet ble utfelt ved å tilsette 2 volumer metanol. Det ble frafiltrert og. vasket med metanol. Man fikk fremstilt 0,355 g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
EKSEMPEL 19
0,600 g heparin (natriumsalt) ble oppløst i 7 ml vann,
og pH-verdien ble justert til 3,5 ved tilsetning av N-saltsyre. 0,300 g 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimid ble tilsatt, og oppløsningen hensatt i 1 time ved romtemperatur. Man tilsatte 2,5 ml av en vandig opp-løsning av natriumklorid inneholdende 280 g pr. liter, hvoretter 15 ml metanol ble tilsatt. Det dannede bunnfallet ble frafiltrert, vasket med metanol og tørket under vakuum. Man fikk fremstilt 0,527 g metylester av heparin, hvor forestringsprosenten av karboksylgruppene er 50%, og produktet ble oppnådd i form av natriumsaltet.
0,300 g av denne ester ble oppløst i 7,5 ml 0,1N, vandig oppløsning av natriumhydroksyd og oppløsningen holdt på 60°C i 2 timer. Etter avkjøling ble oppløsningen nøytra-lisert ved tilsetning av en 0,1N, vandig oppløsning av saltsyre, og konsentrasjonen av NaCl i mediet ble justert til 10%, hvoretter utfelling ble utført ved å tilsette to volumer metanol. Man fikk fremstilt 0,200. g depolymerisert heparin i form av natriumsaltet.
Tabellene B og C angir egenskaper for produktene (depolymerisert heparin i form av natriumsaltet) fremstilt som beskrevet i eksempel 1 til 19. Prosentsatsen av svovel, nitrogen og uronsyrer, samt den spesifikke rota-sjonen i vandig oppløsning ved 20°C, foruten den midlere molekylvekt og de aktiviteter som er angitt i tabellene, ble bestemt ved hjelp av de fremgangsmåter som er beskrevet tidligere. I kolonnen for molekylvektsfordelingen er det gitt omtrentlige ekstreme verdier for molekylvektene til polysakkaridbestanddelen i blandingen, slik dette kunne bestemmes ved gelpenetrasjonskromato-grafi på gel av polyakrylamid-agarose. I viskositets-kolonnen er vist viskositetene ved 25°C av en 10 %-ig vandig oppløsning av produktene. I UV-absorbsjonskolonnen er det vist absorbsjonen for et sjikt på 1 cm av en 1%-ig oppløsning av produktet i 0,01 N HC1, og absorbsjonen er målt i det bølgelengdeområdet hvor man fikk maksimal absorbsjon, dvs. i området fra 220 - 232 nm.
EKSEMPEL 20
Produktet fra eksempel 1 på den ene side, og en kommersiell prøve på heparin på den annen side ble på forskjellig tidspunkt subkutant tilført 5 friske, frivillige personer en dose på 5000 i.e. "codex". Det ble tatt ut blodprøve 1 time, 3 timer, 5 timer og 7 timer etter til-førselen, hvoretter man målte antikoaguleringsaktivi-teten i plasma ved hjelp av de anti-Xa- og A.P.T.T.-r prøver som er beskrevet tidligere. De oppnådde resultater er uttrykt i form av internasjonale enheter pr. ml plasma, idet man refererer til en standardkurve som ble oppsatt fra prøver utført på kontrollplasma som var tilsatt kjente mengder av referanseheparin (3. internasjonale standard).
De midlere resultater er angitt i tabell D.
Det fremgår at produktet fra eksempel 1 har en langt sterkere anti-Xa-effekt enn kommersielt heparin.
Claims (2)
1.
Fremgangsmåte for fremstilling av blandinger av sulfaterte polysakkarider med en generell heparinpolysakkaridstuktur med lavere midlere molkylvekt enn heparin der de sure grupper foreligger i fri eller saltdannet form, der polysakkaridene i blandingene har en etylenisk dobbeltbinding ved en av kjedeendene og der blandingene i natriumsalttilstand oppviser følgende karakteristika: prosentandel svovel: 9 til 13,5, prosentandel nitrogen: 1,8 til 2,5, prosentandel uronsyre; 20 til 30, midlere molekylvekt 2000 til 10.000 dalton, spesifikk rotasjon i vandig oppløsning: (a)<20> = +25 til +55°,
karakterisert ved at en heparinester oppnådd ved partiell eller total forestring av karboksylsyregruppene i heparin omsettes med en alkali- eller organisk base ved en temperatur av 20 til 80°C enten i vandig miljø hvis heparin-esteren er oppløselig i vann eller i et inert oppløsningsmiddel for esteren, det således oppnådde depolymeriseringsprodukt isoleres som alkalisalt og det sistnevnte hydrolyseres ved hjelp av en vandig, minst 1 N natriumhydroksydoppløsning ved en temperatur av 0 til 5°C.
2.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det anvendes en base med en molar konsentrasjon i det vandige miljø på 0,1 til 0,6.
3-
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det som base anvendes alkalihydroksyder, alkalikarbonater, trietylamin eller 1,5-diaza(4,3,0)bicyklo-5-nonen.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8010791A FR2482611B1 (fr) | 1980-05-14 | 1980-05-14 | Nouveaux polysaccharides sulfates, procedes pour leur preparation et leur utilisation comme medicaments |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO811632L NO811632L (no) | 1981-11-16 |
| NO156129B true NO156129B (no) | 1987-04-21 |
| NO156129C NO156129C (no) | 1987-07-29 |
Family
ID=9241965
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO811632A NO156129C (no) | 1980-05-14 | 1981-05-13 | Fremgangsmaate for fremstilling av blandinger av sulfaterte polysakkarider med en generell heparinpolysakkarid-struktur. |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0040144B1 (no) |
| JP (1) | JPS6051482B2 (no) |
| KR (1) | KR840001753B1 (no) |
| AR (1) | AR229510A1 (no) |
| AT (1) | AT384428B (no) |
| AU (1) | AU535791B2 (no) |
| CA (1) | CA1181744A (no) |
| DE (1) | DE3165361D1 (no) |
| DK (1) | DK168824B1 (no) |
| DZ (1) | DZ294A1 (no) |
| ES (1) | ES502199A0 (no) |
| FI (1) | FI67865C (no) |
| FR (1) | FR2482611B1 (no) |
| GR (1) | GR82283B (no) |
| HU (1) | HU188667B (no) |
| IE (1) | IE51283B1 (no) |
| IL (1) | IL62866A (no) |
| IN (1) | IN152828B (no) |
| MA (1) | MA19143A1 (no) |
| NO (1) | NO156129C (no) |
| NZ (1) | NZ197081A (no) |
| PT (1) | PT73024B (no) |
| ZA (1) | ZA813176B (no) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2548672A1 (fr) * | 1983-07-04 | 1985-01-11 | Pharmuka Lab | Oligosaccharides sulfates et leur utilisation comme medicaments |
| DE3422407A1 (de) * | 1984-06-16 | 1986-03-06 | B. Braun Melsungen Ag, 3508 Melsungen | Verwendung von heparinderivaten zur selektiven extrakorporalen praezipitation von low-density-lipoproteinen aus vollserum oder plasma |
| EP0209924A1 (en) * | 1985-07-12 | 1987-01-28 | Akzo N.V. | New anti-trombosis agent based on glycosaminoglycan, process for its preparation, and pharmaceutical compositions |
| FR2584728B1 (fr) * | 1985-07-12 | 1987-11-20 | Choay Sa | Procede de sulfatation de glycosaminoglycanes et de leurs fragments |
| ES2003197A6 (es) * | 1987-01-05 | 1988-10-16 | Rovi Lab Farmaceut Sa | Procedimiento de despolimerizacion de la heparina para la obtencion de una heparina de bajo peso molecular dotada de actividad antitrombotica |
| EP0337327A1 (en) * | 1988-04-09 | 1989-10-18 | Bioiberica, S.A. | Process for the preparation of new oligosaccharide fractions by controlled chemical depolimerization of heparin |
| IT1230582B (it) | 1988-10-21 | 1991-10-28 | Opocrin S P A Lab Farmabiologi | Oliogosaccaridi di dermatan solfato ed eparina aventi attivita' antiaterosclerotica |
| IT1234826B (it) * | 1989-01-30 | 1992-05-29 | Alfa Wassermann Spa | Derivati eparinici e procedimento per la loro preparazione |
| US5340932A (en) * | 1989-08-18 | 1994-08-23 | Ajorca S.A. | Substances with heparin-like structure and their method of production |
| DE4121115B9 (de) * | 1990-06-26 | 2005-09-29 | Aventis Pharma S.A. | Gemische sulfatierter Polysaccharide mit der Grundstruktur der das Heparin bildenden Polysaccharide und mit niedrigem Molekulargewicht, deren Herstellungsverfahren und Verwendung |
| FR2663639B1 (fr) * | 1990-06-26 | 1994-03-18 | Rhone Poulenc Sante | Melanges de polysaccharides de bas poids moleculaires procede de preparation et utilisation. |
| USRE38743E1 (en) * | 1990-06-26 | 2005-06-14 | Aventis Pharma S.A. | Mixtures of particular LMW heparinic polysaccharides for the prophylaxis/treatment of acute thrombotic events |
| US5707973A (en) * | 1991-04-23 | 1998-01-13 | Rhone-Poulenc Rorer S.A. | Sulfated polysaccharids for treatment or prevention of thromboses |
| IT1256236B (it) * | 1992-12-23 | 1995-11-29 | Mediolanum Farmaceutici Srl | Oligosaccaridi aventi attivita' biologica e procedimento per la loro preparazione di glicosaminoglicani |
| ES2077533B1 (es) * | 1994-02-28 | 1996-07-01 | Bioiberica | Procedimiento de obtencion de fracciones de oligosacaridos por despolimerizacion quimica de heparina. |
| AP1390A (en) * | 1996-11-27 | 2005-04-15 | Aventis Pharmaceuticals Products Inc | Pharmaceutical composition comprising a compound having anti-Xa activity and a platelet aggregation antagonist compound. |
| AUPO556297A0 (en) * | 1997-03-11 | 1997-04-10 | Australian National University, The | Sulfated oligosaccharides having anticoagulant/ antithrombotic activity |
| JP4897991B2 (ja) * | 1999-07-23 | 2012-03-14 | ラボラトリオス ファルマセウティコス ロビ ソシエダッド アノニマ | 超低分子量ヘパリン組成物 |
| US6969705B2 (en) | 2000-07-21 | 2005-11-29 | Aventis Pharma S.A. | Compositions of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| FR2811992B1 (fr) * | 2000-07-21 | 2003-07-04 | Aventis Pharma Sa | Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
| DE60218642T2 (de) * | 2002-06-20 | 2007-11-29 | Chemi S.P.A., Cinisello Balsamo | Verfahren zur Herstellung von Heparinestern |
| FR2845686B1 (fr) | 2002-10-10 | 2013-08-30 | Aventis Pharma Sa | Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
| US20040171819A1 (en) | 2002-10-10 | 2004-09-02 | Aventis Pharma S.A. | Mixtures of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| JP2006096668A (ja) * | 2002-11-08 | 2006-04-13 | Ono Pharmaceut Co Ltd | エラスターゼ阻害剤と血液凝固系および／または線溶系酵素阻害剤との組み合わせからなる医薬 |
| DE10260958A1 (de) * | 2002-12-20 | 2004-07-08 | Sustech Gmbh & Co. Kg | Kompositmaterialien aus Calciumverbindungen und Glucuronsäure- und/oder Iduronsäurehaltigen Polysacchariden |
| US7956046B2 (en) | 2003-07-24 | 2011-06-07 | Aventis Pharma S.A. | Oligosaccharide mixtures derived from heparin, preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them |
| ITMI20031679A1 (it) * | 2003-08-29 | 2005-02-28 | Opocrin Spa | Processo per la produzione di eparine a basso peso |
| EP1582531A1 (en) | 2004-03-24 | 2005-10-05 | Aventis Pharma S.A. | Process for oxidizing unfractionated heparins and detecting presence or absence of glycoserine in heparin and heparin products |
| US20050261241A1 (en) | 2004-05-19 | 2005-11-24 | Celsus Biopharmaceuticals, Inc. | Use of dermatan sulfates and/or desulfated heparins to treat or prevent heparinoid-induced autoimmune responses |
| EP1792621B1 (en) | 2005-11-30 | 2012-04-04 | Istituto di Ricerche Chimiche e Biochimiche "G. Ronzoni" | Orally administrable heparin derivatives |
| ES2340902B1 (es) * | 2008-07-01 | 2011-05-03 | Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. | Composicion farmaceutica con glicosaminoglicanos y su uso en tratamiento de ulceras cronicas. |
| KR101794877B1 (ko) * | 2010-09-14 | 2017-11-07 | 고쿠리츠 다이가쿠 호징 미야자키 다이가쿠 | 고순도 헤파린 및 그 제조방법 |
| AU2018385557B2 (en) | 2017-12-11 | 2024-01-04 | Biological E Limited | Process for the preparation of low molecular weight heparin |
| BR112022000255A8 (pt) | 2019-07-09 | 2022-03-22 | Optimvia Llc | Métodos para sintetizar polissacarídeos anticoagulantes |
| ES2792298B2 (es) * | 2020-04-27 | 2022-04-20 | Farm Rovi Lab Sa | Procedimiento para la obtencion de heparinas de bajo peso molecular y heparinas de bajo peso molecular obtenidas por el mismo |
| EP4182452A4 (en) | 2020-07-14 | 2024-07-31 | Optimvia Llc | METHOD FOR THE SYNTHESIS OF NON-ANTICOAGULATING HEPARAN SULFATE |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2100735B1 (no) * | 1970-06-08 | 1974-08-30 | Mar Pha Etu Expl Marques | |
| CA1136620A (en) * | 1979-01-08 | 1982-11-30 | Ulf P.F. Lindahl | Heparin fragments having selective anticoagulation activity |
-
1980
- 1980-05-14 FR FR8010791A patent/FR2482611B1/fr not_active Expired
-
1981
- 1981-05-08 EP EP81400728A patent/EP0040144B1/fr not_active Expired
- 1981-05-08 DE DE8181400728T patent/DE3165361D1/de not_active Expired
- 1981-05-08 GR GR64889A patent/GR82283B/el unknown
- 1981-05-11 MA MA19352A patent/MA19143A1/fr unknown
- 1981-05-12 PT PT73024A patent/PT73024B/pt unknown
- 1981-05-12 HU HU811300A patent/HU188667B/hu unknown
- 1981-05-13 NZ NZ197081A patent/NZ197081A/en unknown
- 1981-05-13 KR KR1019810001640A patent/KR840001753B1/ko active
- 1981-05-13 ES ES502199A patent/ES502199A0/es active Granted
- 1981-05-13 DZ DZ816189A patent/DZ294A1/fr active
- 1981-05-13 DK DK211981A patent/DK168824B1/da not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 FI FI811469A patent/FI67865C/fi not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 AU AU70519/81A patent/AU535791B2/en not_active Expired
- 1981-05-13 ZA ZA00813176A patent/ZA813176B/xx unknown
- 1981-05-13 AT AT0213681A patent/AT384428B/de not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 NO NO811632A patent/NO156129C/no not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 IE IE1074/81A patent/IE51283B1/en not_active IP Right Cessation
- 1981-05-13 IL IL62866A patent/IL62866A/xx not_active IP Right Cessation
- 1981-05-14 JP JP56072858A patent/JPS6051482B2/ja not_active Expired
- 1981-05-14 IN IN513/CAL/81A patent/IN152828B/en unknown
- 1981-05-14 CA CA000377577A patent/CA1181744A/fr not_active Expired
- 1981-05-14 AR AR285321A patent/AR229510A1/es active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO156129B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av blandinger av sulfaterte polysakkarider med en generell heparinpolysakkarid-struktur. | |
| AU643531B2 (en) | Mixtures of low molecular weight polysaccharides, and their preparation and use | |
| US4727063A (en) | Depolymerized and supersulfated heparin, process for its preparation and pharmaceutical compositions | |
| USRE38743E1 (en) | Mixtures of particular LMW heparinic polysaccharides for the prophylaxis/treatment of acute thrombotic events | |
| US5696100A (en) | Method for controlling O-desulfation of heparin and compositions produced thereby | |
| CA1136620A (en) | Heparin fragments having selective anticoagulation activity | |
| US4401758A (en) | Process for making oligosaccharides having anti-Xa activity and the resulting oligosaccharides | |
| JP4166275B2 (ja) | グリコサミノグリカン―アンチトロンビンｉｉｉ／ヘパリン補因子ｉｉ結合体 | |
| WO1996006867A9 (en) | Method for controlling o-desulfation of heparin and compositions produced thereby | |
| EP0862585A1 (en) | Method for controlling o-desulfation of heparin and compositions produced thereby | |
| JP2007501305A (ja) | 血漿中で高度の抗血栓活性を有する多糖類誘導体 | |
| WO1992002232A1 (en) | Heparin fragment showing complement inhibition activity | |
| JPH08508540A (ja) | 循環血液量減少性ショックおよび関連ショック症候群の治療のための非抗凝血性の化学修飾したヘパリン様物質 | |
| EP2256139A1 (en) | Novel sulfated heptasaccharide and its use as antithrombotic agent | |
| USRE35770E (en) | Oligosaccharides having anti-Xa activity and pharmaceutical compositions containing them | |
| EP1694714B1 (en) | Low molecular weight polysaccharides having antithrombotic activity | |
| KR20090109105A (ko) | 바이오틴 또는 바이오틴 유도체와의 1개 이상의 공유 결합을 포함하는 헤파린, 이의 제조 방법 및 이의 용도 | |
| US20050096294A1 (en) | Novel anti-coagulant |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |
Free format text: EXPIRED IN MAY 2001 |