FI58135C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara hellebrigeninacylderivat - Google Patents

Description

Piina- r] ΓΒΐ KUULUTUSJULKAISU C Ω *1 7 C

VgpA [8J (11>UTLÄGGNINGSSKIUFT

•Jtjpfö (45) Patoni r, r J ; ~ I v. t.

^ v ^ (S1) Kv.iiJ/inca.3 C 07 J 19/00

SUOMI—FINLAND (21) Pwn«ihii^-PitM»^i TT38iU

(22) HakwnltpUvl — AMdknlnpdig l6.12.TT

(23) Alkupilvt—Glttlfh«t*dag l6.12.T7 (41) Tullut }ulklttk*l — Riivit offmtllg 18.06. j8

Patentti· Ja rekisterihallitus (44) Nihtivikslpvmn |t kuuLJutluHun pvm. — n

PfttMt· OCh nglltintynlnn Antdktn utlagd och utUkrlfUn publlotrsd 29*08.80 (32)(33)(31) Pyr«i«ty atuolkaut-toglrt priority IT. 12. j6

Engianti-England(GB) 52T59/T6 (Tl) Degussa Aktiengesellschaft, Weissfrauenstrasse 9, 6000 Frankfurt 1,

Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (T2) Otto Isaac, Hanau, Klaus Posselt, Wachtberg-Villiprott, Horst Uthemann, Frankfurt, Klaus Thiemer, Hanau, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (7¾) Oy Kolster Ab (5¾) Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten hellebrigeniiniasyylijohdannais-ten valmistamiseksi - Förfarande för framställning av terapeutiskt använd-bara hellebrigeninacylderivat

Hellebrigeniinimonoasetaatti, jonka kaava on CH„ λ ^_f Vo o=ch \ y

ch3-co-o — 0H

OH

on tunnettu. Tällä yhdisteellä on kissalla suoritetuissa tutkimuksissa havaittu olevan digitaliksen kaltainen vaikutus. (J. Pharmacol, exper. Therapy 99 (1950) sivut 395-toO).

2 58135

Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten helle-brigeniiniasyylijohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava on (I)

R-CO-O —L J

jossa R tarkoittaa C^-Cg-alkenyyliryhmää, C^-C^-alkyyliryhmää, C^-Cg-sykloalkyyli-ryhmää, karboksimetoksimetyyliryhmää, fenyyliryhmää, nitroryhmillä substituoitua fenyyliryhmää tai C^-Cg-alkyyliryhmää, joka sisältää ryhmän -NR^R^, jolloin R^ ja R^ tarkoittavat C^-Cg-alkenyyliryhmää tai ryhmä -NR^R^ substituoimattoman tai yhdellä hydroksiryhmällä substituoidun piperidinoryhmän tai substituoimattoman tai yhdellä tai kahdella metyyliryhmällä substituoidun morfolinoryhmän ja R^ on ryhmä -CHO tai -CH^OH, ja niiden suolojen valmistamiseksi.

Alkyyli- ja substituoidut alkyylitähteet, alkenyyli- ja substituoidut alkenyylitähteet, voivat olla suoraketjuisia tai haarautuneita. Varsinkin, kun R on C^-C^-alkenyylitähde tai C^-C^-alkyylitähde, voi tämä olla haarautunut.

Jos R on suora alkyylitähde, silloin tämä käsittää esimerkiksi 5~12, erityisesti 7-12 C-atomia. Alkyyli- ja substituoidut alkyylitähteet, joissa kussakin on 1-6 hiiliatomia sisältävät erityisesti 1-U C-atomia, edullisesti 1, 2 tai 3 C-atomia. Alkenyyli- sekä substituoidut alkenyylitähteet, sisältävät erityisesti 2, 3 tai 1+ C-atomia, edullisesti 3 tai 1* C-atomia. Jos R on haarautunut C^-C^-alkyyli-tähde, on erityisesti kysymys alkyylitähteestä, jossa on 3-^ C-atomia. Jos R on suora alkyylitähde, on kysymyksessä esimerkiksi alkyylitähde, jossa on 8-12 atomia edullisesti 9-10 C-atomia tai myös propyylitähde.

Jos R on substituoitu fenyylitähde, voi tämä olla yksin-, kaksin- tai kolminkertaisesti substituoitu nitroryhmillä. Jos R on alkyyliryhmä, joka sisältää ryhmän -NR^R^, on tällöin edullisesti kysymyksessä ryhmä -CH^-NR^^.

3 581 35

Jos R on edellä esitetty kaksinkertaisesti substituoitu fenyylitähde, ovat molemmat substituentit edullisesti 3,5-asemassa.

Keksinnön mukaisille yhdisteille on ominaista hyvä sydänvaikutus. Vastakohtana edellä esitetylle tunnetulle hellebrigeniinimonoasetaatille, joka suun kautta nautittuna ei imeydy, imeytyvät keksinnön mukaiset yhdisteet suuressa määrässä maha-suolistoalueella suun kautta antamisen jälkeen ja niiden resorptio-osuus on 30-90 % esimerkiksi suolensisäisesti annettuna. Tunnetun yhdisteen entero-resorptio-osuus on sensijaan 0. Tunnettua yhdistettä ei sentähden voida antaa suim kautta.

Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat suoraan sopivia suun kautta annettaviksi ^ ja siten sopivia pitkäaikaishoitoon. Erityisesti keksinnön mukaisilla yhdisteillä on positiivinen inotrooppinen vaikutus (sydämen supistumisvoimaa parantava vaikutus), joka on osoitettavissa esimerkiksi eristetyllä elimellä (Langendorff-sydän, sydäneteinen) tai koko koe-eläimellä (koira). Hatcher-annokset ovat esimerkiksi erittäin edullisella alueella 0,09-1 mg/kg, edullisesti 0,1-0,5 mg/kg. Hatcher-annos on pienin annos, joka laskimonsisäisesti ruiskeena annettuna 60-90 minuutissa johtaa kissalla kuolemaan ja on yleinen mitta voimakkaasti sydämeen vaikuttavien yhdisteiden tehon arvostelua varten.

Tämän lisäksi keksinnön mukaisilla yhdisteillä on voimakas bradykardinen vaikutus, joka ilmenee lyöntitaajuuden alenemisella 30 %:iin asti (terapeuttisella alueella) ja johtaa vajaatoiminnallisen sydämen kohonneen lyömätiheyden normalisoitumiseen.

Sen lisäksi keksinnön mukaisten yhdisteiden valmennussuhteet kissoilla ovat terapeuttisesti edullisella alueella, esim. kissoilla 20-26 %. Tämän suuruisella valmennussuhteella nimittäin estyy vaikutusaineen liian voimakas kumuloituminen ja toistuvasta annosta aiheutuvat myrkytysilmiöt, mikä erityisesti sydä--- meen vaikuttavilla yhdisteillä on suuresta merkityksestä. Lisäksi keksinnön mukai sille yhdisteille on ominaista sivuvaikutusten puute: niinpä ei esimerkiksi havaittu oksetusärsytystä kissalla ruiskeita annettaessa. Samoin maha sietää niitä hyvin ^ (rotilla ei esimerkiksi havaittu mahahaavoja aiheuttavaa vaikutusta).

Terapeuttiset vertedlukokeet Määrättiin sydänvaikutus ottamalla huomioon enteroresorptio menetelmällä, joka on esitetty julkaisussa Greef, Schwarzmann et Waschulzik, Arzneimittelforschung, Bd. 15 (1965), 483-^86.

** 58135

Metodiikka

Kaikki annokset on ilmoitettu mg tehoainetta yhtä kg kohden koe-eläimen kehonpainoa.

Kissoille, jotka olivat uretaani-kloraloosi-narkoosissa, tehtiin laparo-tomia ja annettiin ruiskeena pohjukaissuoleen suhletaalinen annos tutkittavaa glykosidia. Tämä suhletaalinen annos valitaan tavallisesti siten, että se vastaa noin puolta Hatcher-annoksesta, joka on sellainen annos mg/kg koe-eläimen kehonpainoa, joka intravenoosisesti annettuna saa aikaan sydämen pysähtymisen, ts. kuoleman. Annetun glykosidimäärän takaisinvirtaaminen estettiin siten, että poh-jukaissuoli sidottiin kiinni välittömästi ruiskeen antamiskohdan alapuolelta sekä toiselta puolen mahanportin korkeudelta. Kahden tunnin resorptioajan kuluttua - lisättiin sydämen pysähtymiseen tarvittava määrä glykosidia intravenoosisesti.

Tulokset on esitetty taulukossa I.

Taulukko I

Resorptio-osuus (eli vaikutusosuus) on laskettu seuraavan kaavan mukaan • 3C) · ·* * X) letaalinen annos i.v. - lisätty annos l.v.

R (%) = (Hatcher) __ x 100 intraduodenaalinen ennakkoannos

Yhdiste Resorptio-osuus Hatcher-annos

Esimerkin n:o % mg/kg i.v.

1 38 % 0,108 2 89 % 0,169 3 50 % 0,181 k 90 % 0,191 8 85 % 0,17^ 9 33 % 0,801 10 85 % 0,769 11 61 % 0,187 12 k2 % 0,288 13 89 % 0,295 1k 57 % 0,122 15 96 % 0,196 16 91 % 0,191 17 91 % 0,259 18 100 % 0,k6k

Hellebrigeniini noin 6 % 0,186

Hellebrigeniinimonoasetaatti 0 % 0,05 *^ = intravenoosinen 5 581 35

Keksinnölle on tunnusomaista, että a) hellebrigeniini, jonka kaava on

vCbO

(ii)

OH

jossa R^ tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan hapon kanssa, jonka kaava on R-COX (III) jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä ja X on kloori-, bromi- tai jodiatomi tai, kun R on C -C^-alkyyli- tai fenyyliryhmä, X voi lisäksi olla OCOR-ryhmä, tai kun R on karboksimetoksimetyyliradikaali, X voi lisäksi muodostaa yhdessä tämän radikaalin hydroksiryhmän kanssa yksinkertaisen sidoksen hydroksihappiatomiin, ja saatuiin yhdisteeseen haluttaessa liitetään R^ ja Rg alkyloimella, tai b) kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on C^C^-halogeenialkyyli- tai C -C^-alkenyyliryhmä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on 2 ° NHR^R^, jossa R^ ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä tai molemmat voivat tarkoittaa vetyatomia, ja saatuun yhdisteeseen haluttaessa liitetään toinen tai molemmat substituenteista R^ ja R^ alkyloimalla, ja suoritusmuodon a) tai b) mukaisesti saadussa yhdisteessä, jossa R^ on formyyliryhmä, tämä pelkistetään ryhmäksi -CH^OH, ja että saatu yhdiste haluttaessa muutetaan suolaiseen.

Reaktio kaavan III mukaisen yhdisteen kanssa saatetaan tapahtumaan esimer-kiksi tavallisessa liuottimessa tai suspendoimisaineessa, kuten vedessä, mahdollisesti liuotusvälitysainetta lisäten (esimerkiksi alempia alifaattisia alkoholeja, alempia alifaattisia ketoneja, dimetyyliformamidia), tai tehottomissa aineissa. Liuottimina tai suspendoimisaineina tulevat kysymykseen esimerkiksi: pien-molekyyliset alifaattiset eetterit (esim. U-10 C-atomia); pienmolekyyliset ali-faattiset ketonit (esim. 3-6 C-atomia); tyydytetyt sykliset eetterit, kuten tetra-hydrofuraani, dioksaani; pienmolekyyliset tyydytetyt kloori- tai fluorihiilivedyt, joissa on 1-5 C-atomia, jolloin yksittäiset C-atomit voivat olla yksin- tai moninkertaisesti) substituoituja kloorilla ja/tai fluorilla, kuten kloroformi, 6 58135 metyleenikloridi, mahdollisesti kloorilla tai bromilla substituoidut aromaattiset hiilivedyt, kuten bentseeni, tolueeni, ksyleeni, klooribentseeni, dimetyyliform-amidi, dimetyylisulfoksidi, tetrametyylivirtsa-aine, pyridiini, N-metyylipyrro-lidoni. Tietenkin voidaan käyttää myös näiden liuottimien seoksia.

Menetelmä totetutetaan lämpötiloissa väliltä 0-200°C, edullisesti välillä 15-150°C.

Happoa sitovan aineen, kuten alkalihydroksidien, alkalikarbonaattien, alkali vetykarbonaatt ien , alkaliasetaattien, maa-alkalikarbonaattien, trialkyyliamii-nien, dialkyyliamiinien, pyridiinien ja niiden kaltaisten aineiden tai myös yhdisteen II ylimääräinen läsnäolo on tarkoituksenmukainen. Tällöin voidaan happoa sitovaa ainetta myös samanaikaisesti yksinään tai sekoitettuna muiden tavallisten aineiden kanssa käyttää liuottimena (esim. pyridiiniä). On pidettävä huoli siitä, että reagoimaton lähtöaine (III, varsinkin jos kysymyksessä on happokloridi, huolellisesti neutraloidaan ja poistetaan. Usein reaktiotuotteen kromatografinen puhdistus piihappogeelillä on suositeltava, jolloin eluointi tapahtuu kloroformi/ etanoli-seoksella (etanolipitoisuus esim. 1-5 %).

Kaavan III reaktiokomponenttina voidaan käyttää myös yhdistettä, jossa toinen tähteistä R^ tai R^ on aminoryhmille tavallinen suojaryhmä. Kysymykseen tulevat esimerkiksi peptidi-synteesissä tavalliset suojaryhmät ja siinä tavalliset lohkaisumenetelmät. Tähän viitataan mm. Jesse P. Greenstein'in ja Milton Winitz'in teoksessa "Chemistry of Amino Acids", N.Y. 1961, John Wiley & Sons, Inc. Volume 2, esimerkiksi s. 883-. Lopputuotteista voidaan tällaiset suojaryhmät lohkaista mineraalihappojen, kuten suolahapon tai rikkihapon avulla alkoholipitoisessa tai vesi-alkoholipitoisessa liuoksessa tai emästen, esimerkiksi alkoholipitoisen alkalilipeän (esimerkiksi metanolipitoisen KOH:n) avulla lämpötiloissa väliltä 20-100°C. Pelkistäen lohkaistavia tähteitä voidaan hydrata pois vedyllä hydraus-katalyytin, (esimerkiksi palladiumin, palladium/hiilen) läsnäollessa, esimerkiksi etanolissa, edullisesti normaaliolosuhteissa.

Tämän jälkeen voidaan aminoryhmään liittää tähteet R^ ja R2 alkyloimalla. Tähän kuuluu myös alkenyyliryhmän samanlainen liittäminen. Alkyloimis- tai alke-nyloimisaineina tulevat kysymykseen esimerkiksi: kaavojen RjHal, ArSO^R^ ja SC>2(ORj)2, esterit, jolloin Hai on halogeeniatomi (erityisesti kloori, bromi tai jodi), ja Ar on aromaattinen tähde, kuten esimerkiksi mahdollisesti yhdellä tai useammalla alemmalla alkyylitähteellä substituoitu fenyyli- tai naftyylitähde, ja R| on C.|-Cg-alkyylitähde, C2-Cg-alkenyylitähde tai C^C^-alkoksiryhmillä tai halogeeniatomeilla substituoitu C^-Cg-alkyyli- tai C^-Cg-alkenyylitähde. Esimerk- t 58135 kejä ovat p-tolueenisulfonihappoalkyyliesterit, alemmat dialkyylisulfaatit, alkyy-lihalogenidit, alkenyylihalogenidit jne. Alkyloimis- tai alkenyloimisreaktio saatetaan tapahtumaan, mahdollisesti lisäten tavallisia happoa sitovia aineita, kuten alkalikarbonaatteja, pyridiiniä tai muita tavallisia tertiäärisiä amiineja, lämpötiloissa väliltä 0-150°C inerteissä liuottimissa, kuten alkoholeissa, di-oksaanissa, dimetyyliformamidissa, dimetyylisulfoksidissa, aromaattisissa hiilivedyissä, kuten bentseenissä, tolueenissa tai asetonissa sekä tällaisten liuottimien seoksissa. Alkylointi alkyylihalogenidien (esimerkiksi jodidien) avulla NaH:n läsnäollessa voi tapahtua esim. seoksessa, jossa on tolueenia ja vähän dimetyyliformamidia (0,1-5 %, esim. 0,5 %), Edellä esitettyjen reaktioaineiden - asemesta voidaan käyttää myös muita kemiassa tavallisia kemiallisesti samanarvoisia aineita (ks. esim. myös: L.F. ja Mary Fieser "Reagents for Organic Synthesis", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1967» Vol. 1, s. 1303-1301+ ja Vol. 2, s. 1+71 )· _ Jos ainoastaan toinen tähteistä R^ tai R^ on liitettävä, on tarkoituksenmukaista suorittaa alkylointi tai alkenylointi lähtötuotteessa läsnäolevan suojaryhmän läsnäollessa ja sitten vasta lohkaista suojaryhmä.

Alkylointi tai alkenylointi voidaan suorittaa myös niin, että suojaryhmän lohkaisun jälkeen saatetaan reagoimaan vastaavan oksoyhdisteen kanssa samanaikaisesti tai sen jälkeen pelkistämällä normaalissa tai korotetussa paineessa lämpötiloissa väliltä 0-100°C tavallisessa liuottimessa tai suspendoimisaineessa. Pelkistiminä käytetään esimerkiksi syntyvää vetyä neutraalissa tai emäksisessä väliaineessa, elektrolyyttistä pelkistystä, natrium-alkoholia, natrium- tai alumiini amalgaamaa, vetyä tavallisten hydrauskatalyyttien (esim. Raney-nikkelin, platinan, palladiumin) läsnäollessa tai kompleksisia hydridejä, kuten esim. litium-aluminiumhydridiä. Jos samanaikaisesti hydraavan kondensaation kanssa olisi poistettava bentsyyliryhmiä, ovat palladium-katalyytit edullisesti käyttökelpoisia, - jolloin ensin valmistetaan välitön kondensaatiotuote ja tämä sitten vasta mahdollisesti edeltävän eristämisen ja puhdistamisen jälkeen pelkistetään.

Menetelmätuotteet, joissa tähde R on C^-Cg-halogeenialkyylitähde, voidaan - saattamalla reagoimaan kaavan HNR^R^, jossa R^ ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä, amiinien kanssa, muuttaa sellaisiksi yhdisteiksi, joissa R tarkoittaa C^-Cg-alkyyliryhmää, joka on substituoitu ryhmällä -NR^R^. Tämä reaktio saatetaan tapahtumaan joko liuottimen kanssa tai ilman sitä korotetuissa lämpötiloissa. Liuottimina tulevat kysymykseen orgaaniset liuottimet, esimerkiksi alkoholit tai hiilivedyt, kuten bentseeni, tolueeni, ksyleeni, dimetyyliformamidi, etanoli, butyylialkoholi. Yleensä työskennellään lämpötiloissa väliltä 50-200°C. Mahdollisesti on suositeltavaa työskennellä happoakseptorin, esimerkiksi potaskan, soodan jne. läsnäollessa, Happoakseptorina voi toimia myös amiini-ylimäärä.

8 58135

Samoin voidaan saada kaavan I menetelmätuotteita, joissa R on C^-Cg-alkyyli-ryhmä, joka on substituoitu tähteellä -NR^R^, kaavan I yhdisteistä, joissa R on C^-Cg-alkenyylitähde, saattamalla tällaisia yhdisteitä reagoimaan vastaavan amiinin kanssa, jolla on kaava NHR^Rg. Tämä reaktio voidaan saattaa tapahtumaan esimerkiksi liuottimessa tai suspendoimisaineessa, kuten vedettömissä alemmissa alkoholeissa, dioksaanissa, orgaanisissa happoamideissa, etikkahapossa jne. 20-150°C:ssa (reaktioaika on useammasta tunnista muutamaan päivään).

Jos substituentti R sisältää asymmetrisen hiiliatomin (kuten R:n ollessa haarautunut alkyyliryhmä) ja lähtöaineena käytetään vastaavaa rasemaattia, saadaan lopputuote rasemaattina, joka voidaan sinänsä tunnetulla tavalla esimerkiksi optisesti aktiivisen emäksen avulla hajottaa optisesti aktiivisiksi isomeereiksi.

On kuitenkin myös mahdollista alusta lähtien käyttää optisesti aktiivisia lähtöaineita, jolloin tällöin saadaan lopputuotteeksi vastaavasti optisesti aktiivinen muoto.

Esimerkki 1

Hellebrigeniini-3/^-butyraatti 2.08 g hellebrigeniiniä (0,005 moolia) liuotetaan 20 mlraan pyridiiniä ja lisätään sitten 15 ml n-voihappoanhydridiä. Seoksen annetaan seistä 60 tuntia. Lisätään 300 ml dietyylieetteriä. Yön yli jääkaapissa seistessä erottuu kiteitä, jotka imusuodatetaan, pestään eetterillä ja kuivataan. Saatu tuote kromatografoi-daan piihappogeelillä ja kiteytetään uudelleen 50-#:isesta vesipitoisesta etanolista. Saadaan 1,2 g valkoisia neulasia. Jähmepiste 212°C.

Esimerkki 2

Hellebrigeniini-3^>-isobutyraatti 2.08 g (0,005 moolia) hellebrigeniiniä liuotetaan 20 ml:aan pyridiiniä ja lisätään 10 ml iso-voihappoanhydridiä. 2U tunnin kuluttua lisätään U00 ml dietyylieetteriä ja annetaan kiteytyä seisottamalla yli yön jääkaapissa. Aine puhdistetaan pylväskromatografiaa käyttäen piihappogeelillä ja kiteytetään uudelleen 50-#:sesta vesipitoisesta etanolista. Jähmepiste 250°C; saanto: 1,5 g.

Esimerkki 3 .. . x)

Hellebrigennni-^-isovaleriaanahappoesteri 2,88 g (0,005 moolia) hellebrigeniiniä 20 ml:ssa pyridiiniä keitetään 10 ml:n kanssa isovaleriaanahappoanhydridiä 1 tunti.

k)

Merkintä η3β> " ennen hapon nimeä ilmoittaa, että 3^-asemassa oleva helle-brigeniinin hydroksiryhmä on sidottu happotähteeseen. Tämä pätee myös kaikkiin seuraaviin esimerkkeihin nähden.

9 581 35 Jäähdyttämisen jälkeen lisätään UOO ml dietyylieetteriä. Jääkaapissa seistessä kiteytyy raakatuote, joka puhdistetaan pylväskromatografiaa käyttäen ja kiteytetään uudelleen 50-#:isesta vesipitoisesta etanolista. Jähmepiste 196-199°C. Saanto: 1,5 g.

Esimerkki ^

HeHebrigeniini-3/*-(3,3-dimetyyli-akryylihappoesteri)

Typpivirrassa suspendoidaan 20 g hellebrigeniiniä (0,0U8 moolia) UOO ml:aan kuivaa dikloorimetaania. Lisätään 20 ml = 20 g (0,lk8 moolia) vasta-tislattua dimetyyliakryylihappokloridia ja kuumennetaan sekoittaen 1,5 tuntia _ palautus jäähdyttäen', tällöin on pidettävä huolta kosteuden poissulkemisesta.

Hellebrigeniini liukenee. Annetaan jäähtyä ja lisätään happokloridiylimäärän hajottamiseksi 20 ml absoluuttista metanolia. Tapahtuu voimakasta kloorivety-^ hapon kehittymistä·, happokloridi-jäännösten täydellisesti hajottamiseksi kei tetään vielä palautusjäähdyttäen 30 minuuttia.

Jäähtynyttä reaktioseosta ravistellaan erotussuppilossa 100 ml:n kanssa vettä, sitten kolme kertaa kulloinkin 100 ml:11a kyllästettyä NaHCO^-liuosta ja vielä kerran 100 ml:11a vettä; dikloorimetaaniliuos kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutetaan tyhjössä. Muodostunut keltainen öljy kootaan 50 ml:11a kuivaa kloroformia ja sekoitetaan se 1500 ml:aan petrolibensiiniä (kp. 50-70°), jolloin reaktiotuote saostuu (2U,8 g). Lisäpuhdistus tapahtuu pylväskromatografiaa käyttäen piihappogeelillä (Geduran S 100, seulaluku 0,063-0,200) 20°C:ssa.

Raakatuote liuotetaan 50 ml:aan kloroformi/etanolia (98 % kloroformia, 2 % etanolia) ja kaadetaan 132 cm:n pituiseen pylvääseen (sisäläpimitta 6 cm). Eluoiminen tapahtuu samalla ajoliuoksella. Ruskeaksi värjätyllä jäähdytys-^ vaipalla huolehditaan tehokkaasti suojaamisesta valolta ja lämpötila pidetään muuttumattomana 20°C:ssa. Läpivirtausnopeus on 115 ml/min. Yksittäiset komponentit otetaan erotettuina talteen. Heti kun haluttu päätuote tulee, voidaan — menetelmää lyhentää polaarisuutta nostamalla.

Pääjae haihdutetaan tyhjössä miltei kuiviin, kootaan sitten 50 ml:aan CHCl^ ja saostetaan 1,5 1:11a petrolibensiiniä (kp. 50-70°), imusuodatetaan ja kuivataan 50°C:ssa tyhjössä. Saanto: 15 g = 62,6 %. Jähmepiste 19*+-196°C.

Esimerkki 5

Hellebrigeniini-3/^-krotonihappoesteri 6,8 g (0,0163 moolia) hellebrigeniiniä keitetään 210 ml:ssa kloroformia ja 6 ml:ssa krotonihappokloridia 1 tunti palautusjäähdyttäen. Jälkikäsittely 10 581 35 tapahtuu kuten esimerkissä k. Reaktiotuote kiteytetään uudelleen kahdesti metanolista. Saanto: 0,8 gi Jähmepiste 202-20U°C.

Esimerkki 6

Hellebrigeniini-3^- (3,3~dimetyyli-butyraatti) 2.8 g (0,0067 moolia) hellebrigeniiniä keitetään palautusjäähdyttäen 60 ml:ssa metyleenikloridia 15 ml:n kanssa 3,3-dimetyyli-voihappokloridia 2 tuntia. Sen jälkeen reaktioliuos pestään kahdesti vedellä ja kolmasti kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja tislataan liuotin eroon. Jäännös sekoitetaan dietyylieetterin kanssa ja annetaan seistä yli yön, jolloin reaktiotuote (raakatuote) kiteytyy. Kiteytetään uudelleen 120 ml:sta metanolia. Saanto: 1,8 gj Jähmepiste 237°C.

Esimerkki 7

Hellebrigeniini-3^-kapryylihappoesteri 2.08 g (0,005 moolia) hellebrigeniiniä kuumennetaan palautusjäähdyttäen 20 ml:ssa pyridiiniä ja 10 ml:ssa kapiyylihappoanhydridiä 2 tuntia. Raakatuote saostetaan dietyylieetterillä, kromatografoidaan piihappogeelipylväässä ja kiteytetään uudelleen 50-/2:isesta vesipitoisesta etanolista. Saanto: 1,1 g; Jähmepiste 189—191°C.

Esimerkki 8

Hellebrigeniini-S^dekaanihappoesteri 2.08 g (0,005 moolia) hellebrigeniiniä keitetään palautusjäähdyttäen 20 ml:ssa pyridiiniä 10 ml:n kanssa dekaanihappoanhydridiä 3 tuntia. Jäähdyttämisen jälkeen saostetaan raakatuote lisäämällä 500 ml vettä, kromatografoidaan piihappogeelipylväässä ja kiteytetään uudelleen 66-$:isesta vesipitoisesta etanolista. Saanto: 1,6 gi Jähmepiste 188°C.

Esimerkki 9

Hellebrigeniini-3A*bentsoaatti 3 g (0,007 moolia) hellebrigeniiniä liuotetaan 25 ml:aan pyridiiniä, lisätään 2,8 g bentsoehappoanhydridiä ja keitetään 5 tuntia palautusjäähdyttäen. Sen jälkeen kun on lisätty dietyylieetteriä erottuu raakatuote, joka ensin kromatografoidaan piihappogeelipylväässä ja kiteytetään sitten uudelleen 50-%:isesta vesipitoisesta etanolista. Saanto: 0,8 g; Jähmepiste 238-2l+0°C. Esimerkki 10

Hellebrigeniini-3/3- (3,5-d.initro-bentsoaatti) 2.08 g (0,005 moolia) hellebrigeniiniä keitetään palautusjäähdyttäen 20 ml:ssa pyridiiniä 5 g:n kanssa 3»5-dinitrobentsoyylikloridia 8 tuntia. Reaktiotuote saostetaan vedellä, kromatografoidaan piihappogeelillä, 11 58135 liuotetaan sitten kloroformiin ja seostetaan petrolieetterillä. Saanto: 0,5 g; Jähmepiste 1T2°C.

Esimerkki 11

He lleb r i geni ini - 3/^-hemi di glyk oi aat t i 2 g (0,005 moolia) hellebrigeniiniä liuotetaan 10 ml:aan pyridiiniä ja lisätään liuos, jossa on 5 g diglykolihappoanhydridiä 10 ml:ssa pyridiiniä. Liuoksen annetaan seistä 2k tuntia huoneen lämpötilassa. Saostuu 2,6 g otsik-koyhdistettä, joka kiteytetään uudelleen 230 ml:sta 80-$:isesta etanolia.

Saanto: 1,6 g; Jähmepiste 239“2^0°0.

^ Esimerkki 12

He llebri geni i ni- 3^-di allyy li amino as et aatt i 2 g (0,00U moolia) 3-klooriasetyylihellebrigeniiniä kuumennetaan palautus-jäähdyttäen 20 ml:ssa asetonia 20 ml:n kanssa diallyyliamiinia 2 tuntia. Jäähtymisen jälkeen suodatetaan diallyyliamiinihydrokloridi erilleen, tislataan liuotin pois ja käsitellään jäljelle jäänyttä reaktiotuotetta 100 ml:11a vettä ja kiteytetään uudelleen isopropanolista.

Emäksen sulamispiste: 189°C.

Hydrokloridin valmistus: 2,k g emästä neutraloidaan 25 ml:ssa etanolia isopropanolipitoisella kloorivetyhapolla, sekoitetaan dietyyliesterin kanssa ja annetaan seistä yli yön. Tällöin saostuu 2,2 g hydrokloridia, joka kiteytetään uudelleen 80 ml:sta etanolia lisäten 50 ml dietyylieetteriä. Saanto: 1,2 g; Jähmepiste 230-231°C.

Lähtöaineen valmistus

Hellebrigeniini-3^"klooriasetaatti (= 3/®"klooriasetyylihellebrigeniini) 20 g (0,0i*8 moolia) hellebrigeniiniä keitetään palautus jäähdyttäen " 300 ml:ssa metyleenikloridia ja 20 ml:ssa klooriasetyylikloridia 2 tuntia.

Jälkikäsittely tapahtuu kuten esimerkissä k. Saatu reaktiotuote (22 g) kiteytetään uudelleen 900 ml:sta metanolia, lisäten aktiivihiiltä. Saanto: 16 gi _ Jähmepiste 197~198°C.

Esimerkki 13

Hellebri geniini-3fi-(2,6-dimetyyli-morfoli ini aset aatti) 2,5 g (0,005 moolia) 3~klooriasetyylihellebrigeniiniä kuumennetaan palautus jäähdyttäen 25 ml:ssa asetonia 5 ml:n kanssa 2,6-dimetyylimorfoliinia 2 tuntia. Liuotin tislataan pois ja jäännöstä sekoitetaan 200 ml:n kanssa vettä 1 tunti. Saadaan 2 g otsikkoainetta (emästä) joka uudelleenkiteyttämisen jälkeen isopropanolista sulaa 196-198°C:ssa.

58135

Hydrokloridin valmistus: 2 g emästä, jonka Jähmepiste on 196-198°C, liuotetaan 20 ml:aan asetonia, neutraloidaan isopropanolipitoisella kloorivetyhapolla, saostetaan hydroklo-ridi (2 g) lisäämällä 30 ml dietyylieetteriä ja kiteytetään uudelleen 30 ml:sta etanolia. Saanto: 1 g, hydrokloridin Jähmepiste 1T8-180°C (hydroskoop-pinen).

Esimerkki 1U

Hellebrigeniini-3A- (U-hydroksi-piperidiiniaset aatti) 2.5 g (0,005 moolia) 3-klooriasetyylihellebrigeniiniä keitetään palautus-jäähdyttäen 1*0 ml:ssa asetonia 2 g:n kanssa U-hydroksipiperidiiniä 1 tunti. Jäähdyttämisen jälkeen suodatetaan, tislataan liuotin pois ja jäännöstä sekoitetaan 2 tuntia 200 ml:n kanssa vettä. Emäksen saostamiseksi täydellisesti kyllästetään vesipitoinen suspensio natriumkloridilla. Saadaan 1,8 g otsikkoainet-ta (emästä), joka uudelleenkiteyttämisen jälkeen isopropanolista sulaa 219-220°C:ssa.

Hydrokloridi valmistetaan esimerkin 12 mukaisesti. 1,1* g tätä kiteytetään uudelleen metanoli/etanolista (2:1) lisäten 20 ml dietyylieetteriä. Saanto: 1 g;

Hydrokloridin jähmepiste 236-237°C.

Esimerkki 15

Hellebrigeniini-3^“syklopropaanikarboksyylihappoesteri 800 mg hellebrigeniiniä suspendoidaan 50 ml:aan CE^Cl^, lisätään 1 g syklopropaanikarboksyylihappokloridia ja keitetään palautus jäähdyttäen 1* tuntia. Jälkikäsittely ja pylväskromatografinen puhdistus tapahtuvat kuten esimerkissä k kuvattiin.

Saanto: 500 mg; Jähmepiste 1U0/2U0.

Esimerkki 16

Hellebrigenoli-3A-isobutyraatti 1.5 g (0,0031 moolia) hellebrigeniini-3A-isobutyraattia liuotetaan 60 ml:aan vedetöntä tetrahydrofuraania ja liuokseen lisätään huoneen lämpötilassa 60 ml juuri valmistettua litium-tri-tert.-butoksialuminiumhydridireaktio-komponenttia (saatu 1,5 g:sta LiiAlH^) ja 6 g:sta tert.butanolia) tetrahydro-furaaniin liuotettuina. Reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 2 -vuorokautta ja reaktioseokseen lisätään 5“^*ista etikkahappoa ja reaktioseosta ravistellaan sitten kloroformin kanssa. Saatu liuos väkevöidään, reaktiotuote saostetaan lisäämällä petrolieetteriä ja puhdistetaan pylväskromatografoimalla piihappogeelillä (eluointiaine 95 til-$ kloroformia/5 til.-$ etanolia).

Saanto: 30 %. Jähmepiste 195°C.

s 13 581 35

Esimerkki 17

Hellebrigenoli-3/M 3,3-dimetyyliakrylaatti) 1 g (0,002 moolia) helle'brigeniini-3/a-(3,3-dimetyyliakrylaattia) liuotetaan 60 ml:aan vedetöntä teträhydrofuraania ja liuokseen lisätään huoneen lämpötilassa 60 ml juuri valmistettua litium-tri-tert.-butoksialuminiumhydridi-reaktiokomponenttia tetrahydrofuraaniin liuotettuna. Yhden tunnin reaktioajan jälkeen reaktioseokseen lisätään 5~#:ista etikkahappoa ja reaktioseos uutetaan useita kertoja kloroformilla. Liuos väkevöidään ja reaktiotuote saostetaan lisäämällä petrolieetteriä. Saanto U9,8 %. Jähmepiste lU0-li*2°C.

Esimerkki 18

Hellebrigeniini-SA-sykloheksaanikarboksyylihappoesteri 2 g hellebrigeniiniä suspendoidaan 100 ml:aan CH^Cl^, lisätään U ml syklo- ^ heksaanikarboksyylihappokloridia ja keitetään palautusjäähdyttäen ^ tuntia.

Reaktioseoksen annetaan jäähtyä ja sitten lisätään happokloridiylimäärän hajottamiseksi noin U ml vedetöntä metanolia ja keitetään palautusjäähdyttäen vielä 30 minuuttia. Reaktioseoksen sumetaan jäähtyä, minkä jälkeen sitä ravistellaan erotussuppilossa 10 ml:n kanssa vettä, sitten 3 kertaa kulloinkin 10 ml:n kanssa kyllästettyä bikarbonaattiliuosta ja sitten vielä 10 ml:n kanssa vettä. Dikloorimetaaniliuos kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin tyhjössä. Jäännös otetaan pieneen määrään vedetöntä kloroformia ja hierretään petrolibensiinin (kp. 50~70°C) kanssa, jolloin reaktiotuote saostuu. Saanto: 90 %. Sulamispiste 211-2ll*°C (hajoaa).

Esimerkki 19

Hellebrigenoli-3^-(3,3-dimetyyliakrylaatti) 3 g (0,0072 moolia) hellebrigenolia ja 3,2 g (0,0271 moolia) dimetyyli-akryylihappokloridia saatetaan reagoimaan keskenään ja puhdistetaan kuten esimerkissä b (eluointiaine CHCl^: Ο^Η,-ΟΗ = 95:5). Saanto 0,5 g = 13,9 %· Jähmepiste 1^0-1U2°C, " Esimerkki 20

Hellebrigenoli ~3β~ΐsobutyraatti

Otsikkoyhdiste saadaan kuten esimerkissä 3 g:sta (0,0072 moolia) hellebrigenolia ja 2,9 g:sta (0,027 moolia) isovoihappokloridia. Saanto 0,63 g = 18 %. Jähmepiste 195°C.

Claims (1)

1. ^ 58135 Patenttivaatimus: Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten hellebrigeniiniasyylijohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava on .c&o 'V OH (I) H-CO-O OH jossa R tarkoittaa C^-Cg-alkenyyliryhmää, C^-C^-alkyyliryhmää, C^-Cg-sykloalkyyli-ryhmää, karboksimetoksimetyyliryhmää, fenyyliryhmää, nitroryhmillä substituoitua fenyyliryhmää tai C^-Cg-alkyyliryhmää, joka sisältää ryhmän -NR^Rg, jolloin R^ ja tarkoittavat C^-Cg-alkenyyliryhmää tai ryhmä -NR^R^ muodostaa substituoimat-toman tai hydroksiryhmällä substituoidun piperidinoryhmän tai substituoimattoman tai yhdellä tai kahdella metyyliryhmällä substituoidun morfolinoryhmän ja R^ on ryhmä -CHO tai -CHgOH, ja niiden suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) hellebrigeniini, jonka kaava on Γ I OH (II) OH OH jossa R^ tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan hapon kanssa, jonka kaava on R-COX (III) jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä ja X on kloori-, bromi- tai jodiatomi tai, kun R on C^-C^-alkyyli- tai fenyyliryhmä, X voi lisäksi olla OCOR-ryhmä, tai kun R on karboksimetoksimetyyliradikaali, X voi lisäksi muodostaa yhdessä tämän radikaalin hydroksiryhmän kanssa yksinkertaisen sidoksen hydroksihappiatomiin, ja 15 581 35 saatuun yhdisteeseen haluttaessa liitetään ja R^ alkyloimalla, tai h) kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on C^-Cg-halogeenialkyyli-ryhmä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on NHR^Rg» jossa R^ ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä tai molemmat voivat tarkoittaa vetyatomia, ja saatuun yhdisteeseen haluttaessa liitetään toinen tai molemmat substituenteista R^ ja R^ alkyloimalla, ja suoritusmuodon a) tai h) mukaisesti saadussa yhdisteessä, jossa R^ on fornyyliryhmä, tämä pelkistetään ryhmäksi -CHgOH, ja että saatu yhdiste haluttaessa muutetaan suolakseen. 16 581 35 Förfarande för framställning av terapeutiskt användbara hellebrigenin-acylderivat med formeln ^\H3 /r~°\ I 0H (I) r-co-o—L^^^ OH väri R betecknar en C^-Cg-alkenylgrupp, en 0^~0 ^ g-alkylgrupp» en C^-C^-cykloalkyl-grupp, en karboximetoximetylgrupp, en fenylgrupp, en med nitrogrupper substituerad fenylgrupp eller en C ^ -Cg-alkylgrupp, vilken innehäller gruppen -NR^^, varvid R^ och R^ betecknar en C^-C^-alkenylgrupp eller gruppen -NR^Rg bildar en osubsti-tuerad eller med en hydroxigrupp substituerad piperidinogrupp eller en osubsti-tuerad eller med en eller tvä metylgrupper substituerad morfolinogrupp, och R^ är gruppen -CHO eller -CH^OH, och deras salter, kännetecknat därav, att a) en hellebrigenin med formeln I OH (II) °H OH väri har ovan angiven betydelse, omsättes med en syra med formeln R-COX (III) väri R har ovan angiven betydelse och X är en klor-, brom- eller jodatom eller, dä R är en C^-C^-alkyl- eller fenylgrupp, X kan ytterligare vara en OCOR-grupp, eller dä R är en karboximetoximetylradikal, X kan ytterligare bilda tillsammans med hydroxigruppen i denna radikal en enkelbindning tili hydroxisyreatomen, och