FI111265B - Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten modifioitujen oligodeoksiribonukleotidien valmistamiseksi ja niiden välituotteita - Google Patents

Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten modifioitujen oligodeoksiribonukleotidien valmistamiseksi ja niiden välituotteita Download PDF

Info

Publication number
FI111265B
FI111265B FI940425A FI940425A FI111265B FI 111265 B FI111265 B FI 111265B FI 940425 A FI940425 A FI 940425A FI 940425 A FI940425 A FI 940425A FI 111265 B FI111265 B FI 111265B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
group
dbp
ete
meoph
hhc
Prior art date
Application number
FI940425A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI940425A (fi
FI940425A0 (fi
Inventor
Masakatsu Kaneko
Hidehiko Furukawa
Kenji Momota
Hitoshi Hotoda
Makoto Koizumi
Original Assignee
Sankyo Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sankyo Co filed Critical Sankyo Co
Publication of FI940425A0 publication Critical patent/FI940425A0/fi
Publication of FI940425A publication Critical patent/FI940425A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI111265B publication Critical patent/FI111265B/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1131—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against viruses
    • C12N15/1132—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against viruses against retroviridae, e.g. HIV
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/336—Modified G
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

111265
Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten modifioitujen oligodeoksiribonukleotidien valmistamiseksi ja niiden välituotteita Förfarande för framställning av som läkemedel användbara modifierade oligodeoxiribonukleotider och deras intermediater 5 ( 10 Esillä oleva keksintö liittyy joukkoon uusia modifioituja oligodeoksiribonukleotideja, joilla on erinomainen viruksen vastainen vaikutus. Keksinnöllä saadaan myös menetelmiä ja koostumuksia käyttämällä näitä oligodeoksiribonukleotideja virusinfektioiden hoitoon ja ennaltaehkäisyyn ja neoplastisten solujen lisäkasvun ehkäisemiseksi. Keksinnöllä saadaan myös menetelmiä näiden yhdistelmien valmistamiseksi. Esillä olevan keksinnön yhdisteet 15 ovat erityisen vaikuttavia ihmisen immuunikatovirusta (Human Immunodeficiency Virus (HIV) vastaan, jonka on nykyään yleisesti hyväksytty aiheuttavan AIDSia.
Tiedetään, että oligodeoksiribonukleotideillä (epäherkät oligodeoksiribonukleotidit) on sekvenssi, joka täydentää geeniä, joka inhiboi tämän geenin funktionaalista ilmentämistä. On 20 myös raportoitu, että epäherkät oligodeoksiribonukleotidit, jotka täydentävät virusgeeniä tai ( onkogeeniä voivat inhiboida viruksen replikaatiota tai solun moninkertaista lisääntymistä inhiboimalla kyseisten geenien funktioita. [P.C. Zamecnik, M.L. Stephenson, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 25, (1) 280 (1978) ja P.C. Zamecnik, J. Goodchild, Y. Taguchi, Sarin, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 85, (6) 4143 (1986)].
25
On aikaisemmin luultu, että jotta epäherkällä oligodeoksiribonukleotidillä olisi haluttu vaikutus, oligodeoksiribonukleotidin olisi kyettävä muodostamaan stabiili hybridi kohde-RNA:n tai DNA:n kanssa in vivo ja että sen ketjupituuden siksi pitäisi olla 15 tai useampi nukleotidi. Kuitenkaan ei ole syntetisoitu sellaisia oligodeoksiribonukleotideja saanneilla ja 30 puhtauksilla, jotka mahdollistavat niiden käyttämisen käytännössä. Lisäksi epäherkillä oligodeoksiribonukleotideillä ei ole riittävästi vaikutusta viruksen replikaation tai solujen moninkertaisenlisääntymisen inhiboimiseksi, jotta niitä voitaisiin käyttää hoitoon; lisäksi 111265 2 näiden yhdisteiden myrkyllisyys isännän normaaleja soluja vastaan on suhteellisen korkea.
Vaikka tunnetaan oligodeoksiribonukleotidejä, joilla on lyhyt ketju, on aikaisemmin oltu sitä mieltä, että niillä on heikko inhiboiva vaikutus. Tämän tuloksena monet tutkijat ovat 5 keskittyneet oligodeoksiribonukleotidien tutkimiseen, joilla on pidempiä ketjuja kuin esillä olevan keksinnön mukaisilla. Siten esim. vaikka PCT-hakemus nro WO 88/07544 (jonka uskotaan edustavan lähimpää esillä olevan keksinnön tekniikan tasoa) sisältää oligodeoksiribonukleotidejä, joilla on niin vähän kuin neljä perusyksikköä, käytännössä on selvää, että ainoat testatut aineet ovat ne, joilla on merkittävästi suurempi lukumäärä yksikköjä, suurempi 10 kuin esillä olevassa keksinnössä. Olemme nyt havainneet, että useilla modifioiduilla ' oligodeoksiribonukleotideillä, jotka muodostuvat erilaisista perussekvensseistä ja on valmistettu sisällyttämällä erilaisia substituentteja 5 - tai 3-päätteisiin, on erinomainen anti-AIDS -virusvaikutus, ja että nukleotidin myrkyllisyys isäntäeläimen normaaleja soluja vastaan on alhainen. Lisäksi tärkeä käytännön havainto on, että esillä olevan keksinnön 15 modifioidut oligodeoksiribonukleotidit voidaan helposti syntitisoida käyttämällä yksinkertaisia tunnettuja tekniikoita.
Siksi tämän keksinnön kohteena on aikaansaada joukko uusia modifioituja oligodeoksiribonukleotidejä. Keksinnön erityisempänä lisäkohteena on aikaansaada sellaisia modifioituja 20 oligodeoksiribonukleotidejä, joilla on kyky inhiboida vieraiden nukleiinihappojen replikaatiota normaaleissa soluissa, joita siksi voidaan käyttää virusinfektioiden hoitoon ja ) ennaltaehkäisyyn, mukaan lukien AIDS ja kasvaimet.
Esillä olevaan keksintöön liittyvä kohde on aikaansaada menetelmiä uusien oligodeoksi-25 ribonukleotidi-yhdisteiden valmistamiseksi ja välituotteita käytettäväksi valmistus menetelmissä.
Keksinnön muut kohteet ja edut selviävät keksinnön edetessä.
30 Tämän keksinnön kohteena on menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisen yleisen kaavan (1) mukaisen modifioidun oligodeoksiribonukleotidin valmistamiseksi 111265 3
Ba-ilv,—21-Β-ϊ-Ο—Ρ-Υ3-ίΧ-Υ,)η H
l· Yj—B4 ra missä: 5 Ri, R2 ja R3 on itsenäisesti valittu ryhmästä, joka koostuu vetyatomeista, alkyyliryhmistä, joissa on 1—4 hiiliatomia, aryyliryhmistä, kuten on määritelty myöhemmin ja ( antrakinonyyliryhmistä, jotka ovat substituoimattomia tai ovat substituoituja ainakin yhdellä substituentilla, joka on edullisesti valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit 1, jotka on määritelty myöhemmin; 10 Z on hiiliatomi tai piiatomi; tai 15 R2, R3 j a Z yhdessä ovat fluorenyyli- tai ksantenyyliryhmä;
Ri on vetyatomi, substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia, substituoitu ^ alkyyliryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia ja joka on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on edullisesti valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit 2, jotka on määritelty 20 myöhemmin, aryyliryhmä, kuten on määritelty myöhemmin tai aralkyyliryhmä, kuten on määritelty myöhemmin;
Yi, Y3 ja Y4 on itsenäisesti valittu ryhmästä, johon kuuluu happiatomit, rikkiatomit ja kaavan >NH mukaiset ryhmät; 25 Y2 on happiatomi, rikkiatomi, kaavan >NH mukainen ryhmä, alkyleeniryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia tai fenyleeniryhmä; X on substituoimaton alkyleeniryhmä, jossa on 1—10 hiiliatomia tai alkyleeniryhmä, jossa on 111265 4 1—10 hiiliatomia ja joka on substituoitu ainakin yhdellä hydroksiryhmällä; m ja n on kumpikin itsenäisesti 0 tai kokonaisluku 1—10; ja 5 B on oligodeoksiribonukleotidi, jonka ketjunpituus on 3—9; mainittu aryyliryhmä on aromaattinen karbosyklinen ryhmä, jossa on 6—20 rengashiiliatomia ja joka on substituoimaton tai on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit 1, jotka on määritelty myöhemmin; 10 ) mainittu aralkyyliryhmä on alkyyliryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia ja joka on substituoitu ainakin yhdellä aryyliryhmällä, kuten on määritelty edellä; mainitut substituentit 1 on valittu ryhmästä, johon kuuluu alkyyliryhmät, joissa on 1—4 15 hiiliatomia, haloalkyyliryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, halogeeniatomit, nitroryhmät, syanoryhmät, aminoryhmät, alkoksiryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, alkyylitioryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, aryyliryhmät, kuten on määritelty edellä, aryylioksiryhmät, joissa aryyliosa on määritelty kuten edellä ja aralkyylioksiryhmät, joissa aralkyyliosa on määritelty kuten edellä, sillä edellytyksellä, että kun mainittu substituentti 1 on aryyliryhmä tai ryhmä, 20 joka sisältää aryyliryhmän, joka on substituoitu ylimääräisellä aryyliryhmällä tai ryhmällä, joka sisältää aryyliryhmän, tämä lisäryhmä ei itse ole substituoitu aryyliryhmällä tai ryhmällä, ^ j oka sisältää aryyliryhmän; ja.
mainitut substituentit 2 on valittu ryhmästä, johon kuuluu aminoryhmät, alkoksiryhmät, joissa 25 on 1—4 hiiliatomia ja halogeeniatomit; tai sen suolan valmistamiseksi, EDELLYTTÄEN, ETTÄ kun Z on hiiliatomi, m on 0, Yi on happi ja Ri, R2 ja R3 on substituoimaton tai substituoitu fenyyliryhmä, eikä ryhmää B valita joukosta, johon kuuluu ATGAGCAC, AATTGTGC, TCATTATCA ja CCGCCAGAG, 30 jolle menetelmälle on tunnusomaista, että mainittu menetelmä käsittää vaiheet:
kondensoidaan seuraavan kaavan (2) mukainen yhdiste kaavan [suoja] - O - F - W
111265 5 mukaisen yhdisteen kanssa, jossa F on puuttuva oligonukleotidi, W on kytkijä ja polymeerikantaja ja [suoja] on suojaryhmä: *' o· R2-?-Y'Y°sj
HO
(2) ( missä Ri, R2 ja R3, Y ja Z on määritelty edellä ja D’ on 5’ -emäsryhmä, joka on valittu adeniinin, guaniinin, sytosiinin, tymiinin, 5-metyylisytosiinin ja niiden suojattujen versioiden j oukosta.
10 Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettuja oligonukleotiedejä voidaan käyttää myös koostumuksen valmistukseen, joka käsittää tehokkaan määrän ainakin yhtä oligodeoksi-ribonukleotidia, jossa mainittu oligodeoksiribonukleotidi on kaavan (1) mukainen yhdiste, kuten on määritelty edellä.
15 Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettuja oligonukleotideja voidaan käyttää menetelmässä virusinfektion hoitoon tai ennaltaehkäisyyn nisäkkäässä, joka voi olla ihminen, jossa menetelmässä annostellaan mainitulle nisäkkäälle tehokas määrä ainakin yhtä oligodeoksiribonukleotidia, jossa mainittu oligodeoksiribonukleotidi on kaavan (1) mukainen yhdiste kuten on määritelty edellä.
20
Keksinnöllä saadaan aikaan menetelmiä ja välituotteita esillä olevan keksinnön yhdisteiden valmistamiseksi, jotka menetelmät kuvataan yksityiskohtaisemmin seuraavassa.
Tämän keksinnön mukaiset uudet modifioidut oligodeoksiribonukleotidit saadaan normaalisti 25 muodossa, jossa ei ole reaktion sivutuotteita.
Esillä olevan keksinnön mukaisissa yhdisteissä, joissa Ri, R2 tai R3 on alkyyliryhmä, tämä 111265 6 voi olla suora tai haarautunut alkyyliketju, jossa on 1—4 hiiliatomiä ja esimerkkejä ovat metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, isobutyyli-, sek-butyyli- ja t-butyyliryhmät. Näistä edullinen on t-butyyliryhmä.
5 Kun Ri, R2 tai R3 on aryyliryhmä, tämä voi olla aromaattinen karbosyklinen ryhmä, jossa on 6—20 rengashiiliatomia, edullisemmin 6—-16 rengashiiliatomia, vieläkin edullisemmin 6— 10 rengashiiliatomia ja edullisimmin 6 tai 10 hiiliatomia ja joka substituoimaton tai on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit 1, jotka määritellään ja joista annetaan esimerkkejä myöhemmin. Esimerkkejä 10 substituoimattomista ryhmistä ovat fenyyli-, 1-naftyyli-, 2-naftyyli-, fenantren-4-yyli-, ) antrasen-9-yyli-, antrasen-2-yyli- ja pyrenyyliryhmät. Näistä edullisempia ryhmiä ovat naftyyli- ja fenyyliryhmät, fenyyliryhmän ollessa edullisin. Substituoidut ryhmät voivat olla mitä vain näistä ryhmistä ja voidaan substituoida yhdellä tai useammalla substituentilla 1, jotka määritellään ja joista annetaan esimerkkejä myöhemmin. Substituenttien lukumäärää ei 15 erityisemmin rajoita muu kuin mahdollisesti substituoitavien asemien lukumäärä (esim. 5, kun kyseessä on fenyyliryhmä tai 7, kun kyseessä on naftyyliryhmä) ja mahdollisesti eteeriset esteet. Yleisimmin kuitenkin pidämme edullisena 1—5 sellaista substituenttia, edullisemmin 1— 3 ja edullisimmin 1 tai 2, substituenttia. Erityisiä esimerkkejä substituenteista 1 ovat: 20 alkyyliryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, kuten esimerkiksi metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, isobutyyli-, sek-butyyli- ja t-butyyliryhmät, joista edullisia ovat ) metyyli- j a t-butyyliryhmät; haloalkyyliryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, kuten esimerkiksi fluorimetyyli-, 25 trifluorimetyyli-, trikloorimetyyli-, 2,2,2-trifluorietyyli-, 2,2,2-trikloorietyyli-, 2-fluorietyyli-, 2- kloorietyyli-, 2-jodietyyli-, 3-klooripropyyli- ja 4-fluoributyyli- ja 6-jodiheksyyliryhmät, joista edullisia ovat 2,2,2-trikloorietyyli- ja trifluorimetyyliryhmät; halogeeniatomit, kuten esimerkiksi fluori-, kloori-, bromi- ja jodiatomit, joissa edullisia ovat 30 kloori- ja fluoriatomit; nitroryhmät, syanoryhmät, aminoryhmät; 111265 7 alkoksiryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, kuten esimerkiksi metoksi-, etoksi-, propoksi-, isopropoksi-, butoksi-, isobutoksi-, sek-butoksi- ja t-butoksiryhmät, joista edullisia ovat metoksi-ja t-butoksiryhmät; 5 alkyylitioryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, kuten esimekriksi metyylitio-, etyylitio-, propyylitio-, isopropyylitio-, butyylitio-, isobutyylitio-, sek-butyylitio- ja t-butyylitioryhmät, joista edullisia ovat metyylitio-ja t-butyylitioryhmät; ( 10 aryyliryhmät, kuten on määriteltyjä annettu esimerkkejä edellä ja edullisimmin fenyyliiyhmä; aryylioksiryhmät, joissa aryyliosa on, kuten on määritelty ja annettu esimerkkejä edellä ja edullisimmin fenoksiryhmä; 15 ja aralkyylioksiryhmät, joissa aralkyyliosa on, kuten on määritelty edellä, kuten esimerkiksi bentsyylioksi ja dibentsyylioksibentsyylioksi [varsinkin 3,5-dibentsyylioksibentsyyli-oksiryhmä].
Olisi huomattava, että vaikka aryyliryhmä (tai ryhmä, joka sisältää aryyliryhmän) voi itse olla 20 substituoitu vielä sellaisella lisäryhmällä, jolla lisäsubstituointi on rajoitettua, koska kun ( mainittu substituentti on aryyliryhmä tai ryhmä, joka sisältää aryyliryhmän, joka on substituoitu vielä yhdellä aryyliryhmällä tai ryhmä sisältää aryyliryhmän, tämä lisäryhmä ei itse ole substituoitu aryyliryhmällä tai ryhmällä, joka sisältää aryyliryhmän.
25 Erityisiä esimerkkejä sellaisista substituoiduista aryyliryhmistä ovat 4-metyylifenyy-li-, 4-t-butyylifenyyli-, 2-fenyylifenyyli-, 4-fenyylifenyyli-, 4-fluorifenyyli-, 2-kloorifenyyli-, 4-kloorifenyyli-, 4-bromifenyyli-, 4-jodifenyyli-, 2,4-difluorifenyyli-, 4-nitrofenyyli-, 4-t-butoksifenyyli-, 4-metoksifenyyli-, 4-etoksifenyyli-, 3-fenoksifenyyli-, 4-fenoksifenyyli-, 2-bentsyylioksifenyyli-, 4-bentsyylioksifenyyli-, 3,4-dibentsyylioksifenyyli-, 3,5-30 dibentsyylioksifenyyli- ja 3,5-bis(3,5-dibentsyylioksibentsyylioksi)fenyyliryhmät. Substituoiduista ja substituoimattomista aryyliryhmistä edullisia ovat fenyyli-, 4-metoksifenyyli-, 3,4-dibentsyylioksifenyyli-, 3,5-dibentsyylioksifenyyliryhmä ja 3,5-bis(3,5-dibentsyylioksi- 8 -- bentsyylioksi)fenyyliryhmät.
Kun Ri, R2 tai R3 on antrakinonyyliryhmä, tämä voi olla substituoimaton tai se voi olla substituoitu yhdellä tai useammalla substituentilla 1, jotka on määritelty ja joista on annettu 5 esimerkkejä edellä. Kun ryhmä on substituoitu, se voi olla substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit 1, jotka on määriteltyjä joista on annettu esimerkkejä edellä. Substituenttien lukumäärää eri erityisemmin rajoita mikään paitsi mahdollisesti substituoitavien asemien lukumäärä ja mahdollisesti steeriset esterit. Pidämme edullisena 1—5 sellaista substituenttia, edullisempina 1—3 ja edullisimpana 10 1, substituenttia. Esimerkkejä sellaisista ryhmistä ovat 9,10-antrakinon-l-yyli-, 9,10- ) antrakinon-2-yyli-, 4-metyyli-9,10-antrakinon-l-yyli-, 5-metoksi-9,10-antrakinon-l-yyli-, 7-kloori-9,10-antrakinon-1 -yyli-, 8-fluori-9,10-antrakinon-2-yyli-, 6-etyyli-9,10-antrakinon-2-yyli-, 8-etoksi-9,10-antrakinon-2-yyli- ja 6-hydroksi-9,l0-antrakinon-1-yyliryhmät. Näistä edullisia ovat substituoimattomat antrakinonyyliryhmät.
15
Vaihtoehtoisestai R2, R3 ja Z voivat yhdessä olla fluorenyyli- tai ksantenyyliryhmä, jossa tapauksessa tämä on edullisesti fluoren-9-yyli- tai ksanten-9-yyliryhmä.
Kun R4 on alkyyliryhmä, tämä voi olla mikä vain niistä, joista on annettu esimerkkejä edellä 20 ryhmän Ri jne. yhteydessä, mutta voi olla substituoimaton tai substituoitu. Jos se on substituoitu, se on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla 2, jotka on määritelty edellä. ^ Esimerkkejä sellaisista substituenteista 2 ovat aminoryhmät, alkoksiryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia ja halogeeniatomit, jotka voivat olla, kuten on edellä annettu esimerkkejä edellä olevien substituenttien 1 yhteydessä. Erityisiä esimerkkejä sellaisista substituoiduista ja 25 substituoimattomista alkyyliryhmistä ovat metyyli-, etyyli-, 2-aminoetyyli-, 2-metoksietyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, isobutyyli-, sek-butyyli- ja t-butyyliryhmä. Näistä edullisia ovat metyyli-, etyyli-, 2-aminoetyyli-, 2-metoksietyyli- ja propyyliryhmät.
Kun R4 on aryyliryhmä, tämä voi olla mikä vain aryyliryhmistä, joista on annettu esimerkkejä 30 edellä ryhmän Ri jne. yhteydessä ja voi olla substituoitu tai substituoimaton ryhmä. Esimerkkejä sellaisista ryhmistä ovat: fenyyliryhmä; alkyylifenyyliryhmät, kuten esimerkiksi 2-metyylifenyyli- tai 3-etyylifenyyliryhmä; halogenisoidut fenyyliryhmät, kuten esimerkiksi 9 111265 2-fluorifenyyli-, 2-kloorifenyyli-, 4-kloorifenyyli-, 2-bromifenyyli- tai 2-jodifenyyliryhmä; nitrofenyyliryhmät, kuten esimerkiksi 2-nitrofenyyli- tai 4-nitrofenyyliryhmä; alkoksifenyyliryhmät, kuten esimerkisi 4-metoksifenyyli- tai 4-etoksifenyyliryhmä; alkyylitiofenyyliryhmät, kuten esimerkiksi 4-metyylitiofenyyli- tai 4-etyylitiofenyyliryhmä; ja 5 naftyyli-, fenantrenyyli-, antrasenyyli- ja pyrenyyliryhmät. Näistä edullisia ovat substituoimattomat fenyyli-, halogenisoidut fenyyli-ja nitrofenyyliryhmät.
Kun R4 on aralkyyliryhmä, tämä voi olla alkyyliryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia ja joka on substituoitu ainakin yhdellä (ja edullisesti 1,2 tai 3, edullisemmin 1) aryyliryhmällä, joka voi ( 10 olla kuten on määriteltyjä annettu esimerkkejä edellä. Esimerkkejä sellaisista ryhmistä ovat bentsyyli-, metyylibentsyyli-, etyylibentsyyli-, metoksibentsyyli-, etoksibentsyyli-, fluoribentsyyli-, klooribentsyyli-, bromibentsyy-li-, kloorinaftyylimetyyli-, indenyylimetyyli-, fenantrenyylimetyyli-, antrasenyylimetyyli-, difenyylimetyyli-, trifenyylimetyyli-, 1-fenetyyli-, 2-fenetyyli-, 2,2-difenyylietyyli-, 2,2,2-trifenyylietyyli-, 3,3,3-trifenyylipropyyli-, 15 1-naftyylietyyli-, 2-naftyylietyyli-, 1-fenyylipropyyli-, 2-fenyylipropyyli-, 3- fenyylipropyyli-, 1-naftyylipropyyli-, 2-naftyylipropyyli-, 3 -naftyylipropyyli-, 1- fenyylibutyyli-, 2-fenyylibutyyli-, 3-fenyyhbutyyli-, 4-fenyylibutyyli-, 1-naftyylibutyyli-, 2-naftyylibutyyli-, 3-naflyylibutyyli-, 4-naftyylibutyyli-, 1-fenyylipentyyli-, 2-fenyylipen-tyyli-, 3-fenyylipentyyli-, 4-fenyylipentyyli-, 5-fenyylipentyyli-, 1-naftyylipentyyli-, 2-20 naftyylipentyyli-, 3-naftyylipentyyli-, 4-naflyylipentyyli-, 5-naftyylipentyyli-, 1- ( fenyyliheksyyli-, 2-fenyyliheksyyli-, 3-fenyyliheksyyli-, 4-fenyyliheksyyli-, 5- fenyyliheksyyli-, 6-fenyyliheksyyli-, 1-naftyyliheksyyli-, 2-naflyyliheksyyli-, 3- naflyyliheksyyli-, 4-naflyyliheksyyli-, 5-naflyyliheksyyli- ja 6-naftyyliheksyyliryhmät. Näistä edullinen on substituoimaton bentsyyli- tai 2-fenetyyliryhmä.
25
Kun Y2 on alkyleeniryhmä, tämä voi olla metyleeni-, etyleeni-, propyleeni-, tetrametyleeni-tai pentametyleeniryhmä, Näistä metyleeniryhmä on edullinen.
Yi, Y3 ja Y4 jokainen on edullisesti happiatomi.
Y2 on edullisesti happi- tai rikkiatomi.
30 111265 10 Z on edullisesti hiiliatomi.
Kun X on suora tai haarautunut ketju, joka on valinnaisesti substituoitu hydroksiryhmällä, esimerkkejä ovat metyleeni-, metyylimetyleeni-, etyleeni-, propyleeni-, tetrametyleeni-, 5 metyylietyleeni-, 1-metyylitrimetyleeni-, 2-metyylitrimetyleeni-, 2-metyylitetrametyleeni-, 3-metyylitrimetyleeni-, pentametyleeni-, heksametyleeni-, heptametyleeni-, oktametyleeni-, nonametyleeni-, dekametyleeni-, 2-hydroksitrimetyleeni- tai 2-hydroksitetrametyleeniryhmä.
Näistä edullinen on metyleeni-, metyylimetyleeni-, etyleeni- tai metyylietyleeniryhmä.
10 Edullisia arvoja kummallekin m ja n on kokonaisluku 0—6. Erityisen edullisena pidämme, ) että m on kokonaisluku 0—4.
Oligodeoksiribonukleotidin B ketjunpituus on 4—8; edullisemmin ketjunpituus on 5 tai 6. Lisäksi on edullista, että neljäs deoksiribonukleotidi 5-päätteestä on guaniinideoksi-15 ribonukleotidi.
Tyypilliset edulliset kuvaavat oligodeoksiribonukleotidit ovat seuraavassa "α-ryhmässä" ja edullisempia ovat ne, jotka ovat ”/3-ryhmässä", jossa lyhennykset, joita käytetään a- ja (S-ryhmissä, tarkoittavat seuraavaa: 20 A: adeniinideoksiribonukleotidi; ) G: . guaniinideoksiribonukleotidi; C: sytosiinideoksiribonukleotidi; T: tymiinideoksiribonukleotidi; 25 mC: 5-metyylisytosiinideoksiribonukleotidi; ja mG: 06-metyyliguaniinideoksiribonukleotidi.
Termi "vasen pää" kuvaa 5'-päätettäja termi "oikea pää" kuvaa 3'-päätettä, sillä edellytyksellä että jokaisen oligodeoksiribonukleotidin kummassakaan 5'- ja 3'-päätteessä ei ole 30 hydroksiryhmää.
"a ryhmä": TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, 111265 11 TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, GGGCGGGGC, TAGGAGG, TGGGAGGT, TGGGCGCAG, CCG, TCGGAGG, TGmCGAGG, CTGGGAGG, TGG, TGGGAmGG, TGGGAGA, AATGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, CGGGG, CGCGG, CGGGT, TGGGC, 5 TGGGT.
"β ryhmä": TGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, CGGGG, CGCGG.
(
Kaaavan: R1R2R3Z-Y1 edullisesta ryhmästä 5'-päätteessä annetaan esimerkkeinä: trifenyyli-metyylioksi-, 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-bis[3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi]bentsyylioksi-, tert-butyylidifenyylisilyylioksi-, fenyyli-fluorenyylioksi- tai fenyyliksantenyylioksiryhmä; edullisemmin trifenyylime-15 tyylioksi-, 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi- tai 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä.
Kaavan: [P(O) (Y2R4)-Y3-(X-Y4)n]mH
edullisesta ryhmästä 3'-päätteessä annetaan esimerkkeinä vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2-20 kloorifenyylifosforyyli-, -O-metyylitiofosforyyli-, metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, ( fenyylifosfonyyli-, 2-hydroksietyylifosforyyli-, -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyli-, fenyylifosforyyli-, 4-kloorifenyylifosfoiyyli-, 2-nitrofenyylifosfoiyyli-, 4-nitro-fenyylifosforyyli-, etyylifosforyyli- tai -O-etyylitiofosfoiyyliryhmä; edullisemmin vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2-kloorifenyylifosforyyli-, -O-metyylitiofosforyyli-, metyylifosfonyyli-, 25 metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2-hydroksietyylifosforyyli- tai -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyliryhmä.
Yhteisesti, tämän keksinnön edulliset yhdisteet ovat ne, joissa: 30 (1) ryhmän B ketjunpituus on 4—8; (2) ryhmän B ketjunpituus on 5 tai 6; 111265 12 (3) ryhmän B ketjunpituus on 4—8 ja ryhmän B neljäs deoksiribonukleotidi 5'-päätteestä on guaniinideoksiribonukleotidi; 5 (4) kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä 5'-päätteessä on trifenyylimetyylioksi-, 3,4- (dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-bis[3,5-(dibentsyyli-oksi)bentsyylioksi]bentsyylioksi-, tetrt-butyylidifenyylisilyylioksi-, fenyylifluorenyylioksi-tai fenyyliksantenyylioksiryhmä; kaavan [P(O) (Y2R4)-Y3-(X-Y4)n]mH mukainen ryhmä 3'-päätteessä on vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2-kloorifenyylifosforyyli-, -0-10 metyylitiofosforyyli-, metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2- ) hydroksietyylifosforyyli-, -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyli-, fenyylifosforyyli-, 4-kloorifenyylifosforyyli-, 2-nitrofenyylifosforyyli-, 4-nitrofenyylifosforyyli-, etyylifosforyyli-tai -O-etyylitiofosforyyliryhmä; ja B on TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, 15 mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, GGGCGGGGC, TAGGAGG, TGGGAGGT, TGGGCGCAG, CCG, TCGGAGG, TGmCGAGG, CTGGGAGG, TGG, TGGGAmGG, TGGGAGA, AATGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, CGGGG, CGCGG, CGGGT, TGGGC tai TGGGT; 20 (5) kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä 5'-päätteessä on trifenyylimetyylioksi-, 3,4- (dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-bis[3,5- ) (dibentsyylioksi)bentsyylioki]bentsyylioksi-, tert-butyylidifenyylisilyylioksi-, fenyyli-fluorenyylioksi- tai fenyyliksantenyylioksiryhmä; kaavan [P(O) (Y2R4)-Y3-(X-Y4)n]mH mukainen ryhmä 3'~päätteessä on vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2-kloorifenyylifosforyyli-, 25 -O-metyylitiofosforyyli-, metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2- hydroksietyylifosforyyli-, -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyli-, fenyylifosforyyli-, 4-kloorifenyylifosforyyli-, 2-nitrofenyylifosforyyli-, 4-nitrofenyylifosforyyli-, etyylifosforyyli-tai -O-etyylitiofosforyyliryhmä; ja B on TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, 30 mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, CGGGG tai CGCGG; 111265 13 (6) kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä 5-päätteessä on trifenyylimetyylioksi-, 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-bis[3,5-(dibentsyyli-oksi)bentsyylioksi]bentsyylioksi-, tetrt-butyylidifenyylisilyylioksi-, fenyylifluorenyylioksi-tai fenyyliksantenyylioksiryhmä; kaavan [P(O) (Y2R4)-Y3-(X-Y4)n]mH mukainen ryhmä 3’- 5 päätteessä on vetytomi, metyylifosforyyli-, 2-kloorifenyylifosforyyli-, -O-metyylitio- fosforyyli-, metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2-hydroksi-etyylifosforyyli- tai -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyliryhmä; ja B on TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, ( 10 CGGGG tai CGCGG; (7) kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä 5-päätteessä on trifenyylimetyylioksi-, 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi- tai 3,5(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; kaavan [P(O) (Y2R4)-Y3-(X-Y4)n]mH mukainen ryhmä 3'-päätteesä on vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2- 15 kloorifenyylifosforyyli-, -O-metyylitiofosforyyli-, metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2-hydroksietyylifosforyyli-, -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyli-, fenyyli-fosforyyli-, 4-kloorifenyylifosforyyli-, 2-nitrifenyylifosforyyli-, 4-nitrofenyylifosforyyli-, etyylifosforyyli- tai -O-etyylitiofosforyyliryhmä; ja B on TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, 20 GGGGAGG, mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, ( CGGGG tai CGCGG; (8) kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä 5-päätteessä on trifenyylimetyylioksi-, 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi- tai 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; kaavan [P(O) 25 (Y2R4)-Y3-(X-Y4)n]mH mukainen ryhmä 3'-päätteessä on vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2- kloorifenyylifosforyyli-, -O-metyylitiofosforyyli-, metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2-hydroksietyylifosforyyli- tai -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyliryhmä: ja Bon TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, 30 TTGGGG, TGGGGG, CGGGG tai CGCGG.
Esimerkkejä esillä olevan keksinnön yhdisteistä on lueteltu taulukossa 1. Näitä esimerkkejä ei 14 ole tehty keksinnön rajoittamiseksi.
Taulukossa käytetään seuraavia lyhennyksiä tietyistä ryhmistä.
5 2-Anq antrakinon-2-yyli 2-Ant antrasen-2-yyli 9-Ant antrasen-9-yyli
Bdbbp 3,5-bis[3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi]fenyylibutyyli
Bu butyyli 10 tBu t-butyyli )
Bz bentsyyli 3.4- Dbp 3,4-(dibentsyylioksi)fenyyli 3.5- Dbp 3,5-(dibentsyylioksi) fenyyli
Deem dekametyleeni [-(CH2)io-] 15 Et etyyli
Ete etyleeni [-CH2CH2-]
Hepm heptametyleeni [-(CH2)7-]
Hexm heksametyleeni [-(CHhjö-]
Hpr 2-hydroksipropyleeni [-CH2C(OH)(CH3)-] 20 Me metyyli
Mee metyleeni [-CH2-] ^
Nonm nonametyleeni [-(CH2)9-]
Npe naftalenyyli [esim. 2-Npe on naftalen-2-yyli tai 1-Npe on naftalen-l-yyli] 25 Octm oktametyleeni [-(CBkjs-]
Penm pentametyleeni [-(CHhjs-]
Ph fenyyli
Pha fenantrenyyli [esim. 4-Pha on fenantren-4-yyli]
Phe 1,4-fenyleeni 30 Pr propyyli
Pre propyleeni [-CHhCHiCEb)-] 1-Pyr pyren-l-yyli 111265 15
Tetm tetrametyleeni [-(CH2)4-]
Trim trimetyleeni [-(CH2)3-]
Lisäksi sekvenssi "B" kaavassa (1) tunnistetaan seuraavilla koodinumeroilla: 5
1 TGGGAG
2 TGGGA
2 TGGGG
4 TGGG
( 10 5 TGGGAG
6 CGGGAGG
1 TTGGAGG
5 TTGGGAGG
2 TGCGAGG
15 10 GGGGAGG
11 mCGGGAGG
12 mCGmCGAGG
12 CTGGGAGG
IA GGGCGGGC
20 li TAGGAGG
( 1ή TGGGAGGT
12 TGGGCGCAG
IS CCG
12 TCGGAGG
25 20 TGmCGAGG
21 CTGGGAGG
22 TGG
22 TGGGAmGG
24 TGGGAGA
30 25 AATGGGAGG
26 TTGGGG
22 TGGGGG
111265 16
28. GGGGG
22 CGCGG
2Ω CGGGT
21 TGGGC
5 22 TGGGT.
Myös kun fluorenyyli- tai ksantenyyliryhmä esiintyy taulukossa, tämä edustaa ryhmiä R2, R3 ja Z yhdessä.
) )
Taulukko 1 17 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 111 2 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 111 3 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 111 4 3,4-Dbp H H C 0 0 MeO - - 001 5 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 011 ( 6 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 11 7 3,4-Dbp H H C 0 MeeH O - - 011 8 3,4-Dbp H H C O MeeH S - - 011 9 3,4-Dbp H H C 0 PheH O - - Oli 10 3,4-Dbp H H C O NHPrO EteO 111 11 3,4-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 111 12 Ph Ph Ph C O 0 H O Ete O 111 13 Ph Ph Ph G O S H O Ete O 111 14 Ph Ph Ph C O - - - - 0 0 1 15 Ph Ph Ph C O 0 Me O - - Oli 16 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 11 17 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - Oli ^ 18 Ph Ph Ph C O Mee H O - - O 1 1 19 Ph Ph Ph C O Mee H S - - Oli 20 Ph Ph Ph C O Phe H O - - Oli 21 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 111 22 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 111 23 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 111 24 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 111 25 3,5-Dbp H H C O - - - - - 111 26 3,5-Dbp H H C O O Me O - - Oli 27 3,5-Dbp H H C O O Me S - - Oli 28 3,5-Dbp H H C O Mee H O - - Oli 29 3,5-Dbp H H C O Mee H O - - Oli
Taulukko 1 (i atkuu) 18
Yhd.
nro R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
30 3,5-Dbp H H C 0 Mee H S - - 011 31 3,5-Dbp H H C 0 PheH 0 - - 011 32 3,5-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Ete O 111 33 3,5-Dbp H H C O 0 Me NH Trim - 111 34 4-Me0Ph 4-MeOPh Ph C 0 0 H O Ete O 111 35 4-Me0Ph 4-Me0Ph PhC O S H O Ete O lii) 36 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O - - - - - 111 37 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me O - - Oli 38 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - Oli 39 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O 2-ClPh O - - Oli 40 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - Oli 41 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H S - - Oli 42 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - Oli 43 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O NH Pr O Ete O 111 44 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O Me NH Trim - 111 45 4-MeOPh Ph Ph C O O H O Ete O 111 46 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 111 47 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 1^ 48 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - Oli 49 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - -Oli 50 4-MeOPh Ph Ph C O O 2-ClPh O - - Oli 51 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H O - - Oli 52 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - Oli 53 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - Oli 54 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 111 55 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 111 56 tBu Ph Ph Si O O H O Ete O 111 57 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 111
Taulukko 1 Ci atkuu1) 19 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Υχ Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
58 tBu Ph Ph Si 0 - - - - - 0 0 1 59 tBu Ph Ph Si 0 O Me O - - 0 11 60 tBu Ph Ph Si 0 O Me S - - Oli 61 tBu Ph Ph Si 0 O 2-ClPh O - - 0 11 62 tBu Ph Ph Si O Mee H O - - Oli ( 63 tBu Ph Ph Si O Mee H S - - Oli 64 tBu Ph Ph Si O Phe H O - - 0 11 65 tBu Ph Ph Si O NH Pr O Ete O 111 66 tBu Ph Ph Si O O Me NH Trim - 111 67 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 111 68 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 111 69 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 1 70 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 11 71 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 11 72 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - Oli 73 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 11 74 Ph Ph Ph C S Mee H S - - Oli / 75 Ph Ph Ph C S Phe H O - - Oli 76 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 111 77 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 111 78 4-BzOPh H H C O O H O Ete O 111 79 4-BzOPh H H C 0 S H O Ete O 111 80 4-BzOPh H H C O - - - - - Oli 81 4-BzOPh H H C O O Me O - - Oli 82 4-BzOPh H H C O O Me S - - Oli 83 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - Oli 84 4-BzOPh H H C O Mee H O - - Oli 85 4-BzOPh H H C O Mee H S - - Oli
Taulukko 1 f iatkuu) 20 111265
Yhd.
nro R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 II m B
86 4-BzOPh H H C 0 PheH 0 - - 011 87 4-BzOPh H H C 0 NHPrO EteO 111 88 4-BzOPh H H C 0 0 Me NH Trim - 111 89 Ph Xanthen-9-yl 0 0 H O EteO 111 90 Ph Xanthen-9-yl O S H O Ete O 111 91 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 00_l) 92 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - 011 93 Ph Xanthen-9-yl 0 O Me S - - Oli 94 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 11 95 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 11 96 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - Oli 97 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 11 98 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 111 99 Ph Xanthen-9-yl O 0 Me NH Trim - 111 100 Ph Fluoren-9-yl O O H O Ete O 111 101 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 111 102 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 001 103 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 0 11^ 104 Ph Fluoren-9-yl O O Me S - - 0 11 105 Ph Fluoren-9-yl O O 2-clPh O - - Oli 106 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 11.
107 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - Oli 108 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - Oli 109 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 111 110 Ph Fluoren-9 -yl O O Me NH Trim O 111 111 3,4- Dbp H H C O O H O Ete O 112 112 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 112 113 3,4-Dbp H H C O - - - - - 002
Taulukko 1 (jatkuu') 21
Yhd.
nro R1 R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
114 3,4-Dbp H H C 0 O Me O - - 012 115 3,4-Dbp H H C 0 O Me S - - 012 116 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh O - - 0 12 117 3,4-Dbp H H C 0 MeeH 0 - - 012 118 3,4-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0 12 ( 119 3,4-Dbp H H C 0 PheH O - - 012 120 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr O Ete O 112 121 3,4-Dbp H H C 0 O Me NH Trim - 112 122 Ph Ph Ph C 0 O H O Ete O 112 123 Ph Ph Ph C 0 S H O Ete O 112 124 Ph Ph Ph C O ----- O O 2 125 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 12 126 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 12 127 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 12 128 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 12 129 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 12 130 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 12 ^ 131 Ph Ph Ph G O NH Pr O Ete O 112 132 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 112 133 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 112 134 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 112 135 3,5-Dbp HHCO- - - - - 002 136 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 012 137 3,5-Dbp H H C O O Me S - - 012 138 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 12 139 3,5-Dbp H H C O Mee H O - - 012 140 3,5-Dbp HHCO Mee H S - - 012 141 3,5-Dbp H H C O Phe H O - - 012
Taulukko 1 (jatkuu) 22 111265
Yhd.
nro Rj R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
142 3,5-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Ete 0 112 143 3,5-Dbp H H C O O Me NH Trim - 112 144 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O 0 H O Ete O 112 145 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O S H O Ete O 112 146 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O - - - - - 002 147 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me O - - 012.) 148 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - 012 149 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O 2-ClPh O - - 0 12 150 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 12 151 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee. H S - - 0 12 152 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - 0 12 153 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O NH Pr O Ete O 112 154 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O Me NH Trim - 112 155 4-MeOPh Ph Ph C O O H O Ete O 112 156 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 112 157 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 2 158 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - 0 12 159 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - 0 12^ 160 4-MeOPh Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 12 161 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H O - - 0 12 162 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - 0 12 163 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - 0 12 164 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 112 165 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 112 166 tBu Ph Ph Si O O H O Ete O 112 167 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 112 168 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 2 169 tBu Ph Ph Si O O Me O - - 0 12
Taulukko 1 (i atkuu)
Yhd.
23 111265
nro Rj_ R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
170 tBu PhPhSiO O Me S - - 012 171 tBu Ph Ph Si 0 0 2-ClPh O - - 0 12 172 tBu Ph Ph Si 0 Mee H O - - 0 12 173 tBu Ph Ph Si 0 Mee H S - - 0 12 174 tBu Ph Ph Si 0 ' Phe H O - - 0 12 ( 175 tBu Ph Ph Si 0 NH Pr O Ete O 112 176 tBu Ph Ph Si O O Me NH Trim - 112 177 Ph Ph Ph C S O H 0 Ete O 112 178 Ph Ph Ph C S S H 0 Ete O 112 179 Ph Ph Ph C S - - - - - 0 0 2 180 Ph Ph Ph C S 0 Me O - - 0 12 181 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 12 182 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 12 183 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 12 184 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 12 185 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 12 186 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 112 187 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 112 188 4-Bz0Ph H H C 0 O H O Ete O 112 189 4-BzOPh H H C O S H O Ete O 112 190 4-BzOPh H H C O - - - - - 002 191 4-BzOPh H H C 0 O Me O - - 012 192 4-BzOPh H H C 0 O Me S - - 012 193 4-BzOPh H H C 0 O 2-ClPh O - - 0 12 194 4-BzOPh H H C O Mee H O - - 012 195 4-BzOPh H H C 0 Mee H S - - 012 196 4-BzOPh H H C O Phe H 0 - - 012 197 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete O 112 24 111265
Taulukko 1 (jatkuu)
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
198 4-BzOPh H H C O 0 Me NH Trim - 112 199 Ph Xanthen-9-yl O O H O EteO 112 200 Ph Xanthen-9-yl O S H O EteO 112 201 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 0 0 2 202 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me O - - 0 12 203 Ph Xanthen-9-yl O O Me S - - 0 12.) 204 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 12 205 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 12 206 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 12 207 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 12.
208 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 112.
209 Ph Xanthen-9-yl O O Me NH Trim - 112 210 Ph Fluoren-9-yl O O H O Ete O 112 211 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 112 212 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 002 213 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 0 12 214 Ph Fluoren-9-yl O O Me S - - 012.
215 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 2 ^ 216 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 12 217 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 12 218 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 12 219 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 112 220 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 112 221 3,4- Dbp H H C O O H O Ete O 113 222 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 113 223 3,4-Dbp HHCO- - - - - 003 224 3,4-Dbp H H C O O Me O - - 013 225 3,4-Dbp HHCOOMeS - - 013
Taulukko 1 ('jatkuu') 25 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
226 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 13 227 3,4-Dbp H H C 0 MeeH O - - 013 228 3,4-Dbp H H C 0 MeeH S - - 013 229 3,4-Dbp H H C 0 PheH 0 - - 013 230 3,4-Dbp H H C 0 ' NH Pr O EteO 113 ( 231 3,4-Dbp H H C 0 O Me NH Trim - 113 232 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 113 233 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 113 234 Ph Ph Ph C O ----- 0 0 3 235 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 13 236 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 13 237 Ph Ph Ph C 0 O 2-ClPh O - - 0 13 238 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 13 239 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 13 240 Ph Ph Ph C 0 Phe H O - - 0 13 241 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 113 242 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 113 ^ 243 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 113 244 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 113 245 3,5-Dbp HHCO- - - - - 003 246 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 013 247 3,5-Dbp HHCOOMeS - - 013 248 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 13 249 3,5-Dbp H H C O Mee H O - - 013 250 3,5-Dbp H H G O Mee H S - - 013 251 3,5-Dbp H H C 0 Phe H O - - 013 252 3,5-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 113 253 3,5-Dbp H H C 0 O Me NH Trim - 113
Taulukko 1 (i atkuu)
Yhd.
26 111265
nro Rx R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
254 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 H 0 Ete 0 113 255 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 S H O Ete O 113 256 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 3 257 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 O Me O - - 013 258 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 Me S - - 013 259 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 O 2-ClPh O - - 0 1 3 ) 260 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H O - - 0 13 261 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 13 262 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - 0 13 263 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O NH Pr O Ete 0 113 264 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 Me NH Trim - 113 265 4-MeOPh Ph Ph C O O H O Ete O 113 266 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 113 267 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 3 268 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - 0 13 269 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - 0 13 270 4-MeOPh Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 13 271 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 3 j 272 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - 0 13 273 4-MeOPh Ph Ph C 0 Phe H O - - 0 13 274 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 113 275 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 113 276 tBu Ph Ph Si O O H O Ete O 113 277 tBu Ph Ph Si 0 S H O Ete O 113 278 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 3 279 tBu Ph Ph Si O O Me O - 0 13 280 tBu Ph Ph Si 0 0 Me S - - 0 13 281 tBu Ph Ph Si O 0 2-ClPh O - - 0 13
Taulukko 1 (iatkuu) 27 111265
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
282 tBu Ph Ph Si 0 Mee H 0 - - 0 13 283 tBu Ph Ph Si 0 Mee H S - - 0 13 284 tBu Ph Ph Si 0 Phe H 0 - - 0 13 285 tBu Ph Ph Si 0 NH Pr 0 Ete O 113 286 tBu Ph Ph Si 0 O Me NH Trim - 113 ( 287 Ph Ph Ph C S 0 H 0 Ete O 113 288 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 113 289 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 3 290 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 13 291 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 1 3 292 Ph Ph Ph C S 0 2-ClPh O - - 0 13 293 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 13 294 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 13 295 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 13 296 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 113 297 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 113 298 4-BzOPh H H C O O H O Ete O 113 299 4-BzOPh H H C O S H O Ete O 113 ^ 300 4-BzOPh H H C 0.....003 301 4-BzOPh H H.C 0 O Me O - - 013 302 4-BzOPh H H C O O Me S - - 013 303 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 13 304 4-BzOPh H H C O Mee H O - - 0 13 305 4-BzOPh H H C O Mee H S - - 0 13 306 4-BzOPh H H C O Phe H O - - 013 307 4-BzOPh H H C 0 NH Pr 0 Ete O 113 308 4-BzOPh H H C 0 O Me NH Trim - 113 309 Ph Xanthen-9-yl O O H O Ete O 113
Taulukko 1 (jatkuu) 28 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
310 Ph Xanthen-9-yl 0 S H 0 Ete 0 113 311 Ph Xanthen-9-yl 0 - - - - - 0 0 3 312 Ph Xanthen-9-yl O 0 Me O - - 0 13 313 Ph Xanthen-9-yl O 0 Me S - - 013.
314 Ph Xanthen-9-yl O ' O 2-ClPh O - - 013 315 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H O - - 0 1 ,3 ) 316 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 13 317 Ph Xanthen-9-yl 0 Phe H O - - 0 13 318 Ph Xanthen- 9 -yl O NH Pr O Ete O 113 319 Ph Xanthen-9-yl O 0 Me NH Trim - 113 320 Ph Fluoren-9-yl 0 0 H O Ete O 113 321 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 113 322 Ph Fluoren-9-yl 0 - - - - - 0 0 3 323 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 01.3 324 Ph Fluoren-9-yl O 0 Me S - - 0 13 325 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 13 326 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 13 327 Ph Fluoren-9-yl 0 Mee H S - - 0 13^ 328 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 13 329- Ph Fluoren-9-yl 0 NH Pr O Ete O 113 330 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 113 331 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 114 332 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 114 333 3,4-Dbp HHCO- - - - - 004 334 3,4-Dbp H H C O O Me O - - 014 335 3,4-Dbp H H C O O Me S - - 014 336 3,4-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 14 337 3,4-Dbp H H C O Mee H O - - 014
Taulukko 1 f i atkuu) 29 111265
Yhd.
ruro R-l R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X γ4 n m B
338 3,4-Dbp H H C 0 MeeH S - - 014 339 3,4-Dbp H H C 0 PheH O - - 014 340 3,4-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 114 341 3,4-Dbp H H C O O Me NH Trim - 114 342 Ph Ph Ph C 0 0 H O Ete O 114 ( 343 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 114 344 Ph Ph Ph C O - - - - - 0 0 4 345 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 14 346 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 14 347 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 14 348 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 14 349 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 14 350 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 14 351 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 114 352 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - lii 353 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 114 354 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 114 ^ 355 3,5-Dbp HHCO- - - - - 004 356 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 014 357 3,5-Dbp HHCOOMeS - - 014.
358 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 14 359 3,5-Dbp H H C O Mee H O - - 014 360 3,5-Dbp HHCO Mee H S - - 014 361 3,5-Dbp H H C O Phe H O - - 014 362 3,5-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 114 363 3,5-Dbp H H C O 0 Me NH Trim - 114 364 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O H O Ete O 114 365 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O S H O Ete O 114
Taulukko 1 (jatkuu) 30 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
366 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 004 367 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O 0 MeO - - 014 368 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - 014 369 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 14 370 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 14 371 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H S - - 0 14^ 372 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - 0 14 373 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O NH Pr O Ete O 114 374 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O Me NH Trim - 114 375 4-MeOPh Ph Ph C O O H O Ete O 114 376 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 114 377 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 4 378 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - 0 14 379 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - 0 14 380 4-MeOPh Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 14 381 4-MeOPh Ph Ph C O Mee - H O - - 0 14 382 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - 0 14 383 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - 0 14) 384 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 114 385 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me NH Trim - 114 386 tBu Ph Ph Si O O H O Ete O 114 387 tBu Ph Ph Si 0 S H O Ete O 114 388 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 4 389 tBu Ph Ph Si O O Me O - - 0 14 390 tBu Ph Ph Si O O Me S - - 0 14 391 tBu Ph Ph Si O 0 2-ClPh O - - 0 14 392 tBu Ph Ph Si O Mee H O - - 0 14 393 tBu Ph Ph Si O Mee H S - - 0 14
Taulukko 1 M atkuu') 31 111265
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
394 tBu Ph Ph Si 0 Phe H 0 - - 0 14 395 tBu Ph Ph Si O NH Pr O Ete O 114 396 tBu Ph Ph Si O O Me NH Trim - 114 397 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 114 398 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 114 ( 399 Ph Ph Ph C S - - - - - 0 0 4 400 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 14 401 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 14 402 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 14 403 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 14 404 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 14 405 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 14 406 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 114 407 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 114 408 4-BzOPh H H C O O H O Ete O 114 409 4-Bz0Ph H H C 0 S H 0 Ete O 114 410 4-BzOPh H H C O - - - - - 004 411 4-BzOPh H H C O O Me O - - 014 ' 412 4-BzOPh H H C 0 O Me S - - 014 413 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 14 414 4-BzOPh H H C O Mee H O - - 014 415 4-BzOPh H H C O Mee H S - - 0 14 416 4-BzOPh H H C O Phe H O - - 014 417 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete O 114 418 4-BzOPh H H C O O Me NH Trim - 114 419 Ph Xanthen-9-yl O O H O Ete O 114 420 Ph Xanthen-9-yl O S H O Ete O 114 421 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 004
Taulukko 1 (i atkuu) 32 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Ύί Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
422 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me 0 - - 0 14 423 Ph Xanthen-9-yl O 0 Me S - - 0 14 424 Ph Xanthen-9-yl 0 0 2-ClPh O - - 0 14 425 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H 0 - - 0 14 426 Ph Xanthen-9-yl 0 ' Mee H S - - 0 14 427 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 1 4 ) 428 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 114 429 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me NH Trim - 114 430 Ph Fluor en-9-yl 0 O H O Ete O 114 431 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 114 432 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 004 433 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 014 434 Ph Fluoren-9-yl O O Me S - - 014 435 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 14 436 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 14 437 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 14 438 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 14 439 Ph Fluoren-9-yl 0 NH Pr O Ete O 114 ^ 440 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 114 441 3,4- Dbp H H C O O H O Ete O 115 442 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 115 443 3,4-Dbp H H C O - - - -005 444 3,4-Dbp HHCOOMeO - - 015 445 3,4-Dbp HHCOOMeS - - 015 446 3,4-Dbp H H C O 0 2-ClPh O - - 0 15 447 3,4-Dbp H H C O Mee H O - - 015 448 3,4-Dbp H H C O Mee H S - - 015 449 3,4-Dbp H H C O Phe H O - - 015
Taulukko 1 (jatkuu) 33 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Y1 Y2 R4 γ3 X Y4 n m B
450 3,4-Dbp H H C 0 NHPrO EteO 115 451 3,4-Dbp H H C O 0 Me NH Trim - 115 452 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 115 453 Ph Ph Ph C 0 S H O Ete O 115 454 Ph Ph Ph C O - - - - 0 0 5 ( 445 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 15 456 Ph Ph Ph C 0 O Me S - - 0 15 457 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 15 458 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 15 459 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 15 460 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 15 461 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 115 462 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 115 463 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 115 464 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 115 465 3,5-Dbp HHCO- - - - - 005 466 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 015 ^ 467 3,5-Dbp H H C O O Me S - - 015 468 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 15 469 3,5-Dbp HHCO Mee H O - - 015 470 3,5-Dbp HHCO Mee H S - - 015 471 3,5-Dbp H H C O Phe H O - - 015 472 3,5-Dbp H H C O NHPrO Ete O 115 473 3,5-Dbp H H C O O Me NH Trim - 115 474 4-Me0Ph 4-Me0Ph Ph C O O H O Ete O 115 475 4-Me0Ph 4-Me0Ph Ph C O S H O Ete O 115 476 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O - - - - - 0 0 5 477 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me O - - 015
Taulukko 1 Π atkuul 34 111265
Yhd.
nro R1 R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
478 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 Me S - - 015 479 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 2-ClPh O - - 0 15 480 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 15 481 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 15 482 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - 0 15 483 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 5 ^ 484 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O Me NH Trim - 115 485 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 H O Ete O 115 486 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 115 487 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 5 488 4-MeOPh Ph Ph C O 0 Me O - - 0 15 489 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - 0 15 490 4-MeOPh Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 15 491 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H O - - 0 15 492 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - 0 15 493 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - 0 15 494 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 115 495 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 115) 496 tBu Ph Ph Si O O H O Ete O 115 497 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 115 498 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 5 499 tBu Ph Ph Si O 0 Me O - - 0 15 500 tBu Ph Ph Si O 0 Me S - - 0 15 501 tBu Ph Ph Si O O 2-ClPh O - - 0 15 502 tBu Ph Ph Si O Mee H O - - 0 15 503 tBu Ph Ph Si O Mee H S - - 0 15 504 tBu Ph Ph Si O Phe H O - - 0 15 505 tBu Ph Ph Si O NH Pr O Ete O 115
Taulukko 1(1atkuu) 35 111265
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Y1 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
506 tBu Ph Ph Si 0 0 Me NH Trim - 115 507 Ph Ph Ph C S O H 0 Ete O 115 508 Ph Ph Ph G S S H O Ete O 115 509 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 5 510 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 15 ( 511 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 1 5 512 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 15 513 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 15 514 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 15 515 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 15 516 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 115 517 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 115 518 4-BzOPh H H C O O H O Ete O 115 519 4-BzOPh H H C O S H O Ete O 115 520 4-BzOPh HHCO- - - - - 005 521 4-BzOPh H H C O O Me O - - 015 522 4-BzOPh H H C O O Me S - - 015 ^ 523 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 15 524 4-BzOPh HHCO Mee H O - - 015 525 4-BzOPh H H C 0 Mee H S - - 0 15 526 4-BzOPh H H C O Phe H O - - 015 527 4-BzOPh H H C 0 NH Pr O Ete O 115 528 4-BzOPh H H C O O Me NH Trim - 115 529 Ph Xanthen-9-yl O O H O Ete O 115 530 Ph Xanthen-9-yl O S H O Ete O 115 531 Ph Xanthen-9-yl 0 - - - - - 005.
532 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - 015.
533 Ph Xanthen-9-yl 0 O Me S - - 015
Taulukko 1 (1 atkuu) 36 111265
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 S ES B
534 Ph Xanthen-9-yl 0 O 2-ClPh O - - 0 1 .5 535 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 15 536 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 15.
537 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 15 538 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 115 539 Ph Xanthen-9-yl O O Me NH Trim - 115 7 540 Ph Fluoren-9-yl O 0 H O EteO 115 541 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 115 542 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 005 543 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 015 544 Ph Fluoren-9-yl O 0 Me S - - 015 545 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 15 546 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 15 547 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 15 548 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 15 549 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 115.
550 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 115 551 3,4-Dbp H H C O O H O EteO 116 ) 552 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 116 553 3,4-Dbp H H C O - - - - - 006 554 3,4-Dbp H H C O O Me O - - 016 555 3,4-Dbp HHCOOMeS - - 016 556 3,4-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 16 557 3,4-Dbp HHCO Mee H O - - 016 558 3,4-Dbp HHCO Mee H S - - 016 559 3,4-Dbp H H C 0 Phe H O - - 016 560 3,4-Dbp H H C O NH Pr O EteO 116 561 3,4-Dbp H H C O O Me NH Trim - 116
Taulukko 1 (jatkuu^ 37 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
562 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete O 116 563 Ph Ph Ph C 0 S H O Ete O 116 564 Ph Ph Ph C O ----- O 0 6 565 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 16 566 Ph Ph Ph G 0 0 Me S - - 0 16 ( 567 Ph Ph Ph G O O 2-ClPh O - - 0 16 568 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 16 569 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 16 570 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 16 571 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 116 572 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 116 573 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 116 574 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 116 575 3,5-Dbp HHCO- - - - - 006 576 3,5-Dbp HHCOOMeO - - 016 577 3,5-Dbp HHCOOMeS - - 016 578 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 16 579 3,5-Dbp H H G O Mee H O - - 0 16 ^ 580 3,5-Dbp HHCO Mee H S - - 016 581 3,5-Dbp H H C 0 Phe H O - - 016 582 3,5-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 116 583 3,5-Dbp H H C O O Me NH Trim - 116 584 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O H O Ete O 116 585 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O S H O Ete O 116 586 4-MeOPh 4-MeOPh Ph G O - - - - - 0 0 6 587 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 O Me O - - 016 588 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - 016 589 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O 2-ClPh O - - 0 16
Taulukko 1 (jatkuu) 38 111265
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Υχ Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
590 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 16 591 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 16 592 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Phe H O - - 0 16 593 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 NH Pr O Ete O 116 594 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 Me NH Trim - 116 595 4-MeOPh Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 6 ) 596 4-MeOPh Ph Ph C 0 S H O Ete O 1 1 6 597 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 6 598 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - 0 16 599 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - 0 16 600 4-MeOPh Ph Ph C O 0 2-ClPh O - - 0 16 601 4-MeOPh Ph Ph G O Mee H O - - 0 16 602 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - 0 16 603 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - 0 16 604 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 116 605 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 116 606 tBu Ph Ph Si O O H O Ete O 116 607 tBu Ph Ph Si 0 S H O Ete O 116, 608 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 6 609 tBu Ph Ph Si O O Me O - - 0 16 610 tBu Ph Ph Si O O Me S - - 0 16 611 tBu Ph Ph Si O O 2-ClPh 0 - - 0 16 612 tBu Ph Ph Si O Mee H O - - 0 16 613 tBu Ph Ph Si 0 Mee H S - - 0 16 614 tBu Ph Ph Si 0 Phe H O - - 0 16 615 tBu Ph Ph Si O NH Pr O Ete O 116 616 tBu Ph Ph Si O O Me NH Trim - 116 617 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 116
Taulukko 1 (jatkuu) 39 111265
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
618 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 116 619 Ph Ph Ph C S ----- 0 O 6 620 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 16 621 Ph Ph Ph C S O Me S - - O 1 6 622 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 16 ( 623 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 16 624 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 16 625 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 16 626 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 116 627 Ph Ph Ph G S O Me NH Trim - 116 628 4-BzOPh H H C O O H O Ete O 116 629 4-BzOPh H H C O S H O Ete O 116 630 4-BzOPh HHCO- - - - - 006 631 4-BzOPh H H C O O Me O - - 016 632 4-BzOPh H H C 0 O Me S - - 016 633 4-BzOPh H H C 0 O 2-ClPh O - - 0 16 634 4-BzOPh H H C O Mee H O - - 016 ^ 635 4-BzOPh HHCO Mee H S - - 016 636 4-BzOPh H H C 0 Phe H O - - 016 637 4-BzOPh .H H C 0 NH Pr O Ete O 116 638 4-BzOPh H H C 0 O Me NH Trim - 116 639 Ph Xanthen-9-yl 0 O H O Ete O 1 1 .6 640 Ph Xanthen-9-yl 0 S H O Ete O 116 641 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 006 642 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - 016 643 Ph Xanthen-9-yl 0 O Me S - - 0 16 644 Ph Xanthen-9-yl 0 O 2-ClPh O - - 0 16 645 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 16.
Taulukko 1 (i atkuu) 40 111265
Yhd.
nro Rt R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
646 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 16 647 Ph Xanthen-9-yl O Phe H 0 - - 0 16.
648 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 116 649 Ph Xanthen-9-yl O O Me NH Trim - 116 650 Ph Fluoren-9-yl 0 0 H O Ete O 116.
651 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 116 ) 652 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 006 653 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 016 654 Ph Fluoren-9-yl O O Me S - - 016.
655 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 16 656 Ph Fluoren-9-yl O Mee H 0 - - 0 16.
657 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 16.
658 Ph Fluoren-9-yl O Phe H 0 - - 0 16.
659 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete 0 116.
660 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 116.
661 3,4-Dbp H H C O O H 0 Ete 0 117 662 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 117 663 3,4-Dbp HHCO- - - - - 0 0 7 ^ 664 3,4-Dbp H H C O O MeO - - 017 665 3,4-Dbp H H C O O Me S - - 017 666 3,4-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 17 667 3,4-Dbp HHCO Mee H O - - 017 668 3,4-Dbp HHCO Mee H S - - 017 669 3,4-Dbp H H C O Phe H O - - 017 670 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 EteO 117 671 3,4-Dbp H H C O O Me NH Trim - 117 672 Ph Ph Ph C 0 O H 0 Ete O 117 673 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 117
Taulukko 1 (jatkuu) 41 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
674 Ph Ph Ph C 0 - - - - - 0 0 7 675 Ph Ph Ph C O 0 Me O - - 0 17 676 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 17 677 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 17 678 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 17 ( 679 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 17 680 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 17 681 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 117 682 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 117 683 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 117 684 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 117 685 3,5-Dbp HHCO- - - - - 007 686 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 017 687 3,5-Dbp HHCOOMeS - - 017 688 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 17 689 3,5-Dbp HHCO Mee H O - - 017 690 3,5-Dbp HHCO Mee H S - - 017 691 3,5-Dbp H H C O Phe H O - - 017 ^ 692 3,5-Dbp H H C 0 NH Pr O Ete O 117 693 3,5-Dbp H H C O O Me NH Trim - 117 694 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O H O Ete O 117 695 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O S H O Ete O 117 696 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O - - - - - 007 697 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O 0 Me O - - 017 688 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O 0 Me S - - 017 699 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 O 2-ClPh O - - 0 17 700 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 17 701 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H S - - 0 17
Taulukko 1 (jatkuu) 42 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
702 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Phe H 0 - - 0 17 703 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 NH Pr O Ete O 117 704 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 O Me NH Trim - 117 705 4-MeOPh Ph Ph C O O H O Ete O 117 706 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 117 707 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 7 ) 708 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - 0 17 709 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - 0 17 710 4-MeOPh Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 17 711 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H O - - 0 17 712 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - 0 17 713 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - 0 17 714 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 117 715 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 117 716 tBu Ph Ph Si O O H O Ete O 117 717 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 117 718 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 7 719 tBu Ph Ph Si O O Me O - - 0 17 720 tBu Ph Ph Si O O Me S - - 0 17.' 721 tBu Ph Ph. Si O O 2-ClPh O - - 0 17 722 tBu Ph Ph Si O Mee H O - - 0 17 723 tBu Ph Ph Si O Mee H S - - 0 17 724 tBu Ph Ph Si O Phe H O - - 0 17 725 tBu Ph Ph Si O NH Pr O Ete O 117 726 tBu Ph Ph Si O O Me NH Trim - 117 727 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 117 728 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 117 729 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 7
Taulukko 1 Πatkuu) 43 111265
Yhd.
ήχο R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
730 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 17 731 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 17 732 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 17 733 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 17 734 Ph Ph Ph C S ' Mee H S - - 0 17 ( 735 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 1 7 736 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 117 737 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 117 738 4-BzOPh H H C O O H O Ete O 117 739 4-BzOPh H H C O S H O Ete O 117 740 4-BzOPh HHCO - - - - - 007 741 4-BzOPh H H C O O Me O - - 017 742 4-BzOPh HHCOOMe S - - 017 743 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 17 744 4-BzOPh H H C O Mee H O - - 017 745 4-BzOPh HHCO Mee H S - - 017 746 4-BzOPh H H C O Phe H O - - 017 ^ 747 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete O 117 748 4-BzOPh H H C O O Me NH Trim - 117 749 Ph Xanthen-9-yl O O H O Ete O 117 750 Ph Xanthen-9-yl O S H O Ete O 112 751 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 0 0 7 752 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - 0 17 753 Ph Xanthen-9-yl O O Me S - - 0 17 754 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 17 755 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 17 756 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 17 757 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 17
Taulukko 1 (jatkuu) 44 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Y4 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
758 Ph Xanthen-9-yl 0 NH Pr O Ete 0 117 759 Ph Xanthen-9-yl O 0 Me NH Trim - 117 760 Ph Fluoren-9-yl O 0 H O Ete O 117 761 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete 0 117 762 Ph Fluoren-9-yl O- - - - - 007 763 Ph Fluoren-9-yl O 0 Me O - - 0 1 7 ^ 764 Ph Fluoren-9-yl 0 0 Me S - - 017 765 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 17 766 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 17.
767 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 17 768 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 12 769 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 117 770 Ph Fluoren-9-yl O 0 Me NH Trim - 117 771 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 118 772 3,4-Dbp H H C O S H O EteO 118 773 3,4-Dbp HHCO- - - - - 008 774 3,4-Dbp HHCOOMeO - - 018 775 3,4-Dbp HHCOOMeS - - 018^ 776 3,4-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 18 777 3,4-Dbp HHCO Mee H O - - 018.
778 3,4-Dbp HHCO Mee H S - - 018 779 3,4-Dbp H H C 0 Phe H O - - 018 780 3,4-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 118 781 3,4-Dbp H H C O O Me NH Trim - 118 782 Ph Ph Ph C 0 O H O Ete O 118 783 Ph Ph Ph C O S H O Ete 0 118 784 Ph Ph Ph C O - - - - - 0 0 8 785 Ph Ph Ph C O 0 Me O - - 0 18
Taulukko 1 (i atkuu) 45 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
786 Ph Ph Ph C 0 0 Me S - - 0 18 787 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 18 788 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 18 789 Ph Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 18 790 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 18 ( 791 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 118 792 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 118 793 3,5-Dbp H H C 0 O H O Ete O 118 794 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 118 795 3,5-Dbp HHCO- - - - - 008 796 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 018 797 3,5-Dbp HHCOOMeS - - 018 798 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 18 799 3,5-Dbp HHCO Mee H O - - 018 800 3,5-Dbp HHCO Mee H S - - 018 801 3,5-Dbp H H C O Phe H O - - 018 802 3,5-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 118 ^ 803 3,5-Dbp H H C O O Me NH Trim - 118 804 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 O H O Ete O 118 . 805 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O S H O Ete O 118 806 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O - - - - - 0 0 8 807 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me O - - 018 808 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - 018 809 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O 2-ClPh O - - 0 18 810 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 18 811 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 18 812 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - 0 18 813 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O NH Pr O Ete O 118
nro Rt R2 R3 Z Υχ Y2 R4 Y3 X Y4 S m B
Taulukko 1 (i atkuu) 46 111265
Yhd.
814 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 Me NH Trim - 118 815 4-MeOPh Ph Ph C O 0 H O Ete O 118 816 4-MeOPh Ph Ph C 0 S H O Ete O 118 817 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 8 818 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me O - - 0 18 819 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - O 1 8 ) 820 4-MeOPh Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 18 821 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H O - - 0 18 822 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - 0 18 823 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - 0 18 824 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 118 825 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 118 826 tBu Ph Ph Si O O H O Ete O 118 827 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 118 828 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 8 829 tBu Ph Ph Si O O Me O - - 0 18 830 tBu Ph Ph Si 0 O Me S - - 0 18 831 tBu Ph Ph Si O O 2-ClPh O - - 0 18, 832 tBu Ph Ph Si O Mee H O - - 0 18 833 tBu Ph Ph Si O Mee H S - - 0 18 834 tBu Ph Ph Si O Phe H O - - 0 18 835 tBu Ph Ph Si 0 NH Pr O Ete O 118 836 tBu Ph Ph Si O O Me NH Trim - 118 837 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 118 838 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 118 839 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 8 840 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 18 841 Ph Ph Ph G S O Me S - - 0 18
Taulukko 1 (jatkuu') 47 111265
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
842 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 18 843 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 18 844 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 18 845 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 18 846 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 118 ( 847 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 118 848 4-Bz0Ph H H C 0 O H O Ete O 118 849 4-BzOPh H H C 0 S H O EteO 118 850 4-BzOPh HHCO- - - - - 008 851 4-BzOPh H H C 0 O Me O - - 018 852 4-BzOPh HHCOOMeS - - 018 853 4-BzOPh H H C 0 O 2-ClPh O - - 0 18 854 4-BzOPh HHCO Mee H O - - 018 855 4-BzOPh HHCO Mee H S - - 018 856 4-BzOPh H H C 0 Phe H O - - 018 857 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete O 118 858 4-BzOPh H H C O O Me NH Trim - 118 859 Ph Xanthen-9-yl 0 0 H O Ete O 118.
^ 860 Ph Xanthen-9-yl 0 S H O Ete O 118 861 Ph Xanthen-9-yl 0 - - - - - 00.8 862 Ph Xanthen-9-yl 0 O Me O - - 018.
863 Ph Xanthen-9-yl 0 O Me S - - 0 18 864 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 18 865 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 18.
866 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 18 867 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 1 .8 868 Ph Xanthen-9-yl 0 NH Pr O Ete O 118 869 Ph Xanthen-9-yl 0 O Me NH Trim - 118
nro Rx R2 R3 2 Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 (jatkuu) 48 111265
Yhd.
870 Ph Fluoren-9-yl 0 0 H O Ete 0 118.
871 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 118 872 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 0 0 8 873 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 01.8 874 Ph Fluoren-9-yl 0 0 Me S - - 01.8 875 Ph Fluoren-9-yl O 0 2-ClPh O - - 0 18) 876 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 18 877 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 18 878 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 18 879 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 118 880 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 118 881 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 119 882 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 119 883 3,4-Dbp H H C 0 - - - - -009 884 3,4-Dbp H H C O O Me O - - 019 885 3,4-Dbp HHCOOMeS - - 019 886 3,4-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 19 887 3,4-Dbp H H G 0 Mee H O - - 019 888 3,4-Dbp H H C O Mee H S - - 0 19^ 889 3,4-Dbp H H C O Phe H O - - 0 19 890 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr O Ete O 119 891 3,4-Dbp H H C 0 O Me NH Trim - 119 892 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 119 893 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 119 894 Ph Ph Ph C O ----- 0 0 9 895 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 19 896 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 19 897 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 19
Taulukko 1 (jatkuu)
Yhd.
49 111265
nro R-l R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
898 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 19 899 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 19 900 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 19 901 Ph Ph Ph C 0 NH Pr O Ete O 119 902 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 119 ( 903 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 119 904 3,5-Dbp H H C O S H O EteO 119 905 3,5-Dbp HHCO- - - - - 009 906 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 019 907 3,5-Dbp H H C O O Me S - - 019 908 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 19 909 3,5-Dbp H H C O Mee H O - - 019 910 3,5-Dbp HHCO Mee H S - - 019 911 3,5-Dbp H H C O Phe H O - - 019 912 3,5-Dbp H H C 0 NH Pr O Ete O 119 913 3,5-Dbp H H C 0 O Me NH Trim - 119 914 4-Me0Ph 4-MeOPh Ph C O O H O Ete O 119 . 915 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O S H O Ete O 119 ^ 916 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O - - - - - 0 0 9 917 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me O - - 019 918 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - 019 919 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 O 2-ClPh O - - 0 19 920 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 19 921 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H S - - 0 19 922 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - 0 19 923 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 NH Pr O Ete O 119 924 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O Me NH Trim - 119 925 4-MeOPh Ph Ph C O O H O Ete O 119
Taulukko 1 (jatkuu'}
nro R4 R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
50 111265
Yhd.
926 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 119 927 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 9 928 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me O - - 0 19 929 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - 0 19 930 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 2-ClPh O - - 0 19 931 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H O - - Oli) 932 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 19 933 4-MeOPh Ph Ph C 0 Phe H O - - 0 19 934 4-MeOPh Ph Ph G O NH Pr O Ete O 119 935 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 119 936 tBu Ph Ph Si O O H O Ete O 119 937 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 119 938 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 9 939 tBu Ph Ph Si O O Me O - - 0 19 940 tBu Ph Ph Si O O Me S - - 0 19 941 tBu Ph Ph Si O O 2-ClPh O - - 0 19 942 tBu Ph Ph Si 0 Mee H O - -019 943 tBu Ph Ph Si O Mee H S - - 0 19 944 tBu Ph Ph Si O Phe H O - - 0 19^ 945 tBu Ph Ph Si O NH Pr O Ete O 119 946 tBu Ph Ph Si 0 O Me NH Trim - 119 947 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 119 948 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 119 949 Ph Ph Ph C S - - - - - 0 0 9 950 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 19 951 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 19 952 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 19 953 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 19
Taulukko 1 (i atkuu) 51 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Y1 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
954 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 19 955 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 19 956 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 119 957 Ph Ph Ph C S 0 Me NH Trim - 119 958 4-BzOPh H H C 0 0 H O Ete O 119 ( 959 4-BzOPh H H C O S H O Ete O 119 960 4-BzOPh HHCO- - - - - 009 961 4-BzOPh HH C OOMeO - - 019 962 4-BzOPh H H C O O Me S - - 019 963 4-BzOPh H H G O O 2-ClPh O - - 0 19 964 4-BzOPh H H C 0 Mee H O - - 019 965 4-BzOPh H H C 0 Mee H S - - 019 966 4-BzOPh H H C O Phe H O - - 019 967 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete O 119 968 4-BzOPh H H G O O Me NH Trim - 119 969 Ph Xanthen-9-yl O O H O Ete O 119 970 Ph Xanthen-9-yl O S H O Ete O 119 971 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 0 0 £ ^ 972 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me O - - 0 19 973 Ph Xanthen-9-yl O 0 Me S - - 0 19 974 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 19.
975 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H O - - 0 19.
976 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 19.
977 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 19 978 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 119 979 Ph Xanthen-9-yl O 0 Me NH Trim - 119 980 Ph Fluoren-9-yl O O H O Ete O 119 981 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 1 1 £
Taulukko 1 (jatkuu)
Yhd.
52 111265
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
982 Ph Fluoren-9-yl 0 - - - - - 0 0 £ 983 Ph Fluoren-9-yl 0 0 MeO - - 0 19 984 Ph Fluoren-9-yl O O Me S - - 01.9 985 Ph Fluoren-9-yl O 0 2-ClPh O - - 0 19 986 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 1 .9 987 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 1 „ ) 988 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 1 £ 989 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 119 990 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 119.
991 3,4-Dbp H H C O O H O EteO 1110 992 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 1110 993 3,4-Dbp H H G O - - - - - 0010 994 3,4-Dbp HHCOOMeO - - 0110 995 3,4-Dbp HHCOOMeS - - 0110 996 3,4-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - O 1 10 997 3,4-Dbp H H C O Mee H O - - 0110 998 3,4-Dbp H H C O Mee H S - - 0 1 10 999 3,4-Dbp H H C O Phe H O - - 0 ,1 10 ^ 1000 3,4-Dbp H H C O NH Pr O EteO 1110 1001 3,4-Dbp H H C O O Me NH Trim - 1 1 10 1002 Ph Ph Ph C O 0 H O Ete O 1 1 10 1003 Ph Ph Ph C O S H O Ete 0 1 1 10 1004 Ph Ph Ph C 0 ----- 0 0 10 1005 Ph Ph Ph C O O Me O - - O 1 10 1006 Ph Ph Ph C O O Me S - - O 1 10 1007 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - O 1 10 1008 Ph Ph Ph C O Mee H O - - O 1 10 1009 Ph Ph Ph C O Mee H S - - O 1 10
Taulukko 1 Π atkuu) 53 111265
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1010 Ph Ph Ph C 0 Phe H O - - 0 1 10 1011 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 10 1012 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 10 1013 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 1110 1014 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 1110 ( 1015 3,5-Dbp H H C O - - - - 0010 1016 3,5-Dbp HHCOOMeO - - 0110 1017 3,5-Dbp HHCOOMeS - - 0110 1018 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 1 10 1019 3,5-Dbp H H C O MeeH O - - 0110 1020 3,5-Dbp H H C O MeeH S - - 0110 1021 3,5-Dbp H H C O Phe H O - - 0110 1022 3,5-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 1110 1023 3,5-Dbp H H C O O Me NH Trim - 1 1 10 1024 4-MeOPh 4-Me0Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 10 1025 4-MeOPh 4-Me0Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 10 1026 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O - - - - - 0 0 10 ( 1027 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me O - - 0110 V 1028 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - 0110 1029 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O 2-ClPh O - - 0 1 10 1030 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 1 10 1031 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H S - - 0 1 10 1032 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - 0 1 10 1033 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 10 1034 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O Me NH Trim - 1 1 10 1035 4-MeOPh Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 10 1036 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 10 1037 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 10
nro R-l R2 R3 Z Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 (jatkuu) 54 111265
Yhd.
1038 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - 0 1 10 1039 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - 0 1 10 1040 4-MeOPh Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 1 10 1041 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 10 1042 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - 0 1 10 1043 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - 0 1 1C ) 1044 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete 0 1 1 10 1045 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 10 1046 tBu Ph Ph Si O O H O Ete O 1 1 10 1047 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 1 1 10 1048 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 10 1049 tBu Ph Ph Si O O Me O - - O 1 10 1050 tBu Ph Ph Si O O Me S - - 0 1 10 1051 tBu Ph Ph Si O O 2-ClPh O - - 0 1 10 1052 tBu Ph Ph Si O Mee H O - - 0 1 10 1053 tBu Ph Ph Si O Mee H S - - 0 1 10 1054 tBu Ph Ph Si O Phe H O - - 0 1 10 1055 tBu Ph Ph Si O NH Pr O Ete O 1 1 10 1056 tBu Ph Ph Si O O Me NH Trim - 1 1 10 ^ 1057 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 1 1 10 1058 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 1 1 10 1059 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 10 1060 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 1 10 1061 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 1 10 1062 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 1 10 1063 Ph Ph Ph G S Mee H O - - 0 1 10 1064 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 1 10 1065 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 1 10
Taulukko 1 (i atkuuO
55
Yhd.
niro R4 R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1066 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 1 1 10 1067 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 1 1 10 1068 4-BzOPh H H C 0 O H O Ete O 1110 1069 4-BzOPh H H C 0 S H O Ete O 1110 1070 4-BzOPh H H C O '- - - - - 0010 ( 1071 4-BzOPh H H C O O Me O - - 0110 1072 4-BzOPh H H C 0 O Me S - - 0110 1073 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 1 10 1074 4-BzOPh H H C O MeeH O - - 0110 1075 4-BzOPh H H C O MeeH S - - 0110 1076 4-BzOPh H H C 0 Phe H O - - 0 1 10 1077 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete O 1110 1078 4-BzOPh H H C O O Me NH Trim - 1 1 10 1079 Ph Xanthen-9-yl 0 O H O Ete O 1 1 10 1080 Ph Xanthen-9-yl 0 S H O Ete O 1110 1081 Ph Xanthen-9-yl 0 - - - - - 0 0 10 1082 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - 0 1 10 1083 Ph Xanthen-9-yl O O Me S - - 0 1 10 ' 1084 Ph Xanthen-9-yl 0 O 2-ClPh 0 - - 0 1 10 1085 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 1 10 1086 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H S - - 0 1 10 1087 Ph Xanthen-9-yl 0 Phe H 0 - - 0 1 10 1088 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 10 1089 Ph Xanthen-9-yl 0 O Me NH Trim - 1 1 10 1090 Ph Fluoren-9-yl 0 O H O Ete O 1110 1091 Ph Fluoren-9-yl 0 S H 0 Ete O 1110 1092 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 0 0 10 1093 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 0 1 10
Taulukko 1 (jatkuu)
Yhd.
56 111265
nro Rx R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1094 Ph Fluoren-9-yl 0 O Me S - - 0 1 10 1095 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 10 1096 Ph Fluoren-9-yl 0 Mee H 0 - - 0 1 10 1097 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - O 1 10 1098 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - O 1 10 1099 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 10 ) 1100 Ph Fluoren-9-yl 0 O Me NH Trim - 1 1 10 1101 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 1111 1102 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 1111 1103 3,4-Dbp HHCO- - - - - 0011 1104 3,4-Dbp H H C O O Me O - - Olli 1105 3,4-Dbp H H C O O Me S - - Olli 1106 3,4-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - 0 1 11 1107 3,4-Dbp H H C O Mee H O - - Olli 1108 3,4-Dbp HHCO Mee H S - - 0 1 11 1109 3,4-Dbp H H C O Phe H O - - Olli 1110 3,4-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 1111 1111 3,4-Dbp H H C O O Me NH Trim - 1 1 11 1112 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 11 1113 Ph Ph Ph C O S H O Ete . O 1 1 11 1114 Ph Ph Ph C O ----- 0 0 11 1115 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 1 11 1116 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 1 11 1117 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 1 11 1118 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 11 1119 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 1 11 1120 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 1 11 1121 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 11
Taulukko 1 (jatkuu) 57 111265
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Y± Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1122 Ph Ph Ph C 0 O Me NH Trim' - 1 1 11 1123 3,5-Dbp H H C O O H O EteO 1111 1124 3,5-Dbp H H C O S H O EteO 1111 1125 3,5-Dbp HHCO.....0011 1126 3,5-Dbp H H C 0 0 Me O - - Olli ( 1127 3,5-Dbp HHCOOMeS - - Olli 1128 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - O 1 11 1129 3,5-Dbp H H C O MeeH O - - Olli 1130 3,5-Dbp H H C O MeeH S - - Olli 1131 3,5-Dbp H H C O PheH O - - Olli 1132 3,5-Dbp H H C O NH Pr O EteO 1111 1133 3,5-Dbp H H C O O Me NH Trim - 1 1 11 1134 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O H O Ete O 1 1 11 1135 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O S H O Ete O 1 1 11 1136 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O - - - - - O O 11 1137 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me O - - O 1 11 1138 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - Olli 1139 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O 2-ClPh O - - O 1 11 ^ 1140 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - O 1 11 1141 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H S - - O 1 11 1142 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - O 1 11 1143 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 11 1144 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O Me NH Trim - 1 1 11 1145 4-MeOPh Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 11 1146 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 11 1147 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - O O 11 1148 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - O 1 11 1149 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - O 1 11 i
Taulukko 1 (i atkuu) 58 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Υχ Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1150 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 2-ClPh O - - 0 1 11 1151 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 11 1152 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 11 1153 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - 0 1 11 1154 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 11 1155 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 11 ) 1156 tBu Ph Ph Si 0 O H O Ete O 1 1 11 1157 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 1 1 11 1158 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 11 1159 tBu Ph Ph Si O O Me O - - 0 1 11 1160 tBu Ph Ph Si O O Me S - - 0 1 11 1161 tBu Ph Ph Si O O 2-ClPh O - - 0 1 11 1162 tBu Ph Ph Si O Mee H O - - 0 1 11 1163 tBu Ph Ph Si 0 Mee H S - - 0 1 11 1164 tBu Ph Ph Si O Phe H O - - 0 1 11 1165 tBu Ph Ph Si O NH Pr O Ete O 1 1 11 1166 tBu Ph Ph Si O O Me NH Trim - 1 1 11 1167 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 1 1 11 1168 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 1 1 11 ^ 1169 Ph Ph Ph C S ----- O O 11 1170 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 1 11 1171 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 1 11 1172 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - O 1 11 1173 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 1 11 1174 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 1 11 1175 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 1 11 1176 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 1 1 11 1177 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 1 1 il
Taulukko 1 Π atkuu) 59
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Υχ Y2 R4 Y3 X Y4 E m B
1178 4-BzOPh H H C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 11 1179 4-BzOPh H H C 0 S H 0 EteO 1111 1180 4-BzOPh HHCO- - - - - 0011 1181 4-BzOPh H H C 0 0 Me O - - Olli 1182 4-BzOPh H H C 0 0 Me S - - Olli ( 1183 4-BzOPh H H C 0 O 2-ClPh O - - 0 1 11 1184 4-BzOPh HHCO Mee H O - - 0 1 11 1185 4-BzOPh H H C 0 Mee H S - - 0 1 11 1186 4-BzOPh H H C O PheH O - - Olli 1187 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete O 1 1 11 1188 4-BzOPh H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 11 1189 Ph Xanthen-9-yl O O H O Ete O 1111 1190 Ph Xanthen-9-yl 0 S H O Ete O 1111 1191 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 0 0 11 1192 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - Olli 1193 Ph Xanthen-9-yl O O Me S - - O 1 11 1194 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh O - - O 1 11 1195 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - O 1 11 ( 1196 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - O 1 11 1197 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - O 1 11 1198 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 11 1199 Ph Xanthen-9-yl O O Me NH Trim - 1 1 11 1200 Ph Fluoren-9-yl O O H O Ete O 1111 1201 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 1111 1202 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - O O 11 1203 Ph Fluoren-9-yl 0 O Me O - - 0 1 11 1204 Ph Fluoren-9-yl O O Me S - - Olli 1205 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 11
Taulukko 1 (i atkuu) 60 111265
Yhd.
nro Rj_ R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1206 Ph Fluoren-9-yl 0 Hee H O - - 0 1 11 1297 Ph Fluoren-9-yl O Hee HS - - 01 11 1208 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 1 11 1209 Ph Fluoren-9-yl 0 NH Pr O Ete O 1 1 11 1210 Ph Fluoren-9-yl 0 0 Me NH Trim - 1 1 11 1211 3,4-Dbp H H C 0 O H O Ete O 1112. ) 1212 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 1112 1213 3,4-Dbp HHCO - - - - - 0012 1214 3,4-Dbp H H C O O Me O - - 0112 1215 3,4-Dbp H H C O 0 Me S - - 0112 1216 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh O - - 0 1 12 1217 3,4-Dbp HHCO Mee H O - - 0 1 12 1218 3,4-Dbp H H C O Mee H S - - 0112 1219 3,4-Dbp H H C O Phe H O - - 0112 1220 3,4-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 1112 1221 3,4-Dbp H H C O O Me NH Trim - 1 1 12 1222 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 12 1223 Ph Ph Ph C 0 S H O Ete O 1 1 12 ^ 1224 Ph Ph Ph C O - - - - - 0 0 12 1225 Ph Ph Ph C O O Me O - - O 1 12 1226 Ph Ph Ph C O O Me S - - O 1 12 1227 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - O 1 12 1228 Ph Ph Ph C O Mee H O - - O 1 12 1229 Ph Ph Ph C O Mee H S - - O 1 12 1230 Ph Ph Ph C O Phe H O - - O 1 12 1231 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 12 1232 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 12 1233 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 1112
Taulukko 1 f i atkuu~) 61 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1234 3,5-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1112 1235 3,5-Dbp HHCO- - - - - 0012 1236 3,5-Dbp H H C 0 O Me O - - 0112 1237 3,5-Dbp HHCOOMeS - - 0112 1238 3,5-Dbp H H C 0 0 2-ClPh O - - 0 1 12 ( 1239 3,5-Dbp H H C 0 MeeH O - - 0112 1240 3,5-Dbp H H C 0 MeeH S - - 0112 1241 3,5-Dbp H H C 0 PheH O - - 0112 1242 3,5-Dbp H H C 0 NHPrO EteO 1112 1243 3,5-Dbp H H C 0 O Me NH Trim - 1 1 12 1244 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 H O Ete O 1 1 12 1245 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 S H O Ete O 1 1 12 1246 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 12 1247 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me O - - 0112 1248 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - 0112 1249 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O 2-ClPh O - - 0 1 12 1250 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 1 12 , 1251 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 1 12 1252 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Phe H O - - 0 1 12 1253 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 NH Pr O Ete O 1 1 12 1254 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 O Me NH Trim - 1 1 12 1255 4-MeOPh Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 12 1256 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 12 1257 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 12 1258 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - 0 1 12 1259 4-MeOPh Ph Ph C 0 O Me S - - 0 1 12 1260 4-MeOPh Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 1 12 1261 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H O - - 0 1 12
Taulukko 1 (jatkuu) 62
Yhd.
nro % R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1262 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 12 1263 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - 0 1 12 1264 4-MeOPh Ph Ph C 0 NH Pr O Ete O 1 1 12 1265 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 12 1266 tBu Ph Ph Si O ' O H O Ete O 1 1 12 1267 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 1 1 12 ) 1268 tBu Ph Ph Si O - - - - - 0 0 12 1269 tBu Ph Ph Si O O Me O - - 0 1 12 1270 tBu Ph Ph Si 0 O Me S - - 0 1 12 1271 tBu Ph Ph Si O O 2-ClPh O - - 0 1 12 1272 tBu Ph Ph Si O Mee H O - - 0 1 12 1273 tBu Ph Ph Si O Mee H S - - 0 1 12 1274 tBu Ph Ph Si O Phe H O - - O 1 12 1275 tBu Ph Ph Si 0 NH Pr O Ete O 1 1 12 1276 tBu Ph Ph Si O O Me NH Trim - 1 1 12 1277 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 1 1 12 1278 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 1 1 12 1279 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 12 1280 Ph Ph Ph C S O Me O - - O 1 12 ' 1281 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 1 12 1282 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 1 12 1283 Ph Ph Ph C S Mee H O - - O 1 12 1284 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 1 12 1285 Ph Ph Ph C S Phe H O - - O 1 12 1286 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 1 1 12 1287 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 1 1 12 1288 4-BzOPh H H C O O H O Ete O 1112 1289 4-BzOPh H H C O S H O Ete O 1 1 12
Taulukko 1 (-jatkuu) 63 111265
Yhd.
nro R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1290 4-BzOPh HHCO- - - - -0012 1291 4-BzOPh H H C 0 O Me O - - 0112 1292 4-BzOPh H H C O O Me S - - 0112 1293 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 1 12 1294 4-BzOPh H H C 0 ' Mee H O - - 0112 ( 1295 4-BzOPh H H C O Mee H S - - 0112 1296 4-BzOPh H H C O PheH O - - 0112 1297 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete 0 1 1 12 1298 4-BzOPh H H C O 0 Me NH Trim - 1 1 12 1299 Ph Xanthen-9-yl O O H O Ete O 1112 1300 Ph Xanthen-9-yl O S H O Ete O 1112 1301 Ph Xanthen-9-yl 0.....0 0 12 1302 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - 0 1 12 1303 Ph Xanthen-9-yl O O Me S - - 0 1 12 1304 Ph Xanthen-9-yl 0 O 2-ClPh O - - 0 1 12 1305 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H O - - 0 1 12 1306 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H S - - 0 1 12 ^ 1307 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 1 12.
1308 Ph Xanthen-9-yl 0 NH Pr O Ete 0 1 1 12 1309 Ph Xanthen-9-yl 0 O Me NH Trim - 11 12 1310 Ph Fluoren-9-yl O O H O EteO 1112 1311 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 1112 1312 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 0 0 12 1313 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 0 1 12 1314 Ph Fluoren-9-yl O O Me S - - 01 12 1315 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 12 1316 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 1 12 1317 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 1 12
Taulukko 1 (i atkuu') 64
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1318 Ph Fluoren-9-yl 0 Phe H 0 - - 0 1 12 1319 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr 0 Ete O 1 1 12 1320 Ph Fluoren-9-yl 0 O Me NH Trim - 1 1 12 1321 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 1113 1322 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 1113 1323 3,4-Dbp H H C O - - - - - 0013.) 1324 3,4-Dbp H H C O O Me O - - 0113 1325 3,4-Dbp H H C O O Me S - - 0113 1326 3,4-Dbp H H C O O 2-ClPh 0 - - 0 1 13 1327 3,4-Dbp H H C O MeeH 0 - - 0113 1328 3,4-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0 1 13 1329 3,4-Dbp H H C O Phe H O - - 0113 1330 3,4-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 1113 1331 3,4-Dbp H H G 0 O Me NH Trim - 1 1 13 1332 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 13 1333 Ph Ph Ph G O S H O Ete O 1 1 13 1334 Ph Ph Ph C O ----- 0 0 13 1335 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 1 13 • 1336 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 1 13 1337 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 1 13 1338 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 13 1339 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 1 13 1340 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 1 13 1341 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 13 1342 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 13 1343 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 1113 1344 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 1 1 13 1345 3,5-Dbp H H G O - - - - - 0013
11126S
Taulukko 1 (jatkuu) 65
Yhd.
nro Rj_ R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1346 3,5-Dbp HHCOOMeO - - 0113 1347 3,5-Dbp HHCOOMeS - - 0113 1348 3,5-Dbp H H G 0 O 2-ClPh O - - 0 1 13 1349 3,5-Dbp H H C 0 MeeH 0 - - 0113 1350 3,5-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0 1 13 ( 1351 3,5-Dbp H H C 0 PheH O - - 0113 1352 3,5-Dbp H H C 0 NHPrO EteO 1113 1353 3,5-Dbp H H C 0 O Me NH Trim - 1 1 13 1354 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O H O Ete O 1 1 13 1355 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 S H O Ete O 1 1 13 1356 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O - - - - - 0 0 13 1357 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me O - - 0113 1358 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - 0113 1359 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 O 2-ClPh O - - 0 1 13 1360 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 1 13 1361 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H S - - 0 1 13 1362 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - 0 1 13 ^ 1363 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 13 1364 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O Me NH Trim - 1 1 13 1365 4-MeOPh Ph Ph C O O H 0 Ete O 1 1 13 1366 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 13 1367 4-MeOPh Ph Ph C 0.....0 0 13 1368 4-MeOPh Ph Ph C 0 O Me O - - 0 1 13 1369 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - 0 1 13 1370 4-MeOPh Ph Ph G O O 2-ClPh O - - 0 1 13 1371 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 13 1372 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - 0 1 13 1373 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - 0 1 13
Taulukko 1 ('jatkuu') 66
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Y1 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1374 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 13 1375 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 13 1376 tBu Ph Ph Si 0 O H O Ete O 1 1 13 1377 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 1 1 13 1378 tBu Ph Ph Si O - - - - O 0 13 1379 tBu Ph Ph Si O O Me O - - O 1 13 ) 1380 tBu Ph Ph Si O O Me S - - 0 1 13 1381 tBu Ph Ph Si O O 2-ClPh O - - 0 1 13 1382 tBu Ph Ph Si O Mee H O - - 0 1 13 1383 tBu Ph Ph Si O Mee H S - - 0 1 13 1384 tBu Ph Ph Si O Phe H O - - 0 1 13 1385 tBu Ph Ph Si O NH Pr O Ete O 1 1 13 1386 tBu Ph Ph Si O O Me NH Trim - 1 1 13 1387 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 1 1 13 1388 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 1 1 13 1389 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 13 1390 Ph Ph Ph C S O Me O - - 0 1 13 1391 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 1 13 , 1392 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 1 13 . 1393 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 1 13 1394 Ph Ph Ph G S Mee H S - - 0 1 13 1395 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 1 13 1396 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 1 1 13 1397 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 1 1 13 1398 4-Bz0Ph H H C O O H O Ete O 1113 1399 4-BzOPh H H C O S H O Ete O 1113 1400 4-BzOPh HHCO - - - - - 0013 1401 4-BzOPh H H C O O Me O - - 0113
Taulukko 1 (jatkuu)
Yhd.
67 111265
nro R.x R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1402 4-BzOPh H H C 0 0 Me S - - 0113 1403 4-BzOPh H H C 0 0 2-GlPh 0 - - 0 1 13 1404 4-BzOPh H H C 0 Mee H 0 - - 0 1 13 1405 4-BzOPh H H C 0 Mee H S - - 0113 1406 4-BzOPh H H C O PheH 0 - - 0113 ( 1407 4-BzOPh H H C 0 NHPrO EteO 1113 1408 4-BzOPh H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 13 1409 Ph Xanthen-9-yl 0 0 H 0 EteO 1113 1410 Ph Xanthen-9-yl 0 S H O EteO 1113 1411 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 0 0 13 1412 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me 0 - - 0 1 13 1413 Ph Xanthen-9-yl O O Me S - - 01 13 1414 Ph Xanthen-9-yl 0 O 2-ClPh O - - 0 1 13 1415 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H O - - 0 1 13 1416 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H S - - 0 1 13 1417 Ph Xanthen-9-yl 0 Phe H O - - 0 1 13 1418 Ph Xanthen-9-yl 0 NH Pr O Ete O 1 1 13 1419 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me NH Trim - 1 1 13 v 1420 Ph Fluor en-9-yl 0 O H 0 Ete O 1113 1421 Ph Fluoren-9-yl O S H 0 EteO 1111 1422 Ph Fluoren-9-yl 0 - - - - - 0 0 13 1423 Ph Fluoren-9-yl 0 O Me 0 - - 0 1 13 1424 Ph Fluoren-9-yl O O Me S - - 01 13 1425 Ph Fluoren-9-yl 0 O 2-ClPh O - - 0 1 13 1426 Ph Fluoren-9-yl O Mee H 0 - - 0 1 13 1427 Ph Fluoren-9-yl 0 Mee H S - - 0 1 13
1428 Ph Fluoren-9-yl O Phe HO - - 0 1 H
1429 Ph Fluoren-9-yl 0 NH Pr O Ete O 1 1 13
Taulukko 1 (jatkuu) 68
Yhd.
urns
nro R1 R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n in B
1430 Ph Fluoren-9-yl O 0 Me NH Trim - 1113 1431 3,4-Dbp H H C O 0 H O EteO 1114 1432 3,4-Dbp H H C O S H O EteO 1114 1433 3,4-Dbp HHCO- - - - -0014 1434 3,4-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0114 1435 3,4-Dbp H H C O O Me S - - 0 1 14 ) 1436 3,4-Dbp H H C O 0 2-ClPh O - - 0 1 14 1437 3,4-Dbp H H C O MeeH O - - 0114 1438 3,4-Dbp H H C O MeeH S - - 0114 1439 3,4-Dbp H H C O PheH O - - 0114 1440 3,4-Dbp H H C O NH Pr 0 Ete O 1 1 14 1441 3,4-Dbp H H C O O Me NH Trim - 1 1 14 1442 Ph Ph Ph G O O H O Ete O 1 1 14 1443 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 14 1444 Ph Ph Ph C O ----- 0 0 14 1445 Ph Ph Ph C O O Me O - . - 0 1 14 1446 Ph Ph Ph C O 0 Me S - - 0 1 14 1447 Ph Ph Ph C O 0 2-ClPh O - - 0 1 14 ^ 1448 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 14 1449 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 1 14 1450 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 1 14 1451 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 14 1452 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 14 1453 3,5-Dbp H H C O 0 H O Ete O 1114 1454 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 1114 1455 3,5-Dbp HHCO - - - - - 0014 1456 3,5-Dbp HHCO O Me O - - 0114 1457 3,5-Dbp H H C O O Me S - - 0114
Taulukko 1 f iatkuu) 69 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1458 3,5-Dbp H H C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 14 1459 3,5-Dbp H H C 0 MeeH 0 - - 0114 1460 3,5-Dbp H H C 0 MeeH S - - 0114 1461 3,5-Dbp H H C 0 PheH 0 - - 0114 1462 3,5-Dbp H H C 0 NH Pr 0 EteO 1114 ( 1463 3,5-Dbp H H C 0 O Me NH Trim - 1 1 14 1464 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 O H O Ete O 1 1 14 1465 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 S H 0 Ete O 1 1 14 1466 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 14 1467 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 O Me O - - 0114 1468 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - 0114 1469 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O 2-ClPh O - - 0 1 14 1470 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - 0 1 14 1471 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 1 14 1472 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Phe H O - - 0 1 14 1473 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 14 1474 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 O Me NH Trim - 1 1 14 1475 4-MeOPh Ph Ph C 0 O H O Ete O 1 1 14 ^ 1476 4-MeOPh Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 14 1477 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - 0 0 14 1478 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - 0 1 14 1479 4-MeOPh Ph Ph C O O Me S - - 0 1 14 1480 4-MeOPh Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 1 14 1481 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 14 1482 4-MeOPh Ph Ph C O Mee H S - - O 1 14 1483 4-MeOPh Ph Ph C O Phe H O - - O 1 14 1484 4-MeOPh Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 14 1485 4-MeOPh Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 14
Taulukko 1 (i atkuu) 70 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1486 tBu Ph Ph Si 0 0 H O Ete 0 1 1 14 1487 tBu Ph Ph Si O S H O Ete O 1 1 14 1488 tBu Ph Ph Si 0 - - - - - 0 0 14 1489 tBu Ph Ph Si 0 0 Me O - - O 1 14 1490 tBu Ph Ph Si O 0 Me S - - 0 1 14 1491 tBu Ph Ph Si O 0 2-ClPh O - - 0 1 14 ) 1492 tBu Ph Ph Si 0 Mee H O - - 0 1 14 1493 tBu Ph Ph Si O Mee H S - - 0 1 14 1494 tBu Ph Ph Si O Phe H O - - 0 1 14 1495 tBu Ph Ph Si O NH Pr O Ete 0 1 1 14 1496 tBu Ph Ph Si O 0 Me NH Trim - 1 1 14 1497 Ph Ph Ph C S O H O Ete O 1 1 14 1498 Ph Ph Ph C S S H O Ete O 1 1 14 1499 Ph Ph Ph C S.....0 0 14 1500 Ph Ph Ph C S 0 Me O - - 0 1 14 1501 Ph Ph Ph C S O Me S - - 0 1 14 1502 Ph Ph Ph C S O 2-ClPh O - - 0 1 14 1503 Ph Ph Ph C S Mee H O - - 0 1 14 1504 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 1 14 ^ 1505 Ph Ph Ph C S Phe H O - - 0 1 14 1506 Ph Ph Ph C S NH Pr O Ete O 1 1 14 1507 Ph Ph Ph C S O Me NH Trim - 1 1 14 1508 4-BzOPh H H C O O H O Ete O 1114 1509 4-BzOPh H H C O S H O Ete O 1114 1510 4-BzOPh HHCO- - - - - 0014 1511 4-BzOPh H H C O O Me O - - 0114 1512 4-BzOPh HHCOOMeS - - 0114 1513 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 1 14
Taulukko 1 ('jatkoa') 71 111265
Yhd.
nro R-l R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1514 4-BzOPh H H C 0 MeeH o - - 0114 1515 4-BzOPh H H C 0 Mee H S - - 0 1 14 1516 4-BzOPh H H C 0 PheH 0 - - 1114 1517 4-BzOPh H H C 0 NHPrO EteO 1114 1518 4-BzOPh H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 14 ( 1519 Ph Xanthen-9-yl 0 0 H 0 EteO 1114 1520 Ph Xanthen-9-yl 0 S H 0 Ete 0 1 1 14 1521 Ph Xanthen-9-yl 0 - - - - - 0 0 14 1523 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me S - - 0 1 14 1524 Ph Xanthen-9-yl 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 14 1525 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H 0 - - 0 1 14 1526 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H S - - 0 1 14 1527 Ph Xanthen-9-yl 0 Phe H 0 - - 0 1 14 1528 Ph Xanthen-9-yl 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 14 1529 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me NH Trim - 1 1 14 1531 Ph Fluoren-9-yl 0 0 H 0 EteO 1114 1531 Ph Fluoren-9-yl 0 S H 0 EteO 1114 1532 Ph Fluoren-9-yl 0 - - - - - 0 0 14 ^ 1533 Ph Fluoren-9-yl 0 0 MeO - - 0 1 14 1534 Ph Fluoren-9-yl 0 0 Me S - - 01 14 1535 Ph Fluoren-9-yl 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 14 1536 Ph Fluoren-9-yl 0 Mee H 0 - - 0 1 14 1537 Ph Fluoren-9-yl 0 Mee H S - - 0 1 14 1538 Ph Fluoren-9-yl 0 Phe H 0 - - 0 1 14 1539 Ph Fluoren-9-yl 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 14 1540 Ph Fluoren-9-yl 0 0 Me NH Trim - 1 1 14 1541 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1115
Taulukko 1 (jatkoa)
Yhd.
72 111265
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1542 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1115 1543 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0015 1544 3,4-Dbp H H C 0 0 Me 0 - - 0115 1545 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0115 1546 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 15 1547 3,4-Dbp H H C 0 MeeH 0 - - 0115 ) 1548 3,4-Dbp H H C 0 MeeH S - - 0115 1549 3,4-Dbp H H C 0 PheH 0 - - 0115 1550 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 15 1551 3,4-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 15 1552 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 15 1553 Ph Ph Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 15 1554 Ph Ph Ph C 0 ----- 0 0 15 1555 Ph Ph Ph C 0 0 Me 0 - - 0 1 15 1556 Ph Ph Ph C 0 0 Me S - - 0 1 15 1557 Ph Ph Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 15 1558 Ph Ph Ph C 0 Mee H 0 - - O 1 15 1559 Ph Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 15 ^ 1560 Ph Ph Ph C 0 Phe H 0 - - O 1 15 1561 Ph Ph Ph C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 15 1562 Ph Ph Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 15 1563 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1115 1564 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 1115 1565 3,5-Dbp H H C O - - - - - 0015 1566 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 0115 1567 3,5-Dbp H H C O O Me S - - 0115 1568 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - O 1 15 1569 3,5-Dbp H H C O Mee H O - - O 1 15
Taulukko 1 (-jatkoa) 73 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1570 3,5-Dbp H H C 0 MeeH S - - 0115 1571 3,5-Dbp H H C 0 PheH 0 - - 0115 1572 3,5-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 15 1573 3,5-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 15 1574 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 15 ( 1575 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 15 1576 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 15 1577 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 MeO - - 0115 1578 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 Me S - - 0115 1579 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 15 1580 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 15 1581 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 1 15 1582 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 15 1583 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 15 1584 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 15 1585 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 15 1586 4-MeOPh Ph Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 15 / 1587 4-MeOPh Ph Ph C 0 ----- 0 0 15 1588 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me 0 - - 0 1 15 · 1589 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me S - - 0 1 15 1590 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 15 1591 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 15 1592 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 15 1593 4-MeOPh Ph Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 15 1594 4-MeOPh Ph Ph C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 15 1595 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 15 1596 tBu Ph Ph Si 0 0 H 0 Ete 0 1 1 15 1597 tBu Ph Ph Si 0 S H 0 Ete 0 1 1 15
Taulukko 1 (jatkoa) 74
Yhd.
mm
nro Rx R2 R3 Z Υχ Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1598 tBu Ph Ph Si 0 - - - - - 0 0 15 1599 tBu Ph Ph Si 0 0 Me 0 - - 0 1 15 1600 tBu Ph Ph Si 0 0 Me S - - 0 1 15 1601 tBu Ph Ph Si 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 15 1602 tBu Ph Ph Si 0 Mee H 0 - - 0 1 15 1603 tBu Ph Ph Si 0 Mee H S - - 0 1 15 ^ 1604 tBu Ph Ph Si 0 Phe H 0 - - 0 1 15 1605 tBu Ph Ph Si 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 15 1606 tBu Ph Ph Si 0 0 Me NH Trim - 1 1 15 1607 Ph Ph Ph C S 0 H 0 Ete 0 1 1 15 1608 Ph Ph Ph C S S H 0 Ete 0 1 1 15 1609 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 15 1610 Ph Ph Ph C S 0 Me 0 - - 0 1 15 1611 Ph Ph Ph C S 0 Me S - - 0 1 15 1612 Ph Ph Ph C S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 15 1613 Ph Ph Ph C S Mee H 0 - - 0 1 15 1614 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 1 15 1615 Ph Ph Ph C S Phe H 0 - - 0 1 15 j 1616 Ph Ph Ph C S NH Pr 0 Ete 0 1 1 15 1617 Ph Ph Ph C S . 0 Me NH Trim - 1 1 15 1618 4-Bz0Ph H H C 0 0 H O Ete O 1115 1619 4-BzOPh H H C 0 S H 0 EteO 1115 1620 4-BzOPh H H C 0 - - - - - 0015 1621 4-BzOPh H H C 0 0 Me O - - 0115 1622 4-BzOPh H H C 0 0 Me S - - 0115 1623 4-BzOPh H H C 0 0 2-ClPh O - - 0 1 15 1624 4-BzOPh H H C O Mee H O - - 0 1 15 1625 4-BzOPh H H C O Mee H S - - 0 1 15
Taulukko 1 (i a tkoa') 75 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1626 4-BzOPh H H C 0 PheH 0 - - 0115 1627 4-BzOPh H H C 0 NH Pr O Ete O 1 1 15 1628 4-BzOPh H H C O 0 Me NH Trim - 11 11 1629 Ph Xanthen-9-yl 0 0 H O Ete O 1115 1630 Ph Xanthen-9-yl O S H O Ete O 1115 ( 1631 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 0 O 15 1632 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - 0 1 15 1633 Ph Xanthen-9-yl O O Me S - - 0 1 15 1634 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 15 1635 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 1 15 1636 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - O 1 15 1637 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 1 15 1638 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 15 1639 Ph Xanthen-9-yl O O Me NH Trim - 1 1 15 1640 Ph Fluoren-9-yl O O H O Ete O 1115 1641 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 1115 1642 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 0 0 15 1643 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 0 1 15 1644 Ph Fluoren-9-yl 0 O me S - - 0 1 15 1645 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 15 1646 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 1 15 1647 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 1 15 1648 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 1 15 1649 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 15 1650 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 1 1 15 1651 3,4-Dbp H H C 0 0 H O EteO 1116 1652 3,4-Dbp H H G 0 S H O EteO 1116 1653 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0016
Taulukko 1 (jatkoa)
Yhd.
76 111265
nro Rj_ R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1654 3,4-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0116 1655 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0116 1656 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 16 1657 3,4-Dbp H H C 0 Mee H 0 - - 0 1 16 1658 3,4-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0 1 16 1659 3,4-Dbp H H C 0 Phe H O - - 0 1 16 ) 1660 3,4-Dbp H H C 0 NHPrO EteO 1116 1661 3,4-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 16 1662 Ph Ph Ph C 0 O H O Ete O 1 1 16 1663 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 16 1664 Ph Ph Ph C O ----- 0 0 16 1665 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 1 16 1666 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 1 16 1667 Ph Ph Ph G O O 2-ClPh O - - 0 1 16 1668 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 16 1669 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 1 16 1670 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 1 16 1671 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 16 ^ 1672 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 16 - 1673 3,5-Dbp H H C 0 0 H O EteO 1116 1674 3,5-Dbp H H C 0 S H O EteO 1116 1675 3,5-Dbp H H C 0 - - - - - 0016 1676 3,5-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0116 1677 3,5-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0116 1678 3,5-Dbp H H C 0 0 2-ClPh O - - 0 1 16 1679 3,5-Dbp H H C 0 Mee H O - - 0116 1680 3,5-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0 1 16 1681 3,5-Dbp H H C 0 Phe H O - - 0116
Taulukko 1 (jatkoa)
Yhd.
77 111265
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1682 3,5-Dbp H H C 0 NHPrO EteO 1116 1683 3,5-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 16 1684 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 16 1685 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 16 1686 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0- - - - - 0016 ( 1687 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 MeO - - 0116 1688 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 Me S - - 0116 1689 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 16 1690 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 16 1691 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 1 16 1692 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 16 1693 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Nh Pr 0 Ete 0 1 1 16 1694 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 16 1695 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 16 1696 4-MeOPh Ph Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 16 1697 4-MeOPh Ph Ph C 0 - - - - - 0 0 16 1698 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me 0 - - 0 1 16 1699 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me S - - 0 1 16 ^ 1700 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 16 1701 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 16 1702 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 16 1703 4-MeOPh Ph Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 16 1704 4-MeOPh Ph Ph C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 16 1705 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 16 1706 tBu Ph Ph Si 0 0 H 0 Ete 0 1 1 16 1707 tBu Ph Ph Si 0 S H 0 Ete 0 1 1 16 1708 tBu Ph Ph Si 0 - - - - - 0 0 16 1709 tBu Ph Ph Si 0 0 Me 0 - - 0 1 16
Taulukko 1 (jatkoa)
Yhd.
78 111265
nro % R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1710 tBu Ph Ph Si 0 0 Me S - - 0 1 16 1711 tBu Ph Ph Si 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 16 1712 tBu Ph Ph Si 0 Mee H 0 - - 0 1 16 1713 tBu Ph Ph Si 0 Mee H S - - 0 1 16 1714 tBu Ph Ph Si 0 Phe H 0 - - 0 1 16 1715 tBu Ph Ph Si 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 16 ) 1716 tBu Ph Ph Si 0 0 Me NH Trim 0 1 1 16 1717 Ph Ph Ph C S 0 H 0 Ete 0 1 1 16 1718 Ph Ph Ph C S S H 0 Ete 0 1 1 16 1719 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 16 1720 Ph Ph Ph C S 0 Me 0 - - 0 1 16 1721 Ph Ph Ph C S 0 Me S - - 0 1 16 1722 Ph Ph Ph C S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 16 1723 Ph Ph Ph C S Mee H 0 - - 0 1 16 1724 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 1 16 1725 Ph Ph Ph C S Phe H 0 - - 0 1 16 1726 Ph Ph Ph C S NH Pr 0 Ete O 1 1 16 1727 Ph Ph Ph C S 0 Me NH Trim - 1 1 16 ^ 1728 4-BzOPh H H C O 0 H O Ete O 1116 1729 4-Bz0Ph H H C O S H O Ete O 1 1 16 1730 4-BzOPh H H C O ----- 0 0 16 1731 4-BzOPh H H C O O Me O - - 0116 1732 4-BzOPh H HCO O Me S - - 0116 1733 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 1 16 1734 4-BzOPh H HCO Mee H O - - 0 1 16 1735 4-BzOPh H HCO Mee H S - - 0 1 16 1736 4-BzOPh H H C O Phe H O - - 0116 1737 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete O 1 1 16
Taulukko 1 (jatkoa)
Yhd.
79 111265
nro R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1738 4-BzOPh H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 16 1739 Ph Xanthen-9-yl 0 0 H 0 EteO 1116 1740 Ph Xanthen-9-yl 0 S H 0 EteO 1116 1741 Ph Xanthen-9-yl 0 - - - - - 0 0 16 1742 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me 0 - - 0 1 16 ( 1743 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me S - - 0 1 16 1744 Ph Xanthen-9-yl 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 16 1745 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H 0 - - 0 1 16 1746 Ph Xanthen-9-yl 0 Mee H S - - 0 1 16 1747 Ph Xanthen-9-yl O Phe H 0 - - 0 1 16 1748 Ph Xanthen-9-yl 0 NH Pr O Ete O 1 1 16 1749 Ph Xanthen-9-yl 0 0 Me NH Trim - 1 1 16 1750 Ph Fluoren-9-yl 0 0 H O Ete O 1116 1751 Ph Fluoren-9-yl 0 S H 0 Ete O 1116 1752 Ph Fluoren-9-yl 0 - - - - - 0 0 16 1753 Ph Fluoren-9-yl 0 0 MeO - - 0 1 16 1754 Ph Fluoren-9-yl 0 O Me S - - 01 16 ^ 1755 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 16 1756 Ph Fluor en-9-yl 0 Mee H 0 - - 0 1 16 - 1757 Ph Fluoren-9-yl 0 Mee H S - - , 0 1 16 1758 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 1 16 1759 Ph Fluoren-9-yl 0 NH Pr O Ete O 1 1 16 1760 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 11 16 1761 1-Pyr H H C 0 0 H 0 Ete 0 111 1762 1-Pyr H H C O S H 0 EteO 111 1763 1-Pyr H Ή C O - - - - - 001 1764 1-Pyr H H C 0 0 MeO - - 011 1765 1-Pyr H H C O 0 Me S - - Oli
Taulukko 1 (jatkoa)
Yhd.
80 111265
nro R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1766 2-Npe H H C 0 0 H 0 EteO 111 1767 2-Npe H H C 0 S H 0 EteO 111 1768 2-Npe H H C 0 - - - - - 001 1769 2-Npe H H C 0 0 MeO - - Oli 1770 2-Npe H H C 0 0 Me S - - 011 1771 Ph Ph H C O 0 H 0 Ete 0 1 1 1 ) 1772 Ph Ph H C 0 S H 0 Ete 0 1 1 1 1773 Ph Ph H C O - - - - - 0 0 1 1774 Ph Ph H C O 0 Me 0 - - 0 1 1 1775 Ph Ph H C O 0 Me S - - 0 1 1 1776 4-PhPh H H C O 0 H 0 EteO 111 1777 4-PhPh H H C O S H 0 EteO 111 1778 4-PhPh H H C O - - - - - 001 1779 4-PhPh H H C O 0 MeO - - Oli 1780 4-PhPh H H C O O Me S - - Oli 1781 2-PhPh H H C O O H O Ete O 111 1782 2-PhPh H H C O S H O Ete O 111 1783 2-PhPh HHCO-----001 ^ 1784 2-PhPh H H G O O Me O - - Oli 1785 2-PhPh H. H C O O Me S - - Oli 1786 Ph Ph H C S O H O Ete O 111 1787 Ph Ph H C S S H O Ete O 1 1 1 1788 Ph Ph H C S - - - - - 0 0 1 1789 Ph Ph H C S O Me O - - O 1 1 1790 Ph Ph H C S O Me S - - O 1 1 1791 Ph Ph Ph C NH O H O Ete O 111 1792 Ph Ph Ph C NH S H O Ete O 111 1793 Ph Ph Ph C NH - - - - - 0 0 1
Taulukko 1 (jatkoa)
Yhd.
81 111265
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1794 Ph Ph Ph C NH 0 Me 0 - - Oli 1795 Ph Ph Ph C NH 0 Me S - - Oli 1796 1-Pyr H H C 0 0 H 0 EteO 112 1797 1-Pyr H H C 0 S H 0 EteO 112 1798 1-Pyr H H C 0 - - - - - 002 ( 1799 1-Pyr H H C 0 0 MeO - - 012 1800 1-Pyr H H C 0 0 Me S - - 012 1801 2-Npe H H C 0 0 H 0 EteO 112 1802 2-Npe H H C 0 S H 0 EteO 112 1803 2-Npe H H C 0 - - - - - 002 1804 2-Npe H H C 0 0 MeO - - 012 1805 2-Npe H H C 0 0 Me S - - 012 1806 Ph Ph H C 0 0 H 0 Ete O 1 1 2 1807 Ph Ph H C 0 S H 0 Ete O 112 1808 Ph Ph H C 0 ----- O O 2 1809 Ph Ph H C 0 0 Me 0 - - 0 1 2 1810 Ph Ph H C 0 0 Me S - - 0 1 2 1811 4-PhPh H H C 0 0 H 0 Ete O 112 ^ 1812 4-PhPh H H C 0 0 H 0 Ete O 112' 1813 4-PhPh H H C 0 - - - - - 002 1814 4-PhPh H H C 0 0 MeO - - 012 1815 4-PhPh H H C 0 0 Me S - - 012 1816 2-PhPh H H C 0 0 H 0 Ete O 112 1817 2-PhPh H H C 0 S H 0 Ete O 112 1818 2-PhPh H H C 0 - - - - - 002 1819 2-PhPh H H C 0 0 MeO - - 012 1820 2-PhPh H H C 0 0 Me S - - 012 1821 Ph Ph H C S 0 H 0 Ete O 1 1 2
Taulukko 1 (jatkoa)
Yhd.
82 111265
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
1822 Ph Ph H C S S H 0 Ete O 112 1823 Ph Ph H C S ----- 0 0 2 1824 Ph Ph H C S 0 Me 0 - - 0 1 2 1825 Ph Ph H C S 0 Me S - - 0 1 2 1826 Ph Ph Ph C NH 0 H 0 Ete O 112 1827 Ph Ph Ph C NH S H 0 Ete O 112 ) 1828 Ph Ph Ph C NH - - - - - 0 0 2 1829 Ph Ph Ph C NH 0 Me 0 - - 0 12 1830 Ph Ph Ph C NH 0 Me S - - 0 12 1831 1-Pyr H H C 0 0 H 0 Ete O 113 1832 1-Pyr H H C 0 S H 0 Ete O 113 1833 1-Pyr H H C 0 - - - - - 003 1834 1-Pyr H H C 0 0 MeO - - 013 1835 1-Pyr H H C 0 0 Me S - - 013 1836 2-Npe H H C 0 0 H 0 Ete O 113 1837 2-Npe H H C 0 S H 0 Ete O 113 1838 2-Npe H H C 0 - - - - - 003 1839 2-Npe H H C 0 0 MeO - - 013 ^ 1840 2-Npe H H C 0 0 Me S - - 013 1841 Ph Ph H C 0 0 H 0 Ete O 113.
1842 Ph Ph H C 0 S H 0 Ete O 1 1 3 1843 Ph Ph H G 0 ----- 0 0 3 1844 Ph Ph H C 0 0 Me 0 - - 0 1 3 1845 Ph Ph H C 0 0 Me S - - 0 1 3 1846 4-PhPh H H C 0 0 H 0 Ete O 113 1847 4-PhPh H H C 0 S H 0 Ete O 113 1848 4-PhPh HHCO - - - - - 003 1849 4-PhPh H H C 0 0 MeO - - 013
Taulukko 1 (jatkoa')
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
83 111265
Yhd.
1850 4-PhPh H H C 0 0 Me S - - 013 1851 2-PhPh H H C 0 0 H 0 EteO 113 1852 2-PhPh H H C 0 S H 0 EteO 113 1853 2-PhPh H H C 0 - - - - - 003 1854 2-PhPh H H C 0 0 MeO - - 013 ^ 1855 2-PhPh H H C 0 0 Me S - - 013 1856 Ph Ph H C S 0 H 0 Ete 0 1 1 3 1857 Ph Ph H C S S H 0 Ete O 113 1858 Ph Ph H C S ----- 0 0 3 1859 Ph Ph H C S 0 Me 0 - - 0 1 3 1860 Ph Ph H C S 0 Me S - - 0 1 3 1861 Ph Ph Ph C NH 0 H 0 Ete O 113 1862 Ph Ph Ph C NH S H 0 Ete 0 113 1863 Ph Ph Ph C NH - - - - - 0 0 3 1864 Ph Ph Ph C NH 0 Me 0 - - 0 13 1865 Ph Ph Ph C NH 0 Me S - - 0 13 1866 1-Pyr H - H C 0 0 H 0 Ete O 114 1867 1-Pyr H H C 0 S H 0 Ete O 114 ( 1868 1-Pyr H H C 0 - - - - - 004 1869 1-Pyr H H C 0 0 MeO - - 014 1870 1-Pyr H H C 0 0 Me S - - 014 1871 2-Npe H H C 0 0 H 0 Ete O 114 1872 2-Npe H H C 0 S H 0 Ete O 114 1873 2-Npe H H C 0 - - - - - 004 1874 2-Npe H H C 0 0 MeO - - 014 1875 2-Npe H H C 0 0 Me S - - 014 1876 Ph Ph H C 0 0 H 0 Ete O 114 1877 Ph Ph H C 0 S H 0 Ete O 1 1 4
Taulukko 1 (jatkoa")
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
84 111265
Yhd.
1878 Ph Ph H C 0 ----- 0 0 4 1879 Ph Ph H G 0 0 Me 0 - - 0 1 4 1880 Ph Ph H C 0 0 Me S - - 0 1 4 1881 4-PhPh H H C 0 0 H 0 EteO 114 1882 4-PhPh H H C 0 S H 0 EteO 114 1883 4-PhPh H H C 0 - - - - - 0 0 4 ) 1884 4-PhPh H H C 0 0 MeO - - 014 1885 4-PhPh H H C 0 0 Me S - - 014 1886 2-PhPh H H C 0 0 H 0 EteO 114 1887 2-PhPh H H C 0 S H 0 EteO 114 1888 2-PhPh H H C 0 - - - - - 004 1889 2-PhPh H H C 0 0 MeO - - 014 1890 2-PhPh HHC0 0MeS--014 1891 Ph Ph H C S 0 H 0 Ete O 1 1 4 1892 Ph Ph H C S S H 0 Ete O 1 1 4 1893 Ph Ph H C S ----- 0 0 4 1894 Ph Ph H C S 0 Me 0 - - 0 1 4 1895 Ph Ph H C S 0 Me S Ete - 0 14 1896 Ph Ph Ph C NH 0 H 0 Ete O 114 ) 1897 Ph Ph Ph C NH S H 0 Ete O 114 1898 Ph Ph Ph C NH - - - - - 0 0 4 1899 Ph Ph Ph C NH 0 Me 0 - - 0 14 1900 Ph Ph Ph C NH 0 Me S - - 0 14 1901 3,4-Dbp H H C 0 0 H O EteO 1117 1902 3,4-Dbp H H C 0 S H O EteO 1117 1903 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0017 1904 3,4-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0117 1905 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0117
nro Rx R2 R3 Z Yi Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 (jatkoa') 85 111265
Yhd.
1906 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete O 1 1 17 1907 Ph Ph Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 17 1908 Ph Ph Ph C 0 - - - - 0 0 17 1909 Ph Ph Ph C 0 0 Me 0 - - 0 1 17 1910 Ph Ph Ph C O 0 Me S - - 0 1 17 ^ 1911 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 17 1912 3,5-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1117 1913 3,5-Dbp H H C 0 - - - - - 0017 1914 3,5-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0117 1915 3,5-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0117 1916 3,4-Dbp H H C 0 0 H O EteO 0118 1917 3,4-Dbp H H C 0 S H O Ete 0 O 1 18 1918 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0118 1919 3,4-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0118 1920 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 1118 1921 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 18 1922 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 18 1923 Ph Ph Ph C O ----- 0 0 18 ( 1924 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 1 18 1925 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 1 18 1926 3,5-Dbp H H C 0 0 H O EteO 1118 1927 3,5-Dbp H H C 0 S H O EteO 1118 1928 3,5-Dbp H H C 0 - - - - - 0018 1929 3,5-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0118 1930 3,5-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0118 1931 3,4-Dbp H H C 0 0 H O EteO 0119 1932 3,4-Dbp H H C 0 S H O Ete 0 0 1 19 1933 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0119
nro Rx R2 R3 Z Υχ Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
86 111265
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 1934 3,4- Dbp H H C 0 0 Me O - - 0119 1935 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 1119 1936 Ph Ph Ph C 0 0 H O Ete O 1 1 19 1937 Ph Ph Ph C 0 S H O Ete 0 1 1 19 1938 Ph Ph Ph C O ----- 0 0 19 1939 Ph Ph Ph C 0 O Me O - - 0 1 19 ^ 1940 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 1 19 1941 3,5- Dbp H H C 0 0 H O EteO 1119 1942 3,5- Dbp H H C 0 S H O EteO 1119 1943 3,5- Dbp H H C O - - - - - 0019 1944 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 0119 1945 3,5-Dbp H H C O O Me S - - 0119 1946 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 0120 1947 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 0120 1948 3,4-Dbp H H C O - - - - - 0120 1949 3,4-Dbp H H C O O Me O - - 0120 1950 3,4-Dbp H H C O O Me S - - 1120 1951 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 20 1952 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 20 ) 1953 Ph Ph Ph C O ----- O O 20 1954 Ph Ph Ph C O O Me O - - O 1 20 1955 Ph Ph Ph C O O Me S - - O 1 20 1956 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 1120 1957 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 1120 1958 3,5-Dbp H H C O - - - - - 0020 1959 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 0120 1960 3,5-Dbp H H C O O Me S - - 0120 1961 3,4-Dbp H H C O NH Me O Ete O 111
Taulukko 1 (jatkoa1)
nro R-l R2 R3 Z Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
87 111265
Yhd.
1962 3,4-Dbp H H C 0 0 Ph O - - Oli 1963 3,4-Dbp H H C 0 0 4-ClPh O - - Oli 1964 3,4-Dbp H H C 0 NH 2-NH2Et O Ete 0 111 1965 3,4-Dbp H H C 0 NH 2-MeOEt 0 Ete O 111 1966 3,4-Dbp H H C O S Me O - - Oli ( 1967 3,4-Dbp H H C 0 S H O - - 011 1968 3,4-Dbp H H C 0 0 H S EteO 111 1969 3,4-Dbp H H C O O Et O - - Oli 1970 3,4-Dbp H H C O O Et S - - Oli 1971 3,4-Dbp H H C O O BuO - - Oli 1972 3,4-Dbp H H C O O Bu S - - Oli 1973 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 611 1974 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 621 1975 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 631 1976 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 641 1977 3,4-Dbp H H C O O H O 2-Hpr NH 111 1978 Ph Ph Ph C O NH Me O Ete O 111 1979 Ph Ph Ph C O O Ph O - - O 1 1 ( 1980 Ph Ph Ph C O O 4-ClPh O - - Oli 1981 Ph Ph Ph C O NH 2-NH,Et O Ete O , 111 Δ y — 1982 Ph Ph Ph C O NH 2-MeOEt O Ete O ' ,1 1 1 1983 Ph Ph Ph C O S Me O - - O 1 1 1984 Ph Ph Ph C O S H O - - O 1 1 1985 Ph Ph Ph C O O H S Ete O 111 1986 Ph Ph Ph C O O Et O - - O 1 1 1987 Ph Ph Ph C O O Et S - - O 1 1 1988 Ph Ph Ph C O O Bu O - - O 1 1 1989 Ph Ph Ph C O O Bu S - - O 1 1
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
88
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 1990 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 6 11 1991 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 6 2 1 1992 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 6 3 1 1993 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 6 4 1 1994 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 2-Hpr NH 111 1995 3,5-Dbp H H C 0 NH Me 0 Ete 0 111 ) 1996 3,5-Dbp H H C 0 0 PhO - - 011 1997 3,5-Dbp H H C 0 0 4-ClPh 0 - - Oli 1998 3,5-Dbp H H C 0 NH 2-NH2Et 0 Ete 0 111 1999 3,5-Dbp H H C 0 NH 2-MeOEt 0 Ete 0 111 2000 3,5-Dbp H H C 0 S MeO - - 011 2001 3,5-Dbp H H C O S H O - - Oli 2002 3,5-Dbp H H C O O H S Ete O 111 2003 3,5-Dbp H H C O O Et O - - Oli 2004 3,5-Dbp H H C O O Et S - - Oli 2005 3,5-Dbp H H C O O BuO - - Oli 2006 3,5-Dbp HHCOOBuS--011 2007 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 611 2008 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 621 ) 2009 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 631 2010 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 641' 2011 3,5-Dbp H H C O O H O 2-Hpr NH 111 2012 3,4-Dbp H H C O NH Me O Ete O 112 2013 3,4-Dbp H H C O O Ph O - - 012 2014 3,4-Dbp H H C O O 4-ClPh O - - 0 12 2015 3,4-Dbp H H C O NH 2-NH2Et O Ete O 112 2016 3,4-Dbp H H C O NH 2-MeOEt O Ete O 112 2017 3,4-Dbp H H C O S Me O - - 012
Taulukko 1 (jatkoa>
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
89 111265
Yhd.
2018 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 - - 012 2019 3,4-Dbp H H C 0 0 H S EteO 112 2020 3,4-Dbp H H C 0 0 EtO - - 012 2021 3,4-Dbp H H C 0 0 Et S - - 012 2022 3,4-Dbp H H C 0 0 BuO - - 012 ^ 2023 3,4-Dbp H H C 0 0 BuS - - 012 2024 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 612 2025 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 622 2026 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 632 2027 3,4-Dbp H H C O O H O EteO 642 2028 3,4-Dbp H H C O O H O 2-Hpr NH 112 2029 Ph Ph Ph C O NH Me O Ete O 112 2030 Ph Ph Ph C O O Ph O - - O 1 2 2031 Ph Ph Ph C O O 4-ClPh O - - 0 12 2032 Ph Ph Ph C O NH 2-NH2Et O Ete O 112 2033 Ph Ph Ph C O NH 2-MeOEt O Ete O 112 2034 Ph. Ph Ph C O S Me O - - O 1 2 2035 Ph Ph Ph C O S H O - - O 1 2 ( 2036 Ph Ph Ph C O O H S Ete O 112 2037 Ph Ph Ph C O O Et O - - 0 12 2038 Ph Ph Ph C O O Et S - - O 1 2 2039 Ph Ph Ph C O O Bu O - - O 1 2 2040 Ph Ph Ph C O O Bu S - - O 1 2 2041 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 6 12 2042 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 6 2 2 2043 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 6 3 2 2044 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 6 4 2 2045 Ph Ph Ph C O O H O 2-Hpr NH 112
Taulukko 1 ('jatkoa')
nro Rj_ R2 R3 Z Y1 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
90 111265
Yhd.
2046 3,5-Dbp H H C 0 NH Me 0 Ete 0 112 2047 3,5-Dbp H H C 0 0 PhO - - 012 2048 3,5-Dbp H H C 0 0 4-ClPh 0 - - 0 12 2049 3,5-Dbp H H C 0 NH 2-NH2Et 0 Ete 0 112 2050 3,5-Dbp H H C 0 NH 2-MeOEt 0 Ete 0 112 2051 3,5-Dbp H H C 0 S MeO - - 012 ) 2052 3,5-Dbp H H C 0 S H 0 - - 012 2053 3,5-Dbp H H C 0 0 H S EteO 112 2054 3,5-Dbp H H C 0 0 Et 0 - - 012 2055 3,5-Dbp H H C 0 0 Et S - - 012 2056 3,5-Dbp H H C 0 0 BuO - - 012 2057 3,5-Dbp H H C 0 0 BuS - - 012 2058 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 Ete 0 612 2059 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 622 2060 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 Ete O 632 2061 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 Ete 0 6 4 2 2062 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 2-Hpr NH 112 2063 3,4-Dbp H H C 0 NH Me 0 EteO 113 2064 3,4-Dbp H H C 0 0 PhO - - 013 ) 2065 3,4-Dbp H H C 0 0 4-ClPh 0 - - 0 13 2066 3,4-Dbp H H C 0 NH 2-NH2Et 0 Ete 0 113 2067 3,4-Dbp H H C 0 NH 2-MeOEt 0 Ete 0 113 2068 3,4-Dbp H H C 0 S MeO - - 013 2069 3,4-Dbp H H C O S H O - - 013 2070 3,4-Dbp H H C O O H S Ete O 113 2071 3,4-Dbp H H C O O Et O - - 013 2072 3,4-Dbp H H C O O Et S - - 013 2073 3,4-Dbp H H C O O BuO - - 013
nro Ri r2 R3 z Yj. Y2 r4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 Matkoa') 91 111265
Yhd.
2074 3,4-Dbp H H C 0 0 BuS - - 013 2075 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 Ete 0 6 13 2076 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 623 2077 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 Ete 0 6 3 3 2078 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 643 2079 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 2-Hpr NH 113 ^ 2080 Ph Ph Ph C 0 NH Me O Ete 0 113 2081 Ph Ph Ph C 0 0 Ph 0 - - 0 1 3 2082 Ph Ph Ph C 0 0 4-ClPh 0 - - 0 13 2083 Ph Ph Ph C 0 NH 2-NH2Et 0 Ete 0 113 2084 Ph Ph Ph C 0 NH 2-MeOEt 0 Ete 0 113 2085 Ph Ph Ph C 0 S Me O - - 0 1 3 2086 Ph Ph Ph C 0 S H 0 - - 0 1 3 2087 Ph Ph Ph C 0 0 H S Ete 0 113 2088 Ph Ph Ph C 0 0 Et 0 - - O 1 3 2089 Ph Ph Ph C 0 0 Et S - - 0 1 3 2090 Ph Ph Ph C 0 0 Bu 0 ... 012 2091 Ph Ph Ph C 0 0 Bu S - - 0 1 3 ( 2092 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 6 13 2093 Ph Ph Ph C 0 0 H O Ete 0 6 2 3 2094 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 6 3 3 2095 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 6 4 3 2096 Ph Ph Ph C O O H O 2-Hpr NH 113 2097 3,5-Dbp H H C O NH Me O Ete O 113 2098 3,5-Dbp H H C O O Ph O - - 013 2099 3,5-Dbp H H C O O 4-ClPh O - - 0 13 2100 3,5-Dbp H H C O NH 2-NH2Et O Ete O 113 2101 3,5-Dbp H H C O NH 2-MeOEt O Ete O 113
nro Rx R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
92 111265
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 2102 3,5-Dbp H H C 0 S MeO - - 013 2103 3,5-Dbp H H C 0 S H 0 - - 013 2104 3,5-Dbp H H C 0 0 H S EteO 113 2105 3,5-Dbp H H C 0 0 EtO - - 013 2106 3,5-Dbp H H C 0 .0 Et S - - 013 2107 3,5-Dbp H H C 0 0 BuO - - 013 ^ 2108 3,5-Dbp HHCO OBuS - - 013 2109 3,5-Dbp H H G 0 0 H 0 EteO 613 2110 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 623 2111 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 633 2112 3,5-Dbp H H C 0 0 H O EteO 643 2113 3,5-Dbp H H C O O H O 2-Hpr NH 113 2114 3,4-Dbp H H C O NH Me O Ete O 114 2115 3,4-Dbp H H C O O Ph O - - 014 2116 3,4-Dbp H H C O O 4-ClPh O - - 0 14 2117 3,4-Dbp H H C O NH 2-NH2Et O Ete O 114 2118 3,4-Dbp H H C O NH 2-MeOEt O Ete O 114 2119 3,4-Dbp H H C O S Me O - - 014 2120 3,4-Dbp HHC0SH0--014 ) 2121 3,4-Dbp H H C O O H S Ete O 114 2122 3,4-Dbp H H C O O Et O - - 014 2123 3,4-Dbp H H C O O Et S - - 014 2124 3,4-Dbp H H C O O BuO - - 014 2125 3,4-Dbp H H C O O BuS - - 014 2126 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 614 2127 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 624 2128 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 6 3 4 2129 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 644
nro R]_ K-2 Z Y1 Y2 R4 Y3 X Y4 n ra B
Taulukko 1 ('jatkoa') 93 111265
Yhd.
2130 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 2-Hpr NH 114 2131 Ph Ph Ph C 0 NH Me 0 Ete 0 114 2132 Ph Ph Ph C 0 0 Ph 0 - - 0 1 4 2133 Ph Ph Ph C 0 0 4-ClPh 0 - - 0 14 2134 Ph Ph Ph C 0 NH 2-NH2Et 0 Ete 0 114 2135 Ph Ph Ph C 0 NH 2-MeOEt 0 Ete 0 114 2136 Ph Ph Ph C 0 S Me 0 - - 0 1 4 2137 Ph Ph Ph C 0 S H 0 - - 0 1 4 2138 Ph Ph Ph C 0 0 H S Ete 0 114 2139 Ph Ph Ph C 0 0 Et 0 - - 0 1 4 2140 Ph Ph Ph C 0 0 Et S - - 0 1 4 2141 Ph Ph Ph C 0 0 Bu 0 - - 0 1 4 2142 Ph Ph Ph C 0 0 Bu S - - 0 1 4 2143 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 6 14 2144 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 6 2 4 2145 Ph Ph Ph G 0 0 H 0 Ete 0 6 3 4 2146 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 6 4 4 2147 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 2-Hpr NH 114 ( 2148 3,5-Dbp H H C 0 NH Me 0 EteO 114 2149 3,5-Dbp H H C O O Ph O - - 014 2150 3,5-Dbp H H C O O 4-ClPh O - - 0 14 2151 3,5-Dbp H H C O NH 2-NH2Et O Ete O 114 2152 3,5-Dbp H H C O NH 2-MeOEt O Ete O 114 2153 3,5-Dbp H H C O S Me O - - 014 2154 3,5-Dbp H H C O S H O - - 014 2155 3,5-Dbp H H C O O H S Ete O 114 2156 3,5-Dbp H H C O O Et O - - 014 2157 3,5-Dbp H H C O O Et S - - 014
nro Rj_ R2 R3 Z Y1 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
94 111265
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 2158 3,5-Dbp H H C 0 0 BuO - - 014 2159 3,5-Dbp H H C 0 0 BuS - - 014 2160 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 614 2161 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 624 2162 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 634 2163 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 644 ^ 2164 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 2-Hpr NH 114 2165 4-MePh Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 111 2166 4-MePh 4-MePh Ph C 0 0 H 0 Ete 0 111 2167 4-MePh 4-MePh 4-MePh C 0 0 H 0 EteO 111 2168 4-tBuPh Ph Ph C O O H O Ete O 111 2169 4-tBuPh 4-tBuPh Ph C O O H O Ete O 1 1 1 2170 4-tBuPh 4-tBuPh 4-tBuPh C O O H O Ete O 111 2171 4-N02Ph Ph Ph C O O H O Ete O 111 2172 4-N02Ph 4-N02Ph Ph C O O H O Ete O 111 2173 4-FPh Ph Ph C O O H O Ete O 111 2174 4-FPh 4-FPh Ph C O O H O Ete O 11 1 2175 2,4-diFPh Ph Ph C O O H O Ete O 111 2176 2-ClPh Ph Ph C O O H O Ete O 111 ) 2177 4-ClPh Ph Ph C O O H O Ete O 111 2178 4-ClPh 4-ClPh Ph C O O H O Ete Ö 111 2179 4-BrPh Ph Ph C O O H O Ete O 111 2180 4-BrPh 4-BrPh Ph C O O H O Ete O 111 2181 4-IPh Ph Ph C O O H O Ete O 111 2182 4-tBuOPh Ph Ph C O O H O Ete O 111 2183 4-EtOPh Ph Ph C O O H O Ete O 111 2184 4-EtOPh 4-EtOPh Ph C O O H O Ete O 111 2185 2-BzOPh H H C O O H O Ete O 111
Taulukko 1 (jatkoa) 95 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Y1 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
2186 4-BzOPh Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 111 2187 4-BzOPPh 4-BzOPh Ph C 0 0 H 0 Ete 0 111 2188 4-MeOPh 4-MeOPh 4-MeOPh C 0 0 H 0 EteO 111 2189 9-Ant H H C H 0 EteO 111 / 2190 2-Ant H H C 0 0 H 0 EteO 111 V 2191 1-Npe H H C 0 0 H 0 EteO 111 2192 3-PhOPh H H C 0 0 H 0 EteO 111 2193 4-PhOPh H H C 0 0 H 0 EteO 111 2194 2-Anq H H C 0 0 H 0 EteO 111 2195 4-Pha H H C 0 O H 0 EteO 111 2196 3,4-Dbp H H C O S H O Ete 0 611 2197 3,4-Dbp H H C O NH Et O Ete O 611 2198 3,4-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 611 2199 3,4-Dbp H H C O NH 2-NH2Et O Ete O 6 11 2200 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 211 2201 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 211 2202 3,4-Dbp H H C O O 2-N02Ph O - - Oli ( 2203 3,4-Dbp H H C O O 4-N02Ph O - - Oli 2204 3,4-Dbp H H C O O 2-FPh O - - Oli 2205 3,4-Dbp H H C O O 2-BrPh O - - Oli 2206 3,4-Dbp H H C O O 2-IPh O - - Oli 2207 3,4-Dbp H H C O O 4-MeOPh O - - Oli 2208 3,4-Dbp H H C O O 4-MeSPh O - - Oli 2209 3,4-Dbp H H C O O 4-EtOPh O - - Oli i
nro R-l R2 R3 Z Y4 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
96 111265
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 2210 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 Trim 0 111 2211 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 Tetm 0 111 2212 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 Penin 0 111 2213 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 Hexm 0 111 2214 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 Hepm 0 111 2215 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 Octm 0 111 ^ 2216 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 Nonin 0 111 2217 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 Deem 0 111 2218 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 PreO 111 2219 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 1-Me-Trim 0 111 2220 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 2-Me-Tetm 0 111 2221 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 Trim 0 111 2222 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 Tetm 0 .111 2223 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 Penin 0 111 2224 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 Hexm 0 111 2225 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 Hepm 0 111 2226 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 Octm 0 111 2227 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 Noran 0 111 2228 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 Deem 0 111 ) 2229 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 PreO 111 2230 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 1-Me-Trim 0 111 2231 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 2-Me-Tetm 0 111 2232 3,4-Dbp H H C 0 NHPhO EteO 111 2233 3,4-Dbp H H C 0 NH 2-ClPh 0 Ete 0 111 2234 3,4-Dbp H H C 0 NH Me 0 Trim 0 111 2235 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Trim 0 111
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa')
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
97 111265 2236 3,4-Dbp H H C 0 NH 2-NH2Et 0 Trim 0 111 2237 3,4-Dbp H H C 0 NH 2-MeOEt 0 Trim 0 111 2238 3,4-Dbp H H C 0 NH Ph 0 Trim 0 111 2239 3,4-Dbp H H C 0 NH 2-ClPh 0 Trim 0 111 2240 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Tetm 0 111 2241 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Penm 0 111 ( 2242 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Hexm 0 111 2243 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Hepm 0 111 2244 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Octm 0 111 2245 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Nonm 0 111 2246 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Deem 0 111 2247 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 PreO 111 2248 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 1-Me-Trim 0 111 2249 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 2-Me-Trim 0 111 2250 Ph Ph Ph C NH 0 H 0 Ete 0 6 11 2251 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1121 2252 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1121 2253 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0021 ^ 2254 3,4-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0121 2255 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0121 2256 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 21 2257 Ph Ph Ph C 0 S H 0 Ete O 1 1 21 2258 Ph Ph Ph C 0 - - - - - 0 0 21 2259 Ph Ph Ph C 0 0 Me 0 - - 0 1 21 2260 Ph Ph Ph C 0 0 Me S - - 0 1 21 2261 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1121 2262 3,5-Dbp H H C 0 S H O EteO 1121 2263 3,5-Dbp H H C 0 - - - - - 0021
Taulukko 1 ('jatkoa')
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
111265
Yhd.
98 2264 3,5-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0121 2265 3,5-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0121 2266 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1122 2267 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1122 2268 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0022 2269 3,4-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0122 ^ 2270 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0122 2271 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 22 2272 Ph Ph Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 22 2273 Ph Ph Ph C 0 ----- 0 O 22 2274 Ph Ph Ph C O O Me O - - O 1 22 2275 Ph Ph Ph C O O Me S - - O 1 22 2276 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 1122 2277 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 1122 2278 3,5-Dbp H H C O - - - - - 0022 2279 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 0122 2280 3,5-Dbp H H C O O Me S - - 0122 2281 3,4-Dbp H H C O O H O Ete O 1123 2282 3,4-Dbp H H C O S H O Ete O 1123 ) 2283 3,4-Dbp H H C O - - - - - 0023 2284 3,4-Dbp H H C O O Me O - - 0123 2285 3,4-Dbp H H C O O Me S - - 0123 2286 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 23 2287 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 23 2288 Ph Ph Ph C O ----- O O 23 2289 Ph Ph Ph C O O Me O - - O 1 23 2290 Ph Ph Ph C O O Me S - - O 1 23 2291 3,5-Dbp H H C O O H O Ete O 1 1 23 2292 3,5-Dbp H H C O S H O Ete O 1123
Taulukko 1 (jatkoa^
nro Rx R2 R3 Z Ύ1 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
99 111265
Yhd.
2293 3,5-Dbp H H C 0 - - - - - 0023 2294 3,5-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0123 2295 3,5-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0123 2296 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1124 2297 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1124 ^ 2298 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0024 2299 3,4-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0124 2300 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0124 2301 Ph Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 24 2302 Ph Ph Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 24 2303 Ph Ph Ph C 0 ----- 0 0 24 2304 Ph Ph Ph C 0 0 Me 0 - - 0 1 24 2305 Ph Ph Ph C 0 0 Me S - - 0 1 24 2306 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1124 2307 3,5-Dbp H H C 0 S H O EteO 1124 2308 3,5-Dbp H H C 0 - - - - - 0024 2309 3,5-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0124 2310 3,5-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0124 ( 2311 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1125 2312 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 Ete O 1125 2313 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0025 2314 3,4-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0125 2315 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0125 2316 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 25 2317 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 25 2318 Ph Ph Ph C O ----- O O 25 2319 Ph Ph Ph C O O Me O - - O 1 25 2320 Ph Ph Ph C O O Me S - - O 1 25
nro R2 R3 Z Y4 Y2 R4 Y3 X Y4 n in B
Taulukko 1 (jatkoa') 100 111265
Yhd.
2321 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1125 2322 3,5-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1125 2323 3,5-Dbp HHCO - - - - - 0025 2324 3,5-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0125 2325 3,5-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0125 2326 4-MeOPh 4-Me0Ph PhC 0 - - - - - 0017 ) 2327 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 17 2328 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 19 2329 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 20 2330 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 21 2331 4-MeOPh 4-MeOPh Ph G 0 - - - - - 0 O 22 2332 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 23 2333 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 24 2334 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 25 2335 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1126 2336 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1126 2337 3,4-Dbp H H C 0 - - '- - - 0026 2338 3,4-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0126 2339 3,4-Dbp H H C O O Me S - - 0126 ) 2340 3,4-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - O 1 26 2341 3,4-Dbp HHCO Mee H O - - O 1 26 2342 3,4-Dbp HHCO Mee H S - - O 1 26 2343 3,4-Dbp H H C O PheH O - - 0126 2344 3,4-Dbp H H C O NHPrO EteO 1126 2345 3,4-Dbp H H C O O Me NH Trim - 1 1 26 2346 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 26 2347 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 26 2348 Ph Ph Ph C O ----- O O 26
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa)
Tl 1265 101
nro R-l R2 R3 Z Υ3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
2349 Ph Ph Ph C 0 0 Me 0 - - 0 1 26 2350 Ph Ph Ph C 0 0 Me S - - 0 1 26 2351 Ph Ph Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 26 2352 Ph Ph Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 26 2353 Ph Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 26 ^ 2354 Ph Ph Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 26 2355 Ph Ph Ph C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 26 2356 Ph Ph Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 26 2357 3,5-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1126 2358 3,5-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1126 2359 3,5-Dbp H H C 0 - - - - - 0026 2360 3,5-Dbp H H C O O Me O - - 0126 2361 3,5-Dbp H H C O O Me S - - 0126 2362 3,5-Dbp H H C O O 2-ClPh O - - O 1 26 2363 3,5-Dbp H H C O Mee H O - - O 1 26 2364 3,5-Dbp H H C O Mee H S - - 0126 2365 3,5-Dbp H H C O Phe H O - - 0126 2366 3,5-Dbp H H C O NH Pr O Ete O 1126 ( 2367 3,5-Dbp H H C O O Me NH Trim - 1 1 26 2368 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O H O Ete O 1 1 26 2369 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O S H O Ete O 1 1 26 2370 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O - - - - - O O 26 2371 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me O - - 0126 2372 4-MeOPh 4-MeOPh PhC O O Me S - - 0126 2373 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O O 2-ClPh O - - O 1 26 2374 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H O - - O 1 26 2375 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Mee H S - - O 1 26 2376 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C O Phe H O - - O 1 26
nro Rj_ R2 R3 Z Y1 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 (jatkoa') 102 111265
Yhd.
2377 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 26 2378 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 26 2379 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 26 2380 4-MeOPh Ph Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 26 2381 4-MeOPh Ph Ph C 0 - - - - 0 0 26 2382 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me 0 - - 0 1 26 ) 2383 4-MeOPh Ph Ph C O 0 Me S - - 0 1 26 2384 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 26 2385 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 26 2386 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 26 2387 4-MeOPh Ph Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 26 2388 4-MeOPh Ph Ph C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 26 2389 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 26 2390 tBu Ph Ph Si 0 0 H 0 Ete 0 1 1 26 2391 tBu Ph Ph Si 0 S H 0 Ete 0 1 1 26 2392 tBu Ph Ph Si 0 - - - - - 0 0 26 2393 tBu Ph Ph Si 0 0 Me 0 - - 0 1 26 2394 tBu Ph Ph Si 0 0 Me S - - 0 1 26 2395 tBu Ph Ph Si 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 26 ) 2396 tBu Ph Ph Si 0 Mee H 0 - - 0 1 26 2397 tBu Ph Ph Si 0 Mee H S - - 0 1 26 2398 tBu Ph Ph Si 0 Phe H 0 - - 0 1 26 2399 tBu Ph Ph Si 0 NH Pr 0 Ete O 1 1 26 2400 tBu Ph Ph Si 0 0 Me NH Trim - 1 1 26 2401 Ph Ph Ph C S 0 H 0 Ete O 1 1 26 2401 Ph Ph Ph C S S H 0 Ete O 1 1 26 2403 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 26 2404 Ph Ph Ph C S 0 Me 0 - - 0 1 26
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
103
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 2405 Ph Ph Ph C S 0 Me S - - 0 1 26.
2406 Ph Ph Ph C S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 26 2407 Ph Ph Ph C S Mee H 0 - - 0 1 26 2408 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 1 26 2409 Ph Ph Ph C S Phe H 0 - - 0 1 26 2410 Ph Ph Ph C S NH Pr 0 Ete O 1 1 26 ^ 2411 Ph Ph Ph C S 0 Me NH Trim - 1126 2412 4-BzOPh H H C O O H O Ete O 1126 2413 4-BzOPh H H G O S H O Ete O 1126 2414 4-BzOPh H H C O - - - - - 0026 2415 4-BzOPh H H C O O Me O - - 0126 2416 4-BzOPh H H C O O Me S - - 0126 2417 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 1 26 2418 4-BzOPh H H C O Mee H O - - 0 1 26 2419 4-BzOPh H H C O Mee H S - - 0126 2420 4-BzOPh H H C O Phe H O - - 0126 2421 4-BzOPh H H C 0 NH Pr 0 Ete O 1126 2422 4-BzOPh H H C O O Me NH Trim - 1 1 26 ( 2423 Ph Xanthen-9-yl O O H O Ete O 1126 2424 Ph Xanthen-9-yl O S H O Ete O 1 1 26 2425 Ph Xanthen-9-yl O * - - - - 0 0 26 2426 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - 0 1 26 2427 Ph Xanthen-9-yl O O Me S - - 0 1 26 2428 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh 0 - - 0 1 26 2439 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 1 26 2430 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 1 26 2431 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 1 26 2432 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 26
nro Rx R2 R3 Z Y-l Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 (jatkoa') 104 111265
Yhd.
2433 Ph Xanthen-9-yl O O Me NH Trim - 1 1 26 2434 Ph Fluoren-9-yl 0 0 H O EteO 1126 2435 Ph Fluoren-9-yl O S H O EteO 1126 2436 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - O 0 26 2437 Ph Fluor en-9-yl 0 0 Me O - - O 1 26 2438 Ph Fluoren-9-yl O O Me S - - 0 1 26 ) 2439 Ph Fluoren-9 - yl O O 2-ClPh O - - O 1 26 2440 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 1 26 2441 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 126 2442 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 1 26 2443 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 26 2444 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 11 26 2445 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1127 2446 3,4-Dbp H H C 0 S H O Ete O 1127 2447 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0027 2448 3,4-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0127 2449 '3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0127 2450 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh O - - 0 1 27 2451 3,4-Dbp H H C 0 Mee H O - - 0 1 27 ) 2452 3,4-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0127 2453 3,4-Dbp H H C 0 Phe H O - - 0127 2454 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr O EteO 1127 2455 3,4-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 27 2456 Ph Ph Ph C 0 O H O Ete O 1 1 27 2457 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 27 2458 Ph Ph Ph C O ----- 0 0 27 2459 Ph Ph Ph C 0 O Me O - - 0 1 27 2460 Ph Ph Ph C 0 O Me S - - 0 1 27
Taulukko 1 (jatkoa)
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
105 111265 2461 Ph Ph Ph C 0 O 2-ClPh O - - 0 1 27 2462 Ph Ph Ph C 0 Mee H O - - 0 1 27 2463 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 1 27 2464 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 1 27 2465 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 27 ( 2466 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 27 2467 3,5-Dbp H H C 0 0 H O EteO 1127 2468 3,5-Dbp H H C 0 S H O EteO 1122 2469 3,5-Dbp H H C 0 - - - - - 0027 2470 3,5-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0127 2471 3,5-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0127 2472 3,5-Dbp H H C 0 0 2-ClPh O - - O 1 27 2473 3,5-Dbp H H C 0 Mee H O - - 0127 2474 3,5-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0127 2475 3,5-Dbp H H C 0 Phe H O - - 0127 2476 3,5-Dbp H H C 0 NH Pr O Ete 0 1 1 27 2477 3,5-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 27 2478 4-Me0Ph 4-Me0Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 27 C 2479 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 27 2480 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 27 2481 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 MeO - - 0 1 27 2482 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 Me S - - 0127 2483 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 27 2484 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 27 2485 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 1 27 2486 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 27 2487 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Nh Pr 0 Ete 0 1 1 27 2488 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 27
Taulukko 1 (’jatkoa)
nro Rx R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
106
Yhd.
2489 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 27 2490 4-MeOPh Ph Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 27 2491 4-MeOPh Ph Ph C 0 ----- 0 0 27 2492 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me 0 - - 0 1 27 2493 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me S - - 0 1 27 2494 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 27 ) 2495 4-MeOPh Ph Ph G 0 Mee H 0 - - 0 1 27
2496 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 2Z
2497 4-MeOPh Ph Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 27 2498 4-MeOPh Ph Ph C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 27 2499 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 27 2500 tBu Ph Ph Si 0 0 H 0 Ete 0 1 1 27 2501 tBu Ph Ph Si 0 S H 0 Ete 0 1 1 27 2502 tBu Ph Ph Si 0 - - - - - 0 0 27 2503 tBu Ph Ph Si 0 0 Me 0 - - 0 1 27 2504 tBu Ph Ph Si 0 0 Me S - - 0 1 27 2505 tBu Ph Ph Si 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 27 2506 tBu Ph Ph Si 0 Mee H 0 - - 0 1 27 2507 tBu Ph Ph Si 0 Mee H S - - 0 1 27 ) 2508 tBu Ph Ph Si 0 Phe H 0 - - 0 1 27 2509 tBu Ph Ph Si 0 NH Pr ' 0 Ete O 1 1 27 2510 tBu Ph Ph Si 0 0 Me NH Trim - 1 1 27 2511 Ph Ph Ph C S 0 H 0 Ete 0 1 1 27 2512 Ph Ph Ph C S S H 0 Ete 0 1 1 27 2513 Ph Ph Ph C S - - - - - 0 0 27 2514 Ph Ph Ph C S 0 Me 0 - - 0 1 27 2515 Ph Ph Ph C S 0 Me S - - 0 1 27 2516 Ph Ph Ph C S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 27
nro Rx R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 (jatkoa') 107 111265
Yhd.
2517 Ph Ph Ph C S Mee H 0 - - 0 1 27 2518 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 1 27 2519 Ph Ph Ph C S Phe H 0 - - 0 1 27 2520 Ph Ph Ph C S NH Pr 0 Ete O 1 1 27 2521 Ph Ph Ph C S 0 Me NH Trim - 1 1 27 ^ 2522 4-BzOPh H H C 0 O H O Ete O 1127 2523 4-BzOPh H H C 0 S H O EteO 1 1 27 2524 4-BzOPh H H C O - - - - - 0027 2525 4-BzOPh H H C O O Me O - - 0127 2526 4-BzOPh H H C O 0 Me S - - 0127 2527 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 1 27 2528 4-BzOPh H H C 0 Mee H O - - 0 1 27 2529 4-BzOPh H H C 0 Mee H S - - 0 1 27 2530 4-BzOPh H H C O Phe H O - - 0 1 27 2531 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete O 1127.
2532 4-BzOPh H H C O O Me NH Trim - 1 1 27 2533 Ph Xanthen-9-yl O O H O Ete O 1127 2534 Ph Xanthen-9-yl O S H O Ete O 1127 ( 2535 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 00 27 2536 Ph Xanthen-9-yl O 0 Me O - - 0 1 27 2537 Ph Xanthen-9-yl 0 O Me S - - 0 1 27 2538 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 27 2539 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 1 27 2540 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 1 27 2541 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 1 27 2542 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 22 2543 Ph Xanthen-9-yl O O Me NH Trim - 1 1 27 2544 Ph Fluoren-9-yl O O H O Ete 0 1 1 27
nro Rx R2 R3 Z Υχ Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
108 111265
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 2545 Ph Fluoren-9-yl 0 S H 0 Ete 0 1 1 27 2546 Ph Fluoren-9-yl 0 ..... 0 0 27 2547 Ph Fluoren-9-yl 0 0 MeO - - 01 27.
2548 Ph Fluoren-9-yl O 0 Me S - - 0 1 27 2549 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 27 2550 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 1 27 ^ 2551 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 1 27 2552 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 1 27 2553 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 27 2554 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 1 1 27 2555 3,4-Dbp H H C 0 0 H O EteO 1128 2556 3,4-Dbp H H C 0 S H O Ete 0 1 1 28 2557 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0028 2558 3,4-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0121 2559 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0128 2560 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh O - - 0 1 28 2561 3,4-Dbp H H C 0 Mee H O - - 0128 2562 3,4-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0 1 28 2563 3,4-Dbp H H C 0 Phe H 0 - - 0128 ) 2564 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr O EteO 1128 2565 3,4-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 28 2566 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 28 2567 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 28 2568 Ph Ph Ph C O - - - - - 0 0 28 2569 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 1 28 2570 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 1 28 2571 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 1 28 2572 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 28
Taulukko 1 (jatkoa')
nro R2 R3 Z Υχ Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
109
Yhd.
2573 Ph Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 28 2574 Ph Ph Ph C 0 Phe H O - - 0 1 28 2575 Ph Ph Ph C O NH Pr O Ete O 1 1 28 2576 Ph Ph Ph C O O Me NH Trim - 1 1 28 2577 3,5-Dbp H H C 0 0 H O EteO 1128 , 2578 3,5-Dbp H H C 0 S H O EteO 1128 2579 3,5-Dbp HHCO- - - - - 0028 2580 3,5-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0128 2581 3,5-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0128 2582 3,5-Dbp H H C 0 0 2-ClPh O - - 0 1 28 2583 3,5-Dbp H H C 0 Mee H O - - 0128 2584 3,5-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0128 2585 3,5-Dbp H H C 0 Phe H O - - 0128 2586. 3,5-Dbp H H C 0 NH Pr O EteO 1128 2587 3,5-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 28 2588 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 28 2589 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C · 0 S H 0 Ete 0 1 1 28 2590 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 28 ( 2591 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 MeO - - 0128.
2592 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 Me S - - 0128 2593 4-MeOPh 4-MeOPh PK C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 28 2594 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 28 2595 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 1 28 2596 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 28 2597 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Nh Pr 0 Ete 0 1 1 28 2598 4-MeOPh 4-MeOFh Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 28 2599 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 28 2600 4-MeOPh Ph Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 28
nro R4 R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 (-jatkoa) 110 111265
Yhd.
2601 4-MeOPh Ph Ph C 0 - - - - - 0 0 28 2602 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me 0 - - 0 1 28 2603 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me S - - 0 1 28 2604 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 28 2605 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 28 2606 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 28 ^ 2607 4-MeOPh Ph Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 28 2608 4-MeOPh Ph Ph C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 28 2609 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 28 2610 tBu Ph Ph Si 0 0 H 0 Ete 0 1 1 28 2611 tBu Ph Ph Si 0 S H 0 Ete 0 1 1 28 2612 tBu Ph Ph Si 0 - - - - - 0 0 28 2613 tBu Ph Ph Si 0 0 Me 0 - - 0 1 28 2614 tBu Ph Ph Si 0 0 Me S - - 0 1 28 2615 tBu Ph Ph Si 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 28 2616 tBu Ph Ph Si 0 Mee H 0 - - 0 1 28 2617 tBu Ph Ph Si 0 Mee H S - - 0 1 28 2618 tBu Ph Ph Si 0 Phe H 0 - - 0 1 28 2619 tBu Ph Ph Si 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 28 ) 2620 tBu Ph Ph Si 0 0 Me NH Trim 0 1 1 28 2621 Ph Ph Ph C S 0 H 0 Ete 0 1 1 28 2622 Ph Ph Ph C S S H 0 Ete 0 1 1 28 2623 Ph Ph Ph C S ----- 0 0 28 2624 Ph Ph Ph C S 0 Me 0 - - 0 1 28 2625 Ph Ph Ph C S 0 Me S - - 0 1 28 2626 Ph Ph Ph C S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 28 2627 Ph Ph Ph C S Mee H 0 - - 0 1 28 2628 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 1 28
nro R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 Π atkoai 111 111265
Yhd.
2629 Ph Ph Ph C S Phe H 0 - - 0 1 28 2630 Ph Ph Ph C S NH Pr 0 Ete O 1 1 28 2631 Ph Ph Ph C S 0 Me NH Trim - 1 1 28 2632 4-BzOPh H H C O O H O Ete O 1128 2633 4-BzOPh H H C °.S H O Ete O 1128 / 2634 4-BzOPh H H C O ----- 0 0 28 2635 4-BzOPh H HCOOMeO--0128 2636 4-BzOPh H HCOOMeS--0128 2637 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh O - - 0 1 28 2638 4-BzOPh H HCOMeeHO--0128 2639 4-BzOPh H H C O Mee H S - - 0 1 28 2640 4-BzOPh H H C O Phe H O - - 0128 2641 4-BzOPh H H C O NH Pr O Ete O 1128 2642 4-BzOPh H H C 0 O Me NH Trim - 1 1 28 2643 Ph Xanthen-9-yl O O H O Ete O 1 1 28 2644 Ph Xanthen-9-yl O S H O Ete O 1 1 28 2645 Ph Xanthen-9-yl O ----- 0 0 28 2646 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - 0 1 28 ( 2647 Ph Xanthen-9-yl O O Me S - - 0 1 28 2648 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh O - - O 1 28 2649 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 1 28 ' 2650 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 1 28 2651 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 1 28 2652 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 28 2653 Ph Xanthen-9-yl O O Me NH Trim - 1 1 28 2654 Ph Fluoren-9-yl O O H O Ete O 1128 2655 Ph Fluoren-9-yl O S H O Ete O 1128 2656 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 0 0 28
Taulukko 1 natkoal
nro R-l R2 R3 Z Y-j^ Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
112 111265
Yhd.
2657 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 0 1 28 2658 Ph Fluoren-9-yl O O me S - - 0128 2659 Ph Fluoren-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 28 2660 Ph Fluoren-9-yl O Mee H O - - 0 1 28.
2661 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 1 28 2662 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0128 ^ 2663 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 28.
2664 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 11 23.
2665 3,4-Dbp H H C 0 0 H O EteO 1129 2666 3,4-Dbp H H C 0 S H O Ete O 1 1 29 2667 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0029 2668 3,4-Dbp H H C O 0 Me O - - 0129 2669 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0129 2670 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh O - - 0 1 29 2671 3,4-Dbp H H C 0 Mee H O - - 0 1 29 2672 3,4-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0 1 29 2673 3,4-Dbp H H C 0 Phe H O - - 0129 2674 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr O Ete 0 1 1 29 2675 3,4-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1129 ) 2676 Ph Ph Ph C O O H O Ete O 1 1 29 2677 Ph Ph Ph C O S H O Ete O 1 1 29 2678 Ph Ph Ph C O ----- 0 0 29 2679 Ph Ph Ph C O O Me O - - 0 1 29 2680 Ph Ph Ph C O O Me S - - 0 1 29 2681 Ph Ph Ph C O O 2-ClPh O - - 0 1 29 2682 Ph Ph Ph C O Mee H O - - 0 1 29 2683 Ph Ph Ph C O Mee H S - - 0 1 29 2684 Ph Ph Ph C O Phe H O - - 0 1 29
nro R2 R3 Z Υ4 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
113 111265
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 2685 Ph Ph Ph C 0 NH Pr O Ete O 1 1 29 2686 Ph Ph Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 29 2687 3,5-Dbp H H C 0 0 H O EteO 1129 2688 3,5-Dbp H H C 0 S H O EteO 1129 2689 3,5-Dbp H H C 0,- - - - - 0029 , 2690 3,5-Dbp H H C 0 0 Me O - - 0129 2691 3,5-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0129 2692 3,5-Dbp H H C 0 0 2-ClPh O - - 0 1 29 2693 3,5-Dbp H H C 0 MeeH O - - 0129 2694 3,5-Dbp H H C 0 MeeH S - - 0129 2695 3,5-Dbp H H C 0 PheH O - - 0129 2696 3,5-Dbp H H C 0 NH Pr O EteO 1129 2697 3,5-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 29 2698 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 29 2699 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 29 2700 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 - - - - - 0 0 29 2701 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 MeO - - 0129 2702 4-MeOPh 4-MeOPh PhC 0 0 Me S - - 0129 ( 2703 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 29 2704 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 29 2705 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Mee H S - - 0 1 29 2706 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 29 2707 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 29 2708 4-MeOPh 4-MeOPh Ph C 0 0 Me MH Trim - 1 1 29 2709 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 H 0 Ete 0 1 1 29 2710 4-MeOPh Ph Ph C 0 S H 0 Ete 0 1 1 29 2711 4-MeOPh Ph Ph C O - - - - - O O 29 2712 4-MeOPh Ph Ph C O O Me O - - O 1 29
Taulukko 1 ('jatkoa')
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
114 111265
Yhd.
2713 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me S - - 0 1 29 2714 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 29 2715 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H 0 - - 0 1 29 2716 4-MeOPh Ph Ph C 0 Mee H S - - 0 1 29 2717 4-MeOPh Ph Ph C 0 Phe H 0 - - 0 1 29 2718 4-MeOPh Ph Ph G 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 29 ) 2719 4-MeOPh Ph Ph C 0 0 Me NH Trim - 1 1 29 2720 tBu Ph Ph Si 0 0 H 0 Ete 0 1 1 29 2721 tBu Ph Ph Si 0 S H 0 Ete 0 1 1 29 2722 tBu Ph Ph Si 0 - - - - - 0 0 29 2723 tBu Ph Ph Si 0 0 Me 0 - - 0 1 29 2724 tBu Ph Ph Si 0 0 Me S - - 0 1 29 2725 tBu Ph Ph Si 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 29 2726 tBu Ph Ph Si 0 Mee H 0 - - 0 1 29 2727 tBu Ph Ph Si 0 Mee H S - - 0 1 29 2728 tBu Ph Ph Si 0 Phe H 0 - - 0 1 29 2729 tBu Ph Ph Si 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 29 2730 tBu Ph Ph Si 0 0 Me NH Trim 0 1 1 29 2731 Ph Ph Ph C S 0 H 0 Ete 0 1 1 29 ) 2732 Ph Ph Ph C S S H 0 Ete 0 1 1 29 2733 Ph Ph Ph C S - - - - - 0 0 29 2734 Ph Ph Ph C S 0 Me 0 - - 0 1 29 2735 Ph Ph Ph C S 0 Me S - - 0 1 29 2736 Ph Ph Ph C S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 29 2737 Ph Ph Ph C S Mee H 0 - - 0 1 29 2738 Ph Ph Ph C S Mee H S - - 0 1 29 2739 Ph Ph Ph C S Phe H 0 - - 0 1 29 2740 Ph Ph Ph C S NH Pr 0 Ete 0 1 1 29
Taulukko 1 C i atkoa-)
nro Rx R2 R3 Z Yz Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
115 111265
Yhd.
2741 Ph Ph Ph C S 0 Me NH Trim - 1 1 29 2742 4-BzOPh H H C 0 0 H 0 EteO 1129 2743 4-BzOPh H H C 0 S H 0 EteO 1129 2744 4-BzOPh H H C 0 ----- 0 0 29 2745 4-BzOPh H H C O O Me O - - 0129 , 2746 4-BzOPh H H C 0 O Me S - - 0129 • 2747 4-BzOPh H H C O O 2-ClPh 0 - - 0 1 29 2748 4-BzOPh H H C O Mee H 0 - - 0 1 29 2749 4-BzOPh H H G O Mee H S - - 0 1 29 2750 4-BzOPh H H C 0 PheH O - - 0129 2751 4-BzOPh H H C O NH Pr O EteO 1129 2752 4-BzOPh H H C O O Me NH Trim - 1 1 29 2753 Ph Xanthen-9-yl O O H O EteO 1129 2754 Ph Xanthen-9-yl O S H 0 EteO 1129 2755 Ph Xanthen-9-yl O - - - - - 0 0 29 2756 Ph Xanthen-9-yl O O Me O - - 0 1 29 2757 Ph Xanthen-9-yl O O Me S - - 0 1 29 2758 Ph Xanthen-9-yl O O 2-ClPh O - - 0 1 29 ( 2759 Ph Xanthen-9-yl O Mee H O - - 0 1 29 2760 Ph Xanthen-9-yl O Mee H S - - 0 1 29 2761 Ph Xanthen-9-yl O Phe H O - - 0 1 29 2762 Ph Xanthen-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 29 2763 Ph Xanthen-9-yl O O Me NH Trim - 1 1 29 2764 Ph Fluoren-9-yl O O H O Ete O 1 1 29 2765 Ph Fluoren-9-yl 0 S H O Ete O 1129 2766 Ph Fluoren-9-yl O - - - - - 0 0 29 2767 Ph Fluoren-9-yl O O Me O - - 0 1 29 2768 Ph Fluoren-9-yl O O Me S - - 0 1 29
nro Rx R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
116 111265
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 2769 Ph Fluoren-9-yl 0 O 2-ClPh 0 - - 0 1 29 2770 Ph Fluoren-9-yl 0 Mee H 0 - - 0 1 29 2771 Ph Fluoren-9-yl O Mee H S - - 0 129 2772 Ph Fluoren-9-yl O Phe H O - - 0 1 29 2773 Ph Fluoren-9-yl O NH Pr O Ete O 1 1 29 2774 Ph Fluoren-9-yl O O Me NH Trim - 1 1 29 ^ 2775 3,4-Dbp H H C S 0 H 0 EteO 111 2776 3,4-Dbp H H C S S H 0 Ete O 111 2777 3,4-Dbp H H C S - - - - - 001 2778 3,4-Dbp H H C S 0 MeO - - Oli 2779 3,4-Dbp H H C S O Me S - - 011 2780 3,4-Dbp H H C S 0 2-ClPh 0 - - 0 11 2781 3,4-Dbp H H C S Mee H 0 - - Oli 2782 3,4-Dbp H H C S Mee H S - - 011 2783 3,4-Dbp H H C S Phe H 0 - - Oli 2784 3,4-Dbp H H C S NH Pr 0 EteO 111 2785 3,4-Dbp H H C S 0 Me MH Trim - 111 2786 9-Ant H H C S O H 0 Ete 0 111 2787 9-Ant H H C S S H 0 Ete 0 111 ) 2788 9-Ant H H C S - - - - - 001 2789 9-Ant H H C S 0 MeO - - 011 2790 9-Ant H H C S 0 Me S - - 011 2791 9-Ant H H C S 0 2-ClPh 0 - - 0 11 2792 9-Ant H H C S Mee H 0 - - 011 2793 9-Ant H H G S Mee H S - - 0 11 2794 9-Ant H H C S Phe H 0 - - 011 2795 9-Ant H H C S NH Pr 0 Ete 0 111 2796 9-Ant H H C S 0 Me NH Trim - 111
nro Ri R2 r3 z yi Y2 r4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 Hatkoal 117 111265
Yhd.
2797 2-Npe H H C S 0 H 0 Ete 0 111 2798 2-Npe H H C S S H 0 Ete 0 111 2799 2-Npe H H C S.....001 2800 2-Npe H H C S 0 MeO - - 011 2801 2-Npe H H C S 0 Me S - - Oli / 2802 2-Npe H H C S 0 2-ClPh 0 - - 0 11 2803 2-Npe H H C S MeeH 0 - - 011 2804 2-Npe H H C S MeeH S - - Oli 2805 2-Npe H H C S PheH 0 - - 011 2806 2-Npe H H C S NHPrO EteO 111 2807 2-Npe H H C S O Me NH Trim - 111 2808 Bdbbp H H C S O H O Ete O 111 2809 Bdbbp H H C S S H O Ete O 111 2810 Bdbbp H H C S - - - - - 001 2811 Bdbbp H H C S O Me O - - Oli 2812 Bdbbp H H C S O Me S - - Oli 2813 Bdbbp H H C S O 2-ClPh O - - Oli 2814 Bdbbp H H C S MeeH O - - Oli ( 2815 Bdbbp H H C S MeeH S - - Oli 2816 Bdbbp H H C S PheH O - - Oli 2817 Bdbbp H H C S NHPrO Ete'0 111 2818 Bdbbp H H C S O Me NH Trim - 111 2819 3,4-Dbp H H C S O H O Ete O 1128 2820 3,4-Dbp H H C S S H O Ete O 1128 2821 3,4-Dbp H H C S - - - - - 0028 2822 3,4-Dbp H H C S O Me O - - 0128 2823 3,4- Dbp H H C S O Me S - - 0128 2924 3,4-Dbp H H C S O 2-ClPh O - - O 1 28
nro Rx R2 R3 Z Υχ Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
Taulukko 1 (jatkoa') 118 111265
Yhd.
2825 3,4-Dbp H H C S Mee H 0 - - 0 1 28 2826 3,4-Dbp H H C S Mee H S - - 0128 2827 3,4-Dbp H H C S PheH 0 - - 0128 2828 3,4-Dbp H H C S NHPrO EteO 1128 2829 3,4-Dbp H H C S O Me MH Trim - 1 1 28 2830 9-Ant H H C S 0 H 0 EteO 1128 ^ 2831 9-Ant H H C S S H 0 Ete 0 1 1 28 2832 9-Ant H H C S - - - - - 0028 2833 9-Ant H H C S 0 MeO - - 0128 2834 9-Ant H H C S 0 Me S - - 0128 2835 9-Ant H H C S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 28 2836 9-Ant H H C S Mee H 0 - - 0 1 28 2837 9-Ant H H C S Mee H S - - 0128 2838 9-Ant H H C S PheH 0 - - 0128 2839 9-Ant H H C S NH Pr 0 Ete 0 1 1 28 2840 9-Ant H H C S 0 Me NH Trim - 1 1 28 2841 2-Npe H H C S O H 0 EteO 1128 2842 2-Npe H H C S S H 0 Ete 0 1 1 28 2843 2-Npe HHCS - - - - - 0028) 2844 2-Npe H H C S 0 MeO - - 0128 2845 2-Npe H H C S 0 Me S - - 0128 2846 2-Npe H H C S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 28 2847 2-Npe HHCS Mee H 0 - - 0 1 28 2848 2-Npe HHCS Mee H S - - 0 1 28 2849 2-Npe H H C S PheH 0 - - 0128 2850 2-Npe H H C S NH Pr 0 Ete 0 1 1 28 2851 2-Npe H H C S 0 Me NH Trim - 1 1 28 2852 Bdbbp H H C S 0 H 0 EteO 1128
Taulukko 1 (-jatkoa)
nro Rj_ R2 R3 Z Yx Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
119 111265
Yhd.
2853 Bdbbp H H C S S H 0 EteO 1128 2854 Bdbbp H H C S - - - - - 0028 2855 Bdbbp H H C S 0 MeO - - 0128 2856 Bdbbp H H C S 0 Me S - - 0128 2857 Bdbbp H H C S O 2-ClPh 0 - - 0 1 28 ^ 2858 Bdbbp H H C S MeeH 0 - - 0128 2859 Bdbbp H H C S Mee H S - - 0 1 28 2860 Bdbbp H H C S PheH 0 - - 0128 2861 Bdbbp H H C S NH Pr 0 Ete 0 1 1 28 2862 Bdbbp H H C S 0 Me NH Trim - 1 1 28 2863 3,4-Dbp H H C S 0 H 0 EteO 1129 2864 3,4-Dbp H H C S S H 0 EteO 1129 2865 3,4-Dbp H H C S - - - - - 0029 2866 3,4-Dbp H H C S 0 MeO - - 0129 2867 3,4-Dbp H H C S 0 Me S - - 0129 2868 3,4-Dbp H H G S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 29 2869 3,4-Dbp H H C S Mee H 0 - - 0129 2870 3,4-Dbp H H C S Mee H S - - 0 1 29 ( 2871 3,4-Dbp H H C S PheH 0 - - 0129 2872 3,4-Dbp H H C S NH Pr 0 EteO 1129' 2873 3,4-Dbp H H C S 0 Me MH Trim - 1 1 29 2874 9-Ant H H C S 0 H 0 EteO 1129 2875 9-Ant H H C S S H 0 Ete 0 1 1 29 2876 9-Ant H H C S - - - - - 0029 2877 9-Ant H H C S 0 MeO - - 0129 2878 9-Ant H H C S 0 Me S - - 0129 2879 9-Ant H H C S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 29 2880 9-Ant H H C S Mee H 0 - - 0129
nro Rx R2 R3 Z Y1 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
120 111265
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 2881 9-Ant H H C S Mee H S - - 0 1 29 2882 9-Ant H H C S PheH 0 - - 0129 2883 9-Ant H H C S NHPrO EteO 1129 2884 9-Ant H H C S 0 Me NH Trim - 1 1 29 2885 2-Npe H H C S 0 H 0 EteO 1 1 29 2886 2-Npe H H C S S H 0 EteO 1129 ) 2887 2-Npe H H C S - - - - - 0029 2888 2-Npe H H C S 0 MeO - - 0129 2889 2-Npe H H C S 0 Me S - - 0129 2890 2-Npe H H C S 0 2-ClPh 0 - - 0 1 29 2891 2-Npe H H C S Mee H 0 - - 0 1 29 2892 2-Npe H H C S Mee H S - - 0 1 29 2893 2-Npe H H C S PheH 0 - - 0129 2894 2-Npe H H C S NH Pr 0 Ete 0 1 1 29 2895 2-Npe H H C S 0 Me NH Trim - 1 1 29 2896 Bdbbp H H C S 0 H 0 EteO 1129 2897 Bdbbp H H C S S H 0 EteO 1129' 2898 Bdbbp H H C S - - - - - 0029 2899 Bdbbp H H C S 0 MeO - - 0129 ) 2900 Bdbbp H H C S 0 Me S - - 0129 2901 Bdbbp H H C S 0 2-ClPh 0 - - O 1 29 2902 Bdbbp H H C S Mee H 0 - - 0 1 29 2903 Bdbbp H H C S Mee H S - - 0 1 29 2904 Bdbbp H H C S PheH 0 - - 0129 2905 Bdbbp H H C S NHPrO EteO 1129 2906 Bdbbp H H C S O Me NH Trim - 1 1 29
Taulukko 1 (iatkoal 121 111265
Yhd.
nro Rx R2 R3 Z Y4 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
2907 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1130 2908 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1130 2909 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0030 2910 3,4-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0130 2911 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0130 ( 2912 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 30 2913 3,4-Dbp H H C 0 MeeH 0 - - 0130 2914 3,4-Dbp H H C 0 MeeH S - - 0130 2915 3,4-Dbp H H C 0 Phe H 0 - - 0130 2916 3,4-Dbp H H C 0 NHPrO EteO 1130 2917 3,4-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 30 2918 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1131 2919 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 EteO 1131 2920 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0031 2921 3,4-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0131 2922 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0131 2923 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 31 2924 3,4-Dbp H H C 0 MeeH 0 - - 0131 ( 2925 3,4-Dbp H H C 0 Mee H S - - 0 1 31 - 2926 3,4-Dbp H H C 0 PheH 0 - - 0131 2927 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 31 2928 3,4-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 31 2929 3,4-Dbp H H C 0 0 H 0 EteO 1132 2930 3,4-Dbp H H C 0 S H 0 Ete 0 1 1 32 2931 3,4-Dbp H H C 0 - - - - - 0032 2932 3,4-Dbp H H C 0 0 MeO - - 0132
nro Rx R2 R3 Z Y3 Y2 R4 Y3 X Y4 n m B
122 111265
Yhd.
Taulukko 1 (jatkoa) 2933 3,4-Dbp H H C 0 0 Me S - - 0132 2934 3,4-Dbp H H C 0 0 2-ClPh 0 - - 0 1 32 2935 3,4-Dbp H H C 0 MeeH 0 - - 0132 2936 3,4-Dbp H H C 0 MeeH S - - 0132 2937 3,4-Dbp H H C 0 Phe H 0 - - 0132 2938 3,4-Dbp H H C 0 NH Pr 0 Ete 0 1 1 32 ) 2939 3,4-Dbp H H C 0 0 Me NH Trim - 1 1 32 ) 111265 123
Edellä luetelluista yhdisteistä edullisia yhdisteitä ovat yhdisteet nrot 1—440, 454, 476, 586, 696, 806, 916, 1026, 1136, 1246, 1356, 1466, 1576, 1686, 1763, 1773, 1793, 1979, 1980, 1990-1994, 2250 ja 2326-2906.
5 Edullisempia yhdisteitä ovat yhdisteet nrot 1—110, 113, 221—330, 333, 454, 1763, 1773, 1793, 1979, 1980, 1990-1994, 2250 ja 2334—2906.
Edullisimmat yhdisteet ovat yhdisteet nrot 1, 2, 3, 4, 12, 13, 14, 15, 2555, 2556, 2557, 2558, 2566, 2567, 2568, 2569, 2665, 2666, 2667, 2668, 2676, , 10 2677, 2678 ja 2679.
( Tämän keksinnön yhdisteet voivat olla suolojen muodossa, varsinkin farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen muodossa kationeiden kanssa. Esimerkkejä sopivista suoloista ovat epäorgaaniset tai orgaaniset suolat, esim. alkaalimetallien, kuten natriumin tai 15 kaliumin kanssa, maa-alkaalimetallien kuten kalisumin kanssa; ammoniakki; emäksiset aminohapot kuten lysiini tai arginiini; ja alkyyliamiinit kuten trietyyliamiini. Edulliset suolat ovat alkaalimetallisuoloja kuten natrium- tai kaliumsuoloja.
Muutamia menetelmiä esillä olevan keksinnön yhdisteiden valmistamiseksi kuvataan 20 seuraavilla reaktiokaavioilla.
(
Yleisesti ottaen yleisen kaavan (1) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa kondensoi-malla sopivasti derivatisoitu nukleotidi, joka on halutun yhdisteen 5’-päädyn nukleotidi, suojatun oligonukleotidin kanssa, josta puuttuu 5’-päädyn nukleotidi, jolloin 25 puuttuvan oligonukleotidin nukleotidit antavat yhdessä mainitun 5’-päädyn nukleotidin kanssa halutun oligodeoksiribonukleotidi-yhdisteen sopivan nukleotidisaqan, suojatun puutteellisen nukleotidin ollessa sidottu polymeeritukeen. Tyypillisesti prosessiin kuuluu se, että annetaan yhdisteen R^R^R-^Z.Y^-pääty nukleotidin] reagoida yhdisteen kanssa, joka on [suoja]-puuttuva oligonukleotidi]-sitoja-polymeeri. 30
Konkreettisemmin esillä olevalla keksinnöllä saadaan menetelmä, jossa kondensoi-daan seuraavan kaavan (2) mukainen yhdiste, kaavan [suoja]-OFW kaltaisen yhdis- 111265 124 teen kanssa, jossa F on puuttuva oligonukleotidi ja V on sitoja ja polymeerituki. Käyttämällä DMT:tä suojayhdisteenä, esimerkkejä yhdisteistä, jotka reagoivat yhdisteen (2) kanssa ovat seuraavien kaavojen mukaiset yhdisteet: DMT-0-F-Wj (3), DMT-0-F-W2a (4a), DMT-0-F-W25 (4b), DMT-O-F-W3 (5), DMT-0-F-W4a (6a), 5 DMT-0-F-W4b (6b), DMT-0-F-W^ (6c), DMT-0-F-W^ (6d), DMT-0-F-W5a (7a) ja DMT-0-F-W5b (7b), menetelmän C-l, C-2 tai C-3 mukaisesti. Reaktanssi 2, jota käytetään tässä reaktiossa, voidaan sopivasti valmistaa menetelmällä A-l tai A-2 ja reaktanssit (3, 4a, 4b, 5, 6a—6d, 7a ja 7b) voidaan helposti valmistaa menetelmällä Bl-, B-2, B-3, B-4 tai B-5.
10 ) R, Q.
R,z-v,p
HO
a) )
Menetelmä A-l 125 111265 HYl^\| Vaihel AiY^O^ HO (2-1) HO (2-2)
Step 2
^ ν*^3 A1Yi-|^nJ
A20 (2-4) A20 (2-3) \ H,
Vaihe 4 R2-Z-Hal R3 (2-5) R1 D*
Ra-Z-Yi-j 0 | < - p A20 2 (2-6)
Vaihe 5 R1 D* ”-rp
HO
(2)
Menetelmä A-2 126 111265
HYi-^D
HO (2-1)
Ri )
Vaihe 6 «*?·«·* R3 (2-5) R1 D* R’tv'p
(2) HO
r )
Menetelmä B-l 127 111265
CCCH2CH2CNH
( 0 0 (3-1)
Vaihe 7 DNA-synteesin vaiheet DNA-syntetisoijalla 0MT*O-F-W1 (3) (
Menetelmä B-2 128 111265
HOOWCH\ OH - DMTOCHV CH\ OH —- DMT-OCH2/ CH\ OCCH2CH2COOH
'E'> Vaihe 8 \ E /, Vaihe 9 \E i O
/(4-3) „2N~^ceS> (4-4) DMT-OCH^ Crij OCCH2CH2f NH-'—.
(4-5)
Vaihe 11 DWT-O-F-Wa, -- HOCH2/ CH\ OCCHaCHaCNH——
Vaihe 12 \E / O O
(4-a) 1 (4-6)
Vaihe 13 DMT-O, O?" | s _ - O-P-O-CH5/ prt\ O^CH2CH2£NH-~-'-^-£CH&>
V \E /, O O
(4-7)
Vaihe 14 DMT-OF-VVa, (4-b)
Menetelmä B-3 129 111265 HOCH2/ CH\ Of CH2CH2f
Vh /, o o (5.1) DMT-0-κθΤ
Vaihe 15 \_f (5-2) 9 ( O-P-O*
H
our-o^j O-P-OCH2/ CH\ OCCHjCHifNH^*^^^5
H \E /, o O
(5-3)
Vaihe 16
DMT-ΟγΟJ
o—p—qch2/ ch\ occ^c^fNH----- NHR4 Ve /, o o (5-4)
Vaihe 17 dmt-o-f-w3 (5) „v 130 111265
Menetelmä B-4 c!'p " u y H(OCH2CHjJeOH - OMT-(OCHjCH2)sOH -- OMr-(OCH2CH:),-C·? (6-1) Vaihe 18 m) Vaihe 19 (6->)
Vaihe 20 DMT.{OCH2CH2)eOOCCH2CH2COOH (6-4)
Vaihe 21 Nh2 (6'5) )
OMT*(OCHjCH2)4OOCCH2CH2CONH
(6*6)
Vaihe 22
DMT-0-F*W4a - .....H-(OCHjCH2),OOCCH2CHjCONH
(6a) Vaihe 23 (5.7) (6-3)
Vaihe 24 9 'CpH}
DMT*(OCH2CH2)<OP*(OCHjCH2)4OOCCHjCH2CONH
V (6-8)
Vaihe 25 9 _ .)
DICr-04*»W£ ·"* ---H(OCH2CH2)4OP-{OCHjCHj)*OOCCH2CH2CONH
(6b) ' Vaihe 26 v (6-9)
Vaihe 27 <6*3)
f O
DMT-0-F-W4C "--H (OCH2CH2)4OP* (OCH2CHj)jOOCCH2CH2CONH -— (6c) 4 Vaihe 28 V 2 (6-10)
Vaihe 29 (<S‘33
O
OMT-O-F-W.d -1 — H (OCH2CH2,.OP- (0CH2CH2)400CCH2CH2CCNH
- Vaihe 30 v J
(6d) v (6-11)
Menetelmä B-5 131 111265 0
4 V
DMT*OCHjCHjSCHjCHjO-P ^ 1 (7-1)
hoVN
Vaihe 31 \_/ (7'2) OCCH.CH.CNH ------ < * * a
O O
( ^ 9 o" V OMT-OCHjCHjSCHjCHjO-P-Ο-ι,Ο^
Α σ-3) ’ \J
OCCHjCHjCNH
I * * II
/ \ O O
OMT-O-j^oJ* / \ D"
W / \ DMT*°vN
^ i-' / Vaihe 34 Vaihe 32 \ \ / O / \. I- (7-6)
Il / \ O · ο»Ρ-η,/ \ ^
O* / \ U
( OMWJyoT 0MT-°Y°\j 19 ? 9
O-p.R, ^ O O-p-OCHjCHjSCHjCHjOP-V
(7.5) OCHjCHjSCHjCHjOP-V 0- * i °y°x!
° ™ H
|-' OCCHjCHjCNH ~~C?G)
OCCHjCHjCNH ~<ςρ£) O O
O O
Vaihe 35 Vaihe 33 OMT-a-F-Wjij DMT*0*f=>W,a (7b) a»)
Menetelmä C-l 132 111265
Ri D* (2i_- ^-?-Y<y°sl
Vaihe 36 \ J
9 (8) V-P-U )
Vaihe 37 DMT-O-F-W-j (3) W5 (7a-b)
R, f O
Ra-Z-Y,— B-21o-P-Y3-(X-Y4)n H
Ra *-Y2-R4 d) )
Menetelmä C-2 133 111265
Rl D* (2)--Rj-Ζ-Υ,-,Α
Vaihe 38 R3 Γ 7 0 (9)
"O “* P O
( V
Vaihe 39 DMT-0-F-W, O) W5 (7a-b)
R, fO
R2"Z-Yi—Ξ—Β~0·-Ρ-Υ3-(ΧΎ4)η H Ra ‘Y2-R4 m (1) (
Menetelmä C-3 134 111265
Rl D* ra-- r2-z-y,-t,o
Vaihe 40 R3 \ ^ Q (10)
'0 “ P: O
H ) DMT-0-F-W, (3)
Vaihe 41 ^ W5 (7a~ b) R, ΓΟ
R2-Z-Yr-5lB^o..g.Y3.(x.Y4)n H
‘•Y’a-Ri
(D
) 111265 135
Yleisen kaavan (2) erilaisissa yhdisteissä Rj, R2, R3, Y, X ja Z on määritelty kuten mainitulle yleiselle kaavalle (1); D’ on emäs, joka on valittu seuraavasta "5’-emäs-ryhmästä" tai vastaavasta suojamsta emäksestä, emäksen ollessa emäs mainitun vaikuttavan emässekvenssin 5-päätyosassa (tämän jälkeen sanotaan 5’-päätyosuus 5 vaikuttavassa mainitussa emässekvenssissä tai yksinkertaisesti 5’-päätyemäs), jossa 5’-emäsryhmä on adeniini, guaniini, sytosiini, tyrniini tai 5-metyylisytosiini.
Menetelmässä B-l valmistetaan kaavan (3) mukainen yhdiste, josta puuttuu yksi nukleotidifragmentti mainitun vaikuttavan sekvenssin 5’-päädystä, syntetisoidaan . 10 käyttämällä säädettyä huokoslasia (tämän jälkeen sanotaan CPG), joka käsittää sitojan, joka on sidottu suojattuun nukleosidiin, jota voidaan käyttää mainitun vaikuttavan emässekvenssin 3 ’-päätyosuuden DNA-synteesiin (tämän jälkeen sanotaan 3’-pääty nukleotidi) ja nukleotidiyksikköä, joka on kaupallistettu DNA-syntetisoijalle (tämän jälkeen sanotaan nukleotidiyksikkö).
15
Menetelmässä B-2 valmistetaan kaavan (4a) mukainen yhdiste, jolla on lyhyt nukleotidifragmentti mainitun vaikuttavan sekvenssin 5’-päädyssä, joka sekvenssi on syntetisoitu suojaamalla C2-C10-alkyleenidiolin yksi päätehydroksyyliryhmä, jolla on hydroksyyliryhmiä alkyleenidiolin pääteasemissa, joilla on suojattuja hydroksyyli- tai 20 aminoryhmiä dimetoksitrityyli-DMT-ryhmällä, antamalla toisen hydroksyyliryhmän ^ reagoida sukkiinianhydridin kanssa sukkiinihappomonoesterin tuottamiseksi, sitomalla monoesterin karboksyyliryhmä CPG:hen, poistamalla pääte-DMT-ryhmä ja lopulta antamalla nukleotidiyksikön reagoida CPG-sidotun alkyleenialkoholin kanssa (4-6) säännöllisessä sekvenssissä DNA:n syntetisoijassa; ja yhdisteen IVb valmistus 25 muuttamalla CPG-sidottu alkyleenialkoholi (4-6) 3’-pääty nukleosidifosfortioaatiksi, jota tukee CPG-47 tavanomaisella tavalla käytettynä tioaattinukleotidin valmistamiseen DNA-syntetisoijalla ja sitten antamalla nukleotidiyksikön reagoida samalla tavalla kuin edellä.
30 Menetelmään B-3 kuuluu kaavan (5) mukaisen yhdisteen valmistus, jolla on yksi nukleotidin lyhyt fragmentti mainitun vaikuttavan sekvenssin 5’-päädystä, joka on syntetisoitu kondensoimalla 3’-päädyn nukleosidifosfonaatti, joka on valmistettu 111265 136 antamalla hydroksyyliryhmän 3’-pääty nukleotidin 3’-asemassa reagoida fosfonihapon kanssa esterisidoksen muodostamiseksi, CPG-sidotulla etyleeniglykolilla (5-1), joka on valmistettu käyttämällä sukkiinianhydridiä menetelmässä B-2, antamalla alkyy-liamiinin reagoida 3’-päätynukleotidin fosforiamidiitin valmistamiseksi, jota tukee 5 CPG-54 ja lopuksi antamalla nukleotidiyksikön reagoida säännöllisessä sekvenssissä DNA-syntetisoijalla.
Menetelmään B-4 liittyy tunnetun yhdisteen (6-3) [M. Durand et ai., Nucleic Acids Res., 18, 6353 (1990)] valmistammen suojaamalla yksi hydroksyyliryhmä heksaety-10 leeniglykolissa DMT-ryhmällä ja antamalla toisen hydroksyyliryhmän reagoida .
reagenssin kanssa fosforiamidiittiryhmän valmistamiseksi.
Sen jälkeen samalla tavalla kuin on kuvattu menetelmällä B-3, CPG-sidottu DMT-suojattu glykoli (66) voidaan valmistaa kondensoimalla mainittu heksaety-15 leeniglykoli, joka on suojattu DMT-ryhmällä (6-2) CPG:ksi käyttämällä sukkiinihap-poa.
DMT-ryhmän poistamisen jälkeen CPG-sidotusta DMT-suojaavasta glykolista (6-6) DNA-syntetisoijalla, glykolin annetaan reagoida nukleotidiyksikön kanssa halutun 20 yhdisteen (6a) saamiseksi, jolla on yksi nukleotidin lyhyt fragmentti 5’-päädystä mainitussa syntetisoidussa sekvenssissä. Glykolin, joka on tuettu CPGrllä, joka on ^ saatu poistamalla DMT-ryhmä CPG-sidotusta DMT-suojatusta glykolista (66) DNA-syntetisoijalla, annetaan reagoida kerran, kaksi kertaa tai kolme kertaa mainitun fosforiamidiitin kanssa ja sen jälkeen antamalla reagoida nukleotidiyksikön 25 kanssa, joka käsittää yhden nukleotidin lyhyen fragmentin 5’-päädystä mainitussa vaikuttavassa emässekvenssissä kaavojen (6b), (6c) tai (8d) mukaisen yhdisteen tuottamiseksi.
Menetelmässä B-5 valmistetaan yhdisteen (7-3) mukainen yhdiste poistamalla suoja 30 DMT-ryhmästä kaupallisesti saatavilla olevasta suojatusta 2’-deoksinukleotidistä, jota tukee CPG sitojan kautta (tämän jälkeen kutsutaan D'"-CPG) ja antamalla sen reagoida (2-syanoetoksi)-2-(2’-0-4,4’-dimetoksitrityylioksietyylisulfonyyli)etoksi- •111265 137 N,N-di-isopropyyliaminofosfiinin (7-1) kanssa, jonka on esittänyt T. Horn et ai., Tetrahedron Letters, 27, 4705 (1986); yhdisteen (7-5) valmistus poistamalla suoja DMT-ryhmästä yhdisteestä (7-3), joka on valmistettu kuten edellä ja kondensoimalla yhdiste, josta suoja on poistettu yhdisteen (C-4) kanssa, jossa on aryyli- tai alkyyli-5 fosfaatti hydroksyyliryhmässä nukleotidin 3’-asemassa 3’-päädyssä käyttämällä kondensointiainetta; ja valmistetaan kaavan (7a) mukainen yhdiste antamalla yhdisteen (7-5), joka on valmistettu kuten edellä, reagoida nukleotidiyksikön kanssa, joka sisältää yhden nukleotidin lyhyen fragmentin mainitun vaikuttavan syntetisoidun sekvenssin 5’-päädystä.
10 ' Samalla tavalla voidaan valmistaa yhdiste (7-7) antamalla yhdisteen (7-3), joka on vapautettu DNT-ryhmästä, reagoida yhdisteen (7-6) kanssa, jolla on alkyyli- tai aryylifosforamidiittiryhmä nukleotidin 3’-asemassa 3’-päädyssä ja käsittelemällä samalla tavalla kuin fosforihappotriesterin tai fosforitioaattitriesterin synteesissä 15 DNA-syntetisoijalla. Siten saadun tuotteen annetaan reagoida nukleotidiyksikön kanssa säännöllisessä sekvenssissä yhdisteen (7a) tuottamiseksi, jolla on yksi nukleotidin lyhyt fragmentti 5’-päädyssä mainitussa vaikuttavassa emässekvenssissä.
Menetelmässä C-l valmistetaan yleisen kaavan (1) haluttu yhdiste antamalla yhdis-20 teen (2) reagoida fosfityloivan aineen kanssa 3’-fosfiitin johdannaisen (9) valmistami- ^ seksi, antamalla näin saadun tuotteen reagoida jokaisen kaavan (3, 4a, 4b, 5, 6a—6d, 7a ja 7b)) oligomeerin kanssa, joka on tuettu CPG:llä, joka on valmistettu menetelmissä B1-B5, kun DNT-ryhmän 4-suoja on poistettu, hapettamalla kondensoitu tuote hapetusaineella halkaisemalla nukleotidiketju CPG:stä ja lopuksi poistamalla suoja-25 ryhmä paitsi substituenttiosuus, joka on sidottu hiiliatomiin 5’-päätynukleotidin 5’-asemassa.
Menetelmässä C-2 valmistetaan haluttu kaavan (1) mukainen yhdiste antamalla yhdisteen (2) reagoida fosforylointiaineen kanssa 3’-fosforihappojohdannaisen 30 tuottamiseksi, kondensoidaan tuote mainitun yhdisteen kanssa kukin kaavaa: (3, 4a, 4b, 5, 6a—6d, 7a ja 7b), kun DNT-ryhmästä on poistettu suoja yksinomaan fosfori-happotriesterisidoksen muodostamiseksi, halkaistaan nukleotidiketju CPGrstä, pois- 111265 138 tetaan suojaryhmä paitsi substituenttiosuus, joka on sidottu hiiliatomiin 5’-päädyssä nukleotidin 5’-asemassa; ja lopuksi puhdistetaan tavanomaisin keinoin.
Menetelmässä C-3 on haluttu yhdiste (1) saatu sisällyttämällä fosfonihapporyhmä 5 yhdisteen (2) 3’-asemaan yhdisteen (10) tuottamiseksi, kondensoidaan tuote mainitulla yhdisteellä kukin kaavaa: (3, 4a, 4b, 5, 6a—6d, 7a ja 7b) käyttämällä happohalidia emäksen läsnäollessa, hapetetaan kondensoitu tuote hapetusaineella fosforihappodies-terisidoksen muodostamiseksi, halkaistaan nukleotidi CPGrstä, poistetaan suojaryhmä paitsi substituenttiosuus, joka on sidottu hiiliatomiin 5’-pääty nukleotidin 5’-ase-10 massa; ja lopuksi puhdistetaan tavanomaisin keinoin.
Menetelmät A—C selitetään yksityiskohtaisemmin seuraavassa.
Reaktiokaavioissa, joista on yhteenveto menetelmissä A-C Rj , R2, R3, R4, Z, Yj, 15 Y2, Y3, Y4, X, n. m ja B ovat kuten on määritelty edellä; Aj on trityyli- (Tr) ryhmä, monometoksitrityyli- (MMT) ryhmä tai dimetoksitrityyli- (DMT) ryhmä, jota yleisesti käytetään suojaamaan erityistä nukleotidin primääristä hydroksyyliryhmää; ja A2 on tri-substituoitu silyyliryhmä, kuten esimerkiksi tert-butyylidimetyylisilyyli-(TBDMS) tai tri-isopropyylisilyyli- (TIPS) ryhmä; trihalogeenietoksikarbonyyliryh-20 mä, kuten esimerkiksi trikloorietoksikarbonyyli- (Troc) ryhmä; tai aralkyylioksikar- bonyyliryhmä, kuten esimerkiksi bentsyylioksikarbonyyli- (Z) ryhmä. ^ D’ on 5’-päätynukleotidin emäs, jonka aminoryhmä on suojattu asyyliryhmällä mainitun vaikuttavan emässekvenssin DNA:n syntetisoimiseksi; 25 D" on 3’-päädyn nukleotidin emäsosuus; ja D"’ on valinnaisen nukleotidin emäs, jota käytetään DNA-synteesissä, ts. emäs, joka on valittu 5’-emäsryhmästä tai vastaavasta suojaemäksestä.
30 F on oligonukleotidiosa, jolla on nukleotidin lyhyt fragmentti mainitun vaikuttavan sekvenssin 5’-päädystä ja on vastaavan oligonukleotidin emäsosa, joka on suojattu fosforihappo-osan suojaryhmällä, jota yleisesti käytetään DNA-synteesiin, mutta joka 111265 139 ei sisällä mitään hydroksyyliryhmää nukleotidin 5’-päädyn 5’-asemassa ja nukleotidin 3’-päädyn 3’-asemassa. V on fosforihappo-osan suojaryhmä DNA-synteesin tapauksessa. U on amidiittiosan aminoryhmä, WrW5 on CPG:n fragmentti hydroksyy-liryhmän happiatomiin oligonukleotidi F:n 3’-pääty nukleotidin 3’-asemassa lopulli-5 sessa halutussa yhdisteessä, joka on valmistettu kuten on kuvattu menetelmissä B1-B5. N on kokonaisluku 1-9; E on vetyatomi tai valinnaisesti suojattu hydroksyyli-tai aminoryhmä; ja K on happi- tai rikkiatomi.
R5 on metyyli-, etyyli-, propyyli-, butyyli-, fenyyli-, metoksi-, etoksi-, propoksi-, ^ 10 butoksi-, syanoetyylioksi- tai valinnaisesti substituoitu fenyylioksiryhmä.
Kukin seuraavista vaiheista selitetään yksityiskohtaisemmin seuraavassa. Jos vaihe voidaan suorittaa analogisesti edellä olevassa kuvatun menetelmän kanssa, ensimmäinen selitetään edustuskelpoisena.
15 .
Vaiheet 1, 8 ja 18 Näissä vaiheissa yhdiste (2—2), jossa hydroksyyliryhmä ainoastaan 5’-asemassa suojataan selektiivisesti, voidaan valmistaa antamalla yhdisteen (2-1) reagoida 20 hydroksyyliä suojaavan reagenssin kanssa inertissä liuoksessa. Mikäli emäsosa on A, ^ G tai C, aminoryhmät emäksessä suojataan asyloinnilla edellä olevassa vaiheessa ja suojareaktio voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla, esim. kuten on esitetty menetelmässä [J. Am. Chem. Soc., 104,1316 (1982)]. Aminoa suojaavana ryhmänä kyseeseen tulee yleisesti alifaattinen alempi asyyli- tai aromaattinen asyyliryhmä. 25 Esimerkkejä asyyliryhmistä ovat: alifaattiset alemmat asyyliryhmät, kuten esimerkiksi formyyli-, asetyyli-, propionyyli-, butyryyli-, isobutyryyli-, pentanoyyli-, pivalo-yyli-, valeryyli- tai isovaleryyliryhmä; ja aromaattiset asyyliryhmät, kuten esimerkiksi bentsoyyli-, 4-asetoksibentsoyyli-, 4-metoksibentsoyyli-, 4-metyylibentsoyyli- tai 1-naftoyyliryhmä; edullisesti mikäli emäsosa on A tai C, bentsoyyliryhmä ja mikäli 30 emäsosa on G, isobutyryyliryhmä.
Esimerkkejä edullisista liuottimista ovat: aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi 140 111265 bentseeni, tolueeni tai ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi dikloori-metaani, kloroformi, hiilitetrakloridi, dikloorietaani, klooribentseeni tai diklooribent-seeni; esterit, kuten esimerkiksi etyyliformaatti, etyyliasetaatti, propyyliasetaatti, butyyliasetaatti tai dietyylikarbonaatti; eetterit, kuten esimerkiksi dietyylieetteri, di-5 isopropyylieetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani, dimetoksietaani tai dietyleeniglykoli-dimetyylieetteri; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni, metyyli-isobutyyliketoni, isoforoni tai sykloheksanoni; nitroyhdisteet, kuten esimerkiksi nitroetaani tai nitrobentseeni; nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili tai isobutyyrinit-riili; amidit, kuten formamidi, dimetyyliformamidi (DMF), dimetyyliasetamidi tai 10 heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi tai ^ sulfolaani; alifaattiset tertiaariset amiinit, kuten esimerkiksi trimetyyliamiini, trietyyliamiini tai N-metyylimorfoliini; ja aromaattiset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini tai pikoliini; edullisemmin halogenisoidut hiilivedyt (varsinkin dikloorime-taani) ja amidit (varsinkin DMF).
15
Suojaamiseen käytetyn reagenssin laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että sitä voidaan käyttää ainoastaan 5’-asemassa olevan hydroksyyliryhmän spesifiseen suojaukseen ja että se voidaan poistaa happamissa tai neutraaleissa olosuhteissa. Esimerkkejä edullisista suojareagensseista ovat triaryylimetyylihalidit, 20 kuten esimerkiksi trityy likloridi, monometoksitrityylikloridi tai dimetoksitrityy liklori- di. )
Kun suojareagenssi on triaryylimetyylihalidi, reaktio suoritetaan normaalisti emäksen läsnäollessa.
25
Esimerkkejä sopivista emäksistä ovat: heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini, dimetyyliaminopyridiini tai pyrrlidinopyridiini; ja alifaattiset tertieeriset amiinit, kuten esimerkiksi trimetyyliamiini tai trietyyliamiini; edullisesti orgaaniset emäkset (varsinkin pyridiini, dimetyyliaminopyridiini ja pyrrolidinopyridiini).
Kun orgaanisia amiineja käytetään liuottimena, on tarpeetonta käyttää muita happoa poistavia aineita, koska orgaaniset amiinit itsessään toimivat sellaisina.
30 • 111265 141
Reaktion lämpötila vaihtelee lähtöaineen ja käytetyn liuottimen laadun mukaan ja muista reaktio-olosuhteista riippuen, mutta reaktio suoritetaan normaalisti lämpötilassa 0—150 °C, edullisesti 20—100 °C.
5 Reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen lähtöaineesta ja käytetystä liuottimesta kuten myös reaktiolämpötilasta, mutta reaktio on normaalisti täydellinen 1—100 tunnissa, edullisesti 2—24 tunnissa.
Kun reaktio on mennyt loppuun, haluttu yhdiste voidaan eristää reaktioseoksesta, ^ 10 esim. kaatamalla reaktioseos veteen, uuttamalla veteen sekoittumattomalla liuottimel- la kuten bentseenillä, eetterillä tai etyyliasetaatilla ja lopuksi tislaamalla liuotin pois uutteesta. Siten saatua tuotetta voidaan käyttää reaktiossa ilman lisäpuhdistusta, mutta haluttaessa voidaan puhdistaa tavanomaisin keinoin, esim. erilaisilla kromatografia-tai jälleenkiteytystekniikoilla.
15
Vaihe 2 Tässä vaiheessa yhdiste (2-3) voidaan valmistaa antamalla yhdisteen (2-2) reagoida hydroksyyliä suojaavan reagenssin kanssa inertin liuottimen läsnäollessa.
20 ^ Esimerkkejä edullisista liuottimista ovat: aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni tai ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi dikloori-metaani, kloroformi, hiilitetrakloridi, dikloorietaani, klooribentseeni tai diklooribent-seeni; esterit, kuten esimerkiksi etyyliformaatti, etyyliasetaatti, propyyliasetaatti, 25 butyyliasetaatti, dietyylikarbonaatti; eetterit, kuten esimerkiksi dietyylieetteri, di-isopropyylieetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani, dimetoksietaani tai dietyleeniglykoli-dimetyylieetteri; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni, metyyli-isobutyyliketoni, isoforoni tai sykloheksanoni; nitroyhdisteet, kuten esimerkiksi nitroetaani tai nitrobentseeni; nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili tai isobutyyrinit-30 riili; amidit, kuten esimerkiksi formamidi, dimetyyliformamidi, dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi tai sulfolaani; edullisemmin eetterit (varsinkin tetrahydrofuraania), halogenisoidut 111265 142 hiilivedyt (varsinkin dikloorimetaani), aromaattiset hiilivedyt (varsinkin tolueeni) ja amidit (varsinkin DMF).
Käytetyn reagenssin laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että suoja-5 ryhmästä voidaan poistaa suoja erikseen 5-asemassa olevasta suojaryhmästä. Esimerkkejä sellaisista suojareagensseista ovat: silyylihalidit, kuten esimerkiksi tert-butyylidimetyylisilyylikloridi tai tri-isopropyylisilyylikloridi; haloalkoksikarbonyyli-halidit, kuten esimerkiksi trikloorietoksikarbonyylikloridi; ja aralkyylioksikarbonyyli-halidit, kuten esimerkiksi bentsyylioksikarbonyylikloridi.
1° ) Kun suojareagenssi on silyylihalidi, haloalkoksikarbonyylihalidi tai aralkyylioksikar-bonyylihalidi, suojareaktio suoritetaan normaalisti emäksen läsnäollessa.
Esimerkkejä edullisista emäksistä ovat orgaaniset emäkset (varsinkin trietyy-15 liamiinipyridiini, N-metyylimorfoliini, DBU ja imidatsoli).
Reaktion lämpötila vaihtelee riippuen reagenssin, lähtöaineen ja liuottimen ja muiden reaktio-olosuhteiden laadusta, mutta reaktio suoritetaan normaalisti lämpötilassa -20 - 150 °C, edullisesti -10 - 50 °C.
20
Reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen lähtöaineen ja liuottimen laadusta samoin ) kuin myös reaktiolämpötilasta, mutta reaktio on normaalisti täydellinen 1—100 tunnissa, edullisesti 1—24 tunnissa.
25 Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste voidaan eristää reaktioseoksesta. Esimerkki eräästä sellaisesta tekniikasta käsittää: kaadetaan reaktioseos veteen; uutetaan veteensekoittumattomalla liuottimella, kuten bentseenillä, eetterillä tai etyyliasetaatilla; ja lopuksi tislataan liuotin pois uutteesta. Täten saatua tuotetta voidaan normaalisti käyttää seuraavassa reaktiossa ilman lisäpuhdistusta, mutta jos halutaan, se voidaan 30 puhdistaa erilaisilla kromatografia-, jälleenkiteytys- tai vastaavilla menetelmillä.
111265 143
Vaiheet 3,11, 22 ja 25 Näissä vaiheissa yhdisteet (2—4), (4—6), (6—7) ja (6—9) voidaan valmistaa antamalla yhdisteiden (2—3), (4—5), (6—6) ja (6—8) reagoida suojaa poistavan reagenssin 5 kanssa inertin liuottimen läsnäollessa 5’-asemassa olevan hydroksyyliä suojaavan ryhmän selektiiviseksi poistamiseksi.
Esimerkkejä edullisista liuottimista ovat: aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni tai ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi dikloori-^ 10 metaani, kloroformi, hiilitetrakloridi, dikloorietaani, klooribentseeni tai diklooribent- seeni; esterit, kuten esimerkiksi etyyliformaatti, etyyliasetaatti, propyyliasetaatti, butyyliasetaatti tai dietyylikarbonaatti; eetterit, kuten esimerkiksi dietyylieetteri, di-isopropyylieetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani, dimetoksietaani tai dietyleeniglykoli-fimetyylieetteri; alkoholit, kuten esimerkiksi metanoli, etanoli, n-propanoli, isopro-15 panoli, n-butanoli, isobutanoli, tert-butanoli, isoamyylialkoholi, dietyleeniglykoli, glyseriini, oktanoli, sykloheksanoli tai.metyylisellosolvi; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni, metyyli-isobutyyliketoni, isoforoni tai sykloheksanoni; nitroyhdisteet, kuten esimerkiksi nitroetaani tai nitrobentseeni; nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili tai isobytyyrinitriilit; amidit, kuten esimerkiksi formamidi, 20 dimetyyliformamidi, dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforitriamidi; ja sulfoksi-( dit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi tai sulfolaani; edullisemmin alkoholit (varsinkin metanoli ja etanoli) ja dikloorimetaani ja mikäli etikkahappo on suojan-poistoreagenssi, etikkahapon ja veden seos.
25 Käytetyn suojanpoistoreagenssin laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sitä voidaan normaalisti käyttää tavanomaisessa suojanpoistossa. Kun suojaryhmä on triaryylimetyyliryhmä, se voidaan poistaa käyttämällä happoja, kuten esimerkiksi etikkahappoa, dikloorietikkahappoa, trifluorietikkahappoa, kloorivetyhappoa tai Lewis-happoa, kuten esimerkiksi sinkkibromidia, edullisesti etikkahappoa, dikloo-30 rietikkhappoa tai trifluorietikkahappoa.
Reaktion lämpötila vaihtelee riippuen käytetyn reagenssin, lähtöaineen ja liuottimen 111265 144 ja muiden reaktio-olosuhteiden laadusta, mutta reaktio suoritetaan normaalisti lämpötilassa -10 - 100 °C, edullisesti 0—50 °C.
Reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen lähtöaineen ja käytetyn liuottimen laadusta 5 samoin kuin reaktiolämpötilasta, mutta reaktio on normaalisti täydellinen 1 minuutissa - 50 tunnussa, edullisesti 1 minuutissa - 24 tunnissa.
Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste voidaan eristää reaktioseoksesta. Vaiheessa 3 esimerkki eräästä sellaisesta tekniikasta käsittää: neutralisoidaan reaktioseos, 10 kaadetaan se veteen; uutetaan veteensekoittumattomalla liuottimena, kuten bentseenil- ^ lä, eetterillä tai etyyliasetaatilla; ja tislataan liuotin pois uutteesta. Täten saatua tuotetta voidaan normaalisti käyttää seuraavassa reaktiossa ilman lisäpuhdistusta, mutta jos halutaan, se voidaan puhdistaa erilaisilla kromatografia-, jälleenkiteytys- tai vastaavilla menetelmillä. Vaiheessa 11, 22 ja 25 esimerkki sellaisesta tekniikasta 15 käsittää: erotetaan haluttu yhdiste suodattamalla ja pesemällä se metyleenikloridilla.
Vaiheet 4 ja 6 Näissä vaihessa yhdiste (2—6) tai 2 voidaan valmistaa antamalla yhdisteen (2—4) tai 20 (2—1) reagoida yhdisteen (2—5) kanssa (kaavassa Hai on halogeeniatomi) inertin liuottimen ja emäksen läsnäollessa. ) Käytetyn yhdisteen (2—5) halidiosuus on esim. kloori, jodi tai bromi, edullisesti kloori tai bromi.
25
Esimerkkejä edullisista liuottimista ovat: aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni tai ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi dikloori-metaani, kloroformi, hiilitetrakloridi, dikloorietaani, klooribentseeni tai diklooribent-seeni; esterit, kuten esimerkiksi etyyliformaatti, etyyliasetaatti, propyyliasetaatti, 30 butyyliasetaatti tai dietyylikarbonaatti; eetterit, kuten esimerkiksi dietyylieetteri, di-isopropyylieetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani, dimetoksietaani tai dietyleeniglykoli-dimetyylieetteri; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni, metyyli- 145 111265 isobutyyliketoni, isoforoni tai sykloheksanoni; nitroyhdisteet, kuten esimerkiksi nitroetaani tai nitrobentseeni; nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili tai isobutyyrinit-riili; amidit, kuten esimerkiksi formamidi, dimetyyliformamidi, dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforitriamidi; ja sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi 5 tai suifolaani; edullisemmin eetterit (varsinkin tetrahydrofuraani), ketonit (varsinkin asetoni), halogenisoidut hiilivedyt (varsinkin dikloorimetaani), amidit (varsinkin DMF) ja aromaattiset amiinit (varsinkin pyridiini).
Esimerkkejä edullisista emäksistä ovat: orgaaniset emäkset (varsinkin trietyyliamiini, ^ 10 pyridiini, N-metyylimorfoliini, DBU ja vastaava emäs), alkalimetallihydridit (varsin kin natriumhydridi) ja alkalimetallikarbonaatit (varsinkin natriumkarbonaatti ja litiumkarbonaatti) ja mikäli Z yhdisteessä (2—5) on piiatomi, imidatsoli on edullisin orgaaninen emäs.
15 Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, mutta reaktio suoritetaan normaalisti lämpötilassa 0—100 °C, edullisesti 20—60 °C.
Reaktioon vaadittu aika vaihtelee normaalisti 5 minuutista 30 tuntiin. Kun reaktio suoritetaan lämpötilassa 50 °C, se on täydellinen 10 tunnissa.
20 ^ Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste voidaan eristää reaktioseoksesta, esimerkik si neutralisoimalla reaktioseos sopivasti suodattamalla pois liukenemattomat aineet, jos niitä on, lisäämällä vettä ja veteensekoittumatonta orgaanista liuotinta, kuten esimerkiksi etyyliasetaattia siihen, erottamalla orgaaninen kerros, joka sisältää 25 halutun tuotteen, pesemällä uute vedellä, kuivaamalla uute vedettömän magnesium-sulfaatin avulla jne. ja lopuksi suodattamalla liuotin pois. Täten saatu haluttu yhdiste voidaan tarvittaessa puhdistaa tavanomaisin keinoin, esimerkiksi jälleenkiteyttämällä, jäälleesaostamalla, kromatografia- tai vastaavilla menetelmillä.
30 111265 146
Vaihe 5 Tässä vaiheessa yhdiste (2) voidaan valmistaa antamalla yhdisteen (2—6) reagoida suojanpoistoreagenssin kanssa inertin liuottimen läsnäollessa.
5 (1) Kun hydroksyyliä suojaava ryhmä 3’-asemassa on silyyliryhmä, se voidaan normaalisti poistaa käsittelemällä yhdisteellä, joka kykenee tuottamaan fluoridionin kuten tetrabutyylifluoriammoniumfhioridi.
10 Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Edullisia esimerkkejä ovat eetterit kuten tetrahyd-rofuraani tai dioksaani.
Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, muta reaktio suoritetaan normaalisti 15 lämpötilassa -30 - 100 °C, edullisesti 0—30 °C.
Reaktioon vaadittu aika vaihtelee normaalisti 5 minuutista 30 tuntiin. Kun reaktio suoritetaan lämpötilassa 20 °C, se on täydellinen 10 tunnissa.
20 Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste voidaan eristää reaktioseoksesta, esimerkiksi neutralisoimalla reaktioseos sopivasti suodattamalla pois liukenemattomat aineet, ^ jos niitä on, lisäämällä vettä ja veteensekoittumatonta orgaanista liuotinta, kuten esimerkiksi etyyliasetaattia siihen, erottamalla orgaaninen kerros, joka sisältää halutun tuotteen, pesemällä uute vedellä, kuivaamalla uute vedettömän magnesium-25 sulfaatin avulla jne. ja lopuksi suodattamalla liuotin pois. Täten saatu haluttu yhdiste voidaan tarvittaessa puhdistaa tavanomaisin keinoin, esimerkiksi jälleenkiteyttämällä, jäälleesaostamalla, kromatografia- tai vastaavilla menetelmillä.
Näin saatu haluttu tuote voidaan tarvittaesa puhdistaa lisää tavanomaisin keinoin, 30 esim. jälleenkiteyttämällä, jälleensaostamalla, kromatografialla tai vastaavalla.
(2) Kun hydroksyyliä suojaava ryhmä 3’-asemassa on haloalkoksikarbonyylhyhmä, 147 111265 se voidaan normaalisti poistaa käsittelemällä sinkkipölyllä.
Käytetyn liuottimen laatua ei rerityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat etikkahap-5 po, alkoholit tai veden ja yhden tai useamman näiden liuottimien seokset.
Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, mutta reaktio suoritetaan normaalisti lämpötilassa 0—100 °C, edullisesti huoneen lämpötilassa.
^ 10 Reaktioon vaadittu aika on normaalisti 5 minuuttia - 30 tuntia. Kun reaktio suorite taan huoneen lämpötilassa, se on täydellinen 10 tunnissa.
Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste voidaan eristää reaktioseoksesta, esimerkiksi neutralisoimalla reaktioseos sopivasti suodattamalla pois liukenemattomat aineet, 15 jos niitä on, lisäämällä vettä ja veteensekoittumatonta orgaanista liuotinta, kuten esimerkiksi etyyliasetaattia siihen, erottamalla orgaaninen kerros, joka sisältää halutun tuotteen, pesemällä uute vedellä, kuivaamalla uute vedettömän magnesium-sulfaatin avulla jne. ja lopuksi suodattamalla liuotin pois. Täten saatu haluttu yhdiste voidaan tarvittaessa puhdistaa tavanomaisin keinoin, esimerkiksi jälleenkiteyttämällä, 20 jäälleesaostamalla, kromatografia- tai vastaavilla menetelmillä.
( (3) Kun hydroksyyliäsuojaava ryhmä 3’-asemassa on aralkyylioksikarbonyyliryhmä, se voidaan normaalisti poistaa katalyyttisellä pelkistyksellä tai hapetuksella.
25 Pelkistykseen käytetyn katalysaattorin laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että sitä tavallisesti voidaan käyttää katalyyttiseen pelkistykseen. Esimerkkejä edullisista katalysaattoreista ovat palladium puuhiilellä, Raney-nikkeli, platinaoksidi, platina musta, rodium alumiinalla, trifenyylifosfiinin ja radiumkloridin yhdistelmä ja palladium bariumsulfaatilla.
Vetypaine, jossa reaktio suoritetaan, ei ole erityisen kriittinen, mutta reaktio suoritetaan normaalisti alueella 1...10 ilmanpainetta.
30 148 111265
Reaktion lämpötila ja reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen lähtöaineen ja käytetyn liuottimen samoin kuin katalysaattorin ja muiden reaktio-olosuhteiden laadusta, mutta reaktio suoritetaan lämpötilassa 0—100 °C ja se on täydellinen 5 minuutissa - 24 tunnissa.
5
Suojanpoistoon, joka tapahtuu hapetuksella, käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Edullinen liuotin on esim. veden ja yhden tai useamman orgaanisen liuottimen seos.
10 Esimerkkejä edullisista orgaanisista liuottimista ovat: ketonit, kuten esimerkiksi asetoni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi dikloorimetaani, kloroformi tai hiilitetrakloridi; nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili; eetterit, kuten esimerkiksi dietyylieetteri, tetrahydrofuraani tai dioksaani; amidit, kuten esimerkiksi dimetyyli-formamidi, dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforitriamidi; ja sulfoksidit, kuten 15 esimerkiksi dimetyylisulfoksidi.
Käytetyn hapetusaineen laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että sitä voidaan käyttää tavanomaisessa hapetuksessa. Edullisia esimerkkejä ovat esim. kaliumpersulfaatti, natriumpersulfaatti, ammoniumsiriumnitraatti ja 2,3-dikloori-5,6-20 disyano-p-bentsokinoni DDQ.
. )
Reaktion lämpötila ja reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen lähtöaineen ja liuottimen laadusta samoin kuin käytetyn katalysaattorin tyypistä ja muista olosuhteista, mutta reaktio suoritetaan normaalisti lämpötilassa 0—150 °C ja se on täydellinen 25 10 minuutissa - 24 tunnissa.
Hydroksyyliä suojaava ryhmä voidaan myös poistaa käsittelemällä alkaalimetalleilla kuten litiummetallilla tai natriummetallilla nestemäisessä ammoniakissa tai alkoholissa kuten metanolissa tai etanolissa lämpötilassa -78 - -20 °C.
Lisäksi suojaryhmä voidaan poistaa käyttämällä alumiinikloridin ja natriumdikloridin yhdistelmää tai alkyylisilyylihalideja kuten trimetyylisilyylijodidia liuottimessa.
30 111265 149 Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Esimerkkejä edullisista liuottimista ovat nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili, halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi dikloorime-taani tai kloroformi ja kahden tai useamman näiden liuottimien seokset.
5
Reaktion lämpötila ja reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen lähtöaineen, liuottimen ja muiden reaktio-olosuhteiden laadusta, mutta reaktio suoritetaan normaalisti lämpötilassa 0—50 °C ja se on täydellinen 5 minuutissa - 3 päivässä.
^ 10 Kun substraatti sisältää rikkiatomin, suojan poisto voidaan suorittaa käyttämällä alumiinikloridin ja natriumjodidin yhdistelmää.
Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste eristetään reaktioseoksesta, esim. neutralisoimalla huolellisesti reaktioseosta ja suodattamalla liukenemattomat aineet pois, jos 15 niitä on, ja lisäämällä vettä ja veteen sekoittumaton orgaaninen liuotin kuten etyyliasetaatti siihen, erotetaan orgaaninen kerros, joka sisältää halutun yhdisteen, pestään uute vedellä, kuivataan vedettömän magnesiumsulfatin avulla jne. ja lopuksi tislataan liuotin pois. Haluttu näin saatu yhdiste voidaan tarvittaessa lisäpuhdistaa tvanomaisin keinoin, esim. jälleenkiteyttämällä, jälleensaostamalla, kromatografialla 20 tai vastaavalla.
(
Vaiheet 7, 12,14, 17, 23, 26, 28, 3», 33 ja 35 Näissä vaiheissa CPG-sidotutoligodeoksiribonukleotidit (3), (4a), (4b), (5), (6a—6d, 25 (7a)) ja (7b) voidaan valmistaa käyttämällä CPG-sidottuja nukleotidejä, jotka käsittävät mainitun vaikuttavan emässekvenssin 3’-päätynukleosideja, toistamalla DNA-ketjun pidennysvaihe DNA-syntetisoijalla, ja lopuksi valmistetaan yksi nukleotidin lyhyt fragmentti mainitun vaikuttavan sekvenssin 5’-päädystä.
30 DNA-ketjun jatkaminen DNA-syntetisoijalla selitetään "fosforiamidiitti" lähestymistavan mukaisesti, mutta on ymmärrettävä, että tämä menetelmä on ainostaan kuvaamistarkoitukseen eikä rajoittamaan keksintöä.
.111265 150
Vaiheessa (7), kaupallisesti saatavilla oleva CPG-sidottu D" (3—1) käsitellään DNA-syntetisoijassa olevan DMT-ryhmän suojanpoistoreagenssilla 5’-pääty DMT-ryhmän poistamiseksi ja sitten kondensoidaan nukleotidiyksiköllä, joka on kaupallistettu DNA-syntetisoijassa ja sen jälkeen muodostamalla fosforihappodiesterisidos, 5 joka sen jälkeen hapetetaan fosforihappotriesteriksi käyttämällä sopivaa hapetus-ainetta. Kun on syntetisoitu yksi mainitun efektiivisen sekvenssin nukleotidin lyhyt fragmentti 5’-päädystä toistamalla nämä vaiheet, valmistetaan CPG-sidottu ODN (3), jolla on 5’-pääty DMT-ryhmä. Halutun nukleotidin emässekvenssin CPG-sidottu ODN, jonka 5’-pääty suojataan DMT-ryhmällä, voidaan syntetisoida menetelmän 10 mukaisesti, jonka on kuvannut H. Koster et ai. Nucleic Acid. Res., 12, 4539 (1984) ^ tai sen modifioitua menetelmää käyttämällä syntetisointiaineeseen perustuvaa fosforiamidiittimenetelmää käyttämällä esimerkiksi Model 380B (Apllied Biosystem Inc.:in tuote) tai Cyclon Plus (MilliGen/Biosearch:in tuote).
15 Nukleotidiyksikön emäsosuus, jota käytetään syntetisoimaan ODN, on sellainen, joka on suojattu asyyliryhmällä. Edullisia asyyliryhmiä ovat esim. bentsoyyliryhmä, jolloin emäsosuus on A tai C, ja isobutyryyliryhmä, jos se on G.
Esimerkkejä käytettävistä happamista aineista katalysaattorina vaiheen kondensointi-20 reaktiossa ovat happamat aineet, johon kuuluu tetratsolit, edullisesti tetratsoli.
) Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Edullisia liuottimia ovat esim. asetnitriili ja tetrahy drofuraani.
25
Reaktio suoritetaan lämpötilassa -30 - 50 °C, normaalisti huoneen lämpötilassa.
Reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen reaktion lämpötilasta, mutta reaktio on täydellinen 1 minuutissa - 20 tunnissa. Kun reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa, 30 se on täydellinen 10 minuutissa.
Näissä vaiheissa käytetyn hapetusaineen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä 111265 151 edellytyksellä että sitä voidaan käyttää tavanomaisessa hapetuksessa hapetusaineena. Esimerkkejä edullisista hapetusaineista ovat: epäorgaaniset metallihapetusaineet mukaanlukien mangaanioksidit, kuten esimerkiksi kaliumpermanganaatti tai mangaanidioksidi; ruteniumoksidit, kuten esimerkiksi ruteniumtetraoksidi; seleeniyhdis-5 teet, kuten esimerkiksi seleenidioksidi; rautayhdisteet, kuten esimerkiksi ferrikloridi; osmiumyhdisteet, kuten esimerkiksi osmiumtetraoksidi; hopeayhdisteet, kuten hopeaoksidi; elohopeayhdisteet, kuten esimerkiksi elohopea-asetaatti; lyijyoksidiyh-disteet, kuten esimerkiksi lyijyoksidi tai lyijytetraoksidi; kromihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi kaliumkromaatti, kromisulfaatin ja rikkihapon yhdistelmä tai kromihapon ^ 10 ja pyridiinin yhdistelmä; seriumyhdisteet, kuten esimerkiksi seriumammoniumnitriitti (CAN); epäorgaaniset hapetusaineet mukaanlukien halogeenimolekyylit, kuten esimerkiksi kloori-, bromi- tai jodimolekyyli; periodaatit, kuten esimerkiksi natrium-periodaatti; otsoni; vetyperoksidi; typpiyhdisteet, kuten esimerkiksi typpihapoke; kloorihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi kaliumkloriitti tai natriumkloriitti; perrikki-15 happoyhdisteet, kuten esimerkiksi kaliumpersulfaatti tai natriumpersulfaatti; orgaaniset hapetusaineet mukaanlukien reagenssit, joita käytetään DMSO-hapetuksessa (dimetyylisulfoksidin ja disykloheksyylikarbodi-imidin kompleksi, oksalyylikloridi, etikka-anhydridi tai fosforipentaoksidi tai pyridiinin ja rikkitrioksidin kompleksi); peroksidit, kuten esimerkiksi tert-butyylivetyperoksidi; stabiilit kationit, kuten 20 esimerkiksi trifenyylimetyylikationi; sukkini-imidit, kuten esimerkiksi N-bromisukki-^ ni-imidi; hypokloorihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi tert-butyylihypokloriitti; atsodikarboksyylihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi atsodikarboksylaatti; trifenyyli-fosfiinin ja disulfidien yhdistelmä, kuten esimerkiksi dimetyylidisulfidi tai difenyyli-disulfidi; typpiesterit, kuten esimerkiksi metyylinitriitti; tetrahalogeenihiilet, kuten 25 esimerkiksi tetrabromimetaani; kinonit, kuten esimerkiksi 2,3-dikloori-5,6-disyano-p-bentsokinoni (DDQ); edullisesti jodi.
Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei haitallista vaikutusta reaktioon. Esimerkkejä edullisista liuottimista ovat: aromaattiset 30 hiilivedyt, kuten bentseeni, tolueeni tai ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi dikloorimetaani tai kloroformi; eetterit, kuten esimerkiksi eetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani tai dimetoksietaani; amidit, kuten esimerkiksi dimetyyli- ,111265 152 formamidi, dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi; alkoholit, kuten esimerkiksi metanoli, etanoli, n-propanoli, isopropanoli, n-butanoli, isobutanoli tai isoamyylialkoholi; laimeat hapot, kuten esimerkiksi vesipitoinen rikkihappo; laimeat emäkset, kuten esimerkiksi 5 natriumhydroksidin vesiliuos; vesi; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni tai metyylietyy- liketoni; heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini; ja nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili; edullisesti heterosykliset amiinit (varsinkin pyridiini), nitriilit (varsinkin asetnitriili), eetterit (varsinkin tetrahydrofuraani) ja halogenisoidut hiilivedyt (varsinkin dikloorimetaani).
1° )
Reaktio suoritetaan lämpötilassa -50 - 100 °C. Reaktioon vaadittu aika vaihtelee pääasiassa riippuen reaktion lämpötilasta samoin kuin lähtöaineen ja liuottimen laadusta, mutta reaktio suoritetaan lämpötilassa -50 - 100 °C ja se on normaalisti täydellinen 30 minuutissa -15 tunnissa. Edellä kuvattua hapetusreaktiota kiihdytetään 15 lisäämällä faasinmuutoskatalysaattori kuten trietyylibentsyyliammoniumkloridi tai dibutyylibentsyyliammoniumbromidi. Vaiheet 12,14,17,23,26,28,30,33 ja 35 ovat samantapaisia.
Vaiheet 9 ja 20 20 Näissä vaiheissa dikarboksyylihapon puoliesteri voidaan valmistaa antamalla yhdis- ) teen (4—2) tai (8—2) vapaan hydroksyyliryhmän reagoida dikarboksyylihapon anhydridin kanssa kuten sukkiinianhydridin emäskatalysaattorin läsnäollessa.
Käytetyn dikarboksyylihapon laatua ei erityisemmin rajoiteta. Edullisia dikarboksyy-25 lihappoja ovat ne, jotka sisältävät 2-10 hiiliatomia ja edullisin dikarboksyylihappo on sukkiinihappo tai glutariinihappo. Esimerkkejä sopivista emäskatalysaattoreista ovat: aminopyridiinit, kuten esimerkiksi dimetyyliaminopyridiini tai pyrrolidinopyridiini; tertiaariset amiinit, kuten esimerkiksi trimetyyliamiini tai trietyyliamiini; natriumve-tykarbonaatti; ja alkalimetallikarbonaatit, kuten esimerkiksi kaliumkarbonaatti; 30 edullisimmin dimetyyliaminopyridiini tai pyrrolidinopyridiini.
Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei 153 111265 ole haitallista vaikutusta reaktioon ja että se kykenee liuottamaan lähtöaineen jossain määrin. Esimerkkejä edullisista liuottimista ovat: aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni tai ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi dikloorimetaani tai kloroformi; eetterit, kuten esimerkiksi eetteri, tetrahydrofu-5 raani, dioksaani tai dimetoksietaani; amidit, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidi, dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi; alkoholit, kuten esimerkiksi metanoli, etanoli, n-propanoli, isopropanoli, n-butanoli, isobutanoli tai isoamyylialkoholi; laimeat hapot, kuten esimerkiksi vesipitoinen rikkihappo; laimeat emäkset, kuten esimerkiksi natrium-10 hydroksidin vesiliuos; vesi; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni ti metyylietyyliketoni; heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini; ja nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili; edullisemmin nitriilit (varsinkin asetnitriili), eetterit (varsinkin tetrahydro-furaani) ja halogenisoidut hiilivedyt (varsinkin dikloorimetaani).
15 Reaktio suoritetaan lämpötilassa -50 - 100 °C. Reaktioon vaadittu aika vaihtelee pääasiassa riippuen reaktion lämpötilasta samoin kuin lähtöaineen ja käytetyn liuottimen laadusta, mutta reaktio on normaalisti täydellinen 30 minuutissa - 15 tunnissa.
20 Vaiheet 10 ja 21 ( Näissä vaiheissa haluttu yhdiste (4—5) ja (6—6) voidaan valmistaa antamalla suk-kiinihappojen (4—3) ja (6—4) puoliesterien, jotka on valmistettu vaiheissa 9 ja 10 reagoida fenolien kanssa kuten pentakloorifenolin kondensointiaineen läsnäollessa 25 aktivoidun esterin tuottamiseksi ja sen jälkeen antamalla tuotteen reagoida CPG-amii-nien (4—4) ja (6—5) kanssa emäksen läsnäollessa.
Tässä reaktiossa käytettyjen fenolien laatua ei erityisemmin rajoiteta. Edullisia fenoleja ovat esimerkiksi pentakloorifenoli ja 4-nitrofenoli.
Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon ja että se kykenee liuottamaan lähtöaineen jossain 30 -111265 154 määrin. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat: amidit, kuten esimerkiksi dimetyyli-formamidi, dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni tai metyylietyyli-ketoni; heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini; ja nitriilit, kuten esimer-5 kiksi asetnitriili; edullisesti amidit, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidi.
Käytetyn emäksen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että si voidaan käyttää emäksenä tavanomaisessa reaktiossa. Esimerkkejä edullisista emäksistä ovat: orgaaniset emäkset, kuten esimerkiksi trietyyliamiim, tributyyliamiini, di-isopropyy-10 lietyyliamiini, N-metyylimorfoliini, pyridiini, 4-(N,N-dietyylianiliini, 1,5-diatsabi-syklo[4,3,0]non-5-eeni, 1,4-diatsabisyklo[2,2,2]oktaani (DABCO)tai 1,8-diatsabisyk-lo[5,4,0]undek-7-eeni (DBU); edullisemmin orgaaniset emäkset, varsinkin trietyy-liamiini, pyridiini, N-metyylimorfoliini ja DBU.
15 Reaktio suoritetaan lämpötilassa -50 - 100 °C. Reaktioon vaadittu aika vaihtelee pääasiassa riippuen reaktion lämpötilasta samoin kuin lähtöaineen tai käytetyn · liuottimen laadusta, mutta kun reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa, se on normaalisti täydellinen 30—50 tunnissa.
20 Vaiheet 13 ja 32 )
Vaiheessa 13 CPG-sidottu nukleotidi (4—7), joka sisältää tioaattiryhmän, voidaan valmistaa antamalla yhdisteen (4—6), joka on valmistettu vaiheessa 11, reagoida kaupallisesti saatavilla olevan 5’-0-DMT-nukleotidi-3’-fosforiamidiittireagenssien 25 kanssa DNA-syntetisoijalla ja sen jälkeen antamalla sen reagoida tioatointi-reagenssin kanssa.
Käytetyn tioatointi-reagenssin laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että se kykenee muodostamaan tioaattiryhmän reaktiolla 3-arvoisen fosforin kanssa.
30 Esimerkkejä edullisista tioatointi-reagensseista ovat: rikin lisäksi, tetraetyylitiuram-disulfidi (TETD) (yhtiön Applied Biosystems Inc. tuote) ja Beaucage-reagenssi (yhtiön MilliGen/Biosearch tuote). Haluttu yhdiste (4—7), jossa mainitun vaikuttavan 111265 155 emässekvenssin 3’-päätynukleotidi tuetaan CPG:llä tioaattiryhmän kautta, voidaan valmistaa käsittelemällä tetraetyylitiuramdisulfidilla (TETD) menetelmän mukaan, joka on esitetty Tetrahedron Letters, 32, 3005 (1991) tai Beaucage-reagenssillä menetelmän mukaan, joka on esitetty J. Am. Chem. Soc., Π2, 1253 (1990) tai sen 5 modifioitua menetelmää.
Vaiheessa 32 CPG-sidottu nukleotidi (7—7), jolla on fosforitriesteri tai tioaattiryhmä, voidaan valmistaa antamalla yhdisteen (7—3) reagoida fosforamidiittireagenssien kanssa ja sen jälkeen käsittelemällä tavanomaisin keinoin tai tioatointiaineen kanssa.
10 ^ Vaihe 15
Vaiheessa CPG-sidottu (5—3), jolla on fosfonihappodiesteriryhmä, voidaan valmistaa antamalla CPG-sidotun yhdisteen (5—10), joka on vapautettu DMT-ryhmästä, ja joka 15 on saatu samalla tavalla kuin CPG-sidotun tuotteen (4—6) valmistus, reagoida kaupallisesti saatavilla olevan fosfonihappo-monoesteriyhdisteen kanssa (5—2) kondensointiaineen ja happamuuden poistoaineen läsnäollessa. Käytetyn kondensoin-tiaineen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että se voi muodostaa happoanhydridin fosfonihapon monoesterin kanssa. Esimerkkejä edullisista konden-20 sointiaineista ovat adamantaani-l-karbonyylikloridi ja pivaloyylikloridi. Käytetyn ^ happoa poistavan aineen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sitä voidaan käyttää happoa poistavana aineena, mikäli asylointi suoritetaan käyttämällä happokloridia. Esimerkkejä edullisista happoa poistavista aineista ovat yleensä aromaattiset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini. Käytetyn liuottimen laatua ei 25 erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Esimerkkejä edullisista liuottimista ovat nitriilit, kuten esimerkiksi vedetön asetnitriili. Kun reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa, se on täydellinen 5 minuutissa - 60 tunnissa.
30 Vaihe 16
Vaiheessa fosfonihappodiesteriryhmä CPG-sidotussa yhdisteessä (5—3) muutetaan -111265 156 fosforiamidiittiryhmäksi antamalla alkyyliamiinin ja hiilitetrakloridin reagoida sen kanssa. Alkyyliamiinilla ymmärretään halutut alkyyliamiinit. Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat normaalisti ei-polaariset 5 liuottimet, kuten esimerkiksi hiilitetrakloridi. Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen ja keksintö suoritetaan normaalisti lämpötilassa -50 - 100 °C. Kun reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa, se on täydellinen 1—10 tunnissa.
Vaiheet 19 ja 36 10 Näissä vaiheissa 3’-fosforihappojohdannaiset (3—6) ja (3—8) voidaan valmistaa antamalla yhdisteiden (6—2) ja (2) reagoida kloorifosforiamidiitin (6—3’) kanssa, jota käytetään kolmiarvoisena fosforointiaineena, inertin liuottimen ja happamuuden poistoaineen läsnäollessa. U, jota käytetään yhdisteen (6—3’) määritykseen, tarkoit-15 taa dialkyyliaminoryhmää kuten dimetyyliamino- tai di-isopropyyliaminoryhmää tai heterosyklistä ryhmää, jossa on 1 tai 2 happi- ja/tai typpiatomia renkaassa. Kirjainta V käytetään määrittelemään yhdiste (6—3’) ja se voi olla mikä vain ryhmä sillä edellytyksellä, että se voidaan poistaa, kun se on muodostanut fosfaattisidoksen. Esimerkkejä ryhmistä ovat edulliset alemmat alkyylioksiryhmät kuten metoksiryhmä 20 ja syanoalkyylioksiryhmät kuten syanoetyylioksiryhmä. Yhdisteellä (6—3 ’) ymmärretään erityisesti fosfiinit kuten kloorimorfolinometoksifosfiini, kloorimorfölinosy- .
anoetoksifosfiini, klooridimetyyliaminometoksifosfiini, kloorimetyyliaminosy-anoetoksifosfiini, klooridi-isopropyyliaminometoksifosfiini ja klooridi-isopropyy-liaminosyanoetoksifosfiini; edullisesti kloorimorfolinometoksifosfiini, kloorimorfo-25 linosyanoetoksifosfiini, klooridi-isopropyyliaminometoksifosfiini ja klooridi-isopropyyliaminosyanoetoksifosfiini.
Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Edullisia liuottimia ovat eetterit, kuten esimerkik-30 si tetrahydrofuraani, dietyylieetteri tai dioksaani. Esimerkkejä happoa poistavista aineista ovat: heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini tai dimetyy-liaminopyridiini ja alifaattiset amiinit, kuten esimerkiksi trietyyliamiini, trietyy- . 111265
Tiamiini tai di-isopropyylietyyliamiini, edullisesti alifaattiset amiinit (varsinkin di- isopropyylietyyliamiini).
157
Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, mutta reaktio suoritetaan normaalisti 5 lämpötilassa -50 - 50 °C, edullisesti huoneen lämpötilassa.
Reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen lähtöaineen ja reagenssin laadusta samoin kuin reaktion lämpötilasta, mutta reaktio on normaalisti täydellinen 5 minuutissa - 30 tunnissa. Kun reaktio suoritetaan edullisesti huoneen lämpötilassa, se on täydellinen 10 30 minuutissa.
(
Haluttu yhdiste voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta esim. neutralisoimalla asianmukaisesti reaktioseosta ja suodattamalla liukenemattomat aineet pois, jos niitä on, lisäämällä vettä ja veteen sekoittumaton liuotin kuten etyyliasetaatti, erotetaan 15 orgaaninen seos, joka sisältää halutun yhdisteen, pestään uute vedellä, kuivataan vedettömän magnesiumsulfaatin avulla jne. ja lopuksi tislataan liuotin pois.
Siten saatu haluttu yhdiste voidaan tarpeen vaatiessa puhdistaa tavanomaisin keinoin esim. jälleenkiteyttämällä, jälleensaostamalla, kromatografialla tai vastaavalla.
20
Vaihe 24 ( Tässä vaiheessa CPG-sidottu yhdiste (6—8), jossa on fosforitriesteriiyhmä, voidaan valmistaa kuten on kuvattu vaiheessa 7, mutta käyttämällä yhdistettä (6—3) nukleoti-25 diamidiittiyhdisteen sijasta, jota käytetään nukleotidiyksikkönä DNA-syntetisoijalla.
Vaiheet 27 ja 29 Näissä vaiheissa CPG-sidotut yhdisteet (6—10) ja (6—11), jossa on kaksi tai kolme 30 fosforitriesteriryhmää, voidaan valmistaa CPG-sidotusta yhdisteestä (6—9), jotka on valmistettu vaiheessa 24 käsittelemällä samalla tavalla kuin on kuvattu vaiheessa 24.
Vaihe 31 158 111265 Tässä vaiheessa CPG-sidottu yhdiste (7—3), jossa on 4,4’-dimetoksitrityylioksietyy-lisulfonyylietoksiryhmä voidaan valmistaa käsittelemällä kaupallisesti saatavilla 5 olevaa CPG-yhdistettä (7—2), joka on vapautettu 5 ’ -DMT-ryhmästä (2-sy anoetoksi)-2-[2’-0-(4,4-dimetoksitrityylioksietyylisulfonyyli)etoksi-N,N-di-isopropyyliaminofos-fiini (7-1) [T. Horn et ai., Tetrahedron Letters, 27, 4705 (1986)] samalla tavalla kuin on kuvattu vaiheessa 24.
10 Vaihe 34 ^ Tässä vaiheessa CPG-sidottu yhdiste (7—6) voidaan valmistaa poistamalla DMT-ryh-män suoja CPG-sidotusta yhdisteestä (7—3), joka on valmistettu vaiheessa 31 ja sitten kondensoimalla nukleotidin (7—4) kanssa, jossa on DMT-ryhmä 5’-asemassa 15 ja alkyylifosfaattiryhmä, fenyylifosfaatti, alkyylifosfonaatti tai fenyylifosfonaatti 3’-asemassa käyttämällä kondensointiametta.
Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Edullisia liuottimia ovat aromaattiset amiinit, 20 kuten esimerkiksi pyridiini. Kondensointiaineina tulevat kysymykseen disyklohek- syylikarbodi-imidi (DCC), mesityleenisulfonyylikloridi (Ms-Cl), tri-isopropyyli- ) bentseenisulfonyylikloridi, mesityleenisulfonyylitriatsoli (MST), mesityleenisul- fonyyli-3-nitrotriatsoli (MSNT), tri-isopropyylibentseenisulfonyylitetratsoli (TPS-Te), tri-isopropyylibentseenisulfonyylinitroimidatsoli (TPS-NI) ja tri-isopropyyli-25 bentseenisulfonyylipyridyylitetratsoli; edullisesti MSN, TPS-Te ja TPS-NI.
Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, mutta reaktio suoritetaan lämpötilassa -10 - 100 °C. Reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen käytetyn liuottimen laadusta ja reaktion lämpötilasta. Kun reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa käyttämällä 30 pyridiiniä liuottimena, se on täydellinen 30 minuutissa.
Vaihe 37 159 111265 Tässä vaiheessa lopullinen tuote (1) voidaan valmistaa kondensoimalla yhdiste (8), joka on valmistettu vaiheessa 36 CPG-sidotulla ODM:llä 3, 4a, 4b, 5, 6a—6d, 7a tai 5 7b), joka on syntetisoitu DNA-syntetisointiaineelle ja poistetaan suoja 5’-pääty DMT-ryhmästä yksinomaan käyttämällä hapanta katalysaattoria fosforitriesterin muodostamiseksi, hapettamalla käyttämällä sopivaa hapetusainetta fosforihappotries-terin valmistamiseksi, halkaisemalla CPG:stä, poistamalla suojaryhmät ja lopuksi puhdistamalla.
( 10
Happamana katalysaattorina, jota käytetään kondensointireaktiossa, voi tulla kyseeseen sellaiset happamat aineet kuten tetratsolit, edullisesti tetratsoli.
Käytetyn hapetusaineen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sitä 15 voidaan käyttää hapetusaineena hapetusreaktioissa. Esimerkkejä edullisista hapetusai- neista ovat: epäorgaaniset metallioksidit mukaanlukien mangaanioksidit, kuten esimerkiksi kaliumpermagnanaatti tai mangaanidioksidi; ruteniumoksidit, kuten esimerkiksi ruteniumtetraoksidi; seleenioksidit, kuten esimerkiksi seleenidioksidi; rautayhdisteet, kuten esimerkiksi ferrikloridi; osmiumyhdisteet, kuten esimerkiksi 20 osmiumtetraoksidi; hopeayhdisteet, kuten hopeaoksidi; elohopeayhdisteet, kuten ( esimerkiksi elohopea-asetaatti; lyijyoksidiyhdisteet, kuten esimerkiksi lyijyoksidi tai
V
lyijytetraoksidi; kromihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi kaliumkromaatti, kromisul-faatinja rikkihapon yhdistelmä tai kromihapon ja pyridiinin kompleksi; seriumyhdis-teet, kuten esimerkiksi seriumammoniumnitriitti (CAN); epäorgaaniset hapetusaineet 25 mukaanlukien halogeenimolekyylit, kuten esimerkiksi kloori-, bromi- tai jodimole-kyyli; periodidit, kuten esimerkiksi natriumperiodidi; otsoni; vetyperoksidi; typpiyhdisteet, kuten esimerkiksi typpihapoke; kloorihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi kaliumkloriitti tai natriumkloriitti; perrikkihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi kalium-persulfaatti tai natriumpersulfaatti; orgaaniset hapetusaineet mukaanlukien reagenssit, 30 joita käytetään DMSO-hapetuksessa (dimetyylisulfoksidin ja disykloheksyylikarbodi-imidin yhdistelmä, oksalyylikloridi, etikka-anhydridi tai fosforipentaoksidi tai pyridiinin ja rikkitrioksidin yhdistelmä); peroksidit, kuten esimerkiksi tert-butyylive- 111265 160 typeroksidi; stabiilit kationit, kuten esimerkiksi trifenyylimetyylikationi; sukkini-imidit, kuten esimerkiksi N-bromisukkini-imidi; hypokloorihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi tert-butyylihypokloriitti; atsodikafboksyylihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi atsodikarboksylaatti; ja disulfidien yhdistelmä, kuten esimerkiksi dimetyylidisul-5 fidin tai difenyylidisulfidin; tai dipyridyylidisulfidin ja trifenyylifosfiinin nitriitit, kuten esimerkiksi metyylinitriitti; tetrahalogenisoidut yhdisteet, kuten esimerkiksi tetrabromimetaani; kinonit, kuten esimerkiksi 2,3-dikloori-5,6-disyano-p-bentso-kinoni (DDQ); edullisesti jodi.
10 Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ^ ole haitallista vaikutusta reaktioon ja että se kykenee liuottamaan lähtöaineet jossain määrin. Esimerkkejä edullisista liuottimista ovat: aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni tai ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi dikloorimetaani tai kloroformi; eetterit, kuten esimerkiksi eetteri, tetrahydrofu-15 raani, dioksaani tai dimetoksietaani; amidit, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidi, dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi; alkoholit, kuten esimerkiksi metanoli, etanoli, n-propanoli, isopropanoli, n-butanoli, isobutanoli tai isoamyylialkoholi; laimeat hapot, kuten esimerkiksi vesipitoinen rikkihappo; laimeat emäkset, kuten esimerkiksi natriumhy-20 droksidin vesiliuos; vesi; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni tai metyylietyyliketoni; heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini; nitriilit, kuten esimerkiksi ) asetnitriili; edullisesti heterosykliset amiinit (varsinkin pyridiini), nitriilit (varsinkin asetnitriili), eetterit (varsinkin tetrahydrofuraani) ja halogenisoidut hiilivedyt (varsinkin dikloorimetaani).
25
Reaktio suoritetaan lämpötilassa -50 - 100 °C. Reaktioon vaadittu aika vaihtelee pääasiassa riippuen reaktion lämpötilasta ja lähtöyhdisteen laadusta 30 minuutista 15 tuntiin. Hapetusreaktio, joka on kuvattu edellä, kiihdytetään lisäämällä faasinmuutos-katalysaattoria kuten trietyylibentsyyliammoniumkloridia tai tributyylibentsyyliam-30 moniumbromidia.
Vaihe 38 161 111265 Tässä vaiheessa väliaine, mononukleotidi (19), voidaan valmistaa antamalla yhdisteen (2) reagoida fosforointiaineen kanssa, esim. bis-triatsolidi, inertin liuottimen läsnäol-5 lessa ja lisäämällä vettä ja sitten työstämällä.
Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Liuotin valitaan normaalisti aromaattisista amiineista, kuten pyridiini. Fosforylointiaineen määrityksessä käytetyn V:n laatua ei ^ 10 erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että se voidaan poistaa olosuhteissa, kun poistetaan emäsosan suojaryhmä vaiheen 39 kondensointireaktion valmistumisen jälkeen. V tarkoittaa tavallisesti o-kloorifenoksiryhmää.
Vaikka reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, reaktio suoritetaan lämpötilassa 15 -20 - 100 °C, normaalisti huoneen lämpötilassa. Reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen käytetyn liuottimen laadusta ja reaktion lämpötilasta. Kun reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa käyttämällä pyridiiniä liuottimena, se on täydellinen yhdessä tunnissa.
20 Vaihe 39 ( Tässä vaiheessa lopullinen tuote (1) voidaan valmistaa kondensoimalla mononukleotidi (9) CPG-sidotulla ODN:n kanssa (3, 4a, 4b, 6a—6d, 7a tai 7b), joka syntetisoidaan DNA-syntetisoijalla ja poistetaan suoja 5’-pääty DNT-ryhmästä, jossa on 25 suojaryhmiä ja fosforihappo-osuuksia käyttämällä kondensointiainetta fosforihappot- riesteriryhmän muodostamiseksi, halkaisemalla CPG:stä tavanomaisin keinoin, poistamalla suojaryhmä ja lopullisesti puhdistamalla. Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon.
Esimerkkejä kondensointiaineista ovat: disyklokarbodi-imidi (DCC), mesityleenisul-fonyylikloridi (Ms-Cl), tri-isopropyylibentseenisulfonyylikloridi, mesityleenisul- 30 111265 162 fonyylitriatsoli (MST), mesityleenisulfonyyli-3-nitrotriatsoli (MSNT), tri-isopropyy-libentseenisulfonyylitetratsol i (TPS-Te), tri-isopropyy libentseenisulfonyy linitroimi-datsoli (TPS-NI) ja tri-isopropyylibentseenisulfonyylipyridyylitetratsoli; edullisesti MSNT, TPS-Te ja TPS-NI.
5
Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, mutta reaktio suoritetaan lämpötilassa -10 - 100 °C, tavallisesti huoneen lämpötilassa. Vaikka reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen käytetyn liuottimen laadusta ja reaktion lämpötilasta. Kun reaktio on suoritettu huoneen lämpötilassa käyttämällä pyridiiniä liuottimena, se on töydelli-10 nen 30 minuutissa. )
Halkaiseminen ODN CPG-sidotusta ODN:stä ja suojaryhmien poisto, paitsi 5’-pääty substituentti suoritetaan menetelmillä, jotka ovat sinänsä tunnettuja [J. Am. Chem.
Soc., 103, 3185 (1981)].
15
Reaktioseos, joka sisältää yleisen kaavan (1) yhdisteet, puhdistetaan tavanomaisilla puhdistustekniikoilla esim. erilaisilla kromatografiatekniikoilla, joihin kuuluu käänteisfaasi ja ioninvaihtokromatografia (käsittää korkean nopeuden nestekromato-grafian yhdisteiden tuottamiseksi, joilla on mainittu yleinen kaava (1).
20
Vaihe 40 ) Tässä vaiheessa tris-l,2,4-triatsolyylifosfiitti, joka on aikaisemmin valmistettu fosforitrikloridista ja 1,2,4,-triatsolista menetelmän mukaan, jonka on kuvannut B.C.
25 Freohler, P.G. Ng ja M.D. Matteucci Nucleic Acids Res., 14, 5399 (1986) annetaan reagoida yhdisteen (2) kanssa inertissä liuottimessa ja reaktio pysäytetään lisäämällä vettä ja sen jälkeen työstetään nukleotidi 3’-H-fosfonaatin (10) tuottamiseksi.
Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Edullinen liuotin on halogenisoitu hiilivety, kuten 30 esimerkiksi dikloorimetaani. Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, mutta reaktio suoritetaan lämpötilassa -20 - 100 °C, tavallisesti huoneen lämpötilassa.
111265 163
Reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen käytetyn liuottimen laadusta ja reaktion lämpötilasta. Kun reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa käyttämällä dikloorime-taania liuottimena, se on täydellinen 30 minuutissa.
5 Vaihe 41 Tässä vaiheessa lopullinen tuote (1) voidaan valmistaa antamalla nukleotidin 3’-H-fosfonaatin (10), joka on valmistettu vaiheessa 40 CPG-sidotun ODN:n kanssa (3, 4a, 4b, 5, 6a—6d, 7a tai 7b), joka syntetisoidaan syntetisoijalla ja poistetaan suoja 10 5’-pääty DMT-ryhmä yksinomaan, jolla on suojaryhmiä emäksessä ja fosforihappo- ^ osuuksia käyttämällä kondensointiainetta kuten pivaloyylikloridia happamuuden poistoaineen läsnäollessa H-fosfonihappodiesterihapposidoksen tuottamiseksi, muuttamalla H-fosfonihapporyhmä fosforihappodiesteriryhmäksi käyttämällä hape-tusainetta, poistamalla ODN CPG-sidotusta ODNrstä ja samanaikaisesti poistetaan 15 emäsosuuden suojaryhmä emäksisissä olosuhteissa ja lopulta puhdistetaan. Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon. Edullinen liuotin on vedetön asetnitriili. Esimerkkejä kondensointiaineista ovat happokloridit ja fosforikloridit, edullisesti pivaloyylikloridi.
20 OD:N H-fosfonihapon hapettamiseen fosforihappodiesterihmälle käytetyn hapetusai-^ neen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sitä voidaan käyttää hapetusaineena hapetusreaktioissa. Esimerkkejä sopivista hapetusaineista ovat: epäorgaaniset metallioksidit mukaanlukien mangaanioksidit, kuten esimerkiksi kaliumpermanganaatti tai mangaaniidioksidi; ruteniumoksidit, kuten esimerkiksi 25 ruteniumtetraoksidi; seleenioksidit, kuten esimerkiksi seleenidioksidi; rautayhdisteet, kuten esimerkiksi ferrikloridi; osmiumyhdisteet, kuten esimerkiksi osmiumtetraoksi-di; hopeayhdisteet, kuten esimerkiksi hopeaoksidi; elohopeayhdisteet, kuten esimerkiksi elohopea-asetaatti; lyijyoksidiyhdisteet, kuten esimerkiksi lyijyoksidi tai lyijytetraoksidi; kromihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi kaliumkromaatti, kromiha-30 pon ja rikkihapon yhdistelmä tai kromihapon ja pyridiinin yhdistelmä; ja seriumyh-disteet, kuten esimerkiksi seriumammoniumnitraatti (CAN); epäorgaaniset hapetusai-neet mukaanlukien halogeenimolekyylit, kuten esimerkiksi kloori, bromi- tai 111265 164 jodimolekyyli; periodidit, kuten esimerkiksi natriumperiodidi; otsoni; vetyperoksidi; typpiyhdisteet, kuten esimerkiksi typpihapoke; kloorihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi natriumkloriitti; ja persulfaattiyhdisteet, kuten esimerkiksi kaliumpersulfaatti tai natriumpersulfaatti; ja orgaaniset hapetusaineet mukaanlukien reagenssi, jota on 5 käytetty DMSO-hapetuksessa (dimetyylisulfoksidin ja disykloheksyylikarbodi-imidin, oksalyylikloridin, etikkahappoanhydridin tai fosforipentakloridin kompleksi tai pyridiinin ja rikkianhydridin kompleksi); peroksidit, kuten esimerkiksi tert-butyyli-hydroperoksidi; stabiilit kationit, kuten esimerkiksi trifenyylimetyylikationi; sukkini-imidit, kuten esimerkiksi N-bromisukkini-imidi; hypokloorihappoyhdisteet, kuten 10 esimerkiksi tert-butyylihypokloriitti; atsodikarboksyylihappoyhdisteet, kuten esimer-kiksi atsodikarboksylaatti; disulfidien, kuten esimerkiksi dimetyylisulfidin, difenyyli-disulfidin tai dipyridyylidisulfidin ja trifenyylifosfiinin yhdistelmä; nitriitit, kuten esimerkiksi metyylinitriitti; tetrahalogenisoidut yhdisteet, kuten esimerkiksi tetrabro-mimetaani; ja kinoniyhdisteet, kuten esimerkiksi 2,3-dikloori-5,6-disyano-p-bentso-15 kinoni (DDQ); edullisemmin jodi.
Happamuuden poistoaineena kyseeseen tulee heterosykliset amiinit kuten pyridiini tai dimetyyliaminopyridiini ja alifaattiset amiinit, kuten esimerkiksi trimetyyliamiini, trietyyliamiini tai di-isopropyylietyyliamiini; edullisesti alifaattiset amiinit (varsinkin 20 di-isopropyylietyyliamiini). Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, mutta reaktio suoritetaan normaalisti lämpötilassa -50 - 50 °C, edullisesti huoneen lämpöti- ^ lassa.
Reaktioon vaadittu aika vaihtelee riippuen lähtöaineen ja käytetyn liuottimen laadusta 25 samoin kuin reaktiolämpötilasta, mutta reaktio suoritetaan normaalisti lämpötilassa 5 minuuttia - 30 tuntia. Kun reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa, se on edullisesti täydellinen 30 minuutissa.
Halkaiseminen ODN CPG-sidotusta ODNtstä ja suojaryhmän poisto, paitsi 5’-pääty 30 substituentti suoritetaan sinänsä tunnetuilla menetelmillä, [J. Am. Chem. Soc., 103.
3185 (1981)].
-111265 165
Reaktioseos, joka sisältää yleisen kaavan (1) mukaiset yhdisteet puhdistetaan tavanomaisilla puhdistustekniikoilla, esim. erilaisilla kromatografiatekniikoilla, joihin kuuluu käänteisfaasi ja iomnvaihtokromatografia (käsittää korkean nopeuden neste-kromatografian) mainitun yleisen kaavan (1) mukaisen yhdisteen tuottamiseksi.
5
Esillä olevalla keksinnöllä saadaan lisäksi uusi menetelmä oligodeoksiribonukleotidi-en ja oligodeoksiribonukleotidijohdannaisten valmistamiseksi. Kaavan (11) mukaiset uudet oligodeoksiribonukleotidit valmistetaan uudella menetelmällä, johon tyypillisesti kuuluu yleisen kaavan (1) mukaiset uudet yhdisteet. Lisäksi käytettäväksi uudessa 10 menetelmässä, esillä olevalla keksinnöllä saa uusia väliaineyhdisteitä kuten konkreettisemmin määritellään.
Seuraavassa kuvauksessa käytetään erilaisia määritelmiä substituenttiryhmille, mutta vastaavuutta erilaisten määritelmien välillä voidaan helposti nähdä. Siten esim. 15 samankaltaisutta voidaan nähdä yleisen kaavan (1) mukaisten yhdisteiden substi-tuenttiryhmän R^R^R^Z ja substituenttiryhmän R4,R5,R6,Z välillä, jotka on esitetty yhdisteille, joita käytetään ja tuotetaan uudella menetelmällä. Lisäksi on välttämätöntä huomata, että ryhmät, jotka on esitetty alaindeksillä, kuten R1,R2,Y1, jne. eivät aina ole identtisiä niiden ryhmien kanssa, jotka on esitetty yläindeksillä, 20 kuten R^R^Y1, jne.
(
Keksinnön tältä näkökannalta keksinnön mukaiseen menetelmään kuuluu oligodeoksi-ribonukleotidin tuottaminen, jolla on substituoitu fosfaatti 3’-päädyssä, erityisemmin esillä olevalla keksinnöllä saadaan uusia sideyhdisteitä polymeerin kanssa käytettä-25 väksi käänteisfaasiaineiden valmistuksessa oligodeoksiribonukleotidien synteesissä, kiinteän faasin materiaaleissa voi olla suojattu hydroksiryhmä sidosaineen päässä polymeeritukeen, josta sitten voidaan poistaa suoja ja antaa reagoida nukleotidien lisäämiseksi. 1
Siten esim. esillä olevalla keksinnöllä saadaan sidosyhdisteitä kuten seuraavat yhdistet (12), joiden kanssa polymeerituet voivat antaa halutut suojatut kiinteät materiaalit (14) yhdisteiden (22) suojan poistamiseksi ja sen jälkeinen reaktio 111265 166 yhdisteiksi (24,25 ja 27) lisättyjen nukleotidien kanssa.
Erään suoritusmuodon mukaisesti esillä olevassa menetelmässä tuotetaan kaavan (11) mukainen yhdiste: 5 R4 X3
Rs - 2 -Y2 0 —· O - ? OH
R6 Y3-R7 10 ) [jossa R4,R5,R6 ja ryhmä Z (jossa R4,R5,R6 voivat olla samanlaisia tai erilaisia ja kukin on riippumattomasti vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia, valinnaisesti substituoitu aryyliryhmä tai valinnaisesti substituoitu antrakinonyyliryh-15 mä; Z on hiili- tai piiatomi; R5, R6 ja Z voivat yhdessä olla fluorenyyliryhmä tai ksantenyyliryhmä; tai R4, R5, R6 ja Z voivat yhdessä olla vetyatomi); R7 on vetyatomi, valinnaisesti substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia, valinnaisesti substituoitu aryyliryhmä tai valinnaisesti substituoitu aralkyyliryhmä; Y2 voi olla samanlainen tai erilainen ja on happiatomi, rikkiatomi tai NH-ryhmä; Y3 on 20 happiatomi, rikkiatomi, NH-ryhmä; alkyleeniryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia tai fenyleeniryhmä; X3 on happi- tai rikkiatomi; ja D on oligodeoksiribonukleotidi, jonka ketjunpituus on 2—20, sillä edellytyksellä että hydroksyyliryhmä 5’- ja 3’-päätteissä ei sisälly D:hen]; 25 mainimssa menetelmässä annetaan kaavan (12) mukaisen yhdisteen: R\ (6) 30 V-C-0-CH2CHrX'-A-C-V (12) R3 111265 167 [jossa R1, R2 ja R3 voivat olla samanlaisia tai erilaisia ja jokainen on itsenäisesti vetyatomi tai alkoksiryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia; X1 on ryhmä -S-, -SO- tai -S02; A on ryhmä -(CH2)h- (jossa h on kokonaisluku 1—16), ryhmä -(CH2)hO- (jossa h on kokonaisluku 1—16), ryhmä -(CH2)j-0-C0-(CH2)k- (jossa j 5 on positiivinen kokonaisluku, k on 0 tai positiivinen kokonaisluku ja j + k on 2—16) tai ryhmä -(CH2)j-NH-CO-(CH2)k- (jossa j on positiivinen kokonaisluku, k on 0 tai positiivinen kokonaisluku ja j + k on 2—16), ryhmä -(CH2)j-S-CO-(CH2)k- (jossa j on positiivinen kokonaisluku, k on 0 tai positiivinen kokonaisluku ja j + k on 2—16) tai ryhmä -(CH2)n-0-C0-CH2(0CH2CH2)p-0CH2- (jossa n on positiivinen 10 kokonaisluku, p on 0 tai positiivinen kokonaisluku ja j + k on 2—100); ja Y1 on ^ hydroksyyliryhmä, valinnaisesti substituoitu fenyylioksiryhmä tai etyylioksiryhmä, joka voi olla substituoitu halogeenilla.] reagoida yleisen kaavan (13) mukaisen polymeeriaineen kanssa: 15 -.13 ) [jossa X2 on happiatomi, rikkiatomi tai NHA-ryhmä; ja P on polymeeriaine] (sillä 20 edellytyksellä, että kun Y1 yleisessä kaavassa (12) on hydroksyyliryhmä, yleisen ^ kaavan (12) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida karboksyylihappoa aktivoivan aineen kanssa ennen reaktiota polymeeriaineen (13) kanssa polymeerin muodostamiseksi, jolla on yleinen kaava (14): 25 B- fe)
R2 /_ O
(Cj)-- C - OCH2CH 2- X' - A - C -X2 e.··.; ” ^ R3 111265 168 [jossa Ι^,Ι^,Ι^,Χ^Α,Χ2 ja B tarkoittavat samaa kuin edellä; ja tekemällä tuloksena saadulle polymeerille, joka on kaavan (14) mukainen, DNA-ketjun laajennuskäsittely käyttämällä DNA-syntetisoijaa.
5 Tämän keksinnön mukainen menetelmä esitetään seuraavissa vuokaavioissa.
) r ) 169 111265
O
x-a'-cch η ν.. .
Vaihe 1 RV
Ρ5’ - fe)
R2-V^\V
HOCH,CH,SH -1 (0>-C— 0~CH2CHrX’-A'-CH
(*6) '—(Λ O R3-rQj 05)
HOCH2CH2*X,-A-CCH
(\7) 9
B'v Vaihe 2 (CHj)m O
, föl 1 (10) J ? ( * ° XCCQ ··
7 0yc-OCH2CH2-X'-A*COH Vaihe 3 ^ 1J
R3-£0] 085 Vaihe 5
Vaihe 4 a§> s (Oyc-O-Cn^-X'-A-C-Y· R=-^] C>
Vaihe 6 ΗΧ2Λ«~ν(ρ) R'\^l 03) R2\^Sr 9 ?QV c-o*ch2ch2-x'-a-c -x2 ( 5¾) NT1 Vaihe 7
O
ho-ch2ch2-x’-a-c-x2 ~-~© (12) OMTO-I _ a· OMTOi - 3’ OMTO-1 3' l.ö„ ΰ,„, I OR9» OR9» 9 R9i OMTOn n s’ „7 ,.Ρ, V 0=(=^-^7 H-P=0 L°vl R7-Y3 N<v u , > V Ί VO' o- O R’* 9
XiiP-OCHiOVX’-A-CX2-(p) Y3-R7 (14) 111265 170 DMTCH n Β· p ? R9e 9 χ3·.ρ-θ€Η20Η2-Χ'-Α-0·Χ2 — V3-R7 Y R (14)
Vaihe 9 DMT°-f“L °/ O R91 ) 0=P10--n B· L ^
OR91 O
X3=P-OCH2CH2-X’-A-C-X2'------'© ( ^-R7
Vaihe .0 R5"|s'Y2"LOo" RS-?;yZT0j' RS'?s'Y2_L07' R4 (X6) OR9· a 6’) gg9a (16”) ofc R5-|;Y\o?· Ba.0-R-N;v R“o-P=o of 0·
R \ J V O' H
OR9· ) • OR91 0=P-0--1 n B· L ^Tp
OR91 O
X3=P-OCH2CH2-X1-A-C-X2·-Θ (1.7)
Vaihe 11 ^ -R
R4 e. ,. X3
Rs-Z-Y2 D—O—P-OH
Rs Y3-R7 (U) 111265 171
XfCHjjjOH
o α9) rc // \ (CH,)k O 9
v_ / Vaihe 12 X-A’-COH
ö \_/ «>
85 XiCH^SH
( (3 0) > - , s ^Q^-O-CWiCHj-x'-A'-OH Vaihe a ^O/^0CHsCH,-X'-A-C0H - 1
io) HOOCCH2(OCH2CH2)nOCH2COOH r3tOJ
(3D
(19) (l8> 111265 172
Edellä olevissa vuokaavioissa ryhmillä R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X1, X2, X3, P, Y1, Y2, Y3, A ja Z on samat merkitykset, kuten edellä on määritelty (kuitenkin muissa yhdisteissä kuin yhdisteessä (11) R4, R5, R6 ja Z yhdessä eivät ole vetyatomi). R8a on metyyliryhmä tai syanoetyyliryhmä; R8b on fenyyliryhmä, joka on 5 valinnaisesti substituoitu klooriryhmällä; R8 on metyyliryhmä, syanoetyyliryhmä tai fenyyliryhmä, joka on valinnaisesti substituoitu klooriryhmällä; R9a on vetyatomi tai vetyryhmä, jossa on on suojaryhmä; X on halogeeniatomi (edullisesti kloori, bromi ja jodi); A1 on alkyleeniryhmä, jossa on 1—20 hiiliatomia; m on kokonaisluku 1—14; n on kokonaisluku 1—28; B, B’ ja B" ovat jokainen adeniininukleotidin, 10 guaniininukleotidin, tymiininukleotidin, urasilnukleotidin ja sytosiininukleotidin emäsosuus, joka on suojattu emäs- fosfaattiosuuksissa (ne pitäisi valita, jotta saataisiin haluttu emässekvenssi); sillä edellytyksellä että B’ on D:n 3’-päätenukleotidin emäsosuus, jolla on haluttu emässekvenssi; B" on D:n 5’-päätenukleotidin emäs-osuus, jolla on haluttu emässekvenssi; D on haluttu oligodeoksiribonukleotidi (sillä 15 edellytyksellä että 5’-päätehydroksyyliryhmää ja 3’-päätehydroksyyliryhmää ei ole; Q on halogenoalkyyliryhmä, halogenofenyyliryhmä tai nitrofenyyliryhmä, kuten esimerkiksi 2,2,2-trikloorietyyliryhmä, 2,2-dikloorietyyliryhmä, 2-kloorietyyliryh-mä, 2,2,2-tribromietyyliryhmä, 2,2-dibromietyyliryhmä, 2-bromietyyliryhmä, 2-nitrofenyyliryhmä, 4-nitrofenyyliryhmä, 2,4-dinitrofenyyliryhmä, 2,4,5-trikloori-20 fenyyliryhmä ja 2,3,4,5,6-pentakloorifenyyliryhmä (edullisesti trikloorietyyliryhmä ja ortonitrofenyyliryhmä); V on alempi alkyyliryhmä (edullisesti metyyli-, etyyli-ja .
isopropyyliryhmät, varsinkin isopropyyliryhmä).
Seuraavaksi jokainen vaihe kuvataan yksityiskohtaisesti.
25
Vaihe 1 Tässä vaiheessa valmistetaan yhdiste (17) antamalla 2-merkaptoetanolin (16) reagoida omegahalogeenikarboksyylihapon (15) kanssa inertissä liuottimessa happoa sitovan 30 aineen läsnäollessa.
Käytetty liuotin ei ole erityisemmin rajoitettu, ellei se vaikuta reaktioon ja siihen 111265 173 kuuluu aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni ja ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi metyleenikloridi ja kloroformi; eetterit, kuten esmerkiksi eetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani ja dimetoksietaani; amidit, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidi, dimetyyliasetamidi ja heksametyylifosforit-5 riamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi; alkoholit, kuten esimerkiksi metanoli, etanoli, n-propanoli, isopropanoli, n-butanoli, isobutanoli ja isoamyy-lialkoholi; laimeat hapot, kuten esimerkiksi vesipitoinen rikkihappo; laimeat emäkset, kuten esimerkiksi vesipitoinen natriumhydroksidi; vesi; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni; heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini; ja 10 nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili, edullisesti ketonit, kuten asetoni ja alkoholit, kuten esimerkiksi etanoli ja propanoli.
Käytettäviin happoa sitoviin aineisiin kuuluu alkaalimetallikarbonaatit, kuten esimerkiksi kaliumkarbonaatti ja natrtiumkarbonaatti; alkalimetallivetykarbonaatit, kuten 15 esimerkiksi natriumvetykarbonaatti; alkalimetallihydroksidit, kuten esimerkiksi natriumhydroksidi ja kaliumhydroksidi; ja orgaaniset amiinit, kuten trietyyliamiini, edullisesti alkalimetalliamiinit, kuten esimerkiksi trietyyliamiini, edullisesti alkalime-tallikarbonaatit (varsinkin kaliumkarbonattti).
20 Reaktion lämpötila ja reaktioaika vaihtelevat liuottimesta, happoa sitovasta aineesta, ^ jne. riippuen. Reaktio suoritetaan palautuksessa kuumentamalla 8 tuntia, kun käytetään kaliumkarbonaattia.
Kun reaktio on mennyt loppuun, haluttu yhdiste eristetään reaktioseoksesta ta-25 vanomaisin keinoin.
Esimerkiksi kun reaktioseos on sopivasti neutralisoitu ja liukenemattomat aineet, jos niitä on läsnä, poistetaan suodattamalla, veteen sekoittumaton orgaaninen liuotin kuten etyyliasetaatti lisätään reaktioseokseen. Kun tuloksena saatu seos pestään 30 vedellä, orgaaninen kerros, joka sisältää halutun yhdisteen, erotetaan ja kuivataan vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja sitten haihdutetaan pois liuotin halutun yhdisteen saamiseksi.
111265 174
Siten saatu haluttu yhdiste voidaan puhdistaa tavanomaisin keinoin kuten jälleenki-teyttämällä, jälleensaostamalla, kromatografialla, jne. haluttaessa.
Vaihe 2 5 Tässä vaiheessa valmistetaan yhdiste (18), joka vstaa yhdistettä (17), jonka hydrok-syyliryhmä suojataan antamalla yhdisteen (17) reagoida suojareagenssin kanssa, joka voidaan eliminoida (edullisesti dimetoksitrityylikloridi) happamissa olosuhteissa inertissä liuottimessa happoa sitoavan aineen läsnäollessa.
10 ) Käytettävää liuotinta ei erityisemmin rajoiteta niin kauan kuin se ei haittaa reaktiota ja voi liuottaa lähtöaineet tiettyyn asteeseen ja siihen kuuluu aromaattiset hiilivedyt kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni ja ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt kuten esimerkiksi metyleenikloridi ja kloroformi; eetterit, kuten esimerkiksi eetteri, 15 tetrahydrofuraani, dioksaani ja dimetoksietaani; amidit, kuten esimerkiksi dimetyyli-formamidi, dimetyyliasetamidi ja heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketo-ni; heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini; ja nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili, edullisesti heterosykliset amiinit (erityisesti pyridiini).
20 Käytetyt suojareagenssit sisältävät trityylihalideja, kuten esimerkiksi trityylikloridin, j monometoksitrityylikloridin, dimetoksitrityylikloridin ja trimetoksitrityylikloridin, edullisesti dimetoksitrityylikloridin.
25 Käytetty happoa sitova aine ei ole erityisen rajoitettu, ellei se vaikututa reaktion ja ellei se hajota tuotetta ja lähtöaineita ja se sisältää edullisesti aromaattisia amiineja, kuten esimerkiksi pyridiinin ja dimetyyliaminopyridiinin.
Vaikka reaktion lämpötila ja reaktioaika vaihtelee riippuen reagenssien happoa 30 sitovan aineen laadusta, reaktio suoritetaan huoneenlämmössä 2 tuntia, kun käytetään dimetoksitrityylikloridia suojareagenssina ja pyridiiniä liuottimena ja myös happoa sitovana aineena.
111265 175
Kun reaktio on mennyt loppuun, haluttu yhdiste eristetään reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin.
Esimerkiksi kun reaktioseos on sopivasti neutralisoitu ja liukenemattomat aineet, jos 5 niitä on läsnä, poistetaan suodattamalla, veteen sekoittumaton orgaaninen liuotin kuten etyyliasetaatti lisätään reaktioseokseen. Kun tuloksena saatu seos pestään vedellä, orgaaninen kerros, joka sisältää halutun yhdisteen, erotetaan ja kuivataan vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja sitten haihdutetaan pois liuotin halutun yhdisteen saamiseksi.
( 10
Siten saatu haluttu yhdiste voidaan puhdistaa tavanomaisin kemoin kuten jälleenki-teyttämällä, jälleensaostamalla, kromatografialla, jne. haluttaessa.
Vaihe 3 15 Tässä vaiheessa valmistetaan yhdiste (IS) antamalla yhdisteen (19) reagoida dikar-boksyylihappoanhydridin kanssa (20) inertissä liuotimessa.
Käytetty liuotin ei ole erityisen rajoitettu niin kauan kuin se ei vaikuta reaktioon ja 20 se voi liuottaa lähtöaineita tiettyyn rajaan ja se sisältää aromaattisia hiilivetyjä, kuten ^ esimerkiksi bentseenin, tolueenin ja ksyleenin; halogensoituja hiilivetyjä, kuten esimerkiksi metyleenikloridin ja kloroformin; eettereitä, kuten esimerkiksi eetterin, tetrahydrofuraanin, dioksaanin ja dimetoksietaanin; amideja, kuten esimerkiksi dimetyylifoimamidin, dimetyyliasetamidin ja heksametyylifosforitriamidin; sulfoksi-25 deja, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidin; ketoneja, kuten esimerkiksi asetonin, metyylietyyliketonin; heterosyklisiä amiineja, kuten esimerkiksi pyridiinin ja nitriilejä, kuten esimerkiksi asetnitriilin, edullisesti halogenisoituja hiilivetyjä, kuten esimerkiksi metyleenikloridin. 1 Käytetty happoa sitova aine sisältää pyridiinejä, kuten esimerkiksi pyridiinin, dimetyyliaminopyridiinin ja 4-pyrrolidinopyridiinin, edullisesti dimetyyliaminopyri-diini.
111265 176
Vaikka käytettävää dikarboksyylihappoanhydridiä ei erityisemmin rajoiteta niin kanan kuin se on alfa-omega-alkyylidikarboksyylihapon anhydridi, jossa on 3-16 hiiliatomia ja, se on edullisesti sukkiinianhydridi.
5 Vaikka reaktion lämpötila ja reaktioaika vaihtelee riippuen happoanhydridistä, happoa sitovan aineen laadusta, jne. reaktio suoritetaan huoneenlämmössä 30 minuuttia, kun käytetään sukkiinihappoanhydridiä ja dimetyyliaminopyridiimä käytetään happoa sitovana aineena.
10 Kun reaktio on mennyt loppuun, haluttu yhdiste eristetään reaktioseoksesta ta- . vanomaisin keinoin.
Esimerkiksi kun reaktioseos on sopivasti neutralisoitu ja liukenemattomat aineet, jos niitä on, poistetaan suodattamalla, veteen sekoittumaton orgaaninen liuotin kuten 15 etyyliasetaatti lisätään reaktioseokseen. Kun tuloksena saatu seos pestään vedellä, orgaaninen kerros, joka sisältää halutun yhdisteen, erotetaan ja kuivataan vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja sitten haihdutetaan pois liuotin halutun yhdisteen saamiseksi.
20 Siten saatu haluttu yhdiste voidaan puhdistaa tavanomaisin keinoin, kuten esimerkiksi jälleenkiteyttämällä, jälleensaostamalla, kromatografialla, jne., tarvittaessa. ^
Vaihe 4 25 Tässä vaiheessa muodostetaan aktiivinen esteri (12) antamalla yhdisteen (18) mukaisen karboksyyliryhmän, jossa on vapaa karboksyyliryhmä, reagoida esteriä muodostavan reagenssin kanssa, ja sen jälkeen tapahtuu reaktio valinnaisesti substitu-oidun fenolin kanssa. 1 Käytettyä liuotinta ei erityisesti rajoiteta, ellei se vaikuta reaktioon ja siihen kuuluu aromaattiset hiilivedyt, kuten bentseeni, tolueeni ja ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi metyleenikloridi, kloroformi, hiilitetrakloridi, dikloorietaani, 111 111265 klooribentseeni ja diklooribentseeni; esterit, kuten esimerkiksi etyyliformaatti, etyyliasetaatti, propyyliasetaatti, butyyliasetaattijadietyylikarbonaatti; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni, metyyli-isobutyyliketoni, isoforoni ja sykloheksanoni; nitriyhdisteet, kuten esimerkiksi nitroetaani ja nitrobentseeni; 5 nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili ja isobutyyrinitriili; amidit, kuten esimerkiksi formamidi, dimetyyliformamidi (DMF), dimetyyliasetamidi ja heksametyylifosforit-riamidi; ja sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi ja sulforaani, edullisesti halogenisoidut hiilivedyt (varsinkin metyleenikloridi) ja amidit (varsinkin dimetyyliformamidi).
( 10 Käytettyä fenolia ei erityisesti rajoiteta niin kauan kuin sitä voidaan käyttää aktiivisena esterinä ja että siihen kuuluu 4-nitrofenoli, 2,4-dinitrofenoli, 2,4,5-trikoori-fenoli, pentakloorifenoli ja 2,3,5,6-tetrafluorifenoli, edullisesti pentakloorifenoli.
15 Käytetty esterin muodostava reagenssi on esimerkiksi Nrhydroksiyhdisteet, kuten esimerkiksi N-hydroksisukkini-imidi, 1-hydroksibentsotriatsoli ja N-hydroksi-5-norbomeeni-2,3-dikarboksi-imidi; di-imidatsoliyhdisteet, kuten esimerkiksi Ι,Γ-oksalyylidi-imidatsoli ja Ν,Ν’-dipyridyylidisulfidi; sukkinihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi Ν,Ν’-disukkini-imidyylikarbonaatti; fosfiinikloridiyhdisteet, kuten 20 esimerkiksi N,N’-bis(2-okso-3-oksatsolidinyyli)fosfiinikloridi; oksalaattiyhdisteet, ^ kuten esimerkiksi N,N’-disukkini-imidyylioksalaatti(DSO), N,N-diftalimidyylioksa- laatti (DPO), N,N’-bis(norbomenyylisukkini-imidyyli)oksalaatti (BNO), Ι,Γ-bis(bentsotriatsolyyli)oksalaatti (BBTO), 1,1 ’-bis(6-klooribentsotriatsolyli)oksalaatti (BCTO) ja 1,1 ’-bis(6-trifluorimetyylibentsotriatsolyyli)oksalaatti (BTBO); ja karbodi-25 imidit, kuten esimerkiksi disykloheksyylikarbodi-imidi (DCC), edullisesti di-imidatsoliyhdisteet ja karbodi-imidit (varsinkin DCC).
Vaikka reaktion lämpötila ja reaktioaika vaihtelee riippuen esteriä muodostavasta reagenssista ja käytetystä liuottimesta, reaktio suoritetaan lämpötilassa 0—100 °C 30 5—50 tuntia ja varsinkin kun pentakloorifenolia ja DDCrtä käytetään DMFrssä, reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa 18 tuntia.
111265 178
Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste eristetään reaktioseoksesta tavanomaisin menetelmin.
Esimerkiksi sen jälkeen kun reaktioseos on sopivasti neutralisoitu ja liukenemattomat 5 aineet, jos niitä on läsnä, poistetaan suodattamalla, veteensekoittumaton orgaaninen liuotin, kuten esimerkiksi etyyliasetaatti, lisätään reaktioseokseen. Sen jälkeen kun reaktioseos on pesty vedellä, orgaaninen kerros, joka sisältää haluttua yhdistettä, erotetaan ja kuivataan vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja sen jälkeen haihduttamalla liuotin, jolloin saatiin haluttu yhdiste.
10 ) Näin saatu haluttu yhdiste voidaan vielä puhdistaa tavanomaisin menetelmin, kuten esimerkiksi jälleenkiteyttämällä, jälleensaostamalla, kromatografialla, jne., tarvittaessa.
15 Vaihe 5 Tässä vaiheessa valmistetaan yhdiste (12) antamalla yhdisteen (19) reagoida yhdisteen (21) kanssa inertissä liuottimessa ja happoa sitovan aineen läsnäollessa.
20 Käytettyä liuotin ei erityisesti rajoiteta, ellei se vaikuta reaktioon ja siihen kuuluu aromaattiset hiilivedyt, kuten bentseeni, tolueeni ja ksyleeni; halogenisoidut hiilive- j dyt, kuten esimerkiksi metyleenikloridi, klroformi, hiilitetrakloridi, dikloorietaani, klooribentseeni ja diklooribentseeni; esterit, kuten esimerkiksi etyyliformaatti, etyyliasetaatti, propyyliasetaatti, butyyliasetaattijadietyylikarbonaatti; ketonit, kuten 25 esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni, metyyli-isobutyyliketoni, isoforoni ja sykloheksanoni; nitroyhdisteet, kuten esimerkiksi nitoretaani ja nitrobentseeni; nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili ja isobutyyrinitriili; amidit, kuten esimerkiksi formamidi, dimetyyliformamidi (DMF), dimetyyliasetamidi ja heksametyylifosforit-riamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi ja sulforaani, edullisesti 30 halogenisoidut hiilivedyt, varsinkin metyleenikloridi.
Käytettyn happoa sitova aine on: orgaaniset emäkset, kuten esimerkiksi trietyyliamii- 111265 179 ni, tributyyliamiini, di-isopropyylietyyliamiini, N-metyylimorfoliini, pyridiini, 4-(N,N-dimetyyliamino)pyridiini, N,N-dimetyylianiliini, Ν,Ν-dietyylianiliini, 1,5-diatsbisyklo[4.3.0]non-5-eeni, l,4-diatsabisyklo[2.2.2[oktaani (DABCO) ja 1,8-diatsabisyklo[5,4,0]undek-7-eeni (DB), edullisesti orgaaniset emäkset, varsinkin 5 pyridiini ja N-metyylimorfoliini.
Vaikka reaktion lämpötila ja reaktioaika vaihtelee riippuen käytetystä happoa sitovasta aineesta, reaktio suoritetaan tavallisesti lämpötilassa 0—40 °C 1—5 tuntia.
10 Reaktio mentyä loppuun haluttu tuote voi eristää reaktioseoksesta tavanomaisin menetelmin.
Esimerkiksi sen jälkeen kun reaktioseos on sopivasti neutralisoitu ja liukenemattomat aineet, jos niitä on, poistetaan suodattamalla, veteensekoittumaton orgaaninen liuotin, 15 kuten esimerkiksi etyyliasetaatti, lisätään reaktioseokseen. Sen jälkeen kun reaktioseos on pesty vedellä, orgaaninen kerros, joka sisälsi halutun yhdisteen, erotetaan ja kuivataan vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja sen jälkeen haihduttamalla liuotin, jolloin saatiin haluttu yhdiste.
20 Näin saatu haluttu yhdiste voidaan vielä puhdistaa tavanomaisin menetelmin, kuten ^ esimerkiksi jälleenkiteyttämällä, jälleensaostamalla, kromatografialla, jne., tarvittaes sa.
Vaihe 6 25 Tässä vaiheessa valmistetaan polymeerijohdannainen (14), jota käytetään kantajana, kun syntetisoidaan oligonukleotidi antamalla yhdisteen (12), jossa on aktivoitu karboksyyliryhmä, joka on saatu vaiheessa (5), reagoida polymeerin (13) kanssa kuten lasin (CPG), jossa on säädetty huokoisuus, johon aminoryhmä, hydroksyyli-30 ryhmä, sulfhydryyliryhmä, jne. sidotaan alkyleeniryhmän kautta inertissä liuottimes-sa.
111265 180
Vaikka käytetty polymeeri (13) tässä vaiheessa ei ole erityisen rajoitettu niin kauan kuin sitä tavallisesti käytetään kantajana, hiukkas-koko, kolmiulotteisen verkkomaisen rakenteellinen pinta-ala hydrofiilisen ryhmän paikan osuus, kemiallinen koostumus, paineen vastustuskyky, jne. kantajassa tulisi tarkistaa.
5 Käyttökelpoinen kantaja on polysakkaridijohdannaiset, kuten esimerkiksi selluloosa-dekstraani ja agaroosi, synteettiset polymeerit, kuten esimerkiksi polyakryyliamidi-geeli, polystyreenihartsit ja polyetyleeniglykoli ja epäorgaaniset aineet kuten silika-geeli, huokoinen lasi ja metallioksidit, jotka on tyypillisesti ei-rajoittavalla tavalla 10 kaupallisia käyttökelpoisia kantajia, kuten esimerkiksi Aminopropyyli-CPG ja ^ pitkäketjuinen aminoalkyyli-CPG (jota valmistaa CPG Inc.); Cosmosil NH2 ja Cosmosil Diol (jota valmistaa Nakarai Tesuku); CPC-Silica Carrier Silane Coated, Aminopropyl-CPG-550A, Aminopropyl-CPG-550A, Aminopropyl-CPG-1400A ja polyetyleeniglykoli 5000 monometyylieetteri (jota valmistaa Furuka Co.), p-alkoksi-15 bentsyylialkoholihartsi, aminometyylihartsi ja hydroksimetyylihartsi (joita valmistaa Kokusan Kagaku K.K.); ja polyetyleeniglykoli 12000 monometyylieetteri (jota valmistaa Union Carbide).
Lisäksi funktionaalinen ryhmä, joka on sidottu kantajaan, on edullisesti aminoryhmä, 20 sulfhydryyliryhmä ja hydroksyyliryhmä.
) Käyttökelpoista liuotinta ei erityisesti rajoiteta niin kauan kuin se ei haittaa reaktiota ja voi liuottaa lähtöaineet jossain määrin ja edullisia sellaisia ovat aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni ja ksyleeni; halogenisoidut hiilive-25 dyt, kuten esimerkiksi metyleenikloridi, kloroformi hiilitetrakloridi, dikloorietaani, klooribentseeni ja diklooribentseeni; esterit, kuten esimerkiksi etyyliformaatti, etyyliasetaatti, propyyliasetaatti, butyyliasetaattija dietyylikarbonaatti; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni, metyyli-isobutyyliketoni, isoforoni ja sykloheksanoni; nitroyhdisteet, kuten esimerkiksi nitroetaani ja nitrobentseeni; 30 nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili ja isobutyyrinitriili; amidit, kuten esimerkiksi formamidi, dimetyyliformamidi, dimetyyliasetamidi ja heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi ja sulforaani, edullisesti halo- 111265 181 genisoidut hiilivedyt (varsinkin metyleenikloridi) ja amidit (varsinkin dimetyyliforma-midi).
Reaktiolämpötila on tavallisesti -20 - 150 °C, edullisesti 0—50 °C.
5
Vaikka reaktio vaihtelee riippuen lähtöaineista, liuottimesta, käytetystä reaktion lämpötilasta, se on tavallisesti 1—200 tuntia, edullisesti 24—100 tuntia.
Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste eristetään reaktioseoksesta tavanomaisin ^ 10 menetelmin.
Esimerkiksi haluttu polymeerikantaja otetaan talteen suodattamalla reaktioseoksesta, pestään orgaanisella liuottimena kuten metyleenikloridilla ja kuivataan alennetussa paineessa, jolloin saadaan haluttu yhdiste.
15
Vaihe 7 Tässä vaiheessa valmistetaan yhdiste (22) antamalla yhdisteen (14) reagoida suojan-poistoreagenssien kanssa inertissä liuottimessa hydroksyyliryhmän suojaryhmän 20 selektiiviseksi eliminoimiseksi. Vaiheet 7—11 suoritetaan tavallisesti DNA-synte-^ tisoijassa.
Käytetty liuotin on edullisesti seuraaväa: aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni ja ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi mety-25 leenikloridi, kloroformi, hiilitetrakloridi, dikloorietaani, klooribentseeni ja dikloori-bentseeni; esterit, kuten esimerkiksi etyyliformaatti, etyyliasetaatti, propyyliasetaatti, butyyliasetaatti ja dietyylikarbonaatti; eetterit, kuten esimerkiksi dietyylieetteri, di-isopropyylieetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani, dimetoksietaani ja dietyleeniglykoli-dimetyylieetteri; alkoholit, kuten esimekiksi emtanoli, etanoli, n-propanoli, isopro-30 panoli, n-butanoli, isobutanoli, t-butanoli, isoamyylialkoholi, dietyleeniglykoli, glyseroli, oktanoli, sykloheksanoli ja metyylisellosolvi; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni, metyyli-isobutyyliketoni, isoforoni ja sykloheksanoni; 111265 182 nitroyhdisteet, kuten esimerkiksi nitroetaani ja nitrobentseeni; nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili ja isobutyyrinitriili; amidit, kuten esimerkiksi formamidi, dimetyyli-formamidi, dimetyyliasetamidi ja heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi ja sulforaani, edullisemmin alkoholit (varsinkin 5 metanoli ja etanoli) ja metyleenikloridi ja kun käytetään etikkhappoa suojapoistoai-neena, etikkahapon ja veden seos sisällytetään.
Vaikka käytettyä suojanpoistoainetta ei erityisesti rajoiteta, kunhan sitä tavanomaisesti käytetään ja jos suojaryhmä on trityyliryhmä, esimerkkejä ovat etikkahappo, 10 dikloorietikkahappo, difluorietikkahappo, kloorivetyhappo ja Lewis-happo kuten ) sinkkibromidi ja edullisia ovat etikkahappo, dikloorietikkahappo ja difluorietikkahappo.
Vaikka reaktion lämpötila vaihtelee riippuen reagenssista, lähtöaineista ja käytetystä 15 liuottimesta, se on tavallisesti -10 - 100 °C, edullisesti 0—50 °C.
Vaikka reaktioaika vaihtelee riippuen lähtöaineista, liuottimesta ja käytetystä reaktion lämpötilasta, se on tavallisesti 1 minuutti - 50 tuntia, edullisesti 1 minuuttia - 24 tuntia.
20
Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste eristetään reaktioseoksesta tavanomaisin ) menetelmin.
Esimerkiksi polymeerikantaja otetaan talteen suodattamalla reaktioseoksesta, pestään 25 orgaanisella liuottimena kuten metyleenikloridilla ja kuivataan alennetussa paineessa, jolloin saadaan haluttu yhdiste.
111265 183
Vaihe 8 Tässä vaiheessa valmistetaan yhdiste (24) antamalla yhdisteen (23), (23’) tai (23") reagoida, joilla on dimetoksitrityyliryhmä 5’-hydroksyyliryhmässä, jossa emäsosuus 5 on halutun emässekvenssin 3’-päädyssä ja 3’-hydroksyyliryhmässä on fosforin kautta, joka on sidottu siihen, haluttu alkyylioksi-, fenyylioksi-, aralkyylioksi-, aralkyyli- tai fenyyliryhmä, polymeeriaineen (22) kanssa ja sen jälkeen suorittamalla tioatisointi tai alkylaminointi haluttaessa sellaisen yhdisteen (24) saamiseksi, jolla on haluttu 3’-päädyssä nukleotidiyksikkö sidottuna polymeeriaineeseen, kuten CPG:hen.
( Käytetyt yhdisteet (23), (23’) tai (23") kuvataan seuraavassa.
(a) Jos annetaan yhdisteen (23) reagoida tässä vaiheessa, käytetään hapanta ainetta.
15 Käyttökelpoiset happamat aineet ovat sellaiset kuten esim. tetratsoli, edullisesti tetratsoli. Vaikka hapetusreaktiossa käytettyä hapetusainetta tässä vaiheessa ei erityisesti rajoiteta niin kauan kuin sitä tavallisesti käytetään hapetusreaktioissa, siihen edullisesti kuuluu epäorgaaniset metallihapetusaineet kuten mangaanioksidit, esim. kaliumpermanganaatti ja mangaanidioksidi; ruteenioksidit esim. ruteenitetroksi-20 di; seleeniyhdisteet, esim. seleenidioksidi; rautayhdisteet, esim. rauta-3-kloridi; os-( miumyhdisteet, esim. osmiumtetroksidi; hopeayhdisteet, esim. hopeaoksidi; eloho peayhdisteet, esim. elohopea-asetaatti; lyijyoksidiyhdisteet, esim. lyijyoksidi ja lyijytetroksidi; kromihappoyhdisteet, esim. kaliumkromaatti, kromihappo-rikkihappo-kompleksi jakromihappo-pyridiinikompleksi; ja seriumyhdisteet, esim. seriumammo-25 niumnitraatti; epäorgaaniset hapetusaineet kuten halogeenimolekyylit, esim. kloori-molekyyli, bromimolekyyli ja jodimolekyyli; peijodihapot, esim. natriumpeijodaatti; otsoni, vesipitoinen vetyperoksidi; typpihapokeyhdisteet, esim. typpihapoke; kloori-happoyhdisteet, esim. kaliumkloriitti ja natriumkloriitti; ja perrikkihappoyhdisteet, esim. kaliumpersulfaatti ja natriumpersulfaatti, ja orgaaniset hapetusaineet kuten ne 30 reagenssit, joita käytetään DMSO-hapetukseen (kompleksi, jossa on dimetyylisulfok-sidia ja disykloheksyylikarbodi-imidiä), oksalyylikloridietikkahappoanhydridi tai fosforipentoksidi tai pyridiinirikkihappo-anhydridikompleksi); peroksidit, esim. t- 111265 184 butyylihydroperoksidi; stabiilit kationit, esim. trifenyylimetyylikationi; sukkini-imidit, esim. N-bromisukkini-imidi, hypokloorihappoyhdisteet, esim. t-butyylihypo-kloriitti, atsodikarboksyylihappoyhdisteet, esim. atsodikarboksyylihappoesteri; disuldifit, esim. dimetyylisulfidi, difenyylidisulfidijadipyridyylidisulfidi ja trifenyy-5 lifosfiini; typpihapoke-esterit, esim. metyylinitriitti; hiilitetrahalidit, esim. metaanitet-rabromidi ja kinoniyhdisteet, esim. 2,3-dikloori-5,6-disyano-p-bentsokinoni (DQO), edullisesti jodi. Käytettyä liuotinta ei ole erityisen rajoitettu niin kauan kuin se ei vaikuta reaktioon ja se voi liuottaa lähtöaineet jossain määrin ja niihin kuuluu aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni ja ksyleeni; halo-10 genisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi metyleenikloridi ja kloroformi; eetterit, kuten ^ esimerkiksi eetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani ja dimetoksietaani; amidit, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidi, dimetyyliasetmaidi ja heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni; heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini; ja nitriilit, 15 kuten esimerkiksi asetnitriili, edullisesti heterosykliset amiinit (varsinkin pyridiini), nitriilit (varsinkin asetnitriili), eetterit (varsinkin tetrhydrofuraani) ja halogenisoidut hiilivedyt (varsinkin metyleenikloridi).
Reaktio suoritetaan lämpötilassa -50 - 100 °C ja vaikka reaktioaika vaihtelee riippuen 20 pääasiassa reaktion lämpötilasta, lähtöaineiden ja käytetyn liuottimen tyypeistä, se on tavallisesti 5 minuuttia - 15 tuntia. ) (b) Käytettyä liuotin, kun yhdisteen (23’) annetaan reagoida, ei ole erityistä rajoitettu, ellei se vaikuta reaktioon ja aromaattista amiinia, kuten esimerkiksi pyridiiniä, 25 käytetään edullisesti.
Siinä tapauksessa että yhdisteen (23’) annetaan reagoida, käytetään tavallisesti kondensointioainetta. 1 Käytetty kondensointiaine on esimerkiksi: disyklokarbodi-imidi (DCC), mesity-leenisulfonihappokloridi (Ms-Cl), tri-isopropyylibentseenisulfonihappokloridi, mesityleenisulfonihappotriatsolidi (MST), mesityleenisulfonihappo-3-nitrotriatsolidi 111265 185 (MSNT), tri-isopropyylibentseenisulfonihappotetratsolidi (TPS-Te), tri-isopropyyli-bentseenisulfonihapponitroimidatsolidi (TPS-NI) ja tri-isopropyylibentseeni-sulfonihappopyridyylitetratsolidi, edullisesti MSNT, TPS-Te ja TPS-NI. Vaikka reaktion lämpötila ei ole erityisen rajoitettu lämpötiloissa -10 - 100 °C, reaktio 5 suoritetaan tavallisesti huoneen lämpötilassa. Vaikka reaktioaika vaihtelee riippuen liuottimesta ja käytetystä reaktion lämpötilasta, se on 30 minuuttia siinä tapauksessa, että reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa käyttämällä pyridiiniä liuottimena reaktiolle.
^ 10 (c) Vaikka käyttökelpoista liuotinta kun yhdisteen (23") annetaan reagoida, ei erityisemmin rajoiteta, kunhan se ei haittaa reaktiota, edullisesti käytetään vedetöntä asetnitriiliä. Käytettynä reagenssina tai kondensointiaineena käytetään karboksyyliha-pon ja fosforihapon happoklorideja ja edullisesti pivaloyylikloridia.
15 Vaikka hapetusainetta oligonukleotidin hapetukseen, jossa on H-fosfonaattisidos, fosfodiesterityyppiseksi oligonukleotidiksi, ei erityisemmin rajoiteta niin kauan kuin sitä tavanomaisesti käytetään hapetusreaktioihin, edullisia ovat epäorgaaniset metallin hapetusaineet kuten mangaanioksidit, esim. kaliumpermanganaatti ja mangaanidioksidi; ruteniumoksidit, esim. ruteniumoksidi; seleeniyhdisteet, esim. seleenidioksidi; 20 rautayhdisteet, esim. rauta(III)kloridi; osmiumyhdisteet, esim. osmiumtetroksidi; ^ hopeayhdisteet, esim. hopeaoksidi; elohopeayhdisteet, esim. elohopea-asetaatti; lyijyoksidiyhdisteet, esim. lyijyoksidi ja lyijytetroksidi; kromihappoyhdisteet, esim. kaliumkromaatti, kromihappo-rikkihappokompleksi ja kromihappo-pyridiinikomplek-si; ja seriumyhdisteet, esim. seriumammoniumnitraatti (CAN); epäorgaaniset 25 hapetusaineet, kuten esimerkiksi halogeenimolekyylit, esim. kloorimolekyyli, bromimolekyyli ja jodimolekyyli; peqodihapot, esim. natriumpeijodaatti; otsoni, vesipitoinen vetyperoksidi; otsoni; vesipitoinen vetyperoksidi; typpihapoke yhdisteet; esim. typpihapoke; kloorihappoyhdisteet, esim. kaliumkloriitti ja natriumkloriitti; ja perrikkihappoyhdisteet, esim. kaliumpersulfaatti ja natriumpersulfaatti, ja orgaaniset 30 hapetusaineet kuten ne reagenssit, joita käytetään DMSO-hapetukseen (kompleksi, jossa on dimetyylisulfoksidia ja disykloheksyylikarbodi-imidiä), oksalyyliklori-dietikkahappoanhydridi tai fosforipentoksidi tai pyridiinirikkihappo-anhydridikom- 111265 186 pieksi); peroksidit, esim. t-butyylihydroperoksidi; stabiilit kationit, esim. trifenyyli-metyylikationi; sukkini-imidit, esim. N-bromisukkini-imidi, hypokloorihappoyhdis-teet, esim. t-butyylihypokloriitti, atsodikarboksyylihappoyhdisteet, esim. atsodikar-boksyylihappoesteri; disuldifit, esim. dimetyylisulfidi, difenyylidisulfidijadipyridyy-5 lidisulfidi ja trifenyylifosfiini; typpihappoesterit, esim. metyylinitriitti; hiilitetrahali-dit, esim. metaanitetrabromidi ja kinoniyhdisteet, esim. 2,3-dikloori-5,6-disyano-p-bentsokinoni (DQO), edullisesti jodimolekyyli.
Käytetty happoa sitova aine on esimerkiksi: heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi 10 pyridiini ja dimetyyliaminopyridiini ja alifaattiset amiinit, kuten esimerkiksi trimetyy- ^ liamiini, trietyyliamiini ja di-isopropyylietyyliamiini, edullisesti heterosykliset amiinit (varsinkin pyridiini). Vaikka reaktion lämpötila ei ole erityisen rajoitettu, se on tavallisesti -50 - 50 °C, edullisesti huoneen lämpötila.
15 Vaikka reaktioaika vaihtelee riippuen käytetyistä lähtöaineista, reagenssista, lämpötilasta, jne., se on tavallisesti 5 minuuttia - 30 tuntia, edullisesti 30 minuuttia, kun reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa.
Tioatisointireaktio, joka suoritetaan haluttaessa tässä vaiheessa, suoritetaan seuraaval-20 la tavalla. Kun yhdiste (23) on sidottu yhdisteeseen (22) tioatisointireagenssin annetaan reagoida tioatisoinnin suorittamiseksi hapetuksen sijasta, jodimolekyylin ) kanssa jne., jolloin saadaan yhdiste (24), joka on polymeerikantaja, jolla on tioaat-tisidos kuten CPG. 1 2 3 4 5 6
Tioatisointiin käytettyä reagenssia ei erityisemmin rajoiteta niin kauan kuin se 2 kykenee muodostamaan tioaatin reagoimalla kolmiarvoisen fosforin kanssa ja 3 edullisesti siihen kuuluu rikki ja myös tetraetyylitiuriumdisulfidi TETD, joka saadaan 4 yhtiöstä Applied Biosystems and Beaucage reagenssia, jota saadaan yhtiöstä Milli- 5
Gen/Biosearch. Kun käytetään edellistä, menetelmä on tunnettu kirjallisuudesta 6
Tetrahedron Letters, 32, 3005 (1991) tai sen muunnelmia ja kun kyse on viimeksimainitusta, esitetty menetelmä on tunnettu kirjallisuudesta J. Am. Chem. Soc., 112, 1253 (1990) tai sen muunnelmia, voidaan rajoittamattomasti käyttää.
111265 187
Alkyyliaminointi suoritetaan haluttaessa tässä vaiheessa ja se voidaan suorittaa seuraavalla tavalla.
Kun yhdiste (23") on sidottu yhdisteeseen (22), joka on kuvattu edellä, halutun 5 alkyyliaminin annetaan reagoida huoneenlämmössä hapetusaineen sijasta kuten jodimolekyylin. Tämän menetelmän mukaisesti voidaan saada yhdiste (24), jossa on 3’-päädyssä nukleotidi, jolla on haluttu emässekvenssi sidottu polymeeriin kuten CPG:hen fosforiamidaattisidoksen kautta.
C 10 Vaihe 9 Tämä vaihe suoritetaan 1) käsittelemällä polymeeriä (24), joka on saatu vaiheessa 8, hapolla DMT-ryhmän eliminoimiseksi, 2) annetaan siten käsitellyn polymeerin reagoida amidiittireagenssien kanssa ja happokatalysaattorin, 3) tuloksena saadulle 15 aineelle tehdään hapetusreaktio käyttämällä hapetusainetta ja 4) reagoimattomalle osuudelle tehdään capping-reaction käyttämällä etikkahapon anhydridiä. Tässä vaiheessa edellä olevat menetelmät 1) - 4) toistetaan yhdisteen (25) saamiseksi, johon ainoastaan 5’-pääty nukleotidi, jolla on haluttu emässekvenssi, ei ole vielä sidottu. DNA-ketjun laajennusreaktio DNA-syntetisoijalla, jota käytetään tässä vaiheessa 20 suoritetaan esim. seuraavan menetelmän muunnelmalla Stec [J. Am. Chem. Soc., ( 106, 6077—6089 (1984)] käyttämällä fosforiamidiittimenetelmää käyttämällä Applied
Biosystems Model 380B tai fosforiamidiittimenetelmää H. Koester et ai., Nucleic Acids Res., 12, 4539 (1984) käyttämällä Cyclone Plus DNA syntetisaattoria yhtiöstä Milligen Biosearch, mutta menetelmää ei rajoiteta tähän.
25
Vaihe 10 Tässä vaiheessa valmistetaan polymeeriaine (27), jossa on haluttu emässekvenssi ja substituentit ja säilytetään suojaryhmä eliminoimalla 5’-pääty DMT-ryhmä polymee-30 riaineessa (25), joka on saatu vaiheessa (9) vaiheen (7) menetelmän mukaisesti ja sitten tehdään sama käsittely kuin vaiheessa (8) käyttämällä yhdisteitä (26), (26’) ja (26") kuten on kuvattu seuraavassa yhdisteiden (23), (23’) ja (23") sijasta.
111265 188
Kullakin yhdisteellä (26), (26’) ja (26") on "-deoksiribonukleotidi, jossa on emäs-osuus, jossa halutun emässekvenssin 5’-pääty nukleotidi suojataan tai ribonukleotidi, jossa on suojattu hydroksyyliryhmä 2’-asemassa ja haluttu modifioiva ryhmä 5’-ase-massa. Lisäksi yhdisteessä on sen 3’-asemassa fosforiamidiittisidos, johon kuuluu 5 fosfaattiosuuden suojaryhmä, jota käytetään tavanomaisessa DNA-synteesissä.
Samalla tavalla yhdisteellä (26’) on fosfodiesterisidos ja yhdisteellä (26") on fos-fonaattisidos.
Vaihe 11 10 ) Tässä vaiheessa valmistetaan haluttu oligonukleotidi halkaisemalla oligonukleotidiosa polymeeriaineesta (27), joka on suojatussa polymeeriaineessa, joka on saatu vaiheessa (10), ja sillä on haluttu emässekvenssi ja substituentit 3’- ja 5’-päädyissä ja eliminoidaan muut suojaryhmät kuin halutut substituentit 3’- ja 5’-päädyissä.
15 Suojaryhmän eliminointi voidaan suorittaa tunnetuilla menetelmillä (J. Am. Chem.-Soc., 103, 3185 (1981)].
Näin saatu reaktioseos, joka sisältää yleisen kaavan XI mukaisen yhdisteen, puhdistetaan tavanomaisen puhdistuskäsittelyn avulla, jota voidaan käyttää nukleiinihapon 20 puhdistukseen, esimerkiksi erilaisilla kromatografioilla, kuten käänteisfaasi ja/tai ioninvaihtokromatografialla (mukaanlukien korkean suorituskyvyn nestekromatogra- ) fia) jne. yleisen kaavan (11) mukaisen yhdisteen saamiseksi.
Vaihe 12 25 Tässä vaiheessa valmistetaan dikarboksyylihapon puoliesteri, s.o. yhdiste (15), joka on esillä olevan keksinnön lähtöaine antamalla yhdisteen (29) vapaan hydroksyyliryh-män tai yhdisteen (30) vapaan sulfidryyliryhmän reagoida dikarboksyylihapon anhydridin kanssa, kuten yhdisteen (28) kanssa inertissä liuottimessa emäksisen 30 katalysaattorin läsnäollessa.
Käytettävää dikarboksyylihapon anhydridiä ei erityisemmin rajoiteta ja edullisia ovat 111265 189 dikarboksyylihapon anhydridit, joilla on 1—16 hiiliatomia ja edullisimmat on suk-kiinianhydridi tai glutariinianhydridi. Käytettäviä emäksisiä katalysaattoria ovat edullisesti aminopyridiinit, kuten esimerkiksi dimetyyliaminopyridiini ja pyrrili-diinopyridiini, tertiääriset amiinit, kuten esimerkiksi trimetyyliamiini ja trietyyliamii-5 ni ja alkaalimetallien karbonaatit, kuten esimerkiksi natriumvetykarbonaatti ja kaliumkarbonaatti, edullisimmin dimetyyliaminopyridiini ja pyrrolidinopyridiini.
Käytettävää liuotinta ei erityisemmin rajoiteta niin kauan kun se ei haittaa reaktiota ja kykenee liuottamaan lähtöaineita jossain määrin ja edullisia ovat aromaattiset ^ 10 hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni ja ksyleeni; halogenisoidut hiilive dyt, kuten esimerkiksi metyleenikloridi ja kloroformi; eetterit, kuten esimerkiksi eetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani ja dimetoksietaani; amidit, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidi, dimetyyliasetamidi ja heksametyylifosforitriamidi; sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidi; alkoholit, kuten esimerkiksi emtanoli, etanoli, 15 n-propanoli, isopropanoli, n-butanoli, isobutanoli ja isoamyylialkoholi; laimeat hapot, kuten esimerkiksi vesipitoinen rikkihappo; laimeat emäkset, kuten esimerkiksi vesipitoinen natriumhydroksidi; vesi; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyy-liketoni; heterosykliset amiinit, kuten esimerkiksi pyridiini ja nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili, edullisesti nitriilit (varsinkin asetnitriili), eetterit (varsinkin tetrahyd-20 rofuraani) ja halogenisoidut hiilivedyt (varsinkin metyleenikloridi).
(
Reaktio suoritetaan lämpötilassa -50 -100 °C ja vaikka reaktioaika vaihtelee reaktion lämpötilan mukaan ja käytettyjen lähtöaineiden ja liuottimen mukaan, se on tavallisesti 30 minuuttia - 15 tuntia.
25
Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste kerätään reaktioseoksesta tavanomaisilla keinoilla.
Esimerkiksi kun reaktioseos on sopivasti neutralisoitu ja liukenemattomat aineet, jos 30 niitä on läsnä, poistetaan suodattamalla, veteen sekoittumaton orgaaninen liuotin, kuten etyyliasetaatti, lisätään reaktioseokseen. Kun tuloksena saatu seos on pesty vedellä, orgaaninen kerros, joka sisältää halutun yhdisteen, erotetaan ja kuivataan 111265 190 vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja sen jälkeen haihdutetaan liuotin halutun yhdisteen saamiseksi.
Siten saatu haluttu yhdiste voidaan lisää puhdistaa tavanomaisilla menetelmillä, kuten 5 jälleenkiteyttämällä ja jälleensaostamalla kromatografialla jne. tarpeen vaatiessa.
Vaihe 13 Tässä vaiheessa valmistetaan yhdiste (18) antamalla yhdisteen (19) reagoida dikar-10 boksyylihapon (31) kanssa inertissä liuottimessa esterin muodostavan reagenssin ) läsnäollessa.
Käytettävää liuotinta ei erityisemmin rajoiteta, mikäli se ei haittaa reaktiota ja sellaisia ovat aromaattiset hiilivedyt, kuten esimerkiksi bentseeni, tolueeni ja 15 ksyleeni; halogenisoidut hiilivedyt, kuten esimerkiksi metyleenikloridi, kloroformi, hiilitetrakloridi, dikloorietaani, klooribentseeni ja diklooribentseeni; esterit, kuten esimerkiksi etyyliformaatti, etyyliasetaatti, propyyliasetaatti, butyyliasetaatti ja dietyylikarbonaatti; ketonit, kuten esimerkiksi asetoni, metyylietyyliketoni, metyyli-isobutyyliketoni, isoforoni ja sykloheksanoni; nitroyhdisteet, kuten esimerkiksi 20 nitroetaani ja nitrobentseeni; nitriilit, kuten esimerkiksi asetnitriili ja isobutyyrinitrii- li; amidit, kuten esimerkiksi formamidi, dimetyyliformamidi (DMF), dimetyyliaseta- ) midi ja heksametyylifosforitriamidi; ja sulfoksidit, kuten esimerkiksi dimetyylisulfok-sidi ja sulforaani, edullisesti halogenisoidut hiilivedyt (varsinkin metyleenikloridi) ja amidit (varsinkin dimetyyliformamidi).
25 Käytettäviin esterin muodostaviin reagensseihin kuuluu esimerkiksi N-hydroksiyhdis-teet, kuten esimerkiksi N-hydroksisukkini-imidi, 1-hydroksibentsotriatsoli ja N-hydroksi-5-norbomeeni-2,3-dikarboksi-imidi; di-imidatsoliyhdisteet, kuten esimerkiksi Ι,Γ-oksalyylidi-imidatsoli ja Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsoli; disulfidiyh-30 disteet, kuten esimerkiksi 2,2’-dipyridyylidisulfidi; sukkinihappoyhdisteet, kuten esimerkiksi Ν,Ν’-disukkini-imidyylikarbonaatti; fosfiinikloridiyhdisteet, kuten esimerkiksi N,N’-bis(2-okso-3-oksatsolidinyyli)fosfiinikloridi; oksalaattiyhdisteet, 191 111265 kuten esimerkiksi Ν,Ν’-disukkini-imidyylioksalaatti (DSO), N,N-diftalimidyylioksa-laatti (DPO), N,N’-bis(norbornenyylisukkini-imidyyli)oksalaatti (BNO), Ι,Γ-bis(bentsotriatsolyyli)oksalaatti (BBTO), 1,1 ’-bis(6-klooribentsotriatsolyyli)oksalaatti (BCTO) ja 1,1 ’-bis(6-trifluorimetyylibentsotriatsolyyli)oksalaatti (BTBO); ja karbodi-5 imidit, kuten esimerkiksi disykloheksyylikarbodi-imidi (DCC), edullisesti di-imidat-soliyhdisteet ja karbodi-imidit (varsinkin DCC).
Vaikka reaktion lämpötila ja reaktioaika vaihtelee riippuen esteriä muodostavasta aineesta ja käytetystä liuottimesta, reaktio suoritetaan lämpötilassa 0—100 °C 5—50 ^ 10 tuntia.
Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste eristetään reaktioseoksesta tavanomaisilla menetelmillä. Esimerkiksi kun reaktioseos on sopivasti neutralisoitu ja liukenemattomat aineet, jos niitä on, poistetaan suodattamalla veteensekoittumaton orgaani liuotin, 15 kuten etyyliasetaatti lisätään reaktioseokseen. Kun tuloksena saatu seos on pesty vedellä, orgaaninen kerros, joka sisältää halutun yhdisteen, erotetaan ja kuivataan vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja sen jälkeen haihdutetaan liuotin halutun yhdisteen saamiseksi.
20 Näin saatu haluttu yhdiste voidaan lisää puhdistaa tavanomaisilla menetelmillä, kuten ( jälleenkiteyttämällä ja jälleensaostamalla kromatografialla jne. tarpeen vaatiessa.
Esillä olevan keksinnön uuden menetelmän mukaisesti, modifioitu oligonukleotidi, jolla on haluttu substituentti oligonukleotidin 3’-päätyasemassa fosfaatin kautta 25 voidaan helposti syntetisoida DNA-syntetisoijalla, ja siten saadaan modifioitu oligonukleotidi, jolla on korkea puhtaus suuressa määrässä käyttämällä yksinkertaisia puhdistusmenetelmiä matalalla hinnalla. Käyttökelpoinen oligonukleotidi, jolla on substituentti 3’-päätyasemassa, on kuvattu japanilaisessa patenttihakemuksessa nro HEI 301744, jolla on AIDS:in vastaisia vaikutuksia.
Esillä olevan keksinnön yhdisteillä on erityinen soluja syövä vaikutus AIDS-virusta vastaan (HIV-1) ja se voi erityisesti inhiboida viruksen lisääntymistä tarttuneissa 30 111265 192 soluissa. Siksi keksinnön yhdistettä voidaan käyttää AIDS:in käsittelyyn ja ehkäisyyn.
Esillä oleva keksintö selitetään konkreettisesti laivaamalla seuraavilla esimerkeillä.
5 [Testiesimerkki 1] Modifioitujen oligodeoksiribonukleotidien HIV-1 vastaisen vaikutuksen mittaaminen HIV-1 vastainen vaikutus mitattiin menetelmällä Pauel et ai. [R. Pauel et ai., J.
10 Virological Methods, 20, 309—321 (1988)]. Yhteenvedoksi todetaan, että MT 4 ) soluja eksponentiaalisen kasvun vaiheessa sentrifugoitiin 5 minuuttia painovoimassa 150 x g. Saatu solupelletti suspensoitiin viljelyväliaineeseen ja tartutettiin HIV-1 :llä (tyyppiä ΙΠΒ) 1 tunnin ajan lämpötilassa 37 °C konsentraatiossa 10 CCID50. HIV-l:llä tarttuneet MT-4 -solut saatiin sentrifugoimalla RPMI-1640 -viljelyväliaineissa, 15 jotka sisälsivät 10 % vasikan sikiösiseerumia (tämän jälkeen sanotaan "seerumin viljely väliaineet").
HIV-l:llä tartutetut MT-4 -solut ja ei-tartutetut MT-4 -solut suspensoitiin seerumin viljelyväliaineisiin niin, että kunkin konsentraatio oli 4 x 105 solua/ml.
20 100 μΐ liuosta, joka sisälsi vähitellen laimennettua testiyhdistettä, liuotettiin seerumi- viljely väliaineeseen, joka oli etukäteen valmistettu, asetettiin 98 reiän mikrotitterile- ) vyn kuhunkin reikään. Sitten 100 μΐ kumpaakin edellä mainittua solususpensiota lisättiin mikrotitterilevyn kaikkiin reikiin ja niiden soluja viljeltiin kuusi päivää 5 %:sen hiilidioksidikaasun läsnäollessa.
25
Kontrollina HIV-1 :llä tartutettuja MT-4 -soluja ja ei-tartutettuja MT-4 -soluja, johon mitään näyteyhdistettä ei ollut lisätty, viljeltiin samalla tavalla.
Viljelyn jälkeen, elävien solujen lukumäärä mitattiin perustuen MTT(3-(4,5-dimetyy-30 litioatsoli-2-yyli)-2,5-difenyylitetratsoliumbromidi) -menetelmään [L. M. Green et ai., J. Immunol, Methods, 70, 257—268 (1984)]. Sitten mitattiin HIV-1 :n soluja tappava vaikutus. HIV-1 :llä tartutettujen MT-4 -solujen soluja tappava vaikutus, johon ei 111265 193 ollut lisätty testiyhdistettä, oli 100 % ja ei-HIV-l:llä (tyyppi ΠΙΒ) ei-tartutettujen M-T4 -solujen soluja tappava vaikutus, johon mitään testiyhdistettä ei ollut lisätty, oli 0 %. Lajin konsentraatio, joka inhiboi HIV-1 :llä tartutettujen MT-4 -solujen soluja tappavaa vaikutusta 50 %:lla (IC50) laskettiin. Näyteyhdisteen solumyrkyllisyys 5 määriteltiin olevan konsentraatio, joka inhiboi HIV-1 :llä ei-tartutettujen MT-4 -solujen toisiintumista 50 %:lla (CC50). Näiden mittauksien tulokset on esitetty taulukossa 2.
Taulukko 2 c 10 ---
Esimerkki nro IC50 (^g/mooli) CC50 Oag/ml) 1 2,1 61 2 5,9 > 100,0 15 4 1,5 >100,0 5 2,3 >100,0 6 1,3 >100,0 7 1,0 >100,0 8 4,3 > 100,0 20 9 8,4 >100,0 ( 10 1,5 >100,0 11 4,7 >100,0 12 0,6 >100,0 13 1,4 >100,0 25 14 0,7 > 100,0 16 4,7 >100,0 17 3,7 > 100,0 18 4,7 > 100,0 19 6,25 > 100,0 30 20 4,0 >100,0 21 1,2 100,0 22 0,55 50 111265 194 23 0,8 75 24 0,45 > 100,0 25 4,0 80,0 26 6,0 95,0 5 27 5,0 >100,0 28 5,0 >100,0 29 3,0 > 100,0 30 1,0 90,0 31 1,1 >100,0 10 32 3,8 >100,0 ^ 33 5,0 >100,0 34 5,0 > 100,0 35 5,5 >100,0 36 1,5 100,0 15 37 6,0 >100,0 43 3,0 100,0 45 0,45 > 100,0 48 0,58 > 100,0 57 1,5 100,0 20 58 7,0 50,0 70 1,0 60,0 ) 71 1,0 37,0 72 1,8 >100,0 73 3,0 > 100,0 25 74 4,4 > 100,0 75 6,0 40,0 76 7,0 > 100,0 77 9,0 >100,0 78 9,0 > 50,0 30 79 9,4 > 100,0 80 9,5 > 100,0 81 10,0 > 100,0 111265 195 82 0,35 100,0 83 0,55 > 50,0 84 0,5 > 50,0 85 0,8 60,0 5 86 0,4 > 100,0 87 0,25 > 100,0 88 0,7 75,0 89 0,5 38,0 90 0,15 >100,0 ^ 10 91 0,15 >100,0 92 0,29 >100,0 93 0,35 > 100,0 94 0,19 >100,0 95 0,5 > 100,0 15 98 0,15 >100,0 99 0,15 >100,0 100 0,25 > 100,0 101 1,5 >100,0 102 0,7 >100,0 20 103 5,0 >100,0 ( 104 7,0 >100,0 105 3,0 >100,0 106 5,0 >100,0 107 2,5 > 100,0 25 108 3,5 >100,0 109 2,0 > 100,0 110 2,3 >100,0 1
Siten on lopullisesti todistettu testikokeilla, että kaikki modifioidut oligodioksiri-bonukleotidit, jotka on lueteltu taulukossa 2, on erityisen voimakas HIV:n vastainen vaikutus konsentraatiossa vähemmän kuin 10 ^g/ml.
111265 196
Jos ei muuta eritellä, emässekvenssi (esimerkiksi TGGGAGGG), jota käytetään seuraavissa kemiallisissa rakenteissa, tarkoittaa sopivan oligodioksiribonukleotidin trietyyliamiinisuolaa, jolla ei ole hydroksiryhmää molemmissa 5’-ja 3’-asemissa.
5 Keksintöä kuvataan vielä seuraavien esimerkkien avulla. Kaikki seulamitat, joita käytetään esimerkissä, ovat Tailer-standardin mukaisia ja ydinmagneettiset resonans-sispektrit saatiin käyttämällä trimetyylisilaania sisäisenä standardina ja tämä merkitään lyhennyksellä "TMS". Oligodeoksiribonukleotidijohdannaisen määrä, joka on valmistettu kussakin näissä esimerkeissä, mitattiin optisen tiheyden avulla aallonpi-10 tuudessa 260 nm [OD (260 nm)]. j ESIMERKKI 1 1(a) 5’-0-Trityylitymidiini-2-syanoetyyIi-N,N-di-isopropyyIifosforaimdiitti 15 O “iV’ y r
P
NCOfrCJhO—P.
25 “ * N(/Pr)2 969 mg (2 mmoolia) 5’-0-trityylitymidiiniä [J. Am. Chem. Soc., 80, 6212 (1958)] kuivattiin kolme kertaa atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä, jonka jälkeen se 30 liuotettiin 10 ml:aan tetrahydrofuraania. 1,39 ml (8 mmoolia) N,N-di-isopropyyli-N-etyyliamiinia ja 0,822 ml (4 mmoolia) 2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylikloorifosfora-midiittia lisättiin sitten liuokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneenläm- 197 111265 mössä 30 minuuttia argon-atmosfäärissä. Tämän jälkeen tuloksena saatu saostuma suodatettiin pois reaktioseoksesta ja suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös liuotettiin 100 ml:aan etyyliasetaattia ja liuos pestiin kaksi kertaa kullakin kerralla 50 ml:lla natriumkarbonaatin jäällä 5 jäähdytettyä 10 %:sta p/t vesiliuosta. Liuos kuivattiin sitten vedettömän natriumsul-faatin avulla, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 40 g silikageelin läpi (70—230 seulamitta) käyttämällä metyleenikloridin etyyliasetaatin ja trietyyliamiinin 45:45:10 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 1,35 g (saanti 98 %) otsikkoyhdis-^ 10 tettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC 3, 270 MHz, TMS), 6 ppm: 7,62, 7,57 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); .
7,46—7,20 (15H, multipletti); 15 6,46—6,37 (1H, multipletti); 4,68 (1H, leveä singletti); 4,19, 4,15 (yhdessä 1H, kaksi leveää singlettiä); 3,90—3,30 (6H, multipletti); 2,63—2,28 (4H, multipletti); 20 1,47 (3H, singletti); ( 1,23—1,00 (12H, multipletti).
1(b) Kaavan 1(b) mukainen yhdiste: 25 9 —C —O—TGGGAG—OH 1(b) 6 111265 198
Synteesi suoritettiin käyttämällä Cyclone Plus (tavaramerkki) DNA/RNA -syntetisoi-jaa, jota valmistaa MilliGen/Biosearch (Millipore Ltd.:n sisaryhtiö, Japani). Tähän lisättiin kemiallisia reagensseja, jotka vastaavat nukleotidijäännöksiä edellä olevassa kaavassa Ib, edellä olevan oligonukleotidin syntetisoimiseksi. Ohjelmakartta amidiit-5 timenetelmälle syötettiin koneeseen. Synteesi suoritettiin 15 μπιοΐ.η skaalalla. Tässä tapauksessa 35 mM 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosfo-riamiiditin asetnitriililiuosta [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] käytettiin 2-syanoetyylifosforiamidiittiliuoksen sijasta, joka vastasi tymidiiniä. Reak-tiokolonni oli 15,0 mmol skaalan reaktiokolonni, joka oli pakattu 5 /unoltlla / 10 GCPG [s.o. guaniinideoksiribonukleosidi G, joka on kytketty lasiin, jolla on säädetty ^ huokoisuus (CPG)]. Nukleotidin konsentraatio lasitäyteaineessa oli 35—44 μιηοΐ/g, ja CPG täyteaineella oli keskimääräinen huokoskoko 50 nm. Haluttu emässekvenssi TGGGAG laitettiin sisään (kuten tavanomaista, emässekvenssi, joka on mainittu tässä, kuten myös ne, joihin viitataan tämän jälkeen, sisällyttää emäksen, joka oli 15 kytketty CPG:hen), ja ohjelma ajettiin ilman happokäsittelyä kun oli muodostunut sidos pääte T:n kanssa, johdannaisen saamiseksi, jossa haluttu suojattu oligonukleoti-di oli kytketty kontrolloidun huokoisuuden lasiin (CPG). Tämä kuivattiin vakuumis-sa, poistettiin kolonnista ja upotettiin noin 10 mitään 29 % vesipitoista ammoniakkia.
Sen annettiin sitten reagoida huoneen lämpötilassa noin kaksi päivää suljetussa 20 astiassa. Tämän jälkeen CPG poistettiin suodattamalla ja pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 10 ml:11a vettä; suodos ja pesuvedet yhdistettiin sitten. Yhdis- ) tetty seos pestiin sitten kolme kertaa kullakin kerralla 30 ml dietyylieetteriä, jonka jälkeen ammoniakki ja dietyylieetteri poistettiin haihduttamalla vakuumissa. Tuloksena saatu vesiliuos väkevöitiin noin 3 mitään haihduttamalla alennetussa paineessa ja 25 väkevä liuos suodatettiin myllyhuokossuodattimen avulla (0,45 μια). Suodos jaettiin kolmeen osaan ja kukin osa puhdistettiin käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla 20,0 x 250 mmtn kolonnin läpi, (Inertsil PREP-ODS (tavaramerkki), joka oli aikaisemmin tasapainoitettu 0,1 mM vesipitoista trietyyli-ammoniumasetaattipuskuria (TEAA), pH 7,0, sisältäen 20 til-% asetnitriiliä ja 30 asennettiin ultraviolettivalolla aallonpituudessa 254 nm. Haluttu tuote eluoitiin käyttämällä gradienttieluenttimenetelmää 0,1 M TEAA, joka sisälsi asetnitriiliä konsentraatioissa alueella 20—50 tilavuusprosenttia lineäärisellä gradientilla 8 199 iiises ml/minuutti 30 minuutin ajan. Fraktiot eluoitiin 17,2 minuutin jälkeen. Ne kerättiin ja liuos vapautettiin asetnitriilistä haihduttamalla alennetussa paineessa, jonka jälkeen tuloksena saatu vesiliuos lyofilisoitiin. Näin saatu tuote liuotettiin 50 mlraan vettä ja taas lyofilisoitiin, jolloin saatiin 94,8 OD (260 nm) kaavan 1(b) mukaista yhdistettä 5 amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
Viipymäaika: 23,3 minuuttia ( 10
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia, lineaarinen gradientti; 1 ml/minuutti; 254 nm).
15 ESIMERKKI 2 2(a) 5’-TrityyUamino-5’-deoksitymidiini 557 mg trityylikloridia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 560 mg (2 mmoolia) 3’-0-20 asetyyli-5’-amino-5’-deoksitymidiiniä (joka oli valmistettu menetelmällä, jonka on ( kuvannut J.P. Honvitz et ai. J. Org. Chem., 22, 3045 (1962)] 20 ml:ssa kuivaa pyridiiniä ja tuloksena saatua seosta kuumennettiin palautuksessa tunnin ajan samalla kun kosteus poistui. Kun oli varmistettu, että lähtöyhdiste oli hävinnyt ohutkerros-kromatografialla (käyttämällä metyleenikloridia, joka sisälsi 50 til-% metanolia 25 kehitysliuottimena) liuotin poistettiin reaktioseoksesta tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös sekoitettiin 10 ml:lla sekä metanolia että vettä ja sitten seos väkevöitiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tämä operaatio toistettiin kolme kertaa, jonka jälkeen jäännös liuotettiin 30 ml:aan etyyliasetaattia ja tuloksena saatu liuos pestiin 20 ml: 11a natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, 0,2 N 30 vesipitoisella kloorivetyhapolla ja natriumvetykarbonaatin 5 %:lla vesiliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuos haihdutettiin sitten kuivaksi alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin 30 ml:aan 111265 200 metanolia, joka oli kyllästetty ammoniakkikaasulla ja pullo, jossa liuos oli, suljettiin tiiviisti. Sen annettiin sitten seistä yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin 10 ml:aan metyleenikloridia. Liuos puhdistettiin kolonnikromatografialla 5 silikageelin läpi käyttämällä metyleenikloridia, joka sisälsi 5 til-% metanolia eluentti-na. Fraktiot, jotka sisälsivät haluttua yhdistettä, yhdistettiin ja haihdutettiin kuivaksi alennetussa paineessa. Lyofilisoimalla jäännös bentseenistä saatiin 338 mg otsikkoyh-distettä valkoisena pulverina.
10 *H Ydinmagneettinen resonanssispektri CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: ^ 8,38 (1H, leveä singletti); 7,48-7,18 (15H, multipletti); 7,04 (1H, multipletti); 6,67 (1H, tripletti, J = 6,60 Hz); 15 4,35—4,29 (1H, multipletti); 4,01—3,95 (1H, multipletti); 2,62—2,06 (5H, multipletti); 1,84 (3H, singletti).
20 2(b) 5’-Trityyliamino-5’-deoksitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosfo- ramidiitti ) 0,15 g (0,31 mmoolia) 5’-trityyliamino-5’-deoksitymidimiä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä ja 25 liuotettiin sitten 2 ml:aan metyleenikloridia. 0,23 ml (1,2 mmoolia) N,N-di-isopro-pyyli-N-etyyliamiinia lisättiin sitten tuloksena saatuun liuokseen, jonka jälkeen 0,08 ml (0,36 mmoolia) 2-syanoetyyli-N.N-di-isopropyylikloorifosforamidiittia lisättiin kahden minuutin aikana typpivirrassa. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 60 minuuttia. Tämän jälkeen varmistettiin ohutkerroskromato-30 grafialla, että lähtöyhdiste oli hävinnyt ja reaktioseos laimennettiin 30 ml:lla etyyliasetaattia. Tuloksena saatu orgaaninen liuos pestiin natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, mainitussa jäqes- 111265 201 tyksessä. Orgaaninen kerros suodatettiin IPS (tavaramerkki) suodatinpaperin (Whatman) läpi ja suodos vapautettiin liuottimessa tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 15 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 0,19 5 g (saanti 89 %) otsikkoyhdistettä vaahtomaisena aineena.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 7,50—7,19 (15H, multipletti); 7,15, 7,06 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); ( 10 6,30-6,26 (1H, multipletti); 4,55—4,35 (1H, multipletti); 4.12— 4,35 (1H, multipletti); 4.12— 4,07 (1H, multipletti); 3,84—3,53 (4H, multipletti); 15 2,64—2,09 (6H, multipletti); 1,86, 1,84 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 1,19—1,10 (12H, multipletti).
2(c) Kaavan 2(c) mukainen yhdiste: 20 ( ö 25 —C—NH—TGGGAG-OH 2(c) ό 30 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-trityyliamino-5’-deoksitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyyli-fosforamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 2(b)] 5’-0-tri- 111265 202 tyyliamidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasisilikageeliko-lonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM vesipitoinen trimetyyli-ammoniumvetykarbonaattiapuskuri (TEAB), pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaari-5 gradientti; 254 nm). Eluaatti työstettiin samanlaisella tavalla kuin kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 168 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuuttia; 260 nm) osoitti, että näytteen 10 viipymäaika oli 19,20 minuuttia. j
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), ^ nm: 254.
ESIMERKKI 3 15 3(a) 5’-0-Bentshydryylitymidimi 350 mg (8 mmoolia) natriumhydridiä (55 %:na p/p dispersiona mineraaliöljyssä) lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1,426 g (4 mmoolia) 3’-0-[(l,l-dimetyylietyyli)dime-20 tyylisilyylijtymidiiniä [Can. J. Chem., 56, 2768 (1978)] 8 ml:ssa tetrahydrofuraania argon-atmosfäärissä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 60 °C kaksi ) tuntia ja annettiin sitten jäähtyä huoneen lämpötilaan. Liuos, joka sisälsi 988 mg (4 mmoolia) bentsyylibromidia 2 ml:ssa tetrahydrofuraania lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen ja sen jälkeen 300 mg (2 mmoolia) natriumjodidia. Reaktioseosta 25 sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 17 tuntia, jonka jälkeen se vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Konsentraatti liuotettiin 50 ml:aan etyyliasetaattia ja tuloksena saatu liuos pestiin kaksi kertaa kummallakin kerralla 50 ml: 11a natriumkloridin kyllästettyä vesiliuosta. Se kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa. Jäännös 30 liuotettiin 4 ml:aan tetrahydrofuraania ja 4 ml tetrabutyyliammoniumfluoridin 1 M tetrahydrofuraaniliuosta lisättiin liuokseen. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla 111265 203 alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin 50 mlraan etyyliasetaattia. Tuloksena saatu liuos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 50 ml:lla natriumkloridin kyllästettyä vesiliuosta. Seos kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin sitten tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin 5 kolonnikromatografialla 60 g silikageelin (230—400 seulamitta) läpi käyttämällä gradienttieluointimenetelmää metyleenikloridilla, joka sisälsi 1—2,4 til-% metanolia eluenttina, jolloin saatiin 377,7 mg (saanti 23 %) otsikkoyhdistettä.
Ydinmagneettinen resonanssispektri CDCf3, 270 MHz, TMS), δ ppm: ^ 10 9,85 (1H, leveä singletti); 7,56 (1H, singletti); 7,38-7,20 (10H, multipletti); 6,45 (1H, tripletti, J = 6,92 Hz); 5,40 (1H, singletti); 15 4,62—4,58 (1H, multipletti); 4,17—4,15 (1H, multipletti); 3,75—3,58 (2H, multipletti); 2,47—2,22 (2H, multipletti); 1,36 (3H, singletti).
20 ( 204 3(b) 5’-0-Bentshydryylitymidiini-2-syanoetyyIi-N,N-di-isopropyylifosfor-amidiitti 5 0
Q <aT
CH—O— ” 0 p * 0 ncch2ch2o-pC.
L N(/?r)2 15 204,2 mg (0,5 mmoolia) 5’-0-bentshydryylitymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] kuivattiin kolme kertaa atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä ja liuotettiin sitten 2,5 ml:aan tetrahydrofuraania. 0,348 ml (2 mmoolia) N,N-di-20 isopropyyli-N-etyyliamiinia ja 0,223 ml (1 mmoolia) 2-syanoetyyli-N,N-di-isopro- pyylikloorifosforamidiittia lisättiin liuokseen argon-atmosfäärissä ja tuloksena saatua ) seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin suodoksista suodattamalla ja suodos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Konsentraatti liuotettiin 50 ml:aan etyyliasetaattia ja tuloksena saatu liuos 25 pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 50 ml:lla natriumkarbonaatin jäällä jäähdytettyä 10 %:sta p/t vesiliuosta ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla.
Liuotin poistettiin sitten tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 30 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä metyleenikloridin, etyyliasetaatin ja trietyyliamiinin välistä 45:45:10 tilavuusseosta 30 eluenttina. Fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja liuotin tislattiin pois. Sama kromatografiamenetelmä toistettiin, jolloin saatiin 213,4 mg (saanti 70 %) otsikkoyhdistettä.
111265 205 ^ Ydimnagneettinen resonanssispektri CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 7,55, 7,51 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); 7,43—7,22 (10H, multipletti); 6,48—6,42 (1H, multipletti); 5 5,44, 5,42 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); 4,73-4,64 (1H, multipletti); 4,25, 4,19 (yhdessä 1H, kaksi leveää singlettiä); 3,90—3,55 (6H, multipletti); 2,68—2,24 (4H, multipletti); ^ 10 1,39 (3H, singletti); 1,30—1,10 (12H, multipletti).
3(c) Kaavan 3(c) mukainen yhdiste 15
Ol CH—O—TGOGAG—OH 3(c) (
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-0-bentshydryylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyyli-25 fosforamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-trityylitymi-diini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiitinsijasta, valmistettiin otsikkoyh-diste. Reaktiotuote jaettiin kolmee osaan ja jokainen osa puhdistettiin korkean suorituskyvyn nestekromatografiakolonnilla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 15—45 til-%, 30 minuuttia, 30 lineaarigradientti; 7 ml/minuuttia; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 20,2 minuutin jälkeen, yhdistettiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 76 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfise- 206 11T265 na kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 255.
5 Viipymäaika: 17,3 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 10—40 til-% B, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 254 nm).
10 ) ESIMERKKI 4
Kaavan 4(a) mukainen yhdiste: 15 ö —c—o—TGGGAGG-OH 4(a)
10 O
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta 25 sisällyttämällä emässekvenssi TGGGAGG DNA/RNA -syntetisoijaan, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasisilikageelikolonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Työstämällä kuten on kuvattu esimerkissä 1(b) saatiin 180 OD (260 nm) otsikkoyh-30 distettä amorfisena kiinteänä aineena. Käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Intertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 til-% B, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/ minuuttia; 111265 207 260 nm) analyysi osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,22 minuutin.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 255.
5 ESIMERKKI 5 5(a) 5’-0-[(l,l-DimetyylietyyIi)difenyylisilyyli]tymidiini 1,43 ml (5,5 mmoolia) t-butyylidifenyylisilyylikloridia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 10 1,21 g (5 mmoolia) tymidiiniä ja 0,749 g (11 mmoolia) imidatsolia 10 ml:ssa ^ dimetyyliformamidia argon-atmosfäärissä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huo neen lämpötilassa 140 minuuttia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös liuotettiin 100 mlraan metyleeniklo-ridia. Liuos pestiin sitten viisi kertaa, jokaisella kerralla 100 ml:lla vettä. Liuos 15 kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla, jonka jälkeen liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 100 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä gradienttieluointimenetelmää mety-leenikloridilla, joka sisälsi 0,5—3 til-% metanolia eluenttina, jolloin saatiin 1,5 g (saanti 62 %) otsikkoyhdistettä.
20 ^ *H Ydinmagneettinen resonanssispektri CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 10,52 (1H, leveä singletti); 7,73-7,32 (10H, multipletti); 7,57 (1H, singletti); 25 6,53—6,47 (1H, multipletti); 4,63 (1H, leveä singletti); 4,48 (1H, leveä singletti); 4,11 (1H, leveä singletti); 4,04—3,85 (2H, multipletti); 30 2,58-2,16 (2H, multipletti); 1,59 (3H, singletti); 1,10 (9H, singletti).
208 nvm 5(b) 5’-0-[(l,l-Dimetyylietyyli)difenyylisilyyli]tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di- isopropyylifosforamidiitti
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta 5 käyttämällä 240 mg (0,5 mmoolia) 5’-0-[(l,l-dimetyylietyyli)difenyylisilyyli]tymi-diiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], jolloin saatiin 254,4 mg (saanti 74,7 %) otsikkoyhdistettä.
lU Ydinmagneettinen resonanssispektri CDCi3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 10 7,69-7,36 (11H, multipletti); 6,43—6,38 (1H, multipletti); 4,70-4,62 (1H, multipletti); 4,16-4,09 (1H, multipletti); 4,04—3,55 (6H, multipletti); 15 2,67—2,15 (4H, multipletti); 1,61 (3H, singletti); 1,22—1,05 (12H, multipletti).
5(c) Kaavan 5(c) mukainen yhdiste: 20 ) o · CHj CH3—C—Si—O—TGGGAG—OH 5(c) CH,/ O 1
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-0-[(l,l-dimetyylietyyli)difenyylisilyyli]tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiitia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0- 111265 209 trityylitymidiim-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiitinsijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografiakolonnilla (Intertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: 5 asetnitriili; 20—50 til-% B, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 22,4 minuutin jälkeen, yhdistettiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 54 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
^ 10 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 255.
Viipymäaika: 22,0 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; 15 eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 10—40 til-% B, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 254 nm).
ESIMERKKI 6 20 6(a) 5’-0-(3,5-Dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini ( 175 mg (4 mmoolia) natriumhydridiä (55 %:na p/p dispersiona mineraaliöljyssä) lisättiin liuokseen, joka sisälsi 713 mg (2 mmoolia) 3’-0-[(l,l-dimetyylietyyli)dime-tyylisilyylijtymidiiniä [Can. J. Chem., 56, 2768 (1978)] ja tuloksena saatua seosta 25 sekoitettiin lämpötilassa 60 °C kaksi tuntia. Tämän jälkeen seoksen annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan ja sitten 767 mg (2 mmoolia) 3,5-dibentsyylioksibentsyylibromi-diliuosta [Cahem. Ser., 102, 2887 (1969)] 1 ml:ssa tetrahydrofuraania lisättiin pisara kerrallaan. 149,9 mg (1 mmoolia) natriumjodidia lisättiin sitten tuloksena saatuun seokseen, jonka jälkeen seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 tuntia. Tämän 30 jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jäännös liuotettiin 50 ml:aan etyyliasetaattia ja tuloksena saatu liuos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 0,01 N vesipitoisella kloorivetyhapolla. Liuos kuivattiin sitten vedettömän 210 111265 magnesiumsulfaatin avulla, jonka jälkeen liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa.
Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 100 g silikageelin (230—400 seulamit-ta) läpi käyttämällä gradienttieluointimenetelmää metyleenikloridilla, joka sisälsi 0,5—3 til-% 3’ 0-[(l, l-dimetyylietyyli)dimetyylisilyyli]-5 ’-0-(3,5-dibentsyyliok-5 sibentsyyli)tymidiiniä.
Koko tämä liuotettiin 1,93 ml:aan tetrahydrofuraania. 1,93 ml tetrabutyyliam-moniumfluoridin 1 M tetrahydrofuraaniliuosta lisättiin liuokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen liuotin poistet-10 tiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös liuotettiin 50 mitään .
etyyliasetaattia. Tämä liuos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 50 mltlla natriumkloridin kyllästettyä vesiliuosta. Liuos kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla, liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kromatografialla 30 g silikageelin (230—400 seulamitta) läpi käyttämällä 15 gradienttieluointimenetelmää metyleenikloridilla, joka sisälsi 1—3 til-% metanolia eluenttina, jolloin saatiin 258,5 mg (saanti 23,7 %) otsikkoyhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri CDCf3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 7,87 (1H, singletti); 20 7,52 (1H, singletti); 7,43—6,52 (13H, multipletti); j 6,37 (1H, tripletti, J = 6,75 Hz); 5,03 (4H, singletti); 4,51 (2H, dubletti, J = 3,30 Hz); 25 4,50—4,44 (1H, multipletti); 4,06—4,03 (1H, multipletti); 3,77—3,63 (2H, multipletti); 2,32—2,12 (2H, multipletti); 1,67 (3H, singletti).
30 211 111265 6(b) 5’-0-(3,5-Dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopro-pyylifosforamidiitti
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 3(b), mutta 5 käyttämällä 258,5 mg (0,475 mmoolia) 5’-0-(3,5-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 307,7 mg (87 %) otsikko-yhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri CDCt?3, 270 MHz, TMS), 6 ppm: 10 7,56, 7,53 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); 7,52—6,56 (13H, multipletti); 6,40 (1H, tripletti, J = 6,60 Hz); 5,02 (4H, singletti); 4.67— 4,58 (1H, multipletti); 15 4,53, 4,51 (yhdessä 2H, kaksi singlettiä); 4,23, 4,17 (yhdessä 1H, kaksi leveää singlettiä); 3,90—3,52 (6H, multipletti); 2.68— 2,53 (2H, multipletti); 2,49-2,12 (2H, multipletti); 20 ' 1,65 (3H, singletti); ^ 1,18 (12H, dubletti, J = 5,94 Hz).
6(c) Kaavan 6(c) mukainen yhdiste: 25
Oh-.
(C^j)—CH2—O—TGGGAG—OH 6(c) 30 111265 212
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-0-(3,5-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiittiä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiitin sijasta, saatiin 5 otsikkoyhdistettä. Reaktiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin kromatografialla korkean suorituskyvyn nestekromatografiakolonnilla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 15—45 til-%, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 7 ml/minuuttia; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 19,8 minuutin jälkeen, yhdistettiin ja työstettiin samanlaisella tavalla 10 kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 64,6 OD (260 nm) otsikko- ^ yhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), λ,,^ nm: 255.
15 Viipymäaika: 22,8 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 10—40 til-% B, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 254 nm).
20 ESIMERKKI 7 ) 7(a) 5 ’ -0-(3,4-Dibentsyylioksibentsyy li) tymidiini 25 713 mg (2 mmoolia) 3’-0-[(l,l-dimetyylietyyli)dimetyylisilyyli]tymidiiniä [Can. J.
Chem., 56, 2768 (1978)] liuotettiin 5 ml:aan tetrahydrofuraania ja 175 mg (4 mmoolia) natriumhydridiä (55 %:na t/t dispersiona mineraaliöljyssä) lisättiin tuloksena saatuun liuokseen argon-atmosfäärissä. Seosta sekoitettiin sitten lämpötilassa 60 °C kaksi tuntia. Tämän jälkeen seoksen lämpötila alennettiin huoneen lämpöti-30 laan ja sitten 678 mg (2 mmoolia) 3,4-dibentsyylioksibentsyylikloridia lisättiin ja sen jälkeen 149,9 mg (1 mmooli) natriumjodidia ja tuloksena saama seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 19 tuntia ja sitten lämpötilassa 60 °C viisi tuntia. Tämän 213 111265 jälkeen liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin 50 ml: aan etyyliasetaattia. Tuloksena saatu liuos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 50 ml:lla 0,01 N vesipitoista kloorivetyhappoa; sitten se kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös 5 liuotettiin 4 ml: aan tetrahydrofuraania ja 4 ml tetrabutyyliammoniumfluoridin 1 M liuosta tetrahydrofiiraanissa lisättiin liuokseen. Seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin 50 ml:aan etyyliasetaattia. Tuloksena saatu liuos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 50 ml:lla natriumkloridin kyllästettyä ^ 10 vesiliuosta ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin sitten tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännökselle was applied kromatografiako-lonnille [LiChroprep (tavaramerkki) Si60, 40—63 /xm, GröBe C, Merck] ja eluoitiin käyttämällä gradienttieluointimenetelmää metyleenikloridilla, joka sisälsi 1—4 til-% metanolia, jolloin saatiin 345,4 mg (saanti 31,7 %) otsikkoyhdistettä.
15 *H Ydinmagneettinen resonanssispektri CDCf 3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 8,26 (1H, singletti); 7,50 (1H, singletti); 7,47—7,28 (10H, multipletti); 20 6,91—6,79 (3H, multipletti); ( 6,36 (1H, tripletti, J = 6,75 Hz); 5,17 (4H, singletti); 4,47, 4,45 (yhdessä 2H, kaksi singlettiä); 4,41—4,36 (1H, multipletti); 25 4,04—4,01 (1H, multipletti); 3,72—3,56 (2H, multipletti); 2,31—2,05 (2H, multipletti); 1,62 (3H, singletti).
30 111265 214 7(b) 5’-0-(3,4-Dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopro-pyylifosforamidiitti 271.7 mg (0,499 mmoolia) 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiiniä [valmistettu 5 kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] kuivattiin kolme kertaa atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä, jonka jälkeen se liuotettiin 2,5 ml:aan tetrahydrofuraania.
0,348 ml (2 mmoolia) N,N-di-isopropyyli-N-etyyliamiinia ja 0,223 ml (1 mmooli) 2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylikloorifosforamidiittia lisättiin tuloksena saatuun liuokseen ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa argon-atmosfäärissä kaksi tuntia.
10 Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin ^ 50 ml:aan etyyliasetaattia ja tuloksena saatu liuos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 50 ml:lla jäällä jäähdytettyä natriumsulfaatin 10 %:sta p/t vesiliuosta.
Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös laitettiin kolonniin, joka sisälsi 30 g (70—230 seulamitta) silikageeliä. Sitten se eluoi-15 tiin metyleenikloridin, etyyliasetaatinjatrietyyliamiinin välisellä45:45:10 tilavuusse-oksella. Ne fraktiot, jotka sisälsivät haluttua tuotetta, yhdistettiin, liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös laitettiin kolonniin, joka sisälsi 30 g (70—230 seulamitta) silikageeliä. Sitten se eluoitiin metyleenikloridin, etyyliasetaatin ja trietyyliamiinin välisellä 6:3:1 tilavuusseoksella, jolloin saatiin 20 286,9 mg (saanti 77 %) otsikkoyhdistettä.
) *H Ydinmagneettinen resonanssispektri CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 8.07 (1H, leveä singletti); 7,53, 7,51 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); 25 7,45—7,25 (10H, multipletti); 6,92—6,81 (3H, multipletti); 6,37 (1H, tripletti, J = 6,60 Hz); 5,15 (4H, singletti); 4,62—4,53 (1H, multipletti); 30 4,47 (2H, singletti); 4,22, 4,14 (yhdessä 1H, kaksi leveää singlettiä); 3,90—3,53 (6H, multipletti); 215 111265 2,68—2,53 (2H, multipletti); 2,47—2,05 (2H, multipletti); 1,58 (3H, singletti); 1,17 (12H, dubletti, J = 5,94 Hz).
5 7(c) Kaavan 7(c) mukainen yhdiste: , » /-r—C Η?0—\ C jV—CHi—0—TGGGAG—OH 7(c) 15
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiitinsijasta, valmistettiin 20 otsikkoyhdiste. Sitten reaktiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin ^ kromatografialla korkean suorituskyvyn nestekromatografiakolonnilla (Inertsil PREP- ODS, 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 15—45 til-%, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 7 ml/minuuttia; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 22,5 minuutin jälkeen, yhdistettiin ja työstettiin samanlaisella tavalla 25 kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 76 OD (260 nm) otsikkoyh-distettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), λ,^ nm: 254.
30 Viipymäaika: 13,6 minuuttia 111265 216
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 til-% B, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 2 ml/ minuutti; 254 nm).
5 ESIMERKKI 8
Kaavan 8(a) mukainen yhdiste: 10 ) ,-CH20—u))——O—TGGGA—OH 8(a) CF ^ * 15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiitin sijasta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 5 /xmoolilla A-CPG [s.o. adeniinideoksiri- 20 bonukleosidi (A) kytketty lasiin, jonka huokoisuus on säädetty ja sisällyttämällä emässekvenssi TGGGA syntetisoijaan, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote ) jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografiakolonnilla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 til-%, 30 25 minuuttia, lineaarigradientti; 7 ml/minuuttia; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 23,3 minuutin jälkeen, yhdistettiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 86,2 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena. 1
Viipymäaika: 14,2 minuuttia
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 256.
111265 217
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 til-% B, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 254 nm).
5 ESIMERKKI 9
Kaavan 9(a) mukainen yhdiste:
( 10 C^y-A
^^°_^_C*-O-TGG0-OH
15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5 ’ -0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N ,N-di-isopropyylifosforamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiitin sijasta ja sisällyttämällä emässekvenssi TGGG syntetisoijaan, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reak-20 tiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin kromatografialla kään-^ teisfaasi korkeansuorituskyvyn nestekromatografiakolonnilla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 25—55 til-%, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 7 ml/minuuttia; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 20,2 minuutin jälkeen, yhdistettiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin 25 se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 77,5 OD (260 nm) otsikkoyhdis-tettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 255.
30 Viipymäaika: 14,8 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; 111265 218 eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 til-% B, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 254 nm).
ESIMERKKI 10 5
Kaavan 10(a) mukainen yhdiste: CHh2ov_ 10 )
CH2°—\V_J/—CH2—0 TGGGG—°H 10(a) J
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta 15 käyttämällä 5 ’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforamidiitm sijasta ja sisällyttämällä emässekvenssi TGGGG syntetissoijaan, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin kromatografialla käään-20 teisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografiakolonnilla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 j til-%, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 7 ml/minuuttia; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 22,9 minuutin jälkeen, yhdistettiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 19,8 OD (260 nm) otsikkoyhdis-25 tettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
Viipymäaika: 14,1 minuuttia 30
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 til-% B, 30 111265 219 minuuttia, lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 254 nm).
ESIMERKKI 11 5 11(a) 5’-0-[(Pyren-l-yyli)metyyIi]tymidiini
Seosta, joka sisälsi 875 mg natriumhydridiä (55 %:na t/t dispersiona mineraaliöljyssä) 5 mhssa dimetyylisulfoksidia, sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia typpiatmosfäärissä ja sitten liuos, joka sisälsi 2,42 g (10 mmoolia) tymidiiniä 10 5 mhssa dimetyylisulfoksidia, lisättiin pisara kerrallaan tuloksena saatuun seokseen.
^ Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia, jonka jälkeen suspensio, joka sisälsi 2,51 g (10 mmoolia) l-(kloorimetyyli)pyridiiniä [Acta Chem. Scand., 10, 1362 (1956)] 15 ml.ssa dimetyylisulfoksidia, lisättiin. Seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 90 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos kaadettiin 15 100 ml:aan jäävettä ja vesiseos uutettiin 100 mklla etyyliasetaattia ja sitten 100 mhlla metyleenikloridia. Uute kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 150 g silikageelin (230—400 seulamitta) läpi käyttämällä gradienttieluointimenetelmää metyleenikloridin seoksilla, joka sisälsivät 0—4 til-% 20 metanolia eluenttina, jolloin saatiin 292, 4 mg (saanti 6,4 %) otsikkoyhdistettä.
( Ή Ydinmagneettinen resonanssispektri CDCf3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 8,44—8,07 (9H, multipletti); 7,44 (lh, singletti); 25 6,19 (1H, tripletti, J = 6,75 Hz); 5,33 (1H, dubletti, J = 5,4 Hz); 5,29 (2H, singletti); 4,37—4,30 (1H, multipletti); 4,00—3,96 (1H, multipletti); 30 3,92—3,79 (2H, multipletti); 2,10—2,04 (2H, multipletti); 1,20 (3H, singletti).
111265 220 11(b) 5’-0-[(Pyren-l-yyli)metyyli]tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifos-foramidiitti 91,3 mg (0,2 mmoolia) 5’-0-[(pyren-l-yyli)metyyli]tymidiiniä [valmistettu kuten on 5 kuvattu vaiheessa (a) edellä] kuivattiin kolme kertaa atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä, jonka jälkeen se suspendoitiin 2 ml:lla tetrahydrofuraania. 139 μΐ (0,8 mmoolia) N,N-di-isopropyyli-N-etyyliamiinia ja 89 μ\ (0,4 mmoolia) 2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylikloorifosforamidiittia lisättiin suspensioon argon-atmosfäärissä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän 10 jälkeen suodokset poistettiin suodattamalla ja suodos vapautettiin liuottimesta .
tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin 20 ml:lla etyyliasetaattia ja tuloksena saatu liuos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 20 ml :11a jäällä jäähdytettyä 10 %:stap/t natriumkarbonaatin vesiliuosta. Liuos kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa.
15 Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 30 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä metyleenikloridin, etyyliasetaatin ja trietyy-liamiinin välistä 6:3:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 100,2 mg (saanti 76 %) otsikkoyhdistettä. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 *H Ydinmagneettinen resonanssispektri CDCf3, 270 MHz, TMS), δ 2 ppm: 8,36—7,99 (9H, multipletti); ) 3 7,50, 7,46 (yhddessä 1H, kaksi singlettiä); 4 6,35 (1H, tripletti, J = 6,60 Hz); 5 5,38—5,22 (2H, multipletti); 6 4,60—4,50 (1H, multipletti); 7 4,25—4,17 (1H, multipletti); 8 4,01—3,77 (2H, multipletti); 9 3,73—3,44 (4H, multipletti); 10 2,78—2,09 (4H, multipletti); 11 1,31, 1,29 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); 1,10—1,05 (12H, multipletti).
111265 221 11(c) Kaavan 11(c) mukainen yhdiste:
5 lÖIÖL
CH-O-TGGGAG—OH 11(c) ^ 10 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-Q-[(pyren-2-yyli)metyyli]tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-iso-propyylifosforamidiita [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-trityy-litymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosformaidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin 15 kromatografialla käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografiakolonnilla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 til-%, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 7 ml/minuuttia; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 15,4 minuutin jälkeen, yhdistettiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 80 OD (260 20 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
(
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm:
Viipymäaika: 16,4 minuuttia 25
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 til-% B, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 254 nm). 1 111265 222 ESIMERKKI 12 12(a) O-Dimetoksitrityylietyleeniglykoli 5 3,1 g (50 mmoolia) etyleeniglykolia kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyridiinil- lä ja liuotettiin sitten 40 ml:aan pyridiini. 3,38 g (10 mmoolia) 4,4’-dimetoksitrityyli-kloridia lisättiin liuokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Kun oli varmistettu ohutkerroskromatografialla, että lähtöaine oli hävinnyt, lisättiin 5 ml metanolia reaktiosoeokseen ja seos väkevöitiin sitten noin 10 puoleen tilavuudestaan tislaamalla alennetussa paineessa. Konsentraatti liuotettiin 100 ml:aan metyleenikloridia ja tuloksena saatu liuos pestiin natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella. Orgaaninen liuos suodatettiin lPS-suodatinpaperin (Whatman) läpi ja suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa.
Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 100 g silikageelin (70—230 seulamitta) 15 läpi käyttämällä metyleenikloridia, joka sisälsi 1 til-% metanolia eluenttina, jolloin saatiin 1,97 g otsikkoyhdistettä kumimaisena aineena.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 7,45—6,82 (13H, multipletti); 20 3,79 (6H, singletti); 3,75 (2H, tripletti, J = 4,95 Hz); ) 3,25 (2H, tripletti, J = 4,62 Hz); 1,95 (1H, tripletti).
25 12(b) Kaavan 12(b) mukainen yhdiste: DMT—OCH2CH->OCCH->CHiC.NHCH->CHiCH->- CPG 12(b) " I, “ ‘Il --- *———— o o 30 0,18 g (0,5 mmoolia) O-dimetoksitrityylietyleeinigylkolia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä ja 111265 223 liuotettiin sitten 2 mlraan metyleenikloridia. 75 mg (0,75 mmoolia) sukkinianhydridiä ja 92 mg (0,75 mmoolia) 4-(dimetyyliamino)pyridiiniä lisättiin sitten liuokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yhden tunnin ajan. Kun oli varmistettu ohutker-roskromatografialla, että lähtöaine oli hävinnyt, reaktioseos laimennettiin mety-5 leenikloridilla ja laimennettu liuos pestiin kaliumdivetyfosfaatin 0,5 M vesiliuoksella (pH 5,0) ja vedellä mainitussa järjestyksessä. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin O-dimetoksitrityylietyleeniglykolimonosukkinaattia.
^ 10 Koko tämä yhdiste kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä ja liuotettiin sitten 3 mkaan dimetyyliformamidia. 0,16 g (0,75 mmoolia) pentakloorifenolia ja 0,16 g (0,75 mmoolia) 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidä lisättiin sitten liuokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 42 tuntia. Tämän jälkeen liukenemattomat aineet suodatettiin pois ja suodos väkevöitiin tislaamalla alennetussa 15 paineessa. Jäännös sekoitettiin bentseenillä ja tuloksena saadut liukenemattomat aineet suodatettiin jälleen pois, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa.
0,25 g (0,2 mmoolia) jäännöstä, joka oli valmistettu kuten kuvattiin edellä, liuotettiin 20 4 mkaan dimetyyliformamidia ja 60 μ\ (0,44 mmoolia) trietyyliamiinia ja 2,0 g (3- ( aminopropyyli)-CPG:tä (joka sisäksi 0,129 mmoolia/g aminoryhmiä) lisättiin liuokseen. Tuloksena saadun seoksen annettiin sitten seistä huoneen lämpötilassa 36 tuntia. Tämän jälkeen CPG-kantaja kerättiin suodattamalla, pestiin metyleenikloridilla ja kuivattiin sitten in vacuo. CPG-kantaja sekoitettiin 10 ml:lla sekä kapselin A että 25 B liuosta (Millipore Ltd., Japani) ja seoksen annettiin seistä 10 minuuttia, jotta asetyloitaiisiin mahdollinen jäljelle jäävä reagoiva aminoryhmä. Reaktiotuote pestiin sitten pyridiinillä ja metyleenikloridilla mainitussa järjestyksessä, jonka jälkeen se kuivattiin in vacuo, jolloin saatiin kaavan 12(b) mukainen otsikkoyhdiste. Kapselin A liuos on etikka-anhydridin ja tetrahydrofuraanin välinen 1;9 tilavuusseos ja 30 kapselin B liuos on N-metyyli-imidatsolin ja tetrahydrofuraanin välinen 1:4 tilavuusseos.
111265 224 Jäännösten osuus, jotka on johdettu O-dimetoksitrityylietyleeniglykolista, joka on sisällytetty kaavan 12(b) mukaiseen yhdisteeseen, analysoitiin kvantitatiivisesti seuraavalla tavalla. Seos, joka sisälsi 9,6 mg esimerkin 12(b) mukaista yhdistettä ja tasoittavaa liuosta (dikloorietikkahapon liuos metyleenikloridissa; Millipore Ltd., 5 Japani) ravistettiin 3 minuuttia ja sitten tarpeeksi metyleenikloridia lisättiin liuokseen liuoksen kokonaistilavuuteen 20 ml. 0,4 ml tätä liuosta otettiin koeputkeen ja käytettiin mittaukseen. Näyteliuos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin perkloorihapon ja etanolin 3:2 tilavuusseokseen. Dimetoksitrityylikationin absorbanssi liuoksessa määritettiin aallonpituudessa 10 500 nm. s Tämän tuloksena havaittiin, että dimetoksitrityyliryhmän määrä, joka sisällytettiin, oli 40,0 /xmoolia/g.
15 12(c) Kaavan 12(c) mukainen yhdiste:
O
20 (O)—C—O—TGGGAG-O—P—OCH2CH2OH 12(c) '- OH ) o 1 2 3 4 5 6
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta 2 käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 125 mg :11a (5 /tmoolia) esimerkin 12(b) 3 mukaista yhdistettä ja sisällyttämällä emässekvenssi TGGGAGZ (jossa Z on valekoo- 4 di, kuten on selitetty esimerkissä 17) syntetisoijaan, valmistettiin otsikkoyhdiste 5 käyttämällä DNA/RNA-syntetisoijaan, kuten on kuvattu esimerkissä 1(b). Reak- 6 tiotuote puhdistettiin kromatografialla (Preparative Cl8, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM vesipitoinen trimetyyliammoniumvetykarbonaattiapuskuri (TEAB), pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Eluaatti työstettiin samanlaisella 111265 225 tavalla kuin kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 165 OD (260 nm) otsikkoyh-distettä amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuuttia; 5 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,76 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
ESIMERKKI 13 ( 10
Kaavan 13(a) mukainen yhdiste: 0
15 N/ O
—C-O-TGGGAG-O-P—OCH2CHCH2NH2 13(a)
1 OH OH
O
20 ( Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 12(c), mutta käyttämällä 252 mg (5 ^moolia) 3’-amino-ON CPG (Clontech:in tuotteen tavaramerkki), valmistettiin otsikkoyhdiste. Tuote puhdistettiin kromatografialla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM vesipitoinen trimetyyliammoniumve-25 tykarbonaattiapuskuri (TEAB), pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Eluaatti työstettiin samanlaisella tavalla kuin kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 165 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 til-%, 30 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuuttia; 260 nm) osoitti, että näytteen vii pymäaika oli 18,76 minuuttia.
111265 226
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 255.
ESIMERKKI 14 5 Kaavan 14(a) mukainen yhdiste:
O
_ Y 0 10 \Cj)—C“0“TGGGAG~0—P“"0CH2CH20H l4ia) )
'— JL
o 15 Samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 12(c), toistettiin, mutta seuraavalla muutoksella. Kaavan 12(b) mukainen yhdiste kytkettiin ensin guani-diinideoksiribonukleotidi-B-amidiitilla 3’-pääteasemassa ja kolonni poistettiin sitten syntetisoijasta ilman hapetusta hapetusliuoksella. 5 ml tetraetyylitiuramdisulfidin (TETD) (Applied Biosystems) asetnitriililiuosta lisättiin sitten kolonniin, jonka 20 annettiin sitten seista huoneen lämpötilassa 15 minuuttia. Kolonni pestiin sitten asetnitriilillä ja asetettiin syntetisoijaan. )
Puhdistusvaiheessa kromatografia suoritettiin käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM vesipitoinen trimetyyliammoniumve-25 tykarbonaattiapuskuri (TEAB), pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Työstämällä samanlaisella tavalla kuin kuvattiin esimerkissä 1(b), saatiin 33 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 til-%, 20 minuuttia; 30 lineaarigradientti; 1 ml/minuuttia; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,92 minuuttia.
111265 227
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
ESIMERKKI 15 5 15(a) 5’-0-Trityyli-N-bentsoyyli-2’-deoksisytidiini 3,31 g (10 mmoolia) N-bentsoyyli-2’-deoksisytidiiniä lisättiin 25 ml:aan pyridiiniä ja sitten 3,07 g (11 mmoolia) trityylikloridia lisättiin suspensioon. Tuloksena saatua suspensiota sekoitettiin lämpötilassa 100. °C yhden tunnin ajan, jonka jälkeen sen ζ 10 annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan. Pyridiini poistettiin sitten tislaamalla alenne tussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös liuotettiin etyyliasetaatin ja natriumkloridin kyllästetyn vesiliuoksen seokseen. Orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella. Liuos kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla, jonka jälkeen liuotin poistet-15 itiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonni-kromatografialla silikageelin (Lobar-kolonni Si-60, koko C) läpi käyttämällä gra-dienttieluointimenetelmää metanolin ja metyleenikloridin seoksilla eluenttina, joiden tilavuussuhteet vaihtelivat alueella 2:98 - 5:95, jolloin saatiin 1,47 g (saanti 26 %) otsikkoyhdistettä.
20 ( *H Ydinmagneettinen resonanssispektri CDCf3, 270 MHz, TMS), <5 ppm: 8,72 (1H, leveä singletti); 8,26 (1H, dubletti, J = 7,3 Hz); 7,89 (1H, dubletti, J = 7,3 Hz); 25 7,26—7,64 (20H, multipletti); 6,29 (1H, tripletti, J = 5,9 Hz); 4,48-4,53 (1H, multipletti); 4,12—4,16 (1H, multipletti); 3,42—3,57 (2H, multipletti); 30 2,23-2,77 (2H, multipletti); 2,51 (1H, leveä singletti).
228 111265 15(b) 5’-0~Trityyli-N-bentsoyyli-2’-deoksisytidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopro-pyylifosforamidiitti 402 mg (0,7 mmoolia) 5’-0-trityyli-N-bentsoyyli-2’-deoksisytidiiniä [valmistettu 5 kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä ja liuotettiin sitten 3,5 ml:aan metyleenikloridia. 60 mg (0,35 mmoolia) di-isopropyyliammoniumtetratsolidia lisättiin liuokseen. 245 μΐ (0,77 mmoolia) 2-syanoetyyli-N,N,N\N’-tetraisopropyylifosfodiamidiittia lisättiin sitten pisara kerrallaan argon-atmosfäärissä. Tuloksena saatua seosta sekoitettin huoneen lämpötilassa 10 3.5 tuntia samassa atmosfäärissä. Tämän jälkeen metyleenikloridi poistettiin tislaa- j maila alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja liuos pestiin natriumkarbonaatin 10 %:lla p/t vesiliuoksella ja natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, mainitussa järjestyksessä. Liuos kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa 15 paineessa ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 23 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 337 mg (saanti 62 %) otsikkoyhdistettä vaahtomaisena aineena.
^ Ydinmagneettinen resonanssispektri CDCf3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 20 8,87 (1H, leveä singletti); 8,52 & 8,43 (1H, dubletti, J = 7,3 Hz); ) 8,12 & 8,11 (1H, dubletti, J = 7,3 Hz); 7,23—7,86 (20H, multipletti); 6,49—6,55 (1H, multipletti); 25 4,79-4,91 (1H, multipletti); 4.46— 4,47 (1H, multipletti); 3,60—4,10 (6H, multipletti); 2.46— 3,08 (4H, multipletti); 1,29—1,40 (12H, multipletti).
30 111265 229 15(c) Kaavan 15(c) mukainen yhdiste: 9 C-O-CGGGG-OH 15(c) 6 ( 10
Samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), toistettiin, paitsi että 35 mM esimerkin 15(b) mukaisen yhdisteen asetnitriililiuosta asetettiin amidiittipul-loon (johon viitataan "X") ja sisällyttämällä emässekvenssi XGGGG syntetisoijaan. 90 % vesipitoista formamidiliuosta, joka sisälsi näin saatua otsikkoyhdistettä, 15 kuumennettiin lämpötilassa 95 °C 5 minuuttia ja jäähdytettiin sitten jäässä välittömästi. Reaktioseos jaettiin sitten neljään osaan ja jokainen osa puhdistettiin kään-teisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografiakolonnilla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 15—45 til-%, 30 minuuttia, lineaarigradientti; 7 ml/minuuttia; 254 nm). Ne fraktiot, jotka 20 eluoituivat 20,2 minuutin jälkeen, yhdistettiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin ( se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 68 OD (260 nm) otsikkoyhdistet tä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H^O), Xmax nm: 254.
25
Viipymäaika: 13,25 minuuttia (korkean suorituskyvyn nestekromatografiakolonnilla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 10—60 til-%, 20 30 minuuttia, lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm).
111265 230 ESIMERKKI 16 16(a) Kaavan 16(a) mukainen yhdiste: 5 DMT—0(CH2CH20)6CCH:CH:C NHCH2CH2CH2-[ CPG ] 16(a) O o 0,26 g (0,5 mmoolia) O-dimetoksitrityyliheksaetyleenigly kolia [Nucleic Acids Res., 10 18, 6353 (1990)] kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä ja liuotettiin ) sitten 2 ml:aan metyleenikloridia. 75 mg (0,75 mmoolia) sukkinianhydridiä ja 92 mg (0,75 mmoolia) 4-(dimetyyliamino)pyridiiniä lisättiin sitten liuokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin kaksi tuntia. Kun oli varmistettu ohutkerroskro-matografialla, että reaktio oli täydellinen, reaktioseos laimennettiin metyleenikloridil-15 la ja laimennettu seos pestiin kaliumdivetyfosfaatin (pH 5,0) 0,5 M vesiliuoksella ja vedellä, mainitussa järjestyksessä. Orgaaninen kerros kuivattiin sitten vedettömän natriumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin O-dimetoksitrityyliheksaetyleeniglykolimonosukkinaattia.
20 Koko tämä tuote kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä ja liuotettiin sitten 1 ml:aan dimetyyliformamidia. 0,23 g (0,37 mmoolia) pentakloorifenolia ja ) 0,12 g (0,56 mmoolia) 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä lisättiin liuokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 tuntia. Tämän jälkeen liukenemattomat aineet, jotka saostuivat, suodatettiin pois ja suodos vapautettiin 25 liuottimesta haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin bentseeniin ja tuloksena saadut liukenemattomat aineet suodatettiin jälleen pois, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. 1 μ\ trietyyliamiinia ja 1,0 g (3-aminopropyyli)-CPG (joka sisälsi 0,129 mmoolia/g 30 aminoryhmiä) lisättiin sitten liuokseen, joka sisälsi 0,23 g (0,18 mmoolia) jäännöstä 5 ml:ssa dimetyyliformamidia ja tuloksena saadun seoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa 24 tuntia. Tämän jälkeen CPG-kantaja kerättiin suodattamalla ja pestiin 231 mm metyleenikloridilla, jonka jälkeen se kuivattiin in vacuo. Jotta asetyloitaisiin ne aminoryhmät, jotka eivät reagoineet, CPG-kantaja sekoitettiin 3 ml:aan kumpaakin cap A ja B liuoksia (Millipore Ltd., Japani) ja seoksen annettiin seistä 30 minuuttia. Reaktiotuote pestiin sitten pyridiinillä ja metyleenikloridilla mainitussa järjesyksessä, 5 jonka jälkeen se kuivattiin in vacuo, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä.
Se määrä O-dimetoksitrityyliheksaetyleeniglykolijäännöksiä, joka sisällytettiin esimerkin 16(a) yhdisteeseen, määritettin seuraavasti. Esimerkin 16(a) yhdiste (9,7 mg) mitattiin tarkasti ja tasoittava liuos (dikloorietikkahapon metyleenikloridili-^ 10 uos; Millipore Ltd., Japani) lisättiin siihen. Seosta ravistettiin 3 minuuttia ja sitten lisättiin riittävästi metyleenikloridia, jotta saataisiin 20 ml. 0,4 ml tätä liuosta otettiin sitten koeputkeen ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. 3 ml perkloorihapon ja etanolin välistä 3:2 tilavuusseosta lisättiin jäännökseen ja dimetok-sitrityylikationin absorbanssi (e = 71,700) aallonpituudessa 500 nm mitattiin.
15
Sisällytetyn dimetoksitrityyliryhmän määrä oli 59,1 jumoolia/g.
16(b) Kaavan 16(b) mukainen yhdiste: 20
( O
(Cj)—C—O—TGGGAG—O—P-0(CH2CH20)6H 16(b)
'- OH
25 O
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 12(c), mutta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 85 mgrlla (5 /unoolia) esimerkin 16(a) 30 mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Tuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi silikageeliklonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM vesipitoinen (TEAB), pH 7,5; 5—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm).
111265 232
Eluaatti työstettiin samanlaisella tavalla kuin kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 151 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi kään-teisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 til-%, 20minuuttia; 5 lineaarigradientti; 1 ml/minuuttia; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,50 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
10 ESIMERKKI 17 ^
Kaavan 17(a) mukainen yhdiste: 15 0 r i
_ O
/QV-C-0-TGGGAG-0--P—0(CH2CH20)6 H 17(a)
^- JL OH
» o )
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 85 mg :11a (5 /zmoolia) esimerkin 16(a) 25 mukaista yhdistettä ja käyttämällä 35 mM O-dimetoksitrityyliheksaetyleeniglykoli-O-(2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosfmidiitin asetnitriililiuosta [Nucleic Acis Res., 18, 6353 (1990)], asetettuna amidiittipulloon (ja viitataan tässä "X")ja sisällyttämällä emässekvenssi TGGGAGXZ -syntetisoijaan, otsikkoyhdiste valmistettiin. Tässä esimerkissä ja kaikkialla, X on määritelty kuten edellä ja Z on valekoodi, joka 30 laitetaan syntetisoijaan, joka ei laita sisään todellista emästä; kun sisällytetään valekoodi syntetisoijaan mikä vain koodeista A,G,C,T tai X voidaan laittaa sisään, mutta se ei johda siihen, että emäs lisätään sekvenssiin. Tuote puhdistettiin kromato- 111265 233 grafialla käänteisfaasisilikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 5—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Työstämällä samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), saatiin otsikkoyhdis-te, jolla oli 136 OD 8260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi 5 korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,32 minuuttia.
( 10 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
ESIMERKKI 18
Kaavan 18(a) mukainen yhdiste: 15
Ori"
_ O
20 \Cy—C—TGGGAG—°' -P—°(CH2CH2°)6 H 18(a)
/ '-' JL OH
1 0 1 2 3 4 5 6
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 17, mutta 2 sisällyttämällä emässekvenssi TGGGAGXXZ (jossa X ja Z on kuten on määritelty 3 esimerkissä 17) syntetisoijaan, valmistettiin otsikkoyhdiste. Tuote puhdistettiin 4 kromatografialla käänteifaasi silikageeliklonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 5—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm).
6
Työstämällä samanlaisella tavalla kuin kuvattiin esimerkissä 1(b), saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 136 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 111265 234 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,20 minuutin.
5 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), λ,^ nm: 255.
ESIMERKKI 19
Kaavan 19(a) mukainen yhdiste: 10 )
O
/-\ ©f II
(C~j)— C -0 - TGGG AG -O - - P —0(C H2C H20)6 H 19(a) λOH
0 4 20 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 17, mutta sisällyttämällä emässekvenssi TGGGAGXXXZ (jossa X ja Z on kuten on määritelty ' esimerkissä 17) syntetisoijaan, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteifaasi silikageeliklonnin läpi (Preparative Cl8, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 5—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm).
25 Työstämällä samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 110 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen 30 viipymäaika oli 17,99 minuutin.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
111265 235 ESIMERKKI 20 Kaavan 20(a) mukainen yhdiste: 5 o /r=\ I \\ (())—C-NH-TGGOAG-O-P-0(CH2CH20)6H 20(a)
10 '-/ OH
( O
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 2(c), mutta 15 käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 85 mg:lla (5 μιηοοϋη) esimerkin 16(a) mukaista yhdistettä ja sisällyttämällä emässekvenssi TGGGAGZ (jossa Z on kuten on määritelty esimerkissä 17) DNA/RNA-syntetisoijaan, kuten on kuvattu esimerkissä 1(b), valmistettiin otsikkoyhdiste. Tuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 20 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Työstämällä samanlaisella ( tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 177 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigra-25 dientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 19,10 minuutin.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
ESIMERKKI 21 236 111265 21(a) Kaavan 21(a) mukainen yhdiste: 5 rf-© 10 O 0 l A ) | ^ ^T*0 21(a)
DMT—OCH2CH2SCH2CH20-P—O—i 0 I
°NCCH2CH20 ^-/
OCCH2CH2CNH—(CH,)3—' CPG 15 II II
0 0 20 Liuos, joka sisälsi 250 mg 5’-fosfaattia ON (Clontechrin tuotteen tavaramerkki) 5,2 ml:ssa asetnitriiliä ja kolonni, joka oli pakattu 15 ^moolilla C-CPG:tä (Millipore )
Ltd., Japani), käytettiin DNA/RNA-syntetisoijassa, kuten on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste kvantitatiivisesti. 1 21(b) Kaavan 21(b) mukainen yhdiste: 237 111265 5 <"xV / « . T< J_© CS-0-!-0 ? Ϊ C^*o
—f och2ch2sch2ch2o—p—o— I
15 O I \ / ncch2ch2o \—!
occh2ch2cnh—(CH2)3—1 CPG
0 0 20 ( 5 ml tasoittavaa liuosta (Millipore Ltd., Japani) lisättiin suodattimena varustettuun kolonniin, joka oli pakattu 115 mg:lla (4 /xmoolia) esimerkin 21(a) mukaista yhdistettä. Sen annettiin sitten seistä yhden minuutin ajan, jonka jälkeen se pestiin 5 ml:lla 25 metyleenikloridia ja käsiteltiin sitten tasoittavalla liuoksella yhden minuutin ajan. Seos pestiin sitten 5 ml:11a metyleenikloridia ja 5 ml:lla pyridiiniä, mainitussa järjestyksessä, jonka jälkeen se tislattiin atseotrooppisesti pyridiinillä. Liuos, joka sisälsi20mgtrietyy liammonium-5 ’ -O-dimetoksitrityy li-2-N-isobutyryy Ii-2 ’ -deoksigu-anosiini-3’-0-(2-kloorifenyyli)fosfaattia [Nucleic Acids Res., 8, 5461 (1980)] 0,5 30 ml:ssa pyridiiniä, lisättiin sitten tisleeseen, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Liuos, joka sisälsi 40 mg 2,4,6-trimetyylibentseenisulfonyyli-3-nitrotriatsolia 0,5 ml:ssa pyridiiniä, lisättiin jäännökseen ja tuloksena saatua seosta 111265 238 kuumennettiin lämpötilassa 40 °C 30 minuuttia. Reaktioseos pestiin sitten kolme kertaa, jokaisella kerralla 5 ml:lla pyridiiniä ja sitten seokseen lisättiin 2,5 ml:lla kapselin A liuosta (Millipore Ltd., Japani) ja 2,5 ml:lla kapselin B liuosta (Millipore Ltd., Japani). Seoksen annettiin seistä 3 minuuttia, jonka jälkeen se pestiin kolme 5 kertaa, jokaisella kerralla 5 ml:lla metyleenikloridia, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä.
21(c) Kaavan 21(c) mukainen yhdiste: 10 [Q] > ch3°-^(Qm:"0“tgggag_0“?_0' \0) 21 (c) '-' JL OH Nf
O
15 OCH3
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), mutta 20 käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 115 mg:lla (4 ^moolia) esimerkin 21(b) mukaista yhdistettä ja tymiinideoksiribonukleotidi-j8-amidiittia (Millipore Ltd., )
Japani) 5 ’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyyli-fosforiamidiitin sijasta, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä. Reaktiotuote puhdistettiin käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM 25 TEAB, pH 7,5; 5—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Työstämällä samanlaisella tavalla kuin esimerkissä 1(b), saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 85 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—50 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/mi-30 nuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 21,5 minuutin.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), \max nm: 254.
ESIMERKKI 22 239 111265 22(a) Trietyyliammonium-5’-0-dimetoksitrityyli-2-N-isobutyryyli-2’-deoksigu-anosiini-3’-0-fenyyIifosfaatti 5 0,8 g (11,55 mmoolia) 1,2,4-triatsolia kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyri-diinillä ja suspendoitiin sitten 10 ml:lla dioksaania. 0,52 ml (3,5 mmoolia) fenyyli-fosforidikloridaattia lisättiin suspensioon ja sen jälkeen 1,0 ml (7,35 mmoolia) trie-tyyliamiinia samalla jäähdyttäen jäällä ja sekoittaen ja lämpötilan annettiin sitten ^ 10 kohota huoneen lämpötilaan. Seosta sekoitettiin kaksi tuntia, jonka jälkeen muodos tunut kloorivety suodatettiin pois, jolloin saatiin dioksaaniliuos, joka sisälsi 0,35 mmoolia/ml fenyylifosforibis(triatsolidaatti)a.
1 ml (0,35 mmoolia) fenyylifosforibis(triatsolidaati)n dioksaaniliuosta, joka oli 15 valmistettu kuten edellä kuvattiin, lisättiin liuokseen, joka sisälsi 0,15 g (0,23 mmoolia) 5’-0-dimetoksitrityyli-2-N-isobutyryyli-2’-deoksiguanosiinia [Methods Enzymol., M. 610 (1980)] ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia. Tämän jälkeen noin 10 ml 30 til-%:sta vesipitoista pyridiiniä lisättiin. Reaktioseos uutettiin sitten 30 ml:11a metyleeniklrodia ja uute pestiin 0,1 M 20 TEAB. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös ( liuotettiin 1 ml:lla metyleenikloridia ja trituroitiin 30 ml:lla heksaanin ja dietyylieet- terin välistä 1:1 tilavuusseosta, joka sisälsi 1 til-% trietyyliamiinia, jolloin saatiin 81 mg (saanti 40 %) otsikkoyhdistettä pulverina. 1 2 3 4 5 6 *H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), b ppm: 2 12,07 (1H, leveä singletti); 3 9,67 (1H, leveä singletti); 4 7,80-7,64 (1H, multipletti); 5 7.47— 6,91 (18H, multipletti); 6 6,12—6,10 (1H, multipletti); 5.48— 5,45 (1H, multipletti); 4,64—4,58 (1H, multipletti); 111265 240 4,28 (1H, multipletti); 3,74 (6H, singletti); 3,38-3,18 (2H, multipletti); 2,98—2,89 (6H, multipletti); 5 2,73-2,51 (2H, multipletti); 2,34—2,29 (1H, multipletti); 1,25—1,19 (9H, multipletti); 1,12-0,99 (6H, multipletti).
10 22(b) Kaavan 22(b) mukainen yhdiste: j
O
15 \ 1 1 / DMT O | N-^n^nhc_X 0 _ p 5 £© 20 O-0-)”0 t V ^Λο «O) '— och2ch2sch2ch,o-p—o— 5 " I n } ncch,ch2o \—/
OCCH2CH2CNH— (CH2),—t CPG
o o 25
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 21(b), mutta 30 käyttämällä 143 mg (5 /xmoolia) esimerkin 21(a) mukaista yhdistettä ja esimerkin 22(a) mukaista yhdistettä, saatiin otsikkoyhdiste.
22(c) Kaavan 22(c) mukainen yhdiste: 241 111265
5 O
(O)—C-O-TGGGAG-O—P—O —{(3/ 22(c) '-' OH '-'
O
( 10
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 143 mg:lla (5 ^moolia) esimerkin 22(b) mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin sitten 15 käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Työstämällä samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 66 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 20 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; ^ lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,22 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), \max nm: 255.
25 ESIMERKKI 23 242 111265
Esimerkin 23 (a) mukainen yhdiste: 5 (ö] Cl /PSvJ ° -)r\ (())—C-ο—TGGGAG-O—p—o—23(a) 10 '-/ OH N-/ O }
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), mutta 15 käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 115 mg:lla (4 ^moolia) esimerkin 21(b) mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromato-grafialla käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Työstämällä samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), saatiin 20 otsikkoyhdiste, jolla oli 56 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 j mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymä-aika oli 18,38 minuutin.
25
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 255.
24(a) Kaavan 24(a) mukainen yhdiste: 243 111265 ESIMERKKI 24 5 <"tV .
°MT O | o N-S^NHC / 0 ( 10 yJ ° , (X » och2ch2sch,ch2o~p—o— o " r °x 15 NCCH2CH20 I_/ 0CCH2CH2CNH~(CH2)3—j~CPG~ o o 20 (
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 21(b), mutta käyttämällä 143 mg (5 ^moolia) esimerkin 21(a) mukaista yhdistettä ja trietyyliam-25 monium-5-O-dimetoksitrityyli-2-N-isobutyryyli-2,-deoksiguanosiini-3’-(4-kloori-fenyyli)fosfaattia [Methods Enzymol., 65, 610 (1980)], saatiin otsikkoyhdistettä.
111265 244 24(b) Kaavan 24(b) mukainen yhdiste: 5 ^ o —C-O-TGGGAG-O—p—O——Cl 24(b) ό ” 10 )
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 143 mg:lla (4 ^moolia) esimerkin 24(a) mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromato-15 grafialla käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Työstämällä samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 55 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 20 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,55 minuutin.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 255.
25
ESIMERKKI 25 DMT-O-TGGGAG-OH
30 Haluttu emässekvenssi (5’-TGGGAG-3’) sisällytettiin 380-B -syntetisoijaan (yhtiön Ablaid Biosystems Inc. tuote) ja kontrolloidun huokoinen lasikolonni (1 jumolrn skaala), joka oli sidottuna vastaavaan nukleosidiin (2’-deoksiguanosiini) 3’-päädyssä, 111265 245 kytkettiin siihen. Synteesi suoritettiin 1 μπιοοίΐη skaalalla. Laite koostettiin DMT-ryhmän suojan poistamiseksi reaktion mentyä loppuun ja tuote, jolla on DMT-ryhmä, vapautettiin automaattisesti hartsista, jolloin saatiin oligodeoksiribonukleotidi ammoniakkiliuoksena. Tämä liuos suljettiin lääkepulloon ja kuumennettiin lämpötilas-5 sa 55 °C 8 tuntia ja ammoniakki haihdutettiin pois typpivirrassa. Tuloksena saatu jäännös liuotettiin pieneen määrään 0,1 M TEAA (pH 7,0). Tämä liuos suodatettiin millihuokossuodattimen läpi (0,2 μπι) ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Cosmosil 5C18-AR, 20 x 250 mm) seuraavassa luetelluissa olosuhteissa. Ne fraktiot, jotka eluoituivat 13,5 minuutin jälkeen, 10 kerättiin ja vapautettiin liuottimesta (asetnitriili) tislaamalla alennetussa paineessa ja ( sitten lyofilisoinnilla, jolloin saatiin 800 μg otsikkoyhdistettä. Eluointiaika 17,0 minuuttia.
Eluointiaika: 17,0 minuuttia 15
Olosuhteet preparatiivisessa korkean suorituskyvyn nestekromatografiassa:
Puskuriliuos A: 0,1 M, tretyyliammonium Asetaattipuskuri (pH 7,0) 20 Puskuriliuos B: 100 % asetnitriili Virtausnopeus: 9 ml/min.
Aika (min) Puskuri A (%) Puskuri B (%) 0 80 20 25 15 55 45 20 55 45 ESIMERKIT 26-38 30 Suorittamalla samanlainen menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 25, esimerkkien 26—38 yhdisteet syntetisoitiin. Yhdisteiden nimet ja niiden eluointiajat on lueteltu taulukossa 3.
Taulukko 3 246 111265
Esimerkki nro Yhdisteen nimi Viipymäaika 5 _ 26 DMT-O-TGGG-OH 17,5 min.
27 DMT-O-TGGGA-OH 16,7 min.
28 DMT-O-TGGGG-OH 16,8 min.
29 DMT-O-CGGGAGG-OH 16,3 min.
10 30 DMT-O-TGGGAGG-OH 16,2 min.
31 DMT-O-TTGGAGG-OH 18,0 min. ' 32 DMT-O-TGCGAGG-OH 17,2 min.
33 DMT-O-GGGGAGG-OH 15,3 min.
34 DMT-O-mCGGGAGG-OH 16,3 min.
15 35 DMT-O-mCGmCGAGG-OH 16,6 min.
36 DMT-O-TGGGAGG-OH 17,1 min.
37 DMT-O-CTGGGAGG-OH 17,7 min.
38 DMT-O-CTGGT-OH 17,2 min.
39 DMT-O-CTGGC-OH 17,1 min.
20 40 DMT-O-CTCGT-OH 17,6 min.
41 DMT-O-CTCGC-OH 17,4 min. .
42 DMT-O-CTCGG-OH 17,5 min.
43 DMT-O-CGGGT-OH 16,1 min.
44 DMT-O-CGGGC-OH 16,1 min.
25 45 DMT-O-CGGGG-OH 16,2 min.
46 DMT-O-CGCGT-OH 17,8 min.
47 DMT-O-CGCGC-OH 17,5 min.
Taulukko 3 (jatk.) 247
Esimerkki nro Yhdisteen nimi Viipymäaika 5 _ 48 DMT-O-CGCGG-OH 18,0 min.
49 DMT-O-TTGGA-OH 18,6 min.
50 DMT-O-TTGGT-OH 18,6 min.
51 DMT-O-TTGGC-OH 18,4 min.
10 52 DMT-O-TTGGG-OH 17,7 min.
( 53 DMT-O-TTCGA-OH 18,9 min.
54 DMT-O-TTCGT-OH 18,7 min.
55 DMT-O-TTCGC-OH 18,6 min.
56 DMT-O-TTCGG-OH 18,8 min.
15 57 DMT-O-TGGGT-OH 17,6 min.
58 DMT-O-TGGGC-OH 17,4 min.
59 DMT-O-TGCGA-OH 17,8 min.
60 DMT-O-TGCGT-OH 17,7 min.
61 DMT-O-TGCGC-OH 18,3 min.
20 62 DMT-O-TGCGG-OH 17,6 min.
63 DMT-O-CTCG-OH 17,9 min.
^ 64 DMT-O-TTCG-OH 19,1 min.
65 DMT-O-CTGG-OH 17,1 min.
66 DMT-O-CGCG-OH 18,2 min.
25 67 DMT-O-TGCG-OH 18,0 min.
68 DMT-O-CGGG-OH 16,2 min.
69 DMT-O-TTGG-OH 18,2 min.
70 DMT-O-GGGCGGGGC-OH 15,4 min.
71 DMT-O-TAGGAGG-OH 17,7 min.
30 72 DMT-O-TGGGAGGT-OH 16,2 min.
73 DMT-O-TGGGCGCAG-OH 17,1 min.
74 DMT-O-CCG-OH 16,7 min.
Taulukko 3 (jatk.) 248 111265
Esimerkki nro Yhdisteen nimi Viipymäaika 5 _ 75 DMT-O-TCGGAGG-OH 17,5 min.
76 DMT-O-TGmCGAGG-OH 16,6 min.
77 DMT-O-CTGGGAGG-OH 15,7 min.
78 DMT-O-TGG-OH 15,4 min.
10 79 DMT-O-TGGGAmGG 16,3 min.
80 DMT-O-TGGGAGA-OH 16,7 min.
81 DMT-O-AATGGGAGG-OH 14,9 min.
15 ESIMERKKI 82 82(a) Kaavan 82(a) mukainen yhdistelmä:
O
20 1 H
DMT—O—I N'^n^NHC—O ,--
Yj ° 25 ? Il CH3O—P—O I o 82ia) 0CH2CH2SCH2CH20-P—O—] o I Vj ncch2ch2o \-f
OCCH2CH2CNH— (CHOi—· CPG
30 II II ' - o o 249 11 Kis
Synteesiin vaaditut reagenssit on esitetty yksityiskohtaisemmin seuraavassa ja syötettiin syklooniin (Cyclone, tavaramerkki Plus Milligen Bio.) DNA/RNA -syntetisoijaan Milligen/biosearch (Millibor Ltd., Japani). Asennettiin myös ohjelma-kasetti amidiittimenetelmälle (15 mmol). Käytettiin noin 35 mM 5’-0-dimetoksitri-5 tyyli-2-N-isobutyryyli-2,-deoksiguanosiini-3’-0-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin asetnitriililiuosta (Sigma) guanosiinia vastaavan B-syanoetyyliamiiditin sijasta. Käyttämällä tyhjää kolonnia (15,0 mmol), joka oli pakattu 143 mg:lla (5 mmol) esimerkin 21(a) yhdistettä, sisällyttämällä emässekvenssi GX -syntetisoijaan ja työstämällä ohjelma ilman happokäsittelyä kun oli sidottu emäksellä G saatiin otsikkoyhdiste.
10 ( 82(b) Kaavan 82(b) mukainen yhdiste: 15 CÖ) __ o (Cy)—C—O—TGGGAG—O—P—OCH3 82(b)
'- JL OH
O
20 ( Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 143 mg :11a (5 /xmoolia) esimerkin 82(a) mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Tuote puhdistettiin kromatografialla 25 käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative Cl8, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 66 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 250 30 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuuttia; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymä-aika oli 17,54 minuuttia.
111265 250
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
ESIMERKKI 83 5 83(a) Kaavan 83(a) mukainen yhdiste: 0 ;/n^h .
1° Λ Jl I y E)MT 0 i N^n^nhc/ o „ > V 5 CH30-j=S f o lNX0
0CH2CH2SCH,CH,0—P—O—I I
r · Ή ncch2ch2o \_/
OCCH2CH2CNH—(CH2)3—I CPG
o o 20 )
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 82(a), mutta 25 käyttämällä 143 mg (5 /unoolia) esimerkin 21(a) mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Yksityiskohtaisesti kytkemisen jälkeen 5’-0-dimetoksitrityyli-2-N-isobutyiyyli-2’-deoksiguanosiini-3’-0-(metyyli-N,N-di-isopropyyli)fosforiamidiitilla, kolonni otettiin pois DNA/RNA-syntetisoijasta ilman hapettamista hapetusliuoksella.
5 ml tetraetyylitiuramdisulfidia (TETD) (Applied Biosystems) asetnitriililiuosta 30 lisättiin kolonniin ja kolonnin annettiin seistä huoneen lämpötilassa 15 minuuttia.
Kolonni pestiin sitten asetnitriilillä ja asennettiin syntetisoijaan.
251
Kolonm pestiin sitten asetnitriilillä ja asennettiin syntetisoijaan.
83(b) Kaavan 83(b) mukainen yhdiste: 5
O
(C"j)—C—O—TGGGAG—O—P—OCH3 83(b) io '— ( p
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), mutta 15 käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 143 mg:lla (5 /unoolia) esimerkin 83(a) mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromato-grafialla käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin 20 saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 111 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B; asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuuttia; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 17,72 minuuttia.
25
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), λ,^ nm: 254.
84(a) Kaavan 84(a) mukainen yhdiste: 252 111265 ESIMERKKI 84 5
O
/^An'h DMT~°"V^N N^NHiK 5_^Λ “ p 0 > ch3-p=o f o V^o och2ch2sch2ch,o-p—o—| 0 1 84(a) 15 °ncch2ch2o \_/ OCCH2CH2CNH—(CH2)3-1 c?g] O o 1 2 3 4 5 6 30
Synteesiin vaadittavat reagenssit, kuten on yksityiskohtaisesti kuvattu myöhemmin, 2 syötettiin Milligen/biosearch:in (Millipore Ltd., Japani) sykloniin (Cyclone tavara- .
3 merkki) Plus DNA/RNA -syntetisoijaan. Käyttämällä tyhjää kolonnia (15,0 /unoolia), 4 Käytettiin noin 35 mM deoksiguanosiinin (N-iBu) metyylifosfonamidiitin (American 5
Bionetic Inc.) tetrahydrofuraaniliuosta β-syanoetyyliamiidiittiliuoksen sijasta, joka 6 vastasi guanosiinia. Käyttämällä tyhjää kolonnia, joka oli pakattu 143 mg:lla (5 μιηοοΗη) esimerkin 21(a) mukaista yhdistettä kiinteänä kantajana, sisällyttämällä emässekvenssi GZ (jossa Z on kuten on määritelty esimerkissä 17) ja työstämällä ohjelma ilman happokäsittelyä kun oli sidottu emäksellä G, saatiin otsikkoyhdiste.
84(b) Kaavan 84(b) mukainen yhdiste: 253 111265 5
O
_ O
\Gy—C-0-TGGGAG-0-P-CH3 84(b)
'-' JL OH
< 10 o 15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 143 mg:lla (5 ^moolia) esimerkin 84(a) mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromato-grafialla käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten 20 se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 159 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. ^ Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuuttia; 260 nm) osoitti, että näytteen 25 viipymäaika oli 18,03 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
254 1112ί5 ESIMERKKI 85 85(a) Kaavan 85(a) mukainen yhdiste: 5
<XV X
" T< ? o (j! CH,-P=S f O VN> 15 OCHlCH2SCH2CH20-P-0-, 0 j 85(a) °NCCH2CH20 V—/
OCCH2CH2CNH—(CH2)3—[ CPG
o o 20 .)
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 143 mgrlla (5 ^moolia) esimerkin 21(a) mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Yksityiskohtaisemmin, kun oli 25 kytketty deoksiguanosiini-(N-iBu)metyylifosfoniamidiitilla, kolonni poistettiin syntetisoijasta ilman hapettamista hapetusliuoksella ja sitten lisättiin 4 ml tetranme-tyylitiuramdilsulfidin (TETD) asetnitriililiuosta kolonniin. Kolonnin annettiin seistä huoneen lämpötilassa 15 minuuttia, jonka jälkeen se pestiin asetnitriilillä ja asetettiin jälleen syntetisoijaan.
30 85(b) Kaavan 85(b) mukainen yhdiste: 111265 255
1 O
/r\^T ° (X))—C—0—TGGGAG-O—P—CH3 85(b)
'- Jvs. SH
O
10 (
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 143 mg:lla (5 ^moolia) esimerkin 85(a) 15 mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromato-grafialla käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), .jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 124 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä ainee-20 na. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 ^ B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuuttia; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,07 minuuttia. 1
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
1112« ESIMERKKI 86
Kaavan 86(a) mukainen yhdiste 256 5 p (O)—C—O—TGGGAG—0—P—OH 86(a)
10 -' 1. OH
O
15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 143 mg:lla (5 ^moolia) esimerkin 21(a) mukaista yhdistettä ja sisällyttämällä emässekvenssi TGGGAGZ (jossa Z on kuten on määritelty esimerkissä 17) DNA/RNA-syntetisoijaan, kuten on kuvattu esimerkissä 1(b), valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla kään-20 teisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstet-tiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 54 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 25 250 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuuttia; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 15,20 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 255.
30 ESIMERKKI 87
Kaavan 87(a) mukainen yhdiste: 257 ιιιι:2® 5
O
?\ (A))—C—O—TGGGAG-O—P—OH 87(a)
10 '-' SH
( O
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 86, mutta 15 käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 143 mg:lla (5 /unoolia) esimerkin 21(a) mukaista yhdistettä, valmistettiin otsikkoyhdiste. Yksityiskohtaisemmin, kun ensin oli kytketty G-B-amidiitilla 3’-päätteessä, kolonni poistettiin DNA/RNA-syntetisoijasta ilman hapettamista hapetusliuoksella. 5 ml tetraetyylitiuramdisulfidin (TETD) (Applied Biosystems) asetnitriililiuosta lisättiin kolonniin ja kolonnin annettin seistä 20 huoneen lämpötilassa 15 minuuttia, jonka jälkeen se pestiin asetnitriilillä ja asennettiin syntetisoijaan.
(
Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi silikageelikolonnin läpi (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnit-25 riili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jolla oli 136 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 30 1 ml/minuuttia; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,02 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), λ,^ nm: 254.
ESIMERKKI 88
Kaavan 88(a) mukainen yhdiste: 258 m2m 5
O
^—C—O—TGGGAG-OH 5Na® 88(a) 6 15 Dowex 50W-X2 ioninvaihtohartsia (yhtiön Dow Chemical Co. tuotteen tavaramerkki; H-muoto; noin 1 ml) pakattiin kolonniin ja 3 ml pyridiinin 20 %:sta t/t vesiliuosta annettiin kulkea kolonnin läpi, joka sitten pestiin vedellä hartsin pyridiinimuodon valmistamiseksi kolonniin. Suorittamalla samanlainen menetelmä, mutta käyttämällä 3 ml natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta, hartsin natriummuoto valmistettiin toisessa 20 kolonnissa. Esimerkin 1(b) yhdiste, jolla on 27 OD, syötettiin sitten peräkkäin pyridiinimuotohartsikolonnin ja natriummuotohartsin yhdistelmään mainitussa järjestyksessä ja kolonnit eluoitiin vedellä, jolloin saatiin otsikkoyhdiste (natrium- ^ suola), jolla on 27 OD (260 nm) amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaa-si korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti 25 A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti; asetnitriili; 10—60 B til-%; 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,12 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 256.
30 ESIMERKKI 89
Kaavan 89(a) mukainen yhdiste: 259 5 ö —O—TGGGAG—OH 5K® 89(a) 10 X-/
' O
15 Dowex 50W-X2 ioninvaihtohartsia (yhtiön Dow Chemical Co. tuotteen tavaramerkki; H-muoto; noin 1 ml) pakattiin kolonniin ja 3 ml pyridiinin 20 %:sta t/t vesiliuosta annettiin kulkea kolonnin läpi, joka sitten pestiin vedellä hartsin pyridiinimuodon valmistamiseksi kolonniin. Suorittamalla samanlainen menetelmä, mutta käyttämällä 3 ml kaliumhydroksidin 1 N vesiliuosta, hartsin kaliummuoto valmistettiin toisessa 20 kolonnissa. Esimerkin 1(b) yhdiste, jolla on 27 OD, syötettiin sitten pyridiinimuoto-hartsikolonnin ja kaliummuotohartsin yhdistelmään mainitussa järjestyksessä ja ^ kolonnit eluoitiin vedellä, jolloin saatiin otsikkoyhdiste (kaliumsuola), jolla on 27 OD
(260 nm) amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; 25 eluentti; asetnitriili; 10—60 B til-%; 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,18 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
30 Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti; asetnitriili; 10—60 B til-%; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 18,18 minuuttia.
260
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), \nai( nm: 254.
ESIMERKKI 90 5 Kaavan 90(a) mukainen yhdiste: 10 o ) /-rCH,0-Yn)—CH2—O—TGGGAG-O-P—OCH;CH2OH 90(a) 0 » 15
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 14(a), mutta käyttämällä 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] 20 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi silikageelikolonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 10—50 % asetnitriili; lineaarigradientti;· 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 25 otsikkoyhdiste, jossa oli 119 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti; asetnitriili; 10—60 B til-%; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 19,20 minuuttia.
30 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), \max nm: 254.
ESIMERKKI 91
Kaavan 91(a) mukainen yhdiste: 261 111265 5 o 10 CH2° (O)—c^2 ® TGGGAG 0 P OCH3 91(a) 15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 82(b), mutta käyttämällä 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] 5 ’ -O-trityylitymidiini-2-sy anoetyy li-N, N-di-isopropyy lifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi 20 silikageelikolonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 20—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella ^ tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jossa
oli 50 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M
25 TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 19,15 minuuttia.
30
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
ESIMERKKI 92
Kaavan 92(a) mukainen yhdiste: 262 111265 5
Ch- „ ^^~CH2° O—TGCGAG—O—P—O—92(a) 15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 22(c), mutta käyttämällä 5 ’ -0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N, N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi 20 silikageelikolonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 15—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jossa ^ oli 67 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M 25 TEAA, pH 7,5; eluentti; asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 19,51 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 255.
30 ESIMERKKI 93
Kaavan 93(a) mukainen yhdiste: 263 111265 5 0-, o /P^CU2°~(Cj)—CU2—O-TGGGAG-O-P—0(CH,CH20)6H 93(a)
( 10 <Q) W
15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 16(b), mutta käyttämällä 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi 20 silikageelikolonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 15—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jossa oli 96 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M 25 TEAA, pH 7,5; eluentti; asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 19,26 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
30 ESIMERKKI 94
Kaavan 94(a) mukainen yhdiste: 264 111265 5
CH”)- O
-CH20—(Cj)—CH2—0—TGGGAG—O—P—OCH2CH2OH 94(a) 15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 12(c), mutta käyttämällä 5 ’-Q-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi 20 silikageelikolonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 15—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella ) tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jossa oli 97 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M 25 TE AA, pH 7,5; eluentti; asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 19,16 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
30 ESIMERKKI 95
Kaavan 95(a) mukainen yhdiste: 265 il ms 5
? JU
10 —™-°^—95(^ 15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 23(a), mutta käyttämällä 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi 20 silikageelikolonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; ^ 15—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jossa oli 83 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M 25 TEAA, pH 7,5; eluentti; asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 19,80 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 255.
30 ESIMERKKI 96
Kaavan 96(a) mukainen yhdiste: 266 111265 5
O
\0/ 0~CGCK}G-O-P”-OCH2CH20H 96(a)
10 '-' X OH
o 15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 15(c), mutta käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 125 mg:11a (5 /unoolia) esimerkin 12(b) mukaista yhdistettä ja sisällyttämällä emässekvenssi XGGGGZ (jossa Z on kuten on määritelty esimerkissä 17) syntetisoijaan. 90 % p/p formamidin vesiliuos, joka sisälsi näin saatua otsikkoyhdistettä, kuumennettiin sitten lämpötilassa 95 °C viisi minuuttia. 20 Tämän kuumentamisen jälkeen liuos jäähdytettiin nopeasti. Reaktioseos jaettiin sitten neljään osaan ja jokainen osa puhdistettiin käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,0; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 260 nm; kolonnin lämpötila 60 °C). Fraktiot, jotka oli eluoitu 25 20,7 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 79 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 253.
Viipymäaika: 13,22 minuuttia 30 111265 267
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaa-rigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm).
5 ESIMERKKI 97
Kaavan 97(a) mukainen yhdiste: 10
' O
^—€—O—CGCGG—OH 97(a) 15 ό
Samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), toistettiin paitsi 20 että 35 mM esimerkin 15(b) mukaisen yhdisteen asetnitriililiuosta amidiittipullossa X käytettiin ja emässekvenssi XGCGG sisällytettiin syntetisoijaan ohjelmana. 90 % ^ formamidin vesiliuosta, joka sisälsi näin saatua otsikkoyhdistettä, kuumennettiin lämpötilassa 95 °C viisi minuuttia. Tämän kuumentamisen jälkeen liuos jäähdytettiin nopeasti. Reaktioseos jaettiin sitten neljään osaan ja jokainen osa puhdistettiin 25 käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,0; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 260 nm; kolonnin lämpötila 60 °C). Fraktiot, jotka oli eluoitu 21,7 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 123 OD (260 nm) 30 otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 255.
111265 268
Viipymäaika: 13,58 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaa-5 rigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm).
ESIMERKKI 98
Kaavan 98(a) mukainen yhdiste: 10 ) „ ϊ »-^-CH20—\K_j)—^H2—O-TGGGAG—O—P—OCH3 98(a) <Q> w sH 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 2
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 83(b), 3 mutta käyttämällä 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N- 4 di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] 5 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, 6 valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi 7 silikageelikolonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 8 15—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella 9 tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jossa 10 oli 92 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean 11 suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti; asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 19,46 minuuttia.
111265 269
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
5 ESIMERKKI 99
Kaavan 99(a) mukainen yhdiste: ( ” o ,-CHjO—(Cj)—CH2—O—TCX5GAG—0—P—OH 99(a) i5 <y> w °h
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 86, mutta 20 käyttämällä 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-^ di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] 5’-0- trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitinsijasta,valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi silikageeli-kolonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 15—50 25 B til-% asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jossa oli 43 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti; asetnitriili; 10—60B til-%, 20minuuttia; lineaarigradientti; 30 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 19,12 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
ESIMERKKI 100
Kaavan 100(a) mukainen yhdiste: 270 111265 5 <OHHj0v^ 0 O-CHjO—((Vh-CHj-O-TGGGAG-O-P-OH l00(a) SH ) 15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 87, mutta käyttämällä 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitinsijasta,valmistettiin . otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi silikageeli-20 kolonnilla (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; 15—50 % asetnitriili; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla ) kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jossa oli 36 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena. Analyysi käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS, 6 x 150 mm; eluentti A: 0,1 M 25 TEAA, pH 7,5; eluentti B; asetnitriili; 10—60 B til-%; 20 minuuttia; lineaarigradientti; 260 nm) osoitti, että näytteen viipymäaika oli 19,11 minuuttia.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 255.
30 271 111265 ESIMERKKI 101
Kaavan 101(a) mukainen yhdiste: 5 O-CH20—(Cj)—CH2—O—TTGGGG—OH 101 (a)
Otsikkoyhdiste valmistettiin suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on 15 kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 35 mM 5’-0-(3,4-dibentsyylioksibent-syyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] amidiittipullossa X ja sisällyttämällä emässekvenssi XGCGG syntetisoijaan ohjelmana. Reaktiotuote jaettiin sitten kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin korkean suorituskyvyn käänteisfaasinestekromatografialla 20 (Inertsil PREP-ODS 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,0; eluentti B: ^ asetnitriili; 25—55 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 254 nm).
Fraktiot, jotka oli eluoitu 19,8 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 173 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
25
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 255.
Viipymäaika: 15,1 minuuttia 30 Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 254 nm).
272 111265 ESIMERKKI 102
Kaavan 102(a) mukainen yhdiste: 5 /"V. CH2Q—\C^j)—CH2—O—TGGGGG—OH I02(a) 10 '—' )
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 12(c), mutta käyttämällä 5 ’-0-(3,4-dibentsyylioksibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(b)] 15 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta
ja sisällyttämällä emässekvenssi TGGGGG syntetisoijaan ohjelmana, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote jaettiin sitten kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS
20,0 x 20 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,0; eluentti B: asetnitriili; 25—55 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 254 nm). Fraktiot, jotka oli eluoitu , 14,4 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 120,2 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
25
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
Viipymäaika: 13,1 minuuttia 30 Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 254 nm).
111265 273 ESIMERKKI 103 103(a) 5’-0-[(Naftalen-2-yyli)metyyli]tymidiini 5 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 6(a), mutta käyttämällä 442 mg (2 mmoolia) 2-bromimetyylinaftaleenia, saatiin 253,1 mg (saanti 33 %) otsikkoyhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 10 8,12 (1H, leveä singletti); 7.88— 7,43 (8H, multipletti); 6,40 (1H, tripletti, J = 6,75 Hz); 4,76 (2H, singletti); 4,61—4,54 (1H, multipletti); 15 4,12—4,10 (1H, multipletti); 3.88— 3,72 (2H, multipletti); 2,40—2,20 (2H, multipletti); 2,05 (1H, leveä singletti); 1,58 (3H, singletti).
20 ^ 103(b) 5’-0-[(Naftalen-2-yyli)metyyli]tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyy- lifosforiamidiitti
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 14(a), 25 mutta käyttämällä 77 mg (0,2 mmoolia) 5’-0-[(naftalen-2-yyli)tymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 62,5 mg (saanti 54 %) otsikkoyhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCC3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 30 7,88—7,43 (8H, multipletti); 6,39 (1H, tripletti, J = 7,26 Hz); 4,75 (2H, leveä singletti); 274 111265 4.68— 4,60 (1H, multipletti); 4,25, 4,20 (yhdessä 1H, kaksi leveää singlettiä); 3,90—3,53 (6H, multipletti); 2.68— 2,18 (4H, multipletti); 5 1,57, 1,55 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 1,17 (12H, dubletti, J = 6,60 Hz).
103(c) Kaavan 103(c) mukainen yhdiste: 10 ) CH2 O—TGGGAG—O H 103(c) 15
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-0-[(naftalen-2-yyli)metyyli]tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopro-pyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-20 0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa j puhdistettiin käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,0; eluentti B: asetnit-riili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 254 nm).
25 Fraktiot, jotka oli eluoitu 14,4 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 257,5 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 255.
Viipymäaika: 13,9 minuuttia 30 111265 275
Viipymäaika: 13,9 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—40 B til-%, 30 minuuttia; lineaa-5 rigradientti; 2 ml/minuutti; 254 nm).
ESIMERKKI 104 104(a) 5’-0-(4-Fenyylibentsyyli)tymidiini ( 10
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 6(a), mutta käyttämällä 405 mg (2 mmoolia) 4-fenyylibentsyylikloridia, saatiin 387,8 mg (saanti 47 %) otsikkoyhdistettä.
15 *H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCi3 + CD3CD, 4:1 p/p, 270 MHz, TMS), δ ppm: 7,65—7,33 (10H, multipletti); 6,37 (1H, tripletti, J = 7,26 Hz); 4,64 (2H, singletti); 20 4,55—4,48 (1H, multipletti); ( 4,13—4,09 (1H, multipletti); 3,87—3,70 (2H, multipletti); 2,38—2,15 (2H, multipletti); 1,63 (3H, singletti).
25 104(b) 5’-0-(4-Fenyylibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosfo-riamidiitti
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 11(b), 30 mutta käyttämällä 82 mg (0,2 mmoolia) 5’-0-(4-fenyylibentsyyli)tymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 71,8 mg (saanti 59 %) otsikko-yhdistettä.
111265 276 ^ Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 1,62—7,34 (10H, multipletti); 6,40 (1H, tripletti, J = 6,60 Hz); 4,70—4,60 (3H, multipletti); 5 4,27, 4,20 (yhdessä 1H, kaksi leveää singlettiä); 3,90—3,55 (6H, multipletti); 2,67—2,57 (2H, multipletti); 2,53—2,16 (2H, multipletti); 1,63 (3H, singletti); 10 1,19 (12H, dubletti, J = 6,60 Hz). ^ 104(c) Kaavan 104(c) mukainen yhdiste: 15 —CH2~°—TGGGAG—OH ι04(ς) 20 )
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-0-(4-fenyylibentsyyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyy-lifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-trityylity-25 midiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote jaettiin neljään osaan ja jokainen osa puhdistettiin käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,0; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 1 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; lämpötila 60 °C; 254 nm). Fraktiot, jotka oli eluoitu 16,1 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 281,8 OD (260 nm) otsik- 277 111265 koyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 255.
5 Viipymäaika: 7,1 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia; lineaa-rigradientti; 2 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm).
( 10 ESIMERKKI 105 105(a) 5’-0-(2-Fenyylibentsyyli)tymidiini 15 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 6(a), mutta käyttämällä 365 μ\ (2 mmoolia) 2-fenyylibentsyylibromidia, saatiin 133,2 mg (saanti 16 %) otsikkoyhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 20 8,13 (1H, leveä singletti); ^ 7,50—7,28 (10H, multipletti); 6,34 (1H, tripletti, J = 6,75 Hz); 4,57, 4,50 (2H, kaksi dublettia, J = 13,0 Hz); 4,30 (1H, leveä singletti); 25 3,98 (1H, leveä singletti); 3,73-3,52 (2H, multipletti); 2,32—2,05 (2H, multipletti); 1,90 (1H, leveä singletti); 1,51 (3H, singletti).
30 111265 278 105(b) 5’-0-(2-FenyyIibentsyyIi)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyyIifosfb-riamidiitti
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 11(b), 5 mutta käyttämällä 82 mg (0,2 mmoolia) 5’-0-(2-fenyylibentsyyli)tymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 89,9 mg (saanti 73 %) otsikko-yhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 10 7,51—7,29 (10H, multipletti); .
6,36 (1H, tripletti, J = 7,92 Hz); 4,55—4,45 (3H, multipletti); 4,19, 4,11 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); 3,90—3,52 (6H, multipletti); 15 2,66-2,54 (2H, multipletti); 2,45—2,03 (2H, multipletti); 1,51 (3H, singletti); 1,19 (12H, dubletti, J = 6,60 Hz).
20 105(c) Kaavan 105(c) mukainen yhdiste: ) <s> 25 / Λ\^)χ CH2—O—TGGGAG—OH 105(c) 1
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5 ’ -Q-(2-fenyy libentsyy li)tymidiini-2-syanoetyyli-N ,N-di-isopropyy-lifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-trityylity- 111265 279 midiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS 20,0 x 250 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,0; eluentti B; asetnitriili; 20—50 B til-%, 5 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm). Fraktiot, jotka oli eluoitu 16,1 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 172,2 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
10 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 252.
Viipymäaika: 6,1 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 15 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia; lineaa- rigradientti; 2 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm).
ESIMERKKI 106 20 106(a) 3,-0-Tri-isopropyylisilyyli-5’-0-(4,4’-dimetoksitrityyli)tymidiini ( 1,485 g (2,73 mmoolia) 5,-0-(4,4’-dimetoksitrityyli)tymidiiniä ja 0,37 g (5,45 mmoolia) imidatsolia kuivattiin ensin atseotrooppisella tislauksella alennetussa paineessa ja liuotettiin sitten 6 ml:aan dimetyyliformamidia. 875 μΐ (4,09 mmoolia) tri-25 isopropyylisilyylikloridia lisättiin tähän liuokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen 875 μΐ tri-isopropyylisilyylikloridia ja 0,37 g imidatsolia lisättiin seokseen, jota sekoitettiin sitten yhden päivän ajan. Reaktioseos laimennettiin sitten 100 ml :11a etyyliasetaattia ja laimennettu seos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 100 ml:11a 5 % p/t natriumvetykarbonaatin 30 vesiliuosta. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 100 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttä- 111265 280 mällä metyleenikloridia, joka sisälsi 0—3 til-% metanolia, eluenttina, jolloin saatiin 1,861 g (saanti 97 %) otsikkoyhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 5 8,08 (1H, singletti); 7,67 (1H, singletti); 7.42— 6,80 (13H, multipletti); 6,39 (1H, tripletti, J = 5,94 Hz); 4,60—4,55 (1H, multipletti); 10 4,06—4,03 (1H, multipletti); 3,79 (6H, singletti); ) 3,53—3,26 (2H, multipletti); 2.42— 2,18 (2H, multipletti); 1,50 (3H, singletti); 15 1,03—0,90 (21H, multipletti).
106(b) 3 ’-0-(T ri-isopropyy lisilyyli)tymidiini 1,6 ml trifluorietikkahappoa lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 1,861 20 g (2,655 mmoolia) 3,-0-tri-isopropyylisilyyli-5,-0-(4,4,-dimetoksitrityyli)tymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] 80 mlrssa kloroformia samalla jäähdyttäen jäähauteessa ja sekoittaen. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin 10 minuuttia ja sitten lisättiin 2 ml pyridiiniä Reaktioseos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 100 ml :11a 5 % p/t natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja kuivattiin 25 vedettömän natriumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 50 g silika-geelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä metyleenikloridia, joka sisälsi 4 til-% metanolia, eluenttina, jolloin saatiin 0,9965 g (saanti 94 %) otsikkoyhdistettä. 1 JH Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 8,17 (1H, leveä singletti); 7,36 (1H, singletti); 111265 9 281 6,12 (1H, tripletti, J = 5,94 Hz); 4,63—4,59 (1H, multipletti); 4,03—4,00 (1H, multipletti); 3,96-3,74 (2H, multipletti); 5 2,48 (1H, leveä singletti); 2,45—2,21 (2H, multipletti); 1,91 (3H, singletti); 1,15—1,00 (21H, multipletti).
^ 10 106(c) 3’-0-Tri-isopropyylisilyyli-5’-0-[(4-bentsyyiioksi)bentsyyli]tyimdiini 88 mg (2 mmoolia) natriumhydridiä (55 %:na p/p dispersiona mineraaliöljyssä) lisättiin liuokseen, joka sisälsi 398 mg (1 mmooli) 3’-0-(tri-isopropyylisilyyli)tymi-diiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 2,5 ml:ssa tetrahydrofuraa-15 nia ja tuloksena saadun seoksen annettin seistä lämpötilassa 60 °C kaksi tuntia ja jäähdytettiin sitten huoneen lämpötilaan. 232 mg (1 mmooli) 4-bentsyylioksibentsyy-likloridia ja 75 mg (0,5 mmoolia) natriumjodidia lisättiin seokseen ja reaktioseosta sekoitettiin sitten yön yli huoneen lämpötilassa ja sitten lämpötilassa 55 °C kahdeksan tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja 20 jäännös liuotettiin 100 ml:aan etyyliasetaattia. Tuloksena saatu liuos pestiin kaksi ^ kertaa, kummallakin kerralla 100 ml:lla 0,01 N vesipitoista kloorivetyhappoa.
Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolon-nikromatografialla 30 g silikageelin (230—400 seulamitta) läpi käyttämällä mety-25 leenikloridia, joka sisälsi 1—2 til-% metanolia, eluenttina, jolloin saatiin 237 mg (saanti 40 %) otsikkoyhdistettä *H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 8,00 (1H, leveä singletti); 30 7,58 (1H, singletti); 7,48—6,90 (9H, multipletti); 6,36 (1H, tripletti, J = 6,60 Hz); 111265 282 5,07 (2H, singletti); 4.56— 4,46 (1H, multipletti); 4,50 (2H, singletti); 4,07—4,03 (1H, multipletti); 5 3,80—3,60 (2H, multipletti); 2,33282—2,08 (2H, multipletti); 1.56 (3H, singletti); 1,10—0,97 (21H, multipletti).
10 106(d) 5’-0-[(4-Bentsyylioksi)bentsyyli]tymidiini , 1,5 ml tetrabutyyliammoniumfluoridin 1 M tetrahydrofuraaniliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 237 mg (0,4 mmoolia) 3’-0-tri-isopropyylisilyyli-5’-0-[(4-bentsyy-lioksi)bentsyyli]tymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (c) edellä] 1,5 15 ml:ssa tetrahydrofuraania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös liuotettiin 100 ml:aan etyyliasetaattia.
Tämä liuos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 100 ml :11a natriumkloridin kyllästettyä vesiliuosta ja kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla.
20 Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 30 g silikageelin (230—400 seulamitta) läpi ) käyttämällä metyleenikloridia, joka sisälsi 1—4 til-% metanolia, eluenttina, jolloin saatiin 108,5 mg (saanti 61 %) otsikkoyhdistettä. 1 2 3 4 5 6
Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 2 8,11 (1H, leveä singletti); 3 7.56 (1H, singletti); 4 7,47—6,93 (9H, multipletti); 5 6,38 (1H, tripletti, J = 7,26 Hz); 6 5,06 (2H, singletti); 4.57— 4,47 (1H, multipletti); 4,52 (2H, singletti); 111265 283 4,10—4,06 (1H, raultipletti); 3,80—3,64 (2H, multipletti); 2,38—2,15 (2H, multipletti); 1,67 (2H, singletti).
5 106(e) 5,-0-[(4-Bentsyylioksi)bentsyyli]tyinidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopro-pyylifosforiamldiitti
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 11(b), 10 mutta käyttämällä 88 mg (0,2 mmoolia) 5’-0-[(4-bentsyylioksi)bentsyyli]tymidiiniä ^ [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (d) edellä], saatiin 104,8 mg (saanti 82 %) otsikkoyhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 15 7,58, 7,56 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); 7,46—6,93 (9H, multipletti); 6,37 (1H, tripletti, J = 6,60 Hz); 5,06 (2H, singletti); 4,64—4,54 (1H, multipletti); 20 4,60, 4,59 (2H, singletti); ^ 4,25—4,15 (1H, multipletti); 3,90—3,50 (6H, multipletti); 2,66—2,54 (2H, multipletti); 2,50—2,10 (2H, multipletti); 25 1,18 (12H, dubletti, J = 7,26 Hz).
106(f) Kaavan 106(f) mukainen yhdiste: O- H20-^)—CH2—o—TGCKjAG—OH 106(f) 111265 284
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-0-[(4-bentsyylÖioksi)bentsyyli]tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (e) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, synteti-5 soitiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 17,0 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla 10 kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 208,8 OD (260 nm) ^ otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
15 Viipymäaika: 8,1 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; 0,1 M TEAA:n vesiliuos, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm).
20 ESIMERKKI 107 j 107(a) 5’-0-(9-Fenyyliksanten-9-yyli)tymidiini 25 585 mg (2 mmoolia) 9-kloori-9-fenyyliksantaania lisättiin liuokseen, joka sisälsi 484 mg (2 mmoolia) tymidiiniä 20 ml:ssa pyridiiniä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan samalla varjostaen sitä valolta. Reaktioseos laimennettiin sitten 200 ml :11a metyleenikloridia ja laimennettu seos pestiin kaksi kertaa, kummallakin kerralla 200 ml:11a 5 % p/t natriumvetykarbonaatin vesiliuosta.
30 Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 35 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä metyleenikloridia, joka sisälsi 111265 285 0—2,5 til-% metanolia, eluenttina, jolloin saatiin 647,8 mg (saanti 65 %) otsikkoyh-distettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCt?3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 5 8,33 (1H, leveä singletti); 7,62 (1H, singletti); 7,45—7,02 (13H, multipletti); 6,36 ΠΗ, tripletti, J = 5,94 Hz); 4,49—4,41 (1H, multipletti); 10 4,02-3,96 (1H, multipletti); 3,29-3,12 (2H, multipletti); 2,52—2,24 (2H, multipletti); 1,99 (1H, dubletti, J = 3,96 Hz); 1,67 (3H, singletti).
15 107(b) 5’-0-(9-Fenyyliksanten-9-yyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopro-pyylifosforiamidiitti
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 11(b), 20 mutta käyttämällä 100 mg (0,2 mmoolia) 5’-0-(9-fenyyliksanten-9-yyli)tymidiiniä ( [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 134,9 mg (saanti 99 %) otsikkoyhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCT3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 25 8,03 (1H, leveä singletti); 7,69, 7,64 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); 7.40— 7,03 (13H, multipletti); 6.40— 6,32 (1H, multipletti); 4,58—4,47 (1H, multipletti); 30 4,15—4,05 (1H, multipletti); 3,90—3,10 (6H, multipletti); 2,82—2,28 (4H, multipletti); 286 111265 1,63, 1,62 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 1,16 (12H, dubletti, J = 6,6 Hz).
107(c) Kaavan 107(c) mukainen yhdiste: 5 öo 10 /—() O f—O—TGGGAG—OH 107(c) 15
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5’-0-(9-fenyyliksanten-9-yyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-20 trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, syntetisoitiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistet- ) tiin käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm). Ne fraktiot, 25 jotka eluoituivat 17,0 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 145,6 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 249.
Viipymäaika: 10,9 minuuttia 30 111265 287
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; 0,1 M TEAA:n vesiliuos, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm).
5 ESIMERKKI 108 108(a) 5 ’ -0-(9-Fenyylifluoren-9-yyli) tymidiini 770 mg (2,4 mmoolia) 9-bromi-9-fenyylifluoreenia lisättiin liuokseen, joka sisälsi ^ 10 242 mg (1 mmooli) tymidiiniä 10 ml:ssa pyridiiniä ja tuloksena saatua seosta sekoi tettiin lämpötilassa 100 °C kahdeksan tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti liuotettiin 100 ml:aan mety-leenikloridia. Liuos pestiin 100 ml:lla 5 % p/t natriumvetykarbonaatin vesiliuosta ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alenne-15 tussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 30 g silikageelin (230—400 seulamitta) läpi käyttämällä metyleenikloridia, joka sisälsi 1—3 til-% metanolia, eluenttina, jolloin saatiin 194,2 mg (saanti 37 %) otsikkoyh-distettä. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 *H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC^, 270 MHz, TMS), δ ppm: 2 ^ 8,06 (1H, leveä singletti); 3 7,76 (1H, singletti); 4 7,72-7,20 (13H, multipletti); 5 6,41 (1H, tripletti, J = 6,60 Hz); 6 4,64-4,58 (1H, multipletti); 7 3,95—3,90 (1H, multipletti); 8 3,49—3,13 (2H, multipletti); 9 2,45—2,38 (2H, multipletti); 10 1,88 (1H, dubletti, J = 3,96 Hz); 11 1,48 (3H, singletti).
288 111265 108(b) 5’-0-(9-FenyyIifluoren-9-yyli)tymidimi-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyyli-fosforiamidiitti
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 11(b), 5 mutta käyttämällä 105 mg (0,2 mmoolia) 5’-0-(9-fenyylifluoren-9-yyli)tymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 110,8 mg (saanti 76 %) otsikkoyhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 10 8,00 (1H, leveä singletti); 7m,,80 (1H, singletti); ^ 7,78—7,20 (13H, multipletti); 6,44—6,37 (1H, multipletti); 4,72—4,62 (1H, multipletti); 15 4,10—4,00 (1H, multipletti); 3.90—3,10 (6H, multipletti); 2,75-2,34 (4H, multipletti); 1,46, 1,45 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 1,18 (12H, dubletti, J = 6,60 Hz).
20 108(c) Kaavan 108(c) mukainen yhdiste: _ 25 /^λ /—^
yO
V-O—TGOGAG—OH 108(c) 30 289 111265
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 11(b), mutta käyttämällä 105 mg (0,2 mmoolia) 5’-0-(9-fenyylifluoren-9-yyli)tymidiini-2-syanoetyyh-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-trityyIitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiami-5 diitin sijasta, syntetisoitiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 19,1 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin 10 samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 291,2 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 255.
15 Viipymäaika: 10,4 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5,120A, ODS; 0,1 M TEAA:n vesiliuos, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm).
20 ^ ESIMERKKI 109 109(a) 5’-(S-Trifenyylimetyyli)tio-5’-deoksitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-iso-propyylifosforiamidiitti 25
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 11(b), mutta käyttämällä 100 mg (0,2 mmoolia) 5’-(S-trifenyylimetyyli)tio-5’-deoksitymi-diiniä [B.S. Sproate, B. Beijer, P. Rider, P, Neuner, Nucleic Acids Res., 15, (12) 4837 (1987)], saatiin 88 mg (saanti 62 %) otsikkoyhdistettä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 7,45—7,18 (16H, multipletti); 30 290 111265 6,23—6,17 (1H, multipletti); 4,31-4,20 (1H, multipletti); 4,11—4,00 (1H, multipletti); 3,85—3,43 (4H, multipletti); 5 2,62-1,98 (4H, multipletti); 1,56 (3H, singletti); 1,20—1,05 (12H, multipletti).
109(b) Kaavan 109(b) mukainen yhdiste: 10 ) © 15 —C—S~TGGGAG—0H 109(b) 6 20
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta ^ käyttämällä 5 ’-(S-trifenyylimetyyli)tio-5 ’-deoksitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, synte-25 tisoitiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasiu silikageelikolonnin (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; 50 mM TEAB, pH 7,5; eluentti B; asetnitriili; 20—50 B til-%; lineaarigradientti; 254 nm). Sitten se työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jossa oli 122,3 OD (260 nm), amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
30 111265 291
Viipymäaika: 19,0 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaa-5 rigradientti; 1 ml/minuutti; 60 °C; 260 nm).
ESIMERKKI 110
Kaavan 110(a) mukainen yhdiste: ( » @0 15 V~0—TGGGG—OH 110(a) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 2 ( Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta 3 käyttämällä 5’-0-(9-fenyylifluoren-9-yyli)tymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-iso- 4 propyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 108(b)] 5’-0- 5 trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N ,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta ja sisällyttä- 6 mällä emässekvenssi TGGGG syntetisoijaan, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reak 7 tiotuote jaettiin kolmeen osaan ja jokainen osa puhdistettiin käänteisfaasi korkean 8 suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 mm; eluentti 9 A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 25—55 B til-%, 30 minuuttia; 10 lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 14,6 11 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 28,3 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
111265 292
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 256.
Viipymäaika; 10,7 minuuttia 5 Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5, 120A, ODS; 0,1 M TEAA:n vesiliuos, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 20—50 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 2 ml/minuutti; 60 °C; 254 nm).
ESIMERKKI 111 10 )
Kaavan 111(a) mukainen yhdiste: 0 /QV-<:-0—CGCGG-0-P-OCH2CH2OH 11 l(a)
'- JL OH
» o
Samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 15(c), toistettiin, mutta 25 käyttämällä kolonnia, joka oli pakattu 125 mg:lla (5 μπιοο^) esimerkin 12(b) mukaista yhdistettä ja sisällyttämällä emässekvenssi XGCGGZ (jossa Z on kuten on määritelty esimerkissä 17) DNA/RNA-syntetisoijaan, joka on kuvattu esimerkissä 1(b). 90 % vesipitoinen formamidiliuos, joka sisälsi näin saatua otsikkoyhdistettä, kuumennettiin lämpötilassa 95 °C 5 minuuttia. Tämän kuumentamisen jälkeen liuos 30 jäähdytettiin nopeasti. Reaktioseos jaettiin neljään osaan ja jokainen osa puhdistettiin
käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil PREP-ODS, 20,0 x 250 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,3; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B
111265 293 til- %, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 260 nm; kolonnin lämpötila 60 °C). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 20,8 minuutin jälkeen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 82 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä armorfisena kiinteänä aineena.
5
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 254.
Viipymäaika: 13,38 minuuttia 10 Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (YMC-Pack A-312, S-5,120A, ODS; 0,1 M TEAA:n vesiliuos, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm).
ESIMERKKI 112 15 112(a) 5’-[(3,4-Dibentsyylioksi)bentsyylitio]-5’-deoksitymidiini 258 mg (1 mmooli) 5’-deoksi-5’merkaptotymidiiniä lisättiin 20 ml:aan asetonia. 406 mg (1,2 mmoolia) 3,4-dibentsyylioksikloridia ja 1 g vedetöntä kaliumkarbonaattia 20 lisättiin sitten liuokseen typpiatmosfäärissä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin ^ samalla kuumentaen palautuksessa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen saostumat suodatettiin pois reaktioseoksesta ja suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin pieneen määrään metyleenikloridia ja puhdistettiin kolonnikromatografialla 10 g silikageelin läpi käyttämällä metanolin ja 25 metyleenikloridin välistä 5:95 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 452 mg otsikkoyhdistettä värittömänä karamellimaisena jäännöksenä. Tämä jäännös lyofilisoi-tiin bentseenistä, jolloin saatiin 180 mg (saanti 32 %) otsikkoyhdistettä valkoisina kiteinä. 1 2H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 8,26 (1H, leveä singletti); 6,78—7,46 (14H, multipletti); 2 111265 294 6,20 (1H, tripletti, J = 6,6 Hz); 5.15 & 5,17 (yhdessä 4H, kaksi singlettiä); 4,20-4,27 (1H, multipletti); 3,87—3,91 (1H, multipletti); 5 3,67—3,68 (2H, multipletti); 2,61—2,70 (2H, multipletti); 2,09—2,40 (2H, multipletti); 1,91-1,92 (3H, multipletti).
10 112(b) 5’-[(3,4-Dibentsyy lioksi) bentsyylitio]-5 ’-deoksitymidiini-2-syanoetyy li- , N,N-di-isopropyyliamidiitti 112 mg (0,2 mmoolia) 5’-[(3,4-dibentsyylioksi)bentsyylitio]-5’-deoksitymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] kuivattiin atseotrooppisella tis-15 lauksella pyridiinillä ja liuotettiin sitten 1 ml:aan metyleenikloridia. 17 mg (0,1 mmoolia) di-isopropyyliammoniumtetratsolidia lisättiin sitten liuokseen. 70 μ\ (0,22 mmoolia) 2-syanoetyyli-N,N,N’,N’-tetraisopropyylifosfooriamidiittia lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen argon-atmosfäärissä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia samassa atmosfäärissä. Metyleenikloridi poistettiin 20 tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös liuotettiin 10 ml:aan etyyliasetaattia ja liuos pestiin 10 % p/t natriumkarbonaatin vesiliuoksella ja nat- j riumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, mainitussa järjestyksessä. Liuos kuivattiin sitten vedettömän natriumsulfaatin avulla, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 25 10 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 115 mg (saanti 76 %) otsikkoyhdistettä karamellimaisena aineena. 1 H Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 8.16 (1H, leveä singletti); 30 6,76—7,45 (14H, multipletti); 6,23—6,29 (1H, multipletti); 5,14—5,16 (4H, multipletti); 111265 295 4,38—4,46 (1H, multipletti); 4.08— 4,16 (1H, multipletti); 3,50—3,90 (6H, multipletti); 2.09— 2,80 (6H, multipletti); 5 1,91—1,93 (3H, multipletti); 1,08—1,58 (12H, multipletti).
112(c) Kaavan 112(c) mukainen yhdiste: ( ” N—ch2o 15 CH20--^^)-~CH2—S-TGGGAG-OH 112(c) 20 Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta ( käyttämällä 5’-[(3,4-dibentsyylioksi)bentsyylitio]-5’-deoksitymidiini-2-syanoetyyli- N,N-di-isopropyyliamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasiu 25 silikageelikolonnin (Preparative C18, Waters, 1,5 x 15 cm; eluentti A: 50 mM vesipitoinen trietyyliammoniumvetykarbonaattipuskuri (TEAB); pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 15—50 B til-%; lineaarigradientti; 260 nm). Ne eluoidut fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka kuvattiin esimerkissä 1(b), jolloin saatiin otsikkoyhdiste, jossa oli 57 OD (260 nm), 30 amorfisena kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), λ^χ nm: 253.
111265 296
Viipymäaika: 16,85 minuuttia
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA, pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia; lineaa-5 rigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm).
ESIMERKKI 113 113(a) 5’-[(Antrasen-9-yyli)metyylitio]-5’-deoksitymidiini 10 ) 258 mg (1 mmooli) 5’-deoksi-5’-merkaptotymidiiniä lisättiin20 ml:aan asetonia. 272 mg (1,2 mmoolia) 9-kloorimetyyliantraseenia ja 1 g vedetöntä kaliumkarbonaattia lisättiin sitten liuokseen typpiatmosfäärissä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten samalla kuumentaen palautuksessa, kaksi tuntia. Tämän jälkeen saostumat suodatet- 15 tiin pois reaktioseoksesta ja suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös kiteytettiin 10 ml:sta etanolia, jolloin saatiin 156 mg (saanti 35 %) otsikkoyhdistettä vaaleankeltaisina kiteinä.
*H Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 20 MHz, TMS), δ ppm: 8,56 (1H, singletti); ) 8,40 (2H, dubletti, J = 8,7 Hz); 8,09 (2H, dubletti, J = 8,2 Hz); 7,51—7,61 (5H, multipletti); 25 6,24-6,28 (1H, multipletti); 5,43 (1H, leveä singletti); 4,87—4,89 (2H, multipletti); 4,24—4,25 (1H, tripletti, J = 2,7 Hz); 4,03-4,07 (1H, multipletti); 30 3,05 (2H, dubletti, J = 6,5 Hz); 2,07—2,29 (2H, multipletti); 1,72—1,73 (3H, multipletti).
297 111265 113(b) 5’-[(Antrasen-9-yyli)metyylitio]-5’-deoksitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitti 74 mg (0,165 mmoolia) 5’-[(antrasen-9-yyli)metyylitio]-5’-deoksitymidiiniä [valmis-5 tettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä ja liuotettiin sitten 1 ml:aan tetrahydrofuraania. 0,115 ml (0,659 mmoolia) N,N-di-isopropyyli-N-etyyliamiinia lisättiin liuokseen. 49 μΐ (0,22 mmoolia) 2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylikloorifosforiamidiittia lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen argon-atmosfäärissä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpöti-( 10 lassa 1,75 tuntia samassa atmosfäärissä. Tetrahydrofuraani poistettiin sitten tislaa malla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös liuotettiin 10 mkaan etyyliasetaattia ja liuos pestiin 10 % p/t natriumkarbonaatin vesiliuoksella ja natriumklo-ridin kyllästetyllä vesiliuoksella, mainitussa järjestyksessä. Liuos kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa pai-15 neessa ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 10 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 85 mg (saanti 79 %) otsikkoyhdistettä vaahtomaisena aineena.
Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC^, 270 MHz, TMS), δ ppm: 20 7,26—8,43 (10H, multipletti); ( 6,26—6,33 (1H, multipletti); 4,74-4,93 (2H, multipletti); 4,32—4,42 (1H, multipletti); 4,20—4,28 (1H, multipletti); 25 3,49-3,80 (4H, multipletti); 2,89-3,11 (2H, multipletti); 1,93—2,68 (4H, multipletti); 1,71-1,76 (3H, multipletti); 1,08-1,22 (12H, multipletti).
30 298 111265 113(c) Kaavan 113(c) mukainen yhdiste: <p> (O)—CH2—S—TGOGAG—OH 113(c) cf 10 ) Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta käyttämällä 5 ’ - [(antrasen-9-yyli)metyylitio]-5 ’-deoksitymidiini-2-syanoetyyli- N, N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin 15 sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi silikageelikolonnin (Preparative C18, Waters, 1,5 x 150 mm; eluentti A: 50 mM TEAB; pH 7,5; eluentti: asetnitriili; 15—50 B til-%; lineaarigradientti; 260 nm). Ne eluoidut fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 30 20 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
)
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), nm: 255.
Viipymäaika: 13,52 minuuttia 25
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: O, 1 M TEAA; pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia, lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm).
30 111265 299 ESIMERKKI 114 114(a) 5’-[(2-NaftyyIi)metyylitio]-5’-deoksitymi(liiiii 5 258 mg (1 mmooli) 5’-deoksi-5’merkaptotymidiiniä lisättiin 20 mkaan asetonia.
265 mg (1,2 mmoolia) 2-bromimetyylinaftaleeniaja 1 g vedetöntä kaliumkarbonaattia lisättiin sitten liuokseen argon-atmosfäärissä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin samalla kuumentaen palautuksessa kaksi tuntia. Tämän jälkeen saostumat suodatettiin pois reaktioseoksesta ja suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa 10 paineessa. Jäännös kiteytettiin 10 ml:sta etanolia, jolloin saatiin 100 mg (saanti ^ 25 %) otsikkoyhdistettä valkoisina kiteinä.
*H Ydinmagnettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz, TMS), δ ppm: 15 7,84—7,90 (1H, leveä singletti); 7,78 (1H, singletti); 7,46-7,53 (4H, multipletti); 6,16—6,19 (2H, multipletti); 5,34 (1H, dubletti, J = 4,4 Hz); 20 4,14—4,19 (1H, multipletti); ^ 3,92—3,99 (2H, multipletti); 3,83—3,87 (1H, multipletti); 2,62—2,78 (2H, multipletti); 2,02—2,23 (2H, multipletti); 25 1,75-1,79 (3H, multipletti).
114(b) 5’-[(2-Naftyyli)metyylitio]-5’-deoksitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-iso-propyylifosforiamidiitti 1 79,7 mg (0,2 mmoolia) 5’-[(2-naftyyli)metyylitio]-5’-deoksitymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyri-diinillä ja liuotettiin sitten 2,5 mliaan tetrahydrofuraania. 0,084 ml (0,48 mmoolia) 300 111265 di-isopropyyliamiinia lisättiin sitten liuokseen. 54 μΐ (0,24 mmoolia) 2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen argon-atmosfäärissä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1,75 tunnin ajan samassa atmosfäärissä. Tetrahydrofuraani poistettiin sitten tislaamalla alenne-5 tussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös liuotettiin 10 ml:aan etyyliasetaattia ja liuos pestiin 10 % p/t natriumkarbonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, mainitussa järjestyksessä. Liuos kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla, jonka jälkeen liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kromatografialla 10 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi 10 käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 67 mg (saanti 56 %) otsikko- , yhdistettä vaahtomaisena aineena.
*H Ydinmagnettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 8,32 (1H, leveä singletti); 15 7,26—7,85 (8H, multipletti); 6,27 (1H, multipletti); 4,38—4,46 (1H, multipletti); 4,11—4,19 (1H, multipletti); 3,93—3,95 (2H, multipletti); 20 3,47—3,90 (4H, multipletti); 2.10— 2,88 (6H, multipletti); ) 1,62—1,90 (3H, multipletti); 1.10— 1,21 (12H, multipletti).
25 114(c) Kaavan 114(c) mukainen yhdiste: —CHi—S—TGGGAG—OH H4(c)
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta 30 111265 301 käyttämällä 5’-[(2-naftyyli)metyylitio]-5’-deoksitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdiste. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi 5 silikageelikolonnin (Preparative C18, Waters, 1,5 x 150 mm; eluentti A: 50 mM TEAB; pH 7,5; eluentti: asetnitriili; 15—50 B til-%; lineaarigradientti; 260 nm). Ne eluoidut fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 165 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.
( 10
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 254.
Viipymäaika: 12,07 minuuttia 15 Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA; pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 10—60 B til-%, 20 minuuttia, lineaa-rigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm).
ESIMERKKI 115 20 ( 115(a) 5’-{3,5-Bis[3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi]bentsyylitio}-5’- deoksitymidiini 258 mg (1 mmoolia) 5’-deoksi-5’-merkaptotymidiiniä lisättiin 20 ml:aan asetonia. 25 969 mg (1,2 mmoolia) 3,5-bis[3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi]bentsyylibromidia ja 1 g vedetöntä kaliumkarbonaattia lisättiin sitten liuokseen argon-atmosfäärissä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin samalla kuumentaen palautuksessa kaksi tuntia. Tämän jälkeen saostumat suodatettiin pois reaktioseoksesta ja suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös lyofilisoitiin bentseenistä, 30 jolloin saatiin 365 mg (saanti 37 %) otsikkoyhdistettä valkoisena pulverina.
111265 302 *H Ydinmagnettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 7,99 (1H, leveä singletti); 7,23—7,42 (21H, multipletti); 6,49—6,68 (9H, multipletti); 5 4,98—5,03 (12H, multipletti); 4,18—4,26 (1H, multipletti); 3,87-3,91 (1H, multipletti); 3,64—3,71 (2H, multipletti); 2,67 (2H, dubletti, J - 5,7 Hz); 10 2,00—2,64 (2H, multipletti); ^ 1,86—1,92 (3H, multipletti).
115(b) 5’-{3,5-Bis[3,5-(dibentsyyIioksi)bentsyylioksi]bentsyylitio}-5’-deoksitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiitti 15 197mg(0,2mmoolia)5’-{3,5-bis[3,5-(dibentsyylioksi]bentsyylioksi]bentsyylitio}-5’-deoksitymidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] kuivattiin atseotrooppisella tislauksella pyridiinillä ja liuotettiin sitten 1 ml:aan metyleeniklori-dia. 0,017 g (0,1 mmoolia) di-isopropyyliammoniumtetratsolidia lisättiin sitten 20 liuokseen. 70 μΐ (0,22 mmoolia) 2-syanoetyyli-N,N,N’ ,N’-tetraisopropyylifosforiami- diittia lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen argon-atmosfaärissä. Tuloksena ) saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia samassa atmosfäärissä. Tetrahydrofuraani poistettiin sitten tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös liuotettiin 10 ml:aan etyyliasetaattia ja liuos pestiin 10 % p/t natriumkar-25 bonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, mainitussa järjestyksessä. Liuos kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 10 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 103 mg (saanti 43 %) otsikkoyhdistettä 30 karamallimaisena aineena.
111265 303 ^ Ydimnagnettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 7,27—7,44 (20H, multipletti); 6,51—6,69 (10H, multipletti); 4,98—5,05 (12H, multipletti); 5 4,44—4,51 (1H, multipletti); 4,13—4,18 (1H, multipletti); 3,47—3,87 (6H, multipletti); 2,17—2,84 (6H, multipletti); 1,92 (3H, singletti); ^ 10 1,08—1,34 (12H, multipletti).
115(c) Kaavan 115(c) mukainen yhdiste: 15 2 (( ))—CH2—S—TGGGAG—OH n 5(c) , - 1 2 3 4 5 6 2
Suorittamalla samanlainen menettely kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), mutta 3 käyttämällä 5’-{3,5-bis[3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi]bentsyylitio}-5’- 4 deoksitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopropyylifosforiamidiittia [valmistettu kuten 5 on kuvattu vaiheessa (b) edellä] 5’-0-trityylitymidiini-2-syanoetyyli-N,N-di-isopro- 6 pyylifosforiamidiitin sijasta, valmistettiin otsikkoyhdistet. Reaktiotuote puhdistettiin kromatografialla käänteisfaasi korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (Inertsil ODS-2; 20,0 x 250 mm; eluentti A: 0,1 M TEAA; pH 7,0; eluentti B: asetnitriili; 111265 304 30—100 B til-%, 30 minuuttia; lineaarigradientti; 7 ml/minuutti; 260 nm; kolonnin lämpötila 60 °C). Ne fraktiot, jotka eluoituivat 26,5 minuutin jälkeen, sisälsivät otsikkoyhdistettä, kerättiin ja työstettiin samanlaisella tavalla kuin se, joka on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 86 OD (260 nm) otsikkoyhdistettä amorfisena 5 kiinteänä aineena.
Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 257.
Viipymäaika: 18,44 minuuttia 10 )
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (Inertsil ODS-2; 6 x 150 nm; eluentti A: 0,1 M TEAA; pH 7,5; eluentti B: asetnitriili; 40—100 B til-%, 25 minuuttia, lineaarigradientti; 1 ml/minuutti; 260 nm).
15 VALMISTUSESIMERKIT
Seuraavat valmistusesimerkit kuvaavat vaihtoehtoisten lähtöaineiden valmistusta esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistukselle.
20 VALMISTUSESIMERKKI1 ) 2-[2-0-(4,4’-Dimetoksitrityylioksi)etyylisulfonyyli]etyylimonosukkinaatti 1,37 g (3,0 mmoolia) 2-[2-0-(4,4’-dimetoksitrityylioksi)etyylisulfonyyli]etanolia 25 [Tetrahedron Lett. 27, 4705 (1986)] kuivattiin atseotrooppisella tislauksella alennetussa paineessa pyridiinillä ja liuotettiin sitten 12 ml:aan metyleenikloridia. 315 mg (3,15 mmoolia) sukkinianhydridiä ja 384 mg (3,15 mmoolia) 4-(dimetyyliamino)py-ridiiniä lisättiin tuloksena saatuun liuokseen, jota sitten sekoitettiin 30 minuuttia. Sen jälkeen kun reaktion loppuminen oli vahvistettu ohutkerroskromatografialla 80 ml 30 metyleenikloridia lisättiin reaktioseokseen. Tuloksena saatu seos pestiin sitten 0,5 M kaliumdivetyfosfaatin vesiliuoksella (pH 5,0) ja vedellä, mainitussa järjestyksessä ja orgaaninen kerros kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin 111265 305 sitten tislaamalla alennetussa paineessa,, jolloin saatiin 1,60 g (saanti 96 %) otsikko-yhdistettä.
*H Ydinmagnettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 5 7,40—6,83 (13H, multipletti); 4,58-4,53 (2H, tripletti, J = 5,94 Hz); 3,79 (6H, singletti); 3,68—3,64 (2H, tripletti, J = 5,61 Hz); 3,50—3,45 (2H, tripletti, J = 5,94 Hz); ^ 10 3,18-3,14 (2H, tripletti, J = 5,61 Hz); 2,71—2,61 (4H, multipletti).
VALMISTUSESIMERKKI 2 15 Kaavan 2(p) mukainen yhdiste: 0 f ,_ DMT—OCH2CH2SCH2CH2OCCH2CH2C.Na(CH2)3~-[ CPG 1 2(p)
20 O O O
( 1,60 g (2,87 mmooliä) 2-[2-0-(4,4’-dimetoksitrityylioksi)etyylisulfonyyli]etyyli-monosukkinaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 1) liuotettiin 25 18 ml:aan dimetyyliformamidia ja 0,96 g (3,6 mmoolia) pentakloorifenolia ja 0,96 g (4,5 mmoolia) 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä lisättiin tuloksena saatuun liuokseen, jota sekoitettiin sitten 18 tuntia. Liukenemattomat aineet, jotka saostuivat, erotettiin suodattamalla ja liuotin poistettiin suodoksesta haihduttamalla alennetussa paineessa. Bentseeniä lisättiin jäännökseen ja lisää liukeneattomia aineita, jotka 30 saostuivat, erotettiin suodattamalla. Liuotin poistettiin jälleen suodoksesta haihduttamalla alennetussa paineessa.
111265 306 Jäännös (0,16 g, 0,2 mmoolia) liuotettiin 4 ml:aan dimetyyliformamidia ja 15 μΐ (0,11 mmoolia) trietyyliamiinia ja 1,0 g aminopropyyli-CPG (85,7 ^moolia/g aminoryhmiä sisällytetään tähän, lisättiin liuokseen, jonka annettiin sitten seistä huoneen lämpötilassa 24 tuntia. Tämän jälkeen CPG-kantaja kerättiin suodattamalla, 5 pestiin metyleenikloridilla ja kuivattiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa.
5 ml kumpaakin kapselin A- ja B-liuoksia (Nippon Millipore Limited) lisättiin CPG-kantajaan ja seoksen annettiin seistä 5 minuuttia. Seos pestiin sitten pyridiinillä ja metyleenikloridilla, mainitussa järjestyksessä ja kuivattiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin otsikkoyhdiste.
10 ,
Se määrä valmistuesimerkin 1 yhdistettä, joka sisällytettiin otsikkoyhdisteeseen, määritettiin seuraavan menetelmän mukaisesti. Tasoittava liuos (dikloorietikkahapon 3 til-% liuosta metyleenikloridissa, Nippon Millipore Limited) lisättiin 11,4 mg:aan otsikkoyhdistettä ja seosta ravistettiin 3 minuuttia, jonka jälkeen riittävä määrä 15 metyleenikloridia lisättiin muodostamaan kokonaismääräksi 20 ml. 0,4 ml liuotinta tislattiin pois ja sitten lisättiin 3 ml perkloorihapon 3:2 tilavuusliuosta jäännökseen ja dimetyylitrityylikationin absorbanssi aallonpituudessa 500 nm mitattiin (e = 71700).
20 Sisällytettyjen dimetoksitrityyliryhmien määrä oli 53,1 /unoolia/g.
) VALMISTUSESIMERKKI 3 2-[2-0-(4,4’-Dimetoksitrityylioksi)etyyIisulfonyyIi]etyyli-2,2,2-trikIoorietoksikar-25 bonaatti 1,1 g (2,4 mmoolia) 2-[2-0-(4,4’-dimetoksitrityylioksi)etyylisulfonyyli]etanolia [Tetrahedron Lett. 27, 4705 (1986)] kuivattiin atseotrooppisella tislauksella alennetussa paineessa pyridiinillä ja liuotettiin sitten 12 ml:aan metyleenikloridia. 0,35 ml 30 (2,6 mmoolia) 2,2,2-trikloorietoksikarbonyylikloridia lisättiin liuokseen, jota sitten sekoitettiin kaksi tuntia. Sen jälkeen kun reaktion loppuun meneminen oli vahvistettu ohutkerroskromatografialla, reaktioseos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 100 ml 111265 307 metyleenikloridia ja 100 ml 5 % p/t natriumvetykarbonaatin vesiliuosta faasien erottamiseksi. Orgaaniset kerrokset pestiin 5 % p/t natriumvetykarbonaatin vesliuok-sella ja sitten ne kerättiin ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin sitten tislauksella alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin (Preparati-5 ve C18, Waters, 02,2 x 7,0 cm; 60 % t/t vesipitoinen asetnitriili), jolloin saatiin 1,35 g (saanti 89 %) otsikkoyhdistettä amorfisena pulverina.
JH Ydinmagnettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz, TMS), <5 ppm: 7,41—6,83 (23H, multipletti); ^ 10 4,75 (2H, singletti); 4,70-4,66 (2H, tripletti, J = 5,94 ); 3,80 (6H, singletti); 3,68—3,64 (2H, tripletti, J = 5,28 Hz); 3,61—3,56 (2H, tripletti, J = 6,27 Hz); 15 3,23-3,19 (2H, tripletti, J = 5,28 Hz).
VALMISTUSESIMERKKI 4
Kaavan 4(p) mukainen yhdiste: 20 (
O
k __ DMT-OCaCH2SCH2CH2OC.NH(CH2)3—! CPG 1 4(p) t il o o 25 0,126 g (0,2 mmoolia) 2-[2-0-(4,4’-dimetoksitrityylioksi)etyylisulfonyyli]etyyli- 2,2,2-trikoorietoksikarbonaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 1) liuotettiin 5 ml:aan dimetyyliformamidia ja 15 μΐ (0,11 mmoolia) trietyyliamiinia 30 ja 1,0 g aminopropyyli-CPG:tä (85,7 /xmoolia/g aminoryhmiä sisällytetään siihen), lisättiin tuloksena saatuun liuokseen ja pestiin 1 % t/t trietyyliamiiniliuoksella dimetyyliformamidissa. Seos jätettiin sitten seisomaan huoneen lämpötilaan neljäksi 111265 308 tunniksi. Tämän jälkeen CPG-kantaja kerättiin suodattamalla ja pestiin metyleeniklo-ridilla, jonka jälkeen se kuivattiin haihduttamalla alennetussa paineessa. 5 ml kumpaakin kapselin A- ja B-liuoksia (Nippon Millipore Limited) lisättiin CPG-kantajaan ja seos jätettiin seisomaan 5 minuutiksi.Seos pestiin sitten pyridiinillä ja metyieenik-5 loridilla, mainitussa järjestyksessä, ja kuivattiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin otsikkoyhdiste.
Se määrä valmistusesimerkin 3 yhdistettä, joka sisällytettiin otsikkoyhdisteeseen, määritettiin seuraavan menetelmän mukaisesti. Tasoittava liuos (dikloorietikkahapon 10 3 % t/t liuosta metyleenikloridissa, Nippon Millipore Limited) lisättiin 11,4 mg:aan ) otsikkoyhdistettä ja seosta ravistettiin 3 minuuttia, jonka jälkeen riittävä määrä metyleenikloridia lisättiin muodostamaan kokonaismääräksi 20 ml. 0,4 ml liuotinta tislattiin pois ja sitten lisättiin 3 ml perkloorihapon 3:2 tilavuusliuosta jäännökseen ja dimetyylitrityylikationin absorbanssi aallonpituudessa 500 nm mitattiin (e = 15 71700).
Sisällytettyjen dimetoksitrityyliryhmien määrä oli 24,0 /imoolia/g.
VALMISTUSESIMERKKI 5 20
Kaavan 5(p) mukainen yhdiste: )
O
* - DMT—OCH-,CH2SCH,CH2OCCH2CH2C.NH.(CH2)3— silikageeli 5(p) ^ « ” Il il
Joo 1,60 g (2,87 mmoolia) 2-[2-0-(4,4’dimetoksitrityylioksi)etyylisulfonyyli]etyyli-monosukkinaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 1) liuotettiin 18 30 mkaan dimetyyliformamidia ja 0,96 g (3,6 mmoolia) pentakloorifenolia ja 0,96 g (4,5 mmoolia) 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä lisättiin liuokseen. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 18 tuntia. Tämän jälkeen saostumat 111265 309 suodatettiin pois reaktioseoksesta ja suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Bentseeniä lisättiin jäännökseen. Tuloksena saadut saostumat suodatettiin pois ja suodos vapautettiin uudelleen liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. 1,0 g (0,92 mmoolia) jäännöstä käytettiin seuraavassa vaiheessa.
5 1,0 g (0,92 mmoolia) tätä jäännöstä, 75 μΐ (0,55 mmoolia) trietyyliamiinia ja Cos-mosil 150 NH2-300 (jossa oli 450 /unoolia aminoryhmistä per 1 g silikageelipintaa; jota valmistaa Nacalai Tesque Co. Ltd.) lisättiin 20 ml:aan dimetyyliformamidia. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 20 tuntia. Haluttu ^ 10 kantaja, nimittäin substituentti Cosmosil 150 NH2-300, kerättiin, pestiin metyleenik- loridilla ja kuivattiin haihduttamalla alennetussa paineessa. 10 ml kumpaakin kapselin A- ja B-liuoksia (Nipopon Millipore Limited) lisättiin kantajaan ja seos jätettiin seisomaan 10 minuutiksi. Seos pestiin sitten pyridiinillä ja metyleenikloridilla, mainitussa järjestyksessä, ja kuivattiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin 15 saatiin otsikkoyhdiste.
Se määrä valmistusesimerkin 1 yhdistettä, joka sisällytettiin otsikkoyhdisteeseen, määritettiin seuraavan menetelmän mukaisesti. Tuottava liuos (dikloorietikkahapon 3 % t/t liuosta metyleenikloridissa, Nippon Millipore Limited) lisättiin 5,4 mg:aan 20 otsikkoyhdistettä ja seosta ravistettiin 3 minuuttia, jonka jälkeen riittävä määrä mety-^ leenikloridia lisättiin muodostamaan kokonaismääräksi 20 ml. 0,4 ml liuotinta tislattiin pois ja sitten lisättiin 3 ml perkloorihapon 3:2 tilavuusliuosta jäännökseen ja dimetyylitrityylikationin absorbanssi aallonpituudessa 500 nm mitattiin (e = 71700).
25
Sisällytettyjen dimetoksitrityyliryhmien määrä oli 51,8 ^moolia/g.
111265 310 VALMISTUSESIMERKKI 6 Kaavan 6(p) mukainen yhdiste:
5 O
DMT—O CH2CH2S CH2CH20 CCH2C H:COCH:—¢^)—OCH2—(Q)-^polymeeri ~ O 0 0 6(p) 1° > 1,60 g (2,87 mmoolia) 2-[2-0-(4,4’dimetoksitrityylioksi)etyylisulfonyyli]etyyli-monosukkinaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 1) liuotettiin 18 ml:aan dimetyyliformamidia ja 0,96 g (3,6 mmoolia) pentakloorifenolia ja 0,96 g (4,5 mmoolia) 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä lisättiin liuokseen. Tulokse-15 na saatua seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 18 tuntia. Tämän jälkeen saostumat suodatettiin pois reaktioseoksesta ja suodos vapautettiin liuottimesta tilaamalla alennetussa paineessa. Bentseeniä lisättiin jäännökseen. Tuloksena saadut saostumat suodatettiin pois ja suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. 0,48 g (0,6 mmoolia) jäännöstä käytettiin seuraavassa vaiheessa.
20 0,48 g (0,6 mmoolia) tätä jäännöstä, 110 mg (0,9 mmoolia) 4-(dimetyyliamino)pyri- ) diiniä ja 1,0 g p-alkoksibentsyylialkoholihartsia (jossa oli 0,9 mmoolia aminoryh-mistä per 1 g silikageelipintaa; jota valmistaa Kokusan Kagaku Co. Ltd.) lisättiin 15 ml:aan dimetyyliformamidia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen 25 lämpötilassa 25 tuntia. Tämän jälkeen haluttu kantaja, nimittäin substituoitu p-alkok-sibentsyylialkoholihartsi, kerättiin, pestiin metyleenikloridilla, metanolilla ja dietyy-lieetterillä, mainitussa järjestyksessä, ja kuivattiin haihduttamalla alennetussa paineessa. 10 ml kumpaakin Cap A- ja B-liuoksia (Nippon Millipore Limited) lisättiin kantajaan ja seos jätettiin seisomaan 15 minuutiksia. Seos pestiin sitten metyleenik-30 loridilla, metanolilla ja dietyylieetterillä, mainitussa järjestyksessä, ja kuivattiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin otsikkoyhdiste.
111265 311
Se määrä valmistusesimerkin 1 yhdistettä, joka sisällytettiin otsikkoyhdisteeseen, määritettiin seuraavan menetelmän mukaisesti. Tuottava liuos (dikloorietikkahapon 3 % t/t liuosta metyleenikloridissa, Nippon Millipore Limited) lisättiin 10,6 mg:aan otsikkoyhdistettä ja seosta ravistettiin 3 minuuttia, jonka jälkeen riittävä määrä mety-5 leenikloridia lisättiin muodostamaan kokonaismääräksi 20 ml. 0,4 ml liuotinta tislattiin pois ja sitten lisättiin 3 ml perkloorihapon 3:2 tilavuusliuosta jäännökseen ja dimetyylitrityylikationin absorbanssi aallonpituudessa 500 nm mitattiin (e = 71700).
10 Sisällytettyjen dimetoksitrityyliryhmien määrä oli 302 jtimoolia/g.
VALMISTUSESIMERKKI 7
Kaavan 7(p) mukainen yhdiste: 15
O
DMT—OCH2CH2SCH2CH:OCCH2(OCH2CH2)nOCH2COOH 7(p)
O O
20 ^ 9,9 g (3,3 mmoolia) poly(oksietyleeni)diglykolia kuivattiin atseotrooppisella tislauk sella pyridiinillä ja liuotettiin sitten 10 mitään metyleenikloridia. 226 mg (1,1 mmoolia) 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä lisättiin sitten liuokseen samalla jäähdyttäen jäällä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin samalla jäähdyttäen jäällä 15 25 minuuttia. Tämän jälkeen 2 ml metyleenikloridiliuosta, joka sisälsi 0,5 g (1,1 mmoolia) 2-[2-0-(4,4’-dimetoksitrityylioksi)etyylisulfonyyli]etanolia [Tetrahedron Lett., 27, 4705 (1986)] ja 0,13 g (1,1 mmoolia) 4-(dimetyyliamino)pyridiiniä lisättiin liuokseen. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 tuntia. Saostumat suodatettiin pois. Sitten reaktioseos väkevöitiin 50 ml:ksi haihduttamalla 30 alennetussa paineessa. 500 ml kylmää dietyylieetteriä lisättiin sitten väkevöityyn liuokseen ja saadut saostumat kerättiin ja kuivattiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saadut saostumat liuotettiin metyleenikloridiin ja puhdistettiin 111265 312 kromatografialla 200 g silikageelin (70—230 seulamitta) läpi käyttämällä metanolin ja metyleenikloridin välistä 2:8 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 2,77 g (saanti 72 %) otsikkoyhdistettä.
5 *H Ydinmagnettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz, TMS), δ ppm: 7,09—7,43 (multipletti); 6,81—6,88 (multipletti); 4,58—4,64 (multipletti); 3,65 (singletti); 10 3,50—3,53 (multipletti); ^ 3,46—3,49 (multipletti); 3,31—3,34 (multipletti).
VALMISTUSESIMERKKI 8 15
Kaavan 8(p) mukainen yhdiste:
O
DMT—OCH^CHTSCH^CHoOCCHitOCH^CH^lnOCH^COCH^—^C^—OCH;——j polymeeri 20 O O O
8(P) ) 0,7 g (0,2 mmoolia) valmistusesimerkin 7 mukaista yhdistettä 6 ml:ssa metyleenik-25 loridia ja 2 ml dimetyyliformamidiliuosta, joka sisälsi 63 mg (0,24 mmoolia) penta-kloorifenolia ja 64 mg (0,3 mmoolia) 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä, lisättiin liuokseen samalla jäähdyttäen jäällä. Tuloksena saatua liuosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 7 päivää. Tämän jälkeen saostumat suodatettiin pois reak-tioseoksesta ja suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa.
30 Tuloksena saatu jäännös liuotettiin 10 ml:aan metyleenikloridia. 100 ml dietyylieet-teriä lisättiin liuokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saadut saostumat suodatettiin pois. Suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa.
111265 313
Suodos, 37 mg (0,3 mmoolia) 4-(dimetyyliamino)pyridiini ja 0,25 g p-alkoksibent-syylialkoholihartsia (jossa oli 0,9 mmoolia aminoryhmistä per 1 g silikageelipintaa; jota valmistaa Kokusai Kagaku Co. Ltd.), lisättiin 6 mlraan dimetyyliformamidia. Tuloksena saatu seos jätettiin huoneen lämpötilaan 24 tunniksi. Haluttu kantaja, 5 nimittäin substituoitu p-alkoksibentsyylialkoholihartsi, kerättiin, pestiin pyridiinillä, metyleenikloridilla ja dietyylieetterillä, mainitussa järjestyksessä, ja kuivattiin haihduttamalla alennetussa paineessa. 10 ml kumpaakin Cap A- ja B-liuoksia (Nippon Millipore Limited) lisättiin kantajaan ja seos jätettiin seisomaan 15 minuutiksi. Sitten seos pestiin metyleenikloridilla, metanolilla ja dietyylieetterillä, mainitussa järjestyk-^ 10 sessä, ja kuivattiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin otsikkoyhdis- te.
Se määrä valmistusesimerkin 1 yhdistettä, joka sisällytettiin otsikkoyhdisteeseen, määritettiin seuraavan menetelmän mukaisesti. Tuottava liuos (dikloorietikkahapon 15 3 % t/t liuosta metyleenikloridissa, Nippon Millipore Limited) lisättiin 6,7 mg:aan otsikkoyhdistettä ja seosta ravistettiin 3 minuuttia, jonka jälkeen riittävä määrä mety-leenikloridia lisättiin muodostamaan kokonaismääräksi 20 ml. 0,4 ml liuotinta tislattiin pois ja sitten lisättiin 3 ml perkloorihapon 3:2 tilavuusliuosta jäännökseen ja dimetyylitrityylikationin absorbanssi aallonpituudessa 500 nm mitattiin (e = 20 71700).
(
Sisällytettyjen dimetoksitrityyliryhmien määrä oli 16 /unoolia/g.
FORMULOINTIESIMERKKI1 25
Ruiskuformulointi
Ruiskuformulointi valmistettiin sekoittamalla 1,5 paino-% esimerkin 25 mukaista yhdistettä 10 til-%:seen propyleeniglykooliin, lisäämällä riittävästi vettä ruiskuihin 30 halutun lopullisen tilavuuden saamiseksi ja steriloimiseksi.
314 111265 FORMULOINTEESIMERKKI 2
Tablettiformulointi 5 1) Esimerkin 25 yhdistettä 200 2) Natriumpyrofosfaattia 5 3) Aerosil 200 5 4) Magnesiumstearaattia 5 5) Laktoosia 495 10 6) Maissitärkkelystä 154 7) Apicel 123 8) HPL (L) 10
Yhteensä 997 mg 15 Tabletit, kunkin sisältäessä 100 mg ainesosia, valmistettiin lisäämällä edellä olevan kohteiden nro 1—4 mukaista perusseosta esirakeistettuun kohteiden nro 5—8 mukaista seosta ja sitten puristamalla edellä tuotettu seos sopivalla tabletointikoneel-la.
20 FORMULOINTIESEVIERKKI3
J
Kapselin formulointi 1) Esimerkin 25 yhdistettä 200 25 2) Kalsiumfosfaattia 200 3) Alumiinisilikaattia 345 4) Kiteistä selluloosaa 250 5) Magnesiumstearaattia 2
Yhteensä 997 mg
Tavanomaisella tavalla, kapseleita, jotka sisälsivät 200 mg edellä olevia ainesosia, valmistettiin pulverisoimalla ainesosien seos sopivassa sekoittimessa, antamalla 30 111265 315 seoksen kulkea seulan läpi ja lopulta sekoittamalla hyvin.
FORMULOINTIESIMERKKI 4 5 Kovan kapselin formulointi
Yksikkökapseleita valmistettiin sekoittamalla 100 mg esimerkin 25 mukaista pulve-riyhdistettä, 150 mg laktoosia, 50 mg selluloosaa ja 6 mg magnesiumstearaattia, täyttämällä edellä olevan seos kahden palan koviin standardigelatiinikapseleihin, ^ 10 pesemällä ja lopulta kuivaamalla.
FORMULOINTIESIMERKKI 5
Pehmeän kapselin formulointi 15
Pehmeitä kapseleita käsittäen 100 mg aktiivista ainesosaa valmistettiin sekoittamalla esimerkin 25 yhdistettä syötävään öljyyn (kuten soijapapuöljy, puuvillansiemenöljy tai oliiviöljy) täyttämällä tämä seos sopiviin gelatiinikapseleihin moottoripumpun avulla, pesemällä ja lopulta kuivaamalla.
20 ( FORMULOINTIESIMERKKI 6
Tabletin formulointi 25 Tavanomaisella tavalla valmistettiin tabletteja rakeistamalla seos, joka sisälsi 100 mg esimerkin 25 mukaista yhdistettä, 0,2 mg koloidisilikonidioksidia, 5 mg magnesiumstearaattia, 275 mg hienoa kiteistä selluloosaa, 1 mg tärkkelystä ja 98,8 laktoosia.
111265 316
Sekvenssitaulukko SEQ ID NRO: 1 Sekvenssin pituus: 4 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei
Sekvenssi: TGGG ^
SEQ ID NRO: 2 Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGGGG
SEQ ID NRO: 3 )
Sekvenssin pituus: 5
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: TGGGA
111265 317
SEQ ID NRO: 4 Sekvenssin pituus: 6 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGGGAG
( SEQ ID NRO: 5
Sekvenssin pituus: 7 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGGGAGG
SEQ ID NRO: 6 Sekvenssin pituus: 7 ( Sekvenssityyppi: nukleiinihappo
Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: GGGGAGG
318 wise
SEQ ID NRO: 7 Sekvenssin pituus: 7 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TTGGAGG
SEQ ID NRO: 8 ^
Sekvenssin pituus: 7
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: TGCGAGG
SEQ ID NRO: 9 Sekvenssin pituus: 7
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo ) Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: GGGGAGG
111265 319
SEQ ID NRO: 10 Sekvenssin pituus: 7 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: mCGGGAGG
( SEQ ID NRO: 11
Sekvenssin pituus: 7 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: mCGmCGAGG
SEQ ID NRO: 12 Sekvenssin pituus: 8 ( Sekvenssityyppi: nukleiinihappo
Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TTGGGAGG
111265 320
SEQ ID NRO: 13 Sekvenssin pituus: 8 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: CTGGGAGG
SEQ ID NRO: 14 )
Sekvenssin pituus: 5
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: CTCGT
SEQ ID NRO: 15 Sekvenssin pituus: 5
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo ) Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: CTCGC
111265 321
SEQ ID NRO: 16 Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: CTCGG
^ SEQ ID NRO: 17
Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: CGGGT
SEQ ID NRO: 18 Sekvenssin pituus: 5 ^ Sekvenssityyppi: nukleiinihappo
Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: CGGGC
322
SEQ ID NRO: 19 Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: CGGGG
SEQ ID NRO: 20 )
Sekvenssin pituus: 5
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: CGCGT
SEQ ID NRO : 21 Sekvenssin pituus: 5
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo ) Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: CGCGC
111265 323
SEQ ID NRO: 22 Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: CGCGG
( SEQ ID NRO: 23
Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TTGGA
SEQ ID NRO: 24 Sekvenssin pituus: 5 ( Sekvenssityyppi: nukleiinihappo
Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TTGGT
111265 324
SEQ ID NRO: 25 Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TTGGC
SEQ ID NRO: 26 )
Sekvenssin pituus: 5
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: TTGGG
SEQ ID NRO: 27 Sekvenssin pituus: 5
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo ) Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: TTCGA
111265 325
SEQ ID NRO: 28 Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TTCGT
( SEQ ID NRO: 29
Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TTCGC
SEQ ID NRO: 30 Sekvenssin pituus: 5 ( Sekvenssityyppi: nukleiinihappo
Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TTCGG
111265 326
SEQ ID NRO: 31 Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssi tyyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGGGT
SEQ ID NRO: 32 )
Sekvenssin pituus: 5
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: TGGGC
SEQ ID NRO: 33 Sekvenssin pituus: 5
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo ' Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: TGCGA
111265 327
SEQ ID NRO: 34 Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGCGT
( SEQ ID NRO: 35
Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGCGC
SEQ ID NRO: 36 Sekvenssin pituus: 5 ( Sekvenssityyppi: nukleiinihappo
Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGCGG
111265 328
SEQ ID NRO: 37 Sekvenssin pituus: 5 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: CTGGT
SEQ ID NRO: 38 )
Sekvenssin pituus: 5
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: CTGGC
SEQ ID NRO: 39 Sekvenssin pituus: 4
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo ) Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: CTCG
111265 329
SEQ ID NRO: 40 Sekvenssin pituus: 4 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TTCG
^ SEQ ID NRO: 41
Sekvenssin pituus: 4 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: CTGG
SEQ ID NRO: 42 Sekvenssin pituus: 4 ( Sekvenssityyppi: nukleiinihappo
Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: CGCG
111265 330
SEQ ID NRO: 43 Sekvenssin pituus: 4 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGCG
SEQ ID NRO: 44 )
Sekvenssin pituus: 4
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: CGGG
SEQ ID NRO: 45 Sekvenssin pituus: 4
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo ) Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: TTGG
111265 331
SEQ ID NRO: 46 Sekvenssin pituus: 9 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: GGGCGGGGC
^ SEQ ID NRO: 47
Sekvenssin pituus: 7 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TAGGAGG
SEQ ID NRO: 48 Sekvenssin pituus: 8 ( Sekvenssityyppi: nukleiinihappo
Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGGGAGGT
111265 332
SEQ ID NRO: 49 Sekvenssin pituus: 9 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGGGCGCAG
SEQ ID NRO: 50 )
Sekvenssin pituus: 3
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: CCG
SEQ ID NRO: 51 Sekvenssin pituus: 7
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo ) Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: TCGGAGG
111265 333
SEQ ID NRO: 52 Sekvenssin pituus: 7 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGmCGAGG
^ SEQ ID NRO: 53
Sekvenssin pituus: 8 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: GTGGGAGG
SEQ ID NRO: 54 Sekvenssin pituus: 3 ^ Sekvenssityyppi: nukleiinihappo
Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGG
111265 334
SEQ ID NRO: 55 Sekvenssin pituus: 7 Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen Topologia: lineaarinen Hypoteettinen sekvenssi: ei Anti-sense: ei Sekvenssi: TGGGAmGG
SEQ ID NRO: 56 )
Sekvenssin pituus: 7
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: TGGGAGA
SEQ ID NRO: 57 Sekvenssin pituus: 9
Sekvenssityyppi: nukleiinihappo .
Säikeisyys: yksinkertainen
Topologia: lineaarinen
Hypoteettinen sekvenssi: ei
Anti-sense: ei
Sekvenssi: AATGGGAGG

Claims (15)

111265 335
1 X3:p-OCH2CH2.X'-A-C-X2-© a?) γ3-ρ7 5 missä: 12 3 R , R ja R voivat olla samanlaisia tai erilaisia ja jokainen on itsenäisesti vetyatomi tai alkoksiryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia; 1 R4, R5 ja R6 voivat olla samanlaisia tai erilaisia ja jokainen on itsenäisesti vetyatomi, alkyyliiyhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia, valinnaisesti substituoitu aiyyliryhmä tai 111265 346 valinnaisesti substituoitu antrakinonyyliryhmä; Z on hiili- tai piiatomi;
1. Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisen yleisen kaavan (1) mukaisen modifioidun oligodeoksiribonukleotidin valmistamiseksi 5 Ri-i-Y,—0—o-P-Y3-(X-Y.)n H X I ”3 L V2-R4 m ^ ( missä:
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että oligodeoksi-ribonukleotidi B:n ketjunpituus on A—8.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että oligodeoksi-25 ribonukleotidi B:n ketjunpituus on 5 tai 6. 111265 338
4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että neljäs oligodeoksiribonukleotidi B:n 5'-terminaalisesta päästä on guaniinideoksiribonukleotidi. 5
5 R5, R6 ja Z voivat yhdessä olla fluorenyyliryhmä tai ksantenyyliryhmä; tai R4, R5, R6 ja Z voivat yhdessä olla vetyatomi;
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on valittu ryhmästä, johon kuuluu trifenyylimetyy-lioksi-, 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3.5- bis[3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi]bentsyylioksi-, tert-butyylidifenyylisilyy- 10 lioksi-, fenyylifluorenyylioksi- ja fenyyliksantenyylioksiryhmä; kaavan ) [P(0)(Y2R4)-Y3-(X-Y4)n]mH mukainen ryhmä on valittu joukosta, johon kuuluu vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2-kloorifenyylifosforyyli-, -O-metyylitiofosforyyli-, metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2-hydrok-sietyylifosforyyli-, -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyli-, fenyylifosforyyli-, 4-kloo-15 rifenyylifosforyyli-, 2-nitrofenyylifosforyyli-, 4-nitrofenyylifosforyyli-, etyylifos-foryyli- ja -O-etyylitiofosforyyliryhmä; ja B on valittu ryhmästä, johon kuuluu TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, GGGCGGGGC, TAGGAGG, TGGGAGGT, TGGGCGCAG, CCG,
20 TCGGAGG, TGmCGAGG, CTGGGAGG, TGG, TGGGAmGG, TGGGAGA, AATGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, CGGGG, CGCGG, CGGGT, TGGGC ja ) TGGGT.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan 25 R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on valittu ryhmästä, johon kuuluu trifenyylimetyy- lioksi-, 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3.5- bis[3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi]bentsyylioksi-, tert-butyylidifenyylisilyy-lioksi-, fenyylifluorenyylioksi- ja fenyyliksantenyylioksiryhmä; ja kaavan [P(0)(Y2R4)-Y3-(X-Y4)n]mH mukainen ryhmä on valittu joukosta, johon kuuluu 30 vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2-kloorifenyylifosforyyli-, -O-metyylitiofosforyyli-, metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2-hydrok- 111265 339 sietyylifosforyyli-, -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyli-, fenyylifosforyyli-, 4-kloo-rifenyylifosforyyli-, 2-nitrofenyylifosforyyli-, 4-nitrofenyylifosforyyli-, etyylifos-foryyli- ja -O-etyylitiofosforyyliryhmä; ja B on valittu ryhmästä, johon kuuluu TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, TTGGAGG, 5 TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, CGGGG ja CGCGG.
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on valittu ryhmästä, johon kuuluu trifenyylimetyy- ( 10 lioksi-, 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-, 3,5-bis[3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi]bentsyylioksi-, tert-butyylidifenyylisilyy-lioksi-, fenyylifluorenyylioksi- ja fenyyliksantenyylioksiryhmä; ja kaavan [P(0)(Y2R4)- Y3-(X-Y4)11]mH mukainen ryhmä on valittu joukosta, johon kuuluu vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2-kloorifenyylifosfoiyyli-, -O-metyylitiofosforyyli-, 15 metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2-hydrok-sietyylifosforyyli- ja -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyliryhmä; ja B on valittu ryhmästä, johon kuuluu TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, CGGGG ja 20 CGCGG. (
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on valittu ryhmästä, johon kuuluu trifenyylimetyy-lioksi-, 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi- ja 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi- 25 ryhmä; ja kaavan [P(0)(Y2R4)-Y3-(X-Y4)n]mH mukainen ryhmä on valittu joukosta, johon kuuluu vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2-kloorifenyylifosforyyli-, -O-metyylitiofosforyyli-, metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2-hydroksietyylifosforyyli-, -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyli-, fenyylifosforyyli-, 4-kloorifenyylifosforyyli-, 2-nitrofenyylifosforyyli-, 4-nitrofenyylifosforyyli-, 30 etyylifosforyyli- ja -O-etyylitiofosforyyliryhmä; ja B on valittu ryhmästä, johon kuuluu TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, 111265 340 TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, CGGGGja CGCGG.
9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan 5 R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on valittu joukosta, johon kuuluu trifenyylimetyy- lioksi-, 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi- ja 3,5-(dibentsyylioksi)bentsyylioksi-ryhmä; ja kaavan [P(0)(Y2R4)-Y3-(X-Y4)n]mH mukainen ryhmä on valittu joukosta, johon kuuluu vetyatomi, metyylifosforyyli-, 2-kloorifenyylifosforyyli-, -O-metyyli-tiofosforyyli-, metyylifosfonyyli-, metyylitiofosfonyyli-, fenyylifosfonyyli-, 2-10 hydroksietyylifosforyyli-ja -0-(2-hydroksietyyli)tiofosforyyliryhmä; ja B on valittu ) ryhmästä, johon kuuluu TGGGAG, TGGGA, TGGGG, TGGG, TGGGAGG, CGGGAGG, TTGGAGG, TTGGGAGG, TGCGAGG, GGGGAGG, mCGGGAGG, mCGmCGAGG, CTGGGAGG, TTGGGG, TGGGGG, CGGGGja CGCGG. 15
10. R on vetyatomi, valinnaisesti substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia, valinnaisesti substituoitu aryyliryhmä tai valinnaisesti substituoitu aralkyyliryhmä; R metyyliryhmä, syanoetyyliryhmä tai fenyyliryhmä, joka on valinnaisesti substitu-15 oitu klooriryhmällä; 8ä R on metyyliryhmä tai syanoetyyliryhmä; R on fenyyliryhmä, joka on valinnaisesti substituoitu klooriryhmällä; 20 R9a on vetyatomi tai hydroksiryhmä, jossa on suojaryhmä; A on ryhmä -(CH2)h- (jossa h on kokonaisluku 1—16); ryhmä -(CEhjhO- (jossa h on kokonaisluku 1—16); ryhmä -(CH2)j-0-C0-(CH2)k- (jossa j 0n positiivinen koko-25 naisluku, k on 0 tai positiivinen kokonaisluku ja j + k on 2—16) tai ryhmä -(CEhjr NH-CO-(CH2)k- (jossa j on positiivinen kokonaisluku, k on 0 tai positiivinen kokonaislukuja j + k on 2—16), ryhmä -(CH2)j-S-CO-(CH2)k- (jossa j on positiivinen kokonaisluku, k on 0 tai positiivinen kokonaisluku ja j + k on 2—16) tai ryhmä -(CH2)n-0-C0-CH2(0CH2CH2)p-0CH2- (jossa n on positiivinen kokonaisluku, p on 30 0 tai positiivinen kokonaisluku ja j + k on 2—100); 111265 347 B, B' ja B" ovat jokainen adeniininukleotidin, guaniininukleotidin, tymidiininukleotidin tai sytosiininukleotidin emäsosuus, jonka emäs- ja fosfaattiosuudet ovat suojattuja; 5. on polymeerimateriaali; X on halogeeniatomi; XI on ryhmä -S-, -SO- tai -SO2; ( 10 X on happiatomi, rikkiatomi tai NH-ryhmä; X3 on happi- tai rikkiatomi;
10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; Y2 on happiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on ety-leeniryhmä, m on 1; n on 1; ja B on TGGGAG. 20
10 Ri, R2 ja R3 on itsenäisesti valittu ryhmästä, joka koostuu vetyatomeista, alkyyliiyh-mistä, joissa on 1—4 hiiliatomia, aryyliryhmistä, kuten on määritelty myöhemmin ja antrakinonyyliryhmistä, jotka ovat substituoimattomia tai ovat substituoituja ainakin yhdellä substituentilla, joka on edullisesti valittu ryhmästä, johon kuuluu substituen-tit 1, jotka on määritelty myöhemmin; 15 Z on hiiliatomi tai piiatomi; ( tai
20 R2, R3 ja Z yhdessä ovat fluorenyyli- tai ksantenyyliryhmä; R4 on vetyatomi, substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia, substitu-oitu alkyyliryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia ja joka on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on edullisesti valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit 2, 25 jotka on määritelty myöhemmin, aryyliryhmä, kuten on määritelty myöhemmin tai aralkyyliryhmä, kuten on määritelty myöhemmin; Yi, Y3 ja Y4 on itsenäisesti valittu ryhmästä, johon kuuluu happiatomit, rikkiatomit 111265 336 ja kaavan >NH mukaiset ryhmät; Y2 on happiatomi, rikkiatomi, kaavan >NH mukainen ryhmä, alkyleeniryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia tai fenyleeniryhmä; 5 X on substituoimaton alkyleeniryhmä, jossa on 1—10 hiiliatomia tai alkyleeniryhmä, jossa on 1—10 hiiliatomia ja joka on substituoitu ainakin yhdellä hydroksiryhmällä; 10. janon kumpikin itsenäisesti 0 tai kokonaisluku 1—10; j a ) B on oligodeoksiribonukleotidi, jonka ketjunpituus on 3—9; mainittu aryyliryhmä on aromaattinen karbosyklinen ryhmä, jossa on 6—20 15 rengashiiliatomia ja joka on substituoimaton tai on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit 1, jotka on määritelty myöhemmin; mainittu aralkyyliryhmä on alkyyliryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia ja joka on 20 substituoitu ainakin yhdellä aryyliryhmällä, kuten on määritelty edellä; ) mainitut substituentit 1 on valittu ryhmästä, johon kuuluu alkyyliryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, haloalkyyliryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, halogeeniatomit, nitroryhmät, syanoryhmät, aminoryhmät, alkoksiryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, 25 alkyylitioryhmät, joissa on 1—4 hiiliatomia, aryyliryhmät, kuten on määritelty edellä, aryylioksiryhmät, joissa aryyliosa on määritelty kuten edellä ja aralkyy-lioksiryhmät, joissa aralkyyliosa on määritelty kuten edellä, sillä edellytyksellä, että kun mainittu substituentti 1 on aryyliryhmä tai ryhmä, joka sisältää aryyliryhmän, joka on substituoitu ylimääräisellä aryyliryhmällä tai ryhmällä, joka sisältää 30 aryyliryhmän, tämä lisäryhmä ei itse ole substituoitu aryyliryhmällä tai ryhmällä, joka sisältää aryyliryhmän; ja 111265 337 mainitut substituentit 2 on valittu ryhmästä, johon kuuluu aminoryhmät, alkoksiryh-mät, joissa on 1—4 hiiliatomia ja halogeeniatomit; 5 tai sen suolan valmistamiseksi, EDELLYTTÄEN, ETTÄ kun Z on hiiliatomi, m on 0, Yi on happi ja Ri, R2 ja R3 on substituoimaton tai substituoitu fenyyliryhmä, eikä ryhmää B valita joukosta, johon kuuluu ATGAGCAC, AATTGTGC, TCATTATCA ja CCGCCAGAG, tunnettu siitä, että mainittu menetelmä käsittää vaiheet: ( 10 kondensoidaan seuraavan kaavan (2) mukainen yhdiste kaavan [suoja] - O - F - W mukaisen yhdisteen kanssa, jossa F on puuttuva oligonukleotidi, W on kytkijä ja polymeerikantaja ja [suoja] on suojaryhmä: 0' «»•?-Y’V0Ni Bi yJ HO (2) 15 ( missä Ri, R2 ja R3, Y ja Z on määritelty edellä ja D’ on 5’ -emäsryhmä, joka on valittu adeniinin, guaniinin, sytosiinin, tymiinin, 5-metyylisytosiinin ja niiden suoj attuj en versioiden joukosta. 20
11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan ' R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; Y2 on rikkiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on ety-leeniryhmä; m on 1; n on 1; ja B on TGGGAG. 25
12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; m on 0; n on 0; ja B on TGGGAG. 1
13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; Y2 on 111265 341 happiatomi; Y3 on happiatomi; R4 on metyyliryhmä; m on 1; n on 0; ja B on TGGGAG.
14. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan 5 R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trifenyylimetyylioksiryhmä; Y2 on happiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on etyleeniryhmä; m on 1; n on 1; ja Bon TGGGAG.
15. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan ( 10 R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trimetyyylifenyylioksiryhmä; Y2 on rikkiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on etyleeniryhmä; m on 1; n on 1; ja B on TGGGAG.
16. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan 15 R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trimetyylifenyylioksiryhmä; m on 0; n on 0; ja B on TGGGAG.
17. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trimetyylifenyylioksiryhmä; Y2 on happiatomi; Y3 20 on happiatomi; R4 on metyyliryhmä; m on 1; n on 0; ja B on TGGGAG. (
18. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; Y2 on happiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on ety- 25 leeniryhmä; m on 1; n on 1; ja B on CGGGG. 1 2 3 4 Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan 2 R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; Y2 on 3 rikkiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on ety- 4 30 leeniryhmä; m on 1; n on 1; ja B on CGGGG. 111265 342
20. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; m on 0; n on 0; ja B on CGGGG.
21. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; Y2 on happiatomi; Y3 on happiatomi; R4 on metyyliryhmä; m on 1; n on 0; ja B on CGGGG.
22. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan ) R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trifenyylimetyylioksiryhmä; Y2 on happiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on etyleeniryhmä; m on 1; n on 1; ja B on CGGGG.
23. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trimetyylifenyylioksiryhmä; Y2 on rikkiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on etyleeniryhmä; m on 1; n on 1; ja Bon CGGGG.
24. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trimetyylifenyylioksiryhmä; m on 0; n on 0; ja B ) on CGGGG.
25. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan 25 R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trimetyylifenyylioksiryhmä; Y2 on happiatomi; Y3 on happiatomi; R4 on metyyliryhmä; m on 1; n on 0; ja B on CGGGG. 1 2 3 4 Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan 2 R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; Y2 on 3 30 happiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on ety 4 leeniryhmä; m on 1; n on 1; ja B on CGCGG. 111265 343
27. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; Y2 on rikkiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on ety- 5 leeniryhmä; m on 1; n on 1; ja B on CGCGG.
28. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiiyhmä; m on 0; n on 0; ja B on CGCGG. ( 10
29. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on 3,4-(dibentsyylioksi)bentsyylioksiryhmä; Y2 on happiatomi; Y3 on happiatomi; R4 on metyyliryhmä; m on 1; n on 0; ja B on CGCGG. 15
30. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trifenyylimetyylioksiryhmä; Y2 on happiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on etyleeniryhmä; m on 1; n on 1; ja B on CGCGG. 20 ( 31. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trimetyylifenyylioksiryhmä; Y2 on rikkiatomi; Y3 on happiatomi; Y4 on happiatomi; R4 on vetyatomi; X on etyleeniryhmä; m on 1; n on 1; ja B on CGCGG. 25
32. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trimetyylifenyylioksiiyhmä; m on 0; n on 0; ja B on CGCGG. 1
33. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan R1R2R3Z-Y1 mukainen ryhmä on trimetyylifenyylioksiryhmä; Y2 on happiatomi; Y3 Ί 1)265 344 on happiatomi; R4 on metyyliryhmä; m on 1; n on 0; ja B on CGCGG.
34. Yhdiste, jolla on jokin seuraava yleisistä kaavoista (12), (14), (22), (24), (25) tai (27): 5 Dl Ίρ} o >Qyc-0-CH,CHrX’-A-c-v o21 ) R’lOl r_o YqVc-G*CH2CHrX'-A-C-X3 04) "’“ζΟ) o ho-chjCHj-x'-a-c-x* — (12) ! 10 0MT0 -t a* Yi n o R,e 9 X^tP-OCBjCH^X’-A-CX2·— Y3-*H7 (14) 111265 345 DMTO-f—I π ? w cTr* O=p*0--1 0 B' or8 V i —. ·· λ \ / 9 r9* S c^.5) X3sp-OCH2CH2-Xt-A-C-X2 ^ Y3-R7 ( R4 r5-z-yS λ B‘ * Yi j. I O R*· O—P—0" —i B OR* ^ 'j Π,
0 R94 0*P-0--1 n B· OR® Jn\ / / 0 R5* 0-
15 Y1 on hydroksyyliryhmä, valinnaisesti substituoitu fenyylioksiryhmä tai etyylioksi-ryhmä, joka voi olla substitoitu halogeenilla; Y on happiatomi, rikkiatomi tai NH-ryhmä; 20. on happiatomi, rikkiatomi, NH-ryhmä, alkyleeniryhmä, jossa on 1—4 hiiliatomia ( tai fenyleeniryhmä; EDELLYTTÄEN, ETTÄ yleisten kaavojen (12) tai (14) mukaisissa yhdisteissä, missä A on kaavan - (CH2)j-0-C0-(CCH2)k mukainen ryhmä, j on muu kuin 25 kokonaisluku 2. 111265 348
FI940425A 1993-01-29 1994-01-28 Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten modifioitujen oligodeoksiribonukleotidien valmistamiseksi ja niiden välituotteita FI111265B (fi)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP1350993 1993-01-29
JP1350993 1993-01-29
JP13557393 1993-06-07
JP13557393 1993-06-07
JP13851793 1993-06-10
JP13851793 1993-06-10

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI940425A0 FI940425A0 (fi) 1994-01-28
FI940425A FI940425A (fi) 1994-11-04
FI111265B true FI111265B (fi) 2003-06-30

Family

ID=27280283

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI940425A FI111265B (fi) 1993-01-29 1994-01-28 Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten modifioitujen oligodeoksiribonukleotidien valmistamiseksi ja niiden välituotteita

Country Status (19)

Country Link
US (2) US5674856A (fi)
EP (1) EP0611075B1 (fi)
KR (1) KR100318796B1 (fi)
CN (2) CN1039014C (fi)
AT (1) ATE146479T1 (fi)
AU (1) AU670154B2 (fi)
CA (1) CA2114355A1 (fi)
CZ (1) CZ287050B6 (fi)
DE (1) DE69401136T2 (fi)
DK (1) DK0611075T3 (fi)
ES (1) ES2098866T3 (fi)
FI (1) FI111265B (fi)
GR (1) GR3022821T3 (fi)
HK (2) HK1000191A1 (fi)
HU (1) HU222834B1 (fi)
IL (1) IL108467A (fi)
NO (1) NO309427B1 (fi)
NZ (2) NZ280616A (fi)
RU (1) RU2111971C1 (fi)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2114355A1 (en) * 1993-01-29 1994-07-30 Hidehiko Furukawa Modified oligodeoxyribonucleotides, their preparation and their therapeutic use
US6291438B1 (en) 1993-02-24 2001-09-18 Jui H. Wang Antiviral anticancer poly-substituted phenyl derivatized oligoribonucleotides and methods for their use
CN1060177C (zh) * 1997-06-28 2001-01-03 中国科学院上海生物化学研究所 3′－单磷酸化寡核苷酸
GB9823646D0 (en) 1997-12-19 1998-12-23 Brax Genomics Ltd Compounds for mass spectrometry
US6995259B1 (en) * 1998-10-23 2006-02-07 Sirna Therapeutics, Inc. Method for the chemical synthesis of oligonucleotides
DE10041809A1 (de) * 2000-08-25 2002-03-07 Giesing Michael Arrays immobilisierter Biomoleküle, deren Herstellung und Verwendung
US7205399B1 (en) 2001-07-06 2007-04-17 Sirna Therapeutics, Inc. Methods and reagents for oligonucleotide synthesis
US9394167B2 (en) 2005-04-15 2016-07-19 Customarray, Inc. Neutralization and containment of redox species produced by circumferential electrodes
US20070065877A1 (en) * 2005-09-19 2007-03-22 Combimatrix Corporation Microarray having a base cleavable succinate linker
WO2011071078A1 (ja) * 2009-12-08 2011-06-16 国立大学法人岐阜大学 芳香族化合物、並びに、それを用いたオリゴヌクレオチド誘導体合成用修飾担体、オリゴヌクレオチド誘導体及びオリゴヌクレオチド構築物
CN102766183B (zh) * 2011-05-05 2016-09-14 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 具有抗hiv-1融合活性的修饰的核酸结构
CN116496335B (zh) * 2023-03-21 2024-03-08 中国药科大学 一种修饰核苷酸及其应用

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX158743A (es) * 1980-02-29 1989-03-10 University Patents Inc Procedimiento para la produccion de oligonucleotidos
US4849513A (en) * 1983-12-20 1989-07-18 California Institute Of Technology Deoxyribonucleoside phosphoramidites in which an aliphatic amino group is attached to the sugar ring and their use for the preparation of oligonucleotides containing aliphatic amino groups
FR2568254B1 (fr) * 1984-07-25 1988-04-29 Centre Nat Rech Scient Application d'oligonucleotides lies a un agent intercalant, notamment a titre de medicament
US5252760A (en) * 1985-03-28 1993-10-12 Chiron Corporation Method of using colored phosphorylating reagents
DE3751468T2 (de) * 1986-10-30 1996-02-29 Daicel Chem Verfahren zur herstellung von oligonukleotiden und verbindungen zur bildung hochmolekularer schutzgruppen.
JPH01502187A (ja) * 1986-12-02 1989-08-03 サントル・ナシオナル・ド・ラ・ルシェルシュ・シアンティフィック・（セ・エヌ・エール・エス） α―オリゴヌクレオチド
US5276019A (en) * 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US4904582A (en) * 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
AU5418290A (en) * 1989-03-31 1990-11-05 University Patents Inc. Polynucleotide phosphorodithioates as therapeutic agents for retroviral infections
WO1992008729A1 (fr) * 1990-11-20 1992-05-29 Sankyo Company, Limited Derives d'acide nucleique non codant
US5672697A (en) * 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
US5220003A (en) * 1991-03-29 1993-06-15 The Regents Of The University Of California Process for the synthesis of 2',3'-dideoxynucleosides
JP3061659B2 (ja) * 1991-08-01 2000-07-10 ヤマサ醤油株式会社 ２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エチル基および該基の使用法
KR930016437A (ko) * 1992-01-22 1993-08-26 귀틀라인, 슈미트 올리고뉴클레오티드 유사체, 이의 제조방법 및 용도
US5646261A (en) * 1992-01-22 1997-07-08 Hoechst Aktiengesellschaft 3'-derivatized oligonucleotide analogs with non-nucleotidic groupings, their preparation and use
CA2114355A1 (en) * 1993-01-29 1994-07-30 Hidehiko Furukawa Modified oligodeoxyribonucleotides, their preparation and their therapeutic use
JPH09208729A (ja) * 1996-02-02 1997-08-12 Sekisui Chem Co Ltd 帯電防止プラスチックプレートもしくはシートの製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN1065238C (zh) 2001-05-02
NZ250795A (en) 1997-04-24
NO940310D0 (no) 1994-01-28
HUT66266A (en) 1994-10-28
US5674856A (en) 1997-10-07
AU670154B2 (en) 1996-07-04
FI940425A (fi) 1994-11-04
HK1000191A1 (en) 1998-01-27
GR3022821T3 (en) 1997-06-30
CN1193013A (zh) 1998-09-16
HU222834B1 (hu) 2003-11-28
DE69401136D1 (de) 1997-01-30
NO309427B1 (no) 2001-01-29
US5807837A (en) 1998-09-15
IL108467A0 (en) 1994-04-12
HK1016151A1 (en) 1999-10-29
CA2114355A1 (en) 1994-07-30
EP0611075B1 (en) 1996-12-18
CZ19094A3 (en) 1994-12-15
AU5473194A (en) 1994-08-04
NO940310L (no) 1994-08-01
EP0611075A1 (en) 1994-08-17
CN1098107A (zh) 1995-02-01
FI940425A0 (fi) 1994-01-28
ATE146479T1 (de) 1997-01-15
HU9400246D0 (en) 1994-05-30
ES2098866T3 (es) 1997-05-01
KR940018394A (ko) 1994-08-16
KR100318796B1 (ko) 2002-06-20
DK0611075T3 (da) 1997-07-07
CZ287050B6 (en) 2000-08-16
CN1039014C (zh) 1998-07-08
DE69401136T2 (de) 1997-07-10
IL108467A (en) 1999-09-22
NZ280616A (en) 1997-04-24
RU2111971C1 (ru) 1998-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6038860B2 (ja) リン原子修飾核酸の合成方法
US5512668A (en) Solid phase oligonucleotide synthesis using phospholane intermediates
EP0843684B1 (en) Universal solid supports and methods for their use
AU9063398A (en) Oligonucleotide analogues
FI111265B (fi) Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten modifioitujen oligodeoksiribonukleotidien valmistamiseksi ja niiden välituotteita
JP7263236B2 (ja) 新規二環式ヌクレオシドおよびそれから調製されたオリゴマー
WO1995024413A1 (en) Compositions and methods for use in the synthesis of oligonucleotides
JPH0787982A (ja) 修飾オリゴデオキシリボヌクレオチド
KR20030081303A (ko) 올리고뉴클레오티드 합성용 신톤
JP7075681B2 (ja) 立体制御オリゴヌクレオチド合成用光学活性セグメントおよびその製造方法、ならびにそれを用いた立体制御オリゴヌクレオチドの合成方法
JPH0892275A (ja) 修飾オリゴデオキシリボヌクレオチド
JP2000290185A (ja) Ｔｇｇｇ配列を持つ修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドを含有する抗エイズ剤
WO2000049032A1 (en) Oligonucleotides having alkylphosphonate linkages and methods for their preparation
JPH11246592A (ja) Ｔｇｇｇ配列を持つ修飾オリゴデオキシリボヌクレオチド
JPH11199597A (ja) 修飾ヌクレオシド等を含有するオリゴデオキシリボヌクレオチド
WO2007026824A1 (ja) オリゴヌクレオチド類縁体
WO1997041140A1 (en) Modified oligonucleotides
JP2000302684A (ja) 修飾ヌクレオシド等を含有するオリゴデオキシリボヌクレオチドを含有する抗エイズ剤
PL157777B1 (en) Method of obtaining oligonucleotides