JPH01502187A - α―オリゴヌクレオチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 α−オリゴヌクレオチド 本発明は、新規な化学物質に関し、また同時に一定のＤＮＡまたはＲＮＡ配列の 検出を可能とするプローブを通してのこれらの物質の利用法に関する。

本発明における化学物質は、天然のβ−型とは反対に非天然型のα−アノマー型 を有するヌクレオチド配列を含有するオリゴヌクレオチドまたはオリゴデオキシ ヌクレオチドから成る。

α−およびβ−オレゴヌクレオシドはそれぞれ次式にて表わされる。ヌクレオチ ドを得るには５１位置にり薬理学的目的で、天然のβ−オリゴヌクレオチドをブ ローベとして使用することは公知であり、〜Ａずれの応用においても相補的オリ ゴヌクレオチド配列との対合を包含したものである。しかしながら天然のβ−オ リゴヌクレオチドの使用は数種の困難性に遭遇するＯ第一の困難性は、これらの 配列を十分に安定状態でこれらの相補的物標配列と雑種形成させるために（よ十 分に長い配列を準備する必要があった。

該鎖長を低減するには、アクリジンのような挿入剤を保育している鎖を付加させ る必要のあることを、Ｃ，ヘレン（Ｃ，１１ｅｒｅｎｅ）らが最初に提案してい る。これらの分子は、生成する雑種中の共有結合ヘッドの挿入により生ずる過剰 エネルギーの理由で、より強力にこれらの相補的配列と結合する。

第二の困難性は、多くのオリゴヌクレオチド配列１嘘ある種の酵素に対して代謝 脆弱性を示すことである。この点について、全ての生存生物は多くのヌクレアー ゼを含有していることが知られている。

後述のように本発明の化合物は、上記の欠点を改善でさせつるようなα−オリゴ ヌクレオチド配列を含んで〜）る。

本発明の化合物は天然β−オリゴヌクレオチドの相補的配列と平行に対合すると いう有利な性質を提供するものであるが、これに対して二つの相補的α−配列ま たｉｔ二つの相補的β−配列はアンチパラレルに対合する。この平行対合のほう が遥かに安定である。

その上、これらのα−オリゴヌクレオチドは酵素、特にヌクレアーゼに対して高 度の抵抗性を発揮する。

したがって、既にβ−オリゴマーに対して知られているような生物学的および薬 理学的目的をもつ用途の多様化が効能の著しい向上を伴って期待されつる。

さらに詳しくは、本発明の課題はオリゴヌクレオチドまたはオリゴデオキシヌク レオチドから成る化学物質であり、これらの化合物は非天然α−アノマー型を有 するヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチド配列を含んでいて、該配列ではエ フェクター剤、特に挿入剤に対応するラジカルまたは化学的もしくは光学的に活 性化可能なラジカルであって直接間接にヌクレオチド鎖と反応しうるような基を 有するラジカルまたはその存在が容易かつ鋭敏な検出を可能ならしめるようなラ ジカルと任意に結合せしめろる。

特に、本発明の課題は新規なα−オリゴヌクレオチド誘導体、これらの合成法お よび用途にあり、特にプローブとして特定の核酸配列の検出を可能ならしめる用 途、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列に対して特異的な合成ヌクレアーとしての用途、ま たは遺伝子の表現を選択的にブロッキングするための薬剤としての用途にある。

後者の場合は内因性（例えばしゅよう遺伝子）または外因性（例えばウィルスま たは寄生虫またはバクテリヤのＤＮＡもしくはＲＮＡ）の何れかである。

フランス特許出願８３１０１，２２３（第２，５４０，１２２号）および同８４ ／１１．７９５（第２，５１１ｉ８，２５４号）では、天然または変更ヌクレオ チドすなわちβ−ヌクレオチドの配列を含むオリゴヌクレオチドもしくはオリゴ デオキシヌクレオチドから成る化学物質を開示しており、該配列に対して少なく とも一つの挿入基が共有結合で結ばれており、該化合物は遺伝子表現を選択的に ブロッキングする特性があり、その結果これらは抗ウィルス剤、抗生物質、駆虫 剤、抗腫瘍物質のような治療用に特に有用であると報告している。

ＰＣＴ　８３１０１，４５１号公報には、蛋白に対する伝令ＲＮＡ（ｍＲＮＡ） の翻訳をブロッキングする方法を開示しており、該方法はｍＲＮＡに相補的配列 を有するオリゴヌクレオチドでｍＲＮＡを雑種形成させるもので、このオリゴヌ クレオチドはリン酸トリエステル型に安定化されるとしている。　・ 本発明では、α−ヌクレオチド誘導体はＤＮＡと形成した錯体よりも遥かに安定 な相補ＲＮＡ配列との雑種形成錯体を形成することを見いだしたもので、この点 が本発明の一つの課題をなす。またＲＮＡ５の観点からはこのα−ヌクレオチド 誘導体は天然のβ−ヌクレオチド誘導体よりもさらに安定な雑種形成錯体を形成 するこを見いだしたものである。

本発明の化合物の中でも、特に次式 にて表わされるα−オリゴマー化合物が挙げられる。

式中、ラジカルＢは同種または異種であってそれぞれ任意に変更した核酸塩基を 示し、これらは活性化可能であるか、および／または挿入基を含んでおり、かつ 非天然α−７ノマー型に従がってグリコシド環に連結しており； ラジカル又は同種または異種であってそれぞれオキソ（ｓｌｃ）アニオン０−、 チオ（ｓｌｃ）アニオンＳ−、アルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、 アミノアルキル基、アミノアルコキシ基、チオアルキル基、窒素含有複素環もし くは基−Ｙ−Ｚで置換されたアルキルもしくはアルコキシ基を示し： ＲおよびＲ”は、同種または異種であってそれぞれ水素原子または基−Ｙ−Ｚも しくはＹ’−２’を示し；ＹおよびＹ’は同種または異種であって直鎖または分 枝型のフルキレンラジカル−ａＬｋ−または〔式中、Ｕ＝０、ＳまたはＮ〕 から選択されたラジカルをい示し； ＥはＹ−ＺまたはＹ’−Ｚ’以外はＸと同義であり；ｊは水素原子またはヒドロ キシ基を示し；ＺおよびＺ”は同種または異種であってそれぞれエフェクター剤 に対応するラジカル特に挿入剤に対応するラジカルもしくは直接間接にヌクレオ ド鎖と反応する基を有するラジカルであるか、またはその存在が容易かつ鋭敏な 検出を可能ならしめるようなラジカルを示す。

式（Ｉ）では、次のようなヌクレオシドの略式表示をこのものは次の構造式 〔式中には、（３′）および（５”）端が示されている〕に該当する。

式（１）は、同種または異種のヌクレオチド配置を示し、ｎは単に分子中に含ま れるヌクレオチド数を示し；ｎは好ましくは１〜５０、さらに好ましくは！〜２ ５の数を表わすと記載するのが適当である。

本発明の新規誘導体は、Ｄ−ヌクレオチドのα−アノマー配置を含むオリゴヌク レオチド類似体またはオリゴデオキシヌクレオチド類似体から成り、該配置では 挿入ラジカルおよび／または化学ラジカルであってヌクレオチド鎖（”反応性化 学ラジカル”）および／またはその物の存在が容易に検出を可能とさせるような 標識と直接間接に反応するような基を育する該化学ラジカルと共有結合により任 意に結合できる。

さらに詳しくは、本発明の新規なα−オリゴヌクレ芽チド誘導体は一般式（Ｉ） に該当し、 式中りが硫黄原子または−ＮＨ−基を示すときは、基ＲおよびＲ″は同種または 異種であってそれぞれ水素原子または基−Ｙ−ＺもしくはＹ’−Ｚ”を示し、こ こでＹおよびＹｌは同種または異種であってそれぞれ直鎖もしくは分枝のアルキ レンラジカル（−ａＬｋ−）　＊たはラジカル を示し、式中、Ｅは又と同義であるか、またはラジカル−ａＬｋ　−０−ａＬＫ −またはラジカル−ａＬｋ　−Ｃ０ＮＨ−ａＬｋ−またはラジカル を示し、また ２およびＺ”は同種または異種であってそれぞれ挿入剤に対応するラジカルまた はヌクレオチド鎖またはそれの存在が容易かつ鋭敏な検出を可能ならしめるよう なラジカルと直接間接に反応しうるような基を含有するラジカルを示し、 Ｌが酸素原子を示す場合には、ラジカルＲおよびＲ１は同種または異種であって それぞれ水素原子または基−Ｙ−Ｚ−またはｙ’−ｚゝを示し、ここでＹ％Ｙ’ ％Ｚおよびｚ′は前記したと同じであり、ここで少なくとも一つのラジカルＲお よびＲ１は挿入ラジカルまたは反応性化学ラジカルを含むものとし、 Ｌが酸素原子を示す場合には、基ＲおよびＲ’がそれぞれは水素原子を示し、か つＢは活性化しうるか、および／または挿入基を含む変更核酸塩基を示す。

挿入剤は核酸分野では公知のもので、これらはＤＮＡまたはＲＮＡ構造中に”挿 入”が可能な化合物であり、すなわち核酸の塩基面間に挿入されうる化合物であ る。

挿入剤は、アクリジンおよびその誘導体、フロクマリンおよびその誘導体、ダウ ノマイシンおよび他のアンスラサイクリン誘導体、１．１０−７エナンスロリン 、フェナンスリジンおよびその誘導体、プロフラビン、ポルフィリン、ジビリド ［１，２−ａ：３’、２’−ｄコイミダゾール誘導体、エリブチシンまたはエリ ブチジニウムおよびこれらの誘導体およびジアザピレンおよびその誘導体のよう な平坦な構造的配置をなすポリ環状化合物から選択される。

反応性化学ラジカルは直接間接的にヌクレオチド鎖と反応して共有結合を形成す るかまたはそれを化学的に変更するかまたはそれを分割できるようなラジカルで ありうる。好ましくはこれらの反応性化学ラジカルは、例えば化学的に、生化学 的に、または光化学的に活性化しうるちのである。

この活性化可能な反応性ラジカルは、エチレンジアミンテトラ酢酸、エチレント リアミンペンタ酢酸、ポルフィリン、１．１０−フェナンスロリン、４−アジド アセトフエノン、エチレンイミン、β−クロロエチルアミン、プソラレンおよび その誘導体、近紫外線もしくは可視光線を吸収したり化学的に核酸成分と反応可 能な芳香族から選択される さらに詳しくは、この活性化可能なラジカルは、金属イオン、酸素および還元剤 （エチレンジアミンテトラ酢酸、ジエチレントリアミンペンタ酢酸、ボルフリン 、フェナンスロリン）の存在下で、近隣に位置する核酸配列の分割（ｃｌｅａｖ ａｇｅ）を誘発するものである。

可視または近視外線を照射するとこれらの放射線を吸収して該誘導体は活性化し 、核酸の橋掛けまたは光誘発反応（核酸塩基の分割もしくは変更）を引き起こさ せることができ、活性化可能な基を宵するα−オリゴヌクレオチドは該核酸に結 合している。

ＺおよびＺ′を更に具体的に記載すれば：次式 にて表わされるエチレンジアミンテトラ酢酸から誘導されるラジカル； ジエチレントリアミンペンタ酢酸から誘導されるうにて表わされるメチルパイロ ポルフィリンから誘導されるラジカル： 次式 にて表わされるフェナンスロリンから誘導されるラジカル： 次式 にて表わされるアクリジンから誘導されるラジカル：次式 〔式中、Ｒはアミノ（Ｈｌｌ）またはアジド（Ｎ３）を示す〕にて表わされるプ ロフラビンから誘導されるラジカル；次式 にて表わされるビオチンから誘導されるラジカル；次式 にて表わされる４−アジドアセトフェノンから誘導されるラジカル： から選択される。

ラジカルＢは天然核酸塩基（チミン、アデニン、チトシン、グアニン、ウラシル ）から選択するのが好ましいが、変更核酸塩基の使用も可能である。例えば、２ −アミノアデニンお上びＮ６窒素原子上にアミノアルキレンラジカルもしくはア ジドフェニルアルキレンラジカルが置換したその誘導体、０６酸素原子上に例え ばト（ω−フルキレン）アクリジン基、８４（ω−アミノアルキル）アミノコア デニンが置換したグアニンおよびそのω−アミン基上にアクリジン基が置換した その誘導体、または５−ブロモウラシル、８−アジドアデニン、７−ジアザアデ ニンおよび７−ジアザグアニンのようなハロゲン化もしくはアジド誘導体等を挙 げることができる。

また挿入基、または化学的もしくは光化学的に活性化しうる基を含む核酸塩基の 誘導体の使用もできる。

ＣまたはＴを４−位置でアジリジンで官能化するとＧとＡのそれぞれの上の二つ の相補ストランド間にＱｌ１２−ｃｌＩＱの共有結合ブリフジが形成される。

具体的にはラジカルＢは４−アジドチミンまたは４−アジドチミンから選択され る。

好ましくは、ラジカルＸはオキソ（５ｉｃ）アニオンを示す。しかしながら、ラ ジカルＸは炭素数１〜７　（メチル、エチル、プロピル）のアルキルラジカル、 アルキル部位が炭素数１〜７　（メトキシ、エトキシ、２．２−ジメチルプロピ ルオキシ）を含むアルコキシ基、一般式ＲＩＲ，Ｎ−ａＬｋ−Ａ　（式中、Ａは ボンドまたは酸素原子を示し、−ａＬｋ−は炭素数１〜１０のフルキレンラジカ ルを示し、ＲｓとＲ２は同種または異種であって水素原子もしくは炭素数！〜７ のアルキル基を示すかまたはこれらが結合している窒素原子と飽和５−または６ −員環窒素含宵複素環を形成している）にて示されるアミノアルキルもしくはア ミノアルコキシルラジカルを表わすこともできる。但し、基Ｒ１Ｒ２Ｎ−は四級 化されていてもよく、アルキル部位が炭素数１〜７のアルキルチオ基であっても よい。

式（Ｉ）において、ラジカル−ａＬｋ−は炭素数１−１０の直鎖もしくは分枝の アルキレンラジカルであることが好ましい。

α−オリゴマーの３′または４′末端アルコ−基を用いて、エフェクターＺを各 種の性質を有する官能基Ｚ１”と（ＣＨ２）−鎖を経由してオリゴマーのグリコ シド部位に導入することができる。

次式 から、２１′にて示される基の種類に応じて、例えば次式 にて示されるリン酸塩またはメチルリン酸塩、次式 にて示されるエーテル、 次式 ％式％ にて示されるエステル、または 次式 ％式％ にて示されるカルバメートが得られる。

本発明はまた、塩基または酸との塩の形態をなす上記化合物にも関し、さらにラ セミ体をなす化合物、または形態における式（Ｉ）の化合物にも関する。

本発明は好ましくはＤシリーズにおける式（１）の上記化合物に関する。

一般式（Ｉ）の中でも特に宵利な化合物としては、ａ　−Ｃ（Ｔｐ）−丁］（Ｙ ｘ）Ｚｔ　；　Ｚ２（Ｙａ）ａ　−［（Ｔｐ）、Ｔコ　；　Ｚｔ（Ｙａ）Ｃ１− ［（Ｔｐ）、Ｔ］（Ｙｔ）Ｚｔ　；　Ｚｔ（Ｙａ）α−ｄ（ＣｐＣｐ丁ｐＴｐＡ ｐＴｐＡｐ丁ｐ丁）〔式中、ムはα−Ｄ−デオキシアデノシンラジカル、Ｃはα −Ｄ−デオキシシチジンラジカル、Ｔはα−Ｄ−チミジンラジカル、ｎは１およ び２５間の整数、ＹＸおよびＹａは炭素数！〜１０のアルキレンラジカル、ｚｌ およびｚ２それぞれはアクリジン誘導体またはプロフラビン誘導体または！。

１Ｏ−７ｚナンスロリン誘導体または４−アジドアセトフ工ノン誘導体またはＥ ＤＴ人誘人体導体はビオチン誘導体を示す〕が挙げられる。

一般式（Ｉ）にて表わされる新規な化合物は、公知の方法、特にフランス特許第 ２，５４０，１２２号および同１！２，５６８．２５４号公報に開示の方法によ り化学的に合成できる。

一般式（Ｉ）の化合物はβ−アノマーに対して古くから使用されるホスホジエス テル、ホスホトリエステル、ホスホルアミダイトまたはハイドロゲノホスホネー ト合成法により化学的に合成できる。ホスホトリエステル法では、グアニンのα −ヌクレオチド誘導体が追加的基、好ましくはＮ、Ｎ−ジフェニルカルバモイル 基によりｏ６位置で任意に保護される。

これらの方法では、使用されない各種の基を保護しながら先ずヌクレオチド鎖が 合成され１、この保護基を最終的にはずして所望の生成物を取得する。この方法 によりすべての普通の塩基から成るα−オリゴヌクレオチドを得ることがはじめ て可能に゛なった。該方法によれば所望の長さのα−オリゴヌクレオチドが得ら れる。

式（Ｉ）の化合物はまた、半合成法、特に化学（ｓｉｃ）工学的に合成したＤＮ Ａ断片またはＲＮＡ断片を使用し、次いでこれにエフェクター剤を結合させるこ とによっても合成できる。

したがって本発明によれば、該誘導体は完全に保護されながら合成でき、次いで 該保護基をはずす。一般式（Ｉ）の製品はまた、先ず例えばα−オリゴヌクレオ チド鎖の３′もしくは５１端または３′および５′の両端にトイリン酸基を含む 未保護誘導体を作り、次いでこのチオリンＭ［−ハロゲンアルキル基またはスル ホン酸アルキルエステル基を宵する誘導体Ｚおよび／またはＺｌと縮合させるこ とによっても合成できる。

α−オリゴヌクレオチド鎖を有する本発明の化合物の利点は、エフェクター剤特 に挿入剤とは無関係にこれらの用途を予測できることで、その理由はこれらの新 規オリゴヌクレオチド物質は相補的核酸配列の認識に対して極めて強い安定性を 発揮するからである；挿入剤の機能は雑種形成錯体の安定性を増加させることに あるので、そのものの存在はもはや必須ではなくなるからである。

相補的核酸配列に対するこれらの大きな特異的な親和性のために、本発明の化合 物は相補的配列に対する親和性がより小さい従来のオリゴヌクレオチドよりも優 れている。

したがって本発明の化合物は、雑種形成プローブとして・また特定ＤＮＡまたは ＲＮＡ配列に対する精製成分としてさらに効果的に使用ができる。

これらの化合物はまた、ＤＮＡまたはＲＮＡのレベルに於いて突然変移をより効 果的に検知するのに利用できる。

また本発明の課題はこれらの化合物を細胞遺伝子または予め選択した病原剤（ウ ィルス、バクテリヤ、寄生虫）の特異的ブロッキング用に応用することである。

相補的核酸配列に対して強力に結合する特性の結果、またその位置において核酸 鎖の分割を誘発する結果として、本発明の化合物は配列−特異的人造ネタレアー ゼとして使用できる。

そこで本発明の化合物は医薬としても使用できる。

本発明の製品は、挿入剤または反応性化学基、または挿入剤および反応性化学基 に対し共有結合で結ばれるα−オリゴヌクレオチド鎖から構成させることができ る。

相補的核酸配列の認識に対して提供された新製品である該α−オリゴヌクレオチ ドでは、挿入剤が雑種形成錯体の安定性を著しく高め、かつ活性化することによ ってこの反応性化学基が相補的核酸鎖の橋掛は反応または化学的変更・修飾反応 または分割を引き起こすようになる。

そこでこれらの新製品は橋掛は反応を誘発し、また予め選択した位置で極めて効 果的に核酸鎖の分割もしくは変更・修飾の誘発を可能にする。

本発明による一般式（Ｉ）にて表わされる新規製品、およびＬが酸素を、Ｒおよ びＲ゛がそれぞれ水素原子を、またＢが天然核酸塩基を示す場合の一般式（Ｉ） にて表わされる該製品は、ＤＮＡと形成される錯体よりも更に安定な相補的ＲＮ Ａ配列との雑種形成錯体を形成する。

この安定性は温度上昇過程で該錯体の半一遷移温度（Ｔｌ／２）の測定から知る ことができる。Ｔ　Ｉ／２値は、ナトリウムカコデイレート（１Ｇ−”　Ｍ）お よび塩化ナトリウム（０，Ｉ　Ｍ）を含むｐＨ７の緩衝液中のα−オリゴヌクレ オチド濃度１０４Ｍで測定した。結果を第１表に示した。雑種形成錯体（第１表 ）の該差異は、ゲノムＤＮＡのレベルにおいて逆効果の大きな危険性なしに伝令 ＲＮＡ５およびウィルス性ＲＮＡ５の優先的阻害を可能にする。

そのうえＲＮＡ５に関しては、本発明の製品は一般的に天然のβ−ヌクレオシド 誘導体から得られるものよりもさらに安定な錯体を形成する。

相補核酸配列と本発明のα−オリゴヌクレオチドにより形成された雑種では二つ のストランドは一般に同一方向付けを宵している。例えば、このα−Ｄ−オリゴ ヌクレオチドムｃｒ（ＣＨ，）６−ａ−ｄ’°ＣｐＣｐＣＰＴｐＴｐＡｐＴｐＡ ｐＴｐＴコ３°は配列β−ｄ５°［ムｐＣｐＧｐＧｐＡｐＡｐＴｐムｐＴｐＡｐ Ｇｐｃ　］　３°と安定な錯体を形成し、後者の半一解離温度（Ｔ　Ｉ／２）は ｐ［１７のｌＯ衝液中１０μＭｔｊＡ度において３５℃である。同一条件下で、 （Ｔ　Ｉ／２）はムｃｒ（Ｃ１ｌ１２）ｒ５−α−ｄ”　［ＴＣＴＡＡＡＣＴＣ コ３°が［β−ｄ”　［ＡＧＡＴＴＴＡＧＡコ３と形成した錯体での半一解離温 度は２７℃である。

アンチパラレル配列［β−ｄ６°　［ＧＡＧＴＴＴＡＧＡＩ３°をなすβ−Ｄ− オリゴヌクレオチドでは０℃以上では錯体は検出されていない。

ピリミジンヌクレオシド配置を含むα−オリゴヌクレオチド配列であってシス配 列をなすか、さもなければ挿入剤と結合しているか、または化学的もしくは光化 学的に活性な基と結合していてピリミジンヌクレオシド配置を含むものは、ピリ ミジン塩基の相補配列と水素結合を通じてつながっている隣接のプリン塩基配列 を含むＤＮＡまたはＲＮＡ二重らせんに結合することが可能である。この結合は 、三重らせんの局部的生成を包含し、ここではα−オリゴヌクレオチドのピリミ ジン塩基は二重らせんのプリン塩基と水素結合（Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎまたは逆Ｈ ｏｏｇｓｔｅａｎ型の）を形成する。かくして、α−オリゴヌクレオチドは対応 するβ−オリゴヌクレオチドよりも安定した錯体を形成し、このためにこれらは ＲＮＡまたはＤＮＡ二重らせんと非可逆的反応（橋掛け、変更Φ修飾または分割 ）を引き起こす。

本発明のα−オリゴヌクレオチド誘導体と、相補的塩基配列を含む核酸配列との 間に形成・された雑種は、この二つのストランドが同一指向の時のほうがアンチ パラレルの時よりも遥かに安定である。そこで本発明のα−オリゴヌクレオチド と相補的な核酸配列は、α−オリゴヌクレオチドと同一方向を指向する相補的塩 基配列を含む核酸の部分であること意味するものと理解できる。

本発明の一般式ＣＩ）にて表わされる新規製品、およびＬが酸素原子、ＲとＲ’ がそれぞれが水素原子、Ｂが天然核酸塩基を示す場合の一般式（Ｉ）の製品は相 補的核酸配列順序に強力に結合する性質を有するので、相補的核酸鎖の存在を検 出するためのプローブとして使用が可能である。この検出の際にはこれらの分子 中に蛍光基もしくはビオチン基を存在させて行う。

α−オリゴヌクレオチドの非天然型構造、および相補鎖と形成する二重らせんの パラレル鎖構造は抗原性を付与するので、それにより任意に挿入剤と結合させて α−オリゴヌクレオチド指向の特異的抗体、または天然ＤＮＡもしくは天然ＲＮ Ａとのこれらの錯体を指向する特異的抗体を作ることができる。

診察や予見目的で、任意に挿入剤と結合したα−オリゴヌクレオチドは、蛍光標 識、または着色反応や発光反応や蛍光反応を生ずる標識と結合している固形担体 と共育結合で連結できるので、このために当該目的においにＤＮＡもしくはＲＮ Ａに対するプローベとしてのこれらの用途が開ける。

本発明の他の課題は、本発明の一般式（Ｉ）で表わされる新規製品、およびＬが 酸素原子、ＲとＲｏがそれぞれが水素原子、Ｂが天然核酸塩基を示す場合の一般 式（１）の製品の、細胞遺伝子または予め選択した病原性遺伝子（ウィルス、バ クテリヤ、寄生虫）の特殊ブロッキング用への応用である。これらの配置に起因 して本発明のα−オリゴヌクレオチドは天然のβ−ヌクレオチドよりもヌクレア ーゼに対して遥かに抵抗性を示す。酵素的加水分解に対する安定性を示すために 一般式（Ｉ）の製品はヌクレアーゼが存在する試験管内もしくは体内での試験に 使用することができる。その結果、本発明のα−オリゴヌクレオチドは公知のβ −ヌクレオチド誘導体よりも有用であることは明らかである。

本発明の一般式（Ｉ）で表わされる新規製品、およびＬが酸素原子、ＲとＲｏが それぞれが水素原子、Ｂが天然核酸塩基を示す場合の一般式（Ｉ）の製品は、外 因性（ウィルス、バクテリヤ、寄生虫）かまたは内因性（しゅよう細胞遺伝子） のいずれかの好ましくない遺伝子をブロッキングするための医薬として特に有用 である。これらの遺伝子の表現は、その遺伝子情報を宵するＤＮＡもしくはＲＮ Ａ上に直接作用させるか、または伝令ＲＮＡ上、遺伝子写し上に作用させてブロ ッキングすることが可能で、この際雑種形成または雑種形成に統（伝令または物 標として選択したウィルスＲＮ　Ａの橋掛けや変更・修飾や分割によって結果的 には全ての翻訳をブロッキングできる。

このブロッキングは本発明の一般式（Ｉ）にて表わされる一つの製品、またはＬ が酸素原子、ＲとＲｏがそれぞれが水素原子、Ｂが天然核酸塩基を示す場合の一 般式（１）の一つの製品であってその配列がＲＮＡもしくはＤＮＡ特に伝令ＲＮ Ａの未錯化領域のそれに相補的であるような製品を使用して実施ができる。雑種 形成または引き続くその伝令もしくはウィルスＲＮＡの橋掛け、修飾、分割によ りＲＮＡの合成もしくは対応する蛋白の合成もしくはウィルスまたは寄生虫機能 の表現が阻止されるこのＲＮＡまたは蛋白がこのウィルス、／ククテリヤ、寄生 虫にとり必要不可欠なものであれば、本発明の一般式（Ｉ）にて表される製品、 またはＬが酸素原子、ＲとＲｏがそれぞれが水素原子、Ｂが天然核酸塩基を示す 場合の一般式（Ｉ）の製品は抗ウィルス活性、抗バクテリヤ活性または抗寄生虫 活性を有する医薬品を構成するはずである。

このＲＮＡもしくは蛋白が生物にとり不可欠でなければ後者の効果を選択的に抑 制することが可能であり、この場合、本発明の一般式（Ｉ）にて表わされる製品 、またはＬが酸素原子、ＲとＲ”がそれぞれが水素原子、Ｂが天然核酸塩基を示 す場合の一般式ＣＩ）の製品は、問題の遺伝子もしくはその伝令ＲＮＡがセルの 形質転換に含まれる蛋白に対して暗号付けする場合には、抗しψよう白が抗性物 質、抗ウィルス剤もしくは駆虫薬の不活性化に責任がある場合には抗性物質、抗 ウィルス剤もしくは駆虫薬に抵抗する特性を制御しうる医薬品を構成することに なる。

本発明の一般式（Ｉ）にて表わされる製品、またはＬが酸素原子、ＲとＲｏがそ れぞれが水素原子、Ｂが天然核酸塩基を示す場合の一般式（Ｉ）の製品の作用に より、物標とするセルにとって必須の細胞機能に対して特異的な細胞前効果をも たらすことも可能である。

本発明の一般式（Ｉ）にて表される製品、または１が酸素原子、ＲとＲｏがそれ ぞれが水素原子、Ｂが天然核酸塩基を示す場合の一般式（Ｉ）の製品はまた、Ｒ ＮＡまたは蛋白に対する遺伝子暗号付けを調節するために遺伝子上に作用させる ことによりＲＮＡもしくは蛋白の合成を増加させる用途にも使用できる。

相補的単一ストランド核酸配列または二重らせんに強力に結合する性質を育し、 次いで所望の際には核酸鎖を所望の位置で橋掛け、修飾、分割を誘発する性質を 有する本発明の製品は、シーケンス−特異性（ｓｌｃ）薬剤として使用でき、特 に人工ヌクレアーゼとして使用でき、分子生物学または遺伝子工学における試薬 としての使用が可能である。またこれらは配列特異性ヌクレアーゼが存在しない 核酸断片、特にＲＮＡ断片を得るのに使用できる。　（以下余白） 本発明の他の特性および有利性は次に記載の実施例から明らかになるはずである 。

実施例■は第１および２図で説明した。αおよびβアノマーに対する酵素Ｓｉヌ クレアーゼおよびホスホジェステラーゼそれぞれの抵抗性を記載した。

実施例１：改良ホスホトリエステル溶液法によるα−Ｃｄ　（ＣＡＴＧＣＧ）） およびβ−［（ＣＧＣＡＴＧ））の合成（下記図式Ｉおよび■参照）アノマー立 体配置を有するヌクレオチド単位だけからなる２種の非天然のヘキサデオキシリ ボヌクレオチドのａ−（ｄ　（ＣＡＴＧＣＧ））と（Ｘ−（ｄ　（ＣＧＣＡＴＧ ））が、改良ホスホトリエステル溶液法によって得られた。出発物質は、４−デ オキシリボヌクレオシドの３３〜ｄであつた（下記図式Ｉ参照）。α−デオキシ ヌクレオシド３息と３ｂ　（ピリミジン）は、自己アノマー化反応とこれに続く ヒドロキシル基の選択的保護反応とによって製造され、一方２つのデオキシヌク レオチド３ｃと３ｄ　（プリン）は、トランスグリオキシレージジン反応で製造 された。グアニンのα−ヌクレオシド誘導体の場合は、この塩基を保護する追加 の基が、オリゴヌクレオチド形成中の副反応を避けるために、ＯＢ位置に導入さ れた。この基はＮ、Ｎ−ジフェニルカルバモイル基でありだ。

Ｎ４−ベンゾイル３’、５’−ジー０−アセチル−２′デオキシシチジンをシュ ガードナーとして選択して、７０℃のアセトニトリル中で、ルイス酸すなわちト リメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートの存在下でＮ−保護アデニンお よびＮ−保護グアニンと反応させた。シュガードナーをＮＧベンゾイルアデニン と反応させた後、αアノマーＩＣは、主要ヌクレオシド産物であったにもかかわ らず、対応するβアノマーとは分離されなかった。

したがつて、このアノマー混合物を、アンモニアのメタノール溶液で処理し、ダ ウエックス１カラムのクロマトグラフィで精製して、α−２′デオキシアデノシ ン（２ｃ）を２７％収率で得た。次いでこのα−２′−デオキシアデノシン誘導 体（２Ｃ）を変換して、そのＮ６−ベンゾイル化誘導体（３ｃ）を７０％の収率 で得た。

同じしかたで、Ｎ２−アセチルグアニンを用いて、トランスグリオキシレージジ ン反応を試みた。しかし、得られたＮ２−アセチルグアニンのヌクレオシド誘導 体の収率は非常に低かりた。おそらくこの理由は、これらの誘導体の有機溶媒に 対する溶解度が低いからであろう。

化合物Ｎ２−バルミトイルグアニンは一層親油性であるが、これをトランスグリ オキシレージジン反応に用いた所、１ｄが好収率で得られた。

７０℃で５０分間の反応後、反応混合物の薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）分析 によって、Ｎ７異性体が主生成物として生成したことが分かった。加熱を続けて ６時間の加熱後に、Ｎ７：Ａ性体のＮ９ｒｃ性体への上相な変換が観察された。

シリカゲルカラムのクロマトグラフィに付した後、分別結晶化して、所望のα− デオキシグアノシン誘導体１ｄを収率２６．６％で単離した。

グアニン残基のエノール化可能なラクタム基が、グアニンフラグメントの副反応 の結果、ホスホトリエステル法によるオリゴデオキシヌクレオチド合成反応を妨 害し、そのため、グアニンを含む連鎖の延長反応の収率が低下するに至る。それ 故にグアニンのラクタム基を保護する必要がある。０６−位の保護基としてＮ、 Ｎ−ジフェニルカルバモイル基を選択した。この基は、出発物質の誘導体１ｄに １段階で容易に導入することができ、かっホスホトリエステルの合成の最後に、 脱保護段階を追加することなしに除去できる。

ジフェニルカル１＜モイルクロリドとジイソプロピルエチルアミンと生成物１ｄ とをピリジンで中で反応させ、ついで水酸化ナトリウム水溶液を添加し、生成物 をシリカゲルカラムのクロマトグラフィで精製して、結晶化合物の形態のＮ２− バルミトイル−０６−シフエニルカルバモイルーａ・２゛−デオキシグアノシン （３ｄ）を収率７７％で得た。

生成物３ｃと３ｄは、塩基だＩｆが保護されているが、その対応する十分に保護 されたα−ヌクレオチド４ｃと４ｄ　（下記図式■参照）へ変換するには、４． ４゛−ジメトキシトリチルクロリド（１，５モル当ｆｆ１）による５゛−ヒドロ キシ基のトリチル化反応と、トリエチルアンモニウム（２−クロロ−４−トリチ ル−フェニル）（２−シアノエチル）ホスフェート（１，１モル当量）、メシチ レンスルホニルクロリド（２，２モル当量）および１−メチイルイミダゾールに よる３′−ヒドロキシル基のホスホリル化反応とからなる２段階のプロトコール が必要であった。後者の段階によって２−クロロ−４−トリチルフェニル基を、 ホスフェート保護基として導入することができる。この基は親油性なので、ホス ホトリエステル溶液法によるオリゴヌクレオチドの合成中の十分に保護された中 間体の精製を容易にしかつ収率を高めるため選ばれた。シリカゲルカラムのクロ マトグラフィによりＢＨして、２つのα−ヌクレオチド誘導体４ｃと４ｄを、そ れぞれ９２％と５３％の収率で、ジアステレオ異性体の混合物の形態で単離した 。この２つの目的物質の大量体は、その塩基配列中に、３−′末端グアニンをも っているので、それを合成するための３′−末端単位は、３′−ｏ−ベンゾイル −α−デオキシグアノシン誘導体５ｄである。３ｄの選択的ジメトキシトリチル 化反応、次いでベンゾイル化反応と脱トリチル化反応によって、全収率８１％で ５’　−ＯＨ誘導体５ｄを得た。

十分に保護されたα−オリゴデオキシヌクレオチドであるａ−（ｄ　（ＣＡＴＧ ＣＧ））とａ−Ｃｄ　（ＣＧＣＡＴＧ））の合成は、特に３つの主要段階からな る合成サイクルを繰返すことによって達成される。（ａ）段階は、十分に保護さ れた中間体のオリゴヌクレオチドまたはヌクレオチドを、２％濃度のベンゼンス ルホン酸含有の塩化メチレンとメタノールとの７：３混合物で、０℃にて１５〜 ４０分間処理することによる５゛−ヒドロキシル基の脱保護反応である。（ｂ） 段階は、ｌＯ％濃度のＬｅｒＬ−ブチルアミン含有の無水ピリジンで１５〜２５ 分間処理して十分に保護されたオリゴヌクレオチドまたはヌクレオチドからシア ノエチル基を除去することによる３′−ホスホトリエステルの脱保護反応である 。（ｅ）段階は、カップリング剤、すなわち１−（２−メシチレンスルホニル） −３−二トロー１．２．４−トリアゾールの存在下での（ａ）段階と（ｂ）段階 の生成物（１０〜１５％モル過剰）の縮合反応であり、次いで生成物はシリカゲ ルカラムのクロマトグラフィによって精製される。カップリング反応の条件と結 果に、下記第■表に集約した。

十分に保護されたａ−オリゴヌクレオチドの延長反応の過程では、天然のβ−オ リゴヌクレオチドと比較して、何ら顕著な差異（反応時間、副生物の生成など） は検出されなかった。

換言すれば、ホスホトリエステル法によって、顕著なアノマー効果は何ら認めら れなかった。

保護されたα−大量体の完全な脱保護反応は次のようにして行った。ＩＭのＮ７ ．　Ｎ１．　Ｎ３．　Ｎ３−テトラメチル−グアニジウム２・ピリジン力ルポキ サルドキシメート含有のジオキサン／水（７：１、Ｖ／Ｖ）化合物を用いて、十 分に保護された六量体を、７０℃で２４時間処理し、次いで濃アンモニア溶液で 処理した。この処理によって、ジフェニルカルバモイル基と２−クロロ−４−ト リチルフェニル基ならびにベンゾイル基とバルミトイル基が同時に除去された。

得られた５゛−ジメトキシトリチルオリゴヌクレオチドを次に、酢酸で、１５分 間室温で処理した。次にイオン交換カラムのクロマトグラフィで精製した。２つ の脱保護されたα−オリゴヌクレオチドのａ　−〔ｄ　（ＣＡＴＧＣＧ））とＱ −Ｃｄ　（ＣＧＣＡＴＧ））とをそれぞれ、５９％と５２％の収率で得た。

このように、ホスホトリエステル溶液法を利用して、４つの通常の塩基を有する α−オリゴヌクレオチドの合成に成功することができた。

下記図式Ｉは、塩基が保護された（Ｔを除く）４つのａ−２′−デオキシヌクレ オチドの合成法を示す。

反応条件は、　（ａ）〜（ｈ）の段階について下記のとおりであった。

保護されたα−ヌクレオシドの合成：反応条件：（ａ）トリメチルシリルトリフ ルオロメタンスルホネー）、Ｎ、Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド／ アセトニトリル； ナトリウム水溶液／水／テトラヒドロフラン／メタノール； （Ｃ）トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネー）、Ｎ、Ｏ−ビス（トリ メチルシリル）アセトアミド、Ｎ６−ベンゾイルアデニン／アセトニトリル：（ ｄ）　アンモニアメタノール溶液： （ｅ）トリメチルシリルクロリド／ピリジン、ベンゾイルクロリド、濃アンモニ ア溶液； （ｆ）トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネー）、Ｎ、Ｏ−ビス（トリ メチルシリル）アセトアミド、Ｎ２−バルミトイルグアニン／アセトニトリル： （ｇ）　ジフェニルカルバモイルクロリド／ピリジン；（ｈ）　水酸化ナトリウ ム水溶液／エタノール。

下記図式■は、環基が保護された４つのα−２’−、ｆオキシヌクレオシド（Ｔ を除く）の合成法を示す。

反応条件は、（ａ）〜（ｄ）段階について下記のとおりで（ｂ）トリエチルアン モニウム（４−トリチル−２クロロフエニル）（２−シアノエチル）ホスフェー ト／２−メシチレンスルホニルクロリド： （Ｃ）　ベンゾイルクロリド／ピリジン；（ｄ）２％濃度のベンゼンスルホン酸 ／塩化メチレン／メタノール（７：３、ｖ／ｖ）。

ｌ）２′　−α−デオキシアデノシン（２Ｃ）の作製（反応式ｌ） この化合物を、Ｔ、山口等がＣｈｅｗ、　Ｐｈａｒｌｌ、　Ｂｕｌｌ、　３２゜ １４４１　（１９ｇ４）中に述べる方法に従い、作製した。この化合物の収率は ２７．３％であり、融点は２１２．５〜２１３℃であった。

２）Ｈ６−ベンゾイル−ｄ−２′　−デオキシアデノシン（３Ｃ）の作製（反応 式■） 例えばＪｏｕｒｎａｌ　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、、　１０４．１３１ ８　（１９８２）中で相当するβアノマーに関して述べられているものと類似の 三段階法を用いて、（２ｃ）（２，０１ｇ、　８ミリモル）からこの生成物を作 製した。第三段階の終りに、すなわち、アンモニア水で３０分間処理しついで蒸 発を行なった後に、残渣を水（２００ｍｌ）に溶解した。得られた溶液をジエチ ルエーテル（２ｘ７０ｍｌ）で洗浄し、次に蒸発乾固した。残渣をメタノール（ ５０ｍｌ）とまぜ、濾過に付した。

濾液を蒸発乾固した。残渣を、クロマトグラフ法によりシリカゲル（ｌｏｎｇ） カラムを使い精製した。適当な画分を合体し、蒸発に付した。残渣をエタノール ／アセトンから再結晶した。濾過により２を１．９９　ｇ　（７０％）得た。

融点は１８３〜１８４℃であった。

分析結果は以下の通りであった。

Ｃ１７Ｈ１７０４Ｎ５に対する計算値：Ｃ５７，４８、Ｈ４，８２、Ｎ１９．７ １実測値−Ｃ５７，３０、Ｈ４，８Ｂ　、　Ｎ１９．７５ｐ）１２．１ λ　（ｎｍ　（ε）　）　：　２５３（１０，９００）　、２８４（２４，００ ０）ａＸ 〔α〕２０：＋５９°　（ｃ−１，ＤＭＦ）’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ　Ｏ−ｄＢ’ ）δ：２．４４　（ｍ、Ｉ　Ｈ，Ｈ２−）　。

２．８（ｍ、　Ｉ　Ｈ，Ｈ２，）　。

３．４９　（ｍ、　２Ｈ，Ｈ５，、Ｈ，）　。

４．２１　（ｍ、Ｉ　Ｈ９Ｈ＋Ｊ　。

４−３７　（ｍ、Ｉ　ＨｌＨａ、）　。

４．８８（ｔ、　ＩＨ，ＯＨ５゜）。

５．５４　（ｄ、ＩＨ，ＯＨ３’）。

８．５０　（ｄ　ｄ、Ｉ　ＨｌＨｌ、、Ｊ−２，５８，７，５７Ｈｚ）。

７．５２−８．２６（ｍ、５Ｈ，Ａｒ−Ｈ）　。

８．６９及び８．７４　（２ｓ　、２Ｈ，Ｈ２，Ｈ８）。

１１．１４（ｂｒ　ｓ、Ｉ　Ｈ，ＮＨ）　。

プロトンＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ　ＷＢＵＭ　３８０装置を用いてめ た。

３）３°、５°−ジー０−アセチル−Ｎ２−バルミトイル−α−２′　−デオキ シグアノシン（１ｄ）の作製（反応式り ビス（トリメチルシリル）アセタミド（７，４ｍｌ、３００ミリモル）を、３° 、５°−ジー０−アセチル−Ｎ４−ベンゾイル−２−デオキシシチジン（１５ｇ 、　３６ミリモル）及びＮ２−バルミトイルグアニン（３７，４ｇ、９６ミリモ ル）を無水アセトニトリル（２２０ｍｌ）に溶かした溶液に加えた。

この混合物を７０”Ｃに１時間加熱し、ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉ　Ｉｙｌｔｒｉ ｆ’１ａｔｅ　（８ｍｌ、４７ミリモル）を加えた。混合物を７０”Ｃで６時間 攪拌した。減圧下に溶剤を除き、残渣を塩化メチレン（７５０ｍｌ）に溶解した 。重曹の冷水溶液（７０ｍｌ）を加え、激しく攪拌の後、混合物を吸引濾過した 。有機層を分取し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶剤を減圧下に除去した、残 渣（Ｒｆ　Ｏ，４４，０，５７；シリカゲルＴＬＣ；ＣＢ２６ｇ２／ＣＢ３ｏＨ ９：１（容量比）〕を、シリカゲル（２５０ｇ）カラムを用い、溶離剤として、 メタノールを各種割合（０〜５％）含むクロロホルム溶液を用いて、クロマトグ ラフ法に付した。Ｒｆｏ、４４の物質ＣＮ　９α及びβ異性体）を含む両分を合 体し、蒸発乾固した。

残渣を加熱エタノールに溶かし、冷却した。それによりαアノマー１ｄを結晶さ せ、融点１２９〜１３０℃の無色結晶５．６５５ｇ　（２６，６％）を得た。

Ｃ３ｏＨ４□Ｎ５０□に対する計算値−ＣＢ１．１０　、Ｈ８，０３、Ｎ１１． ８８実測値−Ｃ６０，９５、Ｈ８，１９、Ｎ１２．０Ｂ０．８８　（ｔ、３Ｈ， （ＣＨ２）　、４−９旦、〕。

１．２０−１．４０　〔ｍ、　２４Ｈ，−（ＣＨ２）　１２−　ＣＨ３）　。

２．０３，２．１　（２ｓ　、６　Ｈ，２ＣＨａ　−Ｃ（−０）−３。

２．４８　（ｔ、　２Ｈ，−Ｃ（−０）−９旦２−（ＣＨ２）　１３−）　。

２．５８　（ｍ、　Ｉ　Ｈ，Ｂ２−）　。

２．１１１４　（ｍ、Ｉ　Ｈ１Ｈ２，）　。

４．１８−４．２８　（ｍ、　２Ｈ，Ｂ５．、　Ｈ，）　。

４．５２（ｍ、ＩＨ１Ｈ４，）。

５．２８　（ｍ、　ＩＨ，Ｂ３．）　。

６．２３　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｈｌ、、　Ｊ−１，８９，７，４７Ｈｚ）。

７．９２　（ｓ　、Ｉ　ＨｌＨａ　）　。

８．７７及び１２　（２ｂｒ、ｓ、２Ｈ，２ＮＨ）。

４）Ｎ２−バルミトイル−０６−シフエニルカルバモイルーｄ−２′　−デオキ シグアノシン（３ｄ）の作製（反応式Ｉ） ｌｄ　（２，５３８ｇ、４．３ミリモル）を無水ピリジン（１１ｍｌ）に溶かし た溶液に、ジフェニルカルバモイルクロライド（２，１９２ｇ、　９．４６ミリ モル）及びジイソプロピルエチルアミン（１゜２３ｍ１．　７．１ミリモル）を 加えた。混合物を室温で２．７５時間攪拌し、ピリジン（４１ｍｌ）及びエタノ ール（２１，５ｍ１）を加えた。反応混合物を０℃で１０分間攪拌した。２Ｎ苛 性ソーダ水溶液（２１，５ｍ１）を加え、Ｏ”ＣテｌＯ分間攪拌した後、反応混 合物を酢酸（２，８５ｍ１）で中和した。反応混合物を水（１５０ｍｌ）中に注 ぎ、混合物を塩化メチレン（４Ｘ５０ｍｌ）で抽出した。有機層を合体し、減圧 下に蒸発乾固し、残渣をクロマトグラフ法によりシリカゲル（５０ｇ）カラムを 用いて分画した。純粋な３ｄを含む両分を合体し、蒸発乾固した。残渣を酢酸エ チル（２，３２３ｇ、　７７％）より再結晶し、融点１３４〜１３５℃の化合物 を得た。

Ｃ３９Ｈ５５Ｎ６０Ｂに対する計算値：ＣＢＢ、８３　、Ｈ７，４Ｂ　、Ｎ１１ ．９９実測値：　Ｃ６Ｂ、５３　、　Ｈ７，６Ｂ　、　Ｎ１１．７０〔α）　： ＋３３’　（ｃ−１，ＤＭＦ）２５７（ｓｈｏｕｌｄｅｒ） ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： ０．８５　（ｔ、　３Ｈ，（ＣＨ２）　１４−９旦、〕。

１．１８−１．３５　（ｍ、　２４Ｈ，（９旦２）　１２−ＣＢ５）。

１．５８　（ｍ、２　Ｈ，Ｃ（−０）　−ＣＢ２−　Ｃ旦２．〕。

〕２−４１−２．４８　［ｍ、３Ｈ１Ｈ２−９Ｃ（−〇）　−９旦２−　（ＣＨ ２）、３）。

２．７６　（ｍ、Ｉ　Ｈ，Ｂ２．）　。

Ｃ４Ｂ　（ｍ、　２Ｈ，Ｂ５．、　Ｂ５−）　。

４．２１　（ｍ、ＩＨ，Ｈ４，）　。

４．３５　（ｍ、Ｉ　Ｈ，Ｂ３．）　。

４．８６　（ｔ、ＩＨ，ＯＨ５，）　。

６．３８　（ｄ　ｄ、Ｉ　ＨｌＨｘ、、Ｊ−２−８６，７，６７Ｈｚ）。

７．３０−７．５１（ｍ、ＩＯＨ，Ａ　ｒ　Ｈ）　。

８．８８　（ｓ　、Ｉ　Ｈ，Ｈａ　）　。

１０．８５　（ｓ、ＩＨ，Ｃ（＝Ｏ）　−ＮＨ−：ｌ　。

５）Ｎ２−バルミトイル−０６−シフエニルカルバモイルー３′　−０−ベンゾ イル−α−２′　−デオキシグアノシン（５ｄ）の作製（反応式■） ３ｄ　（０，７ｓｒ、　１ミリモル）を乾燥ピリジン（３，５ｍ１）に溶かした 溶液に、４．４’−ジメトキシトリチルクロライド（０，：４９ｇ、　１．１５ ミリモル）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、塩化ベンゾイル（０，１５ ２ｍ１％　１．Ｓミリモル）を加えた。混合物を４．４時間攪拌し、水（１ｍｌ ）を加えた。５分間攪拌した後、反応混合物を飽和重曹水溶液（４０ｍｌ）中に 注ぎ、混合物を塩化メチレン（４Ｘ８０ｍｌ）で抽出した。有機層を合体し、減 圧下に蒸発乾固した。

残渣を塩化メチレン／メタノール（７：３（容量比）、２０ｍ１〕に溶かした。

そのものを０℃に冷却し、上記混合溶剤（５ｍｌ　）にベンゼンスルホン酸を１ ０％（重ｉｔ／容量）溶かした冷却溶液を加えた。０℃で１４分間攪拌した後、 反応混合物を重曹水溶液（２０ｍｌ）で中和し、飽和重曹水溶液（４０ｍｌ）と 塩化メチレン（４Ｘ３Ｇｍｌ）との間で分別した。有機層を合体し、蒸発乾固さ せ、残渣をクロマトグラフ法によりシリカゲル（３０ｇ）カラムを用いて分画し た。純粋は５ｄを含む画分を合体し、蒸発させた。残渣をメタノールにより結晶 化させ、融点１４４〜１４６℃の無色結晶（０，Ｂ５　ｔｒ、　８１％）を得た 。

Ｃ４ｆｉＨ５６Ｎ８０７に対する計算値：ＣＢ８．６４　、Ｈ７，０１、Ｎ１０ ．４４実測値：　Ｃ６８Ｊ７　、　Ｈ７，０４、Ｎ１０．３５’Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ ＤＣ＃　８　）δ： ０．８７［ｔ、３Ｈ，（ＣＨ２）　１．−ＣＨ５）。

１．１８−１．３５　（ｍ、　２４Ｈ，（Ｃ）Ｉ２）１２−　ＣＨ３）　。

１−６Ｆ１．７４　（ｍ、２Ｈ９Ｃ（−〇）　ＣＨ２−ＣＨ２−）。

２．６７　［ｐｓｅｕｄｏ　ｔ、　２Ｈ，Ｃ（−０）　−ＣＨ２−（ＣＨ２）１ ３〕。

２．９６−３．０３（ｍ、　３Ｈ，Ｈ２，、Ｈ，、−、ＯＨ５，）　。

３Ｊ７−３．９０（ｍ、　２Ｈ，Ｈ５，、Ｈ，）　。

４−５６　（ｍ、Ｉ　Ｈ，Ｈ４，）　。

５Ｊ１　（ｍ、Ｉ　Ｈ，Ｈａ、）　１ ６−５３　（ｐｓｅｕｄｏ　ｔ　、Ｉ　Ｈ、Ｈ１，、Ｊ　ａｐｐ　−’　、３Ｈ ２）。

７．２１−７．Ｈ（ｍ、１５Ｈ，Ａ　ｒ　Ｈ）　。

８．２２　（ｓ、ＩＨ，ＮＨ）。

８．２７　（ｓ　、　Ｉ　Ｈ，Ｈｇ　）　−６）５’−０−ジメトキシトリチル −α−デオキシリボヌクレオシド３’　−０−（（２−クロロ−４−トリチルフ ェニル）（２−シアノエチル）ホスフェート〕の一般的作製法 塩基が保護されたα−デオキシリボヌクレオシド（２，８ミリモル）を乾燥ピリ ジン（７ｍｌ）に溶かした溶液に、４．４１　−ジメトキシトリチルクロライド （１０９１ｇ、３．２２ミリモル）を加え、該ヌクレオシドが完全に消失する迄 （２〜２．５時間）混合物を室温で攪拌した。ついで、トリエチルアンモニウム （２−クロロ−４−トリチルフェニル）（２−シアノエチル）ホスフェ−）　（ ２，０Ｈｇ、特表平１−５０２１８７（１６） （１，５３１ｇ、　７ミリモル）及びＮ−メチルイミダゾール（０，５６ｍｌ、 ７ミリモル）を順次加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌し、水（２ｍｌ）と ピリジン（５ｍｌ）との混合物を加えた。更に１５分間攪拌した後、反応混合物 を０．２Ｍリン酸二水素ナトリウム水溶液＜１５０ｍ１）中に注ぎ、塩化メチレ ン（３Ｘ８０ｍｌ）で抽出した。有機層を合体し、０．２Ｍリン酸二水素ナトリ ウム水溶液（７５ｍｌ）及び０．６Ｍ炭酸水素アンモニウム水溶液を用いて順次 洗浄した（塩化ナトリウムに対し１％、７５ｍ１）。有機層を減圧下に蒸発乾固 し、残渣をクロマトグラフ法によりシリカゲル（ＥｉＯｒ）カラムを用いて分画 した。適当な両分を合体し、蒸発乾固し、ベンゼン溶液から凍結乾燥した。

５′　−〇−ジメトキシトリチルーＮ６−ペンゾイルーα−２′　−デオキシア デノシン ３′　・　〔（２−クロロ−４−トリチルフェニル）（２−シアノエチル）ホス フェート）　（４ｃ）に対し。

ジアステレオマー混合物の収率は９２％であった。

Ｃ６６Ｈ５６ＣＩＮ６０９Ｐ・　０．５）！２０に対する計算値：Ｃ６８，７７ 、Ｈ４，９ｇ　、　Ｎ　７．３５実測値：　Ｃ６８Ｊ５　、　Ｈ４，９９、Ｎ　 ７．９８１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１ｌ　３）δ： ２．５８−２．６５（ｍ、　２　ＨｌＣＨ２−ＣＮ）　。

２．９５　（ｍ、Ｌ　Ｈ，Ｈ２−）　。

３．０１１　（ｍ、Ｉ　Ｈ，Ｈ２，）　。

３．２２−３．４７（ｍ、２　Ｈ，Ｈ５°、Ｈ５−）。

３．７６及び３．７７　（２ｓ、６Ｈ，２０−ＣＨ３）　。

４．０５−４．１６（ｍ、　２　ＨｌＰ　−０−ＣＨ２−）　。

４．７１及び４．８３　（２ｐｓｅｕｄｏ　ｔ、Ｉ　Ｈ，Ｈ４，）　。

５−３９　（ｍ、Ｉ　Ｈ−Ｈｓ、）　−６，７１（ｐｓｅｕｄｏ　ｔ、ＩＨ，Ｈ １’、Ｊａｐｐ　−４，９Ｈｚ）。

８．８８−８（、！３Ｂ１１１．　Ａ　ｒ　Ｈ）　。

８．２８及び８．８０　（２ｓ　、Ｉ　Ｈ，Ｈ２又はＨ８）。

８．７４及び８．７９（２ｓ、ＩＨ，Ｈ又はＨ２）。

８．９７及び９（２ｓ、ＩＨ，ＮＨ）。

５′　−〇−ジメトキシトリチルーＮ２−バルミトイル−０８−ジフェニルカル バモイル−α−２′　−デオキシグアノシン−３’　−（（２−クロロ−４−ト リチルフェニル）（２−シアノエチル）ホスフェ−））　（４ｄ）に対して。

ジアステレオマー混合物の収率は５３％であった。

Ｃ８８Ｈ９□Ｃ＃　Ｎ、０１、Ｐｌ、：対する計算値：Ｃ７０，９１１、Ｈ６， １６、Ｎ　６．５８実測値：　Ｃ７１，２６、ＢＳｌ、１８　、　Ｎ　８．４７ ’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＩＩ　３）δ： ０．８７　（ｔ、　３Ｈ，（ＣＨ２）　１４−　ＣＨ８）　。

１．１５−１．３３　（ｍ、　２４Ｈ，（ＣＨ２）　１２−　ＣＨ３）　。

１．６８（，７３［ｍ、２Ｈ１Ｃ（−０）　−ＣＨ２−２−６Ｆ２．７４　（ｍ 、２Ｈ，Ｃ（−〇）　−ＣＨ２−ＣＨ２−）。

３．０３　（ｍ、　２Ｈ，Ｈ２，、Ｈ２−）　。

３．１９−３．４８（ｍ、　：２］Ｈ，Ｈｓｌ、Ｈ５−）。

３．７５及びｓ、７ｅ　（２ｓ、６Ｈ，２０−ＣＨｓ　）　。

３．８３−３．９５（ｍ、　２　Ｈ，Ｐ　−０−ＣＨ２−）　。

４．６５及び４．８２　（２ｐｓｅｕｄｏ　ｔ、Ｉ　Ｈ，Ｈ４−）　。

５．３１　（ｍ、　Ｉ　Ｈ，Ｈｓ、）　。

６．５６（ｐｓｅｕｄｏ　ｔｔ　ＩＨ，Ｈ１’、Ｊ　−３，３Ｈｚ）。

ａｐｐ ６．１！０−７．４３（ｍ、４１Ｈ，Ａ　ｒ　Ｈ）　。

７．９１及び７．９７　（２ｓ、ＩＨ，ＮＨ）。

８．１７及び８．２３　（２ｓ　、Ｉ　Ｈ，Ｈ９）　。

７）α−オリゴデオキシリボヌクレオチドの一般的作製法 脱トリチル、脱シアノエチル及び縮合を含む選択的諸反応サイクルをくり返して 、完全に保護されたａ−オリゴヌクレオチドを作製した。これらの諸段階は従来 法である。

８）保護されたＧ残基を含むα−オリゴデオキシリボヌクレオチドから保護基を 脱離する一般法完全に保護されたα−オリゴヌクレオチド（０，０５８ミリモル ）、２−ピリジンアルドキシム（１，１１７ｇ、　９．１５ミリモル）、Ｎ’、 Ｎ１．Ｎ３．Ｎ３−テトラメチルグアニジン（１，Ｊ５ｍｌ、９．１５ミリモル ）をジオキサン／水混合物（７：１（容量比）、最終容量が９．１５ｍ１）に溶 がした溶液を７０℃に２４時間加熱した。次にこの溶液を蒸発させ、残渣を５０ ℃で５時間かけアンモニア水に溶かした。この溶液を蒸発させ、残渣を８０％酢 酸（１６ｍｌ）に溶解した。

１５分間の酸処理の後、溶液を塩化メチレン（５Ｘ２０ｍｌ）で洗浄した。得ら れた水溶液を蒸発乾固し、残渣をクロマトグラフ法に付した。その場合、カラム （２，２５（至））は、ＤＥＡＥ　−３ｅｐｈａｄｅｘ　Ａ２５　（ＨＣＯ３− ）であり、溶離剤は、炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（ｐＨ７，５，０ ，００１Ｍ〜ＩＭの直線勾配、１００１００Ｏであった。９ｍ１画分のそれぞれ を集め、適当な画分を合体し、蒸発させた。

残渣をＤｏｖｅｘ　５０Ｗ　（Ｎ　ａ　）　テ処理した所、所望ノα−オリゴヌ クレオチドをナトリウム塩の形で得た。２種のα−オリゴヌクレオチド、すなわ ち、α−（ｄ　（ＣＡＴＧＣＧ））及びα−Ｃｄ　（ＣＧＣＡＴＧ））をそれぞ れ５９〜５２％の収率で得た。Ｃ１Ｂカラムを用いて高速液体クロマトグラフ法 に付した所、９８％より高い純度を示した。

実施例　■ ホスホトリエステル法によるヘキサリボヌクレオチドα−ＣｐＵｐＣｐＣｐＣｐ Ｕの合成（以下の反応式■及び■を参照） 参考文献 １、　Ｓ、Ｓ、　Ｊｏｎｅｓ、　Ｂ、　Ｒａｙｎｅｒ、　Ｃ，Ｂ、　Ｒｅｅｓｅ 、　Ａ、　Ｕｂａｓａｖａ。

３、ν、　Ｔ、　Ｍａｒｋｉｅｖｉｃｚ、　Ｊ、　Ｃｈｅｗ、　Ｒｅｓ、、　５ ｙｎｏｐ、　２４（１９７９）　ａｎｄ　Ｊ、　Ｃｈｅｗ、　Ｒｅｓ、　Ｍ＋ｎ ｊｐｒｌｎＬ、　１８１　（１９７９）−特表平１−５０２１８７　（１７） ４、Ｊ、Ｂ、Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ　ａｎｄ　Ｃ，Ｂ、Ｒｅｅｓｅ、Ｔ ｅｔ。

Ｌｅｔｔｅｒｓ、５０５９　（１９７９）。

以下に述べるヘキサリボヌクレオチドα−ＣｐＵｐＣｐＣｐＣｐＵの合成を、ホ スホトリエステル法に従い溶液中で行なった。これは、Ｃ，Ｂ、　Ｒｅｅｓｅ等 が（１）が天然のβシリーズに対し述べる方法に類似している。

オリゴヌクレオチドの３′末端を構成するヌクレオを作製し、それらを組み合せ て、完全に保護されたヘキサリボヌクレオチド１７を製造した。保護基を脱離の 後、ヘキサリボヌクレオチドα−ＣｐＵｐＣｐＣｐＣｐＵを精製し、確認した。

酌　凸−−〇。

← 国 八 ＩＪ　？７Ｖ４７ｒＳｙｎＬｎＯｎＳ）ａｌ　”）ＤＩ　ｅ＞ａｌ　／ｌｌの得 た。すなわち、（ａ）　５’　−ヒドロキシルを４．４′　−ジメトキシトリチ ルクロライドで選択的にトリチル化し、次いで、（ｂ）２’　−及び３′　−位 置を塩化ベンゾイルでベンゾイル化し、最後に、（Ｃ）ジクロロメタン／メタノ ール（７：３（容量比）〕混合物中で２％ベンゼンスルホン酸で処理して５′　 −ヒドロキシルの保護基を選択的に脱離した。これら三段階の綜合収率は６７％ である。

２）完全に保護されたヘキサリボヌクレオチドα−ＣｐＵｐＣｐＣｐＣｐＵの作 製 反応式ｍに従い、トリリボヌクレオシドジホスフェート耗及びトリリボヌクレオ シドトリホスフェート■を作製した。何れの作製サイクルも、一部保護されたヌ クレオシド又はヌクレオチド誘導体の３′　−位置にホスホジエステル基を導入 するホスホリル化階段と、前段階で得た、３′　−ホスホジエステル化合物と５ ’　−ＯＨ基が遊離状態にあるヌクレオシド又はヌクレオチド誘導体とをカップ リングさせる段階とを含む。場合により（反応式■参照）、５’−ＯＨ基の保護 基を脱離させるために、脱トリチル段階が更に必要である。

３′　−ホスホリル化段階を行なうために、アセトニトリル／無水ピリジン混合 物溶液中で３’　−ＯＨ誘導体を０−クロロフェニルホスホロビス（１，２，４ −）リアゾリド）（４）の溶液で処理し、ついで、トリエチルアミンの存在下に 加水分解を行なった。その結果、３′　−ｏ−アリールホスフェート誘導体８ａ 、１０及び１２をそれぞれ９０％より高い収率で得た。

３’−０（アリールホスフェート）誘導体と５′　−〇Ｈヌクレオシド又はヌク レオチド誘導体とをカップリングさせる段階を、カップリング剤すなわち１−メ シチレン−スルホニル−３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール（Ｍ　Ｓ　Ｎ　 Ｔ）（１）の存在下に無水ピリジン溶液中で行なった。

例として、トリリボヌクレオシドトリホスフェートＨ（ＯＪ３４ミリモル）及び トリリボヌクレオシドジホスフェー）　１Ｂ（８，２７１ｉミリモル）を無水ピ リジン（２ｍｌ）に溶かした溶液に、ＭＳＮＴ　（１，ロアミリモル）を加える 。混合物を室温で５５分間攪拌し、ついで、電蓄溶液（５０ｍｌ）中に注ぐ。得 られた混合物をジクロロメタン（３Ｘ３０ｍｌ）で抽出する。有機相を合体し、 減圧下に蒸発させる。残渣をクロマトグラフ法によりシリカゲルカラム（溶離剤 ニジクロロメタン／メタノール）を用いて精製する。所望生成物１７を含む両分 を合体し、減圧下に蒸発させ、残渣を石油エーテルを用いて析出させる（収率： ５８％）。

３）へキサリボタクレオチドα−ＣｐＵｐＣｐＣｐＣｐＵの保護基脱離、精製及 び確認 完全に保護されたヘキサリボヌクレオチドＵを以下の処理に付した。

・ジオキサン／水〔１：１容量比）〕中における１Ｍテトラメチルグアニジウム ４−ニトロベンズアルドキシメートによる１８時間処理。

・濃アンモニア溶液による５０℃、５時間処理。

・塩酸（ｐＨ２）による室温４日間処理。

これらの処理の終了後、保護基が脱離されたオリゴヌクレオチドａ−ＣｐＵｐＣ ｐＣｐＣｐＵを、クロマトグラフ法によりＤ　Ｅ　Ａ　Ｅ　−５ｅｐｈａｄｅｘ 　（ＨＣＯ３″″形）アニオン交換カラムを用いて精製した。その場合、溶離剤 として、トリエチルアンモニウムハイドロジエンカーボネート溶液（０，０１Ｍ からＩＭの直線勾配、１００１００Ｏを使用した。

保護基脱離を行なったものの収率は５６％であった。

オリゴヌクレオチドａ−ＣｐＵｐＣｐＣｐＣｐＵ（Ｆ）一部（大略５０Ｄ２６０ 単位）を、ヘビ毒ホスホジェステラーゼ及びａｌｋａｌｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈａ ｔｅを用いて酵素分解に付した。分解生成物を高速液体クロマトグラフィーによ り分析した所、α−ウリジン及びａ−シチジン（１：２．１）に完全に分解して いた。

実施例　■ 支持体を使用するａ−オリゴデオキシリボヌクレオチドの合成 支持体を使用するａ−オリゴデオキシリボヌクレオチドの合成（以下に述べる） を、ホスホラミシト法に従い行なう。それは、天然βシリーズに対し記載の方法 ［８，Ｌ−Ｂｅａｕｅａｇｅ、　Ｎ＋Ｈ，Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ、　Ｔｅｔｒｍｈ ｅｄｒｏｎＬｅｔｔ、、　２２．１８５９−１０２　（ＩＨＩ）；　Ｌ、　Ｊ、 　ＭｃＢｒｌｄｅ、Ｍ、　Ｈ。

ｅａｒｕＬｈｅｒｓ、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、　２４．２４５ −２４８　（１９８ｇ））に類似している。この合成は、以下の反応式による、 ４種の塩基Ｔ、Ｃ，Ａ、Ｇに相当するα−デオキシヌクレオシドホスホラミシト ５ｙｎｔｈｏｎｓ　２ａ−ｄの作製（１）を必要とした。

Ｈ２ＣＯＮ（ｊＰｒ）２ 略号は、以下のことを意味する。

ａＢ−Ｔ−チミン ｂ　Ｂ−ＣＢ２−Ｎ’　−ベンゾイルシトシンｃＢ−ＡＢ２−Ｎ’　−ベンゾイ ルアデニンｄ　Ｂ＝Ｇ”’　−Ｎ２−ｔ＜ｋミドイル９’７二＞Ｄｓｔｒ　＝　 ４．４’　−ジメトキシトリチルｉＰｒ：イソプロビル Ｂｚ：ベンゾイル この合成はまた、ａ−デオキシリボヌクレオチド誘導体を含む固体支持体の官能 化（２）　も必要とした。

第二の段階において、手動式又は自動式合成器を用いて、オリゴヌクレオチド鎖 の延長化（３）を行なった。最後に、所望の合成サイクル数が終了した所で、支 持体よりオリゴヌクレオチドを脱離させ、保護基の脱離を行ない、精製を行なっ た。

（１）　α−デオキシリボヌクレオシドホスホラミジト２　ａ−ｄの作製 相当するＮ−保護５′　−〇−ジメトキシトリチルーα−デオキシリボヌクレオ シド１　ａ−ｄより、４種のＮ−保護五一デオキシリボヌクレオシドホスポラミ ジト２ａ−ｄを得た。ヌクレオシド誘導体１を、不活性雰囲気下にジクロロメタ ン中で、Ｎ、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にメチルクロロ−Ｎ 、Ｎ　−ジイソブロピルアミノホスホラミジト（２，５当量）で処理した。得ら れたホスホラミシト誘導体Ｚをクロマトグラフ法によりシリカゲルを用いて精製 し、収率７９〜９５％で単離した。４種のホスホラミシト誘導体２　ａ−ｄを” Ｐ−ＮＭＲにより分析した所、純度は９７％より高かった。

ａ　−２７−デオキシヌクレオシド２　ａ−ｄの３’　−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロ ビルアミノホスホラミシト）誘導体の一般的な作製法は、以下の通りであった。

アルゴン存在下に注射器を用いて、メチルクロロ−Ｎ、Ｎ−ジイソブロピルアミ ノホスホラミジト（２，５ミリモル）を、Ｎ−保護５’−０−ジメトキシトリチ ル−α−デオキシヌクレオシド１（１ミリモル）及びＮ、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピ ルエチルアミン（４ミリモル）を無水ジクロロメタン（３ｍｌ　）に溶かした溶 液に加える。。反応混合物を室温で１０分間攪拌し、次いで、酢酸エチル（３５ ｍｌ）を含む分液漏斗に移す。この混合物を食塩水（４Ｘ８０ｍｌ）で抽出し、 有機相を無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、減圧下に蒸発させた。残渣をクロ マトグラフ法によりシリカゲル（１０ｇ）を用いて精製する。その場合、溶離剤 としては、トリエチルアミン１％を含むヘキサン／ジクロロメタン混合物を用い る。純粋生成物を含む画分を合体し、減圧下に蒸発を行なう。残渣を冷（−７８ ℃）ｎ−ヘキサン（５０ｍｌ）中でトルエン溶液（５ｍｌ）より析出させるか、 ベンゼン溶液（１５ｍｌ）より凍結乾燥する。化合物２　ａ−ｄが白色粉末とし て得られ、アルゴン中で一２０℃で貯蔵する。

４種のホスホラミシト誘導体２　ａ−ｄを”Ｐ−ＮＭＲで分析すると、以下の結 果が得られる。

２ａ： 収率：８８％ ”Ｐ−ＮＭＲδ：　１５０．９ ’Ｈ−ＮＭＲδ： ８．１９（Ｂｒｏａｄ　ｓ、　Ｌ　Ｈ，Ｈ−Ｎ３）　。

７．６０及び７．５７　（２ｄ、ＩＨ，Ｈ６）。

７．４５−８．７９（ｍ、　１３Ｈ，Ａ　ｒ　Ｈ）　。

［ｉ、３４（ｐｓｅｕｄｏ　ｄ、　ＩＨ，Ｈｌ、。

Ｊ　＝　７．５Ｈｚ）。

ａｐｐ ４Ｊ３−４．４５（ｍ、　２Ｈ，Ｂ３．、　Ｈ４，）　。

３ＪＯ（ｓ、６Ｈ，ＣＨ３−０Ａｒ）。

３．６８−３．４２（ｍ、　２Ｈ，Ｂ５．、　Ｈ，）　。

３．３２及び３．３１（２ｄ、３Ｈ，ＣＨ３−０−Ｐ。

Ｊ　＝１３．３Ｈｚ）。

２４８−２．６５　（ｍ、　Ｉ　Ｈ，Ｂ２．）　。

２．３０−２−１４　（ｍ、Ｉ　Ｈ１Ｈ２−）　。

１．９２　（ｓ　、３　ＨＩＣＨｓ　Ｃ）　ｓ　）　。

１．１７−１．０１　（ｍ、　１２Ｈ，（（ＣＨ３）２−収率：７９％ ”Ｐ−ＮＭＲ６：　１５０．４２．　１５１．７’Ｈ−ＮＭＲδ： ８．８２（ｂｒｏａｄ　ｓ、　Ｉ　Ｈ，Ｈ−Ｎ４）　。

８．１２及びＬｌｌ　（２ｄ　、ＩＨ，Ｈ６゜Ｊ　ｓ−ｅ　＝　７．２Ｈ２）。

７．９０　（ｄ、　Ｉ　Ｈ，Ｂ５）　。

７．６６−６．８２（ｍ、１８Ｈ，Ａ　ｒ　Ｈ）　。

８Ｊ５（ｐｓｅｕｄｏ　ｔ、　ＩＨ，Ｈｌ、。

Ｊ　ａｐｐ　−ｓ　−ｓ　ｎ　ｚ）。

４．７２及び４．６３　（２ｐｓｅｕｄｏ　ｔ、ＩＨ，Ｂ３．）　。

４−５Ｆ４．４’ｌ（ｍ−Ｉ　Ｈ１Ｈ４，）。

３−８０　（ｓ、６Ｈ１ＣＨ３−ＯＡ　ｒ）　。

３．５２−３．３５（ｍ、　２Ｈ，Ｂ５．、　Ｈ，）　。

３．２９及び！１．２３（２ｄ、３Ｈ，ＣＨ３−０−Ｐ。

Ｊ−ＩＬ３Ｈｚ）。

８．２９−３．１０　（ｍ、２　Ｈ。

Ｎ〔９旦−（ＣＨ３）　２）　２）。

２．９８−２．７１（ｍ、　Ｉ　Ｈ１Ｈ２Ｊ　。

２．５３−２．３６（ｍ、ＩＨ，Ｂ２”）　。

１．１２−０．９８　（ｍ、１２Ｈ。

（（ＣＨ）　−ＣＨ）２Ｎ）。

２Ｃ： 収率：９５％ ”Ｐ−ＮＭＲδ：　１５０Ｊ１．　１５０．９１’Ｈ−ＮＭＲδ： ８．９７　（ｓ、ＩＨ，ＮＨ）。

８．８４及び８．５９　（２ｄ、２Ｈ，Ｂ２．Ｈ８）。

８．０４−６．８１（ｍ、１８１．　Ａ　ｒ　Ｈ）　。

８．７７４−６Ｊ８（、ＩＨｌＨｔ、）　。

４．６７−４．５８（ｍ、　２Ｈ，Ｂ３．、　Ｈ４，）　。

３ＪＯ（ｓ、６Ｈ１ＣＨｓ　−ＯＡ　ｒ）　。

３、Ｂ１−３．４３（ｍ、　２Ｈ，Ｂ５．、　Ｂ５．）　。

３．２８及び３．２ｆｔ（２ｄ、３Ｈ，ＣＨ３−０−Ｐ。

Ｊ＝１３Ｈｚ）。

３．４０−３．１６　（ｍ、２Ｈ。

Ｎ　（ＣＨ−（ＣＨ３）　２）　２）。

３．０−２．９（ｍｕ　ＩＨＩＨ２，）　１２．７２−２．５３（ｍ、Ｉ　Ｈ， Ｂ２−）　。

１．６１−１．０１　Ｃｍ、１２Ｈ。

（（ＣＨ）　−ＣＨ１２Ｎ）。

２ｄ　： 収率：８７％ ”Ｐ−ＮＭＲ６：　１５０．７１３．　１５０．９７’Ｈ−ＮＭＲδ： １１Ｊ８　（ｂｒｏａｄ　ｓ、Ｉ　Ｈ，ＮＨ）　。

８．２８及びＢ−２４（２ｓ、ＩＨｌＨｓ　）　。

７．４６−６．８２（ｍ、１４Ｈ，ＮＨ，Ａ　ｒ　Ｈ）　。

６．２８（ｐｓｅｕｄｏ　ｔ、　ＩＨ，Ｈｌ、。

Ｊ　−７，８Ｈｚ）。

ｐｐ ４．７０−４．４４（ｍ、　２Ｈ，Ｈ３，、Ｈ４，）　。

３．８０　（ｓ、６Ｈ１ＣＨ３−ＯＡ　ｒ）　。

３．７６−３．４１（ｍ、　２Ｈ，Ｈ５，、Ｈ，）　。

３．３１及び３．２５（２ｄ、３Ｈ，ＣＨ３−０−Ｐ。

Ｊ−１３，５Ｈ）。

３．３６−３．１２　Ｃｍ、２　Ｈ。

Ｎ　［ＣＨ−（ＣＨ３）２）２）。

２．９４−２．８０（ｍ、　Ｉ　Ｈ１ｌＨ２，）　。

２．６１−２．３６　（ｍ、　３）Ｉ、　Ｈ２，（ＣＨ２）　、３−Ｃ旦２−Ｃ （−０））。

１．７０　（ｍ、２Ｈ。

ＣＨ−ＣＨ２−Ｃ（−０）　）　。

１．２５　（ｍ、　２４Ｈ，ＣＨ３−（ＣＨ，）　１２）　。

１．１７−１．０８　（ｍ、１２Ｈ。

（（ＣＨ）　−ＣＭ）２Ｎ）。

０．８８　（ｍ、　３Ｈ，ＣＨ−（ＣＨ２）　１４）　。

（２）固体支持体の官能化 Ｎ−アシル−５′−〇−ジメトシキトリチルーα−デオキシヌクレオシド誘導体 １の３′　−ヒドロキシル基と固体支持体のアミノ基との間で、以下の反応式に 従いサクシニル結合を形成させることにより、主題の事を行なった。

特表平１−５０２１８７　（２１） 化合物１を前もって３′（ペンタクロロフェニルサクシネート）誘導体４にかえ 、ついで、多孔性ガラスビーＦ　（ＬＣＡ−ＣＰＧ）に結合したアルアミン長鎖 のアミノ基と反応させた（Ｓ、　Ｐ、　Ａｄａｍｓ、　Ｋ、　Ｓ、　Ｋａｖｋａ 、　Ｅ、　Ｊ。

Ｖｙｋｅｓ、　Ｓ、　Ｂ、　Ｈｏ１ｄｅｒ、　Ｇ、　Ｒ，Ｇａ１ｌｕｐｐｉ、　 Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅ＋ｏ。

Ｓｏｅ、、　１０５．　［ｉ６１　（１９８３）　］。

固体支持体に結合したヌクレオシドの量を、トリクロロ酢酸１０％を含むジクロ ロメタン溶液による処理により遊離するジメトロキシトリチルカチオンを分光法 で測定して請求めた。ヌクレオシド塩基の性質により、官能化の程度はダラム当 り、２５〜３８ミクロンの範囲にある。

（１）ａ　−ｄ　（ＴＡＣＧＧＣＣＡＧＴ）の合成デカヌクレオチドａ　−ｄ　 （ＴＡＣＧＧＣＣＡＧＴ）を手動式で合成した。小さな反応器の中に、ＬＣＡ− ＣＰＧ支持体に共有結合した５′　−Ｏ−ジメトキシトリチル−ａチミジン（大 略１ミクロンモル）を導入する。

合成サイクルを９回続けて行なって、このオリゴヌクレオチドの延長化を実施し た（以下の表■参照）。

各サイクルは、洗浄の外に、脱トリチル（段階４）、縮合（段階１２）、アセチ ル化（段階１３）並びに酸化（段階１５）を含む。所要サイクル回数の終了後、 チオフェノール／トリエチルアミン／ジオキサン混合物［１：２：３（容量比） 〕を用いて支持体を１時間処理し、ホスフェートよりメチル基を除去した。次い で、濃アンモニア溶液を用いて、６０℃で１２時間支持体を処理し、アミンを保 護している複素環基を除き、固体支持体よりヌクレオチド生成物を脱離させた。

依然として５′末端にジメトキシトリチル基を有する所望のオリゴヌクレオチド を、高速液体クロマトグラフ法によりＣ１８ｇｒａｆｔｅｄ−ｐｈａｓｅカラム を用いて精製した（収率：２０％）。８０％酢酸で処理して、５′末端の保護基 を脱離した。最後に、精製したデカヌクレオチドをヘビ毒ホスホジェステラーゼ 及びａｌｋａｌｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅを用いて酵素分解させた。分解 生成物を高速液体クロマトグラフ法で分析した所、α−チミジン、α−２′−デ オキシシチジン、α−２１−デオキシアデノシン及びα−２１−デオキシグアノ シンに２．１　：　３．２　：　ＩＪ　：　３．３の比（理論比は２：３：２： ３）で完全に分解していた。

これらの結果から、ａ−７ノマー構造のヌクレオチド単位のみからなるオリゴデ オキシリボヌクレオチドを、ホスホラミシト法により固体支持体を用いて迅速に 合成できることが分る。

多孔性ガラスビー）　（ＣＰＧ）を用いるａ−オリゴヌクレオチドの手動式合成 のｐｒｏｔｏｅａｌは、以下の通りであった。

反応器に官能化支持体３０■を充填した（２５〜３８ミクロンモル／　１　）。

各段階における量は、特に言及のない限り、１ｍｌである。

実施例　■ α−オリゴデオキシリボヌクレオチドの自動的合成遺伝子合成器として、Ａｐｐ ｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｓ＋ｓ　Ｍｏｄｅｌ　３８０を用いた。Ｇのホスホ ラミシト誘導体のアセトニトリルに対する溶解度が低いので、このホスホラミシ トの０．０５Ｍ溶液を、３７℃に常に維持しながら用いた。合成の標準プログラ ムを修正し、Ｇの導入に相当する段階をくり返し、高いカップリング収率（９８ ％より高い）を得た。

かくして、オリゴヌクレオチドα−ｄ　（ＴＡＡＡＡＧＧＧＴＧＧＧＡＡＴＣ） を得た（６２０　Ｄ　２６０単位）。そのものの純度及び大きさは、変性條件下 におけるゲル電気泳動により調べた。

実施例　Ｖ ヌクレアーゼに対するオリゴヌクレオチドａ−及びβ−Ｃｄ　（ＣＡＴＧＣＧ） ）の酵素安定性３種のヌクレアーゼを用いた。すなわち、Ｓ１ヌクレアーゼ（− 水糸ＤＮＡに対し特異性を有するエンドヌクレアーゼ）、５′　−エクソヌクレ アーゼ（子牛膵臓ホスホジェステラーゼ）、並びに３′　−エクソヌクレアーゼ （ヘビ毒ホスホジェステラーゼ）。酵素加水分解を調べるため、２Ｈｍｍにおけ る濃色性及び高速液体クロマトグラフ法を用いた。α−オリゴマーを５１ヌクレ アーゼを用いて培養した場合、２０分たっても吸収に大きな変化が生じなかった 。一方、β・オリゴマーは、時間と共に吸収が増大した。

上記酵素分解に関するα−オリゴマーとβ−オリゴマーとの定量的比較は、紫外 線吸収では不可能である。

そこで我々は、高速液体クロマトグラフ法で確認した。

Ｓ１ヌクレアーゼを用いる３７℃での培養中、ヘキサヌクレオチドに相当するピ ークの消失が記録された。１ｏ分の培養後にβ−ヘキサマーは残ってぃながった が、α−ヘキサマーはわずか７％が分解した（表■）。

α−ヘキサマー及びβ−ヘキサマーを子牛膵臓ホスホジェステラーゼで加水分解 した場合の安定性の比較を、以下の表■に示す。２種のアノマーオリゴマー間の 差は著しい。１０分間におけるα−オリゴマーの変化ははっきりしていないが、 同じ時間でβ−オリゴマーは８９％が加水分解した。

表　■ α−及びβ−Ｃｄ　（ＣＡＴＧＣＴ））（各１６６ミリモル）を５１ヌクレアー ゼ（９３単位／ｍｌ）及び牛膵臓ホスホジェステラーゼ（０，０１３単位／ｍｌ ）を用いて３７℃で加水分解した場合の時間豹変イし１分後又は１０分後に残っ ているヘキサマーの量 子牛膵臓ホスホジ β−（ｄ　（ＣＡＴＧＣＧ））　１００％　Ｌ、３％　０％　１００％　１１％ ａ−Ｃｄ　（ＣＡＴＧＣＧ））　１００％　９８％　９３％　１００％　１０４ ％ヘビ毒ホスホジェステラーゼを用いて上記２種のアノマーヘキサマーを加水分 解した場合の安定性を、２８０　＋ｎにおける紫外線吸光度により調べた。酵素 濃度が低い場合は、α−オリゴヌクレオチドはゆっくり加水分解したが、相当す るβ−オリゴヌクレオチドの分解は極めて著しかった。

ｌ）各種ヌクレアーゼに対する基質α−及びβ−〔ｄ（ＣＡＴＧＣＧ））の比較 高速液体クロマトグラフ法 用いた高速液体クロマトグラフィー装置は、ｗａｔｅｒｓＡｓｓｏｃｔａｔｅｓ 製のものであり、Ｃ，８Ｂ　ｏｎｄａｐａｃｋカラムを有していた。２０ｍ　Ｍ 酢酸アンモニウム（ｐＨ８，５）中にアセトニトリルを２７％含む溶液及び２Ｇ Ｏｎｍにおける検出操作を用いて、１ｓｏｃｒａＨｃ　ｅｌｕｔｉｏｎを行なっ た。

ａ）Ｓｌヌクレアーゼ ＧＩＢＣＯＢＲＬなる商品名の５１ヌクレアーゼを用いた。

１単位が、変性ＤＮＡ１μｇに３７℃、１分で溶解する。

α−オリゴヌクレオチド又はβ−オリゴヌクレオチド（５０ナノモル）を水（３ ０μｍ１）に溶かした溶液を、以下の緩衝溶液（３０μｍ））　−０，５Ｍ酢酸 ナトリウム（ｐＨ４，７）、３Ｍ塩化ナトリウム、０．１Ｍ酢酸亜鉛−と混合し た。水３００μｇを加えた。次いで、Ｓ１ヌクレアーゼ（２８単位、３μＩＩ） を加えた。混合物を３７℃で培養し、適当な時点で一部（２０μｍ）をとりｂｌ ｏｃｋｉｎｇ　ｂｕｒｔｅｒ　、すなわち、２０ｍＭ燐酸カリウムとまぜ、次に 、１００℃で５分間加熱を行なった。同様な処理を対照実験に対して行なった。

５０μｐを注入した。

ｂ）牛牌臓ホスホジェステラーゼ 上記と類似の操作を行なった。たソし、Ｓ１ヌクレアーゼの代りに主題ホスホジ ェステラーゼ（４Ｘ１０’単位、１μｇ）を０．１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ６ ，５）中で加えた。該ホスホジェステラーゼは、ＢＯＥＲＩＮＧＥＲ（ＭＡＮＮ ＨＥ　ＩＮ）供給品であった。１単位が、チミジン３′−にトロフェニルホスフ ェート）１ミクロンモルを２５℃で１分間で加水分解する。反応は、燐酸カリウ ム溶液中の代りに、水中で中止した。

紫外線分光光度法 ３７℃で作動する恒温装置を有する分光光度計Ｕｖｉｋｏｎ８１０を用いた。全 反応量は１ｍｌであった。オリゴヌクレオチド（６０ナノモル）を加え、２６０ ｎ−における吸光度を０（ゼロ）に調整した。Ｓ１ヌクレアーゼ（１Ｍｇ１９． ３単位）を加え、２ｆｉＯｎｓにおける吸光度の時間的変化を記録した。ヘビ毒 ホスホジェステラーゼ（やはりＢＯＥＲＩＮＧＥＲ供給品）（１ｕｆｌ　、３ｘ ｌＯ−６単位）を用いて、同様な操作を行なった。

図１は、オリゴヌクレオチドβ−及びα−Ｃｄ　（ＣＡＴＧＣＧ））の２６０ｎ ｍにおける紫外線吸光度の時間的変化を示すカーブである。緩衝溶液は、０．０ ５Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ４，７）、０，３Ｍ塩化ナトリウム及び０　、０１　 Ｍ酢酸亜鉛よりなっていた。ｔ−０で、ヌクレアーゼ（０，８単位／ｍｌ）を６ ０μＭα−又はβ−ヘキサマーに加えた。

図２は、２Ｂ０ｎｍにおける紫外線吸光度の時間的変化を示す。緩衝溶液は、０ ．１Ｍ）リス塩酸（ｐＨ９）及び０．０１Ｍ塩化マグネシウムよりなっていた。

ｔ−０で、ヘビ毒ホスホジェステラーゼ（３Ｘ　１０’単位／ｍ１）を６６μＭ α−又はβ−ヘキサマーに３７℃で加えた。

実施例　■ α−系とβ−系との平行対形成 ４種の塩基よりなる合成ａ配列を用いると、以下の結果が示すように、α−配列 とβ−配列とが平行対を形成するが、相補的な二つのα−配列は非平行対を形成 する。

更に、α−β対はβ−β対よりずっと安定である。

これらのもののＤ　Ｏ／Ｈ２０溶液の、４℃におけるイミノプロトンＮＭＲスペ クトルから以下のことが分る。

ａ）配列ａ　−（ｄ　（ＣＡＴＧＣＧ））は、強度１：１の二つのはつきりした ピークを１２．５７及び１４．１７ｐｌ）−において示す。これは、以下に示す 非平行対に由来する。

ｂ）配列β−Ｃｄ　（ＧＴＡＣＧＣ））は、もつと幅の広いピークを１３．６５ 及び１２．５８ｐｐｍにおいて示す。この場合も、相対的強度及び対称性から考 えて、これらのピークのかへる状態は、以下の非平行対によるものである。

ｃ）ａ　−（ｄ　（ＣＡＴＧＣＧ））配列とβ−（ｄ　（ＧＴＡＣＧＣ））配列 との混合物（１：　１）は、１４．２２　。

１３．８３　、１３．０２　、１３．２３　、１２．７３及び１２．５７ｐｐ− において６個のイミノピークを示し、更に１３．６６ｐｐｍにおいて幅広いピー クを示す。６個のシグナルの最初のグループの化学シフトは何れも、（ａ）及び （ｂ）においてみられるものと異なっている（たりし、α−配列、β−配列の何 れにも存在するδ−１２，５７は除く）ので、これら６個のピークを、ａ　−Ｃ ｄ　（ＣＡＴＧＣＧ））とβ−（ｄ　（ＧＴＡＣＧＣ））との対形成に由来する イミノプロトンのピークと関連させるのが妥当と思われる。観察されるイミノプ ロトンシグナルの数は、非平行対（Ｂ）とよりも平行対（Ａ）とよりよく一致し ている。

ａ−チミジンテトラマーと１ｆｌｔｅｒｅａｌａｔｉｎｇ　ａｇｅｎｔとの結合 ペンタメチレン鎖を介してＮ２−メチル−９−ヒドロキシエリブチジニウムアセ テート誘導体と共有結合したα−チミジンテトラマーを、以下の反応式に従い三 段階で合成した。

段階１　ａ−チミジンテトラマーへのペンタメチレン鎖の結合 ５′　−位置かジメトキシトリチル（Ｄ■ｔｒ）基で保護されたテトラマーの３ ’−ＯＨ末端を、末端残基がＤｓｔｒでブロックされたアミノカプロン酸でエス テル化する。

この反応は、ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）をカブプリング剤とし て、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を触媒として用い、ピリジン中で室温 で行なう。反応は３時間で完了する。

段階２　保護基の脱離 Ｄｍｔｒ基を８０％酢酸で除く。得られる生成物を逆相カラムを用いて精製する 。この時点で、反応（１＋２）の収率は６５％に等しい。

段階３　変性テトラマーとエリブチシン誘導体との結合 この段階で、我々はワサビダイコンペルオキシダーゼ／水の酵素系を用いた。エ リブチシン誘導体Ｎ２−メチル−９−ヒドロキシエリブチジニウム（ＮＭＨＥ） は酵素反応で酸化され、ＮＭＨＥのＯ−キノン誘導体となる。この電子性中間体 は、ついで変性テトラマーの有するアミノ基による攻撃をうける。

その結果、オキサゾール環が形成され、以下の式で示される蛍光性化合物 が得られる。反応はｐＨ７の燐酸塩緩衝溶液中で行なわれ、最終製品は、０１８ カラムを用いて逆相中で高速液体クロマトグラフ法により精製される。

１）３’−０−ベンゾイル−α−チミジンの作製４．４′　−ジメトキシトリチ ルクロライド３８９．７■（１，１５ミリモル）を、２′　−α−チミジン（１ ミリモル、２４２．２■）を無水ピリジン（２，５ｍ１）に溶かした溶液に加え た。混合物を室温で３時間攪拌し、メタノール（１ｍｌ）を加えた。更に１５分 間攪拌した後、混合物を飽和重曹水溶液４Ｑｍｌ中に注ぎ、塩化メチレン（３Ｘ ２０ｍｌ）で抽出した。有機層を合体し、蒸発乾固させ、残渣をクロマトグラフ 法により分画した。溶離剤として、アセトン／塩化メチレン（０〜４０％）混合 物を用いた。純粋な５′−０−ジメトキシトリチル−ａ−チミジンを含む画分を 合体し、蒸発乾固させた。残渣をエーテルから４０℃より低い温度で析出させた 。生成物が５１４．８ｇ　（９４，５％）得られた。

５′−０−ジメトキシトリチル−α−チミジン（０，２５ミリモル、０．１３６ ｇ）を無水ピリジン（１ｍｌ）に溶かした溶液に塩化ベンゾイル４２．２■（０ ，８０ミリモル）を加えた。混合物を室温で１時間攪拌し、水０．５ｍｌを加え た。

１５分の攪拌の後、反応混合物を飽和重曹水溶液２０ｍ１に注ぎ、塩化メチレン （３Ｘ１０ｍｌ）で抽出した。有機層を蒸発乾固させた。残渣を塩化メチレン／ メタノール［７：３（容量比）、５ｍ１）に溶かし、ベンゼンスルホン酸を１０ 容量％含む塩化メチレンを加えた。室温で１７分間攪拌の後、反応混合物を飽和 重曹水溶液２ｍｌで中和し、飽和重曹水溶液２０ｍ１と塩化メチレン（３Ｘ１５ ｍｌ）の間で分配を行なった。有機層を合体し、蒸発乾固させ、残渣をクロマト グラフ法（１０ｇ）で分画した。３′　−〇−ベンゾイルーα−チミジン誘導体 を含む画分を合体し蒸発させた。残渣をエーテルから４０℃より低い温度で析出 させた所、無色不定形粉末（０，０７５ｇ、　８７％）を得た。

２）５’−０−ジメトキシトリチル−α−Ｃ（Ｔｐ）３Ｔ）の作製 ２−ピリジンアルドキシム０．８１０８ｇ　（５ミリモル）及びＮ１．　Ｎ１． 　Ｎ３．　Ｎ３−テトラメチルグアニジン０．６２７　ｍｌ　（５ミリモル）を 、保護されたＤｍｔｒ−ａ−（Ｔ’ｐ）　Ｔ　−８２０，３９３ｇ　（０，１５ ミリモル）を水／ジ第キサン［１ニア（容量比）、５ｍ１）にとかした溶液に加 えた。得られた溶液を７０℃に９．５時間加熱し、次いで、冷却し、蒸発乾固さ せた。残渣をテトリルアンモニウムハイドロジエンカーボネー）　（ＴＥＡＢ、 　５０ｍ１．５０ミリモル）に溶かし、ジエチルエーテル（２Ｘ２５ｍｌ）で洗 浄した。得られた水溶液を蒸発乾固させ、残渣を逆相シリカゲルＣ１Ｂカラム（ １，２ＸｌＯｃｍ）を用いてクロマトグラフ法に付した。その場合、メタノール 勾配０〜５０％のメタノール水を用いた（Ｔ　Ｅ　Ａ　Ｂに対し０．１Ｍ）。適 当な両分を合体し、蒸発乾固させた。残渣を凍結乾燥した所、所望化合物が無色 粉末の形で０．２２３ｇ　（収率：８４％）得られた。

３）　ａ　−（Ｔｐ）３７３’　−０−（ε−アミノヘキサノエート）化合物の 作製 ５′　−〇−ジメトキシトリルーα−（Ｔ　ｐ）　ｓ　Ｔ　（０、２２３■、０ ．１３ミリモル）及びＮ−ジメトキシトリチル−ω−アミノへキサン酸（０，２ ８１ｇ、　０．６５ミリモル）を無水ピリジン（３ｍｌ）に溶かした溶液に、ジ シクロへキシルカルボジイミド０．２６７８ｇ　（１，３ミリモル）及び４−　 （Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジン０．０７９３ｍｇ　（０，８５ミリモル） を加えた。この溶液を室温で３．５時間攪拌した。水１ｍｌを加え、濾過を行な った。濾液を蒸発乾固し、残渣をジエチルエーテルから析出させた（後者の操作 を三回くり返した）。析出物を８０％酢酸（５ｍｌ）にとかし、得られた溶液を 室１に２０分間保った。この混合物をジエチルエーテルで抽出し、蒸発乾固？、 た。残渣にトルエンを加え、その混合物を再度蒸発乾固に付した。残渣をクロマ トグラフ法により逆相シリカゲルＣ１ｓカラム（１，２Ｘ１０ＣＩｌ＋）を用い て精製した。その場合、メタノール濃度が０〜４０％の間で段階的勾配を有する メタノール水を用いた。所望化合物を含む画分を蒸発乾固させ、残渣を凍結乾燥 させた。

所望化合物が、無色粉末の形でＯ，１３０ｇ　（収率：６５％）得られた。

反応体の使用量は以下の通りであった。

ａ−（Ｔｐ）ｓ　Ｔ　−３’　−０−（ε−アミノヘキサノニー））　１３０■ （０，０８２ミリモル）及び２−メチル−９−ヒドロキシエリブチジニウムアセ テ−）　１１ｍｇ　（０，０３２ミリモル）を０．０２Ｍ燐酸塩緩衝溶液５０ｍ １　（ｐＨ７）にとかした。得られた溶液を室温でたえず攪拌した。ペルオキシ ダーゼ（西洋ワサビ）０６８■を加えた。酵素が溶解してから、２０ｍＭ　Ｈ２ ０□溶液を滴下した。得られた溶液を濾過し、蒸発乾固させた。残渣を、クロマ トグラフ法により逆相Ｌｊｇｈｒｏｓｏｒｂｅ　ｌ？ｐＨｔカラムを用いて、精 製した。（そう人あり。）適当な画分を合体し、蒸発乾固に付した。

残渣を高速液体クロマトグラフ法で精製した。残渣をＤｏｖｅｘ　５０ｖ（ＮＨ ４＋の形）カラム中を通過させた。凍結乾燥の後得た最終製品は、２．７ｍｇ（ 収率：５％）の黄色粉末であった。

実施例　■ ａ−Ｔ、−Ｃ５−ＯＰＣとポリ（ｒＡ）との対形成ａ　−Ｔ　４−　Ｃｓ　−Ｏ Ｐ　Ｃとポリ（「Ａ）との相互作用を、紫外線吸収及び蛍光を用いて調べた。α −Ｔ４−ｃ５−ｏｐｃの紫外線スペクトルは、２７１ｎｍ及び３１７ｎｓに二つ の極大を示す。更に、この化合物は蛍光性を有し、励起及び最大放射を夫々３１ ８ｎ■及び５２５ｎ■で起す。

ポリ（「Ａ）の存在量が多くなるに従い、α−Ｔｉ、−Ｃｓ　−ＯＰ　Ｃ（１０ ｍ　Ｍカコジル酸ナトリウム、１００ｍ　Ｍ塩化ナトリウム中に０．０５　ｍＭ 、　ｐＨ７）のスペクトルは変化する。淡色性は２６０ｎ■と３２０ｎｓとの間 で明らかとなり、それは、ａ−Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣとポリ（ｒＡ）配列との結合 に相当する。２７０ｎｍで、テトラ−α−チミジレート鎖とポリ（ｒＡ）との二 重鎖が形成される可能性があり、３１０ｎｍで、オキサゾロピリドカルバゾール 断片の相互作用が起る。α−Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣの始めの吸光度に対する遊離α −Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣの吸光度の比（これは、オキサゾロピリドカルバゾール誘 導体の濃度に対するポリ（ｒＡ）濃度（ヌクレオチドで表した）の比の函数であ る）から、該相互作用の化学量論を推定することが可能である。後者は、４個の アデニン残基に結合する１分子のα−Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣに相当する。同條件下 で、α−Ｔ４とポリ（ｒＡ）との結合は検出され８℃で錯体か形成された後、温 度を上げると、遊離α−Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣの紫外線スペクトルが徐々に回復し た。１ｓｏｂｅｓｔ１ｃ　ｐｏｉｎｔｓが８４７ｎｍ及び３２４ｎ−に見られた 。

２６℃より高い温度では、３１７ｎｓにおＩする吸光度は、８℃における遊離α −Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣに相当する吸光度より大きい。これは、温度を上げた場合 α−Ｔ４−ｃ５−ｏｐｃの脱離が起ることを示す。該錯体の５０％解離に相当す る温度は、２７０ｎｍでは２４．５℃、３１０ｎｓでは２６℃に等しい。この結 果は、β−Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣとポリ（ｒＡ）との錯体でみられる結果と比較す ることができる。後者の場合は、同條件下での錯体の解離温度は、１６℃であっ た。

ｐ４−’ｒ４−Ｃ５−ＯＰＣ分子（７）ＯＰＣ断片の蛍光は、ポリ（ｒＡ）との 錯体の形成後も不変であった。これは、この断片が新たに形成した塩基対の間に 多分はさまれていないことを示唆する。これは、ａ−Ｔ４−Ｃ５−ｏｐｃとβ− Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣとの間のもう一つの相違を示す。何故なら、β−Ｔ４−Ｃ５ −ＯＰＣにおいては、ポリ（「Ａ）との相互作用が蛍光の増加をもたらすからで ある。

更に、ａ−Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣの濃度をかえ、相当するＴｓ　（Ｔｍはａ　−Ｔ 　４−　Ｃｓ　−ＯＰ　Ｃ錯体の５０％解離温度を示す）をめることにより、α −Ｔ４−　Ｃｓ　−０ＰＣとポリ（「Ａ）との相互作用の熱力学的諸パラメータ ーをめた。これらのパラメーターは、以下の式より推定される。

１／Ｔ■　−３／Ｈ＋　２．３Ｒ／Ｈ１ｏｇＣｍ上記式において、ＴＩは該錯体 の５０％解離温度であり、Ｃ■は遊離α−Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣの濃度であり、を −Ｔ１であり、Ｒは２力ロリー１モル／Ｋに等しい。

Ｔｓは２７０ｎ−及び３１０ｎ−で測定し、以下の値を得た。

２７０ｎ−ΔＨ−−３８，７キロ力ロリー／モルΔＳ−１０５，３力ロリー１モ ル ΔＧ（２９ｇ’　Ｋ）　−−７，２キロ力ロリー１モル８１０ｎｓΔＨ−−３Ｂ 、８キロ力ロリー１モルΔ５−９ｇ、８カロリー１モル ΔＧ　（２９８°Ｋ）　−−７，４キロ力ロリー１モル結論として、新しい分子 、すなわち、オキサゾロピリドカルバゾール構造を有するｐｏｔｅｎｔｉａｌ　 ｉｎｔｅｒｅａｌａｔｉｎｇａｇｅｎｔが、α−アノマーヌクレオチド単位のみ よりなる人工のテトラチミジレートにペンタメチレン鎖を介して共有結合してい るα−Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣを合成することができた。そのものの紫外線吸収及び 蛍光が示す所によると、オリゴヌクレオチド断片が、塩基対による相補的配列に 選択的に結合するのに必要なｅｌｅｍｅｎｔｓ　ｏｆｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎを 生ずる。βアノマーと比較した場合、二つの大きな相違がみられる。

ａ）α−アノマー構造は、ポリ（「Ａ）と錯体を形成した場合、一層の安定性を 与える。

ｂ）オキサゾロピリドカルバゾール残基は、α−オリゴヌクレオチドとポリ（「 Ａ）との間で塩基対形成により生ずる二重鎖中に介在するとは思われない。

実施例　■ α−Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣ基質の５１ヌクレアーゼに対する抵抗性 ａ−及びβ−Ｔ４−Ｃ５−ＯＰＣのＳ１エンドヌクレアーゼによる分解性の比較 を高速液体クロマトグラフ法により調べた。ピーク強度を、３７℃におけるＳ１ ヌクレアーゼとの反応時間に対して調べた。オリゴヌクレオチドのアノマー構造 がβである場合は、２０分の反応後に化合物は完全に消失し、アノマー構造がβ である場合は、化合物は３０分後においてももとのま〜であった。

Ｃ１８μｍＢｏｎｄａｐａｋカラムを用いて高速液体クロマトグラフ法を実施し た。３１％アセトニトリルを含む２０ｍＭ酢酸アンモニウム溶液（ｐＨ６，５、 テトラブチルアンモニウムクロライドに対し５ｍＭ）を用いて、１ｓｏｃｒａｔ ｉｃｅｌｕｔｊｏｎを行なった。紫外線吸収を２７０ｎｓでめた。

分析條件：α−又はβ−Ｔ４・Ｃ５−０ＰＣ（３３ナノモル）を水（８μｉｔ） にとかした溶液を、緩衝溶液、すなわち、０６５Ｍ酢酸ナトリウム（ｐ）１４． ７）、３Ｍ塩化ナトリウム及び０．１Ｍ酢酸亜鉛と混合した。混合物の量を水で ３００ｍ１とし、次いで、Ｓ１ヌクレアーゼ（Ｇｌｂｃｏ　ＢＲＬ　。

２８単位、３μｆＩ）を加えた。混合物を３７℃で培養し、一部（２０μｍｌ） を色々な時点でとり、直ちにｂｌｏｃｋｉｎｇｂｕｒｒｅｒｓすなわち、２０ｍ Ｍ燐酸ナトリウム（ｐ）１Ｂ、５．１８０μｊ？）とまぜ、５分間１００℃に加 熱した。同様な操作を各対照実験にも行なった。高速クロマトグラフ法の実施の 際は、５０μｇを注入した。

以下の実施例ｘ−ｘｘｎにおいては、次の省略を使用する。

α−ｄＡ　：α−Ｄ−２′　−デオキシアデノシン ａ−ｄｂｚＡ　：Ｎ−ベンゾイル−ａ−Ｄ−２′　−デオキシアデノシン α−ｄＣ：α−Ｄ−２′　−デオキシシチン ａ−ｄｂｚＣ：Ｎ−ベンゾイル−ａ−Ｄ−２′　−デオキシシチジン α−ｄＧ　：α−Ｄ−２′　−デオキシグアノシン α−ｐａｌｌ　：Ｎ−バルミトイル−α−Ｄ−２′　−デオキシグアノシン α−Ｔ　：α−Ｄ−チミジン α−Ｔｂｚ　：３’　−ベンゾイル−α−Ｄ−チミジン α−（（ｓｐ）Ｔ）：α−Ｄ−チミジン５′　−チオホスフェート α−Ｔ（ｐｓ）　：α−Ｄ−チミジン３′　−チオホ■ 一〇−Ｐ 　５−Ｒ ａ−Ｔ　（ｐ　（ｓ）　）　（Ｃｎｅｔ　）　２　：竪 ＢＨＡ　：ベンゾヒドロキサム酸 Ｃｎｅｔ　：β−シアノエチル ＤＢｕ　：ＩＪ　−ジアザビシフｏ　（５，４，０）Ｍｅ　：メチル ＭＳＴ　：メシチレンスルホニルテトラゾーリド Ｐ　：ホスホエステル Ｐ　：ｐ−クロロフェニルホスホエステルｃｒ Ｎ− Ｐｒｏｆ　・ ＴＬＣニジリカゲルを用いる薄層クロマトグラフ法システムＡ二ＣＨ２Ｃｌ２／ メタノール（９０：１０（容量比）〕 システムＢ：ＣＨ２Ｃｊ）２／メタノール［８５：１５（容量比）〕 実施例　Ｘ α−（ＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐ）（ＣＨ２）　ｓ　Ａ　ｃｒ ｌ）５’　−０−（ジメトキシトリチル＞−ａ−チミジン攪拌下、α−チミジン （ａ、ｅ、＞を無水ピリジン（１５ｃｌ１１３）にとかした溶液にジメトキシト リチルクロライド５．３５．を加える。室温で４時間反応させた後、メタノール （３ｃＩ１１３）を加えて過剰のジメトキシトリチルクロライドを破かいする。

減圧下洛剤を除去し、残渣をクロロホルムにとかす。有機相を水洗し、乾燥し、 濃縮する。濃縮物をシリカゲルを用いてクロマトグラフ法により精製する。収率 　８０％ ２）５’　−０−（ジメトキシトリチル）−α−チミジン３′　−（ピリジニウ ムｐ−クロロフェニルホスフェート）攪拌下−２０℃で、ｌ、５−ジメチルテト ラゾールｇ当量を無水ピリジンにとかした溶液に、メチルｐ−クロロフェニルク ロロホスフェート３当量を加える。次いで、室温で１時間攪拌を続け、５’−０ −（ジメトキシトリチル）−α−チミジン１当量をピリジンにとかした溶液を加 える。室温で２〜３時間反応させた後、氷水を加え、ジエステルをクロロホルム で抽出する。クロロホルム溶液を乾燥し、減圧下に濃縮する。ピリジン溶液の形 で得たジエステルは実際上純粋であり、以下の諸段階に用いル。ＴＬＣ（システ ムＢ）　：　Ｒｆ　−０，１８３）α−チミジン−３′　−ｐ−クロロフェニル β−シアノエチルホスフェート 攪拌上室温で、（Ｄｍｔｒ）α−Ｔ（１ミリモル）及びトリメチルアンモニウム ｐ−クロロフェニルβ−シアノエチルホスフェート（２ミリモル）を無水ピリジ ン（１０ｃＩ０３）にとかした溶液にメシチレンスルホニルクロライド（３ミリ モル）及びテトラゾール（６ミリモル）を加える。反応の後ＴＬＣ（システムＡ ）を行なう。反応が完了したら、氷水を加えて過剰のメシチレンスルホニルクロ ライドを破かいする。

クロロホルムを用いてトリエステルを抽出する。有機相を飽和重曹水溶液で、つ いで水で洗浄し、乾燥し、濃縮する。得られた残渣をベンゼンスルホン酸〔２％ 液で中和する。生成物をクロロホルムで中和し、有機相を氷水で洗い、乾燥し、 蒸発させる。得られた残渣をシリカゲルカラム（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／メタノ ール）を用いて精製する。ＴＬＣ（システムＡ）　：　Ｒｆ　−０，２７収率ニ ア０％ ４）　（Ｄｍｔｒ）ａ　−（ＴｐＴｐ）　Ｃｎｅｔ（Ｄｍｔｒ）ａ　−Ｔ　ｐ　 （実施例ｌ−２）０．６ミリモル、ａ　−Ｔ　ｐ　Ｃｎｅｔ（実施例１−３＞０ ．５ミリモル及びメシチレンスルホニルテトラゾ−リド（ＭＳＴ）１．５ミリモ ルを無水ピリジン４．５ＣＯ１３にとかした溶液を、攪拌上室温で２時間反応に 付す。氷水０．５ａｍ３を加え、攪拌を３０分間続ける。この溶液を減圧下に濃 縮する。残渣をクロロホルムにとかし、有機相を５％Ｎ　ａ　ＨＣＯａ溶液で洗 浄し、乾燥し、減圧下に蒸発させる。生成物をシリカゲルカラム（溶離剤：ＣＨ ２ＣｆＩ２／メタノール）を用いて精製する。ＴＬＣ（システムＡ）　：　Ｒｆ 　−０，５０及び０．５２収率ニア２％ ５）（Ｄｍｔｒ）ａ−（ＴｐＴｐ） （Ｄｍｔｒ）ａ　−（ＴｐＴｐ）Ｃｎｅｔ　（ＯＪミリモル）　（実施例１−４ ）及びトリエチルアミン１ａ＋１３をピリジン（２ｃｇ８）に溶かした溶液を室 温で２時間反応に付す。

減圧下に揮発性物質をおい出し、ジエステルを、エーテル中で攪拌して析出させ る。ＴＬＣ（システムＢ）：Ｒｆ　−０，１９ ６）　（Ｄｓｔｒ）α−（Ｔｐ）　４　Ｃｎｅｔ化合物（Ｄｍｔｒ）ａ　−（Ｔ ｐ）　２Ｃｎｅｔ　（０，２ミリモル）を、０℃で１５分間ベンゼンスルホン酸 で処理する。

この混合物にクロロホルム４０（至）３を加える。有機相をＮ　ａ　ＨＣＯａ水 溶液で洗浄し、Ｎ　ａ　２　Ｓ　Ｏ４で乾燥し、減圧下に濃縮する。得られた残 渣に（Ｄｓｔｒ）α−（Ｔｐ’ｒｐ）ｏ、２ｓミリモルを加える。無水ピリジン と共に蒸発させて乾燥した後、無水ピリジン３（至）３を加え、更にＭｓ’ｒｏ 、ｓミリモルを加え、得られた混合物を室温に２時間放置する。氷水を加えて過 剰のカップリング剤を破かいし、ついで主題化合物の作製を実施例Ｉ−４におけ ると同様にして終了する。

７）　ＣＩ）ｓｔｒ）ａ　−（Ｔｐ）　８Ｃｎｅｔジヌクレオチド（Ｄｓｔｒ） ａ　−（Ｔｐ）　２Ｃｎｅｔをテトラヌクレオチド（Ｄ＋ｅｔｒ）ａ　−（Ｔｐ ）　４　Ｃｎｅｔでおきかえ、１−５および１６におけると同様に操作して、完 全に保護されたオクタヌクレオチドを得る。

８）　（Ｄｍｔｒ）α　−（Ｔｐ）　８　（ＣＨ２）　５　Ａｃｒ（Ｄｓｔｒ） ｃｒ　−（Ｔｐ）　８Ｃｎｅｔ　（０，０１ミリモル）を、ピリジン／トリエチ ルアミン（２：１（容量比）〕溶液０．３ＣＩ１１３を用いて、室温で２時間処 理する。減圧下に溶剤をおい出し、得られたジエステルを固体状態でエーテル洗 浄し、減圧下に乾燥する。次いで、ジエステルを、無水ピリジン中でＭ　Ｓ　Ｔ 　（０，０４ミリモル）の存在下に、２−メトキシ−６−クロロ−９−（ω−ヒ ドロキシペンチルアミノ）アクリジン０．０２ミリモルとカップリングさせる。

ついで、実施例１４と同様にして主題化合物の作製を終了する。

９）　”　−（Ｔｐ）　Ｂ　（ＣＨ２）　５Ａｃｒベンゾヒドロキサム酸（ＢＨ Ａ）及び１．８・ジアザビシクロ（５，４，０）ウンデク−７−エン（Ｄ　Ｂ　 Ｕ）を１モル含む無水ピリジン溶液（保護基を除去すべきアリールホスホトリエ ステル１当量あたりＢ１１１Ａ−ＤＢυ１０当量含有）を用いて、オクタヌクレ オチド（Ｄｍｔｒ）α−（Ｔｐ）　８　（ＣＨ２）　ｓ　Ａｃｒを室温で２４時 間処理する。

この反応媒体をＤｏｖｅｘ　５０　（ピリジニウム形）で中和し、減圧下に蒸発 させる。残渣を８０％酢酸を用いて室温で２〜３時間処理し、エタノールと共に 数回蒸発させて、酢酸を除去する。残渣に水を加え、水相をエーテル洗浄し、生 成物を高速液体クロマトグラフ法で精製する。精製物の保持時間を表■に示す。

実施例　ＸＩ （Ａｃｒ　（ＣＨ２）　５　）　ａ　−（ｐＴ）　８１）３′　−ベンゾイル− α−チミジン、α−Ｔｂｚ（Ｄｓｔｒ）α−Ｔ（１ミリモル）を無水ピリジンに とかした溶液に、室温で攪拌下塩化ベンゾイル（１，５ミリモル）を加える。混 合物を室温で４８時間放置する。氷水を加えて過剰の塩化ベンゾイルを破かいし 、ついで主題化合物の作製を実施例Ｘ−３におけると同様に終了する。

ＴＬＣ（システムＡ）　：Ｒ４０，３Ｂ収率　７５％２）　（Ｄｓｔｒ）ａ　− （ＴｐＴ）　ｂｚ実施例Ｘ−４におけると同様の操作を行なう。たソし、α−Ｔ ｐ−Ｃｎｅｔをα−Ｔｂｚでおきかえる。保護されたジヌクレオシドモノホスフ ェートが得られる。

３）　（Ｄｗｔｒ）ａ　−（（Ｔｐ）　３　Ｔ）　ｂｚジヌクレオチド（Ｄｍｔ ｒ）ａ　−（Ｔｐ）２　Ｃｎｅｔを（Ｄ　ｍｔｒ）α−（ＴｐＴ）ｂｚでおきか え、実施例Ｘ−６に従って操作し、保護されたテトラヌクラシドトリホスフェー トを得る。

４）　（Ｄａｔｒ）ａ　−（（Ｔｐ）　７Ｔ）　ｂｚ（Ｄｍｔｒ）ａ　−（（Ｔ ｐ）　３Ｔ）　ｂｚ　（１当量）からベンゼンスルホン酸を用いてトリチル基を 除去する。混合物にクロロホルムを加え、Ｎ　ａ　ＨＣＯｓ水溶液で洗い、乾燥 し、濃縮する。残渣に、（Ｄｍｔｒ）ａ−（Ｔｐ）　４　（実施例［５に従って （Ｄｍｔｒ）ａ　−（Ｔｐ）　、　Ｃｎｅｔよりシアノエチル基を除去して作製 したもの〕１．２当量を加える。この混合物をピリジンと共に蒸発させて乾燥し た後、そのピリジン溶液にＭＳＴ３当量を加え、混合物を攪拌下室源で２時間放 置する。主題化合物の作製を実施例Ｘ−６におけると同様に終了する。

５）　ａ　−Ｃ（Ｔ　ｐ　）　ｙ　Ｔ）　ｂｚ実施例Ｘｌ−４の化合物を、ベン ゼンスルホン酸〔２％、クロロホルム／メタノール（７：　３、容量比）にとか したもの〕を用いて０℃で１５分間処理する。

混合物にクロロホルムを加える。クロロホルム溶液をＮ　ａ　ＨＣＯａ水溶液で 洗い、乾燥し、減圧下で蒸発させる。以下の段階で（そう人あり。） ６）　（ｒ　−（ｐ（Ｔｐ）　７Ｔ）　ｂｚ攪拌下−２０℃、無水ピリジンにメ チルｐ−クロロフェニルクロロホスフェート６当量を加える。添加が終つたら、 攪拌を室温で１時間更に続け、α−（（Ｔｐ）ｙ　Ｔ）　ｂｚ１当量の溶液を加 える。室温で２時間反応を行なった後、氷水を加え、生成物をクロロホルムで抽 出する。

７）　［Ａｃｒ（ＣＭ　）　）　ａ　−（ｐ　（Ｔｐ）　７Ｔ）　ｂｚ２−メト キシ−６−クロロ−９−（ω−ヒドロキシペンチルアミノ）アクリジン（２当量 ）、α−〔ｐ（Ｔ　ｐ）　７Ｔ）ｂｚ（１当量）及びＭＳＴ　（３当量）の溶液 を、室温で２時間反応に付し、実施例Ｘ−４におけると同様に主題化合物の作製 を終了する。

８）　（Ａｃｒ　（ＣＨ２）　５　）　”　−（ｐＴ）　Ｂ保護されたオリゴヌ クレオチド（実施例Ｘｌ−７）を、ＢＨＡ−ＤＢＵ１モルを無水ピリジンにとか した溶液（保護基を除去すべき了り−ルホスホエステル１当量当りＢＨＡ−ＤＢ ＵＩＯ当量）を用いて、室温で攪拌下４８時間処理する。この混合物に０．４Ｍ 水酸化ナトリウム溶液２溶を加え、室温で１時間攪拌を行なう。反応媒体を塩酸 で中和した後、水相をエーテルで洗い、保護基の除去されたオリゴヌクレオチド を高速液体クロマトグラフで精製する（保持時間は表■に示されている）。

１）ビス（β−シアノエチル）ジイソプロピルアミノホスファイト エーテル（１０００１ｍ　）とベンゼン（５００！１３）の混合物にβ−シアノ エタノール（１５ＣＩｌ１３）及びトリエチルアミン（２０ｇ）をとかした溶液 に、ジクロロジイソプロピルアミノホスファイト２０．をベンゼン４０ａ＋＋３ にとかした溶液を、攪拌下−５℃で滴下する。滴下が終了したら、室温で１時間 攪拌を続け、濾過によりトリエチルアンモニウムハイドロクロライドを除去する 。減圧下に溶剤をおい出し、生成物を薄層蒸発（分子蓋ｆ）により精製する。

２）　ａ−（（Ｃｎｅｔ）　（（ｓ）　ｐ）　（Ｔｐ）ｙＴ）ｂｚビス（β−シ アノエチル）ジイソプロピルアミノホスファイト（５当量）をアセトニトリルに とかした溶液を、ａ　−Ｃ（Ｔｐ）　ｙ　Ｔ）　ｂｚ　（１当ｊｉｉ）及びテト ラゾール（１０当量）をＣＨ３ＣＮ／ＤＭＦ　（５０：５０、容量比）混合溶剤 にとかした無水溶液に、アルゴン雰囲気下に攪拌しながら加える。室温で３０分 間放置の後、この混合物に硫黄（５０当量）のピリジン懸濁物を加え、３０℃で ９０分間攪拌を行なう。過剰の硫黄を濾過で除き、溶剤を減圧下におい出し、残 渣にトルエンを加え、有機相をＮ　ａ　ＨＣ０３水溶液で洗い、乾燥し、濃縮す る。生成物をクロマトグラフ法によりシリカゲルを用いて精製する。

３）α−（（ｓｐ）　（Ｔｐ）　７　Ｔ）実施例Ｘｎ−２に従って作成したオク タヌクレオチドを、ＢＨＡ及びＤＢＵの１モル溶液（ホスホトリエステル１当量 当りＢＨＡ−ＤＢＵＩＯ当ｉｉ）を用いて室温で４８時間処理し、ついで、０． ６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液２容を用いて２４時間処理する。反応媒体を塩酸で 中和し、水相をエーテルで洗い、生成物を高速液体クロマトグラフ法で精製する 。保持時間を表■に示す。

ａ　−（（ｓｐ）（Ｔｐ）ｙ　Ｔ）（１当ｔｈ＞及び２−メトキシ−６−クロロ −９−（３−（Ｎ−（β−クロロエチル）プロピルアミノコエチル）アミノ）ア クリジン（４当ｆｆ１）をＤ　Ｍ　Ｓ　Ｏ／　ＨＯ／　Ｎ　ａ　ＨＣＯ３混合物 （２：２：１、容量比）にとかした溶液（水中濃度：５％）を、室温で５時間反 応に付す。生成物を高速液体クロマ１グラフ法で精製する。（そう人あり。）実 施例　Ｘ■ （Ｐｒｏｆ（ＣＨ）　）　ａ−Ｃ（ｓｐ）　（Ｔｌ））７　Ｔ）ａ　−（（ｓｐ ）　（Ｔｐ）ｙ　Ｔ）　（１当量）及びＮ−（β−ブロモブロピル）プロフラビ ン（５当量）をＤＭＳＯ／ＨＯ／　Ｎ　ａ　ＨＣＯａ混合物（２：２：１、容量 比）にとかした溶液（水中濃度：５％）を、室温で２０時間攪拌下に放置する。

生成物を高速液体クロマトグラフ法で精製する。（保持時間は表■に示しである 。）実施例　ＸＩＶ （Ｐｈｅ−ＣＨ）　ａ　−（（ｓｐ）　（Ｔｐ）ｙ　Ｔ）実施例Ｘｌｌ−４にお けるのと同様の操作を行なう。たりし、アクリジン誘導体を５−（Ｎ−イオドア セチルアミノ）−１，１０−フェナントロリンでおきかえる。生成物の保持時間 を表■に示す。

実施例　ＸＶ （Ａｕ　（ＣＨ）　）　ａ−（ｐＴ）８（ｐｓ）り　ａ−チミジン３′　−〔ビ ス（シアノエチル）チオホスフェート〕 （Ｄｇ＋ｔｒ）α−Ｔ（１当量）、テトラゾール（４当量）、ビス（β−シアノ エチル）ジイソプロピルアミノホスファイト（２当量）及び硫黄（３０当量）を 用い、実施例Ｘｎ−２に従って操作し、ＣＤ＋ｅｔｒ）ａ　−Ｔ（ｐ（ｓ））（ Ｃｎｅｔ）２を得る。ついで、このものを、実施例Ｘｉ５に従い、ベンゼンスル ホン酸を用いてトリチル基除去に付す。収率：５５％ ２）　ＣＤｍｔｒ）ａ　−Ｔ　ｐ　Ｔ）　（ｓ））　（Ｃｎｅｔ）２実施例Ｘ− ４におけると同様の操作を行なう。たソし、Ｑ　Ｔ　ｉ）　Ｃｎｅｔをａ　−Ｔ （ｐ（ｓ））　（Ｃｎｅｔ）２でおきかえる。ジヌクレオチドを得る。そのもの をクロマトグラフ法によりシリカを用いて精製する。〔溶離剤は、０８２０ｇ２ ／Ｈ２０／アセトン（３１：１：６ｇ、容量比）である。〕収率：約８４％ ３）　（Ｄｓｔｒ）ｄ　−（Ｔｐ）　６Ｃｎｅｔ実施例Ｘｌ−６におけると同様 の操作を行なう。たゾし、ジヌクレオチド（Ｄｓｔｒ）ａ　−（Ｔｐ）２Ｃｎｅ ｔをテトラヌクレオチド（Ｄｍｔｒ）α−（Ｔｐ）４Ｃｎｅｔでおきかえる。ヘ キサヌクレオチドが収率７５％で得られる。ＴＬＣ（システムＡ）：　Ｒｆ　− ０ＪＩ ４）（Ａｃｒ（ＣＨ２）　５）ａ−（ｐＴ）　６ｐ（Ｄｍｔｒ）ａ　−（Ｔｐ） ６Ｃｎｅｔを用い、実施例Ｘ　ｌ　−５゜Ｘｉ６およびＸｉ７に従って操作し、 （Ａｃｒ（ＣＨ２）５　）ａ　−（ｐＴ）、ｐＣｎｅｔを得る。このものを、実 施例［５に従ってトリエチルアミンで処理する。ＴＬＣ（システムＢ）　：　Ｒ ｆ　−０，４４５）　（Ａｃｒ　（ＣＨ２）　５　）　ａ　−（ｐＴ）ｇ　（ｐ （ｓ））　（Ｃｎｅｔ）２実施例Ｘ１４に従い、ＭＳＴ（３当量）の存在下に、 ヘキサヌクレオチド［Ａｃｒ　（ＣＨ２）　ｓ　）　ａ　−（ｐＴ）　６（１当 量）をジヌクレオチドａ　−（ＴｐＴ）（ｐ（ｓ））（Ｃｎｅｔ）２（１当量） （実施例ＸＶ−２の化合物を脱トリチルに付して作製したもの）とカップリング させて、オクタヌクレオチドを得る。生成物をシリカゲルを用いて精製する。

〔溶離剤として、ＣＨ２ＣｌＩ２／メタノール（５１：４〜９８：１４、容量比 ）を用いる。〕 ８）　（Ａｃｒ　（ＣＨ２）　ｓ　）　ａ　−（ｐＴ）　Ｂ　（ｐＳ）実施例Ｘ Ｖ−５に従って作製した化合物を用い、実施例Ｘｎ−３に従うで操作し、保護基 を脱離したオクタヌクレオチドを得る。保持時間を表■に示す。

（Ａｃｒ　（ＣＨ２）　５　）　ａ　−（ｐＴ）　ｇ　（ｐｓ）　（１当量）及 び４−アジドフェナシルブロマイド（４当量）をＤＭＳＯ／Ｈ２０／ＮａＨＣＯ ３混合物（２：２＝１、容量比）にとかした溶液（水中濃度＝５％）を、室温に １時間攪拌する。カップリング生成物を高速液体クロマトグラフ法で精製する。

保持時間を表■に示す。

実施例　Ｘ■ （Ａｃｒ　（ＣＨ２）　５）　ａ　−（ｐＴ）　Ｂ　（ｐＳ）Ｈ２ＣＯ− ブロモ酢ｗ１（６当量）を、オリゴヌクレオチド［Ａｃｒ　（ＣＨ２）　ｓ　］ 　ａ　−（ｐＴ）　ｓ　（ｐｓ）　（１当量）と、実施例ＸＶＩに従い室温で３ 時間反応させ名。生成物を高速液体クロマトグラフ法で精製する。保持時間を表 ｍに示す。

実施例　Ｘ■ Ｑ−ＣＴｐ）　（ＣＨ２）　６ＥＤＴＡＭｅａ（Ｄｍｔｒ）ａ　−（Ｔｐ）　（ １当量）　、Ｍ　ｅ　ｓ　Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａ（ＣＨ２）　６０Ｈ（３当量）及びＭ ＳＴ　（３当Ｒ）の溶液を、室温で１時間反応に付す。氷水を加えて過剰のカッ プリング試薬を破かいする。ついで、実施例Ｘ−３におけると同様にして主題化 合物の作製を終了する。

ＴＬＣ（シＸｆムＡ）：　Ｒｒ　Ｏ，４実施例　ＸＩＸ （Ａｅｒ（ＣＨ，、）５）ａ−ｄ　（ｐＣｐＣｐＴｐＴｐＡｐＴｐＡｐＴｐＴ） １）　（Ｄｓｔｒ）ａ　−ｄ　（ｂｚＡｐ）（ａ）３°、５°　−ジー　（ｐ− ニトロベンゾイル）β−Ｄ−チミジン（３，６ミリモル）及びＮ−ベンゾイルア デニン（１２ミリモル）をアセトニトリル（２２ｃａ３）に加えた混合物を、Ｔ 、山口及びＭ　、　Ｓ　ａｎｅｙｏｓｈｌの方法（ｃｈｅｗ。

Ｐｈａｒｍ、　Ｂｕｌ＋、　１９８４．　３２．１４４１−１４５０）に従い、 ビス（トリメチルシリル）アセタミド（１５ミリモル）で、ついでトリメチルシ リルトリフルオロメタンスルホネー）（４，７ミリモル）で処理する＊　ｐｒｅ ｐａｒａｔｔｖｅ　ｐｌａｔｅりｅｌ？トゲラフ法によりシリカゲルを用いて、 ３°、５゛−ジー　（ｐ−二トロベンゾイル）α−Ｄ−ｄ−（Ｎ−ベンゾイルア ゾ／シン）　（ＴＬＣ（システムＡ）　：　Ｒｆ−０，５５）と３°。

５°−ジー　（ｐ−ニトロベンゾイル）β−Ｄ−ｄ−（Ｎ−ベンゾイルアデノシ ン）誘導体（ＴＬＣ（システムＡ）：Ｒｆ−０，８３）とを分離する。

（ｂ）３°、５゛　−ジー　（ｐ−ニトロベンゾイル）α−Ｄ−ｄ−（Ｎ−ベン ゾイルアデノシン）（１ｇ）をジオキ用いて０℃で処理する。出発原料すべてが α−ｄ−Ｎ−ベンゾイルアデノシン〔ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｐ２／Ｈ２Ｃ−２）　（ １０：２０、容量比）　；　Ｒｆ−０，３１＋）に変換したら、アンバーライト ｌＲ１２０樹脂（ピリジニウムの形）を加えて反応媒体を中和する。ついで、ａ 　−ｄ　−ｂｚＡをクロマトグラフ法によりシリカゲルを用いて精製する。

（ｃ）　ａ　−ｄ　−ｂｚＡ　（１当量）を、無水ピリジンにとかした溶液をジ メトキシトリチルクロライド（１，１当量）を用いて、室温で４時間処理する。

ついで、実施例Ｘ−１及びＸ−２におけると同様にして、主題化合物の作製を終 了する。ＴＬＣ（システムＢ）　：　Ｒｆ　−０，３２２）　（Ｄｍｔｒ）ａ　 −ｄ　（ｂｚＡｐＴｐ）　Ｃｎｅｔ実施例Ｘ−４に（そう人あり）操作を行なう 。たソし、（Ｄｓｔｒ）α−’ｒｐを（Ｄ麿Ｌｒ）ａ　−ｄ　（ｂｚＡｐ）でお きかえる。完全に保護されたジヌクレオチドを得る。

Ｓ）　（Ｄｍｔｒ＞−ｄ　（ｂｚＡｐＴｐ）実施例Ｘ−５に従って、化合物Ｘ− ２を脱シアノエチルに付してジエステルを得る。

４）　（Ｄｓｔｒ）ａ　−ｄ　（ｂｚＡｐＴｐｂｚＡｐＴｐ）　Ｃｎｅｔ実施例 Ｘ−６におけると同様に操作を行なう。たりし、（Ｄｍｔｒ）ａ　−（ＴｐＴｐ ）Ｃｎｅｔ及び（Ｄｓｔｒ）ｃｒ　（ＴｐＴｐ）を、夫々実施例ＸＤ（・２及び ＸｌＸ−３の化合物によりおきかえる。保護されたテトラヌクレオチドが得られ る。

５）　（Ｄｌｔｒ）ａ　−ｄ　（ｂｚＡｐＴｐｂｚＡｐＴｐＴ）ｂｚジエステル （Ｄｉｔｒ）ａ　−ｄ　（ｂｚＡ　ｐ　Ｔ　ｐｂｚＡ　ｐ　Ｔ　ｐ）１当量）（ 実施例Ｘ−５に従い化合物ＸｌＸ−４を脱シアノエチルに付して作製したもの） を、実施例Ｘ　−４１：従い３′　−ベンゾイル−α−チミジン（１当量）とカ ップリングさせ、保護されたペンタヌクレオシドテトラホスフェートを得る。

Ｅｉ）　（Ｄｓｔｒ）ａ　−ｄ　（ｂｚＣｐ）３°、５°−ジアセチル−β−Ｄ −ｄ（Ｎ−ベンゾイルシチジン（Ｃｈｅｓ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｂｕｌｌ、　１９ ｇ４．　３２．１４４１−１４５０）を用い、実施例ＸｌＸ−１−ｂ及びＸｌＸ −１−Ｃにおけると同様に操作し、ジエステルを得る。ＴＬＣ（システムＢ）　 ：　Ｒｆ　−０，３２ ７）　（Ｉ）ｓｔｒ）ａ　−ｄ　（ｂｚｃｐｂｚｃｐＴｐＴＩ））　Ｃｎｅｔジ ヌクレオチドα−（Ｔｐ）２　Ｃｎｅｔ　（１当ｉｔ）　（実施例Ｘｌ−５に従 い（Ｄｍｔｒ）ａ　−（’ｒｐ）２Ｃｎｅｔを脱トリチルに付して作製したもの ）を、実施例Ｘ−４に従いＭＳＴ　（３当量）の存在下に、モノヌクレオチド（ Ｄｇｔｒ）ａ　−ｄｂｚＣｐ（１当量）とカップリングさせ、保護されたトリヌ クレオチドＣＤ＋ａｔｒ）ａ　−ｄ　（ｂｚＣｐ　Ｔ　ｐＴｐ）Ｃｎｃｔを得る 。このものを脱トリチルに付し、ついで、上記の如くジエステル（Ｄｍｔｒ）α −ｄｂｚＣｐとカップリングさせる。

８）　（Ｄｓｔｒ）α−ｄ　（ｂｚＣｐｂｚＣｐＴｐＴｐｂｚＡｐＴｐｂｚＡｐ ＴｐＴ）ｂｚ テトラヌクレオチド３′　−ホスホジエステル（Ｄｍｔｒ）ａ　−ｄ　（ｂｚＣ ｐｂｚＣｐ　Ｔ　ｐ　Ｔ　ｐ）　（１，２当量）（実施例Ｘｌ−５に従い化合物 ＸｌＸ−７を脱シアノエチルｔこ付して作製したもの）を、ペンタヌクレオチド α−ｄ（ｂｚＡｐＴ　１）ｂｚＡｐＴｐ）　ｂｚ　（１当量）（実施例Ｘｌ−５ に従い化合物ＸｌＸ−５を脱トリチルに付して得たもの）と、（実施例Ｘ−４に 従いＭＳＴ　（３当量）の存在下にカップリングさせ、保護されたノナヌクレオ チドを得る。ＴＬＣ（システムＡ）　：　Ｒ４−０，５５ａ）（Ａｃｒ　（ＣＨ ，２）５　）ａ　−ｄ　（ｐＣｐＣｐＴｐＴｐＡｐＴｐＡｐＴｐＴ） 化合物Ｘ−Ｓを用い、実施例Ｘｌ−５，Ｘｌ−６゜Ｘｌ７及びＸｌｌ−３におけ ると同様の操作を行な（１、保護基が脱離した生成物を得る。

アクリジン誘導体にカップリングしたα−Ｄ−オリゴヌクレオチドのヌクレアー ゼに対する安定性３′　−位置及び５′　−位置をアクリジンで置換した２種の α−Ｄ−オリゴヌクレオチドの、４種のヌクレアーゼによる加水分解速度を、相 当するβ−Ｄ−オリゴヌクレオチドの加水分解速度に比べて、次の表■に示す。

２種のエンドヌクレアーゼ（ＰＩ及びＳｌ）、２種のエクソヌクレアーゼ（５′ エクソ：子牛膵臓ホスホジェステラーゼ、３′エクソ：へと毒ホスホジェステラ ーゼ）の何れも、β−Ｄ−オリゴヌクレオチドに対してよりもα−Ｄ−オリゴヌ クレオチドに対し３０［１〜５ｏＯ（そう人あり）低活性を示す。表中の値は、 α−Ｄ−オリゴヌクレオチドの加水分解速度の、同じ配列のβ−Ｄ−オリゴヌク レオチドのそれに対する比である。

表　■ フェナントロリンにカップリングしたα−Ｄ−オリゴヌクレオチドによるＤＮＡ の特異開裂実施例ＸＩＶでのべるα−Ｄ−オリゴヌクレオチド（５ミクロンモル ）を、１０ｍＭカコジル酸ナトリウム及び特表平１−５０２１８７（３１） ０．１Ｍ　ＮａＣＮを含む緩衝溶液（ｐＨ７）にとかす。

そのものを、５−位置を放射性燐で置換した配列５゛ ｄ（ＴＧＡＧＴＧＡＧＴＡＡＡＡＡＡＡＡＴＧＡＧＴＧＣＣＡＡ　”）の一本来 ＤＮＡ断片（１０ナノモル）に加える。硫酸第二銅（１ミクロンモル）及びβ− メルカプトプロピオン酸（１ミリモル）を０℃で加え、混合物を０℃で３時間培 養する。ｂａｔｈｏｃｕｐｒｏｊｎを加え、反応を中止させる。

混合物を１８％ポリアクリルアミドゲル上におき、電気泳動に付す。オートラジ オグラフィーを行なうと、１ｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎによりａ−Ｄ−オリゴヌク レオチドがへ８配列と平行配向をしていることを示すバンドの出現により、開裂 位置を知る。

二本糸ＤＮＡ断片 ５°ＴＧＡＧＴＧＡＧＴＡＡＡＡＡＡＡＡＴＧＡＧＴＧＣＣＡＡ　５゜”ＡＣＴ ＣＡＣＴＣＡＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＴＣＡＣＧＧＴＴ　３゜の存在下に培養した 同じオリゴヌクレオチドは、１ｍＭスペルミンの存在下に二重らせん構造のそれ ぞれの糸に開裂を起す。二本糸の開裂位置から、α−Ｄ−オリゴチミジレートＸ ＶＩはＡ８配列を含む糸に”Ｊ？−Ｈ配向していることが分る。

実施例　ＸＸ■ 光活性のα−Ｄ−オリゴヌクレオチド誘導体による共有結合及び開裂 実施例ＸＶＩにのべる分子を、実施例ＸＸＩにのべる條件下で、一本来ＤＮＡ断 片及び二本糸ＤＮＡ断片（何れも５′　−位置で放射性！換を施しである）の存 在下に０℃で培養する。

混合物を３０Ｑｎｔｘより大きい波長の光で０℃で照射し、ついで、１Ｍピペリ ジンを用いて９０℃で２０分間処理する。

得られた試料を１８％ポリアクリルアミドゲル上におき、電気泳動に付す。オー トラジオグラフィーを行なうと、非常に正確な位置における目標ＤＮＡの開裂に 相当するバンドがみられる。これは、α−〇−オリゴチミジレート■が、−水糸 ＤＮＡ、二水糸ＤＮＡ何れの場合にもＡ８配列に王旦三結合していることを示す 。後者の場合、開裂は両方の糸にみられる。

試料をピペリジン処理する前に電気泳動を行なうと、開裂はみられない。最初の ＤＮＡ断片よりゆっくり移動する分子がみられる。それらは、α−Ｄ−オリゴチ ミリデートＸＶＩと目標として使用したＤＮＡの塩基との共存結合生成物に相当 する。

、０−　５　１０　１５　２０ 時間（分） ”　ＦＩＧＵＲＥ　１　。

Ｆ工ＧｔＪＲＥ　２ 平成１年５月２日

Claims (39)

【特許請求の範囲】
1. １．オリゴヌクレオチドまたはオリゴデオキシヌクレオチドからなる化学化合物 であって、非天然のαアノマー立体配置を有するヌクレオチドもしくはデオキシ ヌクレオチドの配列を有し、その配列が、エフェクター剤と任意に結合可能であ り、特に、層間剤に対応するラジカル、化学的にもしくは光によって活性化可能 なラジカル、ヌクレオチド連鎖と直接もしくは間接に反応する基を有するラジカ ル、またはその存在が容易にかつ敏感に検出できるラジカルと結合可能である化 学化合物。
2. ２．オリゴヌクレオチドまたはオリゴデオキシヌクレオチドからなる化学化合物 であって、非天然のαアノマー立体配置を有するヌクレオチドもしくはデオキシ ヌクレオチドの配列を有し、その配列がエフェクターラジカルと結合していない 請求の範囲第１項記載の化学化合物。
3. ３．式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中、ラジカルＢは、同一もしくは 異なっていてもよく、各々任意に修飾された該酸塩基を意味し、活性化可能およ び／または層間基を有し、かつ非天然のαアノマー立体配置のグリコシド環に結 合している； ラジカルＸは。同一もしくは異なっていてもよく、各々オキソ（ｓｉｃ）アニオ ンＯ−、チオ（ｓｉｃ）アニオンＳ−、アルキル基、アルコキシ基、アリールオ キシ基、アミノアルキル基、アミノアルコキシ基、チオアルキル基、窒素原子を 有する複素環基で置換されたアルキル基もしくはアルコキシ基、または基・Ｙ・ Ｚを意味する； ＲとＲ′は、同一もしくは異なっていてもよく、各々水素原子または基−Ｙ−Ｚ もしくはＹ′−Ｚ′を意味する； ＹとＹ′は同一もしくは異なってもよく、各々、線状もしくは分枝アルキレンラ ジカル−ａｌｋ−または下記ラジカル： ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数 式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化 学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、 表等があります▼▲数式、化学式、表等があります▼ （上記ラジカル中、ＵはＯ，ＳまたはＮ；Ｅは、Ｙ−ＺもしくはＹ′−Ｚ′を除 いてＸと同じラジカルを意味する）から選択されたラジカル； Ｊは、水素原子またはヒドロキシル基；ＺとＺ′は、同一もしくは異なっていて もよく、各々、エフェクター剤に対応するラジカル、特に、層間剤に対応するラ ジカル、ヌクレオチド連鎖と直接もしくは間接に反応する基を有するラジカルま たはその存在が容易かつ敏感に検出できるラジカルを意味する、（ｓｉｃ）： ｎはｏを含む整数； Ｌは、酸素原子、硫黄原子または−ＮＨ−基を意味する〕 で表される請求の範囲第１項または第２項に記載の化合物。
4. ４．ＹとＹ′が、下記ラジカル： ▲数式、化学式、表等があります▼， ▲数式、化学式、表等があります▼， ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼（上記 ラジカル中、ＵはＯ，ＳまたはＮ）から選択されたラジカルを意味する請求項第 ３項に記載の化合物。
5. ５．一般式（Ｉ）において、 Ｌが硫黄原子または−ＮＨ−基を意味する場合、ラジカルＲとＲ′が、同一もし くは異なっていてもよく、各々水素原子または基−Ｙ−ＺもしくはＹ′−Ｚ′を 意味する〔上記基のＹとＹ′は、同一もしくは異なっていてもよく、各々、線状 もしくは分枝アルキレンラジカル（−ａｌｋ−）または下記ラジカル：▲数式、 化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、 化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、表等があります▼（上記ラジ カル中、Ｅは、Ｘと同じ意味ラジカル、ラジカル−ａｌｋ−Ｏ−ａｌｋ、ラジカ ル−ａｌｋ−ＣＯＮＨ−ａｌｋ−または下記ラジカル： ▲数式、化学式、表等があります▼またはラジカル▲数式、化学式、表等があり ます▼を意味し、およびＺとＺ′が、同一もしくは異なっていてもよく、各々、 層間剤に対応するラジカル、ヌクレオチド連鎖と直接もしくは間接に反応する基 を有するラジカルまたはその存在が容易にかつ敏感に検出可能な基を意味する〕 ； Ｌが酸素原子を意味する場合、 ラジカルＲとＲ′が、同一もしくは異なっていてもよく、各々水素原子または基 −Ｙ−Ｚ−もしくはＹ′−Ｚ′を意味する（上記基のＹ，Ｙ′，ＺおよびＺ′は 前記定義と同一、但しラジカルＲとＲ′の少なくともひとつは層間ラジカルもし くは反応性の化学ラジカルを有する）； Ｌが酸素原子を意味する場合、 ＲとＲ′が各々、水素原子を意味し；Ｂが、活性可能および／または層間基を有 する修飾された核酸塩基を意味する； 請求の範囲第３項に記載の化合物。
6. ６．層間剤のＺもしくはＺ′が、平坦な立体配置を有する多環式化合物から選択 される請求の範囲第３〜５項のいずれかに記載の新規誘導体。
7. ７．層間剤ＺもしくはＺ′が、アクリジンとその誘導体、フロクマリンとその誘 導体、ダウノマイシンなどのアントラシクリン誘導体、１，１０−フェナントロ リン、フェナントロリンとその誘導体、プロフラビン、ポルフィリン、ジピリジ ド〔１，２−ａ：３′，２′−ｄ〕イミダゾール誘導体、エリブチシンもしくは エリブチシニウムとその誘導体、およびジアザピレンとその誘導体である請求の 範囲第６項に記載の新規誘導体。
8. ８．反応性の化学基ＺもしくはＺ′が、エチレンジアミン四酢酸、ジエチレント リアミン五酢酸、ポルフィリン、１，１０−フェナントロリン、４−アジドアセ トフェノン、エチレンイミン、β−クロロエチルアミン、ブソラレンおよびそれ らの誘導体から選択される請求の範囲第３〜５項のいずれかひとつに記載の新規 誘導体。
9. ９．特にペンタメチレン連鎖を介して、Ｎ２−メチル−９−ヒドロキシエリブチ シニウムアセテートの誘導体と、共有結合したα−オリゴヌクレオチドからなる 請求の範囲第３〜７項のいずれかひとつに記載の化合物。
10. １０．ラジカルＢが、チミン、アデニン、２−アミノアデニンとその置換誘導体 、シトシン、グアニンとその置換誘導体、ウラシル、５−ブロモウラシル、８− アジドアデニン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、４−アジドシトシ ン、４−アジドチミンならびに層間基および／または化学的にもしくは光化学的 に活性化しうる基を有する上記塩基の誘導体である請求の範囲第３〜９項のいず れかひとつに記載の新規誘導体。
11. １１．α〔（Ｔｐ）ｎＴ〕（Ｙ１）Ｚ１；Ｚ２（Ｙ２）α−（Ｔｐ）ｎＴ〕；Ｚ ２（Ｙ２）α−〔Ｔｐ）ｎＴ〕（Ｙ１）Ｚ１：Ｚ２（Ｙ２）α−ｄ（ＣｐＣｐＴ ｐＴｐＡｐＴｐＡｐＴｐＴ）｛式中、Ａはα−Ｄ−デオキシアデノシンラジカル を意味し、Ｃはα−Ｄ−デオキシシチジンラジカルを意味し、Ｔはα−Ｄ−チミ ジンラジカルを意味し、ｎは１〜２５の整数を意味し、Ｙ１とＹ２は１〜１０の 炭素原子を有するアルキレンラジカルを意味し、Ｚ１と２２は各々、アクリジン 誘導体、プロフラビン誘導体、１，１０−フェナントロリン誘導体、４−アジド アセトフェノン誘導体、ＥＤＴＡ誘導体またはビオチン誘導体を意味する｝から 選択される請求の範囲第３〜１０項のいずれかひとつに記載の新規誘導体。
12. １２．α−Ｄ−オリゴヌクレオチド化合物である請求項第１〜１１項のいずれか ひとつに記載の化合物。
13. １３．ホスホジエステル、ホスホトリエステル、ホスホラミダイトまたはハイド ロジエノホスホネートの合成法が適用され、α−ヌクレオシドを出発物質として 用い、十分に保護された誘導体が製造され、次いで保護された基が除去される、 請求項第３〜１２項のいずれかひとつに記載された（ｓｉｃ）α−オリゴヌクレ オチドの製造方法。
14. １４．保護されたα−Ｄ−オリゴヌクレオチド３′−ホスホジエステルを、層間 剤または反応性化学基のヒドロキシルとカッブリングさせるか、またはすでに層 間剤もしくは反応性化学基を有する保護されたα−Ｄ−オリゴヌクレオチドの５ ′−ヒドロキシル基とカッブリングさせる請求の範囲第１３項記載の方法。
15. １５．保護されたα−ヌクレオチド５′−ホスホジエステルを、その層間剤もし くは反応性化学基のヒドロキシ基とカッブリングさせるか、または層間剤もしく は反応性化学基を有するジエステルを、保護されたα−Ｄ−オリゴヌクレオチド の５′−ヒドロキシル基とカッブリングさせる請求の範囲第１３項記載の方法。
16. １６．層間剤もしくは反応性化学基のヒドロキシル基を、保護されたα−Ｄ−オ リゴヌクレオチド３′，５′−ビス（ホスホジエステル）とカッブリングさせる 請求の範囲第１３項記載の方法。
17. １７．層間剤もしくは反応性化学基を有するジエステルを、ずでに層間剤もしく は反応性化学基を有する保護されたα−Ｄ−オリゴヌクレオチドの５′−ヒドロ キシル基とカッブリングさせる請求の範囲第１３項記載の方法。
18. １８．アリールホスホエステル基の脱保護を、無水媒体中で、非求核性第三級塩 基の存在下、ベンゾヒドロキサム酸を用いて行う請求の範囲第１３項記載の方法 。
19. １９．ヌクレオチド連鎖の３′末端もしくは５′末端の一つまたは３′末端と５ ′末端との両者にチオホスフェート基を有する保護されていないα−Ｄ−オリゴ ヌクレオチド誘導体が製造される、請求の範囲第３〜１２項のいずれかひとつに 記載の新規誘導体の製造方法。
20. ２０．保護されていないα−Ｄ−オリゴヌクレオチド３′−チオホスフェートを 、層間剤もしくは化学基を有するハロアルキルとカッブリングさせる請求の範囲 第１９項記載の方法。
21. ２１．保護されていないα−Ｄ−オリゴヌクレオチド５′−チオホスフェートを 、層間剤もしくは化学基を有するハロアルキルとカッブリングさせる請求の範囲 第１９項記載の方法。
22. ２２．保護されていないα−Ｄ−オリゴヌクレオチド３′，５′−ビス（チオホ スフェート）を、層間剤もしくは化学基を有するハロアルキルとカッブリングさ せる請求の範囲第１９項記載の方法。
23. ２３．β−アノマーが用いられる典型的なホスホトリエステル法であるが、グア ニンのα−ヌクレオチド誘導体が、追加の基、好ましくはＮ，Ｎジフェニルカル バモイル基によってＯ６位で保護される、請求の範囲第３〜１２項に記載のα− オリゴヌクレオチドの製造方法。
24. ２４．（ａ）例えば５′位にジメトキシトリチル基および３′位にメチルジイソ プロピルアミノホスホラミダイト基を有する出発物質のヌクレオチドもしくはオ リゴヌクレオチドの３′位と５′位の保護；（ｂ）α−ヌクレオシド誘導体の３ ′−ヒドロキシル基と固体担体のアミノ基面に、例えばスクシニル基のような結 合手を用いて、α−ヌクレオシド誘導体を導入する、固体担体のファンクショナ ライゼーション；（ｃ）合成リアクター内でのオリゴヌクレオチド連鎖の延長； および （ｄ）最後に延長されたオリゴヌクレオチドの脱離，脱保護および精製、 からなるホスホラミダイト法によって、支持された合成が行われる、請求の範囲 第２項または３項に記載の、エフェクター剤を用いずに化合物を合成する方法。
25. ２５．出発物質が、５′位が保護されたエフェクター剤なしのオリゴヌクレオチ ドであり、その３′−ＯＨ末端を、第２官能基が保護されている二宮籠手の保護 されていない官能基と反応させ、得られた生成物を脱保護した後、前記生成物を 、二官能手の遊離の第２官能基を介してエフェクター剤と結合させる、請求の範 囲第３〜１２項のいずれかひとつに記載の、エフェクター剤を有する化合物を合 成する方法。
26. ２６．５′位が保護されたオリゴマーの３′−ＯＨ末端を、アミン基が保護され ているアミノヘキサン酸でエステル化する請求の範囲第２５項記載の方法。
27. ２７．相補的β−オリゴヌクレオチド配列と平行に対合させる、請求の範囲第３ 〜１２項のいずれかひとつに記載の化合物の用途。
28. ２８．前記化合物が、診断もしくは予報のために、指定の一重鎖もしくは二重鎮 らせんのＤＮＡもしくはＲＮＡ配列に対するハイブリッド形成プローブもしくは 精製成分として用いられる、請求の範囲第３〜１２項のいずれかひとつに記載の 化合物の用途。
29. ２９．前記化合物が、ＤＮＡもしくはＲＮＡのレベルでの突然変位を検出するの に用いられる、請求の範囲第３〜１２項のいずれかひとつに記載の化合物の用途 。
30. ３０．前記化合物が、予め選択された、細胞遺伝子、またはウイルス、細菌もし くは寄生生物のような病原因子を特異的に阻害するのに用いられる、請求の範囲 第３〜１２項のいずれかひとつに記載の化合物の用途。
31. ３１．細胞、ウイルス、細菌もしくは寄生生物の起源の遺伝子もしくはそのメッ センジャーＲＮＡのハイブリッド形成、選択的開裂もしくは化学的修飾によって 、遺伝子の発現を選択的に阻害するための、請求の範囲第３〜１２項のいずれか ひとつの誘導体の用途。
32. ３２．ウイルスＲＮＡもしくはそのメッセンジャーＲＮＡのハイブリッド形成、 開裂もしくは化学的修飾によって、ウイルスのＲＮＡの発現を選択的に阻害する ための請求の範囲第３〜１２項のいずれかひとつの誘導体の用途。
33. ３３．前記化合物が、塩基配列に対して特異的な人造ヌクレアーゼとして使用さ れる、請求の範囲第３〜１２項のいずれかひとつに記載の化合物の用途。
34. ３４．抗ウイルス剤、抗腫瘍剤、抗生物質または抗寄生生物剤として、または突 然変位もしくは異常によって遺伝子が異常に発現される病理的状態にある場合に 使用される、医薬製品としての、請求の範囲第３〜１２項のいずれかひとつに記 載の化合物。
35. ３５．診断もしくは予報のために、指定の一重領もしくは二重鎖らせんのＤＮＡ もしくはＲＮＡの塩基配列を検出するプローブとしての、 一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＪとＸは請求の範囲第３項における定義と同一およびＢは天然の核酸塩 基を意味する）で表されるα−Ｄ−オリゴヌクレオチド誘導体の用途。
36. ３６．指定の一重鎮もしくはらせんのＤＮＡもしくはＲＮＡの塩基配列を精製す るための、請求の範囲第３５項に定義した誘導体の用途。
37. ３７．細胞、ウイルス、細菌もしくは寄生生物起源の遺伝子もしくはそのメッセ ンジャーＲＮＡのハイブリッドを選択的に形成することによって、遺伝子の発現 を選択的に阻害するための、請求の範囲第３５項に定義した誘導体の用途。
38. ３８．ウイルスＲＮＡもしくはそのメッセンジャーＲＮＡの発現を選択的に阻害 するための、請求の範囲第３５項で定義した誘導体の用途。
39. ３９．抗ウイルス、抗腫瘍剤、抗生物質もしくは抗寄生生物剤として、または突 然変位もしくは異常によって遺伝子が異常に発現する病理的状態において用いる 、新親な医薬製品としての、請求の範囲第３５項で定義した誘導体。