FI110938B

FI110938B - Menetelmä virusperäisten proteaasien inhiboimiseksi käyttökelpoisten karboksiamidijohdannaisten valmistamiseksi ja menetelmässä käytettäviä välituotteita

Info

Publication number: FI110938B
Application number: FI922094A
Authority: FI
Inventors: Joseph Armstrong Martin; Gareth John Thomas
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1991-05-10
Filing date: 1992-05-08
Publication date: 2003-04-30
Also published as: EP0512343B1; HUT61972A; DK0512343T3; IL101770A; RO109540B1; MX9202146A; EP0512343A3; CS138492A3; NO300496B1; JPH06102639B2; CA2067690A1; DE69203780D1; AU660308B2; IL112900A; IS1747B; FI922094A0; SK281183B6; JPH05155834A; EP0512343A2; DE69203780T2

Description

110938

Menetelmä virusperäisten proteaasien inhiboimiseksi käyttökelpoisten karboksiamidijohdannaisten valmistamiseksi ja menetelmässä käytettäviä välituotteita 5 Tämä keksintö koskee karboksiamidijohdannaisten valmistusta, jotka ovat käyttökelpoisia virusperäisten proteaasien inhiboimiseksi, ja joilla on kaava 10 R3^ r5'"/^r6 15 jossa R1 tarkoittaa Ci_8-alkoksikarbonyyliä tai ryhmää, jolla on kaava

O

20 r9 R2 tarkoittaa aryyli-Ci_8-alkyyliä; R3 tarkoittaa vetyä ja R4 tarkoittaa hydroksia tai R3 ja R4 tarkoittavat yhdessä oksoa; R5 tarkoittaa Ci-8-alkoksikarbonyyliä tai Ci_8-25 alkyylikarbamoyyliä; R6 ja R7 tarkoittavat yhdessä tetrametyleeniä; R8 tarkoittaa Ci-8-alkoksikarbonyyliä, aryyli-Ci_8-alkoksikarbonyyliä, Ci_8-alkanoyyliä, aryylikarb-onyyliä tai kinolyylikarbonyyliä; ja R9 tarkoittaa Ci-8-alkyyliä, aryyli-Ci_8-alkyyliä, syaani-Ci_8-30 alkyyliä, karbamoyyli-Ci-8-alkyyliä, Ci_8-alkyylitio-Ci-8-alkyyliä tai Ci-e-alkoksikarbonyyli-Ch-a-alkyyliä, ja niiden kaavan I mukaisten yhdisteiden, jotka ovat emäksisiä, farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistusta. Keksintö koskee myös valmistuksessa käyttö-35 kelpoisia välituotteita.

2 110938

Kaavan I mukaiset yhdisteet ja niiden suolat ovat uusia ja niillä on arvokkaita farmakologisia ominaisuuksia. Erityisesti ne ehkäisevät virussyntyisiä as-partyyliproteaaseja ja niitä voidaan käyttää virusten ai-5 heuttamien infektioiden ennakoltaehkäisyyn ja käsit telyyn, erityisesti sellaisten infektioiden ollessa kysymyksessä, joita ovat aiheuttaneet HIV ja muut retroidivi-rukset.

Kaavan I mukaisen yhdisteryhmän määrittelyssä 10 termi "alkyyli", yksinään tai yhdistelmässä tarkoittaa suoraketjuista tai haarautunutta alkyyliryhmää, joka sisältää enintään 8, edullisesti enintään 4 hiiliatomia, kuten metyyliä, etyyliä, n-propyyliä, isopropyyliä, n-butyyliä, isobutyyliä, sek.-butyyliä, tert.-butyyliä, n-15 pentyyliä, n-heksyyliä ja näiden kaltaisia. Termi "alkoksi" tarkoittaa, yksinään tai yhdistelmässä, alkyylieetteriryhmää, jossa termillä "alkyyli" on edellä , mainittu merkitys, kuten metoksia, etoksia, n-propoksia, isopropoksia, n-butoksia, isobutoksia, sek.-butoksia, 20 tert.-butoksia ja näiden kaltaisia. Termi "aryylialkyyli" tarkoittaa edellä määriteltyä alkyyliryhmää, jossa yksi vetyatomi on korvattu aryyliryhmällä, s. o. fenyyli- tai naftyyliryhmällä, jossa on mahdollisesti yksi tai useampia j - substituentteja, jotka on valittu seuraavista: alkyyli, 25 alkoksi, halogeeni, trifluorimetyyli, hydroksi, nitro, amino ja näiden kaltaiset. Esimerkkejä aralkyyliryhmistä ovat bentsyyli, 4-klooribentsyyli, 4-metoksibentsyyli, 2-fenyylietyyli, 2-naftyylietyyli ja näiden kaltaiset. Termi ' ' "alkanoyyli" tarkoittaa asyyliryhmää, joka on johdettu 30 alkaanikarboksyylihaposta, kuten asetyyliä, propionyyliä, ' ' butyryyliä, valeryyliä, 4-metyylivaleryyliä ja näiden kaltaisia. Termi "aryylikarboyyli" tarkoittaa bentsoyyli-tai naftoyyliryhmää, jossa mahdollisesti on yksi tai . · useampia substituentteja, jotka on valittu seuraavista: 35 alkyyli, alkoksi, halogeeni, trifluorimetyyli, hydroksi, nitro, amino ja näiden kaltaiset, kuten bentsoyyliä, p- 3 110938 klooribentsoyyliä, 3,5-diklooribentsoyyliä, 1-naftoyyliä ja näiden kaltaisia.

Farmaseuttisesti hyvksyttäviä happoadditiosuoloja muodostetaan kaavan I mukaisten emäksisten yhdisteiden ja 5 epäorgaanisten happojen, esim. halogeenivetyhappojen, kuten kloorivetyhapon ja bromivetyhapon, rikkihapon, typpihapon, fosforihapon jne. kesken, tai orgaanisten happojen, esim. etikkahapon, sitruunahapon, maleiinihapon, fumaari-hapon, viinihapon, metaanisulfonihapon, p-tolueeni-10 sulfonihapon jne. kesken.

Kaavan I mukaiset yhdisteet sisältävät vähintään kolme asymmetristä hiiliatomia ja sen vuoksi ne esiintyvät optisesti puhtaiden diastereoisomeerien, diastereo-isomeerien seosten, diastereoisomeeristen rasemaattien tai 15 diastereoisomeeristen rasemaattien seosten muodossa. Esillä olevan keksinnön puitteisiin kuuluvat kaikki nämä muodot .

Kaavan I mukaisissa yhdisteissä R1 tarkoittaa edullisesti alkoksikarbonyyliä, erityisesti tert.-butok-20 sikarbonyyliä, tai ryhmää, jolla on kaava (i) , jossa R8 "!! tarkoittaa aralkoksikarbonyyliä, erityisesti bentsyy- lioksikarbonyyliä, aroyyliä, erityisesti 3,5-diklooribentsoyyliä, tai 2-kinonyylikarbonyyliä, ja R9 tarkoittaa alkyyliä, erityisesti isopropyyliä tai tert.-25 butyyliä, aralkyyliä, erityisesti bentsyyliä, syaani-. : alkyyliä, erityisesti syaanimetyyliä, karbamoyylialkyyliä, erityisesti karbamoyylimetyyliä, alkyylitioalkyyliä, : erityisesti metyylitiometyyliä, tai alkoksikarbon- yylialkyyliä, erityisesti metoksikarbonyylimetyyliä. R3 ' , 30 tarkoittaa edullisesti bentsyyliä. R3 tarkoittaa edul lisesti vetyä ja R4 tarkoittaa edullisesti hydroksia. Jos R5 tarkoittaa alkoksikarbonyyliä, niin tämä on edullisesti metoksikarbonyyli, ja jos R5 tarkoittaa alkyylikarba-- · moyyliä, niin tämä on edullisesti tert.-butyy- 35 lika rbamoyy1i.

4 110938

Edellä olevasta voidaan päätellä, että erityisen edullisia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat ne, joissa R1 tarkoittaa tert.-butoksikarbonyyliä tai kaavan {i) mukaista ryhmää, jossa kaavassa R8 tarkoittaa bents-5 yylioksikarbonyyliä, : 3,5-diklooribentsoyyliä tai 2-kinolyylikarbon- yyliä, ja R9 tarkoittaa isopropyyliä, tert.-butyyliä, bentsyyliä, syaanimetyyliä, karbamoyylimetyyliä, metyy-litiometyyliä tai metoksikarbonyylimetyyliä, R2 tarkoittaa 10 bentsyyliä, R3 tarkoittaa vetyä ja R4 tarkoittaa hydroksia ja R5 tarkoittaa metoksikarbonyyliä tai tert.-butyylikarbamoyyliä.

Eräs erityisen edullinen kaavan I mukainen yhdiste on: 15 2(S) -[3(S)-[[N-(2-kinolyylikarbonyyli)-L-aspara- ginyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi.

Muita erityisen edullisia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat: - 20 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyyli)-3-syaani- L-alanyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.- 3 butyyli-1(R)-syaaniheksaanikarboksamidi, 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyyli)-L-valyy-li]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-25 1(R)-sykloheksaanikarboksamidi, 2 (S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyyli)-L-fenyy-lialanyyli]amino]-2-(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi, 2(S)—[3—(S)—[[N—(2-kinolyylikarbonyyli)-L-valyy-30 li]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1 (R)-sykloheksaanikarboksamidi, 2 (S)- [3 (S)-[[N-bentsyylioksikarbonyyli)-S-metyyli-L-kysteinyyli[amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi, 5 110938 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyyli)-L-valyy-li]amino]-2-okso-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi, 2 (S) -[3(S)-[[N-bentsyylioksikarbonyyli)-O-metyyli-5 L-aspartyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi, 2 (S)-[3(S)-[[N-(3,5-diklooribentsoyyli)-L-aspara-ginyyli]amino]-2-(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi, 10 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyyli)-3-metyy- li-L-valyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi ja metyyli-2(S)-[3(5)-(tert.-butoksiformamido)-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-1(R)-sykloheksaanikarboksy-15 laatti.

Esimerkkejä muista kiintoisista kaavan I mukaisista yhdisteistä ovat: 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyyli)-L-aspara-ginyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-20 butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi, 2(S)-[3(S)-(tert.-butoksiformamido)-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi, 2(R)-[3(S)-(tert.-butoksiformamido)-2(R)-hydroksi-25 4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi ja 2(R)-[3(S)-[{N-(bentsyylioksikarbonyyli)-L-aspara-ginyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi.

30 Kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden farma seuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja voidaan valmistaa siten, että a) kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, , , . joissa R1 tarkoittaa Ci-e-alkoksikarbonyyliä, R3 tarkoittaa 35 vetyä ja R4 tarkoittaa hydroksia, yhdistettä, jonka kaava on 6 110938 R2 s "’'\^γγΒ' (II>

H—0 A

ch3 10 jossa Rla tarkoittaa Ci-a-alkoksikarbonyyliä ja R2, R5, R6 ja R7 tarkoittavat samaa kuin edellä, käsitellään hapon kanssa, tai (b) yhdiste, jonka kaava on 15 R2

1 R7 (HU

h

r3^^b< I

20 jossa R2, R3, R4, R5, R6 ja R7 tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan asylointiaineen kanssa, joka tuo molekyyliin edellä määritellyn ryhmän R1, tai (c) kaavan I mukaisten yhdisteiden valmista-25 miseksi, joissa R1 tarkoittaa kaavan (i) mukaista ryhmää, ; yhdiste, jonka kaava on H R2 H2Nv^nAavr7 (iv)

30 T, hr^r4T

r5A^r6 jossa R2, R3, R4, R5, R6, R7 ja R9 tarkoittavat samaa kuin 35 edellä, saatetaan reagoimaan asylointiaineen kanssa, joka tuo molekyyliin edellä määritellyn ryhmän R8, tai 7 110938 (d) kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R3 ja R4 tarkoittavat yhdessä oksoa, kaavan I mukainen yhdiste, jossa kaavassa R3 tarkoittaa vetyä ja R4 tarkoittaa hydroksia, hapetetaan, ja/tai 5 (e) haluttaessa diastereoisomeeristen rasemaattien seos erotetaan diastereoisomeerisiksi rasemaateiksi tai optisesti puhtaiksi diastereoisomeereiksi, ja/ tai (f) haluttaessa diastereoisomeerien seos erotetaan optisesti puhtaiksi diastereoisomeereiksi, ja/tai 10 (g) haluttaessa saatu kaavan I mukainen emäksinen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happo-addtiosuolaksi.

Kaavan II mukaisen yhdisteen käsittely hapon kanssa menetelmän suoritusmuodon (a) mukaan antaa kaavan I mu-15 kaisen yhdisteen, jossa R1 tarkoittaa alkoksikarbonyyliä, R3 tarkoittaa vetyä ja R4 tarkoittaa hydroksia. Tässä suoritusmuodossa käytetty hapon tyyppi riippuu oleellisesti kaavan II mukaisessa lähtöaineessa olevan substituentin Rla luonteesta. Jos Rla tarkoittaa esim. tert.-20 butoksikarbonyyliä, suoritetaan käsittely edullisesti käyttämällä voimakasta orgaanista happoa, erityisesti orgaanista sulfonihappoa, kuten alkaanisulfonihappoa, esim. metaanisulfonihappoa jne. tai aromaattista sulfonihappoa, esim. bentseenisulfonihappoa, p-tolueenisulfonihappoa, me- ; 25 sityleenisulfonihappoa jne. ja sellaisen orgaanisen liuot- timen läsnä ollessa, joka on inertinen reaktio-olosuhteissa, esim. alkanolin, kuten metanolin, etanolin jne. läsnä ollessa. Halogenoitua alkaanikarboksyylihappoa, esim. trifluorietikkahappoa jne. voidaan kuitenkin käyttää J . 30 orgaanisen sulfonihapon sijasta.

Kaavan III mukaisen yhdisteen reaktio asy-lointiaineen kanssa voidaan menetelmän suoritusmuodon (b) mukaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla käyttämällä asylointiaineena vastaavaa happoa tai sen reaktiivista 35 johdannaista. Sopivia reaktiivisia johdannaisia ovat happohalogenidit, esim. happokloridit, happoanhydridit, 8 110938 anhydridiseokset, aktivoidut esterit jne. Jos asy-lointiaine on sellainen, joka tuo kaavan (i) mukaisen ryhmän, suoritetaan reaktio sopivasti käyttämällä happoa kondensaatioaineen, esim. disykloheksyylikarbodi-imidin 5 tai bentsotriatsol-l-yylioksi-tris(dimetyyliamino)fos-foniumheksafluorifosfaatin läsnä ollessa, ja emäksen, kuten trietyyliamiinin, etyylidi-isopropyyliamiinin ja näiden kaltaisten läsnä ollessa. Reaktio suoritetaan sopivasti lämpötilassa, joka on noin 0 °C:n ja suunnilleen 10 huoneenlämpötilan välillä, edullisesti huoneenlämpötilassa .

Kaavan IV mukaisen yhdisteen reaktio asyloin-tiaineen kanssa menetelmän suoritusmuodon (c) mukaan voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla käyttämällä asy-15 lontiaineena vastaavaa happoa tai sen reaktiivista johdannaista. Sopivia reaktiivisia johdannaisia ovat happohalo-genidit, esim. happokloridit, happoanhydridit, anhydri-diseokset, aktivoidut esterit jne. Reaktio suoritetaan sopivasti lämpötilassa, joka on noin 0 °C:n ja suunnilleen 20 huoneenlämpötilan välillä, edullisesti huoneenlämpötilassa .

; Hapetus menetelmän suoritusmuodon (d) mukaan voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla “ sekundaaristen alkoholien hapettamiseksi ketoneiksi.

25 Tällöin voidaan hapetus suorittaa esimerkiksi käyttämällä pyridiniumdikromaattia dimetyyliformamidissa, pyridinium-kloorikromaattia dikloorimetaanissa, rikkitrioksidi-pyridiinikompleksia dimetyylisulfoksidissa, oksalyyli-kloridia ja trietyyliamiinia dimetyylisulfoksidissa, 30 disykloheksyylikarbodi-imidiä ja orgaanista happoa, kuten dikloorietikkahappoa tai trifluorietikkahappoa dimetyylisulfoksidissa.

Mahdolliset erottamiset menetelmän suoritusmuotojen (e) ja (f) mukaan voidaan suorittaa tavanomaisten 35 menetelmien mukaan, esim. käyttämällä pylväskro- 9 110938 matografiaa, ohutkerroskromatografiaa, korkeapaineista nestekromatografiaa jne.

Kaavan I mukaisen emäksisen yhdisteen muuttaminen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi menetelmän 5 suoritusmuodon (g) mukaan voidaan suorittaa käsittelemällä tavanomaisella tavalla epäorgaanisen hapon, esim. halogeenivetyhapon, kuten kloorivetyhapon tai bromivetyhapon, rikkihapon, typpihapon, fosforihapon jne. kanssa, tai orgaanisen hapon, esim. etikkahapon, 10 sitruunahapon, maleiinihapon, fumaarihapon, viinihapon, metaanisulfonihapon, p-tolueenisulfonihapon jne. kanssa.

Kaavan II mukaiset yhdisteet, joita käytetään lähtöaineina menetelmän suoritusmuodossa (a) , ovat uusia ja muodostavat esillä olevan keksinnön erään lisäkohteen. 15 Niitä voidaan valmistaa seuraavan reaktiokaavion mukaan, jossa symboleilla Rla, R2, R6 ja R7 on edellä ilmoitetut merkitykset.

10 110938

Reaktiokaavio R2 5 R'-HN^^CHO (|^R6 (V) (VI) xo f Λ Λ/"’ (VII)

RieHN γ OH X.

p, 15 R2 R1V A. /R? 20 " J (VIII)

H3C--O

3 S R6

ch3 II

25 ' Ξ .,.

R2

R\ Xy\/R7 (TO

N ηρ

H3C--O

30 HOOC R6 CH3 ,r 35 (II) 11 110938

Mitä tulee edellä olevaan reaktiokaavioon, niin ensimmäisessä vaiheessa reagoitetaan kaavan V mukainen yhdiste kaavan VI mukaisen yhdisteen kanssa kaavan VII mukaisen yhdisteen saamiseksi. Reaktio suoritetaan 5 tavanomaisissa Grignard'in reaktion olosuhteissa; esimerkiksi orgaanisessa liuottimessa, joka on inertinen reaktio-olosuhteissa, kuten eetterissä, esim. dietyy-lieetterissä, ja lämpötilassa, joka on noin 0 °C:n ja noin 40 °C:n välillä, edullisesti suunnilleen huoneen-10 lämpötilassa.

Seuraavassa vaiheessa muutetaan kaavan VII mukainen yhdiste kaavan VIII mukaiseksi yhdisteeksi reagoittamalla 2,2-dimetoksipropaanin kanssa voimakkaan orgaanisen hapon, edullisesti orgaanisen sulfonihapon, 15 kuten p-tolueenisulfonihapon läsnä ollessa. Reaktio suoritetaan sopivasti suunnilleen huoneenlämpötilassa.

Tämän jälkeen hapetetaan kaavan VIII mukainen yhdiste kaavan IX mukaiseksi yhdisteeksi. Hapetus, suoritetaan edullisesti käyttämällä alkalimetalliperman-20 ganaattia, kuten kaliumpermanganaattia suunnilleen huoneenlämpötilassa. Hapetus suoritetaan sopivasti liuotinjärjestelmässä, joka käsittää seoksena vettä, alkaanikarboksyylihappoa, kuten jääetikkaa, ja inertistä orgaanista liuotinta, joka ei ole näiden kanssa 25 sekoittuva, esim. aromaattista hiilivetyä, kuten bentseeniä, tolueenia jne. ja faasinsiirtokatalysaattorin läsnä ollessa.

Lopuksi muutetaan kaavan IX mukainen yhdiste kaa-van II mukaiseksi yhdisteeksi esteroimalla tai amidoimal-30 la. Esteröinti tai amidointi suoritetaan reagoittamalla kaavan IX mukaista yhdistettä sopivan alkanolin tai amiinin kanssa sinänsä tunnettujen menetelmien mukaan.

• ·.· Kaavojen V ja VI mukaiset yhdisteet, joita käytetään kaavan II mukaisten yhdisteiden valmistukseen, 35 ovat tunnettuja yhdisteitä tai tunnettujen yhdisteiden analogeja, joita voidaan valmistaa tunnettujen yhdisteiden 12 110938 valmistustavalla. Jäljempänä esitetyt esimerkit sisältävät lisäksi yksityiskohtaista tietoa, joka koskee kaavan VI mukaisten määrättyjen yhdisteiden valmistusta. Kaavojen VII, VIII ja IX mukaiset yhdisteet ovat toisaalta uusia ja 5 ne ovat esillä olevan keksinnön kohteena.

Kaavan III mukaiset yhdisteet, joita käytetään lähtöaineina menetelmän suoritusmuodossa (b) , ovat uusia ja muodostavat myös esillä olevan keksinnön erään kohteen. Niitä voidaan valmistaa lohkaisemalla alkoksikarbonyyli 10 kaavan I mukaisesta yhdisteestä, jossa kaavassa R1 tarkoittaa alkoksikarbonyyliryhmää. Lohkaisu voidaan suorittaa sinänsä tunnettujen menetelmien mukaan. Lohkaisu voidaan suorittaa käyttämällä voimakasta epäorgaanista happoa, kuten halogeenivetyhappoa tai voimakasta 15 orgaanista happoa, esim. trifluorietikkahappoa, sopivasti lämpötilassa, joka on noin 0 °C:n ja noin huoneenlämpötilan välillä.

Kaavan IV mukaiset yhdisteet, joita käytetään lähtöaineina menetelmän suoritusmuodossa (c) , ovat uusia 20 ja muodostavat esillä olevan keksinnön erään lisäkohteen. Niitä voidaan valmistaa lohkaisemalla alkoksikarbonyyli kaavan I mukaisesta yhdisteestä, jossa kaavassa R1 tarkoittaa kaavan (i) mukaista ryhmää ja R8 tarkoittaa alkoksikarbonyyli- tai aralkoksikarbonyyliryhmää. Lohkaisu 25 voidaan suorittaa sinänsä tunnettujen menetelmien mukaan. Jos esimerkiksi R8 tarkoittaa alkoksikarbonyyliryhmää, niin voidaan lohkaisu suorittaa käyttämällä voimakasta epäorgaanista happoa, kuten halogeenivetyhappoa tai voimakasta orgaanista happoa, esim. trifluorietikkahappoa, 30 sopivasti lämpötilassa, joka on noin 0 °C:n ja noin huoneenlömpötilan välillä, ja jos R8 tarkoittaa aralkoksikarbonyyliryhmää, niin voidaan lohkaisu suorittaa käyttämällä vetyä jalometallikatalysaattorin, esim. palladium/hiili-yhdistelmän läsnä ollessa, orgaanisessa 35 liuottimessa, joka on inertinen reaktio-olosuhteissa, esim. alkanolissa, kuten etanolissa jne. tai alk- 13 110938 aanikarboksyyhihapon esterissä, kuten etyyliasetaatissa, ja sopivasti suunnilleen huoneenlämpötilassa.

Kuten aikaisemmin mainittiin, kaavan I mukaiset yhdisteet ja näistä yhdisteistä niiden, jotka ovat 5 emäksisiä, farmaseuttisesti hyväksyttävät happo- additiosuolat ehkäisevät virusperäisiä aspart- yyliproteaaseja ja ovat käyttökelpoisia hoidettaessa ja ennakolta ehkäistäessä virusten aiheuttamia infektioita, erityisesti niitä infektioita, jotka ovat HIV:n ja muiden 10 retroidivirusten aiheuttamia.

Esillä olevan keksinnön avulla aikaansaatujen yhdisteiden HIV-proteaasin ehkäisy in vitro voidaan osoittaa seuraavan kokeen avulla: HIV-proteaasi osoitettiin E. coli-bakteereissa ja 15 puhdistettiin bakteerin liukoisista uutoksista ammo- niumsulfaatti-fraktioinnin (0 - 30 %) avulla. Proteaasin aktiviteetti määritettiin käyttämällä substraattina suojattua heptapeptidia sukkinyyli-Val-Ser-Gln-Asn-Phe-Pro-Ile-isobutyyliamidia. Substraatin lohkaisu mää-20 ritettiin kvantitatiivisesti mittaamalla H-ero-Ile-iso- butyyliamidin tuotos N-päätteisen proliinin spektro-fotometrisen kokeen avulla.

1,25 mM substraattia liuotettiin 125 mM ' ' sitraattipuskuriin (pH 5,5), joka sisälsi 0,125 mg/ml ': 25 Tween 20. 10 μΐ koeyhdisteen konsentraatioltaan erilaisia ' liuoksia (liuotettuna metanoliin tai dimetyylisulfoksidiin ja laimennettuna vedellä, joka sisälsi 0,1 % Tween 20) ja 10 μΐ proteaasia lisättiin 80 pl:an edellä mainittua puskuroitua substraattia. Digeroingi suoritettiin 37 30 °C:ssa kiinteän määräajan ja keskeytettiin lisäämällä 1 ml värireagenttia <30 pg/ml isatiinia ja 1,5 mg/ml 2-(4-klooribentsoyyli)bentsoehappoa 10-%:isessa asetonin etano-liuoksessa (til./til.) >. Liuos kuumennettiin vesihauteella : ja sen jälkeen liuotettiin pigmentoituneet jäännökset 35 uudelleen 1 ml:aan l-%:ista pyrogallolin liuosta 33-%:isessa veden asetoniliuoksessa (paino/til./til.).

14 110938

Liuoksen optinen tiheys määritettiin spektrofotometrisesti arvolla 599 nm. H-Pro-Ile-isobutyyliamidin muodostumista koeyhdisteen läsnä ollessa verrattiin vertailukohteisiin ja määritettiin se koeyhdisteen konsentraatio, joka 5 tarvittiin 50-%:isen ehkäisyn (150) aikaansaamiseen, graafisesti käytetyn koeyhdisteen erilaisten konsent-raatioiden funktiona.

Kaavan I raukaisten yhdisteiden virusvastainen aktiviteetti in vitro voidaan osoittaa seuraavassa esitetys-10 sä kokeessa: Tässä kokeessa käytetään HTLV-III (RF-kantaa), jota on kasvatettu C8166-soluissa (ihmisen CD4+ T- lymfoblastoidi-linja) käyttämällä RPM1 1640-väliainetta bikarbonaattipuskurin, antibioottien ja naudan sikiön 15 10-%:isen seerumin kanssa.

Solujen suspensio infektoidaan viruksen kymmenkertaisella TCID50-määrällä ja adsorption annetaan edistyä 90 minuuttia 37 °C:ssa. Solut pestään kolmasti väliaineella. Koe suoritetaan 6 ml: n vetoisissa 20 kudosviljelyputkissa, jotka sisältävät 2 x 105 infektoitua ] solua 1,5 ml:ssa väliainetta. Koeyhdisteet liuotetaan joko ' vesiväliaineeseen tai dimetyylisulfoksidiin, liukoisuuden mukaan, ja 15 μΐ koeyhdisteen liuosta lisätään. Viljelmiä - haudotaan 37 °C:ssa 72 tuntia kostutetussa atmosfäärissä, 25 joka sisältää 5 % hiilidioksidia ilmassa. Viljelmät sentrifugoidaan sen jälkeen ja määrätty määrä sakan yläpuolella olevaa ainetta tehdään liukoiseksi Nonidet P40:n avulla ja alistetaan antigeeninkaappauskokeeseen, jossa käytetään primaarista antiseerumia, jolla on 30 erityistä reaktiviteettia viruksen p24-antigeeniä vastaan, sekä piparjuureen pohjautuvaa peroksidaasin paljastusjärjestelmää. Värin muodostuminen mitataan : spektrofotometrisesti ja esitetään graafisesti koeyhdisteen konsentraation funktiona. Konsentraatiosta, 35 joka aikaansaa 50-%:isen suojauksen, käytetään merkintää (Iso) - i 15 110938

Edellä olevissa, kaavan I mukaisia tyypillisiä yhdisteitä käyttäen suoritetuissa kokeissa saadut tulokset on koottu seuraavaan taulukkoon:

Taulukko 5 Yhdiste HIV-proteaasin Aktiviteetti ehkäisy HIV:ta vastaan

Iso (nmol) I5o (nmol) 10 A 2 46 B 57 1000 C 1,4 4

D 1,3 NT

E 1,9 NT

15 F 2,0 NT

NT =ei testattu

Yhdiste A = 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbon-yyli)-L-asparaginyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibut-yyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi.

20 Yhdiste B = 2(R)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyy- ’' li)-L-aspariginyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyy- li]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi.

Yhdiste C = 2(S) -[3(S) -[[N-(2-kinolyylikarbon- yyli)-L-asparaginyyli] amino]-2 (R)-hydroksi-4-fenyylibut-25 yyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi.

Yhdiste D = 2(S)-[3(S)-[[N-bentsyyloksikarbonyy- li)-S-metyyli-L-kysteinyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyy-libutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi.

Yhdiste E = 2(S)-[3(S)-[[N-bentsyylioksikarbonyy- 30 li)-O-metyyli-L-aspartyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyy-: libutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidi.

Yhdiste F = 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyy-li)-3-syaani-L-alanyyli]amino]2(R)-hydroksi-4-fenyylibut-yyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-syaaniheksaanikarboksamidi.

110933 16

Kaavan I mukaisia yhdisteitä ja kaavan I mukaisten niiden yhdisteiden, jotka ovat emäksisiä, farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja voidaan käyttää lääkkeinä, esimerkiksi farmaseuttisten valmisteiden muodossa.

5 Farmaseuttisia valmisteita voidaan antaa enteraalisesti, kuten oraalisesti, esim. tablettien, päällystettyjen tablettien, rakeiden, kovien ja pehmeiden gelatiini-kapselien, liuosten, emulsioiden tai suspensioiden muodossa, nasaalisesti, esim. nasaalisuihkeiden muodossa, 10 rektaalisesti, esim. suppositorioiden muodossa, tai parenteraalisesti, kuten intramuskulaarisesti tai intravenöösisesti, esim. injektioliuosten muodossa.

Farmaseuttisten valmisteiden valmistamiseksi voidaan edellä mainittuja yhdisteitä ja suoloja käsitellä 15 terapeuttisesti inertisten, epäorgaanisten tai orgaanisten eksipienttien kanssa. Voidaan käyttää esimerkiksi laktoosia, maissitärkkelystä tai sen johdannaisia, ' talkkia, steariinihappoa tai sen suoloja sellaisinaan eksipientteina tabletteihin, päällystettyihin tab-20 letteihin, rakeisiin ja koviin gelatiinikapseleihin.

ΐ Sopivia eksipienttejä pehmeisiin gelatiinikapseleihin ovat esimerkiksi kasviöljyt, vahat, rasvat, puolijähmeät ja nestemäiset polyolit ja näiden kaltaiset. Aktiivisen ; aineksen luonteesta rippuen ei kuitenkaan eksipienttejä 25 tarvita yleensä kysymyksen ollessa pehmeistä gelatiinikapseleista. Sopivia eksipienttejä liuosten ja siirappien valmistukseen ovat esimerkiksi vesi, polyolit, sakkaroosi, inverttisokerit, glukoosi ja näiden kaltaiset. Sopivia eksipienttejä injektioliuosten valmistukseen ovat 30 esimerkiksi vesi, alkoholit, polyolit, glyseroli, kasviöljyt ja näiden kaltaiset. Luonnon ja kovetetut öljyt, vahat, rasvat, puoliksi nestemäiset polyolit ja näiden kaltaiset ovat sopivia eksipienttejä suppo- * sitorioiden valmistukseen.

35 17 110938

Farmaseuttiset valmisteet voivat sisältää myös säilöntäaineita, stabilisaattoreita, kostutusaineita, emulgaattoreita, makeutusaineita, väriaineita, mausteita, suoloja osmoottisen paineen säätämiseen, puskuriaineita, 5 päällystysaineita ja hapetuksenestoaineita. Ne voivat sisältää myös muita terapeuttisesti aktiivisia aineita.

Lääkkeet, jotka sisältävät kaavan I mukaista yhdistettä tai kaavan I mukaisen emäksisen yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa ja terapeuttisesti 10 inertistä eksipienttiä, samoin kuin menetelmä tällaisten lääkkeiden valmistamiseksi ovat myös esillä olevan keksinnön kohteina. Menetelmän mukaan saatetaan kaavan I mukaista yhdistettä tai sen edellä mainittua suolaa galeeniseen lääkkeenantomuotoon yhdessä terapeuttisesti 15 inertisen eksipientin kanssa ja, mikäli halutaan, yhden tai useamman muun terapeuttisesti aktiivisen aineen kanssa.

Kuten aikaisemmin mainittiin, voidaan kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden edellä mainittuja suoloja 20 käyttää sairauksien hoitoon tai ehkäisyyn, erityisesti virusperäisten infektioiden, varsinkin retroviraalisten infektioiden ennakoltaehkäisyyn ja hoitoon. Annostus voi vaihdella laajoissa rajoissa ja sitä voidaan säätää henkilökohtaisten tarpeiden mukaan kussakin erityis- • 25 tapauksessa. Kysymyksen ollessa lääkkeen oraalisesta antamisesta, päivittäinen sopiva annostus olisi noin 3 mg - noin 3 g, edullisesti noin 10 mg - noin 1 g, joskin yläraja voidaan ylittää, jos se todetaan tarkoituksenmukaiseksi. Päivittäinen annos voidaan antaa yhtenä 30 annoksena tai jaettuina annoksina.

Seuraavat esimerkit valaisevat esillä olevaa kek- ··' sintöä: „% Esimerkki 1 } ; Liuosta, joka sisälsi 100 mg (0,20 mmol) 2(S)-[[4- 35 (S)-bentsyyli-3-(tert.-butoksikarbonyyli)-2,2-dimetyyli- 5(R)-oksatsolidinyyli]metyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-syklo- 18 110938 heksaanikarboksamidia ja 3,3 mg (0,017 mmol) p-tolueenisulfonihappoa 3 ml:ssa metanolia, pidettiin huoneenlämpötilassa 40 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännös jaettiin 10 ml:n suuruisen 5 dikloorimetaanierän ja 2 ml:n suuruisen kyllästetyn natriumvetykarbonaattiliuoserän kesken. Orgaaninen liuos kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 90 mg hartsia. Raakatuote kromatografoitiin käyttämällä piihappogeelipylvästä ja 10 eluointiin 33-%:ista etyyliasetaatilin heksaaniliuosta, jolloin saatiin 45 mg 2(S)-[3(S)-(tert.-butoksiformamido)-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-syk-loheksaanikarboksamidia; MS m/e 447 [M+H]+.

Lähtöaineena käytettyä 2(S)-[[4(S)-bentsyyli-3-15 (tert.-butoksikarbonyyli)-2,2-dimetyyli-5(R)-oksatsoli-dinyyli]metyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarb-oksamidia valmistettiin seuraavalla tavalla: (i) Liuosta, joka sisälsi 4,375 g (31 mmol) trans-4-syklohekseeni-l(R),2(R)-dimetanolia ja 4,66 g (31 mmol) 20 tert.-butyylidimetyylisilyylikloridia 16 ml:ssa dimetyy-liformamidia, hämmennettiin typpikaasun alaisena ja jäähdytettiin 0 °C:seen. 5,30 g imidatsolia lisättiin ja seoksen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja sen jälkeen sitä hämmennettiin yön yli. 200 ml vettä lisättiin 25 ja seos uutettiin kolmella 100 ml:n suuruisella erällä dietyylieetteriä. Yhdistetyt uutokset pestiin 100 ml:11a vettä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja ! haihdutettiin, jolloin saatiin 6,50 g öljyä. Tämä kromatografoitiin käyttäen piihappogeelipylvästä ja 30 eluoitiin 10-%:ista etyyliasetaatin heksaaniliuosta, jolloin saatiin 2,80 g trans-1(R),2(R)-bis-[[(tert.-butyyli)-(dimetyyli)silyylioksi]metyyli]-4-syklohekseeniä värittömänä öljynä. Pylvään uudelleeneluointi antoi 2,576 g trans-6(R)-[[(tert.-butyyli)-(dimetyyli)silyyli-35 oksi]metyyli]-3-syklohekseeni-l(R)-metanolia värittömänä öljynä; MS m/e 257 [M+H)+.

19 110938 (ii) Liuosta, joka sisälsi 2,57 g (10 mmol) kappaleessa (i) saatua toista tuotetta 50 ml:ssa etanolia, hydrattiin samalla kun läsnä oli 130 mg 10-%:ista palladi-um/hiilellä-katalysaattoria, huoneenlämpötilassa ja ilma-5 kehän paineessa yhden tunnin ajan. Katalysaattori poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin, jolloin saatiin 2,30 g trans-2(R)-[[(tert.-butyyli)-(dimetyyli)si-lyylioksi]metyyli]-1(R)-sykloheksaanimetanolia värittömänä öljynä; MS m/e 259 [M+H]+.

10 (iii) Liuosta, joka sisälsi 1,17 g (9,2 mmol) ok- salyylikloridia 23 mlrssa dikloorimetaania, hämmennettiin typpikaasun alaisena ja jäähdytettiin -78 °C:seen. Liuos, joka sisälsi 1,3 ml (1,43 g, 18 mmol) vedetöntä dimetyylisulfoksidia 5 ml:ssa dikloorimetaania, lisättiin 15 6 minuutin kuluessa. Seosta hämmennettiin sen jälkeen 2 minuuttia ja sen jälkeen lisättiin 9 minuutin kuluessa liuos, joka sisälsi 2,30 g (8,9 mmol) kappaleessa (ii) saatua tuotetta 10 ml:ssa dikloorimetaania. Seosta hämmennettiin -70 °C:ssa 20 minuuttia ja sen jälkeen 20 lisättiin 6 minuutin kuluessa 5,5 ml (3,99 g, 39 mmol) trietyyliamiinia. Seoksen annettiin sen jälkeen lämmetä huoneenlämpötilaan ja siihen lisättiin 40 ml vettä. Faasit erotettiin ja vesiliuos uutettiin kahdella 50 ml:n suuruisella erällä dikloorimetaania. Yhdistetyt orgaaniset 25 liuokset kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla v : ja haihdutettiin, jolloin saatiin 2,45 g väritöntä öljyä.

Tämä puhdistettiin kromatograafisesti käyttäen pii-happogeelipylvästä ja eluointiin 2,5-%:ista etyyliasetaatin heksaaniliuosta, jolloin saatiin 1,53 g trans-2-30 (R)-[[(tert.-butyyli)-(dimetyyli)silyylioksi]metyyli]- 1(R)-sykloheksaanikarboksialdehydiä värittömänä hartsina; MS m/e 257 [M+H]+.

(iv) 3,46 ml (8,6 mmol) n-butyylilitiumin 2,5-mo- laarista heksaaniliuosta lisättiin 5 minuutin kuluessa 35 hämmennettyyn suspensioon, joka sisälsi 3,08 g (8,6 mmol) metyylitrifenyylifosfoniumbromidia 23 ml:ssa dietyyli- 20 110938 eetteriä. Seosta hämmennettiin huoneenlämpötilassa 85 minuuttia ja sen jälkeen lisättiin 5 minuutin kuluessa liuos, joka sisälsi 1,53 g (6,0 mmol) kappaleessa (iii) saatua tuotetta 10 ml:ssa dietyylieetteriä. Seosta 5 hämmennettiin huoneenlämpötilassa 140 minuuttia, joukkoon lisättiin 20 ml vettä ja sen jälkeen faasit erotettiin. Vesiliuos uutettiin kahdella 20 ml:n suuruisella erällä dietyylieetteriä ja yhdistetyt orgaaniset liuokset pestiin 20 ml :11a vettä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin 10 avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 1,85 g öljyä. Tämä puhdistettiin kromatograafisesti käyttäen pii-happogeelipylvästä ja eluointiin l-%:ista etyyliasetaatin heksaaniliuosta, jolloin saatiin 0,870 g trans-1(R)-{[(tert.-butyyli)-(dimetyyli)silyylioksi]metyyli]-2(S)-15 vinyylisykloheksaania värittömänä öljynä; MS m/e 239 {M-CH3] + .

(v) Liuosta, joka sisälsi 870 mg (3,4 mmol) kappaleessa (iv) saatua tuotetta 6 ml:ssa tetra- butyyliammoniumfluoridin 1-molaarista tetrahydrofuraani-20 liuosta, pidettiin huoneenlämpötilassa 3,5 tuntia. Sen jälkeen haihdutettiin liuotin ja jäännös otettiin 30 ml:an vettä ja uutettiin kolmella 20 ml:n suuruisella erällä dietyylieetteriä. Yhdistetyt uutokset kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, 25 jolloin saatiin 910 mg väritöntä öljyä. Tämä : ’ kromatografoitiin käyttäen piihappogeelipylvästä ja eluointiin 20-%:ista etyyliasetaatin heksaaniliuosta, jolloin saatiin 435 mg trans-2(S)-vinyyli-1(R)-sykloheksaanimetanolia värittömänä öljynä; MS 141 [M+H]+.

30 (vi) Liuosta, joka sisälsi 435 mg (3,1 mmol) kap paleessa (v) saatua tuotetta 10 ml:ssa pyridiiniä, hämmennettiin typpikaasun alaisena ja jäähdytettiin jääkylvyssä.

265 μΐ (391 mg, 3,4 mmol) metaani- sulfonyylikloridia lisättiin, jääkylpy poistettiin ja 35 seosta hämmennettiin huoneenlämpötilassa 4 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännös jaettiin 30 ml:n 21 110938 suuruisen 2M kloorivetyhappoerän ja 30 ml:n suuruisen dietyylieetterierän kesken. Vesiliuos uutettiin kahdella 30 ml:n suuruisella erällä dietyylieetteriä ja yhdistetyt uutokset pestiin 30 ml:11a 2M kloorivetyhappoa, 30 ml :11a 5 kyllästettyä natriumvetykarbonaatin liuosta ja 30 ml:11a vettä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 615 mg l(R)-[(met- aanisulfonyylioksi)metyyli]-2(S)-vinyylisykloheksaania värittömänä öljynä; MS m/e 219 [M+H]+.

10 (vii) Seosta, joka sisälsi 1,55 g (7,1 mmol) kappaleessa (vi) saatua tuotetta ja 935 mg (10,7 mmol) litiumbromidia 20 ml:ssa dimetyyliformamidia, hämmennettiin 60 °C:ssa typpikaasun alaisena 50 tuntia.

Seos kaadettiin sen jälkeen 250 ml:an vettä ja uutettiin 15 kolmella 100 ml: n suuruisella erällä dietyylieetteriä. Yhdistetyt uutokset pestiin 200 ml:11a vettä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 1,312 g trans-1(R)-bromimetyyli-2(S)- vinyylisykloheksaania värittömänä nesteenä; MS m/e 123 20 [M-Br ] +.

(viii) Seosta, joka sisälsi 172 mg (7,1 mmol) magnesiumlastuja ja jodikiteen 2 ml:ssa tetrahydro- furaania, hämmennettiin argonkaasun alaisena ja joukkoon lisättiin 3 minuutin kuluessa 1,113 g (5,5 mmol) 25 kappaleessa (vii) saatua tuotetta. Seosta hämmennettiin ja V : kuumennettiin palautusjäähdyttäjää käyttäen tunnin ajan ja sen jälkeen jäähdytettiin huoneenlämpötilaan. Liuos, joka ;’· : sisälsi 683 mg (2,74 mmol) tert. -butyyli- (L-a- formyylifenetyyli)karbamaattia 5 ml:ssa tetrahydro- 30 furaania, lisättiin 10 minuutin kuluessa ja seosta hämmennettiin sen jälkeen 2,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Tämän jälkeen lisättiin 30 ml 10-%:ista ammoniumkloridiliuosta, seoksen pH säädettiin arvoon 2 . ; lisäämällä 2M kloorivetyhappoa ja sen jälkeen uutettiin 35 kolmella 25 ml:n suuruisella erällä etyyliasetaattia.

Yhdistetyt uutokset pestiin 25 ml:11a kyllästettyä 22 110938 natriumvetykarbonaatin liuosta ja 25 ml:11a vettä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 1,19 g öljyä. Tämä kromatografoitim käyttäen piihappogeelipylvästä ja 5 eluointiin 20-%:ista etyyliasetaatin heksaaniliuosta, jolloin saatiin 630 mg 1(S)-[3(S)-tert.-butoksiformamido)-2(S)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-2(S)-vinyylisykloheksaanin ja 1 (S)-[3(S)-(tert.-butoksiformamido)-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-2(R)-vinyylisykloheksaanin seosta valio koisena kiteisenä aineena; MS m/e 374 [M+H]+.

Diastereomeeriseosta käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman enempää puhdistamista.

(ix) Liuosta, joka sisälsi 630 mg (1,7 mmol) kappaleessa, (viii) saatua tuotetta 20 ml:ssa dimetyyli- 15 formamidia, hämmennettiin ja jäähdytettiin 0 °C:seen. 4,48 g (12 mmol) pyridiniumdikromaattia lisättiin ja seosta hämmennettiin 0 °C:ssa 10 minuuttia. Jäähdytyskylpy poistettim sen jälkeen ja seosta hämmennettiin huoneenlämpötilassa 6 tuntia ja sen jälkeen se kaadettiin 20 170 ml:an vettä. Saatu seos uutettiin kolmella 80 ml:n suuruisella erolla etyyliasetaattia ja yhdistetyt uutokset pestiin 100 ml:11a vettä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 640 mg 1 (S)-[3 (S)-(tert.-butoksiformamido)-2-okso-25 4-fenyylibutyyli]-2(S)-vinyylisykloheksaania värittömänä 1 öljynä, joka kiteytyi seistessään. Tätä tuotetta käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman enempää ; · · puhdistamista.

(x) Liuosta, joka sisälsi 640 mg (1,7 mmol) , 30 kappaleessa (ix) saatua tuotetta 35 ml:ssa etanolia, hämmennettim 0 °C:ssa ja joukkoon lisättiin 368 mg (9,7 mmol) natriumboorihydridiä. Seosta hämmennettiin 0 °C:ssa ;'-J 2,5 tuntia ja liuotin poistettiin sen jälkeen haihduttamalla. Jäännös jaettiin 100 ml:n suuruisen 35 vesimäärän ja 100 ml:n suuruisen etyyliasetaattimäärän kesken, faasit erotettiin ja vesifaasi uutettiin 23 110938 erillisillä 100 ml:n ja 50 ml:n suuruisilla erillä etyyliasetaattia. Yhdistetyt uutokset kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 595 mg valkoista öljymäistä kiinteätä 5 ainetta. Tämä kromatografoitiin käyttäen piihappo-geelipylvästä ja eluintiin 20-%:ista etyyliasetaatin heksaaniliuosta, jolloin saatiin 85 mg 1(S)-[3(S)-(tert.-butoksiformamido)-2(S)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-2(S) -vinyylisykloheksaania valkoisena vahamaisena kiinteänä 10 aineena; MS m/e 374 [M+H]. Pylvään jatkoeluointi antoi 263 mg l(S)-[3(5) (tert.-butoksiformamido)-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-2(S)-vinyylisykloheksaania valkoisena kiinteänä aineena; MS m/e [M+H]+.

(xi) Liuosta, joka sisälsi 370 mg (0,99 mmol) kap-15 paleessa (x) saatua toista tuotetta ja 225 mg (1,2 mmol) p-tolueenisulfonihappomonohydraattia 7 ml; ssa 2,2-dimetoksipropaania, pidettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Liuos laimennettiin 45 ml :11a dietyylieetteriä ja pestiin kahdella 40 ml:n suuruisella erällä natrium-20 vetykarbonaattia, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 530 mg keltaista öljyä. Tämä kromatografoitiin käyttäen piihappo-geelipylvasta ja eluointiin 5-%:ista etyyliasetaatin heksaaniliuosta, jolloin saatiin 230 mg 1(S)—[[4(S)— 25 bentsyyli-3-(tert.-butoksikarbonyyli)-2,2-dimetyyli-5(R)-: oksatsolidmnyylijmetyyli] -2 (S)-vinyylisykloheksaania vaa leankeltaisena öljynä; MS m/e 414 [M+H]+.

: (xii) Liuos, joka sisälsi 670 mg (4,2 mmol) kaliumpermanganaattia 7 ml:ssa vettä, lisättiin seokseen, 30 joka sisälsi 230 mg (0,56 mmol) kappaleessa (xi) saatua tuotetta, 123 mg Aliquat 336 ja 0,65 ml jääetikkaa 8 ml; ssa bentseeniä. Seosta hämmennettiin voimakkaasti j huoneenlömpötilassa yön yli ja sen jälkeen lisättiin 428 mg natriummetabisulfiittia. 24 ml dietyylieetteriä ja 2,5 35 ml 2M sitruunahappoa lisättiin ja seosta hämmennettiin 10 minuuttia ja sen jälkeen suodatettiin. Faasit erotettiin 24 110938 ja vesifaasi uutettiin kahdella 10 ml:n suuruisella erällä dietyylieetteriä. Yhdistetyt uutokset pestiin kahdesti, kummallakin kerralla 10 ml :11a vettä ja sen jälkeen kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja 5 haihdutettiin, jolloin saatiin 340 mg öljyä. Tämä kromatografoitiin käyttäen piihappogeelipylvästä ja eluointiin 5-%:ista metanolin dikloorimetaaniliuosta, jolloin saatiin 210 mg 2(S)-[[4(S)-bentsyyli-3-(tert.-butoksikarbonyyli)-2, 2-dimetyyl-5(R)-oksatsolidinyyli]-10 metyyli]-1(R)-sykloheksaanikarboksyylihappoa värittömänä hartsina, jota käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman enempää puhdistamista.

(xiii) Seosta, joka sisälsi 210 mg (0,49 mmol) kappaleessa (xii) saatua tuotetta, 67 mg (0,49 mmol) 1-15 hydroksibentsotriatsolihydraattia, 101 mg (0,49 mmol) disykloheksyylikarbodi-imidia ja 52 μΐ (36 mg, 0,49 mmol) tert.-butyyliamiinia 2 ml:ssa dimetyyliformamidia, hämmennettiin huoneenlämpötilassa typpikaasun alaisena 20 tuntia. Seos suodatettiin ja kiiinteä aine pestiin 2 20 ml:lla etyyliasetaattia. Yhdistetyt suodokset haihdutettiin ja jäännös jaettiin 10 ml:n suuruisen etyyliasetaattierän ja 10 ml:n suuruisen kyllästetyn natriumvetykarbonaattiliuoserän kesken. Faasit erotettiin 3 : ja vesifaasi uutettiin kahdella 10 ml:n suuruisella erällä - .25 etyyliasetaattia. Yhdistetyt uutokset pestiin 10 ml :11a kyllästettyä natriumkloridiliuosta, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 280 mg öljymäistä kiinteätä ainetta. Tämä uutettiin kahdella 1 ml:n suuruisella erällä 30 dietyylieetteriä ja heitettiin pois. Eetteriliuokset haihdutettiin, jolloin saatiin 260 mg raakatuotetta. Tämä kromatografoitiin käyttäen piihappogeelipylvästä ja eluointiin 22-%:ista etyyliasetaatin heksaaniliuosta, jolloin saatiin 109 mg 2 (S)-[[4(S)-bentsyyli-3-(tert.-35 butoksikarbonyyli)-2,2-dimetyyli-5(R)-oksatsolidinyyli]- 25 110938 metyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidia valkoisena kiinteänä aineena; MS m/e 487 [M+H]+.

Esimerkki 2

Seosta, joka sisälsi 35 mg (0,1 mmol) 2(S)-[3(S)-5 amino-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli- 1(R)-sykloheksaanikarboksamidia ja 44 mg (0,1 mmol) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-asparagiinipentafluorifenyyli-esteriä 1 ml:ssa dioksaania, hämmennettiin huoneenlämpötilassa typpikaasun alaisena 16 tuntia. Liuotin 10 haihdutettim, jäännös otettiin 10 ml:an etyyliasetaattia ja liuos pestiin kahdella 3 ml:n suuruisella erällä 2M kloorivetyhappoa, 3 ml:11a 2M natriumhydroksidiliuosta ja 3 ml :11a kyllästettyä natriumkloridiliuosta, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin. 15 Jäännös kromatografoitiin käyttäen piihappogeelipylvästä ja eluointiin 6-%:ista etanolin dikloorimetaaniliuosta, jolloin saatiin 34 mg valkoista kiinteätä ainetta. Tämä kiteytettiin uudelleen dikloorimetaani/heksaani-seoksesta, jolloin saatiin 14 mg 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksi-20 karbonyyli)-L-asparaginyyli]amino)-2(R)-hydroksi-4-fenyy-libutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidia valkoisena kiinteänä aineena, joka suli välillä 195 -199 °C; MS m/e 595 [M+H]+.

j’: Lähtöaineena käytettyä 2(S)-[3(S)-amino-2(R)- ' 25 hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-syklohek- V '’· saanikarboksamidia valmistettiin seuraavalla tavalla: 45 mg (0,1 mmol) 2 (S)-[3(S)-(tert.-butoksifor-mamido)-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidia [saatu esimerkin 1 30 ensimmäisessä kappaleessa kuvatulla tavalla] liuotettiin 2 ml:an etyyliasetaattia ja liuos jäähdytettiin 0 °C:seen. 2 t.J ml kyllästettyä kloorivedyn etyyliasetaattiliuosta lisättiin ja seoksen annettiin seistä huoneenlämpötilassa ;’· · yön yli. Sen jälkeen lisättiin vielä 1,0 ml kloorivedyn 35 etyyliasetaattiliuosta ja seosta hämmennettiin huoneenläm- 26 110938 pötilassa vielä 4 tuntia ja sen jälkeen haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin 10 ml:an dikloorimetaania ja liuos pestiin 2 ml :11a kyllästettyä natriumvetykarbonaatin liuosta, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla 5 ja haihdutettiin, jolloin saatiin 36 mg 2(S)-[3(S)-amino-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-syk-loheksaanikarboksamidia värittömänä hartsina, MS m/e 346 [M]+, jota käytettiin ilman enempää puhdistamista.

Esimerkki 3 10 75 mg:n (0,15 mmol) suuruisen määrän 2(R)[[4(S)- bentsyyli-3-tert.-butoksikarbonyyli)-2,2-dimetyyli-5(R)-oksatsolidinyyli]metyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-syklohek-saanikarboksamidia käsittely p-tolueenisulfonihapon kanssa metanolissa esimerkin 1 ensimmäisessä kappaleessa 15 kuvatulla tavalla antoi 20 mg 2(R)-[3(S)-(tert.- butoksiformamido)-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyylil(R)-sykloheksaanikarboksamidia; MS m/e 469 [M+NaJ +, 447 [M+H]\ Lähtöaineena käytettyä 2(R)-[[4(S)-bentsyyli-3-20 tert.-butoksikarbonyyli)-2,2-dimetyyli-5(R)-oksatsolidi-nyyli]metyyli]-N-tert.-butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidia valmistettiin seuraavalla tavalla: (i) Liuosta, joka sisälsi 18,40 g (0,10 mol) cis-4(R)-asetoksimetyyli-5(S)-hydroksimetyyli)syklohekseeniä 25 ja 16,50 g (0,11 mol) tert.-butyylidimetyyli-silyylikloridia 45 ml:ssa dimetyyliformamidia, hämmennettiin ja jäähdytettiin 0 °C:seen. 17,00 g (0,25 mol) imidatsolia lisättiin ja seosta hämmennettiin 0 °C:ssa yhden tunnin ajan, sen jälkeen seoksen annettiin lämmetä 30 huoneenlämpötilaan ja sitä hämmennettiin edelleen 160 minuuttia. Seos kaadettiin sen jälkeen 400 ml:an vettä ja uutettiin kahdella 100 ml: n suuruisella erällä j ' dietyylieetteriä. Yhdistetyt uutokset pestiin 200 ml:11a ; vettä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja 1 j 35 haihdutettiin, jolloin saatiin 29,69 g oljenkeltaista nestettä. Raakatuote kromatografoitiin käyttäen pii- 27 110938 happogeelipylvästä ja eluointiin 10-%:ista etyyliasetaatin heksaaniliuosta, jolloin saatiin 20,85 g cis-4(R)-(asetoksimetyyli)-5(S)-[[(tert.-butyyli)(dimetyyli)sil-yylioksi]metyyli]-3-syklohekseeniä värittämänä öljynä; MS 5 m/e 299 [M+H]\ (ii) 32,5 ml 2M natriumhydroksidiliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 26,94 g (0,090 mol) kappaleessa (m) saatua tuotetta seoksessa, jonka muodostivat 90 ml etanolia ja 90 ml tetrahydrofuraania. Seosta hämmennettiin 10 huoneenlämpötilassa 80 minuuttia ja haihtuvat liuottimet poistettiin sen jälkeen haihduttamalla. Jäännös laimennettiin 520 ml :11a vettä ja uutettiin kolmella 150 ml: n suuruisella erällä dietyylieetteriä. Yhdistetyt uutokset pestiin 350 ml:lla ja 100 ml:lla vettä, 15 kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 22,77 g cis-6(S)-[[(tert.-butyyli)-(dimetyyli)silyylioksi]metyyli]-3-syklohekseeni-1(R)-metanolia värittömänä nesteenä; MS m/e 257 [M+H]+.

(iii) Esimerkissä 1 (ii) kuvatulla tavalla 20 hydrattiin 22,77 g (0,089 mol) kappaleessa (ii) saatua tuotetta, jolloin saatiin 19,85 g cis-2(S)-[[(tert.- butyyli)-(dimetyyli)silyylioksi]metyyli]-1(R)-sykloheks-aanimetanolia värittömänä nesteenä; MS m/e 259 [M+H]+.

(iv) Kappaleessa (iii) saadulle 23,15 g:n (0,090 25 mol) suuruiselle tuote-erälle esimerkissä 1 (iii) kuvatulla tavalla suoritettu Swern'in hapetus antoi 22,78 g cis-2(S)-[[(tert.-butyyli)-(dimetyyli)silyyli-oksijmetyyli]-1(R)-sykloheksaanikarboksialdehydiä värit-: tömänä öljynä; MS m/e 257 [M+H]+.

' , 30 (v) Kappaleessa (iv) saadulle 17,70 g:n (0,069 mol) suuruiselle tuote-erälle esimerkissä 1(iv) kuvatulla tavalla suoritettu käsittely metyylitrifenyylifos-j foniumbromidmn ja n-butyylilitiumin kanssa antoi 14,51 g cis-1(S)[[(tert.-butyyli)dimetyyli)silyylioksi]metyyli]-35 2(S )-vinyylisykloheksaania värittömänä öljynä; MS m/e 255 [M+H]\ 28 110938 (vi) Kappaleessa 1(v) saadulle 12,47 g:n (0,049 mol) suuruiselle tuote-erälle esimerkissä (v) esitetyllä tavalla suoritettu käsittely tetrabutyyliammonium-fluoridin kanssa antoi 6,617 g cis-2(S)-vinyyli-l(S)-syk- 5 loheksaanimetanolia värittömänä öljynä; MS m/e 141 [M+H]\ (vii) Liuos, joka sisälsi 6,56 g (47 mmol) kappaleessa (vi) saatua tuotetta 30 ml:ssa tolueenia, lisättiin 4 minuutin kuluessa hämmennettyyn suspensioon, joka sisälsi 22,56 g (53 mmol) dibromitrifenyylifosforaania 10 120 mlrssa tolueenia. Seosta hämmennettiin typpikaasun alaisena huoneenlämpötilassa 20 tuntia, sen jälkeen suodatettiin ja kiinteä aine pestiin 200 ml:11a heksaania. Yhdistetyt suodokset pestiin kahdella 200 ml:n suuruisella erällä kyllästettyä natriumvetykarbonaattiliuosta ja 15 200 ml:11a vettä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 7,898 g cis-l(S)-bromimetyyli-2(S)-vinyylisykloheksaania värittömänä nesteenä; MS m/e 205, 203 [M+H]\ (viii) Kappaleessa (vii) saadulle 7,766 g:n 20 (38 mmol) suuruiselle tuote-erälle esinlerkissä 1 (viii) kuvatulla tavalla suoritettu käsittely magnesiumin kanssa } ja sen jälkeen reagoittaminen tert. -butyyli-(L-a-formyyli- fenetyyli)karbamaatin kanssa antoi 3,196 g 1(R)-[3(S)-1 (tert.-butoksiformamido)-2(S)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]- 25 2(S)-vinyylisykloheksaania, joka sisälsi 10 % (R)-alkoho- lia: MS m/e 374 [M+H]\ (ix) Kappaleessa (viii) saadun 2,81 g:n (7,5 mmol) suuruisen tuote-erän hapettaminen esimerkissä 1 (ix) kuvatulla tavalla pyridiniumdikromaatin avulla antoi 1,61 g 30 l(R)-[3(S)-( tert. -butoksif ormamido) - 2-okso-4- f enyylibutyy- li]-2(S)-vinyylisykloheksaania värittömänä öljynä, joka kiteytyi seistessään; MS m/e 372 [M+H]*.

(x) Kappaleessa (ix) saadun 1,44 g:n suuruisen tuote-erän pelkistäminen esimerkissä 1 (x) kuvatulla tavalla 35 natriumboorihydridin avulla antoi 1,20 g 1(R)-[3(S)- 29 110938 (tert.-butoksiformamido)-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-2(S)—vinyylisykloheksaania värittömänä hartsina, joka kiteytyi seistessään m/e 373 [M]*.

(xi) Kappaleessa (x) saadun 1,20 g: n (3,2 mmol) 5 suuruisen tuote-erän käsittely esimerkissä 1 (xi) kuvatulla tavalla 2,2-dimetoksipropaanin kanssa antoi 1,25 g 1(H)-[[4(S)-bentsyyli-3-(tert.-butoksikarbonyyli)-2,2-di-metyyli-5(R)-oksatsolidinyyli]metyyli]-2(S)-vinyylisykloheksaania vaaleankeltaisena hartsina; MS m/e 414 [M+H]*.

10 (xii) Kappaleessa (xi) saadun 850 mg:n (2,06 mmol) suuruisen tuote-erän käsittely esimerkissä 1 (xii) kuvatulla tavalla kaliumpermanganaatin kanssa antoi 185 mg 2(R)-[[4(S)-bentsyyli-3-(tert.-butoksikarbonyyli)-2,2-di-metyyli-5(R)-oksatsolidinyyli]metyyli] -l(R)-sykloheksaani-15 karboksyylihappoa värittömänä hartsina; MS 432 [M+H]*.

(xiii) 165 mg (0,38 mmol) kappaleessa (xii) saatua tuotetta kytkettiin esimerkissä 1 (xiii) kuvatulla tavalla tert.-butyyliamiinin kanssa, jolloin saatiin 85 mg 2(R)-[[4(S)-bentsyyli-3-(tert.-butoksikarbonyyli)-2,2-dimetyy-20 li-5(R)-oksatsolidinyyli]metyyli]-N-tert.-butyyli-l(R)- sykloheksaanikarboksamidia valkoisena kiinteänä aineena: MS m/e 487 [M+H]\

Esimerkki 4

Menettelemällä esimerkin 2 ensimmäisessä kappalees-25 sa kuvatulla tavalla saatiin 2(R)-[3(S)-amino-2(R)-hydrok- si-4-fenyylibutyyli] -N-tert. -butyyli-1 (R)-sykloheksaani-karboksamidista ja N-bentsyylioksikarbonyyli-L-asparagii-ni-pentafluorifenyyliesteristä 2(R)-[(S)-[[ N-(bentsyy-lioksikarbonyyli)-L-asparaginyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-' ' 30 fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-l(R)-sykloheksaanikarbok- samidia valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste ” oli 166,5 - 168 °C; MS m/e [M+Na]+ ja 595 [M+H]*.

Lähtöaineena käytettyä 2(R)-[3(S)-amino-2(R)-hyd-roksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-l(R)-sykloheksaa-35 nikarboksamidia valmistettiin esimerkin 2 toisessa kappa- 30 110938 leessa kuvatulla tavalla 2(R)-[3(S)-(tert.-butoksiforma-mido)-2(R)-hyroksi-4-fenyylibutyyli] -N-tert. -butyyli-1 (R)-sykloheksaanikarboksamidista [saatu esimerkin 3 ensimmäisessä kappaleessa kuvatulla tavalla] ja käytettiin ilman 5 enempää puhdistamista.

Esimerkki 5

Seosta, joka sisälsi 65 mg (0,13 mmol) 2(S)-[3(S)-[ [ L-asparaginyyli] -amino] -2 (R ) -hydroksi-4- f enyy 1 ibutyyl i ] -N-tert.-butyyli-l(R)-sykloheksaanikarboksamidia ja 35 mg 10 (0,13 mmol) kinaldiinihapon N-hydroksisukkinimidiesteriä 2 mlrssa tetrahydrofuraania, hämmennettiin huoneenlämpötilassa typpikaasun alaisena 18 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännös jaettiin 10 ml:n suuruisen etyy-liasetaattierän ja 10 ml:n suuruisen 10-%risen natriumkar-15 bonaattiliuoserän kesken. Orgaaninen kerros pestiin 10 ml:11a vettä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin. Raakatuote kromatografoitiin käyttämällä piihappogeelipylvästä ja eluointiin 7-%:ista metanolin dikloorimetaaniliuosta, jolloin saatiin 80 mg 20 2(S)-[3(S)-[[N-(2-kinolyyli-karbonyyli)-L-asparaginyy- 4 t li]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-’ l(R)-sykloheksaanikarboksamidia valkoisena kiinteänä ai neena: MS m/e 616 [M+H]*.

Lähtöaineena käytettyä 2(S)-[3(S)-[[L-asparaginyy-25 li]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli- l(R)-sykloheksaanikarboksamidia valmistettiin seuraavalla tavalla:

Liuosta, joka sisälsi 80 mg (0,13 mmol) 2(S)-[3(S)-[ [N-(bentsyylioksikarbonyyli) -L-asparaginyyli] amino] -2(R)-30 hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-l(R)-syklohek- ' ; saanikarboksamidia [saatu esimerkin 2 ensimmäisessä kap paleessa kuvatulla tavalla] 10 mlrssa etanolia, hydrattiin käyttämällä 10 mg 10-%:ista palladium/hiilellä-katalysaat-toria 4 tuntia. Katalysaattori poistettiin suodattamalla 35 ja suodos haihdutettiin. Jäännös suspendoitiin tolueeniin 110938 31 ja seos haihdutettiin. Tämä menettely toistettiin kerran, jolloin saatiin 65 mg 2(S)-[3(S)-[[L-asparaginyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyyli-butyyli] -N-tert. -butyyli-l(R)-syk-loheksaanikarboksamidia värittömänä vaahtona, jota käytet-5 tiin ilman enempää puhdistamista.

Esimerkki 6

Liuos, joka sisälsi 90 mg (0,26 mmol) 2(S)-[3(S)-amino-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-l(R)-sykloheksaanikarboksamidia 4 ml:ssa dikloorimetaania, 10 lisättiin seokseen, joka sisälsi 65 mg (0,26 mmol) N-bent-syylioksikarbonyyli-syaani-L-alaniinia, 35 mg (0,23 mmol) hydroksibentsotriatsolihydraattia ja 54 mg (0,26 mmol) disykloheksyylikarbodi-imidiä 2 mltssa dimetyyliformami-dia. Seosta hämmennettiin typpikaasun alaisena huoneenläm-15 pötilassa 18 tuntia ja sen jälkeen suodatettiin. Suodos haihdutettiin ja jäännös jaettiin 25 ml:n suuruisen etyy-liasetaattimäärän ja 10 ml:n suuruisen kyllästetyn nat-riumvetykarbonaattiliuosmäärän kesken. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdu-20 tettiin. Raakatuote kromatografoitiin käyttäen piihappo-geelipylvästä ja eluointiin 3-%:ista metanolin dikloorime-taaniliuosta ja tuotetta puhdistettiin edelleen kiteyttämällä seoksesta, joka sisälsi 1 ml:n dikloorimetaania ja 10 ml heksaania. Tällöin saatiin 68 mg 2(S)-[3(S)-[[N-25 (bentsyylioksikarbonyyli)-3-syaani-L-alanyyli]amino]-2(R)- hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-l(R)-syklohek-saanikarboksamidia valkoisena kiinteänä aineena; MS m/e 577 [M+H]\

Esimerkki 7 30 Esimerkissä 6 esitetyllä tavalla kytkettiin 73 mg (0,29 mmol) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valiinia 100 mg:n (0,29 mmol) kanssa 2(S)-[3(S)-amino-2(R)-hydroksi-4-fenyy-libutyyli]-N-tert.-butyyli-l(R)-sykloheksaanikarboksamid-ia, jolloin saatiin 80 mg 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksi-35 karbonyyli )-L-valyyli] amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyy- 32 110938 li]-N-tert.-butyyli-l(R)-sykloheksaanikarboksamidia valkoisena kiinteänä aineena: MS m/e 580 [M+H] + .

Esimerkki 8

Esimerkissä 6 esitetyllä tavalla kytkettiin 78 mg 5 (0,26 mmol) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-fenyylialaniinia 90 mg:n (0,26 mmol) kanssa 2(S)-[3(S)-amino-2(R)-hydroksi- 4-fenyylibutyyli]-N-tert. -butyyli-1 (R)-sykloheksaanikar-boksamidia, jolloin saatiin 72 mg 2(S)-[(S)-[[N-bentsyy-lioksikarbonyyli)-L-fenyylialanyyli]amino]-2(R)-hydroksi-10 4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyylil(R)-sykloheksaanikarbok-samidia valkoisena kiinteänä aineena: MS m/e 628 [M+H]*.

Esimerkki 9

Esimerkissä 5 esitetyllä tavalla hydrattiin 95 mg (0,16 mmol) 2(S)[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyyli)-L-va-15 lyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-bu- tyyli-l(R)-syklohekaanikarboksamidia käyttäen 10-%:ista palladium/hiilellä-katalysaattoria ja tuote reagoitettiin kinaldiinihapon N-hydroksisukkinimidiesterin kanssa, jolloin saatiin 50 mg 2(S)-[3(S)-[[N-(2-kinolyylikarbonyyli)-20 L-valyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.- butyyli-1(R)-sykloheksaanikarboksamidia valkoisena kiinteänä aineena; MS m/e 601 [M+H]*.

Esimerkki 10

Esimerkissä 6 esitetyllä tavalla kytkettiin 70 mg 25 (0,26 mmol) N-bentsyylioksikarbonyyli-S-metyyli-L-kysteii- niä 90 mg:n (0,26 mmol) kanssa 2(S)-[3(S)-amino-2(R)-hyd-roksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert. -butyyli-l(R)-syklohekaani-karboksamidia, jolloin saatiin 30 mg 2(S)-[3(S)-[[N-bent-syylioksikarbonyyli)-S-metyyli-L-kysteinyyli]amino]-2(R)-30 hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-l(R)-syklohek- saanikaroksiamidia valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste oli 143 - 144 °C; MS m/e 598 [M+H]*.

Esimerkki 11 220 mg (0,59 mmol) pyridiniumdikromaattia lisättiin 35 liuokseen, joka sisälsi 48 mg (0,08 mmol) 2(S)-[3(S)-[[N- 33 110938 (bentsyylioksikarbonyyli)-L-valyyli]amino]-2(R)-hydroksi- 4-fenyylibutyyli] -N-tert. -butyyli-1 (R)-sykloheksaanikar-boksamidia 1 ml:ssa dimetyyliformamidia, ja seosta hämmennettiin huoneenlämpötilassa 18 tuntia. 10 ml vettä lisät-5 tiin ja seos uutettiin kahdella 10 ml:n suuruisella erällä etyyliasetaattia. Yhdistetyt uutokset pestiin kahdella 10 ml:n suuruisella erällä vettä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin. Raakatuote kromatografoitiin käyttäen piihappogeelipylvästä ja 10 eluointiin 4-%:ista metanolin dikloorimetaaniliuosta, jol loin saatiin 31 mg 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyyli )-L-valyyli] -amino] -2-okso-4- f enyylibu tyyli] -N-tert. -butyyli-l(R)-sykloheksaanikarboksamidia valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste oli 186 - 188 °C; MS m/e 15 578 [M+H]\

Esimerkki 12

Esimerkissä 6 esitetyllä tavalla kytkettiin 72 mg (0,26 mmol) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-asparagiinihapon β-metyyliesteriä 90 mg:n (0,26 mmol) kanssa 2(S)-[3(S)-20 amino-2(R)-hydroks-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-1 (R)- sykloheksaanikarboksamidia, jolloin saatiin 90 mg 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyylioksikarbonyyli)-0-metyyli-L-aspartyy-li]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert.-butyyli-; i l(R)-sykloheksaanikarboksamidia värittömänä hartsina; 25 MS m/e 610 [M+H]\

Esimerkki 13

Seosta, joka sisälsi 60 mg (0,13 mmol) 2(S)-[3(S)-- . [[L-asparaginyyli]amino]-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]- N-tert.-butyyli-l(R)-sykloheksaanikarboksamidia, 25 mg ;· 30 (0,13 mmol) 3,5-diklooribentsoehappoa, 18 mg (0,13 mmol) " hydroksibentsotriatsolihydraattia ja 27 mg (0,13 mmol) disykloheksyylikarbodi-imidiä 2 ml:ssa dimetyyliformamidia, hämmennettiin huoneenlämpötilassa typpikaasun alai-, , sena 20 tuntia. Sen jälkeen seos suodatettiin ja kiinteä J j 35 aine pestiin dikloorimetaanilla. Yhdistetyt suodos ja pe- 110933 34 suvedet haihdutettiin kuiviin ja jäännös jaettiin 50 ml:n suuruisen etyyliasetaattierän ja 10 ml:n suuruisen kyllästetyn natriumvetykarbonaattiliuoserän kesken. Erotettu orgaaninen faasi kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin 5 avulla ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin käyttäen piihappogeeliä ja eluointiin 5-%:ista metanolin di-kloorimetaaniliuosta. Tuotetta puhdistettiin edelleen kiteyttämällä uudelleen seoksesta, joka sisälsi 2 ml dikloo-rimetaania ja 10 ml n-heksaania, jolloin saatiin 37 mg 10 2(S)-[3(S)-[[N-(3, 5-diklooribentsoyyli)-L-asparaginyy- li] amino]-2( R)-hydroksi-4-f enyylibutyyli ] -N-tert. -butyyli-l(R)-sykloheksaanikarboksamidia valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste oli 220 - 226 °C.

Esimerkki 14 15 Esimerkissä 6 esitetyllä tavalla kytkettiin 68 mg (0,26 mmol) N-bentsyylioksikarbonyyli-3-metyyli-L-valiinia 90 mg:n (0,26 mmol) kanssa 2(S)-[3(S)-amino-2(R)-hydroksi- 4-f enyylibutyyli] -N-tert. -butyyli-1(R)-sykloheksaanikar-boksamidia, jolloin saatiin 40 mg 2(S)-[3(S)-[[N-(bentsyy-20 lioksikarbonyyli)-3-metyyli-L-valyyli]amino]-2(R)-hydrok- si-4-f enyylibutyyli] -N-tert. -butyyli-1 (R) -sykloheksaani-karboksamidia valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste oli 90 °C (hajosi); MS m/e 594 [M+H]*.

Esimerkki 15 25 Liuos, joka sisälsi 100 mg (0,23 mmol) 2(S)-[[4(S)- bentsyyli-3-(tert.-butoksikarbonyyli)-2,2-dimetyyli-5(R)-oksatsolidinyyli ] metyyl i ] -1 (R) - sykloheksaanikarboksyy li -happoa (saatu esimerkissä 1 kuvatulla tavalla) 2 ml:ssa dietyylieetteriä, lisättiin 5 ml:an 0,3M diatsometaanin 30 dietyylieetteriliuosta. Seoksen annettiin seistä huoneen-' · lämpötilassa yön yli ja sen jälkeen se haihdutettiin.

Jäännös liuotettiin 3 ml:an metanolia ja liuokseen lisättiin 4 mg tolueeni-4-sulfonihappoa. Seoksen annettiin seistä yön yli huoneenlämpötilassa ja sen jälkeen se haih-35 dutettiin kuiviin. Jäännös jaettiin 10 ml:n suuruisen di- 35 110938 kloorimetaanierän ja 3 ml:n suuruisen kyllästetyn natrium-vetykarbonaatin vesiliuoserän kesken. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 90 mg hartsia. Raakatuote kroma-5 tografoitiin käyttäen piihappogeelipylvästä ja eluintiin heksaani/etyyliasetaatti-seosta (2:1, til./til.), jolloin saatiin metyyli-2(S)-[3(S)-(tert.-butoksiformamido)-2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli] -1 (R) -sykloheksaanikarboksylaat-tia valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste oli 10 127 - 128 °C, MS m/e 406 [M+H]\

Seuraava esimerkki valaisee tyypillistä farmaseuttista valmistetta, joka sisältää kaavan I mukaista yhdistettä tai kaavan I mukaisen emäksisen yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävää happoadditiosuolaa aktiivisena ai-15 neksena:

Esimerkki A

Aktiivisen aineksen vesiliuos suodatetaan sterii-listi ja sekoitetaan samalla lämmittäen steriilin gelatii-niliuoksen kanssa, joka sisältää fenolia säilöntäaineena, 20 käyttäen sellaisia määriä, että 1 ml valmista liuosta sisältää 3 mg aktiivista ainesta, 150 mg gelatiinia, 4,7 mg fenolia ja loput tislattua vettä 1 ml:an asti. Seos täytetään aseptisissa olosuhteissa 1 ml:n vetoisiin lääkepul-loihin.

’ o

Claims

36 110938
1. Menetelmä karboksiamidijohdannaisten valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia virusperäisten prote-5 aasien inhiboimiseksi, ja joilla on kaava R2 io R3 R4JL r5/^R6 jossa R1 tarkoittaa Ci_8-alkoksikarbonyyliä tai ryhmää, jolla on kaava 15 _ 0 R8HNVs^JI— (l) R9
20 R2 tarkoittaa aryyli-Ci_8-alkyyliä; R3 tarkoittaa vetyä ja R4 tarkoittaa hydroksia tai R3 ja R4 tarkoittavat yhdessä oksoa; R5 tarkoittaa Ci-8-alkoksikarbonyyliä tai Ci-8-alkyylikarbamoyyliä; R6 ja R7 tarkoittavat yhdessä '· tetrametyleeniä; R8 tarkoittaa Ci_8-alkoksikarbonyyliä, . . 25 aryyli-Cx-e-alkoksikarbonyyliä, Ci-8-alkanoyyliä, aryyli- karbonyyliä tai kinolyylikarbonyyliä; ja R9 tarkoittaa Ci-8-alkyyliä, aryyli-Ci-e-alkyyliä, syaani-Ci-8~alkyyliä, karbamoyyli-Ci-e-alkyyliä, Ci_8-alkyylitio-Ci_8-alkyyliä tai Cx_8-alkoksikarbonyyli-Ci-8-alkyyliä, ja niiden kaavan I 30 mukaisten yhdisteiden, jotka ovat emäksisiä, farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen ' valmistamiseksi, tunnettu siitä, että ; : a) kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R1 tarkoittaa Ci-8-alkoksikarbonyyliä, R3 tarkoittaa 35 vetyä ja R4 tarkoittaa hydroksia, yhdistettä, jonka kaava on 37 110938 h3c--o J.
5 R5^ ^R6 CH3 jossa Rla tarkoittaa Ci-e-alkoksikarbonyyliä ja Rz, R5, R6 ja R7 tarkoittavat samaa kuin edellä, käsitellään hapon kanssa, tai 10 (b) yhdiste, jonka kaava on R2 dii) h2" X ΊΓ
15 R5-/XJ>SvR6 jossa R2, R3, R4, R5, R6 ja R7 tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan asylointiaineen kanssa, joka tuo molekyyliin edellä määritellyn ryhmän R1, tai 20 (c) kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R1 tarkoittaa kaavan (i) mukaista ryhmää, yhdiste, jonka kaava on O r2 : 25 H2V^N^S^^R7 «IV) I H R3'"^‘R4 R JL Rs/ ^R6 , jossa R2, R3, R4, R5, R6, R7 ja R9 tarkoittavat samaa kuin 30 edellä, saatetaan reagoimaan asylointiaineen kanssa, joka tuo molykyyliin edellä määritellyn ryhmän R8, tai (d) kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R3 ja R4 tarkoittavat yhdessä oksoa, kaavan I mukainen yhdiste, jossa kaavassa R3 tarkoittaa vetyä ja R4 tar-35 koittaa hydroksia, hapetetaan, ja/tai 38 110938 (e) haluttaessa diastereoisomeeristen rasemaattien seos erotetaan diastereoisomeerisiksi rasemaateiksi tai optisesti puhtaiksi diastereoisomeereiksi, ja/tai (f) haluttaessa diastereoisomeerien seos erotetaan 5 optisesti puhtaiksi diastereoisomeereiksi, ja/tai (g) haluttaessa saatu kaavan I mukainen emäksinen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happo-additiosuolaksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun-10 n e t t u siitä, että R8 tarkoittaa Ci-e-alkoksi- karbonyyliä, aryyli-Ci-s-alkoksikarbonyyliä, Ci-e-alkano-yyliä, aryylikarbonyyliä tai kinolyylikarbonyyliä.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R1 tarkoittaa C1-0- 15 alkoksikarbonyyliä tai kaavan (i) mukaista ryhmää, jossa kaavassa R8 tarkoittaa aryyli-Ci-e-alkoksikarbonyyliä tai kinolyylikarbonyyliä ja R9 tarkoittaa Ci-e-alkyyliä, aryyli-Ci-8-alkyyliä, syaani-Ci-e-alkyyliä, karbamoyyli-Ci-e- alkyyliä, Ci-s-alkyylitio-Ci-e-alkyyliä tai Ci-g- 20 alkoksikarbonyyli-Ci-8-alkyyliä.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R1 tarkoittaa tert- butoksikarbonyyliä tai kaavan (i) mukaista ryhmää, jossa kaavassa R8 tarkoittaa bentsyylioksikarbonyyliä, 3,5- 25 diklooribentsoyyliä tai 2-kinolyylikarbonyyliä ja R9 tarkoittaa isopropyyliä, tert-butyyliä, bentsyyliä, syaanimetyyliä, karbamoyylimetyyliä, metyylitiometyyliä tai metoksikarbonyylimetyyliä.
5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen 30 menetelmä, tunnettu siitä, että Rz tarkoittaa bentsyyliä.
6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R3 tarkoittaa vetyä ja R4 tarkoittaa hydroksia. 39 110938
7. Jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R5 tarkoittaa metoksi-karbonyyliä.
8. Jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukainen 5 menetelmä, tunnettu siitä, että R5 tarkoittaa tert-butyylikarbamoyyliä.
9. Jonkin patenttivaatimuksen 1-8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R1 tarkoittaa tert-butoksikarbonyyliä tai kaavan (i) mukaista ryhmää, 10 jossa R8 tarkoittaa bentsyylioksikarbonyyliä, 3,5-di-klooribentsoyyliä tai 2-kinolyylikarbonyyliä ja R9 tarkoittaa isopropyyliä, tert-butyyliä, bentsyyliä, syaanimetyyliä, karbamoyylimetyyliä, metyylitiometyyliä tai metoksikarbonyylimetyyliä, R2 tarkoittaa bentsyyliä; R3 15 tarkoittaa vetyä ja R4 tarkoittaa hydroksia; R5 tarkoittaa metoksikarbonyyliä tai tert-butyylikarbamoyyliä; ja R6 ja R7 tarkoittavat yhdessä tetrametyleeniä.
10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 2(S)- 20 [3(S)-[[N-(2-kinolyylikarbonyyli)-L-asparaginyyli]amino]- 2(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-tert-butyyli-1(R)-syklo-heksaanikarboksamidia.
11. Yhdiste, jonka kaava on
25 R2 0 Τγγ" H3c--O I R5^ ^R6 CH, 30 tunnettu siitä, että Rla tarkoittaa Ci-s-J - alkoksikarbonyyliä; R2 tarkoittaa aryyli-Ci-e-alkyyliä; R5 tarkoittaa Ci-s-alkoksikarbonyyliä tai Ci-e-alkyy-likarbamoyyliä; ja R6 ja R7 tarkoittavat yhdessä 35 tetrametyleeniä. 110933 40
12. Yhdiste, jonka kaava on R2 5 (III) r5"^vr6 tunnettu siitä, että R2 tarkoittaa aryyli-Ci_8-10 alkyyliä; R3 tarkoittaa vetyä; R4 tarkoittaa hydroksia; tai R3 ja R4 tarkoittavat yhdessä oksoa; R5 tarkoittaa Ci-8-alkoksikarbonyyliä tai Ci-8-alkyylikarbamoyyliä; ja R6 ja R7 tarkoittavat yhdessä tetrametyleeniä.
13. Yhdiste, jonka kaava on 15 K'x\^cr' R Jl
20 R5 R6 tunnettu siitä, että Rz tarkoittaa aryyli-Ci-8-alkyyliä; R3 tarkoittaa vetyä; R4 tarkoittaa hydroksia; tai R3 ja R4 tarkoittavat yhdessä oksoa; R5 tarkoittaa Ci-8-25 alkoksikarbonyyliä tai Ci-8-alkyylikarbamoyyliä; R6 ja R7 tarkoittavat yhdessä tetrametyleeniä; ja R9 tarkoittaa Ci-8-alkyyliä, aryyli-Ci-8-alkyyliä, syaani-Ci-8-alkyyliä, karba-moyyli-Ci-8-alkyyliä, Ci-8-alkyylitio-Ci-8-alkyyliä tai Ci-8-alkoksikarbonyyli-Ci-8-alkyyliä.
14. Yhdiste, jonka kaava on R2 ;1 r’-hn'^y^y'r (VIII
35 OH X. t” 41 110938 tunnettu siitä, että Rla tarkoittaa Ci-e- alkoksikarbonyyliä; R2 tarkoittaa aryyli-Ci-8-alkyyliä; ja R6 ja R7 tarkoittavat yhdessä tetrametyleeniä.
15. Yhdiste, jonka kaava on 5 R2 R1* X. .R7 N Y Y I (VIII) H c--O 10 ch3 tunnettu siitä, että Rla tarkoittaa Ci-e- alkoksikarbonyyliä; R2 tarkoittaa aryyli-Ci-e-alkyyliä; ja R6 ja R7 tarkoittavat yhdessä tetrametyleeniä.
16. Yhdiste, jonka kaava on R2 I (IX)
20 H3C--O HOOC R6 CH3 tunnettu siitä, että Rla tarkoittaa Ci-e- ’· alkoksikarbonyyliä; R2 tarkoittaa aryyli-Ci-8-alkyyliä; ja
25 R6 ja R7 tarkoittavat yhdessä tetrametyleeniä. 42 110938