FI107532B - Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisten geneseriinijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

107532

Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisten geneseriinijohdannaisten valmistamiseksi Förfarande för framställning av som läkemedel användbara geneserinderivat 5

Esillä oleva keksintö liittyy menetelmään geneseriinijohdannaisten valmistamiseksi.

10 Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetuilla yhdisteillä on seuraava yleinen kaava (I): foTT j 20 jossa R on suora tai haarautunut C2-C20-aIkyyliryhmä, C3-C7-sykloalkyyliryhmä, fenyyli- tai bentsyyliryhmä, valinnaisesti substituoitu Cj-C4-alkyyliryhmillä, halo-geeniatomeilla, C^-C4-alkoksiryhmillä.

25

Edullisesti R on alkyyliryhmä, jossa on 4-12 hiiliatomia, edullisimmin 6-8 hiiliatomia.

:* Yhdiste I, jossa R on n-heptyyliryhmä, on erityisen edullinen.

30 Keksintö käsittää myös yhdisteiden I suolat farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa, erityisesti kloorivety-, rikki-, viini-, sukkiini-, maleiini-, sitruuna-, metaanisulfoni-, fumariini-, etikka-, maito-, salisyylihappojen kanssa.

2 107532

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävillä suoloilla on inhiboivaa vaikutusta koliiniesteraasia vastaan ja ne ovat käyttökelpoisia annosteltuina potilaille, jotka kärsivät Alzheimerin taudista tai erilaisista muista tiloista, jotka johtuvat neurologisista häiriöistä.

5

Alzheimerin tauti on eräs etenevän dementian muoto, jolle on kliinisesti tunnusomaista muistin menetys ja älyllisten toimintojen heikentyminen.

Kolinergisen systeemin merkitys Alzheimerin taudissa on hyvin tunnettu jakolinergi-10 sen funktion menetyksen on havaittu liittyvän sekä hermosto vammojen läsnäoloon että havaintotoimintojen vakavaan menettämiseen.

Näiden todisteiden perusteella, eräs eniten tutkituista terapeuttisista lähestymistavoista on koliinivaikutukseen liittyvän taudin jäljittely, jonka on tarkoitettu parantavan is ja lisäävän koliinivaikutusta.

Lupaavimmat tulokset saatiin käyttämällä koliiniesteraasin inhibiittoreita, varsinkin fysostigmiiniä ja takriinia.

20 EP-A-0154864 ja EP-A-0298202 esittävät fysostigmiinin johdannaisia, joille on tun nusomaista suurempi lipofilia, johtuen pitkäketjuisten alkyyli- tai aryylijäännösten läsnäolosta karbamoyyliryhmässä, joka on tyypillinen tälle alkaloidiluokalle.

Vaikka geneseriini on jo monta vuotta tunnettu antikolinergisena aineena ja sitä on 2 5 käytetty terapiassa mahasuolikouristuksia vastustavana aineena sitä ei ikinä ole tutkittu siinä mielessä, että sillä olisi kykyä palauttaa kolinerginen funktio keskusher-. moston tasolla.

Nyt on havaittu, että kaavan I mukaisilla geneseriinin johdannaisilla on farmakologi- 3 0 siä ominaisuuksia, jotka ovat erityisen mielenkiintoisia ja edullisia verrattuna teknii kan tason yhdisteisiin.

3 107532

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa hapettamalla kaavan II mukaisia yhdisteitä fH3 fH3 ^ Qj_J ui’ r-nh-c-6^Xsn— 6 ch3 10 jossa R on määritelty kuten edellä.

Hapetus suoritetaan edullisesti orgaanisten perhappojen tai peroksidien avulla, joita 15 ovat esim. m-klooriperbentsoehappo, monoperftaalihappo, peretikkahappo, vetyperoksidi, inerteissä liuottimissa, joita ovat esim. halogenoidut hiilivedyt, aromaattiset hiilivedyt, dimetyyliformamidi, dimetyylisulfoksidi.

Kaavan II mukaisten yhdisteiden valmistus fysostigmiinistä on tunnettu julkaisuista 2 0 EP-A-0154864 ja EP-A-0298202, jotka on mainittu edellä.

Vaihtoehtoisesti, yhdisteitä I voidaan saada geneseriinistä lähtien metyyliaminokar-bonyylioksiryhmän hydrolyysillä ja sen jälkeen O-asyloinnilla reagenssien kanssa, jotka kykenevät sisällyttämään halutun funktion -C-NHR, jossa R on määritelty

25 II

edellä. O

Esimerkkejä asylointireagensseista, joita voidaan sopivasti käyttää tähän tarkoituk-30 seen, ovat kaavan R-NCO mukaiset alkyyli-isosyanaatit, jossa R on kuten kaavassa I tai vaihtoehtoisesti kaavan III mukaiset substituoidut imidatsoliureat 4 107532 ίΐ/~~} (111, r-nh-c-n ΚίΧ1Ί \=l jotka voidaan valmistaa karbonyylidi-imidatsolista ja kaavan RNH2 mukaisista amiineista, joissa R on määritelty kuten edellä.

10 Geneseriinin hydrolyysi voidaan suorittaa analogisesti kuten fysostygmiininkin, reaktiolla alkalialkoksidien kanssa, kun taas O-asylointi substituoiduilla imidatso-liureoilla suoritetaan aivan vedettömässä väliaineessa metallisen natriumin läsnäollessa.

15 Täsmällisemmin sanottuna keksinnön mukaiselle menetelmälle lääkeaineena käyttökelpoisten kaavan (I) 20 \ ^

—kJ

25 . mukaisten geneseriinijohdannaisten valmistamiseksi ja niiden suolojen orgaanisten tai epäorgaanisten ei-toksisten happojen kanssa valmistamiseksi, missä R on suora tai haaroittunut C2-C20-alkyyliryhmä, C3-C7-sykloalkyyliryhmä, 30 fenyyli- tai bentsyyliryhmä, valinnaisesti substituoitu CrC4-alkyyliryhmillä, halo-geeniatomeilla, C, -C4-alkoksiryhmillä, 5 107532 on tunnusomaista se, että vaihtoehtoisesti a) hapetetaan kaavan (II) mukaisia yhdisteitä 5 CH CH, (3,3 ^ Oj __j 10 R-ra-C-6^\^^ o CH3 missä R on määritelty kuten edellä; tai 15 b) kaavan (IV) mukaisen geneseriinin o ^---^ J (m cz3 25

metyyliaminokarbonyylioksiryhmä hydrolysoidaan ja sen jälkeen O-asyloidaan . reagenssin avulla, joka kykenee tuomaan rakenteeseen toivotun -C-NHR

funktion, Il

30 O

6 107532 ja asylointireagenssi on kaavan R-NCO mukainen alkyyli-isosyanaatti, jossa R on kuten kaavassa (I) tai vaihtoehtoisesti kaavan (III) mukainen substituoitu imidat-soliurea

f? /=T

R-NH-C-N (III) 10 joka voidaan valmistaa karbonyylidi-imidatsolista ja kaavan RNH2 mukaisista amiineista, joissa R on määritelty kuten edellä; 15 ja valinnaisesti muodostetaan suola orgaanisen tai epäorgaanisen ei-toksisen hapon kanssa.

Tuloksena saadut yhdisteet I voidaan sitten altistaa suolan muodostamiselle orgaani- 2 0 silla tai epäorgaanisilla ei-myrkyllisillä hapoilla, tavanomaisten tekniikoiden mukai sesti. Yhdisteet I, tarkoitettu terapeuttisia käyttöjä varten, formuloidaan tavanomais-ten tekniikoiden ja täyteaineiden avulla, kuten niiden, jotka on kuvattu Remington:in Pharmaceutical Sciences Handbook:issa, Mack Pub. Co., NY, U.S.A., 18ma Ed. Keskimääräinen päivittäinen annos riippuu tietenkin monista tekijöistä, mutta 25 yleensä se on alueella 10-1000 mg yhdisteitä I tai niiden suoloja.

Keksinnön mukaisilla geneseriinijohdannaisilla on huomattavasti pitkäkestoisempi aivojen asetyylikoliiniesteraasia inhiboiva vaikutus kuin geneseriinillä.

3 0 Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä lisää.

7 107532 ESIMERKKI 1 a) Eseroliini 5 Liuokseen, joka sisälsi 5 g eseriiniä (Sigma tai Fluka) kaasuttamassa vedettömässä etanolissa (600 ml), lisätään 0,4g natriumia annoksittain. Noin puolen tunnin jälkeen liuotin haihdutetaan pois vakuumissa lämpötilassa 30 °Cja tuloksena saatua öljyä käsitellään 10 % :11a HCl-liuoksella ja uutetaan 3 x 50 ml:11a CHC13.

ίο Yhdistetyt orgaaniset faasit pestään sitten NaCl-kyllästetyllä vedellä, kunnes punainen väri vesifaasissa häviää. Kun on kuivattu NajSO^n avulla ja haihdutettu vakuumissa lämpötilassa 25 °C, saadaan öljy, joka jälleenkiteytetään 1/2 etyyliasetaat-ti/petrolieetteristä, jolloin saadaan kiinteä aine 24 %:n saannilla (2,54 g).

is TLC: CHC13/CH30H = 4/1 Rf = 0,4

Kehitin: UV, fenolireaktiivi S.p. = 126 °C (kirj. 129 °C) 20 Saatu kiinteä aine varastoidaan hydrokloridina; emäs käsitellään kloorivety- EtOH-liuoksella happamaksi ja haihdutetaan vakuumissa lämpötilassa 35 °C.

S.P. = 150-151 °C(kirj. 154 °C) MS ja NMR ovat yhdenmukaisia.

25 b) N-heptyyli-imidatsoliurea

Liuokseen, joka sisältää 10 g karbonyylidi-imidatsolia 600 ml:ssa vedetöntä tetrahyd-rofuraania, jäähdytettiin lämpötilaan +5 °Cja voimakkaasti sekoittaen lisätään liuos, 30 joka sisältää 7,1 g heptyyliamiinia 40 ml: ssa vedetöntä tetrahydrofuraania. 45 minuutin jälkeen liuotin haihdutetaan vakuumissa lämpötilassa 30 °Cja saatu öljy 8 107532 käsitellään 2x70ml:llaheksaania, dekantoidaan ja käytetään suoraan sen jälkeiseen reaktioon.

TLC: etyyliasetaatti/heksaani = 3/7 5 Rf = 0,3

Kehitin: fenolireaktiivi (vihreä laatu) MS ja NMR yhdenmukaisia.

c) N-heptyylieseriini 10 0,1 g natriumia lisätään sen tuotteen liuokseen, joka saatiin vaiheessa a) (5 g) 150 ml:ssa kaasutonta vedetöntä etyylieetteriä, sekoittaen ja typpiatmosfäärissä ja seos jätetään reagoimaan yhdeksi tunniksi huoneen lämpöön. Sitten vaiheessa b) saatu tuote (4,5 g) lisätään reaktioseokseen, puolen tunnin ajan. Yhden päivän jälkeen is huoneen lämmössä, eetteriliuos pestään 50 ml:lla vettä, kuivataan Na2S04:n avulla ja haihdutetaan vakuumissa lämpötilassa 30 °C.

Tuote puhdistetaan F.C.:llä.

(eluentti etyyliasetaatti: 3 = heksaani: 1 = metanoli: l;Rf = 0,35;paikallaan pysyvä 2 0 faasi: silikageeli, 30-60 /im).

Saadaan öljyinen tuote, saanti 53 % (4,16 g).

NMR on yhdenmukainen.

Puhtaus >90 % 25

Tuote varastoidaan tartraattina.

MS, Ή- ja 13C-NMR ovat yhdenmukaisia.

9 107532 d) N-heptyyligeneseriini

Liuokseen, joka sisältää 0,52 g tuotetta, joka on saatu vaiheessa c) 50 ml:ssa kaasu-tonta kloroformia, jäähdytetty lämpötilaan noin 0 °C,lisätään 0,7 g m-klooriperbent-5 soehappoa, jonka puhtaus on 99 % (jodometrisellä titroinnilla, käsittelyn jälkeen Schwarts ja Blungersrin mukaisesti, J. Org. 29, 1976 (1964)) liuotettu 10 mlraan kloroformia pisara kerrallaan reaktioseokseen, joka pidetään lämpötilassa 0-5 °C. Sen jälkeen reaktio jätetään huoneen lämpöön sekoitukseen yön yli. Kun reaktio on ohi, kloroformiliuos pestään 50 ml:lla NaHC03 kyllästettyä liuosta, sitten ίο NaCl kyllästettyä liuosta, kuivataan Na2S04:n avulla ja lopuksi haihdutetaan vakuu-missa huoneen lämmössä.

Tuote puhdistetaan preparatiivisella TLC:llä,eluoidaan etyylieetteri/trietyyliamiinilla 40/1. Rf = 0,8.

15

Tuote uutetaan silikasta kloroformi/metanolissa =9,5/0,5 ja saadaan haihduttamalla liuos vakuumissa huoneen lämmössä. Väritön öljy saadaan 35 %:n saantona (200 mg).

20 TLC: etyylieetteri/trietyyliamiini = 40/1.

Rf = 0,8 MS; Ή- ja 13C-NMR; kenttädesorptio, ovat yhdenmukaisia.

ESIMERKKI 2 25 N-heptyyligeneseriini , ««

Esimerkistä 1 saadun tuotteen liuos (1,24 g) 10 ml:ssa asetonia käsitellään 14,7ml:lla 6 % vetyperoksidia ja pisaralla CaC03. Reaktioseoksen annetaan reagoida 30 ilman valoa huoneen lämmössä 55 tuntia, kunnes lähtötuote häviää. Sitten asetoni haihdutetaan pois kuplittamalla typpeä ja vesiliuos uutetaan 3 x50 ml :11a etyylieette-riä.

ίο 107532

Erotettu eetteriliuos pestään 10 %:lla NaHC03, sitten NaCl:n kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivataan Na2S04:llä ja haihdutetaan vakuumissa huoneen lämmössä, jolloin saadaan väritön öljy, joka on sama kuin tuote, joka kuvattiin esimerkissä 1(d) (TLC).

s Saanti = 45 % (600 mg) ESIMERKKI 3 N-heptyyligeneseriini-L-tartraatti (CHF 2060) 10

Liuokseen, joka sisältää 0,400 g tuotetta, joka saatiin esimerkissä 2 tai esimerkissä 3 11,2 ml:ssa vedetöntä kaasutonta isopropyylieetteriä, lisätään aikaisemmin valmistettu liuos, joka sisältää 0,150gL-tartaarihappoa vedettömässä kaasuttomassa isopro-panolissa (3,2 ml). Reaktioseoksen annetaan reagoida, kunnes saadaan kirkas liuos, is sitten 8 ml vedetöntä kaasutonta isopropyylieetteriä lisätään ja kiteiden muodostus käynnistyy. Vielä 2 tunnin sekoittamsen jälkeen saatu kiinteä aine suodatetaan, pestään pienellä määrällä isopropyylieetteriä.

Saanti = 60 % (340 mg).

20 ESIMERKKI 4 N-heptyyli-geneseriinisalisylaatti 25 Liuos, joka sisältää 0,5 g tuotetaa, joka saatiin esimerkeissä 1 ja 2, kaasuttomassa etyylieetterissä (15 ml) lisätään liuokseen, joka sisältää salisyylihappoa (0,18 g) « > . 15 ml:ssa kaasutonta etyylieetteriä, sitten tilavuuden jätetään vähenemään hitaalla haihduttamisella. 48 tunnin jälkeen muodostuu valkoinen kiinteä aine, joka suodatetaan ja kuivataan vakuumissa lämpötilassa 30 °C.

Saanti = 30 % (200 mg).

30 li 107532 ESIMERKKI 5 a) Geneseroliini 5 Liuokseen, joka sisältää 1 g geneseriiniä 70 ml:ssa vedetöntä kaasutonta etnaolia, lisätään 10 mg natriumia typpiatmosfaärissä. Reaktioseos kuumennetaan lämpötilaan 40 °C ja jätetään sekoitukseen tähän lämpötilaan yhdeksi tunniksi. Kun reaktio on ohi, liuotin haihdutetaan pois vakuumissa lämpötilassa 30 °C.Jäännös käsitellään 10 %:lla HCl:llä (40 ml) ja uutetaan kloroformilla (3 x 50 ml). Yhdistetyt orgaaniset ίο liuokset pestään NaCl:llä kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivataan natriumsulfaatin avulla ja haihdutetaan vakuumissa huoneen lämmössä, jolloin saadaan punainen öljy noin 60 %:na saatina.

Öljy käytetään suoraan sen jälkeiseen reaktioon.

15 TLC: etyyliasetaatti/kloroformi/heksaani 3/1/1 Rf = 0,4.

b) N-heptyyligeneseriini 20

Liuokseen, joka sisältää 5 g tuotetta, joka saatiin kohdassa a) 150 ml:ssa vedetöntä ♦ ' kaasutonta etyylieetteriä, lisätään 0,1 g natriumia ja reaktioseos jätetään reagoimaan yhdeksi tunniksi huoneen lämmössä typpiatmosfaärissä. Sitten lisätään N-heptyyli-imidatsoliureaa, joka on saatu esimerkin 1(b) mukaisesti (4,85 g), liuotettuna 10 25 ml:aan vedetöntä kaasutonta etyylieetteriä, noin 30 minuutin ajan. Päivän jälkeen huoneen lämmössä, eetteriliuos pestään 100 ml:lla vettä, kuivataan natriumsulfaatilla . . ja haihdutetaan vakuumissa lämpötilassa 30 °C.Saatu öljy puhdistetaan preparatiivi- sella TLC:llä eluoimalla etyylieetteri/trietyyliamiinilla 40/1.

30 Tuote uutetaan silikasta kloroformi/etanolilla 9,5/0,5 ja se saadaan haihduttamalla liuos vakuumissa huoneen lämmössä.

12 107532

Saadaan väritön öljy 50 %:na saantina (4g).TLC: etyylieetteri/trietyyliamiini 40/1 Rf = 0,8.

ESIMERKKI 6 5 a) Eseroliini

Liuos, joka sisältää 10 g eseriiniä 40 ml:ssa 37 %:sta HC1 lämmitetään palautuksessa sekoittamalla. Kahden tunnin jälkeen vihertävä liuos haihdutetaan pois vakuumissa io lämpötilassa 70 °C ja tuloksena saatu öljy liuotetaan 100 ml :11a vettä ja käsitellään vesiammoniakilla PH -arvoon 5.

Liuotin haihdutetaan vakuumissa lämpötilassa 70 °C alkavaan saostumiseen asti, jäähdytetään ja suodatetaan. Saatu valkoinen kiinteä aine pestään asetonilla ja is etyylieetterillä ja kuivataan vakuumissa lämpötilassa 50 °C. Saanti 86 % (8,0 g) hydrokloridina.

Emäs saadaan lisäämällä väkevää vesipitoista ammoniakkia hydrokloridin vesiliuokseen, kyllästetään NaCl ja uutataan etyylieetterillä. Orgaaninen kerros kuivataan 2 0 Na2S04:llä, suodatetaan ja haihdutetaan vakuumissa lämpötilassa 25 °C, jolloin saadaan valkoinen kiteinen kiinteä aine 80 %:na saantina (5,5 g).

b) N-Heptyylieseriini 25 114 mg natriumia (50 p-%:n dispersio parafiinissa) lisätään liuokseen, joka sisältää 1,8 g tuotetta, joka saatiin kohdan a) mukaisesti 100 ml:ssa vedetöntä etyylieetteriä, . . typpiatmosfäärissä. Seoksen annetaan sekoittua täydelliseen liukenemiseen asti, sitten liuos, joka sisältää 1,28 g heptyyli-isosyanaattia 30 ml:ssa etyylieetteriä listään pisara kerrallaan huoneen lämmössä. Yhden tunnin jälkeen, NH4C1 (2 g) lisätään ja 30 tuloksena saatua seosta sekoitetaan puoli tuntia, sitten pestään 30 mklla vettä; orgaaninen kerros kuivataan Na2S04:llä, suodatetaan ja haihdutetaan vakuumissa lämpötilassa 25 °C.

13 107532

Tuloksena saatu oranssi öljy puhdistetaan F.C.rllä (eluentti kloroformi: 90 = me-tanoli: 10, kiinteä faasi: silikageeli, 30-60 μτη).

Saadaan öljyinen tuote 85 %:na saatina (2,5 g). Puhtaus 95 %.

5 c) N-Heptyyligeneseriini

Liuokseen, joka sisälsi 2,44 g tuotetta, joka saatiin kohdassa b) 100 ml:ssa mety-leenikloridia lisätään liuos, joka sisälsi 2,93 g m-klooriperbentsoehappoa (Fluka) ίο 40 ml:ssa metyleenikloridia huoneen lämmössä.

Liuosta sekoitetaan 30 minuuttia, sitten pestään 50 ml:lla NaHC03:n kyllästettyä liuosta ja 2 x 50 ml:lla fosfaattipuskuria (pH = 3).

is Orgaaninen kerros kuivataan Na2S04:llä, suodatetaan ja haihdutetaan vakuumissa huoneen lämmössä. Tuloksena saatu öljy uutetaan 40 ml:lla n-heksaania. Liuotin haihdutetaan pois vakuumissa lämpötilassa 25 °C,jolloin saadaan väritön öljy, joka kiinteytyy seistessä. Saanti =63 % (1,6 g).

2 0 d) N-Heptyyligeneseriinin hydrokloridi

Liuokseen, joka sisältää 0,8 g tuotetta, joka saatiin kohdassa c) 50 ml:ssa etyylieette-riä lisätään pieni ylimäärä eteeristä hydrokloridihappoa sekoittaen lämpötilassa 0 °C. Tuloksena saadun seoksen annetaan sekoittua tunnin lämpötilassa 0 °C sitten 25 dekantoidaan ja viskoottinen öljy liuotetaan metyleenikloridiin. Liuotin haihdutetaan vakuumissa huoneen lämmössä, jolloin saadaan kiinteä vaahto, jota varastoidaan t · · jäädytyslaitteessa.

Saanti = 80 % (0,7 g) 3 0 TLC: kloroformi/metanoli/muurahaishappo 90/5/5

Rf = 0,8 14 107532

FARMAKOLOGINEN VAIKUTUS

1. Asetyylikoliiniesteraasin inhibointi 5 Aika, joka kului inhiboimaan asetyylikoliiniesteraasia (AchE) aivoissa tutkittiin Crl:CD (SD) Br -urosrotilla (Charles River Italia), joiden paino oli 150-250 g.

Testiyhdisteitä annosteltiin ihonalaisesti, liuotettuna 2 ml/kg steriiliä suolaliuosta. 9 eläintä/ryhmä/aika käytettiin.

10

Vertailueläimet saivat ainoastaan kuljetusainetta.

Eri ajankohtina (10 - 60 - 120 - 240 min.) annostelun jälkeen rotat tapettiin mestauksella ja aivot poistettiin nopeasti, punnittiin ja sen jälkeen heti asetettiin 1 ml:aan is fosfaattipuskuria 0,1 M, pH 8,0, johon oli lisätty 1 % Triton 100 (Merck).

Homogenisoinnin ja sentrifugoinnin jälkeen arvossa 19943 g 15 minuuttia lämpötilassa 4 °C kelluva aine erotettiin ja käytettiin määrittämään AchE-vaikutus asetyyli-tiokoliinimenetelmän mukaisesti, jonka on kuvannut Ellmann (Ellman G.L. et ai, 20 Biochem. Pharmacol. 7, 88, 1961).

* Aktiivisuuskonsentraatiot, jotka saatiin (U/l) kelluvaa ainetta) korjattiin yksitellen aivon painoon nähden.

25 ♦ 15 107532

C CO

ra vt ra vt ·· o 5? ..

n* 3 m —- vt o E°o ****« w β „ — i O ΙΓ) · N· i T- i <o 11 jz cm ir» m m <S w _ c C tö Q. m- ϋ 1 * *« - o -- ·· ♦; fl) Λ r § “ i | .3 _ vt ε i "“4-» O o, ·»- Ό 3 t! c ro o>i O 00 co «- 3 —» omO C* Ό cvi irvin n m F, 4-» a><\j«-«-«-co<\iT-*-co <-· <i> ·*“· C -H -H +1 4H +) -ΗΉ -H -M <ö tn T c> -ί'Νί^οοτ-'Νί-ΓΛ^Ό —* ,χ; &- T3 —» *- o co ιηρο *- co »j-o ^ m :2 3 S NNS CON O ^ ΙΛ r-

_3 :2 -M D MNt- (\jr- t\J«- I

fl} E M

0 2 - £ 5 r 3 w C ϋ ^ ro ^ +j > —

Ij I o 4) UJ u c «C 4-» 1 < 1 ” g > .o * * * TT zi — i «- od i ro i ro «o £ co -c «- «- lh id <\i m c 3 —

s 2 I

> t S c . ^ o —

2 » -S E

Ξ 3 O

O *” o t* vi-N-N- *— o (\Jin N- id 4-· >* 2 —' «—<>*— coo o c\j o» *- W-4-»1- O (\J t— «— t— «— f\|r r t— — *J V” «H +C +1 +1 Ή Ή +1 +1 Ή Ό :(ϊ ^ fO'J-O CO «—CO ΜΌ «c to 10 —' Ov^N o><t m o id ^ >* — ^ χίοο 0*4- ch ro *- rvi

O — D MKltO w<- N«- K)fM

.tj 4-» tr_ *" co > o * <0 r o

s - S .E

| « -s 8.

3 *7^ c < O ~ ·- s °- ° r\j co * o. = 10 = CL £-

<-> O

^ » O

- = 1 a s c o £ ei U) n, .£ iS .5 2 « ·— Be ™ιον.·γο·οι o -S I 5 § .B- o 3 £ c 8.2 s » ΐ 11 Ξ 8 .» :<0 **" t? <0 c to O W 4_»

CO ·· O

CD E t_ (0 fl) CO Γ0 O ra — M r- 4-* o ra ra , : - - t ' ro g S — ro .X: co +j t- c C 4-1 ω 5 o ra σι ^ ra

W o 4J

<υ p j_ ^ -3 § c « c ro •r- *· o o 5 :ro ro ·— ±c. > —. rae ·— 'TT C- CT) >» · C >- ra — co 4-»rac —i id a> *-» ro c Φ o

<D +-* *·— <— LU c C"-C*»“CW

CO CO o O I— c ·»-·—··“ >» ra o ct) » k— ro ro— raeron- 330 ·— too CO — to CT) CO — C — s- CO 3 Ό 3t-3— 3—'

G; —' — V :< 4-> O

—> CO C. ^ fl) (VJ <UtO<DCOG>>» O —'*->&. —I ·—, Φ —» o —» 4-» > O C —· u. —> C. — CO —' Q.

— 30* 3= 3 0 3 >* 3 0

<C0(0* CJ

16 107532 * * * -Q * * * **- * in CO I cu i *— I Ό -C -sf O r- r- K) c

E

o «4- oj

• CO O CO CO «— OJ

—* ΟΟΌ Ό © *sfin t— CM

Φ <\J CO CM T— OJ r- LTl ^ +1 +1 -»-I -ft +1 -H +1 +1 4-1 iniAxT O'O' O'-* ΙΛΝ — NOr oj m t-rn m o \ co in o **3··«— m oj o co ID OJ *- OJ OJ OJ CM oj «- • * * * * * -Ω * * * 4t * ·— I ro o r co I -vj· I oj x: ro in oj ro in c . S'?

C

ε o

OJ

• o <— -sj- m o in —» N-N-co in m co ο •ίο «— T- rn ο-*— τ— o oj «— -V +1 41 41 41 41 41 41 41 41

o in o *4- oj coo COO

O O OJ fM -o -o OJ ΌΟ v oj oj ό o «— N- co in z> rofMr- ro oj oj t— m ·«- c

QJ

c

& Q

o _Z

C Q *· c c «on. * ro > o < «-

C O OJ

X

• O) • ‘ s

CD

E

J->

CD

CD

4-» L_ I 03 4-< · r~* 1 2 3 s a

Jwl 03

4J CD E

2 CD 1-03 *-> ·*— W i— 4-» >- CD *>— tfl I _j hi di-Mdicajo

LU C C ·— C ·- C M

h- - c - — — >-

h— 03 <0 ·*- CD E CD

O —< WO 10 ·— CO D) (Λ ·«- W CO DO D t- D ·— D — V :<t -M O GJ 4-* 4J 4-» >.

3 ^ ω oj <u w a? w ai >* -j —» —. ω —* o —> +-> 3 —* u_ —' C —♦ίο —» Q.

< D=n DOD>»Daj ►— ^ u i^o^LL-^rrc 107532

-C

JC, V* Λ _ I '·- N- O PO ΙΛ 00 o λ: <m o po PO f·» C r*r- f- r- «- CJ ·— 3«

C

O

o

_X

:(0

§ -Q

«*— rs.

~r, .e io cO ir» PO -f S · c st Ό » m m m x — ro

x <0 LO

g Σ *5 c ro c

<D

(0 rö ro c o

-C

ro · · c <n cc *- w .ί: ε 2 e ε cc p to o o o e e u E st st · _

, , OJ PJ O O O

£ h- AI ΛΙ «— «- O

t_ *-» dl a <0 t_

CO

a +-» d> • to to cr> • ·— o .x *-> c 's.

M C CD O l·-- ro o *-

Φ < E OJ

dl c

-X

c

E

c o

jQ

.c

C

·»- to

-X

c — „ ·— «3 , · (0 ·- « to ·*- *-> to *-· c L. 4-» ··- <y to o

•Μ (Ό _Q

CO 4-1 ·— a> u si

-r- (O C

, C +-» — 18 107532 2. Tulokset

Aivojen AchE-konsentraattiarvot on esitetty taulukossa l,kun taas entsyymin inhi-boinnin ajankulu on esitetty kuviossa 1.

5

AchE-inhiboinnin kineettisten parametrien vertailu on esitetty taulukossa 2.

Saadut tulokset osoittavat, että CHF 2060 on pitkään vaikuttava aivojen AchE-inhibiittori.

10

Vaikutus vaikuttaa lisääntyvän vähitellen seuraavan neljän tunnin aikana käsittelyn jälkeen. Merkittävä inhibointi (29-45 %; P < 0,001) on havaittu 1 tunti annostelun jälkeen. Neljän tunnin kuluessa käsittelystä vaikutus lisääntyy 1,5-1,6 kertaiseksi verrattuna niihin vaikutuksiin, jotka havaitaan ensimmäisen tunnin aikana.

15

Sellaiset annokset geneseriinitartaattia ja fysostigmiiniä, jotka tuottavat vaikutuksia, jotka ovat verrattavissa (sekä AUC:n tapauksessa että maksimaalisen inhiboinnin kannalta) niihin, jotka saadaan antamalla 9 mg/kg CHF 2060, johti paljon nopeampaan vaikutukseen, jonka huippu on 10-60 minuutin ajankohtana mutta vähenee 1,5-2 20 kertaiseksi 120 minuuttia käsittelyn jälkeen. Tämä vaikutus häviää 240 minuutissa.

»

Vertaamalla kineettisiä vaikutusmalleja, jotka ilmestyvät uudella heptyylifysostig-miinitartraatti (HPYS) - AchE-inhibiittorilla niihin, jotka saadaan annostelemalla CHF 2060 annoksella, joka kykenee saamaan aikaan samanlaisen AUC -inhiboinnin 25 aikaan nähden (s.o. 1 vs 27 mg/kg) on yhä selvää, että CHF 2060:11a on viiväs-tyneempi vaikutus. Tosiasiassa, kunHPYS:n vaikutus pienenee tekijällä l,4kertaisek-si 120-240 minuutin välillä, ne vaikutukset, jotka havaitaan CHF 2060 -käsittelyn jälkeen lisääntyvät yhtä paljon samalla aikavälillä.

30

Claims (6)

107532

1. Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisten kaavan (I) j*3 ^ (nf"X Γ - 10 mukaisten geneseriinijohdannaisten ja niiden suolojen orgaanisten tai epäorgaanisten ei-toksisten happojen kanssa valmistamiseksi, 15 missä R on suora tai haaroittunut C2-C20-alkyyliryhmä, C3-C7-sykloalkyyliryhmä, fenyyli- tai bentsyyliryhmä, valinnaisesti substituoitu C1-C4-alkyyliryhmillä, halo-geeniatomeilla, CrC4-alkoksiryhmillä, 20 tunnettu siitä, että vaihtoehtoisesti a) hapetetaan kaavan (II) mukaisia yhdisteitä fH3 ^ oT _j O CH 3 missä R on määritelty kuten edellä; tai 30 107532 b) kaavan (IV) mukaisen geneseriinin o iOX-_. J «3 10 metyyliaminokarbonyylioksiryhmä hydrolysoidaan ja sen jälkeen O-asyloidaan reagenssin avulla, joka kykenee tuomaan rakenteeseen toivotun -C-NHR funktion, [I

15 O ja asylointireagenssi on kaavan R-NCO mukainen alkyyli-isosyanaatti, jossa R on kuten kaavassa (I) tai vaihtoehtoisesti kaavan (III) mukainen substituoitu imidat-soliurea u/=I R—NH-C—N (III) \==l 25 .·. . joka voidaan valmistaa karbonyylidi-imidatsolista ja kaavan RNH-, mukaisista amii neista, joissa R on määritelty kuten edellä; ja valinnaisesti muodostetaan suola orgaanisen tai epäorgaanisen ei-toksisen hapon kanssa. 30 107532

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hapetus suoritetaan orgaanisten perhappojen tai peroksidien avulla, edullisesti m-klooriper-bentsoehapon, monoperftaalihapon, peretikkahapon tai vetyperoksidin avulla inerteissä liuottimissa, edullisesti halogenoiduissa hiilivedyissä, aromaattisissa 5 hiilivedyissä, dimetyyliformamidissa tai dimetyylisulfoksidissa.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että geneserii-nin hydrolyysi suoritetaan reaktiolla alkalialkoksidien kanssa ja O-asylointi substituoi-duilla imidatsoli-ureoilla suoritetaan vedettömässä väliaineessa metallisen natriumin io läsnäollessa.

4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R on suora tai haarautunut alkyyliryhmä, jossa on 4-12 hiiliatomia.

5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R on n-heptyyli.

6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että orgaaninen happo valitaan viinihapon ja salisyylihapon joukosta. 20 107532