FI107159B

FI107159B - Menetelmä askomysiinimakrolidijohdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI107159B
Application number: FI942444A
Authority: FI
Inventors: A R C Murty Bulusu
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 1993-05-27
Filing date: 1994-05-25
Publication date: 2001-06-15
Also published as: JPH06340672A; PH30420A; HUT71396A; RU2130460C1; SK281541B6; NO308302B1; US5493019A; CZ129594A3; DE69433234T2; NZ260596A; DK0626385T3; NO941936L; EP0626385A1; IL109775A0; CA2124260C; EP0626385B1; SI0626385T1; NO941936D0; HK1011684A1; FI942444A0

Description

107159

MENETELMÄ ASKOMYSIINIMAKROLIDI JOHDANNAISTEN VALMISTAMISEKSI

Esillä oleva keksintö liittyy makrolideihin, erityisesti t et rahydropy ra ani johdannaisiin. Keksintö

5 koskee erityisesti menetelmää yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava I

Rv i) CH3 ciYr 10 O R2 CV r ΊΓ ch3 och3 och3 jossa 20 Ri tarkoittaa ryhmää, jolla on kaava !w —i

Rial JL tai jossa F^CH, ·! 25

* « ( I

I I

* « ♦ • » joko R7 on hydroksi- tai 2-hydroksietoksiryhmä, joka on mahdollisesti suojattu tert-butyylidimetyylisilyylillä, • · < tai se on isopropyylikarbonyylioksi tai kloori ja R7a ... 30 on vety, • * *;··* tai R7 ja R7a ovat yhdessä okso, ...* R8 on metoksi, ja • R9 on hydroksi; .·*. R2 on vety, isopropyylikarbonyylioksi tai hydroksi ja ·[ 35 katkoviivalla yhdistetyn kahden hiiliatomin välillä on « · · : yksinkertainen tai kaksoissidos; R3 on etyyli tai allyyli; 2 107159 joko R4 on vety tai hydroksi ja R4a on vety, tai R4 ja R4a ovat yhdessä okso; joko R5 on hydroksi ja R5a on vety, tai Rs ja R5a ovat yhdessä okso; ja 5 A on ryhmä, jolla on kaava -CH(OR6) -CH2- (CH2) n- tai -CH=CH-(CH2) n-, jolloin CH2-ryhmä on liittyneenä hiiliatomiin, R6 on alempi alkyyli ja n on luku 1 tai 2; 10 ja jotka yhdisteet voivat olla vapaassa muodossa tai, mikäli tällaisia muotoja esiintyy, suolan muodossa ja joita yhdisteitä kutsutaan lyhyesti "keksinnön mukaisiksi yhdisteiksi".

Kaavan I yhteydessä substituenteille R2 ja R7 15 määritellyn "mahdollisesti suojatun hydroksidin" ei pidä ymmärtää käsittävän sellaista ryhmää R2 tai R7, joka on muulla tavoin spesifioitu, esim. asyylioksia tai -OCONH2.

Edelleen on ymmärrettävä, että "suojattu hyd-20 roksi" tai "suojattu -0(CH2)20H" tarkoittaa farmaseut tisesti aktiivisia yhdisteitä, joissa OH on substituoi-tu ryhmällä, joka suojaa oleellisesti hajoamiselta kemiallisen synteesin aikana; suojaryhmä on edullisesti konventionaalinen hydroksin suojaryhmä, kuten tert- 25 butoksikarbonyyli tai trialkyylisilyyli, erityisesti ‘1". tert-butyylidimetyylisilyyli.

* .* Ri on edullisesti edellä määritelty substitu- • · · •••j oitu sykloheksyyliyksikkö. R2 ja R7 tarkoittavat edul- V * lisesti mahdollisesti suojattua hydroksia, erityisesti 30 hydroksia. R3 on edullisesti etyyli tai allyyli, eri- tyisesti etyyli. R4 on edullisesti yhdessä R4a:n kanssa ·*'*; okso. R5 on edullisesti yhdessä R5a:n kanssa okso. R6 on • · · ^.1. edullisesti metyyli tai etyyli. Re on edullisesti me- toksi. Rg on edullisesti hydroksi. n tarkoittaa edulli- « · '··' 35 sesti lukua 2. A on edullisesti ryhmä, jolla on kaava - CH=CH-(CH2)n-.

• ♦ 3 107159

Alempi alkyyli on edullisesti lineaarinen tai haaroittunut alkyyli, jossa on 1 -4, edullisesti 1 tai 2 hiiliatomia, sopivasti 1 hiiliatomi. Halogeeni on fluori, kloori, bromi tai jodi, edullisesti kloori tai 5 bromi, sopivasti kloori. Hydroksi on edullisesti vapaa hydroksi, so. se on suojaamaton. Asyylioksi on edullisesti formyylioksi, bentsoyylioksi tai alkyylikarbonyy-lioksi, jonka alkyylikarbonyyliosassa on kaikkiaan 2 -5 hiiliatomia.

10 Katkoviivalla yhdistetyn kahden hiiliatomin välillä on edullisesti yksinkertainen sidos.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden erääseen edulliseen alaryhmään kuuluu yhdisteet, joilla on kaava Ix 15 Η7'·γ^'^

Ri^jl CHj CHa o T h oy h 1 o '* cr>=0 :··: ΏΗ

25 I

Il 'CH3 *· ;· OCHa OCHg • « · t • · · · ’ jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia.

3 0 Keksinnön mukaisilla yhdisteillä on monta : kiraalikeskusta ja ne voivat siten esiintyä erilaisina • « ( ·*“: stereoisomeereinä. Keksinnön mukaiset menetelmä- .1. muunnelmat tuottavat tavallisesti tällaisten isomeerien • · · seosta. Reaktio-olosuhteista ja -tyypistä riippuen 3 5 menetelmää voidaan ohjata siten, että saadaan edulli- sesti tiettyä isomeeriä. Keksintö tuo esiin kaikki stereo- ja optiset isomeerit sekä raseemiset seokset.

4 107159

Isomeerit voidaan jakaa tai erottaa käyttäen konventionaalisia menetelmiä. Edullinen stereokemia eri kiraali-sille hiiliatomeille on esitetty kaavassa Is: 5 CH3 _ O Rs * “ yy r —r«

R*. L^oh I

f^XH3 *ch3 15 OCH3 OCH3 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia.

Kun Ri on edellä määritelty substituoitu syk-loheksyyliryhmä, jossa R7 ja R7a ovat muu kuin okso ja 20 R7 on muu kuin halogeeni, niin erityisen edullista stereokemiaa esittää kaava R, 5 25 I 1 *· / mutta kun R7 on halogeeni, niin se on edullisesti E- • · » ··♦· konf iguraatiossa.

• · · ; Kun R5 on hydroksi, se on edullisesti cc- 30 konfiguraatiossa.

OR6-yksikkö ryhmässä A on edullisesti E- ·*· ♦***: konf iguraatiossa. Tämä lisäkiraalikeskus muodostuu • · · menetelmämuunnelmassa (a) , jossa valmistetaan kaavan Ia • * « mukaisia yhdisteitä, a- ja E-isomeerit voidaan erottaa '···' 35 konventionaaliseen tapaan, esim. kromatografisesti.

t I

1 · 5 107159

Kaavan I mukaisten yhdisteiden erääseen edelleen edulliseen alaryhmään kuuluu yhdisteet, joilla on kaava Iss 5 jj CH3 Λ—. ? ^ CV / * io ΜΙ f 0^>Λ 188

c fCjLoh I

^ \*o γ^χη3 iSt" ' ch3 15 OCH3 OCHa jossa

Ris on ryhmä, jolla on kaava ΓΠ 20 7a*I jL tai jossa «Ή ·<· joko R7s on hydroksi- tai 2-hydroksietoksiryhmä, joka « · « « on mahdollisesti suojattu tert- 25 butyylidimetyylisilyylillä, tai se on isopropyylikarbo-nyylioksi tai kloori ja R7as on vety, * / tai R7s ja R7as ovat yhdessä okso;

»M

R2s on vety, isopropyylikarbonyylioksi tai hydroksi ja '·' r katkoviivalla yhdistetyn kahden hiiliatomin välillä on 3 0 yksinkertainen tai kaksoissidos sidos; • · · R3s on etyyli tai allyyli; ’ ♦***: R4 ja R4a sekä R5 ja Rsa ovat edellä määritellyn mukai- .1. siä; ja • · ·

As on ryhmä, jolla on kaava -CH(OR6s) -CH2- (CH2)n- tai -'·;·* 35 CH=CH-(CH2)n-, jolloin CH2-ryhmä on liittyneenä hii- :*·*: 1 latomiin, R6S on metyyli tai etyyli ja n on edellä ·;··· määritellyn mukainen.

6 107159

Kaavan I mukaisten yhdisteiden edelleen erääseen alaryhmään kuuluu yhdisteet, joilla on kaava Ipi 5 CH1 ‘ οη,ΧΓ^οη 10 o^'r^OH ^ T f CH3 OCH3 OCHa 15 jossa R2P ja R7p ovat samanlaisia tai erilaisia ja tarkoittavat mahdollisesti suojattua hydroksia ja muut substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden edelleen erää-20 seen alaryhmään kuuluu yhdisteet, joilla on kaava Ip2 i "ί

' K8 I

XAb, ·. ·: ch3o-^n/w y ^3 ,p2

·:· i U

οΛ=ο

J^OH

3 0 II CH3 =:::= Vt^01 ·1": och3 och3 • · · · · • · · * » t jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia.

Ί’ 35 Kaavan I mukaisten yhdisteiden edelleen erää- • 1.· seen alaryhmään kuuluu yhdisteet, joilla on kaava Ip3 « « « 1 ♦ 5 7 107159

Rf^l] Chi O F^' ^ OV Λ

" "LKL

]Γ Lf CH3 och3 och, jossa 15 R2'p on vety tai mahdollisesti suojattu hydroksi ja katkoviivalla yhdistetyn kahden hiiliatomin välillä on yksinkertainen tai kaksoissidos; joko R4p on hydroksi ja R4ap on vety, tai R4p ja R4ap ovat yhdessä okso; 2 0 R7'p on halogeeni; ja muut substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden edelleen erää- ,:, seen alaryhmään kuuluu yhdisteet, joilla on kaava Ip4 • « ·<· 25 Β?Ρ-γ/\

«•44 I

::: CH3 j Τ' ; o Ra* _(CH2) n / P Lp ... Γ1 / / ( lp4 ·**·: X °

*” —OH

/OH

l 35 Vv, ' \ OCHa OCH3 « « 8 107159 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden edelleen erääseen alaryhmään kuuluu yhdisteet, joilla on kaava Ip5 R7V^ f ch3 o FVp ^ CV Λ 0^0° >0H L· 15 VV ' CH3 och3 och3 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia.

Kaavan Ips mukaisten yhdisteiden eräässä alaryhmässä A tarkoittaa ryhmää, jolla on edellä määritel-20 ty kaava -CH=CH- (CH2) n- - Edelleen eräässä alaryhmässä A tarkoittaa ryhmää, jolla on edellä määritelty kaava -CH(0R6) -CH2- (CH2)n-, edullisesti -CH(OCH3) -CH2-(CH2)n-, jossa n on edellä määritellyn mukainen.

IMI

Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan valmis-"'j( 25 taan menetelmällä, jossa i

(a) sellaisen yhdisteen valmistamiseksi, joilla on *’ '· kaava Ia R

’"jl CH, V e 30 O Rs ^ r?·/ h- o Oi—oh

-5R H U>H

illtl ' TI CH3 och3 och3 107159 9

jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, säteilytetään UV tai näkyvää valoa käyttäen, valinnaisesti herkistävän aineen tai elektronisiirtoa avustavan aineen läsnäollessa, RöOHtn läsnä ollessa vastaavaa 5 yhdistettä, joilla on kaava II

Vu- T T s.

10 H"1/° R‘ L, CX/ /

N Tl I

A O

O^N=0 JL-oh 15 W ' CHg OCH3 OCH3 2 0 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, tai (b) sellaisen yhdisteen valmistamiseksi, joilla on kaava Ib « · « • · · · 25 Rs CH, ;ί in Γ\/ h- 30 / |b : : 0^N=0 - ::: Loh 35 XX Xr CH3 OCH3 OCH3 « • · · · « 10 107159 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, hapetetaan selektiivisesti hapettavalla aineella vastaava yhdiste, joilla on kaava Ie \Γ

ch3 | Y

cv λ |Ach,

' CHS

15 OCH3 OCH3 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, tai (c) sellaisen yhdisteen valmistamiseksi, joilla on 20 kaava Id,

S

CrVrf.

O R, a 25 d-(0Ha)" / j—R.

w V

·. ·: I Tl Id

^JL^OH I

o VVY* .···. OCH3 OCH3 • · · » «rt (li 35 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, eliminoidaan reaktiolla hapon tai suolan kanssa RgOH : ·* vastaavasta yhdisteestä, joilla on kaava Ie 107159 nN CHj o r2 ^ 5 r(CH2)" /

ReO N^lf | 18 0<^>T^-R4

uC ^OH

VrA

och3 och3 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, tai 15 (d) sellaisen yhdisteen valmistamiseksi, joilla on kaava If ch3 t r ar 20 o R *58 ,A—\ ^

La/ ^nf f k oA0 25 Ach3 £ YV4^ ·. ·: Il ch3 och3 och3 « · · « • «« • c · • <- · 3 0 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, ... pelkistetään okso-ryhmä pelkistävällä aineella vastaa- • · *“ vasta yhdisteestä, joilla on kaava Ib; ja • · · - mahdollisesti konvertoidaan reaktiiviset ryhmät saa- 35 duista kaavan I mukaisista yhdisteistä, joissa on asianmukaiset reaktiiviset ryhmät, esim.

• » · • · • » » • · 12 107159 mahdollisesti poistetaan yhden tai useamman hydroksi-ryhmän suojaus saaduista kaavan I mukaisista yhdisteistä, joissa on suojattu (ja) hydroksiryhm(i) ä, tai suojataan yksi tai useampi hydroksiryhmä saaduista kaavan I 5 mukaisista yhdisteistä, joissa on vapaa (vapaita) hyd-roksiryhm(i) ä; mahdollisesti erotetaan kaavan I mukaisten yhdisteiden saadut stereoisomeeriset seokset yksittäisiksi isomeereiksi; ja 10 otetaan kaavan I mukaiset yhdisteet talteen vapaassa muodossa tai, mikäli tällaisia muotoja esiintyy, suolan muodossa.

Keksinnön mukainen menetelmä voidaan toteuttaa konventionaaliseen tapaan.

15 Menetelmämuunnelma (a) (säteilytys) on valon alkuunpaneva molekyylinsisäinen hapetus/pelkistys-reaktio. Se voidaan suorittaa käyttäen UV ja/tai näkyvää valoa, mahdollisesti inertin kaasuatmosfäärin alla, esim. käyttäen monokromaattista tai ei-monokromaattista 2 0 UV ja/tai näkyvää valoa emittoivia ultraviolettilamppu-ja, esim. lämpötilassa n. -78 - 100 °C, edullisesti n. 0-30 °C, edullisesti käyttäen valoa, joka suodattuu pyrex- tai pitkäkulkuisen (long pass) suodattimen läpi, • « « ja esim. vesipitoista liuosta, joka sisältää NaBr ja 25 Pb(N03)2 alkoholissa R6OH, tai seosta, joka sisältää alkoholia RgOH sekä tyydyttynyttä tai tyydyttämätöntä hiilivetyä, eetteriä, ketonia tai esteriä tai tällais- ··· ten liuottimien seosta, jolloin tällaiset liuottimet ··»» .*:% tai niiden komponentit voivat ottaa osaa reaktioon tai 30 toimia esim. herkistävänä aineena, ja läsnä voi olla muita yhdisteitä, jotka voivat ottaa osaa reaktioon • « esim,, herkistävänä aineena tai elektronisi irtoa avusta- • · ···* vana aineena.

• '/ : Menetelmämuunnelma (h) (hapetus) voidaan suo- 35 rittaa konventionaaliseen tapaan esim. antamalla kaavan

Ie mukaisen yhdisteen reagoida sellaisen hapettavan * aineen kanssa, joka reagoi selektiivisesti oksoryhmän • i « « · 13 107159 viereisen hydroksiryhmän kanssa ja joista mainittakoon esim. Cu(OAc)2, liuottimessa esim. alkoholissa, kuten metanolissa, tai syklisessä eetterissä, kuten tetrahyd-rofuraanissa tai vedessä tai tällaisten liuottimien 5 seoksessa, 02-atmosfäärissä tai jonkin muun hapettavan aineen läsnä ollessa, edullisesti lämpötilassa n. 0 -90 °C.

Menetelmämuunnelma (c) (eliminointi) voidaan suorittaa antamalla kaavan Ie mukaisen yhdisteen rea-10 goida hapon, kuten HF, HC1 tai p-tolueenisulfonihapon, kanssa edullisesti liuottimessa, kuten asetonitriilis-sä, metanolissa, tetrahydrofuraa-nissa, dikloorime-taanissa tai dimetyyliformamidissa tai vedessä tai tällaisten liuottimien seoksessa, edullisesti lämpöti-15 lassa n. -3 0 - 100 °C, tai suorittamalla reaktio suolan, kuten NH4Cl tai NlhBr, kanssa edullisesti liuottimessa, kuten dimetyyliform-amidissa, edullisesti lämpötilassa n. -30 - 100 °C, edullisesti alhaisessa pai neessa, jolloin suojattujen hydroksiryhmien suojauksen 20 poisto voidaan suorittaa tässä samassa vaiheessa tai eri vaiheessa.

Menetelmävaihtoehto (d) (pelkistys) voidaan suorittaa esim. käsittelemällä kaavan Ib mukaista yh- ··' distettä pelkistävällä aineella, kuten vetysulfidillä, < 25 edullisesti liuottimessa tai liuotinseoksessa, kuten pyridiini/dimetyyliformamidissa, edullisesti lämpöti- : lassa n. -70 - 100 °C.

• · ··· Reaktiivisten ryhmien konversio voidaan to- • · · · teuttaa esim. halogenoinnin tapauksessa suorittamalla 30 reaktio halogenoivan aineen, kuten diklooritrifenyyli- fosforaanin, kanssa emäksen läsnäollessa sopivassa • · VV. liuottimessa, esim. tolueenissa tai teturahydrofuraa- • · **· nissa, lämptöilassa esim. n. 0-70 °C, ja asyloinnin • : j : tapauksessa suorittamalla reaktio esim. inertissä liu- 35 ottimessa, kuten asetonitriilissä ta± dikloori- 1 · · metaanissa, asyylikloridin tai happoanhycLridin kanssa • · * *. happoa sitovan aineen, kuten 4-dimetyyliamino- • · 14 107159 pyridiinin, läsnä ollessa tai hapon kanssa karbodi-imidin, kuten disykloheksyylikarbodi-imidin, läsnä ollessa.

Suojaryhmien poisto esim. tert-butyyli-5 metyylisilyylin tai tert-butoksikarbonyylin poistami seksi voidaan toteuttaa esim. suorittamalla käsittely fluorivety- tai kloorivetyhapon kanssa liuottimessa, kuten asetonitriilissä, metanolissa tai metanolin ja eetterin seoksessa. Valituista reaktio-olosuhteista 10 (esim. kesto tai lämpötila) riippuen poistoa voidaan ohjata siten, että joko kaikki tai ainoastaan osa suo-jaryhmistä eliminoituu. Osittainen suojauksen poisto soveltuu erityisesti silloin, kun tietyn hydroksiryhmän on tarkoitus reagoida seuraavassa reaktiossa.

15 Vapaan hydroksiryhmän/vapaiden hydroksiryhmien suojauksessa reaktiota voidaan ohjata valituista reaktio-olosuhteista riippuen siten, että joko kaikki tai vain osa potentiaalisesti reaktiivisista hydroksiryh-mistä suojataan. Sopivia suojaryhmiä ovat konventionaa- 2 0 liset hydroksin suojaryhmät, kuten tert- butoksikarbonyyli tai trialkyylisilyyli, edullisesti t ert - butyyl i dime tyy 1 i s i lyyl i.

Saatujen stereomeeristen seosten erotus voi-daan toteuttaa esim. kromatografisesti.

25 Keksinnön mukaisia edellä esitettyjä menetel- *:* mämuunnelmia, esim. (a) ja (b) tai (a) ja (c) , voidaan suorittaa myös yhdessä reaktioastiassa tapahtuvana « · •ί. reaktiona ilman välituotteiden eristämistä.

• · · ·

Vapaassa muodossa oleva keksinnön mukainen • i · 3 0 yhdiste voidaan konvertoida konventionaaliseen tapaan ... suolan muotoon, kun tällaisia muotoja esiintyy, esim.

• · ’”·/ happoadditiosuolan muotoon, ja päin vastoin .

• · ···’ Keksinnön mukainen yhdiste voidaan eristää ja puhdistaa reaktioseoksesta konventionaaliseen tapaan.

j"*; 35 Mikäli valmistusta ei ole erityisesti kuvattu « · a tässä yhteydessä, esim. esimerkkiosassa, niin lähtöai- • · # : ·' neina käytetyt yhdisteet ovat tunnettuja tai ne voidaan • · 15 107159 saada konventionaaliseen tapaan tunnetuista yhdisteistä, esim. lähtien sopivista Streptomyces-kannoista, kuten Streptomyces tsukubaensis No. 9993 kannasta, joka on esitetty esim. julkaisussa EP 184 162, Fujisawa.

5 Näytteitä voidaan saada Fermentation Research Institute -laitoksesta, Tsukuba, Ibaraki 305, Japani, Budapestin sopimuksen mukaisesti esim. talletusnumerolla PERM BP-927. Tämä kanta on talletettu uudelleen 27.4.1989, Agricultural Reseach Culture Collection International 10 Depository- laitokseen, Peoria, Illinois 61604, USA, Budapestin sopimuksen ehtojen mukaisesti talletusnumerolla NRRL 18488.

Yhdiste, jolla on kaava Ha 15 HO„ CH, £ £

O OH

20 Γ 1 / /'"Qrt

Tl f 1,3 7=0 μ r. L^oh ::;j- 25 t5^_tchs V·: OOH* ocHj « <»· « « ··· voidaan ottaa talteen konventionaaliseen tapaan sitä t t i 3 0 tuottamaan kykenevästä mikro-organismista, esim. Strep- tomyces hygroscopicus var. ascomycetus' in mutanttikan- *···/ nasta (ATCC 55087) menetelmällä, joka on kuvattu jul- • · ···* kaisussa EP 478 235. ATCC 55087 on talletettu uudelleen 13.4.1994 American Type Culture Collection -laitokseen, 35 Rockville, MD 20852, USA, talletusnumerolla ATCC 55558, i i «

Budapestin sopimuksen mukaisesti.

c · ♦ • ♦ * « * » « • · 16 107159

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä. Ne eivät ole rajoittavia. Kaikki lämpötilat on Celsius-asteina. NMR-spektrissä kaikki kemiallisen siirtymän arvot on annettu ppm-arvoina; näytteet on 5 määritetty CDCl3:ssa ellei toisin mainita. Eri hiiliatomeilla on sama st ereokemial linen konfiguraatio kuin FK 506:11a ellei toisin mainta. Kaikki yhdisteet ovat vapaassa muodossa. Käytetäään seuraavia lyhenteitä : 10 Ac = asetyyli; cf = väritön vaahto; db = kaksoissidos katkoviivalla yhdistetyn kahden hiiliatomin välillä; depr. = suojauksen poisto; iPr = isopropyyli; m = ste-reoisomeerein seos mainitun paikan suhteen; sp. = sulamispiste; O = okso; OtBDMS = tert- 15 butyylidimefcyylisilyylioksi; sb = yksinkertainen sidos katkoviivalla yhdistetyn kahden hiiliatomin välillä ; tBDMS = tert-butyylidimetyylisilyyli; β - HC\

2 0 HsCO-Q

B, _ tBDMSO,^

'··: ^co~Q

.' 25

I I « I

• « • · «

:t D

HOCIj, • · · 30 S « E - 35 i · :v. iPrC(O)0 ^ F = 5 v, 17 107159

tBDMSCXCHaJgO

G = ^CO~Q

10 c ([ 9^ ^/v5 ön 2 Tl ** lif CT^j=0 I^oh 2 0 i^XH, rr"" ckj OCHj OCKj « « · ·· 25 FK 506 = kaavan Ilf mukainen yhdiste, jossa R3 = • · « · .:. ch2ch=ch2 *·['; FK 520 = kaavan Ilf mukainen yhdiste, jossa R3 = C2Hs.

• · · » ♦ • · ·

Esimerkki 1: Kaavan I mukainen yhdiste "·’ ' 30 [Ri = B; R2 = OH; sb; R3 = C2Hs; R4 = OH (m) ; R5 = 0Η(α) ί R4a, Rsa = H; A = -CH (0R6) -CH2- (CH2) 2-, jossa 0R6 = :...: OCH3 (β) ] ·*”: [Menetelmämuunnelma : suojauksen poisto] _Ί>t 250 mg Esimerkin la (ks. alla) mukaista yhdis- 35 tettä, 10 ml metanolia ja 0,15 ml kuivalla Helillä '*;* kyllästettyä eetteiriä sekoitetaan jäähauteessa 2 tunnin j ajan. Seos kaadetaan bikarbonaatin vesiliuokseen ja 18 107159 suoritetaan uutto etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi kuivataan MgS04 avulla ja liuotin haihdutetaan. Jäännöksen silikageelikromatografointi tuottaa otsikon mukaista yhdistettä (cf).

5

Esimerkki la: Kaavan I mukainen yhdiste [Ri = B'; muut substituentit = kuten Esimerkissä 1; sb] [Menetelmämuunnelma: (a) (säteilytys)]

Liuos, josta on poistettu kaasu argonilla ja 10 joka sisältää 3,8 g kaavan II mukaista yhdistettä [Ri = B'; R2 = OH; sb; R3 = C2H5; Rs = OH(a); Rsa = H; n = 2] 1200 ml metanolissa, jäähdytetään jäähauteessa ja sitä säteilytetään syvennys-tyyppisessä (well-type) reaktorissa 10 tunnin ajan käyttäen Hanau TQ-150 lamppua ja 15 pyrex-suodatinta. Kolme tällaista erää yhdistetään ja kromatografoidaan HPLC:llä käyttäen polygosylpylvästä ja sykloheksaani/isopropanolia (9/1), jolloin saadaan otsikon mukaista yhdistettä (cf) .

• * · • ·· # · • · · • · « · • « e • · f • · « »44 • · « · • · · * · • · · « * · I « « 4 « 4 4* « · « • « , 107159

•H IQ

ί-ι -*·7

<u I

4J -H 4J OS OS OS OS OS OS

5 η o 2:2: = = = = re C-O zzzzz =

Η -Η <D

(0 O -H u u u w u-i u

^JW4J OOUOOO

:<o (0 ε ε

I—t rH

¢) (U

jjjh re re re re re re 0) C C 3 , <D 3 s ε § -3

W 4J

frt tfl C re « 1 1 I 1 1 1

£ H

<0 3 „

Ό t7>eS B B B B β B

<0 .rH

<0 4-1 * w C § cacacacatsoi _ o <0 fad m to c (0 A! - ,*! J3 'd = Xi JO = XI = X)

® +J M £-¾ W W W M W CO

»H Q) -P

a>

5 ω I « I I I I

T* U1 r*"s /n n r< m r* ·Η >-s f*·*"»» ^ ^ μ *0 rCB in r« p*

(D r DUSB2CD

c ^ OwOUOCJ

5 S,^ N»' W W W

/-S I/V-* Λ *-N

10 JJ ^ **β3 m m n ro

u 0) CO r*s CO 03 CO

co υ o u u 0 u . zi 000000 “ W Sm^ W’

4-> <0 Π Π B B B B

to^ ο u u u 0 a

(UP I I I I I I

<0 ε ,_j « 1 u m O' H r<

. . O OOOOOO

: ·.: 1—1 c « • · re <0 es .:. c > < < (0 lu 0

·*·' ^ v 8S03B3C2BSBS

·.· « +2 « = = = = = =

(0 o' OOOOOO

5 • · _. cs

• * P Λ IftO νΛ ΙΛ UI

*** >4 m m a II B B B

, . « n ra in (N (N

• O O O u u O

... fN

;·:·; S

.** „ BBBBBB

. cö OOOOOO

- naaeea *:": ε · •HO CS n ΙΛ Ό Γ'

M H

w 55 20 107159

Esimerkki 8: Kaavan I mukainen yhdiste [Ri = B; R2 = OH; sb; R3 = C2H5; R4+R4a = Rs+Rsa =0; A = -CH=CH- (CH2) 2-] [Menetelmämuunnelma (b) (hapetus)] 5 Seosta, joka sisältää 5 g Esimerkin 9 (ks.

alla) mukaista yhdistettä, 1,9 g Cu(0Ac)21H20 ja 500 ml tetrahydrofuraania, sekoitetaan refluksointilämpötilassa ja 02-atmosfäärissä 7 tunnin ajan. Liuotin poistetaan vakuumissa, jäännös jaetaan bikarbonaatin kylläs-10 tetyn vesiliuoksen ja etyyliasetaatin kesken, orgaaninen faasi erotetaan, kuivataan (MgS04) , suodatetaan, liuotin poistetaan vakuumissa ja jäännös kromatografoi-daan silikageelillä (esikäsitelty 2 p/p-% NaHC03- vesiliuoksella ja kuivattu uunissa) käyttäen etyyliase-15 taattia, jolloin saadaan otsikon mukaista yhdistettä (vaahto). Vaahto kiteytetään liuottamalla dietyylieet-teriin ja lisäämällä n-pentaania pienissä erissä sekä raaputtamalla seinämiä spaattelilla kiteytymisen käynnistämiseksi (sp. 169 - 172 °) .

20

Esimerkki 9: Kaavan I mukainen yhdiste [Ri = B; R2 = OH; sb; R3 = C2H5; R4 = OH (m) ; R4a = H; Rs+Rsa = 0; A = -CH=CH- (CH2) 2~] [Menetelmämuunnelma (c) (eliminointi)] 25

Seoksen, joka sisältää 50 mg Esimerkin 2 mu- ♦/·· kaista yhdistettä ja 100 mg ammoniumkloridia 100 ml *:· dimetyyliformamidissa, annetaan reagoida 1,5 tunnin ajan pyöröhaihduttimessa, vakuumissa, 78 0 lämpötilassa 30 siten, että liuotin tislautuu hitaasti pois. Jäljelle .···. jäänyt liuotin poistetaan korkeavakuumissa ja jäännös • · VV. jaetaan suolaveden ja etyyliasetaatin kesken. Or- » ’V gaanienn faasi erotetaan, kuivataan (MgS04), suodate- • · · V · taan, liuotin poistetaan vakuumissa ja jäännökselle 35 suoritetaan flash-kromatografointi silikageelillä [esi- käsitelty 2 p/p-% NaHC03-lioksella ja kuivattu uunissa] « · ' käyttäen etyyliasetaattia, jolloin saadaan otsikon 21 107159 mukaista yhdistettä (vaahto). Tämä vaahto kiteytetään liuottamalla dietyylieetteriin ja lisäämällä n-pentaania pienissä erissä sekä raaputtamalla seinämiä spaattelilla kiteytymisen käynnistämiseksi (sp. 119 - 5 123 °) .

* · • · · • · · • · • · · • « ( • · • · · • · • · • · · • · · ·· · « « « I · « « · · 1 · · * · · • · * « 107159 h 22 u Φ 1 _ +J-H4-» β:β:β:«:β:ο£οίο;β:£ώΕΚΕ£««£Βθί«ακα««οί

ii I i λ fc· · 5· y y 2C Σ Σ 2C 3— Σ Σ Σ S 2» S *» 2> 3u Σ 31 SS

iec^ I I 2 I I I 2 2 2 Z Z 2 2 2 2 Z 2 2 Z 2 2 2 2 2 22 }-l -H (U ._ ... ... ... ... „ ... ... ... ... ... ... .~ ... — ·- - — - — — — - — ·- —

li 0·Η lulUWlUlMWWIUWWWIUWWU'UWWW'W'U'W'U'UlHW

|^t/)4J UUUUUUOiJVUUUUUCJUUOOOCJUUUOCJ

:tö 3 E E _ P-1 r-l y^. yv y^ yv- y^ yv y—. y^ y^. y-s y-· y qj (y υυυυουου^υυυο

Il *-* y—. y—. y—I y—s y. y—V y—. y—.. y“"N y y - y v y—-

TiS U (J U y-vy^^-s y-«

(DU 3 3 (D 3 S E

e

to 3 V

3 9

03 U

S S es" ^^01111010111111011(111111 2 3 lö O) aT iiiiillllBHBHIIllll· llllll

v *H

^ fQ.

en G g S «ItaCQi β «1 β tn I I l I ! I I i l II iCttii il «3 s° ^ ,rn Φ 00 S A "rj -Q λλλλλλλλλλλλλλχιλλλλλλλλλλλ

e* tn WWnWWWWWWWWWWWMMWWWOWWWW'WO

H W 4>J

φ *H

♦H Ό I i J> X III millit 1 *5 S- m m m (N <N m m , , .

^ ^ ^ r*^-s ^ λ ^ ^ I · I I I I I 1 li I i l '*.

h M rs r*£3 «n im m «n in in in <n n n niM rs «N

CD*P ΕΕΒ2ϋΒΠΕΒΕΟΒ3/^^ ^ ^ .

efl) UUU'OUUUU in in | in n in | in »n ιν ινιΌ νν_μ_*^ •,n .2 XXX^XXXXS 8 8 G B 15 S B B o u u u 03 λ < *> i» nnJB m m m m yrvy vy O ^ywwtj Ύ n^ w w w —”Y V ^ ^

[£) 3 ^ » m E oCD EBBE I I I I I I I IlllltSIIII

.-3¾ eSäSSäsäS“5SSSSSSS8|||||||

«<c *j^ *5 EEEEEECEEECEEttBEEDECOBfflBEfflCD

03 tiUOOOtJUtJCJUUOOOOUOOOOUCJUOOO

<D H llllllllllllllltlllll'1111 n

Ci § £ e b bs SB3 B

O > O O O O O O O O O O O OOOOOOOOO

• · ^ 3 m BEE B B 5 : .ί 3 3 ee; o o o o o o

• · C X

.:. <

*!!* 3 S 03 B E B

::·. > K ooooooooo ooooooooooooo

• ΐ — B E B E

3 « o o o o 3 (M (N in O » „ =·=ν.·^ «”«v.·»^ «v.-s ·ν»ν»ν.ν.ν«; * u"u"u u"8 u oWu“ u"u ui o u"u uo"u u o u u o • n (n in ··· BB te to ti u • u o υ e- e»

V: β~ ==i§gg§SgSg§SSg§g|i«=SSSSS

« « . ,_, ΒΟΒοβββΒΒββΒββΒΟΜβΒΜβΛβΒΟΟΟϋ’-ίβ

·· · K

: · : · • · E · ..: .r-ι o <β -o o

'·"· 10 U OrtlNM-tfinOINBffOHMM-ffirMOfNBe; OSSSmS

HZ SiHHHHSHSrtNNNNNNNN«N«pinnfnn 23 107159

Esimerkki 33: Kaavan I mukainen yhdiste [Ri = B; R2 = OH; sb; R3 = C2H5; R4 = R4a = H; Rs+Rsa = O; A = -CH=CH- (CH2) 2~] [Menetelmämuunnelma (d) (pelkistys)] 5 H2S kaasua johdetaan 10 minuutin ajan seoksen läpi, joka sisältää 200 mg Esimerkin 8 mukaista yhdistettä, 0,3 ml pyridiiniä ja 4,8 ml dimetyyliformamidia. Reaktioseosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 24 tunnin 10 ajan. H2S kaasua johdetaan seoksen läpi jälleen 10 minuutin ajan. Seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa vielä kahden päivän ajan. Seos laimennetaan tolueenilla ja liuottimet poistetaan korkeapaineessa. Jäännös jaetaan etyyliasetaatin ja natriumbikarbonaatin kylläste-15 tyn vesiliuoksen kesken. Orgaaninen faasi erotetaan, sitä pestään suolavedellä, kuivataan MgS04illä ja liuotin poistetaan vakuumissa. Jäännös flash-kromatografoidaan silikageelillä (esikäsitelty 2 % bikarbonaatin vesiliuoksella) käyttäen etyyliasetaat-20 tia, jolloin saadaan otsikon mukaista yhdistettä (vaahto) .

< • « 4 « 4 « « « « « • « 4 «

IMI

• · • · · • · « « · • · · • $ · * • · * » ( · • · · • < • · • · « • · · • * • 9 · « « « I · 4 4 4«

«M

< « * I 4 4 • 4 4 • « « 4 4 4 1 · • · 24 107159

Esim. Spektri: Ή-NMR - Spektri t 5.S3 U. J-2.6HZ): 5.29 (br. d. J-4.1 Hz); 4.32 (d. J»S.5Hz): 3.70 (dd. J-t.2 j a 9.5Hz); 3.13 (S).

'0 Päätatpcnentti: 5.63 fbr. d); 2.S4 (dd).

11 Pääkaipcnentti : 5.69 (br. t); 4.61 (dd. J-2.0. 5.5); 3.21 (s).

17 4.96 (t, J=2.SHz); 4.19 (dd. J=3.7 ja 8.6Hz); 3.92 (m); 3.63 (d. J=9.6Hz); 3.33 (s).

18 (n. 2:1 isomeerien seos ) pääasiallinen iscmeeri: 569(t,J=9- 0Hz); 5.10(d, J=1.6Hz); 4.92(d, J=10.1Hz); 4.46(dd,J=5.3 ja 1.8Hz) 27 (n. 1:1 isaneerien seos) :7.11 (d, J=8.4); 6.89 (d, J=8.4);3.03 - 2.96 (m); 2.54 - 2.46 (m); 1.16 - 1.12 (m).

28 (n. 1:1 isomeerien seos): 7.10 (d, J = 8.6); 6.89 (d. J =» 8.4); 4.71 - 4.64 (m); 3.90 (dd. J-9.5. 3.0); 2.57 - 2.48 (m); 1.18-1.12 (m).

30 6.86 (d. J=8.6 Hz); 7.13 (d, J=8.5Hz).

32a (n* 0-5:0.7 isomeerien seos):7.12 (d, Je8.5); 6.82 (d, Js»8.6); 3.79-3.59 useita multiplettejä; 3.38 (s); 0.90 (leveä singletti) 32b isomeerien seos : 7. 05 (d. J-8.5); 6.43 (d. J=8.4); 5.67 (s); 5.62 (s); 3.90-3.85 (m).

32C isomeerien seos : 7.09 (d, J»8.7); 6.52 (d, J=8.5); 5.69 (s); 5.64 (S); (j 3.07-3.0 (m).

13C-NMR - Spektri

I 4 I

”it 1a 173.8. 170.6. 136.7. 130.4, 129.3. 125.5. 97.3, 84.3. 80.1.

'i|'» 2 Pääkcxnponentti: 214.0, 173.3. 170.7, 139.7, 131.1, 129.7, 123.9.97.0. 80.5.

75.2.52.1.

• · * *::: 3 Pääkarponentti: 214.0. 173.1, 170.3. 139.7. 132.6, 130.1,123.9. 96.9.

» < · 84.2. 78.2. 76.9. 75.3. 74.9. 73.52. 73.46. 72.5. 71.1. 63.7. 52.2.

4 Pääkcnpcinentti: 213.2. 173.3. 170.7, 139.9. 135.7. 131.2. 129.7, 123.3, ««< • o *···* 116.5. 97.0. 84.2. 80.5. 77.7, 75.2. 52.1.

e · · '»•! 5 Pääkcrrponentti: 213.1, 173.2. 169.2. 140.2. 131.9. 130.0. 122.8. 99.6. 88.3.

84.2. 78.5. 77.0. 74.1. 73.5. 71.6. 71.2. 69.3. 59.7. 54.2.

ί(”/. g Pääkamponentti :213.0. 173.0. 170.6, 140.0. 132.3. 130.3. 123.6. 99.2. S8.<4.

:v. 84.1. 79.0. 77.3. 74.2. 73.5. 72.2. 71.2. 69.9. 59.8. 55.8. 54.0.

• « ·:>·· 7 pääasiallinen isomeeri: 214.1, 173.4, 170.7,139.7,123.9,97.0,67.3.

8 Pääkamponentti :213.9, 190.8, 167.7, 162.9,139.5. 131.9. 129.8. 123.9.123.2.

25 107159 109.7. 98.9, 53.0.

9 Pääkonponentti : 212.9, 171.2.168.8. 140.3. 132.4, 130.3. 125.4,123.1,106.7, 99.5, 12 195.2. 169.5, 167.5. 136.5, 130.6, 129.0. 125.3, 96.5, 84.3, 79.5, 78.2, 53.8, 49.4 13 Pääkorpanentti: 213.6, 195.7, 169.0, 167.3, 138.8, 132.2. 130.3,123.5, 97.0.

84.2. 63.8, 54.5.

14 Pääkorpanentti: 212.9, 195.4, 169.1, 167.3, 139.0, 135.5. 131.2, 129.9, 123.1.

116.7, 96.9, 84.3, 79.4.

15 214.5,188.1,168.6,164.4,140.2,132.3,129.5,122.8, 98.7,88.8, 84.2,78.0, 76.1, 73.5, 71.7, 69.2, 59.0, 57.0, 56.6, 56.3, 55.6, 55.3 16 213.6,188.0,168.1,163.9,139.9,131.6,130.0,123.1,99.1,88.6, 84.2,78.4, 76.1, 73.6, 71.4, 69.1, 59.0, 55.0.

19 169.8, 169.0, 138.0, 131.7, 128.3, 127.7, 123.4, 109.0, 98.4, 55.4 20 PMMkaipanentti: 211.9, 171.2, 168.9, 140.4, 135.5, 132.4, 130.4, 125.3, 122.4, 116.5, 106.7, 99.5, 84.1, 78.7, 69.0.

21 213.4, 170.0, 169.0, 140.3, 132.1, 130.6, 130.4, 122.9, 109.3, 100.0, 84.1, 78.9, 74.1.73.5. 71.4, 70.5, 69.4. 59.0.

22 (pääasiallinen isomeeri): 212.7,171.5,168.9, 140.1, 132.1,131.7,125.4,123.1, 106.6,99.7,67.1 23 (n.2:3 isomeerien seos) :214.2,213.3,168.2,167.6,162.9,139.6,138.9, 132.1,131.8,129.8,129.2,123.9,123.23,123.16,121.9,112.1,109.8,98.9,97.5 t

• 4 « I

24 pääkomponentti :213.0,194.5 tai 190.9,167.7,162.9,139.6,135.4,131.9, 129.8.123.9.122.6.116.7.109.7.98.9.84.2.

"['l 25 213.7, 187.0, 167.7, 159.0, 140.3, 132.0, 130.4, 129,4, 122.8, 113.2,99.2,84.2, • ♦♦ 79.0, 76.5, 73.58, 73.55, 71.5, 69.1,59.0, 57.7, 56.5, 56.2, 55.4 26 Pääkonponentti : 195.7, 168.0, 162.8,135.4, 131.4, 128.3,127.9,123.0. 109.5, ' ' 99.6. 52.6 ... 29 (n. 45:40 isomeerien seos) :201.4, 199.4, 194.9, 188.8,168.4, 167.5, 163.3, • t 163.1.148.1.145.3.139.1.138.2.133.9.131.4.129.9.129.6.129.5.127.7.124.0.

• · 123.7. 123.5. 121.8, 110.9, 110.2, 99.0, 98.1 ··· . v r 31 213.8. 195.4, 169.2, 167.4, 138.7, 123.8, 96.9, 83.4, 79.4, 78.3, 74.7, 73.6, 72.6, « 4 < 71.5.67.4 32 213.9. 190.8. 167.7, -163, 139.5, 123.9, 123.2, 109.7, -99,67.3 < · 33 214.8. 170.9, 168.1, 140.9, 132.6, 129.2, 123.7, 122.3, 107.3 , 98.5. 84.2, 77\4, 76.9. 74.2. 73.6, 70.9, 69.4, 37.4 26 107159

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä, jotka voivat olla vapaassa muodossa ja, mikäli suolamuotoja esiintyy, farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodossa ja joista käytetään myöhemmin lyhyesti nimitystä "keksin -5 nön mukaiset aineet", on farmakologista aktiivisuutta. Niitä ehdotetaan siten käytettäväksi farmaseuttisina aineina. Niillä on erityisesti anti-inflammatorista sekä immunosuppressiivista ja antiprolif eratiivista aktiivisuutta.

10 Kaavan mukainen yhdiste I eroaa tunnetun

tekniikan mukaisista "FK506"-johdannaisista, kuten mm. julkaisujen FI 85977, FI 87803, FI 90550 ja FI 102612 (julk. 8.11.93) yhdisteistä, rakenteeltaan ryhmän A

suhteen. Tunnetun tekniikan johdannaisten ryhmä A on 15 aina substituoimaton ja tyydyttynyt pyrrolidiini- tai piperidiinirengas.

Näillä rakenteellisilla eroilla keksinnön mukaisissa yhdisteissä saavutetaan edullisia ominaisuuksia tunnetun tekniikan "FK506"-johdannaisiin näh- 2 0 den.

Anti-inflammatorinen aktiivisuus voidaan määrittää käyttäen esim. seuraavia koemenetelmää: 1. Syöttösolun degranuloitumisen esto in vitro (Koemenetelmä on esim. julkaisussa EP 569 337 kuvatun 25 mukainen) :

Keksinnön mukaiset aineet estävät tässä ko-*. 1 2: keessa syöttösolujen degranuloitumista (ICso) niin al- hai sinä pitoisuuksina kuin 50 nM.

• · · V ' 2. Oksatsoloni-indusoitu allerginen kontakti- 3 0 dermatiitti (hiiren) in vivo (Koemenetelmä on esim.

:3j julkaisussa, F.M. Dietrich ja R. Hess, Int. Arch. AI - « · · .···. lergy 38 (1970) , 246-259, kuvatun mukainen) :

Keksinnön mukaisilla aineilla aikaansaadaan 2 • · · 3 ' tässä kokeessa aina 50 % saakka aktiivisuus (inflamma- 35 torisen turpoamisen esto) 0,01 % liuoksena yhden topi- kaalisen annon jälkeen. Hydrokortisoni (1,2 %) on tässä mallissa mainituissa olosuhteissa inaktiivinen.

27 107159 3. DNFB-indusoitu allerginen kontaktiderma-tiitti (sian) in vivo (Koemenetelmä on esim. julkaisussa EP 315 978 kuvatun mukainen):

Keksinnön mukaisten aineiden 0,13 % valmistei-5 den topikaaliset annot estivät inflammatorista reaktiota aina 50 % saakka.

Immunosuppressoiva ja antiproliferatiivinen aktiivisuus voidaan esim. määrittää seuraavilla koemenetelmillä: 10 4. Lymfosyyttien proliferatiivisen vasteen esto allogeenistimulaatiolle seoslymfosyyttireaktiossa (MLR) in vitro [Koemenetelmä on kuvattu esim. julkaisussa, T. Meo, "The MLR in the Mouse", Immunological Methods, L. Lefkovits ja B. Pernis, Toim., Academic 15 Press, N.Y. (1979), 227-239]:

Keksinnön mukaiset aineet suppressoivat tässä kokeessa lymfosyyttiprolif eräät iota (IC50) niin alhaisina pitoisuuksina kun 1 nM.

5. Ihmisen kerätionosyyttien proliferaation 20 esto in vitro (Koemenetelmä on kuvattu esim. julkaisussa EP 539 326) :

Keksinnön mukaiset aineet ovat aktiivisia tässä kokeessa niin alhaisina pitoisuuksina kuin 7 μΐη, jolla saavutetaan n. 50 % esto.

25 6. Makrofiliini-12 sitoutumismääritys in vitro [Koemenetelmä on kuvattu julkaisussa, K. Baumann et *. 1: ai., Tetrahedron Letters 34 (1993), 2295-2298]: .,1·1 Keksinnön mukaiset aineet sitoutuvat makrofi- • · o ‘•t· " liiniin affiniteetilla (IC50) , joka on verrattavissa 30 rapamysiinin ja FK 506 :n affiniteettiin.

7. IL-2 reportterigeenimääritys in vitro [Koe- • · 4.

• .·**. menetelmä on julkaisussa, G. Baumann et a.1. , Transpl.

Proc. 24/Suppl. 2 (1993), 43-48, kuvatun mukainen]: • · · '« Keksinnön mukaisilla aineilla aikaansaadaan 35 tässä kokeessa ICso-arvo niin alhaisella pitoisuudella kuin 0,2 nM.

1 < ' « « « 28 107159

Esimerkin 8 mukainen yhdiste ( " 5,6-dehydro-askomysiini"), jota voidaan merkitä myös koko kemiallisella nimellä 17-etyyli-l, 14-dihydroksi-12-[2-(4-hydroksi-3-metoksisykloheksyyli) -1-metyylivinyyli] -5 23,25-dimetoksi-13,19,21,27-tetrametyyli-ll, 28-dioksa- 4-atsatrisyklo [22.3.1.0.4'9] oktakosa-5,18-dieeni-2,3,10,16-tetraoni[1R,5Z,9S,12S- [1E(1R,3R,4R)] ,13R,14S,17R,18E,2IS,23S,24R,2 5S,27R] , on erityisen edullinen aine edellä esitettyihin indikaati-10 oihin. On esimerkiksi määritetty, että edellä esitetyssä kokeessa (3) tällä yhdisteellä on 0,13 % valmisteen muodossa parempi aktiivisuus kuin deksametasonin vastaavalla 0,13 % valmisteella. Siten ehdotetaan, että edellä esitettyjä käyttötarkoituksia varten yhdistettä 15 voidaan antaa suuremmille nisäkkäille, kuten ihmisille, vastaavina antomuotoina, samoina tai alempina annoksina kuin on konventionasiisesti käytetty deksametasonille.

Keksinnön mukaisilla aineilla, erityisesti Esimerkin 8 mukaisella yhdisteellä, esiintyy vähäisem-20 pää atropiaa (surkastumista) topikaalisen annon jälkeen kuin tehokkailla topikaalisilla kortikosteroideilla ja myös vähemmän systeemisiä sivuvaikutuksia kuin FK 506:11a, kuten on osoitettu esim. arvioimalla rotilla 4 I < < toksisuutta ihonalaisen annon jälkeen.

'2 5 Keksinnön mukaisia aineita ehdotetaan siten anti-inflammatorisiksi aineiksi sekä immunosuppres- *· [· soiviksi ja antiproliferatiivisiksi aineiksi topikaa- • · · • ••I lista ja systeemistä käyttöä varten estämään ja hoita- • · « V * maan inflammatorisia ja hyperproliferatiivisa tiloja 30 sekä tiloja, jotka edellyttävät immunosupressiota, kuten: • ·« ·’**· (a) hoitamaan inflammatorisia ja hyperproliferatiivisia • · · ihosairauksia, kuten psoriasista, atooppisfca. ihottumaa, • · · kontaktidermatiittia ja muita ekseemisiä ihotauteja, 35 hilseistä ihottumaa, lichen planusta, pemfigusta, rak- ·*·’: kulaista pemfigoidia, rakkulaista epidermolyysiä, suo- • · • · 29 107159 nitulehduksia, eryteemaa, kutaanista eosinofiliaa, lupus erytematoosia ja aknea; (b) estämään ja hoitamaan allergisia sairauksia, kuten ulkosyntyistä astmaa, riniittiä, sidekalvontulehdusta, 5 atooppista ekseemaa, nokkosihottumaa/angiodemaa, ruo- ka/lääkeaineallergiaa ja liikaherkkyyttä; (c) estämään ja hoitamaan - vastustusta elimen ja kudoksen siirtotilanteissa, esim. sydämen, munuaisen, maksan, luuytimen ja ihon 10 siirron tilanteissa, - sirrännäinen-versus-isäntäsairauksia, esim. luuydin-siirtojen jälkeen, ja autoimmuunisairauksia, kuten nivelreumaa, systeemistä lupus erytematoosia, Hashimo-ton tyroideaa, multippeliskleroosia, myastenia gravis- 15 ta, diabetes tyyppi I:tä ja silmän keskikalvontulehdus-ta, - immunologisvälitteisten häiriöiden iho-oireita; ja (d) pälvikaljuutta.

Keksinnön mukaisia aineita voidaan antaa sys-2 0 teemisesti tai topikaalisesti. Sopiva annos edellä mainituissa indikaatioissa käyttöä varten luonnollisesti vaihtelee riippuen esim. erityisestä. käytetystä . aineesta, isännästä, antotavasta ja hoidettavan tilan * *"! luonteesta ja vakavuudesta. Yleensä kuitenkin saavut e- ···· 25 taan systeemisesti edullisia tuloksia n. 0,15 - 1,5 « · « mg/kg eläimen ruumiinpaino päiväannoksilla. Suuremmille ·.*·: nisäkkäille indikoitu päiväannos on välillä n. 10 - 100 mg, annettuna sopivasti, esim. aina neljä kertaa päi- :\‘*r vässä annettavina jaettuina annoksina tai pitkävaikut- 30 teisessa muodossa. Topikaalisessa käytössä saavutetaan .·*·. paikallisena antona tyydyttäviä tuloksia aktiivisen •« ♦ .··, aineen pitoisuuksilla n. 0,1 - 3 % annettuna useita ’«* kertoja päivässä, esim. 3 kertaa päivässä. Esimerkkeinä • « · . V käyttökelpoisista galeenisista muodoista mainittakoon 35 lotionit, geelit, cremorit, suihkeet ja liuokset.

Keksinnön mukaisia aineita voidaan antaa mitä tahansa konventionaalista tietä, erityisesti, enteraali- • · 30 107159 sesti, kuten oraalisesti, esim. tablettien tai kapselien muodossa, tai topikaalisesti, esim. lot ionien, geelien, cremoreiden, suihkeiden, silmä- tai nenäliuosten muodossa tai aerosolien muodossa ihon ja limakalvojen, 5 kuten silmä-, hengitystie-, emätin-, suu- ja nenäonte-loiden, paikalliseen hoitoon.

Esim. topikaaliseen käyttöön tarkoitettuja farmaseuttisia koostumuksia, jotka sisältävät keksinnön mukaista ainetta yhdessä ainakin yhden farmaseuttisesti 10 hyväksyttävän kantajan tai laimennusaineen kanssa, voidaan valmistaa konventionaaliseen tapaan suorittamalla seostus farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan tai laimennusaineen kanssa. Yksikköannosmuodot sisältävät esim. n. 2,5 - 50 mg aktiivista ainetta.

15 Topikaaline anto on esim. iholle anto. Edel leen eräs topikaalinen antomuoto on anto silmään silmän immuno-välitteisten tilojen, kuten autoimmuunisairauksien, esim. silmän keskikalvontulehduksen, keratoplasi-an ja kroonisen keratiitin; allergisten tilojen, esim.

20 keväisen silmänsidekalvontulehduksen; inflammatoristen tilojen ja sarveiskalvon siirrännäisten, hoitamiseksi, jolloin silmän pinnalle saatetaan keksinnön mukaista ainetta farmaseuttisesti hyväksyttävässä silmään sopivassa kantajassa.

25 Silmälle sopiva kantaja on sellainen, että aine pysyy kosketuksissa linssin pinnan kanssa riittä- *· ]· vän kauan aikaa, jolloin aine voi penetroitua sarveis- • · · •••i kalvoon ja silmän sisäosiin, esim. etupuoleiseen kammi- • » · V ‘ oon, taempaan kammioon, lasiaiseen, kammioveteen, la- 3 0 siaisnesteeseen, sarveiskalvoon, iirikseen/säteeseen, linssiin, silmän suonikalvoon/verkkokalvoon ja kovakal- ··· ·*“· voon. Farmaseuttisesti hyväksyttävä silmälle sopiva ♦ · · kantaja voi olla esim. voidetta, kasviöljyä tai kapse- • · · ** ' loivaa materiaalia.

• « 35 Edelleen eräs topikaalinen hoitomuoto on esi- ·’·*: merkiksi astmaattisten potilaiden tapauksessa keksinnön • · • · 31 107159 mukaisten aineiden anto keuhkoputken tai keuhkorakkulan epiteelille esim. aerosoli- tai jauheinhalaationa.

Keksinnön mukaiset aineet estävät keuhkoteitse tapahtuvan hengitysteihin annon jälkeen antigeeni -5 indusoitua inflammatorista solun infiltraatiota hengitysteihin. Niitä ehdotetaan siten käytettäväksi hengitysteiden tai keuhkojen sairauksien kuten astman hoitoon. Tämä aktiivisuus voidaan osoittaa standardi koemenetelmillä, esim. mittaamalla vaikutusta allergeeni-10 indusoituun keuhkoeosinofiiliaan (in vivo) esim. julkaisussa EP 577 544 kuvatun mukaisesti.

Keksinnön mukaisia aineita ehdotetaan siten käytettäväksi sellaisten sairauksien tai tilojen hoitoon, jotka reagoivat hengitysteiden tai keuhkojen 15 topikaaliseen hoitoon tai edellyttävät tällaista hoitoa, ja erityisesti inflammatoristen tai obstruktiivisten hengitysteiden sairauksien hoitoon. Niitä ehdotetaan käytettäväksi erityisesti sellaisten hengitysteiden tai keuhkojen sairauksien tai tilojen hoitoon, 20 joihin liitty tai joille on tunnusomaista inflammatorinen solun infiltraatio tai muut, inflammatoristen solujen, esim. eosinofiili- ja/tai neutrof iilisolujen, akkumulaatiosta seuraavat inflammatoriset tapahtumat, t - edullisesti astman hoitoon. Niitä ehdotetaan käytettä-25 väksi myös keuhkoputkentulehduksen tai siihen yhteydessä olevan kroonisen tai akuutin hengitysteiden obstruk- *· *: tion hoitoon, pölykeuhkon sekä eosinofiileihin liitty- • * · ...l vien hengitysteiden häiriöiden hoitoon.

»I· V * Edellä mainittuja käyttötarkoituksia varten 30 keksinnön mukaisia aineita voidaan käyttää missä tähän- :***: sa annosmuodossa, joka on sopiva annettavaksi topikaa- • 4 » ·***. lisesti haluttuun kohtaan, esim. keuhkoteitse inhaloi- • « · den sopivasta jakelulait teestä; esim. missä tahansa • · · *·] * sopivassa hienojakoisessa tai hienojakoiseksi saatetta- 35 vassa muodossa, joka voidaan antaa hengitysteihin tai ·*·*. keuhkoihin, kuten hienojakoisten kuivien partikkeleiden muodossa tai dispersion tai liuoksen muodossa missä 32 107159 tahansa (so. pulmonaarisesti annettavassa) kiinteässä tai nestemäisessä kantajaväliaineessa. Kuivana partikkelimuotona antoa varten keksinnön mukaisia aineita voidaan antaa esim. sellaisenaan, so. mikronoidussa 5 muodossa ilman lisämateriaaleja, laimennoksena muun hienojakoisen, inert in kantajan tai lalmnnusaineen kanssa, päällystettyjen partikkeleiden muodossa tai missä tahansa sopivassa muodossa, jota käytetään tekniikan tasossa hienojakoisten kiintoaineiden pulmonaa-10 riseen antoon.

Pulmonaarinen anto voidaan toteuttaa käyttäen mitä tahansa sopivaa järjestelmää, jota käytetään tekniikan tasossa kuivassa tai nestemäisessä muodossa olevan lääkeaineen luovuttamiseen inhaloima.Ha, ja joka 15 voi olla esim. sumutin-, nenäsumutin-, kuivan jauheen inhalointi- tai vastaava laite. Edullisesti käytetään annostelevaa luovutuslaitetta, so. laitetta, joka kykenee luovuttamaan ennalta määrätyn määrän keksinnön mukaista ainetta jokaisella käyttötoiminnolla. Tällai-20 set laitteet ovat alalla tunnettuja.

Farmaseuttisesti hyväksyttäviin laimennusai-neisiin tai kantajiin, jotka soveltuvat topikaaliseen antoon pulmonaarisesti, kuuluu esim. oleellisesti puh-taassa muodossa olevan aktiivisen aineosan (so. keksin- «ta < ‘"I 25 non mukaisen aineen) kuiva jauhevalmi s teet, kuten sei- 4 1« laiset, joita käytetään tekniikan tasossa kuivajauheen *♦ *ί inhalointilaitteesta luovuttamiseen. Keinoihin ja lait- teisiin topikaalisen annon mahdollistamiseksi tai hei- * · « V * pottamiseksi kuuluu erityisesti inhalointi laitteet sekä 3 0 säiliöt ja vastaavat, josta aktiivinen a.ine voidaan :**'? luovuttaa topikaaliseen antoon sopivassa muodossa.

« « ·

Edulliset sovellutukset mahdollistavat topikaalisen # « * .*, annon hengitysteihin tai keuhkoihin esim. inhaloimalla.

• · · ’* ‘ Keksinnön mukaisten aineiden annokset, joita 35 käytetään hengitysteiden tai keuhkojen sairauksien tai tilojen hoitoon, esim. inflammatorisen tai obstruktii- « · visen hengitysteiden sairauden, kuten astman, hoitoon 33 107159 esim. inhaloimalla ovat suuruusluokkaa 0,1 - 10 mg per päivä, esim. n. 0,5-5 mg, edullisesti n. 1 - 3 mg per päivä. Annos voidaan antaa sopivasti annostelevasta luovutusjärjestelmästä 1-5 hengityksen sarjana kunkin 5 annon yhteydessä ja anto voidaan suorittaa yhdestä kerrasta neljään kertaan päivässä. Annokset jokaisen annon yhteydessä ovat siten sopivasti suuruusluokkaa n. 0,0025 - 10 mg, sopivammin n. 0,125 - 5 mg, esim. annettuna annostelevalla luovutuslaitteella, joka kykenee 10 luovuttamaan esim. n. 0,25 - 3 mg ainetta per käyttö-toiminto.

Vaikka keksinnön mukaisten aineiden pääasiallinen aktiivisuus on anti-inflammatorinen sekä immu-nosuppressoiva ja antiproliferatiivinen aktiivisuus, 15 niillä on myös jonkin verran aktiivisuutta lisätä herkkyyttä kemoterapeuttiselle lääkeaineterapialle tai lisätä kemoterapeuttisen lääkeaineterapian tehoa. Tämä aktiivisuus voidaan määrittää julkaisussa EP 360 760 kuvattujen koemenetelmien mukaisesti.

20 Keksinnön mukaisia aineita ehdotetaan siten käytettäväksi kumoamaan eri tyyppisiä kemoterapialää-keaineresistenssejä, jotka voivat olla hankittuja tai luontaisia, tai lisäämään herkkyyttä annetulle lää- • « « keaineterapialle esim. keinona vähentää tavanomaisia « ..il* 25 kemoterapia-annostasoja, esimerkiksi anti —neoplastisen tai sytostaattisen lääketerapian tapauksessa, keinona vähentää lääkkeen kokonaistoksisuutta ja erityisesti • · •J. keinona kumota tai vähentää resistenssiä kemoterapialle #··· sekä luontainen ja hankittu resistenssi muk.aan lukien.

• « · 3 0 Esillä oleva keksintö liittyy siten myös kek- ... sinnön mukaisen aineen käyttöön farmaseuttisena, eri- • · • · tyisesti anti-inflammatorisena sekä immunosuppressoiva- • · •y* na ja antiproliteratiivisena aineena; keksinnön mukai- • seen aineeseen käytettäväksi farmaseuttisena aineena; 35 keksinnön mukaisen aineen käyttöön farmaseuttisen koos- tumuksen valmistuksessa, jolloin se seostetaan ainakin • yhden farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan tai lai- • » 34 mennusaineen kanssa; ja menetelmään farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi, jolloin keksinnön mukainen aine seostetaan ainakin yhden farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan tai laimennusaineen kanssa.

5 Keksintö liittyy lisäksi farmaseuttiseen koostumukseen, joka sisältää keksinnön mukaista ainetta yhdessä ainakin yhden farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan tai laimennusaineen kanssa. Keksintö liittyy edelleen menetelmään inflammatoristen ja hyperprolif eratiivisten 10 tilojen sekä immunosuppressiota edellyttävien tilojen hoitamiseksi, jolloin menetelmässä annetaan terapeuttisesti tehokas määrä keksinnön mukaista ainetta tällaista hoitoa tarvitsevalle potilaalle.

« « « « I I I ( • · • · · • · · • · • < I • < « · • · · • < o • · ·

• I

• · * 1 1 • · · • · • ♦ · (il

• < I

« · « 4 « · · « « « • · «

Claims

35 107159

1 X / / 'P3 ..’.r 'l o .·Τ: oX>-R* Fvic0H X y^cH3 * · .··*; CH3 *:*’ och3 och3 f t « I 4 4 X. 35 jossa 4 4 4 4 4· 4 · t 4 43 107159 IVp on vety tai mahdollisesti suojattu bydroksi ja katkoviivalla yhdistetyn kahden hiiliatomin välillä on yksinkertainen tai kaksoissidos; joko R4p on hydroksi ja R4aP on vety, 5 tai R4p ja R4ap ovat yhdessä okso; R71p on halogeeni; ja muut substituentit ovat patenttivaatimuksessa 1 tai tässä patenttivaatimuksessa määritellyn mukaisia, tai 10 jolla on kaava Ip4 R7V^\f

15 CH, CH3 T T ^ »' cv Λ Λ. ° O V—OH /OH CH3\^\0 ««1 II l· 25 ΤΊΓ^CH3 OCH3 OCHa < » • · • · · 9 99 9 9 ·«· jossa substituentit ovat patenttivaatimuksessa 1 tai *9t 9 tässä patenttivaatimuksessa määritellyn mukaisia, 30 tai « 1 · • · • « III jolla on kaava Ip5 • « • · · • * 1,1 t t % 1 « « Γ': 35 1 « · • I I 4 • t 9 I · · · 44 107159 Rf^-^S CH3 5 cH-rVryL oy A * •v X U QJ_| 0^Ύ^<ο ^ch3 VVAh, och3 och3 15 jossa substituentit ovat patenttivaatimuksessa 1 tai tässä patenttivaatimuksessa määritellyn mukaisia.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava I, jossa 2 0 Ri on ryhmä, jolla on kaava B H Ok, *°o-Q « 25 R2 on hydroksi ja katkoviivalla yhdistetyn kahden. :.*·· hiiliatomin välillä on yksinkertainen sidos, R3 on etyyli, :*«·’; R4 on hydroksi, joka on a- tai β-konfiguraatiossa,

30 R5 on hydroksi, joka on a~k°nfiguraatiossa, .···. R^a ja R5a tarkoittavat vetyä, ja .···. A on ryhmä -CH (0R6) -CH2- (CH2) z~, jossa OR6 on metoksi, *:* joka on β-konfiguraatiossa, • · · v ·' ja muiden asymmetrisesti substituoitujen hiiliatomien :ftii 35 stereokemiallinen konfiguraatio on kuten FK 506:ssa, ja joka yhdiste on vapaassa muodossa tai, mikäli < * * \ tällaisia muotoja esiintyy, suolan muodossa. • · 45 107159

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, joka on 17-etyyli-l, 14-dihydroksi-12-[2-(4-hydroksi-3-metoksisykloheksyyli)-1-5 metyylivinyyli]-23,25-dimetoksi-13,19,21,27- tetrametyyli-ll, 28-dioksa-4-atsatrisyklo [22. 3.1.0.4,9] -oktakosa-5,18-dieeni-2,3,10,16-tetraoni [1R, 5Z, 9S,12S-[1E (1R, 3R, 4R) ] , 13R, 14S, 17R, 18E, 21S, 23S, 24R, 25S, 27R] , vapaassa muodossa tai, mikäli tällaisia muotoja esiin-10 tyy, suolan muodossa. «

1. Menetelmä askomysiini makrolidi johdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava I 5 RN ch VW ch3 T r O R2 ^ ” cy r - vV och3 och3 jossa

20 Ri tarkoittaa ryhmää, jolla on kaava ^7il tai jossa ! RgCHj 25 • · • · · *· joko R7 on hydroksi- tai 2-hydroksietoksiryhmä, joka on mahdollisesti suojattu tert-butyylidimetyylisilyylillä, • · · V · tai se on isopropyylikarbonyylioksi tai kloori ja R7a on 30 vety, . tai R7 ja R7a ovat yhdessä okso, • · · .**·. Rs on metoksi, ja ··· Rg on hydroksi; 1 1 1 * R2 on vety, isopropyylikarbonyylioksi tai hydroksi ja ’...· 35 katkoviivalla yhdistetyn kahden hiiliatomin välillä on ·*·*: yksinkertainen tai kaksoissidos; R3 on etyyli tai allyyli; 36 107159 joko R4 on vety tai hydroksi ja R^a on vety, tai R4 ja R4a ovat yhdessä okso; joko R5 on hydroksi ja Rsa on vety, tai R5 ja R5a ovat yhdessä okso; ja 5 A on ryhmä, jolla on kaava -CH (ORe) -CH2- (CH2)n- tai -CH=CH-(CH2) n-, jolloin CH2-ryhmä on liittyneenä hiiliatomiin, Re on alempi alkyyli ja n on luku 1 tai 2; 10 ja jotka yhdisteet voivat olla vapaassa muodossa tai,· mikäli tällaisia muotoja esiintyy, suolan muodossa tunnettu siitä, että menetelmässä (a) sellaisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava 15 Ia \ CHä CH3 II pCp

20 O 1¾ ^ γΎ / / Ra Rs0 ( o la · : o ^ -oh

25 Ah, och3 och3 • · · · • · • « · 30 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, »·· .··*, säteilytetään UV tai näkyvää valoa käyttäen, » ’·* valinnaisesti herkistävän aineen tai elektronisiirtoa « i * v * avustavan aineen läsnäollessa, R6OH:n läsnä ollessa 35 vastaavaa yhdistettä, jolla on kaava II • · · • · · « · 37 107159 S CH3 CHa n T* n CX/ 'λ I ° ίο o^N=o ^oh I CH3 OCHa OCH3 15 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, tai (b) sellaisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava 20 Ib \ Γ ch3 1 |S> 2S A-X /° ^ CV h ·· *: >{ f Ib •h JL o v; Loh

30 I^^CHs iC^ ch, OCH3 OCHa > * « « • * < » « « 35 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia., hapetetaan selektiivisesti hapettavalla aineelba vastaava yhdiste, jolla on kaava Ie • « 38 107159 RN CH3 O Rj I 1C 10 °^Eh J HjCv^^o I^XHa S^V ^ CH3 och3 och3 15 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, tai (c) sellaisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava Id, 20 rN CH, O r2 25 ^_(CHj)n / l Uv / .·. : ™ η id ..il' ^ L^OH I :·; *’ υ^0Η3

30 I 1 |Y ' CH3 OCH3 OCH3 • · · 35 39 107159 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, eliminoidaan reaktiolla hapon tai suolan kanssa R60H vastaavasta yhdisteestä, jolla on kaava Ie

5 R,\ CH3 ch3 T T O Rj * r(0HSI" / /-¾ 10 f °Y>T“R’ Ρζβ L^oh HP

15 CH3 och3 och3 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, tai 20 (d) sellaisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava If RS CKj

25. T X <R* O/ / N—Ν"η{ ( If :if G o 30 jl S rr\ *:* och3 och3 «·« * · · * « « :*]*: 35 jossa substituentit ovat edellä määritellyn mukaisia, pelkistetään okso-ryhmä pelkistävällä aineella « « * \ vastaavasta yhdisteestä, jolla on kaava Ib; ja • « 40 107159 mahdollisesti poistetaan yhden tai useamman hydroksiryhmän suojaus saadusta kaavan I mukaisesta, yhdisteestä, jossa on suojattu(ja) hydroksiryhm(i)ä, tai suojataan yksi tai useampi hydroksiryhmä saadusta kaavan 5 I mukaisesta yhdisteestä, jossa on vapa(it) a hydroksiryhm(i)ä; mahdollisesti erotetaan kaavan I mukaisten yhdisteiden saatu stereoisomeerinen seos yksittäisiksi isomeereiksi i 10 ja otetaan kaavan I mukainen yhdiste talteen vapaassa muodossa tai, mikäli tällaisia muotoja esiintyy, suolan muodossa.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä/· tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava Ix, Bi'—CH, » CV 'h i O '* .·.: o^V=o *· *· X>H ·· 30 VY~C OCH, OCH3 • · • t • · « • · · • · ...* jossa substituentit ovat patenttivaatimuksessa 1 määritellyn mukaisia. « .**·. 35

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä/ « · • i · tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla « · · ' ·* on kaava Is « · 41 107159 jL ~Hs yv Λ .

10 O^Sr-^-R, HteL^OH I HgCw/^o y^CH3 I^Y" *ch3 och3 och3 15 jossa substituentit ovat patenttivaatimuksessa 1 määritellyn mukaisia.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla 20 on kaava Ipi

25 CH,— CH^NiTXXs ·*· * 1 il lr\ ·. ·: ^LcioH CV^H λ

30 I _Γ CH3 Γ]*: OCH3 OCK, • · · • » ·»· ; ‘ ; jossa R2P ja R7P ovat samanlaisia tai erilaisia ja 35 tarkoittavat mahdollisesti suojattua hydroksia ja muut y substituentit ovat patenttivaatimuksessa 1 määritellyn • · · - ·' mukaisia, tai 42 107159 jolla on kaava Ip2

5 X\X\ CKj Rs il I <Tx O IX ch3o-<n/V/ y ^ ip2 10 0<iS==° U°H X XT CH3 och3 och3 15 jossa substituentit ovat patenttivaatimuksessa 1 tai tässä patenttivaatimuksessa määritellyn mukaisia, tai jolla on kaava Ip3 20 "XX RT^Xl CH.

25 CH’ I L Xrs, o F^p ^ rr- «Η)η / Γ'Κ*

4. I • · · • · • · · « • · « < 4 ·» • t ' • 1 • ♦ > « · *·» • · 4 • · • · ♦ • · · * « 4 • » · 46 107159