ES2925740T3 - Complejos de cobre-zinc-amonio solubilizados en ácido, composiciones, preparaciones, métodos y usos - Google Patents

Complejos de cobre-zinc-amonio solubilizados en ácido, composiciones, preparaciones, métodos y usos Download PDF

Info

Publication number
ES2925740T3
ES2925740T3 ES14869541T ES14869541T ES2925740T3 ES 2925740 T3 ES2925740 T3 ES 2925740T3 ES 14869541 T ES14869541 T ES 14869541T ES 14869541 T ES14869541 T ES 14869541T ES 2925740 T3 ES2925740 T3 ES 2925740T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
copper
zinc
water
compositions
ammonium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES14869541T
Other languages
English (en)
Inventor
Tony Hall
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
VM Agritech Ltd
Original Assignee
VM Agritech Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by VM Agritech Ltd filed Critical VM Agritech Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2925740T3 publication Critical patent/ES2925740T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
    • A01N59/16—Heavy metals; Compounds thereof
    • A01N59/20—Copper
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
    • A01N59/02—Sulfur; Selenium; Tellurium; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing liquids as carriers, diluents or solvents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing liquids as carriers, diluents or solvents
    • A01N25/04—Dispersions, emulsions, suspoemulsions, suspension concentrates or gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/16—Foams
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
    • A01N59/16—Heavy metals; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/02—Ammonia; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/34—Copper; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/04—Dispersions; Emulsions
    • A61K8/042—Gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A61K8/27—Zinc; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/02—Local antiseptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F1/00—Treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F1/50—Treatment of water, waste water, or sewage by addition or application of a germicide or by oligodynamic treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/48—Medical, disinfecting agents, disinfecting, antibacterial, germicidal or antimicrobial compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2103/00—Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated
    • C02F2103/42—Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated from bathing facilities, e.g. swimming pools
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

Se describe una composición antimicrobiana que contiene un complejo de cobre-amonio o cobre-zinc-amonio solubilizado en ácido que es eficaz contra microorganismos tales como bacterias nosocomiales o ambientales, hongos, virus y similares. La composición antimicrobiana se puede usar en la preparación de un medicamento para tratar microbios o una infección microbiana, y puede contener un vehículo para crear una crema, jabón, lavado, aerosol, vendaje, limpiador, producto cosmético, medicamento tópico u otro. ti producto microbiano. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Complejos de cobre-zinc-amonio solubilizados en ácido, composiciones, preparaciones, métodos y usos
Campo técnico
Esta invención se refiere generalmente a composiciones con actividad antimicrobiana, y más específicamente a composiciones que contienen, como ingredientes activos, complejos de cobre-zinc-amonio solubilizados en ácido.
Antecedentes de la técnica
Los efectos antimicrobianos del metal cobre y las sales de cobre se conocen desde la antigüedad. El papel del cobre como agente antimicrobiano se describió por primera vez en el Smith Papyrus, un texto médico egipcio escrito alrededor del año 2600 a.C., que describe la aplicación del cobre para esterilizar las heridas del pecho y el agua potable.
El metal cobre o sus compuestos fue usado por los griegos, romanos y aztecas para el tratamiento de infecciones crónicas y para la higiene en general. Por ejemplo, en la Colección Hipocrática se recomienda el cobre para el tratamiento de úlceras en las piernas asociadas con venas varicosas. Para prevenir la infección de heridas recientes, los griegos rociaban un polvo seco compuesto de óxido de cobre y sulfato de cobre sobre la herida. Otro tratamiento antiséptico para heridas en ese momento era una mezcla hervida de miel y óxido de cobre rojo. Los griegos tenían fácil acceso al cobre ya que el metal estaba fácilmente disponible en la isla de Kypros (Chipre), de donde se deriva el nombre latino del cobre, cuprum.
El antiguo texto ayurvédico indio Charaka Samhita (300 a.C.) también menciona cómo el cobre mata microbios fatales, incluido su papel en la purificación del agua potable. Plinio (23 a 79 d.C.) describió una serie de remedios que involucraban cobre, por ejemplo, se administró óxido de cobre negro con miel a los gusanos intestinales.
En tiempos más modernos, la primera observación del papel del cobre en el sistema inmunológico se publicó en 1867 cuando se informó que, durante las epidemias de cólera en París de 1832, 1849 y 1852, los trabajadores del cobre eran inmunes a la enfermedad. Además, se ha demostrado que los animales con deficiencia de cobre tienen una mayor susceptibilidad a patógenos bacterianos tales como Salmonella y Listeria.
El sulfato de cobre es el componente activo clave del fungicida 'mezcla de Burdeos' que se inventó en el siglo XIX y aún es usado en la agricultura hoy en día, al igual que muchos otros agroquímicos a base de cobre.
Los microbios patógenos tales como bacterias, hongos y virus son responsables de muchas de las enfermedades en organismos multicelulares como se ilustra en los siguientes ejemplos no limitantes.
En el área farmacéutica, las infecciones bacterianas están involucradas en enfermedades de la piel tales como el acné (Propionibacterium acnes) y eccema (Staphylococcus aureus), infecciones adquiridas en el cuidado de la salud (HAI) causadas por Staphylococus aureus resistente a meticilina (SARM), Acinobacter sp., Klebsiella pneumoniae (en la que se identificó originalmente el gen de la enzima NDM-1) y Legionella pneumophila la que es la causa de la enfermedad del legionario. Escherichia coli (E.coli) es una causa común de infecciones del tracto urinario. Se estima que estas y otras HAI causan la muerte de casi 100000 personas en los Estados Unidos anualmente. El patógeno E. co liO157:H7 causa gastroenteritis cuando se ingiere a través de alimentos contaminados. Las enfermedades causadas por hongos pueden ser relativamente leves, tales como el pie de atleta (Tricophyton sp.), la caspa (Malassezia globosa) y el tordo (Candida albicans), pero hongos tales como Aspergillus fumigatus (A. fionigatus) y Candida albicans (C. albicans), y levaduras como Cryptococcus neoformans, pueden causar infecciones potencialmente mortales en pacientes inmunocomprometidos. Los virus también son responsables de enfermedades comunes tales como los resfriados (Rinovirus) y la influenza (virus de la influenza A, B y C) y el resfriado, llagas (virus del herpes simple), hasta enfermedades virales más graves como la rabia y el ébola.
Las infecciones bacterianas de las heridas de la piel, tales como las úlceras por presión y las úlceras del pie diabético, pueden exacerbar la afección y se ha demostrado que las sales de cobre y las composiciones a base de cobre son efectivas contra estas enfermedades en virtud tanto de sus efectos antibacterianos como de su capacidad para estimular la cicatrización de la herida al aumentar la producción de factores de crecimiento.
En el área cosmética, se ha demostrado que las composiciones de cobre o cobre-zinc son efectivas, por ejemplo, para mejorar los efectos de las quemaduras solares de leves a moderadas y las quemaduras leves, y también para reducir el picor y la inflamación causados por las picaduras de insectos y reducir la aparición de arrugas.
En el área agrícola, las enfermedades fúngicas están causando la muerte actualmente a los tanoaks en el oeste de los Estados Unidos (Phytophthora ramorum) y fresnos en Europa (Chalara-fraxinea). Las enfermedades fúngicas y bacterianas de las vides, las plantas productoras de frutas y hortalizas y los cultivos de cereales son una amenaza para la producción mundial.
La presencia de un número cada vez mayor de cepas de microbios patógenos resistentes a los medicamentos en hospitales y en el entorno general se está convirtiendo en una gran preocupación, como se ilustra en los siguientes ejemplos. Cepas resistentes a antibióticos y resistentes a múltiples fármacos de bacterias patógenas tal como MRSA, resistentes a la vancomicina Staphylococcus aureus (VRSA), Acinetobacter baumanni. E. coli y Mycobacterium tuberculosis ahora son comunes. Cepas resistentes de hongos patógenos tal como C albicans resistente al ketoconazol y A. fumigatus son un problema creciente, particularmente en pacientes inmunocomprometidos. Las plantas resistentes a fungicidas y los hongos patógenos evolucionan constantemente y requieren nuevos agentes antifúngicos para su tratamiento. Por ejemplo, Phytopinhora infestans, la causa del tizón de la papa, se volvió altamente resistente a metalaxil a finales del siglo XX, los virus patógenos desarrollan de manera similar resistencia a los medicamentos antivirales, el desarrollo de resistencia de la cepa de influenza A H1N1 "gripe porcina" al fosfato de oseltamivir (TAMIFLU®, una marca registrada de Genentech, San Francisco, California, Estados Unidos) en el últimos cinco años siendo un ejemplo reciente,
En los documentos W02019/055799 y US2008/0166424 A1, se describen composiciones y métodos antimicrobianos para el tratamiento de enfermedades, basados en una composición activada que comprende sulfato de cobre, sulfato de zinc, cloruro de sodio y sulfato de amonio.
Descripción de la invención
De acuerdo con la presente invención, se proporciona una composición antimicrobiana de acuerdo con la reivindicación 1. En las reivindicaciones dependientes se describen las modalidades ventajosas de la invención. Breve descripción de las figuras
La invención se describirá con referencia a las siguientes figuras, en los que los mismos números se refieren a elementos similares, y en los que:
La Figura 1 es un gráfico que representa los efectos del sulfato de cobre y la composición Cu#1 en el crecimiento de la cepa bacteriana S1 (S. aureus);
La Figura 2 es un gráfico que representa los efectos del sulfato de zinc solo y combinado con la composición Cu#1 en el crecimiento de la cepa bacteriana S1 (S. aureus);
La Figura 3 es un gráfico de barras que representa los efectos del gel, sulfato de zinc (100 pg/ml) solo y composiciones Cu#9 o Cu#10 (200 pg/ml) solos y en combinación con sulfato de zinc en el crecimiento de S1 (S. aureus);
La Figura 4 es un gráfico de supervivencia de células de piel humana después de un cultivo de 24 horas con sulfato de cobre y composiciones Cu#9, Cu#10 y Cu-Zn#1: Gel Cu#9, Gel Cu-Zn#1; y
La Figura 5 es un gráfico de la supervivencia de las células de la piel humana después de un cultivo de 24 horas con Gel Cu#9, Gel Cu-Zn#1 y dos productos de crema antiacné CLEARASIL® (una marca registrada de Reckitt Benckiser LLC de Berkshire, Inglaterra) que contienen los compuestos activos ácido salicílico y peróxido de benzoilo. La presente invención se describirá en relación con una modalidad preferida, sin embargo, se debe entender que no se pretende limitar la invención a la modalidad descrita.
Mejor modo para llevar a cabo la invención
La presente invención se expone en el conjunto de reivindicaciones adjuntas.
La presente invención se describirá a manera de ejemplo y no como limitación.
Las modificaciones, mejoras y adiciones a la invención descrita en la presente descripción pueden determinarse después de leer esta especificación y ver las figuras adjuntas.
El inventor ha encontrado sorprendentemente que los complejos de cobre-amonio y cobre-zinc-amonio solubilizados en ácido descritos en la presente descripción son útiles para combatir microbios patógenos específicos que son resistentes a los antibióticos en el caso de ciertas bacterias o que de cualquier otra manera son difíciles de tratar o controlar en el caso de ciertas cepas bacterianas y fúngicas. Además, el inventor ha encontrado sorprendentemente que estos complejos de cobre-amonio solubilizados en ácido pueden ser altamente efectivos contra bacterias difíciles de tratar, por ejemplo, MRSA y Acinetobacter baumannii sin toxicidad simultánea para las células de la piel humana en cultivo a concentraciones similares.
Debido a las cantidades relativamente bajas de cobre que pueden ingerirse de manera segura (no más de 6 miligramos por día en humanos adultos) o toleradas por plantas y animales en el medio ambiente, y particularmente en el medio acuoso, las aplicaciones del cobre solubilizado en ácido o las composiciones de amonio o cobre-zinc-amonio descritas en la presente descripción son principalmente para uso tópico, por ejemplo, en la piel o las membranas mucosas de animales y humanos, en las hojas de las plantas o, por ejemplo, en superficies en el medio ambiente, tal como en casas u hospitales.
Las excepciones a los usos tópicos incluyen, por ejemplo, (i) el tratamiento de agua contaminada por uno o más microbios que podría volverse potable mediante el uso de una composición de cobre-amonio solubilizado en ácido o cobre-zinc-amonio solubilizado en ácido para eliminar o matar microbios, o (ii) hacer que el agua sea apta para su usar mediante la eliminación o muerte de microalgas o bacterias que contaminan el agua en una estructura tal como una piscina o un jacuzzi mediante la adición de una o más de las composiciones de cobre o cobre-zinc solubilizadas en ácido descritas en la presente descripción.
Las composiciones del complejo de cobre-amonio solubilizado en ácido descritas en la presente descripción pueden aplicarse tópicamente a la piel de un paciente para prevenir o tratar, por ejemplo, una infección por MRSA o una infección por hongos tal como C. albicans. También pueden aplicarse tópicamente mediante pulverización, por ejemplo, sobre las hojas de plantas con una infección fúngica tal como el mildiu polvoriento. Una vez en la superficie, las propiedades desinfectantes del complejo de iones de cobre pueden permanecer efectivas durante un período de tiempo considerable.
Los complejos de cobre-amonio solubilizados en ácido también pueden aplicarse a las superficies, por ejemplo ya sea por rociado o por aplicación con un paño, e inesperadamente puede ser efectivo contra múltiples microbios patógenos diferentes simultáneamente y puede proporcionar protección contra infecciones y reinfecciones con tales microbios. Una vez en la superficie, las propiedades desinfectantes del complejo de iones de cobre pueden permanecer efectivas durante un tiempo considerable.
Los presentes complejos de cobre-amonio solubilizados en ácido y los sustratos impregnados con ellos pueden proporcionar una inhibición muy efectiva del crecimiento de los microbios patógenos hasta ahora difíciles de tratar con fármacos convencionales y/o regímenes desinfectantes convencionales. Sorprendentemente, esta inhibición del crecimiento de microbios patógenos puede darse a concentraciones que no son tóxicas para las células de la piel humana.
Las composiciones de cobre-amonio solubilizadas en ácido pueden estar en formulaciones tópicas como cremas, geles, soluciones en aerosol, soluciones de irrigación y apósitos impregnados que pueden ser para aplicación sobre la piel y superficies mucosas, hojas de plantas y superficies de trabajo en hogares, hospitales, fábricas, vehículos, etc.
Las composiciones de cobre-amonio y cobre-zinc-amonio solubilizadas en ácido se preparan convenientemente de acuerdo con el procedimiento general que se describe más abajo. Las modalidades de la presente invención descritas ejemplifican ciertas composiciones preferidas; sin embargo, estos. los ejemplos no pretenden limitar el alcance de la invención.
El siguiente ejemplo de referencia describe el protocolo general para hacer una formulación de complejo de cobreamonio Cu#3 solubilizada en ácido. Todos los productos químicos se obtuvieron de la Compañía Sigma-Aldrich Ltd., The old Brickyard, New Road, Gillingham Dorset SP8 4XT, Reino Unido, o Oxoid Ltd. Wade Road, Basingstoke, Hampshire r G248PW, Reino Unido.
Se adicionaron 16,0 gramos de sulfato de cobre pentahidratado a 80 mililitros de agua destilada en un vaso de precipitados de vidrio mediante el uso de un agitador magnético y una barra agitadora con agitación vigorosa para formar una solución azul transparente. Se adicionaron 4,0 gramos de carbonato de amonio a la solución de sulfato de cobre en cantidades de 0,5 a 1 gramo debido a la vigorosa evolución de dióxido de carbono que se dejó reposar entre adiciones de alícuotas de carbonato de amonio. Se formó un complejo de cobre-amonio insoluble de color azul pálido durante la adición del carbonato de amonio a la solución de sulfito de cobre y se mantuvo en suspensión con agitación vigorosa. 10,0 mililitros de ácido fosfórico. (solución al 85 %) se adicionó gradualmente con la evolución del dióxido de carbono y la solubilización del complejo cobre-amonio. Debe adicionarse suficiente ácido para solubilizar completamente el complejo de cobre y amonio y controlar el pH de la solución. La solución transparente de color azul brillante resultante se agitó vigorosamente durante otros 5 minutos y luego se completa hasta un volumen final de 100 mililitros con agua destilada.
Se prefiere que la concentración elemental de cobre en las composiciones sea del orden de 1 a 10 gramos/decilitro preferentemente de 3 a 7 gramos/decilitro, con mayor preferencia de 3,5 a 5 gramos/decilitro, siendo la fase solvente, agua destilada o desionizada
Para ver ejemplos de otras formulaciones de complejos de cobre y amonio solubilizados en ácido basadas en este protocolo, ver la Tabla 1 más abajo. En la Tabla, gramo o gramos se abrevia con la letra g y el mililitro o mililitros se abrevia con las letras ml.
Tabla 1. Ejemplos de referencia de composiciones complejas de cobre-amonio solubilizadas en ácido (Cu#)
Ingredientes adicionados por decilitros de agua destilada Composición CuSO4.5H:0 (NH4)2C03 Ácido
Figure imgf000005_0001
u , g 1.5 g 1,0 mL H 2 SO 4 (37 %) Cu# 13 CuCl;.2H:0 10,7 g* 3,0 g 2 mL H 2 SO 4 (37%) Cu# 16 15,0 g** NH 4 HCO 3 6,0 g 8,0 g H 3 PO 3
NH
Cu#27 4 OH (solución
15,0 2,4 g H mL 3 PO 10%) 2,0 3
*Las cantidades indicadas producen una solución madre de aproximadamente 4,0 gramos/decilitro o
**3,75 gramos/decilitro de cobre elemental.
El siguiente ejemplo describe el protocolo general para hacer la formulación de cobre-zinc-amonio solubilizada en ácido Cu-Zn#10.
Se adicionaron 6,0 granos de sulfato de cobre pentahidratado a 80 mililitros de agua destilada en un vaso de precipitados mediante el uso de un agitador magnético y una barra de agitación con una mezcla vigorosa para formar una solución azul querida. Se adicionaron 6,6 gramos de sulfato de zinc heptahidratado a la solución de sulfato de cobre y se agitó hasta que se disolvió. Se adicionaron gota a gota 2,0 mililitros de hidróxido de amonio (solución al 10 %) a la solución de sulfato de cobre/sulfato de zinc. Se formó un complejo de cobre-zinc-amonio insoluble de color azul pálido durante la adición de la solución de hidróxido de amonio a la solución de sulfato de cobre/sulfato de zinc y se mantuvo en suspensión con agitación vigorosa. Se adicionaron gradualmente 4,0 gramos de ácido fosforoso en aproximadamente alícuotas de 0,5 g para solubilizar el complejo cobre-zinc-amonio. Se debe adicionar suficiente ácido para solubilizar completamente el complejo cobre-zinc-amonio y controlar el pH de la solución. La solución transparente de color azul pálido resultante se agitó vigorosamente durante 5 minutos más y luego se completó hasta un volumen final de 100 mililitros con agua destilada.
Se prefiere que la concentración elemental de cobre, y el zinc en las composiciones sea del orden 1:1 donde la fase solvente es agua destilada o desionizada.
Para otras formulaciones de cobre-zinc-amonio solubilizado en ácido basadas en este protocolo, consulte la Tabla 2. En la Tat:4e, gramo o gramos se abrevia con la letra g y mililitros se abrevia como ml.
Tabla 2. Ejemplos de composiciones de cobre-zinc solubilizados en ácido (Cu-Zn#). Las composiciones Cu-Zn#2-5 son ejemplos de referencia
Ingredientes adicionados por dL de agua destilada
uSO4.5H:0 ZnS04.7H:0
Figure imgf000006_0001
(NH^COj Acido
6,0 g* 6,6 g* 2,0 g 3,0mi IK K -18 M)
6,0 g 2,2 g
Figure imgf000006_0002
2,0 g 3 , 0 mi HCK18M)
,
6,0 g 1,0 g
Figure imgf000006_0004
2,0 g 13,0 mi IK K - 18 M)
2,0 g 6,6 g
Figure imgf000006_0005
2,0 g 3,0 mi HQ (‘ 18 M)
1,0 g 6,6 g 2,0 g i 3,0 mi MCI (-18 VI)
6,0 g 6,6 g 0 g J____ 5 _ , _ 0 _ g ___ H _ 3
_ P _ O _ 3
____ (solución
Figure imgf000006_0003
6,0 g 6,6 g
Figure imgf000006_0006
2,0 mi 5,0 g HjPOj
*Las cantidades indicadas producen una solución madre de aproximadamente 1,5 gramos/decilitro tanto de cobre elemental como de zinc elemental.
Los métodos para preparar el gel a base de aloe vera de la presente invención se describen en la presente descripción, con ejemplos proporcionados.
Ejemplo 1. Espolvorear 1,0 gramo de goma xantana en 150 mililitros de agua destilada a alrededor de 60 °C en un vaso de precipitados de vidrio de borosilicato de 300 mililitros y mezclar vigorosamente con un mezclador durante 30 segundos para formar una solución suave y burbujeante. Espolvorear 1,0 gramo de polvo de Aloe vera sobre la solución de goma xantana y volver a mezclar vigorosamente durante 30 segundos o hasta que el polvo de aloe vera se disuelva por completo en la solución, adicionar agua destilada a temperatura ambiente hasta un volumen final de 200 mililitros, almacenar el gel a 4 °C y usarlo dentro de un plazo de un mes. Este gel fue usado para diluir las composiciones de cobre y cobre/zinc en las pruebas antibacterianas en placa de agar. Si el gel se va a usar con fines cosméticos y/o se almacenará a temperatura ambiente, luego se deben adicionar conservantes antimicrobianos. Estos pueden incluir, por ejemplo, ácido mandélico, glicerol, sorbato de potasio, fenoxietanol, benzoato de sodio. Una combinación efectiva es el sorbato de potasio (KS) y el benzoato de sodio (NaB). Se prepararon soluciones madre separadas de 10,0 % peso/volumen de KS y NaB y se adicionó 2,0 mililitro de cada producto a la solución de goma xantana-Aloe vera descrita anteriormente mezclando vigorosamente, y luego se adicionó agua destilada a temperatura ambiente hasta un volumen final de 200 mililitros, de cobre-amonio solubilizado en ácido o se diluyeron composiciones de complejo de cobre-zinc-amonio, por ejemplo, 1:100 vol/vol en este gel.
Ejemplo 2. En un vaso de precipitados pesado, mezclar gradualmente 3,0 gramos de goma xantana en alícuotas de ~1 gramo en 3 gramos de glicerol a temperatura ambiente (alrededor de 20 °C) hasta que se forme una pasta suave y homogénea. Volver a pesar el vaso de precipitados y su contenido. Adicionar gradualmente 5 gramos de la mezcla de glicerol-goma xantana (debe quedar 1 gramo de la mezcla en el vaso de precipitados) a 400 mililitros de agua destilada a alrededor 60 °C en un vaso de vidrio de borosilicato de 800 mililitros mientras mezcla vigorosamente hasta que se forme una solución transparente y burbujeante, espolvoree 2,5 gramos de polvo de aloe vera sobre la solución y continúe mezclando hasta que el polvo de aloe vera se disuelva por completo en la solución. Los conservantes antimicrobianos (por ejemplo, 5,0 mililitros de las soluciones madre al 10 % de KS y NaB como se describe anteriormente) pueden adicionarse en esta etapa mezclando antes de adicionar agua destilada a temperatura ambiente hasta un volumen final de 500 mililitros.
Para que la presente invención pueda ser ilustrada, más fácilmente apreciada y puesta en práctica por los expertos en la técnica, ahora se presentarán sus modalidades por medio de ejemplos no limitantes únicamente y se describirán con referencia a las figuras adjuntos.
Ejemplo 1. Prueba en placa de agar para el efecto antibacteriano de composiciones seleccionadas sobre bacterias.
La cepa de Staphylococcus aureus (S1) aislada de la piel de un paciente con eccema se cultivó en agar triptona-soja (TSA) y un solo colon) se cultivó en medio RPMI-1640 a 37 °C durante toda la noche. El cultivo de S1 (S. aureus) se diluyó 1:10 con medio RPMI-1640 fresco y 0,2 mililitros se esparció en una placa de Petri de 9 centímetros que contenía TSA y se dejó reposar. La cepa Propionibacterium acnes ATCC 11828 (P. acnes) se cultivó en caldo de infusión cerebro-corazón con glucosa al 1 % (BHI) a 37 °C durante 72 horas en condiciones anaeróbicas mediante el uso de una muestra de 0,2 mililitros del cultivo de P. acnes se esparció en una placa de Petri de 9 centímetros que contenía agar BHI y se dejó secar;
La composición a ensayar se diluyó con agua destilada y se colocaron 5 microlitros en un disco de papel de filtro de 5 milímetros o se adicionó a la base de Aloe vera (sin conservantes) descrita anteriormente en varias concentraciones y se colocó una gota de 5 microlitros en el superficie de agar. Luego, las placas se incubaron a 37 °C durante 24 horas (en condiciones anaerobias para P. acnes), cuando se midieron las zonas de inhibición (Zol) (en milímetros) dos veces en un ángulo de 90° mediante el uso de una regla y se calculó el diámetro promedio (D). El área de inhibición en mm2 (Aol) se calculó mediante el uso de Aol = n x (D/2)2
Resultados:
1. Los resultados en la Figura 1 comparan los efectos del sulfato de cobre y la composición Cu#1 disuelta en gel sobre el crecimiento de la cepa bacteriana S1 (S. aureus) en TSA. Está claro que la composición Cu#1 es aproximadamente 4 veces más potente que el sulfato de cobre para inhibir el crecimiento de S1 (S. aureus), ya que el sulfato de cobre a 800 microgramos/mililitro y la composición Cu#1 a 200 microgramos/mililitro tienen el mismo Aol (28 mm2). Los resultados muestran que las composiciones de complejos de cobre y amonio solubilizados en ácido son sorprendentemente más antimicrobianas que el sulfato de cobre solo.
2. Los resultados en la Figura 2 comparan los efectos del sulfato de zinc solo y combinado con la composición Cu#1 disuelto en gel sobre el crecimiento de la cepa bacteriana S1. (S. aureus) en TSA. El sulfato de zinc solo no tuvo efecto sobre el crecimiento de S1 (S. aureus) a cualquier concentración probada (50-200 microgramos/mililitro). Por el contrario, cuando se combinó la composición Cu#1 (100 microgramos/mililitro) con concentraciones crecientes de sulfato de zinc, hubo un claro efecto sinérgico inhibidor del crecimiento de S1 (S. aureus). Así, la composición de Cu#1 sola tenía un Aol de 3 mm2, pero esto aumentó a 13, 20 y 28 mm2 cuando se combina con sulfato de zinc en concentraciones de 50, 100 y 200 microgramos/mililitro, respectivamente. Estos resultados muestran sorprendentemente que los complejos antimicrobianos de cobre y amonio solubilizados en ácido pueden actuar sinérgicamente con el sulfato de zinc el cual solo no tiene actividad antimicrobiana contra la cepa S1 (S. aureus). Estos resultados sugieren que los complejos de cobre-zinc-amonio solubilizados en ácido pueden tener una actividad antimicrobiana ventajosa contra ciertos organismos.
3. La Figura 3 muestra el efecto de dos composiciones, Cu#9 y Cu#10 (200 microgramos/mililitro) en gel, solo y combinado con sulfato de zinc 000 microgramos/mililitro) en gel sobre el crecimiento de S1 (S. aureus). Los resultados muestran que el gel solo y el sulfato de zinc en gel no tienen efecto sobre el crecimiento de S1 (S. aureus). Las composiciones Cu#9 y Cu#10 en gel solas inhibieron el crecimiento de S1 (S. aureus) con un Aol de 20 y 33 mm2, respectivamente. Por el contrario, cuando se combinaron con sulfato de zinc en gel, las composiciones Cu#9 y Cu#10 mostraron una mayor inhibición del crecimiento de S1 (S. aureus) con Aol de 38 y 57 mm2-, respectivamente. Estos resultados confirman y extienden los mostrados en la Figura 2, demostrando que existe un claro efecto inhibidor sinérgico sobre el crecimiento de la cepa S1 (S. aureus) entre complejos de cobre-amonio solubilizados en ácido y sulfato de zinc.4
4. La Tabla 3 muestra el efecto del sulfato de cobre, los diferentes complejos de cobre-amonio solubilizados en ácido y un complejo de cobre-zinc-amonio solubilizado en ácido sobre el crecimiento de P. acnes en agar BHI como se describió en la sección de métodos anterior. Todas las soluciones madre de complejos de cobre-amonio solubilizados en ácido se diluyeron 1:200 (vol/vol) y también se preparó una solución de sulfato de cobre de la misma concentración de cobre elemental (200 microgramos/mililitro). La solución madre de composición Cu-Zn#1 (ver Tabla 2) también se diluyó 1:200 para la prueba. Todas las diluciones fueron en agua destilada.
Tabla 3. El efecto del sulfato de cobre y varias composiciones (descritas en las Tablas 1 y 2) sobre el crecimiento de P. acnes en agar BHI. No hubo correlación entre la actividad antibacteriana y el pH de las composiciones.
Figure imgf000008_0001
El resultado en la Tabla 3 muestra que todos los complejos de cobre-amonio solubilizados en ácido fueron más inhibidores del crecimiento de P. acnés que una concentración equivalente de cobre elemental en forma de sulfato de cobre. Aunque las ZoI para las cinco composiciones de Cu# probadas fueron similares, las formulaciones de las composiciones fueron bastante diferentes, como se muestra en la Tabla 1, Cu#3, Cu#9 y Cu#13 tenían el mismo Zol pero diferían en el ácido usado para solubilizar el complejo de cobre y amonio (ácidos fosfórico, clorhídrico y sulfúrico, respectivamente) y Cu#13 comprende cloruro de cobre en lugar de sulfato de cobre, Cu#12 (sulfato de cobre y ácido sulfúrico) tuvo el mayor ZoI contra P. acnes pero difiere solo en la sal de cobre usada en la composición de Cu#13 (ver Tabla 1).
Dado que las composiciones de cobre-amonio y cobre-zinc-amonio se solubilizan en ácidos, podría sugerirse que la acidez de las composiciones es responsable de su mayor actividad antimicrobiana en comparación con el sulfato de cobre. Sin embargo, como se muestra en la Tabla 3, la solución madre de Cu#10 tiene un pH más alto que una solución equivalente de sulfato de cobre y, sin embargo, tiene un mayor efecto inhibidor sobre el crecimiento de P. acnes. Además, una prueba de correlación de Spearman no paramétrica entre los ZoI y los pH del compuesto/Composiciones que se muestran en la Tabla 3 arrojó un coeficiente de correlación de -0,056 con p= 0,81 (mediante el uso del paquete de estadísticas Prism 6 de GraphPad Software en La Jolla, California), mostrando que no existe una correlación significativa entre el pH y la actividad antimicrobiana para las composiciones ensayadas en este experimento.
Curiosamente, la composición Cu-Zn#1 fue una de las composiciones más inhibidoras a pesar de tener solo el 37,5 % del cobre elemental de las composiciones de Cu#, pero junto con una concentración equimolar de zinc elemental (1,5 gramos/decilitro en solución madre). La impresionante actividad de Cu-Zn#1 respalda las conclusiones de los resultados presentados en las Figuras 2 y 3, que existe una sinergia entre los iones de cobre y zinc y muestra que este complejo de cobre-zinc-amonio solubilizado en ácido demuestra un efecto inhibidor mayor de lo esperado contra P. acnes. Estos resultados también sugieren esa composición. La Cu-Zn#1 puede tener valor terapéutico en el tratamiento del acné, una enfermedad fuertemente asociada a P. acnes. Además, dado que se sabe que P. acnes no crece bien a pH 4.5-5, que es el intervalo de pH "normal" de la piel, el complejo de cobre-zinc-amonio Cu-Zn#1 solubilizado en ácido puede ser de valor terapéutico en el tratamiento del acné ya que inhibe fuertemente el crecimiento de P.acnes y los valores de pH de una formulación al 1 % (vol/vol) de Cu-Zn#l en el gel con conservantes es de pH alrededor de 4,6.
Ejemplo 2, Cultivos bacterianos en microplaca.
Las cepas bacterianas aeróbicas Acinetobacter Baumannii (A. baumannii), resistente a la meticilina Staphylococcus aureus (MRSA) y Klebsiella pneumoniae (K. pneumoniae) fueron aislados de hisopos tomados en una sala de hospital. Escherichia coli (NCTC 9001; E. coli) es un aislado clínico de la vejiga urinaria de un paciente; todas las cepas se cultivaron en RPMI-1640. Las soluciones madre de los compuestos/composiciones a ensayar se diluyeron de manera que las diluciones dobles en los ensayos de microplacas comenzaron a una concentración de 1 % vol/vol. Se prepararon diluciones dobles de las composiciones a ensayar en RPM1-1640 en una placa de cultivo de tejidos 96-Avell. Los cultivos bacterianos se diluyeron 1:40 con RPMI recién preparado y se adicionaron a las composiciones. P. acnes se cultivó como se describe en el Ejemplo 1 (métodos de ensayo en placa de agar) y se diluyó una muestra 1:100 con BHI fresco. Se prepararon diluciones dobles de las composiciones a ensayar como se describió anteriormente en agua destilada en una placa de cultivo de tejidos de 96 pocillos (100 microlitros) y se adicionaron 100 microlitros del cultivo diluido de P. acnes. Luego, las placas se incubaron a 37 °C durante 24 horas (en condiciones anaerobias para P. acnes). La concentración inhibitoria mínima (MIC) de las composiciones se definió como la concentración más baja a la que no se observó crecimiento bacteriano visible.
Resultados
1. La Tabla 4 muestra los resultados de MIC para el sulfato de cobre, sulfato de zinc y varias composiciones descritas en las Tablas 1 y 2. En el Experimento #1, las dos composiciones basadas en cobre probadas (Cu#3 y Cu#9) fueron dos veces tan activo como el sulfato de cobre. Sorprendentemente, el sulfato de zinc tuvo una MIC más baja con P. acnes que cualquiera de los productos a base de Cu y la formulación de cobre-zinc-amonio solubilizado en ácido Cu-Zn#1 fue la composición más activa probada. La Cu-Zn#3 que tiene la misma cantidad de cobre elemental que la Cu-Zn#1 pero 6 veces menos zinc elemental (ver Tabla 2) fue 4 veces menos activa que Cu-Zn#1.
Tabla 4. El efecto del sulfato de cobre y el sulfato de zinc y varias composiciones (descritas en las Tablas 1 y 2) sobre el crecimiento de P. acnes en cultivos bacterianos en microplaca.
Figure imgf000009_0001
En el Experimento #2, las MIC para sulfato de cobre y Cu #3 con P. acnes eran el doble de los observados en el primer experimento, pero la Cu#3 aún fue el doble de activa. Las Cu#12 y Cu#13 tenían el mismo MIC que la Cu#3. A pesar de comprender ácido sulfúrico en lugar del ácido fosfórico en Cu#3; la Cu#13 comprendía cloruro de cobre en lugar de sulfato de cobre en las Cu#3 y Cu#12. Estos resultados indican que los complejos de cobre-amonio solubilizados en ácido son generalmente más activos que el sulfato de cobre solo. Como en el Experimento #1, la Cu-Zn#1 fue la composición más activa contra el crecimiento de P. acnes y nuevamente fue 4 veces más activa que la Cu-Zn#3.
En general, estos experimentos confirman y extienden resultados de la prueba en la placa de agar- descritos anteriormente, y se muestra en la Tabla 3. Los resultados confirman -que las composiciones de cobre-amonio solubilizadas en ácido son más activas que el sulfato de cobre solo. Los presentes resultados mostraron sorprendentemente que el sulfato de zinc inhibe el crecimiento de P. acnes y que la Cu-Zn#1 era considerablemente más activa que cualquiera de las composiciones de Cu#, a pesar de contener solo el 37,5 % del cobre elemental. Los resultados muestran que la combinación equimolar de zinc elemental y cobre en composición Cu-Z.n#1 es más activa que el sulfato de zinc solo y aún más activo que la Cu-Zn#3 -que contiene 6 veces menos zinc elemental en comparación con el cobre. En general los resultados de estos experimentos confirman que la Cu-Zn#1 puede tener un beneficio terapéutico en el acné.2
2. La Tabla 5 muestra los resultados de la MIC para las composiciones de Cu-Zn #1 a #5 que tienen proporciones variables de cobre y zinc elementales, mientras que las cantidades de carbonato de amonio usadas para fabricar los complejos de Cu-Zn y la cantidad de ácido clorhídrico usado para solubilizar los complejos Cu-Zn permanecieron constantes (ver Tabla 2). En este experimento, la composición Cu#3 (usada como referencia entre experimentos) tenía una MIC = 50 microgramos/mililitro al igual que el sulfato de zinc. Al igual que en los experimentos anteriores, la composición Cu-Zn#1: fue 4 veces más activa contra el crecimiento de P. acnes que Cu-Zn#3 y en este experimento Cu-Zn#2, Cu-Zn#4 y #5 fueron igualmente la mitad de activos que Cu-Zn$2 y #3 y 8 veces menos activos que Cu-Z n # ! Estos resultados muestran esa composición Cu-Zn#1 que comprende cobre elemental equimolar y zinc es la composición más activa contra el crecimiento de P. acnes de todos los probados. Los resultados con Cu-Zn#2 y #3 sugieren que el papel del cobre frente al crecimiento de P. acnes es algo mayor que la del zinc, pero la sorprendente sinergia de los dos metales juntos cuando están en equivalencia equimolar (Cu-Zn#1) crea, por mucho, la composición más efectiva contra el crecimiento de P. acnes.
Tabla 5. El efecto de varias composiciones de Cu-Zn#, Cu#3 y sulfato de zinc en el crecimiento de P. acnes en cultivos bacterianos en microplacas.
Figure imgf000010_0001
3. La Tabla 6 muestra los resultados de la MIC de sulfato de cobre y varias composiciones de Cu# y Cu-Zn# contra el crecimiento de MRSA, E. coli, A. baumannii y K. pneumoniae en cultivos en microplacas. SARM y A. Baumanni son claramente más sensibles a los efectos de las composiciones de sulfato de cobre y Cu-Zn# que E. coli y K. pneumoniae con A. Baumanni que es sorprendentemente sensible al efecto inhibidor de las composiciones de Cu-Zn#. Ya que A. Baumanni es una bacteria particularmente persistente que causa infecciones adquiridas en el cuidado de la salud (HAI), la limpieza y/o nebulización con la composición Cu-Zn#1 puede ser particularmente útil para liberar a los hospitales y otras instalaciones del cuidado de la salud de este problema cada vez más frecuente y difícil de tratar. Microbio.
Tabla 6. El efecto del sulfato de cobre y varias composiciones de Cu# y Cu-Zn# (descritas en las Tablas 1 y 2) sobre el crecimiento de MRSA, E. coli., A. baumannii y K. pneumoniae en cultivos bacterianos en microplaca. NT = No probado.
Figure imgf000010_0002
MRSA y E. coli fueron más sensibles a los efectos inhibidores del crecimiento de las composiciones de Cu# que las composiciones de Cu-Zn# y el sulfato de cobre, mientras que lo contrario fue cierto para A. Baumannii y K.
pneumoniae, sin embargo, E. coli fue generalmente alrededor de 8 veces menos sensible a todas las composiciones ensayadas que MRSA.
Se notó que ciertas composiciones hechas con carbonato de amonio o hidrogenocarbonato de amonio y mediante el uso de ácido acético (Cu#10) y ácido cítrico (Cu#11; no se muestra en la Tabla 1 ni se probó porque la precipitación se notó después de 24 horas) comenzaron a precipitar a los pocos días de la preparación. Se prepararon composiciones muy similares mediante el uso de hidróxido de amonio y estas composiciones (Cu#10a y Cu#11a) demostraron ser sorprendentemente más estables y no mostraron signos de precipitación después de meses de preparación (almacenamiento a temperatura ambiente). Se prepararon tres composiciones mediante el uso de hidróxido de amonio (ver la Tabla 1 para más detalles) y se probaron MRSA, A. Baumannii y E. coli como se muestra en la parte inferior de la Tabla 6, Cu#3 es una composición estable y Cu#3a fue igualmente estable y activo contra las tres cepas bacterianas probadas. La Cu10a mostró una actividad similar a Cu#10, y Cu#11a con ácido cítrico fue tan activa como las otras composiciones de Cu#. Estas (y otras composiciones preparadas con hidróxido de amonio, ver más abajo) no solo son más estables, sino que son más rápidas y fáciles de fabricar porque no se libera dióxido de carbono y los complejos de Cu-/Cu-Zn-amonio que se forman con hidróxido de amonio requieren menos ácido para la solubilización, por lo que el pH de las composiciones puede ser más bajo, lo que representa ventajas en sus formulaciones.
MRSA es quizás la bacteria patógena más conocida y problemática que causa HAI, pero la cepa USA300 MRSA también se ha convertido en una preocupación creciente en las infecciones asociadas con la comunidad, particularmente de la piel K. pneumoniae resistente a los carbapenémicos (CRKP) ha surgido en los últimos 10 años para convertirse en un patógeno nosocomial mundial que es casi totalmente resistente a los medicamentos. Sin embargo, la sensibilidad, de las cepas bacterianas probadas, a las composiciones de Cu# y Cu-Zn# (Tabla 6), sugiere que estas composiciones pueden ser útiles para la limpieza, nebulización y similares en hospitales, hogares y otros edificios para eliminar estos organismos ya que A. Baumannii también es bastante sensible a las composiciones de Cu#. La Cu#3 puede ser una composición particularmente efectiva para la limpieza y desinfección para eliminar estos microbios patógenos de los edificios.
Ejemplo 3. Ensayo de citotoxicidad con una línea celular de piel epitelial escamosa humana (A-431).
Se cultivó A-431 (ATCC) en medio RPMI-1640 complementado con suero fetal bovino al 10 % y L-glutamina 2 mM (medio completo) en incubadora humidificada a 37 °C con CO2 al 5 % en atmósfera de aire. Para los experimentos de citotoxicidad, las células se tripsinizaron, lavaron, contaron y se sembraron 2 x 104 las células en pocillos de placas de 96 pocillos de fondo plano en medio completo y se cultivaron durante 3 días hasta que se formó una monocapa confluente. Los productos probados fueron: (i) sulfato de cobre, Cu#9, Cu#10 y Cu-Zn#1 como se muestra en la Figura 4, y (ii) composiciones Cu#9 y (Cu-Zn#1 diluidas en el gel de Aloe vera con conservantes junto con dos cremas comerciales para el acné: CLEARASIL® (una marca registrada de Reckitt Benckiser LLC de Berkshire Inglaterra) gel de tratamiento de acción ultrarrápida con 2 % de ácido salicílico y CLEARASIL® (una marca registrada de Reckitt Benckiser LLC de Berkshire Inglaterra) crema de tratamiento diario para el acné con 10 % de peróxido de benzoilo como se muestra en la figura 5. Todos los productos de prueba se diluyeron en medio completo y luego se adicionaron por triplicado a las células A-431 confluentes que luego se cultivaron durante 24 horas más cuando se evaluó cuantitativamente la citotoxicidad/supervivencia celular mediante el uso del ensayo de sulforhodamina B (SRB) como se describe más abajo.
Las células se lavaron dos veces con medio RPMI-1640 y luego se fijaron con ácido tricloroacético al 10 % durante 1 hora a 4 °C. Después de lavar dos veces con agua corriente, las células se tiñeron con SRB (SRB al 0,4 % p/v en ácido acético al 1 %) durante 30 min a temperatura ambiente. Después de lavar dos veces con agua del grifo, la mancha restante se disolvió en base Tris 10 mM y se midió la absorbancia de los pocillos en un lector de ELISA Dynatech Muitiplate a 540 nm. El por ciento de supervivencia celular se calculó dividiendo la absorbancia del producto de prueba por la absorbancia de control y multiplicando por 100.
Resultados
La Figura 4 muestra que el sulfato de cobre y las composiciones Cu#9 y #10 tenían perfiles de citotoxicidad casi idénticos con células de piel humana con una concentración citotóxica del 50 % (CC50) de 50 microgramos/mililitro, lo que sugiere que los iones de cobre son responsables de los efectos citotóxicos de los tres productos. La composición Cu-Zn#1 fue ligeramente más citotóxica que los otros tres productos (CC50 = 30 microgramos/mililitro), presumiblemente debido a la presencia de iones de cobre y zinc, aunque las concentraciones de cobre elemental son solo el 37,5 % de los otros tres productos, lo que sugiere que los iones de zinc son incluso más citotóxicos que los iones de cobre para las células de la piel humana y/o potencian la citotoxicidad de los iones de cobre.
Es importante destacar que estos resultados muestran que las composiciones descritas en la presente descripción, tales como Cu#3, #3a, #9, #10, #11a, #12, #13 y Cu-Zn#1 y #3, pueden inhibir el crecimiento de bacterias como MrSA. y A. baumannii en concentraciones (MIC 1,6 - 6,3 microgramos/mililitros; consulte la Tabla 6) más abajo de las que causan citotoxicidad para las células de la piel humana en cultivo (alrededor de 30 microgramos/mililitros). La Cu-Zn#1 también inhibe el crecimiento de P. acnes con una MIC=12,5 microgramos/mililitro (Tabla 4) concentración que no es citotóxico para las células de la piel humana.
La Figura 5 muestra los efectos del gel que contiene 1 % vol/vol de composiciones. La Cu#9 (400 microgramos/mililitro de cobre elemental) y Cu-Zn#1 (150 microgramos/litro de cobre elemental y zinc) y dos productos CLEARASIL® disponibles comercialmente (una marca registrada de Reckitt Benckiser LLC de Berkshire Inglaterra), uno que contenía peróxido de benzoilo al 10 % y el otro que contenía ácido salicílico al 2 % como ingredientes activos, produjo perfiles de citotoxicidad similares con valores de CC50 de 0,02 % y 0,05 %, respectivamente, y 100 % de citotoxicidad-(0 % de supervivencia celular) en concentraciones alrededor de 0,5 % y superiores. El gel que contiene 1 % de composición Cu-Zn#1, que sería la composición preferida para el tratamiento del acné, tuvo un CC50 del 4 %, mientras que el gel que contenía el 1 % de la composición Cu#9 no alcanzó una CC50 incluso al 10 % vol/vol en el ensayo. Estos valores de CC50 de la formulación de gel son compatibles con los valores de CC50 obtenidos con las composiciones solas (véase la figura 4). Por lo tanto, está claro que los productos CLEARASIL® (una marca registrada de Reckitt Benckiser LLC, de Berkshire, Inglaterra) son alrededor de unas 200 veces más tóxicos para las células de la piel humana que cualquiera de las formulaciones de gel.
Es importante tener en cuenta que debido a la relativa simplicidad de los cultivos de células de la piel en comparación con la compleja estructura de la piel, las implicaciones para la salud deben interpretarse con cuidado y estos resultados in vitro pueden no traducirse en diferencias clínicas. No obstante, parece que los ingredientes activos de los productos CLEARASIL® (una marca registrada de Reckitt Benckiser LLC de Berkshire Inglaterra), ácido salicílico y peróxido de benzoilo, que son ampliamente usados en productos de tratamiento para el acné, son particularmente tóxicos para las células de la piel que pueden estar más expuestas en la piel de las personas: que sufren de acné. Así, el gel con la formulación Cu-Zn#1 puede ser menos dañino para la piel de los que sufren de acné, mientras que es altamente activo en contra de P. acnes, la bacteria asociada con el acné (véanse los Ejemplos 1 y 2).
Ejemplo 4. Ensayos antifúngicos con hongos fitopatógenos.
Chalara fraxinea aislada 196/28 (C. fraxinea), Aspergillus niger (A. niger) y una cepa aislada de mildiu polvoriento (Pm; aislada de una hoja de manzano) se cultivaron en papa dextrosa agar (PDA) a temperatura ambiente (alrededor de 22 °C). Para evaluar los efectos de las composiciones sobre el crecimiento fúngico, se colocaron 10 microlitros de las composiciones de ensayo diluidas en agua destilada estéril en los pocillos de una placa de cultivo de tejidos de 12 pocillos y se adicionó con una pipeta 1 mililitro o PDA: a cada pocillo. La placa se agitó para distribuir uniformemente la composición de la prueba a través del agar (agua destilada sola fue usada como control) y luego se dejó que el agar cuajara. Tapones de agar que contienen hifas fúngicas (3 mm2) de un cultivo fúngico establecido se cortaron cuidadosamente con un bisturí y se insertaron en orificios en el centro del agar en cada pocillo de la placa de 12 pocillos que luego se cultivó a temperatura ambiente (alrededor de 22 °C), dado que la velocidad de crecimiento fúngico varía en dependencia de la cepa, los experimentos se evaluaron después de 3 días para Pm, y se encendieron intervalos apropiados de 3-4 días para A. niger y alrededor de 7 días para C. fraxinea. Para evaluar el efecto de composiciones sobre el crecimiento fúngico el diámetro de las hifas fúngicas se midió dos veces a un ángulo de 90o mediante el uso de una regla y se calculó el diámetro promedio en milímetros. Si no se podía detectar crecimiento fúngico a simple vista, los cultivos se observaban mediante microscopía de fase (40X) para confirmar que no había crecimiento (NG) a juzgar por el examen visual.
Resultados
1. La Tabla 7 muestra los efectos del sulfato de cobre y su composición Cu#16 en el crecimiento de C. fraxinea. La composición Cu#16 inhibió fuertemente el crecimiento fúngico a una concentración de 125 microgramos/mililitro en ambos puntos de tiempo y fue alrededor de 30 veces más inhibidor para el crecimiento de los hongos que el sulfato de cobre (los resultados con 3,75 microgramos/mililitro de Cu#16 fueron muy similares a los de 125 microgramos/mililitro de sulfato de cobre), presumiblemente debido -a la solubilización del complejo cobre-amonio en Cu#16 en ácido fosforoso (ver Tabla 1), que se sabe que tiene actividad antifúngica.
Tabla 7. Los efectos del sulfato de cobre y la composición Cu#16 sobre el crecimiento de C. fraxinea en PDA. *Leve crecimiento observado por microscopía de fase a aumento de 40X, ** 20 milímetros es el ancho de los pocillos y representa el crecimiento fúngico confluente.
D iám etro de crecim iento fungico (m m )
C u S C M u g /m l) D ía 7 D ía 15
j 125 | 10 [ 18
Figure imgf000013_0001
37,5 7 io |
1 12,5 9 15
3,75 r ío i ^ 1
C ontro l 14 20 j
—————————— — —— ................... J
2. La Tabla 8 muestra los efectos de las composiciones Cu-Zn#1 y Cu-Zn#7 sobre el crecimiento de C. fraxinea. La composición Cu-Zn#1 es menos efectiva que la composición Cu-Zn#7 en la inhibición del crecimiento de C. fraxinea y aunque las formulaciones de las dos composiciones son muy similares (Tabla 2), la composición Cu-Zn#7 contiene ácido fosforoso como ácido solubilizante de cobre-zinc mientras que la Cu-Zn#1 contiene ácido clorhídrico. Se sabe que el ácido fosforoso tiene actividad antifúngica y su uso en la composición Cu-Zn#7 da como resultado una composición antifúngica que es de 3 a 10 veces más activa que Cu-Zn#1 en los días 7 y 14 del ensayo, respectivamente.
Una concentración del 1 % de la Cu-Zn#7 contiene 150 microgramos/mililitro de cobre elemental, por lo que comparar los efectos de la Cu-Zn#7 con los del sulfato de cobre y Cu#16 en la Tabla 7 indica que la Cu-Zn#7 es un inhibidor ligeramente menos efectivo del crecimiento de C. fraxinea que el Cu#16, pero es considerablemente más efectivo que el sulfato de cobre.
Tabla 8. Efecto de las composiciones Cu-Zn#1 y Cu-Zn#7 sobre el crecimiento de C. fraxinea en PDA, las composiciones de Cu-Zn# se usaron como una dilución de por ciento de las soluciones madre (Tabla 2), por lo que una solución al % contiene 150 pg/ml de cobre elemental (y zinc). *20 milímetros es el ancho de los pocillos y representa el crecimiento fúngico confluente,
Figure imgf000014_0001
3. La Tabla 9 muestra los efectos del sulfato de cobre y la composición Cu#16 sobre el crecimiento de A. niger. La composición Cu#16 inhibió completamente el crecimiento de los hongos a una concentración de 125 microgramos/mililitro y en los tres puntos de tiempo fue de 3 a 10 veces más inhibidora del crecimiento de los hongos que el sulfato de cobre, como se vio con C. fraxinea (Tabla 7).
Tabla 9. Los efectos del sulfato de cobre y la composición Cu#16 en el crecimiento de A. niger en PDA. NG indica que no hay crecimiento según lo evaluado por microscopía de fase con un aumento de 40X.
D iám etro de c rec im ien to fung ico (m m )
C 11SO 4 ( |ig / m i ) D ía 4 D ía 7 D ía 11
125 7 10 15
37,5 13 16 18
12,5 15 17 18
C u#16 (jig /m l )
125 N O NCí NCi
Figure imgf000014_0002
4. La Tabla 10 muestra que ambas composiciones de Cu# que contienen ácido fosforoso fueron más efectivas que el sulfato de cobre para inhibir el crecimiento de Pm. La composición Cu#16 se preparó con hidrogenocarbonato de amonio mientras que la Cu#27 • contiene hidróxido de amonio y como se muestra antes (Tabla 6), esto no supuso una diferencia significativa en la actividad antifúngica de la composición. Sin embargo, se observó precipitación en la composición Cu#16 después de unos días a temperatura ambiente mientras que esto no se observó con Cu#27, lo que sugiere, que el hidróxido de amonio puede ser sorprendentemente ventajoso en la preparación de complejos de cobre-amonio cuando se usa ácido fosforoso para solubilizar el complejo. Las composiciones Cu-Zn#7 y Cu-Zn#10, que son inhibidores del crecimiento igualmente efectivas, difieren en el uso de carbonato de amonio e hidróxido de amonio, respectivamente, para crear los complejos de Cu-Zn-amonio que se solubilizaron con ácido fosforoso en cada caso (Tabla 2). Sin embargo, no se observó precipitación cuando carbonato de amonio fue usado para preparar complejos de Cu-Zn-amonio que se solubilizaron con ácido fosforoso. Sorprendentemente, las composiciones de Cu-Zn# fueron inhibidores más efectivos del crecimiento de Pm que las de composiciones/Cu en términos de contenido de cobre elemental. Así, a una dilución del 1 por ciento (150 microgramos/mililitro de cobre) las composiciones de Cu-Zn# inhibieron completamente el crecimiento, al igual que las composiciones de Cu#, pero a 375 microgramos/mililitro de cobre elemental. A una dilución del 0,3 por ciento (45 microgramos/mililitro de cobre), las composiciones de Cu-Zn# aún inhibían fuertemente el crecimiento de Pm, mientras que a 37,5 microgramos/mililitro, las composiciones de Cu# solo inhibían ligeramente el crecimiento de Pm.
Los cálculos indican que la concentración requerida para inhibir el crecimiento de Pm en un 50 % fue de alrededor de 40 microgramos/mililitro para las composiciones de Cu-Zn# y alrededor de 170 microgramos/mililitro para las composiciones de Cu#. Por lo tanto, estos resultados muestran que las composiciones de Cu-Zn# solubilizadas con ácido fosforoso son sorprendentemente más efectivas que las composiciones de Cu# solubilizadas con ácido fosforoso para inhibir el crecimiento de Pm, independientemente de la sal usada para formar los complejos.
Tabla 10. Los efectos del sulfato de cobre, dos composiciones de Cu# y dos composiciones de Cu-Zn# sobre el crecimiento de Pm en PDA después de 3 días de cultivo. Las composiciones de Cu-Zn# se usaron como una dilución de por ciento de las soluciones madre (Tabla 2), por lo que la solución al 1 % contiene 150 pg/ml de cobre elemental (y zinc). NG indica que no hay crecimiento según lo evaluado por microscopía de fase con un aumento de 40X, *Ligero crecimiento observado por microscopía de fase con un aumento de 40X.
Diámetro del crecimiento ñingico (mm) ....................... "“7 "7—
C om osición 12,5 (pg/ml) 37,5(pg/m l) 125 /ml 3 7 5 /ml
Figure imgf000015_0001
C. fraxinea es la causa de la muerte regresiva de los fresnos, que es un grave problema forestal en Europa. A. niger causa moho negro en ciertas frutas y vegetales tales como uvas, cebollas y cacahuates, y es un contaminante común de los alimentos. Los hongos del género Blumeria son patógenos de plantas muy extendidos que causan mildiu polvoriento en las hojas de muchas plantas, incluidas las vides, las cebollas, los manzanos y los perales. Los resultados descritos anteriormente muestran que los complejos de cobre-amonio y cobre-zinc-amonio solubilizados en ácido fosforoso son altamente efectivos para inhibir el crecimiento de los diversos hongos fitopatógenos probados y, por lo tanto, pueden tener aplicaciones prácticas en el campo agrícola para la protección de cultivos, plantas, árboles, flores y arbustos ornamentales. Sorprendentemente, las Cu-Zn#7 y #10 fueron significativamente más efectivas que Cu-#16 y #27 para inhibir el crecimiento del mildiu polvoriento, lo que sugiere que estas composiciones pueden tener una actividad antifúngica ventajosa contra ciertos patógenos de plantas.
Ejemplo 5. Ensayos antifúngicos/levadura con patógenos humanos. Candida albicans y Cryptocopccus neoformans. Las tres cepas de Candida albicans (C. albicans) fueron usadas: 1-1, 3-1 y 4-1 se aislaron de sangre humana, vagina y orofaringe, respectivamente. Se usó la cepa CCTP13 de Cryptococcus neoformans (C. neoformans). Todas las cepas se cultivaron en medio RPMI-1640 a 37°C. Las composiciones de sulfato de cobre y Cu# comienzan con una concentración alta de 200 microgramos/mililitro, mientras que las composiciones de Cu-Zn# comienzan con concentraciones altas del 1 % de la solución madre (Tabla 2) y el sulfato de zinc y el ácido fosforoso comienzan con una altas concentraciones equivalentes a las de Cu-Zn#7 y #10 (ver la leyenda de la Tabla 11 para detalles) se prepararon diluciones al doble (100 microlitros) de las composiciones en RPMI-1640 en una placa de cultivo de tejido de 96 pocillos. Los cultivos de C. albicans y C. neoformans se diluyeron 1:40 y 1:10 respectivamente con RPMI fresco que contenía tampón MOPS 40 mM y se adicionaron 90 microlitros a las composiciones, en la placa: Se adicionó resazurina A (10. microlitros de una solución al 0,0675 % p/vol en agua destilada) como indicador de crecimiento, y los cultivos se incubaron durante 24 horas a 37°C. La concentración inhibitoria mínima (MIC) de los compuestos/composiciones se definió como la concentración más baja en la que el indicador de resazurina. Un indicador permaneció azul (las células vivas convierten el tinte azul: en un color rosa).
Resultados
La Tabla 11 muestra que todas las cepas analizadas fueron sorprendentemente sensibles al cobre, con MIC similares a las vistas con MRSA y A. baumannii (alrededor de 6 microgramos/mililitro; Tabla 6), ya sea en forma de sulfato de cobre o de composiciones de cobre-amonio solubilizado en ácido (Cu#).
Las composiciones complejas de Cu-Zn-amonio solubilizadas con ácido #1 y #7, que contienen cantidades equimolares de cobre y zinc elementales con ácidos clorhídrico y fosforoso, respectivamente, fueron inhibidores ligeramente más efectivos del crecimiento de C. albicans que el sulfato de cobre y las composiciones de Cu# en términos de concentración de iones de cobre (MIC = 4,7 microgramos/mililitro de Cu2+ elemental). La levadura C. neoformans también fue muy sensible al cobre independientemente de la forma, pero fue menos sensible al Cu-Zn#1 que las cepas C. albicans. El crecimiento de la cepa de C. albicans no se vio afectado por el sulfato de zinc o el ácido fosforoso (MIC >150 y >500 microgramos/mililitro, respectivamente). El crecimiento de C. neoformans tampoco fue afectado por el sulfato de zinc.
Tabla 11. El efecto de diversas composiciones sobre el crecimiento de tres cepas de C. albicans y una cepa de C. neoformans, *Las composiciones de Cu-Zn# contienen 4,7 pg/ml de ambos. Cu2+ y Zn 2+.**Una solución al 1 % vol/vol de Cu-Zn#7, y las composiciones madre #10 (ver Tabla 2) contienen 150 pg/ml de sulfato de zinc y 500 pg/ml de ácido fosforoso. NT = No probado.
Figure imgf000016_0001
Estos resultados muestran que las cepas de C. albicans aisladas de una variedad de sitios anatómicos diferentes son muy sensibles a la presencia de cobre cuando se cultivan en medio RPMI. Así, puede concluirse que cualquiera de las composiciones Cu# o Cu-Zn# puede ser útil en el tratamiento tópico de enfermedades relacionadas con C. albicans tales como aftas vaginales y orales, C. neoformans también fue muy sensible al sulfato de cobre y las composiciones de Cu#, pero fue mucho menos sensible a Cu-Zn#1 y sulfato de zinc. C. neoformans causa meningitis severa en personas con VIH/SIDA y la administración selectiva de un complejo que contiene cobre al cerebro puede ser una terapia potencial para esta enfermedad letal.
Ejemplo 6. Pruebas de estabilidad.
Muestras (3 mililitros) de composición Cu#1 y gel de Aloe vera con conservantes que contienen 1 % vol/vol de composición Cu#1 se colocaron en tubos de plástico estériles de 7 mililitros y las muestras duplicadas se almacenaron en cuatro condiciones; a 37 °C en incubadora humidificada, a temperatura ambiente (alrededor de 22 °C) en armario, a 4 °C en un cuarto frío ya -20 °C en congelador. Después de 5 meses de almacenamiento, se permitió que un conjunto de muestras de Cu#1 y el gel que contenía 1 % de Cu#1 alcanzaran la temperatura ambiente. Las muestras de gel (5 microlitros) y las muestras de Cu#1 (diluido 1:1 o 1:10 vol/vol en agua destilada y 5 microlitros colocados en un disco de papel) se probaron contra la cepa bacteriana S1 (S. aureus) en la prueba de placa de agar, y después de 24 horas de cultivo a 37 °C se midieron los diámetros de las zonas de inhibición como se describe en el Ejemplo 1.
Resultados
Las muestras del gel que contenía 1 % de la composición Cu#1 dieron zonas O de inhibición de 6 milímetros contra S1 (S. aureus), indicando que el almacenamiento en un amplio intervalo de temperaturas no tuvo efecto sobre la actividad antibacteriana de los geles.
La Tabla 12 muestra las zonas de inhibición para las muestras de composición Cu#1 almacenadas a varias temperaturas durante 5 meses. La muestra almacenada a 37 °C fue ligeramente más inhibidora del crecimiento de S1 (S. aureus) que las otras muestras que dieron zonas de inhibición muy similares a ambas concentraciones ensayadas. Estos resultados muestran que la composición Cu#1 conserva su actividad antibacteriana después de 5 meses de almacenamiento en un amplio intervalo de temperaturas.
Tabla 12. El efecto de las muestras de composición Cu#1 almacenado a varias temperaturas durante 5 meses sobre el crecimiento de la cepa bacteriana S1 (S. aureus) en la prueba de la placa de agar.
Zona de inhibición (mm)
Temperatura de almacenamiento Cu#l Dilución 1:1 Dilución 1:10
Figure imgf000017_0001

Claims (10)

REIVINDICACIONES
1. Una composición antimicrobiana que comprende:
una solución que comprende sulfato de cobre hidratado en agua; y una
cantidad equimolar de una sal de zinc en solución;
una sal básica de amonio adicionada a la solución para generar un complejo de cobre-zinc-amonio insoluble; y al menos un ácido soluble en agua seleccionado del grupo que consiste en ácidos sulfúrico, clorhídrico, fosfórico y fosforoso adicionado a la solución para solubilizar el complejo de cobre-zinc-amonio y para controlar el pH de la solución azul transparente de cobre-zinc-amonio solubilizada en ácido así formada.
2. La composición antimicrobiana de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el agua se selecciona del grupo que consiste en agua destilada, agua desionizada, agua purificada, agua filtrada, agua de calidad farmacéutica, agua de calidad médica y agua de ósmosis inversa.
3. La composición antimicrobiana de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la sal de zinc se selecciona del grupo que consiste en sulfato de zinc anhidro, cloruro de zinc anhidro, sulfato de zinc hidratado y cloruro de zinc hidratado.
4. La composición antimicrobiana de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende además un portador seleccionado del grupo que consiste en un gel, un ungüento, un aceite, una pasta, un medicamento, una solución pulverizable, una solución de vendaje, una solución de irrigación, una crema, un jabón, un detergente, un lavado y una espuma.
5. Una composición antimicrobiana producida por el proceso de:
combinar sulfato de cobre hidratado y una cantidad equimolar de una sal de zinc con agua,
agitar vigorosamente la mezcla combinada de sulfato de cobre y sal de zinc y agua;
adicionar una sal básica de amonio a la mezcla resultante para generar un complejo insoluble de cobre-zincamonio; y
adicionar un ácido soluble en agua seleccionado del grupo que consiste en ácidos sulfúrico, clorhídrico, fosfórico y fosforoso al complejo de cobre-zinc-amonio para solubilizar el complejo de cobre-zinc-amonio y controlar el pH de la solución azul transparente así formada.
6. La composición antimicrobiana de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el agua se selecciona del grupo que consiste en agua destilada, agua desionizada, agua purificada, agua filtrada, agua de calidad farmacéutica, agua de calidad médica y agua de ósmosis inversa.
7. La composición antimicrobiana de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la sal de zinc se selecciona del grupo que consiste en sulfato de zinc anhidro, cloruro de zinc anhidro, sulfato de zinc hidratado y cloruro de zinc hidratado.
8. La composición antimicrobiana de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la sal básica de amonio se disuelve en agua antes de combinarse con la mezcla de sal de cobre y agua.
9. La composición antimicrobiana de acuerdo con la reivindicación 5 que comprende además un portador seleccionado del grupo que consiste en un gel, un ungüento, un aceite, una pasta, un medicamento, una solución pulverizable, una solución de vendaje, una solución de irrigación, una crema, un jabón, un detergente, un lavado y una espuma.
10. Un método para producir una composición antimicrobiana que comprende las etapas de:
combinar sulfato de cobre hidratado y una cantidad equimolar de una sal de zinc en agua;
agitar vigorosamente la mezcla combinada de sulfato de cobre y sal de zinc y agua:
adicionar una sal básica de amonio a la mezcla resultante para generar un complejo insoluble de cobre-zincamonio; y
adicionar un ácido soluble en agua seleccionado del grupo que consiste en ácidos sulfúrico, clorhídrico, fosfórico y fosforoso al complejo de cobre-zinc-amonio para solubilizar el complejo de cobre-zinc-amonio y controlar el pH de la composición antimicrobiana azul transparente así formada.
ES14869541T 2013-12-13 2014-12-12 Complejos de cobre-zinc-amonio solubilizados en ácido, composiciones, preparaciones, métodos y usos Active ES2925740T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14/106,676 US9474282B2 (en) 2013-12-13 2013-12-13 Acid-solubilized copper-ammonium complexes and copper-zinc-ammonium complexes, compositions, preparations, methods, and uses
PCT/US2014/069908 WO2015089358A1 (en) 2013-12-13 2014-12-12 Acid-solubilized copper-ammonium complexes and copper-zinc-ammonium complexes, compositions, preparations, methods, and uses

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2925740T3 true ES2925740T3 (es) 2022-10-19

Family

ID=53366866

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES14869541T Active ES2925740T3 (es) 2013-12-13 2014-12-12 Complejos de cobre-zinc-amonio solubilizados en ácido, composiciones, preparaciones, métodos y usos

Country Status (28)

Country Link
US (2) US9474282B2 (es)
EP (2) EP3079476B1 (es)
JP (2) JP6808489B2 (es)
KR (1) KR102061823B1 (es)
CN (1) CN105873442B (es)
AP (1) AP2016009265A0 (es)
AU (1) AU2014362252B2 (es)
BR (1) BR112016013486A2 (es)
CA (1) CA2933594C (es)
CR (1) CR20160317A (es)
DK (1) DK3079476T3 (es)
DO (1) DOP2016000134A (es)
EA (1) EA201691090A1 (es)
ES (1) ES2925740T3 (es)
HR (1) HRP20221027T1 (es)
HU (1) HUE059877T2 (es)
IL (1) IL246143A0 (es)
LT (1) LT3079476T (es)
MA (1) MA39179A1 (es)
MX (1) MX2016007640A (es)
NI (1) NI201600080A (es)
PE (1) PE20161172A1 (es)
PH (1) PH12016501103A1 (es)
PL (1) PL3079476T3 (es)
PT (1) PT3079476T (es)
RS (1) RS63448B1 (es)
TN (1) TN2016000237A1 (es)
WO (1) WO2015089358A1 (es)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9474282B2 (en) * 2013-12-13 2016-10-25 Tony John Hall Acid-solubilized copper-ammonium complexes and copper-zinc-ammonium complexes, compositions, preparations, methods, and uses
WO2015185994A1 (en) * 2014-06-03 2015-12-10 Myco Sciences Limited Anti-microbial compositions, preparations, methods, and uses
RU2742057C2 (ru) 2015-06-08 2021-02-02 Мико Сайенсес Лимитед Антимикробные и агрохимические композиции
CL2016002960A1 (es) * 2016-11-18 2017-01-27 Univ Chile Formulación hibrida metal/estructura de carbono con aplicaciones dentales en el tratamiento de la hipersensibilidad dentinaria, desmineralización, y la caries
US11944101B2 (en) 2017-07-26 2024-04-02 Nutriag Ltd. Phosphorus acid and alkylamine or alkanolamine stabilized copper compound containing compositions for controlling a plant disease caused by a phytopathogenic organism
PE20210476A1 (es) * 2017-10-25 2021-03-08 Compania Minera San Geronimo Composicion fungicida y bactericida que comprende sales en base a cobre, metodo para evitar y/o tratar la infestacion de plantas utiles por bacterias u hongos y uso de dicha composicion
EP3476406B1 (fr) * 2017-10-27 2021-12-08 OneLIFE S.A. Kit de détection des contaminations résiduelles sur des dispositifs médicaux
GB2595304A (en) * 2020-05-22 2021-11-24 Copper Clothing Ltd Antimicrobial material

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1988752A (en) 1931-10-03 1935-01-22 Stanco Inc Copper fungicide
US2414660A (en) 1942-06-27 1947-01-21 Tennessee Copper Company Copper fungicides and process of producing same
US2540209A (en) 1948-02-18 1951-02-06 Tennessee Copper Company Copper fungicidal compositions safened with zinc sulfite
GB1119058A (en) * 1964-07-17 1968-07-03 Allergan Pharma A stabilized ascorbic acid microbiocidal composition
FR1544172A (fr) 1967-09-20 1968-10-31 British Petroleum Co Produits pesticides, huileux et émulsionnables, à usage agricole et industriel
TR19072A (tr) 1973-11-26 1978-05-01 Pepro Fosforlu tuerevler ihtiva eden fungisid terkipler
US4048324A (en) 1973-12-28 1977-09-13 Armand Kohn Fungicidal composition and method
GB1574939A (en) * 1977-05-12 1980-09-10 Cuprinol Ltd Compositions containing preservative metals and their use for the preservation of wood and like materials and as fungicides
DE2807293A1 (de) * 1978-02-21 1979-08-23 Bp Chem Int Ltd Homogenes, fluessiges, einen cuprammonium-komplex umfassendes praeparat
CA1117007A (en) * 1978-06-06 1982-01-26 Bp Chemicals Limited Fungicidal compositions of low phytotoxicity containing cuprammonium carboxylates and metal carboxylates
GR75196B (es) * 1980-05-03 1984-07-13 Basf Ag
DE3017123A1 (de) * 1980-05-03 1981-11-05 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Fungizid
HU184319B (en) 1980-08-27 1984-08-28 Borsodi Vegyi Komb Fungicide compositions salts of phosphonoic acid-monoesters and process for producing the active agents
US4544666A (en) 1983-04-22 1985-10-01 Phyton/Ag, Inc. Chemotherapeutic agents for the control of plant diseases
CA1219040A (en) 1983-05-05 1987-03-10 Elliot V. Plotkin Measurement of enzyme-catalysed reactions
GB8324806D0 (en) * 1983-09-16 1983-10-19 Bp Chem Int Ltd Fungicidal compositions
JPS6079679A (ja) * 1983-09-29 1985-05-07 フオ−ド　モ−タ−　カンパニ− 再充電可能な二酸化マンガン／亜鉛電池
ZA852282B (en) * 1984-04-04 1985-11-27 Osmose Wood Preserv Co America Preservative composition for wood
US4622248A (en) * 1984-04-04 1986-11-11 Osmose Wood Preserving Co. Of America, Inc. Preservative composition for wood
US4952398A (en) 1988-03-17 1990-08-28 Jean Tapin Biocidal composition with copper algicide
JPH0742220B2 (ja) 1988-06-03 1995-05-10 品川燃料株式会社 化粧料用防腐剤
ATE138244T1 (de) * 1990-03-06 1996-06-15 David Tate Fungizide zusammensetzungen zur anwendung bei pflanzen
US5373025A (en) 1992-02-24 1994-12-13 Olin Corporation Sanitizer for swimming pools, spas, and hot tubs
JP2988790B2 (ja) 1992-08-31 1999-12-13 触媒化成工業株式会社 抗菌剤
CN1076080A (zh) 1993-01-11 1993-09-15 福州市农业科学研究所植物激素厂 70％络氨铜锌可湿性杀菌杀螨和促进植物生长复合粉剂及其制法
US8012511B1 (en) 2005-12-02 2011-09-06 Contact Marketing Solutions, Llc Acidic composition of matter for use to destroy microorganisms
US5736164A (en) 1996-08-30 1998-04-07 Taylor; John B. Fungicidal compositions for plants containing phosphonate and phosphate salts, and derivatives thereof
US20020193351A1 (en) 1996-08-30 2002-12-19 Taylor John B. Fungicidal and bactericidal compositions for plants containing phosphonate and phosphate salts, metal chelates, and derivatives thereof
US5707418A (en) * 1997-01-23 1998-01-13 Safergro Laboratories, Inc. Inorganic phosphorous fertilizer
JPH10273875A (ja) * 1997-03-28 1998-10-13 Kohjin Co Ltd 抗菌防臭ならびに消臭性能を有する組成物
DE60025602T2 (de) 1999-05-24 2006-09-14 Lonza Inc. Kupfer/aminoxid-holzschutzmittel
US7455851B1 (en) 1999-06-25 2008-11-25 Arch Chemicals, Inc. Pyrithione biocides enhanced by silver, copper, or zinc ions
AU783229B2 (en) * 1999-08-31 2005-10-06 Remedy Research Limited Metal-containing compositions, preparations and uses
US7674785B2 (en) 2000-06-22 2010-03-09 The Procter & Gamble Company Topical anti-microbial compositions
CN1222272C (zh) 2000-09-11 2005-10-12 昭和电工株式会社 化妆品组合物
US20040001791A1 (en) * 2000-11-16 2004-01-01 Zeiler Kenneth T. Composition, method of use, and devices for the treatment of onychomycosis
MXPA03006755A (es) 2001-01-29 2004-10-15 Agricare Ltd Metodos y composiciones para controlar patogenos en plantas.
US6896908B2 (en) 2001-01-30 2005-05-24 U.S. Borax Inc. Wood preservative concentrate
GB0112939D0 (en) 2001-05-29 2001-07-18 Mini Agriculture & Fisheries Anti-microbials
ITMI20022516A1 (it) 2002-11-27 2004-05-28 Isagro Spa Composizioni fungicide.
US20040258838A1 (en) 2003-06-17 2004-12-23 Richardson H. Wayne Method for preserving wood materials using precipitated copper compounds
TW200528030A (en) 2003-10-17 2005-09-01 Basf Ag Novel copper-containing formulations
US8491812B2 (en) * 2003-12-16 2013-07-23 David J. Moore Compositions for cleaning contained bodies of water with metal hydrates
US20080166424A1 (en) 2004-02-26 2008-07-10 Mixon Stephen P Compositions and methods for treatment of diseases of the foot of an animal
ITMI20051019A1 (it) * 2005-05-31 2006-12-01 Isagro Spa Composizioni fungicide sinergiche
ITMI20051558A1 (it) 2005-08-09 2007-02-10 Isagro Spa Miscele e-o composizioni sinergiche cin elevata attivita'fungicida
WO2007045256A1 (fr) 2005-10-17 2007-04-26 Pierre Hirsbrunner Composition comprenant un alkylsiliconate hydrophobant contenant au moins un indicateur
GB0523427D0 (en) * 2005-11-17 2005-12-28 Remedy Res Ltd Pathogen - controlling products
BRPI0618771A2 (pt) * 2005-11-17 2011-09-13 Remedy Res Ltd produtos controladores de patógenos
WO2007070801A2 (en) 2005-12-12 2007-06-21 Allaccem, Inc. Methods and systems for preparing antimicrobial films and coatings
CA2635932C (en) 2006-02-23 2014-05-27 E.I. Du Pont De Nemours And Company Removable antimicrobial coating compositions and methods of use
CN1826899A (zh) 2006-02-28 2006-09-06 赵金华 亚磷酸二氢钾在制备杀菌叶面肥中的应用
US8221796B2 (en) 2006-04-25 2012-07-17 Albaugh, Inc. Copper-based fungicide/bactericide
JP5101836B2 (ja) 2006-05-10 2012-12-19 幸一 島田 農薬、抗糸状菌薬剤、及び作物の栽培方法
GB0618711D0 (en) 2006-09-22 2006-11-01 Univ Exeter Agricultural treatment
JP4993449B2 (ja) 2006-10-10 2012-08-08 日揮触媒化成株式会社 抗菌剤
CN101742914B (zh) 2007-05-18 2014-07-30 赛森特有限责任公司 生物活性酸性农药组合物及其应用
US20090110751A1 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Kenneke Eli L Compositions and Methods for Treatment of Diseases of the Foot of an Animal
CN100579375C (zh) 2007-11-22 2010-01-13 浙江林学院 一种络氨铜农用杀菌剂生产方法及其产品的用途
US20110052720A1 (en) 2007-12-20 2011-03-03 Wim Van Der Krieken Compositions for the control of plant pathogens and for use as plant fertilizer
US8273791B2 (en) 2008-01-04 2012-09-25 Jr Chem, Llc Compositions, kits and regimens for the treatment of skin, especially décolletage
US8293282B2 (en) 2008-02-12 2012-10-23 Arch Wood Protection, Inc. Micronized copper-containing compositions useful to mitigate residues on wood surfaces
US20100015245A1 (en) 2008-04-24 2010-01-21 Joe Harrison Combination of Copper Cations with Peroxides or Quaternary Ammonium Compounds for the Treatment of Biofilms
WO2009133616A1 (ja) 2008-05-01 2009-11-05 アンスラックス スポアーズ キラー コーポレーション リミテッド 万能殺菌消毒液
TWI489942B (zh) 2008-12-19 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag 活性化合物組合物
EP2403336B1 (en) 2009-03-06 2014-07-23 Gowan Co. Plant treatment compositions and methods for their use
DE102011009678A1 (de) 2011-01-28 2012-08-02 Kurt Obermeier Gmbh & Co. Kg Holzbehandlungsmittel und Verfahren zum Behandeln von Holz, Holzwerkstoffen oder dergleichen
JP5927025B2 (ja) 2012-04-27 2016-05-25 クミアイ化学工業株式会社 農園芸用殺菌剤
EP3041913A2 (en) 2013-09-04 2016-07-13 Ceradis B.V. A new antifungal composition for treatment of soil
US9474282B2 (en) * 2013-12-13 2016-10-25 Tony John Hall Acid-solubilized copper-ammonium complexes and copper-zinc-ammonium complexes, compositions, preparations, methods, and uses
KR20200052896A (ko) 2017-09-14 2020-05-15 쓰리엠 이노베이티브 프로퍼티즈 컴파니 플루오르화 공중합체 및 이를 포함하는 조성물 및 물품

Also Published As

Publication number Publication date
RS63448B1 (sr) 2022-08-31
US9474282B2 (en) 2016-10-25
EP3079476A4 (en) 2017-08-23
TN2016000237A1 (en) 2017-10-06
JP6808489B2 (ja) 2021-01-06
CN105873442B (zh) 2020-06-16
AU2014362252B2 (en) 2018-11-08
US20160309722A1 (en) 2016-10-27
KR20160096665A (ko) 2016-08-16
US20150164085A1 (en) 2015-06-18
PE20161172A1 (es) 2016-11-04
MA39179A1 (fr) 2016-12-30
NI201600080A (es) 2016-07-22
PT3079476T (pt) 2022-08-04
JP7089562B2 (ja) 2022-06-22
EP3079476A1 (en) 2016-10-19
BR112016013486A2 (pt) 2017-08-08
CN105873442A (zh) 2016-08-17
CA2933594C (en) 2020-11-17
KR102061823B1 (ko) 2020-01-02
CA2933594A1 (en) 2015-06-18
PH12016501103A1 (en) 2016-07-11
LT3079476T (lt) 2022-08-25
IL246143A0 (en) 2016-07-31
HRP20221027T1 (hr) 2022-11-11
JP2021006545A (ja) 2021-01-21
EP4074318A1 (en) 2022-10-19
EA201691090A1 (ru) 2016-11-30
HUE059877T2 (hu) 2023-01-28
CR20160317A (es) 2016-12-08
MX2016007640A (es) 2017-01-11
EP3079476B1 (en) 2022-06-29
DK3079476T3 (da) 2022-09-12
WO2015089358A1 (en) 2015-06-18
JP2017501150A (ja) 2017-01-12
PL3079476T3 (pl) 2022-10-10
DOP2016000134A (es) 2016-11-30
AP2016009265A0 (en) 2016-06-30
US10729139B2 (en) 2020-08-04
AU2014362252A1 (en) 2016-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2925740T3 (es) Complejos de cobre-zinc-amonio solubilizados en ácido, composiciones, preparaciones, métodos y usos
ES2597955T3 (es) Composiciones antisépticas que comprenden iones de plata y mentol y usos de las mismas
KR20160140691A (ko) 비-복합 요오드의 안정적 조성물 및 사용 방법
ES2898612T3 (es) Composiciones biocidas mejoradas a base de fluoruro de calcio así como utilizaciones de las mismas
CN105055304A (zh) 一种含复合杀菌成份的免洗护肤消毒凝胶及其制备方法
US20210100244A1 (en) Preservation of personal care compositions
JP2008007451A (ja) 殺菌剤
CN104970050B (zh) 一种蛋白酶-纳米银配合物及其应用
ES2601902T3 (es) Formulaciones antibacterianas o antiacné que contienen ácido úsnico o un usnato y una sal metálica
OA17904A (en) Acid-solubilized copper-ammonium complexes and copper-zinc-ammonium complexes, compositions, preparations, methods, and uses.
ES2784275B2 (es) Antiséptico de acción prolongada para el lavado higiénico por fricción y lavado pre-quirúrgico de manos
ES2877541T3 (es) Agente de tratamiento de la dermatomicosis que comprende citrato tripotásico
RO127722B1 (ro) Preparate farmaceutice, de tip apă de gură, pe bază de complecşi metalici ai clorhexidinei şi procedeu de obţinere a acestora
RO127727B1 (ro) Preparate farmaceutice, de tip discuri bioadezive, pe bază de complecşi metalici ai clorhexidinei, şi procedeu de obţinere a acestora
WO2019122470A1 (es) Composición desinfectante
RO127726B1 (ro) Preparate farmaceutice, de tip geluri bioadezive, pe bază de complecşi metalici ai clorhexidinei, şi procedeu de obţinere a acestora
BR102016020213A2 (pt) Fitoterápico antimicrobiano obtido a partir do extrato das folhas de phthirusa paniculata (tentem)