ES2836550T3 - Anticuerpos anti-C10orf54 y utilizaciones de los mismos - Google Patents

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Abstract

Anticuerpo monoclonal, humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende las 6 CDR del anticuerpo, comprendiendo dicho anticuerpo: - un dominio variable de cadena pesada de las tres CDR siguientes, respectivamente CDR-H1 que presenta la secuencia SEC ID Nº 1296, CDR-H2 que presenta una secuencia seleccionada de entre SEC ID Nº 1358, SEC ID Nº 1556, SEC ID Nº 1557, SEC ID Nº 1558, y SEC ID Nº 1559, y CDR-H3 que presenta la secuencia SEC ID Nº 1393; y - un dominio variable de cadena ligera de las tres CDR siguientes, respectivamente CDR-L1 que presenta la secuencia SEC ID Nº 1435, CDR-L2 que presenta una secuencia seleccionada de entre SEC ID Nº 1476, SEC ID Nº 1630, SEC ID Nº 1631, SEC ID Nº 1632, y SEC ID Nº 1633, y CDR-L3 que presenta la secuencia SEC ID Nº 1499.

Description

DESCRIPCIÓN
Anticuerpos anti-C10orf54 y utilizaciones de los mismos
Campo de la invención
La presente divulgación se refiere en términos generales a los anticuerpos anti-C10orf54, incluyendo conjugados anticuerpo-fármaco que comprenden los anticuerpos, y a los métodos de su utilización.
Antecedentes de la invención
C10orf54 es una proteína transmembranaria tipo I de un solo paso que presenta 311 aminoácidos de longitud e incluye una secuencia de señal y un dominio similar a IgV en su región intracelular. Potencialmente, es un miembro de la familia B7 de proteínas y presenta aproximadamente 24% de identidad de secuencia con respecto a B7-H1/PD-L1 (Flajnik et al., Immunogenetic 64:571-590 (2012)). El ortólogo de ratón respecto a C10orf54 es conocido como supresor que contiene inmunoglobulina de región V de activación de células T (VISTA; conocido asimismo como PD-L3). VISTA se clonó a partir de una biblioteca de células T reguladoras CD4 positivas (Treg) (Wang et al., JEM 208(3):577-592 (2011)). VISTA se expresa principalmente en células hematopoyéticas, y la expresión de VISTA está muy regulada en células mieloides presentadoras de antígenos (CPA) y células T (Wang et al., supra).
VISTA parece tener actividades funcionales no redundantes con otros miembros de la superfamilia Ig y pueden desempeñar una función en el desarrollo de autoinmunidad y vigilancia inmunitaria en cáncer. Por ejemplo, se ha demostrado que la expresión de una proteína de fusión VISTA-Ig inhibe la proliferación de células T y la producción de citocinas in vitro y la sobreexpresión de VISTA en células tumorales MCA105 interfiere con una inmunidad antitumoral protectora del hospedador (Wang et al., supra). Además, la administración de un anticuerpo monoclonal específico para VISTA potenció la respuesta in vivo de células T CD4 positivas y el desarrollo de autoinmunidad (Wang et al., supra). También se ha demostrado que los anticuerpos monoclonales contra C10orf54 evitan la enfermedad aguda de injerto-contra-hospedador en ratones (Flies et al., J. Immunology 187(4):1537-1541 (2011)). En los documentos WO 2014/197849 y Wo 2014/059028 se describen unos anticuerpos monoclonales adicionales contra C10orf154.
Sumario
La presente invención se define en las reivindicaciones adjuntas y se refiere a anticuerpos monoclonales humanizados, o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, dirigidos contra C10orf14.
El sumario y la divulgación técnica detallada expuestos a continuación pueden en algunos sentidos superar la divulgación de la invención per se, y pueden proporcionar asimismo unos antecedentes técnicos para los desarrollos técnicos relacionados. Se apreciará que la presente divulgación técnica no está destinada a definir la invención como tal (que es definida exclusivamente por las reivindicaciones adjuntas), sino más bien para ubicarla en un contexto técnico más amplio. Por lo tanto, se apreciará que los términos “aspectos” y “formas de realización” reflejan unos detalles específicos de la divulgación pero en tanto que se refieren a una parte de los antecedentes técnicos adicionales, no están destinados a definir como parte de la invención aspectos que no están comprendidos dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.
Más específicamente, la invención se refiere a un anticuerpo que comprende un dominio variable de cadena pesada que comprende las tres CDR siguientes, respectivamente CDR-H1 que presenta la secuencia SEC ID n° 1296, c Dr -H2 que presenta una secuencia seleccionada de entre SEC ID n° 1358, SEC ID n° 1556, SEC ID n° 1557, SEC ID n° 1558, y SEC ID n° 1559, y CDR-H3 que presenta la secuencia SEC ID n° 1393; y un dominio variable de cadena ligera que comprende las tres CDR siguientes, respectivamente CDR-L1 que presenta la secuencia SEC ID n° 1435, CDR-L2 que presenta una secuencia seleccionada de entre SEC ID n° 1476, SEC ID n° 1630, SEC ID n° 1631, SEC ID n° 1632, y SEC ID n° 1633, y CDR-L3 que presenta la secuencia SEC ID n° 1499. Un ejemplo de dicho anticuerpo se designa en la presente memoria como 26A.
Otros anticuerpos que se unen a las proteínas C10orf54, y se designan en la presente memoria como 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, o 305A, se mencionan en la presente memoria únicamente como aspectos de la divulgación.
La presente divulgación proporciona anticuerpos que se unen a C10orf54, incluyendo anticuerpos humanizados y conjugados anticuerpo-fármaco que comprenden los anticuerpos humanizados, y métodos de utilización de los anticuerpos y conjugados anticuerpo-fármaco, incluyendo para el diagnóstico y tratamiento de cánceres. La presente divulgación además proporciona proteínas que se unen a C10orf54, incluyendo las proteínas de unión, tales como anticuerpos, que se unen a una o más proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas. Dichas proteínas de unión, incluyendo anticuerpos, pueden ser antagonistas (por ejemplo, que inhiban una o más de las actividades biológicas de C10orf54).
En un primer aspecto, se proporcionan en la presente memoria unos anticuerpos que se unen a C10orf54, incluyendo un polipéptido de Cl0orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54, a los que se hace referencia en conjunto en la presente memoria como anticuerpos anti-C10orf54. También se proporcionan en la presente memoria unos anticuerpos anti-C10orf54 que se conjugan a los fármacos como conjugados anticuerpo-fármaco (ADC), incluyendo los ADC de la fórmula A-L-CTX, en donde A es un anticuerpo, L es un ligador y CTX es la citotoxina. En algunos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 son anticuerpos humanizados que se unen a un polipéptido de C10orf54, a un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54. En ciertos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y/o VL CDR3 del anticuerpo monoclonal 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, en las tablas 12-33), o una variante humanizada del mismo. En ciertos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 puede comprender además VH FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de una secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina de línea germinal humana o una variante de la misma.
En ciertos aspectos, el anticuerpo comprende menos de seis CDR. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende o consiste en una, dos, tres, cuatro, o cinco CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y/o VL CDR3. En unos aspectos específicos, el anticuerpo comprende o consiste en una, dos, tres, cuatro, o cinco CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y/o VL CDR3 del anticuerpo monoclonal 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, o 305A descrito en la presente memoria (por ejemplo, en las tablas 12-33), o una variante humanizada del mismo. En unos aspectos específicos, el anticuerpo comprende además una v H FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de una secuencia de aminoácidos de línea germinal de inmunoglobulina humana o una variante de la misma.
En unos aspectos específicos, el anticuerpo es un anticuerpo humanizado, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo recombinante, un fragmento de unión a antígeno o cualquier combinación de los mismos. En unos aspectos particulares, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal humanizado como se describe en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3), o fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une a un polipéptido de C10orf54 (por ejemplo, un C10orf54 expresado sobre la superficie celular o soluble), un fragmento de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
En un segundo aspecto, se proporcionan en la presente memoria unos anticuerpos, incluyendo anticuerpos humanizados, (i) que bloquean competitivamente (por ejemplo, de una manera dependiente de la dosis) un anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria la unión a un polipéptido de C10orf54 (por ejemplo, un C10orf54 expresado sobre la superficie celular o soluble), un fragmento de C10orf54, un epítopo de C10orf54 o (ii) que se une a un epítopo de C10orf54 enlazado por un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) proporcionado en la presente memoria. En otros aspectos, el anticuerpo bloquea competitivamente (por ejemplo, de una manera dependiente de la dosis) el anticuerpo monoclonal 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, o 305A descrito en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) o una variante humanizada del mismo la unión a un polipéptido de C10orf54 (por ejemplo, C10orf54 expresado sobre superficie celular o soluble), un fragmento de C10orf54, o un epítopo de C10orf54. En otros aspectos, el anticuerpo se une a un epítopo de C10orf54 que está enlazado (por ejemplo, reconocido) mediante un anticuerpo monoclonal 5B, 46A, 97a , 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, o 305A descrito en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) o una variante humanizada del mismo (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados).
En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) proporcionados en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2 y VH CDR3, VL CDR1 VL CDR2 y/o VL CDR3) están conjugados o fusionados de manera recombinante con un agente de diagnóstico, un agente detectable o un agente terapéutico. En algunos aspectos, el agente terapéutico es un agente quimioterápico (por ejemplo, un agente citotóxico como citotoxina). En algunos aspectos, el agente detectable es un radioisótopo, una enzima, un compuesto fluorescente, un compuesto bioluminiscente o un compuesto quimioluminiscente. En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) están conjugados a fármacos como conjugados anticuerpo-fármaco (ADC). En algunos aspectos, el conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) es de la fórmula A-L-CTX, en donde A es un anticuerpo, L es un ligador y CTX es una citotoxina.
En ciertos aspectos, se proporcionan unas composiciones que comprenden un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-Cl0orf54 humanizado) descrito en la presente memoria. En algunos aspectos, las composiciones comprenden un conjugado anticuerpo-fármaco en donde el anticuerpo es un anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descrito en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL c DR3). También se proporcionan en la presente memoria composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo anti-C10orf54, incluyendo un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descrito en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3).
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249) y CC10 (SEC ID N°: 1251), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248) y CC9 (SEC ID N°: 1250).
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246) y CC8 (SEC ID N°: 1249), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248) , CC9 (SEC ID N°: 1250) y CC10 (SEC ID N°: 1251). En algunos aspectos, tal anticuerpo no comprende una o más secuencias de CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 32, 1101, 1107, 1112, 45, 1102, 1108, 1113, 40, 1103, 1114, 41, 1109, y 1115.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245) y CC5 (SEC ID N°: 1246), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), CC8 (SEC ID N°: 1249) , CC9 (SEC ID N°: 1250) y CC10 (Se C ID N°: 1251). En algunos aspectos, tal anticuerpo no comprende una o más secuencias de CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 38, 1083, 1089, 1094, 45, 1084, 1090, 1095, 46, 1085, 1096, 47, 1091, y 1097.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249) y CC9 (SEC ID N°: 1250), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), CC9 (SEC ID N°: 1250) y CC10 (SEC ID N°: 1251). En algunos aspectos, tal anticuerpo no comprende una o más secuencias de CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en 33, 1117, 1122, 1123, 1128, 34, 1118, 1124, 1129, 1134, 35, 1119, 1125, 1130, 42, 1120, 1126, 1131, 43, 1121, 1132, 44, 1127, y 1133.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249) y CC9 (SEC ID N°: 1250), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248) y CC10 (SEC ID N°: 1251).
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249) y CC10 (SEC ID N°: 1251), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), CC9 (SEC ID N°: 1250) y CC10 (SEC ID N°: 1251).
En un tercer aspecto, se proporcionan moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican una cadena VH, cadena VL, dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3 de anticuerpos anti-C10orf54 como se describe en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1,53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A 353A, o 305Adescritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3), incluyendo los anticuerpos humanizados anti-C10orf54, que se unen a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54. En ciertos aspectos, la molécula de ácido nucleico codifica un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y/o VL CDR3 del anticuerpo monoclonal 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, o 305A como se describe en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33), o una variante humanizada del mismo. En ciertos aspectos, la molécula de ácido nucleico codifica además VH FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de una secuencia de aminoácidos de línea germinal de inmunoglobulina humana o una variante de la misma. También se proporcionan en la presente memoria vectores y células hospedadoras que comprenden las moléculas de ácido nucleico que codifican un anticuerpo anti-C10orf54 (porejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados), así como de métodos de producción de un anticuerpo anti-C10orf54 por cultivo de las células hospedadoras proporcionadas en la presente memoria en unas condiciones que promueven la producción del anticuerpo anti-C10orf54.
En un cuarto aspecto, en la presente memoria se proporcionan los anticuerpos anti-C10orf54 como se describen en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12­ 33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3), incluyendo un conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) que comprende un anticuerpo anti-C10orf54, proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12­ 33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) para tratar, prevenir o aliviar la enfermedad, trastorno o afección, incluyendo uno o más síntomas de la enfermedad, trastorno o afección, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-C10orf54 como se describe en la presente memoria a un sujeto, tratando, previniendo o aliviando así la enfermedad, el trastorno o la afección, incluyendo uno o más síntomas de la enfermedad, el trastorno o la afección. En algunos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 son anticuerpos humanizados que se unen a un polipéptido de C10orf54, a un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54. En un aspecto, la enfermedad, trastorno o afección son causados por o asociados con C10orf54, incluyendo por o asociados a células de expresión de C10orf54 (porejemplo, células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células dendríticas supresoras (DC supresoras) y/o las células T reguladoras (T regs)). En ciertos aspectos, la enfermedad es un cáncer, tal como leucemia, cáncer de vejiga, cáncer de la piel, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer hepático, cáncer renal, cáncer pulmonar, un cáncer gástrico, un cáncer pancreático, un cáncer esofágico o fibrosarcoma. En un aspecto, la leucemia es una leucemia mieloide aguda (AML). En otros aspectos, la enfermedad es injerto - contra - hospedador (GVHD). Adicionalmente, un anticuerpo anti-C10orf54 con actividad de unión a C10orf54 para células que expresan C10orf54, que se proporciona en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, CDR2 Vl y/o VL CDR3), por ejemplo, como un anticuerpo no conjugado o anticuerpo conjugado (ADC), se proporciona para utilizaciones terapéuticas divulgadas a continuación que incluyen inhibir y/o destruir las células que expresan C10orf54 (por ejemplo, con actividad antitumoral para mediar un efecto antitumoral). En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54, que incluyen ADC que comprenden los anticuerpos anti-C10orf54, proporcionados en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2 y VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) inhiben la actividad supresora mediada por C10orf54 sobre las células T (por ejemplo, para permitir una respuesta inmunitaria antitumoral). En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33 A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) directamente destruyen las células que expresan C10orf54 (por ejemplo las células tumorales portadoras de C10orf54, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células dendríticas supresoras (DC supresoras) y/o las células T reguladoras (T regs)), por ejemplo, a través de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y la citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) en ciertos aspectos, los conjugados anticuerpo-fármaco (ADCs) que comprenden anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A 321D, 141a , 51A, 353A o 305A descritos (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) directamente destruyen células que expresan C10orf54 incluyendo la unión a las células que expresan C10orf54 (por ejemplo, células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células dendríticas supresoras (Dc supresoras), o las células T reguladoras (T regs)), por ejemplo, permitiendo la internalización del fármaco citotóxico. En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria o conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) que comprenden los anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria se utilizan para tratar cánceres (por ejemplo, vejiga, mama, colon, tejido conectivo, rectal, gástrico, esofágico, pulmonar, laringe, riñón, cáncer oral, ovario o próstata, o un sarcoma, melanoma, glioma, linfoma o leucemia) o tumores asociados con las células supresoras derivadas de mieloides (MDSC) (por ejemplo, carcinoma de colon carcinoma mamario, fibrosarcoma, timoma, carcinoma pulmonar, carcinoma de células renales, mesotelioma, glioma, linfoma, sarcoma, carcinoma de próstata, sarcoma o carcinoma de cabeza y cuello). En cualquiera de los aspectos anteriores, el anticuerpo anti-C10orf54, puede ser un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2 y VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y VL CDR3) que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
En un quinto aspecto, se proporcionan en la presente memoria un anticuerpo anti-C10orf54 o conjugados anticuerpo-fármaco que comprenden el anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL Cd R2 y/o VL CDR3) para inhibir el crecimiento de las células y/o destruir células que presentan una expresión superficial de la célula de C10orf54 que comprende poner en contacto las células con una cantidad eficaz de dicho anticuerpo anti-C10orf54 o conjugados anticuerpo-fármaco. En un aspecto, la célula es una célula T reguladora (por ejemplo, una célula reguladora de CD4+ Foxp3+). En ciertos aspectos, se proporcionan en la presente memoria los anticuerpos anti-C10orf54, que incluyen ADC que comprenden los anticuerpos anti-C10orf54, proporcionados en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2 y VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) para la utilización en la inhibición del crecimiento de un tumor con inflamación en un sujeto, comprendiendo dicha utilización administrar una cantidad eficaz. En otros aspectos, la célula es una célula supresora derivada de mieloide (porejemplo, una célula supresora derivada de mieloide CD11b+ o CD11balta) o una célula dendrítica supresora (por ejemplo, una célula dendrítica CD11b+ CD11balta). En otros aspectos, la célula es una célula cancerosa o precancerosa. Adicionalmente, un anticuerpo anti-C10orf54 con actividad de unión a C10orf54 para células que expresan C10orf54 proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDr 2 y/o VL CDR3), por ejemplo, como un anticuerpo no conjugado o anticuerpo conjugado (ADC) se proporciona en la presente memoria, para la utilización terapéutica divulgada anteriormente, que incluye inhibir y/o destruir células que expresan C10orf54 (por ejemplo, con actividad antitumoral para mediar un efecto antitumoral). En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54, que incluyen ADC que comprenden los anticuerpos anti-C10orf54, proporcionados en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL c Dr2 y/o Vl CDR3) inhiben la actividad supresora mediada por C10orf54 sobre las células T (por ejemplo, para permitir una respuesta inmunitaria antitumoral eficaz). En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria (porejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) destruyen directamente las células que expresan C10orf54 (por ejemplo las células tumorales portadoras de C10orf54, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células dendríticas supresoras (DC supresoras) y/o las células T reguladoras (T regs)), por ejemplo, a través de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y la citotoxicidad dependiente de complemento (CDC). En algunos aspectos, los conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) que comprenden anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) directamente destruyen células que expresan C10orf54 que incluyen por unión a las células que expresan C10orf54 (por ejemplo, células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células dendríticas supresoras (Dc supresoras), y/o las células T reguladoras (T regs)), por ejemplo, permitiendo la internalización del fármaco citotóxico. En cualquiera de los aspectos anteriores, el anticuerpo anti-C10orf54 puede ser un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, v L CDR1, VL CDR2 y/o VL c Dr 3) que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
En un sexto aspecto, se proporciona en la presente memoria un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, un anticuerpo anti-10orf54 humanizado) proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) para la utilización en la modulación de una respuesta inmunitaria en un sujeto que comprende administrar una cantidad eficaz de dicho anticuerpo a un sujeto. En un aspecto, la modulación comprende aumentar la activación de células T. En otro aspecto, la modulación comprende aumentar la proliferación de células T. En otro aspecto, la modulación implica aumentar la producción de citocinas.
En un séptimo aspecto, se proporcionan en la presente memoria unos métodos para detectar C10orf54 en una muestra que comprende poner en contacto la muestra con un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpo anti-C10orf54 humanizado) proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3), tal como un anticuerpo que comprende un agente detectable. En ciertos aspectos, la muestra comprende una célula que expresa C10orf54 sobre su superficie.
En un octavo aspecto, se proporciona en la presente memoria un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, un anticuerpo humanizado anti-C10orf54) o un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) que comprende el anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, un ADC de la fórmula A-L-CTX, en donde A es el anticuerpo, L es un ligador y CTX es un agente citotóxico) proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1,53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305Adescritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) para la utilización en el tratamiento de cánceres que comprenden administrar a un sujeto dicho anticuerpo o ADC en una cantidad terapéuticamente eficaz, que incluye en una cantidad eficaz para destruir una célula que expresa C10orf54 (por ejemplo células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), célula dendrítica supresora (DC supresora) y/o T células reguladoras (T reg)). En algunos aspectos, el cáncer es la leucemia mieloide aguda (AML). En cualquiera de los aspectos anteriores, el anticuerpo anti-C10orf54 puede ser un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, Vl CDR1, VL CDR2 y/o Vl CDR3) que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
En un noveno aspecto, se proporcionan en la presente memoria unos métodos de destruir células que expresan C10orf54 (por ejemplo, células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células supresoras dendríticas (DC supresoras) y/o las células T reguladoras (T reg)) que comprenden poner en contacto una célula que expresa C10orf54 (por ejemplo, células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), célula dendrítica supresora (DC supresora) y/o células T reguladoras (T regs)) con una cantidad de un anticuerpo anti-C10orf54 o un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) que comprende un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo un ADC de la fórmula A-L-CTX, en donde A es el anticuerpo, L es un ligador y CTX es un agente citotóxico) proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) eficaz para destruir la célula (por ejemplo., células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), célula dendrítica supresora (DC supresora) y/o célula T reguladora (T reg)). En algunos aspectos, la célula tumoral es una célula AML. En cualquiera de los aspectos anteriores, el anticuerpo anti-C10orf54 puede ser un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3) que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
En un décimo aspecto, se proporciona en la presente memoria un kit que comprende un anticuerpo anti-C10orf54, (por ejemplo, un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado) que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54 proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3). En algunos aspectos, los kits comprenden un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) en el que el anticuerpo es un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado) proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A descritos en la presente memoria (por ejemplo, tablas 12-33) con un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3).
Terminología
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos que se utilizan en la presente memoria presentan el mismo significado que el comúnmente entendido por un experto en la materia. En caso de que exista una pluralidad de definiciones de un término en la presente memoria, éstos prevalecerán en esta sección a menos que se indique de otro modo.
El término "alrededor de" o "aproximadamente" significa dentro de 20%, tal como dentro de 10% o 5% (o 1% o menos) de un determinado valor o rango.
Como se utiliza en la presente memoria, "administrar" o "administración" se refiere al acto de inyección o de otra manera suministro físico de una sustancia que existe fuera del cuerpo (por ejemplo, un anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria) en un paciente, tales como mediante suministro mucosal, intradérmico, intravenoso, intramuscular y/o cualquier otro método de suministro físico descrito en la presente memoria o conocido en la materia. Cuando una enfermedad o un síntoma de la misma, están siendo tratados, la administración de la sustancia ocurre típicamente después de la aparición de la enfermedad o sus síntomas.
Cuando una enfermedad o los síntomas de la misma, están siendo prevenidos, la administración de la sustancia ocurre típicamente antes de la aparición de la enfermedad o sus síntomas.
Como se utiliza en la presente memoria, un "agonista" de C10orf54 se refiere a una molécula que es capaz de activar o de lo contrario aumentar una o más de las actividades biológicas de C10orf54, tal como en una célula que expresa C10orf54 o en una célula que expresa un ligando de C10orf54, tal como un receptor de C10orf54. En algunos aspectos, un agonista de C10orf54 (por ejemplo, un anticuerpo agonista proporcionado en la presente memoria) puede, por ejemplo, actuar activando o de lo contrario aumentando la activación y/o las vías de señalización celular de la célula que expresa un C10orf54 o un receptor de C10orf54, incrementando así una actividad biológica mediada por C10orf54 de la célula respecto a la actividad biológica mediada por C10orf54 en ausencia del agonista. En algunos aspectos los anticuerpos proporcionados en la presente memoria son anticuerpos anti-C10orf54 agonistas.
El término "alquilo", como se utiliza en la presente memoria, significa un hidrocarburo de cadena recta, ramificada, o cíclico (en este caso, se conocería asimismo como "cicloalquilo") que contiene de 1 a 10 átomos de carbono. Los ejemplos de alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, sec-butilo, tercbutilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo, n-hexilo, 3-metilohexilo, 2,2-dimetilopentilo, 2,3-dimetilohexilo, n-heptilo, noctilo, n-nonilo y n-decilo. En ciertos aspectos, los grupos alquilo son opcionalmente sustituidos.
El término "C1-6aquilo," como se utiliza en la presente memoria, significa un hidrocarburo de cadena recta, ramificada o cíclico (en este caso, sería conocido asimismo como "cicloalquilo") que contiene de 1 a 6 átomos de carbono.
El término "C1-3alquil," como se utiliza en la presente memoria, significa un hidrocarburo de cadena recta o ramificada que contiene de 1 a 3 átomos de carbono.
El término "alquenilo," como se utiliza en la presente memoria, significa un hidrocarburo de cadena recta, ramificada, o cíclico (en este caso, sería conocido asimismo como "cicloalquenilo") que contiene de 2 a 10 carbonos y que contiene por lo menos un enlace doble carbono-carbono formado por la eliminación de dos hidrógenos. En algunos aspectos, dependiendo de la estructura, un grupo alquenilo es un monorradical o un dirradical (por ejemplo, un grupo alquenileno). En algunos aspectos, los grupos alquenilo están opcionalmente sustituidos. Los ejemplos de alquenilos incluyen, pero no se limitan a, etenilo, 2-propenilo, 2-metil-2-propenilo, 3-butenilo, 4-pentenilo, 5-hexenilo, heptenilo 2 y 2-metil-1-heptenilo. En algunos aspectos, son sustituidos opcionalmente los grupos alquenilo.
El término "C2-6 alquenilo," como se utiliza en la presente memoria, significa un hidrocarburo de cadena recta, ramificada, o cíclico (en este caso, sería conocido asimismo como "cicloalquilo") que contiene de 2 a 6 átomos de carbono y por lo menos un doble enlace carbono-carbono formado por la eliminación de dos hidrógenos.
El término "alcoxi," como se utiliza en la presente memoria, significa un grupo alquilo, como se define en la presente memoria, adjunto a la porción molecular original través de un átomo de oxígeno. Los ejemplos de alcoxi incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propoxi, 2-propoxi, butoxi, terc-butoxi, pentiloxi y hexiloxi.
Un "aminoácido" (o AA) o residuo de aminoácido incluye pero no se limita a los 20 ácidos de aminoácidos naturales comúnmente designados por tres símbolos de letra y también incluye 4-hidroxiprolina, hidroxiisina, demosina, isodemosina, 3-metilohistidina, norvalia, beta-alanina, ácido gamma-aminobutírico, homocisteína, homoserina, ornitina y metionina sulfona. El residuo de aminoácido de la presente solicitud incluye asimismo los correspondientes aminoácidos de N-metilo, tales como -N(CH3)CH2C(O)O-, -NHC(O)CH2CH2CH(NHCH3)C(O)O-, etc. Los aminoácidos, dipéptidos, tripéptidos, oligómeros y polipéptidos designados como-(AA)r- de la presente solicitud pueden incluir los correspondientes aminoácidos y péptidos no-N-alquilados (tal como aminoácidos no-N-metilados en los péptidos), así como una mezcla de los aminoácidos no-N-alquilados y los aminoácidos N-alquilados de los péptidos.
Un "conjugado anticuerpo-fármaco" o "ADC" es un anticuerpo que se conjuga a una o más citotoxinas, a través de uno o más ligadores. Un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) puede ser de la fórmula A-L-CTX, en la que A es un anticuerpo, L es un ligador y CTX es una citotoxina.
En el contexto de un polipéptido, el término "análogo" como se utiliza en la presente memoria se refiere a un polipéptido que posee una función similar o idéntica como un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo anti-C10orf54 pero no necesariamente comprende una secuencia de aminoácidos similar o idéntica de un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo anti-C10orf54, o posee una estructura similar o idéntica de un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo anti-C10orf54. Un polipéptido que presenta una secuencia similar de aminoácidos se refiere a un polipéptido que satisface por lo menos uno de los siguientes: (a) un polipéptido que presenta una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 30%, por lo menos 35%, por lo menos 40%, por lo menos 45%, por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95% o por lo menos un 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos de un polipéptido de C10orf54 (por ejemplo SEC ID N°: 1079), un fragmento de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo anti-C10orf54 descrito en la presente memoria; (b) un polipéptido codificado por una secuencia de nucleótidos que hibrida bajo estrictas condiciones a una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54, o anticuerpo anti-C10orf54 (o región VH o VL de la misma) descrito en la presente memoria de por lo menos 5 residuos de aminoácidos, por lo menos 10 residuos de aminoácidos, por lo menos 15 residuos de aminoácidos, por lo menos 20 residuos de aminoácidos, por lo menos 25 residuos de aminoácidos, por lo menos 40 residuos de aminoácidos, por lo menos 50 residuos de aminoácidos, por lo menos 60 residuos de aminoácidos, por lo menos 70 residuos de aminoácidos, por lo menos 80 residuos de aminoácidos, por lo menos 90 residuos de aminoácidos, por lo menos 100 residuos de aminoácidos, por lo menos 125 residuos de aminoácidos o por lo menos 150 residuos de aminoácidos (ver, por ejemplo, Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY); y (c) un polipéptido codificado por una secuencia de nucleótidos que es por lo menos 30%, por lo menos 35%, por lo menos 40%, por lo menos 45%, por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95% o por lo menos 99% idéntica a la secuencia de nucleótidos que codifican un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54, o anticuerpo anti-C10orf54 (o región VH o VL de la misma) descrito en la presente memoria. Un polipéptido con una estructura similar a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo anti-C10orf54 descrito en la presente memoria se refiere a un polipéptido que presenta una estructura secundaria, terciaria o cuaternaria similar de un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un C10orf54 o un anticuerpo C10orf54 descrito en la presente memoria. La estructura de un polipéptido puede determinarse por métodos conocidos por unn experto en la materia, incluyendo, pero no limitándose a, cristalografía de rayos x, resonancia magnética nuclear y la microscopía electrónica cristalográfica.
Como se utiliza en la presente memoria, un "antagonista" o "inhibidor" de C10orf54 se refiere a una molécula que es capaz de inhibir o de lo contrario disminuir una o más de las actividades biológicas de C10orf54, tal como en una célula que expresa C10orf54 o en una célula que expresa un ligando de C10orf54, tales como un receptor de C10orf54. En algunos aspectos, un antagonista de C10orf54 (por ejemplo, un anticuerpo antagonista proporcionado en la presente memoria) puede, por ejemplo, actuar inhibiendo o de lo contrario disminuyendo la activación y/o las vías de señalización celular de la célula que expresa un C10orf54 o un receptor de C10orf54, inhibiendo así una actividad biológica de la célula mediada por C10orf54 respecto a la actividad biológica mediada por C10orf54 en ausencia del antagonista. En algunos aspectos los anticuerpos proporcionados en la presente memoria son anticuerpos anti-C10orf54 antagonistas.
Los términos "anticuerpo" y "inmunoglobulina" o "Ig" se utilizan indistintamente en la presente memoria y están destinados a incluir un producto de polipéptido de células de B dentro de la clase de inmunoglobulina de polipéptidos que es apta para unirse a un antígeno específico molecular y comprende dos pares idénticos de cadenas polipeptídicas, en los que cada par presenta una cadena pesada (alrededor de 50-70 kDa) y una cadena ligera (alrededor de 25 kDa) y cada porción amino terminal de cada cadena incluye una región variable de alrededor de 100 a alrededor de 130 o más aminoácidos y cada porción carboxi-terminal de cada cadena incluye una región constante (Ver, Borrebaeck (ed.) (1995) Antibody Engineering, segunda Ed., Oxford University Press.; Kuby (1997) Immunology, tercera Ed., W.H. Freeman and Company, New York). En unos aspectos específicos, el antígeno molecular específico puede ser enlazado por un anticuerpo proporcionado en la presente memoria que incluye el polipéptido, fragmento o epítopo de C10orf54 diana.
Los anticuerpos también incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos sintéticos, anticuerpos monoclonales, anticuerpos producidos por vía recombinante, anticuerpos multiespecíficos (incluyendo anticuerpos biespecíficos), anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos camelizados, anticuerpos quiméricos, intracuerpos, anticuerpos anti-idiotípico (anti-Id) y fragmentos funcionales de cualquiera de las anteriores, que se refiere a una parte de un polipéptido de cadena pesada o ligera de anticuerpo que retiene parte o la totalidad de la actividad de unión del anticuerpo del que deriva el fragmento. Los ejemplos no limitativos de fragmentos funcionales incluyen Fvs de cadena simple (scFv) (por ejemplo, incluyendo monoespecíficos, biespecíficos, etc.), fragmentos Fab, fragmentos F(ab'), fragmentos F(ab)2, fragmentos F(ab')2, Fvs unidos a disulfuro Fvs (sdFv), fragmentos Fd, fragmentos Fv, diacuerpo, triacuerpo, teracuerpo y minicuerpo. En particular, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria incluyen moléculas de inmunoglobulina y porciones inmunológicamente activas de moléculas de inmunoglobulina, por ejemplo, dominios de unión a antígeno o moléculas que contienen un sitio de unión de antígeno que se une a un antígeno C10orf54 (por ejemplo, una o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) de un anticuerpo anti-C10orf54). Dichos fragmentos de anticuerpo pueden encontrarse descritos en, por ejemplo, Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989); Myers (ed.), Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, New York: VCH Publisher, Inc.; Huston et al., Cell Biophysics, 22:189-224 (1993); Plückthun and Skerra, Meth. Enzymol:., 178:497-515 (1989) y en Day, E.D., Advanced Immunochemistry, segunda Ed., Wiley-Liss, Inc., New York (1990). Los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), cualquier clase (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2), o cualquier subclase (por ejemplo, IgG2a e IgG2b) de la molécula de inmunoglobulina. Unos anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria pueden ser anticuerpos agonistas o anticuerpos antagonistas.
Los términos "anticuerpos que se unen específicamente a C10orf54," "anticuerpos que se unen específicamente a un epítopo de C10orf54", "anticuerpos anti-C10orf54" y términos análogos también se utilizan indistintamente en la presente memoria y se refieren a los anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de C10orf54, tal como antígeno o epítopo de C10orf54. Dichos anticuerpos incluyen anticuerpos humanizados. Un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno C10orf54 puede ser de reacción cruzada con los antígenos relacionados. En algunos aspectos, un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno C10orf54 no presenta una reacción cruzada con otros antígenos. Un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno C10orf54 puede identificarse, por ejemplo, por inmunoensayos, BIAcore u otras técnicas que conoce en experto en la materia. Un anticuerpo se une específicamente a un antígeno C10orf54 cuando se une a un antígeno C10orf54 con mayor afinidad que a cualquier antígeno de reacción cruzada como se determina utilizando técnicas experimentales, tales como el radioinmunoanálisis (RIA) y los ensayos por inmunoabsorción ligados a enzima (ELISA). Típicamente una reacción específica o selectiva será por lo menos dos veces la señal o ruido de fondo y más típicamente más de 10 veces el fondo. Ver, por ejemplo, Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York en páginas 332-336 para una discusión sobre la especificidad del anticuerpo. En algunos aspectos, un anticuerpo "que se une a" un antígeno de interés es uno que se une al antígeno con afinidad suficiente tal que el anticuerpo es útil como un agente diagnóstico y/o terapéutico en la dianización de una célula o tejido que expresa el antígeno y no presenta una reacción cruzada de manera significativa con otras proteínas. En dichos aspectos, el grado de unión del anticuerpo a una proteína "no diana" será menos de alrededor de 10% de la unión del anticuerpo a su proteína diana particular según lo determinado por análisis de clasificación celular activada por fluorescencia (FACS) o radioinmunoprecipitación (RIA). Con respecto a la unión de un anticuerpo a una molécula diana, el término "unión específica" o "específicamente se une a" o es "específico para" un polipéptido particular o un epítopo en una diana de polipéptido particular significa una unión que es diferente de manera medible de una interacción no específica. La unión específica puede medirse, por ejemplo, mediante la determinación de la unión de una molécula en comparación con la unión de una molécula de control, que es generalmente una molécula de estructura similar que no presenta actividad de unión. Por ejemplo, la unión específica puede determinarse por la competencia con una molécula de control similar a la diana, por ejemplo, un exceso de diana no marcada. En este caso, la unión específica se indica si la unión de la diana marcada a una sonda es inhibida de manera competitiva por diana no marcada en exceso. El término "unión específica" o "específicamente se une a" o es "específico para" un polipéptido particular o un epítopo en una diana de polipéptido particular como se utiliza en la presente memoria puede ser exhibido, por ejemplo, por una molécula con un Kd para la diana de por lo menos alrededor de 10-4 M, como alternativamente por lo menos alrededor de 10-5 M, alternativamente por lo menos alrededor de 10-6 M, alternativamente por lo menos alrededor de 10-7 M, alternativamente por lo menos alrededor de 10-8 M, alternativamente por lo menos alrededor de 10-9 M, alternativamente por lo menos alrededor de 10-10 M, alternativamente por lo menos alrededor de 10-11 M, alternativamente por lo menos alrededor de 10-12 M, o mayor. En un aspecto, el término "unión específica" se refiere a una unión en la que una molécula se une a un polipéptido particular o epítopo en un polipéptido particular sin unirse de manera sustancial a cualquier otro polipéptido o epítopo de polipéptido. En algunos aspectos, un anticuerpo que se une a C10orf54 presenta una constante de disociación (Kd) de <1pm, <100 nM, <10 nM, <1nM < o < 0.1nM. En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 se une a un epítopo de C10orf54 que se conserva de entre C10orf54 de especies diferentes.
Un "anticuerpo anti-c10orf54" o "un anticuerpo que se une a C10orf54" se refiere a un anticuerpo capaz de unirse a C10orf54, incluyendo, por ejemplo, un anticuerpo, con afinidad suficiente tal que el anticuerpo es útil como un agente diagnóstico y/o terapéutico en la dianización de C10orf54. Tales anticuerpos incluyen anticuerpos humanizados. Preferentemente, el grado de unión de un anticuerpo anti-C10orf54 a una proteína no C10orf54, no relacionada, es menos de alrededor de 10% de la unión de anticuerpo a C10orf54 medido, por ejemplo, por análisis de clasificación celular activada por fluorescencia (FACS) o un radioinmunoanálisis (RIA). Un anticuerpo que ' "específicamente se une a" o es "específico para" C10orf54 se define como anteriormente. En algunos aspectos, un anticuerpo que se une a C10orf54 presenta una constante de disociación (Kd) de < 1 pM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, o < 0.1 nM. En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 se une a un epítopo de C10orf54 que se conserva de entre C10orf54 de especies diferentes.
Un "antígeno" es un antígeno determinado al que un anticuerpo puede unirse selectivamente. El antígeno diana puede ser un polipéptido, carbohidrato, ácido nucleico, lípido, hapteno u otro compuesto natural o sintético. En unos aspectos específicos, el antígeno diana es un polipéptido.
El término "fragmento de unión a antígeno," "dominio de unión a antígeno," "región de unión a antígeno" y términos similares se refieren a aquella parte de un anticuerpo que comprende los residuos de aminoácidos que interactúan con un antígeno y otorgan al agente de unión su especificidad y afinidad por el antígeno (por ejemplo, la regiones determinantes de complementariedad (CDR)).
Los términos "se une" o "unión" como se utilizan en la presente memoria se refieren a una interacción entre las moléculas para formar un complejo. Las interacciones pueden ser, por ejemplo, interacciones no covalentes, incluyendo enlaces de hidrógeno, enlaces iónicos, interacciones hidrófobas y/o interacciones de van der Waals.
Un complejo puede incluir también la unión de dos o más moléculas unidas por enlaces, interacciones o fuerzas covalentes o no covalentes. La fuerza de las interacciones no covalentes totales entre un solo sitio de unión a antígeno en un anticuerpo y un solo epítopo de una molécula diana, tal como C10orf54, es la afinidad del anticuerpo 0 fragmento funcional para ese epítopo. La relación de asociación (ki) disociación (k-i) de un anticuerpo a un antígeno monovalente (ki/ k-i) es la constante de asociación K, que es una medida de la afinidad. El valor de K varía para los diferentes complejos de anticuerpo y antígeno y depende de ambas ki y k-i. La constante de asociación K para un anticuerpo proporcionado en la presente memoria puede ser determinada mediante cualquier método proporcionado en la presente memoria o cualquier otro método bien conocido por un experto en la materia. La afinidad en el sitio de unión no siempre refleja la verdadera fuerza de la interacción entre un anticuerpo y un antígeno. Cuando antígenos de complejo que contienen determinantes antigénicos repetitivos, múltiples, tales como un C10orf54 polivalente, entran en contacto con los anticuerpos que contienen múltiples sitios de unión, la interacción del anticuerpo con el antígeno en un sitio aumentará la probabilidad de una reacción en un segundo sitio. La fuerza de estas interacciones múltiples entre un anticuerpo multivalente y un antígeno se denomina avidez. La avidez de un anticuerpo puede ser una mejor medida de su capacidad de unión que es la afinidad de sus sitios de unión individuales. Por ejemplo, una alta avidez puede compensar la baja afinidad como a veces se encuentra para los anticuerpos IgM pentaméricos, que pueden tener una menor afinidad de IgG, pero la alta avidez de IgM, que es resultado de su multivalencia, le permite unirse al antígeno de manera eficaz.
El término "C10orf54" o " polipéptido de C10orf54 " y términos similares se refieren al polipéptido ("polipéptido", "péptido" y "proteína" se utilizan indistintamente en la presente memoria) codificado por el gen humano del cromosoma 10 de marco de lectura abierto 54 (C10orf54), que también se conoce en la materia como B7-H5, receptor de plaquetas Gi24, GI24, proteína secretada inducida por estrés Protein1, SISP1 y PP2135, que comprende la secuencia de aminoácidos:
1 mgvptaleag swrwgsllfa lflaaslgpv aafkvatpys lyvcpegqnv tltcrllgpv
61 dkghdvtfyk twyrssrgev qtcserrpir nltfqdlhlh hgghqaants hdlaqrhgle
121 sasdhhgnfs itmrnltlld sglycclvve irhhhsehrv hgamelqvqtgkdapsncvv
181ypsssqdsen itaaalatga civgilclpl illlvykqrq aasnrraqel vrmdsniqgi
241enpgfeaspp aqgipeakvrhplsyvaqrq psesgrhlls epstplsppg pgdvffpsld
301pvpdspnfev I (SEQIDNO:1079)
y polipéptidos relacionados, incluyendo sus variantes SNP. El polipéptido de C10orf54 ha demostrado o se prevé que comprende varias regiones distintas dentro de la secuencia de aminoácido, incluyendo: una secuencia señal (residuos 1-32; Ver Zhang et al., Protein Sci. 13:2819-2824 (2004)); un dominio de inmunoglobulina similar a IgV (residuos 33-162); y una región transmembrana (residuos 195-215). La proteína C10orf54 madura incluye los restos de aminoácidos 33-311 de SEC ID N°: 1079. El dominio extracelular de la proteína C10orf54 incluye los residuos de aminoácidos 33-194 de SEC ID N°: 1079. Los polipéptidos relacionados incluyen variantes alélicas (por ejemplo, variantes SNP); variantes de corte y empalme; fragmentos; derivados; sustitución, eliminación y variantes de inserción; polipéptidos de fusión (porejemplo, proteínas quiméricas); y homólogos entre las especies, preferentemente, que conservan actividad de C10orf54 y/o son suficientes para generar una respuesta inmunitaria anti-C10orf54. Como apreciarán los expertos en la materia, un anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria puede unirse a un polipéptido, fragmento de polipéptido, antígeno y/o epítopo de C10orf54, como un epítopo forma parte del antígeno mayor, que es parte del fragmento del polipéptido más grande, que a su vez, es parte del polipéptido más grande. C10orf54 puede existir en una forma desnaturalizada o natural. Los polipéptidos de C10orf54 descritos en la presente memoria pueden ser aislados de una variedad de fuentes, tales como tipos de tejido humano o de otra fuente, o preparados por métodos recombinantes o sintéticos. Un “polipéptido de C10orf54 de secuencia natural” comprende un polipéptido que presenta la misma secuencia de aminoácidos que el polipéptido de C10orf54 correspondiente derivado de la naturaleza. Dichos polipéptidos de C10orf54 de secuencia natural pueden ser aislados de la naturaleza o pueden ser producidos por medios recombinantes o sintético. El término " polipéptido de C10orf54 de secuencia natural " abarca específicamente formas secretadas o truncadas naturales del polipéptido de C10orf54 específico (por ejemplo, una secuencia de dominio extracelular), formas variantes naturales (por ejemplo, formas de corte y empalme alternativamente) y variantes alélicas naturales del polipéptido.
Una secuencia de ácidos nucleicos de ADNc que codifica el polipéptido de C10orf54 comprende:
1 atgggcgtcc ccacggccct ggaggccggc agctggcgct ggggatccct gctcttcgct
61 ctcttcctgg ctgcgtccct aggtccggtg gcagccttca aggtcgccac gccgtattcc
121 ctgtatgtct gtcccgaggggcagaacgtcaccctcacct gcaggctctt gggccctgtg
181 gacaaagggc acgatgtgaccttctacaag acgtggtacc gcagctcgaggggcgaggtg
241 cagacctgct cagagcgccggcccatccgcaacctcacgt tccaggacct tcacctgcac
301 catggaggcc accaggctgccaacaccagccacgacctgg ctcagcgccacgggctggag
361 tcggcctccg accaccatggcaacttctcc atcaccatgc gcaacctgac cctgctggat
421 agcggcctct actgctgcct ggtggtggag atcaggcacc accactcggagcacagggtc
481 catggtgcca tggagctgcaggtgcagacaggcaaagatg caccatccaactgtgtggtg
541 tacccatcct cctcccaggatagtgaaaac atcacggctg cagccctggctacgggtgcc
601 tgcatcgtag gaatcctctg cctccccctc atcctgctcc tggtctacaa gcaaaggcag
661 gcagcctcca accgccgtgcccaggagctggtgcggatgg acagcaacattcaagggatt
721 gaaaaccccg gctttgaagcctcaccacct gcccagggga tacccgaggccaaagtcagg
781 caccccctgt cctatgtggc ccagcggcagccttctgagt ctgggcggcatctgctttcg
841 gagcccagca cccccctgtctcctccaggc cccggagacg tcttcttccc atccctggac
901 cctgtccctg actctccaaa ctttgaggtc atctag (SEQIDNO:1080)
Los ortólogos del polipéptido de C10orf54 también son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, el ortólogo de ratón para el polipéptido de C10orf54 es el supresor que contiene inmunoglobulina de región V de la activación de las células T (VIs Ta ) de la célula (también conocido como PD-L3, PD-1H, PD-XL, Pro1412 y UNQ730), que comparte aproximadamente 70% de identidad de secuencia para el polipéptido humano. Los ortólogos de C10orf54 pueden encontrarse también en organismos adicionales incluyendo chimpancés, vaca, rata y pez cebra.
Una "célula que expresa C10orf54," "una célula que presenta expresión de C10orf54" o un equivalente gramatical de la misma se refiere a una célula que expresa C10orf54 endógeno o transfectado sobre la superficie celular. Las células que expresan C10orf54 incluyen unas células tumorales portadoras de C10orf54, las células tumorales reguladoras (por ejemplo, células T reguladoras CD4+ Foxp3+), células supresoras derivadas de mieloides (por ejemplo, células supresoras derivadas de mieloides CD11b+ o CD11balta) y/o células dendríticas supresoras (por ejemplo, células dendríticas CD11b+ o CD11balta). Una célula que expresa C10orf54 produce niveles suficientes de C10orf54 en su superficie, de manera que un anticuerpo anti-C10orf54 puede unirse al mismo. En algún aspecto, dicha unión puede tener un efecto terapéutico en relación con el cáncer. Una célula que "sobreexpresa" C10orf54 es una que presenta niveles significativamente superiores de C10orf54 en la superficie de la célula de la misma, en comparación a una célula del mismo tipo de tejido que se conoce para expresar C10orf54. Dicha sobreexpresión puede ser causada por la amplificación génica o por transcripción o traducción aumentada. La sobreexpresión de C10orf54 puede determinarse en un ensayo de diagnóstico o pronóstico evaluando los niveles aumentados de la proteína C10orf54 presente en la superficie de una célula (porejemplo, a través de un ensayo inmunohistoquímico; análisis FACS). Alternativamente, o adicionalmente, uno puede medir los niveles de ácido nucleico que codifica C10orf54 o ARNm en la célula, por ejemplo, mediante hibridación in situ fluorescente; (FISH; ver el documento W098/45479 publicado en octubre de 1998), técnicas de transferencia Southern, transferencia Northern o de reacción en cadena de polimerasa (PCR), tal como PCR cuantitativa en tiempo real (RT-PCR). Aparte de los ensayos anteriores, varios ensayos in vivo están disponibles para el profesional experto. Por ejemplo, se puede exponer a las células dentro del cuerpo del paciente a un anticuerpo que opcionalmente se etiqueta con un agente detectable, y puede ser evaluada la unión de los anticuerpos a las células en el paciente, por ejemplo, mediante la exploración externa de radiactividad o mediante el análisis de una biopsia de un paciente previamente expuesto al anticuerpo. Una célula tumoral que expresa C10orf54 incluye, pero no se limita a, las células tumorales de leucemia mieloide aguda (AML).
Una "enfermedad mediada por C10orf54," "trastorno mediado por C10orf54" y "afección mediada por C10orf54" se usan indistintamente y se refieren a cualquier enfermedad, trastorno o afección que es totalmente o parcialmente causado por o es el resultado de C10orf54. Tales enfermedades, trastornos o afecciones incluyen los causados por o de otra manera asociados con C10orf54, incluyendo por o asociados a células que expresan C10orf54 (por ejemplo, células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células supresoras dendríticas (DC supresoras) y/o las células T reguladoras (T regs)). En algunos aspectos, C10orf54 se expresa de manera aberrante (por ejemplo, de manera elevada) sobre la superficie de una célula. En algunos aspectos, C10orf54 puede sobrerregularse de manera aberrante en un tipo de célula particular. En otros aspectos, la señalización celular normal, aberrante o excesiva es causado por la unión de C10orf54 a un ligando de C10orf54, que se puede unir o de otra manera interactuar con C10orf54.
Los términos "trastorno proliferativo celular" y "trastorno proliferativo" se refieren a trastornos que se asocian con algún grado de proliferación celular anormal. En un aspecto, el trastorno proliferativo celular es un tumor o cáncer. "Tumor" como se utiliza en la presente memoria, se refiere a todo crecimiento y proliferación de células neoplásicas, ya sean malignos o benignos y todos los tejidos y las células precancerosas y cancerosas. Lo términos "cáncer," "canceroso", "trastorno proliferativo celular", "trastorno proliferativo" y "tumor" no son mutuamente excluyentes como se hace referencia en la presente memoria. Los términos "cáncer" y "canceroso" se refieren a o describen el estado fisiológico en los mamíferos que típicamente se caracteriza por crecimiento celular no regulado. Los ejemplos de cáncer incluyen, pero no se limitan a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia o malignidades linfoides. Unos ejemplos más particulares de tales cánceres incluyen el cáncer de células escamosas (por ejemplo, cáncer de células escamosas epiteliales), cáncer de pulmón, incluyendo cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, adenocarcinoma del pulmón y el carcinoma escamoso del pulmón, cáncer del peritoneo, cáncer hepatocelular cáncer gástrico o de estómago incluyendo cáncer gastrointestinal, cáncer pancreático, glioblastoma, cáncer de cuello uterino, cáncer ovárico, cáncer oral, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, cáncer del tracto urinario, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de glándulas salivales, cáncer de riñón o renal, cáncer de próstata, cáncer vulvar, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma de pene, melanoma, mieloma múltiple y linfoma de células B, cáncer cerebral, cáncer de la piel, cáncer del esófago, así como cáncer de cabeza y cuello y asociados a las metástasis.
El término "portador" se refiere a un diluyente, adyuvante (por ejemplo, adyuvante de Freund (completo e incompleto)), excipiente o vehículo con el cual se administra la terapia. Dichos portadores farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo los de petróleo, origen animal, vegetal o sintético, tales como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. El agua es un portador ejemplificativo cuando la composición farmacéutica se administra por vía intravenosa. Las soluciones salinas y la dextrosa acuosa y las soluciones de glicerol se pueden utilizar también como portadores líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche descremada seca, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y similares. La composición, si se desea, también puede contener pequeñas cantidades de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes de amortiguación de pH. Estas composiciones pueden adoptar la forma de soluciones, suspensiones, emulsión, comprimidos, píldoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida y similares. La formulación oral puede incluir portadores estándares tales como grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, celulosa, carbonato de magnesio, etc. Los ejemplos de portadores farmacéuticos adecuados se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA. Tales composiciones contendrán una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz del anticuerpo, por ejemplo, en forma aislada o purificada, junto con una cantidad adecuada del portador con el fin de proporcionar la forma para la administración adecuada para el paciente. La formulación debe adaptarse al modo de administración.
El término "grupo químico", como se utiliza en la presente memoria, se refiere a dos o más átomos unidos como una sola unidad y formando parte de una molécula.
Un "agente quimioterápico" es un agente químico (por ejemplo, compuesto o fármaco) útil en el tratamiento del cáncer, independientemente del mecanismo de acción. Los agentes quimioterápicos incluyen compuestos usados en terapia dirigida y quimioterapia convencional. Los ejemplos de agentes quimioterápicos incluyen, pero no se limitan a, los agentes alquilantes tales como tiotepa y CYTOXAN® ciclofosfamida; sulfonatos de alquilo como busulfán, improsulfán y piposulfán; aziridinas como benzodopa, carbocuona, meturedopa y uredopa; etiloeniminas y metiloamelaminas incluyendo la altretamina, trietiloenmelamina, trietilenfosforamida, trietiilentiofosforamida y trimetilolomelamina; acetogeninas (especialmente bullatacina y bullatacinona); delta-9-tetrahidrocannabinol (dronabinol, AR1NOL®); beta-lapacona; lapacol; colquicinas; ácido betulínico; una camptotecina (incluyendo el topotecán análogo sintético (HYCAMTIN®), CPT-11 (irinotecán, CAMPTOSAR®), acetilcamptotecina, escopolectina y 9-aminocamptotecina); briostatina; callistatina; CC-1065 (incluyendo sus análogos sintéticos adocelesina, carcelesina y bicelesina); podofilotoxina; ácido podofilínico; tenipósido; criptoficinas (particularmente criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluyendo los análogos sintéticos, KW-2189 y CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; una sarcodictiina; espongistatina; mostazas de nitrógeno tal como clorambucilo, clornafacina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalán, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosureas tal como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustinay ranimnustina; antibióticos tales como antibióticos de enediina (por ejemplo, calicheamicina, especialmente calicheamicina gamma I y calicheamicina omega II (ver, por ejemplo, Agnew, Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186 (1994)); dinemicina, incluyendo dinemicinaA; una esperamicina; así como cromóforo de neocarcinostatina y cromóforos de antibiótico de enediina de cromoproteína relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, caminomicina, carcinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, ADRIAMYCIN®, doxorrubicina (incluyendo morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolinodoxorrubicina y desoxidoxorrubicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas tales como la mitomicina C, el ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina; antimetabolitos tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos del ácido fólico como denopterina, metotrexato, pteropterina, , trimetrexato; análogos de purinas tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos como calusterona, dromostanolona propionato, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; anti-suprarrenales tales como la aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reabastecedor de ácido fólico como ácido frolínico; aceglatona; aldofosfamida glucósido; ácido aminolevulínico; eniluracil; amsacrina; bestrabucil; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diacicuona; elfornitina; acetato de eliptinio; epotilona; etoglucida; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinano; lonidainina; maitansionides tales como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; losoxantrona; 2-etilhidracida; procarbacina; complejo de polisacárido PSK® (JHS Natural Products, Eugene, Oreg.); razoxano; rizoxina; sizofurano; espirogermanio; ácido tenuazónico; triacicuona; 2,2’,2’’-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano; vindesina (ELDDISINE®, FILDESIN®); dacarbacina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinósido (“Ara-C”); tiopeta; taxoides, por ejemplo, TAXOL® paclitaxel (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE™ libre de Cremophor, formulación de nanopartículas genomanipulados de albúmina de paclitaxel (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, IL.), y TAXOTERE® doxetaxel (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, Francia); cloranbucil; gencitabina (GEMZAR®); 6-tiogguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platino tales como cisplatino y carboplatino; vinblastina (VELBAN®); platino; etopósido (VP-16); ifosfamina; mitoxantrona; vincristina (ONCOVIN®) oxaliplatino; leucovovina; vinorelbina (NAVELBINE®); novantrona; edatrexato; daunomicina; aminopterina; ibandronato; inhibidor de la topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides tales como ácido retinoico; capecitabina (XELODA®); sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores; así como combinaciones de dos o más de los anteriores tales como CHOP, una abreviatura para una terapia combinada de ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina y prednisolona, y FOLFOX, una abreviatura para un régimen de tratamiento con oxaliplatino (ELOXATIN™) combinado con 5-FU y leucovovina. Los agentes quimioterápicos adicionales incluyen agentes citotóxicos útiles como conjugados anticuerpo-fármaco, tales como maitansionides (DM1 y DM4, por ejemplo) y auristatinas (MMAE y MMAF, por ejemplo).
También se incluyen en la definición de agente quimioterápico: (i) agentes antihormonales que actúan para regular o inhibir la acción de la hormona en tumores tales como los moduladores de receptor de estrógeno selectivos (SERM) y antiestrógenos, incluyendo, por ejemplo, el tamoxifeno (incluyendo NOLVADEX®; citrato de tamoxifeno), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, ceoxifeno, LY 117018, onapristona y FARESTON® (citrato de toremifina); (ii) inhibidores de la aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, que regula la producción de estrógeno en las glándulas suprarrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, MEGASE® (acetato de megestrol), AROMASIN® (exemestano; Pfizer), formestanie, fadrozol, RI VISor® (vorozol), FEMARA® (letrozol; Novartis,) y ARIMIDEX® (anastrozol; AstraZeneca); (iii) los antiandrógenos como la flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina; así como troxacitabina (un análogo de 1, 3-dioxolano nucleósido citosina); (iv) inhibidores de la proteína cinasa como inhibidores ME (documento WO 2007/044515); (v) inhibidores de la cinasa lipídica; (vi) oligonucleótidos antisentido, particularmente aquellos que inhiben la expresión de genes en vías de señalización implicadas en la proliferación celular aberrante, por ejemplo, PKC-alfa, Raf y H-Ras, como oblimersen (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) ribozimas tales como inhibidores de la expresión de VEGF (por ejemplo, ANGIOZYME®) y los inhibidores de la expresión del HER2; (viii) las vacunas tales como vacunas de terapia génica, por ejemplo, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® y VAX1D®; PROLEUKIN® rIL-2; inhibidores de la topoisomerasa 1 tales como LURTOTECAN®; ABARELIX® mRH; (ix) agentes antiangiógenos tales como bevacizumab (AVASTIN®, Genentech), y sales, ácidos y derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
Los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden incluir anticuerpos "quiméricos” en los que una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica con u homóloga a unas secuencias correspondientes en los anticuerpos derivados de una especie particular o perteneciente a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la(s) cadena(s) es idéntico con u homólogo a unas secuencias correspondientes en los anticuerpos derivados de otra especie o pertenecientes a otra clase o subclase de anticuerpo, así como fragmentos de tales anticuerpos, mientras que exhiben la actividad biológica deseada (ver la patente US n° 4.816.567; y Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)).
Como se utiliza en la presente memoria, el término "composición" está destinado a abarcar un producto que contiene los ingredientes especificados (por ejemplo, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria) en, opcionalmente, las cantidades, así como cualquier producto que resulta, directa o indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados en, opcionalmente, las cantidades especificadas.
Una "CDR" hace referencia a una de las tres regiones hipervariables (H1, H2 o H3) dentro de la región no estructural de la estructura de lámina-p VH de inmunoglobulina (Ig o anticuerpo), o una de las tres regiones hipervariables (L1, L2 o L3) dentro de la región no estructural de la estructura de lámina-p VL de anticuerpo. Así, las CDR son secuencias de región variable intercaladas dentro de las secuencias de la región estructural. Las regiones de CDR son bien conocidas por los expertos en la materia y han sido definidas por, por ejemplo, Kabat como las regiones de mayor hipervariabilidad dentro de los dominios variables (V) de anticuerpo (Kabat et al., J. Biol Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat, ADV. Prot. Chem. 32:1-75 (1978)). Las secuencias de la región de CDR también han sido definidas estructuralmente por Chothia como aquellos residuos que no son parte de la estructura de lámina-p y por lo tanto son capaces de adaptarse a diferentes conformaciones (Chothia y Lesk, Bandeo J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Ambas terminologías están reconocidas en la materia. Las secuencias de la región de CDR también han sido definidas por la AbM, Contact e IMGT Las secuencias de la región de CDR se ilustran en las figuras 16A y 16B. Las posiciones de CDR dentro de un dominio variable de anticuerpo canónico han sido determinadas por comparación de numerosas estructuras (Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997); Morea et al., Methods 20:267-279 (2000)). Debido a que el número de residuos dentro de una región hipervariable varía en los diferentes anticuerpos, unos residuos adicionales en relación con las posiciones canónicas se numeran convencionalmente con a, b, c, etc. junto al número de residuo en el esquema de numeración de dominio variable canónico (Al-Lazikani et al., supra (1997)). Tal nomenclatura es igualmente bien conocida por los expertos en la materia.
El término "región hipervariable", "HVR", o "HV", cuando se utiliza en la presente memoria se refiere a las regiones de un dominio variable de anticuerpos que son hipervariables en secuencia y/o forman bucles estructuralmente definidos. Generalmente, los anticuerpos comprenden seis regiones hipervariables; tres en VH (H1, H2, H3) y tres en VL (Ll, L2, L3). Un número de delineaciones de región hipervariable está en uso y se abarca en la presente memoria. Las CDR de Kabat se basan sobre la variabilidad de secuencia y son los más utilizadas comúnmente (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Ed 5. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Chothia se refiere en cambio a la situación de los bucles estructurales (Chothia y Lesk Bandeo J Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). El final del bucle CDR-HI de Chothia cuando se numera utilizando la convención de numeración de Kabat varía entre H32 y H34 dependiendo de la longitud del bucle (esto es porque el esquema de numeración de Kabat coloca las inserciones h 35A y H35B; si ni 35A ni 35B están presentes, el bucle termina en 32, si solo 35A está presente, el bucle termina en 33; si están presentes 35A y 35B el bucle termina en 34). Las regiones hipervariables de AbM representan un compromiso entre las CDR de Kabat y los bucles estructurales de Chothia y se utilizan por el software de modelado de anticuerpo AbM de Oxford Molecular. Las regiones hipervariables de "contacto" se basan en un análisis de las estructuras cristalinas complejas disponibles. Los residuos de cada una de estas regiones hipervariables se indica a continuación.
Recientemente, un sistema de numeración universal ha sido desarrollado y adoptado extensamente, ImMunoGenetics (IMGT) Information System® (Lafranc et al., Dev. Comp Immunol. 27 (1): 55-77 (2003)). IMGT es un sistema integrado de información especializado en las inmunoglobulinas (IG), receptores de células T (TR) y el complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de humano y otros vertebrados. En la presente memoria, las CDR se refieren en términos de la secuencia del aminoácido y la ubicación dentro de la cadena ligera o pesada. Como la "situación" de las CDR dentro de la estructura del dominio variable de la inmunoglobulina es conservada entre especies y presente en estructuras llamadas bucles, usando sistemas de numeración que alinean las secuencias de dominio variable según las características estructurales, CDR y residuos estructurales y se identifican fácilmente. Esta información puede ser utilizada en el injerto y el reemplazo de residuos CDR de inmunoglobulinas de una especie en una estructura de aceptor de, típicamente, un anticuerpo humano. La correspondencia entre la numeración de Kabat y el sistema de numeración único de IMGT es asimismo bien conocida por el experto en la materia (por ejemplo Lefranc et al., supra) y también es ilustrada en las figuras 16A y 16B. Un sistema ejemplificativo, que se muestra en la presente memoria, combina Kabat y Chothia.
Tabla 1: Definiciones de CDR
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Las regiones hipervariables pueden comprender "regiones hipervariables extendidas" como sigue: 24-36 o 24-34 (Ll), 46-56 o 50-56 (L2) y 89-97 o 89-96 (L3) en el VL y 26-35 o 26-35A (H1), 50-65 o 49-65 (H2) y 93-102, 94-1 02 o 95-102 (H3) en el VH. Los residuos del dominio variable son 25 numerados según Kabat et al., supra, para cada una de estas definiciones. Como se utiliza en la presente memoria, se usan indistintamente los términos "HVR" y "CDR".
El término "región constante" o "dominio constante" se refiere a una porción terminal carboxilo de la cadena ligera y pesada que no participa directamente en la unión del anticuerpo al antígeno pero exhibe varias funciones efectoras, como interacción con el receptor Fc. Los términos se refieren a la porción de una molécula de inmunoglobulina con una secuencia de aminoácidos más conservada en relación con la otra porción de la inmunoglobulina, el dominio variable, que contiene el sitio de unión a antígeno. El dominio constante contiene los dominios CH1, CH2 y CH3 de la cadena pesada y el dominio de CL de la cadena ligera.
El término "cicloalquilo," como se utiliza en la presente memoria, significa un radical monocíclico o policíclico que contiene solamente carbono e hidrógeno e incluye los que están saturados, insaturados parcialmente o insaturados completamente. Los grupos cicloalquilo grupos que presentan de 3 a 10 átomos de anillo.
En el contexto de un polipéptido, el término "derivado" como es usado en la presente memoria se refiere a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo que se une a un polipéptido de C10orf54 que ha sido alterado por la introducción de sustituciones, supresiones o adiciones de residuo de aminoácido. El término "derivado" como es usado en la presente memoria también se refiere a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo que se une a un polipéptido de Cl0orf54 que ha sido modificado químicamente, por ejemplo, por la fijación covalente de cualquier tipo de molécula del polipéptido. Por ejemplo, pero no como limitación, un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de Cl0orf54 o un anticuerpo de C10orf54 puede ser modificado químicamente, por ejemplo, por glucosilación, acetilación, pegilación, fosforilación, amidación, derivación mediante grupos protectores/de bloqueo conocidos, escición proteolítica, ligación a un ligando celular u otra proteína, etc. Los derivados se modifican de una manera diferente a los péptidos o polipéptidos de partida o naturales, en el tipo o localización de las moléculas adjuntas. Los derivados incluyen además la eliminación de uno o más grupos químicos que están naturalmente presentes en el péptido o polipéptido. Un derivado de un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo de C10orf54 puede ser modificado químicamente por modificaciones químicas utilizando técnicas conocidas por el experto en la materia, incluyendo, sin limitarse a, escisión química específica, acetilación, formulación, síntesis metabólica de tunicamicina, etc. Además, un derivado de un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54, o un anticuerpo de C10orf54 puede contener uno o más aminoácidos no clásicosd. Un derivado de polipéptido posee una función similar o idéntica a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo de C10orf54 descrito en la presente memoria.
El término "agente citotóxico" o "citotoxina" o "CTX" en la presente memoria se refiere a una sustancia que inhibe o previene la función de células y/o presenta un efecto citotóxico sobre las células (por ejemplo, causa la destrucción de las células). El término pretende incluir alquilantes agentes antraciclinas, disruptores citoesqueléticos (taxanos), epotilonas, un inhibidor de histona desacetilasa (HDAC), un inhibidor de la topoisomerasa I, un inhibidor de la topoisomerasa II, un inhibidor de la cinasa, unos anticuerpos monoclonales, un análogo de nucleótido, un antibiótico de péptido, un agente a base de platino, un retinoide, un alcaloide de la Vinca o un derivado del mismo y radioisótopos. El término está destinado asimismo a incluir actinomicina, ácido retinóico todo-trans, azacitidina, azatioprina, bleomicina, bortezomib, carboplatino, capecitabina, cisplatino, clorambucil, ciclofosfamida, citarabina, daunorrubicina, docetaxel, doxifluridina, doxorrubicina, epirrubicina, epotilona, etopósido, fluorouracilo, gencitabina, hidroxiurea, idarrubicina, imatinib, irinotecán, mecloretamina, mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, oxaliplatino, paclitaxel, pemetrexed, tenipósido, tioguanina, topotecán, valrubicina, vinblastina, vincristina, vindesina y vinorrelbina. El término está asimismo destinado a incluir un estabilizador de la tubulina, un desestabilizador de la tubulina, un agente alquilante de ADN, un ligante de surco menor de ADN, un intercalator de ADN, un inhibidor de topoisomerasa I, un inhibidor de topoisomerasa II, un inhibidor de la girasa, un inhibidor de la síntesis de proteína, un inhibidor de proteosoma y un anti-metabolito. El término está asimismo destinado a incluir actinomicina D, amonafida, una auristatina, benzofenona, benzotiazol, una caliqueamicina, camptotecina, CC-1065 (NSC 298223), cemadotina, colquicina, combretastatina A4, dolastatina, doxorrubicina, elinafida, emtansina (DM1), etopósido, KF-12347 (leinamicina), un maitansionide, metotrexato, mitoxantrona, nocodazol, inhibidor de proteosoma 1 (PSI 1), roridina A, toxina T-2 (análogo de tricoteceno), taxol, tubulisina, Velcade® y vincristina. Las citotoxinas preferidas incluyen una auristatina, una caliqueamicina, un maitansinoide y una tubulisina. Otras citotoxinas preferidas incluyen monometilauristatina E (MMAE) monometilauristatina F (MMAF), caliqueamicina y, mertansina, tubulisina T3 y tubulisina T4. Todavía otras citotoxinas preferidas incluyen caliqueamicina, doxorrubicina, camptotecina, duocarmicina, DM1, DM4, un maitansinoide y una tubulisina. Todavía otras citotoxinas preferidas incluyen MMAE, MMAF y una pirrolobenzodiacepina (PBD).
El término "MMAF" se refiere generalmente a monometilauristatina F, para la que un nombre químico es ácido (S)-2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-((S) -N, 3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metiloheptanoilo)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico. Un experto ordinario en la entenderá que MMAF se describe también en la materia como MeVal-Val-Dil-Dap-Phe, donde "Dil" es dolaisoleuina, y "Dap" es dolaproína.
El término "MMAE" generalmente se refiere a monometilauristatina E, para la que un nombre químico es (S)-N-((3R, 4S,5S)-1-((S)-2-((1R, 2R)-3-(((1S, 2R) -1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida.
El término "pirrolobenzodiacepina" o "pirrolobenzodiacepinas" generalmente se refiere a una familia de dímeros de pirrolo [2,1-c] [1,4] benzodiacepina (PBD) que son agentes de reticulación de ranura menor de ADN interhebra selectivos de secuencia sintéticos desarrollados a partir de antramicinas. Los ejemplos de pirrolobenzodiacepinas incluyen, pero no se limitan a, abeimicina quicamicina, DC-81, macetramicina, neotramicinas A y B, porotramicina, protracarcina, sibanomicina (DC-102), sibiromicin y tomamicina. Las pirrolobenzodiacepinas ejemplificativas incluye las divulgadas en las patentes US n° 7.049.311, 7.741.319, 8.697.688 (ver, por ejemplo, (26) en el ejemplo 5) y 8.765.740; documentos de publicación internacional n° WO 2011/130598 A1, WO 2012/112708 A1, A1 2013 WO/055987, WO 2013/165940 A1; y Jeffrey et al., Bioconjugate Chem. 2013, 24, 1256-1263 y Sutherland et al., Blood 2013, 122(8), 1455-1463.
A continuación se proporcionan las estructuras para T3 y T4:
Figure imgf000017_0001
A continuación se proporciona la estructura para MMAF:
Figure imgf000017_0002
para el cual el nombre químico es ácido (S)-2-((2R 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-((S)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metiloheptanoilo)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico. Un experto en la materia entenderá que MMAF se describe también en la materia como como MeVal-Val-Dil-Dap-Phe, donde "Dil" es dolaisoleuina, y "Dap" es dolaproína
A continuación se proporciona la estructura para MMAE:
Figure imgf000017_0003
para la que el nombre químico es "(S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-ilo)amino)-1-metoxi-2-metilo-3-oxopropilo)pirrolidin-1-ilo)-3-metoxi-5-metilo-1-oxoheptan-4-ilo)-N,3-dimetilo-2-((S)-3-metilo-2-(metiloamino)butanamido)butanamida." Un experto en la materia entiende que MMAE es descrito también en la materia como MeVal-Val-Dil-Dap-norefedrina, donde "Dil" es dolaisoleuina, y "Dap" es dolaproína”.
Las estructuras de tres PBD se proporcionan a continuación:
Figure imgf000018_0001
para las que el nombre químico es "(S)-11-hidroxi-7-metoxi-8-((5-(((S)-7-metoxi-2-metilo-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-8-ilo)oxi)pentilo)oxi)-2-metilo-1 H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-5(11aH)-ona"; y
Figure imgf000018_0002
para la que el nombre químico es "(S) -2-(4-aminofenilo)-8-(3-(((S)-2-ciclopropilo-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1, 2-a] [1,4]diacepin-8-ilo)oxi)propoxi)-7-metoxi-1 H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diacepin-5(11aH)-ona" (Ver, por ejemplo, compuesto (26) en el ejemplo 5 de la patente US n° 8.697.688); y
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para la que el nombre químico es (S)-2-(4-aminofenil)-7-metoxi-8-(3-(((S)-7-metoxi-2-(4-metoxifenil)-5-oxo-5,11adihidro-lH-benzo[e]pirrol [1,2-a][1,4]diacepin-8-il)oxi)propoxi)-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][ 1,4]diacepin-5 (11aH)-ona.
Otros agentes citotóxicos que incluyen varios agentes antitumorales o anticancerígenos son conocidos en la materia.
El término "sonda detectable", como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una composición que proporciona una señal detectable. El término incluye, sin limitación, cualquier fluoróforo, cromóforo, radioetiqueta, enzima, anticuerpo o fragmento de anticuerpo, y similares, que proporcionan una señal detectable a través de su actividad.
El término "agente de diagnóstico" se refiere a una sustancia administrada a un sujeto que ayuda en el diagnóstico de una enfermedad. Tales sustancias pueden utilizarse para revelar, identificar y definir la localización de proceso causante de enfermedad. En algunos aspectos, un agente de diagnóstico incluye una sustancia que es conjugada a un anticuerpo proporcionado en la presente memoria, cuando se administra a un sujeto o se pone en contacto con una muestra de un sujeto ayuda en el diagnóstico de cáncer, formación de tumores o cualquier otra enfermedad mediada por C10orf54.
El término "agente detectable" se refiere a una sustancia que puede utilizarse para determinar la existencia o presencia de una molécula deseada, tal como un anticuerpo proporcionado en la presente memoria, en una muestra o un sujeto. Un agente detectable puede ser una sustancia que es capaz de ser visualizada o una sustancia que de lo contrario es capaz de ser determinada y/o medida (por ejemplo, mediante cuantificación).
Una "cantidad eficaz" es una cantidad suficiente para llevar a cabo unos resultados beneficiosos o deseados. Una cantidad eficaz puede administrarse en una o más administraciones, aplicaciones o dosis. Dicho suministro es dependiente de un número de variables incluyendo el período de tiempo para el que la unidad de dosis individuales va a ser utilizada, la biodisponibilidad del agente, la vía de administración, etc. En algunos aspectos, cantidad eficaz también se refiere a la cantidad de un anticuerpo proporcionado en la presente memoria para lograr un resultado específico (por ejemplo, inhibición de una actividad biológica de C10orf54 de una célula, tal como la modulación de la activación y/o la proliferación de células T). En algunos aspectos, este término se refiere a la cantidad de una terapia (por ejemplo, un anticuerpo o composición farmacéutica proporcionados en la presente memoria) que es suficiente para reducir y/o mitigar la gravedad o duración de una determinada enfermedad y/o un síntoma relacionado con la misma. Este término también abarca una cantidad necesaria para la reducción o la mejora del avance o la progresión de una determinada enfermedad, la reducción o la mejora de la recurrencia, el desarrollo o la aparición de una determinada enfermedad, y/o para mejorar o aumentar el/los efecto(s) terapéutico(s) o profiláctico(s) de otra terapia (por ejemplo, una terapia distinta del anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria). En algunos aspectos, la cantidad eficaz de un anticuerpo es de aproximadamente 0.1 mg/kg (mg de anticuerpo por kg de peso del sujeto) a aproximadamente 100 mg/kg. En algunos aspectos, una cantidad eficaz de un anticuerpo proporcionado en la presente memoria es de alrededor de 0.1 mg/kg, alrededor de 0.5 mg/kg, alrededor de 1 mg/kg, de 3 mg/kg, 5 mg/kg, alrededor de 10 mg/kg, alrededor de 15 mg/kg, alrededor de 20 mg/kg, alrededor de 25 mg/kg, 30 mg/kg, alrededor de 35 mg/kg, alrededor de 40 mg/kg, alrededor de 45 mg/kg, alrededor de 50 mg/kg, alrededor de 60 mg/kg, alrededor de 70 mg/kg, alrededor de 80 mg/kg alrededor de 90 mg/kg o alrededor de 100 mg/kg (o un rango en la misma).
El término "grupo saliente electrófilo" como se utiliza en la presente memoria, se refiere a un grupo saliente que acepta un par de electrones para realizar un enlace covalente. En general, los electrófilos son susceptibles de ataque mediante nucleófilos complementarios, incluyendo los tioles reducidos desde el enlace de disulfuro de un anticuerpo.
El término "grupo saliente electrófilo que reacciona selectivamente con tioles," como se utiliza en la presente memoria, se refiere a un grupo saliente electrófilo que reacciona selectivamente con tioles, sobre otros nucleófilos. En algunos aspectos, un grupo saliente electrófilo que reacciona selectivamente con tioles reacciona selectivamente con los tioles reducidos a partir del enlace de disulfuro de un anticuerpo.
El término "codificar" o gramaticales equivalentes del mismo como se utiliza en referencia a la molécula de ácido nucleico se refiere a una molécula de ácido nucleico en su estado nativo o cuando se manipula por métodos bien conocidos para los expertos en la materia que se puede transcribir para producir ARNm, que se traduce a continuación en un polipéptido o su fragmento. La hebra antisentido es el complemento de tal molécula de ácido nucleico, y la secuencia de codificación puede deducirse a partir de la misma.
El término "epítopo" como se utiliza en la presente memoria se refiere a una región localizada en la superficie de un antígeno, tal como polipéptido de C10orf54 o fragmento de polipéptido de C10orf54, que es capaz de unirse a una o más regiones de unión a antígeno de un anticuerpo, y que presenta actividad antígena o inmunógena en un animal tal como un mamífero (porejemplo, un humano), que es capaz de suscitar una respuesta inmunitaria. Un epítopo que presenta actividad inmunógena es una parte de un polipéptido que produce una respuesta de anticuerpos en un animal. Un epítopo que presenta actividad antígena es una parte de un polipéptido a la que se une un anticuerpo como se determina por cualquier método bien conocido en la materia, por ejemplo, por un inmunoensayo. Los epítopos antígenos no necesitan necesariamente ser inmunógenos. Los epítopos generalmente consisten en agrupaciones de superficie químicamente activas de moléculas como los aminoácidos o cadenas laterales de azúcar y presentan unas características estructurales tridimensionales, así como características de carga específica. Una región de un polipéptido que contribuye a un epítopo puede ser aminoácidos contiguos del polipéptido o el epítopo puede agruparse de dos o más regiones no contiguas del polipéptido. El epítopo puede o no ser una una característica de superficie tridimensional del antígeno. En algunos aspectos, un epítopo de C10orf54 es una característica de superficie tridimensional de un polipéptido de C10orf54. En otros aspectos, un epítopo de C10orf54 es una característica lineal de un polipéptido de C10orf54. Generalmente un antígeno presenta varios o muchos diferentes epítopos y reacciona con muchos anticuerpos diferentes.
El término "excipiente" como se utiliza en la presente memoria se refiere a una sustancia inerte que se utiliza comúnmente como un diluyente, vehículo, conservante, ligante, o agente estabilizador e incluye, pero no limitado a, proteínas (porejemplo, albúmina sérica, etc.), aminoácidos (porejemplo., ácido aspártico, ácido glutámico, lisina, arginina, glicina, histidina, etc.), ácidos grasos y fosfolípidos (por ejemplo, alquil sulfonatos, caprilato, etc.), tensioactivos (por ejemplo, SDS, polisorbato, tensioactivo no iónico etc.), sacáridos (por ejemplo, sacarosa, maltosa, trehalosa, etc.) y polioles (por ejemplo, manitol, sorbitol, etc.). Ver, también, Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA.
En el contexto de un péptido o polipéptido, el término "fragmento" como se utiliza en la presente memoria se refiere a un péptido o polipéptido que comprende menos de la secuencia de aminoácidos de longitud completa. Tal fragmento puede surgir, por ejemplo, de un truncamiento en extremo amino, un truncamiento en el extremo carboxilo, y/o una eliminación interna de un(os) residuo(s) de la secuencia de aminoácido. Los fragmentos pueden, por ejemplo, resultar de un empalme alternativo de RNA o de actividad in vivo de la proteasa. En algunos aspectos, los fragmentos de C10orf54 incluyen polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos de por lo menos 5 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 10 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 15 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 20 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 25 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 40 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 50 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 60 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 70 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 80 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 90 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 100 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 125 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 150 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 175 residuos de aminoácidos contiguos, por lo menos 200 residuos de aminoácidos contiguos, o por lo menos 250 residuos de aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo que se une a un polipéptido de C10orf54. En un aspecto específico, un fragmento de un polipéptido de C10orf54 o un anticuerpo que se une a un antígeno C10orf54 conserva por lo menos 1, por lo menos 2 o por lo menos 3 funciones del polipéptido o del anticuerpo. El término "estructura" o residuos "FR" son los residuos del dominio variable que flanquean la ECCD. Los residuos de FR están presentes, por ejemplo, en anticuerpos de dominio, quiméricos, humanizados, humanos, diacuerpos, anticuerpos lineales y anticuerpos biespecíficos. Los residuos de FR son los residuos de dominio variable distintos de los residuos de región hipervariable en la presente definidos en la presente memoria.
Un “fragmento funcional" de un anticuerpo exhibirá por lo menos una si no todas o algunas de las funciones biológicas atribuidas al anticuerpo intacto, comprendiendo la función por lo menos la unión específica al antígeno diana.
El término "proteína de la fusión" como se utiliza en la presente memoria se refiere a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de un anticuerpo y una secuencia de aminoácidos de un polipéptido heterólogo o proteína (por ejemplo, un polipéptido o proteína no normalmente una parte del anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo no-anti-Antígeno C10orf54)). El término "fusión" cuando se utiliza en relación a C10orf54 o a un anticuerpo anti-C10orf54 se refiere a la unión de un péptido o polipéptido, o fragmento, variante y/o derivado del mismo, con un polipéptido o péptido heterólogo. En algunos aspectos, la proteína de fusión mantiene la actividad biológica del anticuerpo de C10orf54 o anti-C10orf54. En algunos aspectos, la proteína de fusión comprende un dominio VH, dominio VL, VH CDR (una, dos o tres VH CDR),y/ o VL CDR (una, dos o tres VL CDR ) de anticuerpo de C10orf54, en la que la proteína de fusión se une a un epítopo de C10orf54.
El término "cadena pesada" cuando se utiliza en referencia a un anticuerpo se refiere a una cadena polipeptídica de alrededor de 50-70 kDa, en la que la porción amino terminal incluye una región variable de 120 a 130 o más aminoácidos y una porción carboxi-terminal que incluye una región constante. La región constante puede ser uno de los cinco tipos distintos, denominados alfa (a), delta (8), épsilon (e), gamma (y) y mu (p), sobre la base de la secuencia de aminoácidos de la región constante de cadena pesada. Las distintas cadenas pesadas difieren en tamaño: a, 8 y y contienen aproximadamente 450 aminoácidos, mientras que p y e contienen aproximadamente 550 aminoácidos. Cuando se combina con una cadena ligera, estos tipos de cadenas pesadas dan lugar a cinco clases bien conocidas de anticuerpos IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, respectivamente, incluyendo cuatro subclases de IgG, es decir, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Una cadena pesada puede ser una cadena pesada humana.
El término "hospedador" en la presente memoria se refiere a un animal como un mamífero (por ejemplo, un humano).
El término "célula hospedadora" como se utiliza en la presente memoria se refiere a una célula objeto transfectada con una molécula de ácido nucleico y la progenie o potencial progenie de dicha célula. La progenie de dicha célula puede no ser idéntica a la célula parental transfectada con la molécula de ácido nucleico debido a mutaciones o influencias ambientales que pueden ocurrir en las generaciones venideras o integración de la molécula de ácido nucleico en el genoma de la célula hospedadora.
Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) son anticuerpos quiméricos que incluyen las inmunoglobulinas humanas (anticuerpo de receptor) en las que los residuos de CDR nativos son sustituidos por residuos de CDR correspondientes de una especie no humana (anticuerpos de donante) tal como ratón, rata, conejo o primate no humano que presenta la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunos casos, uno o más residuos de región de FR de la inmunoglobulina humana se sustituyen por restos no humanos correspondientes. Además, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que no se encuentran en el anticuerpo de receptor o en el anticuerpo de donante. Estas modificaciones se hacen para refinar aún más el rendimiento de anticuerpo. Una cadena ligera o pesada de anticuerpo humanizado puede comprender por lo menos uno o más dominios variables, en la que todos o sustancialmente todos los CDR corresponden a los de una inmunoglobulina no humana y todos o sustancialmente todos los FR son los de una secuencia de inmunoglobulina humana. En algunos aspectos, el anticuerpo humanizado comprenderá por lo menos una parte de una región constante de la inmunoglobulina (Fc), típicamente de una inmunoglobulina humana. Para más detalles, ver, Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-329 (1988); y Presta, Curr. Op. Struct. Biol, 2:593-596 (1992); Carter et al., Proc. Natl. Acd. Sci. USA. 89:4285-4289 (1992); y patentes US n°: 6.800.738 (publicada el 5 de octubre de 2004), 6.719.971 (publicada el 27 de septiembre de 2005), 6.639.055 (publicada el 28 de octubre de 2003), 6.407.213 (publicada el 18 de junio de 2002) y 6.054.297 (publicada el 25 de abril de 2000).
Un anticuerpo que "inhibe el crecimiento de y/o destruye las células que expresan C10orf54" o un anticuerpo "inhibidor del crecimiento" o "citotóxico" es uno que resulta en la inhibición del crecimiento mensurable de y/o destruir las células que expresan o sobreexpresan el polipéptido de C10orf54 apropiado. En algunos aspectos, tales anticuerpos pueden inhibir el crecimiento de y/o destruir las células que expresan C10orf54. Estas células incluyen las células T reguladoras (por ejemplo, unas células T reguladoras CD4+ Foxp3+), unas células supresoras derivadas de mieloides (por ejemplo, una células supresoras derivadas de mieloides CD11b o CD11bhigh) y/o una células dendríticas supresoras (por ejemplo, una células dendríticas CD11b o CD11bhigh). En un aspecto específico, los anticuerpos inhiben el crecimiento de y/o destruyen una célula cancerosa, una célula precancerosa o una célula que comprende un tumor. Ciertos anticuerpos anti-C10orf54 inhibidores del crecimiento inhiben el crecimiento de y/o destruyen las células que expresan C10orf54 por más de 20%, tal como de alrededor de 20% a alrededor de 50%, o superior a 50% (por ejemplo, de alrededor de 50% a alrededor de 100%) en comparación con el control adecuado, siendo el control típicamente unas células no tratadas con el anticuerpo que se somete a prueba. En un aspecto, la inhibición del crecimiento y/o la destrucción pueden medirse en una concentración de anticuerpos de alrededor de 0.1 a 30 g/ml o de alrededor de 0.5 nM a 200 nM en cultivo celular, donde la inhibición del crecimiento es determinada 1-10 días después de la exposición de las células tumorales al anticuerpo. La inhibición del crecimiento y/o la destrucción de células in vivo se pueden determinar de varias maneras tal como se describe a continuación. En el contexto de la inhibición de una célula cancerosa o una célula que comprende un tumor, el anticuerpo es inhibidor del crecimiento o destruye in vivo si la administración del anticuerpo anti-C10orf54 a alrededor de 1 g/kg a alrededor de 100 mg/kg de peso corporal produce una reducción en el tamaño del tumor o la proliferación de células tumorales en aproximadamente 5 días a 3 meses desde la primera administración del anticuerpo, tal como dentro de alrededor de 5 a 30 días.
Como se utiliza en la presente memoria, el término "en combinación" en el contexto de la administración de otras terapias se refiere a la utilización de más de una terapia. La utilización del término "en combinación" no restringe el orden en el que las terapias son administradas a un sujeto con una infección. Una primera terapia puede administrarse antes (por ejemplo, 1 minuto, 45 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas), de manera simultánea, o después (por ejemplo, 1 minuto, 45 minutos, 30 minutos 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas) de la administración de una segunda terapia a un sujeto que presentaba, presenta, o es susceptible a una enfermedad mediada por C10orf54. Cualquier terapia adicional puede ser administrada en cualquier orden con las otras terapias adicionales. En algunos aspectos, los anticuerpos pueden administrarse en combinación con una o más terapias (por ejemplo, las terapias que no son los anticuerpos que actualmente se administran para prevenir, tratar, gestionar y/o mejorar una enfermedad mediada por C10orf54. Los ejemplos no limitativos de terapias que pueden administrarse en combinación con un anticuerpo incluyen agentes analgésicos, agentes anestésicos, antibióticos, o agentes inmunomoduladores o cualquier otro agente presentado en la U.S. Pharmacopoeia y/o la Physician's Desk Reference.
Un anticuerpo que "induce la muerte celular' es el que hace que una célula viable resulte no viable. La célula es un tipo de células que específicamente expresa o sobreexpresa un polipéptido de C10orf54. La célula puede ser cancerosa o una célula normal del tipo de célula particular, como una célula T reguladora. La muerte de la célula in vitro puede determinarse en ausencia de complemento y células efectoras inmunitarias para distinguir la muerte celular inducida por la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpo (ADCC) o citotoxicidad dependiente de complemento (CDC). Así, el ensayo para la muerte celular se puede realizar usando el suero inactivado por calor (por ejemplo, en ausencia de complemento) y en la ausencia de las células efectoras inmunitarias. Para determinar si el anticuerpo es capaz de inducir la muerte celular, pérdida de la integridad de la membrana como se evalúa por la absorción de yoduro de propidio (PI), azul de tripán (ver Moore et al. Cytotechnology (1995) 17:1-11). En algunos aspectos, los anticuerpos inductores de muerte celular son los que inducen la absorción de la PI en el ensayo de absorción de PI en las células que expresan C10orf54.
Un anticuerpo "aislado" es sustancialmente libre de material celular u otras proteínas contaminantes de la célula o fuente de tejido y/u otros componentes contaminantes de los que deriva el anticuerpo, o sustancialmente libre de precursores químicos u otros productos químicos cuando son sintetizados químicamente. El lenguaje "sustancialmente libre de material celular" incluye preparaciones de un anticuerpo en las cuales el anticuerpo se separa de componentes celulares de las células de las que está aislado o producido por vía recombinante. Por lo tanto, un anticuerpo que está sustancialmente libre de material celular incluye preparaciones de anticuerpo que presentan menos de 30%, 20%, 10% o 5% (en peso seco) de proteína heteróloga (también denominada en la presente memoria una "proteína contaminante"). En algunos aspectos, cuando el anticuerpo es producido por vía recombinante, es sustancialmente libre de medio de cultivo, por ejemplo, medio de cultivo representa menos de alrededor de 20%, 10% o 5% del volumen de la preparación de la proteína. En algunos aspectos, cuando el anticuerpo se produce por síntesis química, es sustancialmente libre de precursores químicos u otros productos químicos, por ejemplo, se separa de los precursores químicos u otros productos químicos que participan en la síntesis de la proteína. Por lo tanto dichas preparaciones de anticuerpos presentan menos de 30%, 20%, 10%, 5% (en peso seco) de precursores químicos o compuestos diferentes del anticuerpo de interés. Los componentes contaminantes también pueden incluir, pero no se limitan a, materiales que interferirían con los usos terapéuticos de los anticuerpos y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteínicos o no proteínicos. En algunos aspectos, el anticuerpo será purificado (1) a más de 95% en peso de anticuerpo como se determina por el método de Lowry (Lowry et al. J. Bio. Chem. 193: 265-275, 1951), tal como 99% en peso, (2) a un grado suficiente para obtener por lo menos 15 residuos de secuencia del aminoácido N-terminal o interno por la utilización de un secuenciador de taza giratoria, o (3) a homogeneidad por SDS-PAGE bajo unas condiciones reductoras o no reductoras con tinción de azul Coomassie o, preferentemente, de plata. Los anticuerpos aislados incluyen el anticuerpo in situ dentro de las células recombinantes ya que por lo menos uno de los componentes del ambiente natural del anticuerpo no estará presente. Ordinariamente, sin embargo, los anticuerpos aislados se prepararán mediante por lo menos una etapa de purificación. En un aspecto específico, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria son aislados o purificados.
Una molécula de ácido nucleico "aislada" es una que se separa de otras moléculas de ácidos nucleicos que están presentes en la fuente natural de la molécula de ácido nucleico. Además, una molécula de ácido nucleico "aislada", tal como una molécula de ADNc, puede estar sustancialmente libre de otro material celular o medio de cultivo cuando se produce por técnicas recombinantes, o sustancialmente libre de precursores químicos u otros productos químicos cuando son sintetizados químicamente. En un aspecto específico, una(s) molécula(s) de ácidos nucleicos que codifican un anticuerpo proporcionado en la presente memoria es(son) aislada(s) o purificada(s).
El término "grupo saliente" como se utiliza en la presente memoria, se refiere a cualquier grupo que sale en el curso de una reacción química que implica al grupo como se describe en la presente memoria e incluye pero no se limita al halógeno, sulfonatos (brosilato, mesilato, tosilato triflato, etc.), grupos de p-nitrobenzoato y fosfonato, por ejemplo.
El término "cadena ligera" cuando se utiliza en referencia a un anticuerpo se refiere a una cadena polipeptídica de aproximadamente 25 kDa, en el que la porción amino terminal incluye una región variable de alrededor de 100 a alrededor de 110 o más aminoácidos y una porción carboxi-terminal que incluye una región constante. La longitud aproximada de una cadena ligera es 211 a 217 aminoácidos. Existen dos tipos distintos, denominados kappa (k) de lambda (A) sobre la base de la secuencia de aminoácidos de los dominios constantes. Las secuencias de aminoácidos de cadena ligera son bien conocidas en la materia. Una cadena ligera puede ser una cadena ligera humana.
Un "ligador" (mencionado como L o L1, L2 y L3) es una molécula con dos extremos reactivos, uno para conjugación a un anticuerpo o a otro ligador y el otro para la conjugación una citotoxina. El extremo reactivo de conjugación de anticuerpo del ligador es típicamente un sitio que es capaz de conjugación al anticuerpo a través de un grupo amina de lisina o cisteína tiol en el anticuerpo, y así es típicamente un grupo reactivo a tiol tal como un enlace doble (como en maleimida) o un grupo saliente tal como cloro, bromo o yodo o un grupo R-sulfanilo o grupo sulfonilo, o un grupo reactivo a amina tal como un grupo carboxilo o como se define en la presente memoria; mientras que el extremo reactivo de conjugación de anticuerpo es típicamente un sitio que es capaz de conjugación a la citotoxina a través de la formación de un enlace amida con una amina básica o un grupo carboxilo en la citotoxina, y así es típicamente un carboxilo o un grupo amino básico. En un aspecto, cuando el término “ligador" se utiliza al describir el ligador en forma conjugada, uno o ambos de los extremos reactivos estarán ausentes (tal como el grupo saliente de thiol reactivo) o incompletos (por ejemplo, como el ser únicamente el carbonilo del ácido carboxílico) debido a la formación de los enlaces entre el ligador y/o la citotoxina. Los ligadores divulgados en la presente memoria pueden ser divisibles en condiciones normales fisiológicas y/o intracelulares, o pueden permanecer estables (por ejemplo, no escindidos o no escindibles) bajo las mismas condiciones. Los ejemplos de ligadores escindibles son ligadores que contienen porciones del dipéptido, en las que el enlace de péptido que conecta los dos péptidos presenta el potencial de ser escindido selectivamente por las proteasas lisosómicas (por ejemplo, la catepsina B). La valina-citrulina (Val-Cit) es una porción de dipéptido utilizada en ligadores escindibles.
Como se utiliza en la presente memoria, los términos "gestionar", "gestionando" y "gestión" se refieren a los efectos beneficiosos que un sujeto obtiene de un tratamiento (por ejemplo, un agente profiláctico o terapéutico), que no da como resultado una curación de la enfermedad. En algunos aspectos, se administran a un sujeto una o más terapias (por ejemplo, agentes profilácticos o terapeúticos, tal como un anticuerpo proporcionado en la presente memoria) para "gestionar" una enfermedad mediada por C10orf54, uno o más síntomas de la misma, con el fin de evitar la progresión o empeoramiento de la enfermedad.
El término "anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos homogéneos o sustancialmente homogéneos, y cada anticuerpo monoclonal normalmente reconocerá un solo epítopo del antígeno. En unos aspectos específicos, un "anticuerpo monoclonal", como se utiliza en la presente memoria, es un anticuerpo producido por un hibridoma individual u otra célula, en el que el anticuerpo se une sólo a un epítopo de C10orf54 determinado, por ejemplo, mediante ELISA u otro ensayo de unión competitiva o de unión a antígeno conocido en la materia. El término "monodonal" no se limita a ningún método en particular para la fabricación de los anticuerpos. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales proporcionados en la presente memoria pueden realizarse por el método de hibridoma como se describe en Kohler et al.; Nature, 256:495 (1975) o pueden ser aislados de las bibliotecas de fagos utilizando las técnicas. Otros métodos para la preparación de líneas celulares clónicas y de anticuerpos monoclonales expresados así son bien conocidos en la materia (ver, por ejemplo, el capítulo 11 en: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5a Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley y Sons, New York). En los ejemplos en la presente memoria se proporcionan otros métodos ejemplificativos de producción de otros anticuerpos monoclonales.
El término "natural" cuando se usa con respecto a materiales biológicos tales como moléculas de ácido nucleico, polipéptidos, las células hospedadoras y similares, se refiere a los que se encuentran en la naturaleza y no manipulados por un ser humano.
El término "farmacéuticamente aceptable" como se utiliza en la presente memoria significa ser aprobado por una agencia reguladora del gobierno federal o estatal, o figuran en la U.S. Pharmacopeia, European Pharmacopeia u otra farmacopea generalmente reconocido para su uso en animales y más concretamente en los seres humanos.
"Anticuerpos policlonales" como se utiliza en la presente memoria se refiere a una población de anticuerpos generada en una respuesta inmunógena a una proteína con muchos epítopos y por lo tanto incluyen una variedad de diferentes anticuerpos dirigidos a diferentes epítopos dentro de la proteína. Los métodos para la producción de anticuerpos policlonales son conocidos en la materia (ver, por ejemplo, ver, por ejemplo, el capítulo 11 en: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5a Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley y Sons, New York).
Como se utiliza en la presente memoria, el término "polinucleótido", "nucleótido," ácido nucleico" "molécula de ácido nucleico" y otros términos similares se usan intercambiables e incluyen ADN, ARN, ARNm y similares.
Una "célula precancerosa" se refiere a una célula que presenta un aspecto anormal tal como una diferencia en el tamaño o la forma en comparación con las células de los tejidos circundantes o las células normales de su tipo celular, pero no es invasiva. La aparición de las células precancerosas puede sugerir un riesgo creciente del cáncer. Las células precancerosas que expresan c10orf54 se pueden identificar mediante métodos divulgados en la presente memoria, que puede incluir el análisis de una muestra de células de un paciente.
Como se utiliza en la presente memoria, los términos "prevenir", "que previene" y "prevención" se refieren a la inhibición total o parcial del desarrollo, recurrencia, inicio o propagación de una enfermedad mediada por C10orf54 y/o síntomas relacionados con la misma, que resultan de la administración de una terapia o una combinación de terapias proporcionadas en la presente memoria (por ejemplo, una combinación de agentes profilácticos o terapéuticos, tal como un anticuerpo proporcionado en la presente memoria).
Como se utiliza en la presente memoria, el término "agente profiláctico" se refiere a cualquier agente que puede inhibir total o parcialmente el desarrollo, recurrencia, aparición o propagación de una enfermedad mediada por C10orf54 y/o síntomas relacionados con la misma en un sujeto. En algunos aspectos, el término "agente profiláctico" se refiere a un anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria. En ciertos otros aspectos, el término "agente profiláctico" se refiere a un agente diferente a un anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria. En algunos aspectos, un agente profiláctico es un agente que es conocido que resulta útil o ha sido o está siendo utilizado actualmente para prevenir una enfermedad mediada por C10orf54 y/o un síntoma relacionado con la misma o impedir el inicio, desarrollo, progresión y/o gravedad de una enfermedad mediada por C10orf54 o un síntoma relacionado con la misma. En unos aspectos específicos, el agente profiláctico es un anticuerpo humanizado anti-C10orf54, tal como un anticuerpo monoclonal humanizado anti-C10orf54.
En algunos aspectos, un "título de suero eficaz profilácticamente" es el título del suero en un sujeto, preferentemente humano, que total o parcialmente inhibe el desarrollo, recurrencia, aparición o propagación de una enfermedad mediada por C10orf54 y/o síntomas relacionados con la misma en el sujeto.
El término "anticuerpo recombinante" se refiere a un anticuerpo que está preparado, expresado, creado o aislado por medios recombinantes. Anticuerpos recombinantes pueden ser anticuerpos expresados usando un vector de expresión recombinante transfectado en una célula hospedadora, anticuerpos aislados de una biblioteca de anticuerpos recombinantes, combinatoria, anticuerpos aislados de un animal (por ejemplo, un ratón o una vaca) que es transgénico y/o transcromosómico para los genes de inmunoglobulina humana (ver por ejemplo, Taylor, L. D. et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) o anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados por cualquier otro medio que implica el empalme de las secuencias génicas de inmunoglobulina a otras secuencias de ADN. Tales anticuerpos recombinantes pueden presentar las regiones variable y constante derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana (ver Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication no. 91­ 3242). En algunos aspectos, sin embargo, estos anticuerpos recombinantes son sometidos a mutagénesis in vitro (o, cuando se utiliza un animal transgénico para secuencias de Ig humanas, mutagénesis somática in vivo) y así las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque derivadas de y relacionadas con las secuencias VH y VL de línea germinal humana, pueden no existir naturalmente dentro del repertorio de línea germinal de anticuerpo humano in vivo.
El término "título de suero" como se utiliza en la presente memoria se refiere a un título de suero medio en una población de por lo menos 10, tal como por lo menos 20, o por lo menos 40 sujetos, hasta alrededor de 100, 1000 o más.
Como se utiliza en la presente memoria, el término "efectos secundarios" abarca efectos no deseados y adversos de la terapia (por ejemplo, un agente profiláctico o terapéutico). Los efectos no deseados no son necesariamente negativos. Un efecto adverso de una terapia (por ejemplo, un agente profiláctico o terapéutico) puede ser perjudicial o incómodo o de riesgo. Son ejemplos de efectos secundarios, diarrea, tos, gastroenteritis, sibilancias, náuseas, vómitos, anorexia, calambres abdominales, fiebre, dolor, pérdida de peso, deshidratación, alopecia, disnea, insomnio, mareos, mucositis, efectos del nervio y del músculo, fatiga, boca seca, y pérdida de apetito, erupciones o inflamaciones en el sitio de administración, síntomas de tipo gripal tales como fiebre, escalofríos y fatiga, problemas del sistema digestivo y reacciones alérgicas. Los efectos no deseados experimentados por los pacientes son numerosos y conocidos en la materia. Muchos se describen en Physician's Desk Reference (67th ed., 2013).
Como se utiliza en la presente memoria, los términos "sujeto" y "paciente" se usan indistintamente. Como se usa en la presente memoria, en algunos aspectos, un sujeto es un mamífero, como un no primate (por ejemplo, vacas, cerdos, caballos, gatos, perros, ratas, etc.) o un primate (por ejemplo, monos y humanos). En unos aspectos específicos, el sujeto es un humano. En un aspecto, el sujeto es un mamífero (por ejemplo, un humano) que presenta una enfermedad mediada por C10orf54. En otro aspecto, el sujeto es un mamífero (por ejemplo, un ser humano) en riesgo de desarrollar una enfermedad mediada por C10orf54.
Como se utiliza en la presente memoria "sustancialmente todo" se refiere a por lo menos alrededor de 60%, por lo menos alrededor de 70%, por lo menos alrededor de 75%, por lo menos alrededor de 80%, por lo menos alrededor de 85%, por lo menos alrededor de 90%, por lo menos alrededor de 95%, por lo menos alrededor de 98%, por lo menos alrededor de 99%, o alrededor de 100%.
Como se utiliza en la presente memoria, el término "agente terapéutico" se refiere a cualquier sustancia que puede ser utilizada para tratar, prevenir o aliviar una enfermedad, trastorno o afección, incluyendo el tratamiento, la prevención o el alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54, trastorno, o afección y/o síntoma relacionado con la misma. En algunos aspectos, un agente terapéutico se refiere a un anticuerpo proporcoinado en la presente memoria. En ciertas otros aspectos, un agente terapéutico se refiere a un agente diferente a un anticuerpo proporcionado en la presente memoria. En algunos aspectos, un agente terapéutico es un agente que es conocido que resulta útil, o ha sido o está siendo usado actualmente para el tratamiento, la prevención o el alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54, trastorno, afección o un síntoma relacionado con la misma.
La combinación de terapias (por ejemplo, uso de agentes terapéuticos) puede ser más eficaz que los efectos aditivos de dos o más terapias individuales. Por ejemplo, un efecto sinérgico de la combinación de agentes terapéuticos permite la utilización de dosis más bajas de uno o más de los agentes y/o menos administración frecuente de los agentes a un sujeto con una enfermedad mediada por C10orf54. La capacidad de utilizar dosis más bajas de las terapias terapéuticas y/o para administrar las terapias con menos frecuencia reduce la toxicidad asociada con la administración de las terapias a un sujeto sin reducir la eficacia de las terapias en la prevención, el tratamiento y/o el alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54. Además, un efecto sinérgico puede resultar en una eficacia mejorada de las terapias en la prevención, el tratamiento y/o el alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54. Finalmente, el efecto sinérgico de la combinación de terapias (por ejemplo, agentes terapéuticos) pueda evitar o reducir los efectos secundarios adversos o no deseados asociados con la utilización de cualquier terapia individual.
El término "cantidad terapéuticamente eficaz" como se utiliza en la presente memoria se refiere a la cantidad de un agente terapéutico (por ejemplo, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria o cualquier otro agente terapéutico proporcionado en la presente memoria) que es suficiente para reducir y/o mejorar la gravedad y/o duración de una determinada enfermedad y/o un síntoma relacionado con la misma. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente terapéutico puede ser una cantidad necesaria para la reducción o la mejora del avance o progresión de una determinada enfermedad, la reducción o la mejora de la recurrencia, el desarrollo o aparición de una determinada enfermedad, y/o para mejorar o aumentar el efecto profiláctico o terapéutico de otra terapia (por ejemplo, una terapia diferente de la administración de un anticuerpo proporcionado en la presente memoria).
En algunos aspectos, un "título de suero terapéuticamente eficaz" es el título de suero en un sujeto, preferentemente humano, que reduce la gravedad, la duración y/o los síntomas asociados con una enfermedad mediada por C10orf54 en el sujeto.
Como se utiliza en la presente memoria, el término "terapia" se refiere a cualquier protocolo, método y/o agente que puede ser utilizado en la prevención, gestión, tratamiento y/o mejora de una enfermedad mediada por C10orf54. En algunos aspectos, los términos "terapias" y "terapia" se refieren a una terapia biológica, terapia de apoyo y/o otras terapias útiles en la prevención, gestión, tratamiento o mejora de una enfermedad mediada por C10orf54 conocida por un experto en la materia como personal médico.
El término "tiol," como se utiliza en la presente memoria, se refiere al radical -SH.
Como se utiliza en la presente memoria, lo términos "tratar", "tratamiento" y "tratando" se refieren a la reducción o la mejora de la progresión, gravedad o duración de una enfermedad mediada por C10orf54 que resultan de la administración de una o más terapias (incluyendo pero no limitado a, la administración de uno o más agentes terapéuticos, tales como un anticuerpo proporcionado en la presente memoria). En unos aspectos específicos, tales términos se refieren a la reducción o inhibición de la formación de cáncer o tumor. En otros aspectos específicos, dicho término se refiere a la reducción o la mejora de la evolución, gravedad y duración de la enfermedad de injerto contra hospedador. Todavía en otros aspectos específicos, tales términos se refieren a la reducción o la mejora de la progresión, gravedad y/o duración de una enfermedad que responde a la modulación inmunitaria, tal modulación resultante de aumentar la activación de células T, aumentar la proliferación de células T o aumentar la producción de citocinas.
"Tubulisina" incluye tanto los productos naturales descritos como tubulisinas, tales como por Sasse et al y otros autores mencionados en la descripción de la técnica relacionada y también los análogos de tubulisina descritos en la publicación de solicitud de patente US n° 2011/0021568 A1. Las tubulisinas divulgadas en la presente solicitud se mencionan en la presente memoria y pueden incluir las tubulisinas de las fórmulas T3 y T4 y otras tubulisinas en las que la /V-metilpiperidina terminal ha sido reemplazada por una piperidina no sustituida, permitiendo la formación de enlace amida con un ligador.
El término "dominio variable" o "región variable" se refiere a una porción de las cadenas ligeras o pesadas de un anticuerpo que se encuentra generalmente en el terminal amino de la cadena ligera o pesada y presenta una longitud de alrededor de 120 a 130 aminoácidos en la cadena pesada y alrededor de 100 a 110 aminoácidos en la cadena ligera y se utilizan en la unión y la especificidad de cada anticuerpo particular para su antígeno particular. Los dominios variables difieren ampliamente en secuencia entre diferentes anticuerpos. La variabilidad en la secuencia se concentra en las CDR mientras que las porciones menos variables en el dominio variable se denominan regiones estructurales (FR). Las CDR de las cadenas ligeras y pesadas son responsables principalmente de la interacción del anticuerpo con el antígeno. En unos aspectos específicos, la región variable es una región variable humana.
El término "numeración de residuo de dominio variable como en Kabat' o "numeración de la posición de aminoácido como en Kabat", y las variaciones del mismo, se refiere al sistema de numeración utilizado para dominios variable de cadena pesada o dominios variable de cadena ligera de la compilación de anticuerpos en Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5 a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991). Utilizando este sistema de numeración, la secuencia de aminoácidos lineales actual puede contener menos o adicionales aminoácidos correspondientes a un acortamiento de, o inserción en, una FR o CDR de la región variable. Por ejemplo, un dominio variable de cadena pesada puede incluir una inserción de un solo aminoácido (residuo 52a según Kabat) después del residuo 52 de H2 y residuos insertados (por ejemplo residuos 82a, 82b y 82c, etcétera, según Kabat) después del residuo 82 de FR de cadena pesada. La numeración de Kabat de los residuos se puede determinar para un anticuerpo dado por alineamiento en regiones de homología de la secuencia del anticuerpo con una secuencia numerada de Kabat "estándar". El sistema de numeración de Kabat se utiliza generalmente cuando se refiere a un residuo en el dominio variable (aproximadamente residuos 1-107 de la cadena ligera y residuos 1-113 de la cadena pesada) (por ejemplo, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5 ° Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). El "sistema de numeración de EU" o "índice de EU" se utiliza generalmente al referirse a un residuo en una región constante de cadena pesada de inmunoglobulina (por ejemplo, la el índice de EU divulgado en Kabat et al., supra). El "índice de EU como en Kabat" se refiere a la numeración de residuo de anticuerpo de EU humano de IgG 1 UE. A menos que se indique lo contrario en la presente memoria, las referencias a números de residuo en el dominio variable de anticuerpos significa numeración de residuo por el sistema de numeración de Kabat. Otros sistemas de numeración se han descrito, incluyendo, por ejemplo, AbM y Chothia, Contact e IMGT. Diversos sistemas de numeración se ilustran en la figura 16A y 16B.
El término "variante” cuando se utiliza en relación con C10orf54 o a un anticuerpo anti-C10orf54 se refiere a un péptido o polipéptido que comprende una o más (tal como, por ejemplo, alrededor de 1 a alrededor de 25, alrededor de 1 a alrededor de 20, de alrededor 1 a alrededor de 15, de alrededor de 1 a alrededor de 10, o de alrededor de 1 a alrededor de 5) sustituciones, eliminaciones y/o adiciones de secuencia de aminoácidos en comparación con una secuencia natural o sin modificar. Por ejemplo, una variante C10orf54 puede resultar de unos o más (tal como, por ejemplo,de alrededor de 1 a alrededor de 25, alrededor de 1 a alrededor de 20, de alrededor de 1 a alrededor de 15, de alrededor de 1 a alrededor de 10, o de alrededor de 1 a alrededor de 5) cambios respecto a una secuencia de aminoácidos de C10orf54 natural. También a título de ejemplo, una variante de un anticuerpo anti-C10orf54 puede resultar de uno o más cambios (tal como, por ejemplo, de alrededor de 1 a alrededor de 25, de alrededor de 1 a alrededor de 20, de alrededor de 1 a alrededor de 15, de alrededor de 1 a alrededor de 10, o de alrededor de 1 a alrededor de 5) a una secuencia de aminoácidos de un anticuerpo anti-C10orf54 nativo o previamente no modificado. Las variantes pueden ser naturales, tales como variantes de corte y empalme o alélicas, o pueden ser artificialmente construidas. Las variantes del polipéptido se pueden preparar de las correspondientes moléculas de ácido nucleico que codifican las variantes. En unos aspectos específicos, la variante C10orf54 o variante de anticuerpo anti-C10orf54 por lo menos conserva la actividad funcional de C10orf54 o anticuerpo anti-C10orf54, respectivamente. En unos aspectos específicos, una variante de anticuerpo anti-C10orf54 se une a C10orf54 y/o es antagonista respecto a la actividad de C10orf54. En unos aspectos específicos, una variante de anticuerpo anti-C10orf54 se une a C10orf54 y/o es agonista respecto a la actividad de C10orf54. En ciertos aspectos, la variante es codificada por una variante de polimorfismo de nucleótido único (SNP) de una molécula de ácido nucleico que codifica C10orf54 o regiones VH o VL de anticuerpo de anti-C10orf54 o subregiones.
El término "vector" se refiere a una sustancia que se utiliza para introducir una molécula de ácido nucleico en una célula hospedadora. Los vectores aplicables para la utilización incluyen, por ejemplo, vectores de expresión, plásmidos, vectores de fagos, vectores virales, episomas y cromosomas artificiales, que pueden incluir secuencias de selección o marcadores operables para la integración estable en el cromosoma de una célula hospedadora. Además, los vectores pueden incluir uno o más genes marcadores seleccionables y secuencias de control de expresión adecuadas. Los genes marcadores seleccionables que pueden incluirse, por ejemplo, proporcionan resistencia a antibióticos o toxinas complementan deficiencias auxotróficas o suministran nutrientes esenciales no en los medios de cultivo. Las secuencias de control de expresión pueden incluir promotores constitutivos e inducibles, potenciadores de la transcripción, terminadores de transcripción y similares que son bien conocidos en la materia. Cuando dos o más moléculas de ácido nucleico van a coexpresarse (por ejemplo, tanto una cadena ligera como pesada de anticuerpo), ambas moléculas de ácido nucleico pueden ser insertadas, por ejemplo, en un vector de expresión único en vectores de expresión separados. Para la expresión de vector único, los ácidos nucleicos codificantes pueden estar operacionalmente ligados a una secuencia de control de expresión común o ligados a secuencias de control de expresión diferentes, tal como un promotor inducible y un promotor constitutivo. La introducción de moléculas de ácido nucleico en una célula hospedadora puede confirmarse mediante métodos bien conocidos en la materia. Tales métodos incluyen, por ejemplo, análisis de ácidos nucleicos tal como transferencia northern o la amplificación de ARNm de reacción en cadena de polimerasa (PCR), o inmunotransferencia para la expresión de productos génicos, u otros métodos analíticos adecuados para probar la expresión de una secuencia de ácido nucleico introducido o su correspondiente producto génico. Los expertos en la materia apreciarán que la molécula de ácido nucleico se expresa en una cantidad suficiente para producir el producto deseado (por ejemplo, un anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria), y se aprecia además que los niveles de expresión pueden ser optimizados para obtener una suficiente expresión usando métodos bien conocidos en la materia.
Breve descripción de las figuras
Las figuras 1A y 1B representan el nivel de expresión proteica de C10orf54 que fue identificado y cuantificado mediante análisis sTAg en muestras de AML y BMMC y control pertinente.
La figura 2 representa un análisis FACS de 23 muestras primarias de AML-BM-MNC y 3 muestras normales de BM-MNC utilizando el anticuerpo 76E1 anti-C10orf54.
Las figuras 3A y 3B representan unas secuencias humanizadas de la región VH del anticuerpo monoclonal 76E1 de murino. Se muestran las SEC ID N°: 1, 7, 8, 12-15 y 82.
Las figuras 4A y 4B representan unas secuencias humanizadas de la región VH del anticuerpo monoclonal 141A de murino. Se muestran las SEC ID N°: 2, 7, 8, 16-19 y 82.
Las figuras 5A y 5B representan unas secuencias humanizadas de la región VH del anticuerpo monoclonal 175A de murino. Se muestran las SEC ID N°: 3, 7, 8, 20-23 y 82.
Las figuras 6A y 6B representan unas secuencias humanizadas de la región VL del anticuerpo monoclonal 76E1 de murino. Se muestran las SEC ID N°: 4, 9, 10, 24, 25 y 94.
Las figuras 7A y 7B representan unas secuencias humanizadas de la región VL del anticuerpo monoclonal 141A de murino. Se muestran las SEC ID N°: 5, 10, 11, 26, 27 y 94.
Las figuras 8A y 8B representan unas secuencias humanizadas de la región VL del anticuerpo monoclonal 175A de murino. Se muestran las SEC ID N°: 6, 9, 10, 28, 29 y 94.
La figura 9 representa pseudosecuencias de los dominios VH y VL de los anticuerpos monoclonales de murino 76E1, 141A y 175A (SEC ID N°: 1143-1148). Las CDR se identifican en negrita.
La figura 10 representa que el tratamiento con anticuerpo anti-C10orf54 induce una notable inhibición del crecimiento tumoral en tumores establecidos Kasumi-3.
La figura 11 representa que el tratamiento con anticuerpos 175A anti-C10orf54 de murino induce una notable inhibición del crecimiento tumoral en tumores establecidos Kasumi-3.
La figura 12 representa los resultados de un ensayo ADC secundario utilizando anticuerpos anti-C10orf54 en un ensayo de viabilidad celular con una línea de sarcoma que expresa C10orf54.
Las figuras 13 y 14 representan la actividad de anticuerpos anti-C10orf54 no conjugados y conjugados con MMAF en un ensayo de viabilidad celular utilizando líneas de sarcoma que expresan C10orf54 y la línea de sarcoma parental.
La figura 15 representa los resultados del tratamiento con anticuerpos anti-C10orf54 no conjugados y conjugados con MMAF en un modelo de tumor que utiliza una línea de sarcoma que expresa C10orf54 y la línea de sarcoma parental.
Las figuras 16A y 16B representan un alineamiento de secuencias de las cadenas pesadas variables y las cadenas ligeras variables de los anticuerpos anti-C10orf54 de murino designados como 76E1, 141A y 175A (SEC ID N°: 1-6). Los límites de las CDR se indican mediante numeración Kabat, AbM, Chothia, Contact e IMGT
Las figuras 17A y 17B representan un alineamiento de las cadenas pesadas variables y las cadenas ligeras variables de los anticuerpos anti-C10orf54 de murino humanizados ejemplificativos designados como hu76E1, 141A y 175A (SEC ID N°: 1135-1137 para las cadenas pesadas; SEC ID N°: 1139-1141 para las cadenas ligeras) y las secuencias de consenso correspondientes entre hu76E1 y hu175A (SEC ID N°: 1138 de la cadena pesada; SEC ID N°: 1142 de la cadena ligera). Los residuos indicados justo por debajo del alineamiento indican los residuos específicos que pueden variar en la posición superior a “X” en la secuencia de consenso.
La figura 18A a 18D representan alineamientos de secuencias VH y VL de los anticuerpos divulgados en la presente memoria mediante un grupo parátopo. Se muestran las SEC ID N°: 1271-1280 para VH y VL. También se muestran las SEC ID N°: 1291, 1306, 1441, 1918, 1440, 1368, 1442, 1919, 1385, 1405, 1446, 1920, 1443, 1458, 1446, 1921, 1473, 1445, 1447, 1922, 1444, 1508, 1448 y 1923 para secuencias CDR de consenso dentro de grupos parátopos.
La figura 19 representa las secuencias de la línea germinal humana ejemplificativas para la humanización de los anticuerpos anti-C10orf54 descritos en la presente memoria.
Las figuras 20A y 20B representan unas secuencias VH de humano y VL de humano seleccionadas para la humanización de los anticuerpos anti-C10orf54 descritos en la presente memoria. Se muestran las SEC ID N°: 7, 1902-1904, 1907, 1905, 1906, 1912, 1910, 11, 1909, 1913 (en orden descendente) para las secuencias de VH y VL.
La figura 21A representa una representación gráfica de la proteína C10orf54 y constructos de proteínas quiméricas. La designación “humano" se refiere al constructo CC1; "ratón" se refiere al constructo CC2; "hsIGVmmSTALK" se refiere al constructo CC5; "mmIGVhsSTALK" se refiere al constructo CC6; "hsABCmmC10" se refiere al constructo CC7; "mmabChsC10" se refiere al constructo CC8; "hsC10mmLOOP" se refiere al constructo CC9; y "mmC10hsLOOP" se refiere al constructo CC10, tal como se describe en el Ejemplo 3. También se representa un alineamiento de secuencias de las secuencias de aminoácidos de C10orf54 humano (residuos 1 a 193 de SEC ID N°: 1079), y C10orf54 de ratón (residuos 1 a 90 de SEC ID N°: 1243) incluyendo una secuencia consenso de estos residuos (SEC ID N°: 1914).
La figura 21B representa un árbol filogenético de anticuerpos C10orf54 tanto para genes VH como VL, incluyendo la clasificación de análisis de agrupamiento de flujo y depósito de parátopos como se describe en el Ejemplo 3. La designación "humano de longitud completa” se refiere al po c C1; "rata" se refiere al constructo CC3; "cino de longitud completa" se refiere al constructo CC4; "hsIGVmmSTALK" se refiere al constructo CC5; "hsABCmmC10" se refiere al constructo CC7; "mmABChsC10" se refiere al constructo CC8; "hsC10mmLOOP" se refiere al constructo CC9; y "mmC10hsLOOP" se refiere al constructo CC10, como se describe en el Ejemplo 3.
Las figuras 22A y 22B representan unas secuencias humanizadas para las regiones VH y VL del anticuerpo monoclonal 26A de murino, respectivamente. SEC ID N°: 1902, 82, 1266 y 1529-1531 se representan en la figura 22A y SEC ID N°: 1910, 94 y 1532-1534 se muestran en la figura 22b . La VH humanizada designada como h26AH1 y la VL humanizada designada como h26AL1 son cada una unos constructos "CDR-intercambio" sin cambios en la estructura humana. Las secuencias subsiguientes presentan residuos de aminoácidos alterados. # indica sustitución por desamidación: Q/S/A/D.
Las figuras 23A y 23B representan unas secuencias humanizadas de las regiones VH y VL del anticuerpo monoclonal 128A de murino. SEC ID N°: 1902, 82, 1258 y 1535-1537 se representan en la figura 23A y s Ec ID N°: 1907, 94, 1259 y 1538-1540 se muestra en la figura 23B. La VH humanizada designada como h128AH1 y la VL humanizada designada como h128AL1 son cada una unos constructos "CDR-intercambio" sin cambios en la estructura humana. Las secuencias subsiguientes presentan unos residuos de aminoácidos alterados. # indica sustitución por desamidación: Q/S/A/D.
Las figuras 24A y 24B representan unas secuencias humanizadas de las regiones VH y VL del anticuerpo monoclonal 124A de murino, respectivamente. SEC ID N°: 1902, 82, 1281, 1541 y 1542 se representan en la figura 24A y SEC ID N°: 1911, 94, 1282, 1546 y 1547 se muestra en la figura 24B. La VH humanizada designada como h124AH1 y la VL humanizada designada como h124AL1 son cada una unos constructos "CDR-intercambio" sin cambios en la estructura humana. Las secuencias subsiguientes presentan residuos de aminoácidos alterados. # indica sustitución por desamidación: Q/S/A/D. @ indica sustituciones por isoaspartato: Q/S/A.
Las figuras 25A y 25B representan unas secuencias humanizadas para las regiones VH y VL del anticuerpo monoclonal 259A de murino, respectivamente. SEC ID N°: 1902, 82, 1275 y 1543-1545 se representan en la figura 25A y SEC ID N°: 1905, 94, 1276, 1548 y 1549 se muestra en la figura 25B. La VH humanizada designada como h124AH1 y la VL humanizada designada como h124AL1 son cada una unos constructos "CDR-intercambio" sin cambios en la estructura humana. Las secuencias subsiguientes presentan residuos de aminoácidos alterados. # indica sustitución por desamidación: Q/S/A/D. @ indica sustituciones por isoaspartato: E/S/A.
Las figuras 26A y 26B representan una expresión de C10orf54 en subpoblaciones MDSC. La figura 26A muestra el porcentaje de C10orf54 dentro de subpoblaciones LinVCD11b+ MDSC. La figura 26B muestra el número de copias de C10orf54 para subpoblaciones LinVCD11b+ MDSC. Las poblaciones MDSC se denominan: células monocíticas (CD14+/h LA'DR‘), granulocíticas (CD15+/HLA'DR‘) y mieloides inmaduras (CD15VHLA'DR‘).
La figura 27 representa un diagrama de dispersión de expresión de C10orf54 en subconjuntos PBMC de pacientes con NSCLC.
La figura 28 representa unos gráficos de barras de la proliferación de células T que está siendo inhibida por la exposición a un constructo C10orf54-Fc. Se muestra la incorporación de 3H-timidina.
La figura 29 representa unos gráficos de barras sobre la capacidad de los anticuerpos anti-C10orf54 para atenuar la supresión mediada por C10orf54 de la proliferación de células T sin tratamiento previo y secreción de citocinas.
Las figuras 30A a 30C representan una comparación entre poblaciones de pan-células T y sin tratamiento previo. Una cantidad de 50,000 células T por pocillo se cultivaron en placas recubiertas previamente con 5 ug/ml de anticuerpo anti-CD3/ml y diversas concentraciones de C10orf54-Fc. Las células fueron coestimuladas aún más con diversas concentraciones de anticuerpo anti-CD28 (no se añadió anticuerpo anti-CD3 a los pocillos control (0 pg/ml aCD28). Los valores son la media de RLU/pocillo (n=4). La figura 30A muestra pancélulas T, 2 días tras la estimulación. La figura 30B muestra células T sin tratamiento previo, 2 días tras la estimulación. La figura 30C muestra células T sin tratamiento previo, 3 días tras la estimulación.
Descripción detallada
Se proporcionan en la presente memoria unos anticuerpos que se unen a C10orf54, incluyendo un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54. Tales anticuerpos incluyen anticuerpos anti-C10orf54 humanizados. También se proporcionan anticuerpos (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) que bloquean competitivamente y el anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria, de la unión con un polipéptido de C10orf54. Los anticuerpos anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) proporcionados en la presente invención también pueden conjugarse o fusionarse recombinantemente a un agente de diagnóstico, agente detectable o agente terapéutico (por ejemplo, un conjugado anticuerpo-fármaco). Además se proporcionan unas composiciones que comprenden un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado). Por ejemplo, un agente detectable puede ser una sonda detectable.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249) y CC10 (SEC ID N°: 1251), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248) y CC9 (SEC ID N°: 1250).
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246) y CC8 (SEC ID N°: 1249), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248) , CC9 (SEC ID N°: 1250) y CC10 (SEC ID N°: 1251). En algunos aspectos, tal anticuerpo no comprende una o más secuencias CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 32, 1101, 1107, 1112, 45, 1102, 1108, 1113, 40, 1103, 1114, 41, 1109, y 1115.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245) y CC5 (SEC ID N°: 1246), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), CC8 (SEC ID N°: 1249) , CC9 (SEC ID N°: 1250) y CC10 (Se C ID N°: 1251). En algunos aspectos, tal anticuerpo no comprende una o más secuencias CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 38, 1083, 1089, 1094, 45, 1084, 1090, 1095, 46, 1085, 1096, 47, 1091, y 1097.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249) y CC9 (SEC ID N°: 1250), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), CC9 (SEC ID N°: 1250) y CC10 (SEC ID N°: 1251). En algunos aspectos, tal anticuerpo no comprende una o más secuencias CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en 33, 1117, 1122, 1123, 1128, 34, 1118, 1124, 1129, 1134, 35, 1119, 1125, 1130, 42, 1120, 1126, 1131,43, 1121, 1132, 44, 1127, y 1133.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249) y CC9 (SEC ID N°: 1250), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248) y CC10 (SEC ID N°: 1251).
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249) y CC10 (SEC ID N°: 1251), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), CC9 (SEC ID N°: 1250) y CC10 (SEC ID N°: 1251).
Se proporcionan asimismo en la presente memoria unas moléculas de ácido nucleico aislado que codifican una cadena VH, cadena de VL, dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2 y VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 y/o VL CDR3 de anticuerpos anti-C10orf54 se unen a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54. Se proporcionan además unos vectores y células hospedadoras que comprenden moléculas de ácido nucleico que codifican anticuerpos anti-C10orf54 que se unen a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54. Se proporcionan además unos métodos para preparar anticuerpos que se unen a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
Se proporcionan métodos de utilización de los anticuerpos anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos humanizados anti-C10orf54). Los métodos incluyen tratar, prevenir o aliviar una enfermedad, trastorno o afección, incluyendo uno o más síntomas de una enfermedad, trastorno o afección, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-C10orf54, incluyendo un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) que comprende un anticuerpo anti-C10orf54, previsto en la presente memoria a un sujeto, tratando, previniendo o aliviando así la enfermedad, el trastorno o la afección, incluyendo uno o más síntomas de la enfermedad, trastorno o afección. En algunos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 son anticuerpos humanizados que se unen a un polipéptido de C10orf54, a un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54. En un aspecto, la enfermedad, trastorno o afección es causada por o asociada con C10orf54, incluyendo por o asociadas a células que expresan C10orf54 (por ejemplo, células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células supresoras dendríticas (DC supresoras) y/o las células T reguladoras (T regs)). En ciertos aspectos, la enfermedad es un cáncer, tal como una leucemia, cáncer de vejiga, cáncer de la piel, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer hepático, cáncer renal, cáncer pulmonar, un cáncer de estómago, un cáncer pancreático, un cáncer esofágico o fibrosarcoma. En un aspecto, la leucemia es una leucemia mieloide aguda (AML). En otros aspectos, la enfermedad es enfermedad de injerto contra hospedador (GVHD). Los métodos adicionales proporcionados incluyen la utilización de un anticuerpo anti-C10orf54 con actividad de unión a C10orf54 para las células que expresan C10orf54, que se proporciona en la presente memoria, por ejemplo, como un anticuerpo no conjugado o anticuerpo conjugado (ADC), incluyendo inhibir y/o destruir las células que expresan C10orf54 (por ejemplo, con actividad antitumoral para mediar un efecto antitumoral). En algunos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54, incluyendo ADC que comprende los anticuerpos anti-C10orf54, que se proporcionan en la presente memoria inhiben la actividad supresora mediada por C10orf54 en las células T (por ejemplo, para permitir una eficaz respuesta inmunitaria antitumoral). En algunos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 que se proporcionan en la presente memoria destruyen directamente las células que expresan Cl0orf54 (porejemplo, las células tumorales portadoras de C10orf54, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células supresoras dendríticas (DC supresoras) y/o las células T reguladoras (T regs)), por ejemplo, a través de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y/o la citotoxicidad dependiente de complemento (CDC). En algunos aspectos, los conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) que comprenden anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria directamente destruyen las células que expresan C10orf54 incluyendo incluyendo mediante la unión a las células que expresan C10orf54 (por ejemplo las células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células supresoras dendríticas (DC supresoras), o las células T reguladoras (T regs)), por ejemplo, permitiendo la internalización del fármaco citotóxico. En cualquiera de los aspectos anteriores, el anticuerpo anti-C10orf54 puede ser un anticuerpo humanizado anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54. En cualquiera de los aspectos anteriores, el anticuerpo anti-C10orf54 puede ser un anticuerpo humanizado anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
Se proporcionan unos métodos adicionales de la utilización de un anticuerpo anti-C10orf54.
Los métodos incluyen métodos de inhibición del crecimiento de las células y/o destrucción de las células que presentan expresión superficial de C10orf54 que comprende poner en contacto las células con una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-C10orf54 o conjugados anticuerpo-fármaco que se proporcionan en la presente memoria. En un aspecto, la célula es una célula T reguladora (por ejemplo, una célula T reguladora c D4+ Foxp3+). En otros aspectos, la célula es una célula supresora derivada de mieloides (por ejemplo, una célula supresora derivada de mieloides CD11b+ o CD11bhigh) o una célula dendrítica supresora (por ejemplo, una célula dendrítica CD11b+ o CD11bhigh). En otros aspectos, la célula es una célula cancerosa o precancerosa. Los métodos adicionales proporcionados incluyen la utilización de un anticuerpo anti-C10orf54 con actividad de unión a C10orf54 para las células que expresan C10orf54 que se proporciona en la presente memoria, por ejemplo, como un anticuerpo no conjugado o anticuerpo conjugado (ADC) incluyendo inhibir y/o destruir las células que expresan C10orf54 (por ejemplo, con actividad antitumoral para mediar un efecto anti-tumoral). En algunos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54, incluyendo ADC que comprende los anticuerpos anti-C10orf54, que se proporcionan en la presente memoria inhiben la actividad supresora mediada por C10orf54 en las células T (por ejemplo, para permitir una eficaz respuesta inmunitaria antitumoral). En algunos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 que se proporcionan en la presente memoria destruyen directamente las células que expresan C10orf54 (por ejemplo, las células tumorales portadoras de C10orf54, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células supresoras dendríticas (DC supresoras) y/o las células T reguladoras (T regs)), por ejemplo, a través de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y/o la citotoxicidad dependiente de complemento (CDC). En algunos aspectos, los conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) que comprenden anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria directamente destruyen las células que expresan C10orf54 incluyendo la unión a las células que expresan C10orf54 (por ejemplo las células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células supresoras dendríticas (DC supresoras), y/o las células T reguladoras (T regs)), por ejemplo, permitiendo la internalización del fármaco citotóxico. En cualquiera de los aspectos anteriores, el anticuerpo anti-C10orf54 puede ser un anticuerpo humanizado anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
Los métodos incluyen métodos de modulación de una respuesta inmunitaria en un sujeto que comprende administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, un anticuerpo humanizado anti-C10orf54) proporcionado en la presente memoria a un sujeto. En un aspecto, la modulación comprende aumentar la activación de células T. En otro aspecto, la modulación comprende aumentar la proliferación de células T. En otro aspecto, la modulación implica aumentar la producción de citocinas.
Los métodos incluyen unos métodos para detectar C10orf54 en una muestra que incluye poner en contacto la muestra con un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, un anticuerpo humanizado anti-C10orf54) proporcionado en la presente memoria, tal como un anticuerpo que comprende un agente detectable. En algunos aspectos, la muestra comprende una célula que expresa C10orf54 en su superficie.
Los métodos incluyen unos métodos de tratar cánceres que comprenden administrar a un sujeto un anticuerpo anti-C10orf54 o un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) que incluye un anti-C10orf54 (por ejemplo, un ADC de la fórmula A-L-CTX, en donde A es el anticuerpo, L es un ligador y CTX es un agente citotóxico) en una cantidad terapéuticamente eficaz, incluyendo en una cantidad eficaz para destruir una célula que expresa C10orf54 (por ejemplo células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), célula dendrítica supresora (DC supresora) y/o célula T reguladora (T reg)). En algunos aspectos, el cáncer es la leucemia mieloide aguda (AML). En cualquiera de aspectos anteriores, el anticuerpo anti-C10orf54 puede ser un anticuerpo humanizado anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
Los métodos incluyen métodos de destruir células que expresan C10orf54 (por ejemplo, células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células dendríticas supresoras (DC supresoras) y/o las células T reguladoras (T reg)) que comprenden poner en contacto una célula que expresa C10orf54 (por ejemplo, células tumorales, células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), células dendríticas supresoras (Dc supresoras) y/o T células T reguladoras (regs de T)) con una cantidad de un anticuerpo anti-C10orf54 o un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) que comprende un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo un ADC de la fórmula A-L-CTX, en donde A es el anticuerpo, L es un ligadory CTX es un agente citotóxico) eficaz para destruir la célula (por ejemplo, célula tumoral, célula supresora derivada de mieloides (MDSC), célula dendrítica supresora (DC supresora) y/o célula T reguladora (T reg)). En algunos aspectos, la célula tumoral es una célula AML. En cualquiera de los aspectos anteriores, el anticuerpo anti-C10orf54 puede ser un anticuerpo humanizado anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
En un aspecto, se proporciona en la presente memoria un kit que comprende un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, un anticuerpo humanizado anti-C10orf54) que se une a un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54 proporcionados en la presente memoria. En algunos aspectos, los kits comprenden un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) en el que el anticuerpo es un anticuerpo anti-C10orf54 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado).
Anticuerpos
En algunos aspectos se proporcionan en la presente memoria unos anticuerpos que se unen a C10orf54, incluyendo un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54. En algunos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 son anticuerpos humanizados que se unen a C10orf54, incluyendo un polipéptido de C10orf54, un fragmento de polipéptido de C10orf54 o un epítopo de C10orf54.
En ciertos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y/o VL CDR3 del anticuerpo monoclonal de murino 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1,53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, o 305A como se muestra en la tabla 2 y las figuras 3-8, 22A, 22B, 23A, 23B, 24A, 24B, 25A, y 25B. En consecuencia, en algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 2. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 3. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1252. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1254. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1256. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1258. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1260. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1262. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1266. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1268. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1271. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1273. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1375. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1277. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1279. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1281. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1283. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1285. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1287. En algunos aspectos, el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1289. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 4. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 5. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 6. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1253. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1255. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1257. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1259. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1261. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1263. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1265. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1267. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1269. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1270. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1272. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1274. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1276. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1278. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1280. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1282. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1284. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1286. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1288. En algunos aspectos, el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1290.
Tabla 2. Secuencias de anticuerpo de murino
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En ciertos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VH FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de una secuencia de aminoácidos humano de línea germinal de inmunoglobulina humana o una variante de la misma. Por ejemplo, en algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VH FR1, FR2 VH, VH FR3, y/o VH FR4 representada en una secuencia de línea germinal humana identificada en la tabla 3. Por lo tanto, en algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VH FR1, FR2 VH, VH FR3, y/o VH FR4 de la línea germinal humana IGHV1-18 (SEC ID N°: 7) y IGHJ4-01 (SEC ID N°: 82). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VH FR1, FR2 VH, VH FR3, y/o VH FR4 de la línea germinal humana IGHV3-48 (Se C ID N°: 8) y IGHJ4-01 (SEC ID N°: 82). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VH FR1, VH FR2, VH FR3, y/o VH FR4 de la línea germinal humana IGHV1-46*01 (SEC ID N°:1902) y IGHJ4-01 (SEC ID N°: 82). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una Vh FR1, VH FR2, VH FR3, y/o VH FR4 de la línea germinal humana IGHV3-74*01 (SEC ID N°:1903) y IGHJ4-01 (SEC ID N°: 82). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una Vh FR1, VH FR2, Vh FR3, y/o VH FR4 de la línea germinal humana IGHV4-61*01 (SEC ID N°:1904) y IGHJ4-01 (SEC ID N°: 82). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV2-28 (SEC ID N°: 9) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV1-39 (SEC ID N°: 10) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL f R i , VL FR2, VL Fr 3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV3-20 (SeC ID N°: 10) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGHV1-46*01 (SEC ID N°:1920) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGHV3-74*01 (SEC ID N°:1903) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, v L FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGHV4-61*01 (SEC ID N°:1904) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, Vl FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV2-28*0l (SEC ID N°:1905) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV2-29*02 (SEC ID N°:1906) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV1-39*01 (SEC ID N°:1907) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, VL Fr 3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV3-20*01 (SEC ID N°:1908) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, Vl FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV3D-20*01 (SEC ID N°:1909) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV3-11*01 (SEC ID N°:1910) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, v L FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV2-30*01 (SEC ID N°:1911) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, Vl FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV2-30*02 (SEC ID N°:1912) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94). En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C10orf54 comprende una VL FR1, VL FR2, VL FR3, y/o VL FR4 de la línea germinal humana IGKV4-1*01 (SEC ID N°:1913) y IGKJ2-1 (SEC ID N°:94).
Tabla 3. Secuencias de aminoácidos de inmunoglobulina de línea germinal humana
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En ciertos aspectos, los anticuerpos que se unen a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido C10orf54, epítopo de C10orf54) comprenden un dominio VH que presenta una secuencia de aminoácidos identificada en la tabla 4 o figuras 3-8, 22A, 22B, 23A, 23B, 24A, 24B, 25A o 25B y/o un dominio VL que presenta una secuencia de aminoácidos identificada en la tabla 4 o figuras 3-8, 22A, 22B, 23A, 23B, 24A, 24B, 25A o 25B.
Tabla 4. Secuencias de aminoácidos de anticuerpo humanizado de dominios VH y VL
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Por lo tanto, en algunos aspectos, los anticuerpos que se unen a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de Cl0orf54) comprenden un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 20, 21, 22, 23, 1529-1531, 1535-1537, 1541-1545 o y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 28, 29, 1532-1534, 1538-1540, o 1546-1549. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 20 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 28. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 21 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 28. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio Vh que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 22 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 28. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 23 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 28. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 20 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 29. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 21 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 29. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de Cl0orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 22 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 29. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de Cl0orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 23 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 29.
En algunos aspectos, los anticuerpos que se unen a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprenden un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 12, 13, 14 o 15 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 24 o 25. En consecuencia, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 12 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 24. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 13 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 24. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 14 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 24. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 15 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 24. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 12 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 25. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 13 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 25. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio Vh que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 14 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 25. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 15 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 25.
En algunos aspectos, los anticuerpos que se unen a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprenden un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 16, 17, 18 o 19 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 26 o 27. En consecuencia, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 16 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 26. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio Vh que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 17 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 26. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 18 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 26. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 19 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 26. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 16 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 27. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 17 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 27. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 18 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 27. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende un dominio VH que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 19 y/o un dominio VL que presenta la secuencia de aminoácidos SEC ID N°: 27.
En ciertos aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria que se unen a un epítopo de C10orf54 comprenden una región VH que presenta una VH CDR1, VH CDR2, y/o VH CDR3, que presentan una secuencia de aminoácidos identificada en las tablas 5-11 o en las tablas 12-33 a continuación; y/o una región VL que presenta VL CDR1, VL CDR 2 y/o VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos identificada en las tablas 5-11 o en las tablas 12-33 a continuación.
Tabla 5: Secuencias de aminoácidos derivadas del anticuerpo 175A de murino.
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Tabla 6: Secuencias de aminoácidos derivadas del anticuerpo 76E1 de murino.
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Tabla 7: Secuencias de aminoácidos derivadas del anticuerpo 141A de murino.
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*La numeración de posición de aminoácidos es como en Kabat.
Tabla 8: Secuencias de aminoácidos derivadas del anticuerpo 26A de murino.
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Tabla 9: Secuencias de aminoácidos derivadas del anticuerpo 128A de murino.
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Tabla 10: Secuencias de aminoácidos derivadas del anticuerpo 124A de murino.
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Tabla 11: Secuencias de aminoácidos derivadas del anticuerpo 259A de murino.
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En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 36; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 37; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38. En ciertos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende de: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 6. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 28. Incluso en otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 29. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 36; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 37; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38; y (b) una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47. En la medida en que un anticuerpo proporcionado en la presente memoria se "una a un epítopo de C10orf54", se prevé que aquellos anticuerpos también se unan a un polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido o a un antígeno del mismo.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 36; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 50; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38. En ciertos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende de: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 6. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 28. Incluso en otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 29. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 36; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 50; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38; y (b) una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 36; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 99; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38. En ciertos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende de: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 6. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 28. Incluso en otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 29. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 36; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 99; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38; y (b) una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47.
En otro aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL c DR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VH que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 20. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VH que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 2 l. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VH que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 22. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VH que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 23.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 30; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 31; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 32. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 24. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 25. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 30; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 31; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 32; y (b) una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 30; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 321; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 32. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 24. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 25. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 30; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 321; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 32; y (b) una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 30; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 835; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 32. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 24. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 25. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 30; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 835; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 32; y (b) una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41.
En algunos aspectos, un anticuerpo que se une a C10orf54 (porejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) un VL c DR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VH que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 12. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VH que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 13. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VH que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 14. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VH que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 15.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (porejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 33; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 34; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 26. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 27. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 33; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 34; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35; y (b) una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (porejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 33; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 49; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 26. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 27. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 33; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 49; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35; y (b) una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (porejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 33; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1070; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44. En otros aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 26. En otro aspecto, el anticuerpo comprende además una región VL que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 27. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) un VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 33; (2) un VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1070; y (3) un VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35; y (b) una región VL que comprende: (1) un VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42; (2) un VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43; y (3) un VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44.
Como apreciará el experto en la materia, los límites entre las CDR y las secuencias estructurales para cualquiera de las regiones VH y regiones VL que se describen en la presente memoria, se pueden determinar mediante alguno de los métodos bien conocidos en la materia, incluyendo IMGT, Kabat, Chothia, Contact, AbM o Kabat más Chothia (por ejemplo, "ejemplificante" como se describe en la presente memoria). Por lo tanto, cualquier anticuerpo anti-C10orf54 que presenta una o varias CDR o una secuencia estructural como se describe en la presente memoria, incluye una CDR o secuencia de aminoácidos estructural como se determina usando IMGT, Kabat, Chothia, Contact, AbM o Kabat más Chothis. Por ejemplo, las secuencias CDR ejemplificativas para ambas regiones VH y VL que pueden incluirse en un anticuerpo anti-C10orf54 de la descripción se representan en las tablas 12-33 (ver también, por ejemplo, las Tablas 5-11).
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En ciertos aspectos, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 30, 33, 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, y 1717-1720; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 31, 34, 37, 849, 1082, 1088, 1092, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1118, 1124, 1129, 1134, 1161, 1336-1344, 1348­ 1384, 1556-1559, 1829-1847, y 1917; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 32, 35, 38, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130, y 1385-1424.
En ciertos aspectos, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 42, 45, 253­ 271, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896, y 1915; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 40, 43, 46, 157, 843-846, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688, y 1898-1900, y 253-1900; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 41, 44, 47, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 y 1493­ 1525.
En ciertos aspectos, el anticuerpo comprende (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 30, 33, 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, y 1717-1720; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 31, 34, 37, 849, 1082, 1088, 1092, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1118, 1124, 1129, 1134, 1161, 1336-1344, 1348-1384, 1556­ 1559, 1829-1847, y 1917; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 32, 35, 38, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 y 1385­ 1424; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 42, 45, 253-271, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896, y 1915; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 40, 43, 46, 157, 843-846, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688, y 1898-1900, y 253-1900; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 41, 44, 47, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 y 1493-1525. En la medida en que un anticuerpo proporcionado en la presente memoria se "une a un epítopo de C10orf54", se prevé que esos anticuerpos también se unan a un polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido o a un antígeno del mismo.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249), y CC10 (SEC ID N°: 1251), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), y CC9 (SEC ID N°: 1250). En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región variable de cadena pesada (VH) que comprende: (1) una VH c DR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 1291-1305, 1311-1315, y 1321-1325; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 37, 849, 1082, 1088, 1093, 1098, 1336-1344, 1348-1367, 1373, 1374, y 1556­ 1559; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 38, 1083, 1094, 1089, 1385-1404 y 1409-1412; y/o (b) una región variable de cadena ligera (VL) que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 45, 1102, 1108, 1113, 1425-1430, 1432-1457, 1681-1684, y 1915; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 40, 157, 1103, 1114, 1473-1481, 1526-1528, 1630-1633, y 1685-1688; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1493-1507, 1511-1516, y 1523-1525. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1291, 1292, 1293, 1294, o 1295; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1336, 1337, 1338, 1339, o 1340; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1385, 1386, 1387, o 1388; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1425, 1426, 1427, o 1428; (2) una v L CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1473, 1474, o 1475; y (3) una VL c Dr 3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1493, 1494, o 1495. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1291, 1292, 1293, 1294, o 1295; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1341, 1342, 1338, 1343, o 1344; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1389, 1390, 1391, o 1392; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1425, 1426, 1427, o 1428; (2) una v L CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1473, 1474, o 1475; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1496, 1497, o 1498. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1291, 1292, 1293, 1294, o 1295; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1348, 1337, 1338, 1349, o 1350; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1385, 1386, 1387, o 1388; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1429, 1426, 1427, 1430, 1681, 1682, 1683, o 1684; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1473, 1474, 1475, 1685, 1686, 1687, o 1688; y (3) una v L CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1493, 1494, o 1495. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1291, 1292, 1293, 1294, o 1295; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1348, 1337, 1338, 1349, o 1350; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1385, 1386, 1387, o 1388; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1429, 1426, 1427, o 1430; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1473, 1474, o 1475; y (3) una VL Cd R3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1493, 1494, o 1495. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1291, 1292, 1293, 1294, o 1295; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1351, 1337, 1338, 1352, o 1353; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1385, 1386, 1387, o 1388; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1425, 1426, 1427, o 1428; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1473, 1474, o 1475; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1493, 1494, o 1495. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 30, 1099, 1104, 1105, o 1110; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1359, 1360, 1361, 1362, o 1363; y (3 ) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1397, 1398, 1399, o 1400; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1437, 1451, 1438, 1452, 1451 1439, 1453, 1450, o 1915; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1526, 1479, 1527, 1480, 157, 1528, o 1481; y (3) una Vl Cd R3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1523, 1502, 1524, 1503, 1525, o 1504. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1301, 1302, 1303, 1304, o 1305; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1364, 1365, 1361, 1366, o 1367; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1401, 1402, 1403, o 1404; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1454, 1455, 1456, o 1457; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40, 1103, o 1114; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1505, 1506, o 1507. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1311, 1312, 1313, 1314, o 1315; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 37, 1082, 1088, 1093, o 1098; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1409, 1410, 1411, o 1412; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45, 1102, 1108, o 1113; (2) una VL c Dr 2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40, 1103, o 1114; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1511, 1512, o 1513. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1321, 1322, 1323, 1324, o 1325; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 849, 1082, 1088, 1373, o 1374; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38, 1083, 1089, o 1094; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45, 1102, 1108, o 1113; (2) una VL Cd R2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40, 1103, o 1114; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1514, 1515, o 1516.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), y CC8 (SEC ID N°: 1249), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), CC9 (SEC ID N°: 1250), y CC10 (s Ec ID N°: 1251). En algunos aspectos, tal anticuerpo no comprende una o más secuencias CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 32, 1101, 1107, 1112, 45, 1102, 1108, 1113, 40, 1103, 1114, 41, 1109, y 1115. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región variable de cadena pesada (VH) que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 30, 1099, 1110, 1104, 1105, 1296-1300, 1306-1310, 1316-1320, y 1717-1720; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en Se C ID N°: 31, 37, 1082 , 1088, 1092, 1098, 1100 , 1106, 1111, 1116, 1354-1358, 1368-1372, 1829-1847, y 1917; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 38, 1083, 1094, 1089, 1393-1396, 1405­ 1408,1414; y/o (b) una región variable de cadena ligera (VL) que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 45, 253-271, 1102, 1108, 1113, 1431-1434, 1458-1465, 1744-1822, 1878-1896; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 40, 843-846, 1103, 1114, 1476-1478, 1482-1487, 1898-1900; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEc ID N°: 41, 1109, 1115, 1499-1501, 1508-1513. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1296, 1297, 1298, 1299, o 1300; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1354, 1355, 1356, 1357, o 1358; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1393, 1394, 1395, o 1396; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1431, 1432, 1433, o 1434; (2) una v L CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1476, 1477, o 1478; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1499, 1500, o 1501. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1306, 1307, 1308, 1309, o 1310; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1368, 1369, 1370, 1371, o 1372; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1405, 1406, 1407, o 1408; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1458, 1459, 1460, o 1461; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1482, 1483, o 1484; y (3) una VL Cd R3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1508, 1509, o 1510. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1306, 1307, 1308, 1309, o 1310; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1368, 1369, 1370, 1371, 1372, 1829, 1830, 1831, 1832, 1833, 1834, 1835, 1836, 1837, 1838, 1839, 1840, 1841, 1842, 1843, 1844, 1845, 1846, o 1847; y (3) una VH CDR3que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1405, 1406, 1407, o 1408; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1458, 1459, 1460, 1461, 1878, 1879, 1880, 1881, 1882, 1883, 1884, 1885, 1886, 1887, 1888, 1889, 1890, 1891, 1892, 1893, 1894, 1895, o 1896; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1485, 1486, 1487, 1897, 1898, 1899, o 1900; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1508, 1509, o 1510. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1316, 1317, 1318, 1319, o 1320; (2 ) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 37, 1082, 1088, 1092, o 1098; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38, 1083, 1089, o 1094; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1462, 1463, 1464, o 1465; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40, 1103, o 1114; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1511, 1512, o 1513. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1316, 1317, 1318, 1319, 1320, 1717, 1718, 1719, o 1720; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 37, 1082, 1088, 1917, o 1098; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1413, 1414, 1089, o 1094; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1462, 1463, 1464, 1465, 1744, 45, 1745, 1746, 1747, 1748, 1749, 1750, 1751, 1752, 1753, 1754, 1755, 1756, 1757, 1758, 1759, 1760, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 1.761, 1.762, 1.763, 1.764, 1.765, 1.766, 1.767, 1.768, 1.769, 1.770, 1.771, 1.772, 1.773, 1.774, 1.775, 1.776, 1.777, 1.778, 1.779, 1.780, 1.781, 1782, 1783, 1784, 1785, 1786, 1787, 260, 1788, 1789, 1790, 1791, 264, 268, 1792, 1793, 1794, 1795, 1796, 261, 1797, 1798, 1799, 1800, 265, 269, 1801, 1802, 1803, 1804, 1805, 262, 1806, 1807, 1808, 1809, 266, 270, 1810, 1811, 1812, 1813, 1814, 263, 1815, 1816, 1817, 1818, 267, 271, 1819, 1820, 1821, o 1822; (2) una VL CDR2 que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40, 1103, 1114, 843, 844, 846, o 845; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1511, 1512, o 1513.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), y CC5 (SEC ID N°: 1246), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), CC8 (SEC ID N°: 1249), CC9 (SEC ID N°: 1250), y CC10 (SEC ID N°: 1251). En algunos aspectos, tal anticuerpo no comprende una o más secuencias CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 38, 1083, 1089, 1094, 45, 1084, 1090, 1095, 46, 1085, 1096, 47, 1091, y 1097.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), Cc 8 (SEC ID N°: 1249), y CC9 (SEC ID N°: 1250), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), CC9 (SEC ID N°: 1250), y CC10 (SEC ID N°: 1251). En algunos aspectos, tal anticuerpo no comprende una o más secuencias CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en 33, 1117, 1122, 1123, 1128, 34, 1118, 1124, 1129, 1134, 35, 1119, 1125, 1130, 42, 1120, 1126, 1131,43, 1121, 1132, 44, 1127, y 1133. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región variable de cadena pesada (VH) que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 33, 1117, 1122, 1123, y 1128; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 34, 1082, 1088, 1118, 1124, 1129, y 1134; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 35, 1119, 1130, 1125, 1415 y 1416; y/o (b) una región variable de cadena ligera (Vl ) que comprende: (1 ) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 42, 1120, 1126, y 1131; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 43, 1121, y 1132; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 44, 1127, y 1133. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 33, 1117, 1122, 1123, o 1128; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 34, 1082, 1088, 1129, o 1134; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35, 1415, 1125, o 1416; y/o (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42, 1120, 1126, o 1131; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43, 1121, o 1132; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44, 1127, o 1133.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249), y CC9 (SEC ID N°: 1250), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), y CC10 (s Ec ID N°: 1251). En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1326, 1327, 1328, 1329, o 1330; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1375, 1376, 1377, 1378, o 1379; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1417, 1418, 1419, o 1420; y/o (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1466, 1467, o 1468; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1488, 1489, o 1490; y (3) una VL c Dr 3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1517, 1518, o 1519.
En ciertos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se une a un primer grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC1 (SEC ID N°: 1079), CC4 (SEC ID N°: 1245), CC5 (SEC ID N°: 1246), CC8 (SEC ID N°: 1249), y CC10 (SEC ID N°: 1251), y no se une a un segundo grupo de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas designadas como CC2 (SEC ID N°: 1243), CC3 (SEC ID N°: 1244), CC6 (SEC ID N°: 1247), CC7 (SEC ID N°: 1248), CC9 (SEC ID N°: 1250), y CC10 (SEC ID N°: 1251). En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1331, 1332, 1333, 1334, o 1335; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1380, 1381, 1382, 1383, o 1384; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1421, 1422, 1423, o 1424; y/o (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1469, 1470, 1471, o 1472; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1491, 1488, o 1492; y (3) una VL Cd R3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1520, 1521, o 1522.
De acuerdo con las secuencias de aminoácidos divulgadas en las tablas 12-33, en algunos aspectos, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende: una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 33, 1117, 1122, 1123, 1128 o 1291-1335; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 34, 1118, 1124, 1129, 1134 o 1336-1384; y/o (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38, 1083, 1089, 1094, 32, 1101, 1107, 1112, 35, 1119, 1125, 1130, o 1385-1424. En ciertos aspectos, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 42, 1120, 1126, 1131 o 1425-1472; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46, 1085, 1096, 40, 1103, 1114, 43, 1121 y 1132; y/o (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47, 1091, 1097, 41, 1109, 1115, 44, 1127, 1133 o 1493-1525. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 33, 1117, 1122, 1123, 1128 o 1291-1335; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 34, 1118, 1124, 1129, 1134 o 1336-1384; y/o (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38, 1083, 1089, 1094, 32, 1101, 1107, 1112, 35, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 42, 1120, 1126, 1131 o 1425-1472; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46, 1085, 1096, 40, 1103, 1114, 43, 1121, 1132, 1473 -1492 o 1526­ 1528; y/o (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47, 1091, 1097, 41, 1109, 1115, 44, 1127, 1133 o 1493-1525.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1081; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1082; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1083. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1084; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1085; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC iD N°: 1081; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1082; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1083; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1084; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1085; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1086; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 37; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1086; (2) una VH c DR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 37; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1087; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1088; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1089. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1090; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1085; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1091. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1087; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1088; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1089; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1090; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1085; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1091.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1092; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1093; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1094. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1095; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1096; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1097. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1092; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1093; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1094; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1095; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1096; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1097.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 36; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1098; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 36; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1098; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 38; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 46; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1099; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1100; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1101. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1102; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1103; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1099; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1100; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1101; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1102; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1103; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1104; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 31; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 32. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1104; (2) una VH c DR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 31; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 32; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1105; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1106; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1107. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1108; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1103; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1109. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1105; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1106; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1107; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1108; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1103; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1109.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1110; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1111; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1112. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1113; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1114; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1115. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1110; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1111; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1112; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1113; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1114; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1115.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 30; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1116; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 32. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 30; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1116; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 32; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 45; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 40; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 41.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC iD N°: 1117; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1118; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1119. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1120; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1121; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1117; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1118; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1119; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1120; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1121; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1122; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 34; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1122; (2) una VH c DR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 34; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1123; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1124; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1125. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1126; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1121; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1127. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1123; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1124; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1125; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1126; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1121; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1127.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1128; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1129; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1130. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1131; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1132; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1133. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1128; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1129; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1130; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1131; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1132; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1133.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 33; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1134; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende además una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44. En un aspecto, el anticuerpo comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 33; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1134; y (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 35; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42; (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 43; y (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 44.
En ciertos aspectos, un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una o más secuencias de consenso derivadas de anticuerpos relacionados tal como se representa en las figuras 17A y 17B. Como se describe en la presente memoria, una "secuencia de consenso" se refiere a secuencias de aminoácidos que conservan los aminoácidos comunes entre una cantidad de secuencias y aminoácidos variables que varían dentro de una determinada secuencia de aminoácidos. Las secuencias de consenso CDR que se proporcionan incluyen CDR correspondientes a CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 y/o CDRL3. Las secuencias de consenso de CDR de los anticuerpos anti-C10orf54 se muestran en las figuras 17A y 17B. Por lo tanto, en algunos aspectos, un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado comprende una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de GYTFSX1X2WIE (SEC ID N°: 1149), en donde X1 es una R o T y X2 es una Y o H; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de EILPGSGSTX1YNEKFKG (SEC ID N°: 1150), en donde X1 es una N o S; y/o (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de xxxxxxxxxX-^Y (SEC ID N°: 1151), en donde x es cualquier residuo aminoacídico, X1 es una M o F, y X2 es G o D. En ciertos aspectos, un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado comprende una región que comprende VL: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de RSSq S iVHSNGNTYLE (SEC ID N°: 45); (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de KX1SNRFS (SEC ID N°: 1152), en donde X1 es una V o L; y/o (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos FQGSHX1PX2M (Se C ID N°: 1153), en donde X1 es V o F y X2 es un W o Y En ciertos aspectos, un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado comprende: (a) una región VH que comprende: (1) una VH CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de GYTFSX1X2W 1E (SEC ID N°: 1149), en donde X1 es una R o T y X2 es una Y o H; (2) una VH CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de EILPGSGSTX1YNEKFKG (SEC ID N°: 1150), en donde X1 es una N o S; y/o (3) una VH CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos de xxxxxxxxxX-^Y (SEC ID N°: 1151), en donde x es cualquier residuo aminoacídico, X1 es una M o F, y X2 es G o D; y (b) una región VL que comprende: (1) una VL CDR1 que presenta una secuencia de aminoácidos de RSSQSIVHSn Gn TYLE (SEC ID N°: 45); (2) una VL CDR2 que presenta una secuencia de aminoácidos de KX1SNRFS (SEC ID N°: 1152), en donde X1 es una V o L; y/o (3) una VL CDR3 que presenta una secuencia de aminoácidos FQGSHX1PX2M (SEC ID N°: 1153), en donde X1 es V o F y X2 es un W o Y.
En algunos aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria comprenden una región VH que comprende o consiste en un dominio VH. En otros aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria comprenden una región VH que comprende o consiste en una cadena VH. En algunos aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria comprenden una región VL que comprende o consiste en un dominio VL. En otros aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria comprenden una región VL que comprende o consiste en una cadena VL. En algunos aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria presentan una combinación de (i) un dominio VH o una cadena VH; y/o (ii) un dominio VL o cadena VL.
En algunos aspectos, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria comprende o consiste en seis CDR, por ejemplo, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y/o VL CDR3 identificadas en las tablas 5-33. En ciertos aspectos, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria puede comprender menos de seis CDR. En algunos aspectos, el anticuerpo comprende o consiste en una, dos, tres, cuatro, o cinco CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y/o VL CDR3. En unos aspectos específicos, el anticuerpo comprende o consiste en una, dos, tres, cuatro, o cinco CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y/o VL CDR3 del anticuerpo monoclonal de murino 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, o 305A que describe en la presente memoria, o una variante humanizada del mismo, como se identifica en las tablas 5-33. En consecuencia, en algunos aspectos, el anticuerpo comprende o consiste en una, dos, tres cuatro o cinco CDR seleccionadas de entre el grupo que consiste en VH CDR1 , VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y/o VL CDR3 identificadas en las tablas 5-33.
En algunos aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente invención comprenden una o más (por ejemplo una, dos o tres) VH CDR presentadas en las tablas 5-33. En otros aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente invención comprenden una o más (por ejemplo, una, dos o tres) VL CDR presentadas en las tablas 5-33. En todavía otras formas de realización, los anticuerpos proporcionados en la presente invención comprenden una o más (por ejemplo, una, dos o tres) VH CDR presentadas en las tablas 5­ 33, y una o más VL CDR presentadas en las tablas 5-33. Por lo tanto, en ciertos aspectos, los anticuerpos comprenden una VH CDR1 que presenta la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEC ID N°: 36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335, y 1717-1720. En otro aspecto, los anticuerpos comprenden una VH CDR2 que presenta la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEC ID N°: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835 a 842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847, y 1917. En otro aspecto, los anticuerpos comprenden una VH CDR3 que presenta la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEC ID N°: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 y 1385-1424. En ciertos aspectos, los anticuerpos comprenden una VH CDR1 y/o una VH CDR2 y/o una VH CDR3 seleccionadas indistintamente a partir de una VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3 como se muestra en cualquiera de las regiones VH cualesquiera representadas en las tablas 5-33. En ciertos aspectos, los anticuerpos comprenden una VL CDR1 que presenta la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEC ID N°: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878­ 1896, y 1915. En otro aspecto, los anticuerpos comprenden una VL CDR2 que presenta la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEC ID N°: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688, y 1898-1900. En otro aspecto, los anticuerpos comprenden una VL CDR3 que presenta la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEC ID N°: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 y 1493-1525. En ciertos aspectos, los anticuerpos comprenden una VL CDR1 y/o una VL CDR2 y/o una VL CDR3 seleccionadas indistintamente a partir de una VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3 como se muestra en cualquiera de las regiones VL cualesquiera representadas en las tablas 5-33.
También se proporcionan en la presente memoria anticuerpos que comprenden una o más VH CDR y una o más (por ejemplo, una, dos o tres) VL CDR presentadas en las tablas 5-33. En términos particulares, se proporciona en la presente memoria un anticuerpo que comprende una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081 , 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720) y una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271,42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843­ 846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898­ 1900); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917) y una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385­ 1424) y una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425­ 1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ); una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843­ 846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898­ 1900); una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41,44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917) y una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101­ 104, 50, 114, 99, 100, 31,65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424) y una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31,65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59­ 62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717­ 1720), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425­ 1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272­ 275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685­ 1688 o 1898-1900) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41,44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493­ 1525); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31,65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847­ 858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272­ 275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685­ 1688 o 1898-1900); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31,65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835­ 842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41,44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101­ 104, 50, 114, 99, 100, 31,65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526­ 1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900); una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424) y una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878­ 1896 o 1915 ); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31,65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385­ 1424) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473­ 1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829­ 1847 o 1917), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41,44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744­ 1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717­ 1720), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31,65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253­ 271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556­ 1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41,44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59­ 62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717­ 1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31,65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847­ 858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321,322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900) y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744­ 1822, 1878-1896 o 1915 ), una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900), y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR1 (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 o 1717-1720), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385­ 1424), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425­ 1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ), una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045­ 1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900), y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); una VH CDR2 (SEC ID N°:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070­ 1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 o 1917), una VH CDR3 (SEC ID N°:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 o 1385-1424), una VL CDR1 (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 o 1915 ), una VL CDR2 (SEC ID N°:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 o 1898-1900), y una VL CDR3 (SEC ID N°:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 o 1493-1525); o cualquier combinación de las mismas VH CDR (SEC ID N°:36, 30, 59-62, 33, 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83­ 90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-8941070-1078, 38, 32, 319, 35, 883-885, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125 y 1130) y VL CDR (SEC ID N°:45, 253-271, 42, 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 47, 41, 44, 1056-1058, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127 y 1133) presentadas en las tablas 5-33.
En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-C10orf54 humanizados se unen a un polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido o epítopo con una afinidad comparable a la de uno o más de los anticuerpos monoclonales de origen murino designados como 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353a, o 305A. Los anticuerpos anti-C10orf54 humanizados también pueden comprender una dos, tres o cuatro regiones estructurales humanas o humanizadas de la región variable de cadena pesada de inmunoglobulina y/o una dos, tres o cuatro regiones estructurales humanas o humanizadas de la región variable de cadena ligera de inmunoglobulina. También se proporcionan regiones FR de cadena pesada y/o ligera que contienen una o más copias de las mutaciones en las que un residuo FR de humano se intercambia por el residuo correspondiente presente en la cadena pesada o ligera parental de origen murino o otro residuo comparable al residuo. En algunos aspectos, las secuencias de aminoácidos para CDR1, CDR2, y CDR3 de las cadenas pesadas y ligeras para algunos de los anticuerpos anti-C10orf54 humanizados también pueden incluir una o más mutaciones en las que existe un residuo CDR como se identifica en las tablas 5-33. Las secuencias de aminoácidos para FR1, FR2, FR3 y FR4 de las cadenas pesadas y ligeras que se pueden utilizar para los anticuerpos anti-C10orf54 humanizados se identifican en las tablas 5-11 y en las figuras 3-9, 17 y 22-25.
En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VH que comprende: (1) una VH FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827, y 1828; (2) una VH FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64, y 323-326; (3) una VH FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742, y 1848-1875; y/o (4) una VH FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 54, 320, 168 054, 320, 1680. Por lo tanto, en algunos aspectos, el anticuerpo humanizado comprende una región VH que incluye una VH FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827, y 1828. En algunos aspectos, el anticuerpo humanizado comprende una región VH que incluye una VH FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64, y 323-326. En algunos aspectos, el anticuerpo humanizado comprende una región VH que incluye una VH FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742, y 1848-1875. En algunos aspectos, el anticuerpo humanizado comprende una región VH que incluye una VH FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 54, 320, 168054, 320, 1680.
En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una región VL que comprende: (1) una VL FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877, y 1878; (2) una VL FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067, y 1823-1826; (3) una VL FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714, y 1901; y/o (4) una VL FR4 que presenta un aminoácido de SEC ID N°: 54, 320, 168 054, 320, 78. Por lo tanto, en algunos aspectos, el anticuerpo humanizado comprende una región VL que incluye una VL FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877, y 1878. En algunos aspectos, el anticuerpo humanizado comprende una región VL que incluye una VL FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067, y 1823-1826. En algunos aspectos, el anticuerpo humanizado comprende una región VL que incluye una VL FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714, y 1901. En algunos aspectos, el anticuerpo humanizado comprende una región VL que incluye una VL FR4 que presenta un aminoácido de SEC ID N°: 78.
En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende región VH y una región VL, en donde la región VH comprende además: (1) una VH FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827, y 1828; (2) una VH FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC iD N°: 52, 106, 56, 122-124, 63, 64, y 323-326; (3) una VH FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292­ 318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742, y 1848-1875; y/o (4) una VH FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 54, 320, 168 054, 320, 1680;, en donde la región VL comprende además: (1) una VL FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877, y 1878; (2) una VL FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°:76, 80, 2 84 , 92, 1038-1044, 1062-1067, y 1823-1826; (3) una VL FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en Se C ID N°:77, 276, 81 , 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714, y 1901; y/o (4) una VL FR4 que presenta un aminoácido de SEC ID N°: 54, 320, 168054, 320, 78.
También se proporcionan en la presente memoria anticuerpos que comprenden una o más (por ejemplo una, dos o tres) VL FR y una o más VL FR presentadas en las tablas 5-11. En particular, se proporciona en la presente memoria un anticuerpo que comprende una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121,39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828) y una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 18781037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-18261044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 19011068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326) y una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 18781037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-18261044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 19011068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251,96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107­ 113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848­ 1875882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285­ 291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875882, 903-1030, 1560­ 1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326) y una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615­ 1629, 1743, 1877 o 1878); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901);una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326) y una VL FR4 (SEC ID N°:78);una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875882, 903-1030, 1560-1614, 1653­ 1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615­ 1629, 1743, 1877 o 1878), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903­ 1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81,285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031­ 1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062­ 1067 o 1823-1826); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81 ,285­ 291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323­ 326), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689­ 1714 o 1901); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251,96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 168054, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615­ 1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615­ 1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81,285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653­ 1679, 1721-1742 o 1848-1875) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81,285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689­ 1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107­ 113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848­ 1875) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615­ 1629, 1743, 1877 o 1878); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653­ 1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550­ 1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653­ 1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615­ 1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96­ 98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859­ 882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689­ 1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689­ 1714 o 1901); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251,96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038­ 1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81,285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689­ 1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107­ 113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848­ 1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125­ 251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859­ 882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038­ 1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062­ 1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653­ 1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323­ 326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560­ 1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049­ 1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122­ 124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062­ 1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292­ 318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81,285-291,93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721­ 1742 o 1848-1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859­ 882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125­ 251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903­ 1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031­ 1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062­ 1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96­ 98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903­ 1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062­ 1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323­ 326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560­ 1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323­ 326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550­ 1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323­ 326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560­ 1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125­ 251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323­ 326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285­ 291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251,96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653­ 1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615­ 1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859­ 882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107­ 113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848­ 1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689­ 1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550­ 1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 9031030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031­ 1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125­ 251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031­ 1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); 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una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323­ 326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901), y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125­ 251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96­ 98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653­ 1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038­ 1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81,285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689­ 1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107­ 113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848­ 1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823­ 1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653­ 1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81,285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277­ 283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81,285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823­ 1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689­ 1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550­ 1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125­ 251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615­ 1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653­ 1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689­ 1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653­ 1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277­ 283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031­ 1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81,285-291,93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721­ 1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615­ 1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125­ 251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277­ 283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038­ 1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81,285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327­ 833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), una VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903­ 1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903­ 1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031­ 1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR1 (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 o 1828), una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); una VH FR2 (SEC ID N°:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 o 323-326), una VH FR3 (SEC ID N°:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 o 1848-1875), una VH FR4 (SEC ID N°:54, 320, 1680), una VL FR1 (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 o 1878), VL FR2 (SEC ID N°:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 o 1823-1826), VL FR3 (SEC ID N°:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 o 1901) y una VL FR4 (SEC ID N°:78); o cualquier combinación de las VH FR (SEC ID N°:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 52, 106, 56, 122-124, 63, 64, 323-326, 53, 107­ 113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882903-1030, 54, 320, 1680) y las VL FR (SEC ID N°:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067, 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049­ 1055, 1068, 1069, o 78) presentadas en las tablas 5-11.
En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a un grupo A de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas descritas en la presente memoria, comprende una región VH que comprende: (1) una VH FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 51, 1550, -1555, 105, y 1649-1652; (2) una VH FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 52 y 106; (3) una VH FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1560, -1614, y 1653-1679; y/o (4) una VH FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 54 y 1680. En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a un grupo A de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas descritas en la presente memoria, comprende una región VL que comprende: (1) una VL f R1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1615-1629, 79, y 278; (2) una VL FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 92, 80, y 284; (3) una VL FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1634-1648, 81, 1689 -1714, 285, 286, y 288; y/o (4) una VL FR4 que presenta un aminoácido de SEC ID N°: 78. En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a un grupo A de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas descritas en la presente memoria comprende una región VH y una región VL, en donde la región VH comprende además: (1) una Vh FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 51, 1550, -1555, 105, y 1649-1652; (2) una VH FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 52 y 106; (3) una VH FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1560, -1614, y 1653-1679; y/o (4) una VH FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 54 y 1680; y en donde la región VL comprende además: (1) una VL FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1615-1629, 79, y 278; (2) una VL FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 92, 80, y 284; (3) una VL FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1634-1648, 81, 1689 -1714, 285, 286, y 288; y/o (4) una VL FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 78.
En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a un grupo A de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas descritas en la presente memoria, comprende una región VH que comprende: (1) una VH FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 51, 39, 1715, 1716, 1550, 1827,1828, 105, 55, y 115-121; (2) una VH FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en Se C ID N°: 52, 106, 63, 64, 56, 323, -326-1315, y 122-124; (3) una VH FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1560, 1561, 1721-1742, 1566, 1567, 1571, 1575, 1585, 1562, 1563, 1848-1875, 1565-1568, 1570-1572, 1574, 1575, 1577, 1578, 1581, 1582, 1584, 1585, 1587, 1591, 1593, 1594, 1597, 1602, 1603, 53, 107, 96-98, 292-318, 57, y 327-833; y/o (4) una VH FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 54 y 320. En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a un grupo A de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas descritas en la presente memoria, comprende una región VL que comprende: (1) una VL FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1743, 75, 252, 1878, 1877, 323, 79-1315, y 277283; (2) una VL FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1823-1826, 76, 80, y 284; (3) una VL FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 77, 276, 1901, 285, 81, y 285-291; y/o (4) una VL FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 78. En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a un grupo A de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas descritas en la presente memoria comprende una región VH y una región VL, en donde la región VH comprende además: (1) una VH FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 51, 39, 1715, 1716, 1550, 1827,1828, 105, 55, y 115-121; (2) una VH FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 52, 106, 6 3 , 64, 56, 323, -326-1315, y 122-124; (3) una VH FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1560, 1561, 1721-1742, 1566, 1567, 1571, 1575, 1585, 1562, 1563, 1848-1875, 1565-1568, 1570-1572, 1574, 1575, 1577, 1578, 1581, 1582, 1584, 1585, 1587, 1591, 1593, 1594, 1597, 1602, 1603, 53, 107, 96-98, 292-318, 57, y 327-833; y/o (4) una VH FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 54 y 320; y en donde la región VL comprende además: (1) una VL FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1743, 75, 252, 1878, 1877, 323, 79-1315, y 277283; (2) una VL FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1823-1826, 76, 80, y 284; (3) una VL FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 77, 276, 1901, 285, 81, y 285-291; y/o (4) una VL FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 78.
En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a un grupo A de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas descritas en la presente memoria, comprende una región VH que comprende: (1) una VH FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 51, 39, 105, 58, 55, 115, -121-1315, y 895-902; (2) una VH FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 52, 106, 56, y 122-124; (3) una VH FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 53, 107-113, 859-882, 57, 125-251, y 903­ 1030; y/o (4) una VH FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 54. En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a un grupo A de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas descritas en la presente memoria, comprende una región VL que comprende: (1) una VL FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 91, 1031, -1037, 79, y 1059-1061; (2) una VL FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 92, 1038-1044, 80, 284, y 1062-1067; (3) una VL FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en Se C ID N°: 1049, -1055 81, 1068, 285, 43, y 1069; y/o (4) una VL FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 78. En ciertos aspectos, un anticuerpo humanizado que se une a un grupo A de proteínas C10orf54 o proteínas quiméricas descritas en la presente memoria comprende una región VH y una región VL, en donde la región VH comprende además: (1) una VH FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 51, 39, 105, 58 , 55, 115, -121-1315, y 895-902; (2) una VH FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 52, 106, 56, y 122-124; (3) una VH FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 53, 107-113, 859-882, 57, 125-251, y 903-1030; y/o (4) una VH FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 54; y en donde la región VL comprende además: (1) una VL FR1 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 91, 1031, -1037, 79, y 1059-1061; (2) una VL FR2 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC iD N°: 92, 1038-1044, 80, 284, y 1062-1067; (3) una VL FR3 que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEC ID N°: 1049, -105581 , 1068, 285, 43, y 1069; y/o (4) una VL FR4 que presenta una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 78.
En algunos aspectos, se proporcionan anticuerpos en la presente memoria que se unen a C10orf54 (por ejemplo, Polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, Epítopo de C10orf54) e incluyen anticuerpos que comprenden derivados de los dominios VH, Vh CDR, dominios VL y VL CDR descritos en la presente memoria que se unen a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54). También se proporcionan en la presente memoria anticuerpos que comprende derivados del anticuerpo monoclonal murino 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A, en los que los anticuerpos se unen a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, Epítopo de C10orf54). Unas técnicas estándar conocidas por el experto en la materia pueden utilizarse para introducir mutaciones en la secuencia de nucleótidos que codifican un anticuerpo, o fragmento del mismo, proporcionado en la presente memoria, por ejemplo, mutagénesis dirigidas al sitio y mutagénesis mediada por PCR que resulta en sustituciones de aminoácidos. En ciertos aspectos, los derivados incluyen menos de 25 sustituciones de aminoácidos, menos de 20 sustituciones del aminoácidos, menos de 15 sustituciones de aminoácidos, menos de 10 sustituciones de aminoácidos, menos de 5 sustituciones de aminoácidos, menos de 4 sustituciones de aminoácidos, menos de 3 sustituciones de aminoácidos, o menos de 2 sustituciones de aminoácidos en relación a la molécula original. En un aspecto específico, los derivados presentan unas sustituciones de aminoácidos conservadoras que se realizan en uno o más residuos de aminoácidos no esenciales previstos. Una "sustitución de aminoácido conservadora" es una en la que el residuo del aminoácido es sustituido con un residuo de aminoácido con una cadena lateral con una carga similar. Las familias de residuos de aminoácidos con cadenas laterales con cargas similares se han definido en la materia. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas secundarias básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), las cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares sin cargar (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), las cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano), cadenas secundarias beta-ramificadas (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina). Alternativamente, las mutaciones pueden introducirse al azar a lo largo de toda o parte de la secuencia de codificación, tal como por mutagénesis de saturación, y los mutantes resultantes pueden ser examinados por actividad biológica para identificar a mutantes que conservan la actividad. Tras la mutagénesis, puede expresarse la proteína codificada y la actividad de la proteína puede ser determinada.
En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 35%, por lo menos 40%, por lo menos 45%, por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, o por lo menos 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos del anticuerpo monoclonal murino, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, 305A o un fragmento de unión a antígeno del mismo, tal como un dominio VH o dominio VL. En un aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 35%, por lo menos 40%, por lo menos 45%, por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, o por lo menos 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos en SEC ID N°:12-29. En otro aspecto, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 35%, por lo menos 40%, por lo menos 45%, por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, o por lo menos 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos en las tablas 5-33. En otro aspecto más, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 35%, por lo menos 40%, por lo menos 45%, por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, o por lo menos 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos VH CDR mostrada en las tablas 5-33 y/o secuencia de aminoácidos VL CDR mostrada en las tablas 5-33.
En algunos aspectos, los anticuerpos utilizados según los métodos previstos en la presente memoria presentan una alta afinidad para un polipéptido de C10orf54, o fragmento de polipéptido o del epítopo mismo. En un aspecto, los anticuerpos utilizados según los métodos previstos en la presente memoria presentan una afinidad más alta para un anticuerpo C10orf54 que anticuerpos conocidos (por ejemplo, anticuerpos monoclonales comercialmente disponibles discutidos en otra parte en la presente memoria). En un aspecto específico, los anticuerpos utilizados según los métodos previstos en la presente memoria presentan una 2 a 10 veces (o más) mayor afinidad por un antígeno de C10orf54 de un anticuerpo anti-C10orf54 conocido según lo determinado por técnicas descritas en la presente memoria o conocidas por un experto en la materia (por ejemplo, un ensayo BIAcore). De acuerdo con estos aspectos, la afinidad de los anticuerpos, en un aspecto, evalúa un ensayo BIAcore.
En un aspecto específico, un anticuerpo que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una secuencia de aminoácidos de un dominio VH y/o una secuencia de aminoácidos de un dominio VL codificado por una secuencia de nucleótidos que cruza por hibridación (1) el complemento de una secuencia de nucleótidos que codifica cualquiera de los dominios VH y/o VL en tablas 2 y 4-10 bajo estrictas condiciones estrictas (por ejemplo hibridación a ADN enlazado a filtro en 6 x citrato de sodio, cloruro de sodio (SSC) a alrededor de 45°C seguido de uno o más lavados en 0.2xSSC/0.1% SDS a alrededor de 50-65°C) bajo condiciones muy estrictas (por ejemplo, hibridación ácido nucleico enlazado a filtro en 6 xSSC a alrededor de 45°C seguido de uno o más lavados en 0.1xSSC/0.2% SDS a alrededor de 68 °C), o bajo otras condiciones de hibridación rigurosas conocidas por el experto en la materia (ver, por ejemplo, Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology. Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. y John Wiley & Sons, Inc., New York en páginas 6.3.1-6.3.6 y 2.10.3).
En otro aspecto, un anticuerpo que se une C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) comprende una secuencia de aminoácidos de una VH CDR o una secuencia de aminoácidos de una VL CDR codificada por una secuencia de nucleótidos que se hibrida al complemento de una secuencia de nucleótidos que codifica cualquiera de las VH CDR y/o VL CDR presentadas en las tablas 2 y 4-10 bajo estrictas condiciones (por ejemplo hibridación a ADN enlazado a filtro 6 x SSC a alrededor de 45°C seguido de uno o más lavados en 0.2XSSC/0.1% SDS a alrededor de 50-65°C) bajo condiciones muy estrictas (por ejemplo, hibridación a ácido nucleico enlazado a filtro en 6 X SSC a alrededor de 45°C seguido de uno o más lavados en 0.1X SSC/0.2% SDS a alrededor de 68 °C), o bajo otras condiciones de hibridación rigurosas conocidas por el experto en la materia (ver, por ejemplo, Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology. Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. y John Wiley & Sons, Inc., New York en páginas 6.3.1-6.3.6 y 2.10.3).
En algunos aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria son modificados químicamente, por ejemplo, mediante la unión covalente de cualquier tipo de molécula del anticuerpo. Por ejemplo, pero no como limitación, los derivados de anticuerpos incluyen anticuerpos que han sido modificados químicamente, por ejemplo, por glucosilación, acetilación, pegilación, fosforilación, amidación, derivatización por grupos conocidos de protección/bloqueo, escisión proteolítica, ligación a un ligando celular u otra proteína, etc. Cualquiera de entre numerosas modificaciones químicas puede realizarse por técnicas conocidas, incluyendo pero no limitado a la escisión química específica, acetilación, formulación, síntesis metabólica de tunicamicina, etc. Además, el anticuerpo puede contener uno o más aminoácidos no clásicos.
También se proporcionan en la presente memoria anticuerpos que se unen a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54) que comprende una región estructural conocida por los expertos en la materia (por ejemplo, un fragmento humano o no humano). La región estructural, por ejemplo, pueden ser regiones estructurales que ocurren naturalmente o de consenso. En unos aspectos específicos, la región estructural de un anticuerpo proporcionado en la presente memoria es humano (ver, por ejemplo, Chothia et al., 1998, J. Mol. Biol. 278:457-479 para un listado de las regiones estructurales de humano). Ver también Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (U.S. Department of Health y Human Services, Washington, D.C.) 5a ed.
También se proporcionan en la presente memoria anticuerpos que se unen a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54), comprendiendo los anticuerpos la secuencia de aminoácidos de una o más de las CDR del anticuerpo monoclonal murino 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A, incluyendo asimismo los proporcionados en las tablas 5-33, o variantes humanizadas de los mismos (por ejemplo, VH CDR o VL CDR de las tablas 5-11) y regiones estructurales humanas con una o más sustituciones del aminoácido en uno, dos, tres o más de los siguientes residuos: (a) residuos estructurales poco comunes que difieren entre la estructura de anticuerpo murino (por ejemplo, estructura de anticuerpo donante) y la estructura de anticuerpo humano (por ejemplo, estructura del anticuerpo de aceptor); (b) residuos de la zona Venier cuando difieren entre estructura de anticuerpo donante y estructura de anticuerpo aceptor; (c) residuos de empaquetamiento intercatenarios en la interfaz VH/VL que difieren entre la estructura de anticuerpo de donante y la estructura de anticuerpo de aceptor; (d) residuos canónicos que se diferencian entre las secuencias de estructura de anticuerpo aceptor y estructura de anticuerpo donante, particularmente las regiones estructurales fundamentales para la definición de la clase canónica de los bucles de CDR del anticuerpo murino; (e) residuos que son adyacentes a una CDR; (g) residuos capaces de interactuar con el antígeno; (h) residuos capaces de interactuar con la CDR; y (i) residuos de contacto entre el dominio VH y el dominio VL. En ciertos aspectos, los anticuerpos que se unen a un antígeno C10orf54 que comprende las regiones estructurales humanas con una o más sustituciones de aminoácido en uno, dos, tres o más de los residuos identificados anteriormente son anticuerpos C10orf54 antagónicos. En ciertos aspectos, los anticuerpos que se unen a un antígeno C10orf54 que comprende las regiones estructurales humanas con una o más sustituciones de aminoácido en uno, dos, tres o más de los residuos identificados anteriormente son anticuerpos C10orf54 agonistas.
Los anticuerpos provistos en la presente memoria incluyen pero no se limitan a anticuerpos sintéticos, anticuerpos monoclonales, anticuerpos producidos por vía recombinante, anticuerpos multiespecíficos (incluyendo anticuerpos biespecíficos), anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos camelizados, anticuerpos quiméricos, intracuerpos, anticuerpos anti-idiotipo (anti-Id) y fragmentos funcionales de cualquiera de las anteriores. Los ejemplos no limitativos de fragmentos funcionales incluyen Fvs de cadena simple (scFv) (por ejemplo, incluyendo monoespecíficos, biespecíficos), fragmentos Fab, fragmentos F(ab'), fragmentos F(ab)2, fragmentos F(ab')2, Fvs ligado a disulfuro (sdFv), fragmentos Fd, fragmentos Fv, diacuerpo, triacuerpo, tetracuerpo y minicuerpo.
En particular, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria incluyen unas moléculas de inmunoglobulina y partes inmunológicamente activas de moléculas de inmunoglobulina, por ejemplo, las moléculas que contienen un sitio de unión a antígeno que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54). Las moléculas de inmunoglobulina proporcionadas en la presente memoria pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA y IgY), clase (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina.
Las variantes y derivados de anticuerpos incluyen fragmentos funcionales de anticuerpos que conservan la capacidad de unirse a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54). Los fragmentos funcionales ejemplificativos incluyen fragmentos Fab (un fragmento de anticuerpo que contiene el dominio de unión al antígeno y comprende una cadena ligera y parte de una cadena pesada puenteada por un enlace disulfuro); Fab'(un fragmento de anticuerpo que contiene un único dominio antiunión que comprende un Fab y una porción adicional de la cadena pesada a través de la región bisagra); F(ab')2 (dos moléculas de Fab' unidas por enlaces disulfuro intercatenarios en las regiones de bisagra de las cadenas pesadas; las moléculas de Fab' pueden ser dirigidas hacia los mismos o diferentes epítopos); un Fab biespecífico (una molécula Fab que presenta dos dominios de unión a antígeno, cada uno de los cuales puede ser dirigido a un epítopo diferente); una cadena de Fab de cadena sencilla que comprende una región variable, también conocido como, sFv (la región determinante de unión a antígeno, variable, de una sola cadena ligera y cadena pesada de un anticuerpo unidos entre sí por una cadena de 10-25 aminoácidos); una Fv unida disulfuro, o dsFv (la región determinante de unión a antígeno, variable, de una sola cadena ligera y cadena pesada de un anticuerpo que se unen entre sí por un enlace disulfuro); una VH camelizada (la región determinante de unión a antígeno, variable, de una sola cadena pesada de un anticuerpo en el que algunos aminoácidos en la interfaz VH son los encontrados en la cadena pesada de anticuerpo de camello naturales); un sFv biespecífico (un sFv o una molécula de dsFv que presenta dos dominios de unión a antígeno, cada uno de los cuales pueden ser dirigidos a un epítopo diferente); un diacuerpo (un sFv dimerizado formado cuando el dominio VH de un primer sFv se ensambla con el dominio VL de un segundo sFv y el dominio VL del primer sFv se ensambla con el dominio VH del segundo sFv; las dos regiones de unión a antígeno del diacuerpo pueden ser dirigidas hacia el mismo o diferentes epítopos); y un triacuerpo (un sFv trimerizado, formado de una manera similar a un diacuerpo, pero en el que tres dominios de unión a antígeno se crean en un solo complejo; los tres dominios de unión a antígeno pueden ser dirigidos hacia el mismo o diferentes epítopos). Los derivados de anticuerpos también incluyen una o más secuencias CDR de un sitio de combinación de anticuerpos. Las secuencias CDR pueden unirse en un andamiaje cuando están presentes dos o más secuencias CDR. En ciertos aspectos, el anticuerpo comprende un Fv de cadena sencilla ("scFv"). Los scFvs son fragmentos de anticuerpo que comprenden los dominios VH y VL de un anticuerpo, en los que estos dominios están presentes en una única cadena polipeptídica. Generalmente, el polipéptido de scFv comprende además un ligador de polipéptidos entre los dominios Vh y VL, que permite a scFv formar la estructura deseada para la unión del antígeno. Para una revisión de scFvs, ver Pluckthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg y Moore eds. Springer-Verlag, New York, págs. 269-315 (1994).
Los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden ser monoespecíficos, biespecíficos, triespecíficos o de mayor multiespecificidad. Los anticuerpos multiespecíficos pueden ser específicos para diferentes epítopos de un polipéptido de C10orf54 o pueden ser específicos para un polipéptido de C10orf54 así como para un epítopo heterólogo, tal como un polipéptido heterólogo o material de soporte sólido. En unos aspectos específicos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria son monoespecíficos para un determinado epítopo de un polipéptido de C10orf54 y no se unen a otros epítopos.
También se proporcionan en la presente memoria proteínas de fusión que comprenden un anticuerpo proporcionado en la presente memoria que se une a un antígeno C10orf54 y un polipéptido heterólogo. En algunos aspectos, el polipéptido heterólogo al que se fusiona el anticuerpo es útil para dirigir el anticuerpo a las células que presentan C10orf54 expresada en la superficie celular.
También se proporcionan en la presente memoria unos paneles de anticuerpos que se unen a un antígeno C10orf54. En unos aspectos específicos, los paneles de anticuerpos presentan unas constantes de tasa de asociación diferentes unas constantes diferentes de tasa de disociación, afinidades diferentes para el antígeno C10orf54 y/o diferentes especificidades para un antígeno C10orf54. En algunos aspectos, los paneles comprenden o consisten en aproximadamente 10, aproximadamente 25, aproximadamente 50, aproximadamente 75, aproximadamente 100, aproximadamente 125, aproximadamente 150, aproximadamente 175, aproximadamente 200, aproximadamente 250, aproximadamente 300, aproximadamente 350, aproximadamente 400, aproximadamente 450, 500, aproximadamente 550, aproximadamente 600, aproximadamente 650, aproximadamente 700, 750 aproximadamente, aproximadamente 800, aproximadamente 850, aproximadamente 900, aproximadamente 950, o aproximadamente de 1000 anticuerpos o más. Los paneles de anticuerpos pueden utilizarse, por ejemplo, en placas de 96 o 384 pocillos, tal como para ensayos ELISA.
Conjugados de anticuerpos y proteínas de fusión
En algunos aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria son conjugados o fusionados por vía recombinante a un agente diagnóstico, perceptible o terapéutico o cualquier otra molécula. Los anticuerpos conjugados o fusionados por vía recombinante pueden ser útiles, por ejemplo, para vigilancia o pronóstico de la aparición, desarrollo, progresión y/o gravedad de una enfermedad mediada por C10orf54 como parte de un procedimiento de prueba clínico, tal como determinar la eficacia de una terapia particular.
Tales diagnóstico y detección pueden realizarse, por ejemplo, mediante el acoplamiento del anticuerpo a las sustancias detectables incluyendo, pero no limitado a, diversas enzimas, tales como, pero no limitado a, peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa, o acetilcolinesterasa; grupos prostéticos, tales como, pero no limitado a, estreptavidina/biotina y avidina/biotina; materiales fluorescentes, tales como, pero no limitado a, umbeliferona, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, diclorotriazinilamina fluoresceína, cloruro de dansilo o ficoeritrina; materiales luminiscentes, tales como, pero no limitados a, luminol; materiales bioluminiscentes, tales como, pero no limitados a, luciferasa, luciferina, y aecuorina; material quimioluminiscente, tal como, pero no limitado a, un compuesto a base de acridinio o un HaloTag; materiales radioactivos, tales como, pero no limitados a, yodo (131I, 125I, 123I, y 121I,), carbono ( 14C), azufre (35S), tritio (3H), indio (115In, 113In, 112In, e 111In), tecnecio (99Tc), talio (201Ti), galio (68Ga, 67Ga), paladio (103Pd), molibdeno (99Mo), xenón (133Xe), flúor (18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn, y 117Sn; y metales que emiten positrones usando diversas tomografías de emisión de positrones, e iones metálicos paramagnéticos no radiactivos.
También se proporcionan en la presente memoria anticuerpos conjugados o fusionados por vía recombinante a un grupo terapéutico (o uno o más grupos terapéuticos), así como sus utilizaciones. El anticuerpo puede ser conjugado o fusionado por vía recombinante a un grupo terapéutico, tal como una citotoxina, por ejemplo, un agente citostático o citocidal, un agente terapéutico o un ion de metal radiactivo, por ejemplo, emisores de alfa. Un agente citotóxico 0 citotoxina incluye cualquier agente que es perjudicial para las células. Los grupos terapéuticos incluyen, pero no
se limitan a, los antimetabolitos (por ejemplo, metotrexato, 6 -mercaptopurina 6 -tioguanina, citarabina, 5-fluorouracilo decarbacina); agentes alquilantes (por ejemplo, mecloretamina, tioepa, clorambucilo, melfalán, carmustina (BCNU) y lomustina (CCNU), ciclotosfamida, busulfán, dibromomanitol, estreptozotocina, mitomicina C
y platino de cisdiclorodiamina (II) (DDP) y cisplatino); antraciclinas (por ejemplo, daunorrubicina (anteriormente daunomicina) y doxorrubicina); antibióticos (por ejemplo, actinomicina d (anteriormente actinomicina), bleomicina, mitramicina y antramicina (AMC)); moléculas de auristatina (por ejemplo, auristatina PHE, auristatina F, monometil auristatina E, briostatina 1 y solastatina 10; ver Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother. 46:3802-8 (2002),
Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother. 45:3580-4 (2001), Mohammad et al., Anticancer Drugs 12:735-40
(2001), Wall et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:76-80 (1999), Mohammad et al., Int. J. Oncol. 15:367-72
(1999), hormonas (por ejemplo, glucocorticoides, progestinas, andrógenos y estrógenos), inhibidores de la enzima
de reparación del ADN (por ejemplo, etopósido o topotecán), inhibidores de la cinasa (por ejemplo, compuesto
(ST1571, mesilato de imatinib (Kantarjian et al., Clin Cancer Res. 8 (7): 2167-76 (2002)); agentes citotóxicos (por
ejemplo, paclitaxel, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etopósido, tenopósido, vincristina, vinblastina, colquicina, doxorrubicina, daunorrubicina, dihidroxi antracina diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1-dihidrotestosterona, glucocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol y puromicina y análogos o sus homólogos y los compuestos divulgados en las patentes US n° 6.245.759, 6.399.633, 6.383.790, 6.335.156, 6.271.242, 6.242.196, 6.218.410, 6.218.372, 6.057.300, 6.034.053, 5.985.877, 5.958.769, 5.925.376 5.922.844, 5.911.995, 5.872.223, 5.863.904, 5.840.745, 5.728.868, 5.648.239, 5.587.459); los inhibidores de farnesil-transferasa (por ejemplo, R115777, BMS-214662 y las divulgaron por, por ejemplo, en las
patentes US n°: 6.458.935, 6.451.812, 6.440.974, 6.436.960, 6.432.959, 6.420.387, 6.414.145, 6.410.541,
0 9
Figure imgf000147_0001
3
inhibidores de la topoisomerasa (por ejemplo, camptotecina, irinotecán; SN-38; topotecán; 9-aminocamptotecina;
GG-211 (GI 147211); DX-8951f; IST-622; rubitecán; pirazoloacridina; XR-5000; saintopin; UCE6 ; UCE1022; TAN-1518A; TAN 1518B; KT6006; KT6528; ED-110; NB-506; ED-110; NB-506; y rebecamicina); bulgareína; ligantes de
surco menor del ADN como colorante Hoescht 33342 y colorante Hoechst 33258; nitidina; fagaronina; epiberberina;
coralina; beta-lapacona; AC-4-1; los bisfosfonatos (por ejemplo, alendronato, cimadronte, clodronato, tiludronato, etidronato, ibandronato, neridronato, olpandronato, risedronato, piridronato, pamidronato, zolendronato) inhibidores de la reductasa HMG-CoA, (por ejemplo, lovastatina, simvastatina, atorvastatina, pravastatina, fluvastatina, estatina, cerivastatina, lescol, lupitor, rosuvastatina y atorvastatina); oligonucleótidos antisentido (por
ejemplo, los divulgados en las patentes US n° 6.277.832, 5.998.596, 5.885.834, 5.734.033 y 5.618.709); inhibidores
de la adenosina desaminasa (por ejemplo, fosfato de fludarabina y 2 -clorodesoxiadenosina); ibritumomab tiuxetán (Zevalin®); tositumomab (Bexxar®)) y sales, solvatos, clatratos y profármacos farmacéuticamente aceptables de
los mismos.
Además, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria puede ser conjugado o fusionado por vía recombinante a un grupo terapéutico o porción de fármaco que modifica una determinada respuesta biológica. Los
grupos terapéuticos o las porciones del fármaco no deben interpretarse como limitados a los agentes quimioterápicos químicos clásicos. Por ejemplo, la porción de fármaco puede ser una proteína, péptido o polipéptido que presenta una actividad biológica deseada. Tales proteínas pueden incluir, por ejemplo, una toxina
tal como abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas, toxina del cólera, o toxina de la difteria; una proteína tal como
el factor de necrosis tumoral, Y-interferón, a-interferón, factor de crecimiento nervioso, factor de crecimiento
derivado de plaquetas, activador del plasminógeno tisular, un agente apoptótico, por ejemplo, TNF-y, TNF-y, AIM
1 (ver, la publicación internacional N° WO 97/33899), AIM II (ver, la publicación Internacional N° WO 97/34911),
ligando Fas (Takahashi et al, 1994, J. Immunol., 6 :. 1567-1574), y VEGF (ver, publicación internacional N° w O 99/23105), un agente anti-angiogénico, por ejemplo, angiostatina, endostatina o un componente de la vía de coagulación (por ejemplo, factor tisular); o, un modificador de respuesta biológica tal como, por ejemplo, una
linfocina (por ejemplo, interferón gamma, interleucina-1 ( “ IL-1”), interleucina-2 ( “ IL-2”), interleucina-5 ( “ IL-5 “), interleucina- 6 ('IL-6 '), interleucina-7 ('IL-7'), interleucina 9 ('IL-9'), interleucina-10 ('IL-10'), interleucina-12 ( “ IL-12”), interleucina-15 ( “ IL-15”), interleucina-23 ( “ IL-23”), factor estimulante de colonias de macrófagos granulocitos (
“GM-CSF”), y factor estimulante de colonias de granulocitos ( “G -CSF”)), o un factor de crecimiento (por ejemplo,
hormona del crecimiento ('GH')), o un agente de coagulación (por ejemplo, calcio, vitamina K, factores de tejido,
tales como, pero no limitado a, factor de Hageman (factor XII), quininógeno de alto peso molecular (HMWK), precalicreína (PK), factores II-proteínas de coagulación (protrombina), factor V, XIIa, VIII, XIIIa, XI, XIa, IX, IXa, X, fosfolípido, y monómero de fibrina).
También se proporcionan en la presente memoria unos anticuerpos que se fusionan por vía recombinante o se
conjugan químicamente (conjugaciones covalentes o no covalentes) con una proteína heteróloga o polipéptido (o
fragmento del mismo, por ejemplo, a un polipéptido de aproximadamente 10 , aproximadamente 2 0 , aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 50, aproximadamente 60, aproximadamente 70, aproximadamente 80, aproximadamente 90 o aproximadamente 100 aminoácidos) para generar proteínas de
fusión, así como sus utilizaciones. En particular, se proporcionan en la presente memoria unas proteínas de fusión
que comprenden un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, un fragmento Fab, fragmento Fd, fragmento Fv, fragmento F(ab)2, un dominio VH, una VH CDR, un dominio VL o una CDR VL) y una proteína heteróloga, polipéptido o péptido. En un aspecto, la proteína heteróloga, polipéptido o péptido a la(al) que el anticuerpo está fusionado es útil para dirigir el anticuerpo a un tipo de célula particular, tal como una célula que expresa C10orf54 o un receptor C10orf54. Por ejemplo, un anticuerpo que se une a un receptor de superficie celular expresado por un tipo de célula particular (por ejemplo, una célula inmunitaria) puede estar fusionado o conjugado a un anticuerpo modificado proporcionado en la presente memoria.
Una proteína conjugada o de fusión puede comprender cualquier anticuerpo proporcionado en la presente memoria descrito en la presente memoria y un polipéptido heterólogo. En un aspecto, una proteína conjugada o de fusión provista en la presente memoria comprende el dominio VH o VL de cualquiera de los anticuerpos monoclonales murinos 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A o 305A, como se muestra en la tabla 2 y un polipéptido heterólogo. En otro aspecto, una proteína conjugada o de fusión establecida en la presente memoria comprende un dominio VH con la secuencia de aminoácidos de cualquiera de los dominios Vh representado en las tablas 5-33, y/o un dominio VL con la secuencia de aminoácidos de cualquiera de los dominios VL como se muestra en las tablas 5-33 y un polipéptido heterólogo. En otro aspecto, una proteína conjugada o de fusión establecida en la presente memoria comprende una o más VH CDR con la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las VH CDR representada en las tablas 5-33, y un polipéptido heterólogo. En otro aspecto, una proteína conjugada o de fusión proporcionada en la presente memoria comprende por lo menos un dominio VH y por lo menos un dominio VL representados en las tablas 5-33 y un polipéptido heterólogo. Todavía en otro aspecto, una proteína conjugada o de fusión establecida en la presente memoria comprende por lo menos una VH CDR y por lo menos una VL CDR representadas en las tablas 5-33, y un polipéptido heterólogo.
Además, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria puede estar conjugado a grupos terapéuticos como un ion de metal radiactivo, tal como emisores de alfa como 213Bi o quelantes macrocíclicos útiles para conjugar iones radiometálicos, incluyendo pero no limitados a, 131In, 131LU, 131Y, 131Ho, 131Sm, a polipéptidos. En ciertos aspectos, el quelante macrocíclico es ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecan-N,N',N” ,N” '-tetraacético (DOTA) que se puede unir al anticuerpo a través de una molécula ligadora. Estas moléculas ligadoras se conocen comúnmente en la materia y se describen en Denardo et al., 1998, Clin Cáncer Res. 4(10):2483-90; Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem. 10(4):553-7; y Zimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol. 8:943-50.
Por otra parte, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria se pueden fusionar a secuencias de marcador, tal como un péptido para facilitar la purificación. En unos aspectos específicos, la secuencia de aminoácidos de marcador es un péptido de hexa-histidina, tales como la etiqueta prevista en un vector de pQE (QIAGEN, Inc.), entre otros, muchos de los cuales están disponibles en el mercado. Como se describe en Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824, por ejemplo, la hexa-histidina proporciona una purificación conveniente de la proteína de fusión. Otras etiquetas de péptido útiles para la purificación incluyen, pero no se limitan a, la etiqueta de hemaglutinina ("HA"), que corresponde a un epítopo derivado de la proteína hemaglutinina de la gripe (Wilson et al., 1984, Cell 37:767), y la etiqueta “FLAG”. Son bien conocidos los métodos para fusionar o conjugar grupos terapéuticos (incluyendo polipéptidos) a anticuerpos, ver, por ejemplo, Arnon et al., “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”, en Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., “Antibodies For Drug Delivery”, en Controlled Drug Delivery (2a Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review”, en Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); “Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”, en Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58; Pat. de EE.UU. Núms. 5,336,603, 5,622,929, 5,359,046, 5,349,053, 5,447,851, 5,723,125, 5,783,181, 5,908,626, 5,844,095, y 5,112,946; EP 307,434; EP 367,166; EP 394,827; publicaciones PCT WO 91/06570, WO 96/04388, WO 96/22024, WO 97/34631, y WO 99/04813; Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88 : 10535­ 10539, 1991; Traunecker et al., Nature, 331:84-86, 1988; Zheng et al., J. Immunol., 154:5590-5600, 1995; Vil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:11337-11341, 1992.
Las proteínas de fusión se pueden generar, por ejemplo, a través de las técnicas de transposición génica, transposición de motivos, transposición de exones y/o transposición de codones (colectivamente denominados "transposición de ADN"). La transposición de ADN puede utilizarse para alterar las actividades de los anticuerpos proporcionados en la presente memoria (por ejemplo, anticuerpos con afinidades mayores y menores tasas de disociación). Ver, en términos generales, las patentes US n° 5,605,793, 5,811,238, 5,830,721, 5,834,252, y 5,837,458; Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82; Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76; y Lorenzo y Blasco, 1998, Biotechniques 24 (2): 308-313. Los anticuerpos, o los anticuerpos codificados, se pueden alterar al ser sometidos a mutagénesis aleatoria mediante PCR propensa a error, inserción aleatoria de nucleótidos u otros métodos anteriores a la recombinación. Un polinucleótido que codifica un anticuerpo proporcionado puede recombinarse con uno o más componentes, motivos, secciones, partes, dominios, fragmentos, etc. de una o más moléculas heterólogas.
Un anticuerpo proporcionado en la presente memoria también puede ser conjugado con un segundo anticuerpo para formar un heteroconjugado de anticuerpos como se describe en la patente US n° 4.676.980.
El grupo terapéutico o fármaco que se conjuga o se fusiona por vía recombinante a un anticuerpo proporcionado en la presente memoria que se une a un antígeno C10orf54 debe ser elegido para lograr los efectos profilácticos o terapéuticos deseados. En ciertos aspectos, el anticuerpo es un anticuerpo modificado. Un médico u otro personal médico debe considerar lo siguiente al decidir en qué grupo terapéutico o fármaco conjugarse o fusionarse por vía recombinante a un anticuerpo proporcionado en la presente memoria: la naturaleza de la enfermedad, la gravedad de la enfermedad y la afección del sujeto.
Los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden fijarse también a soportes sólidos, que son particularmente útiles para inmunoensayos o purificación del antígeno diana. Estos soportes sólidos incluyen, pero no se limitan a, vidrio, celulosa, poliacrilamida, nailon, poliestireno, cloruro de polivinilo o polipropileno.
Conjugado anticuerpo-fármaco (ADC)
En algunos aspectos, se proporcionan en la presente memoria unos conjugados anticuerpo-fármaco, incluyendo un conjugado anticuerpo-fármaco de las siguientes fórmulas (Ia) e (Ib):
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(Ib);
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
en el que:
A es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo;
los dos residuos de cisteína representados son de un enlace disulfuro abierto de cisteína-cisteína en A; cada X y X' es independientemente O, S, NH o NR1 donde R1 es alquilo C1-6;
Wa es =N-, =CH-, =CHCH2-, =C(R2)-, o =CHCH(R2)-; Wb-NH-, -N(R1)-, -CH2-, -CH2-NH-, -CH2-N(R1)-, -CH2CH2-, -CH(R2)-, o -CH2CH(R2)-; en donde R1 y R2 son independientemente alquilo C1-6;
CTX es una citotoxina;
R es cualquier grupo químico; o R está ausente;
cada L1, L2 y L3 es independientemente un ligador seleccionado de entre el grupo que consiste en -O-, -C(O)-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NH-, -NCH3-, -(CH2)q-, -NH(CH2)2NH-, -OC(O)-, -CO2-, -NHCH2CH2C(O)-, -
C(O)NHCH2CH2NH-, -NHCH2C(O)-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -NCH3C(O)-, -C(O)NCH3-, -(CH2CH2OV, -
(CH2CH2O)pCH2CH2-, -CH2CH2-(CH2CH2O)p-, -OCH(C^O-)2, -(AA)r-, ciclopentanilo, ciclohexanilo, fenilenilo no sustituido, y fenilenilo sustituido por 1 o 2 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en halo, CF3-, CF3O-, CH3O-, -C(O)OH, alquilo -C(O)OCi-3, -C(O)CH3, -CN, -NH-, -NH2, -O-, -OH, -NHCH3, -N(CH3)2, y alquilo C1-3;
a, b y c son cada uno independientemente un número entero de 0, 1, 2 o 3, siempre que por lo menos uno de a, b o c sea1 ;
cada k y k' es independientemente un número entero de 0 o 1 ;
cada p es independientemente un número entero de 1 a 14;
cada q es independientemente un número entero de 1 a 12 ;
cada AA es independientemente un aminoácido;
cada r es 1 a 12 ;
m es un número entero de 1 a 4;
n es un número entero de 1 a 4; y
el enlace---------- representa un enlace simple o un doble enlace,
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ib), R se selecciona de entre el grupo que consiste en W, (L1)a, (L2)b, (L3)c, Z, W-(L1)a-(L2)b-(L3)c, (L1)a-(L2)b-(L3)c-Z, y W-(L1)a-(L2)b-(L3)c-Z, como se define en la presente memoria. En ciertos aspectos, R se selecciona de entre el grupo que consiste en W, (L1)a, (L2)b, (L3)c, y W-(L1)a-(L2)b-(L3)c. En ciertos aspectos, R se selecciona de entre el grupo que consiste en Z, (L1)a-(L2)b-(L3)c-Z, y W-(L1)a-(L2)b-(L3)c-Z.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ia) o (Ib), n es un entero de 2 (por ejemplo, dos enlaces de disulfuro intercatenarios de cadena pesada-cadena ligera). En ciertos aspectos, n es un entero de 3 (por ejemplo, dos enlaces de disulfuro intercatenarios de cadena pesada-cadena ligera y un enlace disulfuro intercatenario de cadena pesada-cadena ligera). En ciertos aspectos, n es un entero de 4 (por ejemplo, dos enlaces de disulfuro intercatenarios de cadena pesada-cadena ligera y dos enlaces de disulfuro intercatenarios de cadena pesada-cadena ligera).
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ib), R es una sonda detectable. En algunos aspectos, R es un fluoróforo, cromóforo, radiomarcador, enzima, ligando, anticuerpo o fragmento de anticuerpo. En algunos aspectos, R es un ligando (por ejemplo, un ligando específico para un receptor en una célula tumoral, como un antígeno de membrana específico prostático, o una célula infectada víricamente, tal como una célula infectada por el VIH).
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ib), R se enlaza con el resto de la molécula del ligador mediante una amida, una amida N-(alquilo C1-6), un carbamato, un carbamato N-(alquilo C-i-a), una amina, una amina N-(alquilo C1-6), un éter, un tioéter, una urea, una urea N-(alquilo C1-6) o un enlace de urea N, N-di(alquilo C1-6).
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ia) o (Ib), cada uno de L1, L2 y L3 se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en -NHC (O) -, -C (O) NH-,-( CH2CH2O) p, -(CH2CH2O) pCH2CH2-, -CH2CH2-(CH2CH2O) p-, -OCH (CH2O-) 2, -(AA) r-, fenilenilo no sustituido, y fenilenilo sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en halo, CF3-, CF3O-, CH3O-, -C (O) OH, alquilo -C(O)OC1-3, -C (O) CH3, -CN, -NH-, -NH2, -O-, -OH, -NHCH3, -N (CH3) 2 y alquilo C1.3; donde a, b y c son cada uno independientemente 0 o 1; y cada p y r son independientemente 1, 2 o 3. En ciertos aspectos, uno o más de L1, L2 y L3 es -(AA)r-, en el que -(AA)r- es ValCit (por ejemplo, el primer aminoácido es valina, ele segundo aminoácido es citrulina, y r es 1). En ciertos aspectos, uno o más de L1, L2 y L3 es -(AA)r-, en el que -(AA)r- es ValAla (por ejemplo, el primer aminoácido es valina, el segundo aminoácido es alanina, y r es 1). En ciertos aspectos, uno o más de L1, L2 y L3 es fenilenilo sustituido por -C(O)OH y -NH2. En ciertos aspectos, uno o más de L1, L2 y L3 es fenilenilo sustituido por -C(O)O- y -NH-. En ciertos aspectos, uno o más de L1, L2 y L3 es fenilenilo sustituido por -OC(O)- y -NH-. En ciertos aspectos, uno o más de L1, L2 y L3 es fenilenilo sustituido por -O-y -NH-. En ciertos aspectos, uno o más de L1, L2 y L3 es fenilenilo sustituido por -OC(O)-y -C-. En ciertos aspectos, L1 es -(CH2)q-, L2 está ausente, L3 está ausente y CTX se une a (L1)a-(L2)b-(L3)c a través de un enlace amida. En ciertos aspectos, L1 es -(CH2)q-, L2 es -(OCH2CH2V , L3 está ausente y CTX se une a (L1)a-(L2)b-(L3)c a través de un enlace amida. En ciertos aspectos, L1 es -(CH2)q-, L2 es -(CH2)q-, L3 está ausente y CTX se une a (L1)a-(L2)b-(L3)c a través de un enlace amida. En ciertos aspectos, cada L1 es indistintamente seleccionado de entre el grupo que consiste en -(CH2CH2O)pCH2CH2- y -CH2CH2-(CH2CH2O)p-, L2 está ausente, L3 está ausente y CTX se une a (L1)a-(L2)b-(L3)c a través de un enlace amida. En ciertos aspectos, cada L1 es indistintamente seleccionado de entre el grupo que consiste en -(CH2CH2O)p,-(CH2CH2- y -CH2CH2-(CH2CH2O)p-, L2 está ausente, L3 está ausente y CTX se une a (L1)a-(L2)b-(L3)c a través de un enlace amida. En ciertos aspectos, cada L1 es indistintamente seleccionado de entre el grupo que consiste en -(CH2CH2O)p,-(CH2CH2- y -CH2CH2-(CH2CH2O)p-, L2 está ausente, L3 está ausente y CTX se une a (L1)a-(L2)b-(L3)c a través de un enlace amida. En ciertos aspectos, cada L1 es indistintamente seleccionado de entre el grupo que consiste en -(CH2CH2O)p,-(CH2CH2- y -CH2CH2-(CH2CH2O)p-, L2 está ausente, L3 está ausente y CTX se une a (L1)a-(L2)b-(L3)c a través de un enlace amida.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (la) o (Ib), CTX se selecciona de entre el grupo que consiste en un estabilizador de la tubulina, un desestabilizador de la tubulina, un agente alquilante de ADN, un ligador de surco menor del ADN, un intercalador de ADN, un inhibidor de topoisomerasa I, un inhibidor de topoisomerasa II, un inhibidor de la girasa, un inhibidor de la síntesis de proteína, un inhibidor de la proteosoma y un antimetabolito.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de fórmula (Ia) o (Ib), CTX es una agente quimioterápico. Los expertos en la materia serán conscientes de los agentes quimioterápicos apropiados como se divulga, por ejemplo, en Chu, E., DeVite, V. T, 2012, Physicians' Cancer Chemotherapy Drug Manual 2012 (Jones & Bartlett Learning Oncology), y documentos similares.
En ciertos aspectos, el CTX puede ser cualquier agente quimioterápico aprobado por la FDA. En algunos aspectos, el CTX puede ser cualquier agente quimioterápico aprobado por la FDA disponible para el tratamiento del cáncer.
En ciertos aspectos, el CTX es seleccionado de entre el grupo que consiste en unos agentes alquilantes unas antraciclinas, un disruptor de citoesqueleto (taxanos), una epotilona, un inhibidor de histona desacetilasa (HDAC), un inhibidor de la topoisomerasa I, un inhibidor de la topoisomerasa II, un inhibidor de la cinasa, anticuerpos monoclonales, un análogo de nucleótido, un antibiótico peptídico, un agente a base de platino, un retinoides, un alcaloide de la vinca o un derivado del mismo y radioisótopo.
En ciertos aspectos, el CTX es seleccionado de entre el grupo que consiste en actinomicina, ácido retinoico todotrans, azacitidina, azatioprina, bleomicina, bortezomib, carboplatino, capecitabina, cisplatino, clorambucilo, ciclofosfamida, citarabina, daunorrubicina, docetaxel, doxifluridina, doxorrubicina, epirrubicina, epotilona, etopósido, fluorouracilo, gemcitabina, hidroxiurea, idarrubicina, imatinib, irinotecán, mecloretamina, mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, oxaliplatino, paclitaxel, pemetrexed, tenipósido, tioguanina, topotecán, valrrubicina, vinblastina, vincristina, Vindesina y vinorrelbina.
En ciertos aspectos, el CTX es seleccionado de entre el grupo que consiste en un estabilizador de la tubulina, un desestabilizador de la tubulina, un agente alquilante de ADN, un ligador de surco menor del ADN, un intercalador de ADN, un inhibidor de topoisomerasa I, un inhibidor de topoisomerasa II, un inhibidor de la girasa, un inhibidor de la síntesis de proteína, un inhibidor de la proteosoma y un antimetabolito.
En ciertos aspectos, el CTX es seleccionado de entre el grupo que consiste en actinomicina D, amonafida, una auristatina, benzofenona, benzotiazol, una caliqueamicina, camptotecina, CC-1065 (NSC 298223), cemadotina, colquicina, combretastatina A4, dolastatina, doxorrubicina, elinafida, entansina (DM1), etopósido, KF-12347 (leinamicina), un maitansinoide, metotrexato, mitoxantrona, nocodazol, inhibidor de proteosoma 1 (PSI 1), roridina A, toxina T-2 (análogo de tricotecenos), taxol, una tubulisina, Velcade® y vincristina. En ciertos aspectos, el CTX es una auristatina, una caliqueamicina, un maitansinoide o una tubulina.
En ciertos aspectos, la citotoxina es un pirrolobenzodiacepina (PBD), una caliqueamicina, doxorrubicina, camptotecina, duocarmicina, DM1, DM4, un maitansionide o una tubulisina. En algunos aspectos, la citotoxina es PDB, una caliqueamicina, doxorrubicina, camptotecina, duocarmicina, DM1, DM4, un maitansinoide o una tubulisina. En ciertos aspectos, CTX es una auristatina, tal como monometilauristatina F (MMAF) y monometilauristatina E (MMAE). En ciertos aspectos, la citotoxina es PBD.
En ciertos aspectos, el CTX es MMAE, MMAF, PDB, caliqueamicina y, mertansina o tubulisina T2.
En ciertos aspectos, el CTX es MMAE o MMAF, cuyas estructuras que se proporcionan a continuación:
Figure imgf000151_0001
Figure imgf000152_0001
En ciertos aspectos, la CTX es tubulisina T2.
En ciertos aspectos, la CTX es tubulisina T3, o tubulisina T4, cuyas estructuras se proporcionan a continuación:
Figure imgf000152_0002
un conjugado anticuerpo-fármaco de la siguiente fórmula (Ic):
Figure imgf000153_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en el que:
A es un anticuerpo anti-C10orf54, opcionalmente un anticuerpo humanizado anti-C10orf54;
los dos residuos de cisteína representados son de un enlace disulfuro abierto de cisteína-cisteína en A; L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster;
el enlace---------- representa un enlace simple o un doble enlace; y
n es un número entero de 1 a 4.
En algunos aspectos, se proporcionan en la presente memoria unos conjugados anticuerpo-fármaco, incluyendo un conjugado anticuerpo-fármaco de la siguiente fórmula (Ic1):
Figure imgf000153_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en el que:
A es un anticuerpo anti-C10orf54, opcionalmente un anticuerpo humanizado anti-C10orf54;
los dos residuos de cisteína representados son de un enlace disulfuro abierto de cisteína-cisteína en A; L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster; y
n es un número entero de 1 a 4.
En algunos aspectos, se proporcionan en la presente memoria unos conjugados anticuerpo-fármaco, incluyendo un conjugado anticuerpo-fármaco de la siguiente fórmula (Ic2):
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en el que:
A es un anticuerpo anti-C10orf54, opcionalmente un anticuerpo humanizado anti-C10orf54;
los dos residuos de cisteína representados son de un enlace disulfuro abierto de cisteína-cisteína en A; L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster; y
n es un número entero de 1 a 4.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic), (Ic1) o (Ic2), el enlace disulfuro abierto de cisteína-cisteína en A es un enlace disulfuro intercatenario. En ciertos aspectos, cuando el enlace disulfuro cisteína-cisteína abierto en A es un enlace disulfuro intercatenario n es 4 (por ejemplo, dos enlaces de disulfuro intercatenarios de cadena pesada-cadena ligera y dos enlaces disulfuro intercatenarios de cadena pesada-cadena pesada de bisagra). En ciertos aspectos, cuando el enlace disulfuro cisteína-cisteína abierto en A es un enlace disulfuro intercatenario n es 3 (por ejemplo, dos enlaces de disulfuro intercatenarios de cadena pesada-cadena ligera y un enlace disulfuro intercatenario de cadena pesada-cadena pesada de bisagra). En ciertos aspectos, cuando el enlace disulfuro cisteína-cisteína abierto en A es un enlace disulfuro intercatenario n es 2 (por ejemplo, dos enlaces de disulfuro intercatenarios de cadena pesada-cadena ligera).
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic), (Ic1) o (Ic2), CTX es una auristatina, una pirrolobenzodiacepina (PDB), caliqueamicina, doxorrubicina, camptotecina, duocarmicina, DM1, DM4, un maitansinoide, o una tubulisina, en el que CTX se une a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster. En ciertos aspectos, CTX es una auristatina unida a L por un enlace amida. En ciertos aspectos, CTX es MMAF unida a L mediante un enlace amida. En ciertos aspectos, CTX es MMAE unida a L mediante un enlace carbamato. En ciertos aspectos, CTX es una PBD unida a L por un enlace amida o un enlace carbamato.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic); (Ic1) o (Ic2), L es un ligador no escindible. En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic); (Ic1) o (Ic2), L es:
-(CH 2)mC(O)-,
-(CH 2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-,
o
-(CH 2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-;
en el que m es un número entero de 5 a 11, y p es un número entero de 1 a 3.
En ciertos aspectos del conjugado fármaco de la fórmula (Ic); (Ic1) o (Ic2), L es un ligador escindible.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic); (Ic1) o (Ic2), L es:
-(CH 2)mC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
-(CH 2)mC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
-(CH 2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
-(CH 2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
-(CH 2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-, o
-(CH 2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-;
en el que m es un número entero de 5 a 11, y p es un número entero de 1 a 3; y
en el que PAB presenta la siguiente estructura:
Figure imgf000154_0001
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic); (Ic1) o (Ic2), CTX es una auristatina. En ciertos aspectos, la CTX es una MMAF. En ciertos aspectos, la CTX es una MMAE. En ciertos aspectos, la CTX es un PDB.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic); (Ic1) o (Ic2), n es 2, 3, o 4.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic); (Ic1) o (Ic2), CTX es MMAF, y L es -(CH2)5C(O)-. En ciertos aspectos, CTX es MMAE, y L es -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-pAB-O-C(O)-. En ciertos aspectos, CTX es PBD, y L es -(C H 2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- o -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
En ciertos aspectos, el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la siguiente fórmula:
Figure imgf000155_0001
En ciertos aspectos, el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente:
Figure imgf000155_0002
En ciertos aspectos, el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente:
En ciertos aspectos, el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente:
Figure imgf000156_0001
En ciertos aspectos, el conjugado anticuerpo-fármaco presenta una de las siguientes fórmulas:
En ciertos aspectos, el conjugado anticuerpo-fármaco presenta una de las siguientes fórmulas:
Figure imgf000157_0001
En algunos aspectos, se proporciona en la presente memoria un conjugado anticuerpo-fármaco de la siguiente fórmula (Id):
Figure imgf000157_0002
en el que:
L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster;
Sx es un átomo de azufre a partir de un primer residuo de cisteína, y Sy es un átomo de azufre a partir de un segundo residuo de cisteína, en el que el primer residuo de cisteína y el segundo residuo de cisteína son de diferentes cadenas y/o de la misma cadena de un anticuerpo multicadena;
el enlace---------- representa un enlace simple o un doble enlace; y
n es un número entero de 1 a 4.
En algunos aspectos, se proporciona en la presente memoria un conjugado anticuerpo-fármaco de la siguiente fórmula (Id1):
Figure imgf000158_0001
en el que:
L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster;
Sx es un átomo de azufre a partir de un primer residuo de cisteína, y Sy es un átomo de azufre a partir de un segundo residuo de cisteína, en el que el primer residuo de cisteína y el segundo residuo de cisteína son de diferentes cadenas y/o de la misma cadena de un anticuerpo multicadena; y
n es un número entero de 1 a 4.
En algunos aspectos, se proporciona en la presente memoria un conjugado anticuerpo-fármaco de la siguiente fórmula (Id2):
Figure imgf000158_0002
en el que:
L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster;
Sx es un átomo de azufre a partir de un primer residuo de cisteína, y Sy es un átomo de azufre a partir de un segundo residuo de cisteína, en el que el primer residuo de cisteína y el segundo residuo de cisteína son de diferentes cadenas y/o de la misma cadena de un anticuerpo multicadena; y
n es un número entero de 1 a 4.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), CTX es una auristatina, una pirrolobenzodiacepina (PDB), caliqueamicina, doxorrubicina, camptotecina, duocarmicina, DM1, DM4, un maitansinoide, o una tubulisina, en la que CTX se une a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster. En ciertos aspectos, CTX es una auristatina unida a L por un enlace amida o un enlace carbamato. En ciertos aspectos, CTX es MMAF unida a L mediante un enlace amida. En ciertos aspectos, CTX es MMAE unida a L mediante un enlace carbamato. En ciertos aspectos, CTX es una PBD unida a L por un enlace amida o un enlace carbamato.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), el anticuerpo multicadena comprende dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), el primer residuo de cisteína es de una primera cadena pesada y el segundo residuo de cisteína es de una segunda cadena pesada del anticuerpo multicadena.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), el primer residuo de cisteína es de una cadena pesada y el segundo residuo de cisteína es de una cadena ligera del anticuerpo multicadena. En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), los primer y segundo residuos de cisteína son de la misma cadena pesada del anticuerpo multicadena.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), el anticuerpo multicadena es un anticuerpo anti-C10orf54, opcionalmente anticuerpo anti-C10orf54 humanizado.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), el primer residuo de cisteína es de una cadena pesada y el segundo residuo de cisteína es de una cadena ligera del anticuerpo multicadena. En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de fórmula la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), los primer y segundo residuos de cisteína son de la misma cadena pesada del anticuerpo multicadena.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), el conjugado anticuerpo-fármaco es de la fórmula siguiente:
Figure imgf000159_0001
en el que cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica por la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se designa por la letra L; y e l ---------- enlace representa un enlace único o doble.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), el conjugado anticuerpo-fármaco es de la fórmula siguiente:
Figure imgf000160_0001
en el que cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se designa por la letra L; y e l ---------- enlace representa un enlace único o doble.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id1), el conjugado anticuerpo-fármaco es de la fórmula siguiente:
Figure imgf000160_0002
donde cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se designa por la letra L.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id1), el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente:
Figure imgf000160_0003
donde cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se designa por la letra L.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id2), el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente:
Figure imgf000161_0001
donde cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se designa por la letra L.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id2), el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente:
Figure imgf000161_0002
donde cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se designa por la letra L.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), el anticuerpo multicadena comprende unas mutaciones en una o más cisteínas en las regiones bisagra y dos cadenas pesadas. En ciertos aspectos, el uno o más residuos de cisteína están mutados a aminoácidos estructuralmente relacionados. En ciertos aspectos, el uno o más residuos de cisteína están mutados a alaninas.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), en la que el anticuerpo multicadena comprende mutaciones en una o más cisteínas en las regiones bisagra de las dos cadenas pesadas, el conjugado anticuerpo-fármaco es de la fórmula siguiente:
Figure imgf000162_0001
donde cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se designa por la letra L; y e l ---------- enlace representa un enlace único o doble. Para los aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id) mostrada anteriormente, el ADC presenta una DAR = 3 (tres fármacos por anticuerpo). Como se describe en la presente memoria, tales ADC se pueden preparar, como se describe en la presente memoria, mediante la mutación de uno o más de los residuos de cisteína bisagra de una IgG1 humana (por ejemplo, 1 cisteína bisagra), IgG2 (por ejemplo, 3 cisteínas bisagra), IgG3 (por ejemplo, 10 cisteínas bisagra), o IgG4 (por ejemplo, 1 cisteína bisagra).
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), en la que el anticuerpo multicadena comprende unas mutaciones en una o más cisteínas en las regiones bisagra de dos cadenas pesadas, el conjugado anticuerpo-fármaco es de la fórmula siguiente:
Figure imgf000162_0002
donde cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se designa por la letra L; y e l ---------- enlace representa un enlace único o doble. Para los aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id) mostrada anteriormente, el ADC presenta una DAR = 2 (dos fármacos por anticuerpo). Como se describe en la presente memoria, tales ADC se pueden preparar mutando uno o más de los residuos de cisteína bisagra de una IgG1 humana (por ejemplo, 2 cisteínas bisagra), IgG2 (por ejemplo, 4 cisteínas bisagra), IgG3 (por ejemplo, 11 cisteínas bisagra), o IgG4 (por ejemplo, 2 cisteínas bisagra). En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (id), L es un ligador no escindible.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id1), en el que el anticuerpo multicadena comprende unas mutaciones en una o más cisteínas en las regiones bisagra de dos cadenas pesadas, el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente.
Figure imgf000163_0001
en donde cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra L. Para los aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id1) representada anteriormente, el ADC presenta una dAr = 3 (tres fármacos por anticuerpo). Como se describe en la presente memoria, tales ADC se pueden preparar mutando uno o más de los residuos de cisteína bisagra de una IgG1 humana (por ejemplo, 1 cisteínas bisagra), IgG2 (por ejemplo, 3 cisteínas bisagra), IgG3 (por ejemplo, 10 cisteínas bisagra), o IgG4 (por ejemplo, 1 cisteínas bisagra).
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id1), en el que el anticuerpo multicadena comprende mutaciones en una o más cisteínas en las regiones bisagra de dos cadenas pesadas, el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente.
Figure imgf000163_0002
en el que cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra L. Para los aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id1) representado anteriormente, el ADC presenta una dAr = 2 (dos fármacos por anticuerpo). Como se describe en la presente memoria, tales ADC se pueden preparar mutando uno o más de los residuos de cisteína bisagra de una IgG1 humana (por ejemplo, 2 cisteínas bisagra), IgG2 (por ejemplo, 4 cisteínas bisagra), IgG3 (por ejemplo, 11 cisteínas bisagra), o IgG4 (por ejemplo, 2 cisteínas bisagra). En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id1), L es un ligador no escindible.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id2), en el que el anticuerpo multicadena comprende mutaciones en una o más cisteínas en las regiones bisagra de dos cadenas pesadas, el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente.
Figure imgf000164_0001
en el que cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra L. Para los aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id2) representado anteriormente, el ADC presenta una DAR = 3 (tres fármacos por anticuerpo). Como se describe en la presente memoria, tales ADC se pueden preparar mutando uno o más de los residuos de cisteína bisagra de una IgG1 humana (por ejemplo, 1 cisteínas bisagra), IgG2 (por ejemplo, 3 cisteínas bisagra), IgG3 (por ejemplo, 10 cisteínas bisagra), o IgG4 (por ejemplo, 1 cisteína bisagra).
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id2), en el que el anticuerpo multicadena comprende mutaciones en una o más cisteínas en las regiones bisagra de dos cadenas pesadas, el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente.
Figure imgf000164_0002
en el que cada cadena pesada del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra H, y cada cadena ligera del anticuerpo multicadena se indica mediante la letra L. Para los aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id2) representado anteriormente, el ADC presenta una dAr = 2 (dos fármacos por anticuerpo). Como se describe en la presente memoria, tales ADC se pueden preparar mutando uno o más de los residuos de cisteína bisagra de una IgG1 humana (por ejemplo, 2 cisteínas bisagra), IgG2 (por ejemplo, 4 cisteínas bisagra), IgG3 (por ejemplo, 11 cisteínas bisagra), o IgG4 (por ejemplo, 2 cisteínas bisagra). En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id2), L es un ligador no escindible.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), L es:
-(CH 2)mC(O)-,
-(CH 2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-,
o
-(CH 2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-;
en el que m es un número entero de 5 a 11, y p es un número entero de 1 a 3.
En ciertos aspectos del conjugado fármaco de la fórmula (Id); (Id1) o (Id2), L es un ligador escindible.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), L es:
-(CH 2)mC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
-(CH 2)mC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
-(CH 2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
-(CH 2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
-(CH 2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-, o
-(CH 2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-;
en el que m es un número entero de 5 a 11, y p es un número entero de 1 a 3; y
en el que PAB presenta la siguiente estructura:
Figure imgf000165_0001
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (id), (Id1) o (Id2), CTX es MMAF. En ciertos aspectos, CTX es una MMAE. En ciertos aspectos, CTX es una PDB.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), n es 2, 3, o 4.
En ciertos aspectos del conjugado anticuerpo-fármaco de la fórmula (Id), (Id1) o (Id2), CTX es MMAF, y L es -(CH2)aC(O)-. En ciertos aspectos, CTX es MMAE, y L es -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-pAB-O-C(O)-. En ciertos aspectos, CTX es PBD, y L es -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-, -(CH 2)5C(O)-Val-Cit-, -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
Métodos para la elaboración de ADC
Los métodos para elaborar los ADC incluyen la utilización de conjugados ligador-citotoxina y mutantes de bisagra del anticuerpo.
Una DAR opcional (proporción fármacos-anticuerpo) es deseable para los ADC, incluyendo, por ejemplo, una DAR de 2, 3, o 4. Por ejemplo, los siguientes esquemas de reacción ilustran los esquemas generales para la preparación de ADC homogéneos con DAR = 2, 3, o 4, como se divulga en la presente memoria, que pueden ser elaborados mediante los procedimientos divulgados en la presente memoria.
Por ejemplo, para ADC con anticuerpos IgG1, una o ambas de las cisteínas bisagra pueden estar mutadas en otro aminoácido (por ejemplo, alanina) para preparar ADC con una DAR de 3 o 2, respectivamente.
Por ejemplo, para ADC con anticuerpos IgG2, una, dos, tres o cuatro de las cisteínas bisagra pueden mutarse en otro aminoácido (por ejemplo, alanina) para preparar un ADC con una DAR de 4, 3 o 2, respectivamente.
Por ejemplo, para ADC con anticuerpos IgG3, nueve, diez, u once de las cisteínas bisagra pueden mutarse en otro aminoácido (por ejemplo, alanina) para preparar un ADC con una DAR de 4, 3 o 2, respectivamente.
Para otro ejemplo, para ADC con anticuerpos IgG4, una o ambas de las cisteínas bisagra pueden mutarse en otro aminoácido (por ejemplo, alanina) para preparar un ADC con una DAR de 3 o 2, respectivamente.
Esquemas generales ilustrativos para la preparción de ADC con DAR = 2 o 3:
A. Preparación de mutantes bisagra
Figure imgf000166_0001
Ċ
B. Conjugación
Figure imgf000167_0001
Las regiones bisagra de las cadenas pesadas de IgG1 e IgG4 humanas contienen dos residuos de cisteína, mientras que la región bisagra de las cadenas pesadas de IgG3 humana contienen once residuos de cisteína, y la región bisagra de las cadenas pesadas de IgG4 humana contiene cuatro residuos de cisteína (vertabla A).
Figure imgf000168_0001
La secuencia de aminoácidos de la región bisagra y el extremo N del dominio CH2 se alinean contra los aminoácidos 216 a 238 de la IgG1 humana (numeración de Eu; adaptado de Burton DR (1985) Immunoglobulin G: functional sites. Mol Immunol 22: 161-206)
Los mutantes de bisagra de IgG se generaron mediante la mutación de uno o ambas cisteínas en la región bisagra a aminoácidos estructuralmente relacionados, por ejemplo, alaninas. Los residuos de bisagra se numeran usando numeración Eu de IgG1 humana (Burton DR (1985) Immunoglobulin G: functional sites. Mol Immunol 22: 161-206). Las tablas B-E proporcionan la correspondencia entre la numeración exclusiva de IMGT para C-DOMAIN, la numeración de exones IMGT, las numeraciones de Eu y de Kabat para IgG1 humana (tabla B), IgG2 (tabla C), IgG3 (tabla D) e IgG4 (tabla E).
Tabla B: IgG1 humana
Figure imgf000169_0001
Tabla C: IgG2 humana
Figure imgf000169_0002
Figure imgf000170_0001
Tabla E: IgG4 humana
Figure imgf000171_0002
(1) J00228 corresponde al alelo IGHG1*01 (alineación de alelos: IGHG1 de humano) y a una cadena G1m1,17 (alotipos G1m). La cadena gamma1 Eu es codificada por el alelo IGHG1 * 03 (CH1 K120> R, D12 CH3> E y L14> M) y es una cadena G1m3 (alotipos G1m).
(2) Los exones IGHG1, IGHG3 y IGHG4 CH2 codifican 110 aminoácidos. El exón IGHG2 CH2 codifica 109 aminoácidos, debido a una eliminación de 3 nt correspondiente al codón 3 (posición 1,4 en la numeración exclusiva de IMGT para C-DOMAIN).
(3) Los dos últimos aminoácidos de los exones IGHG CH3 pertenecen a la CHS que codifica el extremo C de cadena pesada que se encuentra en las inmunoglobulinas secretadas.
(4) En Kabat [2], el índice de Eu 219-221 debería haber sido alineado con la proteína Eu (pp. 671). Como consecuencia, las posiciones de Kabat 232, 233 y 234 corresponden al índice de posiciones EU 219, 220 y 221, respectivamente (pp. 670-678).
(5) Las etiquetas MGT (conceptos de descripción) se escriben en mayúsculas.
Referencias:
[1] Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969). PMID: 5257969
[2] Kabat, E.A. et al., Sequences of proteins of immunological interest. 5a Edición - US Department of Health y Human Services, publicación NlH en 91-3242, pp 662,680,689 (1991).
Conjugados ligador-citotoxina
En otro aspecto, se proporcionan en la presente memoria para su uso con los anticuerpos descritos en la presente memoria unos conjugados ligador-citotoxina de las siguientes fórmulas (IIa), (IIb) un (IIc):
Figure imgf000171_0001
Figure imgf000172_0001
o un enantiómero, diastereoisómero o mezclas de los mismos;
en los que:
L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida o un enlace carbamato.
En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa); (IIb) o (IIc), L es un ligador no escindible. En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa); (IIb) o (IIc), L es:
-(CH 2)mC(O)-,
-(CH 2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-, o
-(CH 2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-;
en el que m es un número entero de 5 a 11, y p es un número entero de 1 a 3.
En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa); (IIb) o (IIc), L es un ligador escindible. En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa); (IIb) o (IIc), L es:
-(CH 2)mC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
-(CH 2)mC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
-(CH 2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
-(CH 2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
-(CH 2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)- o
-(CH 2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-;
en el que m es un número entero de 5 a 11, y p es un número entero de 1 a 3; y
en el que PAB presenta la siguiente estructura:
Figure imgf000172_0002
En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa), (IIb), o (IIc), CTX es una auristatina. En ciertos aspectos, la CTX es una MMAF. En ciertos aspectos, la CTX es una MMAE. En ciertos aspectos, la CTX es una PBD. En ciertos aspectos, CTX es un una caliqueamicina, doxorrubicina, camptotecina, duocarmicina, DM1, DM4, un maitansinoide o una tubulisina.
En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa), (IIb) o (IIc), en donde CTX es MMAE, L es un ligador escindible.
En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa), (IIb) o (IIc), en la que CTX es MMAE, L es -(CH 2)mC(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH 2)mC(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, en donde m es un número entero de 5 a 11.
En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa), (IIb) o (IIc), en la que CTX es MMAE, L es -(CH 2)mC(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH 2)mC(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa), (IIb) o (IIc), en donde CTX es una PBD, L es un ligador escindible.
En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa), (IIb) o (IIc), en la que CTX es una PBD, L es -(CH 2)mC(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH 2)mC(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, en donde m es un número entero de 5 a 11.
En ciertos aspectos del conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa), (IIb) o (IIc), en la que CTX es una PBD, L es -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH 2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
En ciertos aspectos, el conjugado ligador-citotoxina presenta la estructura siguiente:
Figure imgf000173_0001
En ciertos aspectos, el conjugado ligador-citotoxina presenta la estructura siguiente:
Figure imgf000173_0002
En ciertos aspectos, el conjugado ligador-citotoxina presenta la estructura siguiente:
Figure imgf000173_0003
En ciertos aspectos, el conjugado ligador-citotoxina presenta la estructura siguiente:
Figure imgf000174_0001
En ciertos aspectos, el conjugado ligador-citotoxina presenta la estructura siguiente:
Figure imgf000174_0002
En ciertos aspectos, el conjugado ligador-citotoxina presenta la estructura siguiente:
Figure imgf000174_0003
En ciertos aspectos, el conjugado ligador-citotoxina presenta una de las siguientes estructuras:
Figure imgf000174_0004
En ciertos aspectos, el conjugado ligador-citotoxina presenta una de las siguientes estructuras:
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En ciertos aspectos, el conjugado ligador-citotoxina presenta una de las siguientes estructuras:
Figure imgf000175_0002
Composiciones farmacéuticas
Las formulaciones terapéuticas que contienen uno o más de los anticuerpos proporcionados en la presente memoria se pueden preparar para el almacenamiento mezclando el anticuerpo que presenta el grado deseado de pureza con portadores, excipientes o estabilizantes fisiológicamente aceptables (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA), en forma de formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas. Los portadores, excipientes o estabilizantes aceptables no son tóxicos para los receptores a las dosis y concentraciones utilizadas, e incluyen amortiguadores tales como fosfato, citrato, y otros ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico y metionina; conservantes (tales como cloruro de octadecildimetilbencil amonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; fenol, butil o bencil alcohol; alquil parabenos tales como metil o propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; y m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina, o inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina, o lisina; monosacáridos, disacáridos, y otros carbohidratos incluyendo glucosa, manosa, o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; azúcares tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sal tales como sodio; complejos metálicos (por ejemplo, complejos de Zn-proteína); y/o tensioactivos no iónicos tales como TWEEN ™, PLURONICS ™ o polietilenglicol (PEG).
Los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden también, por ejemplo, formularse en liposomas. Los liposomas que contienen la molécula de interés se preparan mediante procedimientos conocidos en la técnica, tales como los descritos en Epstein et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688; Hwang et al. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030; y patentes Us n° 4.485.045 y 4.544.545. Los liposomas con tiempo de circulación potenciado se divulgan en la patente US n° 5.013.556.
Los inmunoliposomas particularmente útiles pueden ser generados mediante el método de evaporación de fase inversa con una composición lipídica que contiene fosfatidilcolina, colesterol y fosfatidiletanolamina derivatizada con PEG (PEG-PE). Los liposomas se extruyen a través de filtros con tamaño de poro definido para producir liposomas con el diámetro deseado. Los fragmentos Fab' de un anticuerpo proporcionado en la presente memoria se pueden conjugar con los liposomas como se describen en Martin et al. (1982) J. Biol. Chem. 257:286-288 a través de una reacción de intercambio disulfuro. Un agente quimioterápico (tal como doxorrubicina) está contenido opcionalmente dentro del liposoma; ver Gabizon et al., (1989) J.Inst Nacional del Cáncer. 81(19):1484.
Las formulaciones, tales como las descritas en la presente memoria, también pueden contener más de un compuesto activo según sea necesario para la indicación particular que se está tratando. En ciertos aspectos, las formulaciones comprenden un anticuerpo proporcionado en la presente memoria y uno o más compuestos activos con actividades complementarias que no afectan adversamente entre sí. Tales moléculas están presentes adecuadamente en combinación en cantidades que son eficaces para el propósito pretendido. Por ejemplo, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria puede combinarse con uno o más de otros agentes terapéuticos. Tal terapia combinada puede ser administrada al paciente en serie o simultáneamente o en secuencia.
Un anticuerpo proporcionado en la presente memoria también puede ser atrapado en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, por ejemplo, hidroximetilcelulosa o gelatina-microcápsula y microcápsula de poli-(metilmetacrilato), respectivamente, en sistemas de liberación de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones. Tales técnicas se describen en Remington’s Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA.
Las formulaciones que se van a utilizar para la administración in vivo pueden ser estériles. Esto se consigue fácilmente por filtración a través, por ejemplo, de membranas de filtración estériles.
Las preparaciones de liberación prolongada también se pueden preparar. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación prolongada incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el polipéptido, matrices que están en forma de artículos conformados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Los ejemplos de matrices de liberación prolongada incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(2-hidroxietil-metacrilato), o poli(alcohol vinílico)), poliláctidos (patente US n° 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutámico y etil-L-glutamato, acetato no degradable de etileno-vinilo, copolímeros degradables de ácido lácticoácido glicólico tales como el LUPRON DEPOT ™ (microesferas inyectables compuestas de copolímero ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolida), y ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico. Mientras que polímeros tales como etileno-acetato de vinilo y ácido láctico-ácido glicólico permiten la liberación de moléculas durante más de 100 días, ciertos hidrogeles liberan proteínas durante períodos de tiempo más cortos. Cuando los anticuerpos encapsulados permanecen en el cuerpo durante un largo tiempo, se pueden desnaturalizar o agregar como resultado de la exposición a la humedad a 37°C, resultando en una pérdida de actividad biológica y posibles cambios en la inmunogenicidad. Las estrategias racionales se pueden concebir para la estabilización dependiendo del mecanismo implicado. Por ejemplo, si el mecanismo de agregación se descubre que es la formación de enlace intermolecular S--S a través de intercambio tio-disulfuro, la estabilización puede conseguirse modificando los residuos sulfhidrilo, liofilizando a partir de soluciones ácidas, controlando el contenido de humedad, utilizando aditivos apropiados, y unas composiciones de matriz de polímero específicas.
En algunos aspectos, las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente invención contienen cantidades terapéuticamente eficaces de uno o más de los anticuerpos proporcionados en la presente memoria, y opcionalmente uno o profilácticos adicionales de agentes terapéuticos, en un portador farmacéuticamente aceptable. Tales composiciones farmacéuticas son útiles en la prevención, el tratamiento, o el alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54.
Los portadores farmacéuticos adecuados para la administración de los compuestos proporcionados en la presente memoria incluyen cualesquiera de los portadores conocidos por los expertos en la materia por ser adecuados para el modo particular de administración.
Además, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden formularse como el único principio farmacéuticamente activo en la composición o pueden ser combinados con otros principios activos (tales como uno o más de otros agentes profilácticos o terapéuticos).
Las composiciones pueden contener uno o más anticuerpos proporcionados en la presente memoria. En un aspecto, los anticuerpos se formulan en preparaciones farmacéuticas adecuadas, tales como soluciones, suspensiones, comprimidos, comprimidos dispersables, píldoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida o elixires, para administración oral o en soluciones o suspensiones estériles para administración parenteral, así como la preparación de parche transdérmico e inhaladores de polvo seco. En un aspecto, los anticuerpos descritos anteriormente se formulan en composiciones farmacéuticas utilizando técnicas y procedimientos bien conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Ansel (1985) Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4a Ed., p. 126).
En ciertos aspectos de las composiciones, las concentraciones eficaces de uno o más anticuerpos o derivados de los mismos es (son) mezclado(s) con un portador farmacéutico adecuado. En unos aspectos específicos, las concentraciones de los compuestos en las composiciones son eficaces para el suministro de una cantidad, tras la administración, que trata, previene, o mejora una enfermedad mediada por C10orf54 o síntoma de la misma.
En un aspecto, las composiciones se formulan para la administración de dosificación única. Para formular una composición, la fracción en peso del compuesto se disuelve, suspende, dispersa o mezcla de otro modo en un portador seleccionado a una concentración eficaz tal que la afección tratada se alivia, previene, o uno o más síntomas son mejorados.
En algunos aspectos, el anticuerpo proporcionado en la presente memoria se incluye en el portador farmacéuticamente aceptable en una cantidad eficaz suficiente para ejercer un efecto terapéuticamente útil en ausencia de efectos secundarios indeseables sobre el paciente tratado. La concentración terapéuticamente eficaz puede determinarse empíricamente ensayando los compuestos en sistemas in vitro e in vivo que utilizan métodos de rutina y después se extrapola de los mismos para dosificaciones para seres humanos.
La concentración de anticuerpo en la composición farmacéutica dependerá de, por ejemplo, las características fisicoquímicas del anticuerpo, la pauta de dosificación, y la cantidad administrada así como otros factores conocidos por los expertos en la materia.
En un aspecto, una dosificación terapéuticamente eficaz produce una concentración en suero de anticuerpo de aproximadamente 0.1 ng/ml a aproximadamente 50-100 g/ml. Las composiciones farmacéuticas, en otro aspecto, proporcionan una dosificación de aproximadamente 0.001 mg a aproximadamente 2000 mg de anticuerpo por kilogramo de peso corporal por día. Las formas unitarias de dosificación farmacéuticas se pueden preparar para proporcionar de aproximadamente 0.01 mg, 0.1 mg o 1 mg a aproximadamente 500 mg, 1000 mg o 2000 mg, y en un aspecto desde aproximadamente 10 mg a aproximadamente 500 mg del anticuerpo y/o una combinación de otros ingredientes esenciales opcionales por forma unitaria de dosificación.
El anticuerpo se puede administrar a la vez, o puede dividirse en un número de dosis más pequeñas para ser administradas a intervalos de tiempo. Se entiende que la dosificación precisa y la duración del tratamiento es una función de la enfermedad que se trata y puede determinarse empíricamente usando protocolos de ensayo conocidos o por extrapolación a partir de datos de prueba in vivo o in vitro. Debe apreciarse además que las concentraciones y los valores de dosificación también pueden variar con la gravedad de la afección que se debe aliviar. Debe apreciarse además que para cualquier sujeto en particular, las pautas posológicas específicas pueden ser ajustadas en el tiempo según la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los intervalos de concentración establecidos en la presente memoria son únicamente ejemplificativos y no están destinados a limitar el alcance o práctica de las composiciones reivindicadas.
Tras la mezcla o adición del anticuerpo, la mezcla resultante puede ser una solución, suspensión, emulsión o similar. La forma de la mezcla resultante depende de un número de factores, incluyendo el modo pretendido de administración y la solubilidad del compuesto en el portador o vehículo seleccionado. La concentración eficaz es suficiente para mejorar los síntomas de la enfermedad, trastorno o afección tratados y se puede determinar empíricamente.
En algunos aspectos, las composiciones farmacéuticas se proporcionan para la administración a humanos y animales en formas de dosificación unitarias, tales como comprimidos, cápsulas, píldoras, polvos, gránulos, soluciones o suspensiones parenterales estériles, y soluciones o suspensiones orales, y emulsiones de aceite en agua que contienen cantidades adecuadas de los compuestos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos. El anticuerpo es, en un aspecto, formulado y administrado en formas de dosis unitarias o formas de dosificación múltiple. Las formas de “dosis unitaria” como se usan en la presente memoria, se refieren a unidades físicamente discretas adecuadas para sujetos humanos y animales y envasadas individualmente como se conoce en la técnica. Cada dosis unitaria contiene una cantidad predeterminada del anticuerpo suficiente para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con el portador farmacéutico requerido, vehículo o diluyente. Los ejemplos de formas de dosis unitarias incluyen ampollas y jeringas y comprimidos o cápsulas envasados individualmente. Las formas de dosis unitaria pueden administrarse en fracciones o múltiplos de las mismas. Una forma “de dosis múltiple” es una pluralidad de formas de dosis unitarias idénticas envasadas en un solo contenedor para ser administrado en forma de dosis unitaria segregada. Los ejemplos de formas de dosis múltiples incluyen viales, frascos de comprimidos o cápsulas o botellas de pintas o galones. Por lo tanto, la forma de dosis múltiple es un múltiplo de dosis unitarias que no están segregadas en el envasado.
En unos aspectos específicos, uno o más anticuerpos anti-C10orf54 proporcionados en la presente memoria están en una formulación farmacéutica líquida. Las composiciones líquidas farmacéuticamente administrables pueden, por ejemplo, prepararse por disolución, dispersión, o de otra manera mezclando un compuesto activo como se ha definido anteriormente y adyuvantes farmacéuticos opcionales en un portador, tal como, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa acuosa, glicerol, glicoles, etanol, y similares, para formar de este modo una solución o suspensión. Si se desea, la composición farmacéutica que se debe administrar también puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes solubilizantes, agentes amortiguadores del pH y similares, por ejemplo, acetato, citrato de sodio, derivados de ciclodextrina, monolaurato de sorbitán, acetato sódico de trietanolamina, oleato de trietanolamina, y otros de tales agentes.
Los métodos actuales para preparar tales formas de dosificación son conocidos, o serán evidentes, para los expertos en la materia; por ejemplo, ver Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA
Se pueden preparar las formas de dosificación o composiciones que contienen anticuerpos en el intervalo de 0.005% a 100% con el equilibrio realizado a partir de un portador no tóxico. Los expertos en la materia están familiarizados con los métodos de preparación de estas composiciones.
Las formas farmacéuticas de dosificación oral son sólidas, en gel o líquidas. Las formas sólidas de dosificación incluyen comprimidos, cápsulas, gránulos y polvos a granel. Los tipos de comprimidos orales incluyen comprimidos, pastillas y comprimidos masticables que pueden ser de cubierta entérica, recubiertos de azúcar o recubiertos con película. Las cápsulas pueden ser cápsulas de gelatina dura o blanda, mientras que los gránulos y polvos pueden proporcionarse en forma no efervescente o efervescente con la combinación de otros ingredientes conocidos por los expertos en la materia.
En ciertos aspectos, las formulaciones son formas de dosificación sólidas. En ciertos aspectos, las formulaciones son cápsulas o comprimidos. Los comprimidos, píldoras, cápsulas, tabletas y similares pueden contener uno o más de los siguientes ingredientes, o compuestos de una naturaleza similar: un aglutinante; un lubricante; un diluyente; un deslizante; un agente disgregante; un agente colorante; un agente edulcorante; un agente saborizante; un agente humectante; un recubrimiento emético; y un recubrimiento de película. Los ejemplos de aglutinantes incluyen celulosa microcristalina, goma de tragacanto, solución de glucosa, mucílago de acacia, solución de gelatina, melaza, polivinilpirrolidona, povidona, crospovidonas, sacarosa y pasta de almidón. Los lubricantes incluyen talco, almidón, magnesio o estearato de calcio, licopodio y ácido esteárico. Los diluyentes incluyen, por ejemplo, lactosa, sacarosa, almidón, caolín, sal, manitol y fosfato dicálcico. Los agentes deslizantes incluyen, pero no se limitan a, dióxido de silicio coloidal. Los agentes disgregantes incluyen croscarmelosa sódica, glicolato sódico de almidón, ácido algínico, almidón de maíz, almidón de patata, bentonita, metilcelulosa, agar y carboximetilcelulosa. Los agentes colorantes incluyen, por ejemplo, cualquiera de los colorantes FD y C solubles en agua certificados aprobados, mezclas de los mismos; y tintes FD y C insolubles en agua suspendidos en hidrato de alúmina. Los agentes edulcorantes incluyen sacarosa, lactosa, manitol y agentes edulcorantes artificiales tales como sacarina, y cualquier cantidad de sabores secados por pulverización. Los agentes aromatizantes incluyen aromas naturales extraídos de plantas tales como frutas y mezclas sintéticas de compuestos que producen una sensación agradable, tales como, pero no limitados a menta y salicilato de metilo. Los agentes humectantes incluyen monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbitán, monolaurato de dietilenglicol y lauril éter de polioxietileno. Los recubrimientos eméticos incluyen ácidos grasos, grasas, ceras, goma laca, goma laca amoniacal y ftalatos de acetato de celulosa. Los recubrimientos de película incluyen hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, polietilenglicol 4000 y ftalato de acetato de celulosa.
Los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden proporcionarse en una composición que los proteja del entorno ácido del estómago. Por ejemplo, la composición puede formularse en un recubrimiento entérico que mantiene su integridad en el estómago y libera el compuesto activo en el intestino. La composición también se puede formular combinado con un antiácido u otro ingrediente.
Cuando la forma unitaria de dosificación es una cápsula, ésta puede contener, además del material del tipo anterior, un portador líquido tal como un aceite graso. Además, las formas unitarias de dosificación pueden contener otros diversos materiales que modifican la forma física de la unidad de dosificación, por ejemplo, recubrimientos de azúcar y otros agentes entéricos. Los compuestos también se pueden administrar como un componente de un elixir, suspensión, jarabe, oblea, espolvoreado, goma de mascar o similares. Un jarabe puede contener, además de los compuestos activos, sacarosa como agente edulcorante y ciertos conservantes, tintes y colorantes y aromas.
El anticuerpo también se puede mezclar con otros materiales activos que no perjudiquen la acción deseada, o con materiales que suplementan la acción deseada, tales como antiácidos, bloqueadores H2, y diuréticos. El principio activo es un derivado de anticuerpo o farmacéuticamente aceptable del mismo como se describe en la presente memoria. Las concentraciones más altas, hasta aproximadamente 98% en peso del principio activo pueden ser incluidos.
En todos los aspectos, los comprimidos y formulaciones cápsulas se pueden recubrir como se conoce por los expertos en la materia con el fin de modificar o sostener la disolución del principio activo. Así, por ejemplo, pueden estar recubiertas con un recubrimiento entéricamente digestible convencional, tal como fenilsalicilato, ceras y ftalato de acetato de celulosa.
En unos aspectos específicos, las formulaciones son formas de dosificación líquidas. Las formas de dosificación oral líquidas incluyen soluciones acuosas, emulsiones, suspensiones, soluciones y/o suspensiones reconstituidas a partir de gránulos no efervescentes y preparaciones efervescentes reconstituidas a partir de gránulos efervescentes. Las soluciones acuosas incluyen, por ejemplo, elixires y jarabes. Las emulsiones son de aceite-en­ agua o agua-en-aceite.
Los elixires son preparaciones hidroalcohólicas traslúcidas y endulzadas. Los portadores farmacéuticamente aceptables usados en elixires incluyen disolventes. Los jarabes son soluciones acuosas concentradas de un azúcar, por ejemplo, sacarosa, y pueden contener un conservante. Una emulsión es un sistema de dos fases en el que un líquido se dispersa en forma de pequeños glóbulos a través de otro líquido. Los vehículos farmacéuticamente aceptables usados en emulsiones son líquidos no acuosos, agentes emulsionantes y conservantes. Las suspensiones usan agentes de suspensión y conservantes farmacéuticamente aceptables. Las sustancias farmacéuticamente aceptables usadas en gránulos no efervescentes, para su reconstitución en una forma de dosificación oral líquida, incluyen diluyentes, edulcorantes y agentes humectantes. Las sustancias farmacéuticamente aceptables usadas en gránulos no efervescentes, para su reconstitución en una forma de dosificación oral líquida, incluyen diluyentes de ácidos orgánicos y agentes humectantes. Los agentes colorantes y aromatizantes se utilizan en todas las formas de dosificación anteriores.
Los disolventes incluyen glicerina, sorbitol, alcohol etílico y jarabe. Los ejemplos de conservantes incluyen glicerina, metilo y propilparabeno, ácido benzoico, benzoato de sodio y alcohol. Los ejemplos de líquidos no acuosos utilizados en emulsiones incluyen aceite mineral y aceite de semilla de algodón. Los ejemplos de agentes emulsionantes incluyen gelatina, acacia, tragacanto, bentonita, y tensioactivos tales como monooleato de polioxietileno sorbitán. Los agentes de suspensión incluyen carboximetilcelulosa sódica, pectina, tragacanto, Veegum y acacia. Los agentes edulcorantes incluyen sacarosa, jarabes, glicerina y agentes edulcorantes artificiales tales como sacarina. Los agentes humectantes incluyen monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbitán, monolaurato de dietilenglicol y lauril éter de polioxietileno. Los ácidos orgánicos incluyen ácido cítrico y tartárico. Las fuentes de dióxido de carbono incluyen bicarbonato de sodio y carbonato de sodio. Los agentes colorantes incluyen cualquiera de los colorantes FD y C solubles en agua certificados aprobados, y sus mezclas. Los agentes aromatizantes incluyen aromas naturales extraídos de plantas tales como frutas y mezclas sintéticas de compuestos que producen una sensación de gusto agradable.
Para una forma de dosificación sólida, la solución o suspensión, en por ejemplo carbonato de propileno, aceites vegetales o triglicéridos, es, en un aspecto, encapsulada en una cápsula de gelatina. Tales soluciones, y la preparación y encapsulación de las mismas, se describen en las patentes US n° 4.328.245; 4.409.239; y 4.410.545. Para una forma de dosificación líquida, la solución, por ejemplo, por ejemplo, en un polietilenglicol, puede diluirse con una cantidad suficiente de un portador líquido farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, agua, para medirse fácilmente para la administración.
Alternativamente, las formulaciones orales líquidas o semisólidas se pueden preparar disolviendo o dispersando el compuesto activo o sal en aceites vegetales, glicoles, triglicéridos, ésteres de propilenglicol (por ejemplo, carbonato de propileno) y otros tales portadores, y encapsulando estas soluciones o suspensiones en cápsulas de gelatina duras o blandas. Otras formulaciones útiles incluyen las expuestas en las patentes US n° RE28.819 y 4.358.603. En resumen, tales formulaciones incluyen, pero no se limitan a, las que contienen un compuesto proporcionado en la presente memoria, un grupo mono-o polialquilenglicol dialquilado, incluyendo, pero no limitado a, 1,2-dimetoximetano, diglima, triglima, tetraglima, polietilenglicol -350-dimetil-éter, polietilenglicol-550-dimetil, polietileno glicol-750-dimetil éter en donde 350, 550 y 750 se refieren al peso molecular promedio aproximado del polietilenglicol, y uno o más antioxidantes, tales como hidroxitolueno butilado ( BHT), hidroxianisol butilado (BHA), galato de propilo, vitamina e, hidroquinona, hidroxicumarinas, etanolamina, lecitina, cefalina, ácido ascórbico, ácido málico, sorbitol, ácido fosfórico, ácido tiodipropiónico y sus ésteres, y ditiocarbamatos.
Otras formulaciones incluyen, pero no se limitan a soluciones alcohólicas acuosas incluyendo un acetal farmacéuticamente aceptable. Los alcoholes utilizados en estas formulaciones son cualquier disolvente farmacéuticamente aceptable miscible en agua que presenta uno o más grupos hidroxilo, incluyendo, pero no limitado a, propilenglicol y etanol. Los acetales incluyen, pero no se limitan a, di(alquilo inferior) acetales de aldehídos de alquilo inferior tales como acetaldehído dietil acetal.
La administración parenteral, en un aspecto, se caracteriza por inyección, ya sea por vía subcutánea, intramuscular o intravenosa también se contempla en la presente memoria. Los productos inyectables pueden prepararse en formas convencionales, bien como soluciones o suspensiones líquidas, formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en líquido antes de la inyección, o como emulsiones. Los productos inyectables, soluciones y emulsiones también contienen uno o más excipientes. Los excipientes adecuados son, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol o etanol. Además, si se desea, las composiciones farmacéuticas que se deben administrar también pueden contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes o emulsionantes, agentes amortiguadores del pH, estabilizantes, potenciadores de la solubilidad, y otros agentes, tales como por ejemplo, sodio de etilo, monolaurato de sorbitán, oleato de trietanolamina y ciclodextrinas.
La implantación de un sistema de liberación lenta o de liberación sostenida, de manera que un nivel constante de dosificación se mantiene (ver, por ejemplo, la patente US n° 3.710.795) también se contempla en la presente memoria. En resumen, un compuesto proporcionado en la presente memoria se dispersa en una matriz interna sólida, por ejemplo, polimetilmetacrilato, polibutilmetacrilato, cloruro de polivinilo plastificado o no plastificado, nailon plastificado, tereftalato de polietileno plastificado, caucho natural, poliisopreno, poliisobutileno, polibutadieno, polietileno, copolímeros de etileno-acetato de vinilo, cauchos de silicona, polidimetilsiloxanos, copolímeros de carbonato de silicona, polímeros hidrófilos tales como hidrogeles de ésteres de ácido acrílico y ácido, colágeno, alcohol polivinílico reticulado metacrílico y acetato de polivinilo parcialmente hidrolizado reticulado, que está rodeado por una membrana polimérica exterior, por ejemplo, polietileno, polipropileno, copolímeros de etileno/propileno, copolímeros de etileno/acrilato de etilo, copolímeros de etileno/acetato de vinilo, cauchos de silicona, polidimetilsiloxanos, caucho de neopreno, polietileno clorado, cloruro de polivinilo, copolímeros de cloruro de vinilo con acetato de vinilo, cloruro de vinilideno, etileno y propileno, polietileno ionómero tereftalato, cauchos de butilo caucho de epiclorhidrina, copolímero de etileno/alcohol de vinilo, etileno/acetato de vinilo/alcohol vinílico, terpolímero y copolímero de etileno/viniloxietanol, que es insoluble en fluidos corporales. El anticuerpo se difunde a través de la membrana polimérica exterior en una etapa de control de velocidad de liberación. La cantidad de anticuerpo contenido en dichas composiciones parenterales depende altamente de la naturaleza específica del mismo, así como la actividad del compuesto y las necesidades del sujeto.
Las preparaciones para administración parenteral incluyen soluciones estériles listas para inyección, productos solubles secos estériles, tales como polvos liofilizados, listos para ser combinados con un disolvente justo antes del uso, incluyendo comprimidos hipodérmicos, suspensiones estériles listas para inyección, productos insolubles secos estériles listos para ser combinados con un vehículo justo antes del uso y emulsiones estériles. Las soluciones pueden ser acuosas o no acuosas.
Si se administra por vía intravenosa, los portadores adecuados incluyen solución salina fisiológica o solución salina amortiguada con fosfato (PBS), y soluciones que contienen agentes espesantes y solubilizantes, tales como glucosa, polietilenglicol, y polipropilenglicol y mezclas de los mismos.
Los portadores farmacéuticamente aceptables utilizados en preparaciones parenterales incluyen vehículos acuosos, vehículos no acuosos, agentes antimicrobianos, agentes isotónicos, amortiguadores, antioxidantes, anestésicos locales, agentes de suspensión y dispersión, agentes emulsionantes, agentes secuestrantes o quelantes y otras sustancias farmacéuticamente aceptables.
Los ejemplos de vehículos acuosos incluyen inyección de cloruro sódico, inyección de Ringer, inyección de dextrosa isotónica, inyección de agua estéril, dextrosa y solución de Ringer lactada. Los vehículos parenterales no acuosos incluyen aceites de origen vegetal, aceite de semilla de algodón, aceite de maíz, aceite de sésamo y aceite de cacahuate. Unos agentes antimicrobianos en concentraciones bacteriostáticas o fungistáticas se pueden añadir a las preparaciones parenterales envasadas en recipientes de dosis múltiples que incluyen fenoles o cresoles, mercuriales, alcohol bencílico, clorobutanol, ésteres del ácido p-hidroxibenzoico de metilo y propilo, timerosal, cloruro de benzalconio y cloruro de bencetonio. Los agentes isotónicos incluyen cloruro de sodio y dextrosa. Los amortiguadores incluyen fosfato y citrato. Los antioxidantes incluyen bisulfato de sodio. Los anestésicos locales incluyen clorhidrato de procaína. Los agentes de suspensión y dispersión incluyen carboximetilcelulosa de sodio agentes, hidroxipropilmetilcelulosa y polivinilpirrolidona. Los agentes emulsionantes incluyen polisorbato 80 (TWEEN® 80). Un agente secuestrante o quelante de iones metálicos incluye EDTA. Los portadores farmacéuticos también incluyen alcohol etílico, polietilenglicol y propilenglicol para vehículos miscibles en agua; e hidróxido sódico, ácido clorhídrico, ácido cítrico o ácido láctico para ajuste del pH.
La concentración del compuesto farmacéuticamente activo se ajusta de modo que una inyección proporciona una cantidad eficaz para producir el efecto farmacológico deseado. La dosis exacta depende de la edad, peso y estado del paciente o animal como se conoce en la técnica.
Las preparaciones parenterales de dosis unitarias pueden envasarse en una ampolla, un vial o una jeringa con una aguja. Todas las preparaciones para administración parenteral pueden ser estériles, como es conocido y practicado en la técnica.
De forma ilustrativa, la infusión intravenosa o intraarterial de una solución acuosa estéril que contiene un compuesto activo es un modo eficaz de administración. Otro aspecto es una solución acuosa o aceitosa estéril o suspensión que contiene un material activo inyectado según sea necesario para producir el efecto farmacológico deseado.
Los inyectables se diseñan para administración local y sistémica. En un aspecto, una dosificación terapéuticamente eficaz se formula para que contenga una concentración de por lo menos aproximadamente 0.1 % p/p hasta aproximadamente 90% p/p o más, en ciertos aspectos más de 1% p/p del compuesto activo a tejido(s) tratado(s).
El anticuerpo puede ser suspendido en forma micronizada u otra forma adecuada. La forma de la mezcla resultante depende de un número de factores, incluyendo el modo pretendido de administración y la solubilidad del compuesto en el portador o vehículo seleccionado. La concentración eficaz es suficiente para mejorar los síntomas de la enfermedad o afección tratada y se puede determinar empíricamente.
En otros aspectos, las formulaciones farmacéuticas son polvos liofilizados, que pueden reconstituirse para su administración como soluciones, emulsiones y otras mezclas. También pueden ser reconstituidos y formulados como sólidos o geles.
El polvo liofilizado se prepara disolviendo un anticuerpo proporcionado en la presente memoria, o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, en un disolvente adecuado. En algunos aspectos, el polvo liofilizado es estéril. El disolvente puede contener un excipiente que mejora la estabilidad u otro componente farmacológico del polvo o solución reconstituida, preparada a partir del polvo. Los excipientes que pueden usarse incluyen, pero no se limitan a, dextrosa, sorbital, fructosa, jarabe de maíz, xilitol, glicerina, glucosa, sacarosa u otro agente adecuado. El disolvente también puede contener un amortiguador, tal como citrato, fosfato sódico o potásico u otro amortiguador de este tipo conocido por los expertos en la materia en, en un aspecto, aproximadamente pH neutral. La posterior filtración estéril de la solución seguida por la liofilización bajo condiciones estándar conocidas por los expertos en la materia proporciona la formulación deseada. En un aspecto, la solución resultante será repartida en viales para su liofilización. Cada vial contendrá una única dosis o múltiples dosis del compuesto. El liofilizado puede almacenarse bajo condiciones apropiadas, como a aproximadamente 4°C a temperatura ambiente.
La reconstitución de este polvo liofilizado con agua para inyección proporciona una formulación para uso en la administración parenteral. Para la reconstitución, se añade el polvo liofilizado a agua estéril u otro portador adecuado. La cantidad precisa depende del compuesto seleccionado. Tal cantidad se puede determinar empíricamente.
Las mezclas tópicas se preparan como se describe para la administración local y sistémica. La mezcla resultante puede ser una solución, suspensión, emulsiones o similares y se pueden formular como cremas, geles, pomadas, emulsiones, soluciones, elixires, lociones, suspensiones, tinturas, pastas, espumas, aerosoles, irrigaciones, pulverizaciones, supositorios, vendajes, parches dérmicos o cualesquiera otras formulaciones adecuadas para administración tópica.
Los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden formularse como aerosoles para aplicación tópica, tales como por inhalación (ver, por ejemplo, las patentes US n° 4.044.126, 4.414.209, y 4.364.923, que describen aerosoles para el suministro de un esteroide útil para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, particularmente asma). Estas formulaciones para administración al tracto respiratorio pueden estar en la forma de un aerosol o solución para un nebulizador, o como un polvo microfino para insuflación, solas o en combinación con un portador inerte tal como lactosa. En tal caso, las partículas de la formulación, en un aspecto, presentarán diámetros de menos de 50 micrómetros, en un aspecto menos de 10 micras.
Los compuestos pueden formularse para aplicación tópica o local, tales como aplicación tópica en la piel y las membranas mucosas, como en el ojo, en forma de geles, cremas y lociones y para aplicación en el ojo o para la aplicación intracisternal o intraespinal. La administración tópica se contempla para la entrega transdérmica y también para la administración a los ojos o mucosa, o para terapias de inhalación. Las soluciones nasales del compuesto activo solo o en combinación con otros excipientes farmacéuticamente aceptables también se pueden administrar.
Estas soluciones, particularmente las destinadas para uso oftálmico, pueden ser formuladas como soluciones isotónicas 0.01% -10%, pH de aproximadamente 5-7, con sales apropiadas.
Otras vías de administración, tales como parches transdérmicos, incluidos dispositivos iontoforéticos y electroforéticos, y la administración rectal, también se contemplan en la presente memoria.
Los parches transdérmicos, incluyendo dispositivos iontoforéticos y electroforéticos, son bien conocidos por el experto en la materia. Por ejemplo, estos parches son divulgados en las patentes US n° 6.267.983, 6.261.595, 6.256.533, 6.167.301, 6.024.975, 6.010715, 5.985.317, 5.983.134, 5.948.433, y 5.860.957.
Por ejemplo, las formas farmacéuticas de administración rectal son supositorios rectales, cápsulas y comprimidos para un efecto sistémico. Los supositorios rectales como se utilizan en la presente memoria significan cuerpos sólidos para su inserción en el recto que se derriten o ablandan en la temperatura corporal liberando uno o más principios activos farmacológica o terapéuticamente. Las sustancias farmacéuticamente aceptables en supositorios rectales son bases o vehículos y agentes para aumentar el punto de fusión. Los ejemplos de bases son manteca de cacao (aceite de teobroma), glicerina-gelatina, carbowax (polioxietilenglicol) y mezclas adecuadas de mono-, di-y triglicéridos de ácidos grasos. Pueden utilizarse combinaciones de diversas bases. Los agentes para aumentar el punto de fusión de supositorios son cera y esperma de ballena. Los supositorios rectales se pueden preparar ya sea por el método de compresión o por moldeo. El peso de un supositorio rectal, en un aspecto, es aproximadamente de 2 a 3 gm.
Los comprimidos y cápsulas para administración rectal pueden ser fabricados usando la misma sustancia farmacéuticamente aceptable y por los mismos métodos en cuanto a formulaciones para administración oral.
Los anticuerpos y otras composiciones proporcionados en la presente memoria también pueden formularse para ser dirigidos a un determinado tejido, receptor, u otra área del cuerpo del sujeto que debe ser tratado. Tales métodos de dianización son bien conocidos por un experto en la materia. Se contemplan todos estos métodos de dianización en la presente memoria para su uso en las presentes composiciones. Para los ejemplos no limitativos de métodos de dianización, ver, por ejemplo, las patentes US n° 6.316.652, 6.274.552, 6.271.359, 6.253.872, 6.139.865, 6.131.570, 6.120.751, 6.071.495, 6.060.082, 6.048.736, 6.039.975, 6.004.534, 5.985.307, 5.972.366, 5.900.252, 5.840.674, 5.759.542 y 5.709.874.
En un aspecto, las suspensiones liposómicas, incluyendo liposomas dirigidos a tejidos, tales como liposomas dirigidos a tumores, también pueden ser adecuados como portadores farmacéuticamente aceptables. Estos pueden prepararse según métodos conocidos por los expertos en la materia. Por ejemplo, formulaciones de liposomas se pueden preparar como se describe en la patente US n° 4.522.811. En resumen, los liposomas tales como vesículas multilamelares (MLV de) se pueden formar secando fosfatidilcolina de huevo y fosfatidilserina del cerebro (relación molar 7:3) en el interior de un matraz. Una solución de un compuesto que se proporciona en la presente memoria en cationes divalentes que carecen de solución salina amortiguada con fosfato (PBS) se añade y el frasco es agitado hasta que la película lipídica se dispersa. Las vesículas resultantes son lavadas para retirar compuestos no encapsulados, sedimentadas por centrifugación y a continuación resuspendidas en PBS.
Métodos de administración y dosificación
También se proporcionan en la presente memoria unas composiciones que comprenden uno o más anticuerpos proporcionados en la presente memoria para la utilización en la prevención, el tratamiento o alivio de uno o más síntomas de una enfermedad, tal como una enfermedad mediada por C10orf54.
En ciertos aspectos, se proporcionan en la presente memoria unas composiciones que comprenden uno o más anticuerpos proporcionados en la presente memoria para la utilización en la gestión, prevención o el tratamiento de una enfermedad mediada por C10orf54 y/o el alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54. Las enfermedades mediadas por C10orf54 ejemplificativas incluyen un trastorno proliferativo celular, cáncer, tumor e injerto-contra-hospedador (GVHD) o un síntoma de los mismos.
En ciertos aspectos, se proporcionan en la presente memoria unas composiciones que comprenden uno o más anticuerpos proporcionados en la presente memoria para la utilización en la prevención, el tratamiento y/o alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54, tal como un trastorno proliferativo celular. Un trastorno proliferativo celular puede incluir cáncer o la formación de un tumor o un síntoma del mismo. En algunos aspectos, el trastorno proliferativo celular se asocia con aumento de la expresión y/o actividad de C10orf54. Por ejemplo, en algunos aspectos, el trastorno proliferativo celular se asocia con aumento de la expresión de C10orf54 en la superficie de una célula cancerosa. Los ejemplos de trastornos proliferativos celulares que se deben tratar, prevenir, o cuyos síntomas pueden ser aliviados por los anticuerpos proporcionados en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, vejiga, mama, colon, tejido conectivo, recto, gástrico, esófago, pulmón, laringe, riñón, oral, ovario, o los cánceres de próstata o sarcomas, melanomas, gliomas, linfomas o leucemias o metástasis de cualquiera de estos tipos de cáncer. Los trastornos proliferativos celulares ejemplificativos incluyen, pero no se limitan a una leucemia, ya sea aguda o crónica, un fibrosarcoma y un cáncer de vejiga.
Las leucemias son cánceres de los tejidos formadores de sangre caracterizados por una proliferación distorsionada y el desarrollo de leucocitos y sus precursores en la sangre y médula ósea. Las leucemias se clasifican típicamente como crónica (que progresa lentamente) o aguda (que progresa rápidamente). Las leucemias se pueden clasificar adicionalmente sobre la base del tipo de célula sanguínea afectada. Por ejemplo, la leucemia de células linfoides incluye la leucemia linfoide, la leucemia linfocítica o leucemia linfoblástica y la leucemia de células mieloides incluye la leucemia mielógena, leucemia mieloblástica, leucemia mieloide y leucemia granulocítica. Cuatro de los principales tipos de leucemias que se pueden tratar, prevenir o aliviar sus síntomas por los métodos proporcionados en la presente memoria incluyen la leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia linfocítica crónica (LLC), leucemia mielógena aguda (AML) y la leucemia mieloblástica crónica (CML).
En un aspecto, se proporcionan en la presente memoria unos métodos para prevenir o tratar una enfermedad que se describen en la presente memoria mediante la administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva, respectivamente, de un anticuerpo anti-C10orf54 descrito en la presente memoria, o una composición del mismo. En algunos aspectos, un método para el tratamiento de la enfermedad comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C10orf54 y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable o un excipiente. Un método proporcionado en la presente memoria puede incluir también opcionalmente por lo menos un agente terapéutico adicional, tales como los previstos en la presente memoria, ya sea como un tratamiento independiente o conjugado o fusionado de manera recombinante a un anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria.
En un aspecto, un anticuerpo anti-C10orf54 proporcionado en la presente memoria puede utilizarse para dirigirse a C10orf54 expresada por las células cancerosas poniendo en contacto el anticuerpo con C10orf54 para formar un complejo antígeno-anticuerpo de manera que un agente conjugado o fusionado de manera recombinante descrito en la presente memoria accede al interior de la célula. En un aspecto, el anticuerpo unido es internalizado en la célula de cáncer que expresa C10orf54.
En ciertos aspectos, se proporcionan en la presente memoria unas composiciones que comprenden uno o más anticuerpos proporcionados en la presente memoria para la utilización en la prevención, el tratamiento y/o alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54, tal como GVHD, o un síntoma de la misma. La GVHD ocurre generalmente después de trasplantes de médula ósea no emparentados emparejados o alogénicos (BMT).
En algunos aspectos, la GVHD es GVHD aguda. Los síntomas de la GVHD aguda pueden ocurrir rápidamente y pueden ser leves o graves. En ciertos casos, la GVHD aguda se desarrolla dentro de unos tres meses después del trasplante, como cuando los recuentos sanguíneos se recuperan después del trasplante. En ciertos casos, la GVHD aguda afecta a la piel, el tracto gastrointestinal (GI) y el hígado. Por ejemplo, en algunos pacientes, GVHD comienza con una erupción aguda de la piel por ejemplo, en las palmas de las manos del paciente, plantas del pie o los hombros. Sin embargo, la erupción puede convertirse en generalizada, puede ser pruriginosa y dolorosa y/o podría ampollarse y pelarse. La GVHD aguda en hígado puede afectar las funciones normales del hígado, tales como las enzimas del hígado y a su vez, causar ictericia. La GVHD aguda en hígado también puede hacer que el abdomen del paciente resulte hinchado y doloroso si el hígado se convierte en agrandado. Finalmente, los síntomas de GVHD intestinal aguda (o GVHD del sistema digestivo) pueden incluir diarrea, moco o sangre en las heces, dolor abdominal o calambres, indigestión, náusea y pérdida del apetito. Otros síntomas generales de GVHD aguda pueden incluir anemia, fiebre de bajo grado y/o ser más propenso a las infecciones. Cualquier combinación de estos síntomas de la EICH aguda se puede prevenir, tratar, o aliviar usando las composiciones y métodos proporcionados en la presente memoria.
En otros aspectos, la GVHD es GVHD crónica. La GVHD crónica puede ocurrir unos tres meses a un año o más después del trasplante. La GVHD crónica puede ser leve o severa y generalmente incluye síntomas similares a los de GVHD aguda. La GVHD crónica puede afectar a la piel y el sistema digestivo, incluyendo el hígado pero también puede implicar otros órganos y el sistema inmunitario (por ejemplo, haciendo al paciente más propenso a las infecciones) y/o los tejidos conectivos. Los síntomas de la GVHD crónica de la piel incluyen erupción, piel seca, piel apretada, piel con comezón, oscurecimiento del color de la piel, engrosamiento de la piel, o pueden afectar al cabello (por ejemplo, pérdida de cabello, deviene gris) o uñas (por ejemplo, uñas duras o quebradizas). La GVHD crónica intestinal puede afectar al sistema digestivo, boca, esófago, revestimiento del estómago y/o revestimiento del intestino, y los síntomas pueden incluir diarrea, boca seca o dolorida, dolor al tragar, baja absorción de nutrientes por el estómago, hinchazón, calambres gástricos. La GVHD crónica hepática puede causar daño y cicatrización del hígado (cirrosis). La GVHD crónica de los ojos puede afectar a las glándulas que producen lágrimas, haciendo que los ojos resulten secos, ardor y dolor o dificultad para tolerar la luz brillante. La GVHD crónica pulmonar puede causar dificultad respiratoria, sibilancias, tos persistente y/o ser más propensos a las infecciones de pecho. La GVHD crónica afecta a los tendones (por ejemplo, inflamación) que conectan el músculo al hueso causando dificultad para enderezar o doblar los brazos y las piernas. Cualquier combinación de estos síntomas de la GVHD aguda se puede prevenir, tratar, y/o aliviar usando las composiciones y métodos proporcionados en la presente memoria.
En ciertos aspectos, puede utilizarse un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria en, por ejemplo, métodos terapéuticos in vitro, ex vivo y in vivo. En algunos aspectos, se proporcionan en la presente memoria los métodos para la inhibición del crecimiento o la proliferación celular, ya sea in vivo o in vitro, comprendiendo el método poner en contacto una célula con una cantidad eficaz de una composición o un anticuerpo anti-C10orf54 que se proporciona en la presente memoria. En algunos aspectos, un anticuerpo contenido puede utilizarse en un método para inducir la muerte celular. El método puede implicar poner en contacto una célula con una cantidad eficaz de una composición o un anticuerpo anti-C10orf54 que se proporcionan en la presente memoria. Los métodos se pueden realizar en condiciones permisivas para la unión del anticuerpo a un polipéptido, fragmento del polipéptido o epítopo de C10orf54, tales como, pero no limitados a cuando el polipéptido de C10orf54 se expresa en la superficie de una célula. Para inhibir el crecimiento de la célula o la proliferación de una célula, la inhibición puede incluir disminución de crecimiento o proliferación por por lo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 100% de las células y puede incluir la muerte celular. En algunos aspectos, la célula es una célula cancerosa o una célula precancerosa. En algunos aspectos, la célula es una célula de cáncer de vejiga, mama, colon, tejido conectivo, recto, gástrico, esófago, pulmón, laringe, riñón, oral, ovario o próstata o una célula de sarcoma, melanoma, glioma, linfoma o leucemia. En ciertos aspectos, la célula es una célula inmunitaria que expresa un polipéptido de C10orf54, tal como, pero no limitado a, una célula T reguladora (es decir, una célula T supresora).
Un anticuerpo anti-C10orf54 puede administrarse a un ser humano con fines terapéuticos o profilácticos. Por otra parte, un anticuerpo anti-C10orf54 puede ser administrado a un mamífero no humano que expresa C10orf54 con el cual el anticuerpo reacciona de manera cruzada (por ejemplo, un primate, cerdo, rata o ratón) para los propósitos veterinarios o como un modelo animal de enfermedad humana. Con respecto a esto último, tales modelos animales pueden ser útiles para evaluar la eficacia terapéutica o profiláctica de anticuerpos o inmunoconjugados (por ejemplo, pruebas de dosis y cursos temporales de administración).
En ciertos aspectos, un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria puede utilizarse en un método de modulación de la respuesta inmunitaria en un sujeto. Tales métodos pueden incluir administrar una cantidad eficaz de la composición que comprende un anticuerpo proporcionado a un sujeto. En algunos aspectos, la modulación puede incluir (a) aumentar la activación de la célula T; (b) aumentar la proliferación de células T; o (c) aumentar la producción de citocinas. Los métodos para el análisis de la modulación de la respuesta inmunitaria son bien conocidos por el experto la materia, y se entiende que un experto en la materia podría fácilmente llevar a cabo tales ensayos.
En un aspecto específico, una composición para su uso en la gestión, prevención, tratamiento y/o alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54 comprende un anticuerpo como se describe en la presente memoria. En otro aspecto específico, una composición para su uso en la gestión, prevención, tratamiento y/o alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54 comprende un fragmento de unión a antígeno, una proteína de fusión o un fragmento funcional de un anticuerpo como se describe en la presente memoria.
En otro aspecto, una composición para su uso en la gestión, prevención, el tratamiento y/o alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54 comprende uno o más anticuerpos descritos en la presente memoria.
Como se explica con mayor detalle en otras partes en la presente memoria, una composición que se prorporciona en la presente memoria puede utilizarse sola o en combinación con otros compuestos o composiciones. Por otra parte, los anticuerpos pueden ser además fusionados por vía recombinante a un polipéptido heterólogo en el extremo N o C o conjugados químicamente (incluyendo las conjugaciones de manera covalente y no covalente) a polipéptidos u otras composiciones. Por ejemplo, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden ser fusionados por vía recombinante o conjugados a moléculas útiles como etiquetas en los ensayos de detección y moléculas efectoras tales como polipéptidos heterólogos, fármacos, radionucleótidos o toxinas. Ver, por ejemplo, las publicaciones PCT WO 92/08495; WO 91/14438; WO 89/12624; la patente US n° 5.314.995; y EP 396.387.
Los anticuerpos que se proporcionan en la presente memoria pueden utilizarse, por ejemplo, para purificar, detectar y dirigirse a antígenos C10orf54, en métodos de diagnóstico y terapéuticos in vitro e in vivo . Por ejemplo, los anticuerpos modificados presentan una utilización en inmunoensayos para medir cualitativa y cuantitativamente los niveles de C10orf54 en muestras biológicas. Ver, por ejemplo, Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988).
También se proporcionan en la presente memoria unos métodos de gestionar, tratar, prevenir y/o mejorar uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54 mediante la administración a un sujeto de una cantidad eficaz de un anticuerpo, o composición farmacéutica que comprende un anticuerpo proporcionado en la presente memoria. En un aspecto, un anticuerpo es sustancialmente purificado (por ejemplo, sustancialmente libre de sustancias que limitan su efecto o producen efectos secundarios no deseados). En ciertos aspectos, el anticuerpo es un anticuerpo modificado. El sujeto administrado con una terapia puede ser un mamífero tal como no primate (por ejemplo, vacas, cerdos, caballos, gatos, perros, ratas etc.) o un primate (por ejemplo, un mono, como mono cynomolgous, o un humano). En un aspecto específico, el paciente es un humano. En otro aspecto, el paciente es un humano con una enfermedad mediada por C10orf54.
Se conocen varios sistemas de suministro y se pueden utilizar para administrar a un agente profiláctico o terapéutico (por ejemplo, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria), incluyendo, sin limitarse a, la encapsulación en liposomas, micropartículas, microcápsulas, células recombinantes capaces de expresar el anticuerpo, endocitosis mediada por receptor (ver, por ejemplo, Wu y Wu, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)), la construcción de un ácido nucleico como parte de un retrovirus u otro vector, etc. Los métodos de administración de un agente profiláctico o terapéutico (por ejemplo, un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria), o composición farmacéutica incluyen, pero no se limitan a, la administración parenteral (por ejemplo, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa y subcutánea), epidural y de la mucosa (por ejemplo, vías intranasal y oral). En un aspecto específico, un agente profiláctico o terapéutico (por ejemplo, un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria) o una composición farmacéutica es administrado(a) por vía intranasal, intramuscular, intravenosa o subcutánea. Los agentes profilácticos o terapéuticos, o composiciones se pueden administrar por cualquier vía conveniente, por ejemplo por la inyección de infusión o bolo, por absorción a través de revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo, la mucosa oral, mucosa intranasal, mucosa rectal e intestinal a, etc.) y pueden administrarse junto con otros agentes biológicamente activos. La administración puede ser sistémica o local. Además, también se puede emplear la administración pulmonar, por ejemplo, por medio de un inhalador o nebulizador y la formulación con un agente de nebulización. Ver, por ejemplo, las patentes US n° 6.019.968, 5.985.320, 5.985.309, 5.934.272, 5.874.064, 5.855.913, 5.290.540, y las publicaciones PCT n°WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346, y WO 99/66903.
En un aspecto específico, puede ser deseable administrar un tratamiento profiláctico o agente terapéutico o una composición farmacéutica que se proporcionan en la presente memoria localmente en la zona que necesita tratamiento. Esto puede lograrse, por ejemplo, y no como una limitación, por infusión local, administración tópica (porejemplo, por el aerosol intranasal), por inyección o por medio de un implante, siendo el implante de un material poroso, no poroso o gelatinoso, que incluye membranas tales como membranas sialásticas, o fibras. En ciertos aspectos, al administrar un anticuerpo proporcionado en la presente memoria, se debe tener cuidado de utilizar materiales a los que el anticuerpo no absorbe.
En otro aspecto, un agente terapéutico o composición que se proporciona en la presente memoria se puede suministrar en una vesícula, en particular un liposoma (ver Langer, 1990, ciencia 249:1527-1533; Tratar et al., en Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein y Fidler (eds.), Liss, New York, págs.
353-365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327; Ver generalmente ibíd.).
En otro aspecto, un agente terapéutico o composición que se proporciona en la presente memoria se puede suministrar en un sistema de liberación sostenida o de liberación controlada. En un aspecto, una bomba se puede utilizar para lograr liberación controlada o sostenida (ver Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng.
14:20; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574). En otro aspecto, los materiales poliméricos pueden utilizarse para lograr la liberación controlada o sostenida de un agente terapéutico (por ejemplo, un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria) o una composición que se proporciona en la presente memoria (ver por ejemplo, Medical Applications of Controlled Release, Langer y Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability Drug Product Design and Performance, Smolen y Ball (eds.), Wiley, New York(1984); Ranger y Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61; ver asimismo Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105); patente US n° 5.679.377; patente US n° 5.916.597; patente US n° 5.912.015; patente US n° 5.989.463; patente US n° 5.128.326; publicación PCT n° WO 99/15154; y publicación PCT n° WO 99/20253. Los ejemplos de polímeros utilizados en formulaciones de liberación sostenida incluyen, pero no se limitan a, poli(metacrilato de 2 -hidroxi etil), poli(metacrilato de metilo), poli(ácido acrílico), poli(etileno-co-vinil acetato), poli(ácido metacrílico), poliglicólidos (PLG), polianhídridos, poli(N-vinil pirrolidona), poli(alcohol vinílico), poliacrilamida, poli(glicol de etileno), polilactidas (PLA), poli(lactido-co-glicólidos) (PLGA) y poliortoésteres. En un aspecto específico, el polímero utilizado en una formulación de liberación sostenida es inerte, libre de impurezas lixiviables, estable en almacenamiento, estéril y biodegradable. En otro aspecto, un sistema de liberación controlada o sostenida puede colocarse en la proximidad del objetivo terapéutico, por ejemplo, las fosas nasales o los pulmones, por lo que requiere sólo una fracción de la dosis sistémica (ver, por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Release supra, vol. 2, págs. 115-138 (1984)). Los sistemas de liberación controlada se discuten en la revisión por Langer (1990, ciencia 249:1527-1533). Puede utilizarse cualquier técnica conocida por un experto en la materia para producir formulaciones de liberación sostenida que comprenden uno o más anticuerpos en la presente memoria. Ver, por ejemplo, patente US n° 4.526.938, publicación PCT WO 91/05548, publicación PCT W o 96/20698, Ning et al., 1996, “Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel,” Radiotherapy & Oncology 39:179- 189, Song et al., 1995, “Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions,” PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397, Cleek et al., 1997, “Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application,” Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854, y Lam et al., 1997, “Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery,” Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater.
24:759-760.
En un aspecto específico, cuando la composición que se proporciona en la presente memoria es un ácido nucleico que codifica un agente profiláctico o terapéutico (por ejemplo, un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria), el ácido nucleico puede ser administrado in vivo para promover la expresión de su agente terapéutico codificado, mediante la construcción como parte de un vector de la expresión de ácido nucleico apropiado y su administración por lo que se convierte en intracelular, por ejemplo, mediante la utilización de un vector retroviral (ver la patente US n° 4.980.286), o por inyección directa o por medio de bombardeo de micropartículas (por ejemplo, una pistola de genes; Biolística, Dupont), o la capa de lípidos, receptores de superficie celular o agentes de transferencia, o mediante su administración en enlace a un péptido de tipo homeobox que se conoce para entrar en el núcleo (ver, por ejemplo, Joliot et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868), etc. Alternativamente, un ácido nucleico puede ser introducido intracelularmente e incorporado dentro del ADN de la célula hospedadora para la expresión por recombinación homóloga.
En un aspecto específico, una composición comprende uno, dos o más anticuerpos. En otro aspecto, una composición comprende uno, dos o más anticuerpos proporcionados en la presente memoria y un agente profiláctico o terapéutico que no es un anticuerpo proporcionado en la presente memoria. En ciertos aspectos, los agentes son conocidos por ser útiles para o han sido o son actualmente utilizados para la prevención, el tratamiento y/o el alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54. Además de los agentes profilácticos o terapéuticos, las composiciones que se proporcionan en la presente memoria pueden asimismo comprender un portador.
Las composiciones que se proporcionan en la presente memoria incluyen composiciones de fármacos a granel útiles en la fabricación de composiciones farmacéuticas (por ejemplo, las composiciones que son convenientes para la administración a un sujeto o paciente) que pueden ser utilizadas en la preparación de formas de dosificación unitarias. En un aspecto específico, una composición proporcionada en la presente memoria es una composición farmacéutica. Estas composiciones comprenden una cantidad eficaz como profilaxis o terapéutica de uno o más agentes profilácticos o terapéuticos (por ejemplo, un anticuerpo en la presente memoria u otro agente profiláctico 0 terapéutico) y un portador farmacéuticamente aceptable. En algunos aspectos, las composiciones farmacéuticas están formuladas para ser convenientes para la vía de administración a un sujeto.
En un aspecto específico, la composición está formulada de acuerdo con procedimientos de rutina como una composición farmacéutica adaptada para administración intravenosa a seres humanos. Típicamente, las composiciones para la administración intravenosa son soluciones en amortiguador acuoso isotónico estéril. Cuando resulte necesario, la composición puede incluir también un agente solubilizante y un anestésico local como lignocamne para aliviar el dolor en el sitio de la inyección. Sin embargo, tales composiciones, pueden administrarse por una vía diferente a vía intravenosa.
En general, los ingredientes de las composiciones que se proporcionan en la presente memoria son suministrados por separado o mezclados en forma de dosis unitaria, por ejemplo, como un polvo seco liofilizado o concentrado libre de agua en un recipiente herméticamente cerrado como una ampolla o sobrecito indicando la cantidad de agente activo. Cuando la composición es para ser administrada por infusión, puede ser distribuida con una botella de infusión que contiene agua de calidad farmacéutica estéril o solución salina. Cuando la composición se administra por inyección, una ampolla de agua estéril para inyección o solución salina puede ser proporcionada para que los ingredientes se pueden mezclar antes de la administración.
En ciertos aspectos, un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria está envasado en un recipiente herméticamente cerrado como una ampolla o sobrecito indicando la cantidad de anticuerpos. En un aspecto, el anticuerpo se suministra como un seco esterilizado liofilizado en polvo o agua libre del concentrado en un recipiente herméticamente cerrado y puede ser reconstituido, por ejemplo, con agua o solución salina a la concentración adecuada para la administración a un sujeto. En ciertos aspectos, el anticuerpo se suministra como un polvo liofilizado estéril en un envase herméticamente cerrado en una dosificación unitaria de por lo menos 0.1 mg, por lo menos 0,5 mg, por lo menos 1 mg, por lo menos 2 mg o por lo menos 3 mg, como menos de 5 mg, por lo menos 10 mg, por lo menos 15 mg, por lo menos 25 mg, por lo menos 30 mg, menos de 35 mg, por lo menos 45 mg, por lo menos 50 mg, por lo menos 60 mg, por lo menos 75 mg, por lo menos 80 mg, por lo menos 85 mg, por lo menos 90 mg, menos de 95 mg o por lo menos 100 mg. El anticuerpo liofilizado puede almacenarse entre 2 y 8 ° C en su envase original y el anticuerpo puede ser administrado dentro de un período de 12 horas, como en 6 horas, dentro de 5 horas, 3 horas, o dentro de 1 hora después de ser reconstituido. En un aspecto alternativo, un anticuerpo se suministra en forma líquida en un recipiente herméticamente cerrado indicando la cantidad y la concentración del anticuerpo. En algunos aspectos, la forma líquida del anticuerpo se suministra en un envase herméticamente sellado por lo menos 0,1 mg/ml, por lo menos 0.5 mg/ml o menos de 1 mg/ml, como mínimo 5 mg/ml, por lo menos 10 mg/ml, por lo menos 15 mg/ml, por lo menos 25 mg/ml, por lo menos 30 mg/ml, por lo menos 40 mg/ml, por lo menos 50 mg/ml, por lo menos 60 mg/ml, por lo menos 70 mg/ml, por lo menos 80 mg/ml, por lo menos 90 mg/ml o por lo menos 100 mg/ml.
Las composiciones que se proporcionan en la presente memoria pueden ser formuladas como formas neutras o de sal. Las sales farmacéuticamente aceptables son las que se formaron con los aniones tales como aquellas derivadas de ácidos clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etc., y se formaron con cationes tales como los derivados de sodio, potasio, amonio, calcio, hidróxidos férricos, isopropilamina, trietilamina, 2 -etilamino etanol, histidina, procaína, etc.
La cantidad de un agente terapéutico (por ejemplo, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria) o una composición que se proporciona en la presente memoria que será eficaz en la prevención, el tratamiento y/o el alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54 puede determinarse por técnicas clínicas estándares.
Por lo tanto, una dosis de un anticuerpo o una composición que resulta en un título del suero de aproximadamente 0,1 |jg/ml a aproximadamente 450 jig/ml y en algunos aspectos de por lo menos 0.1 |jg/ml, por lo menos 0,2 |jg/ml, por lo menos 0.4 jig/ml, por lo menos 0.5 jig/ml, por lo menos 0.6 jig/ml, menos 0 ,8 jig/ml, por lo menos 1 jig/ml, por lo menos 1.5 jig/ml, como por lo menos 2 jig/ml, por lo menos 5 jig/ml, por lo menos 10 jig/ml, menos de 15 jig/ml, por lo menos 20 jig/ml, por lo menos 25 jig/ml, por lo menos 30 jig/ml, por lo menos 35 jig/ml, por lo menos 40 jig/ml, por lo menos 50 jig/ml, por lo menos 75 jig/ml, por lo menos 100 jig/ml, por lo menos 125 jig/ml, por lo menos 150 jig/ml, por lo menos 200 jig/ml, por lo menos 250 jig/ml, por lo menos 300 jig/ml, por lo menos 350 jig/ml, por lo menos 400 jig/ml o por lo menos 450 jig/ml puede administrarse a un ser humano para la prevención, el tratamiento y/o el alivio de uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54. Además, opcionalmente pueden emplearse in vitro ensayos para ayudar a identificar los intervalos de dosis óptima. La dosis exacta que debe utilizarse en la formulación dependerá también de la vía de administración y la gravedad de una enfermedad mediada por C10orf54 y debe ser decidida según el juicio del profesional y las circunstancias de cada paciente.
Las dosis eficaces pueden ser extrapoladas de curvas dosis-respuesta derivadas de sistemas de prueba de modelo in vitro o animal.
Para los anticuerpos proporcionados en la presente memoria, la dosis que se administra a un paciente puede ser, en ciertos aspectos, 0.1 mg/kg a 100 mg/kg en peso del paciente. En algunos aspectos, la dosis administrada al paciente es de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 75 mg/kg de peso del paciente. En algunos aspectos, la dosis administrada a un paciente es de entre 1 mg/kg y 20 mg/kg de peso corporal del paciente, tales como 1 mg/kg a 5 mg/kg de peso del paciente. Generalmente, los anticuerpos humanos presentan una vida media más larga dentro del cuerpo humano que los anticuerpos de otras especies debido a la respuesta inmunitaria a los polipéptidos extraños. Por lo tanto, disminuir las dosis de anticuerpos humanos y administración menos frecuente a menudo es posible. Además, la dosis y la frecuencia de la administración de los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden reducirse mejorando la penetración de tejido y la absorción de los anticuerpos por modificaciones como, por ejemplo, lipidación.
En un aspecto, aproximadamente 100 mg/kg o menos, aproximadamente 75 mg/kg o menos, aproximadamente 50 mg/kg o menos, aproximadamente 25 mg/kg o menos, aproximadamente 10 mg/kg o menos, aproximadamente 5 mg/kg o menos, aproximadamente 1 mg/kg o menos, aproximadamente 0.5 mg/kg o menos, o aproximadamente 0.1 mg/kg o menos de un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria se administra 5 veces, 4 veces, 3 veces, 2 veces o 1 vez para prevenir, tratar o aliviar uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54. En algunos aspectos, se administra un anticuerpo proporcionado en la presente memoria aproximadamente 1 -12 veces, en el cual las dosis pueden administrarse como sea necesario, por ejemplo, semanal, quincenal, mensual, bimestral, evolución, etc., según lo determinado por un médico. En algunos aspectos, una dosis más baja (por ejemplo, 1-15 mg/kg) puede ser administrada con más frecuencia (por ejemplo, 3 - 6 veces). En algunos aspectos, una dosis más elevada (por ejemplo, 25-100 mg/kg) puede ser administrada con más frecuencia (por ejemplo, 1 - 3 veces). Sin embargo, como resulta evidente para un experto en la materia, otras cantidades y horarios de dosificación son fácilmente determinables y dentro del alcance de la divulgación.
En un aspecto específico, aproximadamente 100 mg/kg o menos, aproximadamente 75 mg/kg o menos, aproximadamente 50 mg/kg o menos, aproximadamente 25 mg/kg o menos, aproximadamente 10 mg/kg o menos, aproximadamente 5 mg/kg o menos, aproximadamente 1 mg/kg o menos, aproximadamente 0.5 mg/kg o menos, o aproximadamente 0.1 mg/kg o menos de un anticuerpo proporcionado en la presente memoria en una formulación de liberación sostenida se administra a un sujeto, tal como un humano, para prevenir, tratar o aliviar uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54. En otro aspecto específico, aproximadamente 100 mg/kg, aproximadamente 75 mg/kg o menos, aproximadamente 50 mg/kg o menos, aproximadamente 25 mg/kg o menos, aproximadamente 10 mg/kg o menos, aproximadamente 5 mg/kg o menos, aproximadamente 1 mg/kg o menos, aproximadamente 0.5 mg/kg o menos, o aproximadamente 0.1 mg/kg o menos bolo de un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria no en una formulación de liberación sostenida se administra a un sujeto, como un ser humano, para prevenir, tratar o aliviar uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54 y después de cierto período de tiempo, aproximadamente 100 mg/kg, aproximadamente 75 mg/kg o menos, aproximadamente 50 mg/kg o menos, aproximadamente 25 mg/kg o menos, aproximadamente 10 mg/kg o menos, aproximadamente 5 mg/kg o menos, aproximadamente 1 mg/kg o menos, aproximadamente 0.5 mg/kg o menos, o aproximadamente 5 mg/kg o menos de un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria en una liberación sostenida se administra al sujeto (por ejemplo, intranasal o intramuscular) uno, dos, tres o cuatro veces. De acuerdo con este aspecto, un cierto período de tiempo puede ser de 1 a 5 días, una semana, dos semanas o un mes.
En algunos aspectos, una dosis única de un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria es administrado a un paciente para evitar, tratar o aliviar uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54 dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce veces, trece, catorce, quince, dieciséis, diecisiete, dieciocho, diecinueve, veinte, veintiuna, veintidós, veintitrés, veinticuatro, veinticinco o veintiséis a dos veces por semana (por ejemplo cerca de 14 días) intervalos a lo largo de un año, en donde la dosis se selecciona de entre el grupo que consiste en aproximadamente 0,1 mg/kg, 0.5 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, 5 mg/kg, aproximadamente 10 mg/kg, aproximadamente 15 mg/kg, aproximadamente 20 mg/kg, aproximadamente 25 mg/kg, aproximadamente 30 mg/kg, aproximadamente 35 mg/kg, aproximadamente 40 mg/kg, aproximadamente 45 mg/kg, aproximadamente 50 mg/kg, aproximadamente 55 mg/kg, aproximadamente 60 mg/kg, aproximadamente 65 mg/kg, aproximadamente 70 mg/kg, aproximadamente 75 mg/kg, aproximadamente 80 mg/kg, aproximadamente 85 mg/kg, aproximadamente 90 mg/kg, aproximadamente 95 mg/kg, aproximadamente 100 mg/kg, o una combinación de los mismos (por ejemplo, cada dosis mensual pueden o no ser idéntica).
En otro aspecto, una dosis única de un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria es administrado a un paciente para evitar, tratar y/o aliviar uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54 dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, o doce veces aproximadamente al mes (por ejemplo aproximadamente 30 días) intervalos a lo largo de un año, en donde la dosis se selecciona de entre el grupo que consiste en aproximadamente 0,1 mg/kg, aproximadamente 0.5 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 5 mg/kg, aproximadamente 10 mg/kg, aproximadamente 15 mg/kg, aproximadamente 20 mg/kg, aproximadamente 25 mg/kg, aproximadamente 30 mg/kg, aproximadamente 35 mg/kg, aproximadamente 40 mg/kg, aproximadamente 45 mg/kg, aproximadamente 50 mg/kg, aproximadamente 55 mg/kg, aproximadamente 60 mg/kg, aproximadamente 65 mg/kg, aproximadamente 70 mg/kg, aproximadamente 75 mg/kg, aproximadamente 80 mg/kg, aproximadamente 85 mg/kg, aproximadamente 90 mg/kg, aproximadamente 95 mg/kg, aproximadamente 100 mg/kg, o una combinación de los mismos (por ejemplo, cada dosis mensual puede o no ser idéntica).
En un aspecto, una dosis única de un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria es administrado a un paciente para evitar, tratar y/o aliviar uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54 dos, tres, cuatro, cinco o seis aproximadamente cada dos meses (por ejemplo aroximadamente 60 días) intervalos a lo largo de un año, en donde la dosis se selecciona de entre el grupo que consiste en aproximadamente 0 ,1 mg/kg, aproximadamente 0.5 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 5 mg/kg, aproximadamente 10 mg/kg, aproximadamente 15 mg/kg, aproximadamente 20 mg/kg, aproximadamente 25 mg/kg, aproximadamente 30 mg/kg, aproximadamente 35 mg/kg, aproximadamente 40 mg/kg, aproximadamente 45 mg/kg, aproximadamente 50 mg/kg, aproximadamente 55 mg/kg, aproximadamente 60 mg/kg, aproximadamente 65 mg/kg, aproximadamente 70 mg/kg, aproximadamente 75 mg/kg, aproximadamente 80 mg/kg, aproximadamente 85 mg/kg, aproximadamente 90 mg/kg, aproximadamente 95 mg/kg, aproximadamente 100 mg/kg, o una combinación de los mismos (por ejemplo, cada dosis mensual puede o no ser idéntica).
En algunos aspectos, una dosis única de un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria es administrado a un paciente para evitar, tratar y/o aliviar uno o más síntomas de una enfermedad mediada por C10orf54 dos, tres o cuatro veces aproximadamente cada 3 meses (por ejemplo aproximadamente 120 días) intervalos a lo largo de un año, en donde la dosis se selecciona de entre el grupo que consiste en aproximadamente 0 ,1 mg/kg, aproximadamente 0.5 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 5 mg/kg, aproximadamente 10 mg/kg, aproximadamente 15 mg/kg, aproximadamente 20 mg/kg, aproximadamente 25 mg/kg, aproximadamente 30 mg/kg, aproximadamente 35 mg/kg, aproximadamente 40 mg/kg, aproximadamente 45 mg/kg, aproximadamente 50 mg/kg, aproximadamente 55 mg/kg, aproximadamente 60 mg/kg, aproximadamente 65 mg/kg, aproximadamente 70 mg/kg, aproximadamente 75 mg/kg, aproximadamente 80 mg/kg, aproximadamente 85 mg/kg, aproximadamente 90 mg/kg, 95 mg/kg, aproximadamente 100 mg/kg, o una combinación de los mismos (por ejemplo, cada dosis mensual puede o no ser idéntica).
En ciertos aspectos, la vía de administración de una dosis de un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria a un paciente es intranasal, intramuscular, intravenosa, o una combinación de las mismas, pero otras rutas descritas en la presente memoria también son aceptables. Cada dosis puede o no ser administrada a través de una idéntica vía de administración. En algunos aspectos, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria puede ser administrado a través de múltiples vías de administración simultánea o posteriormente a otras dosis de la misma o un anticuerpo diferente que se proporciona en la presente memoria.
En ciertos aspectos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria se administran de manera profiláctica o terapéutica a un sujeto. Los anticuerpos pueden ser administrados profiláctica o terapéuticamente a un sujeto con el fin de prevenir, disminuir y/o aliviar una enfermedad mediada por C10orf54 o síntoma de la misma.
Uso diagnóstico de los anticuerpos
Los anticuerpos marcados proporcionados en la presente memoria y derivados y análogos de los mismos, que se unen a un antígeno C10orf54 se pueden utilizar con fines de diagnóstico para detectar, diagnosticar o monitorizar una enfermedad mediada por C10orf54. También se proporcionan métodos para la detección de una enfermedad mediada por C10orf54 que comprenden: (a) realizar pruebas de ensayo de la expresión de un antígeno C10orf54 en células o una muestra de tejido de un sujeto con uno o más anticuerpos que se proporcionan en la presente memoria que se unen al antígeno C10orf54; y (b) comparar el nivel del antígeno C10orf54 con un nivel, por ejemplo, niveles de control en muestras de tejido normal (por ejemplo, un paciente que no presenta una enfermedad mediada por C10orf54, o del mismo paciente antes del inicio de la enfermedad), por el que un aumento en el nivel ensayado de antígeno C10orf54 en comparación con el nivel de control del antígeno C10orf54 es indicativo de una enfermedad mediada por C10orf54.
También se proporcionan en la presente memoria un ensayo de diagnóstico para el diagnóstico de una enfermedad mediada por C10orf54 que comprende: (a) realizar pruebas de ensayo de la expresión de un antígeno C10orf54 en células o una muestra de tejido de un sujeto con uno o más anticuerpos que se proporcionan en la presente meoria que se unen al antígeno C10orf54; y (b) comparar el nivel del antígeno C10orf54 con un nivel, por ejemplo, niveles de control en muestras de tejido normal (por ejemplo, un paciente que no presenta una enfermedad mediada por C10orf54, o del mismo paciente antes del inicio de la enfermedad), por el que un aumento en el nivel ensayado de antígeno C10orf54 en comparación con el nivel de control del antígeno C10orf54 es indicativo de una enfermedad mediada por C10orf54. Un diagnóstico más definitivo de una enfermedad mediada por C10orf54 puede permitir a los profesionales de la salud emplear las medidas preventivas o tratamientos agresivos anteriores impidiendo el desarrollo o la mayor progresión de la enfermedad mediada por C10orf54.
Los anticuerpos que se proporcionan en la presente memoria pueden utilizarse para análisis de los niveles del antígeno C10orf54 en una muestra biológica utilizando métodos inmunohistológicos clásicos tal como se describe en la presente memoria o como conocen los expertos en la materia (por ejemplo, ver Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol. 101:976-985; y Jalkanen et al., 1987, J. Cell. Biol. 105:3087-3096). Otros métodos basados en anticuerpos útiles para detectar la expresión de gen de la proteína son inmunoensayos, tales como el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y radioinmunoensayo (RIA). Las etiquetas de ensayo de anticuerpos adecuadas son conocidas en la materia e incluyen etiquetas de enzima, por ejemplo, glucosa oxidasa; radioisótopos como yodo (125I, 121I), carbono (14C), azufre (35S), tritio (3H), indio (121In) y tecnecio (99Tc); etiquetas luminiscentes, como luminol; y etiquetas fluorescentes, como la fluoresceína y la rodamina y biotina.
Un aspecto proporcionado en la presente memoria es la detección y el diagnóstico de una enfermedad mediada por C10orf54 en un ser humano. En un aspecto, el diagnóstico comprende: a) administración (por ejemplo, por vía parenteral, por vía subcutánea o intraperitoneal) a un sujeto de una cantidad eficaz de un anticuerpo marcado que se une a un antígeno C10orf54; b) esperar un intervalo de tiempo después de la administración para permitir que el anticuerpo marcado se concentre preferentemente en sitios en el sujeto donde se expresa el antígeno C10orf54 (y para que la molécula marcada no ligada se aclare a nivel de fondo); c) determinar el nivel de fondo; y d) detectar el anticuerpo marcado en el sujeto, de manera que la detección de anticuerpo marcado sobre el nivel del fondo indica que el sujeto presenta una enfermedad mediada por C10orf54. El nivel de fondo se puede determinar por varios métodos incluyendo, comparar la cantidad de molécula marcada detectada con un valor previamente determinado para un sistema en particular.
Se entenderá en la materia que el tamaño del sujeto y el sistema de formación de imágenes determina la cantidad de porción de imágenes necesaria para producir imágenes de diagnóstico. En el caso de una fracción del radioisótopo, para un sujeto humano, la cantidad de radioactividad que se inyecta normalmente está comprendida entre aproximadamente 5 y 20 milicurios de 99Tc. El anticuerpo marcado preferencial entonces se acumulará en la localización de las células que contienen la proteína específica. La formación de imagen in vivo de tumores se describe en S.W. Burchiel et al., “ Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies y Their Fragments.” (Capítulo 13 en Tumor Imaging: The Radiochemical Detection of Cancer, S.W. Burchiel y B.A. Rhodes, eds., Masson Publishing Inc. (1982).
Dependiendo de varias variables, incluyendo el tipo de etiqueta utilizado y el modo de administración, el intervalo de tiempo después de la administración para permitir que el anticuerpo marcado se concentre preferentemente en sitios en el sujeto y para que el anticuerpo no etiquetado no ligado se aclare a nivel de fondo es de 6 a 48 horas o 6 a 24 horas o 6 a 12 horas. En otro aspecto el intervalo de tiempo después de la administración es 5 a 20 días o 5 a 10 días.
En un aspecto, el seguimiento de una enfermedad mediada por C10orf54 se lleva a cabo repitiendo el método para diagnosticar la enfermedad mediada por C10orf54, por ejemplo, un mes después del diagnóstico inicial, seis meses después del diagnóstico inicial, un año después del diagnóstico inicial, etc.
La presencia de la molécula marcada puede detectarse en el sujeto utilizando métodos conocidos en la materia para el escaneo in vivo. Estos métodos dependen del tipo de etiqueta utilizada. Los expertos serán capaces de determinar el método adecuado para detectar una etiqueta particular. Los métodos y dispositivos que se pueden utilizar en los métodos de diagnóstico que se proporcionan en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, la tomografía computerizada (CT), exploración del cuerpo entero tales como tomografía por emisión de posición (PET), imágenes por resonancia magnética (MRI) y ecografía.
En un aspecto específico, la molécula es marcada con un radioisótopo y se detecta en el paciente con un instrumento quirúrgico sensible a la radiación (Thurston et al., patente US n° 5,441,050). En otro aspecto, la molécula es marcada con un compuesto fluorescente y se detecta en el paciente con un instrumento de exploración sensible a la fluorescencia. En otro aspecto, la molécula es marcada con un metal de emisión de positrones y se detecta en el paciente con una tomografía por emisión de positrones. Incluso en otro aspecto, la molécula es marcada con una etiqueta paramagnética y se detecta en el paciente con imágenes por resonancia magnética (MRI).
Métodos para producir anticuerpos
Los anticuerpos proporcionados en la presente memoria que se unen a un antígeno se pueden producir por cualquier método conocido en la técnica para la síntesis de anticuerpos, en particular, mediante síntesis química o mediante técnicas de expresión recombinantes. La práctica de la divulgación emplea, a menos que se indique lo contrario, las técnicas convencionales en biología molecular, microbiología, análisis genético, ADN recombinante, química orgánica, bioquímica, PCR, síntesis de oligonucleótidos y modificación, hibridación de ácidos nucleicos, y campos relacionados en la habilidad de la técnica. Estas técnicas se describen en las referencias citadas en la presente memoria y se explican en detalle en la literatura. Ver, por ejemplo, Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 y annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 y actualizaciones anuales) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides y Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren et al. (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Los anticuerpos policlonales que se unen a un antígeno se pueden producir por varios procedimientos bien conocidos en la materia. Por ejemplo, un antígeno humano puede ser administrado a varios animales hospedadores incluyendo, sin limitarse a, conejos, ratones, ratas, etc., para inducir la producción de sueros que contengan anticuerpos policlonales específicos para el antígeno humano. Varios adyuvantes pueden utilizarse para aumentar la respuesta inmunológica, dependiendo de la especie de hospedador e incluyen pero no se limitan a, geles minerales de Freund (completos e incompletos), como el hidróxido de aluminio, superficie sustancias activas como lisolecitina, polioles plurónicos, polianiones, péptidos, emulsiones de aceite, hemocianinas de lapa californiana, dinitrofenol y potencialmente útiles adyuvantes humanas como BCG (bacilo Calmette-Guerin) y Corynebacterium parvum. Tales aditivos también son bien conocidos en la materia.
Los anticuerpos monoclonales se pueden preparar con una variedad de técnicas conocidas en la materia, incluyendo la utilización de hibridoma, recombinante y tecnologías de visualización de fagos o una combinación de los mismos. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales pueden ser producidos usando técnicas de hibridoma, los conocidos en la materia y se enseñó, por ejemplo, en Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2a ed. 1988); Hammerling et al., en: Monoclonal Antibodies and T-Cel1Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y, 1981). El término "anticuerpo monoclonal", en la presente memoria, no se limita a anticuerpos producidos mediante la tecnología de hibridomas. Otros métodos ejemplificativos de producción de anticuerpos monoclonales se discuten en otros lugares, como por ejemplo, uso del ratón KM™. En los ejemplos en la presente memoria se proporcionan métodos ejemplificativos adicionales para producir anticuerpos monoclonales.
Los métodos para la producción y cribado de anticuerpos específicos que utilizan la tecnología de hibridomas son rutinarios y conocidos en la materia. Brevemente, los ratones pueden ser inmunizados con un antígeno C10orf54 y una vez que se detecta una respuesta inmunitaria, por ejemplo, anticuerpos específicos para el antígeno C10orf54 se detectan en el suero de ratón, se recoge el bazo de ratón y se aislaron los esplenocitos. Los esplenocitos se fusionan luego por técnicas conocidas a las células de mieloma adecuado, por ejemplo las células de la línea celular SP20 de la ATCC. Los hibridomas son seleccionados y clonados por dilución limitada.
Además, una técnica RIMM (sitios múltiples de inmunización repetitiva) puede utilizarse para inmunizar un animal (Kilptrack et al., 1997 Hybridoma 16:381-9). Los clones de hibridoma entonces se analizan por métodos conocidos en la materia para las células que secretan anticuerpos capaces de unirse a un determinado polipéptido. El líquido ascítico, que generalmente contiene altos niveles de anticuerpos, puede ser generado mediante inmunización de ratones con clones de hibridoma positivo.
Por lo tanto, se proporcionan asimismo en la presente memoria unos métodos de generar anticuerpos por cultivo de una célula de hibriodoma que secreta un anticuerpo modificado que se proporciona en la presente memoria, en algunos aspectos, el hibridoma se genera mediante la fusión de esplenocitos aislados de un ratón inmunizado con un antígeno C10orf54 con células de mieloma y a continuación el cribado de los hibridomas resultantes de la fusión para clones de hibridoma que secretan un anticuerpo capaz de unirse a un antígeno C10orf54.
Los fragmentos de anticuerpos que reconocen antígenos específicos C10orf54 pueden generarse mediante cualquier técnica conocida por un experto en la materia. Por ejemplo, los fragmentos Fab y F(ab')2 se pueden producir por escisión proteolítica de las moléculas de inmunoglobulina, utilizando enzimas como la papaína (para producir fragmentos Fab) y pepsina (para producir fragmentos F(ab')2). Los fragmentos F(ab')2 contienen la región variable, la región constante de cadena ligera y el dominio CH1 de la cadena pesada. Además, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria también se pueden generar usando varios métodos de visualización de fagos conocidos en la materia.
Por ejemplo, los anticuerpos también se pueden generar utilizando diversos métodos de visualización de fagos.
En los métodos de visualización de fagos, los dominios de anticuerpos funcionales se visualizan en la superficie de las partículas de fagos que llevan las secuencias de polinucleótido que las codifican. En particular, las secuencias de ADN que codifican los dominios VH y VL se amplifican a partir de bibliotecas de ADNc de animal (por ejemplo, bibliotecas de ADNc humano o murino de tejidos afectados). El ADN que codifica los dominios VH y Vl es recombinado junto a un ligador de fragmentos mediante PCR y clonado en un vector de fagémido. El vector es electroporado en E. coli y la E. coli es infectada con fago del ayudante. Los fagos utilizados en estos métodos son generalmente fagos filamentosos que incluyen fd y M13 y los dominios VH y VL se fusionan normalmente por vía recombinante ya sea el fago gen III o gen VIII. Los fagos que expresan un dominio de unión a antígeno que se une a un antígeno particular pueden ser seleccionados o identificados con el antígeno, por ejemplo, utilizando antígeno etiquetado o antígeno ligado o capturado a una superficie sólida o perla. Los ejemplos de métodos para visualización de fagos que pueden utilizarse para realizar los anticuerpos proporcionados en la presente memoria incluyen los divulgados en Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50; Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186; Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958; Persic et al., 1997, Gene 187:9-18; Burton et al., 1994, Advances in Immunology 57:191-280; solicitud PCT Núm. PCT/GB91/O1 134; publicación Internacional n° WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/1 1236, WO 95/15982, WO 95/20401, y WO97/13844; y patentes US n° 5.698.426, 5.223.409, 5.403.484, 5.580.717, 5.427.908, 5.750.753, 5.821.047, 5.571.698, 5.427.908, 5.516.637, 5.780.225, 5.658.727, 5.733.743 y 5.969.108.
Como se describe en las referencias anteriores, después de selección de fagos, las regiones de codificación de anticuerpo a partir del fago pueden ser aisladas y utilizadas para generar anticuerpos completos, incluyendo anticuerpos humanos o cualquier otro fragmento de unión a antígeno deseado y expresarse en cualquier hospedador deseado, incluyendo células de mamíferos, células de los insectos, las células vegetales, la levadura, y bacterias, por ejemplo, como se describe a continuación. Las técnicas para producir por vía recombinante fragmentos Fab, Fab' y F(ab')2 pueden también emplearse usando métodos conocidos en la materia como se divulgó en la publicación PCT WO 92/22324; Mullinax et al., 1992, BioTechniques 6:864-869; Sawai et al., 1995, AJRI 34:26-34; y mejor et al., 1988, Science 240:1041-1043.
Para generar anticuerpos completos, pueden utilizarse cebadores de PCR incluyendos las secuencias de nucleótidos VH o VL, un sitio de restricción y una secuencia flanqueante para proteger el sitio de la restricción para amplificar las secuencias VH o VL en clones de scFv. Utilizando técnicas de clonación conocidas por un experto en la materia, los dominios VH amplificados por PCR pueden ser clonados en vectores que expresan una región constante de VH, por ejemplo, la región constante gamma humana 4, y los dominios VL amplificados por PCR pueden ser clonados en vectores que expresan una región constante VL, por ejemplo, regiones constantes lambda o kappa humanas. Los dominios VH y VL pueden también ser clonados en un vector que expresa las regiones constantes necesarias. Los vectores de conversión de cadena pesada y vectores de conversión de cadena ligera son cotransfectados en líneas celulares para generar líneas celulares estables o transitorias que expresan anticuerpos de larga duración, por ejemplo, IgG, utilizando técnicas conocidas por un experto en la materia.
Para algunas utilizaciones, que incluyen la utilización in vivo de anticuerpos en seres humanos y ensayos de detección in vitro, pueden utilizarse anticuerpos quiméricos o humanos. Los anticuerpos totalmente humanos son particularmente deseables para el tratamiento de sujetos humanos. Los anticuerpos humanos se pueden realizar por una variedad de métodos conocidos en la materia de métodos para visualización de fagos descritos utilizando bibliotecas de anticuerpos derivadas de secuencias de inmunoglobulina humana. Ver también las patentes US n° 4.444.887 y 4.716.111; y las publicaciones internacionales n° WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735, y WO 91/10741.
En unos aspectos específicos, se producen anticuerpos humanos. Los anticuerpos humanos y/o anticuerpos totalmente humanos se pueden producir con cualquier método conocido en la materia, incluyendo los ejemplos proporcionados en la presente memoria. Por ejemplo, los ratones transgénicos que son incapaces de expresar inmunoglobulinas endógenas funcionales, pero que pueden expresar genes de inmunoglobulina humana. Por ejemplo, los complejos de genes de inmunoglobulina humana de cadena pesada y ligera pueden ser introducidos al azar o por recombinación homóloga en células madre embrionarias de ratón. Por otra parte, la región variable humana, región constante y región de diversidad pueden introducirse en células madre embrionarias de ratón además de los genes humanos cadena pesada y ligera. Los genes de inmunoglobulina de cadena pesada y ligera de ratón pueden ser proporcionados no funcionales por separado o simultáneamente con la introducción de loci de inmunoglobulina humana por recombinación homóloga. En particular, la eliminación homocigótica de la región Jh previene la producción de anticuerpos endógenos. Las células madre embrionarias modificadas se expandieron y microinyectaron en blastocistos para producir ratones quiméricos. Los ratones quiméricos entonces se crían para producir descendencia homocigótica que expresa anticuerpos humanos. Los ratones transgénicos son inmunizados de manera normal con un antígeno seleccionado, por ejemplo, todo o una porción del polipéptido. Unos anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno pueden obtenerse de los ratones inmunizados, transgénicos, utilizando la tecnología de hibridoma convencional. Los transgenes de inmunoglobulina humana albergados por los ratones transgénicos se reorganizan durante la diferenciación de células B y posteriormente se someten a cambio de clase y mutación somática. Así, usando esta técnica, es posible producir anticuerpos IgG, IgA, IgM e IgE terapéuticamente útiles. Para tener una visión general de esta tecnología para la producción de anticuerpos humanos, vea Lonberg y Huszar (1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93). Para una discusión detallada de esta tecnología para la producción de anticuerpos humanos y anticuerpos monoclonales humanos y protocolos para la producción de dichos anticuerpos, ver, por ejemplo, publicaciones PCT n° WO 98/24893, WO 96/34096, y WO 96/33735; y patente US n° 5.413.923, 5.625.126, 5.633.425, 5.569.825, 5.661.016, 5.545.806, 5.814,.18, y 5.939.598. Además, empresas como Abgenix, Inc. (Freemont, CA) y Genpharm (San Jose, CA) pueden comprometerse a proporcionar anticuerpos humanos dirigidos contra un antígeno seleccionado usando la tecnología similar a la que se describe anteriormente.
Un anticuerpo quimérico es una molécula en la que diferentes partes del anticuerpo se derivan de moléculas de inmunoglobulina diferentes. Los métodos para la producción de anticuerpos quiméricos son conocidos en la materia. Ver, por ejemplo, Morrison, 1985, Science 229:1202; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202; y patentes US n° 5.807.715, 4.816.567, 4.816.397, y 6.331.415.
Un anticuerpo humanizado es un anticuerpo o su variante o fragmento del mismo que es capaz de unirse a un antígeno determinado y que comprende una región de marco que presenta sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana y una CDR que presenta sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina no humana. Prácticamente la totalidad de los dominios variables por lo menos uno y por lo general dos, consta de un anticuerpo humanizado (Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, Fv) en que todas o casi todas las regiones CDR corresponden a las de una inmunoglobulina no humana (por ejemplo, anticuerpos del donante) y todas o casi todas de las regiones estructurales son las de una secuencia de consenso de la inmunoglobulina humana. En algunos aspectos, un anticuerpo humanizado también comprende por lo menos una parte de una región constante de la inmunoglobulina (Fc), típicamente de una inmunoglobulina humana. Por lo común, el anticuerpo contiene la cadena ligera así como por lo menos el dominio variable de una cadena pesada. El anticuerpo también pueden incluir las regiones CH1, bisagra, CH2, CH3 y el CH4 de la cadena pesada. El anticuerpo humanizado puede seleccionarse de cualquier clase de inmunoglobulinas, incluyendo IgM, IgG, IgD, IgA y IgE y cualquier isotipo, incluyendo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. El dominio constante es generalmente un complemento que fija el dominio constante donde se desea que el anticuerpo humanizado exhiba una actividad citotóxica, y la clase es típicamente IgG1. Cuando tal actividad citotóxica no es deseable, puede ser el dominio constante de la clase IgG2. Los ejemplos de dominios VL y VH constantes que pueden ser utilizados en ciertos aspectos incluyen, pero no se limitan a, C-kappa y C-gamma-1 (nG1m) descritos en Johnson et al. (1997) J. Infect. Dis. 176, 1215-1224 y los descritos en la patente US n° 5.824.307. El anticuerpo humanizado puede abarcar secuencias de más de una clase o isotipo, y seleccionar los dominios constantes particulares para optimizar funciones efectoras deseadas resulta evidente para el experto en la materia. Las regiones estructurales y CDR de un anticuerpo humanizado necesitan no corresponder precisamente a las secuencias parentales, por ejemplo, la CDR de donante o la estructura de consenso puede mutar mediante sustitución, inserción o eliminación de por lo menos un residuo de manera que el residuo CDR o marco en ese sitio no se corresponde con el anticuerpo de consenso o de importación. Sin embargo, tales mutaciones no serán extensas. Generalmente, por lo menos 75% de los residuos de anticuerpo humanizado corresponden a los de las secuencias FR y CDR parentales, más del 90%, o más del 95%. Los anticuerpos humanizados se pueden producir usando una variedad de técnicas conocidas en la materia, incluyendo pero no limitado a, injerto CDR (patente europea n° EP 239.400; publicación internacional n° WO 91/09967; y patente US n° 5.225.539, 5.530.101 y 5.585.089), revestimiento o resurgimiento (patente europea n° 592.106 y EP 519.596; Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6): 805-814; y Roguska et al., 1994, PNAS 91:969-973), mezclando la cadena (patente US n° 5.565.332), y técnicas divulgadas en, por ejemplo, patente US n° 6.407.213, patente US n° 5.766.886, documento w O 9317105, Tan et al., J. Immunol. 169:1119 25 (2002), Caldas et al., Protein Eng.
13(5):353-60 (2000), Morea et al., Methods 20(3):267 79 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem. 272(16):10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895904 (1996), Couto et al., Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s- 5977s (1995), Couto et al., Cancer Res. 55(8):1717-22 (1995), Sandhu JS, Gene 150(2):409-10 (1994), y Pedersen et al., J. Mol. Biol. 235(3):959-73 (1994). Ver también la patente US n° US 2005/0042664 A1 (24 de febrero de 2005). A menudo, los residuos estructurales en las regiones estructurales serán sustituidas con el correspondiente residuo de anticuerpo donante de CDR para alterar (por ejemplo, mejorar) la unión del antígeno. Estas sustituciones estructurales se identifican por métodos bien conocidos en la materia, por ejemplo, por el modelado de las interacciones de las CDR y los residuos estructurales para identificar residuos estructurales importantes para la unión del antígeno y comparación de la secuencia para identificar residuos estructurales inusuales en posiciones particulares. (ver, por ejemplo, Queen et al., patente US n° 5.585.089; y Reichmann et al., 1988, Nature 332:323,).
Los anticuerpos de dominio único, por ejemplo, los anticuerpos que carecen de cadenas ligeras, pueden ser producidos por métodos bien conocidos en la materia. Ver Riechmann et al., 1999, J. Immunol. 231:25-38; Nuttall et al., 2000, Curr. Pharm. Biotechnol. 1(3):253-263; Muylderman, 2001, J. Biotechnol. 74(4):277302; Patente US n° 6.005.079; y publicación internacional n°WO 94/04678, WO 94/25591, y WO 01/44301.
Además, los anticuerpos que se unen a un antígeno C10orf54 pueden, a su vez, utilizarse para generar anticuerpos antiidiotipo que "imitan" un antígeno usando técnicas bien conocidas por los expertos en la materia. (Ver, por ejemplo, Greenspan y Bona, 1989, FASEB J. 7 (5): 437-444; y Nissinoff, 1991, J. Immunol. 147(8):2429-2438).
Polinucleótidos que codifican un anticuerpo
También se proporcionan en la presente memoria los polinucleótidos que comprenden una secuencia de nucleótidos que codifican un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria que se une a C10orf54 (por ejemplo, polipéptido de C10orf54, fragmento de polipéptido de C10orf54, epítopo de C10orf54). También se proporcionan en la presente memoria polinucleótidos que hibridan a elevadas, intermedias o bajas condiciones rigurosas de hibridación, por ejemplo, como se define anteriormente, polinucleótidos que codifican un anticuerpo o un anticuerpo modificado que se proporciona en la presente memoria.
En ciertos aspectos, las moléculas de ácido nucleico comprenden o consisten en una secuencia de ácidos nucleicos que codifican una secuencia de aminoácidos de VH y/o VL que se proporciona en la presente memoria o cualquier combinación de las mismas (por ejemplo, como una secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo proporcionado en la presente memoria, como un anticuerpo de longitud completa, cadena pesada y/o ligera de un anticuerpo, o un anticuerpo de cadena única que se proporciona en la presente memoria).
Expresión recombinante de un anticuerpo
La expresión recombinante de un anticuerpo proporcionado en la presente memoria (por ejemplo, un anticuerpo de longitud completa, cadena pesada y/o ligera de un anticuerpo, o un anticuerpo de cadena única que se proporciona en la presente memoria) que se une a un antígeno C10orf54 requiere la construcción de un vector de expresión que contiene un polinucleótido que codifica el anticuerpo. Una vez que un polinucleótido que codifica una molécula de anticuerpo, una cadena pesada o ligera de un anticuerpo, o un fragmento del mismo (tal como que contiene el dominio variable de cadena pesada y/o ligera) se ha obtenido, el vector para la producción de la molécula de anticuerpo puede ser producido por tecnología de ADN recombinante usando técnicas bien conocidas en la materia. Así, en la presente memoria se describen métodos para la preparación de una proteína expresando un polinucleótido que contiene un anticuerpo que codifica la secuencia de nucleótidos. Pueden utilizarse métodos que son bien conocidos por los expertos en la materia para la construcción de vectores de expresión que contienen secuencias de codificación de anticuerpo y las señales apropiadas de control transcripcional y de traducción. Estos métodos incluyen, por ejemplo, técnicas de ADN in vitro recombinante, técnicas sintéticas y recombinación genética in vivo. Así, se proporcionan asimismo en la presente memoria unos vectores replicables que comprenden una secuencia de nucleótidos que codifican una molécula de anticuerpo que se proporciona en la presente memoria, una cadena pesada o ligera de un anticuerpo, un dominio variable de cadena pesada o ligera de un anticuerpo o un fragmento del mismo, o una CDR de cadena pesada o ligera, que se liga de manera funcional a un promotor. Tales vectores pueden incluir la secuencia de nucleótidos que codifican la región constante de la molécula de anticuerpo (ver, por ejemplo, publicación internacional n°WO 86/05807 y WO 89/01036; y la patente US n° 5.122.464) y el dominio variable del anticuerpo puede ser clonado en un vector para la expresión de la cadena pesada completa, la cadena ligera completa o ambas cadenas ligeras y pesadas completas.
El vector de expresión es transferido a una célula hospedadora por técnicas convencionales y luego se cultivan las células transfectadas por técnicas convencionales para producir un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria. Por lo tanto, también se proporcionan en la presente memoria unas células hospedadoras que contienen un polinucleótido que codifica un anticuerpo que se proporciona en la presente memoria o fragmentos del mismo, o una cadena pesada o ligera del mismo, o fragmento del mismo o un anticuerpo de cadena única que se proporciona en la presente memoria, ligado de manera funcional a un promotor heterólogo. En ciertos aspectos para la expresión de los anticuerpos de doble cadena, los vectores que codifican las cadenas ligeras y pesadas pueden ser coexpresados en la célula hospedadora para la expresión de la molécula de inmunoglobulina entera, como se detalla a continuación.
Una variedad de sistemas de vectores de expresión de hospedador puede utilizarse para expresar los anticuerpos proporcionados en la presente memoria (ver, por ejemplo, patente US n°. 5.807.715). Estos sistemas de expresión de hospedador representan vehículos por los que las secuencias de codificación de interés pueden producir y purificar posteriormente, pero también representan células que pueden, cuando se transforman o transfectan con la secuencias de codificación de nucleótidos apropiadas, expresan un anticuerpo proporcionado en la presente memoria in situ. Incluyen pero no se limitan a microorganismos tales como bacterias (por ejemplo, E. coli y B. subtilis) transformadas con vectores de expresión de ADN bacteriófago recombinante, ADN plasmídico o ADN cosmídico que contienen secuencias de codificación de anticuerpo; levadura (por ejemplo, Saccharomyces Pichia) transformada con vectores de expresión de levadura recombinante que contienen secuencias de codificación de anticuerpo; sistemas de células de insecto infectados con vectores de expresión recombinante de virus (por ejemplo, baculovirus) que contienen secuencias de codificación de anticuerpo; sistemas de célula de planta infectados con vectores de expresión recombinante de virus (por ejemplo, virus mosaico de la coliflor, CaMV, virus del mosaico del tabaco, TMV) o transformados con vectores de expresión (por ejemplo, plásmido Ti) del plásmido recombinante que contienen secuencias de codificación de anticuerpo; o sistemas de células de mamífero (por ejemplo, COS, CHO, BHK, 293, NS0 y las células 3T3) que alojan los constructos de expresión recombinante que contienen promotores derivados del genoma de células de mamíferos (por ejemplo, promotor de la metalotioneína) o de virus de mamíferos (por ejemplo, el promotor tardío de adenovirus, el promotor 7.5 K de virus de vacuna). En ciertos aspectos, las células bacterianas, como Escherichia coli, las células eucariotas, especialmente para la expresión de la molécula de anticuerpo recombinante completo, se utilizan para la expresión de una molécula de anticuerpo recombinante. Por ejemplo, las células de mamífero tales como células de ovario de hámster chino (CHO), junto con un vector como el elemento promotor de gen temprano intermedio principal de citomegalovirus humano es un sistema de expresión eficaz para anticuerpos (Foecking et al., 1986, Gene 45:101; y Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2). En unos aspectos específicos, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria se producen en células CHO. En un aspecto concreto, la expresión de secuencias de nucleótidos que codifican anticuerpos proporcionados en la presente memoria que se unen a un antígeno C10orf54 está regulada por un promotor constitutivo, promotor inducible o un promotor específico del tejido.
En sistemas bacterianos, un número de vectores de expresión puede ser ventajosamente seleccionado dependiendo del uso para la molécula de anticuerpo que se expresa. Por ejemplo, cuando una gran cantidad de tal anticuerpo debe ser producida, para la generación de composiciones farmacéuticas de una molécula de anticuerpo, los vectores que dirigen la expresión de altos niveles de productos de proteína de fusión que son purificados fácilmente pueden ser deseables. Tales vectores incluyen, pero no se limitan a, vector de expresión de E. coli pUR278 (Ruther et al., 1983, EMBO 12:1791), en que la secuencia de codificación del anticuerpo puede ser ligada individualmente en el vector en el marco con la región de la codificación de lac Z de manera que se produce una proteína de fusión; vectores de pIN (Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109; Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509); y similares. Los vectores pGEX pueden usarse para expresar polipéptidos extraños como proteínas de fusión con 5 glutatión-transferasa (GST). En general, estas proteínas de fusión son solubles y fácilmente pueden ser purificadas a partir de células sometidas a lisis por adsorción y unión perlas de agarosa glutatión de matriz seguido por elución en presencia de glutatión libre. Los vectores de pGEX están diseñados para incluir la trombina o los sitios de escisión de factor Xa proteasa para que el producto del gen diana clonado pueda ser liberado de la porción de GST.
En un sistema de insectos, el virus de la poliedrosis nuclear de Autographa californica (AcNPV) se utiliza como vector para expresar genes externos. El virus crece en células de Spodoptera frugiperda. La secuencia de codificación de anticuerpo puede reproducida individualmente en regiones no esenciales (por ejemplo el gen polihedrina) del virus y colocada bajo control de un promotor AcNPV (por ejemplo el promotor de polihedrina).
En las células hospedadoras de mamífero, puede utilizarse un número de sistemas de expresión basados en virus. En los casos en los que se utiliza un adenovirus como un vector de expresión, la secuencia de codificación del anticuerpo de interés puede estar ligada a un complejo de control de transcripción/traducción de adenovirus, por ejemplo, el promotor tardío y la secuencia tripartita líder. Este gen quimérico se puede insertar en el genoma de adenovirus por recombinación in vitro o in vivo. La inserción de una región no esencial del genoma viral (por ejemplo, región El o E3) dará como resultado un virus recombinante que es viable y capaz de expresar la molécula de anticuerpo en hospedadores infectados (por ejemplo, ver Logan y Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 1:355-359). Las señales de iniciación específicas también pueden ser necesarias para la eficiente traducción de secuencias de codificación de anticuerpo insertadas. Estas señales incluyen el codón de iniciación ATG y secuencias adyacentes. Además, el codón de iniciación debe estar en fase con la estructura de lectura de la secuencia de codificación para asegurar la traducción del inserto entero. Estas señales de control de traducción exógenas y codones de iniciación pueden ser de una variedad de orígenes tanto naturales como sintéticos. La eficacia de expresión puede mejorarse mediante la inclusión de elementos aumentadores de la transcripción adecuados, terminadores de transcripción, etc. (ver, por ejemplo, Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol.: 153:51-544).
Además, puede seleccionarse una cepa de células hospedadoras que modula la expresión de las secuencias insertadas, o modifica y procesa el producto del gen de la manera específica deseada. Tales modificaciones (por ejemplo, la glucosilación) y procesamiento (por ejemplo, escisión) de productos proteicos pueden ser importantes para la función de la proteína. Las diferentes células hospedadoras presentan mecanismos característicos y específicos para el proceso de postraducción y la modificación de proteínas y productos génicos. Las líneas celulares adecuadas o los sistemas de hospedador pueden seleccionarse para garantizar la correcta modificación y el procesamiento de la proteína extraña expresada. Para ello, pueden utilizarse las células hospedadoras eucariotas que presentan la maquinaria celular para el adecuado procesamiento de la transcripción primaria, glucosilación y fosforilación del producto del gen. Tales células hospedadoras de mamífero incluyen, pero no se limitan a, células CHO, VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 293, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O y T47D, NS0 (una línea celular de mieloma murina que no produce endógenamente cualesquier cadenas de inmunoglobulina), CRL7O3O y HsS78Bst. En unos aspectos específicos, los anticuerpos anti-C10orf54 monoclonales, totalmente humanos, proporcionados en la presente memoria, son producidos en células de mamíferos, como las células CHO.
Para la producción a largo plazo, de alto rendimiento de proteínas recombinantes, la expresión estable es útil, pero no es obligatoria. Por ejemplo, pueden diseñarse las líneas celulares que expresan de forma estable la molécula de anticuerpo. En lugar de utilizar vectores de expresión que contienen el origen viral de la replicación, las células hospedadoras pueden transformarse con el ADN controlado por elementos de control de la expresión adecuados (por ejemplo, promotor, potenciador, secuencias, terminadores de transcripción, sitios de poliadenilación, etc.) y un marcador seleccionable. Tras la introducción de ADN extraño, las células genomanipuladas pueden permitirse crecer durante 1-2 días en un medio enriquecido y luego se cambian a un medio selectivo. El marcador seleccionable en el plásmido recombinante confiere resistencia a la selección y permite a las células estables integrar el plásmido en sus cromosomas y crecer para formar focos de forma que a su vez pueden ser reproducidos y ampliados en líneas celulares. Este método puede utilizarse ventajosamente para líneas celulares que expresan la molécula de anticuerpo. Tales líneas celulares modificadas pueden ser particularmente útiles en la detección y evaluación de composiciones que interactúan directa o indirectamente con la molécula de anticuerpo.
Pueden utilizarse varios sistemas de selección, incluyendo pero no limitado a, la timidina cinasa de virus herpes simple virus (Wigler et al., 1977, Cell 11:223), los genes de hipoxantineguanina fosforribosiltransferasa (Szybalska & Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. u Sa 48:202), y adenina fosforribosiltransferasa (Lowy et al., 1980 , Cell 22:8-17) se pueden emplear en células tk, hgprt o aprt, respectivamente. También, la resistencia antimetabolito puede utilizarse como la base de la selección de los genes siguientes: dhfr, que confiere resistencia al metotrexato (Wigler et al., 1980, Natl. Acad. Sci. USA 77:357; O'Hare et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527); gpt, que confiere resistencia a ácido micofenólico (Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072); Neo, que confiere resistencia a los aminoglucósidos G-418 (Wu y Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95; Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596; Mulligan, 1993, Science 260:926-932; y Morgan y Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; Mayo, 1993, TIB TECH 11(5):l55-2 15); e higro, que confiere resistencia a higromicina (Santerre et al., 1984, Gene 30:147). Los métodos comúnmente conocidos en la materia de la tecnología de ADN recombinante pueden ser aplicados rutinariamente para seleccionar el clon recombinante deseado, y se describen los métodos, por ejemplo, en Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler, Gene Transfer y Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); y en capítulos 12 y 13, Dracopoli et al. (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1.
Los niveles de expresión de una molécula de anticuerpo pueden aumentarse mediante amplificación vectorial (para una revisión, ver Bebbington y Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3, New York, 1987)). Cuando un marcador en el sistema de vectores que expresa anticuerpos es amplificable, el aumento en el nivel de inhibidor presente en el cultivo de célula hospedadora aumentará el número de copias del gen marcador. Puesto que la región amplificada está asociada con el gen del anticuerpo, la producción del anticuerpo también aumentará (Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257).
La célula hospedadora puede ser transfectada con dos vectores de expresión proporcionados en la presente memoria, el primer vector de codificación de un polipéptido derivado de cadena pesada y el segundo vector de codificación de un polipéptido derivado de cadena ligera. Los dos vectores pueden contener idénticos marcadores seleccionables que permiten un expresión igual de polipéptidos de cadena pesada y ligera. Alternativamente, puede utilizarse un solo vector que codifica y es capaz de expresar, ambos polipéptidos de cadena pesada y ligera. En tales situaciones, la cadena ligera debe colocarse antes de la cadena pesada para evitar un exceso de cadena pesada libre de tóxicos (Proudfoot, 1986, Nature 322: 52, y Kohler, 1980 , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:2197-2199). Las secuencias de codificación para las cadenas pesadas y ligeras pueden abarcar el ADNc o ADN genómico.
Una vez que se ha producido un anticuerpo por expresión recombinante, puede ser purificado por cualquier método conocido en la materia para la purificación de una molécula de inmunoglobulina, por ejemplo, por cromatografía (por ejemplo, intercambio iónico, afinidad, sobre todo por la afinidad por el antígeno específico tras la proteína A y dimensionamiento de cromatografía de columna), centrifugación, solubilidad diferencial o por cualquier otra norma técnica para la purificación de proteínas. Además, los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden ser fusionados con secuencias de polipéptido heterólogo que se describen en la presente memoria o también conocidos en la materia para facilitar la purificación.
Kits
Se proporciona asimismo un paquete farmacéutico o un kit que comprende uno o más contenedores llenados con uno o más de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas que se proporcionan en la presente memoria, como uno o más anticuerpos que se proporcionan en la presente memoria. Opcionalmente asociada a dichos contenedores pueden ser una notificación en el formulario prescrito por una agencia gubernamental que regula la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos o de productos biológicos, notificación que refleja la aprobación por la agencia de la fabricación, uso o venta para la administración humana. En algunos aspectos, el kit comprende un prospecto. El término "prospecto" se utiliza para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en paquetes comerciales de productos terapéuticos, que contienen información sobre las indicaciones, uso, dosificación, administración, contraindicaciones o advertencias sobre la utilización de estos productos terapéuticos, así como instrucciones de utilización.
También se proporcionan en la presente memoria unos kits que pueden ser utilizados en los métodos anteriores. En un aspecto, un kit comprende un anticuerpo proporcionado en la presente memoria, como un anticuerpo aislado, en uno o más recipientes. En un aspecto específico, los kits proporcionados en la presente memoria contienen un antígeno C10orf54 sustancialmente aislado como control. En ciertos aspectos, los kits proporcionados en la presente memoria comprenden además un anticuerpo de control que no reacciona con el antígeno C10orf54. En otro aspecto específico, los kits proporcionados en la presente memoria contienen unos medios para la detección de la unión de un anticuerpo modificado a un antígeno C10orf54 (por ejemplo, el anticuerpo puede ser conjugado a un sustrato perceptible como un compuesto fluorescente, un sustrato enzimático, un compuesto radiactivo o un compuesto luminiscente, o un segundo anticuerpo que reconoce el primer anticuerpo puede ser conjugado a un sustrato perceptible). En unos aspectos específicos, el kit puede incluir un antígeno C10orf54 químicamente sintetizado o producido por vía recombinante. El antígeno C10orf54 proporcionado en el kit también puede fijarse a un soporte sólido. En un aspecto más específico los medios de detección del kit descrito anteriormente incluyen un soporte sólido al cual el antígeno C10orf54 se une. Tal kit también puede incluir un anticuerpo no humano y no fijado y etiquetado como indicador. En este aspecto, la unión del anticuerpo al antígeno C10orf54 puede ser detectada por la unión del anticuerpo marcado con el indicador.
Ejemplos
Ejemplo 1 - Identificación de C10ORF54 en la superficie de células tumorales de leucemia mielógena aguda (AML)
Un total de 14 células mononucleares frescas de médula ósea (BMMC) de pacientes con AML se obtuvieron de AllCells y 16 muestras de pacientes congeladas adicionales eran de Fred Hutchinson Cancer Research Center (FHCRC). Como control, se analizaron 16 muestras BMMC frescas de donantes sanos. Para supervisar la calidad de las muestras individuales de AML, se realizó una tinción de hematoxilina y eosina de blastos de la AML o se monitorizó la expresión de marcadores AML mediante el análisis FACS/citometría de flujo. El manejo de la muestra se ha optimizado para mantener al máximo la viabilidad de las células durante el aislamiento de la muestra. Los momentos óptimos de etiquetado para las muestras de AML se determinaron para permitir el etiquetado eficiente sin comprometer la integridad celular.
El perfil del antígeno de superficie etiquetado (sTAg) se utilizó para identificar y perfilar cuantitativamente el repertorio de proteínas de la superficie de las células en las muestras. Los dominios extracelulares de las proteínas asociadas con las membranas celulares de células de tumor de LMA primarias intactas fueron etiquetados químicamente y luego enriquecidos por cromatografía para proteínas etiquetadas usando una resina de afinidad de la fase sólida. Las proteínas eluidas se almacenaron a -80° C antes del análisis de espectrometría de masas como se describe a continuación.
Las proteínas enriquecidas por el método de sTAg se identificaron y cuantificaron usando alta resolución, cromatografía líquida aleatoria espectrometría de masa en tándem (MS). Un espectrómetro de masas híbrido ThermoFisher LTQ-ORBITRAP VELOS, que combina la sensibilidad de una trampa de iones lineal con la precisión de alta resolución y la masa proporcionada por el analizador de masas orbitrap revolucionario (Olsen et al., Mol. Cell Proteomics 8:2759-2769, 2009) acoplado a un aparato de cromatografía líquida de nanoflujo fue empleado para la proteómica basada en el azar, de fondo para determinar las identidades y mediciones de abundancia cuantitativa de proteínas en las fracciones de enriquecimiento superficial de la célula de AML(Yates et al., Annu. Rev. Biomed. Eng. 11:49-79, 2009). Los productos de digestión trípticos enriquecidos con proteínas superficiales fueron separados por hidrofobicidad mediante cromatografía de líquidos de nanoflujo en línea, como masas de péptido y patrones de fragmentación se registraron dinámicamente por el espectrómetro de masas. Para determinar identidades del péptido y proteína, los datos brutos de la MS fueron procesados utilizando el algoritmo SEQUEST ejecutado en una plataforma de procesamiento rápido Sorcerer 2 (Lundgren et al., Curr. Protoc. Bioinformatics, Capítulo 13: Unidad 13.3, 2009), para determinar las correspondencias de mejor ajuste entre los patrones de fragmentación experimental y los determinados in silico del proteoma humano. Las correspondencias resultantes fueron validadas estadísticamente mediante los algoritmos PEPTIDEPROPHET (Keller et al, Anal. Chem. 74:5383-5392, 2002) y PROTEINPROPHET (Nesvizhskii et al, Anal. Chem. 75: 4646-4658, 2003) ya implementados en software SCAFFOLD (Proteome Software) para asegurar las tasas de descubrimiento falso más bajas posibles (FDR) y así la inclusión de únicamente las proteínas firmemente identificadas en el reservorio candidato.
Los niveles cuantitativos relativos de proteínas identificadas en las muestras de sTAg se determinaron utilizando el método espectral de recuento (revisado en Neilson et al., Proteomics 11:535-553, 2011). El recuento espectral se basa en la demostración empírica de que el número de espectros asignados (positivamente identificados) asociados con péptidos de cada proteína correlaciona fuertemente con la abundancia relativa de la proteína en la mezcla original (Liu et al., Anal. Chem. 76:4193-4201,2004). Los recuentos espectrales de péptidos identificados se obtuvieron desde el programa SCAFFOLD que muestra, ordena y filtra los resultados de los datos de búsquedas de SEQUEST de espectrometría de masas. Los recuentos espectrales sin procesar se transformaron en un porcentaje de los valores del factor de abundancia espectral normalizado (% NSAF) (Zybailov et al., J. Proteome Res. 5:2339-2347, 2006) para tener en cuenta las diferencias en la longitud de la proteína y la variabilidad en la concentración de proteína total. los anticuerpos monoclonales seleccionados fueron utilizados para validar las mediciones de proteómica utilizando análisis FACS cuantitativas como medida de confirmación externa, independiente, del perfil proteómico basado en espectrometría de masas sTAg de la expresión de superficie de la célula de tumor primario (ver, por ejemplo, el ejemplo 2 ).
Usando el análisis de sTAg, la C10orf54 que presenta la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1080 fue identificada como estando presente en la superficie de células tumorales de AML. Como se muestra en la figura 1A, el método de sTAg había identificado C10orf54 en 7 de 30 muestras de LMA primarias con una mediana de % de NSAF de 0.06. En contraste, C10orf54 no fue detectada en las muestras de BMMC 16 procedentes de donantes sanos. La referencia de AML, CD33, fue identificada en 11 de 30 muestras de AML con mediana de % de NSAF de 0.07 y cuatro de 16 muestras de BMMC normales con una mediana de % de NSAF de 0.05. La figura 1B, muestra un subconjunto de muestras sTAg que se muestra en la figura 1A. Sobre la base de este análisis, C10orf54 parece expresarse de manera comparable a CD33 en especímenes de AML derivados de paciente y expresarse en una parte significativa de los pacientes de AML en relación con los pertinentes controles normales.
Ejemplo 2 - Expresión de C10ORF54
A. Expresión en AML
Se realizaron estudios de citometría de flujo con 23 muestra primarias y 3 normales de BM-MNC obtenidas como se describe en el ejemplo 1 usando anticuerpos anti-C10orf54 para analizar el perfil de expresión de C10orf54 en AML. Los anticuerpos fueron etiquetados con los fluorocromos AF647 o AF488. Las células fueron contadas y utilizadas en 500000 células/estatina, nuevamente suspendidas en amortiguador FACS: RPMI, 4% HIFBS, 0.02%NaN3. Los anticuerpos fueron incubados durante 15 minutos, a temperatura ambiente en la oscuridad y analizados en un instrumento MACSQuant (Miltenilo Biotec, Auburn, CA). El análisis de datos se realiza mediante el software FLOWJO (TreeStar, Ashland, O). Los resultados del análisis FACS usando el anticuerpo anti-C10orf54 76E1 se muestran en la figura 2.
B. Expresión en tejidos normales con respecto a tumorales
Adicionalmente, se realizaron estudios de micromatriz de tejidos (TMA) para determinar la expresión proteica para C10orf54 en una variedad de tejidos normales y tumorales humanos.
Una variedad de tejidos embebidos en parafina fijada en formalina, incluyendo TMA obtenidos de US Biomax (Rockville, MD) y Protein Biotechnologies (Ramona, CA), fueron utilizados. Las células de sarcoma embebidas en parafina fijada con formalina transfectadas con C10orf54, las células del sarcoma parental y las células de placenta humana fueron utilizadas como controles positivos y negativos. Un anticuerpo anti-C10orf54 (Novus Biologicals (Littleton CO80120) Cat #NBP1 88967 C10orf54/B7-H5/PD-1H) se utilizó a una dilución de 1:150 con amortiguador de citrato pH 6.0 para la recuperación de antígeno.
La tinción inmunohistoquímica se realizó mediante un Dako Autostainer (Dako Norteamérica, Carpenteria, CA93013) a temperatura ambiente con lavados PBS entre cada etapa.
La expresión de tejido normal de C10orf54 fue limitada principalmente a las células inmunitarias en los tejidos más normales evaluados. Los vasos sanguíneos positivos para C10orf54 se observaron en tejidos ded CNS aunque a mayor aumento, y la expresión de C10orf54 parece estar en células perivasculares (pericitos) y células inmunitarias. Los trofoblastos de la placenta eran fuertemente positivos para C10orf54. El único tejido epitelial donde se observó expresión positiva para C10orf54 fue en la amígdala reactiva. Sin embargo, esta expresión positiva puede ser debida a la gran cantidad de células positivas que transitan a través del epitelio. Los tejidos negativos incluyeron glomérulos del riñón, túbulos y conductos, hepatocitos hepáticos y sinusoides, alvéolos pulmonares y bronquios, islotes de páncreas y ácinos, músculo cardíaco, glándulas de la próstata, ovario, criptas del colon, glándulas del estómago y epitelios, glándulas de la piel y epitelios, timo, útero, glándulas suprarrenales, músculo esquelético, neuronas de CNS, epitelio de la vejiga y vasos gruesos.
Así, en resumen, los estudios de TMA de tejido normal demostraron la coloración positiva más fuerte para los trofoblastos de la placenta, con las células inmunitarias positivas en el intestino delgado (lámina propia), bazo, amígdala, uréter y pulmón.
Los estudios de tejido tumoral de TMA sorprendentemente mostraron células positivas para C10orf54 presentes en más de 99% de los tumores que presentan inflamación. Estos resultados se muestran en la tabla 34.
Tabla 34
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N/A* - no aplicable, ya que no se encuentra inflamación presente.
** La muestra de cáncer pulmonar de células pequeñas presentó inflamación con resultados negativos para C10orf54. Por lo tanto, en resumen, la expresión de C10orf54 en el tejido tumoral se localiza dentro de las células inmunitarias inflamatorias en muchos tipos de tumores.
C. Expresión en células supresoras derivadas de mieloide (MDSC)
Se realizaron estudios de citometría de flujo como se describe a continuación para determinar los niveles de expresión de C10orf54 en la subpoblación de MDSC (leucocitos CD11b+) de células mononucleares de sangre periférica humana purificada (PBMC) de donantes sanos. Se evaluó la expresión y se cuantificó utilizando anticuerpo monoclonal 76E1 marcado en las siguientes poblaciones MDSC: células monocíticas (CD11b+/CD14+/HLA-DR-), granulocíticas (CD11b+/CD15+/HLA-DR- ) y mieloides inmaduras (CD11b+/CD15 /HLA-DR_ ). Las muestras de PBMC utilizadas en estos experimentos se obtuvieron de ALLCELLS (Emeryville, CA).
El clon de anticuerpo 76E1 fue etiquetado con Alexa Fluor 647. Las muestras de PBMC se preparan y etiquetan con LIVE/DEAD Yellow (LDY). 100 |jl (células 1E6) fueron agregadas a lo siguiente: reactivo de bloqueo de FcR, humano; marcadores de linaje; CDl1b-PE; CD14-APC-Cy7; CD15-PerCP-Cy5.5; HLA-DR-PE-Cy7; y 1 jg de anticuerpo marcado 76E1-AF647. Después de la incubación durante 30 minutos a 4°C en la oscuridad, las muestras fueron lavadas y analizadas.
La intensidad de fluorescencia media (MFI) se calculó para cada muestra en un analizador de MACSQuant. Con el fin de determinar el número de copias de C10orf54, se utilizó un kit de IgG antirratón de Quantum Simply Cellular (Bangs Laboratories, 815B).
El porcentaje de células 76E1-AF-647+ que se encuentran dentro de las tres subpoblaciones de MDSC se resumen en la figura 26A. Del mismo modo, los números de copias de C10orf54 para cada subpoblación de MDSC se resumen en la figura 26B.
Utilizando el análisis anterior, fue posible identificar tanto los leucocitos Lin-+/CD11b+ como las subpoblaciones de MDSC, que demostraron que la población de MDSC monocíticas exhibe el más alto nivel de expresión de C10orf54 en muestras sanas de PBMC.
D. Expresión en las células T CD4+/CD25+
Se realizaron estudios de citometría de flujo como se describió anteriormente para determinar los niveles de expresión de C10orf54 en células T CD4+/CD25+ naturales que encuentran en PBMC de humano. Como se describió anteriormente, se evaluó la expresión y se cuantificó utilizando un anticuerpo monoclonal marcado 6E1. Las células T CD4+/CD25+ fueron aisladas usando el kit de aislamiento de células reguladoras CD4+/CD25+ humanas (Miltenyi-Biotec, 130-091-301). Los alícuotas de cada etapa de la separación (PBMC, células T CD4+ , células T CD4+/CD25 ) fueron analizados para la expresión de C10orf5. Los valores de MFI se cuantificaron utilizando el Kit de IgG antirratón Quantum Simply Cellular (Bangs Laboratories, 815B). Se obtuvieron muestras de PBMC humanas de ALLCELLS para evaluar esta metodología.
El análisis anterior mostró que C10orf54 se expresó mínimamente en las células T CD4+/CD25+.
E. Expresión en el melanoma humano
Se realizaron unos estudios de doble tinción de tinción por inmunohistoquímica (IHC) e inmunofluorescencia (IF) como se describe a continuación para determinar la expresión de C10orf54 en muestras de tumores de melanoma humano y para evaluar un gran número de subtipos celulares (macrófagos, células mieloides, células T y células tumorales).
Se evaluaron tres melanomas distintos: dos melanomas de piel de tejidos blandos (M113044 y OD41239) y un melanoma metastásico para el ganglio linfático (WD-12972). Una muestra del melanoma de tejido blando (OD41239) fue > 90% tumor mientras que el otro melanoma de tejido blando y el encuentro de melanoma respecto al nódulo linfático (LN) presentaron una respuesta inflamatoria con menos células tumorales presentes.
Los anticuerpos utilizados en este estudio se describen en la siguiente tabla 35. Gp100, que preferentemente se expresa en altos niveles en células de melanoma, también fue teñida en cada tejido de melanoma mediante IHC para determinar la cantidad de células tumorales dentro de las muestras de tejido y el grado de las células tumorales positivas para C10orf54.
Tabla 35
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Para la tinción doble de IF, 8 pm de secciones de criostato congeladas se fijaron en 75% de etanol de 200 grados y 25% de acetona durante 5 minutos. Un cóctel de anticuerpos primarios (2 especies diferentes diluidas en diluyente Dako cat #S3022; diluido según la tabla 35) se añadió a las muestras y se incubaron durante 1 hora. Luego se agregaron anticuerpos secundarios en una proporción de 1: 200 y se incubó 30 minutos. Se añadieron unos Ccubreobjetos con Prolong Gold DAPI (ThermoFisher cat #36935) y se dejaron curar durante la noche. Un microscopio fluorescente vertical BX52 Olympus se utilizó para analizar las muestras.
Para la tinción de IHC con anticuerpo de gp100, se fijaron 8 pm de secciones de criostato congeladas en 75% de etanol de 200 grados y 25% de acetona durante 5 minutos. La peroxidasa endógena fue bloqueada por la incubación con Bloxall (Vector cat #SP-6000)) durante 5 minutos. Las muestras fueron bloqueadas además usando el kit de bloqueo de avidina y biotina (BioLegend cat #SIG-31126) durante 10 minutos cada una y el bloqueo de proteína (Dako cat #0909) durante 30 minutos. El anticuerpo primario gp100 (abcam cat # ab137062; proporción de 1: 100) se añadió y se incubó durante 1 hora. Se añadió anticonejo de biotina de anticuerpo secundario (vector cat#BA1000) en una proporción de 1: 200 y se incubó durante 30 minutos. Se efectuó una tinción de estreptavidina-HRP con kit VECTASTAIN Elite ABC (Vector Laboratories cat #PK6100) durante 30 minutos. Se realizaron asimismo una tinción de DAB (Sigma cat #D4418) y contratinción de hematoxilina de Mayers (EMS cat#26043-05).
A continuación se resumen los resultados de los experimentos anteriores:
- Gp100: Casi todas las células tumorales en las tres muestras de tejido de melanoma fueron negativas para C10orf54.
- CD3: M113044: Un gran número de células T eran muy débilmente positivas para C10orf54. ~ 30% de células dieron positivo para C10orf54 y negativo para CD3. OD41239: Muy pocas células T presentes y casi todas las células positivas para CD3 fueron negativas para C10orf54. WD-12972: Hay un gran número de células T presentes. Muchas fueron también débilmente positivas para C10orf54. Las células T dentro del tumor eran sobre todo negativas para C10orf54 y muchas células positivas para C10orf54 fueron negativas para CD3 en todo el tejido tumoral.
- CD6 8 : M113044: La mayoría de las células positivas para CD68 fueron negativas para C10orf54. OD41239:
Un subconjunto de las células positivas para CD68 fue también negativo para C10orf54. WD-12972: Las células con resultado positivo para CD68 fueron predominantemente negativas para C10orf54 aunque también se encuentran algunas células negativas para CD68 /positivas para C10orf54.
- CD11b: Prácticamente todas las células positivas para CD11b fueron asimismo positivas para C10orf54. Sin embargo, existían células positivas para C10orf54 que fueron negativas para CD11b en los tres tumores de melanoma.
- PD-L1: Las células positivas para PD-L1 también fueron predominantemente positivas para C10orf54 en los tres tumores. De nuevo, existían células positivas para C10orf54 que fueron negativas para PD-L1 en los tres melanomas.
En resumen, casi todas las células tumorales de melanoma positivas para gp100 fueron negativas para C10orf54 en las tres muestras de melanoma. Hubo una gran variabilidad en la cantidad de infiltrado de células inflamatorias dentro de los 3 tejidos de muestra diferentes del melanoma. Sin embargo, casi todas las células positivas para CD11b y PD-L1 en estos melanomas fueron positivos para C10orf54 y la mayoría de las células T positivas para CD3 fueron negativas para C10orf54 o muy débilmente positivas para C10orf54.
F. Expresión en carcinoma pulmonar de células no pequeñas (NSCLC)
Se realizaron estudios de citometría de flujo como se describe a continuación para determinar los niveles de expresión de C10orf54 en PBMCs de pacientes de NSCLC. La expresión fue evaluada y cuantificada utilizando un anticuerpo monoclonal etiquetado 26A para evaluar las subpoblaciones de CD11b y CD33, CD14, CD15. Las muestras ejemplificativas de PBMC de un paciente sano y un paciente de NSCLC clínicamente diagnosticado que se usaron en estos estudios se obtuvieron de ALLCELLS (Emeryville, CA).
El clon de anticuerpo 26A fue etiquetado con Alexa Fluor 647. Se prepararon muestras de PBMC. 100 pl (células 1E6) fueron agregados a lo siguiente: reactivo de bloqueo de FcR, humano; marcadores de linaje; CD11b-PE; CD14-APC-Cy7; CD15-PerCP-Cy5.5; HLA-DR-PE-Cy7; y 1 pg de anticuerpo etiquetado AF647. Después de la incubación durante 30 minutos a 4° C en la oscuridad, las muestras fueron lavadas, resuspendidas en una disolución de trabajo de DAPI y analizadas.
La intensidad de fluorescencia media (MFI) se calculó para cada muestra en un analizador de MACSQuant. Con el fin de determinar el número de copias de C10orf54, se utilizó un kit de IgG antirratón de Quantum Simply Cellular (Bangs Laboratories, 815B).
La expresión de C10orf54 fue elevada en las poblaciones de PBMC de la muestra de NSCLC en comparación con la muestra sana como se muestra en la figura 27. Estos resultados se resumen en la tabla 36, que muestra los números de copias de C10orf54 para la expresión dentro de los subconjuntos celulares.
Tabla 36
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Adicionalmente, se realizaron estudios de micromatriz de tejidos (TMA) para determinar la expresión proteica para C10orf54 en NSCLC.
Una variedad de tejidos embebidos en parafina fijados con formalina, incluyendo TMA obtenidas de US Biomax (Rockville, MD), se utilizaron. Las células de sarcoma embebidas con parafina fijada con formalina transfectadas con C10orf54 y células parentales de sarcoma fueron utilizadas como controles positivos y negativos. Un anticuerpo anti-C10orf54 (Novus Biologicals (Littleton CO80120) Cat #NBP1 88967 C10orf54/B7-H5/PD-1H) se utilizó a una dilución de 1:150 con amortiguador de citrato pH 6.0 para la recuperación de antígeno.
La tinción inmunohistoquímica se realizó mediante un Dako Autostainer (Dako North America, Carpenteria, CA93013) a temperatura ambiente con lavados de PBS entre cada etapa.
Una TMA de un tumor de pulmón con todos los tipos de tumores de NSCLC revelaron que todos los tipos de CPNM tenían expresión positiva para C10orf54. Sin embargo, los números de muestra en esta TMA eran relativamente pequeños, a excepción de los carcinomas de células escamosas (SCC), que demostró un patrón de expresión de C10orf54 fuerte.
El subtipo de SCC se evaluó además en cuatro TMA adicionales. Dos TMA contaban con datos adicionales de supervivencia. Sin embargo, no se observó correlación cuando estos datos se trazan contra el porcentaje de células positivas para C10orf54. Una TMA también proporcionó datos de expresión de EGFR, pero no se observó correlación cuando se trazan contra el porcentaje de células positivas para C10orf54. En esta TMA, el número de muestras puede haber sido insuficiente para determinar una correlación verdadera. También se evaluaron los datos agrupados para la totalidad de las cuatro TMA de SCC. Las muestras fueron separadas según el grado de inflamación presente en los corazones probados. Cuando se observa que no hay inflamación, no se detectaron células positivas para C10orf54. Sin embargo, sorprendentemente, en muestras con inflamación leve o marcada, la mayoría de estas muestras presentaba células infiltrantes positivas para C10orf54. Por ejemplo, en una TMA de SCC, 17% mostró entonces inflamación, 28% mostró inflamación leve y 55% mostró una inflamación moderadamarcada. Del 28% que mostró inflamación leve, 85% fue positivo para C10orf54, y del 55% que mostró una inflamación moderada-marcada, 92% fue positivo para C10orf54.
Así, en análisis anteriores indican una población de C10orf54 aumentada dentro de cada subgrupo en relación con el donante sano. Del mismo modo, los números de copias de C10orf54 son mayores en las muestras del paciente de NSCLC en comparación con el donante sano. Por otra parte, el NSCLC con inflamación correlaciona considerablemente con la expresión de C10orf54.
Ejemplo 3 - Preparación de anticuerpos monoclonales para C10ORF54
Se generaron anticuerpos de C10orf54 utilizando la plataforma iTAb. En este sistema, una línea celular de tumor de ratón se transduce para expresar de forma estable la proteína humana y luego se implanta por vía subcutánea en ratones singénicos. Los ratones se trataron con anticuerpo anti-CD8 para eliminar la vía de rechazo mediado por células dejando intacta la respuesta inmunitaria humoral. Después de esta inmunización, unos esplenocitos se recogen y se fusionan a una célula pareja para generar hibridomas. Los anticuerpos de estos hibridomas son cribados en ensayos múltiples diseñados para identificar un panel diverso de anticuerpos con propiedades de unión buena. Los anticuerpos seleccionados se producen entonces para pruebas in vivo como se expone a continuación.
Las líneas de células de sarcoma murino que expresan C10orf54 fueron preparadas por la infección del virus de líneas de células de sarcoma. Un gen de C10orf54 amplificado por PCR fue clonado en un vector de expresión de células de virus de células madre murino con un gen de resistencia a neomicina y secuenciado para confirmar la identidad. Para preparar las partículas del virus, unas células HEK 293t con proteínas de empaquetamiento retrovíricas fueron transfectadas, en presencia del reactivo de transfección FUGENE HD (Roche), con el vector de expresión retrovírico que contiene C10orf54. Las partículas de virus recogidas partir del sobrenadante de los medios de cultivo 48 horas después de transfección fueron utilizadas para infectar a las células de sarcoma. Después de selección de G418, unos transfectantes estables fueron agrupados y luego clonados limitando la dilución. Los clones fueron entonces recogidos y ampliados en presencia de antibióticos. Los clones con el máximo nivel de expresión de C10orf54 medido por citometría de flujo se expandieron y depositaron. Estas líneas celulares fueron utilizadas para inmunizar los ratones singénicos para la producción de anticuerpos y en los ensayos de unión para la selección de anticuerpos como sigue.
Para la inmunización, la línea de células de sarcoma de ratón que expresa C10orf54 fue implantada por vía subcutánea en ratones 129s6/SvEv, que son singénicos con la línea de sarcoma. los ratones fueron potenciados con la línea celular tres días antes de la extracción de bazo. Los esplenocitos fueron aislados como células únicas y se fusionaron con células SP2 MIL6 usando PEG1500. Los hibridomas resultantes fueron dispuestos en placas de 384 pocillos y se permitió que crecieran durante diez días.
Los anticuerpos contra C10orf54 inicialmente fueron seleccionados utilizando un análisis inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) a base de células para detectar la unión a C10orf54. Para este ensayo, las células de sarcoma que expresan C10orf54 fueron dispuestas en placas de 384 pocillos un día antes del ensayo. Las células fueron tratadas luego con sobrenadantes de hibridoma. Después de incubación y lavado, se detectó la presencia del anticuerpo unido usando un anticuerpo de IgG antirratón de cabra conjugado con peroxidasa (Jackson ImmunResearch Laboratories) seguido por un sustrato quimioluminiscente (ThermoScientific SuperSignal ELISA Pico Substrate). Los hibridomas identificados como positivos en la pantalla inicial fueron transferidos a los pocillos de una placa de 96 pocillos. Después del crecimiento, los sobrenadantes fueron probados en un análisis similar para la confirmación.
El isotipo de anticuerpos fue identificado por ELISA utilizando anticuerpos Fc antirratón de cabra específicos de isotipo. Para este ensayo, las células que expresan C10orf54 fueron dispuestas en placas de 384 pocillos un día antes del ensayo. Las células fueron tratadas luego con sobrenadantes de hibridoma. Después de la incubación y el lavado, las células se incubaron con el anticuerpo de cabra conjugado con peroxidasa específico para IgG1 o IgG2a de ratón (Jackson ImmunResearch Laboratories), seguido por un sustrato quimioluminiscente (ThermoScientific SuperSignal ELISA Pico Substrate).
La concentración de anticuerpo en sobrenadantes que se descubre que es positivo para la unión a las células que expresan C10orf54 fue medido por ELISA. Los sobrenadantes fueron probados en cuatro diluciones. Para cada anticuerpo, la dilución que genera un valor dentro del rango lineal de la curva estándar se utiliza para calcular la concentración del anticuerpo en el sobrenadante. La concentración de anticuerpos en los sobrenadantes estaba comprendida en una concentración de >1 jg/m l a <500 pg/ml, con aproximadamente 300 sobrenadantes >10|jg/ml.
Veintidós anticuerpos monoclonales fueron seleccionados para su unión a C10orf54 y analizados adicionalmente in vitro e in vivo, como se describe en la presente memoria.
Las secuencias para los veintidós anticuerpos monoclonales seleccionados (5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, 305A) se muestran a continuación.
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 5B se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 5B con la secuencia de señal ATGGGTTGGAGCTGTATCATCTTCTTTCTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTGCACTCCCAGGTCCAGCTGCAGC AGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGTCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAGGGTTCTGGCTACACATTCA CTGATTATGGTATGCACTGGGTGAAGCAGAGTCATGCAAAGAGTCTAGAGTGGATTGGAATTATTGATACTTAC TATGGTGATGCTACCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACGATGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAG CCTATATGGAACTTGCCAGACTGACATCTGAGGATTCTGCCATCTATTACTGTGCAAGAAGGGCTGGGAATGC TATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1154) MGWSCIIFFLVATATGVHSQVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYGMHWVKQSHAKSLEWIGIIDTYYGD ATYNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCARRAGNAMDYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1155; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 12)
Región variable de cadena ligera 5B con la secuencia de señal ATGAAGTCACAGACCCAGGTCTTCGTATTTCTACTGCTCTGTGTGTCTGGTGCTCATGGGAATATTGTGATGAC CCAGACTCCCAAATTCCTGCTTGTATCAGCAGGAGACAGGGTTACCATAACCTGCAAGGCCAGTCAGAGTGT GAGTAATGATGTAGCTTGGTACCAACAGAAGCCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATATACTATGCATCCAATC GCTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATATGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCACTGT GCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGGATTATAGCTCTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCAC CAAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1156) MKSQTQVFVFLLLCVSGAHGNIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYT GVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPRTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1157; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 12 )
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 46A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 46A con la secuencia de señal ATGGGTTGGAGCTGTATCGTCTTCTTTCTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTGCACTCCCAGGTCCAGCTGCAG CAGGCCGGGGGTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGTCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAGGGTTCTGGCTACACATT CACTGATTATGGTATGCACTGGGTGAAGCAGAGTCATGCAAAGAGTCTAGAGTGGATTGGAATTATTAATACTTA CTATGGGGATGCTACCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACAATGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACA GCCTATATGGAACTTGCCAGACTGACATCTGAGGATTCTGCCATCTATTACTGTGCAAGAAGGGCTGGGACTG CTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1158) MGWSCIVFFLVATATGVHSQVQLQQAGGELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYGMHWVKQSHAKSLEWIGIINTYYG DATYNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCARRAGTAMDYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1159; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 13)
Región variable de cadena ligera 46A con la secuencia de señal ATGAAGTCACAGACCCAGGTCTTCGTATTTCTACTGCTCTGTGTGTCTGGTGGTCATGGGAGTATTGTGATGA CCCAGACTCCCAAATTCCTGCTTGTATCAGCAGGAGACAGGGTTACCATAACCTGCAAGGCCAGTCAGAGTG TGAGTAATGATGTAGCTTGGTACCAACAGAAGCCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATATACTATGCATCCAAT CGCTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATATGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCACTG TGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGGATTATGGCTCTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCA CCAAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1160) MKSQTQVFVFLLLCVSGGHGSIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYT GVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYGSPRTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1161; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 13)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 97A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 97A con la secuencia de señal ATGGGTTGGAGCTGTATCATCTTCTTTCTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTGCACTCCCAGGTCCAGCTGCAGC AGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGTCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAGGGTTCTGGCTACACATTCA CTGATTATGGTATGCACTGGGTGAAGCAGAGTCATGCAAAGAGTCTAGAGTGGATTGGAGTTATTGATACTTAC TATGGTGATGCTAGTAACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACAATGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAG CCTATATGGAACTTGCCAGACTGACATCTGAGGATTCTGCCATCTATTACTGTGCAAGAAGGGCTGGGAATGC TATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1162) MGWSCIIFFLVATATGVHSQVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYGMHWVKQSHAKSLEWIGVIDTYYG DASNNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCARRAGNAMDYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1163; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 14)
Región variable de cadena ligera 97A con la secuencia de señal ATGAAGTCACAGACCCAGGTCTTCGTATTTCTACTGCTCTGTGTGTCTGGTGCTCATGGGAGTATTGTGATGA CCCAGACTCCCAAATTCCTGCTTGTATCAGCAGGAGACAGGGTTGCCATAACCTGCAAGGCCAGTCAGAGTG TGAGTAATGATGTAGCTTGGTACCAACAGAAGCCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATATACTATGCATCCAAT CGCTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATATGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCACTG TGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGGATTATGGCTCTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCA CCAAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1164) MKSQTQVFVFLLLCVSGAHGSIVMTQTPKFLLVSAGDRVAITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYT GVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYGSPRTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1165; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 14)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 128A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 128A con la secuencia de señal ATGGGTTGGAGCTGTATCATCTTCTTTCTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTGCACTCCCAGGTCCAGCTGCAGC AGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGTCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAGGGTTCTGGCTACACATTCA CTGATTATGGTATGCACTGGGTGAAGCAGAGTCATGCAAAGAGTCTAGAGTGGATTGGACTTATTGATACTTAC TATGGTGATGCTACCTACAACCACAAATTCAAGGGCAAGGCCACGATGACTGTAGACAAATCCTCCAGAACAG CCTATATGGAACTTGCCAGACTGACATCTGAGGATTCTGCCATCTATTACTGTGCAAGAAGGGCTGGGAATGC TATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGCCTCCTCA (SEC ID N°: 1166) MGWSCIIFFLVATATGVHSQVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYGMHWVKQSHAKSLEWIGLIDTYYG DATYNHKFKGKATMTVDKSSRTAYMELARLTSEDSAIYYCARRAGNAMDYWGQGTSVTASS (SEC ID N°: 1167; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 15)
Región variable de cadena ligera 128A con la secuencia de señal ATGAAGTCACAGACCCAGGTCTTCGTATTTCTACTGCTCTGTGTGTCTGGTACTCATGGGAATATTGCGATGAC CCAGACTCCCAAATTCCTGCTTGTATCAGCAGGAGACAGGGTTACCATAACCTGCAAGGCCAGTCAGAGTGT GAGTAATGATATAGCTTGGTACCAACAGAAGCCAGGACAGTCTCCTAGATTGCTGATATACTATGCATCCAATCG CTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATATGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCACTGTG CAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGGATTATAGCTCTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACC AAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1168) MKSQTQVFVFLLLCVSGTHGNIAMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDIAWYQQKPGQSPRLLIYYASNRYT GVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPRTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1169; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 16)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 146C se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 146C con la secuencia de señal ATGGGTTGGAGCTGTATCATCTTCTTTCTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTGCACTCCCAGGTCCAGCTGCAGC AGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGTCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAGGGTTCTGGCTACACATTCA CTGATTATGGTATGCACTGGGTGAAGCAGAGTCATGCAAAGAGTCTAGAGTGGATTGGACTTATTGATACTTAC TATGGTGATGCTACCTACAACCACAAATTCAAGGGCAAGGCCACGATGACTGTAGACAAATCCTCCAGAACAG CCTATATGGAACTTGCCAGACTGACATCTGAGGATTCTGCCATCTATTACTGTGCAAGAAGGGCTGGGAATGC TATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGCCTCCTCA (SEC ID N°: 1170) MGWSCIIFFLVATATGVHSQVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYGMHWVKQSHAKSLEWIGLIDTYYG DATYNHKFKGKATMTVDKSSRTAYMELARLTSEDSAIYYCARRAGNAMDYWGQGTSVTASS (SEC ID N°: 1171; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 16)
Región variable de cadena ligera 146C con la secuencia de señal ATGAAGTCACAGACCCAGGTCTTCGTATTTCTACTGCTCTGTGTGTCTGGTACTCATGGGAATATTGCGATGAC CCAGACTCCCAAATTCCTGCTTGTATCAGCAGGAGACAGGGTTACCATAACCTGCAAGGCCAGTCAGAGTGT GAGTAATGATATAGCTTGGTACCAACAGAAGCCAGGACAGTCTCCTAGATTGCTGATATACTATGCATCCAATCG CTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATATGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCACTGTG CAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGGATTATAGCTCTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACC AAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1172) MKSQTQVFVFLLLCVSGTHGNIAMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDIAWYQQKPGQSPRLLIYYASNRYT GVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPRTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1173; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 16)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 208A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 208A con la secuencia de señal ATGGGTTGGAGCTGTATCATCTTCTTTCTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTGCACTCCCAGGTCCAGCTGCAGC AGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGTCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAGGGTTCTGGCTACACATTCA CTGATTATGGTATGCACTGGGTGAAGCAGAGTCATGCAAAGAGTCTAGAGTGGATTGGAGTTATTGATACTTAC TATGGTGATGCTGGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACAATGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACA GCCTATATGGAACTTGCCAGACTGACATCTGAGGATTCTGCCATCTATTACTGTGCAAGAAGGGCTGGAAATG CTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1174) MGWSCIIFFLVATATGVHSQVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYGMHWVKQSHAKSLEWIGVIDTYYG DAGYNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCARRAGNAMDYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1175; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 17)
Región variable de cadena ligera 208A con la secuencia de señal ATGAAGTCACAGACCCAGGTCTTCGTATTTCTACTGCTCTGTGTGTCTGGTGCTCTTGGGAGTATTGTGATGA CCCAGACTCCCAAATTCCTGCTTGTATCAGCAGGAGACAGGGTCACCATAACCTGCAAGGCCAGTCAGAGTG TGAGTAATGATGTTGCTTGGTACCAACAGAAGCCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATATACTATGCATCCAAT CGCTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATATGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCACTG TGCAGGCTGAGGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGGATTATAGCTCTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCA CCAAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1176) MKSQTQVFVFLLLCVSGAHGNIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYT GVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPRTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1177; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 17)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 215A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 215A con la secuencia de señal ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCTGAGGTCCAGCTGCAG CAGTCTGGACCTGAGTTGGTGAAGCCTGGTGCTTCAATGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTTCTCTTTCA CTGGCTACACCATGAACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAACCTTGAGTGGATTGGACTTATTAGTCCTTA CAATGGTGGTACTAGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTAACTGTAGATAAGTCATCCAGCACA GCCTACATGGAGCTCCTCAGTCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAAGGGCCTACGGCT ATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1178) MGWSWIFLFLLSGTAGVHSEVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGFSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWIGLISPYN GGTSYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARRAYGYAMDYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1179; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 18)
Región variable de cadena ligera 215A con la secuencia de señal
ATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTAATCAGTGCCTCAGTCATACTGTCCAGAGGACAAATTGT TCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTC AAGTGTAAGTTACATGTTCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAGACTCCTGATTTATGACACATCCA ACCTGGCTTCTGGAGTCCCTCTTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCC GAATGGAGGCTGAGGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTTACCCATTCACGTTCGGCTCGG GGACAAAGTTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1180)
MDFQVQIFSFLLISASVILSRGQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMFWYQQKPGSSPRLLIYDTSNLAS GVPLRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSSYPFTFGSGTKLEIK (SEC ID N°: 1181; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 18)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 26A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 26A con la secuencia de señal
ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCTGAGGTCCAGCTGCAG CAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGTGCTTCAATGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTTCTCATTCA CTGGCTACACCATGAACTGGGTGAAGCAGAGCCATGTAAAGAACCTTGAGTGGATTGGACTTATTAGTCCTTA CAATGGTGGTACTAGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTAACTGTAGACAAGTCATCCAGCACA GCCTACATGGAGCTCCTCAGTCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAAGGGCCTACGGCT ATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1182)
MGWSWIFLFLLSGTAGVHSEVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGFSFTGYTMNWVKQSHVKNLEWIGLISPYN GGTSYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARRAYGYAMDYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1183; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 19)
Región variable de cadena ligera 26A con la secuencia de señal
ATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTAATCAGTGCCTCAGTCATACTGTCCAGAGGACAAATTGT TCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTC AAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAGACTCCTGATTTATGACACATCCA ACCTGGCTTCTGGAGTCCCTCTTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCC GAATGGAGGCTGAGGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTTACCCATTCACGTTCGGCTCGG GGACAAAGTTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1184)
MDFQVQIFSFLLISASVILSRGQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPGSSPRLLIYDTSNLAS GVPLRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSSYPFTFGSGTKLEIK (SEC ID N°: 1185; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 19)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 164A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 164A con la secuencia de señal
ATGGGATGGACCTGGATCTTTATTTTAATCCTGTCAGTAACTACAGGTGTCCACTCTGAGGTCCAGCTGCAGCA GTCTGGACCTGAGTTGGAGAAGCCTGGCGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTACTCATTCACT GGCTACAACATGAACTGGGTGAAGCAGAGCAATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAAATATTGATCCTTACT ATGGTAGTGCTAGCTACAACCAGAAATTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCACCACAGC CTACATGCAGCTCAAGAGCCTGACATCTGAAGACTCTGCAGTCTATTACTGTACAAGAAGTAATTATGGTTACTA CGGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1186)
MGWTWIFILILSVTTGVHSEVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYNMNWVKQSNGKSLEWIGNIDPYYG SASYNQKFKGKATLTVDKSSTTAYMQLKSLTSEDSAVYYCTRSNYGYYGYFDVWGAGTTVTVSS (SEC ID N°: 1187; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 20)
Región variable de cadena ligera 164A con la secuencia de señal
ATGGAATCACAGACTCAGGTCTTCCTCTCCCTGCTGCTCTGGGTATCTGGTACCTGTGGGAACATTATGATGA CACAGTCGCCATCATCTCTGGCTGTGTCTGCAGGAGAAAAGGTCACTATGAGCTGTAAGTCCAGTCAAAGTGT TTTATACAGTTCAAATCAGAAGAACTACTTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTG ATCTATTGGGCATCCACTAGGGAATCTGGTGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTTA CTCTTACTATCAGCAGTGTACAAGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCATCAATTCCTCTCCTCGTACACG TTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATGAAA (SEC ID N°: 1188)
MESQTQVFLSLLLWVSGTCGNIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLI YWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQFLSSYTFGGGTKLEMK (SEC ID N°: 1189; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 20)
Región variable de cadena ligera 164A número 2 con la secuencia de señal
ATGGATTTTCAGGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGTTAATCAGTGTCTCAGTCATAATGTCCAGAGGAGAAAATGT GCTGACCCAGTCTCCAGCAATCATGGCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCT CAAGTGTAAGTTCTAGTAACTTGCACTGGTACCAGCAGAAGTCAGGCACTTCTACCAAATTCTGGATTTATAGG ACATCCAACCTGGCTTCAGAAGTCCCAGCTCCCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTTACAA TCAGCAGCGTGGAGGCCGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTGGTTACCCACGGACGTTC GGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1190)
MDFQVQIFSFLLISVSVIMSRGENVLTQSPAIMAASPGEKVTMTCSASSSVSSSNLHWYQQKSGTSTKFWIYRTSN LASEVPAPFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYYCQQWSGYPRTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1191; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 20)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 230A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 230A con la secuencia de señal
ATGGGATGGACCTGGATCTTTATTTTAATCCTGTCAGTAACTACAGGTGTCCACTCTGAGGTCCAGCTGCAGCA GTCTGGACCTGAGCTGGAGAAGCCTGGCGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTACTCATTCAC TGGCTCCAACATGAACTGGGTGAAGCAGAACAATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAAATATTGATCCTTAC TATGGTTATACTACCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAG CCTACATGCAGCTCAAGAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGACTATGATTACGC CCTCGGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1191)
MGWTWIFILILSVTTGVHSEVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGSNMNWVKQNNGKSLEWIGNIDPYYG YTTYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMQLKSLTSEDSAVYYCARDYDYALGYFDVWGAGTTVTVSS (SEC ID N°: 1192; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 21)
Región variable de cadena ligera 230A con la secuencia de señal
ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTGTGATGACCC AAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCCTTGT ACACAGTAATGGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACA AAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCA AGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTTCTGCTCTCAAAGTACACATGTTCCGTACACGTT CGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1193)
MKLPVRLLVLMFWIPASSSDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVS NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1194; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 21)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 76E1 se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 76E1 con la secuencia de señal
ATGGGATGGACCTGGATCTTTATTTTAATCCTGTCAGTAACTACAGGTGTCCACTCTGAGGTCCAGCTGCTGCA GTCTGGACCTGAGCTGGAGAAGCCTGGCGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTACTCATTCAC TGGCTACAACATGAACTGGGTGAAGCAGAGCAATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAAATATTGATCCTTAC TATGATTATACTAGTTACAACCTGAAGTTCAAGGACAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGC CTACATGCAGCTCAAGAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAACCTCTACTATGATTACTC CCTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1195)
MGWTWIFILILSVTTGVHSEVQLLQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYNMNWVKQSNGKSLEWIGNIDPYYD YTSYNLKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLKSLTSEDSAVYYCATSTMITPFDYWGQGTTLTVSS (SEC ID N°: 1196; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 22)
Región variable de cadena ligera 76E1 con la secuencia de señal
ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTTTGATGACCC AAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGT ACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACA AAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCA AGATCAACAGAGTGGAGGCTGAAGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTGGACGTT CGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1197)
MKLPVRLLVLMFWIPASSSDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVS NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1198; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 22)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 53A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 53A con la secuencia de señal
ATGGAATGGAGTTGGATATTTCTCTTTCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCTGAGGTCCAGCTGCAGC AGTCTGGACCTGAGCTGGTAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCA CTAGCTATTTTATGCACTGGGTGAAGCAGAAGCCTGGGCAGGGCCTTGAGTGGATTGGATATATTTATCCTTAC AATGATGGTACTAAGTACAATGAGAAGTTCAAAGGCAAGGCCACACTGACTTCAGACAAATCCTCCAGCACAG CCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACCTCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATTTGATTACGACAC CCTGCGATACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1199)
MEWSWIFLFLLSGTAGVHSEVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYFMHWVKQKPGQGLEWIGYIYPYN DGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARFDYDTLRYWGQGTTLTVSS (SEC ID N°: 1200; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 23)
Región variable de cadena ligera 53A con la secuencia de señal
ATGAAGCTGCCTGTTCTGCTAGTGGTGCTGCTATTGTTCACGAGTCCAGCCTCAAGTAGTGATGTTGTTCTGA CCCAAACTCCACTCTCTCTGCCTGTCAATATTGGAGATCAAGCCTCTATCTCTTGCAAGTCTACTAAGAGTCTT CTGAATAGTGATGGATTCACTTATTTGGACTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCACAGCTCCTAATATA TTTGGTTTCTAATCGATTTTCTGGAGTTCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACAGATTTCACACTC AAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTTCCAGAGTAACTATTTTCCGTGGACGTT CGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1201)
MKLPVLLVVLLLFTSPASSSDVVLTQTPLSLPVNIGDQASISCKSTKSLLNSDGFTYLDWYLQKPGQSPQLLIYLVSN RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQSNYFPWTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1202; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 23)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 259A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 259A con la secuencia de señal
ATGGAATGGAGTTGGATATTTCTCTTTCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCTGAGGTCCAGCTGCAGC AGTCTGGACCTGAGCTGGTAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCA CTAGCTATTTTATGCACTGGGTGAAGCAGAAGCCTGGGCAGGGCCTTGAGTGGATTGGATATATTTATCCTTAC AATGATGGTACTAAGTACAATGAGAAGTTCAAAGGCAAGGCCACACTGACTTCAGACAAATCCTCCAGCACAG CCTACATGGACCTCAGCAGCCTGACCTCTGAAGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATTTGATTACGACAC CCTGCGATACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1203)
MEWSWIFLFLLSGTAGVHSEVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYFMHWVKQKPGQGLEWIGYIYPYN DGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMDLSSLTSEDSAVYYCARFDYDTLRYWGQGTTLTVSS (SEC ID N°: 1204; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 24)
Región variable de cadena ligera 259A con la secuencia de señal
ATGAAGCTGCCTGTTCTGCTAGTGGTGCTGCTATTGTTCACGAGTCCAGCCTCAAGTAGTGATGTTGTTCTGA CCCAAACTCCACTCTCTCTGCCTGTCAATATTGGAGATCAAGCCTCTATCTCTTGCAAGTCTACTAAGAGTCTT CTGAATAGTGATGGATTCACTTATTTGGACTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCACAGCTCCTAATATA TTTGATTTCTAATCGATTTTCTGGAGTTCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACAGATTTCACACTC AAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTTCCAGAGTAACTATTTTCCGTGGACGTT CGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1205)
MKLPVLLVVLLLFTSPASSSDVVLTQTPLSLPVNIGDQASISCKSTKSLLNSDGFTYLDWYLQKPGQSPQLLIYLISN RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQSNYFPWTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1206; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 24)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 33A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 33A con la secuencia de señal
ATGGAATGGACCTGGGTCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGTAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCAG CAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTC AGTAGCTACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCT GGAAGTGGTAGTACTAGCTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTCACTGCAGATACATCCTCCAACA CAGCCTACATGCAACTCAGCGGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGATGGTTACTATAT TACTATGCTATGGTCTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1207)
MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSSYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGS GSTSYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSGLTSEDSAVYYCARWLLYYYAMVYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1208; las CDR de Kabat están subrayadas; vertambién, tabla 25)
Región variable de cadena ligera 33A con la secuencia de señal
ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTTTGATGACCC AAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGT ACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACA AAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCA AGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTACACGTT CGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1209)
MKLPVRLLVLMFWIPASSSDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVS NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1210; las CDR de Kabat están subrayadas; vertambién, tabla 25)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 39A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 39A con la secuencia de señal
ATGGAATGGACCTGGGTCTGTCTCTTCCTCCTGTCAGTAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCAG CAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTC AGTAGTAACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCTG GAAGTGGCAGTACTAGCTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTCACTGCAGATACATCCTCCAACAC AGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAAGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGATGGTTACTATATT ACTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1211)
MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSSYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGS GSTSYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSGLTSEDSAVYYCARWLLYYYAMVYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1212; las CDR de Kabat están subrayadas; vertambién, tabla 26)
Región variable de cadena ligera 39A con la secuencia de señal
ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTTTGATGACCC AAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCCAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGT ACATAATAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACA AAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCA AGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTACACGTT CGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1213)
MKLPVRLLVLMFWIPASSSDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVS NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1214; las CDR de Kabat están subrayadas; vertambién, tabla 26)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 124A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 124A con la secuencia de señal
ATGGAATGGACCTGGGTCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGTAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCAG CAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTC AGTAGCAACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGATGGGAGAGATTTTACCT GGAAGTGGCAGTACTAGCTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTCACTGCAGATACATCCTCCAACA CAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAAGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGATGGTTACTATAT TACTATGCTATGGACTTCTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1215)
MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSSYWIEWVKQRPGHGLEWMGEILPG SGSTSYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSGLTSEDSAVYYCARWLLYYYAMVYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1216; las CDR de Kabat están subrayadas; vertambién, tabla 27)
Región variable de cadena ligera 124A con la secuencia de señal
ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTTTGATGACCC AAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGT ACATAATAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACA AAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCA AGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTACACGTT CGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1217)
MKLPVRLLVLMFWIPASSSDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVS NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1218; las CDR de Kabat están subrayadas; vertambién, tabla 27)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 175A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 175A con la secuencia de señal
ATGGAATGGACCTGGGTCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGTAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCAG CAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTC AGTACCCACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCT GGAAGTGGTAGTACTAGCTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTCACTGCAGATACATCCTCCAACA CAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGATGGTTACTATAT TACTAT GCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1219)
MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSTHWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGS GSTSYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARWLLYYYAMDYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1220; las CDR de Kabat están subrayadas; vertambién, tabla 28)
Región variable de cadena ligera 175A con la secuencia de señal
ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTTTGATGACCC AAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGT ACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACA AACTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCA AGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATTTTCCGTACACGTT CGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1221)
MKLPVRLLVLMFWIPASSSDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVS NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1222; las CDR de Kabat están subrayadas; vertambién, tabla 28)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 321D se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 321D con la secuencia de señal
ATGGAATGGACCTGGGTCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGTAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCAG CAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCGCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTC AGTAGCCACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCT GGAAGTGGTAGTACTGACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTCACTGCAGATACATCCTCCAACA CAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGATGGTTACTATAT TACTAT GCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEC ID N°: 1223)
MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSSYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGS GSTDYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSGLTSEDSAVYYCARWLLYYYAMVYWGQGTSVTVSS (SEC ID N°: 1224; las CDR de Kabat están subrayadas; vertambién, tabla 29)
Región variable de cadena ligera 321D con la secuencia de señal ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTTTGATGACCC AAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGT ACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACA AAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCA AGATCACCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTTCACGTT CGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1225) MKLPVRLLVLMFWIPASSSDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVS NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1226; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 29)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 141A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 141A con la secuencia de señal ATGGAATGGACCTGGGTCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGTAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCAG CAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTC AGTAGGTACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCT GGAAGTGGTAGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTCACTGCAGATACATCCTCCAACA CAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAGGAGAGGAAGTCTA TGATGGTTACCCCTGGTTTGGTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA (SEC ID N°: 1227) MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGS GSTNYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAGEEVYDGYPWFGYWGQGTLVTVSA (SEC ID N°: 1228; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 30)
Región variable de cadena ligera 141A con la secuencia de señal ATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTAATCAGTGCTTCAGTCATAATGTCCAGAGGACAAATTGTT CTCTCCCAGTCTCCAGCAATCCTGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACAATGACTTGCAGGGCCAGCTCA AGTTTAAGTTACATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATGCCACATCCA ACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCA GAGTGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCGTACACGTTCGGAGGGG GGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1229) MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSLSYMHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLAS GVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSSNPYTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1230; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 30)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 51A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 51A con la secuencia de señal ATGGAATGGACCTGGGTCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGTAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCAG CAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTC AGTAGGTACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCT GGAAGTGGTAGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTCACTGCAGATACATCCTCCAACA CAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGCGAGGAAGTCTA TGATGGTTACCCCTGGTTTGGTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA (SEC ID N°: 1231) MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGS GSTNYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAGEEVYDGYPWFGYWGQGTLVTVSA (SEC ID N°: 1232; las CDR de Kabat están subrayadas; vertambién, tabla 31)
Región variable de cadena ligera 51A con la secuencia de señal ATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTAATCAGTGCTTCAGTCATAATGTCCAGAGGACAAATTGTT CTCTCCCAGTCTCCAGCAATCCTGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACAATGACTTGCAGGGCCAGCTCA AGTTTAAGTTACATGCACTGGTACCAGCAGAGGCCAGGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATGCCACATCCA ACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCA GAGTGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCGTACACGTTCGGAGGGG GGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1233) MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSLSYMHWYQQRPGSSPKPWIYATSNLA SGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSSNPYTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1234; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 31)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 353A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 353A con la secuencia de señal ATGGATTTTGGGCTGATTTTTTTTATTGTTGCTCTTTTAAAAGGGGTCCAGTGTGAGGTGAAGCTTCTCGAGTC TGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTAG ATACTGGATGAATTGGGTCCGGCAGGCTCCAGGGAAAGGGCTAGAATGGATTGGAGAAATTAATCCAGATAGC AGTACGATAAACTATACGCCATCTCTAAAGGATAAATTCATCATCTCCAGAGACAACGCCAAAAATACGCTGTAC CTGCAAATGAGCAAAGTGAGATATGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTGCAAGACCGGGGGAAATTTATTACTA CGGTAGTTACTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA (SEC ID N°: 1235) MDFGLIFFIVALLKGVQCEVKLLESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSRYWMNWVRQAPGKGLEWIGEINPDSST INYTPSLKDKFIISRDNAKNTLYLQMSKVRYEDTALYYCARPGEIYYYGSYWFAYWGQGTLVTVSA (SEC ID N°: 1236; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 32)
Región variable de cadena ligera 353A con la secuencia de señal ATGGAGTCAGACACACTCCTGCTATGGGTGCTGCTGCTCTGGGTTCCAGGCTCCACTGGTGACATTGTGCTC ACCCAATCTCCAGCTTCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCAGAGAGCCACCATCTCCTGCAGAGCCAGTGAAAGT GTTGAATATTATGGCACAAGTTTAATGCAGTGGTTCCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTA TGCTGCATCCAACGTAGAATCTAGGGTCCCTGCCAGGTTTAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGCCT CAACATCCATCCTGTGGAGGAGGATGATATTGCAATGTATTTCTGTCAGCAAAGTAGGAAGGATCCTTGGACAT TCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA (SEC ID N°: 1237) MESDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVEYYGTSLMQWFQQKPGQPPKLLIYAAS NVESRVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDIAMYFCQQSRKDPWTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1238; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 32)
Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos para las regiones variables de cadena ligera y de cadena pesada del anticuerpo 305A se muestran a continuación:
Región variable de cadena pesada 305A con la secuencia de señal ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGTCTGATGTACAGCTTCAGGAGTC AGGACCTGGCCTCGTGAAACCTTCTCAGTCTCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCACCAGT GGTTATTACTGGAACTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAAACTGGAATGGATGGGCTACATAAGCTACGACG GTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAAAAATCGAATCTCCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCC TGAAGTTGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCTACATATTACTGTGCAAGACGGCATGATTACCTCTCCTTT GCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCATTGTCTCTGCA (SEC ID N°: 1239) MKVLSLLYLLTAIPGILSDVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQFPGNKLEWMGYISYDGSN NYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYYCARRHDYLSFAYWGQGTLVIVSA (SEC ID N°: 1240; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 33)
Región variable de cadena ligera 305A con la secuencia de señal ATGGAGACAGACACAATCCTGCTATGGGTGCTGCTGCTCTGGGTTCCAGGCTCCACTGGTGACATTGTGCTG ACCCAATCTCCAGCTTCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCAGAGGGCCACCATCTCCTGCAAGGCCAGCCAAAGT GTTGATTATGATGGTGATAGTTATATGAACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTA TGCTGCATCCAATCTAGAATCTGGGATCCCAGCCAGGTTTAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCT CAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCAAAGTGATGAGGATCCGTACACG TTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEC ID N°: 1241) METDTILLWVLLLWVPGSTGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIYAAS NLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSDEDPYTFGGGTKLEIK (SEC ID N°: 1242; las CDR de Kabat están subrayadas; ver también, tabla 33)
Se proporcionan en las tablas 12-33 las secuencias CDR para los veintidós anticuerpos monoclonales seleccionados y se utilizan para la preparación de anticuerpos anti-C10orf54 humanizados.
Ejemplo 4 - Preclasificación y mapeo de epítopos de anticuerpos anti-C10ORF54
La diversidad de parátopos de los 22 anticuerpos anti-C10orf54 humano de VH y VK se evaluó mediante el análisis de las secuencias de la región variable. La búsqueda IMGT/V-Quest (IMGT®, el international ImMunoGeneTics information system® http://www.imgt.org (fundador y director: Marie-Paule Lefranc, Montpellier, Francia)) de cada secuencia de nucleótidos se llevó a cabo, y se tabuló la secuencia del gen de la línea germinal con el más alto grado de identidad con respecto a la secuencia de consulta (tabla 37). Los anticuerpos con las mismas secuencias de genes de la línea germinal VH y VK se colocaron en el mismo grupo parátopo (tabla 37).
Tabla 37
Figure imgf000212_0002
Para investigar la diversidad de epítopos de anticuerpos anti-C10orf54 humano, las células 293t fueron transfectadas con 1 de 10 diferentes constructos expresión de C10orf54 que conjuntamente expresan un marcador fluorescente. Las proteínas C10orf54 y proteínas quiméricas codificadas por los constructos utilizados se muestran en la tabla 38. Dos días después de la transfección, las células se separan de la placa de cultivo de tejido, se tiñeron con anticuerpo anti-C10orf542 Dg / ml humano, se lavaron, se tiñeron con anticuerpo policlonal anti-IgG de ratón-Fc Alexa Fluor 647, se lavaron, y se tiñeron con el tinte de viabilidad 4',6-diamidino-2-fenilindol, dihidrocloruro. Tras la adquisición de 10.000 eventos en vivo en un citómetro de flujo, se analizaron células vivas marcadas con el marcador fluorescente para el grado de tinción por el anticuerpo anti-C10orf54 humano. Cuando el cambio de veces de la intensidad de fluorescencia media con relación a un anticuerpo de control de isotipo fue por lo menos 20 veces, el anticuerpo se consideró que tiñe el constructo de expresión de C10orf54 en cuestión. Los resultados de estos experimentos de preclasificación y la descripción de los depósitos de constructos se muestran en la tabla 39.
Tabla 38
Figure imgf000212_0001
* Dominio IgV de humano = aa33-169; dominio IgV de ratón = aa33-168; bucle de humano = aa84-116; bucle de ratón = aa84-116; Stalk humano = aa170-194; Stalk de ratón = aa169-192; dominio extracelular de humano (hECD) = aa33-194; dominio extracelular de ratón (mECD) 33-192
A continuación se muestran las secuencias de aminoácidos para proteínas C10orf54 y proteínas quiméricas codificadas por los constructos de expresión.
A continuación se muestra la secuencia de aminoácidos para proteína C10orf54 humana y mediante el constructo de expresión CC1:
MGVPTALEAGSWRWGSLLFALFLAASLGPVAAFKVATPYSLYVCPEGQNVTLTCRLLGPVDKGHDVTFYKTWYRS SRGEVQTCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEI RHHHSEHRVHGAMELQVQTGKDAPSNCVVYPSSSQDSENITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQAASNRRA QELVRMDSNIQGIENPGFEASPPAQGIPEAKVRHPLSYVAQRQPSESGRHLLSEPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPV PDSPNFEVI (SEC ID N°: 1079; C10orf54 del constructo 1 (CC1))
A continuación se muestra la secuencia de aminoácidos para proteína C10orf54 de ratón codificada mediante el constructo de expresión CC2:
MGVPAVPEASSPRWGTLLLAIFLAASRGLVAAFKVTTPYSLYVCPEGQNATLTCRILGPVSKGHDVTIYKTWYLSSR GEVQMCKEHRPIRNFTLQHLQHHGSHLKANASHDQPQKHGLELASDHHGNFSITLRNVTPRDSGLYCCLVIELKN HHPEQRFYGSMELQVQAGKGSGSTCMASNEQDSDSITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQVASHRRAQELV RMDSSNTQGIENPGFETTPPFQGMPEAKTRPPLSYVAQRQPSESGRYLLSDPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPVPD SPNSEAI (SEC ID N°: 1243; C10orf54 del constructo 2 (CC2))
A continuación se muestra la secuencia de aminoácidos para la proteína C10orf54 de rata codificada por el constructo de expresión CC3:
MGVPTVPEASSLRWGTLLLTIFLAASRGLVAAIKVTTPYSLYVCPEGQNVTLTCRILDSVSKGHDANFLKTWFLSSR GEVQVCKEHRPIRNFISHHQHHRSHPAVNASHDQPQKHGLEIAYDNHGNFSITLHNVTLSDSGLYCCLVIEVKHHH PERRLYGYMELQVQTGKGSASTCTAYPPNEQDSDSITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQAASHRRAQELVR MDSNTQGIENPGYETTPPFQGMPEAKTRPPLSYVAQRQPSESGRHLLSDPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPVPDSP NSEAI (SEC ID N°: 1244; C10orf54 del constructo 3 (CC3))
A continuación se muestra la secuencia de aminoácidos para la proteína C10orf54 de cinomolgo codificada por el constructo de expresión CC4:
MGVPTAPEAGCWRWGSLLFALFLAASLGPVAAFKVATLYSLYVCPEGQNVTLTCRVFGPVDKGHDVTFYKTWYRS SRGEVQTCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEI RHHHSEHRVHGAMELQVQTGKDAPSSCVAYPSSSQESENITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQAASNRRA QELVRMDSNTQGIENPGFEASSPAQGILEAKVRHPLSYVAQRQPSESGRHLLSEPGTPLSPPGPGDVFFPSLDPV PDSPNFEVI (SEC ID N°: 1245; C10orf54 del constructo 4 (CC4))
A continuación se muestra la secuencia de aminoácidos para la proteína quimérica codificada por el constructo de expresión CC5:
MGVPTALEAGSWRWGSLLFALFLAASLGPVAAFKVATPYSLYVCPEGQNVTLTCRLLGPVDKGHDVTFYKTWYRS SRGEVQTCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEI RHHHSEHRVHGAMELQVQAGKGSGSTCMASNEQDSDSITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQVASHRRAQE LVRMDSSNTQGIENPGFETTPPFQGMPEAKTRPPLSYVAQRQPSESGRYLLSDPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPVP DSPNSEAI (SEC ID N°: 1246; C10orf54 del constructo 5 (CC5) con secuencia humana subrayada)
A continuación se muestra la secuencia de aminoácidos para la proteína quimérica codificada por el constructo de expresión CC6 :
MGVPAVPEASSPRWGTLLLAIFLAASRGLVAAFKVTTPYSLYVCPEGQNATLTCRILGPVSKGHDVTIYKTWYLSSR GEVQMCKEHRPIRNFTLQHLQHHGSHLKANASHDQPQKHGLELASDHHGNFSITLRNVTPRDSGLYCCLVIELKN HHPEQRFYGSMELQVQTGKDAPSNCVVYPSSSQDSENITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQAASNRRAQE LVRMDSNIQGIENPGFEASPPAQGIPEAKVRHPLSYVAQRQPSESGRHLLSEPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPVPDS PNFEVI (SEC ID N°: 1247; C10orf54 del constructo 6 (CC6 ) con secuencia humana subrayada)
A continuación se muestra la secuencia de aminoácidos para la proteína quimérica codificada por el constructo de expresión CC7:
MGVPTALEAGSWRWGSLLFALFLAASLGPVAAFKVATPYSLYVCPEGQNVTLTCRLLGPVDKGHDVTFYKTWYRS SRGEVQTCKEHRPIRNFTLQHLQHHGSHLKANASHDQPQKHGLELASDHHGNFSITLRNVTPRDSGLYCCLVIEL KNHHPEQRFYGSMELQVQAGKGSGSTCMASNEQDSDSITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQVASHRRAQE LVRMDSSNTQGIENPGFETTPPFQGMPEAKTRPPLSYVAQRQPSESGRYLLSDPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPVP DSPNSEAI (SEC ID N°: 1248; C10orf54 del constructo 7 (CC7) con secuencia humana subrayada)
A continuación se muestra la secuencia de aminoácidos para la proteína quimérica codificada por el constructo de expresión CC8 :
MGVPAVPEASSPRWGTLLLAIFLAASRGLVAAFKVTTPYSLYVCPEGQNATLTCRILGPVSKGHDVTIYKTWYLSSR GEVQMCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEIR HHHSEHRVHGAMELQVQTGKDAPSNCVVYPSSSQDSENITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQAASNRRAQ ELVRMDSNIQGIENPGFEASPPAQGIPEAKVRHPLSYVAQRQPSESGRHLLSEPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPVPD SPNFEVI (SEC ID N°: 1249; C10orf54 del constructo 8 (CC8 ) con secuencia humana subrayada)
A continuación se muestra la secuencia de aminoácidos para la proteína quimérica codificada por el constructo de expresión CC9:
MGVPTALEAGSWRWGSLLFALFLAASLGPVAAFKVATPYSLYVCPEGQNVTLTCRLLGPVDKGHDVTFYKTWYRS SRGEVQTCKEHRPIRNFTLQHLQHHGSHLKANASHDQPQKHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEI RHHHSEHRVHGAMELQVQTGKDAPSNCVVYPSSSQDSENITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQAASNRRA QELVRMDSNIQGIENPGFEASPPAQGIPEAKVRHPLSYVAQRQPSESGRHLLSEPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPV PDSPNFEVI (SEC ID N°: 1250; C10orf54 del constructo 9 (CC9) con secuencia del ratón subrayada)
A continuación se muestra la secuencia de aminoácidos para la proteína quimérica codificada por el constructo de expresión CC10:
MGVPAVPEASSPRWGTLLLAIFLAASRGLVAAFKVTTPYSLYVCPEGQNATLTCRILGPVSKGHDVTIYKTWYLSSR GEVQMCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLELASDHHGNFSITLRNVTPRDSGLYCCLVIELK NHHPEQRFYGSMELQVQAGKGSGSTCMASNEQDSDSITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQVASHRRAQEL VRMDSSNTQGIENPGFETTPPFQGMPEAKTRPPLSYVAQRQPSESGRYLLSDPSTPLSPPGPGDVFFPSLDPVP DSPNSEAI (SEC ID N°: 1251; C10orf54 del constructo 10 (CC10) con secuencia humana subrayada)
Tabla 39
Figure imgf000214_0001
Los resultados de estos experimentos demuestran que los anticuerpos anti-C10orf54 como se describen en la presente memoria se unen a varios epítopos de C10orf54 humana, incluyendo aa33-169, aa84-169, aa115-169 y aa84-115.
Ejemplo 5 - Preparación de anticuerpos humanizados
Los anticuerpos de murino preparados como se describe en el ejemplo 3, se seleccionaron para su secuenciación. Los anticuerpos monoclonales seleccionados designados 76E1, 141A y 175Ase humanizaron por dos métodos como sigue. Estos resultados se muestran en las figuras 3-8.
En un primer método de humanización, la mayoría de aminoácidos en cada región determinante de complementariedad (CDR), previamente identificados, en la secuencia de dominio pesado variable (VH) y ligero variable (VL) fueron convertidos en alanina. La secuencia resultante para VH y VL como se muestra en la figura 9 fue utilizada como entrada para el algoritmo de identificación de subgrupos humanos en el sitio web del Dr. Andrew C.R. Martin www.bioinf.org.uk/abs/; este método es una derivación de Deret, S. et al SUBIM: a Program of Analysing the Kabat Database and Determining the Variability Subgroup of a new Immunoglobulin Sequence Comput Appl Biosci 11: 435-439 (1995). Los anticuerpos 76E1 VH, 141A Vh y 175A VH estaban más próximos al subgrupo VH humano I, 76E1 VL y VL 175A estaban más próximos subgrupo kappa Vl humano II y 141A VL estaba más próximo al subgrupo kappa Vl humano III. Para cada secuencia 76E1, 141A y 175A VH y VL de murino, una sola secuencia de línea germinal aceptora de VH o VL de humano se seleccionó de las correspondientes secuencias de la línea germinal del subgrupo humano y todas las secuencias de la región de unión humanas compiladas en IMGT® el international ImmunoGeneTics information system® www.imgt .org (fundador y director: Marie-Paule Lefranc, Montpellier, Francia).
En un segundo método de humanización (Carter et al., Proc Natl Acad Sci USA 89:4285-4289 (1992)), la línea germinal de subgrupo de Vh de humano III se utilizó como aceptor para las secuencias murinas de VH de 76E1 VH, 141A VH y 175AVH; subgrupo kappa I de VL de humano se utilizó como aceptor para 76E1 VL, 141A VL y 175A VL.
La alteración de las posiciones de la estructura de línea germinal humana (por ejemplo, residuos no CDR en VH y VL) respecto a la secuencia 76E1, 141A o 175A murina parental correspondiente podría ser necesaria para optimizar la unión del anticuerpo humanizado. Los cambios potenciales para cada secuencia humanizada se observan en las figuras 3-8. Los cambios potenciales en las secuencias CDR de los anticuerpos humanizados para aliviar las complicaciones debidas a desamidación de asparaginas expuestas a solvente, oxidación de metioninas expuestas a solvente y la formación de ácido isoaspártico también se observan en las figuras 3-8.
Se generaron modelos de gráficos por ordenador de los dominios VH y VL 76E1, 141A y 175A murinos para ayudar en la selección de residuos CDR y estructurales que podrían requerir la alteración. Se utilizó el programa Swiss-PdB Viewer (Guex, N y Peitsch, MC SWISS-MODEL y Swiss-PdBViewer: An environment for comparative protein modelling. Electrophoresis 18:2714-2723 Expasy website (1997). Las estructuras cristalinas de anticuerpos fueron tomadas del sitio web de Protein Data Bank (Berman, HM; Westbrook, J; Feng, Z; Gilliland, G; Bhat, t N; Weissig, H; Shindyalov, IN; Bourne PE, The Protein Data Bank Nucleic Acids Research 28:235-242 (2000). Las secuencias de los dominios VH y VL 76E1, 141A y 175A humanizados se muestran en las figuras 3-8.
Los anticuerpos anti-C10orf54 humanizados adicionales se preparan comprendiendo un dominio VH, dominio VL, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, y/o VL CDR3 como se muestra en las tablas 12-33. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales de murino seleccionados designados como 26A, 128A, 124A y 259A fueron humanizados por el siguiente método, cuyos resultados se muestran en las figuras 22A, 22B, 23A, 23b , 24A, 24B, 25A y 25B. Las secuencias CDR y secuencias VH/VL para anticuerpos que se designan como 26A, 128A, 124A y 259A se muestran en las tablas 19, 15, 27 y 24, respectivamente.
Las secuencias de VH y VL de cada anticuerpo monoclonal murino se utilizaron como entrada para el programa de IgBLAST en el sitio web NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/; Ye, J. et al. Nucleic Acids Research 41:W34-W40 (2013)). IgBLAST toma una secuencia murina VH o VL y la compara con una biblioteca de secuencias de la línea germinal humana conocida. Las bases de datos utilizadas fueron genes VH humanos IMGT (F ORF, 273 secuencias de línea germinal) y genes humanos de VLkappa IMGT (F ORF, 74 secuencias de línea germinal). IgBLAST devuelve las 10 mejores secuencias de línea germinal humana según puntuación.
Para todas las cuatro VH de 26A, 128A, 124A y 259A, la línea germinal humana IGHV1-46 (alelo 1) fue seleccionada como la secuencia de aceptor y la región de unión (gen J) de cadena pesada humana IGHJ4 (alelo 1) se seleccionó a partir de las secuencias de región de unión humanas compiladas en IMGT® el international ImMunoGeneTics informatin system® www.imgt.org (ver figuras 22A, 23A, 24A, y 25A).
Para 26A, la línea germinal humana IGKV43-11(alelo 1) fue seleccionada como la secuencia de aceptor y la región de unión (gen J) de cadena ligera humana IGKJ2 (alelo 1) se seleccionó a partir de las secuencias de región de unión humanas compiladas en IMGT® el international ImMunoGeneTics information system® www.imgt.org (ver figura 22B).
Para 128A VL, la línea germinal humana IGKV1-39 (alelo 1) se seleccionó como la secuencia de aceptor y la cadena ligera humana IGKJ2 (alelo 1) como la región de unión (gen J) (figura 23B).
Para 124A VL, la línea germinal humana IGKV2-30 (alelo 1) se seleccionó como la secuencia de aceptor y la cadena ligera humana IGKJ2 (alelo 1) como la región de unión (gen J) (figura 24B).
Para 259A VL, la línea germinal humana IGKV2-28 (alelo 1) se seleccionó como la secuencia de aceptor y la cadena ligera humana IGKJ2 (alelo 1) como la región de unión (gen J) (figura 25B).
Ejemplo 6 - actividad antitumoral
Los anticuerpos anti-C10orf54 fueron sometidos a prueba respecto a su actividad antitumoral en un modelo de tumor animal. Para estos estudios, la línea celular Kasumi-3 (leucemia mieloide aguda), fue obtenida de la ATCC (CRL-2725) y cultivadas según los protocolos de los proveedores. Los animales se obtuvieron de Taconic (Hudson, New York). Se realizaron estudios con anticuerpos anti-C10orf54 en un modelo de tumor animal.
En estos experimentos, se utilizaron ratones hembra inmunodeficientes NOD-SCID de 4-6 semanas de edad para el modelo de tumor Kasumi-3. Los ratones fueron inyectados por vía subcutánea en el flanco derecho con 1.2x106 células viables (Kasumi-3) en una mezcla de PBS (sin magnesio o calcio) y BD Matrigel (BD Biosciences) en una relación 1:1. El volumen total inyectado por ratón fue de 200|jl siendo 50% de Matrigel (BD Biosciences). Una vez que el tumor alcanzó un tamaño entre 65-200mm3 los ratones se asignaron al azar. Los anticuerpos se administran semanalmente a 15 mg/kg durante cuatro semanas, los pesos corporales y los tumores medidos una vez y dos veces por semana, respectivamente. El volumen del tumor se calculó como se ha descrito (van der Horst et al, 2009, Neoplasia 11 (4):355-364). Los experimentos se realizaron en grupos de por lo menos 8 animales por punto experimental.
La significación estadística entre los grupos de tratamiento y control se calculó utilizando el paquete de software Graphpad Prism y la aplicación de la prueba t-Student de dos colas. Se consideró un nivel de valor-p de 0.05 como estadísticamente significativo. Los resultados de tres experimentos ejemplificativos se muestran en la tabla 40. Para el experimento 1, los volúmenes tumorales en los que se inició el tratamiento fueron de 114.7 mm3 (día 96). Para el experimento 2, los volúmenes tumorales en los que se inició el tratamiento fueron de 114.7 mm3 (día 103). Para el experimento 3, los volúmenes tumorales en los que se inició el tratamiento fueron de 133 mm3 (día 34).
Tabla 40
Figure imgf000216_0001
Como se muestra en la figura 10 (ver asimismo, la tabla 40, experimento 1), el tratamiento con anticuerpo anti-C10orf54 induce una notable inhibición del crecimiento tumoral en tumores Kasumi-3 establecidos. Ninguno de los tratamientos de anticuerpo tuvo un efecto significativo en el peso corporal, lo que indica que el tratamiento de anticuerpo no fue tóxico. Como se muestra en la figura 11 (ver asimismo, tabla 40, experimento 3) el tratamiento de anticuerpo de nuevo con anticuerpo 175A induce una notable inhibición del crecimiento tumoral en tumores Kasumi-3 establecidos.
Ejemplo 7-Preparación y utilización de conjugados anticuerpo-fármaco
Se preparan y utilizan los conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) en ensayos secundarios de ADC y ensayos directos de ADC con anticuerpos para C10orf54, como se ilustra en el siguiente esquema A genérico ejemplificativo, en el que un grupo maleimida se une a través de un ligador (L) a una citotoxina (CTX):
Figure imgf000217_0001
(i) -(CH2)5-C(O)-; (ii) -(CH2)5-C(O)-valina-vitrulina; (iii) -(CH2)5-C(O)-valina-alanina; (iv) -(CH2)5-C(O)-valinacitrulina-fenilenilo, donde el fenilenilo se sustituye por 2 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en -C(O)OH y -NH2; (v) -(CH2)5-C(O)-valina-alanina-fenilenilo, donde el fenilenilo se sustituye por 2 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en -C(O)OH y -NH2; (vi) -(CH2CH2)-(CH2CH2O)4-C(O)-vaNna-citrulinafenilenilo, donde el fenilenilo se sustituye por 2 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en -C(O)OH y -NH2; o (vii) -(CH 2CH2)-(CH2CH2O)4-C(O)-valina-alanina-fenilenilo, donde el fenilenilo se sustituye por 2 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en -C(O)OH y -NH2.
Por ejemplo, según el esquema A anterior, L puede ser uno de los siguientes: (i) caproílo ("c"); (ii) caproílo-valinacitrulina ("cValCit"); (iii) alanina valina alanina ("cValAla"); (iv) caproílo-valina-citrulina-para aminobencilo («cValCit-PAB"); (v) caproílo-valina-alanina-para amimobencilo («cValAla-PAB"); (vi) (dPEG)4-valina-citrulina-para aminobencilo ("dPEG4- ValCit-PAB"); o (vii) (dPEG)4-valina-alanina-para aminobencilo ("dPEG4- ValAla-PAB").
Por ejemplo, cuando el conjugado anticuerpo-fármaco se prepara con un grupo de maleimido ("m"), unido a través del ligador a una citotoxina, CTX, como se ilustra en el esquema A, el conjugado anticuerpo-fármaco puede comprender uno de los siguientes: (i) caproílo ("mc"); (ii) caproílo-valina-citrulina ("mcValCit"); (iii) maleimidocaproílo-valina-alanina ("mcValAla"); (iv) maleimidocaproílo-valina-citrulina-para aminobencilo (“mcValCit-PAB"); (v) maleimidocaproílo-valina-alanina-para aminobencilo (“mcValAla-PAB"); (vi) maleimidocaproílo-(dPEG)4-valina-citrulina-para aminobencilo ("mdPEG4- ValCit-PAB"); o (vii) maleimidocaproílo-(dPEG)4-valina-alanina-para aminobencilo ("m-dPEG4-ValAla-PAB”).
Como se ilustra en los siguientes esquemas B-F, se puede preparar el conjugado anticuerpo-fármaco del esquema A anterior utilizando maleimidocaproílo-monometiloauristatina F ("mc-MMAF"), maleimidocaproílo-valina-citrulinapara aminobencilo-monometiloauristatina F ("mcValCit-PAB-MMAF"), maleimidocaproílo-valina-citrulina-para aminobencilo-monometiloauristatina E ("mcValCit-PAB-MMAE"), maleimidocaproílo-(dPEG)4-valina-citrulina-para aminobencilo-CC1065 ("dPEG m4- ValCit-PAB-CC1065"), o maleimidocaproílo-valina-alaninapirrolobenzodiacepina ("mcValAla-PBD") .
Los conjugados anticuerpo-fármaco ejemplificativos son preparados utilizando maleimidocaproílomonometiloauristatina F (mc-MMAF), como se ilustra en el siguiente esquema B, donde el grupo maleimida está conectado a través de un ligador (L = grupo caproílo) a una citotoxina (CTX = MMAF):
Figure imgf000219_0001
(por e jem plo, IgG con 4 Anticuerpo con tioles reducidos
puentes de d isu lfu ro
Figure imgf000219_0002
Los conjugados anticuerpo-fármaco ejemplifícateos son asimismo preparados utilizando maleimidocaproílo-valinacitrulina-para aminobencilo-monometiloauristatina F (mcValCit-PAB-MMAF), como se ilustra en el siguiente esquema C, donde el grupo maleimida está conectado a través de un ligador (L = caproílo-valina-citrulina-para aminobencilo) a una citotoxina (CTX = MMAF):
Figure imgf000220_0001
(por ejemplo, IgG con 4 Anticuerpo con tioles reducidos
puentes de disulfuro
Figure imgf000220_0002
Figure imgf000220_0003
ADC
Los conjugados anticuerpo-fármaco ejemplificativos son asimismo preparados utilizando maleimidocaproílo-valinacitrulina-para aminobencilo-monometiloauristatina E (mcValCit-PAB-MMAE), como se ilustra en el siguiente esquema D, donde el grupo maleimida está conectado a través de un ligador (L = caproílo-valina-citrulina-para aminobencilo) a una citotoxina (CTX = MMAE):
Figure imgf000221_0001
Los conjugados anticuerpo-fármaco ejemplifícateos son asimismo preparados utilizando maleimidocaproílol-(dPEG)4-valina-citrulina-para aminobencilo-CC1065 (m-dPEG4-ValCit-pAB-CC1065), como se ilustra en el siguiente esquema E, donde el grupo maleimida está conectado a través de un ligador (L = (dPEG)4-valina-citrulinapara aminobencilo) a una citotoxina (CTX = CC1065):
Figure imgf000222_0001
(p o r e je m p lo , IgG c o n 4 Anticuerpo con tioles reducidos
p u e n te s d e d is u lfu ro
in te rc a d e n a )
Figure imgf000222_0002
Esquema E: ADC
con m-dPEG4-ValCit-PAB-CC1065 c o n ju g a d o fá rm a c o - lig a d o r de
m l im i n v n i n l
Figure imgf000222_0003
En el esquema E, la estructura de la ciclofosfamida, CC1065, aparece en la esquina inferior izquierda del esquema, con una flecha que indica el punto de conexión (por ejemplo, vía el grupo amino libre en la molécula de CC1065) al grupo carbonilo de porción aminobenzoato del ligador.
Los conjugados anticuerpo-fármaco ejemplificativos son asimismo preparados utilizando maleimidocaproílovalina-alanina-pirrolobenzodiacepina (mc-ValAla-PBD), como se ilustra en el siguiente esquema F. donde el grupo maleimida está conectado a través de un ligador (L = caproílo-valina-alanina) a una citotoxina (CTX = PDB):
Figure imgf000223_0001
Anticuerpo Anticuerpo con tioles reducidos
(po r e jem p lo , IgG con 4
Figure imgf000223_0002
ADC
Los ADC de los esquemas B-F ejemplificativos se realizaron como sigue. En un tubo de eppendorf estéril de 1,7 ml, 20 mg de anticuerpo en concentración de 20 mg/ml en tampón fosfato salino (PBS) pH 7.4 (Gibco, Mg y Ca libre) se hacen reaccionar con 1mM de ácido dietilentriaminopentaacético (DTPA) como el quelante. Entonces 2,75 eq. de una solución de tris(2-carboxietilo) de clorhidrato de fosfina (TCEP HCl) (concentración de 0,5 M de ampolla de Sigma) o 50 pl de 100 mM de ditiotreitol (DTT) se añaden para una relación media de fármaco-anticuerpo (DAR) de 4 fármacos por anticuerpo y se incubaron a 37°C durante 1 hora, con el fin de presentar menos de 10% del anticuerpo total estando en el anticuerpo sin etiqueta o desnudo.
Se utiliza un ensayo colorimétrico de benzoato de ditiobisnitro (DTNB; reactivo de Ellman) para evaluar los tioles libres disponibles para la conjugación (Ellman et al., Biochemical Pharmacology 7:88-95 (1961)). La solución de anticuerpo reducido se enfrió en un baño de hielo a ~ 0°C durante 15 minutos. Después, se añadió conjugado ligador-citotoxina a la solución de anticuerpo reducido como sigue: (i) para el esquema B, se añadieron 60 pL de mc-MMAF de una solución madre de 10 mM en DMSO (9,74 mg en 1,074 ml de DMSO para 10 mM); (ii) para el esquema C, se añadieron 60 pL de McValCit-PAB-MMAF de una solución madre de 10 mM en DMSO (9,4 mg en 707 pl de DMSO para 10 mM); (iii) para el esquema D, se añadieron 60 pL de mcValCit-PAB-MMAE de una solución madre de 10 mM en DMSO (3,24 mg en 247 pl de DMSO para 10 mM); (iv) para el esquema E, se añadieron 60 pL de dPEG mc4- ValCit-PAB-CC1065 de una solución madre de 10 mM en DMSO (3,8 mg en 258 pl de DMSO para 10 mM); y (v) para el esquema F. se añadieron 60 pL de mc-ValAla-PBD de 10 mM de solución madre en DMSO. Una vez que el conjugado ligador-citotoxina se añade a la solución de anticuerpo reducida, la solución fue incubada en una placa de rodillos en un refrigerador a 4°C durante la noche (o alternativamente a 37°C durante 2 horas) para producir el ADC. El ensayo DTNB se repitió para demostrar no se encontraban tioles libres restantes (claro significa no tiol libre y un color amarillo indica tioles libres restantes y conjugación incompleta de carga útil). Se obtuvo la concentración del ADC mediante el espectrofotómetro NanoDrop. El ADC bruto se purificó utilizando separación de PD-10 SEC o cromatografía de SEC a través de una columna Superdex 200 que se eluye con un tampón de trabajo adecuado o tampón de formulación final. El ADC purificado se almacenó a 4°C.
Se utilizó el método HPLC de cromatografía de interacción hidrófoba (HIC) para determinar las cargas medias del fármaco de ADC a través de HPLC. En un sistema de bomba binaria de HPLC Agilent 1200 conectado a un espectrómetro de masas Agilent 6130b Electrospray, una columna Tosoh NPR Butil-C4 (2.1 mm x 75 mm) se ha ejecutado con un gradiente binario a 0.8 ml/min con detección de red de diodos UV-vis a 220 nm, 254 nm y 280 nm. La fase móvil A era 1,5 M sulfato de sodio en 1x PBS, la fase móvil B era 1 x PBS con 25% isopropanol que se ejecuta en un gradiente lineal de 0-100% para 10-12 volúmenes de columna con un equilibrado inicial de 5 minutos y un lavado de fase móvil B al 100% de 5 minutos al final de cada serie de HPLC. El anticuerpo no marcado o desnudo se eluyó primero en el gradiente lineal con picos que representan el aumento de cargas medias de fármaco con el fin de hidrofobicidad que correlaciona con el aumento de carga de anticuerpo con cargas útiles. Los tiempos de retención del anticuerpo desnudo se confirmaron a través de la ejecución de una inyección estándar de 20DL de una solución madre de 1 mg/ml del anticuerpo. La coelución del anticuerpo desnudo y ADC definitivamente confirmó las cantidades relativas de cada uno.
La figura 12 muestra los resultados de un ensayo ADC secundario utilizando anticuerpos anti-C10orf54 en un ensayo de viabilidad celular utilizando una línea de sarcoma que expresa C10orf54. Los anticuerpos anti-C10orf54 se incubaron en una relación 2:1 con un anticuerpo antirratón de cabra secundario conjugado con MMAF. Las células se colocaron en placas a 1000 células /pocillo y se incubaron en presencia de anticuerpos durante 72 horas. Las células de sarcoma que expresan C10orf54 fueron destruidas por los anticuerpos anti-C10orf54 probados de una manera dependiente de la concentración.
Las figuras 13-14 muestran la actividad de los anticuerpos no conjugados y anti-C10orf54 directamente conjugados con MMAE en ensayos de viabilidad celular utilizando líneas de sarcoma que expresan C10orf54. Para estos ensayos, las células pueden colocarse en placas en un número variable en los pocillos y se incuban durante varios tiempos en presencia o ausencia de anticuerpos anti-C10orf54 y ADC. Por ejemplo, para los ensayos mostrados en la figura 13, las células se colocaron en placas a 1000 células/pocillo y se incubaron en presencia de anticuerpos durante 72 horas. En estos ensayos in vitro basados en células, los anticuerpos anti-C10orf54 conjugados de MMAF destruyeron a las células de sarcoma de una manera dependiente de la concentración.
La figura 15 muestra los resultados del tratamiento con anticuerpos anti-C10orf54 y ADC (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 conjugados de MMAF y no conjugados) en un modelo de tumor animal (por ejemplo, xenoinjerto), con líneas de sarcoma parentales y que expresan C10orf54
Ejemplo 8 - Preparación y utilización de conjugados anticuerpo-fármaco adicionales
Los conjugados anticuerpo-fármaco adicionales de la fórmula (la) o (Ib) de la presente divulgación se pueden preparar como se ilustra con fórmula (la) en el siguiente esquema G con la fórmula (Ib) en el siguiente esquema H para:
Figure imgf000225_0001
Anticuerpo Anticuerpo con tio les reducidos
(por
pue
Figure imgf000225_0002
conjugado citotoxina-ligador
E m : AD f rm l l
Figure imgf000225_0003
ADC
Figure imgf000226_0001
Anticuerpo Anticuerpo con tioles reducidos
(por ejemplo, IgG con 4
puentes de disulfuro
intercadena)
b-( L 1)a-( L 2 )b-( L 3)c-C T X
Figure imgf000226_0002
ado citotoxina-ligador
E m H: AD f rm l I
Figure imgf000226_0003
ADC
Los conjugados anticuerpo-fármaco adicionales de la presente divulgación se pueden preparar, en los que los conjugados anticuerpo-fármaco son según la fórmula (Ic1):
Figure imgf000227_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
en los que:
A es un anticuerpo, en los que el anticuerpo en un anticuerpo anti-C10orf54, u opcionalmente, un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado;
los dos residuos de cisteína representados son de un enlace disulfuro abierto de cisteína-cisteína en A; L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster; y
n es un número entero de 1 a 4.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) son preparados en los que CTX es monometilauristatina F (MMAF), L es -(CH 2)5C(O)-, y n is 4.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) son preparados en los que el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente:
Figure imgf000227_0002
en el que A es un anticuerpo anti-C10orf54, opcionalmente un anticuerpo humanizado anti-C10orf54; y n es 4. Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) son aquellos en los que CTX es monometilauristatina E (MMAE), L es -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH 2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, y n es 4.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) son los que presentan la fórmula siguiente: en los que A es un anticuerpo anti-C10orf54, opcionalmente un anticuerpo humanizado anti-C10orf5, y n es 4. Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) son aquellos en los que CTX es pirrolobenzodiacepina (PDB), L es -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH 2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, y n es 4.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) son los que presentan una de las siguientes fórmulas:
Figure imgf000228_0002
Los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) son preparados utilizando unos conjugados ligadorcitotoxina de la siguiente fórmula (IIa):
Figure imgf000228_0001
CTX
(IIa);
o un enantiómero, diastereoisómero o mezclas de los mismos;
en los que:
L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (porejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa), en la que CTX es MMAF, y L es -(CH 2)5C(O)-.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina que presenta la estructura siguiente:
Figure imgf000229_0001
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (porejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa), en la que CTX es MMAE, y L es -(C H 2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina que presenta la estructura siguiente:
Figure imgf000229_0002
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (porejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIa), en la que CTX es PDB, y L es -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-, -(CH 2)5C(O)-Val-Cit-, -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH 2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic1) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina que presenta una de las siguientes estructuras:
Figure imgf000230_0001
Los conjugados anticuerpo-fármaco adicionales de la presente divulgación se pueden preparar, en los que los conjugados anticuerpo-fármaco son según la fórmula (Ic2):
Figure imgf000230_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
en los que:
A es un anticuerpo, en los que el anticuerpo en un anticuerpo anti-C10orf54, u opcionalmente, un anticuerpo anti-C10orf54 humanizado;
los dos residuos de cisteína representados son de un enlace disulfuro abierto de cisteína-cisteína en A; L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster; y
n es un número entero de 1 a 4.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (IC1) se preparan en los que CTX es monometilauristatina F (MMAF), L es -(CH 2)5C(O)-, y n es 4.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) son preparados en los que el conjugado anticuerpo-fármaco presenta la fórmula siguiente:
Figure imgf000231_0001
en el que A es un anticuerpo anti-C10orf54, opcionalmente un anticuerpo humanizado anti-C10orf54; y n es 4. Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) son aquellos en los que CTX es monometilauristatina E (MMAE), L es -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH 2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, y n es 4.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) son los que presentan la siguiente fórmula:
Figure imgf000231_0002
en los que A es un anticuerpo anti-C10orf54, opcionalmente un anticuerpo humanizado anti-C10orf54; y n es 4. Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) son aquellos en los que CTX es pirrolobenzodiacepina (PDB), L es -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH 2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, y n es 4.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) son los que presentan una de las siguientes fórmulas:
Figure imgf000232_0001
Los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) se preparan usando conjugados ligador-citotoxina de una de las siguientes fórmulas (IIb) y (IIc):
Figure imgf000232_0002
o un enantiómero, diastereoisómero o mezclas de los mismos;
en los que:
L es un ligador escindible o no escindible; y
CTX es una citotoxina unida a L por un enlace amida, un enlace carbamato, un enlace disulfuro, un enlace éter, un enlace tioéter, o un enlace éster.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (porejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIb) o (IIc), en la que CTX es MMAF, y L es -(CH2)5C(O)-.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina que presenta una de las siguientes estructuras:
Figure imgf000233_0001
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) se prepararon con anticuerpos anti-16orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIb) o (IIc), en la que CTX es MMAE, y L es -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-. Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina que presenta una de las siguientes estructuras:
Figure imgf000233_0002
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina de la fórmula (IIb) o (IIc), en los que CTX es PDB, y L es -(CH 2)5C(O)-Val-Ala-, -(CH 2)5C(O)-Val-Cit-, -(C H 2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, o -(CH 2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
Por ejemplo, los conjugados anticuerpo-fármaco de la fórmula (Ic2) se prepararon con anticuerpos anti-C10orf54 (por ejemplo, anticuerpos anti-C10orf54 humanizados) utilizando el conjugado ligador-citotoxina que presenta una de las siguientes estructuras:
Figure imgf000234_0001
Los conjugados anticuerpo-fármaco, como se describe en este ejemplo y en la presente memoria, se preparan en los que se conjugan uno o más enlaces disulfuro intercatenarios del anticuerpo (por ejemplo, cuatro enlaces disulfuro intercatenarios en los esquemas F y G anteriores ejemplificativos). Los conjugados anticuerpo-fármaco, en los que se conjugan una o más de los enlaces disulfuro intracatenarios del anticuerpo, como se describe en la presente memoria, presentan una relación anticuerpo a fármacos preferida de cuatro.
Los experimentos de viabilidad celular se realizaron con líneas celulares humanas de AML, tales como OCI/AML3, PL21 y P31/FUJ. Para los ensayos primarios de ADC, las líneas celulares mieloides fueron pasadas rutinariamente en medios RPMI o MEM (LifeTech) suplementados con suero de ternera fetal de 10-20% (LifeTech). Para someter a ensayo la toxicidad, las células se sembraron en placas de 384 pocillos (Greiner) a 3.000 células por pocillo en 50 |jL de medio.
Para los ensayos primarios de ADC, los anticuerpos anti-C10orf54s conjugados con DBM (C6 ) MMAF son diluidos en serie de 100-300 nM en RPMI y se añaden a los pocillos apropiados en duplicado utilizando un controlador de líquido iPipette (Apricot Designs). Placas de células se incuban a continuación durante tres días, seguido de lisis en el reactivo de ensayo Cell-Titer Glo (Promega).
Para los ensayos primarios de ADC, la luminescencia es cuantificada en un lector de placas de sinergia HT (BioTek) y se dispone en un gráfico. Se calculan las IC50 ajustándose al ajuste sigmoidal de cuatro parámetros (GraphPad). Los resultados de los ensayos de ADC primarios ejemplificativos que utilizan tres líneas de células mieloides se muestran como valores de IC50 (nM) en la tabla 41. Por ejemplo, los ADC representados en la tabla 41 se generaron conjugando las variantes humanizadas de los anticuerpos al ligador-toxina de DBM-(C6 )-MMAF, como se describe en este ejemplo 8. Los resultados indican que la línea celular OCI/AML3 y P31/FUJ eran sensibles a los ADC anti-C10orf54, mientras que la línea celular PL21 fue menos sensible.
Tabla 41
Figure imgf000235_0001
Los aspectos de la presente divulgación descritos anteriormente, pretenden ser únicamente ejemplificativos, y los expertos en la materia en la materia reconocerán, o serán capaces de determinar utilizando únicamente la experimentación rutinaria, numerosos equivalentes a los procedimientos específicos descritos en la presente memoria. Todos estos equivalentes se consideran dentro del alcance de la presente divulgación divulgación y están cubiertos por las reivindicaciones siguientes. Además, como se utiliza en la presente memoria y las reivindicaciones, las formas singulares «un/una", "uno/una» y «el/la» incluyen formas plurales a menos que el contenido indique lo contrario de manera clara. Así, por ejemplo, la referencia a “un anticuerpo” incluye una mezcla de dos o más de tales anticuerpos, y similares. Además, los expertos ordinarios en la materia reconocerán que las secuencias operacionales deben ser establecidas en un mismo orden específico para el propósito de explicación y reivindicación, pero la presente divulgación contempla diversos cambios más allá de tal orden específico.
Ejemplo 9 - Ensayos funcionales
Con el fin de identificar las condiciones óptimas de cultivo y activación de las células T naturales en la medida en que esta activación puede revertirse por la administración de anticuerpos anti-C10orf54, se llevaron a cabo los siguientes experimentos. Una vez determinadas las condiciones óptimas, pueden utilizarse en el cribado de anticuerpo anti-C10orf54 adicional, tales como los descritos en la presente memoria. Se han determinado las concentraciones óptimas de anticuerpos anti-CD3, anticuerpos anti-CD28, C10orf54-Fc y células T
CellTiter-Glo, un ensayo de viabilidad celular luminiscente, se utilizó para determinar la viabilidad de las células T cultivadas en distintas condiciones. La activación de células T se consiguió mediante un revestimiento previo de las placas con anticuerpos anti-CD3, seguido de coestimulación con anticuerpos anti-CD28 en solución. Las condiciones de partida se basaron en los datos presentados por Wang et al., Biofunctions of three new B7 family members, https://www.mdsystems.com (10 de diciembre de 2015).
La concentración de células T parece ser importante para la estimulación dependiente de anti-CD3/anti-CD28 de las células T Sólo la cantidad más elevada probada, 50.000 células por pocillo de placa de 384 pocillos, demostró tal dependencia y fue utilizada para todas las otras etapas. La concentración de anticuerpos anti-CD3 mínima, en la que se logró la activación próxima al máximo nivel, era 5 ug/ml. A la definida concentración de anticuerpo anti-CD3, se observó un impacto de C10orf54-Fc dependiente de la concentración en la proliferación del células T Con una activación más fuerte lograda por perlas magnéticas de CD2/CD3/CD28, el efecto no fue observado.
La concentración mínima de anticuerpos anti-CD28, en la que se logró la proliferación de células T próxima al nivel máximo, se demostró que era de aproximadamente 3-4 ug/ml. El impacto dependiente de la concentración de C10orf54-Fc sobre proliferación de células T se observó en todo el intervalo probado de anticuerpo anti-CD28. Así, se ha seleccionado un punto de 3.2 ug/ml para las etapas posteriores.
Las pan-células T se comportaron semejantemente a las células T sin tratamiento previo. Sin embargo, las células T sin tratamiento previo fueron más sensibles a la inhibición de C10orf54-Fc que las pan-células T (figuras 30A-30C).
En resumen, sobre la base del análisis anterior, las condiciones optimizadas para cultivo y activación de células T sin tratamiento previo son 5 ug/ml de anticuerpos anti-CD3 y 3.2 ug/ml de anticuerpos anti-CD28. El nivel moderado de activación hizo posible revertir esta activación mediante la administración de C10orf54-Fc, haciendo este análisis útil para la evaluación de anticuerpos anti-C10orf54.
Se realizaron ensayos in vitro adicionales, como se describe a continuación para determinar si los anticuerpos anti-C10orf54 inducían estimulación de células T
Los anticuerpos anti-C10orf54 descritos en la presente memoria fueron inmovilizados en una placa en concentraciones variables. Las células T sin tratamiento previo fueron estimuladas por la adición de anticuerpos anti-CD28 solubles en una concentración de 5 pg/ml y la puesta en contacto de las células T sin tratamiento previo con anticuerpos anti-CD3 inmovilizados en una concentración de 3.2 pg/ml en la misma placa como los anticuerpos anti-C10orf54. El aumento de la estimulación de células T fue monitoreada por la secreción de IL-2, la secreción de IFN-y y la incorporación de 3H-timidina (un indicador de la proliferación celular).
Los efectos de los anticuerpos anti-C10orf54 en la estimulación de células T se resumen en la tabla 42 a continuación.
Tabla 42
Figure imgf000236_0001
Aún más, se realizaron ensayos in vitro, como se describe a continuación para determinar si los anticuerpos anti-C10orf54 inducían proliferación de células T.
El constructo C10orf54-Fc, como se describe anteriormente, fue inmovilizado en una placa en concentraciones variables. Como control positivo, un constructo IgG-Fc también fue inmovilizado en una placa separada. Las células T sin tratamiento previo fueron estimuladas por la adición de anticuerpos anti-CD28 solubles en una concentración de 5 pg/ml y la puesta en contacto de las células T sin tratamiento previo con anticuerpos anti-CD3 inmovilizados en una concentración de 3.2 pg/ml en la misma placa como el constructo C10orf54-Fc o el control IgG-Fc. Adicionalmente, los anticuerpos anti-C10orf54 solubles (26A o 175A descritos en la presente memoria) fueron agregados para aumentar adicionalmente la estimulación de células T El aumento de la estimulación células T fue monitoreada por la secreción de IL-2, la secreción de IFN-y y la incorporación de 3H-timidina (un indicador de la proliferación celular).
El anticuerpo anti-C10orf54 26A atenuó la supresión mediada por C10orf54 de proliferación de células T sin tratamiento previo, así como la secreción de IL-2 e IFN-y. Estos resultados se muestran en la figura 29.
Se realizaron aún unos ensayos adicionales in vitro como se describe a continuación para determinar si C10orf54 inhibe la estimulación de células T en células T sin tratamiento previo, células T CD4+ y células T CD8 +.
El constructo C10orf54-Fc, como se describe anteriormente, fue inmovilizado en una placa en concentraciones variables. Como control positivo, un constructo IgG-Fc también fue inmovilizado en una placa separada. Las células T fueron estimuladas por la adición de anticuerpos anti-CD28 solubles en una concentración de 5 pg/ml y la puesta en contacto de las células T con anticuerpos anti-CD3 inmovilizados en una concentración de 3.2 pg/ml en la misma placa como el constructo C10orf54-Fc o el control IgG-Fc. La inhibición de la estimulación de células T fue monitoreada por la incorporación de 3H-timidina (un indicador de la proliferación celular).
El constructo C10orf54-Fc inmovilizado en una concentración de 10 pg/ml inhibe las células T sin tratamiento previo estimuladas con anti-CD3/anti-CD28, así como inhibe las células T CD4+ o CD8 +, como se mide por la incorporación de 3H-timidina. Estos resultados se muestran en la figura 28. En ensayos adicionales, los anticuerpos anti-Cl0orf54, tal como 26A, se agregan al ensayo para atenuar la supresión mediada por C10orf54 de células T sin tratamiento previo, células T CD4+ o células T c D8 +.

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Anticuerpo monoclonal, humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende las 6 CDR del anticuerpo, comprendiendo dicho anticuerpo:
- un dominio variable de cadena pesada de las tres CDR siguientes, respectivamente CDR-H1 que presenta la secuencia SEC ID N° 1296, CDR-H2 que presenta una secuencia seleccionada de entre SEC ID N° 1358, SEC ID N° 1556, SEC ID N° 1557, SEC ID N° 1558, y SEC ID N° 1559, y CDR-H3 que presenta la secuencia SEC ID N° 1393; y
- un dominio variable de cadena ligera de las tres CDR siguientes, respectivamente CDR-L1 que presenta la secuencia SEC ID N° 1435, CDR-L2 que presenta una secuencia seleccionada de entre s Ec ID N° 1476, SEC ID N° 1630, SEC ID N° 1631, SEC ID N° 1632, y SEC ID N° 1633, y CDR-L3 que presenta la secuencia SEC ID N° 1499.
2. Anticuerpo según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es un fragmento Fab, fragmento F(ab')2, Fv monocatenario (sFv), diacuerpo, triacuerpo o minicuerpo.
3. Conjugado anticuerpo-fármaco que comprende el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 conjugado a un agente citotóxico.
4. Polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2.
5. Vector de expresión que comprende el polinucleótido según la reivindicación 4.
6. Célula hospedadora que comprende el vector de expresión según la reivindicación 5.
7. Método de producción del anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 , comprendiendo dicho método una etapa de cultivar la célula hospedadora según la reivindicación 6 bajo unas condiciones que promueven la producción del anticuerpo.
8. Composición farmacéutica que comprende el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 o el conjugado anticuerpo-fármaco según la reivindicación 3, y un diluyente, portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
9. Composición farmacéutica según la reivindicación 8 para la utilización en el tratamiento o la prevención del cáncer.
10. Composición farmacéutica para la utilización según la reivindicación 9, en la que el cáncer es una leucemia, preferentemente leucemia mieloide aguda (AML), un cáncer de vejiga, un cáncer de la piel, un cáncer de colon, un cáncer de mama, un cáncer hepático, un cáncer renal, un cáncer pulmonar, un cáncer gástrico, un cáncer pancreático, un cáncer esofágico o un fibrosarcoma.
11. Método para detectar C10orf54 en una muestra que comprende poner en contacto la muestra con el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2.
12. Kit que comprende el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2.
13. Kit según la reivindicación 12, en el que dicho anticuerpo se conjuga a un sustrato detectable.
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