KR20230132603A - Psgl-1 길항제 및 그의 용도 - Google Patents

Psgl-1 길항제 및 그의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20230132603A
KR20230132603A KR1020237029602A KR20237029602A KR20230132603A KR 20230132603 A KR20230132603 A KR 20230132603A KR 1020237029602 A KR1020237029602 A KR 1020237029602A KR 20237029602 A KR20237029602 A KR 20237029602A KR 20230132603 A KR20230132603 A KR 20230132603A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
vista
psgl
thr
antibody
ala
Prior art date
Application number
KR1020237029602A
Other languages
English (en)
Inventor
로버트 제이. 존스턴
아라티 크리쉬나쿠마르
폴 오. 셰퍼드
아르빈드 라즈팔
앤드류 란킨
Original Assignee
브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니, 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. filed Critical 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Publication of KR20230132603A publication Critical patent/KR20230132603A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6845—Methods of identifying protein-protein interactions in protein mixtures
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/32—Fusion polypeptide fusions with soluble part of a cell surface receptor, "decoy receptors"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

PSGL-1 길항제를 확인하고 사용하는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 암을 치료하는 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. PSGL-1 길항제는 PSGL-1에 결합하는 항체 및 VISTA에 결합하는 항체 (여기서 항체는 예를 들어 산성 pH (예를 들어, pH 6.0)에서 VISTA에 대한 PSGL-1 결합을 억제함), 뿐만 아니라 PSGL-1 및 VISTA 세포외 도메인 폴리펩티드에 결합하는 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

Description

PSGL-1 길항제 및 그의 용도{PSGL-1 ANTAGONISTS AND USES THEREOF}
기술 분야
PSGL-1 길항제를 확인하고 사용하는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 암을 치료하는 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. PSGL-1 길항제는 PSGL-1에 결합하는 항체 및 VISTA에 결합하는 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 항체는 예를 들어 산성 pH (예를 들어, pH 6.0)에서 VISTA에 대한 PSGL-1 결합을 억제한다.
서열 목록
본 출원은 전자 포맷의 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 2018년 1월 10일에 생성된, 49,152 바이트 크기의 "2018-01-10_01134-0058-00PCT_Final_Seq_List_ST25.txt"라는 제목의 파일로서 제공된다. 전자 포맷의 서열 목록 내 정보는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
T 세포 활성화의 V-영역 이뮤노글로불린-함유 억제자 (VISTA)는 T 세포의 활성을 음성적으로 조절하는 세포 표면-발현된 단백질이다 (Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577). VISTA는 단일 세포외 IgV 도메인을 갖는 단일 통과 제I형 막횡단 단백질이다. 두드러지게, VISTA의 세포외 도메인은 면역 반응을 조정하는 데 있어서 또한 역할을 하는 B7 패밀리 구성원 예컨대 PDL1에 대한 상동성을 보유한다 (Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577). VISTA 발현은 조혈 세포에 제한되고, 단핵구, T 세포 및 수지상 세포의 분획 상에 존재한다 (Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577 & Flies et al., 2011, JI 187:1537). 시험관내에서 VISTA:Ig를 사용한 치료는 CD4+ T 세포에 의한 증식 및 시토카인 생산을 억제한다 (Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577). VISTA 특이적 모노클로날 항체는 VISTA-발현 수지상 세포에 의해 제시된 항원에 반응하여 증진된 T 세포 분열을 도출할 수 있다 (Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577). 항-VISTA 모노클로날 항체를 사용한 종양-보유 동물의 생체내 치료는 종양 성장을 억제한 면역 매개 항종양 반응을 도출하였다 (Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577). 집합적으로, 이들 결과는 T-세포 유도된 면역 반응 예컨대 면역 매개 종양 거부 동안 관찰된 것의 조절제로서의 VISTA의 중요성을 강조한다. VISTA에 대한 동족 결합 파트너는 현재 알려지지 않았다.
VISTA에 대한 결합 파트너의 확인은 T 세포 활성화의 VISTA-매개 억제의 이해를 보조하고, 치료상 유효하고 안전한 치료제, 환자 선택 및 동반 진반을 위한 바이오마커, 조합 요법을 위한 표적, 및 암 면역요법제를 개발하기 위한 새로운 표적의 선택을 포함하여, 약물 개발에 많은 이점을 제공할 것이다.
일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제를 확인하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 후보 분자를 VISTA 분자 (예를 들어, 성숙 VISTA 단백질 또는 그의 단편) 및 PSGL-1 분자 (예를 들어, 성숙 PSGL-1 단백질 또는 그의 단편)와 접촉시키는 것을 포함하며, 여기서 VISTA 분자는 VISTA, VISTA 세포외 도메인 ("ECD"), 또는 VISTA ECD 융합 분자 (예를 들어, 신호 서열을 배제함; 즉, 성숙 VISTA 또는 그의 단편)를 포함하고, PSGL-1 분자는 PSGL-1, PSGL-1 ECD, 또는 PSGL-1 ECD 융합 분자 (예를 들어, 신호 서열을 배제함; 즉, 성숙 PSGL-1 또는 그의 단편)를 포함하며, 여기서 접촉은 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 발생한다. 일부 실시양태에서, 방법은 예를 들어 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 후보 분자, VISTA 분자, 및 PSGL-1 분자를 포함하는 조성물을 형성하는 것을 포함하며, 여기서 VISTA 분자는 VISTA, VISTA ECD, 또는 VISTA ECD 융합 분자를 포함하고, PSGL-1 분자는 PSGL-1, PSGL-1 ECD, 또는 PSGL-1 ECD 융합 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합을 검출하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 후보 분자의 부재 하의 VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합과 비교하여 후보 분자의 존재 하의 VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합의 감소는 후보 분자가 PSGL-1 길항제라는 것을 나타낸다. 일부 실시양태에서, VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합은 후보 분자의 존재 하에 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 또는 적어도 80%만큼 감소한다. 일부 실시양태에서, VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합은 표면 플라즈몬 공명, ELISA, 증폭된 발광 근접 동질 검정 (ALPHA), 및 유동 세포측정법으로부터 선택되는 방법에 의해 검출된다.
본원에 기재된 PSGL-1 길항제를 확인하는 방법 중 임의의 것에서, PSGL-1 길항제는 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 VISTA에 결합하는 항체일 수 있다. 본원에 기재된 PSGL-1 길항제를 확인하는 방법 중 임의의 것에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1에 결합하는 항체일 수 있다. 본원에 기재된 PSGL-1 길항제를 확인하는 방법 중 임의의 것에서, PSGL-1 길항제는 소분자일 수 있다. 본원에 기재된 PSGL-1 길항제를 확인하는 방법 중 임의의 것에서, PSGL-1 길항제는 소형 펩티드일 수 있다.
일부 실시양태에서, VISTA 항체가 PSGL-1 길항제인지 결정하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 VISTA 항체를 VISTA 분자 및 PSGL-1 분자와 접촉시키는 것을 포함하며, 여기서 VISTA 분자는 VISTA, VISTA ECD, 또는 VISTA ECD 융합 분자를 포함하고, PSGL-1 분자는 PSGL-1, PSGL-1 ECD, 또는 PSGL-1 ECD 융합 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 VISTA 항체, VISTA 분자, 및 PSGL-1 분자를 포함하는 조성물을 형성하는 것을 포함하며, 여기서 VISTA 분자는 VISTA, VISTA ECD, 또는 VISTA ECD 융합 분자를 포함하고, PSGL-1 분자는 PSGL-1, PSGL-1 ECD, 또는 PSGL-1 ECD 융합 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합을 검출하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체의 부재 하의 VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합과 비교하여 VISTA 항체의 존재 하의 VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합의 감소는 VISTA 항체가 PSGL-1 길항제라는 것을 나타낸다. 일부 실시양태에서, VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합은 VISTA 항체의 존재 하에 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 또는 적어도 80%만큼 감소한다. 일부 실시양태에서, VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합은 표면 플라즈몬 공명, ELISA, 증폭된 발광 근접 동질 검정, 및 유동 세포측정법으로부터 선택되는 방법에 의해 검출된다.
본원에 기재된 PSGL-1 길항제를 확인하는 방법 중 임의의 것에서, VISTA 분자는 세포의 표면 상에 발현된 VISTA일 수 있고/거나 PSGL-1 분자는 세포의 표면 상에 발현된 PSGL-1일 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 억제하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 대상체에게 적어도 1종의 PSGL-1 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 상에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 억제하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 세포를 적어도 1종의 PSGL-1 길항제와 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 시험관내 세포이다.
일부 실시양태에서, 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 암을 갖는 대상체에게 유효량의 적어도 1종의 PSGL-1 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 대상체에게 화학요법제, 항혈관신생제, 성장 억제제, 면역-항암제 및 항신생물성 조성물로부터 선택되는 치료제의 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 차단할 수 있다.
본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것에서, 방법은 PSGL-1 항체 및 VISTA 항체로부터 선택되는 PSGL-1 길항제를 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 항체는 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 억제한다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것에서, 방법은 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 억제하는 PSGL-1 항체를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것에서, 항체는 키메라 항체, 인간화 항체, 및 인간 항체로부터 선택될 수 있다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것에서, 항체는 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 단편은 IgG (예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG4), Fv, 단일-쇄 Fv (scFv), Fab, Fab', 및 (Fab')2로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 암을 치료하기 위한 PSGL-1 길항제의 용도가 제공된다. 본원에 기재된 용도 중 임의의 것에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1 항체 또는 VISTA 항체일 수 있으며, 여기서 항체는 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, 항체는 키메라 항체, 인간화 항체, 및 인간 항체로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 항체는 항체 단편이다. 일부 실시양태에서 항체 단편은 IgG (예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG4), Fv, 단일-쇄 Fv (scFv), Fab, Fab', 및 (Fab')2로부터 선택된다.
본원에 기재된 임의의 실시양태 또는 그의 임의의 조합은 본원에 기재된 발명의 임의의 및 모든 방법에 적용된다.
도 1은 다양한 pH에서의 T 세포에 대한 VISTA 덱스트라머 결합의 유동 세포측정법 결과를 보여주며, 이는 보다 낮은 pH에서 증진된 결합을 보여준다.
도 2a는 실시예 2에 기재된 바와 같이, 항-PSGL-1의 B 세포, T 세포 및 NK 세포에 대한 결합을 보여준다. 도 2b는 실시예 2에 또한 기재된 바와 같이, VISTA 덱스트라머의 B 세포, T 세포 및 NK 세포에 대한 결합을 보여준다.
도 3은 대조군 항체 (●), hPSGL-1-Fc (▼) 또는 p-셀렉틴 (다이아몬드)의 존재 하의 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 대한 상대 VISTA 덱스트라머 결합을 보여준다.
도 4a 및 4b는 PSGL-1이 pH 6.0에서 293T-hVISTA 세포에 결합한다는 것을 보여준다. 도 4b는 pH 6.0에서의 PSGL-1-Fc의 293T-hVISTA 세포에 대한 결합 (도트/흑색 원) 및 pH 7.2에서의 유의한 결합의 결여 (흑색 사각형), 뿐만 아니라 pH 6.0 및 7.2에서의 hVISTA를 발현하지 않는 293T 세포에 대한 PSGL-1-Fc의 결합의 결여 (각각 다이아몬드 및 삼각형, 사각형 뒤에 부분적으로 가려짐)를 보여준다. 도 4a는 도 4b를 지지하는 간략한 데이터를 제공하고, pH 6.0에서의 PSGL-1의 293T-hVISTA 세포에 대한 결합을 보여준다.
도 5는 T 세포 ("대조군 gRNA") 및 PSGL-1 CRISPR 녹아웃 T 세포 ("PSGL-1 gRNA#1" 및 "PSGL-1 gRNA#2", 이들은 2종의 상이한 가이드 RNA를 사용하여 수득된 2종의 클론임)에 대한 인간 VISTA 결합의 백분율을 보여준다.
본 발명자들은 VISTA에 대한 결합 파트너로서의 PSGL-1을 확인하였으며, 여기서 결합은 산성 pH에서 우선적으로 발생한다. VISTA와 PSGL-1 사이의 상호결합을 표적화하는 것은 VISTA의 면역 억제 효과를 억제함으로써 암 세포에 대한 면역 반응을 증진시킬 수 있다. 표적화 분자는 PSGL-1에 결합하는 항체 및 VISTA에 결합하는 항체를 포함하며, 여기서 항체는 VISTA의 PSGL-1에 대한 결합을 차단한다. 예시적인 표적화 분자는 산성 pH, 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 VISTA 또는 PSGL-1에 결합하는 분자이다. 이러한 표적화 분자는 암을 치료하기 위한 치료제로서 제공된다.
특허 출원 및 공개를 포함하여 본원에 인용된 모든 참고문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용된 섹션 표제는 단지 조직화 목적을 위한 것이며, 기재된 대상을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학 기술 용어는 관련 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 의미를 가질 것이다. 추가로, 문맥에서 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수형을 포함할 것이고, 복수 용어는 단수형을 포함할 것이다.
재조합 DNA, 올리고뉴클레오티드 합성, 조직 배양 및 형질전환 (예를 들어, 전기천공, 리포펙션), 효소 반응 및 정제 기술과 관련하여 사용되는 예시적인 기술은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 많은 이러한 기술 및 절차가 특히, 예를 들어 문헌 [Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001))]에 기재되어 있다. 또한, 화학적 합성, 화학적 분석, 제약 제제, 제제화, 및 전달, 및 환자의 치료를 위한 예시적인 기술이 또한 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 언급되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 다중 종속항의 문맥에서, "또는"의 사용은 오직 대안적으로만 하나 초과의 앞선 독립항 또는 종속항을 다시 지칭하는 것이다. 달리 나타내지 않는 한, 용어 "포함하다"는 "포함하나 이에 제한되지는 않는다"와 동일한 의미를 갖는다. 유사하게, 용어 "예컨대"는 "예컨대 비제한적으로"와 동일한 의미를 갖는다. 또한, 용어 예컨대 "요소" 또는 "성분"은 달리 구체적으로 언급되지 않는 한 하나의 유닛을 포함하는 요소 및 성분 및 하나 초과의 서브유닛을 포함하는 요소 및 성분 둘 다를 포괄한다.
본 개시내용에 따라 이용되는 바와 같이, 하기 용어는 달리 나타내지 않는 한 하기 의미를 갖는 것으로 이해될 것이다:
용어 "핵산 분자" 및 "폴리뉴클레오티드"는 상호교환가능하게 사용될 수 있으며, 이는 뉴클레오티드의 중합체를 지칭한다. 이러한 뉴클레오티드의 중합체는 천연 및/또는 비-천연 뉴클레오티드를 함유할 수 있고, DNA, RNA, 및 PNA를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "핵산 서열"은 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 선형의 뉴클레오티드 서열을 지칭한다.
용어 "폴리펩티드"는 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하고, 최소 길이로 제한되지 않는다. 이러한 아미노산 잔기의 중합체는 천연 또는 비-천연 아미노산 잔기를 함유할 수 있고, 펩티드, 올리고펩티드, 아미노산 잔기의 이량체, 삼량체 및 다량체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 전장 단백질 및 그의 단편, 둘 다는 정의에 의해 포괄된다. 용어는 또한 폴리펩티드의 발현후 변형, 예를 들어, 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화, 인산화 등을 포함한다. 게다가, 본 발명의 목적을 위해, "폴리펩티드"는, 단백질이 목적하는 활성을 유지하는 한, 천연 서열에 대한 변형, 예컨대, 결실, 부가, 및 치환 (일반적으로 자연에서 보존적임)을 포함하는 단백질을 지칭한다. 이들 변형은 부위 지정 돌연변이유발을 통한 것처럼 의도적으로 이루어질 수 있거나, 또는 예컨대 단백질을 생산하는 숙주의 돌연변이를 통해 또는 PCR 증폭으로 인한 오류를 통해 우연히 이루어질 수 있다. "단백질"은 폴리펩티드 및 2개 이상의 폴리펩티드의 복합체, 예를 들어, 이량체 및 중합체를 포함한다. "소형 펩티드"는 50개 이하의 아미노산을 갖는 펩티드를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 소형 펩티드는 40개 이하, 또는 35개 이하, 또는 30개 이하, 또는 25개 이하의 아미노산을 갖는다. 일부 실시양태에서, 소형 펩티드는 10 내지 50개의 아미노산 또는 15 내지 30개의 아미노산을 갖는다.
"천연 서열" 폴리펩티드는 천연에서 발견되는 폴리펩티드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 천연 서열 폴리펩티드는 임의의 포유동물로부터의 자연 발생 폴리펩티드의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 이러한 천연 서열 폴리펩티드는 자연으로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합 또는 합성 수단에 의해 생성될 수 있다. 용어 "천연 서열" 폴리펩티드는 폴리펩티드의 자연 발생 말단절단된 또는 분비된 형태 (예를 들어, 세포외 도메인 서열), 폴리펩티드의 자연 발생 변이체 형태 (예를 들어, 대안적으로 스플라이싱된 형태) 및 자연 발생 대립유전자 변이체를 특히 포괄한다.
폴리펩티드 "변이체"는 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환은 고려하지 않고, 서열을 정렬시키고 필요한 경우 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 갭을 도입한 후에, 천연 서열 폴리펩티드와 적어도 약 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 생물학적으로 활성인 폴리펩티드를 의미한다. 이러한 변이체는 예를 들어 폴리펩티드의 N- 또는 C-말단에서 1개 이상의 아미노산 잔기가 부가 또는 결실된 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체는 적어도 약 80% 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다. 일부 실시양태에서, 변이체는 적어도 약 90% 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다. 일부 실시양태에서, 변이체는 천연 서열 폴리펩티드와 적어도 약 95% 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다. 일부 실시양태에서, 변이체는 천연 서열 폴리펩티드와 적어도 약 97% 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다.
펩티드, 폴리펩티드 또는 항체 서열과 관련하여 본원에 사용된 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성" 및 "상동성"은, 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환은 고려하지 않고, 서열을 정렬시키고 필요한 경우 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 갭을 도입한 후에, 특정한 펩티드 또는 폴리펩티드 서열에서의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서의 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정할 목적을 위한 정렬은 관련 기술분야의 기술 내의 다양한 방식, 예를 들어 공중 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 MEGALIGN™ (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함한, 정렬 측정에 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
용어 "P-셀렉틴 당단백질 리간드 1" 및 "PSGL-1"은 달리 나타내지 않는 한 천연, PSGL-1을 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다. 따라서, PSGL-1에 대한 언급은 문맥이 (예를 들어 비-인간, 또는 뮤린 또는 시노몰구스 PSGL-1을 논의함으로써) 달리 명확하게 하지 않는 한, 텍스트 전체에 걸쳐 인간 PSGL-1에 대한 언급과 동일한 의미를 갖는다. 비-인간 PSGL-1은 포유동물 예컨대 영장류 (예를 들어 시노몰구스 원숭이) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 것일 수 있다.
용어 PSGL-1은 전장, 프로세싱되지 않은 PSGL-1뿐만 아니라 세포에서 프로세싱에 의해 생성된 임의의 형태의 PSGL-1 또는 예를 들어 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, 또는 ≤ 10 nM 미만의 친화도 (Kd)로 VISTA에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 그의 임의의 단편을 포함한다. 용어는 또한 PSGL-1의 자연 발생 변이체, 예를 들어, 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포괄한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1은 서열식별번호(SEQ ID NO): 1 (인간 이소형 1 전구체, 신호 펩티드 있음) 또는 서열식별번호: 2 (인간 이소형 1 성숙, 신호 펩티드 없음)의 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 14 (인간 이소형 2 전구체, 신호 펩티드 있음) 또는 서열식별번호: 15 (인간 이소형 2 성숙, 신호 펩티드 없음)의 아미노산 서열을 포함한다.
용어 "PSGL-1"은 또한 신호 펩티드가 있거나 없는 전장 PSGL-1, PSGL-1 단편, 및 PSGL-1 변이체를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "전장 PSGL-1"은 전장, 프로세싱되지 않은 PSGL-1뿐만 아니라 세포에서 프로세싱에 의해 생성된 임의의 형태의 PSGL-1 또는 예를 들어 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, 또는 ≤ 10 nM 미만의 친화도 (Kd)로 VISTA에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 그의 임의의 단편을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 전장 PSGL-1은 서열식별번호: 1 (이소형 1 전구체, 신호 펩티드 있음) 또는 서열식별번호: 2 (이소형 1 성숙, 신호 펩티드 없음) 또는 서열식별번호: 14 (이소형 2 전구체, 신호 펩티드 있음) 또는 서열식별번호: 15 (이소형 2 성숙, 신호 펩티드 없음)의 아미노산 서열을 갖는다. 본원에 사용된 용어 "PSGL-1 단편"은 전장 PSGL-1의 N- 및/또는 C-말단으로부터 1개 이상의 잔기가 결실되고, VISTA에 결합하는 능력을 보유하는 PSGL-1을 지칭한다. PSGL-1 단편은 N-말단 신호 펩티드를 포함할 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 본원에 사용된 용어 "PSGL-1 변이체"는 아미노산 부가, 결실, 및 치환을 함유하고, VISTA에 여전히 결합할 수 있는 PSGL-1을 지칭한다. 이러한 변이체는 모 PSGL-1과 적어도 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일할 수 있다. 2개의 폴리펩티드의 % 동일성은 유사성을 결정하기 위한 디폴트 설정으로 베스트핏(Bestfit) 프로그램을 사용하여 2개의 폴리펩티드의 아미노산 서열을 비교함으로써 결정된 유사성 점수에 의해 측정될 수 있다. 베스트핏은 문헌 [Smith and Waterman, Advances in Applied Mathematics 2:482-489 (1981)]의 국소 상동성 알고리즘을 사용하여 2개의 서열 사이의 최상의 유사성 분절을 찾는다.
용어 "T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제자", "혈소판 수용체 Gi24 이소형 1 전구체", "B7H5", 및 "VISTA"는 달리 명시되지 않는 한 본원에서 천연, 인간 VISTA를 지칭한다. 따라서, 표현 "VISTA" 및 "인간 VISTA"는 문맥이 (예를 들어 비-인간 VISTA 종을 구체적으로 지칭함으로써) 달리 명확하게 하지 않는 한 동일한 의미를 갖는다. VISTA가 비-인간인 경우, 그것은 포유동물 예컨대 영장류 (예를 들어 시노몰구스 원숭이) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 것일 수 있다. 용어는 전장, 프로세싱되지 않은 VISTA뿐만 아니라 세포에서 프로세싱에 의해 생성된 임의의 형태의 VISTA 또는 예를 들어 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, 또는 ≤ 10 nM 미만의 친화도 (Kd)로 PSGL-1에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 그의 임의의 단편을 포함한다. 용어는 또한 VISTA의 자연 발생 변이체, 예를 들어, 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포괄한다. 일부 실시양태에서, VISTA는 서열식별번호: 5 (전구체, 신호 펩티드 있음) 또는 서열식별번호: 6 (성숙, 신호 펩티드 없음)의 아미노산 서열을 포함한다. 비제한적 예시적인 비-인간 VISTA는 마우스 VISTA이며, 이는 서열식별번호: 7 (전구체, 신호 펩티드 있음) 또는 서열식별번호: 8 (성숙, 신호 펩티드 없음)의 아미노산 서열을 갖는다.
용어 "길항제"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 이는 폴리펩티드, 예컨대 PSGL-1 또는 VISTA의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 전체적으로 억제하거나 중화시키는 임의의 분자, 또는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 전사 또는 번역을 부분적으로 또는 전체적으로 억제하는 임의의 분자를 포함한다. 예시적인 길항제 분자는 길항제 항체, 소형 펩티드, 올리고펩티드, 유기 분자 (소분자 포함), 압타머, 및 안티센스 핵산을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 길항제는 차단제 (예컨대 차단 항체)로 지칭될 수 있다.
용어 "PSGL-1 길항제"는 PSGL-1 또는 VISTA와 상호작용하고 PSGL-1 및/또는 VISTA-매개 신호전달을 억제하는 분자를 지칭한다. 예시적인 PSGL-1 길항제는 PSGL-1에 결합하는 항체 및 VISTA에 결합하는 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1에 결합하는 항체이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 차단한다.
PSGL-1 길항제는 그것이 PSGL-1의 VISTA에 대한 검출가능한 결합의 양을 적어도 50%만큼 감소시키는 경우에 "PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 차단"한다고 여겨진다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1의 VISTA에 대한 검출가능한 결합의 양을 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%만큼 감소시킨다. 일부 이러한 실시양태에서, 길항제는 리간드 결합을 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70% 등만큼 차단한다고 한다.
용어 "억제" 또는 "억제하다"는 임의의 표현형 특징의 감소 또는 중단, 또는 그 특징의 발생, 정도 또는 가능성의 감소 또는 중단을 지칭한다. 일부 실시양태에서, "감소시키다" 또는 "억제하다"는 20% 이상의 감소를 유발하는 능력을 의미한다. 또 다른 실시양태에서, "감소시키다" 또는 "억제하다"는 50% 이상의 감소를 유발하는 능력을 의미한다. 또 다른 실시양태에서, "감소시키다" 또는 "억제하다"는 75%, 85%, 90%, 95% 또는 그 초과의 전반적 감소를 유발하는 능력을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "PSGL-1 항체" 또는 "PSGL-1에 결합하는 항체"는 예를 들어 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 PSGL-1에 결합하는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 PSGL-1 및/또는 VISTA-매개 신호전달을 억제한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 차단한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 항체가 PSGL-1을 표적화하는 데 있어서 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 PSGL-1에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체의 비관련된, 비-PSGL-1 단백질에 대한 결합의 정도는, 예를 들어 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정 시 항체의 PSGL-1에 대한 결합의 약 10% 미만이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 상이한 종으로부터의 PSGL-1 중에서 보존된 PSGL-1의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 PSGL-1에 결합하는 인간 또는 인간화 PSGL-1 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
본원에 사용된 용어 "VISTA 항체" 또는 "VISTA에 결합하는 항체"는 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0에서 VISTA에 결합하는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 PSGL-1 및/또는 VISTA-매개 신호전달을 억제한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 상기 정의된 바와 같이, 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 차단한다. 따라서, 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 PSGL-1 길항제이다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 항체가 VISTA를 표적화하는 데 있어서 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 VISTA에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체의 비관련된, 비-VISTA 단백질에 대한 결합의 정도는, 예를 들어 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정 시 항체의 VISTA에 대한 결합의 약 10% 미만이다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 상이한 종으로부터의 VISTA 중에서 보존된 VISTA의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 인간 VISTA에 결합하는 인간 또는 인간화 VISTA 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 목적하는 항원-결합 활성을 나타내는 한 항체 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 항체 구조를 포괄한다. 본원에 사용된 용어 "항체"는 중쇄의 상보성-결정 영역 (CDR) 1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 분자를 추가로 지칭하며, 여기서 분자는 항원에 결합할 수 있다. 용어 항체는 항원에 결합할 수 있는 단편, 예컨대, Fv, 단일-쇄 Fv (scFv), Fab, Fab', 및 (Fab')2를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 용어 항체는 또한 키메라 항체, 인간화 항체, 및 다양한 종 예컨대, 마우스, 인간, 시노몰구스 원숭이 등의 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 적어도 1개의 중쇄, 및 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 적어도 1개의 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각의 중쇄가 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 2개의 중쇄, 및 각각의 경쇄가 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 2개의 경쇄를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 단일-쇄 Fv (scFv), 또는 예를 들어, 모든 6개의 CDR (3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR)을 포함하는 단일 폴리펩티드 쇄를 포함하는 임의의 다른 항체는 중쇄 및 경쇄를 갖는 것으로 여겨진다. 일부 이러한 실시양태에서, 중쇄는 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항체 영역이고, 경쇄는 3개의 경쇄 CDR을 포함하는 항체 영역이다.
본원에 사용된 용어 "중쇄 가변 영역"은 중쇄 CDR1, 프레임워크 (FR) 2, CDR2, FR3, 및 CDR3을 포함하는 영역을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 또한 CDR1에 대해 N-말단인 FR1의 적어도 일부, 및/또는 CDR3에 대해 C-말단인 FR4의 적어도 일부를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "중쇄 불변 영역"은 적어도 3개의 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2, 및 CH3을 포함하는 영역을 지칭한다. 비제한적 예시적인 중쇄 불변 영역은 γ, δ 및 α를 포함한다. 비제한적 예시적인 중쇄 불변 영역은 또한 ε 및 μ를 포함한다. 각각의 중쇄 불변 영역은 항체 이소형에 상응한다. 예를 들어, γ 불변 영역을 포함하는 항체는 IgG 항체이고, δ 불변 영역을 포함하는 항체는 IgD 항체이고, α 불변 영역을 포함하는 항체는 IgA 항체이다. 추가로, μ 불변 영역을 포함하는 항체는 IgM 항체이고, ε 불변 영역을 포함하는 항체는 IgE 항체이다. 특정 이소형은 하위부류로 추가로 세분될 수 있다. 예를 들어, IgG 항체는 IgG1 (γ1 불변 영역 포함), IgG2 (γ2 불변 영역 포함), IgG3 (γ3 불변 영역 포함), 및 IgG4 (γ4 불변 영역 포함) 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않고; IgA 항체는 IgA1 (α1 불변 영역 포함) 및 IgA2 (α2 불변 영역 포함) 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않고; IgM 항체는 IgM1 및 IgM2를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "중쇄"는 리더 서열이 있거나 없는, 적어도 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 중쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "전장 중쇄"는 리더 서열이 있거나 없고 C-말단 리신이 있거나 없는, 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "경쇄 가변 영역"은 경쇄 CDR1, 프레임워크 (FR) 2, CDR2, FR3, 및 CDR3을 포함하는 영역을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 또한 FR1 및/또는 FR4를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "경쇄 불변 영역"은 경쇄 불변 도메인, CL을 포함하는 영역을 지칭한다. 비제한적 예시적인 경쇄 불변 영역은 λ 및 κ를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "경쇄"는 리더 서열이 있거나 없는, 적어도 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 경쇄는 경쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "전장 경쇄"는 리더 서열이 있거나 없는, 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다.
참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 검정에서 참조 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상만큼 차단하는 항체를 지칭하고, 반대로 참조 항체는 경쟁 검정에서 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상만큼 차단한다. 동일한 에피토프에 대해 경쟁하는 항체와 관련하여 사용된 용어 "경쟁하다"는 시험되는 항체가 참조 항체의 공통 항원 (예를 들어, PSGL-1 또는 VISTA)에 대한 특이적 결합을 막거나 억제하는 검정에 의해 항체 사이의 경쟁이 결정된다는 것을 의미한다. 수많은 유형의 경쟁적 결합 검정, 예를 들어 하기가 사용될 수 있다: 고체 상 직접 또는 간접 방사선면역검정 (RIA), 고체 상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA), 샌드위치 경쟁 검정 (예를 들어, 문헌 [Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253] 참조); 고체 상 직접 바이오틴-아비딘 EIA (예를 들어, 문헌 [Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619] 참조), 고체 상 직접 표지된 검정, 고체 상 직접 표지된 샌드위치 검정 (예를 들어, 문헌 [Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press] 참조); I-125 표지를 사용한 고체상 직접 표지 RIA (예를 들어, 문헌 [Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15] 참조); 고체 상 직접 바이오틴-아비딘 EIA (예를 들어, 문헌 [Cheung et al., 1990, Virology 176:546-552] 참조); 및 직접 표지된 RIA (Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82). 전형적으로, 이러한 검정은 이들 비표지된 시험 결합 분자 및 표지된 참조 항체 중 어느 것을 보유하는 고체 표면 또는 세포에 결합된 정제된 항원을 사용하는 것을 포함한다. 경쟁적 억제는 시험 항체의 존재 하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정된다. 통상적으로, 시험 항체는 과량으로 존재한다. 경쟁 검정에 의해 확인된 항체 (경쟁 항체)는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 및 참조 항체에 의해 결합된 에피토프에 입체 장애를 일으키기에 충분히 근접한 인접한 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쟁 항체가 과량으로 존재하는 경우에, 그것은 참조 항체의 공통 항원에 대한 특이적 결합을 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75%만큼 억제할 것이다. 일부 경우에, 결합은 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 97% 또는 그 초과만큼 억제된다.
용어 "항원"은 선택적 결합제, 예컨대 항체 또는 그의 면역 기능적 단편에 의해 결합될 수 있고, 추가적으로 그 항원에 결합할 수 있는 항체를 생산하기 위해 포유동물에서 사용될 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 지칭한다. 항원은 항체와 상호작용할 수 있는 1개 이상의 에피토프를 보유할 수 있다.
용어 "에피토프"는 선택적 결합제, 예컨대 항체 또는 그의 단편에 의해 결합된 분자의 일부이다. 용어는 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 결정기를 포함한다. 에피토프는 인접하거나 인접하지 않은 것 (예를 들어, 폴리펩티드에서, 폴리펩티드 서열에서 서로 인접하지 않지만 분자의 맥락 내에서 항원 결합 단백질에 의해 결합되는 아미노산 잔기)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 그들이 항체를 생성하기 위해 사용된 에피토프와 유사하지만 항체를 생성하기 위해 사용된 에피토프에서 발견되는 아미노산 잔기를 포함하지 않거나 일부만 포함하는 3차원 구조를 포함한다는 점에서 모방체일 수 있다. 에피토프 결정기는 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹핑, 예컨대 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 술포닐 기를 포함할 수 있고, 특정 3차원 구조 특징 및/또는 특정 전하 특징을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, "에피토프"는 그것을 결정하는 데 사용되는 방법에 의해 정의된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항체는 수소-중수소 교환 (HDX)에 의해 결정 시, 그들이 항원의 동일한 영역에 결합하는 경우에 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합한다. 특정 실시양태에서, 항체는 X선 결정학에 의해 결정 시 그들이 항원의 동일한 영역에 결합하는 경우에 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
본원에 사용된 "키메라 항체"는 제1 종 (예컨대 마우스, 래트, 시노몰구스 원숭이 등)으로부터의 적어도 1개의 가변 영역 및 제2 종 (예컨대 인간, 시노몰구스 원숭이, 닭 등)으로부터의 적어도 1개의 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항체는 적어도 1개의 마우스 가변 영역 및 적어도 1개의 인간 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항체는 적어도 1개의 시노몰구스 가변 영역 및 적어도 1개의 인간 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항체의 가변 영역 모두는 제1 종으로부터의 것이고, 키메라 항체의 불변 영역 모두는 제2 종으로부터의 것이다.
본원에 사용된 "인간화 항체"는 비-인간 가변 영역 (예컨대 마우스, 래트, 시노몰구스 원숭이, 닭 등)의 프레임워크 영역에서의 적어도 1개의 아미노산이 인간 가변 영역으로부터의 상응하는 아미노산으로 대체된 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체는 적어도 1개의 인간 불변 영역 또는 그의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체는 Fab, scFv, (Fab')2 등이다.
본원에 사용된 "CDR-그라프트된 항체"는 제1 (비-인간) 종의 1개 이상의 상보성 결정 영역 (CDR)이 제2 (인간) 종의 프레임워크 영역 (FR) 상에 그라프트된 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 "인간 항체"는 인간에서 생산된 항체, 인간 이뮤노글로불린 유전자를 포함하는 비-인간 동물에서 생산된 항체, 예컨대 제노마우스(XenoMouse)®, 및 시험관내 방법, 예컨대 파지 디스플레이를 사용하여 선택된 항체를 지칭하며, 여기서 항체 레퍼토리는 인간 이뮤노글로불린 서열에 기초한다.
용어 "PSGL-1 세포외 도메인" ("PSGL-1 ECD")은 전장 PSGL-1 ECD, PSGL-1 ECD 단편, 및 PSGL-1 ECD 변이체를 포함하고, 신호 펩티드가 있거나 없는, 세포내 및 막횡단 도메인이 결여된 PSGL-1 폴리펩티드를 지칭한다. PSGL-1 ECD 폴리펩티드는 달리 명시되지 않는 한 천연, 인간 ECD이다. 본원에 사용된 용어 "전장 PSGL-1 ECD"는 세포외 도메인의 마지막 아미노산까지 연장된 PSGL-1 ECD를 지칭하고, N-말단 신호 펩티드를 포함할 수 있거나 그렇지 않을 수 있고, 세포외 도메인에서의 천연 스플라이스 변이체를 포함한다. 비제한적 예시적인 PSGL-1 ECD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 241 (신호 서열 있음), 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 23 내지 241 (신호 서열 없음), 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 또는 서열식별번호: 4의 아미노산 1 내지 219를 포함한다. 또 다른 예시적인 PSGL-1 ECD는 서열식별번호: 14의 아미노산 1 내지 241 (신호 서열 있음), 또는 서열식별번호: 14의 아미노산 23 내지 241 (신호 서열 없음), 또는 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 또는 서열식별번호: 17, 또는 서열식별번호: 18의 아미노산 1 내지 219를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "PSGL-1 ECD 단편"은 전장 ECD의 N- 및/또는 C-말단으로부터 1개 이상의 잔기가 결실되고, VISTA에 결합하는 능력을 보유하는 PSGL-1 ECD를 지칭한다. PSGL-1 ECD 단편은 N-말단 신호 펩티드를 포함할 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 본원에 사용된 용어 "PSGL-1 ECD 변이체"는 아미노산 부가, 결실, 및 치환을 함유하고, VISTA에 여전히 결합할 수 있는 PSGL-1 ECD를 지칭한다. 이러한 변이체는 모 PSGL-1 ECD와 적어도 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일할 수 있다. 2개의 폴리펩티드의 % 동일성은 유사성을 결정하기 위한 디폴트 설정으로 베스트핏 프로그램을 사용하여 2개의 폴리펩티드의 아미노산 서열을 비교함으로써 결정된 유사성 점수에 의해 측정될 수 있다. 베스트핏은 문헌 [Smith and Waterman, Advances in Applied Mathematics 2:482-489 (1981)]의 국소 상동성 알고리즘을 사용하여 2개의 서열 사이의 최상의 유사성 분절을 찾는다.
용어 "PSGL-1 ECD 융합 분자"는 PSGL-1 ECD, 및 1개 이상의 "융합 파트너"를 포함하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 ECD 및 융합 파트너는 공유결합으로 연결된다 ("융합"된다). 융합 파트너가 또한 폴리펩티드 ("융합 파트너 폴리펩티드")인 경우, PSGL-1 ECD 및 융합 파트너 폴리펩티드는 연속적인 아미노산 서열의 일부일 수 있고, 융합 파트너 폴리펩티드는 PSGL-1 ECD의 N-말단 또는 C-말단에 연결될 수 있다. 이러한 경우에, PSGL-1 ECD 및 융합 파트너 폴리펩티드는 PSGL-1 ECD 및 융합 파트너 폴리펩티드 둘 다를 코딩하는 코딩 서열로부터 단일 폴리펩티드로서 번역될 수 있다 ("PSGL-1 ECD 융합 단백질"). 일부 실시양태에서, PSGL-1 ECD 및 융합 파트너는 다른 수단, 예컨대, 예를 들어, 펩티드 결합 이외의 화학 연결을 통해 공유결합으로 연결된다. 폴리펩티드를 다른 분자 (예를 들어, 융합 파트너)에 공유결합으로 연결시키는 많은 공지된 방법이 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, PSGL-1 ECD 및 융합 파트너는 적어도 1개의 아미노산 또는 화학적 모이어티로 구성된 "링커"를 통해 융합될 수 있다. 서열식별번호: 19는 본원의 실시예의 PSGL-1 Fc 융합 분자에 사용되는 링커를 제공한다. 비제한적 예시적인 PSGL-1 ECD 융합 분자는 문헌 [T. Pouyani et al., Cell 83: 333-343 (1995)]에 기재된 융합 분자를 포함한다. 비제한적 예시적인 PSGL-1 ECD 융합 분자는 (a) 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 241 (신호 서열 있음), 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 23 내지 241 (신호 서열 없음), 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 또는 서열식별번호: 4의 아미노산 1 내지 219, 또는 서열식별번호: 14의 아미노산 1 내지 241 (신호 서열 있음), 또는 서열식별번호: 14의 아미노산 23 내지 241 (신호 서열 없음), 또는 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 또는 서열식별번호: 17, 또는 서열식별번호: 18의 아미노산 1 내지 219의; (b) 서열식별번호: 11, 12, 또는 13의 Fc와 같은 Fc, 또는 인간 IgG1으로부터의 Fc 도메인과의 조합과 같은, Fc와 조합된 PSGL-1 ECD를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, PSGL-1 폴리펩티드 및 융합 파트너는 비-공유결합으로 연결된다. 일부 이러한 실시양태에서, 이들은 예를 들어 결합 쌍을 사용하여 연결될 수 있다. 예시적인 결합 쌍은 비오틴 및 아비딘 또는 스트렙타비딘, 항체 및 그의 항원 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
예시적인 융합 파트너는 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 알부민, 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 비제한적 예시적인 Fc 도메인의 아미노산 서열은 서열식별번호: 11 내지 13에 제시된다.
상기 언급된 바와 같이, PSGL-1 ECD는 달리 명시되지 않는 한 천연, 인간 PSGL-1 서열로부터 유래된다. 그러나, 일부 실시양태에서, PSGL-1 ECD 아미노산 서열은 비-인간 포유동물의 것으로부터 유래된다. 이러한 실시양태에서, 비-인간 PSGL-1 ECD 아미노산 서열은 설치류 (마우스, 래트, 햄스터 포함), 토끼, 원숭이, 고양이, 개, 말, 소, 양, 염소, 포유동물 실험 동물, 포유동물 가축, 포유동물 스포츠 동물, 및 포유동물 애완동물을 포함하나 이에 제한되지는 않는 포유동물로부터 유래될 수 있다. 비-humPSGL-1 ECD를 혼입시킨 PSGL-1 ECD 융합 분자는 "비-humPSGL-1 ECD 융합 분자" 또는 "비-인간 PSGL-1 ECD 융합 분자"로 지칭된다. 인간 PSGL-1 ECD 융합 분자와 유사하게, 비-인간 융합 분자는 융합 파트너, 임의적인 링커, 및 비-인간 PSGL-1 ECD를 포함할 수 있다. 이러한 비-인간 융합 분자는 또한 신호 펩티드를 포함할 수 있다.
"PSGL-1 ECD 단편"은 전장, 인간 ECD의 N- 및/또는 C-말단으로부터 1개 이상의 잔기가 결실되고, 인간 VISTA에 결합하는 능력을 보유하는 PSGL-1 ECD를 지칭한다. "비-humPSGL-1 ECD 단편"은 전장 ECD의 N- 및/또는 C-말단으로부터 1개 이상의 잔기가 결실되고, 서열이 유래된 비-인간 동물의 VISTA에 결합하는 능력을 보유하는 비-humPSGL-1 ECD를 지칭한다. 이는 천연, 인간 PSGL-1 ECD와 비교하여 아미노산 부가, 결실, 및 치환을 함유하고, 인간 VISTA에 여전히 결합할 수 있는 PSGL-1 ECD를 지칭하는 "PSGL-1 ECD 변이체"와 대조된다.
"비-humPSGL-1 ECD 변이체"는 아미노산 부가, 결실, 및 치환을 함유하고, 서열이 유래된 동물로부터의 VISTA에 여전히 결합할 수 있는 비-인간 PSGL-1 ECD를 지칭한다. 이는 아미노산 부가, 결실, 및 치환을 함유하고, 인간 VISTA에 여전히 결합할 수 있는 인간 PSGL-1 ECD를 지칭하는 "PSGL-1 ECD 변이체"와 대조된다.
본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것에서, 전장 PSGL-1, PSGL-1 단편, PSGL-1 변이체, PSGL-1 ECD, 및 PSGL-1 ECD 융합 단백질을 포함하나 이에 제한되지는 않는 PSGL-1은 태그를 추가로 포함할 수 있다. 비제한적 예시적인 태그는 FITC, His6, 비오틴, 및 관련 기술분야에 공지된 다른 표지 및 태그를 포함한다.
용어 "VISTA 세포외 도메인" ("VISTA ECD")은 전장 VISTA ECD, VISTA ECD 단편, 및 VISTA ECD 변이체를 포함하고, 신호 펩티드가 있거나 없는, 세포내 및 막횡단 도메인이 결여된 VISTA 폴리펩티드를 지칭한다. 폴리펩티드는 달리 명시되지 않는 한 천연, 인간 ECD이다. 본원에 사용된 용어 "전장 VISTA ECD"는 세포외 도메인의 마지막 아미노산까지 연장된 VISTA ECD를 지칭하고, N-말단 신호 펩티드를 포함할 수 있거나 그렇지 않을 수 있고, 세포외 도메인 내의 천연 스플라이스 변이체를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "VISTA ECD 단편"은 전장 ECD의 N- 및/또는 C-말단으로부터 1개 이상의 잔기가 결실되고, PSGL-1에 결합하는 능력을 보유하는 VISTA ECD를 지칭한다. VISTA ECD 단편은 N-말단 신호 펩티드를 포함할 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 본원에 사용된 용어 "VISTA ECD 변이체"는 아미노산 부가, 결실, 및 치환을 함유하고, PSGL-1에 여전히 결합할 수 있는 VISTA ECD를 지칭한다. 이러한 변이체는 모 VISTA ECD와 적어도 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일할 수 있다.
2개의 폴리펩티드의 % 동일성은 유사성을 결정하기 위한 디폴트 설정으로 베스트핏 프로그램을 사용하여 2개의 폴리펩티드의 아미노산 서열을 비교함으로써 결정된 유사성 점수에 의해 측정될 수 있다. 베스트핏은 문헌 [Smith and Waterman, Advances in Applied Mathematics 2:482-489 (1981)]의 국소 상동성 알고리즘을 사용하여 2개의 서열 사이의 최상의 유사성 분절을 찾는다. 일부 실시양태에서, His 태그를 포함하는 VISTA ECD는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, His 태그를 갖지 않는 VISTA ECD는 서열식별번호: 10의 아미노산 1-202의 아미노산 서열 (서열식별번호: 10의 전체 서열에서 그 서열의 마지막 6개의 His 잔기를 뺀 것에 상응함)을 갖는다.
용어 "VISTA ECD 융합 분자"는 VISTA ECD 및 1개 이상의 "융합 파트너"를 포함하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, VISTA ECD 및 융합 파트너는 공유결합으로 연결된다 ("융합"된다). 융합 파트너가 또한 폴리펩티드 ("융합 파트너 폴리펩티드")인 경우, VISTA ECD 및 융합 파트너 폴리펩티드는 연속적인 아미노산 서열의 일부일 수 있고, 융합 파트너 폴리펩티드는 VISTA ECD의 N-말단 또는 C-말단에 연결될 수 있다. 이러한 경우에, VISTA ECD 및 융합 파트너 폴리펩티드는 VISTA ECD 및 융합 파트너 폴리펩티드 둘 다를 코딩하는 코딩 서열로부터 단일 폴리펩티드로서 번역될 수 있다 ("VISTA ECD 융합 단백질"). 일부 실시양태에서, VISTA ECD 및 융합 파트너는 다른 수단, 예컨대, 예를 들어, 펩티드 결합 이외의 화학 결합을 통해 공유결합으로 연결된다. 폴리펩티드를 다른 분자 (예를 들어, 융합 파트너)에 공유결합으로 연결시키는 많은 공지된 방법이 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, VISTA ECD 및 융합 파트너는 적어도 1개의 아미노산 또는 화학적 모이어티로 구성된 "링커"를 통해 융합될 수 있다. 비제한적 예시적인 VISTA ECD 융합 분자는 서열식별번호: 9의 서열을 포함한다. 또 다른 예시적인 VISTA ECD 융합 분자는 서열식별번호: 10의 아미노산 1-202의 서열 플러스 서열식별번호: 11, 12 또는 13의 Fc 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, VISTA 폴리펩티드 및 융합 파트너는 비-공유결합으로 연결된다. 일부 이러한 실시양태에서, 이들은 예를 들어 결합 쌍을 사용하여 연결될 수 있다. 예시적인 결합 쌍은 비오틴 및 아비딘 또는 스트렙타비딘, 항체 및 그의 항원 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
예시적인 융합 파트너는 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 알부민, 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 비제한적 예시적인 Fc 도메인의 아미노산 서열이 서열식별번호: 11 내지 13에 제시된다.
다시, 달리 명시되지 않는 한, VISTA ECD 아미노산 서열은 인간의 것으로부터 유래된다. 그러나, 일부 실시양태에서, VISTA ECD 아미노산 서열은 비-인간 포유동물의 것으로부터 유래된다. 이러한 실시양태에서, VISTA ECD 아미노산 서열은 설치류 (마우스, 래트, 햄스터 포함), 토끼, 원숭이, 고양이, 개, 말, 소, 돼지, 양, 염소, 포유동물 실험 동물, 포유동물 가축, 포유동물 스포츠 동물, 및 포유동물 애완동물을 포함하나 이에 제한되지는 않는 포유동물로부터 유래될 수 있다. 비-인간 VISTA ECD를 포함하는 VISTA ECD 융합 분자는 "비-인간 VISTA ECD 융합 분자"로 지칭된다. 인간 VISTA ECD 융합 분자와 유사하게, 비-인간 융합 분자는 융합 파트너, 임의적인 링커, 및 VISTA ECD를 포함할 수 있다. 이러한 비-인간 융합 분자는 또한 신호 펩티드를 포함할 수 있다. "VISTA ECD 단편"은 대조적으로, 전장 인간 ECD의 N- 및/또는 C-말단으로부터 1개 이상의 잔기가 결실되고, 인간 PSGL-1에 결합하는 능력을 보유하는 천연, VISTA ECD를 지칭한다.
"비-인간 VISTA ECD 단편"은 전장 ECD의 N- 및/또는 C-말단으로부터 1개 이상의 잔기가 결실되고, 서열이 유래된 비-인간 동물의 PSGL-1에 결합하는 능력을 보유하는 비-인간 VISTA ECD를 지칭한다. "VISTA ECD 변이체"는 대조적으로, 천연, 인간 VISTA ECD와 비교하여 아미노산 부가, 결실, 및 치환을 함유하고, 인간 PSGL-1에 여전히 결합할 수 있는 VISTA ECD를 지칭한다. "비-인간 VISTA ECD 변이체"는 그의 모 VISTA ECD와 비교하여 아미노산 부가, 결실, 및 치환을 함유하고, 서열이 유래된 동물로부터의 PSGL-1에 여전히 결합할 수 있는 VISTA ECD를 지칭한다.
본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것에서, 전장 VISTA, VISTA 단편, VISTA 변이체, VISTA ECD, 및 VISTA ECD 융합 단백질을 포함하나 이에 제한되지는 않는 VISTA는 태그를 추가로 포함할 수 있다. 비제한적 예시적인 태그는 FITC, His6, 비오틴, 및 관련 기술분야에 공지된 다른 표지 및 태그를 포함한다.
용어 "신호 펩티드"는 포유동물 세포로부터의 폴리펩티드의 분비를 용이하게 하는, 폴리펩티드의 N-말단에 위치하는 아미노산 잔기의 서열을 지칭한다. 신호 펩티드는 포유동물 세포로부터의 폴리펩티드의 유출 시에 절단되어, 성숙 단백질을 형성할 수 있다. 신호 펩티드는 천연 또는 합성일 수 있고, 이들은 이들이 부착되는 단백질에 대해 이종 또는 동종일 수 있다. 예시적인 신호 펩티드는 PSGL-1 및 VISTA의 신호 펩티드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 신호 펩티드는 또한 이종 단백질로부터의 신호 펩티드를 포함한다. "신호 서열"은 신호 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 지칭한다.
용어 "벡터"는 숙주 세포에서 전파될 수 있는 클로닝된 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드들을 함유하도록 조작될 수 있는 폴리뉴클레오티드를 기재하는 데 사용된다. 벡터는 하기 요소들 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 복제 기점, 관심 폴리펩티드의 발현을 조절하는 하나 이상의 조절 서열 (예컨대, 예를 들어, 프로모터 및/또는 인핸서), 및/또는 하나 이상의 선택 마커 유전자 (예컨대, 예를 들어, 항생제 내성 유전자 및 비색 검정법에 사용될 수 있는 유전자, 예컨대 β-갈락토시다제). 용어 "발현 벡터"는 숙주 세포에서 관심 폴리펩티드를 발현시키는 데 사용되는 벡터를 지칭한다.
"숙주 세포"는 벡터 또는 단리된 폴리뉴클레오티드의 수용자일 수 있거나, 또는 수용자가 된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 원핵 세포 또는 진핵 세포일 수 있다. 예시적인 진핵 세포는 포유동물 세포, 예컨대 영장류 또는 비-영장류 동물 세포; 진균 세포, 예컨대 효모; 식물 세포; 및 곤충 세포를 포함한다. 비제한적 예시적인 포유동물 세포는 NSO 세포, PER.C6® 세포 (크루셀(Crucell)), 및 293 및 CHO 세포, 및 그의 유도체, 예컨대, 각각 293-6E 및 DG44 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "단리된"은 그것이 전형적으로 자연에서 발견되는 성분 중 적어도 일부로부터 분리되거나 또는 그것이 전형적으로 생산되는 성분 중 적어도 일부로부터 분리된 분자를 지칭한다. 예를 들어, 폴리펩티드는 그것이 생산된 세포의 성분 중 적어도 일부로부터 분리되는 경우에 "단리된" 것으로 지칭된다. 폴리펩티드가 발현 후 세포에 의해 분비되는 경우, 그를 생산한 세포로부터 폴리펩티드를 함유하는 상청액을 물리적으로 분리시키는 것이 폴리펩티드를 "단리하는 것"으로 여겨진다. 유사하게, 폴리뉴클레오티드는 그것이 전형적으로 자연에서 발견되는 보다 큰 폴리뉴클레오티드 (예컨대, 예를 들어, DNA 폴리뉴클레오티드의 경우, 게놈 DNA 또는 미토콘드리아 DNA)의 일부가 아닌 경우, 또는 예를 들어 RNA 폴리뉴클레오티드인 경우에 그것이 생산되는 세포의 성분 중 적어도 일부로부터 분리되는 경우에 "단리된" 것으로 지칭된다. 따라서, 숙주 세포 내부의 벡터 중에 함유되어 있는 DNA 폴리뉴클레오티드는 그 폴리뉴클레오티드가 자연에서 그 벡터에서 발견되지 않는 한, "단리된" 것으로 지칭될 수 있다.
용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 인간을 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다. 일부 실시양태에서, 설치류, 원숭이, 고양이, 개, 말, 소, 돼지, 양, 염소, 포유동물 실험실 동물, 포유동물 가축 동물, 포유동물 스포츠 동물, 및 포유동물 애완동물을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다른 포유동물을 치료하는 방법이 또한 제공된다. 일부 경우에, "대상체" 또는 "환자"는 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체 또는 환자를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "샘플" 또는 "시험 샘플"은 예를 들어 물리적, 생화학적, 화학적 및/또는 생리학적 특징에 기초하여 특징화 및/또는 확인되는 세포 및/또는 다른 분자 엔티티를 함유하는 관심 대상체로부터 수득되거나 유래된 물질을 지칭한다. 예를 들어, 어구 "질환 샘플" 및 그의 변화형은 특징화되는 세포 및/또는 분자 엔티티를 함유하는 것으로 예상되거나 알려져 있을 관심 대상체로부터 수득된 임의의 샘플을 의미한다. "조직 또는 세포 샘플"은 대상체 또는 환자의 조직으로부터 수득된 유사한 세포의 집합을 의미한다. 조직 또는 세포 샘플의 공급원은 신선한, 동결 및/또는 보존된 기관 또는 조직 샘플 또는 생검 또는 흡인물로부터의 고체 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 구성성분; 체액, 예컨대 뇌 척수액, 양수, 복막액, 활액 또는 간질액; 대상체의 임신 또는 발생 중의 임의의 시점으로부터의 세포일 수 있다. 조직 샘플은 또한 1차 또는 배양된 세포 또는 세포주일 수 있다. 임의로, 조직 또는 세포 샘플은 질환 조직/기관으로부터 수득된다. 조직 샘플은 자연에서 조직과 자연적으로 상호혼합되지 않는 화합물, 예컨대 보존제, 항응고제, 완충제, 고정제, 영양소, 항생제 등을 함유할 수 있다.
본원에 사용된 "참조 샘플," "참조 세포," 또는 "참조 조직"은 그를 확인하기 위해 본 발명의 방법 또는 조성물이 사용되는 질환 또는 상태를 앓지 않는 것으로 알려져 있거나, 그러한 것으로 여겨지는 공급원으로부터 수득된 샘플, 세포 또는 조직을 지칭한다. 한 실시양태에서, 참조 샘플, 참조 세포 또는 참조 조직은 본 발명의 조성물 또는 방법을 사용하여 질환 또는 상태가 확인되는 동일한 대상체 또는 환자의 건강한 실체 일부로부터 수득된다. 한 실시양태에서, 참조 샘플, 참조 세포 또는 참조 조직은 질환 또는 상태가 본 발명의 조성물 또는 방법을 사용하여 확인되는 대상체 또는 환자가 아닌 적어도 1명의 개체의 건강한 신체 일부로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 참조 샘플, 참조 세포 또는 참조 조직은 질환 또는 상태가 발생하기 전에 또는 질환 또는 상태의 보다 초기 단계에서 환자로부터 이전에 수득되었다.
상태의 이러한 특징이 상태를 갖는 환자의 적어도 하위세트에서, 또는 상태의 1종 이상의 동물 모델에서 나타난 경우에 상태는 "[특징]을 갖는 것으로 이전에 특징화되었다". 일부 실시양태에서, 상태의 이러한 특징은 본 발명의 1종 이상의 PSGL-1 길항제로 치료될 환자에서 결정될 필요는 없다. 본 발명의 방법 및/또는 조성물을 사용하여 치료될 특정 환자에서의 특징의 존재는 환자가 특징을 갖는 것으로 이전에 특징화된 상태를 갖는 것으로 간주되도록 하기 위해 결정될 필요는 없다.
"장애" 또는 "질환"은 본 발명의 1종 이상의 PSGL-1 길항제를 사용한 치료로부터 이익을 얻을 임의의 상태이다. 이는 포유동물을 해당 장애에 취약하게 하는 병리학적 상태를 포함한 만성 및 급성 장애 또는 질환을 포함한다. 본원에서 치료될 장애의 비제한적 예는 암을 포함한다.
용어 "암"은 본원에서 비정상적으로 높은 수준의 증식 및 성장을 나타내는 세포 군을 지칭하는 데 사용된다. 암은 양성 (양성 종양으로도 지칭됨), 전암성, 또는 악성일 수 있다. 암 세포는 고형 암 세포 (즉, 고형 종양을 형성함) 또는 백혈병성 암 세포일 수 있다. 용어 "암 성장"은 본원에서 암의 크기 또는 정도의 상응하는 증가를 유도하는 암을 포함하는 세포 또는 세포들에 의한 증식 또는 성장을 지칭하는 데 사용된다.
암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 암의 보다 특히 비제한적 예는 편평 세포암, 소세포 폐암, 뇌하수체암, 식도암, 성상세포종, 연부 조직 육종, 비소세포 폐암, 폐의 선암종, 폐의 편평세포 암종, 복막암, 간세포성암, 위장암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암, 신암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 뇌암, 자궁내막암, 고환암, 담관암종, 담낭 암종, 위장암, 흑색종, 및 다양한 유형의 두경부암을 포함한다.
"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예는 알킬화제 예컨대 티오테파 및 시톡산(Cytoxan)® 시클로포스파미드; 알킬 술포네이트 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민을 포함한 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴; 항생제 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1 (예를 들어, 문헌 [Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)] 참조); 디네미신 A를 포함한 디네미신; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 색소단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신(Adriamycin)® 독소루비신 (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 폴리사카라이드 복합체 (JHS 내츄럴 프로덕츠(JHS Natural Products), 미국 오레곤주 유진); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어, 탁솔(Taxol)® 파클리탁셀 (브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 뉴저지주 프린스턴), 아브락산(Abraxane)® 크레모포르-무함유, 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제제 (아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 일리노이주 샤움버그), 및 탁소테레(Taxotere)® 도세탁셀 (롱-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer), 프랑스 안토니); 클로란부실; 겜자르(Gemzar)® 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 나벨빈(Navelbine)® 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; 이리노테칸 (캄프토사르, CPT-11) (5-FU 및 류코보린을 포함한, 이리노테칸의 치료 요법 포함); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 콤브레타스타틴; 류코보린 (LV); 옥살리플라틴 치료 요법 (FOLFOX)을 포함한 옥살리플라틴; 세포 증식을 감소시키는 PKC-알파, Raf, H-Ras, EGFR (예를 들어, 에를로티닙 (타르세바(Tarceva)®)) 및 VEGF-A의 억제제 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
추가의 비제한적 예시적인 화학요법제는 암에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조정제 (SERM)를 포함하며, 예를 들어 타목시펜 (예를 들어, 놀바덱스(Nolvadex)® 타목시펜), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 파레스톤(Fareston)® 토레미펜; 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제 (부신에서 에스트로겐 생성을 조절함), 예컨대, 예를 들어 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메가세(Megase)® 메게스트롤 아세테이트, 아로마신(Aromasin)® 엑세메스탄, 포르메스타니, 파드로졸, 리비소르(Rivisor)® 보로졸, 페마라(Femara)® 레트로졸 및 아리미덱스(Arimidex)® 아나스트로졸; 및 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린; 뿐만 아니라 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 이상 세포 증식에 연루된 신호전달 경로에서의 유전자 발현을 억제하는 것, 예컨대, 예를 들어 PKC-알파, Ralf 및 H-Ras; 리보자임, 예컨대 VEGF 발현 억제제 (예를 들어, 안지오자임(Angiozyme)® 리보자임) 및 HER2 발현 억제제; 백신 예컨대 유전자 요법 백신, 예를 들어 알로벡틴(Allovectin)® 백신, 류벡틴(Leuvectin)® 백신 및 박시드(Vaxid)® 백신; 프로류킨(Proleukin)® rIL-2; 루르토테칸(Lurtotecan)® 토포이소머라제 1 억제제; 아바렐릭스(Abarelix)® rmRH; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다.
"항혈관신생제" 또는 "혈관신생 억제제"는 직접적으로 또는 간접적으로 혈관신생, 혈관생성, 또는 바람직하지 않은 혈관 투과성을 억제하는 소분자량 물질, 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 억제 RNA (RNAi 또는 siRNA) 포함), 폴리펩티드, 단리된 단백질, 재조합 단백질, 항체, 또는 그의 접합체 또는 융합 단백질을 지칭한다. 항혈관신생제가 혈관신생 인자 또는 그의 수용체에 결합하고 그의 혈관신생 활성을 차단하는 작용제를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 항혈관신생제는 혈관신생제에 대한 항체 또는 다른 길항제, 예를 들어, VEGF-A에 대한 항체 (예를 들어, 베바시주맙 (아바스틴(Avastin)®)) 또는 VEGF-A 수용체 (예를 들어, KDR 수용체 또는 Flt-1 수용체)에 대한 항체, 항-PDGFR 억제제 예컨대 글리벡(Gleevec)® (이마티닙 메실레이트), VEGF 수용체 신호전달을 차단하는 소분자 (예를 들어, PTK787/ZK2284, SU6668, 수텐트(Sutent)®/SU11248 (수니티닙 말레이트), AMG706, 또는 예를 들어, 국제 특허 출원 WO 2004/113304에 기재된 것)이다. 항혈관신생제는 또한 천연 혈관신생 억제제, 예를 들어, 안지오스타틴, 엔도스타틴 등을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Klagsbrun and D'Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53:217-39; Streit and Detmar (2003) Oncogene 22:3172-3179 (예를 들어, 표 3은 악성 흑색종에서의 항혈관신생 요법을 열거함); Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5(12):1359-1364; Tonini et al. (2003) Oncogene 22:6549-6556 (예를 들어, 표 2는 알려져 있는 항혈관신생 인자를 열거함); 및, Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206 (예를 들어, 표 1은 임상 시험에 사용되는 항혈관신생제를 열거함)]을 참조한다.
본원에 사용된 "성장 억제제"는 시험관내 또는 생체내에서 세포 (예컨대 VEGF를 발현하는 세포)의 성장을 억제하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 따라서, 성장 억제제는 S 기의 세포 (예컨대 VEGF를 발현하는 세포)의 백분율을 유의하게 감소시키는 것일 수 있다. 성장 억제제의 예는 세포 주기 진행을 차단하는 작용제 (S 기 이외의 위치에서), 예컨대 G1 정지 및 M-기 정지를 유도하는 작용제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 전형적인 M-기 차단제는 빈카 (빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁산, 및 토포이소머라제 II 억제제 예컨대 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드, 및 블레오마이신을 포함한다. G1을 정지시키는 작용제, 예를 들어, DNA 알킬화제 예컨대 타목시펜, 프레드니손, 다카르바진, 메클로레타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 및 ara-C는 또한 S-기 정지로 이어진다. 추가 정보는 문헌 [Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami et al. (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995), e.g., p. 13]에서 찾아볼 수 있다. 탁산 (파클리탁셀 및 도세탁셀)은 둘 다 주목으로부터 유래된 항암 약물이다. 유럽 주목으로부터 유래된 도세탁셀 (탁소테레®, 롱-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer))은 파클리탁셀 (탁솔®, 브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb))의 반합성 유사체이다. 파클리탁셀 및 도세탁셀은 튜불린 이량체로부터 미세관의 어셈블리를 촉진시키고 탈중합을 방지함으로써 미세관을 안정화시키며, 이는 세포에서의 유사분열의 억제를 발생시킨다.
용어 "항신생물성 조성물"은 적어도 1종의 활성 치료제를 포함하는, 암 치료에 유용한 조성물을 지칭한다. 치료제의 예는 예를 들어, 화학요법제, 성장 억제제, 세포독성제, 방사선 요법에 사용되는 작용제, 항혈관신생제, 암 면역치료제 (면역-항암제로도 지칭됨), 아폽토시스제, 항-튜불린제, 및 암을 치료하기 위한 다른 작용제, 예컨대, 항-HER-2 항체, 항-CD20 항체, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 길항제 (예를 들어, 티로신 키나제 억제제), HER1/EGFR 억제제 (예를 들어, 에를로티닙 (타르세바)®, 혈소판 유래 성장 인자 억제제 (예를 들어, 글리벡® (이마티닙 메실레이트)), COX-2 억제제 (예를 들어, 세레콕시브), 인터페론, CTLA-4 억제제 (예를 들어, 항-CTLA 항체 이필리무맙 (예르보이(YERVOY)®)), PD-1 억제제 (예를 들어, 항-PD1 항체, BMS-936558), PDL1 억제제 (예를 들어, 항-PDL1 항체, MPDL3280A), PDL2 억제제 (예를 들어, 항-PDL2 항체), VISTA 억제제 (예를 들어, 항-VISTA 항체), 시토카인, 하기 표적 ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-베타, BlyS, APRIL, BCMA, PD-1, PDL1, PDL2, CTLA-4, VISTA, 또는 VEGF 수용체(들) 중 1종 이상에 결합하는 길항제 (예를 들어, 중화 항체), TRAIL/Apo2, 및 다른 생체활성 및 유기 화학 작용제 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 그의 조합이 또한 본 발명에 포함된다.
본원에 사용된 "치료"는 예를 들어, 표적화된 병리학적 상태 또는 장애를 둔화 (경감)시키기 위한 목적, 뿐만 아니라 예를 들어, 상태 또는 장애의 재발을 억제하기 위한 목적의 치유적 치료를 지칭한다. 본원에 사용된 "치료"는 인간을 포함한 포유동물에서의 질환 (본원에서 "장애" 또는 "상태로도 지칭됨)에 대한 치료제의 임의의 투여 또는 적용을 포함하고, 질환 또는 질환의 진행을 억제하는 것, 질환 또는 그의 진행을 억제 또는 둔화시키는 것, 그의 발생을 정지시키는 것, 질환을 부분적으로 또는 완전히 완화시키는 것, 질환의 1종 이상의 증상을 부분적으로 또는 완전히 완화시키는 것, 또는 사라진, 잃어버린, 또는 결함있는 기능을 회복 또는 복구시키는 것; 또는 비효율적인 과정을 자극시키는 것을 포함한다. 용어 "치료"는 또한 임의의 표현형 특징의 중증도를 감소시키고/거나, 특징의 발생률, 정도 또는 가능성을 감소시키는 것을 포함한다. 치료를 필요로 하는 대상체는 이미 장애가 있는 대상체뿐만 아니라 장애의 위험이 있는 대상체 또는 장애의 재발이 예방 또는 둔화되어야 하는 대상체를 포함한다.
용어 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 데 효과적인 약물의 양을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 유효량은 목적하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량에서 및 그러한 시간 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 본 발명의 PSGL-1 길항제의 치료 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 목적하는 반응을 도출하는 길항제의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 치료 유효량은 치료상 유익한 효과가 PSGL-1 길항제의 임의의 독성 또는 유해 효과를 능가하는 양을 포괄한다.
"예방 유효량"은 목적하는 예방 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량에서 및 그러한 시간 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 전형적으로, 반드시 그러한 것은 아니지만, 예방 용량은 질환의 보다 초기 단계 이전 또는 보다 초기 단계의 대상체에서 사용되기 때문에 예방 유효량은 치료 유효량보다 적을 것이다.
"제약상 허용되는 담체"는 치료제와 사용되어 대상체에게 투여하기 위한 "제약 조성물"을 함께 구성하는 관련 기술분야에서 통상적인 비-독성 고체, 반고체 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화 물질, 제제화 보조제, 또는 담체를 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비-독성이고, 제제의 다른 성분과 상용성이다. 제약상 허용되는 담체는 사용되는 제제에 적절한 것이다. 예를 들어, 치료제가 경구로 투여되어야 하는 경우, 담체는 겔 캡슐일 수 있다. 치료제가 피하로 투여되어야 하는 경우, 이상적으로는 담체는 피부에 대해 자극적이지 않고, 주사 부위 반응을 유발하지 않는다.
"제조 물품"은 적어도 1종의 시약, 예를 들어 질환 또는 장애의 치료를 위한 의약, 또는 본원에 기재된 바이오마커를 특이적으로 검출하기 위한 프로브를 포함하는 임의의 제조품 (예를 들어, 패키지 또는 용기) 또는 키트이다. 일부 실시양태에서, 제조품 또는 키트는 본원에 기재된 방법을 수행하기 위한 단위로서 판촉되거나, 배급되거나 또는 판매된다.
치료 조성물 및 방법
질환을 치료하는 방법
인간 및 다른 포유동물을 치료하는 방법에 사용하기 위한 PSGL-1 길항제가 제공된다. PSGL-1 길항제를 인간 및 다른 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
암을 치료하는 방법
일부 실시양태에서, 유효량의 PSGL-1 길항제를 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다.
본 발명자들은 VISTA에 대한 결합 파트너로서의 PSGL-1을 확인하였다. VISTA는 활성 면역 반응의 억제제로서의 역할을 하는 다양한 면역 세포 (예컨대 T 세포, 수지상 세포, 자연 킬러 세포, 단핵구 및 대식세포)의 표면 상의 수용체이다. 암 및/또는 면역 세포 (예를 들어, T 세포 및 NK 세포)의 표면 상의 PSGL-1 및/또는 VISTA의 발현은 면역 세포 상의 PSGL-1 및/또는 VISTA를 결속시킴으로써 면역 반응을 억제할 수 있다. VISTA-PSGL-1 상호작용의 억제는 암 세포의 면역-매개 사멸을 증진시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제를 암을 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 암을 치료하기 위한 PSGL-1 길항제의 용도가 제공된다. PSGL-1 길항제로 치료될 수 있는 비제한적 예시적인 암이 본원에 제공되며, 이는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병을 포함한다. 이러한 암의 보다 특히 비제한적 예는 편평 세포암, 소세포 폐암, 뇌하수체암, 식도암, 성상세포종, 연부 조직 육종, 비소세포 폐암, 폐의 선암종, 폐의 편평세포 암종, 복막암, 간세포성암, 위장암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암, 신암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 뇌암, 자궁내막암, 고환암, 담관암종, 담낭 암종, 위암, 흑색종, 및 다양한 유형의 두경부암을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 폐암은 비소세포 폐암 또는 폐 편평 세포 암종이다. 일부 실시양태에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병 또는 만성 림프구성 백혈병이다. 일부 실시양태에서, 유방암은 유방 침습성 암종이다. 일부 실시양태에서, 난소암은 난소 장액성 낭선암종이다. 일부 실시양태에서, 신장암은 신장 투명 신세포 암종이다. 일부 실시양태에서, 결장암은 결장 선암종이다. 일부 실시양태에서, 방광암은 방광 요로상피 암종이다.
일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1 항체 및 VISTA 항체로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1 항체이다. 암을 치료하기 위한 PSGL-1 길항제는 또한 PSGL-1과 VISTA 사이의 상호작용을 억제하는, 임의로 추가로 융합 파트너를 포함하고 융합 분자 형태인, 비-항체 단백질, 예컨대 PSGL-1 또는 VISTA 또는 그의 부분 (예를 들어, ECD)일 수 있다. 다양한 예시적인 PSGL-1 길항제가 하기 섹션에 보다 상세하게 기재된다.
투여 경로 및 담체
다양한 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 피하로 또는 정맥내로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 생체내에서 경구, 동맥내, 비경구, 비강내, 근육내, 심장내, 뇌실내, 기관내, 협측, 직장, 복강내, 흡입, 피내, 국소, 경피 및 척수강내, 또는 달리 예를 들어 이식을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 경로에 의해 투여될 수 있다. 대상 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌제, 관장제, 주사, 흡입제 및 에어로졸을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태의 제제로 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 유전자 요법을 사용하여 전달된다. 비제한적 예로서, PSGL-1 길항제를 코딩하는 핵산 분자는 예를 들어 문헌 (예를 들어, 문헌 [Tang et al., Nature 356:152-154 (1992)] 참조)에 기재된 바와 같이, 금 마이크로입자 상에 코팅되어, 입자 충격 장치, 또는 "유전자 총"에 의해 피내로 전달될 수 있다.
다양한 실시양태에서, PSGL-1 길항제를 포함하는 조성물은 매우 다양한 제약상 허용되는 담체와 함께 제제로 제공된다 (예를 들어, 문헌 [Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000)] 참조). 비히클, 아주반트, 및 희석제를 포함한, 다양한 제약상 허용되는 담체가 이용가능하다. 더욱이, 다양한 제약상 허용되는 보조 물질, 예컨대, pH 조정제 및 완충제, 장성 조정제, 안정화제, 습윤제 등이 또한 이용가능하다. 비제한적 예시적인 담체는 염수, 완충 염수, 덱스트로스, 물, 글리세롤, 에탄올, 및 그의 조합을 포함한다.
다양한 실시양태에서, PSGL-1 길항제를 포함하는 조성물은 이들을 수성 또는 비수성 용매, 예컨대 식물성 또는 다른 오일, 합성 지방산 글리세리드, 고급 지방산의 에스테르, 또는 프로필렌 글리콜 중에; 목적하는 경우, 통상적인 첨가제, 예컨대, 가용화제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제 및 보존제와 함께 용해시키거나, 현탁시키거나 또는 유화시킴으로써 피하 투여를 포함하여 주사용으로 제제화될 수 있다. 다양한 실시양태에서, 조성물은 예를 들어, 허용되는 가압 추진제, 예컨대 디클로로플루오로메탄, 프로판, 질소 등을 사용하여 흡입용으로 제제화될 수 있다. 조성물은 또한 다양한 실시양태에서 예컨대 생체분해성 또는 비-생체분해성 중합체를 사용하여 지속 방출 마이크로캡슐로 제제화될 수 있다. 비제한적 예시적인 생체분해성 제제는 폴리 락트산-글리콜산 중합체를 포함한다. 비제한적 예시적인 비-생체분해성 제제는 폴리글리세린 지방산 에스테르를 포함한다. 이러한 제제를 제조하는 특정 방법은 예를 들어 EP 1 125 584 A1에 기재되어 있다.
각각 1회 이상 용량의 PSGL-1 길항제를 함유하는 1개 이상의 용기를 포함하는 제약 투여량 팩이 또한 제공한다. 일부 실시양태에서, 단위 투여량은 1종 이상의 추가의 작용제를 갖거나 갖지 않는, PSGL-1 길항제를 포함하는 조성물의 미리 결정된 양을 함유하는 단위 투여량이 제공된다. 일부 실시양태에서, 이러한 단위 투여량은 단일-사용을 위해 미리 충전된 주사용 시린지로 공급된다. 다양한 실시양태에서, 단위 투여량으로 함유된 조성물은 염수, 수크로스 등; 완충제, 예컨대 포스페이트 등을 포함할 수 있고/거나; 안정하고 효과적인 pH 범위 내에서 제제화될 수 있다. 대안적으로, 일부 실시양태에서, 조성물은 적절한 액체, 예를 들어, 멸균수 첨가시 재구성될 수 있는, 동결건조된 분말로서 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 수크로스 및 아르기닌을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 단백질 응집을 억제하는 1종 이상의 물질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 헤파린 및/또는 프로테오글리칸을 포함한다.
제약 조성물은 특정 적응증의 치료 또는 예방에 효과적인 양으로 투여된다. 치료 유효량은 전형적으로 치료되는 대상체의 체중, 그 또는 그녀의 신체 또는 건강 상태, 치료될 상태의 광범위함, 또는 치료되는 대상체의 연령에 따라 달라진다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 용량당 약 50 μg/kg 체중 내지 약 50 mg/kg 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 용량당 약 100 μg/kg 체중 내지 약 50 mg/kg 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 용량당 약 100 μg/kg 체중 내지 약 20 mg/kg 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 용량당 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 20 mg/kg 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 용량당 약 10 mg 내지 약 1,000 mg 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1은 용량당 약 20 mg 내지 약 500 mg 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 용량당 약 20 mg 내지 약 300 mg 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 용량당 약 20 mg 내지 약 200 mg 범위의 양으로 투여될 수 있다.
PSGL-1 길항제 조성물은 대상체에게 필요한 만큼 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 유효 용량의 PSGL-1 길항제는 대상체에게 1회 이상 투여된다. 다양한 실시양태에서, 유효 용량의 PSGL-1 길항제는 대상체에게 1개월에 1회, 1개월에 1회 미만, 예컨대, 예를 들어, 2개월마다, 3개월마다, 또는 6개월마다 투여된다. 다른 실시양태에서, 유효 용량의 PSGL-1 길항제는 1개월에 1회 초과, 예컨대 예를 들어 2주마다, 매주, 1주에 2회, 1주에 3회, 매일, 또는 1일에 다수회 투여된다. 유효 용량의 PSGL-1 길항제는 대상체에게 적어도 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 유효 용량의 PSGL-1 길항제는 적어도 1개월, 적어도 6개월, 또는 적어도 1년의 기간 동안을 포함하여 다수회 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 대상체에게 상태의 1종 이상의 증상을 완화시키기에 필요한 만큼 투여된다.
조합 요법
본 발명에 따른 PSGL-1 길항제 (그의 임의의 기능적 단편 포함)는 그를 필요로 하는 대상체에게 질환의 치료를 위한 다른 생물학적 활성 물질 또는 다른 치료 절차와 조합하여 투여될 수 있다. 예를 들어, PSGL-1 길항제는 단독으로 또는 다른 방식의 치료와 함께 투여될 수 있다. 이들은 다른 방식의 치료, 예컨대 방사선 요법 전에, 그와 실질적으로 동시에, 또는 그 후에 제공될 수 있다.
암의 치료를 위해, PSGL-1 길항제는 항암제, 예컨대, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 또는 항신생물성 조성물 중 1종 이상과 함께 투여될 수 있다. 본 발명의 1종 이상의 PSGL-1 길항제와 조합하여 사용될 수 있는 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 항신생물성 조성물의 비제한적인 예는 "정의" 하에 본원에 제공된다.
특정 실시양태에서, PSGL-1에 특이적으로 결합하는 PSGL-1 길항제 ("PSGL-1 결합 길항제"), 예를 들어, PSGL-1 길항제 항체는 VISTA에 특이적으로 결합하는 길항제 ("VISTA 결합 길항제"), 예를 들어, VISTA 길항제 항체와 함께, 면역계의 자극이 유익할 질환, 예를 들어, 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체에게 투여된다. 2종의 길항제는 예를 들어 PSGL-1 길항제와 면역-항암제의 조합에 대해 하기 기재된 바와 같이, 동시에 또는 연속적으로 투여될 수 있다. 1종 이상의 추가의 치료제, 예를 들어, 체크포인트 조정제가 예를 들어 암 또는 감염성 질환에 대한, PSGL-1 결합 길항제 및 VISTA 결합 길항제를 사용한 치료에 추가될 수 있다.
특정 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에게 동시에 또는 연속적으로, 또 다른 치료와 함께 투여된다. 예를 들어, PSGL-1 길항제는 방사선요법, 수술, 또는 화학요법, 예를 들어, 표적화된 화학요법 또는 면역요법 중 1종 이상과 함께 투여될 수 있다. 면역요법, 예를 들어, 암 면역요법은 암 백신 및 면역-항암제를 포함한다. PSGL-1 길항제는 예를 들어, PSGL-1에 결합하는 단백질, 항체, 항체 단편 또는 소분자일 수 있다. PSGL-1 길항제는 PSGL-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다. PSGL-1 길항제는 예를 들어, VISTA에 결합하는 단백질, 항체, 항체 단편 또는 소분자일 수 있다. PSGL-1 길항제는 VISTA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다.
특정 실시양태에서, 암을 갖는 대상체의 치료 방법은 암을 갖는 대상체에게 PSGL-1 길항제, 예를 들어, PSGL-1 항체 또는 VISTA 항체, 및 1종 이상의 면역-항암제를 투여하는 것을 포함한다. 면역요법, 예를 들어, 면역-항암제를 사용한 요법은 대상체에서 면역 반응을 증진, 자극, 및/또는 상향조절하는 데 효과적이다. 한 측면에서, PSGL-1 길항제와 면역-항암제의 투여는 암의 치료에서, 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 데 있어서 상승작용적 효과를 갖는다.
PSGL-1 길항제와 또 다른 작용제, 예를 들어, 면역-항암제의 조합에 대한 본원의 설명에 대해, PSGL-1 길항제가 PSGL-1 결합 길항제인 경우, 면역-항암제는 VISTA 결합 길항제일 수 있고, PSGL-1 길항제가 VISTA 결합 길항제인 경우, 면역-항암제는 PSGL-1 결합 길항제일 수 있다.
한 측면에서, PSGL-1 길항제는 면역-항암제의 투여 전에 순차적으로 투여된다. 한 측면에서, PSGL-1 길항제는 면역-항암제와 공동으로 투여된다. 한 측면에서, PSGL-1 길항제는 면역-항암제의 투여 후에 순차적으로 투여된다. 2종의 작용제의 투여는 예를 들어 30분, 60분, 90분, 120분, 3시간, 6시간, 12시간, 24시간, 36시간, 48시간, 3일, 5일, 7일, 또는 1주 이상 이격된 시간에 시작될 수 있거나, 또는 제2 작용제의 투여는 제1 작용제가 투여되고 예를 들어 30분, 60분, 90분, 120분, 3시간, 6시간, 12시간, 24시간, 36시간, 48시간, 3일, 5일, 7일, 또는 1주 이상 후에 시작될 수 있다.
특정 측면에서, PSGL-1 길항제 및 면역-항암제는 환자에게 동시에 투여되고, 예를 들어 동시에, 예를 들어 30 또는 60분의 기간에 걸쳐 주입된다. PSGL-1 길항제는 면역-항암제와 공동-제제화될 수 있다.
면역-항암제는, 예를 들어 소분자 약물, 항체 또는 그의 단편, 또는 다른 생물학적 분자 또는 소분자를 포함한다. 생물학적 면역-항암제의 예는 항체, 항체 단편, 백신 및 시토카인을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 한 측면에서, 항체는 모노클로날 항체이다. 특정 측면에서, 모노클로날 항체는 인간화 또는 인간 항체이다.
한 측면에서, 면역-항암제는 면역 세포, 예를 들어 T 세포 상의 (i) 자극 (공동-자극 포함) 분자 (예를 들어, 수용체 또는 리간드)의 효능제 또는 (ii) 억제 (공동-억제 포함) 분자 (예를 들어, 수용체 또는 리간드)의 길항제이며, 이들 둘 다는 항원-특이적 T 세포 반응을 증폭시킨다. 특정 측면에서, 면역-항암제는 선천성 면역에 수반되는 세포, 예를 들어 NK 세포 상의 (i) 자극 (공동-자극 포함) 분자 (예를 들어, 수용체 또는 리간드)의 효능제 또는 (ii) 억제 (공동-억제 포함) 분자 (예를 들어, 수용체 또는 리간드)의 길항제이고, 여기서 면역-항암제는 선천성 면역을 증진시킨다. 이러한 면역-항암제는 종종 면역 체크포인트 조절제, 예를 들어 면역 체크포인트 억제제 또는 면역 체크포인트 자극제로 지칭된다.
특정 실시양태에서, 면역-항암제는 이뮤노글로불린 슈퍼 패밀리 (IgSF)의 구성원인 자극 또는 억제 분자를 표적화한다. 예를 들어, 면역-항암제는 B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5, 및 B7-H6을 포함하는 막-결합된 리간드의 B7 패밀리의 구성원을 표적화하는 (또는 이에 특이적으로 결합하는) 작용제 또는 B7 패밀리 구성원에 특이적으로 결합하는 공동-자극 또는 공동-억제 수용체일 수 있다. 면역-항암제는 막 결합 리간드의 TNF 패밀리의 구성원을 표적화하는 작용제 또는 예를 들어 TNF 수용체 패밀리 구성원에 특이적으로 결합하는 공동-자극 또는 공동-억제 수용체일 수 있다. 면역-항암제에 의해 표적화될 수 있는 예시적인 TNF 및 TNFR 패밀리 구성원은 CD40 및 CD40L, OX-40, OX-40L, GITR, GITRL, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, 림프독소 α/TNFβ, TNFR2, TNFα, LTβR, 림프독소 α 1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY 및 NGFR을 포함한다. 암을 치료하기 위해 PSGL-1 길항제와 조합하여 사용될 수 있는 면역-항암제는 IgSF 구성원, 예컨대 B7 패밀리 구성원, B7 수용체 패밀리 구성원, TNF 패밀리 구성원 또는 TNFR 패밀리 구성원을 표적화하는 작용제, 예를 들어, 항체, 예컨대 상기 기재된 것일 수 있다.
한 측면에서, PSGL-1 길항제는 (i) T 세포 활성화를 억제하는 단백질 예컨대 CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, 갈렉틴 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, 갈렉틴-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, B7-H3, B7-H4, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1, TIM-4, 및 PSGL-1의 길항제 (예를 들어, 면역 체크포인트 억제제) 및 (ii) T 세포 활성화를 자극하는 단백질 예컨대 B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, CD40L, DR3 및 CD28H의 효능제 중 1종 이상과 함께 투여된다.
한 측면에서, 면역-항암제는 T 세포 활성화를 억제하는 시토카인 (예를 들어, IL-6, IL-10, TGF-β, VEGF, 및 다른 면역억제성 시토카인)을 억제하는 작용제 (즉, 그의 길항제)이거나 또는 T 세포 활성화를 자극하는 시토카인, 예컨대 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21 및 IFNα의 효능제 (예를 들어, 시토카인 그자체)이다.
면역계를 자극하기 위해, 예를 들어, 암 및 감염성 질환의 치료를 위해 PSGL-1 길항제와 조합될 수 있는 다른 작용제는 NK 세포 상의 억제 수용체의 길항제 또는 NK 세포 상의 활성화 수용체의 효능제를 포함한다. 예를 들어, 항-PSGL-1 길항제는 KIR의 길항제와 조합될 수 있다.
조합 요법을 위한 또 다른 작용제는 RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) 또는 FPA008 (WO11/140249; WO13169264; WO14/036357)을 포함한 CSF-1R 길항제 항체와 같은 CSF-1R 길항제를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 대식세포 또는 단핵구를 억제하거나 고갈시키는 작용제를 포함한다.
면역-항암제는 또한 TGF-β 신호전달을 억제하는 작용제를 포함한다.
PSGL-1 길항제와 조합될 수 있는 추가의 작용제는 종양 항원 제시를 증진시키는 작용제, 예를 들어 수지상 세포 백신, GM-CSF 분비 세포 백신, CpG 올리고뉴클레오티드 및 이미퀴모드, 또는 종양 세포의 면역원성을 증진시키는 요법 (예를 들어, 안트라시클린)을 포함한다.
PSGL-1 길항제와 조합될 수 있는 또 다른 요법은 Treg 세포를 고갈시키거나 차단시키는 요법, 예를 들어 CD25에 특이적으로 결합하는 작용제를 포함한다.
PSGL-1 길항제와 조합될 수 있는 또 다른 요법은 대사 효소, 예컨대 인돌아민 디옥시게나제 (IDO), 디옥시게나제, 아르기나제, 또는 산화질소 신테타제를 억제하는 요법이다.
사용될 수 있는 작용제의 또 다른 부류는 아데노신의 형성을 억제하거나 또는 아데노신 A2A 수용체를 억제하는 작용제를 포함한다.
암을 치료하기 위해 PSGL-1 길항제와 조합될 수 있는 다른 요법은 T 세포 무반응 또는 소진을 역전/방지하는 요법 및 종양 부위에서의 선천성 면역 활성화 및/또는 염증을 촉발하는 요법을 포함한다.
PSGL-1 길항제는 1종 초과의 면역-항암제와 조합될 수 있고, 예를 들어 면역 경로의 다중 요소를 표적화하는 조합 접근법, 예컨대 하기 중 하나 이상과 조합될 수 있다: 종양 항원 제시를 증진시키는 요법 (예를 들어, 수지상 세포 백신, GM-CSF 분비 세포 백신, CpG 올리고뉴클레오티드, 이미퀴모드); 예를 들어 CTLA-4 및/또는 PD1/PD-L1/PD-L2 경로의 억제 및/또는 Treg 또는 다른 면역 억제 세포의 고갈 또는 차단에 의해 음성 면역 조절을 억제하는 요법; 예를 들어 CD-137, OX-40, 및/또는 GITR 경로를 자극하고/거나 T 세포 이펙터 기능을 자극하는 효능제로 양성 면역 조절을 자극하는 요법; 항종양 T 세포의 빈도를 전신에서 증가시키는 요법; 예를 들어 CD25의 길항제 (예를 들어, 다클리주맙)를 사용하거나 생체외 항-CD25 비드 고갈에 의해 Treg, 예컨대 종양에서의 Treg을 고갈시키거나 억제하는 요법; 종양에서의 억제 골수 세포의 기능에 영향을 미치는 요법; 종양 세포의 면역원성을 증진시키는 요법 (예를 들어, 안트라시클린); 유전자 변형된 세포, 예를 들어 키메라 항원 수용체에 의해 변형된 세포 (CAR-T 요법)를 포함하는 입양 T 세포 또는 NK 세포 전달; 대사 효소, 예컨대 인돌아민 디옥시게나제 (IDO), 디옥시게나제, 아르기나제 또는 산화질소 신테타제를 억제하는 요법; T 세포 무반응 또는 소진을 역전/방지하는 요법; 종양 부위에서의 선천성 면역 활성화 및/또는 염증을 촉발하는 요법; 면역 자극 시토카인의 투여 또는 면역 억제 시토카인의 차단.
예를 들어, PSGL-1 길항제는 양성 공동자극 수용체를 라이게이션하는 1종 이상의 효능작용제; 억제 수용체를 통해 신호전달을 약화시키는 1종 이상의 길항제 (차단제), 예컨대 종양 미세환경 내의 별개의 면역 억제 경로를 극복한 길항제 (예를 들어, PD-L1/PD-1/PD-L2 상호작용을 차단함); 항종양 면역 세포, 예컨대 T 세포의 빈도를 전신에서 증가시키거나, (예를 들어, CD25를 억제함으로써) Treg을 고갈시키거나 억제하는 1종 이상의 작용제; 대사 효소 예컨대 IDO를 억제하는 1종 이상의 작용제; T 세포 무반응 또는 소진을 역전/예방하는 1종 이상의 작용제; 및 종양 부위에서의 선천성 면역 활성화 및/또는 염증을 촉발하는 1종 이상의 작용제와 함께 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 CTLA-4 길항제, 예컨대 길항작용 CTLA-4 항체이다. 적합한 CTLA-4 항체는 예를 들어, 예르보이 (이필리무맙) 또는 트레멜리무맙을 포함한다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 PD-1 길항제, 예컨대 길항작용 PD-1 항체이다. 적합한 PD-1 항체는 예를 들어, 옵디보 (니볼루맙), 키트루다 (펨브롤리주맙) 또는 MEDI-0680 (AMP-514; WO2012/145493)을 포함한다. 면역-항암제는 피딜리주맙 (CT-011)을 포함할 수 있으나, PD-1 결합에 대한 그의 특이성에 의문이 제기되었다. PD-1 수용체를 표적화하기 위한 또 다른 접근법은 AMP-224로 불리는, IgG1의 Fc 부분에 융합된 PD-L2 (B7-DC)의 세포외 도메인으로 구성된 재조합 단백질이다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 PD-L1 길항제, 예컨대 길항작용 PD-L1 항체이다. 적합한 PD-L1 항체는 예를 들어, MPDL3280A (RG7446; WO2010/077634), 두르발루맙 (MEDI4736), BMS-936559 (WO2007/005874), MSB0010718C (WO2013/79174) 또는 rHigM12B7을 포함한다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 LAG-3 길항제, 예컨대 길항작용 LAG-3 항체이다. 적합한 LAG3 항체는 예를 들어, BMS-986016 (WO10/19570, WO14/08218), 또는 IMP-731 또는 IMP-321 (WO08/132601, WO09/44273)을 포함한다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 CD137 (4-1BB) 효능제, 예컨대 효능작용 CD137 항체이다. 적합한 CD137 항체는, 예를 들어, 우렐루맙 또는 PF-05082566 (WO12/32433)을 포함한다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 GITR 효능제, 예컨대 효능작용 GITR 항체이다. 적합한 GITR 항체는, 예를 들어, TRX-518 (WO06/105021, WO09/009116), MK-4166 (WO11/028683), 또는 WO2015/031667에 개시된 GITR 항체를 포함한다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 OX40 효능제, 예컨대 효능작용 OX40 항체이다. 적합한 OX40 항체는, 예를 들어 MEDI-6383, MEDI-6469 또는 MOXR0916 (RG7888; WO06/029879)을 포함한다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 CD40 효능제, 예컨대 효능작용 CD40 항체이다. 특정 실시양태에서, 면역-항암제는 CD40 길항제, 예컨대 길항작용 CD40 항체이다. 적합한 CD40 항체는, 예를 들어 루카투무맙 (HCD122), 다세투주맙 (SGN-40), CP-870,893 또는 카이 롭 7/4를 포함한다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 CD27 효능제, 예컨대 효능작용 CD27 항체이다. 적합한 CD27 항체는, 예를 들어 바를리루맙 (CDX-1127)을 포함한다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 MGA271 (B7H3에 대한 것) (WO11/109400)이다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 KIR 길항제, 예컨대 리릴루맙이다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 IDO 길항제이다. 적합한 IDO 길항제는, 예를 들어 INCB-024360 (WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), 인독시모드, NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO12/142237) 또는 F001287을 포함한다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 톨-유사 수용체 효능제, 예를 들어 TLR2/4 효능제 (예를 들어, 바실루스 칼메트-게랭(Bacillus Calmette-Guerin)); TLR7 효능제 (예를 들어, 힐토놀 또는 이미퀴모드); TLR7/8 효능제 (예를 들어, 레시퀴모드); 또는 TLR9 효능제 (예를 들어, CpG7909)이다.
한 실시양태에서, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환을 갖는 대상체는 PSGL-1 길항제 및 면역-항암제를 대상체에게 투여하는 것에 의해 치료되고, 여기서 면역-항암제는 TGF-β 억제제, 예를 들어 GC1008, LY2157299, TEW7197, 또는 IMC-TR1이다.
예시적인 PSGL-1 길항제
일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1 항체 및 VISTA 항체로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1 항체이다. 일부 실시양태에서, 그것은 VISTA 항체이다. 암을 치료하기 위한 PSGL-1 길항제는 또한 PSGL-1과 VISTA 사이의 상호작용을 억제하는, 임의로 추가로 융합 파트너를 포함하고 융합 분자 형태인, 비-항체 단백질, 예컨대 PSGL-1 또는 VISTA 또는 그의 부분 (예를 들어, ECD)일 수 있다. 다른 실시양태에서, 길항제는 또한 소분자 또는 소형 펩티드일 수 있다.
PSGL-1 항체 및 VISTA 항체
일부 실시양태에서, 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 차단하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, PSGL-1-매개 신호전달을 억제하는 항체가 제공된다. 일부 이러한 실시양태에서, 항체는 PSGL-1 항체이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 PSGL-1 세포외 도메인 (ECD)에 결합한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 VISTA-매개 신호전달을 억제한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 PSGL-1-매개 신호전달을 억제한다.
일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 PSGL-1에 대해, 예를 들어, humPSGL-1에 대해 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 실시양태에서, PSGL-1 항체는 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 PSGL-1에 대해, 예를 들어, humPSGL-1에 대해 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 임의의 특징을 갖는 PSGL-1 항체는 VISTA의 PSGL-1에 대한 결합의 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 90% 또는 100%를 억제한다.
일부 실시양태에서, 항체는 다중 종으로부터의 PSGL-1에 결합한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항체는 인간 PSGL-1에 결합하고, 또한 마우스, 래트, 개, 기니 피그, 및 시노몰구스 원숭이로부터 선택되는 적어도 1종의 포유동물로부터의 PSGL-1에 결합한다.
일부 실시양태에서, 항체는 VISTA 항체이다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 VISTA 세포외 도메인 (ECD)에 결합한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 VISTA의 PSGL-1에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 VISTA-매개 신호전달을 억제한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 PSGL-1-매개 신호전달을 억제한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 VISTA에 대해, 예를 들어, 인간 VISTA에 대해 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 VISTA에 대해, 예를 들어, 인간 VISTA에 대해 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 임의의 특징을 갖는 VISTA 항체는 VISTA의 PSGL-1에 대한 결합의 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 90% 또는 100%를 억제한다.
일부 실시양태에서, 항체는 다양한 종으로부터의 VISTA에 결합한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항체는 인간 VISTA에 결합하고, 또한 마우스, 래트, 개, 기니 피그, 및 시노몰구스 원숭이로부터 선택되는 적어도 1종의 포유동물로부터의 VISTA에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체가 제공된다. 비제한적 예시적인 이중특이적 항체는 제1 항원에 결합하는 중쇄/경쇄 조합을 포함하는 제1 아암 및 제2 항원에 결합하는 중쇄/경쇄 조합을 포함하는 제2 아암을 포함하는 항체를 포함한다. 추가의 비제한적 예시적인 다중특이적 항체는 이중 가변 도메인 항체이다. 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 억제하는 제1 아암, 및 예를 들어 CD3에 결합함으로써 T 세포를 자극하는 제2 아암을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 아암은 PSGL-1에 결합한다.
인간화 항체
일부 실시양태에서, PSGL-1 또는 VISTA 항체는 인간화 항체이다. 인간화 항체는 항체 치료제에 대한 면역 반응을 발생시킬 수 있고, 치료제의 유효성을 감소시킬 수 있는, 비-인간 항체에 대한 인간 면역 반응 (예컨대, 인간 항-마우스 항체 (HAMA) 반응)을 감소시키거나 또는 제거하기 때문에, 인간화 항체가 치료 분자로서 유용하다.
항체는 임의의 방법에 의해 인간화될 수 있다. 인간화의 비제한적 예시적인 방법은 예를 들어, 미국 특허 번호 5,530,101; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 6,180,370; 문헌 [Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-27 (1988); Verhoeyen et al., Science 239: 1534-36 (1988)]; 및 미국 공개 번호 US 2009/0136500에 기재된 방법을 포함한다.
상기 언급된 바와 같이, 인간화 항체는 비-인간 가변 영역의 프레임워크 영역에서의 적어도 1개의 아미노산이 인간 프레임워크 영역에서의 상응하는 위치로부터의 아미노산으로 대체된 항체이다. 일부 실시양태에서, 비-인간 가변 영역의 프레임워크 영역에서의 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 15 또는 적어도 20개의 아미노산은 1개 이상의 인간 프레임워크 영역에서의 1개 이상의 상응하는 위치로부터의 아미노산으로 대체된다.
일부 실시양태에서, 치환에 사용되는 상응하는 인간 아미노산 중 일부는 상이한 인간 이뮤노글로불린 유전자의 프레임워크 영역으로부터의 것이다. 즉, 일부 이러한 실시양태에서, 비-인간 아미노산 중 1개 이상은 제1 인간 항체의 인간 프레임워크 영역으로부터의 상응하는 아미노산으로 대체될 수 있거나 또는 제1 인간 이뮤노글로불린 유전자에 의해 코딩될 수 있고, 비-인간 아미노산 중 1개 이상은 제2 인간 항체의 인간 프레임워크 영역으로부터의 상응하는 아미노산으로 대체될 수 있거나 또는 제2 인간 이뮤노글로불린 유전자에 의해 코딩될 수 있고, 비-인간 아미노산 중 1개 이상은 제3 인간 항체의 인간 프레임워크 영역으로부터의 상응하는 아미노산으로 대체될 수 있거나또는 제3 인간 이뮤노글로불린 유전자에 의해 코딩될 수 있으며, 그 다음의 것도 그러할 수 있다. 추가로, 일부 실시양태에서, 단일 프레임워크 영역, 예를 들어, FR2에서의 치환에 사용되는 상응하는 인간 아미노산 모두가 동일한 인간 프레임워크로부터 유래될 필요는 없다. 그러나, 일부 실시양태에서, 치환에 사용되는 상응하는 인간 아미노산 모두가 동일한 인간 항체로부터의 것이거나 또는 동일한 인간 이뮤노글로불린 유전자에 의해 코딩된다.
일부 실시양태에서, 항체는 1개 이상의 전체 프레임워크 영역을 상응하는 인간 프레임워크 영역으로 대체함으로써 인간화된다. 일부 실시양태에서, 대체된 비-인간 프레임워크 영역과 최고 수준의 상동성을 갖는 인간 프레임워크 영역이 선택된다. 일부 실시양태에서, 이러한 인간화 항체는 CDR-그라프트된 항체이다.
일부 실시양태에서, CDR-그라프팅 후, 1개 이상의 프레임워크 아미노산은 마우스 프레임워크 영역에서의 상응하는 아미노산으로 다시 변경된다. 일부 실시양태에서, 이러한 "복귀 돌연변이"는 CDR 중 1개 이상의 것의 구조에 기여하는 것으로 보이고/거나, 항원 접촉에 수반될 수 있고/거나, 항체의 전체 구조적 완전성에 수반되는 것으로 보이는 1개 이상의 마우스 프레임워크 아미노산을 유지시키기 위해 이루어진다. 일부 실시양태에서, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 또는 0개의 복귀 돌연변이가 CDR 그라프팅 후 항체의 프레임워크 영역에 대해 이루어진다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 또한 인간 중쇄 불변 영역 및/또는 인간 경쇄 불변 영역을 포함한다.
키메라 항체
일부 실시양태에서, PSGL-1 항체 또는 VISTA 항체는 키메라 항체이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체 또는 VISTA 항체는 적어도 1종의 비-인간 가변 영역 및 적어도 1종의 인간 불변 영역을 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, PSGL-1 항체 또는 VISTA 항체의 가변 영역 모두는 비-인간 가변 영역이고, PSGL-1 항체 또는 VISTA 항체의 불변 영역 모두는 인간 불변 영역이다. 일부 실시양태에서, 키메라 항체의 1개 이상의 가변 영역은 마우스 가변 영역이다. 키메라 항체의 인간 불변 영역은 비-인간 불변 영역과 동일한 이소형일 필요는 없으며, 동일할 경우, 이는 대체된다. 키메라 항체는, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-55 (1984)]에서 논의된다.
인간 항체
일부 실시양태에서, PSGL-1 항체 또는 VISTA 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 비제한적 예시적인 방법은 인간 이뮤노글로불린 유전자좌를 포함하는 트랜스제닉 마우스에서 인간 항체를 제조하는 것을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551-55 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-8 (1993); Lonberg et al., Nature 368: 856-9 (1994)]; 및 미국 특허 번호 5,545,807; 6,713,610; 6,673,986; 6,162,963; 5,545,807; 6,300,129; 6,255,458; 5,877,397; 5,874,299; 및 5,545,806을 참조한다.
비제한적 예시적인 방법은 또한 파지 디스플레이 라이브러리를 사용하여 인간 항체를 제조하는 것을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Hoogenboom et al., J. Mol. Biol. 227: 381-8 (1992); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-97 (1991)]; 및 PCT 공개 번호 WO 99/10494를 참조한다.
인간 항체 불변 영역
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화, 키메라, 또는 인간 항체는 1개 이상의 인간 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 중쇄 불변 영역은 IgA, IgG, 및 IgD로부터 선택되는 이소형을 갖는다. 일부 실시양태에서, 인간 경쇄 불변 영역은 κ 및 λ로부터 선택되는 이소형을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 인간 IgG 불변 영역, 예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 Fc 융합 파트너는 예를 들어 IgG1 불변 영역에서 C237S 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, 서열식별번호: 17을 참조한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 인간 IgG2 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, IgG2 불변 영역은 미국 특허 번호 6,900,292에 기재된 바와 같이, P331S 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 인간 IgG4 불변 영역에서 S241P 돌연변이를 포함한다. 예를 들어 문헌 [Angal et al. Mol. Immunol. 30(1): 105-108 (1993)]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 인간 IgG4 불변 영역 및 인간 κ 경쇄를 포함한다.
중쇄 불변 영역의 선택은 항체가 생체내에서 이펙터 기능을 갖게 될지 결정할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 이펙터 기능은 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체-의존성 세포독성 (CDC)을 포함하고, 이는 항체가 결합하는 세포의 사멸을 발생시킬 수 있다. 전형적으로, 인간 IgG1 또는 IgG3 중쇄를 포함하는 항체는 이펙터 기능을 갖는다.
일부 실시양태에서, 이펙터 기능은 바람직하지 않다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 이펙터 기능은 염증성 상태 및/또는 자가면역 장애의 치료에 바람직하지 않을 수 있다. 일부 이러한 실시양태에서, 인간 IgG4 또는 IgG2 중쇄 불변 영역은 선택되거나 또는 조작된다. 일부 실시양태에서, IgG4 불변 영역은 S241P 돌연변이를 포함한다.
항체의 예시적인 특성
PSGL-1 항체의 예시적인 특성
일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 PSGL-1에 결합하고, PSGL-1-매개 신호전달을 억제한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 차단한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 예를 들어, 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 90% 또는 100%만큼 차단한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 50 nM 미만, 20 nM 미만, 10 nM 미만, 또는 1 nM 미만의 결합 친화도 (KD)로 PSGL-1에 결합한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체의 비관련된, 비-PSGL-1 단백질에 대한 결합의 정도는 예를 들어 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정 시, 항체의 PSGL-1에 대한 결합의 약 10% 미만이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 상이한 종으로부터의 PSGL-1 중에서 보존된 PSGL-1의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 항체는 humPSGL-1에 결합하는 인간 또는 인간화 PSGL-1 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
VISTA 항체의 예시적인 특성
일부 실시양태에서, VISTA 항체는 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 VISTA에 결합하고, PSGL-1-매개 신호전달을 억제한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 차단한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 예를 들어, 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 90% 또는 100%만큼 차단한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 50 nM 미만, 20 nM 미만, 10 nM 미만, 또는 1 nM 미만의 결합 친화도 (KD)로 VISTA에 결합한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체의 비관련된, 비-VISTA 단백질에 대한 결합의 정도는 예를 들어 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정 시, 항체의 VISTA에 대한 결합의 약 10% 미만이다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 상이한 종으로부터의 VISTA 중에서 보존된 VISTA의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, VISTA 항체는 인간 VISTA에 결합하는 인간 또는 인간화 VISTA 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
항체 접합체
일부 실시양태에서, PSGL-1 또는 VISTA 항체는 표지에 접합된다. 본원에 사용된 바와 같이, 표지는 항체의 검출을 용이하게 하고/거나, 항체가 결합하는 분자의 검출을 용이하게 하는 모이어티이다. 비제한적 예시적인 표지는 방사성동위원소, 형광 기, 효소 기, 화학발광 기, 비오틴, 에피토프 태그, 금속-결합 태그 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 의도된 용도에 따라 적합한 표지를 선택할 수 있다.
일부 실시양태에서, 표지는 시험관내에서 화학적 방법을 사용하여 항체에 접합된다. 비제한적 예시적인 화학적 접합 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 이는 예를 들어 써모 사이언티픽 라이프 사이언스 리서치 프로듀시스(Thermo Scientific Life Science Research Produces) (예전 피어스(Pierce), 일리노이주 록포드), 프로자임(Prozyme) (캘리포니아주 헤이워드), SACRI 안티바디 서비시스(SACRI Antibody Services) (캐나다 캘거리), AbD 세로텍(AbD Serotec) (노스캐롤라이나주 롤리) 등으로부터 상업적으로 입수가능한 서비스, 방법 및/또는 시약을 포함한다. 일부 실시양태에서, 표지가 폴리펩티드인 경우, 표지는 적어도 1개의 항체 쇄를 갖는 동일한 발현 벡터로부터 발현됨으로써 항체 쇄에 융합된 표지를 포함하는 폴리펩티드로 생산될 수 있다.
PSGL-1 및 VISTA ECD, ECD 융합 분자, 및 소형 펩티드
일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1 폴리펩티드, 예컨대 전장 PSGL-1, 또는 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 억제하는 PSGL-1의 단편이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1 세포외 도메인 (ECD)이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 전장 PSGL-1 ECD이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 ECD는 예를 들어 그것이 유래된 전장 PSGL-1 ECD 아미노산 서열의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%를 포함하는 PSGL-1 ECD 단편이다. 일부 실시양태에서 PSGL-1 ECD는 예를 들어 그것이 유래된 전장 PSGL-1 ECD와의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 PSGL-1 ECD 변이체이다. 다른 실시양태에서, PSGL-1 ECD는 비-인간 PSGL-1 ECD로부터의 것이고, 전장, 단편, 또는 변이체일 수 있다.
일부 실시양태에서, PSGL-1 또는 PSGL-1 단편은 적어도 1개의 융합 파트너와 조합된다. 따라서, 일부 이러한 실시양태에서 PSGL-1 길항제는 PSGL-1 ECD 융합 분자를 형성하기 위해 전장 PSGL-1 ECD 및 적어도 1개의 융합 파트너를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 융합 분자의 PSGL-1 ECD 부분은 예를 들어 그것이 유래된 전장 PSGL-1 ECD 아미노산 서열의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%를 포함하는 PSGL-1 ECD 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 분자의 PSGL-1 ECD 부분은 예를 들어 그것이 유래된 전장 PSGL-1 ECD와의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 PSGL-1 ECD 변이체이다. 다른 실시양태에서, PSGL-1 ECD 성분은 비-인간 PSGL-1 ECD로부터의 것이고, 전장, 단편, 또는 변이체일 수 있다. 상기 융합 분자 실시양태 중 임의의 것에서, 융합 파트너는 이뮤노글로불린 Fc 분자, 예를 들어, 인간 Fc 분자, 또는 일부 실시양태에서 서열식별번호: 11-13으로부터 선택되는 서열을 갖는 Fc를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 융합 파트너는 상이한 분자 예컨대 알부민 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 초과의 융합 파트너는 PSGL-1 ECD에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 융합 파트너 (또는 파트너들)는 ECD의 C-말단에 부착될 수 있으며, 또한 예컨대 아미노산 측쇄 상에서 또는 N-말단에서 다른 부착이 가능하다. 융합 파트너의 PSGL-1 ECD에 대한 부착은 직접적이거나 (즉 공유 결합에 의함) 또는 링커를 통해 간접적일 수 있다. 링커는 예를 들어, 융합 파트너를 ECD에 공유결합으로 또는 비-공유결합으로 연결시키는 역할을 하는 적어도 1개의 개재 아미노산 또는 일부 다른 화학적 모이어티를 포함할 수 있다.
상기 실시양태 중 임의의 것에서, PSGL-1 폴리펩티드는 신호 서열을 포함할 수 있거나 또는 성숙 형태, 즉, 신호 서열을 포함하지 않을 수 있다. 신호 서열은 천연 PSGL-1 분자로부터의 것일 수 있거나 또는 그것은 상이한 단백질, 예를 들어 세포 배양물 중에서 PSGL-1 폴리펩티드의 발현을 증진시키기 위해 선택된 것으로부터의 신호 서열일 수 있다.
일부 실시양태에서 PSGL-1 ECD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-241 또는 서열식별번호: 14의 1-241의 서열 (각각 인간 이소형 1 및 2, 신호 서열 포함)을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, PSGL-1 ECD는 서열식별번호: 1의 아미노산 23-241 또는 서열식별번호: 14의 23-241 또는 서열식별번호: 2의 아미노산 1-219 또는 서열식별번호: 15의 아미노산 1-219의 서열 또는 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4 또는 서열식별번호: 16 또는 서열식별번호: 17 (인간 이소형 1 및 2, 성숙 형태, 신호 서열 없음), 또는 서열식별번호: 18 (또 다른 예시적인 ECD 서열)의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 ECD는 상기 아미노산 서열 중 하나로 이루어질 수 있다. 상기 경우 중 임의의 것에서, PSGL-1 ECD는 상기 아미노산 서열이 직접적으로 또는 링커, 예컨대 Fc, 알부민, 또는 PEG를 통해 융합 파트너에 연결될 수 있도록 하는 융합 분자의 일부일 수 있다. 예를 들어, 길항제가 PSGL-1 ECD 융합 분자인 일부 실시양태에서, 융합 분자는 상기 서열 중 하나 플러스 서열식별번호: 11-13 (이뮤노글로불린 Fc 서열) 중 적어도 하나 또는 인간 IgG1으로부터의 Fc를 포함할 수 있다. PSGL-1 ECD Fc 융합 분자는 PSGL-1 ECD 아미노산 서열의 Fc 아미노산 서열에 대한 직접적 부착에 의해 또는 링커 (개재 아미노산 또는 아미노산 서열 또는 또 다른 화학적 모이어티)를 통해 형성될 수 있다. 예를 들어 서열식별번호: 19는 하기 실시예에 사용된 PSGL-1 Fc 분자에서 사용되는 링커를 제공된다. 추가의 PSGL-1 ECD Fc 융합 분자는 문헌 [T. Pouyani et al., Cell 83: 333-343 (1995)]에 기재된다.
일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 VISTA 폴리펩티드, 예컨대 전장 VISTA 또는 VISTA와 PSGL-1 사이의 상호작용을 억제하는 VISTA의 단편이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 전장 VISTA 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 VISTA 세포외 도메인 (ECD)이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 전장 인간 VISTA ECD이다. 일부 실시양태에서, VISTA ECD는 예를 들어 그것이 유래된 전장 VISTA ECD 아미노산 서열의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%를 포함하는 VISTA ECD 단편일 수 있다. 일부 실시양태에서 VISTA ECD는 예를 들어 그것이 유래된 전장 VISTA ECD와의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 VISTA ECD 변이체이다. 다른 실시양태에서, VISTA ECD는 비-인간 VISTA ECD로부터의 것이고, 전장, 단편, 또는 변이체일 수 있다.
일부 실시양태에서, VISTA 또는 VISTA 단편은 적어도 1개의 융합 파트너와 조합된다. 따라서, 일부 이러한 실시양태에서 PSGL-1 길항제는 VISTA ECD 융합 분자를 형성하기 위해 전장 VISTA ECD 및 적어도 1개의 융합 파트너를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 융합 분자의 VISTA ECD 부분은 예를 들어 그것이 유래된 전장 VISTA ECD 아미노산 서열의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%를 포함하는 VISTA ECD 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 분자의 VISTA ECD 부분은 예를 들어 그것이 유래된 전장 VISTA ECD와의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 VISTA ECD 변이체이다. 다른 실시양태에서, VISTA ECD 성분은 비-인간 VISTA ECD로부터의 것이고, 전장, 단편, 또는 변이체일 수 있다. 상기 융합 분자 실시양태 중 임의의 것에서, 융합 파트너는 이뮤노글로불린 Fc 분자, 예를 들어, 인간 Fc 분자, 일부 실시양태에서 서열식별번호: 11-13으로부터 선택되는 서열을 갖는 것을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 융합 파트너는 상이한 분자 예컨대 알부민 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 초과의 융합 파트너는 VISTA ECD에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 융합 파트너 (또는 파트너들)는 ECD의 C-말단에 부착될 수 있으며, 또한 예컨대 아미노산 측쇄 상에서 또는 N-말단에서 다른 부착이 가능하다. 융합 파트너의 VISTA ECD에 대한 부착은 직접적이거나 (즉 공유 결합에 의함) 또는 링커를 통해 간접적일 수 있다. 링커는 예를 들어, 융합 파트너를 ECD에 공유결합으로 또는 비-공유결합으로 연결시키는 역할을 하는 적어도 1개의 개재 아미노산 또는 일부 다른 화학적 모이어티를 포함할 수 있다.
상기 실시양태 중 임의의 것에서, VISTA 폴리펩티드는 신호 서열을 포함할 수 있거나 또는 성숙 형태, 즉, 신호 서열을 포함하지 않을 수 있다. 신호 서열은 천연 VISTA 분자로부터의 것일 수 있거나 또는 그것은 상이한 단백질, 예를 들어 세포 배양물 중에서 VISTA 폴리펩티드의 발현을 증진시키기 위해 선택된 것으로부터의 신호 서열일 수 있다.
일부 실시양태에서 VISTA ECD는 서열식별번호: 10의 아미노산 1-202의 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, VISTA ECD는 상기 아미노산 서열로 이루어질 수 있다. 상기 경우 중 임의의 것에서, VISTA ECD는 상기 아미노산 서열이 직접적으로 또는 링커, 예컨대 Fc, 알부민, 또는 PEG를 통해 융합 파트너에 연결될 수 있도록 하는 융합 분자의 일부일 수 있다. 예를 들어, 길항제가 VISTA ECD 융합 분자인 일부 실시양태에서, 융합 분자는 서열식별번호: 10의 아미노산 1-202 플러스 서열식별번호: 11-13 (이뮤노글로불린 Fc 서열) 중 적어도 하나의 서열을 포함할 수 있거나, 또는 전체 융합 분자는 서열식별번호: 9 (예시적인 VISTA ECD Fc 융합 단백질)의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어질 수 있다. VISTA ECD Fc 융합 분자는 VISTA ECD 아미노산 서열의 Fc 아미노산 서열에 대한 직접적 부착에 의해 또는 링커 (개재 아미노산 또는 아미노산 서열 또는 또 다른 화학적 모이어티)를 통해 형성될 수 있다.
일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 소분자 또는 펩티드, 예를 들어, 소형 펩티드일 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 PSGL-1 ECD 단편의 아미노산 서열을 포함하는 소형 펩티드일 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 VISTA ECD 단편의 아미노산 서열을 포함하는 소형 펩티드일 수 있다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제는 예를 들어 3 내지 20개, 예를 들어, 3 내지 15개 또는 3 내지 10개의 아미노산을 갖는 소형 펩티드이며, 여기서 펩티드는 PSGL-1 단편, PSGL-1 ECD 단편, VISTA 단편, 또는 VISTA ECD 단편, 또는 PSGL-1 단편의 변이체, PSGL-1 ECD 단편, VISTA 단편, 또는 VISTA ECD 단편을 포함하는 서열을 가지면서, 선형 또는 원형일 수 있다. PSGL-1 또는 VISTA 단편의 이러한 변이체는 예를 들어, 그것이 유래된 천연 단편 서열에 대해 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 99% 서열 동일성을 가질 수 있다.
신호 펩티드
일부 분비되는 단백질이 대량으로 발현 및 분비되기 위해, 이종 단백질로부터의 신호 펩티드가 바람직할 수 있다. 이종 신호 펩티드를 사용하는 것은, 신호 펩티드가 분비 과정 동안 ER에서 제거되는 경우, 생성된 성숙 폴리펩티드가 변경되지 않고 유지될 수 있다는 점에서 유리할 수 있다. 일부 단백질의 발현 및 분비를 위해 이종 신호 펩티드의 부가가 요구될 수 있다.
비제한적 예시적인 신호 펩티드 서열은 예를 들어 싱가포르 국립 대학교 생화학과(Department of Biochemistry, National University of Singapore)에 의해 유지되는 온라인 신호 펩티드 데이터베이스에 기재되어 있다. 문헌 [Choo et al., BMC Bioinformatics, 6: 249 (2005)]; 및 PCT 공개 번호 WO 2006/081430을 참조한다.
번역-동시 및 번역후 변형
일부 실시양태에서, 폴리펩티드 예컨대 PSGL-1 또는 VISTA 항체 또는 PSGL-1 또는 VISTA ECD는 예를 들어 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화, 인산화, 아미드화, 알려져 있는 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해적 절단, 또는 항체 분자 또는 다른 세포 리간드에 대한 연결에 의해, 번역 동안에 또는 번역 후에 차별적으로 변형된다. 시아노겐 브로마이드, 트립신, 키모트립신, 파파인, V8 프로테아제에 의한 특이적 화학적 절단; NABH4; 아세틸화; 포르밀화; 산화; 환원; 및/또는 튜니카마이신의 존재 하의 대사적 합성을 포함하나 이에 제한되지는 않는 공지된 기술에 의해 수많은 화학적 변형 중 임의의 것이 수행될 수 있다.
본 발명에 의해 포괄되는 추가의 번역후 변형은, 예를 들어, N-연결된 또는 O-연결된 탄수화물 쇄; N-말단 또는 C-말단의 프로세싱; 화학적 모이어티의 아미노산 백본에 대한 부착; N-연결된 또는 O-연결된 탄수화물 쇄의 화학적 변형; 및 원핵생물 숙주 세포 발현의 결과로서의 N-말단 메티오닌 잔기의 부가 또는 결실을 포함한다.
PSGL-1 길항제를 코딩하는 핵산 분자
본원에 기재된 항체, 예컨대 PSGL-1 또는 VISTA 항체의 1개 이상의 쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 분자가 제공된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 본원에 기재된 항체의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 본원에 기재된 항체의 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 둘 다를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 핵산 분자는 중쇄를 코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 핵산 분자는 경쇄를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 이러한 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄는 1개의 핵산 분자로부터, 또는 2개의 별개의 핵산 분자로부터 2개의 별개의 폴리펩티드로서 발현된다. 일부 실시양태에서, 예컨대, 항체가 scFv인 경우, 단일 폴리뉴클레오티드는 함께 연결된 중쇄 및 경쇄 둘 다를 포함하는 단일 폴리펩티드를 코딩한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는, 번역된 경우에, 중쇄 또는 경쇄의 N 말단에 위치하는 리더 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 상기 논의된 바와 같이, 리더 서열은 천연 중쇄 또는 경쇄 리더 서열일 수 있거나, 또는 또 다른 이종 리더 서열일 수 있다.
다른 PSGL-1 길항제, 예컨대 PSGL-1 ECD 분자 또는 PSGL-1 ECD 융합 분자를 포함하는 PSGL-1의 단편 또는 변이체 및 VISTA ECD 분자 또는 VISTA ECD 융합 분자를 포함하는 VISTA의 단편 또는 변이체를 코딩하는 핵산이 또한 제공된다. 핵산 분자는 관련 기술분야에서 통상적인 재조합 DNA 기술을 사용하여 구축될 수 있다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 선택된 숙주 세포에서의 발현에 적합한 발현 벡터이다.
폴리펩티드 발현 및 생산
벡터
본원에 기재된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 제공된다. 이러한 벡터는 DNA 벡터, 파지 벡터, 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 벡터는 중쇄를 코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 서열, 및 경쇄를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄는 벡터로부터 2개의 별개의 폴리펩티드로서 발현된다. 일부 실시양태에서, 예컨대, 예를 들어, 항체가 scFv인 경우에, 중쇄 및 경쇄는 단일 폴리펩티드의 일부로서 발현된다.
일부 실시양태에서, 제1 벡터는 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 벡터는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 벡터 및 제2 벡터는 유사한 양으로 (예컨대, 유사한 몰량 또는 유사한 질량 양으로) 숙주 세포 내로 형질감염된다. 일부 실시양태에서, 제1 벡터 및 제2 벡터는 5:1 내지 1:5의 몰비 또는 질량비로 숙주 세포 내로 형질감염된다. 일부 실시양태에서, 중쇄를 코딩하는 벡터 및 경쇄를 코딩하는 벡터에 대해 1:1 내지 1:5의 질량비가 사용된다. 일부 실시양태에서, 중쇄를 코딩하는 벡터 및 경쇄를 코딩하는 벡터에 대해 1:2의 질량비가 사용된다.
일부 실시양태에서, CHO 또는 CHO-유래 세포에서, 또는 NSO 세포에서의 폴리펩티드의 발현을 위해 최적화된 벡터가 선택된다. 예시적인 이러한 벡터는 예를 들어 문헌 [Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)]에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 인간을 포함한 동물에서의 PSGL-1 길항제의 생체내 발현을 위한 벡터가 선택된다. 일부 이러한 실시양태에서, 폴리펩티드 또는 폴리펩티드들의 발현은 조직-특이적 방식으로 기능하는 프로모터 또는 프로모터들의 제어 하에 있다. 예를 들어, 간-특이적 프로모터는 예를 들어, PCT 공개 번호 WO 2006/076288에 기재되어 있다.
숙주 세포
다양한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 원핵 세포, 예컨대, 박테리아 세포에서; 또는 진핵 세포, 예컨대, 진균 세포 (예컨대, 효모), 식물 세포, 곤충 세포 및 포유동물 세포에서 발현될 수 있다. 이러한 발현은 예를 들어, 관련 기술분야에 공지된 절차에 따라 수행될 수 있다. 폴리펩티드를 발현시키는 데 사용될 수 있는 예시적인 진핵 세포는 COS 세포 (COS 7 세포 포함); 293 세포 (293-6E 세포 포함); CHO 세포 (CHO-S 및 DG44 세포 포함); PER.C6® 세포 (크루셀); 및 NSO 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 효모에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 미국 공개 번호 US 2006/0270045 A1을 참조한다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 또는 VISTA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄에 목적하는 번역후 변형을 만드는 능력에 기초하여 특정한 진핵 숙주 세포가 선택된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, CHO 세포는 293 세포에서 생산된 동일한 폴리펩티드보다 더 높은 시알릴화 수준을 갖는 폴리펩티드를 생산한다.
1개 이상의 핵산을 목적하는 숙주 세포 내로 도입하는 것은 인산칼슘 형질감염, DEAE-덱스트란 매개 형질감염, 양이온성 지질-매개 형질감염, 전기천공, 형질도입, 감염 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 방법에 의해 달성될 수 있다. 비제한적 예시적인 방법은 예를 들어 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)]에 기재되어 있다. 핵산은 임의의 적합한 방법에 따라 목적하는 숙주 세포에서 일시적으로 또는 안정하게 형질감염될 수 있다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 폴리펩티드는 임의의 적합한 방법에 따라 폴리펩티드를 코딩하는 1개 이상의 핵산 분자로 조작되거나 형질감염된 동물에서 생체내에서 생산될 수 있다.
폴리펩티드의 정제
본원에 기재된 항체는 임의의 적합한 방법에 의해 정제될 수 있다. 이러한 방법은 친화성 매트릭스 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피의 사용을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 적합한 친화성 리간드는 항체가 결합하는 항원 및/또는 에피토프, 및 항체 불변 영역에 결합하는 리간드를 포함한다. 예를 들어, 불변 영역에 결합하고, 항체를 정제하는 데 단백질 A, 단백질 G, 단백질 A/G, 또는 항체 친화성 칼럼이 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 예를 들어, 부틸 또는 페닐 칼럼이 또한 일부 폴리펩티드를 정제하는 데 사용된다. 많은 폴리펩티드 정제 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다.
폴리펩티드의 무세포 생산
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 무세포 시스템에서 생산된다. 비제한적 예시적인 무세포 시스템은 예를 들어 문헌 [Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)]에 기재되어 있다.
PSGL-1 길항제를 확인하는 방법
일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제를 확인하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 후보 분자 (즉, 길항제 활성에 대해 시험되는 분자)를 VISTA, VISTA ECD, 또는 VISTA ECD 융합 분자 (집합적으로 "VISTA 분자"로 지칭됨)와 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 후보 분자 / VISTA 분자 혼합물을 PSGL-1, PSGL-1 ECD, 또는 PSGL-1 ECD 융합 분자 (집합적으로 "PSGL-1 분자"로 지칭됨)와 접촉시키는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 후보 분자를 PSGL-1 분자와 접촉시키고, 이어서 후보 분자 / PSGL-1 분자를 VISTA 분자를 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 후보 분자를 VISTA 분자 및 PSGL-1 분자와 대략 동시에 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 VISTA 분자 및 PSGL-1 분자를 포함하는 제1 조성물을 형성하고, 이어서 후보 분자를 제1 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 성분이 서로 접촉되는 순서가 검정 설계에 따라 달라질 수 있다는 것을 인식할 것이다. 일부 실시양태에서, VISTA 분자, PSGL-1 분자, 및 후보 분자를 접촉시키는 것은 산성 pH, 또는 pH 8.0 미만, pH 7.0 미만, pH 6.5 미만 또는 pH 6.0 미만인 pH, 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 발생한다. 조성물의 pH는 pH 5.0 내지 pH 8.0, pH 5.5 내지 pH 7.0, pH 6.0 내지 pH 8, 또는 pH 6.5 내지 pH 8일 수 있다.
일부 실시양태에서, VISTA 분자는 전장 VISTA, 예를 들어, 세포의 표면 상에 발현된 VISTA이다. 일부 실시양태에서, VISTA 분자는 가용성 VISTA, 예컨대 VISTA ECD 또는 VISTA ECD 융합 분자이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 분자는 전장 PSGL-1, 예를 들어, 세포의 표면 상에 발현된 PSGL-1이다. 일부 실시양태에서, PSGL-1 분자는 가용성 PSGL-1, 예컨대 PSGL-1 ECD 또는 PSGL-1 ECD 융합 분자이다.
일부 실시양태에서, 후보 분자가 VISTA 분자 및/또는 PSGL-1 분자와 접촉된 후에, 검정 또는 검정들이 VISTA 분자에 결합하는 PSGL-1 분자를 검출하기 위해 수행된다. VISTA 분자에 결합하는 PSGL-1 분자를 검출하기 위한 비제한적 예시적인 검정은 ELISA 검정, 표면 플라즈몬 공명 검정 (예를 들어, 비아코어(Biacore)®), 유동 세포측정-기반 검정 (예를 들어, 1종 이상의 성분이 비드에 결합되거나, 또는 세포의 표면 상에 발현된 경우), 증폭된 발광 근접 동질 검정 (ALPHA) 등을 포함한다. 단백질-단백질 결합을 검출하는 많은 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있고, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 적합한 검정 방법을 선택할 수 있다. 추가로, 항체 (표지 포함 또는 불포함), 2차 항체 (표지 포함 또는 불포함), 표지된 검정 성분 (표지된 PSGL-1 분자 및/또는 표지된 VISTA 분자를 포함하나 이에 제한되지는 않음) 등을 포함한 다양한 시약이 필요에 따라 검출에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, PSGL-1 길항제를 확인하는 방법은 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 후보 분자의 존재 및 부재 하에 VISTA 분자/PSGL-1 분자 결합의 정도를 비교하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, VISTA 분자/PSGL-1 분자 결합이 후보 분자의 부재 하의 결합에 비해 후보 분자의 존재 하에 감소된 경우에, 후보 분자는 PSGL-1 길항제이다. 일부 실시양태에서, VISTA 분자와 PSGL-1 분자 사이의 결합은 후보 분자의 존재 하에 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%만큼 감소된다. 일부 이러한 실시양태에서, 후보 분자는 PSGL-1 길항제이다.
후보 분자의 예시적인 부류는 항체, 펩티드, 소분자, 및 압타머를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 후보 분자는 VISTA에 결합하는 것으로 알려져 있는 항체 (즉, VISTA 항체)이다. 일부 실시양태에서, 후보 분자는 PSGL-1에 결합하는 것으로 알려져 있는 항체 (즉, PSGL-1 항체)이다.
일부 실시양태에서, VISTA 항체가 PSGL-1 길항제인지 결정하는 방법이 제공된다. 이러한 실시양태에서, VISTA 항체는 후보 분자로서 상기 기재된 검정에서 시험된다. 일부 실시양태에서, 예를 들어, 산성 pH, 예를 들어, pH <7.0, ≤6.8, ≤6.5 또는 ≤6.3 또는 pH 5.5 내지 6.5, 6.0-6.5, 6.5-7.0 또는 6.0-7.0, 예를 들어, pH 6.0에서 VISTA 항체가 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 차단하는지를 결정하는 방법이 제공된다. 이러한 방법은, 일부 실시양태에서, 예를 들어 상기 및 본원에 기재된 바와 같이, VISTA 항체를 VISTA 분자 및 PSGL-1 분자와 접촉시키고, 항체의 존재 하의 VISTA 분자의 PSGL-1 분자에 대한 결합을 검출하는 것을 포함한다.
제조 물품
일부 실시양태에서, 제조 물품 또는 바이오마커 (예를 들어, PSGL-1 또는 VISTA)의 검출을 위해 또는 상기 기재된 장애의 치료, 예방 및/또는 진단을 위해 유용한 물질을 함유하는 키트가 제공된다. 제조 물품은 용기 및 용기 상의 또는 용기와 회합된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어, 병, 바이알, 시린지 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 용기는 조성물 그 자체 또는 상태를 치료, 예방 및/또는 진단하는 데 효과적인 또 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유하고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫릴 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 선택 상태를 치료하기 위해 사용된다는 것을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 제조 물품은 (a) 본 발명의 PSGL-1 길항제를 포함하는 조성물이 함유된 제1 용기; 및 (b) 추가의 치료제를 포함하는 조성물이 함유된 제2 용기를 포함할 수 있다. 제조 물품은 조성물이 특정한 상태를 치료하는 데 사용될 수 있다는 것을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 제조 물품은 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 정박테리아 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 그것은 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 포함한, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 분자는 단독으로 또는 다른 치료 화합물과 조합되어 키트로서 패키징될 수 있다. 한 실시양태에서, 치료 화합물은 항암제이다. 또 다른 실시양태에서, 치료 화합물은 면역억제제이다. 키트는 환자에게 단위 용량을 투여하는 것을 보조하는 임의적인 구성성분, 예컨대 분말 형태를 재구성하기 위한 바이알, 주사용 시린지, 맞춤형 IV 전달 시스템, 흡입기 등을 포함할 수 있다. 추가적으로, 단위 용량 키트는 조성물의 제조 및 투여를 위한 지침서를 함유할 수 있다. 키트는 1명의 환자에게 단일 사용 단위 용량으로서, 특정한 환자에 대한 다중 사용으로서 (일정한 용량으로 또는 치료가 진행됨에 따라 개별 화합물은 그 효력이 다양할 수 있음) 제조될 수 있거나; 또는 키트는 다중 환자에게 투여하기에 적합한 다중 용량을 함유할 수 있다 ("벌크 패키징"). 키트 성분은 카툰, 블리스터 팩, 병, 튜브 등에 조립될 수 있다.
실시예
하기 논의되는 실시예는 순수하게 본 발명의 예시인 것으로 의도되며, 어떠한 방식으로도 본 발명을 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다. 실시예는 하기 실험이 수행된 모든 또는 유일한 실험임을 나타내는 것으로 의도되지 않는다. 사용된 숫자 (예를 들어 양, 온도 등)에 대해 정확성을 보장하기 위해 노력하였으나 일부 실험 오차 및 편차가 고려되어야 한다. 달리 나타내지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이고, 온도는 섭씨 온도이고, 압력은 대기압 또는 대기압에 가까운 값이다.
실시예 1: VISTA ECD는 히스티딘 풍부하고 VISTA 덱스트라머는 산성 pH에서 선택적으로 백혈구에 결합한다
이뮤노글로불린 수용체 슈퍼패밀리 (IgSF) 구성원의 세포외 도메인 내의 히스티딘 잔기의 빈도를 분석하였으며, VISTA가 다른 수용체 또는 리간드의 것에 비해 특별히 히스티딘-풍부한 것으로 발견되었다.
PBMC CD4+ T 세포를 로제트셉(RosetteSep)® (스템 셀 테크놀로지스(Stem Cell Technologies))에 의해 혈액으로부터 단리하고, 항-CD3/CD28 디나비즈(Dynabeads)® (써모피셔(ThermoFisher)) 및 재조합 인간 IL-2의 1:1 비로 3-4일 동안 자극하였다. 자극 후에, CD4+ T 세포를 세척한 다음, 6.97 내지 5.99 범위의 pH에서 형광-접합된 인간 VISTA 덱스트라머 (모노비오티닐화된 재조합 인간 VISTA 분자의 최적 몰비로 로딩된 스트렙타비딘 덱스트라머)와 함께 인큐베이션하였다. 결합을 유동 세포측정법에 의해 검출하였다.
도 1에 제시된 결과는 VISTA가 중성 pH보다는 산성 pH에서 선택적으로 T 세포에 결합한다는 것을 나타낸다.
실시예 2: 산성 pH에서의 VISTA 대응-수용체로서의 PSGL-1의 확인
LRC-TriCEPS™ 기술을 사용하여 T 세포 상의 VISTA 수용체를 확인하였다 (Frei et al. (2013) Nat. Protoc. 8:1321; Frei and Jeon (2012) Nat. Biotechnol. 30:997 및 Omasits et al. (2014) Bioinformatics 15:884). 인간 VISTA-Fc를 TriCEPS에 커플링시키고, pH6.0에서 1차 인간 T 세포 상에서 인큐베이션하였다. 항-CD3을 또한 TriCEPS 시약에 커플링시켰고, 이는 양성 대조군으로서의 역할을 하였다. 여러 단백질이 스크린에서 확인되었으며, 이들 중 일부는 VISTA-Fc의 Fc 부분에만 결합하는 것으로 보였다. 인간 PSGL-1은 인간 VISTA에 결합하는 단백질로서 확인되었다. 스크리닝 실험을 동일한 조건에서 1회 더 반복하였으며, PSGL-1이 다시 확인되었다.
P-셀렉틴 당단백질 리간드 1 (PSGL-1 또는 SELPL)은 P-, E-, 및 L-셀렉틴에 대한 리간드이고, 고도로 글리코실화 및 티로신 술페이트화되고, T 세포를 포한 대부분의 백혈구에 의해 발현된다. 셀렉틴의 PSGL-1 결속은 백혈구 혈관외유출 및 트래픽킹에 결정적이다.
실시예 3: PSGL-1 발현은 VISTA 덱스트라머 결합과 상관관계가 있다
PBMC를 피콜-파크(ficoll-paque) 구배 원심분리에 의해 혈액으로부터 단리하고, 세척한 다음, pH 7.2에서 형광-접합된 항-PSGL-1 항체와 함께 또는 pH 6.0에서 형광-접합된 인간 VISTA 덱스트라머 (모노비오티닐화된 재조합 인간 VISTA 분자의 최적 몰비로 로딩된 스트렙타비딘 덱스트라머)와 함께 행크 평형 염 용액 (HBSS) 중에서 인큐베이션하였다. 결합을 유동 세포측정법에 의해 검출하였다.
도 2a-b에 제시된 결과는 PBMC 림프구 상의 PSGL-1 표면 발현이 산성 pH에서의 VISTA 덱스트라머 결합과 상관관계가 있다는 것을 나타낸다.
실시예 4: 가용성 PSGL-1 및 P-셀렉틴은 활성화된 CD4+ T 세포에 대한 VISTA 덱스트라머 결합을 차단한다
T 세포에 대한 VISTA 덱스트라머 결합을 방해하는 가용성 PSGL-1의 능력을 pH 6.0에서 행크 평형 염 용액 중에서 및 적정된 농도의 대조군 (즉, 비-VISTA 또는 PSGL-1 특이적) 항체 (도트), 재조합 인간 PSGL-1-Fc 융합 단백질 (삼각형), 또는 재조합 인간 P-셀렉틴 (알앤디 시스템즈(R&D Systems), 다이아몬드)의 존재 하에 형광-접합된 VISTA 덱스트라머 (모노비오티닐화된 재조합 인간 VISTA 분자의 준최적 몰비로 로딩된 스트렙타비딘 덱스트라머)와 함께 활성화된 T 세포를 인큐베이션함으로써 평가하였다. 재조합 인간 PSGL-1 Fc 융합 분자를 알앤디 시스템즈 카탈로그 번호 3345-PS로부터 수득하였으며, 이는 그의 C-말단에서 IEGRMD 링커 서열 (서열식별번호: 19)에 커플링된 수탁 번호 AA50061의 인간 PSGL-1 서열의 위치 42-295를 포함하는, 서열식별번호: 18에 제시된 PSGL-1 ECD 서열에 이어서 인간 IgG1의 아미노산 P100 내지 K330을 포함한다. 인큐베이션 후에, VISTA 덱스트라머의 T 세포에 대한 결합을 유동 세포측정법에 의해 측정하였다. IC50 값은 프리즘(Prism) 소프트웨어 (그래프패드(GraphPad))에서 비선형 회귀를 통해 계산하였다. 도 3 및 표 1에 제시된 결과는 PSGL-1 및 P-셀렉틴이 산성 pH에서 VISTA의 활성화된 CD4+ T 세포에 대한 결합을 용량 의존성 방식으로 억제한다는 것을 나타낸다.
표 1
Figure pat00001
실시예 5: PSGL-1-Fc는 산성 pH에서 세포 표면-발현된 VISTA에 결합한다
인간 VISTA를 이소적으로 발현하는 293 T 세포에 대한 humPSGL-1-Fc의 결합을 시험하였다. 인간 VISTA 및 GFP를 발현하는 293T 세포 (도트 및 사각형), 뿐만 아니라 VISTA도 GFP도 발현하지 않는 293T 세포 (다이아몬드 및 삼각형)를 배양하였다. 세포를 세척한 다음, pH 7.2 (삼각형 및 사각형) 또는 pH 6.0 (다이아몬드 및 도트 곡선)에서 행크 평행 염 용액 중에서 PSGL-1-Fc 융합 단백질 (알앤디 시스템즈; Cat. No. 3345)과 함께 인큐베이션하였다. 1차 인큐베이션 후에, 세포를 세척하고, 형광-접합된 항-hIgG 2차 검출 항체와 함께 인큐베이션하였다. 2차 인큐베이션 후에, 세포를 세척하고, 결합을 유동 세포측정법에 의해 검출하였다. 도 4a 및 b에 제시된 결과는 humPSGL-1-Fc가 인간 VISTA (hVISTA)를 발현하는 293 T 세포에 결합하며 인간 VISTA를 발현하지 않는 293 T 세포에는 결합하지 않는다는 것을 나타낸다. 또한, 결과는 PSGL-1-Fc가 pH 6.0에서 결합하며 (도 4b에서의 원/도트 및 도 4a에서의 우측 곡선), pH 7.2에서는 유의하게 결합하지 않으므로 (도 4b에서의 사각형 및 도 4a에서의 좌측 곡선), PSGL-1-Fc의 결합이 pH 의존성이라는 것을 나타낸다.
실시예 6: PBMC CD4 T 세포 PSGL-1 CRISPR은 VISTA 덱스트라머 결합을 제거한다
인간 CD4 T 세포를 전혈로부터 단리하고, 플레이팅된 코팅된 OKT3 & CD28.2로 2일 동안 활성화시켰다. 이어서, T 세포를 CD4, PSGL1을 표적화하는 가이드 RNA, 또는 인간 서열 상동성을 갖지 않는 gRNA (비-표적화 대조군)로 로딩된 Cas9 리보핵 단백질 (RNP)로 형질감염시켰다. 형질감염을 삼중으로 수행하였다. 형질감염 후, 세포를 CD3/CD28 코팅된 디나비즈®로 4일 동안 재활성화시켰다. 이어서, 세포를 재조합 인간 avi-태그부착된 VISTA로 로딩된 덱스트라머로 염색하여 VISTA에 대한 결합을 평가하였다. 최대 VISTA 결합의 퍼센트는 녹-아웃 집단의 평균 VISTA 덱스트라머 평균 형광 강도 (MFI)를 비-표적화 대조군의 평균 VISTA 덱스트라머 MFI로 나눔으로써 결정하였다.
결과는 도 5에 제시되고, T 세포에 대한 VISTA 결합이 PSGL-1이 제거된 T 세포에서 약 절반으로 감소되었음을 나타낸다. 이들 결과는 PSGL-1이 T 세포 상의 VISTA 대응-수용체라는 것을 추가로 시사한다.
서열의 표
Figure pat00002
Figure pat00003
Figure pat00004
SEQUENCE LISTING <110> Bristol-Myers Squibb Company Five Prime Therapeutics, Inc. Johnston, Robert J. Rankin, Andrew Krishnakumar, Arathi Sheppard, Paul O. Rajpal, Arvind <120> PSGL-1 ANTAGONISTS AND USES THEREOF <130> 01134-0058-00PCT <150> US 62/445,071 <151> 2017-01-11 <160> 19 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 428 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ala Val Gly Ala Ser Gly Leu Glu Gly Asp Lys Met Ala Gly Ala 1 5 10 15 Met Pro Leu Gln Leu Leu Leu Leu Leu Ile Leu Leu Gly Pro Gly Asn 20 25 30 Ser Leu Gln Leu Trp Asp Thr Trp Ala Asp Glu Ala Glu Lys Ala Leu 35 40 45 Gly Pro Leu Leu Ala Arg Asp Arg Arg Gln Ala Thr Glu Tyr Glu Tyr 50 55 60 Leu Asp Tyr Asp Phe Leu Pro Glu Thr Glu Pro Pro Glu Met Leu Arg 65 70 75 80 Asn Ser Thr Asp Thr Thr Pro Leu Thr Gly Pro Gly Thr Pro Glu Ser 85 90 95 Thr Thr Val Glu Pro Ala Ala Arg Arg Ser Thr Gly Leu Asp Ala Gly 100 105 110 Gly Ala Val Thr Glu Leu Thr Thr Glu Leu Ala Asn Met Gly Asn Leu 115 120 125 Ser Thr Asp Ser Ala Ala Met Glu Ile Gln Thr Thr Gln Pro Ala Ala 130 135 140 Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Val Pro Thr Glu Ala Gln Thr Thr 145 150 155 160 Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Arg Leu Thr Ala Thr Glu 165 170 175 Ala Gln Thr Thr Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro 180 185 190 Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Gly Leu Glu Ala Gln 195 200 205 Thr Thr Ala Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ala Ala 210 215 220 Met Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr 225 230 235 240 Gln Thr Thr Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Glu Ala Thr Glu 245 250 255 Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Leu 260 265 270 Ala Ala Met Glu Ala Leu Ser Thr Glu Pro Ser Ala Thr Glu Ala Leu 275 280 285 Ser Met Glu Pro Thr Thr Lys Arg Gly Leu Phe Ile Pro Phe Ser Val 290 295 300 Ser Ser Val Thr His Lys Gly Ile Pro Met Ala Ala Ser Asn Leu Ser 305 310 315 320 Val Asn Tyr Pro Val Gly Ala Pro Asp His Ile Ser Val Lys Gln Cys 325 330 335 Leu Leu Ala Ile Leu Ile Leu Ala Leu Val Ala Thr Ile Phe Phe Val 340 345 350 Cys Thr Val Val Leu Ala Val Arg Leu Ser Arg Lys Gly His Met Tyr 355 360 365 Pro Val Arg Asn Tyr Ser Pro Thr Glu Met Val Cys Ile Ser Ser Leu 370 375 380 Leu Pro Asp Gly Gly Glu Gly Pro Ser Ala Thr Ala Asn Gly Gly Leu 385 390 395 400 Ser Lys Ala Lys Ser Pro Gly Leu Thr Pro Glu Pro Arg Glu Asp Arg 405 410 415 Glu Gly Asp Asp Leu Thr Leu His Ser Phe Leu Pro 420 425 <210> 2 <211> 395 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Leu Gln Leu Trp Asp Thr Trp Ala Asp Glu Ala Glu Lys Ala Leu Gly 1 5 10 15 Pro Leu Leu Ala Arg Asp Arg Arg Gln Ala Thr Glu Tyr Glu Tyr Leu 20 25 30 Asp Tyr Asp Phe Leu Pro Glu Thr Glu Pro Pro Glu Met Leu Arg Asn 35 40 45 Ser Thr Asp Thr Thr Pro Leu Thr Gly Pro Gly Thr Pro Glu Ser Thr 50 55 60 Thr Val Glu Pro Ala Ala Arg Arg Ser Thr Gly Leu Asp Ala Gly Gly 65 70 75 80 Ala Val Thr Glu Leu Thr Thr Glu Leu Ala Asn Met Gly Asn Leu Ser 85 90 95 Thr Asp Ser Ala Ala Met Glu Ile Gln Thr Thr Gln Pro Ala Ala Thr 100 105 110 Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Val Pro Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro 115 120 125 Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Arg Leu Thr Ala Thr Glu Ala 130 135 140 Gln Thr Thr Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala 145 150 155 160 Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Gly Leu Glu Ala Gln Thr 165 170 175 Thr Ala Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ala Ala Met 180 185 190 Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Gln 195 200 205 Thr Thr Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Glu Ala Thr Glu Ala 210 215 220 Gln Thr Thr Gln Pro Thr Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Leu Ala 225 230 235 240 Ala Met Glu Ala Leu Ser Thr Glu Pro Ser Ala Thr Glu Ala Leu Ser 245 250 255 Met Glu Pro Thr Thr Lys Arg Gly Leu Phe Ile Pro Phe Ser Val Ser 260 265 270 Ser Val Thr His Lys Gly Ile Pro Met Ala Ala Ser Asn Leu Ser Val 275 280 285 Asn Tyr Pro Val Gly Ala Pro Asp His Ile Ser Val Lys Gln Cys Leu 290 295 300 Leu Ala Ile Leu Ile Leu Ala Leu Val Ala Thr Ile Phe Phe Val Cys 305 310 315 320 Thr Val Val Leu Ala Val Arg Leu Ser Arg Lys Gly His Met Tyr Pro 325 330 335 Val Arg Asn Tyr Ser Pro Thr Glu Met Val Cys Ile Ser Ser Leu Leu 340 345 350 Pro Asp Gly Gly Glu Gly Pro Ser Ala Thr Ala Asn Gly Gly Leu Ser 355 360 365 Lys Ala Lys Ser Pro Gly Leu Thr Pro Glu Pro Arg Glu Asp Arg Glu 370 375 380 Gly Asp Asp Leu Thr Leu His Ser Phe Leu Pro 385 390 395 <210> 3 <211> 242 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HumPSGL-1 ECD, with signal peptide <400> 3 Met Ala Val Gly Ala Ser Gly Leu Glu Gly Asp Lys Met Ala Gly Ala 1 5 10 15 Met Pro Leu Gln Leu Leu Leu Leu Leu Ile Leu Leu Gly Pro Gly Asn 20 25 30 Ser Leu Gln Leu Trp Asp Thr Trp Ala Asp Glu Ala Glu Lys Ala Leu 35 40 45 Gly Pro Leu Leu Ala Arg Asp Arg Arg Gln Ala Thr Glu Tyr Glu Tyr 50 55 60 Leu Asp Tyr Asp Phe Leu Pro Glu Thr Glu Pro Pro Glu Met Leu Arg 65 70 75 80 Asn Ser Thr Asp Thr Thr Pro Leu Thr Gly Pro Gly Thr Pro Glu Ser 85 90 95 Thr Thr Val Glu Pro Ala Ala Arg Arg Ser Thr Gly Leu Asp Ala Gly 100 105 110 Gly Ala Val Thr Glu Leu Thr Thr Glu Leu Ala Asn Met Gly Asn Leu 115 120 125 Ser Thr Asp Ser Ala Ala Met Glu Ile Gln Thr Thr Gln Pro Ala Ala 130 135 140 Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Val Pro Thr Glu Ala Gln Thr Thr 145 150 155 160 Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Arg Leu Thr Ala Thr Glu 165 170 175 Ala Gln Thr Thr Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro 180 185 190 Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Gly Leu Glu Ala Gln 195 200 205 Thr Thr Ala Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ala Ala 210 215 220 Met Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr 225 230 235 240 Gln Thr <210> 4 <211> 209 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HumPSGL-1 ECD without signal peptide <400> 4 Leu Gln Leu Trp Asp Thr Trp Ala Asp Glu Ala Glu Lys Ala Leu Gly 1 5 10 15 Pro Leu Leu Ala Arg Asp Arg Arg Gln Ala Thr Glu Tyr Glu Tyr Leu 20 25 30 Asp Tyr Asp Phe Leu Pro Glu Thr Glu Pro Pro Glu Met Leu Arg Asn 35 40 45 Ser Thr Asp Thr Thr Pro Leu Thr Gly Pro Gly Thr Pro Glu Ser Thr 50 55 60 Thr Val Glu Pro Ala Ala Arg Arg Ser Thr Gly Leu Asp Ala Gly Gly 65 70 75 80 Ala Val Thr Glu Leu Thr Thr Glu Leu Ala Asn Met Gly Asn Leu Ser 85 90 95 Thr Asp Ser Ala Ala Met Glu Ile Gln Thr Thr Gln Pro Ala Ala Thr 100 105 110 Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Val Pro Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro 115 120 125 Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Arg Leu Thr Ala Thr Glu Ala 130 135 140 Gln Thr Thr Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala 145 150 155 160 Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Gly Leu Glu Ala Gln Thr 165 170 175 Thr Ala Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ala Ala Met 180 185 190 Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Gln 195 200 205 Thr <210> 5 <211> 311 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Gly Val Pro Thr Ala Leu Glu Ala Gly Ser Trp Arg Trp Gly Ser 1 5 10 15 Leu Leu Phe Ala Leu Phe Leu Ala Ala Ser Leu Gly Pro Val Ala Ala 20 25 30 Phe Lys Val Ala Thr Pro Tyr Ser Leu Tyr Val Cys Pro Glu Gly Gln 35 40 45 Asn Val Thr Leu Thr Cys Arg Leu Leu Gly Pro Val Asp Lys Gly His 50 55 60 Asp Val Thr Phe Tyr Lys Thr Trp Tyr Arg Ser Ser Arg Gly Glu Val 65 70 75 80 Gln Thr Cys Ser Glu Arg Arg Pro Ile Arg Asn Leu Thr Phe Gln Asp 85 90 95 Leu His Leu His His Gly Gly His Gln Ala Ala Asn Thr Ser His Asp 100 105 110 Leu Ala Gln Arg His Gly Leu Glu Ser Ala Ser Asp His His Gly Asn 115 120 125 Phe Ser Ile Thr Met Arg Asn Leu Thr Leu Leu Asp Ser Gly Leu Tyr 130 135 140 Cys Cys Leu Val Val Glu Ile Arg His His His Ser Glu His Arg Val 145 150 155 160 His Gly Ala Met Glu Leu Gln Val Gln Thr Gly Lys Asp Ala Pro Ser 165 170 175 Asn Cys Val Val Tyr Pro Ser Ser Ser Gln Asp Ser Glu Asn Ile Thr 180 185 190 Ala Ala Ala Leu Ala Thr Gly Ala Cys Ile Val Gly Ile Leu Cys Leu 195 200 205 Pro Leu Ile Leu Leu Leu Val Tyr Lys Gln Arg Gln Ala Ala Ser Asn 210 215 220 Arg Arg Ala Gln Glu Leu Val Arg Met Asp Ser Asn Ile Gln Gly Ile 225 230 235 240 Glu Asn Pro Gly Phe Glu Ala Ser Pro Pro Ala Gln Gly Ile Pro Glu 245 250 255 Ala Lys Val Arg His Pro Leu Ser Tyr Val Ala Gln Arg Gln Pro Ser 260 265 270 Glu Ser Gly Arg His Leu Leu Ser Glu Pro Ser Thr Pro Leu Ser Pro 275 280 285 Pro Gly Pro Gly Asp Val Phe Phe Pro Ser Leu Asp Pro Val Pro Asp 290 295 300 Ser Pro Asn Phe Glu Val Ile 305 310 <210> 6 <211> 279 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Phe Lys Val Ala Thr Pro Tyr Ser Leu Tyr Val Cys Pro Glu Gly Gln 1 5 10 15 Asn Val Thr Leu Thr Cys Arg Leu Leu Gly Pro Val Asp Lys Gly His 20 25 30 Asp Val Thr Phe Tyr Lys Thr Trp Tyr Arg Ser Ser Arg Gly Glu Val 35 40 45 Gln Thr Cys Ser Glu Arg Arg Pro Ile Arg Asn Leu Thr Phe Gln Asp 50 55 60 Leu His Leu His His Gly Gly His Gln Ala Ala Asn Thr Ser His Asp 65 70 75 80 Leu Ala Gln Arg His Gly Leu Glu Ser Ala Ser Asp His His Gly Asn 85 90 95 Phe Ser Ile Thr Met Arg Asn Leu Thr Leu Leu Asp Ser Gly Leu Tyr 100 105 110 Cys Cys Leu Val Val Glu Ile Arg His His His Ser Glu His Arg Val 115 120 125 His Gly Ala Met Glu Leu Gln Val Gln Thr Gly Lys Asp Ala Pro Ser 130 135 140 Asn Cys Val Val Tyr Pro Ser Ser Ser Gln Asp Ser Glu Asn Ile Thr 145 150 155 160 Ala Ala Ala Leu Ala Thr Gly Ala Cys Ile Val Gly Ile Leu Cys Leu 165 170 175 Pro Leu Ile Leu Leu Leu Val Tyr Lys Gln Arg Gln Ala Ala Ser Asn 180 185 190 Arg Arg Ala Gln Glu Leu Val Arg Met Asp Ser Asn Ile Gln Gly Ile 195 200 205 Glu Asn Pro Gly Phe Glu Ala Ser Pro Pro Ala Gln Gly Ile Pro Glu 210 215 220 Ala Lys Val Arg His Pro Leu Ser Tyr Val Ala Gln Arg Gln Pro Ser 225 230 235 240 Glu Ser Gly Arg His Leu Leu Ser Glu Pro Ser Thr Pro Leu Ser Pro 245 250 255 Pro Gly Pro Gly Asp Val Phe Phe Pro Ser Leu Asp Pro Val Pro Asp 260 265 270 Ser Pro Asn Phe Glu Val Ile 275 <210> 7 <211> 309 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Met Gly Val Pro Ala Val Pro Glu Ala Ser Ser Pro Arg Trp Gly Thr 1 5 10 15 Leu Leu Leu Ala Ile Phe Leu Ala Ala Ser Arg Gly Leu Val Ala Ala 20 25 30 Phe Lys Val Thr Thr Pro Tyr Ser Leu Tyr Val Cys Pro Glu Gly Gln 35 40 45 Asn Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ile Leu Gly Pro Val Ser Lys Gly His 50 55 60 Asp Val Thr Ile Tyr Lys Thr Trp Tyr Leu Ser Ser Arg Gly Glu Val 65 70 75 80 Gln Met Cys Lys Glu His Arg Pro Ile Arg Asn Phe Thr Leu Gln His 85 90 95 Leu Gln His His Gly Ser His Leu Lys Ala Asn Ala Ser His Asp Gln 100 105 110 Pro Gln Lys His Gly Leu Glu Leu Ala Ser Asp His His Gly Asn Phe 115 120 125 Ser Ile Thr Leu Arg Asn Val Thr Pro Arg Asp Ser Gly Leu Tyr Cys 130 135 140 Cys Leu Val Ile Glu Leu Lys Asn His His Pro Glu Gln Arg Phe Tyr 145 150 155 160 Gly Ser Met Glu Leu Gln Val Gln Ala Gly Lys Gly Ser Gly Ser Thr 165 170 175 Cys Met Ala Ser Asn Glu Gln Asp Ser Asp Ser Ile Thr Ala Ala Ala 180 185 190 Leu Ala Thr Gly Ala Cys Ile Val Gly Ile Leu Cys Leu Pro Leu Ile 195 200 205 Leu Leu Leu Val Tyr Lys Gln Arg Gln Val Ala Ser His Arg Arg Ala 210 215 220 Gln Glu Leu Val Arg Met Asp Ser Ser Asn Thr Gln Gly Ile Glu Asn 225 230 235 240 Pro Gly Phe Glu Thr Thr Pro Pro Phe Gln Gly Met Pro Glu Ala Lys 245 250 255 Thr Arg Pro Pro Leu Ser Tyr Val Ala Gln Arg Gln Pro Ser Glu Ser 260 265 270 Gly Arg Tyr Leu Leu Ser Asp Pro Ser Thr Pro Leu Ser Pro Pro Gly 275 280 285 Pro Gly Asp Val Phe Phe Pro Ser Leu Asp Pro Val Pro Asp Ser Pro 290 295 300 Asn Ser Glu Ala Ile 305 <210> 8 <211> 277 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Phe Lys Val Thr Thr Pro Tyr Ser Leu Tyr Val Cys Pro Glu Gly Gln 1 5 10 15 Asn Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ile Leu Gly Pro Val Ser Lys Gly His 20 25 30 Asp Val Thr Ile Tyr Lys Thr Trp Tyr Leu Ser Ser Arg Gly Glu Val 35 40 45 Gln Met Cys Lys Glu His Arg Pro Ile Arg Asn Phe Thr Leu Gln His 50 55 60 Leu Gln His His Gly Ser His Leu Lys Ala Asn Ala Ser His Asp Gln 65 70 75 80 Pro Gln Lys His Gly Leu Glu Leu Ala Ser Asp His His Gly Asn Phe 85 90 95 Ser Ile Thr Leu Arg Asn Val Thr Pro Arg Asp Ser Gly Leu Tyr Cys 100 105 110 Cys Leu Val Ile Glu Leu Lys Asn His His Pro Glu Gln Arg Phe Tyr 115 120 125 Gly Ser Met Glu Leu Gln Val Gln Ala Gly Lys Gly Ser Gly Ser Thr 130 135 140 Cys Met Ala Ser Asn Glu Gln Asp Ser Asp Ser Ile Thr Ala Ala Ala 145 150 155 160 Leu Ala Thr Gly Ala Cys Ile Val Gly Ile Leu Cys Leu Pro Leu Ile 165 170 175 Leu Leu Leu Val Tyr Lys Gln Arg Gln Val Ala Ser His Arg Arg Ala 180 185 190 Gln Glu Leu Val Arg Met Asp Ser Ser Asn Thr Gln Gly Ile Glu Asn 195 200 205 Pro Gly Phe Glu Thr Thr Pro Pro Phe Gln Gly Met Pro Glu Ala Lys 210 215 220 Thr Arg Pro Pro Leu Ser Tyr Val Ala Gln Arg Gln Pro Ser Glu Ser 225 230 235 240 Gly Arg Tyr Leu Leu Ser Asp Pro Ser Thr Pro Leu Ser Pro Pro Gly 245 250 255 Pro Gly Asp Val Phe Phe Pro Ser Leu Asp Pro Val Pro Asp Ser Pro 260 265 270 Asn Ser Glu Ala Ile 275 <210> 9 <211> 411 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Human VISTA ECD-Fc, without signal peptide <400> 9 Phe Lys Val Ala Thr Pro Tyr Ser Leu Tyr Val Cys Pro Glu Gly Gln 1 5 10 15 Asn Val Thr Leu Thr Cys Arg Leu Leu Gly Pro Val Asp Lys Gly His 20 25 30 Asp Val Thr Phe Tyr Lys Thr Trp Tyr Arg Ser Ser Arg Gly Glu Val 35 40 45 Gln Thr Cys Ser Glu Arg Arg Pro Ile Arg Asn Leu Thr Phe Gln Asp 50 55 60 Leu His Leu His His Gly Gly His Gln Ala Ala Asn Thr Ser His Asp 65 70 75 80 Leu Ala Gln Arg His Gly Leu Glu Ser Ala Ser Asp His His Gly Asn 85 90 95 Phe Ser Ile Thr Met Arg Asn Leu Thr Leu Leu Asp Ser Gly Leu Tyr 100 105 110 Cys Cys Leu Val Val Glu Ile Arg His His His Ser Glu His Arg Val 115 120 125 His Gly Ala Met Glu Leu Gln Val Gln Thr Gly Lys Asp Ala Pro Ser 130 135 140 Asn Cys Val Val Tyr Pro Ser Ser Ser Gln Asp Ser Glu Asn Ile Thr 145 150 155 160 Ala Ala Ala Gly Thr Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser 165 170 175 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Arg Ser Val Pro Arg Asp Ser Gly Cys Lys 180 185 190 Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro 195 200 205 Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr 210 215 220 Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser 225 230 235 240 Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Lys Pro Arg 245 250 255 Glu Glu Gln Ile Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile 260 265 270 Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn 275 280 285 Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys 290 295 300 Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu 305 310 315 320 Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asn Phe 325 330 335 Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala 340 345 350 Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr 355 360 365 Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly 370 375 380 Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His 385 390 395 400 Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 405 410 <210> 10 <211> 286 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> His-tagged human VISTA extracellular domain (ECD) <400> 10 Phe Lys Val Ala Thr Pro Tyr Ser Leu Tyr Val Cys Pro Glu Gly Gln 1 5 10 15 Asn Val Thr Leu Thr Cys Arg Leu Leu Gly Pro Val Asp Lys Gly His 20 25 30 Asp Val Thr Phe Tyr Lys Thr Trp Tyr Arg Ser Ser Arg Gly Glu Val 35 40 45 Gln Thr Cys Ser Glu Arg Arg Pro Ile Arg Asn Leu Thr Phe Gln Asp 50 55 60 Leu His Leu His His Gly Gly His Gln Ala Ala Asn Thr Ser His Asp 65 70 75 80 Leu Ala Gln Arg His Gly Leu Glu Ser Ala Ser Asp His His Gly Asn 85 90 95 Phe Ser Ile Thr Met Arg Asn Leu Thr Leu Leu Asp Ser Gly Leu Tyr 100 105 110 Cys Cys Leu Val Val Glu Ile Arg His His His Ser Glu His Arg Val 115 120 125 His Gly Ala Met Glu Leu Gln Val Gln Thr Gly Lys Asp Ala Pro Ser 130 135 140 Asn Cys Val Val Tyr Pro Ser Ser Ser Gln Asp Ser Glu Asn Ile Thr 145 150 155 160 Ala Ala Ala Leu Ala Thr Gly Ala Cys Ile Val Gly Ile Leu Cys Leu 165 170 175 Pro Leu Ile Leu Leu Leu Val Tyr Lys Gln Arg Gln Ala Ala Ser Asn 180 185 190 Arg Arg Ala Gln Glu Leu Val Arg Met Asp Ser Asn Ile Gln Gly Ile 195 200 205 Glu Asn Pro Gly Phe Glu Ala Ser Pro Pro Ala Gln Gly Ile Pro Glu 210 215 220 Ala Lys Val Arg His Pro Leu Ser Tyr Val Ala Gln Arg Gln Pro Ser 225 230 235 240 Glu Ser Gly Arg His Leu Leu Ser Glu Pro Ser Thr Pro Leu Ser Pro 245 250 255 Pro Gly Pro Gly Asp Val Phe Phe Pro Ser Leu Asp Pro Val Pro Asp 260 265 270 Ser Pro Asn Phe Glu Val Ile Gly His His His His His His 275 280 285 <210> 11 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Fc C237S <400> 11 Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 12 <211> 228 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Exemplary Fc #1 <400> 12 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 20 25 30 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 35 40 45 His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 50 55 60 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 65 70 75 80 Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 85 90 95 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 100 105 110 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 115 120 125 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 130 135 140 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 145 150 155 160 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 165 170 175 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 180 185 190 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 195 200 205 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 210 215 220 Ser Pro Gly Lys 225 <210> 13 <211> 229 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Exemplary Fc #2 <400> 13 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 14 <211> 412 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Met Pro Leu Gln Leu Leu Leu Leu Leu Ile Leu Leu Gly Pro Gly Asn 1 5 10 15 Ser Leu Gln Leu Trp Asp Thr Trp Ala Asp Glu Ala Glu Lys Ala Leu 20 25 30 Gly Pro Leu Leu Ala Arg Asp Arg Arg Gln Ala Thr Glu Tyr Glu Tyr 35 40 45 Leu Asp Tyr Asp Phe Leu Pro Glu Thr Glu Pro Pro Glu Met Leu Arg 50 55 60 Asn Ser Thr Asp Thr Thr Pro Leu Thr Gly Pro Gly Thr Pro Glu Ser 65 70 75 80 Thr Thr Val Glu Pro Ala Ala Arg Arg Ser Thr Gly Leu Asp Ala Gly 85 90 95 Gly Ala Val Thr Glu Leu Thr Thr Glu Leu Ala Asn Met Gly Asn Leu 100 105 110 Ser Thr Asp Ser Ala Ala Met Glu Ile Gln Thr Thr Gln Pro Ala Ala 115 120 125 Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Val Pro Thr Glu Ala Gln Thr Thr 130 135 140 Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Arg Leu Thr Ala Thr Glu 145 150 155 160 Ala Gln Thr Thr Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Gly Leu Glu Ala Gln 180 185 190 Thr Thr Ala Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ala Ala 195 200 205 Met Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr 210 215 220 Gln Thr Thr Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Glu Ala Thr Glu 225 230 235 240 Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Leu 245 250 255 Ala Ala Met Glu Ala Leu Ser Thr Glu Pro Ser Ala Thr Glu Ala Leu 260 265 270 Ser Met Glu Pro Thr Thr Lys Arg Gly Leu Phe Ile Pro Phe Ser Val 275 280 285 Ser Ser Val Thr His Lys Gly Ile Pro Met Ala Ala Ser Asn Leu Ser 290 295 300 Val Asn Tyr Pro Val Gly Ala Pro Asp His Ile Ser Val Lys Gln Cys 305 310 315 320 Leu Leu Ala Ile Leu Ile Leu Ala Leu Val Ala Thr Ile Phe Phe Val 325 330 335 Cys Thr Val Val Leu Ala Val Arg Leu Ser Arg Lys Gly His Met Tyr 340 345 350 Pro Val Arg Asn Tyr Ser Pro Thr Glu Met Val Cys Ile Ser Ser Leu 355 360 365 Leu Pro Asp Gly Gly Glu Gly Pro Ser Ala Thr Ala Asn Gly Gly Leu 370 375 380 Ser Lys Ala Lys Ser Pro Gly Leu Thr Pro Glu Pro Arg Glu Asp Arg 385 390 395 400 Glu Gly Asp Asp Leu Thr Leu His Ser Phe Leu Pro 405 410 <210> 15 <211> 395 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Leu Gln Leu Trp Asp Thr Trp Ala Asp Glu Ala Glu Lys Ala Leu Gly 1 5 10 15 Pro Leu Leu Ala Arg Asp Arg Arg Gln Ala Thr Glu Tyr Glu Tyr Leu 20 25 30 Asp Tyr Asp Phe Leu Pro Glu Thr Glu Pro Pro Glu Met Leu Arg Asn 35 40 45 Ser Thr Asp Thr Thr Pro Leu Thr Gly Pro Gly Thr Pro Glu Ser Thr 50 55 60 Thr Val Glu Pro Ala Ala Arg Arg Ser Thr Gly Leu Asp Ala Gly Gly 65 70 75 80 Ala Val Thr Glu Leu Thr Thr Glu Leu Ala Asn Met Gly Asn Leu Ser 85 90 95 Thr Asp Ser Ala Ala Met Glu Ile Gln Thr Thr Gln Pro Ala Ala Thr 100 105 110 Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Val Pro Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro 115 120 125 Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Arg Leu Thr Ala Thr Glu Ala 130 135 140 Gln Thr Thr Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala 145 150 155 160 Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Gly Leu Glu Ala Gln Thr 165 170 175 Thr Ala Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ala Ala Met 180 185 190 Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Gln 195 200 205 Thr Thr Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Glu Ala Thr Glu Ala 210 215 220 Gln Thr Thr Gln Pro Thr Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Leu Ala 225 230 235 240 Ala Met Glu Ala Leu Ser Thr Glu Pro Ser Ala Thr Glu Ala Leu Ser 245 250 255 Met Glu Pro Thr Thr Lys Arg Gly Leu Phe Ile Pro Phe Ser Val Ser 260 265 270 Ser Val Thr His Lys Gly Ile Pro Met Ala Ala Ser Asn Leu Ser Val 275 280 285 Asn Tyr Pro Val Gly Ala Pro Asp His Ile Ser Val Lys Gln Cys Leu 290 295 300 Leu Ala Ile Leu Ile Leu Ala Leu Val Ala Thr Ile Phe Phe Val Cys 305 310 315 320 Thr Val Val Leu Ala Val Arg Leu Ser Arg Lys Gly His Met Tyr Pro 325 330 335 Val Arg Asn Tyr Ser Pro Thr Glu Met Val Cys Ile Ser Ser Leu Leu 340 345 350 Pro Asp Gly Gly Glu Gly Pro Ser Ala Thr Ala Asn Gly Gly Leu Ser 355 360 365 Lys Ala Lys Ser Pro Gly Leu Thr Pro Glu Pro Arg Glu Asp Arg Glu 370 375 380 Gly Asp Asp Leu Thr Leu His Ser Phe Leu Pro 385 390 395 <210> 16 <211> 226 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HumPSGL-1 isoform 2 ECD, with signal peptide <400> 16 Met Pro Leu Gln Leu Leu Leu Leu Leu Ile Leu Leu Gly Pro Gly Asn 1 5 10 15 Ser Leu Gln Leu Trp Asp Thr Trp Ala Asp Glu Ala Glu Lys Ala Leu 20 25 30 Gly Pro Leu Leu Ala Arg Asp Arg Arg Gln Ala Thr Glu Tyr Glu Tyr 35 40 45 Leu Asp Tyr Asp Phe Leu Pro Glu Thr Glu Pro Pro Glu Met Leu Arg 50 55 60 Asn Ser Thr Asp Thr Thr Pro Leu Thr Gly Pro Gly Thr Pro Glu Ser 65 70 75 80 Thr Thr Val Glu Pro Ala Ala Arg Arg Ser Thr Gly Leu Asp Ala Gly 85 90 95 Gly Ala Val Thr Glu Leu Thr Thr Glu Leu Ala Asn Met Gly Asn Leu 100 105 110 Ser Thr Asp Ser Ala Ala Met Glu Ile Gln Thr Thr Gln Pro Ala Ala 115 120 125 Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Val Pro Thr Glu Ala Gln Thr Thr 130 135 140 Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Arg Leu Thr Ala Thr Glu 145 150 155 160 Ala Gln Thr Thr Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Gly Leu Glu Ala Gln 180 185 190 Thr Thr Ala Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ala Ala 195 200 205 Met Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr 210 215 220 Gln Thr 225 <210> 17 <211> 209 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Human PSGL-1 isoform 2 ECD, without signal peptide <400> 17 Leu Gln Leu Trp Asp Thr Trp Ala Asp Glu Ala Glu Lys Ala Leu Gly 1 5 10 15 Pro Leu Leu Ala Arg Asp Arg Arg Gln Ala Thr Glu Tyr Glu Tyr Leu 20 25 30 Asp Tyr Asp Phe Leu Pro Glu Thr Glu Pro Pro Glu Met Leu Arg Asn 35 40 45 Ser Thr Asp Thr Thr Pro Leu Thr Gly Pro Gly Thr Pro Glu Ser Thr 50 55 60 Thr Val Glu Pro Ala Ala Arg Arg Ser Thr Gly Leu Asp Ala Gly Gly 65 70 75 80 Ala Val Thr Glu Leu Thr Thr Glu Leu Ala Asn Met Gly Asn Leu Ser 85 90 95 Thr Asp Ser Ala Ala Met Glu Ile Gln Thr Thr Gln Pro Ala Ala Thr 100 105 110 Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Val Pro Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro 115 120 125 Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Arg Leu Thr Ala Thr Glu Ala 130 135 140 Gln Thr Thr Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala 145 150 155 160 Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Gly Leu Glu Ala Gln Thr 165 170 175 Thr Ala Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ala Ala Met 180 185 190 Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Gln 195 200 205 Thr <210> 18 <211> 254 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Human PSGL-1 ECD (N-terminal positions 42 to 295 of a full length Human PSGL-1 Accession No. AAC50061) <400> 18 Gln Ala Thr Glu Tyr Glu Tyr Leu Asp Tyr Asp Phe Leu Pro Glu Thr 1 5 10 15 Glu Pro Pro Glu Met Leu Arg Asn Ser Thr Asp Thr Thr Pro Leu Thr 20 25 30 Gly Pro Gly Thr Pro Glu Ser Thr Thr Val Glu Pro Ala Ala Arg Arg 35 40 45 Ser Thr Gly Leu Asp Ala Gly Gly Ala Val Thr Glu Leu Thr Thr Glu 50 55 60 Leu Ala Asn Met Gly Asn Leu Ser Thr Asp Ser Ala Ala Met Glu Ile 65 70 75 80 Gln Thr Thr Gln Pro Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Leu Ala 85 90 95 Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Arg Leu Thr Ala Thr Glu Ala Gln Thr 100 105 110 Thr Pro Leu Ala Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Pro Ala Ala Thr 115 120 125 Glu Ala Gln Thr Thr Gln Pro Thr Gly Leu Glu Ala Gln Thr Thr Ala 130 135 140 Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ala Ala Met Glu Ala 145 150 155 160 Gln Thr Thr Pro Pro Ala Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Gln Thr Thr 165 170 175 Ala Met Glu Ala Gln Thr Thr Ala Pro Glu Ala Thr Glu Ala Gln Thr 180 185 190 Thr Gln Pro Thr Ala Thr Glu Ala Gln Thr Thr Pro Leu Ala Ala Met 195 200 205 Glu Ala Leu Ser Thr Glu Pro Ser Ala Thr Glu Ala Leu Ser Met Glu 210 215 220 Pro Thr Thr Lys Arg Gly Leu Phe Ile Pro Phe Ser Val Ser Ser Val 225 230 235 240 Thr His Lys Gly Ile Pro Met Ala Ala Ser Asn Leu Ser Val 245 250 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Exemplary fusion protein linker sequence <400> 19 Ile Glu Gly Arg Met Asp 1 5

Claims (25)

  1. 대상체에서 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한, VISTA에 결합하는 적어도 1종의 항체를 포함하는 제약 조성물이며, 여기서 VISTA에 결합하는 항체는 pH 5.5 내지 pH 6.5 범위 내의 pH에서 10nM 이하의 KD로 인간 VISTA에 결합하고, pH 5.5 내지 pH 6.5 범위 내의 pH에서 인간 PSGL-1의 인간 VISTA에 대한 결합을 차단하는 것인 제약 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 방법이 대상체에게 화학요법제, 항혈관신생제, 세포 성장 억제제, 면역-항암제, 및 항신생물성 조성물로부터 선택되는 치료제의 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 제약 조성물.
  3. 암을 가진 대상체에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 억제하는 방법에 사용하기 위한, VISTA에 결합하는 적어도 1종의 항체를 포함하는 제약 조성물이며, 여기서 VISTA에 결합하는 항체는 pH 5.5 내지 pH 6.5 범위 내의 pH에서 10nM 이하의 KD로 인간 VISTA에 결합하고, pH 5.5 내지 pH 6.5 범위 내의 pH에서 인간 PSGL-1의 인간 VISTA에 대한 결합을 차단하는 것인 제약 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 방법이 대상체에게 화학요법제, 항혈관신생제, 세포 성장 억제제, 면역-항암제 및 항신생물성 조성물로부터 선택되는 치료제의 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 제약 조성물.
  5. 세포를 VISTA에 결합하는 적어도 1종의 항체와 접촉시키는 것을 포함하는, 세포 상에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 억제하는 시험관내 방법.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체, 또는 중쇄 불변 영역에서 S241P 치환을 갖는 IgG4 항체인 제약 조성물.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 및 항체 단편으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  8. 제7항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 Fv, 단일-쇄 Fv (scFv), Fab, Fab' 및 (Fab')2로부터 선택되는 항체 단편인 제약 조성물.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 대상체에서 면역 반응을 자극하는 것인 제약 조성물.
  10. 제9항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 대상체에서 T 세포 활성화를 자극하는 것인 제약 조성물.
  11. 제5항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체, 또는 중쇄 불변 영역에서 S241P 치환을 갖는 IgG4 항체인 방법.
  12. 제5항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 및 항체 단편으로부터 선택되는 것인 방법.
  13. 제12항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 Fv, 단일-쇄 Fv (scFv), Fab, Fab' 및 (Fab')2로부터 선택되는 항체 단편인 방법.
  14. 제5항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 pH 5.5 내지 pH 6.5 범위 내의 pH에서 PSGL-1의 VISTA에 대한 결합을 차단하는 것인 방법.
  15. 제5항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 10 nM 이하의 KD로 인간 VISTA에 결합하는 것인 방법.
  16. 제5항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 대상체에서 면역 반응을 자극하는 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, VISTA에 결합하는 항체가 대상체에서 T 세포 활성화를 자극하는 것인 방법.
  18. pH 5.5 내지 pH 6.5 범위 내의 pH에서 인간 VISTA의 인간 PSGL-1에 대한 결합을 적어도 부분적으로 억제하는, VISTA에 결합하는 항체.
  19. 제18항에 있어서, pH 5.5 내지 pH 6.5 범위 내의 pH에서 인간 VISTA의 인간 PSGL-1에 대한 결합을 적어도 90%만큼 억제하는, VISTA에 결합하는 항체.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 대상체에서 면역 반응을 자극하는, VISTA에 결합하는 항체.
  21. 제20항에 있어서, 대상체에서 T 세포 활성화를 자극하는, VISTA에 결합하는 항체.
  22. 제18항 또는 제19항에 있어서, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체, 또는 중쇄 불변 영역에서 S241P 치환을 갖는 IgG4 항체인, VISTA에 결합하는 항체.
  23. 제18항 또는 제19항에 있어서, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 또는 항체 단편으로부터 선택되는, VISTA에 결합하는 항체.
  24. 제23항에 있어서, Fv, 단일-쇄 Fv (scFv), Fab, Fab' 및 (Fab')2 항체 단편으로부터 선택되는, VISTA에 결합하는 항체.
  25. 대상체에서 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 제18항 또는 제19항의 VISTA에 결합하는 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물.
KR1020237029602A 2017-01-11 2018-01-10 Psgl-1 길항제 및 그의 용도 KR20230132603A (ko)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762445071P 2017-01-11 2017-01-11
US62/445,071 2017-01-11
PCT/US2018/013171 WO2018132476A1 (en) 2017-01-11 2018-01-10 Psgl-1 antagonists and uses thereof
KR1020197023196A KR102630011B1 (ko) 2017-01-11 2018-01-10 Psgl-1 길항제 및 그의 용도

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197023196A Division KR102630011B1 (ko) 2017-01-11 2018-01-10 Psgl-1 길항제 및 그의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230132603A true KR20230132603A (ko) 2023-09-15

Family

ID=62839779

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197023196A KR102630011B1 (ko) 2017-01-11 2018-01-10 Psgl-1 길항제 및 그의 용도
KR1020237029602A KR20230132603A (ko) 2017-01-11 2018-01-10 Psgl-1 길항제 및 그의 용도

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197023196A KR102630011B1 (ko) 2017-01-11 2018-01-10 Psgl-1 길항제 및 그의 용도

Country Status (6)

Country Link
US (2) US11306150B2 (ko)
EP (1) EP3568159A4 (ko)
JP (2) JP7244422B2 (ko)
KR (2) KR102630011B1 (ko)
CN (1) CN111201038A (ko)
WO (1) WO2018132476A1 (ko)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102630011B1 (ko) 2017-01-11 2024-01-26 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Psgl-1 길항제 및 그의 용도
JP7211961B2 (ja) 2017-03-14 2023-01-24 ファイヴ プライム セラピューティクス インク 酸性ｐＨでＶＩＳＴＡに結合する抗体
AU2019239747A1 (en) 2018-03-21 2020-10-08 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to VISTA at acidic pH
GB201814562D0 (en) 2018-09-07 2018-10-24 Hummingbird Bioscience Pte Ltd Vista antigen-binding molecules
US20190300610A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Hummingbird Bioscience Pte. Ltd. Vista antigen-binding molecules
WO2020014327A2 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to vista at acidic ph
AU2019306165A1 (en) * 2018-07-20 2021-02-25 Pierre Fabre Medicament Receptor for vista
CN111389053A (zh) * 2020-04-07 2020-07-10 柳家鹏 一种纯化杂交瘤细胞培养液中小鼠单抗的免疫吸附剂、装置和制备方法
WO2022059008A1 (en) * 2020-09-16 2022-03-24 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Methods of treating glioblastoma
TW202328196A (zh) 2021-09-16 2023-07-16 新加坡商蜂鳥生物科技私人有限公司 使用vista抗原結合分子的癌症之治療及預防
WO2023046979A1 (en) 2021-09-27 2023-03-30 Hummingbird Bioscience Pte. Ltd. Treatment and prevention of cancer using vista antigen-binding molecules
WO2023096651A1 (en) 2021-11-26 2023-06-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods for treating bile duct cancers with tivozanib
WO2024062073A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 Hummingbird Bioscience Pte. Ltd. Treatment and prevention of cancer using vista antigen-binding molecules

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4997913A (en) 1986-06-30 1991-03-05 Oncogen pH-sensitive immunoconjugates and methods for their use in tumor therapy
US5605821A (en) 1989-03-08 1997-02-25 Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Expression control sequences of the P-selectin gene
WO1992001718A2 (en) 1990-07-17 1992-02-06 Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Functionally active selectin-derived peptides and ligand for gmp-140
ATE256182T1 (de) 1992-10-23 2003-12-15 Inst Genetics Llc Neuartiges p- selectin ligandenprotein
US5843707A (en) 1992-10-23 1998-12-01 Genetics Institute, Inc. Nucleic acid encoding a novel P-selectin ligand protein
US6277975B1 (en) 1992-10-23 2001-08-21 Genetics Institute, Inc. Fusions of P-selectin ligand protein and polynucleotides encoding same
AU681369B2 (en) 1992-11-16 1997-08-28 Board Of Regents Of The University Of Oklahoma, The Glycoprotein ligand for P-selectin and methods of use thereof
AU2361395A (en) 1994-04-28 1995-11-29 Genetics Institute Inc. Novel P-selectin ligand protein
EP0850243B1 (en) 1995-08-03 2003-10-08 Board Of Regents Of The University Of Oklahoma o-glycan inhibitors of selectin mediated inflammation
DE69620898T2 (de) 1995-09-01 2002-11-07 Univ Washington Seattle Interaktive molekulare konjugate
CA2315295A1 (en) 1997-12-18 1999-06-24 Human Genome Sciences, Inc. 110 human secreted proteins
EP1090118A2 (en) 1998-06-26 2001-04-11 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human signal peptide-containing proteins
NZ531664A (en) 1998-09-01 2005-07-29 Genentech Inc Pro1317 polypeptides and sequences thereof with homology to the semaphorin B glycoprotein family
AU2883700A (en) 1999-06-23 2001-01-09 Genentech Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU5249700A (en) 1999-07-08 2001-01-30 Protegene Inc. Human proteins having hydrophobic domains and dnas encoding these proteins
EP1274839A2 (en) 2000-03-24 2003-01-15 Genetics Institute, LLC A p-selectin glycoprotein ligand (psgl-1) binding protein and uses therefor
US7744888B2 (en) 2001-08-03 2010-06-29 Abgenomics Cooperatief U.A. Methods of modulating T cell or natural killer cell activity with anti-P-selectin glycoprotein ligand 1 antibodies
US20040116333A1 (en) 2001-08-03 2004-06-17 Rong-Hwa Lin Modulators of P-selectin glycoprotein ligand 1
US20060141456A1 (en) 2002-06-12 2006-06-29 Cynthia Edwards Methods and compositions for milieu-dependent binding of a targeted agent to a target
AU2003258714A1 (en) 2002-09-06 2004-03-29 Cytos Biotechnology Ag Immune modulatory compounds and methods
US20050260711A1 (en) 2004-03-30 2005-11-24 Deepshikha Datta Modulating pH-sensitive binding using non-natural amino acids
MY148646A (en) 2004-05-10 2013-05-15 Abgenomics Cooperatief Ua Anti-psgl-1 antibodies
CN105777867A (zh) 2004-05-11 2016-07-20 艾比吉诺米克斯合作公司 诱导t细胞死亡的表位
PT1781682E (pt) 2004-06-24 2013-05-14 Mayo Foundation B7-h5, um polipéptido coestimulante
US8236304B2 (en) 2005-04-25 2012-08-07 Trustees Of Dartmouth College Use of PD-L3 proteins and PD-L3 specific antibodies or antibody fragments to regulate CD4+ and CD8+ T cell immunity
WO2007033959A2 (en) 2005-09-19 2007-03-29 Vib Vzw Use of p-selectin glycoprotein ligand 1 in modulation of hematogenous metastasis of lymphomas
WO2007067984A2 (en) 2005-12-09 2007-06-14 Wyeth Neutralizing antibodies against primate psgl-1 and uses therefor
US7655778B2 (en) 2006-02-28 2010-02-02 Curonix Co., Ltd. SISP-1, a novel p53 target gene and use thereof
ATE536369T1 (de) 2006-10-11 2011-12-15 Ablynx Nv Im wesentlichen ph-wert-unabhängigerweise an serumproteine bindende aminosäuresequenzen, verbindungen, die diese enthalten, und deren verwendung
WO2009140623A2 (en) 2008-05-15 2009-11-19 Selexys Pharmaceuticals Corporation Anti-psgl-1 antibodies and methods of identification and use
US20120100140A1 (en) 2009-01-23 2012-04-26 Biogen Idec Ma Inc. Stabilized fc polypeptides with reduced effector function and methods of use
ES2661310T3 (es) 2009-03-09 2018-03-28 Bioatla, Llc Proteínas mirac
EP2552947A4 (en) * 2010-03-26 2013-11-13 Dartmouth College VISTA REGULATORY T CELL MEDIATOR PROTEIN, VISTA BINDING ACTIVE SUBSTANCES AND USE THEREOF
JP6121904B2 (ja) 2010-09-08 2017-04-26 ハロザイム インコーポレイテッド 条件的活性治療用タンパク質を評価および同定する、または発展させる方法
JP6180408B2 (ja) 2011-06-13 2017-08-16 アブゲノミクス コーペラティフ ユー．エー． 抗ｐｓｇｌ−１抗体およびその使用
CA2857019C (en) 2011-11-28 2022-08-16 Gray D. Shaw Soluble tandem selectin glycoprotein ligand molecules
EA201400993A1 (ru) 2012-03-08 2015-05-29 Галозим, Инк. Антитела против рецептора эпидермального фактора роста, активные в определенных условиях, и способы их применения
AU2013277051B2 (en) 2012-06-22 2018-06-07 King's College London Novel VISTA-Ig constructs and the use of VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
AU2013312211B2 (en) 2012-09-07 2018-03-29 King's College London VISTA modulators for diagnosis and treatment of cancer
JP6682426B2 (ja) 2013-05-24 2020-04-15 メディミューン，エルエルシー 抗ｂ７−ｈ５抗体およびその使用
EP3003390B1 (en) 2013-06-06 2021-07-07 Pierre Fabre Médicament Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof
WO2015037000A1 (en) * 2013-09-11 2015-03-19 Compugen Ltd Vstm5 polypeptides and uses thereof as a drug for treatment of cancer, infectious diseases and immune related diseases
KR20160093012A (ko) 2013-11-05 2016-08-05 코그네이트 바이오서비시즈, 인코포레이티드 암 치료를 위한 체크포인트 억제제 및 치료제의 배합물
WO2015097536A2 (en) 2013-12-24 2015-07-02 Janssen Pharmaceutical Nv Anti-vista antibodies and fragments
EP3094346B1 (en) 2014-01-14 2019-12-11 The Trustees Of Dartmouth College Vista antagonist and methods of use
CA2949947A1 (en) 2014-06-04 2015-12-10 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for targeting a pathway
AU2015274504B2 (en) 2014-06-11 2021-02-04 Kathy A. Green Use of VISTA agonists and antagonists to suppress or enhance humoral immunity
CA2953706A1 (en) 2014-07-08 2016-01-14 Sanford-Burnham Medical Research Institute Psgl-1 modulators and uses thereof
AU2015357463B2 (en) 2014-12-05 2021-10-07 Immunext, Inc. Identification of VSIG8 as the putative vista receptor and its use thereof to produce vista/VSIG8 modulators
US10766959B2 (en) 2014-12-11 2020-09-08 Pierre Fabre Medicament Anti-C10ORF54 antibodies and uses thereof
BR112017027870A2 (pt) * 2015-06-24 2018-08-28 Janssen Pharmaceutica Nv anticorpos e fragmentos anti-vista
US11472876B2 (en) 2015-11-02 2022-10-18 Bioatla, Inc. Conditionally active polypeptides
EP3400239B1 (en) 2016-01-08 2021-06-02 AltruBio Inc. Tetravalent anti-psgl-1 antibodies and uses thereof
US10899836B2 (en) 2016-02-12 2021-01-26 Janssen Pharmaceutica Nv Method of identifying anti-VISTA antibodies
WO2017175058A1 (en) 2016-04-07 2017-10-12 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same
CA3020848A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Anti-human vista antibodies and use thereof
WO2017181109A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Michael Molloy Anti-human vista antibodies and use thereof
EP3494141A4 (en) 2016-08-03 2020-04-08 Bio-Techne Corporation IDENTIFICATION OF VSIG3 / VISTA AS A NEW IMMUNE CONTROL POINT AND ITS USE IN IMMUNOTHERAPY
WO2018047143A1 (en) 2016-09-12 2018-03-15 Aurigene Discovery Technologies Limited Vista signaling pathway inhibitory compounds useful as immunomodulators
KR102630011B1 (ko) 2017-01-11 2024-01-26 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Psgl-1 길항제 및 그의 용도
JP7211961B2 (ja) 2017-03-14 2023-01-24 ファイヴ プライム セラピューティクス インク 酸性ｐＨでＶＩＳＴＡに結合する抗体
WO2018195772A1 (en) 2017-04-25 2018-11-01 Sun Yat-Sen University Pd-1h as target in treatement of asthma
EP3642231A4 (en) 2017-06-22 2021-06-23 Apexigen, Inc. ANTI-VISTA ANTIBODIES AND METHODS OF USE
KR102281405B1 (ko) 2017-10-20 2021-07-26 주식회사 파멥신 항-vista 항체 및 이의 용도
EP3706798A1 (en) 2017-11-06 2020-09-16 Aurigene Discovery Technologies Limited Conjoint therapies for immunomodulation
US20210085785A1 (en) 2018-02-23 2021-03-25 Truebinding, Inc. Treating cancer by blocking the interaction of vista and its binding partner
AU2019239747A1 (en) 2018-03-21 2020-10-08 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to VISTA at acidic pH
WO2019185163A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Hummingbird Bioscience Holdings Pte. Ltd. Vista antigen-binding molecules
US20190300610A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Hummingbird Bioscience Pte. Ltd. Vista antigen-binding molecules
WO2020014327A2 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to vista at acidic ph
CN110563843A (zh) 2019-07-25 2019-12-13 钟小泉 一种靶向人vista蛋白的单克隆抗体

Also Published As

Publication number Publication date
WO2018132476A1 (en) 2018-07-19
JP2020504147A (ja) 2020-02-06
US20220298258A1 (en) 2022-09-22
KR20190102267A (ko) 2019-09-03
JP7244422B2 (ja) 2023-03-22
US20190330364A1 (en) 2019-10-31
JP2023088925A (ja) 2023-06-27
CN111201038A (zh) 2020-05-26
KR102630011B1 (ko) 2024-01-26
EP3568159A1 (en) 2019-11-20
EP3568159A4 (en) 2020-08-05
US11306150B2 (en) 2022-04-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102630011B1 (ko) Psgl-1 길항제 및 그의 용도
US20240041979A1 (en) Cd80 extracellular domain polypeptides and their use in cancer treatment
ES2857076T3 (es) Terapia de combinación para cáncer
AU2016359609B2 (en) FGFR2 inhibitors alone or in combination with immune stimulating agents in cancer treatment
US11789010B2 (en) Methods of treatment with CD80 extracellular domain polypeptides
JP2017533207A (ja) Ｓｌａｍｆ１アンタゴニスト及びその使用
KR20220151161A (ko) Igsf8의 표적화에 의해 자가면역 질환 및 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법
KR20220123105A (ko) 항-갈렉틴-9 항체 및 그것의 용도
CN110709420A (zh) 使用抗gitr抗体的癌症组合疗法

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent