ES2822180T3

ES2822180T3 - Formulación farmacéutica que contiene glicosaminoglicano

Info

Publication number: ES2822180T3
Application number: ES13877756T
Authority: ES
Inventors: Pao-Ho Chang
Original assignee: Aihol Corp
Current assignee: Aihol Corp
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2013-04-19
Publication date: 2021-04-29
Anticipated expiration: 2033-04-19
Also published as: EA030133B1; WO2014142938A1; KR101727847B1; EP2968195A4; CN105025889A; BR112015020820B1; EA201591450A1; EP2968195B1; CA2903037C; AU2013381833A1; TW201434497A; TWI516285B; WO2014143085A1; CN105025889B; KR20150126350A; JP2016510026A; EP2968195A1; JP6161734B2; AU2013381833B2; BR112015020820A2

Abstract

Una formulación farmacéutica que contiene por lo menos una pella, en la que la pella comprende: un núcleo que comprende un material inerte farmacéuticamente aceptable; una capa de fármaco que rodea el núcleo, en la que la capa de fármaco comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un fármaco para el tratamiento de una enfermedad entérica; una capa de glicosaminoglicano que rodea directamente la capa de fármaco, en la que la capa de glicosaminoglicano comprende un glicosaminoglicano; una capa aislante que rodea la capa de glicosaminoglicano, en la que la capa aislante comprende un polímero hidrófobo, que se disuelve a un valor de pH de por lo menos 5.5; y una capa de recubrimiento entérico que rodea la capa aislante, en la que la capa de recubrimiento entérico comprende un polímero entérico, que se disuelve a un valor de pH de por lo menos 6.8.

Description

DESCRIPCIÓN

Formulación farmacéutica que contiene glicosaminoglicano

Antecedentes

Campo técnico

La divulgación se refiere a una formulación farmacéutica. Más particularmente, la divulgación se refiere a una formulación farmacéutica que contiene glicosaminoglicano.

Descripción de la técnica relacionada

El recubrimiento entérico ha sido desarrollado por muchos años para mejorar la eficiencia en el tratamiento de enfermedad entéricas, y la dosificación de fármaco usada puede así ser disminuida. Sin embargo, la eficiencia en el tratamiento de enfermedad entéricas requiere todavía mejoras para disminuir adicionalmente la dosificación de fármaco usada.

La mesalamina, también conocida como mesalazina o ácido 5-aminosalicílico (5-ASA), es un fármaco antiinflamatorio usado para tratar la inflamación de la colitis ulcerativa del tracto digestivo y enfermedad de Crohn media a moderada, la mesalamina es un fármaco de aminosalicilato específico del intestino que actúa localmente en las entrañas y tiene sus acciones predominantes allí, por lo cual tiene algunos efectos sistémicos laterales. Como un derivado de ácido salicílico, se piensa también que la mesalamina es un antioxidante que atrapa radicales libres, que son subproductos del metabolismo, potencialmente dañinos. El N-acetil-5-ASA es un metabolito de 5-ASA. El 5-ASA es absorbido rápidamente a través de la pared mucosa del intestino y por el hígado. Es excretado principalmente por el riñón, como N-acetil-5-ASA.

El documento de EEUU No. 4980173 divulga una composición farmacéutica que contiene como ingrediente activo, ácido 5-aminosalicílico o una sal o éster farmacéuticamente aceptables del mismo, que permiten el tratamiento de colitis ulcerosa o enfermedad de Crohn, mediante administración oral. Se divulgó una formación de comprimido particular de liberación lenta, y su preparación. El defecto de la patente es que el fármaco se distribuye naturalmente en el intestino y se dispersa de manera no específica en sitios de interés, de manera que se requiere mayor dosificación para alcanzar mejor resultado en la terapia, y tendrá menor efecto de terapia debido a la menor dosificación del fármaco adherido dentro de la parte de inflamación.

El documento de EEUU No. 5541170 divulga una forma sólida de dosificación, tal como una cápsula o comprimido, que contiene un agente farmacológicamente activo, que está recubierto con un polímero aniónico, el cual es insoluble en jugo gástrico y en jugo intestinal con pH menor a 7, pero es soluble en jugo intestinal del colon, en una cantidad suficiente tal que la forma de dosificación oral permanece intacta hasta que alcanza el colon. Aunque esta invención ha liberado específicamente el fármaco en el ambiente por debajo de pH 7, todavía no puede pretender focalizarse en la mejora de la concentración del fármaco en la parte del desorden. El defecto es el mismo mencionado anteriormente. El documento de EEUU No. 5541171 también divulga una forma sólida de dosificación que es muy similar al documento de EEUU No. 5541170. Esta patente sólo añadió más términos de restricción, comparada con la primera. El documento de EEUU No. 6551620 divulga una formulación de pella farmacéutica administrable por vía oral, para el tratamiento del tracto intestinal que se divulga, que comprende un núcleo y un recubrimiento entérico, en la que el núcleo incluye como un compuesto farmacéutico activo, ácido aminosalicílico o una sal farmacéuticamente tolerable o un derivado de ellos. El defecto es todavía el mismo mencionado anteriormente.

El documento de EEUU No. 6773720 divulga una composición farmacéutica oral de liberación controlada, que contiene un ingrediente activo ácido 5-amino-salicílico. La composición comprende: (a) una matriz lipofílica interior que consiste en sustancias con un punto de fusión inferior a 90°C, en las cuales el ingrediente activo está englobado por lo menos parcialmente; (b) una matriz hidrofílica exterior en la cual está dispersa la matriz lipofílica; y (c) opcionalmente, otros excipientes. El defecto es todavía el mismo mencionado anteriormente.

El documento de EEUU No. 6893662 divulga una composición farmacéutica en una forma de dosificación unitaria sólida para la administración oral en un humano o animal inferior. La composición farmacéutica comprende: (a) una cantidad segura y efectiva de una agente terapéuticamente activo; (b) una capa interior de recubrimiento seleccionado de entre el grupo que consiste en poli(ácido metacrílico, metil metacrilato) 1:2, poli(ácido metacrílico, metil metacrilato) 1:1, y mezclas de ellos; y (c) una capa exterior de recubrimiento que comprende un polímero entérico o material de recubrimiento de película. Sin embargo, el defecto es todavía el mismo mencionado anteriormente.

El documento de EEUU No, 6046179 divulga una composición para el tratamiento de enfermedad inflamatoria del intestino en un paciente que sufre de enfermedad inflamatoria del intestino, que comprende: (a) una cantidad terapéutica de N-acetil-glucosamina; y (b) un vehículo farmacológicamente aceptable, adaptado para ser administrado en el colon a dicho paciente. El defecto de esta patente es que carecía de un fármaco diferente a N-acetil-glucosamina; por ello, carece de suplemento diferente a otro entre N-acetil-glucosamina y el otro fármaco, tal como mesalamina. Dado que todas las composiciones de estas patentes anteriores tienen que ser usadas bajo dosificaciones regulares de fármaco o N-acetil-glucosamina, estas composiciones no pueden disminuir la dosificación (cantidad) terapéutica general de ninguna de ellas.

El glicosaminoglicano puede ser obtenido de numerosas fuentes (por ejemplo crestas de gallo, tráquea, cordón umbilical, piel, fluidos articulares y ciertas bacterias tales como Streptococci spp). La mayoría de los glicosaminoglicanos están compuestos por unidades repetitivas de azúcares tales como N-acetil glucosamina, ácido N-acetil glucurónico y/o N-acetil galactosamina (éstos son conocidos como glicosaminoglicanos no sulfatados). Si tales glicosaminoglicanos contienen grupos azufre, son conocidos como glicosaminoglicanos sulfatados. Los ejemplos de glicosaminoglicanos incluyen ácido hialurónico (que está hecho de unidades repetitivas de N-acetil glucosamina y ácido glucurónico), condroitina sulfato, dermatan sulfato, queratan sulfato y heparina, todos los cuales contienen N-acetilglucosamina o aminoazúcar, N-acetilgalactosamina. Los glicosaminoglicanos se presentan también en los proteoglicanos, que son estructuras que contienen varias cadenas de glicosaminoglicanos enlazadas a un núcleo de polipéptido o proteína.

Resumen

De acuerdo con ello, en un aspecto, la presente invención está orientada a una formulación farmacéutica, que contiene por lo menos una pella para mejorar la eficiencia en el tratamiento de enfermedad entéricas.

De acuerdo con otra realización, luna pella anterior comprende un núcleo, una capa de fármaco que rodea el núcleo, una capa de glicosaminoglicano que rodea la capa de fármaco, una capa aislante que rodea la capa de glicosaminoglicano, y una capa de recubrimiento entérico que rodea la capa aislante.

De acuerdo con ello, la relación en peso del núcleo, la capa de fármaco, la capa de glicosaminoglicano, la capa aislante, y el recubrimiento entérico es 100:137-141:25-29: 9-13:60-64, y preferiblemente 100:139: 27:11:62.

De acuerdo con una realización, luna pella anterior comprende un núcleo, una capa de fármaco que rodea el núcleo, una capa de glicosaminoglicano que rodea la capa de fármaco, y una capa de recubrimiento entérico que rodea la capa de glicosaminoglicano.

De acuerdo con ello, la relación en peso del núcleo, la capa de fármaco, la capa de glicosaminoglicano, y el recubrimiento entérico es 100:137-141; 25-29:60-64, y preferiblemente 100:139:27:62.

En una realización, el núcleo anterior comprende un material inerte farmacéutico aceptable, tal como celulosa, almidón, azúcar u óxido de silicio; preferiblemente, celulosa microcristalina.

En otra realización, la capa de fármaco anterior comprende un fármaco para el tratamiento de una enfermedad entérica.

En otra realización, la capa de fármaco anterior comprende un fármaco que incluye mesalamina, laxantes, antidiarreicos, glucocorticoides, antimicrobianos, inmunosupresores, quimioterapéuticos, fármacos contra el cáncer, péptidos, proteínas, fármacos cardiovasculares, fármacos psicotrópicos, bloqueadores de H2, agentes contra el asma, antihistaminas, esteroides, fármacos antiinflamatorios no esteroides (NSAID), antibióticos, antiinflamatorios, o cualquier derivado de ellos.

En todavía otra realización, la capa de fármaco anterior comprende adicionalmente un aglutinante como hidroxipropilmetil celulosa, hidroxipropil celulosa, o polivinilpirrolidona.

En todavía otra realización, la capa de glicosaminoglicano comprende ácido hialurónico o una sal del mismo, condroitina sulfatos, heparina sulfato, heparina, queratan sulfato, o dermatan sulfato, por ejemplo.

En todavía otra realización, la capa aislante comprende un polímero hidrófobo, que puede ser disuelto a un valor de pH de por lo menos 5.5. El polímero hidrófobo puede ser poli(ácido metacrílico-co-etil acrilato) 1:1, poli(ácido metacílico-co-metil metacrilato) 1:1, poli{metil acrilato-co-metil metacrilato-co-ácido metacrílico) 7:3:1, celulosa acetato ftalato, celulosa acetato succinato, metilcelulosa ftalato, metilhidroxipropil-celulosa ftalato, etilhidroxicelulosa ftalato, polivinilacetato ftalato, polivinilbutirato acetato, copolímero de vinil acetato-anhídrido maleico, copolímero de estirenomonoéster maleico, copolímero de metil acrilato-ácido metacrílico, y copolímero de metacrilato- ácido metacrílico-octil acrilato, por ejemplo.

En todavía otra realización, la capa aislante o la capa de recubrimiento entérico comprende polímero(s) entérico(s) o polímero(s) resistente(s) al pH, que pueden ser disueltos a un valor de pH de por lo menos 6.8. Los polímero(s) entérico(s) pueden ser celulosa acetato ftalato, celulosa acetato succinato, metilcelulosa ftalato, etilhidroxicelulosa ftalato, polivinilacetato ftalato, polivinilbutirato acetato, copolímero de vinil acetato-anhídrido maleico, copolímero de estireno-monoéster maleico, copolímero de metil acrilato-ácido metacrílico, copolímero de metacrilato-ácido metacrílico-octil acrilato, o cualquier combinaciones de ellos, por ejemplo.

En todavía otra realización, luna pella está en una cápsula o un comprimido.

Lo anterior presenta un resumen simplificado de la divulgación, con objeto de suministrar un entendimiento básico al lector. Este resumen no es una vista general extensa de la divulgación, y no identifica elementos clave/críticos de la presente invención o delinea el alcance de la presente invención. Su único propósito es presentar algunos conceptos divulgados en esta memoria, de una manera simplificada, como un preludio a la descripción más detallada, que se presenta posteriormente. Muchos de los rasgos relacionados serán apreciados más fácilmente en la medida que los mismos son mejor entendidos por referencia a la siguiente descripción detallada, considerada en conexión con los dibujos acompañantes.

Breve descripción de los dibujos

La Fig. 1A es un diagrama de una estructura de una pella de acuerdo con una realización de esta invención.

La Fig. 1B es un diagrama de una estructura de una pella de acuerdo con otra realización de esta invención.

La Fig. 2 muestra la afinidad de HAs por índice fluorescente en tejidos de colon normales y dañados (*p<0.05). La Fig. 3 muestra tiempo de biopsias de tejido, perfil de concentración de mesalamina después de dosificación de Colasa® (una marca de preparación de enema con 20 mg de mesalamina en 1 ml de solución) o HA-mesalamina. Las Figs. 4A y 4B son los perfiles de disolución de las pellas disueltas en soluciones amortiguadoras de pH 6.8 y pH 4.5.

Descripción detallada

En la siguiente descripción detallada, para propósitos de explicación, se exponen varios detalles específicos, con objeto de suministrar un completo entendimiento de las realizaciones divulgadas. Sin embargo, será evidente que pueden practicarse una o más realizaciones, sin estos detalles específicos. En otros casos, se muestran esquemáticamente estructuras y dispositivos bien conocidos, con objeto de simplificar el dibujo.

Definición de términos

Como se usa en esta memoria "sujeto", es cualquier mamífero. Los sujetos incluyen individuos (pacientes) que requieren tratamiento con un fármaco (por ejemplo mesalamina) e individuos que no requieren tratamiento por un fármaco (por ejemplo voluntarios saludables normales). Los humanos son sujetos y pacientes preferidos.

Una "cantidad terapéuticamente efectiva" o "cantidad efectiva" de un fármaco (por ejemplo mesalamina) es una cantidad requerida para alcanzar un efecto farmacológico o mejora terapéutica deseados, sin efectos laterales adversos indebidos. La cantidad efectiva de un fármaco (por ejemplo mesalamina) será seleccionada por aquellos expertos en la técnica, dependiendo del paciente y la enfermedad particulares. Se entiende que "una cantidad efectiva" o "una cantidad terapéuticamente efectiva" pueden variar de sujeto a sujeto, debido a la variación en el metabolismo de un fármaco (por ejemplo mesalamina), edad, peso, condición general del sujeto, la condición que va a ser tratada, la severidad de la condición que es tratada, y el juicio del médico que hace la prescripción. Además, las personas de destreza ordinaria en la técnica pueden entender claramente la "cantidad" o "dosificación" de acuerdo con el inserto o etiqueta el paquete del fármaco registrado ante la autoridad competente para administración de fármacos, ratificada por la institución responsable por la gestión de la medicina.

"Tratar" o "tratamiento" se refiere a cualquier tratamiento de un desorden o enfermedad, tal como la prevención de la ocurrencia del desorden o enfermedad, en un sujeto que puede estar predispuesto al desorden o la enfermedad, pero al que no se le ha diagnosticado que tenga el desorden o enfermedad; inhibición del desorden o enfermedad, por ejemplo, detención del desarrollo del desorden o enfermedad, alivio en el desorden o enfermedad, causa de la regresión del desorden o enfermedad, alivio de una condición causada por el desorden o enfermedad, o reducción en los síntomas del desorden o enfermedad.

Introducción

La presente invención se basa en los resultados previos de prueba, en los que la cantidad de ácido hialurónico (HA) enlazado a la superficie inflamatoria fue mayor que el área no inflamatoria del tejido de colon. Además, los resultados indicaron que el HA puede ser tomado como un vehículo de entrega para portar un fármaco, tal como mesalamina, adecuado para el tratamiento de una inflamación y/o alergia y/o daño, cuando se mezcla e1HA con un fármaco. Por ello, la concentración del fármaco es mayor en la superficie inflamatoria, que en el área no inflamatoria, cuando se combina el uso de HA y mesalamina. De acuerdo con ello, la dosificación del fármaco puede ser disminuida respecto a la dosificación regular, y el efecto de la terapia mejora también de manera notable debido al fármaco que se adhiere especialmente sobre el lugar que requiere curación. De acuerdo con ello, la presente invención está, a la luz de los resultados mencionados anteriormente, para desarrollar adicionalmente la formulación de la presente invención. Formulación farmacéutica que contiene una pella

De acuerdo con ello, un aspecto de esta invención es suministrar una formulación farmacéutica que contiene por lo menos una pella, para mejorar la eficiencia del tratamiento de enfermedades entéricas. La pella es una formulación de liberación controlada (también conocida como una formulación de liberación retardada), que es diseñada para entregar un fármaco durante un período extendido de tiempo, es decir, para liberar un fármaco en cualquier momento diferente a inmediatamente después de la administración y/o en cualquier otra ubicación en el tracto gastrointestinal, más distal de aquella a la cual se habría logrado por una forma de dosificación de liberación inmediata.

La estructura de cada pella en esta formulación farmacéutica es mostrada en las Fig. 1A o 1B. La formulación farmacéutica comprende cápsula, comprimido o cualquier otro tipo de formulación que necesite por lo menos una pella. Esto es, las pellas pueden estar encapsuladas en una cápsula o comprimidas como un comprimido.

La Fig. 1A es un diagrama de la estructura de una pella, de acuerdo con una realización de esta invención. En la Fig. 1A, una pella 100a incluye secuencialmente un núcleo 110, una capa 120 de fármaco, una capa 130 de glicosaminoglicano, una capa 140 aislante, y una capa 150 de recubrimiento entérico, desde el interior. En la tabla 1 se muestra la relación en peso del núcleo 110, la capa 120 de fármaco, la capa 130 de glicosaminoglicano, la capa 140 aislante, y la capa 150 de recubrimiento entérico.

Tabla 1: Relación en peso de cada parte de la pella 100a

El núcleo 110 es usado como una semilla de recubrimiento para facilitar el recubrimiento de las capas subsiguientes. Por ello, el diámetro del núcleo 110 es aproximadamente 500 - 800 pm, tal como 700 pm. La composición del núcleo 110 puede ser cualquier material inerte farmacéuticamente aceptable, tal como celulosa, almidón, azúcar o dióxido de silicio. La celulosa puede ser metil celulosa, hidroxipropilmetil-celulosa, carbometilcelulosa de sodio, o celulosa microcristalina, por ejemplo. El almidón puede ser o provenir de almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, o almidón de cereal, por ejemplo. El azúcar puede ser maltosa, lactosa, fructosa, galactosa, trehalosa, sucrosa, manitol, o sorbitol, por ejemplo.

La capa 120 de fármaco contiene un fármaco que es adecuado para el tratamiento de una enfermedad entérica. Por ejemplo, para el tratamiento de enteritis, el fármaco puede ser antibiótico o antiespasmódico. Para el tratamiento de úlcera péptica, el fármaco puede ser coagulante, antibiótico, antiácido, bloqueador de H2, bloqueador de bomba de hidrógeno potasio (PPI), citoprotectores o protector de mucosa. Para el tratamiento de la enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), el fármaco puede ser esteroide, agente inmunosupresor, antibiótico, 5-ASA (ácido 5-amo salicílico) y derivados, o antiinflamatorio. De acuerdo con ello, el fármaco puede ser cualquiera de los mencionados anteriormente, por ejemplo. Preferiblemente, el fármaco en la capa 120 de fármaco contiene un grupo funcional con carga positiva. La capa 120 de fármaco puede comprender además un aglutinante para unir el polvo del fármaco con el núcleo 110. El aglutinante puede ser hidroxipropilmetil celulosa, hidroxipropil celulosa, o polivinilpirrolidona, por ejemplo.

La capa 130 de glicosaminoglicano contiene principalmente un glicosaminoglicano, el cual es usado para hacer puente entre el fármaco en la capa 120 de fármaco y la mucosa entérica en el tracto gastrointestinal. El glicosaminoglicano puede ser ácido hialurónico, condroitina sulfatos, heparina sulfato, heparina, queratan sulfato, o dermatan sulfato. De acuerdo con una realización, el glicosaminoglicano es ácido hialurónico. El ácido hialurónico (abreviado como HA abajo) es un glicosaminoglicano aniónico no sulfatado, distribuido ampliamente a través de tejidos conectivos, epiteliales y neurales. Por ello, HA tiene una elevada afinidad con tejidos biológicos, tales como mucosa. Por ello, el HA contiene un grupo carboxilato con carga negativa, HA puede interactuar con un grupo funcional que tiene carga positiva. Por ello, si el fármaco en la capa 120 de fármaco tiene un grupo funcional que tiene carga positiva, e1HA puede interactuar con el fármaco para fijar el fármaco sobre la mucosa entérica, para concentrar el fármaco en un área específica, como la parte deteriorada; por ello, aumenta el efecto y eficiencia del fármaco para el mejor tratamiento de la enfermedad entérica y para menor gasto del fármaco administrado. Este fenómeno puede ser interpretado también mediante resultados piloto de la presente invención, que mostraron una adhesión más estrecha sobre el área deteriorada, comparada con el área normal.

La capa 140 aislante es usada para proteger la capa 130 de glicosaminoglicano del contacto con agua durante los pasos posteriores de preparación de la pella. Cuando el glicosaminoglicano en la capa 130 de glicosaminoglicano es HA, dado que HA formará fácilmente una película de HA después de hacer contacto con el agua, se produce un problema de agregación de las pellas, que obstruye el recubrimiento. por ello, el material usado para la capa 140 aislante puede ser un polímero hidrófobo, que puede disolverse a un valor de pH de por lo menos 5.5.

El polímero hidrófobo puede ser poli (ácido metacrílico-co-etil acrilato) 1:1, poli (ácido metacílico-co-metil metacrilato) 1:1, poli (metil acrilato-co-metil metacrilato-co-ácido metacrílico) 7:3:1, celulosa acetato ftalato, celulosa acetato succinato, metilcelulosa ftalato, metilhidroxipropil-celulosa ftalato, etilhidroxicelulosa ftalato, polivinilacetato ftalato, polivinilbutirato acetato, copolímero de vinil acetato-anhídrido maleico, copolímero de estireno-monoéster maleico, copolímero de metil acrilato-ácido metacrílico, o copolímero de metacrilato-ácido metacrílico-octil acrilato. Estos polímero hidrófobos pueden ser usados solos o en combinación, o junto con otros polímeros diferentes a aquellos mencionados anteriormente.

El recubrimiento entérico 150 contiene principalmente un polímero entérico, el cual preferencialmente es soluble en el ambiente menos ácido de intestino pequeño, intestino grande, o ambos, respecto al ambiente más ácido del estómago. Se espera que como un recubrimiento entérico, en la práctica de la presente invención pueda usarse cualquier polímero aniónico que exhibe un perfil de solubilidad dependiente del pH. De acuerdo con una realización, el polímero entérico puede ser disuelto a un valor de pH de por lo menos 6.8. El polímero entérico puede ser celulosa acetato ftalato, celulosa acetato succinato, metilcelulosa ftalato, etilhidroxicelulosa ftalato, polivinilacetato ftalato, polivinilbutirato acetato, copolímero de vinil acetato-anhídrido maleico, copolímero de estireno -monoéster maleico, copolímero de metil acrilato-ácido metacrílico, copolímero de metacrilato-ácido metacrílico-octil acrilato, etc. Estos polímeros entéricos pueden ser usados solos o en combinación, o junto con otros polímeros diferentes a aquellos mencionados anteriormente.

La Fig. 1B es un diagrama de la estructura de una pella, de acuerdo con otra realización de esta invención. En la Fig. 1B, se omite la capa 140 aislante de la pella 100a en la Fig. 1A, para formar la estructura de la pella 100b.

Procedimiento para la preparación de pellas en la formulación farmacéutica

Otro aspecto de esta invención es suministrar un procedimiento para la preparación de pellas empacadas en cápsulas o comprimidos. Cada capa de la pella 100a o 100b mostrada en las Figs. 1a o 1B es recubierta mediante un sistema de lecho fluido (comprado a Huttlin, Alemania). Abajo se describen las soluciones de recubrimiento para cada capa de la pella 100a o 100b.

Para el recubrimiento de la capa 120 de fármaco, se prepara la solución de recubrimiento de fármaco, mediante los siguientes pasos. Primero, se añade al agua por lo menos uno de los aglutinantes anteriores y se agita para formar una solución clara que tiene una elevada viscosidad de 4.8 a 7.2 cP (centipoise). Luego, a la solución clara de aglutinante se añadió secuencialmente un agente contra el apelmazamiento y un fármaco, y luego se agitó para formar una solución de recubrimiento uniforme de fármaco. El agente contra el apelmazamiento, tal como el talco (es decir silicato de magnesio hidratado), es usado para evitar la agregación de la pella.

Para el recubrimiento de la capa 130 de glicosaminoglicano, se prepara una solución de recubrimiento de glicosaminoglicano, mediante los siguientes pasos. Primero se añade un aglutinante al etanol (99.9%) y se agita para formar una solución clara. Luego se añade un glicosaminoglicano a la solución clara de aglutinante, y luego se agita para formar una suspensión uniforme de recubrimiento de glicosaminoglicano. El aglutinante puede ser hidroxipropil celulosa (tal como HPC-L).

Para el recubrimiento de la capa 140 aislante, se prepara la solución de recubrimiento de aislamiento, mediante los siguientes pasos. Se añade un polímero hidrófobo a etanol (95%) y se agita para formar una solución clara. Luego, se añaden trietil citrato y talco a la solución clara del polímero hidrófobo y se agita para formar una solución de recubrimiento de aislamiento uniforme.

Para el recubrimiento de la capa 150 de recubrimiento entérico, se prepara la solución de recubrimiento entérico, mediante los siguientes pasos. Se mezclan para formar una solución uniforme, por lo menos un polímero entérico, una emulsión que contiene agua, gliceril monoestearato, trietil citrato y polisorbato 80 (PlasACRYL-T20), y agua. Se filtra luego la solución sobre una criba de malla 60.

Realización 1: la adhesión de HA en tejido de colon

Procedimiento:

(I) Se añadieron 0.25 g de hialuronato de sodio de alto peso molecular en polvo (abreviado como HHA; MW: 2 MDa; Freda) y 0.25 g de hialuronato de sodio de bajo peso molecular en polvo (abreviado como LHA; MW: 350 kDa; Freda), a 50 ml de amortiguador PBS (solución salina amortiguada de fosfato) respectivamente para formar una solución al 0.5 %, y luego se agitó por 6 horas hasta que el polvo estuvo totalmente disuelto. Se añadieron 0.05 g de LHA en polvo y 0.2 g de HHA en polvo (relación 2:8, y promedio MW es 1 MDa; denotado como hialuronato de sodio de peso molecular medio en polvo, y abreviado como MHA) a 50 ml de amortiguador PBS, y luego se agitó por 6 horas hasta que el polvo estuvo totalmente disuelto.

(II) Se preparó HA fluorescente (abreviado como HA-f) mediante los siguientes pasos:

(1) Solución amortiguadora MES: 0,39 g MES de ácido (2-(N-morfolino) etanosulfónico ácido libre, Calbiochem) y se disolvieron en 100 ml de agua dd (doblemente destilada).

(2) Solución A: se disolvieron 65 mg de polvo de fluroresceinamina, (isómero I, Fluka) en 9 ml de solución al 95% de EtOH y luego se agitó por 10 minutos bajo una condición en la cual estaba prohibida la luz.

(3) Solución B: se disolvieron 359 mg de polvo EDC [clorhidrato de N-(3-dimetilamino propil)-N-etil carbodiimida, Sigma] en 9 ml de amortiguador MES y luego se agitó por 10 minutos.

(4) Solución C: se disolvieron 216 mg de polvo NHS (N-hidroxisuccinimda, Sigma) en 9 ml de amortiguador MES y luego se agitó por 10 minutos.

(5) Se añadieron 3 ml de solución A lentamente gota a gota sobre 50 ml de solución al 0.5% de HA y luego se agitó por 10 minutos bajo una condición en que la luz estaba prohibida.

(6) Se añadieron separadamente gota a gota 3 ml de solución B y 5 ml de solución C a la solución del paso (5), y luego se agitó por 10 minutos bajo una condición en que la luz estaba prohibida.

(7) Se añadió lentamente solución amortiguadora 0.02 M de MES a la solución del paso (6) hasta que el volumen alcanzó 100 ml, y luego se agitó por 24 horas a temperatura ambiente bajo una condición en que la luz estaba prohibida.

(8) Después de la reacción se colocó el producto dentro de un tubo de diálisis (MW: 12000~14000) en 5 L de agua dd como una solución de diálisis y luego se agitó por 5 días a 4 °C bajo una condición en que la luz estaba prohibida, en la que la solución de diálisis era cambiada cada 12 horas hasta que la solución de diálisis no tuvo fluorescencia. (9) Después de la diálisis, el líquido fue repartido en tubos plásticos de centrifuga de 50 ml y luego reservado a -20 °C en el refrigerador durante la noche, seguido por secado en una máquina de liofilización, bajo una condición en que la luz estaba prohibida.

(10) Se reservó en un refrigerador a -20 °C el polvo HA-f.

(11) Se añadieron lentamente 50 mg HA-f en polvo a 10 ml de amortiguador PBS y luego se agitó por 6 horas hasta que el polvo estuvo totalmente disuelto.

(III) Con un escalpelo se cortó tejido de colon de rata SD (Sprague-Dawley) con edad de 7-8 semanas y luego se lavó mediante amortiguador PBS seguido por un corte con longitud de 3-4 cm, con remojo final en amortiguador PBS. (IV) Se preparó tejido lesionado de colon cepillando con cepillo dental por 20 veces en sentido longitudinal y luego remojando en amortiguador PBS.

(V) Se colocaron tejidos normal y lesionado de colon dentro de placas de 12 pozos y luego se añadió 1 ml de solución al 0.5 % de HA-f dentro de cada pozo y se sacudió por 2 horas a temperatura ambiente. Mediante puntas se succionó el exceso de solución HA-f 2 horas después, y luego se remojo dentro de amortiguador PBS por 10 minutos seguido por retiro del amortiguador de PBS repetidamente por 3 veces.

(VI) Se colocó el tejido de colon limpio en una placa de 12 pozos con tejido de revestimiento orientado hacia arriba y luego se colocó sobre el muelle del IVIS (in vivo image system, XENOGEN). Se ajustó el parámetro de condición base como GFP (proteína verde fluorescente) mientras la excitación era 465 nm y la emisión era 500 nm y luego se capturó la imagen mediante software.

(VII) Todos los valores en la tabla están expresados como promedios de n observaciones. El índice histológico fue analizado mediante la prueba t de Student.

Resultado:

La Fig. 2 muestra la afinidad de HAs por índice fluorescente en tejidos normal y lesionado de colon (*p<0.05). En la Fig. 2, el índice fluorescente de tejido normal de colon fue definido como 1. Las otras pruebas de tejido de colon fueron calibradas mediante el índice fluorescente de tejido normal de colon. Los resultados mostraron que la cantidad adherida de los HAs con el mismo promedio MW fueron obviamente mayores en los tejidos lesionados de colon, comparados con los tejidos normales de colon (P<0.01). Comparando la diferente cantidad adherida de los HAs con tres diferentes promedios de peso molecular (es decir HHA, MHA, y LHA) en los tejidos lesionados de colon, el índice fluorescente de la adhesión de 350 KDa HA (es decir LHA) para los tejidos lesionados de colon fue obviamente mayor que para aquellos de los otros dos HAs con MW de 2 MDa y 1 MDa (es decir HHA y MHA).

Realización 2: Estudio comparativo de concentración de tejido de colon de mesalamina, después de la instilación intraluminal de diferentes preparaciones de mesalamina

Procedimiento:

(I) Animales del experimento:

Las ratas Sprague-Dawley (280~330 g) macho con 8 semanas de edad, grado SPF, fueron suministradas por BioLASCO Taiwan Co. Ltd.

(II) Fármacos en prueba:

(A) Enema Colasa® (20 mg/ml United Biomedical, Inc. Asia), y

(B) mezcla de HA 0.25% (p/p) (8:2=2000 KDa HA: 350 KDa HA) en PBS (f7.4) que contiene 5 mg/ml de mesalamina (abreviado como HA-M).

(III) Instilación intraluminal de fármacos en prueba:

Después de anestesiar levemente mediante Zoletil 50, se realizó incisión ventral a la rata mediante tijeras quirúrgicas, y se identificó el colon. Se ataron mediante hilos de algodón 2 segmentos de colon (2 cm cada uno), se inyectaron 0.5 ml de fármacos en prueba, dentro del lumen de segmentos aislados de colon. Después de 0.5, 1, 1.5, o 2 horas, se sacrificaron las ratas y se retiraron los segmentos de colon. Para cada punto del tiempo de instilación intraluminal, se usaron tres ratas.

(IV) Preparación de especímenes:

Se lavaron con solución PBS biopsias de tejido, para retirar la contaminación superficial, se pesaron y de inmediato se congelaron en nitrógeno líquido, y se almacenaron a -80°C hasta el uso. Se trituraron las biopsias y se les añadió solución de KH2PO4 50 mM (pH 7.4). Se alteraron con ultrasonido las células del tejido, usando una microsonda insertada dentro de la suspensión por 10 segundos, y luego se detuvo la alteración ultrasónica por 20 segundos a 25 W, para un total de 10 minutos. Después de mezclar mediante Vortex, se dejaron las muestras por 30 minutos a temperatura ambiente para permitir la precipitación de la proteína, y luego se sometieron a centrifugación a 13000 g por 30 minutos,

(V) Análisis de la concentración de mesalamina en biopsias de tejido de colon:

La mesalamina fue medida mediante cromatografía líquida de ultradesempeño (UPLC). El método ha sido validado. se emplearon sistema Waters (Reino Unido) ACQUITY y detector de florescencia (excitación 315 nm, emisión 430 nm), y los datos fueron analizados usando Empower 2. Una columna ACQUITY (C18, 100x2.1 de diámetro interior, partícula de 1.7 um) adquirida de Waters (Reino Unido) fue protegida mediante un guardacolumna Van (C18, 5x2.1 mm de diámetro interior, partículas de 1.7 um, Waters). La fase móvil consistía en ácido acético 0.1 M con trietilamina a pH 4.3 y acetonitrilo (850:150). La tasa de flujo fue 0.2 ml/min, con una presión resultante de 5400 psi, y el análisis fue ejecutado a 40°C. El volumen de inyección fue 5 pl. Se prepararon los derivados de las muestras usando anhídrido propiónico, para mejorar las características de florescencia de la mesalamina. Se usó trietilamina como un agente de par de ion, para mejorar la simetría del pico. El método de análisis de UPLC de mesalamina fue validado mediante medición de mesalamina en un intervalo lineal nominal de 10 a 1000 ng/ml. El coeficiente de correlación lineal (R2) del método usado en este estudio es 1.00.

Resultados:

La Fig. 3 muestra el perfil de tiempo de biopsias de tejido de colon, concentración de mesalamina después de dosificación de Colasa® (una marca de preparación de enema con 20 mg de mesalamina en 1 ml de solución) o HA-mesalamina (abreviado como HA-M). En la Fig. 3, la concentración (mediana) de mesalamina en biopsias de tejido de colon, después de la instilación de Colasa®, mostró un pico después de una hora de instilación. Después de ello, la concentración de mesalamina cayó rápidamente. Por el contrario, HA-M liberó continuamente mesalamina durante el periodo de dos horas, y la concentración de mesalamina fue creciente y mucho mayor que la de Colasa® después de dos horas de instilación.

El resultado de esta realización divulgó que HA-M sostuvo la liberación de mesalamina de modo mucho más prolongado, comparado con el enema comercial de mesalamina (Colasa®). Sin embargo, HA-M contenía sólo un cuarto de la concentración de mesalamina en Colasa®. El resultado de los datos anteriores mostró que sólo un cuarto de la cantidad regular terapéuticamente efectiva fue usado en el HA-M, pero HA-M tiene casi la misma eficacia para mejorar la inflamación de IBD inducido de manera artificial en ratas.

Realización 3: Prueba de disolución de las pellas

En esta realización, se produjeron pellas de acuerdo con el procedimiento de preparación suministrado anteriormente. En la tabla 2 abajo se listan los materiales usados para cada capa están listados.

Tabla 2

Luego, se realizó un experimento de disolución para las pellas de arriba. En este experimento de disolución, se usaron 6 cápsulas para cada prueba de disolución. los valores de pH de las soluciones amortiguadoras usadas para disolver las cápsulas fueron 4.5 y 6.8, respectivamente. La solución amortiguadora de pH 4.5 fue preparada mediante mezcla de soluciones de KH2PO4 y H3PO4, y la solución amortiguadora de pH 6.8 fue preparada mediante mezcla de soluciones de KH2PO4, NaOH y KOH. Las pruebas de disolución fueron ejecutadas a 37.0 ± 0.5 °C, y la paleta rotaba a 100 rpm. El detector UV en línea fue ajustado a 330 nm para detectar la concentración de la mesalamina disuelta. Se disolvieron diferentes cantidades de mesalamina en una cierta cantidad de soluciones amortiguadoras de pH 4.5 o pH 6.8, para ser las muestras estándar para la determinación de la concentración de la mesalamina disuelta. Las Figs. 4A y 4B son los perfiles de disolución de las pellas disueltas en soluciones amortiguadoras de pH 6.8 y pH 4.5. En la Fig. 4A, la tasa de disolución de las pellas aumentó rápidamente desde 90 minutos. Sin embargo, en la Fig. 4B, las pellas no se disolvieron en solución amortiguadora de pH 4.5 por al menos 2 horas. De acuerdo con ello, puede saberse que las pellas de esta realización pueden disolverse en solución amortiguadora de pH 6.8, es decir el ambiente entérico, pero no pueden disolverse en solución amortiguadora de pH 4.5, es decir el ambiente gástrico.

Realización 4: Eficacia de curación de pellas 100a para colitis inducida por DNBS, en el modelo de cerdo Procedimiento:

(I) Se seleccionaron puercos de la cepa de cerdos LY (el lado paterno era Landrace; el lado materno era Yorkshire). la edad durante la prueba era 9 semanas ± 1 semana. Los 9 puercos fueron divididos en tres grupos: A, B y C. (II) Reactivos:

(a) 40 mg/ml de Stresnil (de China Chemical & Pharmaceutical Co., Ltd., Taiwan) para la sedación de los puercos. (b) 50 mg/ml de Zoletil-50 (de Virbac Laboratories, Francia) para la anestesia de los puercos.

(c) 1 mg/ml de Atropina (de Tai Yu Chemical & Pharmaceutical Co., Ltd, Taiwan) para inhibición de la secreción de saliva en combinación con Zoletil-50.

(d) 150 mg/ml de ácido 2,4-dinitrobenceno sulfónico (DNBS) disuelta en etanol al 50% (de Sigma-Aldrich Co., EEUU). (III) Fármaco en prueba:

Grupo A: Las pellas 100a con recubrimiento entérico dentro de una cápsula con la dosificación activa de 200 mg 5-ASA/cápsula.

Grupo B: almidón con una cápsula como control.

Grupo C: fármaco de referencia, nombre comercial Pentasa, con 500 mg de 5-ASA/cápsula.

(IV) Todos los puercos ayunaron por 2 días. El día 1, se anestesiaron los puercos para inspeccionar la situación del intestino grande mediante endoscopia intestinal gástrica.

(V) Se administraron 40 ml de DNBS (150 mg/ml) vía recto y se retuvieron en el colon por 1 hora para inducir colitis; después de lo cual se retiró el DNBS, luego se lavó el recto con 100 ml de agua destilada.

(VI) En los días 7, 14, 35 y 49, se observaron y registraron las situaciones inducidas del intestino en los sitios de 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5 cm desde el ano.

(VII) El día 8, se administraron los fármacos en prueba dos veces por día por 28 días de acuerdo con el grupo. El tiempo de administración diaria de fármacos fue 9:00-11:00 y 16:30-18:30.

(VIII) Se recolectaron muestras de sangre mediante tubo anticoagulante de heparina litio, el día 0 (antes de la inducción), día 7 (después de la inducción), día 8 (el día inicial de la administración del fármaco en prueba) y los días 12, 14 y 35. los tubos fueron sometidos a centrifugación a 3000 rpm y luego analizados.

(IX) El día 35, se tomaron el tejido inflamado y tejido normal, mediante biopsia por endoscopia (aproximadamente 5 10 cm desde el ano).

Resultados:

El resultado de la tasa de recuperación de diferentes grupos por el período de tiempo, fue mostrado en la tabla 3. De la tabla 3, puede verse que el grupo A (HA más 400 mg 5-ASA/día) tiene mejor tasa de recuperación que el grupo B (placebo) y grupo C (1000 mg 5-ASA/día). El resultado prueba que el efecto de HA más fármaco puede reducir la dosificación o cantidad del fármaco usado, lo cual es consistente con el resultado de la realización 2 arriba, y así la formulación de la pella 100a tiene incluso mejor efecto de terapia que el fármaco individual con la dosificación regular.

Tabla 3: Tasa de recuperación de diferentes rupos, por el período de tiempo

La concentración de 5-ASA (es decir mesalamina) y N-acetil-5-ASA (un metabolito de 5-ASA) en el plasma de diferentes grupos es mostrada en la tabla 4. Cuanto menor es la concentración de 5-ASA en el plasma, tanto menor es el efecto lateral. En la tabla 4, el promedio de concentración de 5-ASA en el plasma del grupo A es menor que el del grupo C, lo cual indica que la forma de dosificación de HA más fármaco elimina el riesgo de seguridad.

Tabla 4

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una formulación farmacéutica que contiene por lo menos una pella, en la que la pella comprende:

un núcleo que comprende un material inerte farmacéuticamente aceptable;

una capa de fármaco que rodea el núcleo, en la que la capa de fármaco comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un fármaco para el tratamiento de una enfermedad entérica;

una capa de glicosaminoglicano que rodea directamente la capa de fármaco, en la que la capa de glicosaminoglicano comprende un glicosaminoglicano;

una capa aislante que rodea la capa de glicosaminoglicano, en la que la capa aislante comprende un polímero hidrófobo, que se disuelve a un valor de pH de por lo menos 5.5; y

una capa de recubrimiento entérico que rodea la capa aislante, en la que la capa de recubrimiento entérico comprende un polímero entérico, que se disuelve a un valor de pH de por lo menos 6.8.

2. La formulación farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la relación en peso del núcleo, la capa de fármaco, la capa de glicosaminoglicano, la capa aislante, y el recubrimiento entérico es 100:137-141:25-29: 9-13:60-64.

3. La formulación farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el material inerte farmacéuticamente aceptable es celulosa, almidón, azúcar u óxido de silicio.

4. La formulación farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la capa de fármaco comprende además un aglutinante.

5. La formulación farmacéutica de la reivindicación 4, en la que el aglutinante es hidroxipropilmetil celulosa, hidroxipropil celulosa, o polivinilpirrolidona.

6. La formulación farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el fármaco es seleccionado del grupo que consiste en mesalamina, laxantes, antidiarreicos, glucocorticoides, antimicrobianos, inmunosupresores, quimioterapéuticos, fármacos contra el cáncer, péptidos, proteínas, fármacos cardiovasculares, fármacos psicotrópicos, bloqueadores de H2, agentes antiasmáticos, antihistaminas, esteroides, fármacos antiinflamatorios no esteroides (NSAID), antibióticos, antiinflamatorios, y cualesquier derivados de ellos.

7. La formulación farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el glicosaminoglicano es ácido hialurónico o una sal del mismo, condroitina sulfatos, heparina sulfato, heparina, queratan sulfato, o dermatan sulfato.

8. La formulación farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el polímero hidrófobo es poli (ácido metacrílico-co-etil acrilato) 1:1, poli (ácido metacílico-co-metil metacrilato) 1:1, poli (metil acrilato-co-metil metacrilato-co-ácido metacrílico) 7:3:1, celulosa acetato ftalato, celulosa acetato succinato, metilcelulosa ftalato, metilhidroxipropil-celulosa ftalato, etilhidroxicelulosa ftalato, polivinilacetato ftalato, polivinilbutirato acetato, copolímero de vinil acetato-anhídrido maleico, copolímero de estireno-monoéster maleico, copolímero de metil acrilato-ácido metacrílico, o copolímero de metacrilato- ácido metacrílico-octil acrilato.

9. La formulación farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el polímero entérico es seleccionado del grupo que consiste en poli (ácido metacrílico-co-etil acrilato) 1:1, poli (metil acrilato-co-metil metacrilato-co-ácido metacrílico) 7:3:1, celulosa acetato ftalato, celulosa acetato succinato, metilcelulosa ftalato, metilhidroxipropil-celulosa ftalato, etilhidroxicelulosa ftalato, polivinilacetato ftalato, polivinilbutirato acetato, copolímero de vinil acetato-anhídrido maleico, copolímero de estireno- monoéster maleico, copolímero de metil acrilato-ácido metacrílico, y copolímero de metacrilato- ácido metacrílico-octil acrilato.

10. La formulación farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la pella está en una cápsula o un comprimido.