ES2750655T3 - Derivados de pirrolo[2,3-d]pirimidina útiles para inhibir la Janus cinasa - Google Patents

Derivados de pirrolo[2,3-d]pirimidina útiles para inhibir la Janus cinasa Download PDF

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James M Duerr
Neelu Kaila
Mihir D Parikh
Matthew R Reese
Tarek Samad
Simone Sciabola
Jamison B Tuttle
Michael L Vazquez
Patrick Robert Verhoest
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Abstract

Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado entre el grupo que consiste en: N-[cis-3-({[3-(difluorometil)azetidin-1-il]sulfonil}metil)ciclobutil]-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-[cis-3-({[3-(2,2-difluoroetil)-azetidin-1-il]sulfonil}metil)-ciclobutil]-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-((1S,3S)-3-(((3-(difluorometoxi)azetidin-1-il)sulfonil)metil)ciclobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-metil-N-((1S,3S)-3-(((3-(trifluorometil)azetidin-1-il)sulfonil)metil)ciclobutil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-((1S,3S)-3-(((3,3-difluoroazetidin-1-il)sulfonil)metil)ciclobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina; y, N-metil-N-((1S,3S)-3-(((3,3,3-trifluoropropil)sulfonil)metil)ciclobutil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina.

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de pirrolo[2,3-d]pirimidina útiles para inhibir la Janus cinasa
Campo de la invención
La presente invención proporciona compuestos de pirrolo[2,3-d]pirimidina y análogos farmacéuticamente activos. Dichos compuestos son útiles para inhibir la Janus cinasa (JAK). En el presente documento se desvelan composiciones que comprenden tales compuestos, procedimientos para preparar tales compuestos, y procedimientos para tratar y prevenir afecciones mediadas por JAK.
Antecedentes de la invención
Las proteínas cinasas son familias de enzimas que catalizan la fosforilación de restos específicos en las proteínas, clasificadas ampliamente entre las tirosina y las serina/treonina cinasas. Una actividad de cinasa inadecuada, que surja a causa de una mutación, sobreexpresión o regulación inadecuada, disregulación o desregulación, así como de la sobre o subproducción de factores de crecimiento o citocinas, se ha vinculado con muchas enfermedades, incluyendo, pero sin limitación, cáncer, enfermedades cardiovasculares, alergias, asma y otras enfermedades respiratorias, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades inflamatorias, enfermedades óseas, trastornos metabólicos y trastornos neurológicos y neurodegenerativos, tales como la enfermedad de Alzheimer. Una actividad de cinasa inadecuada desencadena una diversidad de respuestas biológicas celulares relacionadas con el crecimiento celular, la diferenciación celular, la supervivencia, la apoptosis, la mitogénesis, el control del ciclo celular y la movilidad celular implicada en las enfermedades anteriormente mencionadas y otras relacionadas.
Por lo tanto, las proteínas cinasas han surgido como una clase importante de enzimas como dianas para intervención terapéutica. En particular, la familia JAK de proteínas tirosina cinasas (JAK1, JAK2, JAK3 y Tyk2) desempeñan un papel crucial en la señalización de las citocinas (Kisseleva y col., Gene, 2002, 285, 1; Yamaoka y col. Genome Biology 2004, 5, 253)). Tras unirse a sus receptores, las citocinas activan JAK, que posteriormente fosforilan el receptor de citocinas, creando de este modo sitios de acoplamiento para moléculas de señalización, de manera destacable, miembros de la familia de transductores de señales y activadores de la transcripción (STAT) que en última instancia dan lugar a la expresión génica. Se sabe que numerosas citocinas activan la familia de JAK. Estas citocinas incluyen la familia de IFN (IFN-alfa, IFN-beta, IFN-omega, Limitina, IFN-gamma, IL-10, IL-19, IL-20, IL-22), la familia de gp130 (IL-6, IL-11, OSM, LIF, CNTF, NNT-1/BSF-3, G-CSF, CT-1, Leptina, IL-12, IL-23), familia C gamma (IL-2, IL-7, TSLP, IL-9, IL-15, IL-21, IL-4, IL-13), familia de IL-3 (IL-3, IL-5, GM-CSF), familia monocatenaria (EPO, GH, PRL, TPO), tirosina cinasas receptoras (EGF, PDGF, CSF-1, HGF) y receptores acoplados a proteína G (AT1).
Sigue existiendo la necesidad de nuevos compuestos que inhiban, de manera eficaz y selectiva, enzimas JAK específicas y, en particular, JAK1, frente a JAK2. JAK1 es un miembro de la familia de proteínas cinasas Janus, que está formada por JAK1, JAK2, JAK3 y TYK2. JAK1 se expresa a distintos niveles en todos los tejidos. Muchos receptores de citocinas señalizan a través de pares de JAK cinasas en las siguientes combinaciones: JAK1/JAK2, JAK1/JAK3, JAK1/TYK2, JAK2/TYK2 o JAK2/JAK2. JAK1 es la cinasa JAK más frecuentemente emparejada en este contexto y es necesaria para la señalización a través de receptores de citocinas y comunes ( I L - 2 R y ), la familia de receptores de IL-6, familias de receptores de Tipo I, II y III y la familia de receptores de IL-10. Los estudios en animales han demostrado que JAK1 es necesaria para el desarrollo, la función y la homeostasia del sistema inmunitario. La modulación de la actividad inmunitaria mediante la inhibición de la actividad de cinasa JAK1 puede resultar útil para el tratamiento de diversos trastornos inmunitarios (Murray, P.J. J. Immunol., 178, 2623-2629 (2007); Kisseleva, T., y col., Gene, 285, 1-24 (2002); O'Shea, J. J., y col., Cell, 109, (supl.) S121-S131 (2002)) a la vez que se evita la señalización de eritropoyetina ( E p O ) y trombopoyetina (TPO) dependiente de JAK2 (Neubauer H., y col., Cell, 93(3), 397-409 (1998); Parganas E., y col., Cell, 93(3), 385-95 (1998)).
Los compuestos de pirrolo[2,3-d]pirimidina inhibidores de la Janus cinasa se desvelan en el documento WO 99/65908 y en J. Med. Chem. 2010, 53, 8468-8484.
COMPUESTOS DESVELADOS
Se desvela un compuesto de fórmula I que tiene la estructura:
Figure imgf000003_0001
a sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que
R se selecciona entre hidrógeno, deuterio, alquilo C1-C6 lineal o ramificado, perfluoroalquilo C1 -C6 lineal o ramificado, arilo y alquilarilo;
X se selecciona entre --NH-- y --CRaRb--, en el que (a) Ra y Rb son independientemente hidrógeno, deuterio, alquilo C1 -C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, arilo, (aril)alquilo C1-C6 lineal o ramificado, heteroarilo, (alquil C1 -C6 lineal o ramificado)heteroarilo, (heteroaril)alquilo C1-C6 lineal o ramificado, (heterocíclico)alquilo C1-C6 lineal o ramificado, en el que dicho alquilo, arilo, heteroarilo y cicloalquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más Rc , o (b) Ra y Rb forman juntos una cadena que comprende --(CRcRd)y-, en el que Rc y Rd son independientemente hidrógeno, deuterio, alquilo C1 -C6 lineal o ramificado, arilo, (alquil C1-C6 lineal o ramificado)arilo, heteroarilo, (alquil C1 -C6 lineal o ramificado)heteroarilo, halo, CN, CF3 , hidroxilo, alcoxi, --CONH2 , --NHCO(alquilo C1-C6), --CONH(alquilo C1 -C6), alcoxicarbonilo C1-C6, o SO2CH3; Y es -A-R1 , en el que A es un enlace, --NH--, - (CH2)k-- o -(C D 2)k-- y R1 es alquilo C1-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, arilo, o --NRaRb, o es una estructura de anillo monocíclico o bicíclico, insaturado, saturado o parcialmente saturado que contiene un total de cuatro a once átomos que tiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en oxígeno, nitrógeno y azufre, en el que dicho alquilo, cicloalquilo, arilo o estructura de anillo monocíclico o bicíclico está además opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en deuterio, halo, alquilo C1-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo -C3-C6, alcoxi C1 -C6 lineal o ramificado-(cicloalquilo C3-C6), alcoxi C1 -C6 lineal o ramificado-(alquil C1-C6 lineal o ramificado)--, CN, hidroxilo, CF3, —ORe , — CO(alquilo C1 -C6 lineal o ramificado), --CO(cicloalquilo C3-C6), — NReRf, una estructura de anillo monocíclico o bicíclico, insaturado, saturado o parcialmente saturado que contiene un total de cuatro a once átomos como se ha definido anteriormente, y — S(O)2 Re y en el que dicho alquilo, alcoxi, y cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, halo, CN, hidroxilo, --ORe, CONH2 , y SO2CH3 , en el que (a) Ra y Rb son independientemente hidrógeno, deuterio, alquilo C1-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6 , alcoxi C1-C6 lineal o ramificado-(cicloalquilo C3-C6), alcoxi C1 -C6 lineal o ramificado-a lquil C1-C6 lineal o ramificado)--, arilo, (aril)alquilo C1 -C6 lineal o ramificado, heteroarilo, heterocíclico, (alquil C1-C6 lineal o ramificado)heteroarilo, (heteroaril)alquilo C1-C6 lineal o ramificado, (heterocíclico)alquilo C1 -C6 lineal o ramificado en el que dicho alquilo, arilo, heteroarilo y cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más Rc;
(b) Ra y Rb forman juntos una cadena que comprende --(CRcRd)y-, en el que Rc y Rd son independientemente hidrógeno, deuterio, alquilo C1 -C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, alcoxi C1-C6 lineal o ramificado-(cicloalquilo C3-C6), alcoxi C1-C6 lineal o ramificado-(alquil C1 -C6 lineal o ramificado)--, arilo, (alquil C1-C6 lineal o ramificado)arilo, heteroarilo, (alquil C1 -C6 lineal o ramificado)heteroarilo, halo, CN, hidroxilo, CF3 , --NHCO(alquilo), --CONH(alquilo), alcoxicarbonilo, CONH2 , --ORe , --NRe Rf, o --S(O)2 Re en el que cualquier resto alquilo, cicloalquilo o alcoxi puede estar opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
(c) Ra y Rb forman juntos una cadena que comprende de cuatro a seis átomos que tiene de uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre en el que cualquier átomo de carbono puede estar opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre el grupo que consiste en alquilo C1 -C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, alcoxi C1 -C6 lineal o ramificado-(cicloalquilo C3-C6), alcoxi C1 -C6 lineal o ramificado-(alquil C1-C6 lineal o ramificado)--, arilo, (alquil C1-C6 lineal o ramificado)arilo, heteroarilo, (alquil C1 -C6 lineal o ramificado)heteroarilo, heterocíclico, halo, CN, hidroxilo, CF3,-NHCO(alquilo C1 -C6 lineal o ramificado), --CONH(alquilo C1 -C6 lineal o ramificado), alcoxicarbonilo C1-C6 lineal o ramificado, CONH2 , --ORe, --NReRf, o --S(O)2 Re , en el que cualquiera de dichos restos alquilo, alcoxi, o cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno y cualquier átomo de nitrógeno, si es químicamente permisible, puede estar opcionalmente sustituido con alquilo C1 -C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, alcoxi C1 -C6 lineal o ramificado-(cicloalquilo C3-C6), alcoxi C1-C6 lineal o ramificado-(alquil C1 -C6 lineal o ramificado)--, arilo, (alquil C1 -C6 lineal o ramificado)arilo,-C(O)alquilo C1-C6 lineal o ramificado, --CONH(alquilo C1-C6 lineal o ramificado), alcoxicarbonilo C1-C6, CONH2 , o --S(O)2 Re en el que cualquiera de dichos restos alquilo o cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; o,
(d) Ra y Rb forman juntos un anillo de bicicloalquilo de 5 a 10 miembros en el que cualquier átomo de dicho anillo puede estar opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre el grupo que consiste en alquilo Ci-Ca lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, alcoxi C1-C6 lineal o ramificado-(cidoalquilo C3-C6), alcoxi C1-C6 lineal o ramificado-(alquil C1-C6 lineal o ramificado)--, arilo, (alquil C1-C6 lineal o ramificado)arilo, heteroarilo, (alquil C1-C6 lineal o ramificado)heteroarilo, heterocíclico, halo, CN, hidroxilo, CF3, --NHCO(alquilo C1-C6 lineal o ramificado), --CONH(alquilo C1-C6 lineal o ramificado), alcoxicarbonilo C1-C6 lineal o ramificado, CONH2, —ORe, --NReRf, o --S(O)2Re, en el que cualquiera de dichos restos alquilo, alcoxi o cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
en el que Re y Rf son independientemente hidrógeno, deuterio, alquilo C1-C6 lineal o ramificado, alcoxi C1-C6, o cicloalquilo C3-C6, en los que dicho alquilo y cicloalquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en halo, CN, hidroxilo, haloalquilo C1-C6 lineal o ramificado, y CONH2; y,
j es 2, 3, 4 o 5; y, k es 0, 1, 2; 3 o 4.
También se desvelan:
composiciones farmacéuticas que comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de fórmula I; procedimientos para tratar afecciones o trastornos que incluyen miositis, vasculitis, pénfigo, enfermedad de Crohn, lupus, nefritis, psoriasis, esclerosis múltiple, trastorno depresivo mayor, alergia, asma, enfermedad de Sjogren, síndrome del ojo seco, rechazo de trasplantes, cáncer, enfermedad intestinal inflamatoria, choque séptico, disfunción cardiopulmonar, enfermedad respiratoria aguda o caquexia, mediante la administración a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
procedimientos para tratar afecciones o trastornos incluyendo dermatitis atópica, eccema, psoriasis, esclerodermia, lupus, prurito, otras afecciones pruríticas, reacciones alérgicas, incluyendo dermatitis alérgica en mamíferos, enfermedades alérgicas en caballos, incluyendo hipersensibilidad a las picaduras, eccema estival, dermatitis estival equina, arcadas, enfermedad inflamatoria de las vías respiratorias, obstrucción recurrente de las vías respiratorias, hipersensibilidad de las vías respiratorias y enfermedad pulmonar obstructiva crónica, mediante la administración a un mamífero que lo necesite de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y,
procedimientos para la preparación de compuestos de fórmula I.
Una revisión de la bibliografía química y médica descubre numerosos inhibidores de JAK. Aunque estos compuestos han mostrado actividad en numerosas afecciones inflamatorias, la bibliografía no muestra la misma actividad en enfermedades del sistema nervioso central. Esta falta de actividad está directamente relacionada con la dificultad de hacer que los inhibidores de JAK atraviesen la barrera hematoencefálica. Los compuestos seleccionados de fórmula I atraviesan la barrera hematoencefálica y por lo tanto pueden usarse en el tratamiento de varias enfermedades y afecciones neurológicas tales como epilepsia, demencia, etc.
La presente invención se entenderá adicionalmente a partir de la siguiente descripción. La presente invención se refiere a una clase de derivados de pirrolo[2,3-d]pirimidina. En particular, la presente invención se refiere a compuestos de pirrolo[2,3-d]pirimidina útiles como inhibidores de JAK y en particular de JAK1.
El término "alquilo", solo o en combinación, significa un grupo hidrocarburo saturado acíclico de la fórmula CnH2n+1 que puede ser lineal o ramificado. Los ejemplos de tales grupos incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, ferc-butilo, pentilo, iso-amilo y hexilo. A menos que se especifique otra cosa, un grupo alquilo comprende de 1 a 6 átomos de carbono. El contenido de átomos de carbono de alquilo y otros restos que contienen hidrocarburos se indica mediante un sufijo que designa un número inferior y superior de átomos de carbono en el resto, es decir, el sufijo Ci-Cj indica un resto del número entero "i" al número entero "j" de átomos de carbono, inclusive. Por lo tanto, por ejemplo, alquilo C1-C6 se refiere a alquilo de uno a seis átomos de carbono, inclusive. El término "haloalquilo" se refiere a un resto alquilo como se ha descrito anteriormente en el que uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos por un átomo de halógeno (tal como se define posteriormente).
El término "alcoxi (C1-C6)", como se usa en el presente documento, significa un grupo alquilo (C1-C6), como se ha definido anteriormente, unidos al resto molecular precursor a través de un átomo de oxígeno. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propoxi, 2-propoxi, butoxi, ferc-butoxi, pentiloxi y hexiloxi. El término "haloalcoxi" se refiere a un resto alcoxi como se ha descrito en lo inmediatamente anterior, en el que uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos por un átomo de halógeno.
El término "hidroxi", como se usa en el presente documento, significa un radical OH. El término "heterocíclico" se refiere a un heterociclo saturado o parcialmente saturado (es decir, no aromático) que contiene de cinco a diez átomos en el anillo en el que uno o más, preferentemente, uno, dos o tres átomos en el anillo, son heteroátomos seleccionados entre N, O y S, siendo el resto carbono, y que puede estar unido mediante un átomo de nitrógeno del anillo o un átomo de carbono del anillo. De igual manera, cuando se sustituye, el sustituyente puede estar localizado en un átomo de nitrógeno del anillo (si el sustituyente está unido a través de un átomo de carbono) o un átomo de carbono del anillo (en todos los casos). Los ejemplos específicos incluyen oxiranilo, aziridinilo, oxetanilo, azetidinilo, tetrahidrofuranoílo, pirrolidinilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo, 1,4-dioxanilo, morfolinilo, piperazinilo, azepanilo, oxepanilo, oxazepanilo y diazepinilo.
El término "arilo" se refiere a un hidrocarburo aromático monocíclico o bicíclico que contiene de seis a diez átomos de carbono en el anillo, que puede estar unido mediante uno de los átomos de carbono en el anillo. De igual manera, cuando se sustituye, el sustituyente puede estar localizado en un átomo de carbono del anillo. De igual manera, cuando se sustituye, el sustituyente puede estar localizado en un átomo de carbono del anillo. Los ejemplos específicos incluyen fenilo, toluilo, xililo, trimetilfenilo y naftilo. Los ejemplos de sustituyentes arilo incluyen alquilo, hidroxilo, halo, nitrilo, alcoxi, trifluorometilo, carboxamido, SO2Me, bencilo y bencilo sustituido.
El término "heteroarilo" se refiere a un heterociclo monovalente, aromático, monocíclico o bicíclico de cinco a diez átomos en el anillo, en el que uno o más, preferentemente, uno, dos o tres átomos en el anillo, son heteroátomo(s) seleccionados entre N, O y S, siendo el resto carbono, y que puede estar unido mediante un átomo de carbono del anillo o un átomo de nitrógeno del anillo con una valencia adecuada. De igual manera, cuando se sustituye, el sustituyente puede estar localizado en un átomo de carbono del anillo (en todos los casos) o un átomo de nitrógeno del anillo con una valencia apropiada (si el sustituyente está unido a través de un átomo de carbono). Los ejemplos específicos incluyen tienilo, furanilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, tetrazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo y pirazinilo. El término "cicloalquilo" significa un grupo hidrocarburo saturado monocíclico de fórmula CnH2n-1. Los ejemplos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. A menos que se especifique otra cosa, un grupo cicloalquilo comprende de 3 a 8 átomos de carbono.
Los términos "halo" y "halógeno" se refieren a flúor (F), cloro (CI), bromo (Br) o yodo (I).
El término "mamífero" se refiere un ser humano, ganado o animales de compañía.
La expresión "animal de compañía" o "animales de compañía" se refiere a animales mantenidos como mascotas o animales domésticos. Los ejemplos de animales de compañía incluyen perros, gatos y roedores, que incluyen hámsteres, cobayas, jerbos y similares, conejos, hurones y pájaros.
El término "ganado" se refiere a los animales criados en un entorno agrícola para fabricar productos como alimentos o fibra, o para su trabajo. Cierto ganado es apto para su consumo por mamíferos, por ejemplo seres humanos. Los ejemplos de animales de ganado incluyen vacas, cabras, caballos, cerdos, ovejas, incluyendo corderos, y conejos, así como aves, tales como gallinas, patos y pavos.
El término "tratar" o "tratamiento" significa un alivio de los síntomas asociados con una enfermedad, trastorno o afección, o interrupción de una mayor progresión o empeoramiento de esos síntomas. Dependiendo de la enfermedad y condición del paciente, el término "tratamiento" como se usa en el presente documento pueden incluir uno o más tratamientos curativos, paliativos y profilácticos. El tratamiento también puede incluir administrar una formulación farmacéutica de la presente invención en combinación con otras terapias.
La expresión "terapéuticamente eficaz" indica la capacidad de un agente para prevenir, o mejorar la gravedad de, el trastorno, mientras se evitan los efectos secundarios adversos habitualmente asociados con terapias alternativas. La expresión "terapéuticamente eficaz" debe entenderse como equivalente a la expresión "eficaz para el tratamiento, prevención o mejoría ", y ambos pretenden calificar la cantidad de cada agente para su uso en la terapia combinada que logrará el objetivo de mejorar la gravedad del cáncer, enfermedad cardiovascular, o dolor e inflamación y la frecuencia de incidencia sobre el tratamiento de cada agente por sí mismo, mientras se evitan los efectos secundarios adversos habitualmente asociados con terapias alternativas.
"Farmacéuticamente aceptable" significa adecuado para su uso en mamíferos, animales de compañía o animales de ganado.
El término "neurológico" se refiere al sistema nervioso central. El tratamiento de afecciones neurológicas se refiere al tratamiento de una afección, enfermedad, padecimiento, etc. que afecta al sistema nervioso central ("SNC"). Tales enfermedades pueden afectar a los tejidos en la periferia así como al sistema nervioso central.
Si se describe que los sustituyentes están "seleccionados independientemente" de un grupo, cada sustituyente se selecciona independientemente del otro. Por tanto, cada sustituyente puede ser idéntico o diferente del resto de sustituyente(s).
Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere a nuevos compuestos que son moduladores selectivos de JAK1 útiles para el tratamiento de enfermedades y estados asociados con la desregulación del JAK1. También se desvelan composiciones farmacéuticas que comprenden dichos moduladores de JAK1 así como también procedimientos para tratar y/o prevenir tales enfermedades y afecciones.
La invención proporciona un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en:
N-[cis-3-({[3-(Difluorometil)azetidin-1-il]sulfonil}metil)ciclobutil]-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-met¡l-N-[c¡s-3-({[3-(tr¡fluoromet¡l)azet¡d¡n-1-¡l]sulfon¡l}met¡l)c¡clobut¡l]-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na;
N-[c¡s-3-({[3-(d¡fluorometox¡)azet¡d¡n-1-¡l]sulfon¡l}met¡l)c¡clobut¡l]-N-met¡l-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na;
N-met¡l-N-(c¡s-3-{[(3,3,3-tr¡fluoroprop¡l)sulfon¡l]met¡l}c¡clobut¡l)-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na;
N-[c¡s-3-({[3-(2,2-d¡fluoroet¡l)azet¡d¡n-1-¡l]sulfon¡l}met¡l)c¡clobut¡l]-N-met¡l-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na; y, N-(c¡s-3-{[(3,3-d¡fluoroazet¡d¡n-1-¡l)sulfon¡l]met¡l}c¡clobut¡l)-N-met¡l-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na;
o una sal farmacéut¡camente aceptable de cualqu¡era de los compuestos enunc¡ados anter¡ormente.
Tamb¡én se desvela un proced¡m¡ento para tratar un trastorno o afecc¡ón relac¡onada con la desreguladón de JAK, en part¡cular de JAK1, en un sujeto, que comprende adm¡n¡strar al sujeto una cant¡dad terapéut¡camente ef¡caz del compuesto que t¡ene la estructura de fórmula I, o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo. Tamb¡én se desvela un trastorno o afecc¡ón tratado med¡ante el proced¡m¡ento selecc¡onado entre artr¡t¡s reumato¡de, m¡os¡t¡s, vascul¡t¡s, pénf¡go, enfermedad de Crohn, col¡t¡s ulcerosa, enfermedad del Alzhe¡mer, lupus, nefr¡t¡s, psor¡as¡s, dermat¡t¡s atóp¡ca, trastornos t¡ro¡deos auto¡nmun¡tar¡os, escleros¡s múlt¡ple, trastorno depres¡vo mayor, alerg¡a, asma, enfermedad de Sjogren, síndrome del ojo seco, rechazo al trasplante de órganos, xenotrasplantes, d¡abetes de t¡po I y compl¡cac¡ones a causa de la d¡abetes, cáncer, leucem¡a, leucem¡a de l¡nfoc¡tos T adultos s¡m¡lares a l¡nfoc¡tos B act¡vados, l¡nfoma d¡fuso de células B grandes, enfermedad ¡ntest¡nal ¡nflamator¡a, choque sépt¡co, d¡sfunc¡ón card¡opulmonar, trastorno pulmonar obstruct¡vo crón¡co, enfermedad resp¡rator¡a aguda, caquex¡a, leucem¡a m¡elo¡de aguda, leucem¡a l¡nfoblást¡ca aguda de l¡nfoc¡tos T, m¡eloma múlt¡ple, cáncer de páncreas, tumores cerebrales, gl¡omas que ¡ncluyen astroc¡toma, ol¡godendrogl¡oma y gl¡oblastoma, traumat¡smo agudo del SNC ¡ncluyendo daño cerebral, encefal¡t¡s, ¡ctus y les¡ón de la médula esp¡nal, ep¡leps¡a, ataques, neuro¡nflamac¡ón crón¡ca asoc¡ada con la neurodegenerac¡ón ¡ncluyendo la enfermedad de Alzhe¡mer, enfermedad de Park¡nson, escleros¡s lateral am¡otróf¡ca, demenc¡a del lóbulo frontotemporal, y con trastornos neurops¡qu¡átr¡cos ¡ncluyendo esqu¡zofren¡a, trastorno b¡polar, depres¡ón res¡stente al tratam¡ento, trastorno de estrés postraumát¡co, ans¡edad y encefalopatías med¡adas por autoant¡cuerpos, que comprende la etapa de adm¡n¡strar a un sujeto una cant¡dad ef¡caz de una compos¡c¡ón que comprende un compuesto de fórmula I.
Los compuestos de fórmula I ¡nd¡cados anter¡ormente t¡enen la capac¡dad de cruzar la barrera hematoencefál¡ca, y por lo tanto, serán út¡les en el tratam¡ento de una ser¡e de afecc¡ones neurológ¡cas. Estas ¡ncluyen, pero s¡n l¡m¡tac¡ón: ¡nflamac¡ón cerebral vascular o ¡nfecc¡osa tal como malar¡a cerebral, absceso cerebral, vascul¡t¡s cerebral, arter¡t¡s de células g¡gantes / arter¡t¡s temporal, y aracno¡d¡t¡s, men¡ng¡t¡s; enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de P¡ck, ep¡leps¡a, ¡ctus; enfermedades de la barrera hematoocular tales como uveít¡s, uveít¡s recurrente, y degenerac¡ón macular relac¡onada con la edad; afecc¡ones de encefal¡t¡s ¡nmun¡tar¡as, ¡nfecc¡osas (o ¡nduc¡das por vacuna), o paraneoplás¡cas ¡ncluyendo encefalom¡el¡t¡s ¡nmun¡tar¡a, síndromes paraneoplás¡cos con man¡festac¡ones neurológ¡cas (por ejemplo, encefalom¡el¡t¡s, encefal¡t¡s límb¡ca, encefal¡t¡s del tronco encefál¡co), encefal¡t¡s de Rasmussen, m¡elopatía asoc¡ada con HTLV-1, m¡el¡t¡s transversa, pol¡neuropatía desm¡el¡n¡zante ¡d¡opát¡ca crón¡ca (PDIC) (tamb¡én conoc¡da como síndrome de Gu¡lla¡n-Barre) encefalom¡el¡t¡s aguda d¡sem¡nada (EAD); y, demenc¡a asoc¡ada con VIH/SIDA (propagac¡ón v¡ral y supres¡ón de ¡nflamac¡ón) ¡ncluyendo demenc¡a asoc¡ada con VIH, trastorno neurocogn¡t¡vo asoc¡ado a VIH (TNAV) supres¡ón por VIH, ¡ndepend¡ente o junto con tratam¡ento como HAART.
Tamb¡én se desvela un proced¡m¡ento para tratar o preven¡r un trastorno o afecc¡ón selecc¡onado entre dermat¡t¡s atóp¡ca, eccema, escleroderm¡a, prur¡to, otras afecc¡ones prurít¡cas, reacc¡ones alérg¡cas, ¡ncluyendo dermat¡t¡s alérg¡ca en mamíferos, enfermedades alérg¡cas en caballos, ¡ncluyendo h¡persens¡b¡l¡dad a las p¡caduras, eccema est¡val, dermat¡t¡s est¡val equ¡na, arcadas, enfermedad ¡nflamator¡a de las vías resp¡rator¡as, obstrucc¡ón recurrente de las vías resp¡rator¡as e h¡persens¡b¡l¡dad de las vías resp¡rator¡as, adm¡n¡strando a un mamífero que lo neces¡ta una cant¡dad terapéut¡camente ef¡caz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo.
Tamb¡én se desvelan compuestos englobados por la fórmula IE, mostrada poster¡ormente:
Figure imgf000006_0001
o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, en la que Ri se representa med¡ante alqu¡lo l¡neal o ram¡f¡cado CiCe , cicloalquilo C3-C6 o --NRa Rb, en el que los restos alquilo o cicloalquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más restos halo, haloalquilo, o haloalcoxi;
Ra y Rb forman juntos una cadena que comprende --(CRcRd)j-, en la que Rc y Rd se representan independientemente mediante hidrógeno, deuterio, alquilo C1-C6 lineal o ramificado, alcoxi Ci -Ca ,-(alquilo lineal o ramificado Ci -Ca)-O-(alquilo lineal o ramificado Ci -Ca )-, -(alcoxi lineal o ramificado C1 -C6)-O-(alquilo lineal o ramificado Ci -Ca )-, cicloalquilo C3-C6, halo, CN, hidroxilo, en el que cualquier resto alquilo, cicloalquilo o alcoxi puede estar opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; k se representa mediante el número entero 0 o 1; y, j se representa mediante el número entero 3, 4 o 5. Los átomos de halógeno descritos en la fórmula IE pueden ser uno o más átomos de flúor.
Se ha descubierto que los compuestos de fórmula IE tienen la capacidad de cruzar la barrera hematoencefálica y, por lo tanto, se pueden usar en el tratamiento de una serie de afecciones neurológicas. Tales afecciones incluyen apoplejía, epilepsia, enfermedad de Parkinson, enfermedad del Alzheimer, demencia del lóbulo frontotemporal (DFT), esclerosis múltiple y enfermedad de Pick.
La invención se refiere a un sub-género de compuestos englobados por la fórmula IE, o sus sales farmacéuticamente aceptables, seleccionado entre el grupo que consiste en:
N-[cis-3-({[3-(difluorometil)azetidin-1-il]sulfonil}metil)ciclobutil]-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina;
N-[cis-3-({[3-(2,2-difluoroetil)-azetidin-1-il]sulfonil}metil)-ciclobutil]-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-((1S,3S)-3-(((3-(difluorometoxi)azetidin-1-il)sulfonil)metil)ciclobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-metil-N-((lS,3S)-3-(((3-(trifluorometil)azetidin-1-il)sulfonil)metil)ciclobutil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-((1S,3S)-3-(((3,3-difluoroazetidin-1-il)sulfonil)metil)ciclobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina; y, N-metil-N-((lS,3S)-3-(((3,3,3-trifluoropropil)sulfonil)metil)ciclobutil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina.
También se desvela un procedimiento para tratar una afección neurológica que comprende administrar una cantidad eficaz de cualquiera de estos compuestos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, a un paciente que lo necesita. Dicha afección neurológica se puede seleccionar entre el grupo que consiste en apoplejía, epilepsia, enfermedad de Parkinson, enfermedad del Alzheimer, demencia del lóbulo frontotemporal, esclerosis múltiple y enfermedad de Pick.
Los compuestos que tienen la misma fórmula molecular pero difieren en la naturaleza o secuencia de unión de sus átomos o la disposición de sus átomos en el espacio se denominan "isómeros". Los isómeros que difieren en la disposición de sus átomos en el espacio se denominan "estereoisómeros". Los expertos en la materia apreciarán que el compuesto de fórmula I puede existir en forma de diastereómeros cis y trans aquirales.
También se desvelan todos los isómeros (por ejemplo, cis, trans o diastereómeros) de los compuestos descritos en el presente documento solos, así como en forma de cualquiera de sus mezclas. Todas estas formas, incluyendo enantiómeros, diastereómeros, cis, trans, syn, anti, solvatos (incluyendo hidratos), tautómeros y mezclas de los mismos, se incluyen en los compuestos descritos. Las mezclas estereoisoméricas, por ejemplo, mezclas de diastereómeros, pueden separarse en sus isómeros correspondientes de una manera conocida por medio de procedimientos de separación adecuados. Las mezclas diastereoméricas, por ejemplo, pueden separarse en sus diastereómeros individuales por medio de cristalización fraccionada, cromatografía, distribución de disolvente y procedimientos similares. Esta separación puede tener lugar al nivel de uno de los compuestos de partida o en un compuesto de fórmula I o IE en sí mismo. Los enantiómeros pueden separarse a través de la formación de sales diastereoméricas, por ejemplo, mediante la formación de sal con un ácido quiral enantiomérico puro, o mediante cromatografía, por ejemplo por HPLC, usando sustratos cromatográficos con ligandos quirales.
En el uso terapéutico para el tratamiento de trastornos en un mamífero, un compuesto de la presente invención o sus composiciones farmacéuticas puede administrarse por vía oral, parenteral, tópica, rectal, transmucosa o intestinal. Las administraciones parenterales incluyen inyecciones indirectas para generar un efecto sistémico o inyecciones directas a la zona afectada. Las administraciones tópicas incluyen el tratamiento de la piel u órganos fácilmente accesibles mediante aplicación local, por ejemplo, los ojos u oídos. También incluye el suministro transdérmico para generar un efecto sistémico. La administración rectal incluye la forma de supositorios. Las vías de administración preferidas son oral y parenteral.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I incluyen las sales de adición de ácidos y bases de los mismos. Las sales de adición de ácidos adecuadas se forman a partir de ácidos que forman sales no tóxicas. Los ejemplos incluyen las sales de acetato, adipato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, ciclamato, edisilato, esilato, formiato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, clorhidrato/cloruro, bromhidrato/bromuro, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrogenofosfato/dihidrogenofosfato, piroglutamato, sacarato, estearato, succinato, tanato, tartrato, tosilato, trifluoroacetato y xinofoato.
Las sales de bases adecuadas se forman a partir de bases que forman sales no tóxicas. Los ejemplos incluyen las sales de aluminio, arginina, benzatina, calcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnesio, meglumina, olamina, potasio, sodio, trometamina y cinc.
También se pueden formar hemisales de ácidos y bases, por ejemplo, sales de hemisulfato y hemicalcio. Para una revisión de las sales adecuadas, véase Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, de Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, 2002).
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I, pueden prepararse, respectivamente, mediante uno o más de tres procedimientos: (i) haciendo reaccionar el compuesto de fórmula I o IE con el ácido o base deseado; (ii) retirando un grupo protector lábil a ácido o base de un precursor adecuado del compuesto de fórmula I o mediante la apertura de anillo de un precursor cíclico adecuado, por ejemplo, una lactona o lactama, usando el ácido o la base adecuados; o (iii) convirtiendo una sal del compuesto de fórmula I en otra por reacción con un ácido o base adecuado o por medio de una columna de intercambio iónico adecuada. Las tres reacciones habitualmente se llevan a cabo en solución. La sal resultante puede precipitarse y recogerse por filtración o puede recuperarse por evaporación del disolvente. El grado de ionización en la sal resultante puede variar desde completamente ionizada a casi no ionizada.
Las composiciones farmacéuticas de los compuestos de la presente invención pueden fabricarse mediante procedimientos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, por medio de procedimientos convencionales de mezclado, disolución, granulación, composición de grageas, levigación, emulsionantes, encapsulación, inmovilización, liofilización o secado por pulverización.
Las composiciones farmacéuticas pueden formularse de manera convencional usando uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables que comprenden excipientes y adyuvantes, que facilitan el procesado del compuesto activo en preparaciones, que pueden usarse farmacéuticamente. La formulación adecuada depende de la vía de administración elegida. Los expertos en la materia conocen generalmente excipientes y vehículos farmacéuticamente aceptables. Dichos excipientes y vehículos se describen, por ejemplo, en "Remington's Pharmaceutical Sciences" Mack Pub. Co., Nueva Jersey (1991). Las formulaciones desveladas en el presente documento se pueden diseñar para ser de acción corta, de liberación rápida, de acción prolongada y de liberación sostenida. Por lo tanto, las formulaciones farmacéuticas también pueden formularse para liberación controlada o para liberación lenta.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para su uso incluyen composiciones en las que los principios activos están contenidos en una cantidad suficiente para conseguir el fin previsto, es decir, el control o el tratamiento de trastornos o enfermedades. Más específicamente, una cantidad terapéuticamente eficaz significa una cantidad de compuesto eficaz para prevenir, aliviar o mejorar los síntomas/signos de una enfermedad o para prolongar la supervivencia del sujeto que se esté tratando.
La cantidad de componente activo, que es el compuesto de la presente invención, en la composición farmacéutica y forma de dosificación unitaria del mismo, puede variar o ajustarse de manera amplia dependiendo del modo de administración, la potencia del compuesto particular y la concentración deseada. La determinación de una cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra dentro de las competencias de los expertos en la materia. Generalmente, la cantidad de componente activo estará en el intervalo entre un 0,01 % y un 99 % en peso de la composición.
Generalmente, una cantidad de dosis terapéuticamente eficaz del componente activo se encontrará en el intervalo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal/día, preferentemente, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal/día, más preferentemente, de aproximadamente 0,3 a 3 mg/kg de peso corporal/día, aún más preferentemente, de aproximadamente 0,3 a 1,5 mg/kg de peso corporal/día. Debe entenderse que las dosis pueden variar dependiendo de los requisitos de cada sujeto y de la gravedad del trastorno o de las enfermedades que se estén tratando.
La dosis deseada puede convenientemente presentarse en una única dosis o como dosis divididas administradas en intervalos adecuados, por ejemplo, como dos, tres, cuatro o más sub-dosis por día. La sub-dosis por sí misma puede dividirse adicionalmente, por ejemplo, en una serie de administraciones individuales ampliamente espaciadas; tales como múltiples inhalaciones por un insuflador o mediante aplicación de una pluralidad de gotas en el ojo.
Asimismo, debe entenderse que la dosis inicial administrada puede aumentarse más allá del límite superior anterior para lograr rápidamente la concentración plasmática deseada. Por otro lado, la dosis inicial puede ser menor que la óptima y puede aumentarse progresivamente la dosis diaria durante el transcurso del tratamiento, dependiendo de la situación concreta. Si se desea, también puede dividirse la dosis diaria en múltiples dosis para su administración, por ejemplo, de dos a cuatro veces al día.
Los compuestos de la presente invención son compuestos de pirrolo[2,3-d]pirimidina útiles como inhibidores de Janus cinasas (JAK-i). Son útiles como agentes terapéuticos, en relación con el tratamiento o la prevención de un trastorno o afección seleccionado entre artritis reumatoide, miositis, vasculitis, pénfigo, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad del Alzheimer, lupus, nefritis, psoriasis, dermatitis atópica, trastornos tiroideos autoinmunitarios, esclerosis múltiple, trastorno depresivo mayor, alergia, asma, enfermedad de Sjogren, síndrome del ojo seco, rechazo al trasplante de órganos, xenotrasplantes, diabetes de tipo I y complicaciones a causa de la diabetes, cáncer, leucemia, leucemia linfoblástica aguda de linfocitos T, leucemia de linfocitos T adultos similares a linfocitos B activados, linfoma difuso de células B grandes, enfermedad intestinal inflamatoria, choque séptico, disfunción cardiopulmonar, trastorno pulmonar obstructivo crónico, enfermedad respiratoria aguda, caquexia y otras indicaciones, en las que sería deseable la inmunosupresión/inmunomodulación.
Hay una necesidad considerable de agentes seguros y eficaces para controlar trastornos relacionados con JAK, tales como dermatitis atópica, tanto en seres humanos como en animales. El mercado para el tratamiento de la dermatitis atópica en animales actualmente está dominado por los corticosteroides, que provocan malestar y efectos secundarios no deseados en los animales, específicamente en animales de compañía, tales como perros. También se usan antihistamínicos, pero son poco eficaces. En la actualidad, se comercializa para la dermatitis atópica una formulación canina de ciclosporina (ATOPICA™), pero es cara y tiene una lenta aparición de la eficacia. Además, existen problemas de tolerancia GI con ATOPICa ™ . Los compuestos de la presente invención son inhibidores de JAK con una eficacia selectiva contra JAK1. Se espera que estos compuestos proporcionen una alternativa al uso de esteroides y proporcionen la curación del prurito y la inflamación crónica que podría persistir en la dermatitis atópica o que podría retroceder lentamente después de la desaparición del agente alérgeno o causante, tal como pulgas en la dermatitis alérgica por pulgas.
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse en una forma farmacéuticamente aceptable ya sea solos o en combinación con uno o más agentes adicionales que modulan el sistema inmunitario de un mamífero o con agentes antiinflamatorios. Estos agentes pueden incluir, pero sin limitación, ciclosporina A (por ejemplo, Sandimmune™ o Neoral™, rapamicina, f K-506 (tacrolimus), leflunomida, desoxipergualina, micofenolato (por ejemplo, Cellcept™, azatioprina (por ejemplo, Imuran™), daclizumab (por ejemplo, Zenapax™), OKT3 (por ejemplo, Orthocolone™), AtGam, aspirina, acetaminofeno, ibuprofeno, naproxeno, piroxicam, y esteroides antiinflamatorios (por ejemplo, prednisolona o dexametasona). Estos agentes pueden administrarse como parte de la misma forma de dosificación o de formas de dosificación separadas, a través de la misma vía de administración u otras diferentes y con una pauta posológica igual o diferente, de acuerdo con la práctica farmacéutica convencional conocida por los expertos en la materia.
También se desvela en el presente documento cualquiera de los usos, procedimientos o composiciones como se han definido anteriormente en los que el compuesto de fórmula I, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o sal, se usa en combinación con otro compuesto farmacológicamente activo, particularmente una de las clases definidas funcionalmente o compuestos específicos enumerados posteriormente. Estos agentes pueden administrarse como parte de la misma forma de dosificación o de formas de dosificación separadas, a través de la misma vía de administración u otras diferentes y con una pauta posológica igual o diferente, de acuerdo con la práctica farmacéutica convencional conocida por los expertos en la materia.
Los agentes adecuados para su uso en terapia de combinación con un compuesto de fórmula I, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o sal, en particular en el tratamiento de enfermedad respiratoria, incluyen: un antagonista de proteína activadora de 5-lipooxigenasa (FLAP); un antagonista de leucotrieno (LTRA) tal como un antagonista de LTB4, LTC4, LTD4, LTE4, CysLT1 o CysLT2 , por ejemplo, montelukast o zafirlukast; un antagonista del receptor de histamina, tal como un antagonista del receptor de histamina de tipo 1 o un antagonista del receptor de histamina de tipo 2, por ejemplo, loratidina, fexofenadina, desloratidina, levocetirizina, metapirileno o cetirizina; un agonista de a1-adrenoceptor o un agonista de a2-adrenoceptor, por ejemplo, fenilefrina, metoxamina, oximetazolina o metilnorefrina; un antagonista del receptor muscarínico M3, por ejemplo, tiotropio o ipratropio; un antagonista del receptor muscarínico M3/agonista de p2 doble; un inhibidor de PDE, tal como un inhibidor de PDE3, un inhibidor de PDE4 o un inhibidor de PDE5, por ejemplo, teofilina, sildenafilo, vardenafilo, tadalafilo, ibudilast, cilomilast o roflumilast; cromoglicato sódico o nedocromilo sódico; un inhibidor de ciclooxigenasa (COX), tal como un inhibidor no selectivo (por ejemplo, aspirina o ibuprofeno) o un inhibidor selectivo (por ejemplo celecoxib o valdecoxib); un glucocorticosteroide, por ejemplo, fluticasona, mometasona, dexametasona, prednisolona, budesonida, ciclesonida o beclametasona; un anticuerpo monoclonal antiinflamatorio, por ejemplo, infliximab, adalimumab, tanezumab, ranibizumab, bevacizumab o mepolizumab; un agonista de p2, por ejemplo, salmeterol, albuterol, salbutamol, fenoterol o formoterol, particularmente un agonista de p2 de acción larga; un antagonista de integrina, por ejemplo, natalizumab; un inhibidor de molécula de adhesión, tal como un antagonista de VLA-4; un antagonista del receptor de quinina B1 o B2 ; un agente inmunosupresor, tal como un inhibidor de la ruta de IgE (por ejemplo, omalizumab) o ciclosporina; un inhibidor de la metaloproteasa de la matriz (MMP), tal como un inhibidor de MMP-9 o MMP-12; un antagonista del receptor de taquinina NK1 , NK2 o NK3; un inhibidor de proteasa, tal como un inhibidor de elastasa, quimasa o cateopsina G; un agonista del receptor de adenosina A2 a ; un antagonista del receptor de adenosina A2b; un inhibidor de uroquinasa; un agonista del receptor de dopamina (por ejemplo, ropinirol), particularmente un agonista del receptor de dopamina D2 (por ejemplo, bromocriptina); un modulador de la ruta de n FkB, tal como un inihbidor de IKK; un modulador adicional de una ruta de señalización de citocinas tal como un inhibidor de cinasa JAK, cinasa syk, cinasa p38, cinasa SPHK-1, cinasa Rho, EGF-R o MK-2; un agente mucolítico, mucocinético o antitusivo; un antibiótico; un agente antivírico; una vacuna; una quimiocina; un bloqueador del canal de sodio epitelial (ENaC) o inhibidor del canal de sodio epitelial (ENaC); un agonista del receptor de nucleótidos, tal como un agonista de P2Y2; un inhibidor de tromboxano; niacina; un inhibidor de 5-lipooxigenasa (5-LO), por ejemplo, Zileuton; un factor de adhesión, tal como VLAM, ICAM o ELAM; un antagonista del receptor de CRTH2 (DP2); un antagonista del receptor de prostaglandina D2 (DP1 ); un inhibidor de prostaglandina D2 sintasa hematopoyética (HPGDS); interferón-p; un receptor de TNF humano soluble, por ejemplo, Etanercept; un inhibidor de HDAC; un inhibidor de fosfoinositida 3-cinasa gamma (PI3Ky); un inhibidor de fosfoinositida 3-cinasa delta (PI3K8); un antagonista del receptor CXCR-1 o CXCR-2; un inhibidor de IRAK-4; y, un inhibidor de TLR4 o TLR-9, incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos nombrados específicamente y los solvatos farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos nombrados específicamente y sales.
Como se ha indicado anteriormente, los compuestos de fórmula I son útiles en el tratamiento de una serie de afecciones neurológicas. Estos se pueden usar como monoterapia para tratar estas afecciones, o se pueden combinar con otros agentes farmacéuticamente activos que se usan rutinariamente para las afecciones neurológicas. Los ejemplos de tales agentes farmacéuticos incluyen, sin limitación:
(i) inhibidores de la acetilcolinasterasa tales como clorhidrato de donepezilo (ARICEPT, MEMAC); o antagonistas del receptor de la adenosina A2A tales como Preladenant (SCH 420814) o SCH 412348;
(ii) amiloide p (o fragmentos del mismo), tales como Ap i-15 conjugados con el panepítopo de unión HLA DR (PADRE) y ACC-001 (Elan/Wyeth);
(iii) anticuerpos dirigidos contra el amiloide p (o fragmentos del mismos), tales como bapineuzumab (también conocido como AAB-001) y AAB-002 (Wyeth/Elan);
(iv) agentes reductores o inhibidores de amiloide (incluyendo los que reducen la producción, la acumulación y la fibrilización de amiloide) tales como colostrinina y bisnorcimserina (también conocida como BNC);
(v) agonistas del receptor alfa-adrenérgico tales como clonidina (CATAPRES);
(vi) agentes bloqueantes del receptor beta-adrenérgico (beta-bloqueantes) tales como carteolol;
(vii) anticolinérgicos tales como amitriptilina (ELAVIL, ENDEP);
(viii) anticonvulsionantes tales como carbamazepina (TEGRETOL, CARBATROL);
(ix) antipsicóticos, tales como lurasidona (también conocida como SM-13496; Dainippon Sumitomo);
(x) bloqueadores de los canales de calcio tales como nilvadipina (ESCOR, NIVADlL);
(xi) inhibidores de la catecol O-metiltransferasa (COMT) tales como tolcapona (TASMAR);
(xii) estimulantes del sistema nervioso central tales como cafeína;
(xiii) corticosteroides tales como prednisona (STERAPRED, DELTASONE);
(xiv) agonistas del receptor de dopamina tales como apomorfina (APOKYN);
(xv) antagonistas del receptor de dopamina tales como tetrabenazina (NITOMAN, XENAZINE, antagonista de dopamina D2 tal como Quetiapina);
(xvi) inhibidores de la recaptación de la dopamina tales como maleato de nomifensina (MERITAL);
(xvii) agonistas del receptor de ácido gamma-aminobutírico (GABA) tales como baclofeno (LIORESAL, KEMSTRO);
(xviii) antagonistas de histamina 3 (H3) tales como ciproxifano;
(xix) inmunomoduladores tales como acetato de glatiramer (también conocido como copolímero-1; COPAXONE); (xx) inmunosupresores tales como metotrexato (TREXALL, RHEUMATREX);
(xxi) interferones, incluyendo interferón beta-1a (AVONEX, REBIF) e interferón beta-1b (BETASERON, BETAFERON);
(xxii) levodopa (o su éster metílico o etílico), en solitario o en combinación con un inhibidor de la DOPA descarboxilasa (por ejemplo, carbidopa (SINe MeT, CARBILEV, PARCOPA));
(xxiii) antagonistas del receptor del W-metil-D-aspartato (NMDA) tales como memantina (NAMENDA, AXURA, EBIXA);
(xxiv) inhibidores de monoamina oxidasa (MAO) tales como selegilina (EMSAM);
(xxv) agonistas del receptor muscarínico (particularmente el subtipo M1) tales como cloruro de betanecol (DUVOID, URECHOLINE);
(xxvi) fármacos neuroprotectores tales como 2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-3-ona oxima;
(xxvii) agonistas del receptor nicotínico tales como epibatidina;
(xxviii) inhibidores de la recaptación de norepinefrina (noradrenalina) tales como atomoxetina (STRATTERA); (xxix) inhibidores de fosfodiesterasa (PDE), por ejemplo, inhibidores de PDE9 tales como BAY 73-6691 (Bayer AG) e inhibidores de PDE 10 (por ejemplo, PDE10A) tales como papaverina;
(xxx) otros inhibidores de PDE incluyendo (a) inhibidores de PDE1 (por ejemplo, vinpocetina), (b) inhibidores de PDE2 (por ejemplo, eritro-9-(2-hidroxi-3-nonil)adenina (EHNA)), (c) inhibidores de PDE4 (por ejemplo, rolipram), y (d) inhibidores de PDE5 (por ejemplo, sildenafilo (VIAGRA, r Ev AT iO));
(xxxi) quinolinas tales como quinina (incluyendo sus sales de clorhidrato, diclorhidrato, sulfato, bisulfato y gluconato);
(xxxii) inhibidores de p-secretasa tales como WY-25105;
(xxxiii) inhibidores de Y-secretasa tales como LY-411575 (Lilly);
(xxxiv) antagonistas del receptor de serotonina (5-hidroxitriptamina) 1A (5-HT1A) tales como espiperona;
(xxxv) agonistas del receptor de serotonina (5-hidroxitriptamina) 4 (5 -HT4) tales como PRX-03140 (Epix);
(xxxvi) antagonistas del receptor de serotonina (5-hidroxitriptamina) 6 (5-HTa) tales como mianserina (TORVOL, BOLVIDON, NORVAL);
(xxxvii) inhibidores de la recaptación de serotonina (5-HT) tales como alaproclato, citalopram (CELEXA, CIPRAMIL);
(xxxviii) factores tróficos, tal como factor de crecimiento nervioso (FCN), factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFCF; ERSOFERMIN), neurotrafina-3 (NT-3), cardiotrafina-1, factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF), neublastina, meteorina y factor neurotrófico derivado de la glía (FNDG), y agentes que estimulan la producción de factores tróficos, tales como propentofilina;
y similares.
En consecuencia, se desvelan procedimientos para tratar o prevenir una enfermedad, afección o trastorno asociado con JAK en un sujeto, tal como un ser humano o un mamífero no humano, que comprenden administrar una cantidad eficaz de uno o más compuestos descritos en el presente documento al sujeto. Los sujetos adecuados que pueden tratarse incluyen animales domésticos o silvestres, animales de compañía, tales como perros, gatos, caballos y similares; ganado, incluyendo vacas y otros rumiantes, cerdos, aves de corral, conejos y similares; primates, por ejemplo, monos, tales como monos rhesus y cynomolgus (también conocidos como monos cangrejeros o de cola larga), titíes, tamarinos, chimpancés, macacos y similares; y roedores, tales como ratas, ratones, gerbos, cobayas y similares. El compuesto se puede administrar en una forma farmacéuticamente aceptable, opcionalmente en un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Las condiciones en las que se contempla que la dirección selectiva de la ruta de JAK o modulación de las cinasas JAK, particularmente JAK1, es terapéuticamente útil incluyen artritis, asma, enfermedades autoinmunitarias, cánceres o tumores, diabetes, ciertas enfermedades, trastornos o afecciones oculares, inflamación, inflamaciones intestinales, alergias o afecciones, enfermedades neurodegenerativas, psoriasis y rechazo de trasplantes. Las afecciones que podrían beneficiarse de la inhibición selectiva de JAK1 se analizan con más detalle a continuación.
En consecuencia, el compuesto de fórmula I o IE, o sus sales farmacéuticamente aceptables, y composiciones farmacéuticas del mismo, pueden usarse para tratar una serie de afecciones o enfermedades tales como las siguientes:
Artritis, incluyendo artritis reumatoide, artritis juvenil y artritis psoriásica;
Enfermedades o trastornos autoinmunitarios, incluyendo aquellos denominados trastornos autoinmunitarios de un solo órgano o de un solo tipo de célula, por ejemplo, tiroiditis de Hashimoto, anemia hemolítica autoinmunitaria, gastritis atrófica autoinmunitaria de anemia perniciosa, encefalomielitis autoinmunitaria, orquitis autoinmunitaria, enfermedad de Goodpasture, trombocitopenia autoinmunitaria, oftalmia simpática, miastenia gravis, enfermedad de Graves, cirrosis biliar primaria, hepatitis agresiva crónica, colitis ulcerosa y glomerulopatía membranosa, aquellas en la que se ha designado que está implicado un trastorno autoinmunitario sistémico, por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, síndrome de Sjogren, el síndrome de Reiter, polimiositisdermatomiositis, esclerosis sistémica, poliarteritis nodosa, esclerosis múltiple y penfigoide ampollar y enfermedades autoinmunitarias adicionales, que pueden estar basadas en células O (humorales) o en linfocitos T, incluyendo el síndrome de Cogan, espondilitis anquilosante, granulomatosis de Wegener, alopecia autoinmunitaria, diabetes de tipo I o de aparición juvenil o tiroiditis;
Cánceres o tumores, incluyendo cáncer del tracto alimentario/gastrointestinal, cáncer de colon, cáncer de hígado, cáncer de piel, incluyendo tumor mastocítico y carcinoma de células escamosas, cáncer de mama y mamario, cáncer de ovario, cáncer de próstata, linfoma, leucemia, incluyendo leucemia mielógena aguda y leucemia mielógena crónica, cáncer de riñón, cáncer broncopulmonar, cáncer de músculo, cáncer de huesos, cáncer de vejiga, cáncer de cerebro, melanoma, incluyendo melanoma oral y metastásico, sarcoma de Kaposi, mielomas, incluyendo mieloma múltiple, trastornos mieloproliferativos, retinopatía diabética proliferativa o trastornos asociados con la angiogénesis, incluyendo tumores sólidos;
Diabetes, incluyendo diabetes de tipo I o complicaciones a causa de la diabetes;
Enfermedades, trastornos o afecciones oculares incluyendo enfermedades autoinmunitarias del ojo, queratoconjuntivitis, conjuntivitis vernal, uveítis, incluyendo uveítis asociada con la enfermedad de Behcet y la uveítis inducida por lentillas, queratitis, queratitis herpética, queratitis cónica, distrofia epitelial de la córnea, queratoleucoma, pénfigo ocular, úlcera de Mooren, escleritis, oftalmopatía de Grave, síndrome de Vogt-Koyanagi-Harada, queratoconjuntivitis seca (ojo seco), flicténula, iridociclitis, sarcoidosis, oftalmopatía endocrina, oftalmitis simpática, conjuntivitis alérgica o neovascularización ocular;
Inflamaciones, alergias o afecciones intestinales incluyendo enfermedad de Crohn y/o colitis ulcerosa, enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad celíaca, proctitis, gastroenteritis eosinofílica o mastocitosis;
Enfermedades neurodegenerativas, incluyendo la enfermedad de la neurona motora, enfermedad del Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Huntington, isquemia cerebral o enfermedad neurodegenerativa causada por una lesión traumática, golpe, neurotoxicidad por glutamato o hipoxia; lesión por isquemia/reperfusión en un ictus, isquemia del miocardio, isquemia renal, ataques cardíacos, hipertrofia cardíaca, ateroesclerosis y arteriesclerosis, hipoxia orgánica o agregación plaquetaria;
Enfermedades, afecciones o trastornos cutáneos, incluyendo dermatitis atópica, eccema, psoriasis, esclerodermia, prurito u otras afecciones pruríticas;
Reacciones alérgicas, incluyendo dermatitis alérgica en mamíferos (incluyendo enfermedades alérgicas en caballos, tales como hipersensibilidad a picaduras), eccema estival, dermatitis estival equina, arcadas, enfermedad inflamatoria de las vías respiratorias, obstrucción recurrente de las vías respiratorias, hipersensibilidad de las vías respiratorias o enfermedad pulmonar obstructiva crónica;
Asma y otras enfermedades obstructivas de las vías respiratorias, incluyendo asma crónica o inveterada, asma tardía, bronquitis, asma bronquial, asma alérgica, asma intrínseca, asma extrínseca o asma por polvo;
Rechazo de trasplantes, incluyendo el rechazo de trasplante de islotes pancreáticos, rechazo de trasplante de médula ósea, enfermedad del injerto contra el huésped, rechazo de trasplante de órganos y células, tal como médula ósea, cartílago, córnea, corazón, disco intervertebral, islote, riñón, extremidad, hígado, pulmón, músculo, mioblasto, nervio, páncreas, piel, intestino delgado o tráquea o un xenotrasplante; y
También se desvela en el presente documento un procedimiento para inhibir de manera selectiva una enzima JAK1, que incluye poner en contacto la enzima JAK con una cantidad no terapéutica o una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más de los compuestos enseñados en el presente documento. Dichos procedimientos pueden efectuarse in vivo o in vitro. El contacto in vitro puede implicar un ensayo de exploración para determinar la eficacia de los uno o más compuestos contra una enzima seleccionada a diversas cantidades o concentraciones. El contacto in vivo con una cantidad terapéuticamente eficaz de los uno o más compuestos puede implicar el tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección o profilaxis descrita del rechazo al trasplante de órgano en el animal en el que tiene lugar el contacto. También puede determinarse o medirse el efecto de los uno o más compuestos en la enzima JAK y/o el animal hospedador. Los procedimientos para determinar la actividad de JAK incluyen aquellos descritos en los ejemplos, así como aquellos desvelados en los documentos WO99/65908, WO 99/65909, WO01/42246, WO02/00661, WO02/096909, WO2004/046112 y WO2007/012953.
Síntesis química
Los siguientes esquemas y descripciones escritas proporcionan detalles generales con respecto tanto a la preparación de los compuestos de fórmula I desvelados en el presente documento como de los compuestos de la invención.
Los compuestos de fórmula I, en la que p es 2, X es NH, Y es AR5 y A es un enlace, pueden prepararse de acuerdo con el Esquema 1.
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Será evidente a los expertos en la materia que los grupos funcionales sensibles (PG) pueden necesitar protección y desprotección durante la síntesis de un compuesto de fórmula I. La protección y la desprotección pueden conseguirse mediante procedimientos convencionales, como se ha descrito, por ejemplo, en "Protective Groups in Organic Synthesis" de T. W. Greene y P. G. M. Wuts, John Wiley & Sons Inc. (1999), y referencias en el mismo. Por lo tanto, en el Esquema 1, Etapa 1, un compuesto de fórmula II, en la que Q1 es halógeno, se trata con un agente de protección para proporcionar un compuesto de fórmula III, en la que PG1 es un grupo protector alquilsulfonilo, tal como bencenosulfonilo, o preferentemente para-toluenosulfonilo ("tosilo"). El grupo protector puede instalarse por reacción del compuesto de fórmula II con un cloruro de arilsulfonilo, preferentemente cloruro de tosilo, en presencia de una base, tal como una solución acuosa de hidróxido sódico y un disolvente orgánico, tal como acetona. La reacción se realiza típicamente de 0 °C a aproximadamente 50 °C, preferentemente a aproximadamente 23 °C (temperatura ambiente). Como alternativa, pueden usarse bases, tales como hidruro sódico y terc-butóxido potásico, empleando un disolvente adecuado, tal como N,N-dimetilformamida o tetrahidrofurano. Se conocen varios compuestos de fórmula II en la bibliografía y se han preparado por los procedimientos anteriores. Por ejemplo, la síntesis de compuesto de fórmula II, en la que Q1 es Cl y R2 y R3 son hidrógeno se han indicado previamente, por ejemplo en el documento WO 2007 012953.
En el Esquema 1, Etapa 2, el compuesto protegido de fórmula III se combina con 1-2 equivalentes de una amina de fórmula IV en presencia de 1-3 equivalentes de una base y un disolvente prótico para proporcionar un compuesto de fórmula V. Las bases adecuadas incluyen trietilamina, diisopropiletilamina y carbonato potásico, mientras que los disolventes adecuados incluyen metanol, etanol, alcohol diisopropílico y agua o mezclas de los mismos. La reacción se realiza habitualmente de aproximadamente 23 °C a aproximadamente 150 °C, preferentemente a aproximadamente 75 °C. Se observará que la amina de fórmula IV contiene un segundo grupo amino que está protegido con un grupo protector PG2 que puede retirarse en condiciones que no conducen a la pérdida de Pg 1. Los grupos protectores adecuados PG2 incluyen t-butoxicarbonilo ("Boc") y ("Cbz"), preferentemente benciloxicarbonilo.
En el Esquema 1, Etapa 3, el grupo protector PG2 se retira a partir del compuesto de fórmula V en condiciones que no conducen a la pérdida de PG1 para dar una amina primaria (o una sal de la misma) de fórmula VI. Cuando PG2 es benciloxicarbonilo, el grupo protector de benciloxicarbonilo puede retirarse por hidrogenólisis en el que el compuesto de fórmula V se expone a hidrógeno o a un reactivo de transferencia de hidrógeno tal como ciclohexeno en presencia de un catalizador de hidrogenación tal como hidróxido de paladio usando un disolvente tal como metanol, ácido acético o, preferentemente, etanol. Como alternativa, cuando PG2 es benciloxicarbonilo, el grupo protector de benciloxicarbonilo puede retirarse mediante tratamiento del compuesto de fórmula V con una solución de bromuro de hidrógeno (aproximadamente 6 equivalentes) en ácido acético opcionalmente en presencia de un disolvente adecuado tal como acetato de etilo a una temperatura de aproximadamente menos 20 °C a aproximadamente 40 °C, preferentemente menos de 25 °C. Se prefiere este último procedimiento de desprotección en el que n es 1, R2, R3 y R4 son hidrógeno, R1 es metilo, PG1 es tosilo y PG2 es benciloxicarbonilo y proporciona la amina de fórmula VI como la sal de dibromhidrato. Cuando PG2 es t-butoxicarbonilo, el grupo protector t-butoxicarbonilo puede retirarse por tratamiento con un exceso de un ácido, tal como ácido clorhídrico o ácido trifluoroacético en un disolvente tal como diclorometano o 1,4-dioxano.
En el Esquema 1, Etapa 4, la amina primaria de fórmula VI (o una sal de la misma) se convierte a un derivado de sulfonamida de fórmula VII por tratamiento con un derivado de ácido sulfónico activado de fórmula VIII, en la que Q2 es halógeno, O-alquilo u O-arilo en presencia de una base. Más comúnmente, VIII es un derivado de cloruro de sulfonilo en el que Q2 es Cl. Muchos cloruros de sulfonilo pueden obtenerse a partir de fuentes disponibles en el mercado. Asimismo, existen varios procedimientos para la preparación de cloruros de sulfonilo, que son bien conocidos por los expertos en la materia y han sido descritos en textos tales como "Advanced Organic Chemistry" de J. March, John Wiley & Sons (1985). Por lo general, la amina de fórmula VI se trata con un derivado de cloruro de sulfonilo de fórmula VIII en la que Q2 es Cl en presencia de al menos un equivalente de una base tal como trietilamina o diisopropilamina en un disolvente adecuado tal como diclorometano, tetrahidrofurano o acetonitrilo. Cuando se usa una forma de sal de la amina, se usa un equivalente de base adicional para cada equivalente de ácido que forma la sal. Por ejemplo, usando una sal de dibromhidrato, se usan dos equivalentes extra de base. La reacción puede realizarse de aproximadamente menos 20 °C a aproximadamente 50 °C, preferentemente empezando la reacción a aproximadamente 0 °C y después dejándola calentar a aproximadamente 23 °C (temperatura ambiente).
Por último, en el Esquema 1, Etapa 5, el derivado de sulfonamida de fórmula VII se desprotege para proporcionar un compuesto de fórmula I, en la que p es 2, X es NH, Y es AR5 y A es un enlace. Habitualmente se emplean dos procedimientos, cuya elección se determina por la compatibilidad de las condiciones con otros grupos funcionales en la molécula. El primer procedimiento implica la exposición del compuesto de fórmula VII a un exceso (aproximadamente 4 equivalentes) de una base, tal como hidróxido de litio o hidróxido sódico. La reacción se ejecuta en una mezcla disolvente que contiene agua y un alcohol, tal como metanol o etanol. También puede ejecutarse en una mezcla de agua y tetrahidrofurano, y, opcionalmente un alcohol, tal como metanol o etanol. La reacción puede ejecutarse a una temperatura de aproximadamente 23 °C a aproximadamente 100 °C, habitualmente de aproximadamente 60 °C. El segundo procedimiento, que se prefiere en casos en los que hay una funcionalidad sensible al hidróxido, tal como nitrilo presente en la molécula, implica la reacción del compuesto de fórmula VII con un exceso de fluoruro de tetrabutilamonio (4-25 equivalentes) en un disolvente, tal como 1,2-dimetoxietano o, preferentemente tetrahidrofurano, La desprotección se realiza a una temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 60 °C, preferentemente de aproximadamente 23 °C.
Los compuestos de fórmula II, en la que Q1 es halógeno, están disponibles en el mercado o se conocen en la bibliografía química. Por ejemplo, 4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina, en la que Q1 es Cl y R2 y R3 son los dos hidrógeno, es un compuesto fácilmente disponible en el mercado.
Los compuestos de fórmula IV se conocen en la bibliografía química o pueden prepararse por reacciones químicas convencionales conocidas para un experto en la materia.
Un procedimiento alternativo de preparación de compuestos de fórmula I en la que p es 2, X es NH, Y es AR5, A es un enlace, se muestra en el Esquema 2.
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En el Esquema 2, Etapa 1, un compuesto de fórmula IX se combina con un derivado de benciloxicarbamato de fórmula X en presencia de una base (1-5 equivalentes) para proporcionar un derivado de benciloxicarbamato de fórmula XI. La reacción se realiza en un disolvente tal como agua o un alcohol, tal como etanol, opcionalmente con la adición de un codisolvente miscible, tal como tetrahidrofurano. Las bases adecuadas incluyen carbonato potásico, carbonato de cesio, trietilamina y diisopropiletilamina. La reacción se realiza de aproximadamente 23 °C a aproximadamente 100 °C. Cuando n es 1, R2 , R3 y R4 son hidrógeno y R1 es metilo, las condiciones preferidas son ejecutar la reacción en agua, usando carbonato potásico (3 equivalentes) como base, empezando la reacción a aproximadamente 23 °C y calentando entonces a aproximadamente 95 °C.
En el Esquema 2, Etapa 2, el derivado de benciloxicarbamato de fórmula XI se desprotege por exposición a hidrógeno o un reactivo de transferencia de hidrógeno, tal como ciclohexeno en presencia de un catalizador de hidrogenación, tal como hidróxido de paladio. Al mismo tiempo, en las condiciones de desprotección, el átomo de cloro en la posición 2 del anillo de 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina se reemplaza por hidrógeno para proporcionar una sal de clorhidrato de amina de fórmula XlI. La reacción se ejecuta en un disolvente, tal como metanol o etanol a una temperatura de aproximadamente 50 °C a aproximadamente 80 °C. Cuando R2 , R3 y R4 son hidrógeno y R1 es metilo, las condiciones preferidas son ejecutar la reacción en etanol a aproximadamente 78 °C usando hidróxido de paladio como catalizador, y ciclohexeno (aproximadamente 20 equivalentes) como un reactivo de transferencia de hidrógeno.
Por último, en el Esquema 2, Etapa 3, el clorhidrato de amina de fórmula XII se convierte a una sulfonamida de fórmula I, en la que p es 2, X es NH, Y es AR5 , A es un enlace por reacción con un derivado de ácido sulfónico activado de fórmula VIII, en la que Q2 es halógeno, O-alquilo u O-arilo en presencia de al menos dos equivalentes de una base. Más comúnmente, VIII es un derivado de cloruro de sulfonilo en el que Q2 es Cl. Las bases adecuadas incluyen trietilamina, diisopropiletilamina y carbonato potásico. Los disolventes adecuados incluyen N,N-dimetilformamida, y una mezcla de tetrahidrofurano y agua. La reacción puede ejecutarse a una temperatura de aproximadamente menos 20 °C a aproximadamente 50 °C, preferentmente a aproximadamente 23 °C. Como alternativa, el clorhidrato de amina de fórmula XII se trata primero con aproximadamente 2 equivalentes de trimetilclorosilano en presencia de aproximadamente 2-3 equivalentes de una base tal como bis(dimetilsilil)amida de litio o bis(dimetilsilil)amida de sodio en un disolvente aprótico adecuado, tal como tetrahidrofurano. A continuación, después de aproximadamente 1 hora, aproximadamente 1,2 equivalentes del cloruro de sulfonilo de fórmula VIII, Q2 es Cl se añade para proporcionar, después del tratamiento, la sulfonamida de fórmula I, en la que p es 2, X es NH, Y es AR5 , A es un enlace. La reacción puede ejecutarse a una temperatura de aproximadamente menos 20 °C a aproximadamente 50 °C, preferentemente a aproximadamente 23 °C.
Los compuestos de fórmula IX, están disponibles en el mercado o se conocen en la bibliografía química. Por ejemplo, 2,4-dicloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina, en la que R2 y R3 son los dos hidrógeno, está disponible en el mercado. Su síntesis se describe en la Publicación Internacional PCT n.° WO2007/012953.
Los compuestos de fórmula I, en la que p es 2, X es NH e Y es NRaRb, pueden prepararse de acuerdo con el Esquema 3.
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En el Esquema 3, Etapa 1, una amina de fórmula VI (o sal de la misma), en la que PG1 es un grupo protector alrilsulfonilo tal como bencenosulfonilo, o preferentemente tosilo, se convierte a un derivado de oxazolidinona de fórmula XIII. En primer lugar, una solución de N-clorosulfonilisocianato (1 equivalente) se añade lentamente a una solución de 2-bromoetanol (1 equivalente) a una temperatura de aproximadamente -40 °C a aproximadamente 10 °C, preferentemente de aproximadamente 0 °C. Posteriormente, después de 0,5 a 2 horas, una solución de la amina de fórmula VI (1 equivalente) y una base, tal como trietilamina o diisopropiletilamina (aproximadamente 3 equivalentes, más un equivalente para cada mol de ácido que forma una sal) se añade lentamente y la reacción se deja calentar a aproximadamente 23 °C durante un período de aproximadamente 10 a 24 horas. Los disolventes adecuados para la reacción incluyen cloroformo o preferentemente diclorometano.
En el Esquema 3, Etapa 2, el derivado de oxazolidinona de fórmula XIII se hace reaccionar con 1-3 equivalentes de una amina de la fórmula HNRaRb, en presencia de una base (2-5 equivalentes), para proporcionar un derivado de sulfamida de fórmula XIV. Las bases adecuadas incluyen trietilamina y diisopropiletilamina. La reacción se lleva a cabo preferentemente calentando de aproximadamente 90 °C a aproximadamente 150 °C en un recipiente de presión usando un disolvente adecuado, tal como una N,N-dimetilformamida o acetonitrilo.
En el Esquema 3, Etapa 3, el compuesto de fórmula XIV se desprotege, retirando el grupo protector arilsulfonilo PG1 para proporcionar un derivado de sulfamida de fórmula I, en la que p es 2, X es NH e Y es NRaRb. La reacción puede realizarse mediante uno de los dos procedimientos generales descritos para el Esquema 1, Etapa 5. De nuevo, la elección del procedimiento de desprotección se determina por la compatibilidad de las condiciones con otros grupos funcionales en la molécula. Como alternativa, las sulfamidas de la fórmula XIV pueden obtenerse directamente a partir de una amina de fórmula VI (o una sal de la misma). Por lo tanto, en el Esquema 3, Etapa 4, la amina de fórmula VI (o sal de la misma) se trata con un cloruro de sulfamoílo de la fórmula Cl-SC^NRaRb y una base, tal como trietilamina o diisopropiletilamina como se describe para el Esquema 1, Etapa 4. Pueden prepararse cloruros de sulfamoílo de fórmula Cl-SC^NRaRb, a su vez, a partir de aminas de la fórmula HNRaRb de acuerdo con los procedimientos revisados por W. R. Bowman y R. J. Marmon en "Comprehensive Organic Functional Group Transformations, Volume 2", Pergamon (1995).
Los compuestos de fórmula I, en la que p es 2, X es NH e Y es NRaRb también pueden obtenerse directamente a partir de una amina de fórmula XII (o una sal de la misma). Por lo tanto, en el Esquema 3, Etapa 5, la amina de fórmula XII (o una sal de la misma) se trata con un cloruro de sulfamoílo de la fórmula Cl-SO2NRaRb y una base, tal como trietilamina o diisopropiletilamina como se describe para el Esquema 1, Etapa 4. Las aminas de fórmula XII se obtienen como se describen por el Esquema 2. Las aminas de fórmula XII (o sales de las mismas) pueden obtenerse mediante la retirada del grupo protector arilsulfonilo PG1 a partir de un compuesto de la fórmula VI (véase el Esquema 1). La desprotección puede realizarse mediante uno de los dos procedimientos de desprotección generales descritos para el Esquema 1, Etapa 5. La elección del procedimiento de desprotección se determina por la compatibilidad de las condiciones con otros grupos funcionales en la molécula.
Los compuestos de fórmula I, en la que p es 2, X es CH2 e Y es NRaRb, pueden prepararse de acuerdo con el Esquema 4, Esquema 4a y Esquema 4b .
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En el Esquema 4, Etapa 1, un compuesto de fórmula III (véase el Esquema 1), se combina con un aminoalcohol de fórmula XV en presencia de una base y un disolvente polar para proporcionar un compuesto de fórmula XVI. Las bases adecuadas incluyen trietilamina y diisopropiletilamina mientras que los disolventes adecuados incluyen metanol, alcohol diisopropílico y acetona. La reacción se realiza habitualmente de aproximadamente 23 °C a aproximadamente 70 °C. Preferentemente, se añade una cantidad catalítica (aproximadamente 1 % molar) de yoduro potásico a la reacción.
En el Esquema 4, Etapa 2, el compuesto de fórmula XVI se convierte a un compuesto de fórmula XVII, en el que LG es un grupo saliente, tal como bromo, yodo, metanosulfonato o, preferentemente, para-toluenosulfonato. Los procedimientos para instalar tales grupos salientes son bien conocidos por los expertos en la materia y se han descrito en textos, tales como "Advanced Organic Chemistry" de J. March, John Wiley & Sons (1985). En el caso en el que LG es para-toluenosulfonato, el compuesto de fórmula XVI se trata con cloruro de para-toluenosulfonilo en presencia de una base, tal como trietilamina, diisopropiletilamina o N,N-dimetilaminopiridina en un disolvente aprótico, tal como diclorometano o tetrahidrofurano. La reacción se realiza a una temperatura de aproximadamente -10 °C a aproximadamente 40 °C, preferentemente comenzando a aproximadamente 0 °C y permitiendo que la reacción se caliente a aproximadamente 23 °C.
En el Esquema 4, Etapa 3, el compuesto de fórmula XVII se combina con una sal de ácido tioacético, preferentemente tioacetato potásico para producir un derivado tioéster de fórmula XVIII. La reacción se realiza en un disolvente polar, tal como N,N-dimetilformamida o N-metilpirrolidina, a una temperatura de aproximadamente 23 °C a aproximadamente 80 °C, preferentemente a aproximadamente 55 °C.
En el Esquema 4, Etapa 4, el derivado tioéster de fórmula XVIII se convierte a un derivado de ácido sulfónico de fórmula XIX por reacción con una solución acuosa de peróxido de hidrógeno, habitualmente al 30 % en peso. La reacción se realiza en un disolvente ácido, tal como ácido fórmico o acético a una temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 40 °C, preferentemente a aproximadamente 23 °C.
En el Esquema 4, Etapa 5, el derivado de ácido sulfónico de fórmula XIX se convierte a un derivado de cloruro de sulfonilo de fórmula XX. Se conocen en la bibliografía varios procedimientos para llevar a cabo esta transformación de grupo funcional. El procedimiento preferido es tratar el compuesto de fórmula XIX con un exceso (3-15 equivalentes) de cloruro de tionilo en presencia de una cantidad catalítica de N,N-dimetilformamida en un disolvente aprótico, tal como diclorometano o cloroformo. La reacción puede realizarse de aproximadamente menos 20 °C a aproximadamente 100 °C, preferentemente empezando la reacción a aproximadamente 0 °C, y después calentando a aproximadamente 75 °C.
Como alternativa, en el Esquema 4, Etapa 6, el derivado tioéster de fórmula XVIII puede convertirse al derivado de cloruro de sulfonilo de fórmula XX por tratamiento con un agente de cloración. Se conocen en la bibliografía varios procedimientos para llevar a cabo esta transformación de grupo funcional. Los agentes de cloración incluyen cloro gaseoso y N-clorosuccinimida, y la reacción se realiza comúnmente en presencia de un ácido como ácido clorhídrico o ácido acético. Los sistemas de disolventes acuosos mixtos se usan a menudo, tales como agua y diclorometano y agua y acetonitrilo.
En el Esquema 4, Etapa 7, el derivado de cloruro de sulfonilo de fórmula XX se combina con 1-3 equivalentes de una amina de la fórmula HNRaRb para formar un derivado de sulfonamida de fórmula XXI. La reacción se ejecuta en presencia de al menos un equivalente de una base, tal como trietilamina o diiosopropiletilamina a una temperatura de aproximadamente menos 20 °C a aproximadamente 50 °C, preferentemente empezando la reacción a aproximadamente 0 °C y permitiendo que la reacción se caliente a aproximadamente 23 °C. La reacción se lleva a cabo en un disolvente aprótico, tal como tetrahidrofurano o diclorometano.
Por último, en el Esquema 4, Etapa 8, el grupo protector arilsulfonilo PG1 se retira para proporcionar un compuesto de la fórmula I, en la que p es 2, X es CH2 e Y es NRaRb. La reacción puede realizarse mediante uno de los dos procedimientos de desprotección generales descritos para el Esquema 1, Etapa 5. La elección del procedimiento de desprotección se determina por la compatibilidad de las condiciones con otros grupos funcionales en la molécula. Los aminoalcoholes de fórmula X v son conocidos en la bibliografía química o pueden prepararse por procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia.
En el Esquema 4a, Etapa 1, el compuesto de fórmula XX se hace reaccionar con 1-2 equivalentes de polvo de cinc para dar el intermedio de sulfinato de cinc Iva (M = Zn). La reacción se realiza en un disolvente adecuado tal como etanol a una temperatura de aproximadamente 30 °C a reflujo, preferentemente 70 °C. Como alternativa, el compuesto de fórmula XX se hace reaccionar con 2 o más equivalentes de bisulfito sódico para dar el intermedio de sulfinato sódico IVa (M = Na). La reacción se realiza en presencia de 1-2 equivalentes de una base adecuada, tal como bicarbonato sódico, usando agua como disolvente, o una mezcla de agua y un disolvente tal como acetona o dioxano, a una temperatura de aproximadamente 10 °C a aproximadamente 60 °C, preferentemente de aproximadamente 25 °C.
En el Esquema 4a, Etapa 2, sulfinatos de fórmula IVa se tratan con 2 equivalentes de un haluro de alquilo para dar una sulfona de fórmula IVb. Los haluros adecuados incluyen derivados de cloro, bromo y yodo y la reacción se realiza en un disolvente tal como DMSO a una temperatura de aproximadamente 20 °C a 110 °C, dependiendo del haluro. Como alternativa, el intermedio IVa puede tratarse con 2-5 equiv. de un derivado de arilo o heteroarilo adecuadamente sustituido. Los ejemplos de tales derivados incluyen yodo, éster de boronato, ácidos borónicos y sales de BF3K. La reacción se realiza en presencia de una fuente de cobre tal como triflato de cobre (I) o acetato de cobre (II) con o sin una diamina adecuada tal como N,N1 dimetiletilendiamina en presencia de una base adecuada, incluyendo carbonato potásico o trietilamina. La reacción se realiza en un disolvente tal como dimetilsulfóxido solo, o como una mezcla con dioxano, a una temperatura de aproximadamente 25 °C a 75 °C, preferentemente 60 °C.
Los compuestos de fórmula I, en la que p es 0, X es CH2, Y es AR5 y A es un enlace, se preparan en el Esquema 4a, etapa 3, retirando el grupo protector arilsulfonilo PG1 a partir de un compuesto de fórmula XXV. La reacción puede realizarse mediante uno de los dos procedimientos de desprotección generales descritos a partir del Esquema 1, Etapa 5. La elección del procedimiento de desprotección se determina por la compatibilidad de las condiciones con otros grupos funcionales en la molécula.
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Como se ha mostrado anteriormente en el Esquema 4b, Etapa 1, el orden de reacción en el Esquema 4 se puede modificar. Comenzando con el producto de la Etapa 2 , compuestos de fórmula XVIIa en la que LG puede ser un grupo saliente adecuado, tal como un tosilato, puede hacerse reaccionar con un derivado de tioacetato adecuadamente sustituido en presencia de una base, tal como K2CO3, y un disolvente polar, tal como MeOH, con calentamiento, habitualmente 60 - 65 °C para proporcionar tioéteres de fórmula XXIVb.
En el Esquema 4b, Etapa 2, un sulfuro de fórmula XXIVa se oxida para producir una sulfona de fórmula I, en la que p es 2, X es CH2, Y es A r 5 y A es un enlace. Se conocen varios procedimientos en la bibliografía y todos implican el uso de un oxidante como el ácido meta-cloroperbenzoico, peróxido de hidrógeno o peroximonosulfato potásico (Oxone®). Un procedimiento preferido es tratar el compuesto de fórmula XXIV con 2 equivalentes de peroximonosulfato potásico (Oxone®) en un disolvente mezcla de tetrahidrofurano, etanol y agua a una temperatura de aproximadamente 23 °C. El sulfuro de fórmula XXIVb también puede oxidarse en condiciones más suaves, por ejemplo usando 1 equivalente de ácido metaclorobenzoico en un disolvente, tal como diclorometano a aproximadamente 0 °C para producir un sulfóxido de fórmula I, en la que p es 1, X es CH2, Y es AR5 y A es un enlace. Se observa que, en algunos casos, el sulfuro XXIVb puede retener opcionalmente el PG1 después de la Etapa 1 y requerirá una etapa de desprotección para proporcionar compuestos de Fórmula I. La reacción puede realizarse mediante uno de los dos procedimientos de desprotección generales descritos a partir del Esquema 1, Etapa 5. La elección del procedimiento de desprotección se determina por la compatibilidad de las condiciones con otros grupos funcionales en la molécula.
Los compuestos de fórmula I, en la que p es 0, 1 o 2, X es CH2, Y es AR5 y A es un enlace, pueden prepararse de acuerdo con el Esquema 5.
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En el Esquema 5, Etapa 1, un compuesto de fórmula XVII (véase el Esquema 4) se trata con 1-2 equivalentes de un tiol de la fórmula R5SH en presencia de 1-2 equivalentes de una base para dar un sulfuro de la fórmula XXIII. Las bases adecuadas incluyen hidruro sódico, bis(trimetilsilil)amida sódica, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN) y preferentemente, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU). La reacción se realiza en un disolvente, tal como N,N-dimetilformamida o N-metilpirrolidinona a una temperatura de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 50 °C, preferentemente a aproximadamente 23 °C.
En el Esquema 5, Etapa 2, el compuesto de fórmula XXIII se desprotege, retirando el grupo protector arilsulfonilo PG1 para proporcionar un compuesto de fórmula XXIV. La reacción puede realizarse mediante uno de los dos procedimientos de desprotección generales descritos para el Esquema 1, Etapa 5. La elección del procedimiento de desprotección se determina por la compatibilidad de las condiciones con otros grupos funcionales en la molécula.
En el Esquema 5, Etapa 3, un sulfuro de fórmula XXIV se oxida para producir una sulfona de fórmula I, en la que p es 2, X es CH2 , Y es AR5 y A es un enlace. Se conocen varios procedimientos en la bibliografía y todos implican el uso de un oxidante como el ácido meta-cloroperbenzoico, peróxido de hidrógeno o peroximonosulfato potásico (Oxone®). Un procedimiento preferido es tratar el compuesto de fórmula XXIV con 2 equivalentes de peroximonosulfato potásico (Oxone®) en un disolvente mezcla de tetrahidrofurano, etanol y agua a una temperatura de aproximadamente 23 °C. El sulfuro de fórmula XXIV también puede oxidarse en condiciones más suaves, por ejemplo usando 1 equivalente de ácido metaclorobenzoico en un disolvente, tal como diclorometano a aproximadamente 0 °C para producir un sulfóxido de fórmula I, en la que p es 1, X es CH2 , Y es AR5 y A es un enlace.
Se observa que el orden de las Etapas 2 y 3 en el Esquema 5 , puede invertirse opcionalmente de modo que la etapa de oxidación se lleve a cabo antes de la etapa de desprotección.
Los compuestos de la fórmula I, en la que p es 0, X es CH2 , Y es AR5 y A es un enlace se preparan en el Esquema 5, Etapa 4 retirando el grupo protector arilsulfonilo PG1 a partir de un compuesto de fórmula XXIII. La reacción puede realizarse mediante uno de los dos procedimientos de desprotección generales descritos para el Esquema 1, Etapa 5. De nuevo, la elección del procedimiento de desprotección se determina por la compatibilidad de las condiciones con otros grupos funcionales en la molécula.
En el Esquema 5, Etapa 5, los compuestos de la fórmula XXIII se preparan como alternativa a partir de un derivado de tioacetato de fórmula XVIII. En primer lugar, el tioacetato de fórmula XVIII se disuelve en un disolvente, tal como etanol, metanol o agua (o una mezcla de los mismos). Una base adecuada, tal como carbonato potásico o carbonato de cesio (aproximadamente 2 equivalentes) se añade y se burbujea nitrógeno a través de la solución para retirar oxígeno. Después se añade un agente de alquilación de la fórmula R5-LG, en el que LG es un grupo saliente, tal como bromo, yodo, metanosulfonato o para-tolueno-sulfonato. La reacción se realiza a una temperatura de aproximadamente menos 20 °C a aproximadamente 30 °C. Preferentemente, la reacción se inicia a aproximadamente 0 °C y después se calienta a aproximadamente 23 °C.
Muchos tioles de la fórmula R5SH y agentes alquilantes de la fórmula R5-LG pueden obtenerse de fuentes comerciales. Asimismo, existen diversos procedimientos para la preparación de tales compuestos, que son bien conocidos por los expertos en la materia y han sido descritos en textos tales como "Advanced Organic Chemistry" de J. March, John Wiley & Sons (1985).
Se observa que determinados compuestos de fórmula I pueden obtenerse mediante transformaciones de grupos funcionales en una etapa tardía de la síntesis, por ejemplo, mediante la modificación química de los grupos R4 o R5 después de llevarse a cabo las Etapas 4 o 5 en el Esquema 1, Etapa 3 en el Esquema 2, Etapas 2, 3 o 4 en el Esquema 3, Etapas 7 u 8 en el Esquema 4 y Etapas 2, 3, 4 o 5 en el Esquema 5. Tales transformaciones de grupos funcionales pueden incluir una etapa o etapas múltiples, por ejemplo, reducción de un éster a un alcohol, reoxidación a un aldehído, adición de un reactivo de organomagnesio para formar un alcohol secundario, reoxidación a una cetona y, por último, adición de un reactivo de organomagnesio para producir un alcohol terciario.
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En el Esquema 6, Etapa 1, los compuestos de fórmula XVIIIa, en la que R5 puede ser alquilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo, se hacen reaccionar con 1 equivalente de disulfuro de 2,2'-dibenzotiazolilo en presencia de 1-2 equivalentes de un reactivo de activación tal como trifenilfosfina. La reacción se realiza en un disolvente adecuado tal como THF de 0 °C a 60 °C, preferentemente a temperatura ambiente.
En el Esquema 6, Etapa 2, se hacen reaccionar tioéteres de fórmula XVIIIb con 2-3 equivalentes de un agente oxidante, tal como ácido m-cloroperbenzoico. La reacción se realiza en un disolvente adecuado tal como diclorometano a temperatura ambiente.
En el Esquema 6, Etapa 3, se hacen reaccionar compuestos de fórmula XVIIIc con 1-2 equivalentes de una base adecuada tal como metóxido sódico o un agente reductor, tal como borohidruro sódico. La reacción se realiza en un disolvente adecuado tal como MeOH, preferentemente a temperatura ambiente.
En el Esquema 6, Etapa 4, se hacen reaccionar 1-2 equivalentes de sulfinatos en bruto de la fórmula XVIIId con un haluro de alquilo, tal como XVII, en presencia de 2-3 equivalentes de una base tal como carbonato potásico. Los haluros adecuados incluyen derivados de cloro, bromo y yodo y la reacción se realiza en un disolvente tal como DMSO a una temperatura de 10 °C a 100 °C, preferentemente 50 °C. Para los haluros de alquilo tales como grupos protectores de XVII, por ejemplo tosilatos, se pueden retirar posteriormente in situ después de la compleción de la reacción de sulfonilación para proporcionar los compuestos finales.
Excluyendo la síntesis de los compuestos de la invención, un experto en la materia reconocerá la necesidad de muestrear y analizar mezclas de reacción antes del tratamiento para controlar el progreso de las reacciones y decidir si la reacción debe continuar o si está lista para ser procesada para obtener el producto deseado. Los procedimientos comunes para analizar mezclas de reacción incluyen cromatografía en capa fina (TLC), cromatografía líquida/espectroscopía de masas (CLEM) y resonancia magnética nuclear (RMN).
Un experto en la materia también reconocerá que los compuestos de fórmula I pueden prepararse en forma de mezclas de diastereómeros o isómeros geométricos (por ejemplo, sustitución cis y trans en un anillo cicloalcano). Estos isómeros pueden prepararse por técnicas cromatográficas convencionales, tales como cromatografía de fase normal sobre gel de sílice, cromatografía líquida preparativa de alta presión y de fase inversa o cromatografía de fluidos supercríticos. Un experto en la materia también reconocerá que algunos compuestos de fórmula I son quirales y, por lo tanto, pueden prepararse como mezclas racémicas o escalonadas de enantiómeros. Están disponibles diversos procedimientos y son bien conocidos por los expertos en la materia para la separación de enantiómeros. Un procedimiento preferido para los enantiómeros de separación de rutina es la cromatografía de fluidos supercríticos que emplea una fase estacionaria quiral.
SECCIÓN EXPERIMENTAL
Los Ejemplos de referencia expuestos posteriormente no son compuestos de la invención.
Excepto cuando se indique otra cosa, las reacciones se ejecutaron en una atmósfera de nitrógeno. La cromatografía sobre gel de sílice se realizó usando gel de sílice de malla 250-400 usando nitrógeno presurizado (~0,07-0,10 MPa (~10-15 psi)) para impulsar el disolvente a través de la columna ("cromatografía ultrarrápida"). Cuando se indique, las soluciones y mezclas de reacción se concentraron por evaporación rotatoria al vacío.
Ejemplo de referencia 1: 2,2,2-Trifluoro-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobutil}etanosulfonamida
Etapa 1: [ds-3-(m etilamino)ddobutil]carbamato de bencilo y [trans-3-(metilamino)ciclobutil]carbamato de bencilo
Una solución al 33% de metilamina (1000 ml, 9,13 mol) en etanol absoluto se añadió a una mezcla de (3­ oxociclobutil)carbamato de bencilo (documentos WO2012/75381 A1 y WO2012/09678 A1) (200 g, 0,913 mol) y ácido acético (88 ml) agitándose en etanol (1000 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante a 0 °C durante 1,5 horas y después se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió en porciones borohidruro de litio (41 g, 2,05 mol) a la mezcla de reacción a -70 °C. Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se agitó a -70 °C durante 1 hora y después se dejó calentar a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se inactivó con agua (400 ml) y se concentró al vacío para retirar etanol. La capa acuosa se acidificó con ácido clorhídrico concentrado a pH 2, se lavó con acetato de etilo (2 x 1000 ml), se basificó con hidróxido sódico al 10 % a pH 9-10 y después se extrajo con diclorometano (3 x 1000 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1000 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para obtener el producto en bruto en forma de un líquido de color pardo pálido. Este se disolvió en diclorometano (400 ml) y se enfrió a 0 °C. A la solución resultante se le añadió una solución de HCl 4 M en dioxano (300 ml). La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos y después a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se filtró y el sólido restante se volvió a cristalizar se recristalizó en una mezcla de metanol y metil terc-butil éter para proporcionar el isómero cis en forma de un sólido de color blanco (111,09 g, 52 %). RMN 1 H: (400 MHz, D2O): 87,33-7,38 (m, 5H); 5,02 (s, 2H), 3,83-3,87 (m, 1H), 3,89­ 3,41 (m, 1H), 2,66-2,70 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,03-2,05 (m, 2H). CL/EM (masa exacta) calculado para C13 H18 N2O2 ; 234,137, encontrado (M H+); 235,1.
El isómero trans se aisló de las aguas madre usando cromatografía de fluidos supercríticos.
Etapa 2: {ds-3-[(2-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)(metil)amino]-cidobutil}carbamato de bencilo
A una solución de carbonato potásico (20,47 g, 148 mmol) en agua (180 ml) se le añadió [cis-3-(metilamino)ciclobutil]carbamato de bencilo (13,57 g, 50,2 mmol), seguido de 2,4-dicloro-7H-pirrolo(2,3-d)pirimidina (9,0 g, 47,9 mmol) a temperatura ambiente. Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se agitó a 95 °C durante una noche. La mezcla se filtró para recoger el sólido. La torta de filtro se lavó con agua y se secó al vacío para proporcionar el compuesto del título (16,5 g, 89,7 %) en forma de un sólido de color amarillo. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,81 (sm 1 H), 7,65 (d, 1 H), 7,38 (m, 5 H), 7,16 (m, 1 H), 6,67 (d, 1 H), 5,02 (s, 2 H), 4,81 (m, 1 H), 3,85 (m, 1 H), 3,25 (s, 3 H), 2,53 (m, 2 H), 2,25 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C-i9 H20ClN5O2 ; 385,131, encontrado (M H+); 386,1.
Etapa 3: clorhidrato de cis-N-Metil-N-7H-pirmlo[2,3-d]pirím idin-4-ilddobutano-1,3-diamina
Una mezcla de {cis-3-[(2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)(metil)-amino]ciclobutil}carbamato (13,0 g, 34,0 mmol), Pd(OH)2 (40,3 g, 40,8 mmol) y ciclohexeno (72,5 ml, 0,71 mol) en etanol (300 ml) se agitó a la temperatura de reflujo durante 3 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de Celite® y el lecho se lavó con metanol. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el compuesto del título (4,8 g, 66 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,68 (a, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,67 (a, 2H), 7,17 (d, 1H), 6,65 (d, 1H), 5,08 (m, 1 H), 3,45 (m, 1H), 3,26 (s, 3H), 2,31 (m, 4H). CL/EM (masa exacta) calculado para C11H15N5; 217,133, encontrado (M H+); 218,1.
Etapa 4: 2,2,2-Trífluoro-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]-ddobutil}etanosulfonamida
A una solución de clorhidrato de cis-N-metil-N-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilcidobutano-1,3-diamina (100 mg, 0,39 mmol) en tetrahidrofurano (0,8 ml) se añadió bis(trimetilsilil)amida de litio (solución 1 M en tetrahidrofurano) (0,9 ml, 0,9 mmol) y clorotrimetilsilano (94 mg, 0,88 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos y después se añadió lentamente cloruro de 2,2,2-trifluoroetanosulfonilo (86 mg, 0,47 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas y después se repartió entre diclorometano y agua. La capa acuosa se extrajo dos veces con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se concentraron para proporcionar el producto en bruto en forma de un sólido de color castaño. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (93:7) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (93 mg, 65%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 11,61 (s a, 1 H), 8,20 (d, 1 H), 8,08 (s, 1 H), 7,13 (d, 1 H), 6,60 (d, 1 H), 4,80-4,94 (m, 1 H), 4,34 (c, 2 H), 3,58-3,71 (m, 1 H), 3,23 (s, 3 H), 2,55-2,67 (m, 2 H), 2,17-2,30 (m, 2 H). Cl/e M (masa exacta) calculado para C13H16F3N5O2S; 363,098, encontrado (M H+); 363,9.
Los siguientes compuestos, Ejemplos de referencia 2-7, se prepararon a partir de clorhidrato de cis-N-metil-N-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilciclobutano-1,3-diamina (Ejemplo de referencia 1, Etapa 3) de una manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 1, Etapa 4, sustituyendo cloruro de 2,2,2-trifluoroetanosulfonilo por el cloruro de sulfonilo indicado.
Ejemplo de referencia 2: N-{ds-3-[Metil(7H-pirmlo[2,3-d]pinmidin-4-il)amino]ddobutil}-propano-1-sulfonamida
Este compuesto se preparó usando cloruro de 1-propanosulfonilo. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (93:7) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color castaño (rendimiento del 78 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,60 (s a, 1 H), 8,08 (s, 1 H), 7,46 (d, 1 H), 7,12 (d, 1 H), 6,61 (d, 1 H), 4,81-4,94 (m, 1 H), 3,47-3,62 (m, 1 H), 3,23 (s, 3 H), 2,87-2,96 (m, 2 H), 2,52-2,63 (m, 2 H), 2,14-2,27 (m, 2 H) 1,60-1,73 (m, 2 H) 0,96 (t, 3 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C14H21N5O2S; 323,142, encontrado (M H+); 324,1.
Ejemplo de referencia 3: 2-M etil-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]-ddobutil}propano-1-sulfonamida
Este compuesto se preparó usando cloruro 2-metil-1-propanosulfonilo. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (93:7) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (52 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,64 (s a, 1 H), 8,12 (s, 1 H), 7,51 (d, 1 H), 7,03-7,26 (m, 1 H), 6,65 (d, 1 H), 4,82-5,02 (m, 1 H), 3,52-3,70 (m, 1 H), 3,26 (s, 3 H), 2,87 (d, 2 H), 2,55-2,67 (m, 2 H), 2,18-2,30 (m, 2 H), 2,11 (dt, 1 H), 1,04 (d, 6 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C15H23N5O2S; 337,157, encontrado (M H+); 338,0.
Ejemplo de referencia 4A y Ejemplo de referencia 4B: cis- y trans-3-(Cianometil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}ciclobutanosulfonamida
Estos compuestos se prepararon usando una mezcla (~1:1) de cloruro de cis- y trans-3-(cianometil)ciclobutanosulfonilo. La mezcla en bruto de isómeros cis y trans se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de diclorometano y metanol (100:0 a 10:1) para proporcionar una mezcla (420 mg) de los compuestos del título en forma de un sólido de color blanco (67 %). Los isómeros cis y trans se separaron por cromatografía de fluidos supercríticos.
isómero cis 4A: 160 mg (21 %). RMN 1H (400 MHz, m etanol^): 88,12 (s, 1H), 7,13-7,12 (d, 1H), 6,69-6,69 (d, 1 H), 4,92-4,89 (m, 1 H), 3,84-3,78 (m, 1 H), 3,76-3,67 (m, 1 H), 3,36 (s, 3 H), 2,79-2,73 (m, 2 H), 2,65-2,64 (m, 3H), 2,58­ 2,52 (m, 2 H), 2,32-2,19 (m, 4 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17H22N6O2S; 374,152, encontrado (M H+); 375,3.
isómero trans 4B: 155 mg (20 %). RMN 1H (400 MHz, m etanol^): 88,13 (s, 1H), 7,13 (d, 1H), 6,70 (d, 1H), 4,94-4,89 (m, 1H), 3,89-3,85 (m, 1H), 3,72-3,69 (m, 1H), 3,36 (s, 3H), 2,85-2,62 (m, 7H), 2,31-2,23 (m, 4H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17H22N6O2S; 374,152, encontrado (M H+); 374,9.
La mezcla de cloruros de cis- y trans-3-(cianometil)ciclobutanosulfonilo se preparó como sigue a continuación:
Etapa 1: [3-(Bendloxi)ddobutilideno]acetonitrilo
A una suspensión fría de hidruro sódico (125 mg, 3,12 mmol) en tetrahidrofurano (12 ml) a 0 °C se le añadió cianometilfosfonato de dietilo (1,21 g, 3,40 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora antes de añadirse una solución de 3-(benciloxi)ciclobutanona (500 mg, 2,84 mmol) en tetrahidrofurano (8 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche y después se inactivó con agua. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (100:0 a 85:15) para proporcionar el compuesto del título (450 mg, 80 %) en forma de un aceite de color amarillo.
Etapa 2: [3-(Bendloxi)ddobutil]acetonitrílo
Una mezcla de [3-(benciloxi)ciclobutilideno]acetonitrilo (10,2 g, 51 mmol,) y Pd al 10 %/C (2,0 g) en tetrahidrofurano seco se presurizó a 50 psi con hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. Después, la mezcla se filtró y se concentró al vacío. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (100:0 a 80:20) para dar el compuesto del título (7 g, 70 %) en forma de un aceite incoloro. RMN 1 H (400 MHz, CDCls ): 87,36-7,28 (m, 5 H), 4,44-4,43 (m, 2 H), 4,30-4,09 (m, 1H), 3,98-3,95 (m, 1 H), 2,64-2,45 (m, 4 H), 1,81-1,759 (m, 2 H).
Etapa 3: (3-Hidroxicidobutil)acetonitrílo
A una solución de [3-(benciloxi)ciclobutil]acetonitrilo (1 g, 5,00 mmol) en acetonitrilo (15 ml) se le añadió gota a gota yodotrimetilsilano (1,5 g, 7,50 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se inactivó con trietilamina, se concentró y después se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (1:0 a 1:1) para proporcionar el compuesto del título (340 mg, 62 %) en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1 H (400 MHz, CDCla ): 84,55-4,15 (m, 1H), 2,49-2,46 (m, 2H), 2,25-2,21 (m, 2H), 2,14-2,08 (m, 1H), 1,79-1,72 (m, 2H).
Etapa 4: 4-metilbencenosulfonato de 3-(cianometil)ddobutilo
A una solución de (3-hidroxiciclobutil)acetonitrilo (333 mg, 3,0 mmol) en diclorometano seco (25 ml) se le añadió 4-dimetilaminopiridina (732 mg, 6,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos y después se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (859 mg, 4,5 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se lavó con agua (2 x 15 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (10:0 a 7:3) para proporcionar el compuesto del título (520 mg, rendimiento del 65 %) en forma de un aceite incoloro.
Etapa 5: etanotioato de S-[3-(cianom etil)ddobutilo]
La mezcla de 4-metilbencenosulfonato de 3-(cianometil)ciclobutilo (1,5 g, 5,7 mmol) y tioacetato potásico (1,29 g, 3,00 mmol) en N,N-dimetilformamida (8 ml) se calentó a 80 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (15 ml), se lavó con agua (30 ml) y salmuera (2 x 30 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía de capa fina preparativa eluyendo con una mezcla de éter de petróleo y acetato de etilo (3:1) para proporcionar el compuesto del título (750 mg, 78%) en forma de un aceite incoloro. r Mn 1 H (400 MHz, CDCh): 84,12-3,92 (m, 1 H), 2,86-2,77 (m, 2 H), 2,71-2,47 (m, 2 H), 2,42-2,37 (m, 2 H), 2,30-2,29 (m,3 H), 1,97-1,90 (m, 1 H).
Etapa 6: cloruro de 3-(cianometil)ddobutanosulfonilo
Una mezcla de N-clorosuccinimida (1,6 g, 12,0 mmol) en HCl concentrado (3 ml) y acetonitrilo (12 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió S-[3-(cianometil)ciclobutil]etanotioato (507 mg, 3,0 mmol) en acetonitrilo (3 ml) a 0 °C y se agitó durante 10 minutos. La mezcla se diluyó con bicarbonato sódico acuoso (50 ml), y se extrajo con metil terc-butil éter (3 x 50 ml). Las capas orgánicas secas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de éter de petróleo y acetato de etilo (100:0 a 50:50) para proporcionar el compuesto del título (400 mg, 69 %) en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1 H (400 MHz, CDCh): 84,45-4,40 (m, 1H), 3,06-2,71 (m, 3H), 2,61-2,49 (m, 4H).
Ejemplo de referencia 5: 1-[3-(Cianometil)oxetan-3-il]-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]cidobutil}metanosulfonamida
Este compuesto se preparó a partir de cloruro de [3-(cianometil)oxetan-3-il]metanosulfonilo. El compuesto en bruto se purificó usando cromatografía de capa fina preparativa eluyendo con acetato de etilo para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (32 %). RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,13 (s, 1 H), 7,14-7,13 (m, 1 H), 6,71-6,70 (m, 1 H), 5,06-5,05 (m, 1 H), 4,85-4,81 (m, 2 H), 4,52-4,50 (m, 2 H), 3,77-3,75 (m, 1 H), 3,63 (m, 2 H), 3,39 (s, 3 H), 3,29-3,26 (m, 2 H), 2,85-2,78 (m, 2 H), 2,38-2,30 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17 H22N6O3S; 390,147, encontrado (M H+ ); 391,0.
Cloruro de [3-(cianometil)oxetan-3-il]metanosulfonilo
Etapa 1: 4-metilbencenosulfonato de [3-(cianometil)oxetan-3-il]metilo
Este compuesto se preparó siguiendo el procedimiento del Ejemplo de referencia 4, Etapa 4, sustituyendo (3-hidroxiciclobutil)acetonitrilo por [3-(hidroximetil)-3-oxetanil]acetonitrilo. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de éter de petróleo y acetato de etilo (1:0 a 1:1) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (10 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCh): 87,82­ 7,80 (m, 2 H), 7,41-7,39 (m, 2 H), 4,54-4,35 (m, 4 H), 4,31 (s, 2 H), 2,79 (s, 2 H), 2,45 (s, 3H).
Etapa 2: Tiocianato de [3-(danometil)oxetan-3-il]metilo
Una solución de 4-metilbencenosulfonato de [3-(cianometil)oxetan-3-il]metilo (150 mg, 0,53 mmol) y tiocianato potásico (104 mg, 1,07 mmol) se agitó en etanol (10 ml). La reacción se calentó a 85 °C y se agitó durante 16 horas. El disolvente se evaporó para proporcionar el compuesto del título en bruto en forma de un sólido de color blanco.
Etapa 3: Cloruro de [3-(cianometil)oxetan-3-il]metanosulfonilo
Se burbujeó gas de cloro a través de una solución de tiocianato de [3-(cianometil)oxetan-3-il]metilo (0,53 mmol, en bruto) en agua (10 ml) a 0 °C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se extrajo con metil terc-butil éter (2 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para proporcionar el compuesto del título (20 mg, 18%).
Ejemplo de referencia 6: N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ciclobutil}-1-oxetan-3-ilmetanosulfonamida
Este compuesto se preparó usando cloruro de oxetan-3-ilmetanosulfonilo. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (85:15) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (23 %). RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,13 (m, 1 H), 7.13 (d, J = 4Hz, 1 H), 6,70-6,69 (m, J = 4 Hz, 1 H), 4,93-4,91 (m,1 H), 4,84-4,83 (m, 2 H), 4,63-4,59 (m, 2 H), 3,74­ 3,68 (m, 1 H), 3,58-3,56 (m, 1 H), 3,47-3,45 (m, 2 H), 3,37 (s, 3 H), 2,79-2,77 (m, 2 H), 2,32-2,29 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C15 H21 N5O3S; 351,136, encontrado (M H+ ); 352,1.
Cloruro de oxetan-3-ilmetanosulfonilo
Etapa 1: Tiocianato de oxetan-3-ilmetilo
Este compuesto se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo de referencia 5, Etapa 2, sustituyendo 4-metilbencenosulfonato de [3-(cianometil)oxetan-3-il]metilo por 4-metilbencenosulfonato de oxetan-3-ilmetilo (documento WO2012/117000A1) para proporcionar el compuesto del título en bruto en forma de un sólido de color blanco. (100 %).
Etapa 2: Cloruro de oxetan-3-ilmetanosulfonilo
Este compuesto se preparó en forma en bruto (rendimiento del 25 %) siguiendo el procedimiento del Ejemplo de referencia 5, Etapa 3, sustituyendo tiocianato de [3-(cianometil)oxetan-3-il]metilo por tiocianato de oxetan-3-ilmetilo.
Ejemplo de referencia 7A y 7B: cis- y trans-3-(Cianometil)-3-metil-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}ciclobutanosulfonamida
Estos compuestos se prepararon usando una mezcla (~1:1) de cloruro de cis- y trans-3-(cianometil)-3-metilciclobutanosulfonilo. La mezcla en bruto de isómeros cis y trans se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo:acetato de etilo (10:1 a 1:15) para proporcionar una mezcla (70 mg) de los compuestos del título en forma de un sólido de color pardo claro (28 %). Después, los isómeros cis y trans se separaron por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC). isómero cis (7A): 26 mg (10 %); tiempo de retención de SFC = 7,11 minutos; RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,13 (s, 1 H), 7,13-7,13 (d, 1 H), 6,69 (d, 1 H), 4,93-4,86 (m, 1 H), 3,91-3,87 (m, 1 H), 3,71-3,65 (m, 1 H), 3,37-3,33 (m, 3 H), 2,77-2,75 (m, 2 H), 2,68 (s, 2 H), 2,41-2,36 (m, 2 H), 2,26-2,21 (m, 2 H), 1,34 (m, 3 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C18 H24N6O2S; 388,168, encontrado (M H+); 389,1.
isómero trans (7B) 24 mg (10 %); tiempo de retención de SFC = 11,35 minutos; RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 8 8.13 (s, 1 H), 7,14 (d, 1 H), 6,69 (d, 1 H), 4,93-4,86 (m, 1 H), 3,96-3,86 (m, 1 H), 3,72-3,65 (m, 1 H), 3,36-3,31 (m, 3 H), 2,77-2,75 (m, 2 H), 2,71 (s, 2 H), 2,34-2,26 (m, 6 H), 1,33 (m, 3 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C18 H24N6O2S; 388,168, encontrado (M H+ ); 389,0.
La mezcla de cloruros de cis- y trans-3-(cianometil)-3-metilciclobutanosulfonilo se preparó de la siguiente manera:
Etapa 1: 1-Metil-3-metilenociclobutanocarbonitrilo
A una solución de 3-metilenociclobutanocarbonitrilo (35,0 g, 373,0 mmol) en tetrahidrofurano (200 ml) se le añadió gota a gota bis(trimetilsilil)amida de litio (450 ml, 1 M) a -78 °C. La solución se agitó durante 1 hora a -78 °C y se añadió yodometano (30 ml, 448 mmol) a la reacción. Después de 1 hora, la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se inactivó con cloruro de amonio acuoso (380 ml) y se extrajo con metil terc-butil éter (3 x 400 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El producto en bruto se purificó por destilación a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (20 g, 50 %) en forma de un aceite transparente. RMN 1 H (400 MHz, CDCla ): 84,90-4,89 (m, 2 H), 3,24-3,20 (m, 2 H), 2,67­ 2,62 (m, 2 H), 1,50 (s, 3H).
Etapa 2: ácido 1-metil-3-metilenociclobutanocarboxílico
A una solución de 1-metil-3-metilenocidobutanocarbonitrilo (10,0 g, 93,3 mmol) en agua (50 ml) y etanol (50 ml) se le añadió hidróxido potásico (25,6 g, 466,6 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo y se agitó durante una noche. El etanol se retiró a presión reducida y la solución se enfrió por debajo de 10 °C, se acidificó con ácido clorhídrico concentrado a pH 1. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 150 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para proporcionar el compuesto del título (9 g, 77 %). RMN 1H (400 MHz, CDCls): 811,90 (s, 1 H), 4,88-4,85 (m, 2 H), 3,23-3,17 (m, 2 H), 2,53-2,41 (m, 2 H), 1,45 (s, 3 H).
Etapa 3: 1-Metil-3-metilenoddobutanocarboxilato de etilo
A una solución de ácido 1-metil-3-metilenociclobutanocarboxílico (6 g, 47,6 mmol) en diclorometano (30 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota cloruro de tionilo (11,0 ml, 143 mmol). La solución se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se añadieron tres gotas de N,N-dimetilformamida a la solución. La solución se agitó a 0 °C durante 30 minutos. El disolvente se evaporó y se añadieron diclorometano (20 ml) y etanol (125 ml) al residuo. La solución resultante se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. El disolvente se evaporó y se añadió agua (20 ml) al residuo. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (4 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (20:1 a 10:1) para proporcionar el compuesto del título (5 g, 68 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla): 84,85­ 4,83 (m, 2 H), 4,17-4,12 (m, 2 H), 3,18-3,12 (m, 2 H), 2,48-2,42 (m, 2H), 1,41 (s, 3 H), 1,27-1,23 (m, 3 H).
Etapa 4: (1-Metil-3-metilenocidobutil)metanol
Una mezcla de 1-metil-3-metilenociclobutanocarboxilato de etilo (4,55 g, 29,5 mmol) hidruro de litio y aluminio (2,8 g, 72 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) se agitó durante una noche a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le añadió Na2SO4-10H2O (3,7 g, 11,5 mmol) y la mezcla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Los sólidos se retiraron por filtración y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se extrajo con diclorometano (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para proporcionar el compuesto del título (2,6 g, 79 %) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCh): 84,79-4,78 (m, 2 H), 3,48 (s, 2 H), 2,53-2,48 (m, 2 H), 2,36-2,27 (m, 2 H), 1,16 (s, 3 H).
Etapa 5: 4-Metilbencenosulfonato de (1-metil-3-metilenoddobutil)metilo
Este compuesto se preparó siguiendo el Ejemplo de referencia 4, Etapa 4, sustituyendo (3-hidroxiciclobutil)acetonitrilo de (1-metil-3-metilenociclobutil)metanol. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (20:1 a 4:1) para proporcionar el compuesto del título (70 %). RMN 1H (400 MHz, CDCh): 87,79 (d, 2 H), 7,34 (d, 2 H), 4,79-4,78 (m, 2 H), 3,90 (s, 2 H), 2,51-2,47 (m, 2 H), 2,44 (s, 3 H), 2,35-2,31 (m, 2 H), 1,15 (s, 3 H).
Etapa 6: (1-Metil-3-metilenoddobutil)acetonitrilo
Una mezcla de 4-metilbencenosulfonato de (1-metil-3-metilenociclobutil)metilo (2,5 g, 9,4 mmol), cianuro potásico (1,3 g, 19 mmol) y N,N-dimetilformamida (8 ml) se agitó durante una noche a 70 °C. Se añadieron agua (10 ml) y metil terc-butil éter (20 ml) a la mezcla y la capa orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo con metil terc-butil éter (3 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (15 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (10:1 a 5:1) para proporcionar el compuesto del título (1,1 g, 97 %) en forma de un aceite de color pardo claro. RMN 1H (400 MHz, CDCh): 84,88-4,87 (m, 2 H), 2,62­ 2,54 (m, 2 H), 2,50 (s, 2 H), 1,33 (s, 3 H).
Etapa 7: (1-Metil-3-oxoddobutil)acetonitrilo
Se burbujeó gas ozono a través de una solución de (1-metil-3-metilenociclobutil)acetonitrilo (1,08 g, 8,91 mmol) en diclorometano (30 ml) -78 °C durante 10 minutos. Después de purgarse la solución con gas nitrógeno, se añadió gota a gota dimetilsulfuro (10 ml) a la solución a -78 °C. La solución se agitó durante 30 minutos a -78 °C y el disolvente se retiró a presión reducida. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (20:1 a 8:1) para proporcionar el compuesto del título (920 mg, 84 %) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCh): 83,11-3,06 (m, 2 H), 2,96-2,91 (m, 2 H), 2,69 (s, 2 H), 1,53 (s, 3 H).
Etapa 8: (3-Hidroxi-1-metilddobutil)acetonitrilo
A una solución de (1-metil-3-oxociclobutil)acetonitrilo (400 mg, 3,25 mmol) en tetrahidrofurano (15 ml) se le añadió borohidruro sódico (246 mg, 6,5 mmol). La mezcla se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. Se añadió acetona (2 ml) y después el disolvente se evaporó. Se añadió agua (10 ml) al residuo y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (4 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (10:1 a 1:1) para proporcionar el compuesto del título (300 mg, 74 %) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCh): 84,38-4,34 (m, 2 H), 2,46-2,27 (m, 4 H), 1,94-1,86 (m, 2 H), 1,33-1,12 (m, 3 H).
Etapa 9: 4-metilbencenosulfonato de 3-(danom etil)-3-m etilddobutilo
Este compuesto se preparó siguiendo el Ejemplo de referencia 7, Etapa 5, sustituyendo (1-metil-3-metilenociclobutil)metanol por (3-hidroxi-1-metilcidobutil)acetonitrilo. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (20:1 a 4:1) para proporcionar el compuesto del título (36 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCls ): 87,77 (d, 2 H), 7,35 (d, 2 H), 4,89-4,81 (m, 1 H), 2,45 (s, 3 H), 2,43-2,34 (m, 3 H), 2,26-2,21 (m, 1 H), 2,15-2,11 (m, 2 H), 1,33 (s, 3 H).
Etapa 10: S-[3-(Cianometil)-3-metilddobutil]etanotioato
Este compuesto se preparó en un rendimiento del 89 % (en bruto) siguiendo el procedimiento del Ejemplo de referencia 4, Etapa 5, sustituyendo 4-metilbenceno-sulfonato de 3-(cianometil)ciclobutilo por 4-metilbencenosulfonato de 3-(cianometil)-3-metilciclobutilo. RMN 1 H (400 MHz, CDCla ): 83,12 (s, 1 H), 2,46-2,30 (m, 4 H), 2,19 (s, 2 H), 1,29 (s, 1 H) 1,26-1,24 (m, 1 H), 1,18-1,14 (m, 1 H), 1,13 (s, 3H).
Etapa 11: cloruro de 3-(danometil)-3-metilddobutanosulfonilo
Este compuesto se preparó siguiendo el Ejemplo de referencia 4, Etapa 6, sustituyendo S-[3-(cianometil)-ciclobutil]etanotioato por S-[3-(cianometil)-3-metilciclobutil]etanotioato. El compuesto en bruto se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (90:10 a 30:70) para proporcionar el compuesto del título en forma de un líquido amarillo (66 %). r Mn 1 H (400 MHz, CDCh): 84,45-4,38 (m, 1 H), 2,67-2,55 (m, 4 H), 2,46-2,40 (m, 2 H), 1,42-1,40 (m, 3 H).
Ejemplo de referencia 8: 4-Ciano-N-{ds-3-[metil(7H-pirm lo[2,3-d]pirím idin-4-il)amino]-ddobutil}piridin-2-sulfonamida
Etapa 1: 2-(Bendltio)isonicotinonitrilo
Una suspensión al 60 % de hidruro sódico en aceite mineral (8,36 g, 210,0 mmol) se suspendió en tetrahidrofurano (100 ml). Después se añadió gota a gota una solución de mercaptano bencilo (21,5 g, 173 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml). Se formó una suspensión espesa durante la adición. Se añadió 4-ciano-2-cloropiridina (12,5 g, 90,2 mmol) y la mezcla resultante se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. Después de inactivarse cuidadosamente con agua, la mezcla se repartió entre agua y éter dietílico. La capa de éter se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. Se añadió heptano al residuo con sólidos que se formaron rápidamente. Los sólidos se recogieron por filtración, se lavaron con heptano y se secaron para dar (33,02 g, 84 %) del compuesto del título en forma de un sólido de color blanquecino. RMN 1 H (400 MHz, CDCh): 88,61 (d, 1 H), 7,25-7,46 (m, 6 H), 7,16-7,22 (m, 1 H), 4,47 (s, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C^H-k^ S ; 226,056, encontrado (M H+); 227,1.
Etapa 2: cloruro de 4-cianopiridin-2-sulfonilo
A una mezcla agitada mecánicamente de 2-(benciltio)isonicotinonitrilo (8,92 g, 39,4 mmol) en diclorometano (139 ml) y agua (31 ml) se le añadió gota a gota cloruro de sulfurilo (22,5 ml, 278 mmol), manteniendo la temperatura de la mezcla por debajo de 3 °C. Después de que se completara la adición, la mezcla se agitó durante 30 minutos con enfriamiento continuo en un baño de hielo. Se añadió una suspensión de agua (50 ml) e hielo (20 g). La fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano. Los extractos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron a presión reducida para proporcionar el compuesto del título en bruto.
Etapa 3: 4-Ciano-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}piridin-2-sulfonamida
Una solución de cloruro de 4-cianopiridin-2-sulfonilo (9,7 g, 47,9 mmol) en N,N-dimetilformamida (10 ml) se añadió a una solución de clorhidrato de cis-N-metil-N-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilciclobutano-1,3-diamina (8,0 g, 36,8 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (150 mg, 0,03 mmol) en N,N-dimetilformamida (90 ml) a temperatura ambiente. Se añadió diisopropiletilamina (13 ml, 77 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 ml) y se añadió una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico. Se añadió agua para disolver los sólidos precipitados. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron cuatro veces con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentraron a presión reducida. Una mezcla 1:1 de acetato de etilo y hexanos se añadió al residuo. Los sólidos se recogieron por filtración y después se disolvieron en diclorometano y una cantidad mínima de metanol. La solución resultante se pasó a través de un lecho de sílice eluyendo con una solución al 5 % de metanol en diclorometano. Los disolventes se evaporaron para proporcionar un sólido al que se añadió una solución al 10% de metanol en diclorometano. La mezcla se agitó brevemente y después se dejó en reposo durante una noche. Los sólidos se filtraron, se lavó con diclorometano y se secaron para proporcionar el compuesto del título (5,58 g, 39 %) en forma de un sólido de color blanquecino. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 811,62 (s a, 1 H), 9,02 (d, 1 H), 8,52 (d, 1 H), 8,38 (s, 1 H), 8,17 (dd, 1 H), 8,07 (s, 1 H), 7,10-7,15 (m, 1 H), 6,59 (dd, 3,41 Hz, 1 H), 4,80-4,91 (m, 1 H), 3,58-3,71 (m, 1 H), 3,19 (s, 3 H), 2,25-2,36 (m, 2 H), 2,10 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17 H17 N7O2S; 383,116, encontrado (M H+ ); 384,1.
Ejemplo de referencia 9: 3-(1-Hidroxi-1-metiletil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4il)amino]ddobutil}bencenosulfonamida
Etapa 1: 3-[({ds-3-[Metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]-ddobutil}amino)-sulfonil]benzoato de metilo
A una suspensión de clorhidrato de cis-N-metil-N-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilcidobutano-1,3-diamina (1,8 g, 8,29 mmol) en N,N-dimetilformamida (100 ml) se le añadió en porciones trietilamina (6,7 ml, 49 mmol) a 0 °C. Se añadió 3-(clorosulfonil)benzoato de metilo (2,3 g, 9,9 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se retiró al vacío. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de metanol en diclorometano (3 % a 10 %) para proporcionar el compuesto del título (1,6 g, 47 %) en forma de un sólido de color amarillo.
Etapa 2: 3-(HidmximeW)-N-{ds-3-[metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ddo-buW}bencenosulfonamida
A una solución de 3-[({cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}amino)sulfonil]benzoato de metilo (800 mg, 1,92 mmol) en tetrahidrofurano (120 ml) se le añadió hidruro de litio y aluminio (0,25 g, 6,7 mmol) a 0 °C. La reacción se calentó a 25 °C y se agitó durante 3 horas. La reacción se inactivó con agua (2 ml) y se agitó durante 15 minutos. La mezcla de reacción se filtró. La torta de filtro se agitó en tetrahidrofurano (50 ml) y se filtró de nuevo. El filtrado combinado se concentró a sequedad para proporcionar el compuesto del título (430 mg, 58 %) en forma de un sólido de color amarillo.
Etapa 3: 3-Formil-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirím idin-4-il)amino]-ddobutil}bencenosulfonamida
A una solución de 3-(hidroximetil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}bencenosulfonamida (400 mg, 1,03 mmol) en cloroformo (50 ml) y metanol (5 ml) se le añadió dióxido de manganeso (0,89 g, 10,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante una noche. La mezcla de reacción se filtró y la torta de filtro se lavó con cloroformo (3 x 25 ml). Los filtrados combinados se concentraron. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de metanol en diclorometano (2 % a 8 %) para proporcionar el compuesto del título (240 mg, 60 %) en forma de un aceite.
Etapa 4: 3-(1-HidmxieW)-N-{ds-3-[metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ddobuW}bencenosulfonamida
A una solución de 3-formil-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}bencenosulfonamida (260 mg, 0,68 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) se le añadió bromuro de metilmagnesio (1,8 ml, 5,4 mmol) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se agitó a 25 °C durante una noche y después se inactivó con cloruro de amonio acuoso (10 ml). La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x25 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa para proporcionar el compuesto del título (60 mg, 22 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,6 (s, 1 H), 8,08 (s, 1 H), 8,03 (d, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 7,70 (m, 1 H), 7,55 (m, 2 H), 7,15 (m, 1 H), 6,61 (m, 1 H), 5,44 (m, 1 H), 4,85 (m, 1 H), 3,56 (m, 1 H), 3,18 (s, 3 H), 2,18 (m, 2 H), 2,04 (m, 2 H), 1,32 (d, 3 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C19 H23N5O3S; 401,152, encontrado (M H+); 402,2.
Etapa 5: 3-AceW-N-{ds-3-[metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-ddobuW}bencenosulfonamida
A una solución de 3-(1-hidroxietil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}bencenosulfonamida (60 mg, 0,15 mmol) en cloroformo (30 ml) y metanol (5 ml) se le añadió dióxido de manganeso (190 mg, 2,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 45 °C durante una noche. Después, la mezcla de reacción se filtró y la torta de filtro se lavó con cloroformo (3 x 25 ml). Los filtrados combinados se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa para proporcionar el compuesto del título (15 mg, 25 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 811,58 (s, 1 H), 8,31 (s, 1 H), 8,21 (m, 2 H), 8,16 (m, 2 H), 7,76 (m, 1 H), 7,09 (d, 1 H), 6,56 (s, 1 H), 4,82 (m, 1 H), 3,54 (m, 1 H), 3,14 (s, 3 H), 2,81 (m, 3 H), 2,26 (m, 2 H), 1,98 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C19 H21 N5O3S; 399,136, encontrado (M H+ ); 400,1.
Etapa 6: 3-(1-Hidmxi-1-metiletil)-N-{ds-3-[metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirím idin-4-il)amino]ddobutil}bencenosulfonamida
A una solución de 3-acetil-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}bencenosulfonamida (240 mg, 0,58 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) se le añadió bromuro de metilmagnesio (2,4 ml, 7,2 mmol) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se agitó a 25 °C durante 2 horas y se inactivó con una solución acuosa de cloruro de amonio (10 ml). La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa para proporcionar el compuesto del título (101 mg, 42 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 811,6 (s, 1 H), 8,05 (s, 1 H), 7,97 (m, 2 H), 7,67 (m, 2 H), 7,52 (m, 1 H), 7,12 (m, 1 H), 6,57 (m, 1 H), 5,29 (s, 1 H), 4,85 (m, 1 H), 3,53 (m, 1 H), 3,15 (s, 3 H), 2,24 (m, 2 H), 1,98 (m, 2 H), 1,44 (s, 6 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C20H25N5O3S; 415,168, encontrado (M H+); 416,0.
Ejemplo de referencia 10: 1-Cidopropil-N-{trans-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}metanosulfonamida
Este compuesto se sintetizó partiendo de [trans-3-(metilamino)-ciclobutil]carbamato de bencilo (Ejemplo de referencia 1, Etapa 1), siguiendo procedimientos similares a los descritos para el Ejemplo de referencia 1, Etapas 2 y 3 para obtener clorhidrato de trans-N-metil-N-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilciclobutano-1,3-diamina. Al clorhidrato resultante (60 mg, 0,28 mmol) en THF (10 ml) se le añadió carbonato potásico (76 mg, 0,55 mmol), H2O (5 ml) y cloruro de ciclopropilmetanosulfonilo (52 mg, 0,33 mmol). La mezcla se agitó durante dos horas, se diluyó con diclorometano, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (7 mg; 8 %). RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,14 (s, 1 H), 7,16 (d, 1 H), 6,72 (d, 1 H), 5,44-5,40 (m, 1 H), 4,07-4,06 (m, 1 H), 3,41 (s, 3 H), 3,01-2,99 (m, 2 H), 2,81-2,74 (m, 2 H), 2,54-2,49 (m, 2 H), 1,15-1,13 (m, 1 H), 0,720-0,69 (m, 2 H), 0,42-0,41 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C15 H21 N5O2S; 335,142, encontrado (M H+); 336,1.
Ejemplo de referencia 11: N-{(1S,3R)-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]cidopentil}propano-1-sulfonamida
Este compuesto se preparó siguiendo el Ejemplo de referencia 10 sustituyendo [trans-3-(metilamino)-ciclobutil]carbamato de bencilo por (1S,3R)-N-bencil-N'-metilciclopentano-1,3-diamina, clorhidrato de trans-N-metil-N-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilciclobutano-1,3-diamina por clorhidrato de (1R,3S)-N-metil-N-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il-ciclopentano-1,3-diamina y cloruro de ciclopropilmetanosulfonilo por cloruro de propano-1-sulfonilo para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanquecino (11 %). El compuesto en bruto se purificó usando cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa. RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,08 (s, 1 H), 7,08 (s, 1 H), 6,65 (s, 1 H), 5,27-5,23 (m, 1 H), 3,81-3,76 (m, 1 H), 3,31 (s, 3 H), 2,33-2,29 (m, 1 H), 2,13-2,04 (m, 1 H), 1,98-1,92 (m, 2 H), 1,82-1,75 (m, 4 H), 1,06 (t, 3 H), 0,42-0,41 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C15 H23N5O2S; 337,157, encontrado (M H+); 337,8. Se preparó (1S,3R)-N-bencil-N'-metilciclopentano-1,3-diamina como sigue a continuación:
Etapa 1: (1R,3S)-3-Aminoddopentil]carbamato de bencilo
Se añadió ácido trifluoroacético (15 ml, 190 mmol) a una solución de terc-butil (1R,3S)-ciclopentano-1,3-diilbiscarbamato de bencilo (preparado como se describe en el documento WO2011/086053A1) (5,02 g, 15,0 mmol) en diclorometano (75 ml) a temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 2 horas y después se concentró para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color pardo claro (6,70 g, en bruto)
Etapa 2: [(1R,3S)-3-(Bendlamino)ddopentil]carbamato de bencilo
Se añadió triacetoxihidroborato sódico (4,38 g, 20,0 mmol) a una solución de [(1R,3S)-3-aminociclopentil]carbamato de bencilo (5,23 g, 15,0 mmol) y benzaldehído (1,7 ml, 16,0 mmol) en diclorometano (75 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 21 horas y después se añadió una solución acuosa 1 M de hidróxido sódico (75 ml) para hacer la solución básica. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El material en bruto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (100:0 a 88:12) para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (3,47 g, 71 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCh): 8 7,35-7,31 (m, 5 H), 7,30-7,26 (m, 5 H), 5,07 (s, 2 H), 4,17-4,07 (m, 1 H) 3,76-3,68 (m, 2 H), 3,27-3,20 (m, 1 H), 2,02­ 1,51 (m, 6 H).
Etapa 3: (1S,3R)-N-Bendl-N'-metilddopentano-1,3-diamina
Se añadió en porciones hidruro de litio y aluminio (1,02 g, 26,9 mmol) a una solución de [(1R,3S)-3-(bencilamino)ciclopentil]carbamato de bencilo (3,47 g, 10,7 mmol) en tetrahidrofurano (70 ml) a temperatura ambiente. La reacción se calentó a reflujo durante 3,5 horas. Después, la mezcla se enfrió en un baño de hielo y se inactivó secuencialmente con agua (1,0 ml), solución acuosa al 15% de hidróxido sódico (1,0 ml) y agua (3,0 ml). La suspensión se diluyó con acetato de etilo y se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró y el residuo se recogió en una solución acuosa 0,5 M de ácido clorhídrico. La mezcla se lavó con éter dietílico (2 x 20 ml) y la solución acuosa se hizo básica (pH ~ 11) con hidróxido sódico. La mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El material en bruto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (90:10) para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (204 mg, 9 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCh): 87,33-7,20 (m, 5 H), 3,74 (s, 2 H), 3,19-3,13 (m, 1 H), 3,08-3,02 (m, 1 H) 2,39 (s, 3 H), 2,09-2,03 (m, 1 H), 1,87-1,81 (m, 2 H), 1,67-1,54 (m, 2 H), 1,46-1,39 (m, 1 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C13 H20N2 ; 204,163, encontrado (M H+ ); 205,1.
Ejemplo de referencia 12: 1-(3,3-Difluoroddobutil)-N-{ds-3-[metil(7H-pirm lo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ciclobutil}metanosulfonamida
Etapa 1: [ds-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}am ino)ddobutil]carbamato de bencilo
Se mezclaron 4-cloro-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (15 g, 48,7 mmol) y [cis-3-(metilamino)ciclobutil]carbamato de bencilo (17,2 g, 63,5 mmol) con alcohol isopropílico (180 ml) y diisopropiletilamina (28 ml, 161 mmol). La suspensión resultante se calentó a 75 °C durante 6 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se lavó con alcohol isopropílico (150 ml) y se secó en un horno a 50 °C para dar el compuesto del título (23,5 g, 95 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-da): 58,38 (s, 1 H), 8,03 (d, 2 H), 7,45 (d, 1 H), 7,38-7,28 (m, 4 H), 7,26 (s, 1 H), 7,25 (d, 1 H), 6,61 (d, 1 H), 5,08 (s, 2 H), 4,96 (d, 1 H), 4,77 (m, 1 H), 3,88 (m, 1 H), 3,23 (s, 3 H), 2,71 (m, 2 H), 2,36 (s, 3 H), 2,18 (m, 2 H).
Etapa 2: dibromhidrato de ds-N-Metil-N-{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirmlo[2,3-d]pinmidin-4-il}ddobutano-1,3-diamina
Se suspendió [cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)cidobutil]carbamato de bencilo (15,2 g, 30,1 mmol) en acetato de etilo (45 ml) y ácido acético (45 ml). A la suspensión se le añadió lentamente una solución 4 M de HBr en ácido acético (45 ml, 180 mmol), manteniendo la temperatura por debajo de 25 °C. La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los sólidos se recogieron por filtración, se lavaron con acetato de etilo (450 ml) y se secaron a 40 °C para proporcionar el compuesto del título (16 g; 100 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 58,31 (s, 1 H), 8,20 (s, 2 H), 7,97 (d, 2 H), 7,72 (d, 1 H), 7,44 (d, 2 H), 7,08 (d, 1 H), 4,93 (m, 1 H), 3,54 (m, 1 H), 3,30 (s, 3 H), 2,50 (m, 4 H), 2,35 (s, 3 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C18 H21 N5O2S; 371,142, encontrado (M H+); 372,1.
Etapa 3: ({[(3,3-Difluoroddobutil)metil]tio}metil)benceno
Una mezcla de 4-metilbencenosulfonato de (3,3-difluorociclobutil)metilo (véase el documento W02010/032200A1) (4 g, 14,5 mmol), imidotiocarbamato de bencilo (3,53 g, 17,4 mmol), solución de hidróxido sódico (1,45 g, 36,2 mmol, disuelto en 16 ml de agua) y N,N-dimetilformamida (16 ml) se agitó a 60 °C durante 16 horas. Se añadieron agua (40 ml) y acetato de etilo (150 ml). La capa orgánica se lavó con agua (40 ml), se separó, se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (100:0 a 95:5) para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (3,2 g, 81 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCla ): 57,34-7,24 (m, 5 H), 5,71 (s, 2 H), 2,71-2,61 (m, 2 H), 2,57-2,55 (m, 2 H), 2,30-2,14 (m, 3 H).
Etapa 4: Cloruro de (3,3-difluoroddobutil)metanosulfonilo
Este compuesto se preparó siguiendo el procedimiento del Ejemplo de referencia 8, Etapa 2, sustituyendo 2-(benciltio)isonicotinonitrilo por S-[3-(cianometil)-3-metilciclobutil]etanotioato para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (93 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCla ): 53,88-3,86 (m, 2 H), 3,03-2,94 (m, 3 H), 2,61-2,49 (m, 2 H).
Etapa 5: 1-(3,3-DifluomddobuW )-N-[ds-3-(metil(7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirmlo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ciclobutil]metanosulfonamida
Una solución de cloruro de (3,3-difluorociclobutil)metanosulfonilo (2,5 g, 12,19 mmol) en 10 ml de diclorometano se añadió gota a gota a una solución de dibromhidrato de cis-N-metil-N-{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}ciclobutano-1,3-diamina (3,25 g, 6,10 mmol) y trietilamina (3,08 g, 30,49 mmol) en diclorometano (150 ml) a 0 °C durante 15 minutos. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Se añadió agua (50 ml) y la capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 150 ml) y las capas orgánicas combinadas se separaron y se secaron sobre sulfato sódico. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de diclorometano y metanol (100:0 a 90:10) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (2,0 g, 61 %). CL/EM (masa exacta) calculado para C23H27F2 N5O4S2 ; 539,147, encontrado (M H+ ); 540,1.
Etapa 6: 1-(3,3-DifluomddobuW)-N-{ds-3-[metil(7H-pirmlo[2,3-d]pinmidin-4-il)aminolddobuW}metanosulfonamida
Una solución de 1-(3,3-difluorociclobutil)-N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)-sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metanosulfonamida (2 g, 3,71 mmol) y monohidrato de hidróxido de litio (780 mg, 18,6 mmol) en etanol (40 ml) y agua (20 ml) se agitó a 60 °C durante 4 horas. El etanol se evaporó y la capa acuosa restante se neutralizó a pH 7 con ácido clorhídrico y posteriormente se extrajo con diclorometano (2 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron, se concentraron y se purificaron por cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa para proporcionar el compuesto del título (800 mg, 56 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 58,15 (s, 1H), 8,13 (s, 1 H), 7,16-7,15 (m, 1 H), 6,73-6,62 (m, 1 H), 4,95­ 4,88 (m, 1 H), 3,73-3,71 (m, 1 H), 3,38 (s, 3 H), 3,28-3,26 (m, 2 H), 2,87-2,78 (m, 4 H), 2,63-2,61 (m, 1 H), 2,56-2,48 (m, 2 H), 2,35-2,28 (m, 2 H). c L / E M (masa exacta) calculado para C16 H21 F2 N5O2S; 385,138, encontrado (M H+); 386,1.
Los siguientes compuestos, Ejemplos de referencia 13-14, se prepararon a partir de dibromhidrato de cis-N-metil-N-{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}ciclobutano-1,3-diamina (Ejemplo de referencia 12, Etapa 2) de una manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 12, Etapa 5, sustituyendo el cloruro de (3,3-difluorociclobutil)metanosulfonilo por cloruro de sulfonilo y usando el procedimiento de desprotección ilustrado en el Ejemplo de referencia 12, Etapa 6.
Ejemplo de referencia 13: 3,3-Difluoro-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}ciclobutanosulfonamida
Este compuesto se preparó usando cloruro de 3,3-difluorociclobutanosulfonilo usando el procedimiento en la Publicación PCT n.° WO2011/068881. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (80:20 a 10:90) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanquecino (22 % en 2 etapas). RMN 1 H (400 m Hz , metanol-d4): 88,13 (s, 1 H), 7,13 (d, 1 H), 6,70 (d, 1 H), 4,86-4,81 (m, 1H), 3,78-3,72 (m, 2 H), 3,35 (s, 3 H), 3,01-2,93 (m, 4 H), 2,78-2,76 (m, 2 H), 2,32­ 2,25 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C15 H19 F2N5O2S; 371,123, encontrado (m H+ ); 372,1.
Ejemplo de referencia 14: 1-Cidopmpil-N-{cis-3-[metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirím idin-4-il)amino]ddobutil}metanosulfonamida
Este compuesto se preparó en forma de un sólido de color blanco usando cloruro de ciclopropilmetanosulfonilo (73 % en 2 etapas). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-da ): 8 11,64 (s a, 1 H), 8,11 (s, 1 H), 7,53 (d, 1 H), 7,12-7,19 (m, 1 H), 6,64 (m, 1 H), 4,84-4,97 (m, 1 H), 3,54-3,70 (m, 1 H), 3,26 (s, 3 H), 2,93 (d, 2 H), 2,55-2,66 (m, 2 H), 2,29-2,22 (m, 2 H), 0,96-1,09 (m, 1 H), 0,53-0,64 (m, 2 H), 0,29-0,39 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C15 H19 F2 N5O2S; 335,142, encontrado (M H+); 336,0.
Ejemplo de referencia 15: 1-Cidopropil-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)am ino]ddobutil}azetidina-3-sulfonamida
Etapa 1: 3-({[ds-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirm lo[2,3-d]pirím idin-4-il}am ino)ddobutil]amino}sulfonil)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo
Dibromhidrato de cis-N-metil-N-{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}ciclobutano-1,3-diamina (7,0 g, 18,8 mmol) se convirtió en base libre agitándose con una solución acuosa 1 N de hidróxido sódico en exceso durante 3 minutos y después se extrajo en diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró. La base libre restante se recogió en diclorometano (200 ml), se enfrió a 0 °C y se trató con trietilamina (13 ml, 94 mmol) y 3-(clorosulfonil)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo. La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 10 minutos. La mezcla en bruto se lavó con agua y salmuera, después se secó sobre sulfato sódico y se concentró para proporcionar el producto en bruto en forma de un sólido de color blanco. El sólido se cristalizó usando una mezcla de diclorometano y éter dietílico para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (9,61 g, 90 %). RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,19 (s, 1 H), 7,92-8,01 (m, 2 H), 7,54 (d, 1 H), 7,35 (d, 2 H), 6,86 (d, 1 H), 4,76-4,65 (m, 1 H), 4,18 (s a, 2 H), 3,99-4,10 (m, 3 H), 3,66-3,78 (m, 1 H), 3,25 (s, 3 H), 2,64-2,78 (m, 2 H), 2,37 (s, 3 H), 2,10-2,25 (m, 2 H), 1,41 (s, 9 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C26H34N6O6S2 ; 590,198, encontrado (M H+ ); 591,45.
Etapa 2: N-[cis-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il]amino)ciclobutil]azetidina-3-sulfonamida
Se añadió cloruro de acetilo (0,20 ml, 2,8 mmol) a una solución de 3-({[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]amino}sulfonil)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo (1,64 g, 2,78 mmol) en diclorometano anhidro (18 ml) y metanol (7 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. El precipitado de color blanco se retiró por filtración y se recogió en una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (20 ml). La solución resultante se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para proporcionar el compuesto del título (810 mg, 60 %) en forma de un sólido de color blanco. c L/EM (masa exacta) calculado para C21 H26N6O4S2 ; 490,146, encontrado (M H+ ); 491,0.
Etapa 3: 1-Cidopmpil-N-[ds-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirm lo[2,3-d]pirím idin-4-il}amino)ddobutil]azetidina-3-sulfonamida
Se combinaron N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]azetidin-3-sulfonamida (810 mg, 1,65 mmol), metanol (10 ml), tamices moleculares y [(1-etoxiciclopropil)oxi](trimetil)silano (0,53 ml, 2,64 mmol) se combinaron en un recipiente de reacción herméticamente sellable. El recipiente se purgó con nitrógeno y se añadió ácido acético (1,28 ml, 8,26 mmol). El recipiente se cerró herméticamente y después se calentó a 80 °C durante 2 horas. Después de enfriar la mezcla a temperatura ambiente, se añadió cianoborohidruro sódico (273 mg, 4,13 mmol). El recipiente se volvió a cerrar herméticamente y se calentó lentamente hasta 40 °C durante 1,5 horas. La mezcla en bruto se filtró sobre un lecho de Celite, aclarándose con metanol. El filtrado se concentró y el residuo se recogió en una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico. La solución resultante se extrajo con diclorometano (5 x 20 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para proporcionar el compuesto del título (576 mg, 74 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, metanold4): 8 8,23 (s, 1 H), 7,95-8,05 (m, 2 H), 7,58 (d, 1 H), 7,39 (d, 2 H), 6,90 (d, 1 H), 4,69-4,83 (m, 1 H), 3,94-4,09 (m, 1 H), 3,65-3,75 (m, 3 H), 3,54-3,64 (m, 2 H), 3,29 (s, 3 H), 2,67-2,79 (m, 2 H), 2,41 (s, 3 H), 2,15-2,29 (m, 2 H), 2,02-2,15 (m, 1 H), 0,43-0,51 (m, 2 H), 0,29-0,39 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C24H30N6O4S2 ; 530,177, encontrado (M H+ ); 531,0.
Etapa 4: 1-Cidopmpil-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirím idin-4-il)amino]ddobutil}azetidina-3-sulfonamida
Una solución de carbonato de cesio (976 mg, 3,0 mmol) en agua (5 ml) se añadió a una solución de 1-ciclopropil-N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]azetidin-3-sulfonamida (530 mg, 1,0 mmol) en etanol (10 ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 16 horas. Después de que se retirara el disolvente, se recogió el material restante en agua y se extrajo con una mezcla de diclorometano y metanol (96:4; 3 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El sólido en bruto se cristalizó en metanol para proporcionar el compuesto del título (225 mg, 59 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, m e ta n o ^): 8 8,10 (s, 1 H), 7,09 (d, 1 H), 6,66 (d, 1 H), 4,88-4,80 (m, 1 H), 4,03-3,96 (m, 1 H), 3,73-3,65 (m, 3 H), 3,61-3,57 (m, 2 H), 3,32 (s, 3 H), 2,77-2,68 (m, 2 H), 2,28-2,19 (m, 2 H), 2,08-2,03 (m, 1 H), 0,46­ 0,41 (m, 2 H), 0,34-0,31 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17 H24N6O2S; 376,168, encontrado (M H+); 377,0.
Ejemplo de referencia 16: N-(CidopropilmeW)-N'-{ds-3-[metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ddobutil}sulfamida
Etapa 1: N-[ds-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ddobutil]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-sulfonamida
A una solución de isocianato de clorosulfonilo (1,76 ml, 20,6 mmol) en diclorometano (150 ml) se le añadió gota a gota una solución de 2-bromoetanol (1,43 ml, 20,6 mmol) en diclorometano (80 ml) a 0 °C. Después de 30 minutos a 0 °C, se añadió gota a gota una solución de dibromhidrato de cis-N-metil-N-{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}ciclobutano-1,3-diamina (11,0 g, 20,6 mmol) y trietilamina (10,42 g, 103,2 mmol) en diclorometano seco (80 ml) y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante una noche. La solución de reacción se disolvió en diclorometano (1 l), se lavó con una solución acuosa 1 M de ácido clorhídrico (2 x 800 ml) y salmuera (500 ml). La solución se secó sobre sulfato sódico y se concentró para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (8,5 g, 79 %). RMN 1 H (400 MHz, CD3OD): 88,22 (s, 1 H), 8,00 (d, 2 H), 7,58 (d, 1 H), 7,38 (d, 2 H), 6,91 (d, 1 H), 4,88 (m, 1 H), 4,45-4,41 (m, 2 H), 4,06-4,02 (m, 2 H), 3,75 (m, 1 H), 3,29 (s, 3 H), 2,72-2,69 (m, 2 H), 2,40 (s, 3 H); 2,30-3,27 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C21 H24N6O6S2 ; 520,120, encontrado (M H+ ); 521,4.
Etapa 2: N-(Cidopmpilmetil)-N'-[ds-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirm lo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ciclobutil]sulfamida
Una solución de N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-sulfonamida (150 mg, 0,29 mmol), ciclopropanometilamina (51 mg, 0,72 mmol) y trietilamina (116 mg, 1,15 mmol) en acetonitrilo (3 ml) se agitó durante 15 minutos a 100 °C usando calentamiento con microondas. La mezcla de reacción se concentró para proporcionar el compuesto del título en bruto (146 mg, rendimiento en bruto del 100%) en forma de un aceite de color amarillo. CL/e M (masa exacta) calculado para C22H28N6O4S2 ; 504,161, encontrado (M H+ ); 505,2.
Etapa 3: N-(Ciclopropilmetil)-N'-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}sulfamida
Una solución de N-(ciclopropilmetil)-N'-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]sulfamida (146 mg, 0,29 mmol), monohidrato de hidróxido de litio (48 mg, 1,15 mmol) en etanol (5 ml) y agua (2,5 ml) se agitó a 100 °C durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el producto en bruto se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa para proporcionar el compuesto del título (14 mg, 14 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,12 (s, 1 H), 7,13 (d, 1 H), 6,90 (d, 1 H), 4,90-4,86 (m, 1 H), 3,63-3,59 (m, 1 H), 3,37 (s, 3 H), 2,85-2,83 (m, 2 H), 2,78-2,71 (m, 2 H), 2,33-2,26 (m, 2 H), 1,05-1,03 (m, 1 H), 0,57-0,52 (m, 2 H); 0,30-0,25 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C15 H22N6O2S; 350,152, encontrado (M H+); 351,2.
Los siguientes compuestos, Ejemplos de referencia 17-18, se prepararon a partir de N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]-2-oxo-1,3-oxazolidina-3-sulfonamida (Ejemplo de referencia 16, Etapa 1) de una manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 16, Etapa 2, sustituyendo ciclopropanometilamina por la amina indicada y usando el procedimiento de desprotección ilustrado en el Ejemplo de referencia 16, Etapa 3.
Ejemplo de referencia 17A y 17B: (R)- y (S)-3-Ciano-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ciclobutil}pirrolidin-1-sulfonamida
Estos compuestos se prepararon usando clorhidrato de pirrolidin-3-carbonitrilo racémico. La mezcla racémica en bruto se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento para proporcionar un sólido de color blanco (60 mg, 52 % en 2 etapas). Los enantiómeros se separaron por cromatografía de fluidos supercríticos.
Enantiómero A (17A): 24 mg (21 %): RMN 1 H (400 MHz, CD3OD): 88,13 (s, 1 H), 7,13 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 6,69 (d, 1 H, J = 3,6 Hz, 1 H), 4,87-4,84 (m, 1 H), 3,73-3,67 (m, 1 H), 3,65-3,57 (m, 1 H), 3,53-3,50 (m, 2 H), 3,48-3,44 (m, 2 H), 3.405 (s, 3 H), 2,77-2,75 (m, 2 H), 2,42-2,20 (m, 4 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C16H21 N7O2S; 375,148, encontrado (M H+ ); 376,1. Tiempo de retención HPLC quiral = 5,97 minutos.
Enantiómero B (17B): 25 mg (21 %). RMN 1 H (400 MHz, CD3OD): 88,13 (s, 1 H), 7,13 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 6,69 (d, 1 H, J = 3,6 Hz, 1 H), 4,87-4,84 (m, 1 H), 3,73-3,67 (m, 1 H), 3,65-3,57 (m, 1 H), 3,53-3,50 (m, 2 H), 3,48-3,44 (m, 2 H), 3.405 (s, 3 H), 2,77-2,75 (m, 2 H), 2,42-2,20 (m, 4 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C16H21 N7O2S; 375,148, encontrado (M H+ ); 376,1. Tiempo de retención HPLC quiral = 5,16 minutos.
Ejemplo de referencia 18: 2-Metil-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobutil}2,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-5(4H)-sulfonamida
Este compuesto se preparó usando clorhidrato de 2-metil-2,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanquecino (24 % en 2 etapas). RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,08 (s, 1 H), 7,38 (s, 1 H), 7,10 (d, 1 H), 6,66 (d, 1 H), 4,87-4,86 (m, 1 H), 4,42-4,41 (m, 4 H), 3,87 (s, 3 H), 3,71-3,67 (m, 1 H), 3,31 (s, 3 H), 2,68-2,61 (m, 2 H), 2,27-2,22 (m, 3H). c L / E M (masa exacta) calculado para C17 H22N8O2S; 402,159, encontrado (M H+ ); 403,2 y (M Na); 425,1.
Ejemplo de referencia 19: N-{ds-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobutil}-6-oxa-3-azabiciclo[3.1.1]heptano-3-sulfonamida
Etapa 1: N-[ds-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirmlo[2,3-d]pinmidin-4-il}amino)ddobuM]-6-oxa-3-azabiciclo[3.1.1]heptano-3-sulfonamida
Una mezcla de N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]-2-oxo-1,3-oxazolidina-3-sulfonamida (208 mg, 0,40 mmol), 6-oxa-3-azabiciclo[3.1.1]heptano (50 mg, 0,50 mmol), trietilamina (220 |jl, 1,58 mmol) en acetonitrilo (15 ml), se calentó en un vial de microondas de 20 ml en un reactor de microondas durante 1 hora a 120 °C. Se evaporó el exceso de disolvente y el aceite resultante se recogió en diclorometano. La solución se lavó con cloruro de amonio acuoso y salmuera. El material en bruto se secó sobre sulfato sódico y se concentró para dar un aceite. Este se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de metanol en diclorometano (0:100 a 5:100) para proporcionar el compuesto del título en forma de una espuma (82 mg, 30 %). RMN 1 H (CDCla): 88,38 (s, 1 H), 8,04 (d, 2 H), 7,48 (d, 1 H), 7,28 (d, 2 H), 6,63 (d, 1 H), 4,78-4,69 (m, 1 H), 4,62 (d, 1 H), 4,47 (d, 1 H), 3,69-3,61 (m, 1 H), 3,58 (d, 3 H), 3,26-3,17 (m, 1 H), 3,24 (s, 3 H), 2,83-2,75 (m, 2 H), 2,37 (s, 3 H), 2,18-2,11 (m, 2 H), 2,04 (d, 1 H), 1,18 (t, 1 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C23H28N6O5S2 ; 532,156, encontrado (M H+ ); 533.
Etapa 2: N-{ds-3-[Metil(7H-pirm lo[2,3-d]pirim idin-4-il)aminolddobutil}-6-oxa-3-azabiddo[3.1.1]heptano-3-sulfonamida
Se añadió N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]-6-oxa-3-azabiciclo[3.1.1]heptano-3-sulfonamida (229 mg, 0,43 mmol) a una solución 1 M de fluoruro de tetrabutilamonio en tetrahidrofurano (6,5 ml, 6,4 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas. La mezcla se concentró y el material restante se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de metanol en acetato de etilo (1:9). Se aisló un aceite de color amarillo que se trituró con una mezcla de acetato de etilo y heptano para dar un sólido de color amarillo. El sólido se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para proporcionar un sólido de color blanquecino. Este se trituró con éter dietílico y después con alcohol isopropílico para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (14 mg, 9 %). RMN 1 H (CD3OD) 88,08 (s, 1 H), 7,09 (d, 1 H), 6,66 (s, 1 H), 4,90-4,81 (m, 1H), 4,62 (d, 2 H), 3,86-8,84 (m, 1 H), 3,66 (t, 1 H), 3,56-3,49 (m, 3 H), 3,33 (s, 3 H), 3,19-3,13 (m, 1 H), 2,75-2,70 (m, 2 H), 2,32-2,24 (m, 2 H), 2,05-2,03 (d, 1 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C16 H22N6O3S; 378,147, encontrado (M H+ ); 379,5.
Los siguientes compuestos, Ejemplos de referencia 20-24, se prepararon a partir de N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]-2-oxo-1,3-oxazolidina-3-sulfonamida (Ejemplo de referencia 16, Etapa 1) de una manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 16, Etapa 2, sustituyendo ciclopropanometilamina por la amina indicada y usando el procedimiento de desprotección ilustrado en el Ejemplo de referencia 19, Etapa 2.
Ejemplo de referencia 20: 3-Ciano-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]-ddobutil}azetidina-1-sulfonamida
Este compuesto se preparó usando azetidin-3-carbonitrilo. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (23 % en 2 etapas). RMN 1 H (400 MHz, CD3OD): 88,10 (s, 1 H), 7,11 (d, 1 H), 6,68 (d, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 4,02 (m, 2 H), 3,90 (m, 2 H), 3,58 (m, 2 H), 3,32 (s, 3 H), 2,72 (m, 2 H), 2,25 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C15 H19N7O2S; 361,132, encontrado (M H+ ); 362,1.
Ejemplo de referencia 21: N-{ds-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobutil}-4-(1H-pirazol-3-il)piperidina-1-sulfonamida
Este compuesto se preparó usando 4-(1H-pirazol-3-il)piperidina. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (9:1). El material aislado se trituró con éter dietílico y después con acetato de etilo para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (10 % en 2 etapas). RMN 1 H (300 MHz, CD3OD): 88,09 (s, 1 H), 7,48 (s, 1 H), 7,12-7,05 (m, 1 H), 6,71-6,60 (m, 1 H), 6,22-6,08 (m, 1 H), 4,92-4,73 (m, 1H), 3,80-3,55 (m, 3H), 3,41 (s, 3H), 2,90-2,65 (m, 5 H), 2,38-2,19 (m, 2 H), 2,09­ 1,90 (m, 2 H) y 1,83-1,65 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C19 H26N8O2S; 430,190, encontrado (M H+ ); Ejemplo de referencia 22: N-(2-Cianoetil)-N-metil-N'-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ddobutil}sulfamida
Este compuesto se preparó usando 3-metilaminopropionitrilo. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento para proporcionar el compuesto del título (7 % en 2 etapas). C L / e M (masa exacta) calculado para C15H21N7O2S; 363,148, encontrado (M H+); 364,0.
Ejemplos de referencia 23 y 27: (1S,5S)-1-Ciano-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]cidobutil}-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-sulfonamida y (1R,5R)-1-Ciano-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)aminolcidobutil}-3-azabicido[3.1.0]hexano-3-sulfonamida
Estos compuestos se prepararon usando 3-azabiciclo[3.1.0]hexano-1-carbonitrilo racémico. El compuesto racémico en bruto se purificó en forma de un sólido de color blanco (92 mg, 21 % en 2 etapas) por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de diclorometano y metanol (30:1 a 5:1). Los enantiómeros del título se separaron por cromatografía de fluidos supercríticos.
Enantiómero 23: 41 mg (9 %); tiempo de retención de SFC = 4,28 minutos; RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,13 (s, 1 H), 7,13 (d, 1 H), 6,70 (d, 1 H), 4,61 (s, 1 H), 3,57 - 3,72 (m, 2 H), 3,43 - 3,51 (m, 3H), 3,36 (s, 3 H), 2,70 - 2,77 (m, 2 H), 2,24 - 2,38 (m, 3 H), 1,41 - 1,48 (m, 1 H), 1,32 (t, 1 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17H21N7O2S; 387,148, encontrado (M H+ ); 388,1. Enantiómero 27: 40 mg (9 %); tiempo de retención SFC = 4,84 minutos RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,13 (s, 1 H), 7,13 (d, 1 H), 6,70 (d, 1 H), 4,61 (s, 1 H), 3,57 - 3,72 (m, 2 H), 3,43 - 3,51 (m, 3H), 3,36 (s, 3 H), 2,70 -2,77 (m, 2 H), 2,24 -2,38 (m, 3 H), 1,41 - 1,48 (m, 1 H), 1,32 (t, 1 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17H21N7O2S; 387,148, encontrado (M H+ ); 388,1. Se preparó 3-azabiciclo[3.1.0]hexano-1-carbonitrilo racémico como sigue a continuación.
Etapa 1: rac-1-formil-3-azabiddo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo racémico
Se añadió 1,1,1-triacetoxi-1,1-dihidro-1,2-benziodoxol-3(1H)-ona (6,5 g, 15,2 mmol) a una solución de terc-butil-1-(hidroximetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato racémico (Synlett 2009, 921) (2,5 g, 11,7 mmol) en diclorometano anhidro (60 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con diclorometano (60 ml), se lavó con una solución saturada acuosa de sulfito sódico, bicarbonato sódico saturado (30 ml) y salmuera (50 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró para dar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (1,7 g, 68 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCl3): 8 9,01 (d, 1 H), 3,83 (d, 1 H), 3,68 (t, 1H), 3,59 (dd, 1 H), 3,50-3,36 (m, 1 H), 2,25-2,09 (m, 1H), 1,63 (t, 1H), 1,43 (s, 9 H), 1,19-1,06 (m, 1 H).
Etapa 2: terc-butil-1-[(hidroxiim ino)metil]-3-azabicido[3.1.0]hexano-3-carboxilato racémico
Se añadieron carbonato potásico (3,89 g, 28,2 mmol) y clorhidrato de hidroxilamina (671 mg, 9,7 mmol) a una solución de 1-formil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo racémico (1,7 g, 8,05 mmol) en diclorometano anhidro (40 ml) a temperatura ambiente y después se agitó durante 16 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (80 ml), y se lavó con agua (30 ml) y salmuera (30 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (0:100 a 83:17) para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (1,6 g, 88 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCla): 8 7,18 (s, 1 H), 3,74-3,55 (m, 3 H), 3,44-3,40 (m, 1 H), 1,74-1,72 (m, 1 H), 1,44 (s, 9 H), 1,10 (t, 1 H), 0,86-0,83 (m, 1 H).
Etapa 3: terc-butil-1-ciano-3-azabiddo[3.1.0]hexano-3-carboxilato racémico
A una solución de terc-butil-1-[(hidroxiimino)metil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato racémico (925 mg, 4,09 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (100 ml) se le añadió N-(trietilamonio sulfonil)carbamato de metilo (2,92 g, 12,3 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 3 horas. Después de la evaporación del disolvente, el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de éter de petróleo y acetato de etilo (5:1) para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (570 mg, 67 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCla ): 83,84 (dd, 1 H), 3,64 (dd, 1 H), 3,50 (d, 1 H), 3,46 (dd, 1 H), 2,21-2,12 (m, 1 H), 1,44 (s, 9 H), 0,96 (t, 1 H).
Etapa 4: 3-azabicido[3.1.0]hexano-1-carbonitrilo racémico
Una solución de terc-butil-1-ciano-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato racémico en ácido trifluoroacético (1 ml) y diclorometano (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El disolvente se retiró para proporcionar el compuesto del título (205 mg, 100 %) en forma de un aceite de color pardo.
Ejemplo de referencia 24: 3-ciano-N-{trans-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}pirrolidin-1-sulfonamida racémica
Este compuesto se sintetizó siguiendo el procedimiento del Ejemplo de referencia 10, sustituyendo cloruro de ciclopropilmetanosulfonilo por cloruro de 3-cianopirrolidin-1 -sulfonilo. El producto en bruto se purificó usando cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanquecino (5 %). RMN 1 H (400 MHz, CD3OD): 8 8,13 (s, 1 H), 7,14 (d, 1 H), 6,67 (d, 1 H), 5,45-5,41 (m, 1 H), 4,00-3,64 (m, 1 H), 3,62-3,52 (m, 1 H), 3,51-3,47 (m, 2 H), 3,45-3,39 (m, 2 H), 3,369 (s, 3 H), 2,78-2,70 (m, 2 H), 2,53-2,47 (m, 2 H); 2,39-2,36 (m, 1 H); 2,27-2,24 (m, 1 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C16H21N7O2S; 375,148, encontrado (M H+ ); 375,9.
Cloruro de 3-áanopirm lidin-1-sulfonilo racémico
Una solución de pirrolidin-3-carbonitrilo racémico (53 mg, 0,4 mmol) y trietilamina (101 g, 1 mmol) en diclorometano seco (1,0 ml) se añadió gota a gota a una solución agitada de cloruro de sulfurilo (64,8 mg, 0,48 mmol) en diclorometano (3,0 ml) a -78 °C. La reacción se agitó a -78 °C durante 30 minutos, y después se dejó calentar a temperatura ambiente durante 1 hora. La solución de reacción se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1 M (5 ml) y salmuera (5 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (68 mg, en bruto).
Ejemplo de referencia 25: N-(cis-3-{[(4,4-Difluoropiperidin-1-il)sulfonil]metil}cidobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Etapa 1: 3-[(terc-butoxicarbonil)amino]ciclobutanocarboxilato de cis/trans-etilo
A una solución de una mezcla de clorhidrato de 3-aminociclobutanocarboxilato de cis- y trans-etilo (cis/trans = 10:1) (documento WO2009/60278) (10 g, 55,7 mmol) y trietilamina (19,4 ml, 139,1 mmol) en diclorometano (370 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota dicarbonato de di-terc-butilo (15,8 g, 72,3 mmol). Después de que se completara la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo resultante se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (10:1 a 3:1) para proporcionar la mezcla del título en forma de un sólido de color blanco (19 g, 92 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCla): 8 4,77 (s, 1 H), 4,13 (c, 3 H), 2,68-2,82 (m, 1 H), 2,60 (d, 2 H), 1,99-2,17 (m, 2 H), 1,43 (s, 9 H), 1,25 (t, 3 H).
Etapa 2: cis/trans-[3-(Metilamino)ciclobutil]metanol
Se suspendió hidruro de litio y aluminio (9,14 g, 240,4 mmol) en tetrahidrofurano seco (350 ml). La mezcla se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de 3-[(terc-butoxicarbonil)amino]ciclobutanocarboxilato de cis/trans etilo (cis/trans = 10:1) (11,7 g, 48,1 mmol) en tetrahidrofurano seco (170 ml). Después de que se completara la adición, la mezcla resultante se calentó a reflujo durante una noche. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con tetrahidrofurano (1,5 l) y después se enfrió hasta 0~5 °C. Se añadieron pequeñas porciones de Na2SO4.10 H2O hasta que el desprendimiento de gas hubo cesado. La mezcla se filtró para retirar los sólidos, que se lavaron con más tetrahidrofurano (500 ml). El filtrado se concentró a sequedad proporcionado la mezcla del título (cis/trans = 10:1) en forma de un aceite (10 g, >100 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCla ): 8 3,58 (d, J = 3,8 Hz, 2 H), 3,06­ 3,17 (m, 1 H), 2,34-2,43 (m, 3 H), 2,32 (s, 3 H), 1,48 - 1,57 (m, 2 H).
Etapa 3: cis/trans-[3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metanol
Se añadieron yoduro potásico (173 mg) y trietilamina (13 ml, 93,8 mmol) a una solución de cis/trans-[3-(metilamino)ciclobutil]metanol (6,0 g, 52,1 mmol) en acetona (250 ml). Después, se añadió 4-Cloro-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (14,4 g, 46,9 mmol) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante una noche. Después de la evaporación del disolvente a presión reducida, el residuo se diluyó con diclorometano (500 ml). La solución se lavó secuencialmente con agua (300 ml), ácido cítrico acuoso al 2 % (300 ml) y salmuera (300 ml) y después se secó sobre sulfato sódico. Después de la filtración, la solución se filtró y se concentró para proporcionar la mezcla del título en forma de un sólido claro (15,3 g, 85 %). Una porción (5,0 g) de la mezcla del cis/trans-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)-ciclobutil]metanol se separó por cromatografía de fluidos supercríticos usando una columna Chiralpak-AD: isómero cis, 4,6 g: RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 8 8,20 (s, 1 H), 7,98 (d, 2 H), 7,53 (d, 1 H), 7,34 (d, 2 H), 6,83 (d, 2 H), 4,99-4,95 (m, 1 H), 3,56 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 3,24 (s, 3 H), 2,36 (s, 3 H), 2,34-2,28 (m, 2 H), 2,24-2,19 (m, 1 H), 2,11-2,03 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para ^ 9^ 2^ 0 3$: 386,14, encontrado (M H+): 387,3
isómero trans, 0,4 g: RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 8 8,20 (s, 1H), 7,98 (d, 2 H), 7,55 (d, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,84 (d, 2H), 5,26-5,22 (m, 1H), 3,69 (d, 1H), 3,30 (s, 3H), 2,46-2,41 (m, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,19-2,14 (m, 2H). CL/EM (masa exacta) calculado para C-ig H22N403S: 386,14, encontrado (M H+): 387,3
Etapa 4: 4-Metilbencenosulfonato de ds-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ciclobutil]metilo
A una solución de cis-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metanol (20 g, 51,8 mmol) y N,N-dimetilaminopiridina (12,6 g, 103,6 mmol) en diclorometano (500 ml) a 0 °C se le añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (14,8 g, 77,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y después se lavó con agua (500 ml). Los lavados acuosos combinados se extrajeron con diclorometano (2 x 800 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de diclorometano y metanol (100:0 a 95:5) para proporcionar el compuesto del título (23 g, 82 %) en forma de un sólido de color blanco. CL/EM (masa exacta) calculado para C26H28N4O5S2: 540,150, encontrado (M H+ ): 541,3.
Ejemplo de referencia 32: N-(ds-3-{[(2-Cidopropiletil)sulfonil]metil}ddobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
Etapa 1: N-(ds-3-{[(2-CidopmpileW )sulfanil]meW }ddobutil)-N-metil-7-[(4-meW fenil)sulfonil]-7H-pirmlo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Se burbujeó nitrógeno a través de una mezcla de S-{[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)-sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)cidobutil]metil}etanotioato, Ejemplo de referencia 25, Etapa 5 (190 mg, 0,43 mmol) y carbonato potásico (129 mg, 0,94 mmol) en metanol (10 ml) a 0 °C durante 2 minutos. Después, se añadió 4-metilbencenosulfonato de 2-ciclopropiletilo (159 mg, 1,53 mmol) y la solución se agitó durante 6 horas a temperatura ambiente. Se añadieron diclorometano (30 ml) y agua (20 ml) y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 20 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía de capa fina preparativa usando acetato de etilo-éter de petróleo (1 :2 ) para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (62 mg, 31 %). CL/EM (masa exacta) calculado para C24H30N4O2S2; 470,18, encontrado (M H+); 471,1
Etapa 2: N-(cis-3-{[(2-Ciclopropiletil)sulfonil]metil}ciclobutil)-N-metil-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
La mezcla de N-(cis-3-{[(2-ciclopropiletil)sulfanil]-metil}ciclobutil)-N-metil-7-[(4-metilfenil)-sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (24 mg, 0,051 mmol) y peroxomonosulfato potásico (49 mg, 0,079 mmol) en tetrahidrofurano (1,2 ml), agua (0,6 ml) y etanol (1,2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se añadió bisulfito sódico acuoso, seguido de diclorometano (20 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 20 ml) y las capas orgánicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El material en bruto se usó directamente en la siguiente etapa. CL/EM (masa exacta) calculado para C24H30N4O4S2; 502,17, encontrado (M H+ ); 503,3
Etapa 3: N-(cis-3-{[(2-Ciclopropiletil)sulfonil]metil}ciclobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
La mezcla de N-(cis-3-{[(2-ciclopropiletil)sulfonil]metil}ciclobutil)-N-metil-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (49 mg, 0,097 mmol) e hidróxido de litio (30 mg, 1,3 mmol) en agua (5 ml) y etanol (10 ml) se agitó a 50 °C durante 2 horas. A continuación, se añadió diclorometano (20 ml) y la capa acuosa se extrajo con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa usando un gradiente de agua y un gradiente de acetonitrilo (95:5 a 5:95) para dar el compuesto del título (14 mg, 40 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, m etanol^): 8 8,12 (s, 1 H), 7,13 (d, 2 H), 6,70 (d, 2 H), 5,12-5,09 (m, 1 H), 3,34 (s, 3 H), 3,34-3,33 (m, 2 H), 3,20-3,17 (m, 2 H), 2,64-2,61 (m, 3 H), 2,26-2,22 (m, 2 H), 1,75-1,69 (m, 2 H), 0,89-0,86 (m, 2 H), 0,56-0,52 (m, 2 H), 0,18-0,17 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17H24N4O2S; 348,16, encontrado (M H+); 349,1
Ejemplo de referencia 33: N-[ds-3-({[(3,3-Difíuom ddobutil)m etil]sulfonil}-m etil]ddobutil]-N-m etil-7H-pirm lo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Etapa 1: N-[cis-3-({[(3,3-Difluorociclobutil)metil]sulfanil}metil)ciclobutil]-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Se burbujeó nitrógeno a través de una mezcla de S-{[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)-sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metil}etanotioato, Ejemplo de referencia 25, Etapa 5 (250 mg, 0,56 mmol) y carbonato potásico (194 mg, 1,41 mmol) en metanol (100 ml) durante dos minutos a 0 °C seguido de la adición de 4-metilbencenosulfonato de (3,3-difluorociclobutil)metilo (preparado como se describe en el documento WO2004/032834) (310 mg, 1,12 mmol). La mezcla se agitó durante 6 horas a temperatura ambiente, se filtró y se concentró para dar el compuesto del título (270 mg, en bruto) en forma de un sólido de color blanco. CL/EM (masa exacta) calculado para C17H22F2N4S; 352,15, encontrado (M H+); 353,2
Etapa 2: N-[cis-3-({[(3,3-Difluorociclobutil)metil]sulfonil}metil)ciclobutil]-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
La mezcla de N-[cis-3-({[(3,3-difluorociclobutil)metil]sulfanil}-metil)ciclobutil]-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (45 mg, 0,13 mmol) y peroxomonosulfato potásico (157 mg, 0,26 mmol) en una mezcla de tetrahidrofurano (20 ml), agua (10 ml) y etanol (20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Después, se añadió bisulfito sódico acuoso, seguido de diclorometano (20 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 20 ml) y las capas orgánicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa usando un gradiente agua-acetonitrilo (95:5 a 5:95) para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (34 mg, 39 %). RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,29 (s, 1 H), 7,42 (d, 1 H), 7,03 (d, 1 H), 4,86 (m, 1 H), 3,51 (s, 3 H), 3,39-3,33 (m, 4 H), 2,84 (m, 1 H), 2,76-2,71 (m, 4 H), 2,53 (m, 2 H), 2,37-2,34 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17H22F2N4O2S; 384,14, encontrado (M H+ ); 385,1.
Ejemplos de referencia 34A y 34B: (1R, 3R) y (1S, 3S)-[({cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ciclobutil}metil)sulfonil]ciclopentanocarbonitrilo
El compuesto del título mezcla de (1R, 3R) y (1S, 3S)-3-[({c¡s-3-[met¡l(7H-p¡rrolo[2,3-d]pmm¡d¡n-4-¡l)am¡no]c¡clobut¡l}-metil)sulfonil]cidopentano-carbonitrilo se preparó a part¡r de S-{[c¡s-3-(met¡l{7-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-7H-p¡rrolo[2,3-d]pmm¡d¡n-4-¡l}am¡no)c¡clobut¡l]met¡l}etanot¡oato, Ejemplo de referenc¡a 25, Etapa 5, de acuerdo con el proced¡m¡ento del Ejemplo de referenc¡a 30, etapas 1 y 2.
El compuesto del título (180 mg) se separó por cromatografía de flu¡dos supercrít¡cos preparat¡va usando una columna Ch¡ralpak AS:
(1R, 3R) enant¡ómero 34A: 60 mg, RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,12 (s, 1 H), 7,13-7,12 (d, 1 H), 6,70-6,69 (d, 1 H), 5,17-5,11 (m, 1H), 3,86-3,78 (m, 1H), 3,41-3,36 (m, 5 H), 3,15-3,11 (m, 1 H), 2,63-2,53 (m, 4 H), 2,37-2,13 (m, 6 H), 2,03-1,91 (m, 1 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17H22F2N4O2S; 373,16, encontrado (M H+ ); 374,1 (1S, 3S) enant¡ómero 34B: 27 mg, CL/EM (masa exacta) calculado para C17H22F2N4O2S; 373,16, encontrado (M H+ ); 374,1
El ¡ntermed¡o 4-met¡lbencenosulfonato de 3-c¡anoc¡clopent¡lo usado en la etapa 1 se preparó como se muestra a cont¡nuac¡ón:
4-Metilbencenosulfonato de 3-cianoddopentilo
Se añad¡eron cloruro de 4-met¡lbenceno-1-sulfon¡lo (6,9 g, 36 mmol) y N,N-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-am¡na (100 mg) a una soluc¡ón del compuesto 3-h¡drox¡c¡clopentano-carbon¡tr¡lo (J. Org. Chem. 2007, 72, 7423) (2 g, 18 mmol) y tr¡et¡lam¡na (5,5 g, 54 mmol) en d¡clorometano (100 ml). La reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 15 horas y después la mezcla se ¡nact¡vó med¡ante la ad¡c¡ón de una soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato sód¡co (20 ml). La mezcla se extrajo con d¡clorometano (4 x 50 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se secaron sobre sulfato de magnes¡o y se concentraron. El res¡duo se somet¡ó a cromatografía sobre gel de síl¡ce eluyendo con una mezcla de éter de petróleo y acetato de et¡lo (1:1) para dar el compuesto del título en forma de un ace¡te de color amar¡llo (0,5 g, rend¡m¡ento del 11 %). CL/EM (masa exacta) calculado para C13H15NO3S; 265,08, encontrado (M 23); 287,9.
Ejemplo de referencia 35: N-meW -N-[ds-3-({[1-(propan-2-il)pirrolidin-3-il]sulfonil}meW )ddobutil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina racémica
Etapa 1: 3-({[ds-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirm lo[2,3-d]pirim idin-4-il}am ino)ddobutil]metil}sulfanil)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo
La soluc¡ón de 4-met¡lbencenosulfonato de c¡s-[3-(met¡l{7-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}am¡no)c¡clobut¡l]met¡lo del Ejemplo de referenc¡a 25, Etapa 4 (2 g, 3,7 mmol) se ag¡tó en N-met¡lp¡rrol¡d¡na (40 ml). Después, se añad¡eron 1,8-d¡azab¡c¡cloundec-7-eno (1,13 g, 7,4 mmol) y éster terc-butíl¡co del ác¡do 3-mercaptop¡rrol¡d¡n-1-carboxíl¡co (1,13 g, 5,6 mmol) a la mezcla de reacc¡ón. La reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 16 horas. Se añad¡eron agua (200 ml) y acetato de et¡lo (500 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de et¡lo (2 x 500 ml).y las capas orgán¡cas comb¡nadas se secaron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sól¡do de color blanco (2,6 g, 118%). CL/EM (masa exacta) calculado para C28H37N5O4S2; 571,23, encontrado (M H+ ): 572,1.
Etapa 2: N-Metil-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-N-{ds-3-[(pirrolidin-3-ilsulfanil)metil)ddobutil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
A una soluc¡ón de 3-({[c¡s-3-(met¡l{7-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}am¡no)c¡clobut¡l]met¡l}sulfan¡l)p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato de terc-but¡lo (2,6 g, 4,5 mmol) en metanol (15 ml) se le añad¡ó una soluc¡ón 3 M de ác¡do clorhídr¡co en metanol (40 ml). La soluc¡ón resultante se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 1 hora. La soluc¡ón se concentró para dar el producto en bruto, que se pur¡f¡có por cromatografía sobre gel de síl¡ce eluyendo con un grad¡ente de d¡clorometano y metanol (100:0 a 85:15) para dar el compuesto del título en forma de un ace¡te ¡ncoloro (1,7 g, 52 %). RMN 1 H (400 MHz, m etanol^): 88,21 (s, 1 H), 7,99 (d, 2 H), 7,56 (d, 1 H), 7,37 (d, 2 H), 6,88 (d, 1 H), 4,95-4,87 (m, 1H), 3,29 (s, 1 H), 3,27 (s, 3 H), 3,21-3,17 (m, 1 H), 3,04-3,96 (m, 1 H), 2,92-29 (m, 1 H), 2,72-2,01 (m, 3 H), 2,50-2,43 (m, 2 H), 2,39 (s, 3 H), 2,29-2,15 (m, 2 H), 2,03-2,01 (m, 2 H), 1,98-1,65 (m, 1 H). C L / E m (masa exacta) calculado para C23H29N5O2S2; 471,18, encontrado (M 23): 494.
Etapa 3: N-Metil-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-N-[ds-3-({[1-(propan-2-il)pirrolidin-3-il]sulfanil}meW )ddobutil]-7H-pirm lo[2,3-d]pirimidin-4-amina
A una soluc¡ón de N-met¡l-7-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-N-{c¡s-3-[(p¡rrol¡d¡n-3-¡lsulfan¡l)met¡l]c¡clobut¡l}-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na (472 mg, 1 mmol) en d¡clorometano (50 ml) se le añad¡ó acetona (174 mg, 3 mmol), tam¡ces moleculares de 4 A (40 mg) y c¡anoboroh¡druro sód¡co (189 mg, 3 mmol). La soluc¡ón resultante se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 1 hora, después se d¡luyó con d¡clorometano (70 ml) y agua (70 ml). La capa acuosa se extrajo con d¡clorometano (2 x 50 ml) y las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con salmuera (100 ml). La capa orgán¡ca se secó sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se concentró para dar el compuesto del título (500 mg, rend¡m¡ento del 97 %) en forma de un ace¡te ¡ncoloro. CL/EM (masa exacta) calculado para C26H35N5O2S2; 513,22, encontrado (M H+ ); 514,1.
Etapa 4: N-Metil-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-N-[ds-3-({[1-(propan-2-il)pirrolidin-3-il]sulfonil}meW )ddobutil]-7H-pirm lo[2,3 d]pirimidin-4-amina
La mezcla de N-met¡l-7-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-N-[c¡s-3-({[1-(propan-2-¡l)p¡rrol¡d¡n-3-¡l]sulfan¡l}met¡l)c¡clobut¡l]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (500 mg, 1,0mmol) y peroxomonosulfato potás¡co (1,23 g, 2,0 mmol) en tetrah¡drofurano (20 ml), agua (10 ml) y etanol (20 ml) se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos. La soluc¡ón de reacc¡ón se d¡luyó con acetato de et¡lo (100 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de et¡lo (3 x 50 ml) y las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con salmuera (l00 ml), se secaron sobre sulfato sód¡co y se concentraron para dar el compuesto del título en forma de un ace¡te ¡ncoloro (420 mg, 90 %). CL/EM (masa exacta) calculado para C26H35N5O4S2; 545,21, encontrado (M H+): 546,3.
Etapa 5: N-M etil-N-[ds-3-({[1-(pmpan-2-il)pirmlidin-3-il]sulfonil}metil)-ddobutil]-7H-pirmlo[2,3-d]pirím idin-4-amina
La mezcla de N-met¡l-7-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-N-[c¡s-3-({[1-(propan-2-¡l)p¡rrol¡d¡n-3-¡l]sulfon¡l}met¡l)c¡clobut¡l]-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na (330 mg, 0,6 mmol) e h¡dróx¡do de l¡t¡o (126 mg, 3 mmol) en una mezcla de agua (5 ml) y etanol (10 ml) se ag¡tó a 50 °C durante 2 horas. Después, la mezcla se concentró y el res¡duo se recog¡ó en acetato de et¡lo. La capa orgán¡ca se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sód¡co y se concentró. El producto en bruto se pur¡f¡có por cromatografía líqu¡da de alto rend¡m¡ento de fase ¡nversa usando un grad¡ente de agua y aceton¡tr¡lo (95:5 a 5:95) para dar el compuesto del título (89 mg, 38 %) en forma de un sól¡do de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, CDCla ): 6 8,32 (s, 1 H), 7,07 (d, 1 H), 6,57 (d, 1 H), 5,13 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,33 (s, 3 H) 3,05-3,22 (m, 3H), 2,92 (m, 1H), 2,78 -2,87 (m, 1H), 2,58-2,77 (m, 4H), 2,50 (m, 1H), 2,19-2,34 (m, 2H), 2,06-2,19 (m, 2H), 1,12 (d, 6 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C19H29N5O2S; 391,20, encontrado (M H+ ); 392,3
Ejemplo de referencia 36: N-(ds-3-{[(3-Cloro-4-fluorofenil)sulfonil]metil]ddobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
Etapa 1: N-(cis-3-{[(3-Cloro-4-fluorofenil)sulfanil]metil}ciclobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
A una soluc¡ón de 3-cloro-4-fluorot¡ofenol (93 mg, 0,55 mmol) en tetrah¡drofurano (1,5 ml) se le añad¡ó h¡dróx¡do sód¡co acuoso al 50 % (44 mg, 0,55 mmol) y etanol (1,5 ml). La mezcla se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 1 hora. Una soluc¡ón de 4-met¡lbencenosulfonato de c¡s-[3-(met¡l{7-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}am¡no)c¡clobut¡l]met¡lo del Ejemplo de referenc¡a 25, Etapa 4 (200 mg, 0,37 mmol) en tetrah¡drofurano (1,5 ml) se añad¡ó a la mezcla de reacc¡ón. La mezcla comb¡nada se calentó a 40 °C durante una noche. La reacc¡ón se concentró y se pur¡f¡có por columna de síl¡ce eluyendo con un grad¡ente de heptanos y acetato de et¡lo (90:10 a 0:100) para proporc¡onar el compuesto del título (69 mg, 49,6 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla): 6 8,18 (s, 1 H), 7,39 (dd, 1 H), 7,28 (s, 1 H), 7,03-7,08 (m, 1 H), 7,00 (d, 1 H), 6,52 (d, 1 H), 4,97-5,07 (m, 1 H), 3,35 (m, 2 H), 3,23 (s, 3 H), 2,89 (s, 1 H), 2.43- 2,52 (m, 2 H), 2,19-2,30 (m, 2 H).
Etapa 2: N-(cis-3-{[(3-Cloro-4-fluorofenil)sulfonil]metil}ciclobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
A una soluc¡ón de N-(c¡s-3-{[(3-cloro-4-fluorofen¡l)sulfan¡l]met¡l}c¡clobut¡l)-N-met¡l-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na (75 mg, 0,2 mmol) en d¡clorometano (10 ml) se le añad¡ó ác¡do 3-clorobenzoperoxo¡co (107 mg). La reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante una noche y después se concentró. El res¡duo en bruto se somet¡ó a cromatografía sobre gel de síl¡ce eluyendo con un grad¡ente de d¡clorometano y amon¡aco 2 M en metanol (80:20) para obtener el compuesto del título (48 mg, 59,2 %). RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 68,31 (s, 1H), 8,02 (m, 1H), 7,81-7,83 (m, 1H) 7,37-7,27 (m, 1H), 7,09 (d, 1H), 6,65 (s, 1H), 5,18-5,10 (m, 1 H), 4,15-4,09 (m, 1 H), 3,32 (m, 5 H), 2,59-2,54 (m, 2 H), 2.44- 2,42 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C18H18CIFN4O2S; 408,08, encontrado (M H+); 409
Ejemplo de referencia 37: 2-[({ds-3-[M etil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)am ino]ddobutil}m etil) sulfonil]piridin-4-carbonitrilo
Etapa 1: 2-({[cis-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ciclobutil]metil}sulfanil)piridin-4-carbonitrilo
Se añad¡eron 1,8-d¡azab¡c¡cloundec-7-eno (24,6 g, 161 mmol) y 2-mercapto-¡son¡cot¡non¡tr¡lo (16,1 g, 118mmol) a una soluc¡ón de metanosulfonato de [c¡s-3-(met¡l{7-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}am¡no)c¡clobut¡l]-met¡lo (50 g, 110 mmol) en N-met¡lp¡rrol¡d¡na (250 ml). La reacc¡ón se calentó a 50 °C durante una noche. Se añad¡ó 2-mercapto¡son¡cot¡non¡tr¡lo ad¡c¡onal (8,1 g, 59 mmol) para conduc¡r la reacc¡ón a la f¡nal¡zac¡ón. La mezcla se enfr¡ó a aprox¡madamente 0 °C y después la reacc¡ón se ¡nterrump¡ó med¡ante la ad¡c¡ón gota a gota de agua. Los sól¡dos se recog¡eron por f¡ltrac¡ón, se lavaron con agua y se secaron al vacío a 50 °C para dar el compuesto del título en forma de un sól¡do de color amar¡llo br¡llante (45,8 g, 82,8 %). CL/EM (masa exacta) calculado para C25H24N6O2S2; 504,14, encontrado (M H+); 505,1
Etapa 2: 2-[({cis-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ciclobutil}metil)sulfanil]piridin-4-carbonitrilo
A una soluc¡ón de 2-({[c¡s-3-(met¡l{7-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}am¡no)c¡clobut¡l]met¡l}sulfan¡l)p¡r¡d¡n-4-carbon¡tr¡lo (45,3 g, 89,8 mmol) en tetrah¡drofurano (180 ml) se le añad¡ó una soluc¡ón 1 M de fluoruro de tetrabut¡lamon¡o en tetrah¡drofurano (269 ml). La mezcla de reacc¡ón se calentó a reflujo durante 6 horas y después se enfr¡ó a temperatura amb¡ente. Se añad¡ó agua gota a gota durante 45 m¡nutos. Los sólidos se recogieron por filtración y se lavaron con una mezcla de tetrahidrofurano al 20 % (33 ml) y agua (97 ml). La torta húmeda se secó al vacío a 50 °C para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color castaño (25 g, 79 %). CL/EM (masa exacta) calculado para C18 H18 N6S2 ; 350,13, encontrado (M H+); 351,1
Etapa 3: 2-[({ds-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)am ino]ddobutil}metil)sulfonil]pirídin-4-carbonitrílo
Se añadió lentamente peroxomonosulfato potásico (236,8 g, 385,2 mmol) a una mezcla de 2-[({cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}-metil)sulfanil]piridin-4-carbonitrilo (22,5 g, 64,2 mmol) en metanol (337 ml) y agua (56 ml) a 0 °C. La reacción se agitó a 3 °C durante 20 horas. La reacción se interrumpió usando una solución acuosa al 10 % de bisulfato sódico (40 ml), y la suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió una solución acuosa al 10 % de carbonato potásico hasta que el pH fue de 4 a 5. El material se filtró y se aclaró con agua. La torta del filtro húmeda se secó al vacío a 40 °C para dar un sólido de color blanquecino. Este material se recogió en tetrahidrofurano (50 ml) y se calentó a reflujo durante 3 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró para recoger el sólido, que se secó al vacío a 40 °C hasta el compuesto del título en forma de un polvo de color castaño claro (17,3 g, 70,46 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla): 6 11,97 (s, 1 H), 8,95 (d, 1 H), 8,33-8,28 (m, 2 H), 7,81 (d, 1 H) 7,1 (d, 1 H), 6,54 (d, 1 H), 5,13-5,08 (m, 1 H), 3,63 (m, 2 H), 3,30 (s, 3 H), 2,54-2,48 (m, 3 H), 2,09-2,07 (m, 2 H). c L / E M (masa exacta) calculado para C18H18 N6O2S2 ; 382,12, encontrado (M H+); 383,1.
Ejemplo de referencia 38. 2-Metil-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobutil}-1,3-tiazol-5-sulfonamida
Etapa 1: 2-M etil-N-[ds-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirm lo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ddobutil]-1,3-tiazol-5-sulfonamida
Se añadió trietilamina (62,0 g, 0,613 mol) a una solución de clorhidrato de cis-N-metil-N-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilciclobutano-1,3-diamina (22,2.g, 0,102 mol) en diclorometano (250 ml). Se añadió cloruro de 2-metiltiazol-5-sulfonilo (28,0 g, 0,142 mol) en diclorometano (250 ml) durante 30 minutos a temperatura ambiente a la mezcla de reacción. Después de 1,5 horas, el disolvente se retiró a presión reducida y el sólido resultante se disolvió en 4:1 de acetato de etilo:diclorometano (400 ml). La solución se filtró a través de un lecho de sílice de 40 g, aclarándose con acetato de etilo (800 ml) y diclorometano (100 ml). El disolvente del filtrado se retiró a presión reducida para dar un sólido (59 g). El sólido se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo de 1:1 de diclorometano:acetato de etilo a acetato de etilo puro para dar el compuesto del título (44,4 g, 81 %); m/z (CI) 533 [M+H]+.
Etapa 2:2-Metil-N-{ds-3-[metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobutil}-1,3-tiazol-5-sulfonamida
Se añadió hidróxido de litio (12,1 g, 0,505 mol) en agua (290 ml) a 2-metil-N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]-1,3-tiazol-5-sulfonamida (43,8 g, 82,2 mmol) en alcohol isopropílico (435 ml) y la mezcla se calentó a 60 °C durante una noche. Después de enfriar a temperatura ambiente la mezcla de reacción se filtró aclarando con agua (145 ml). El filtrado del pH se ajustó a 6-7 usando ácido clorhídrico acuoso 6 M. La suspensión de reacción se concentró a presión reducida. Se añadió agua (370 ml) y la mezcla se enfrió a 0 °C. El disolvente se recogió por filtración, se lavó con agua fría (150 ml), después se secó al vacío a 60 °C durante una noche para dar el compuesto del título (25,0 g, 80 %); RMN 1H (DMSO-d6): 611,66-11,71 (1 H), 8,44-8,47 (1 H), 8,11-8,08 (2 H), 7,16-7,17 (1 H), 6,63-6,65 (1 H), 4,86-4,94 (1 H), 3,58-3,68 (1 H), 3,22 (3 H), 2,74 (3 H), 2,40-2,46 (2 H), 2,10­ 2,18 (2H). m/z (CI) 379 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 39: N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobutil}-2,1,3-benzoxadiazol-4-sulfonamida
Etapa 1: [ds-3-(m etilam ino)ddobutil]carbamato de bencilo y [trans-3-(metilamino)ciclobutil]carbamato de bencilo.
Una solución al 33% de metilamina (1000 ml, 9,13 mol) en etanol absoluto se añadió a una mezcla de (3-oxociclobutil)carbamato de bencilo (documentos WO2012/75381 y WO2012/09678) (200 g, 0,913 mol) y ácido acético (88 ml) agitándose en etanol (1000 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante a 0 °C durante 1,5 horas y después se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió en porciones borohidruro de litio (41 g, 2,05 mol) a la mezcla de reacción a -70 °C. Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se agitó a -70 °C durante 1 hora y después se dejó calentar a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se inactivó con agua (400 ml) y se concentró al vacío para retirar etanol. La capa acuosa se acidificó con ácido clorhídrico concentrado a pH 2, se lavó con acetato de etilo (2 x 1000 ml), se basificó con hidróxido sódico al 10 % a pH 9-10 y después se extrajo con diclorometano (3 x 1000 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1000 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para obtener el producto en bruto en forma de un líquido de color pardo pálido. Este se disolvió en diclorometano (400 ml) y se enfrió a 0 °C. A la solución resultante se le añadió una solución de ácido clorhídrico 4 M en dioxano (300 ml). La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos y después a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se filtró y el sólido restante se volvió a cristalizar se recristalizó en una mezcla de metanol y metil terc-butil éter para proporcionar el isómero cis en forma de un sólido de color blanco (111,09 g, 52 %). RMN 1 H: (400 MHz, D2O): 6 7,33-7,38 (m, 5H); 5,02 (s, 2H), 3,83-3,87 (m, 1H), 3,89-3,41 (m, 1H), 2,66-2,70 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,03-2,05 (m, 2H). CL/EM (masa exacta) calculado para C13 H18 N2O2 ; 234,137, encontrado (M H+); 235,1.
El isómero trans se aisló de las aguas madre usando cromatografía de fluidos supercríticos.
Etapa 2: {ds-3-[(2-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)(metil)amino]-ddobutil}carbamato de bencilo
A una solución de carbonato potásico (20,47 g, 148 mmol) en agua (180 ml) se le añadió [cis-3-(metilamino)cidobutil]carbamato de bencilo (13,57 g, 50,2 mmol), seguido de 2,4-dicloro-7H-pirrolo(2,3-d)pirimidina (9,0 g, 47,9 mmol) a temperatura ambiente. Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se agitó a 95 °C durante una noche. La mezcla se filtró para recoger el sólido. La torta de filtro se lavó con agua y se secó al vacío para proporcionar el compuesto del título (16,5 g, 89,7 %) en forma de un sólido de color amarillo. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-da): 8 11,81 (s, 1 H), 7,65 (d, 1 H), 7,38 (m, 5 H), 7,16 (m, 1 H), 6,67 (d, 1 H), 5,02 (s, 2 H), 4,81 (m, 1 H), 3,85 (m, 1 H), 3,25 (s, 3 H), 2,53 (m, 2 H), 2,25 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C1gH20ClN5O2; 385,131, encontrado (M H+); 386,1.
Etapa 3: clorhidrato de ds-N-Metil-N-7H-pirmlo[2,3-d]pirímidin-4-ilcidobutano-1,3-diamina
Una mezcla de {cis-3-[(2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)(metil)-amino]ciclobutil}carbamato (13,0 g, 34,0 mmol), Pd(OH)2 (40,3 g, 40,8 mmol) y ciclohexeno (72,5 ml, 0,71 mol) en etanol (300 ml) se agitó a la temperatura de reflujo durante 3 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de Celite™ y el lecho se lavó con metanol. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el compuesto del título (4,8 g, 66 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 8 11,68 (a, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,67 (a, 2H), 7,17 (d, 1H), 6,65 (d, 1H), 5,08 (m, 1 H), 3,45 (m, 1H), 3,26 (s, 3H), 2,31 (m, 4H). CL/EM (masa exacta) calculado para C11H15N5; 217,133, encontrado (M H+); 218,1.
Etapa 4: N-{ds-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobutil}-2,1,3-benzoxadiazol-4-sulfonamida
A una solución de clorhidrato de cis-N-metil-N-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilciclobutano-1,3-diamina (141 mg, 0,5 mmol) en tetrahidrofurano (5,0 ml) se añadió bis(trimetilsilil)amida de litio (solución 1 M en tetrahidrofurano) (1,4 ml, 1,375 mmol) y clorotrimetilsilano (108 mg, 1,01 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente y entonces se añadió lentamente cloruro de 2,1,3-benzoxadiazol-4-sulfonilo (109 mg, 0,5 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas y después se repartió entre diclorometano y cloruro de amonio acuoso. La capa acuosa se extrajo dos veces con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se concentraron para proporcionar el producto en bruto en forma de un sólido de color castaño. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (95:5) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color naranja (130 mg, 65%). RMN 1 H (400 MHz, CHaOH-d4): 8 8,15 (d, 1 H), 8,08 (s, 1 H), 7,72 (m, 1 H), 7,10-7,09 (m, 2H), 6,62 (m, 1 H), 3,84 (m, 1 H), 3,26 (s, 4 H), 2,55-2,47 (m, 2 H), 2,17-2,30 (m, 2 H); C l / E M (masa exacta) calculado para C17H17N7O3S; 399,43, encontrado (M H+ ); 400,9
Los siguientes compuestos, Ejemplos de referencia 40-45, se prepararon a partir de clorhidrato de cis-N-metil-N-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilciclobutano-1,3-diamina (Ejemplo de referencia 39, Etapa 3) de una manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 39, Etapa 4, sustituyendo cloruro de 2,1,3-benzoxadiazol-4-sulfonilo por el cloruro de sulfonilo indicado
Ejemplo de referencia 40: 1-(3-Metiloxetan-3-il)-N-{ds-3-[metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirím idin-4-il)amino]cidobutil}-metanosulfonamida
Este compuesto se preparó usando cloruro de (3-metiloxetan-3-il)metanosulfonilo. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (90:10) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (48 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6) 8 11,65 (s a, 1 H), 8,12 (s, 1 H), 7,62 (d, 1 H), 7,07 - 7,28 (m, 1 H), 6,66 (dd, 1 H), 4,82 - 5,05 (m, 1 H), 4,59 (d, 2 H), 4,20 (d, 2 H), 3,55 -3,71 (m, 1 H), 3,41 (s, 2 H), 3,27 (s, 3 H), 2,56 -2,70 (m, 2 H), 2,15 -2,34 (m, 2 H), 1,53 (s, 3 H); CL/EM (masa exacta) calculado para C16H23N5O3S; 365,46, encontrado (M H+); 366,2
Ejemplos de referencia 41A (1S,2S) y 41B (1R,2R): trans-2-(cianometil)-N-(cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]cido-buW]ddopmpanosulfonamida racémica (cis), (trans)
Estos compuestos se prepararon usando una mezcla (~1:1) de trans-2-(cianometil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4 il)amino]ciclobutil}ciclopropano sulfonamida racémica. La mezcla en bruto de isómeros trans racémicos se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de acetato de etilo y metanol (90:10) para proporcionar una mezcla (215 mg) de los compuestos del título en forma de un sólido de color blanco (58 %). Los isómeros trans se sometieron entonces a separación quiral por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) usando condiciones de columna (col Chiral Pak IC, 21 x 250 mm, 65/35 CO2/metanol con 0,2 % de isopropil amina, 65 ml/min). La estereoquímica absoluta de los isómeros trans se asignó arbitrariamente.
(1S,2S)-2-(CianomeW)-N-((1s,3R)-3-(metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)ddobutil)ddopmpano-1-sulfonamida
El aislamiento del primer isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 1, isómero trans: 35 mg (9,5 %); tiempo de retención de SFC = 4,99 minutos; RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6) 8 11,6 (s a, 1H), 8,08 (s, 1 H), 7,59 (d, 1 H), 7,13 (dd, 1 H), 6,62 (dd, 1 H), 4,93-4,89 (m, 1 H), 3,63-3,60 (m, 1 H), 3,33 (s, 3 H), 2,51 - 2,72 (m, 4 H), 2,16 - 2,34 (m, 2 H), 1,55 - 1,72 (m, 1 H), 1,10 -1,21 (m, 2 H), 1,02 (dt, 1 H); CL/EM (masa exacta) calculado para C16H20N6O2S; 360,44, encontrado (M H); 361,1
(1R,2R)-2-(Cianometil)-N-((1s,3S)-3-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)cidobutil)ddopropano-1-sulfonamida
El aislamiento del segundo isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 2, isómero trans: 32 mg (8,7%); tiempo de retención de SFC = 5,38 minutos; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 6 11,6 (a, s, 1H), 8,08 (s, 1 H), 7,59 (d, 1 H), 7,13 (dd, 1 H), 6,62 (dd, 1 H), 4,93-4,89 (m, 1 H), 3,60-3,63 (m, 1 H), 3,33 (s, 3 H), 2,51 - 2,72 (m, 4 H), 2,16 - 2,34 (m, 2 H), 1,55 - 1,72 (m, 1 H), 1,10 - 1,21 (m, 2 H), 1,02 (dt, 1 H); CL/EM (masa exacta) calculado para C16H20N6O2S; 360,44, encontrado (M H); 361,1
La mezcla de trans-2-(cianometil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-ciclobutil}ciclopropanosulfonamida racémica se preparó como sigue:
Etapa 1: [ds-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}am ino)ddobutil]carbamato de bencilo
Se mezclaron 4-cloro-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (15 g, 48,7 mmol) y [cis-3-(metilamino)ciclobutil]carbamato de bencilo (17,2 g, 63,5 mmol) con alcohol isopropílico (180 ml) y diisopropiletilamina (28 ml, 161 mmol). La suspensión resultante se calentó a 75 °C durante 6 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se lavó con alcohol isopropílico (150 ml) y se secó en un horno a 50 °C para dar el compuesto del título (23,5 g, 95 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 68,38 (s, 1 H), 8,03 (d, 2 H), 7,45 (d, 1 H), 7,38-7,28 (m, 4 H), 7,26 (s, 1 H), 7,25 (d, 1 H), 6,61 (d, 1 H), 5,08 (s, 2 H), 4,96 (d, 1 H), 4,77 (m, 1 H), 3,88 (m, 1 H), 3,23 (s, 3 H), 2,71 (m, 2 H), 2,36 (s, 3 H), 2,18 (m, 2 H).
Etapa 2: dibromhidrato de ds-N-Metil-N-{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrnlo[2,3-d]pirim idin-4-il}ddobutano-1,3-diamina
Se suspendió [cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]carbamato de bencilo (15,2 g, 30,1 mmol) en acetato de etilo (45 ml) y ácido acético (45 ml). A la suspensión se le añadió lentamente una solución 4 M de ácido bromhídrico en ácido acético (45 ml, 180 mmol), manteniendo la temperatura por debajo de 25 °C. La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los sólidos se recogieron por filtración, se lavaron con acetato de etilo (450 ml) y se secaron a 40 °C para proporcionar el compuesto del título (16 g; 100 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 6 8,31 (s, 1 H), 8,20 (s, 2 H), 7,97 (d, 2 H), 7,72 (d, 1 H), 7,44 (d, 2 H), 7,08 (d, 1 H), 4,93 (m, 1 H), 3,54 (m, 1 H), 3,30 (s, 3 H), 2,50 (m, 4 H), 2,35 (s, 3 H); CL/EM (masa exacta) calculado para C18H21N5O2S; 371,142, encontrado (M H+); 372,1
Etapa 3: But-3-eno-1-sulfonato sódico
A una suspensión de 4-bromobut-1-eno (10 g, 74 mmol) en agua (70 ml) se le añadió sulfito sódico (11,2 g, 89 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 90 °C durante 16 horas y entonces se concentró a presión reducida para dar el compuesto deseado con rendimiento cuantitativo. RMN 1H (400 MHz, D2O) 65,80-5,87 (m, 1H), 4,94 - 5,13 (m, 2 H), 2,78 - 3,03 (m, 2 H), 2,32 - 2,48 (m, 2 H)
Etapa 4: Cloruro de but-3-eno-1-sulfonilo
A un matraz que contenía but-3-eno-1-sulfonato sódico (3 g, 22,2 mmol) a 0 °C se le añadió cloruro de oxalilo (18 ml, 200 mmol) de una forma gota a gota seguido de N,N-dimetilformamida (150 pl). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con éter y se filtró, la capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se concentró para dar el compuesto del título (0,45 g, 13 %) en forma de un aceite. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 65,80-5,85 (m, 1H), 5,0-5,2 (m, 2 H), 2,90 - 3,03 (m, 2 H), 2,42 -2,58 (m, 2 H)
Etapa 5: But-3-eno-1-sulfonato de etilo
A una solución de cloruro de but-3-eno-1-sulfonilo (6,2 g, 40 mmol) en etanol (70 ml) se le añadió trietilamina (5,69 ml, 40 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y entonces se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con acetato de etilo, la capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se concentró para dar el compuesto del título (6,58 g, 71 %) en forma de un aceite. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 6 5,82 (m, 1 H), 5,01 -5,21 (m, 2 H), 4,19 -4,41 (c, 2 H), 3,08 -3,24 (m, 2 H), 2,46 -2,70 (m, 2 H), 1,34 - 1,46 (t, 3 H)
Etapa 6 : 2-(oxiran-2-il)etano-1-sulfonato de etilo
A una solución de but-3-eno-1-sulfonato de etilo (4,5 g, 27,4 mmol) en diclorometano (46 ml) se le añadió ácido metacloroperoxibenzoico (6,76 g, 30,1 mmol) a temperatura ambiente. La reacción se agitó durante el fin de semana y se inactivó con tiosulfato sódico acuoso. La capa orgánica se extrajo, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de heptano y acetato de etilo (0-50 %) para proporcionar el compuesto del título (3,1 g, 63 %) en forma de un aceite. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 64,32 (c, 2 H), 3,24 (t, 2 H), 2,99 - 3,13 (m, 1 H), 2,78 - 2,90 (m, 1 H), 2,57 (dd, 1 H), 2,20 - 2,39 (m, 1 H), 1,79 - 2,03 (m, 1 H), 1,42 (t, 3 H)
E t a p a 7 : 2-(hidroximetil)ádopropano-1-sulfonato de etilo
A u n a s o l u c ió n d e 2 -( o x i r a n - 2 - i l ) e t a n o - 1 - s u l f o n a t o d e e t i lo ( 2 , 3 g , 12 , 76 m m o l) e n t e t r a h id r o f u r a n o ( 40 m l) e n t r e - 30 ° C y - 40 ° C s e le a ñ a d i ó s o l u c ió n 1 M d e lit io h e x a m e t i l d i s i l a z a n o e n t o l u e n o ( 15 , 3 m l, 15 , 3 m m o l) . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e d e jó e n a g i t a c ió n a - 30 ° C y - 40 ° C d u r a n t e 2 h o r a s y e n t o n c e s s e c a l e n t ó h a s t a - 10 ° C d u r a n t e 30 m in u t o s . L a r e a c c i ó n s e in t e r r u m p ió c o n á c id o c l o r h íd r ic o 1 M d i l u id o a c u o s o ( 25 m l) h a s t a p H = 2 - 3 . L a r e a c c i ó n s e d i l u y ó c o n a c e t a t o d e e t i lo , s e e x t r a jo , s e la v ó c o n s a l m u e r a , s e s e c ó s o b r e s u lf a t o s ó d i c o y s e c o n c e n t r ó . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e h e p t a n o y a c e t a t o d e e t i lo ( 0 - 70 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 1, 45 g , 63 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) 8 4 , 33 ( c , 2 H ) , 3 , 81 ( d d , 1 H ) , 3 , 58 ( d d , 1 H ) , 2 , 39 - 2 , 5 3 ( m , 1 H ) , 1, 84 - 2 , 0 0 ( m , 1 H ) , 1, 33 - 1, 48 ( m , 4 H ) , 1, 06 - 1, 20 ( m , 1 H )
E t a p a 8 : 2-(cianometil)ciclopropano-1-sulfonato de etilo
A u n a s u s p e n s i ó n a g i t a d a d e t r i f e n i l f o s f in a ( 0 , 3 g , 1, 16 m m o l) e n t e t r a h id r o f u r a n o ( 3 , 0 m l) s e le a ñ a d i ó a z o d i c a r b o x i la t o d e d i i s o p r o p i l o ( 0 , 157 g , 0 , 77 m m o l) a 0 ° C . D e s p u é s d e a g i t a r d u r a n t e 15 m in u t o s , s e le a ñ a d i ó u n a s o l u c ió n d e 2 -( h i d r o x i m e t i l ) c i c l o p r o p a n o - 1 - s u l f o n a t o d e e t i lo ( 0 , 14 g , 0 , 77 m m o l) e n t e t r a h id r o f u r a n o ( 3 m l) g o t a a g o t a y la r e a c c i ó n s e a g it ó d u r a n t e 20 m in u t o s . S e a ñ a d i ó a c e t o n a c i a n o h i d r i n a ( 0 , 1 g , 1, 16 m m o l) g o t a a g o t a y la r e a c c i ó n s e c a l e n t ó g r a d u a l m e n t e a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e u n a n o c h e . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e c o n c e n t r ó a p r e s ió n r e d u c id a . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e h e p t a n o y a c e t a t o d e e t i lo ( 0 - 70 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 0 , 035 g , 24 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e . R m N 1 H ( 400 M H z , C D C l a ) 8 4 , 33 ( c , 2 H ) , 3 , 79 ( d d , 1 H ) , 3 , 52 ( d d , 1 H ) , 2 , 38 - 2 , 5 2 ( m , 1 H ) , 1, 81 - 1, 97 ( m , 1 H ) , 1, 33 - 1, 48 ( m , 4 H ) , 1, 05 - 1, 18 ( m , 1 H )
E t a p a 9 : 2-(cianometil)ciclopropano-1-sulfonato sódico
A u n a s o l u c i ó n d e 2 -( c i a n o m e t i l ) c i c l o p r o p a n o - 1 - s u l f o n a t o d e e t i lo ( 0 , 65 g , 3 , 44 m m o l) e n a c e t o n a ( 5 m l) s e le a ñ a d i ó y o d u r o s ó d i c o ( 0 , 52 g , 3 , 47 m m o l) . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e u n a n o c h e . E l r e s i d u o s e t r it u r ó c o n d ic l o r o m e t a n o s e g u i d o d e p e n t a n o y é t e r . E l s ó l id o s e s e c ó a a lt o v a c í o p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 0 , 6 g , 100 % ) e n f o r m a d e u n s ó l id o d e c o l o r b l a n c o . R M N 1 H ( 400 M H z , D M S O - d 6) 8 3 , 79 ( d d , 1 H ) , 3 , 52 ( d d , 1 H ) , 2 , 38 - 2 , 5 2 ( m , 1 H ) , 1, 81 - 1, 9 7 ( m , 1 H ) , 1, 33 - 1, 48 ( m , 1 H ) , 1, 05 - 1, 18 ( m , 1 H )
E t a p a 10 : cloruro de 2-(cianometil)ciclopropano-1-sulfonilo
A u n a m e z c l a d e 2 -( c i a n o m e t i l ) c i c l o p r o p a n o - 1 - s u l f o n a t o s ó d ic o ( 0 , 6 g , 3 , 17 m m o l) a 0 ° C s e le a ñ a d ió c lo r u r o d e o x a l i lo ( 6 , 5 g , 50 m m o l) s e g u i d o d e 2 g o t a s d e N , N ' - d im e t i l f o r m a m id a . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e c a l e n t ó a t e m p e r a t u r a a m b i e n t e y s e a g it ó d u r a n t e 1 h o r a . L a r e a c c i ó n s e d i l u y ó c o n d i c l o r o m e t a n o y a g u a , la c a p a o r g á n i c a s e e x t r a jo , s e la v ó c o n s a l m u e r a , s e s e c ó s o b r e s u l f a t o s ó d ic o , s e f ilt r ó y s e c o n c e n t r ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 0 , 56 g , 9 8 , 3 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e , u s a d o d i r e c t a m e n t e e n la s i g u i e n t e e t a p a .
E t a p a 1 1 : 2-(Cianometil)-N-[ds-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)cidobutil]cidopropanosulfonamida
U n a s o l u c i ó n d e c l o r u r o d e 2 -( c i a n o m e t i l ) c i c l o p r o p a n o - 1 - s u l f o n i l o ( 0 , 25 g , 1, 39 m m o l) e n 2 m l d e d ic l o r o m e t a n o s e a ñ a d i ó g o t a a g o t a a u n a s o l u c i ó n d e c i s - N - m e t i l - N - { 7 -[ ( 4 - m e t i l f e n i l ) s u l f o n i l ] - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 - i l } c i c l o b u t a n o -1, 3 - d i a m i n a ( 0 , 517 g , 1, 39 m m o l) y N ' N - d ie t i l i s o p r o p i l a m i n a ( 0 , 27 g , 2 , 09 m m o l) e n d ic l o r o m e t a n o ( 5 m l) a 0 ° C d u r a n t e 15 m in u t o s . L a r e a c c i ó n s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b i e n t e d u r a n t e 4 h o r a s . S e a ñ a d i ó a g u a ( 50 m l) y la c a p a o r g á n i c a s e s e p a r ó . L a c a p a a c u o s a s e e x t r a jo c o n d ic l o r o m e t a n o ( 2 x 150 m l) y l a s c a p a s o r g á n i c a s c o m b i n a d a s s e s e p a r a r o n y s e s e c a r o n s o b r e s u l f a t o s ó d i c o . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e h e p t a n o s y a c e t a t o d e e t i lo ( 0 -100 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo e n f o r m a d e u n s ó l id o d e c o l o r a m a r i l l o ( 0 , 716 g , 74 % ) ; C L / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 23H 26N 6O 4S 2; 514 , 15 , e n c o n t r a d o ( M H ) ; 515 , 1
E t a p a 12 : trans-2-(Cianometil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddo-butil}ddopropanosulfonamida racémica
A u n a s o l u c ió n d e 2 -( c i a n o m e t i l ) - N -[ c i s - 3 -( m e t i l { 7 -[ ( 4 - m e t i l f e n i l ) s u l f o n i l ] - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 -i l } a m i n o ) c i c l o b u t i l ] c i c l o p r o p a n o s u l f o n a m i d a ( 0 , 525 g , 1, 0 2 m m o l) e n t e t r a h id r o f u r a n o ( 10 m l) s e a ñ a d i ó s o l u c ió n 1 M d e f lu o r u r o d e t e t r a b u t i l a m o n io e n t e t r a h id r o f u r a n o ( 5 , 1 m l, 5 , 1 m m o l) . L a r e a c c i ó n s e c a l e n t ó a 50 ° C d u r a n t e 5 h o r a s . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e c o n c e n t r ó y s e d i l u y ó c o n a c e t a t o d e e t i lo . L a c a p a o r g á n i c a s e la v ó c o n s a l m u e r a , s e s e c ó s o b r e s u l f a t o s ó d i c o , s e f ilt r ó y s e c o n c e n t r ó . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e a c e t a t o d e e t i lo y m e t a n o l ( 0 - 20 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo e n f o r m a d e u n s ó l id o d e c o l o r a m a r i l l o ( 0 , 216 g , 58 % ) . C l / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 16H 20N 6O 2S ; 360 , 44 , e n c o n t r a d o ( M H ) ; 361, 1
Ejemplo de referencia 42: 3-Ciano-3-metil-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]cidobutil}azetidina-1-sulfonamida
E t a p a 1 : N-[ds-3-(MeW {7-[(4-metilfenil)sulfonil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ddobutil]-2-oxo-1,3-oxazolidina 3-sulfonamida
A una solución de isocianato de clorosulfonilo (1,76 ml, 20,6 mmol) en diclorometano (150 ml) se le añadió gota a gota una solución de 2-bromoetanol (1,43 ml, 20,6 mmol) en diclorometano (80 ml) a 0 °C. Después de 30 minutos a 0 °C, se añadió gota a gota una solución de dibromhidrato de cis-N-metil-N-{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}ciclobutano-1,3-diamina (11,0 g, 20,6 mmol) y trietilamina (10,42 g, 103,2 mmol) en diclorometano seco (80 ml) y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante una noche. La solución de reacción se disolvió en diclorometano (1 l), se lavó con una solución acuosa 1 M de ácido clorhídrico (2 x 800 ml) y salmuera (500 ml). La solución se secó sobre sulfato sódico y se concentró para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (8,5 g, 79 %). RMN 1 H (400 MHz, CD3OD): 8 8,22 (s, 1 H), 8,00 (d, 2 H), 7,58 (d, 1 H), 7,38 (d, 2 H), 6,91 (d, 1 H), 4,88 (m, 1 H), 4,45-4,41 (m, 2 H), 4,06-4,02 (m, 2 H), 3,75 (m, 1 H), 3,29 (s, 3 H), 2,72-2,69 (m, 2 H), 2,40 (s, 3 H); 2,30-3,27 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C21H24N6O6S2; 520,120, encontrado (M H+ ); 521,4.
Etapa 2: N-(Cidopmpilmetil)-N'-[ds-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ddobutil]sulfamida
Una solución de N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)-ciclobutil]-2-oxo-1,3-oxazolidina-3-sulfonamida (2,87 g, 5,53 mmol), clorhidrato de 3-metilazetidina-3-carbonitrilo (1,09 g, 8,27 mmol) y trietilamina (1,674 g, 16,6 mmol) en acetonitrilo (35 ml) se agitó durante 60 minutos a 120 °C usando calentamiento con microondas. La mezcla de reacción se concentró, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con agua; la capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (45:55) para proporcionar el compuesto del título (1,66 g, 56 %) en forma de un sólido de color blanco. CL/EM (masa exacta) calculado para C23H27N7O4S2; 529,63, encontrado (M H+ ); 530,3
Etapa 3: N-(Cidopropilmetil)-N'-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobuti}-sulfamida
A una solución de N-(ciclopropilmetil)-N'-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]sulfamida (1,66 g, 3,14 mmol) en tetrahidrofurano (40 ml) se le añadió una solución de fluoruro de tetrabutilamonio 1 M en tetrahidrofurano (2,45 g, 9,42 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 6 horas y entonces se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se concentró al vacío y se diluyó con acetato de etilo (100 ml). La solución resultante se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró.
El residuo se purificó usando cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa preparativa usando gradiente de agua y acetonitrilo (90:10 a 10:90) para proporcionar el compuesto del título (0,5 g, 43 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 8 8,12 (s, 1H), 7,14-7,13 (d, 1H), 6,70-6,69 (d, 1H), 4,93-4,90 (m, 1H), 4,13-4,11 (m, 2H), 3,78-3,74 (m, 2H), 3,72-3,66 (m, 1H), 3,37 (s, 3H), 2,80-2,74 (m, 2H), 2,36-2,29 (m, 2H) 1,68 (s, 3H); C L / e M (masa exacta) calculado para C16H21N7O2S; 375,45, encontrado (M H+); 376,1
Ejemplos de referencia 43A, 43B, 43C y 43D: cis- y trans-3-Ciano-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}-ciclopentanosulfonamida
Diastereómeros cis
Diastereómeros trans
Estos compuestos se prepararon usando una mezcla (~1:1) de cloruro de cis-y trans-3-cianociclopentano-1-sulfonilo. La mezcla en bruto de isómeros cis y trans se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (10:1 a 1:15) para proporcionar una mezcla (1920 mg) de los compuestos del título en forma de un sólido de color pardo claro (25,5 %). Los isómeros cis y trans se sometieron entonces a separación quiral por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) usando condiciones de columna (col OD-H 20 x 250 mm, 30 % de propanol, 60 ml/min). La estereoquímica absoluta para los isómeros cis y trans se asignó arbitrariamente.
(1S,3S)-3-Ciano-N-((1s,3R)-3-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino)ddobutil)ddopentano-1-sulfonamida
El aislamiento del primer isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 1, isómero trans: 326 mg (17 %); tiempo de retención de SFC = 7,79 minutos; RMN 1 H (400 MHz, CH3OH-d4): 8 8,12 (s, 1H), 7,13-7,12 (d, 1H), 6,70­ 6,69 (d, 1H), 4,91-4,88 (m, 1H), 3,80-3,70 (m, 2H), 3,36 (s, 3H), 3,20-3,10 (m, 1H), 2,79-2,76 (m, 2H), 2,52-2,45 (m, 1H), 2,35-2,29 (m, 5H) 2,18-2,05 (m, 1H), 2,03-1,95 (m, 1H); CL/EM (masa exacta) calculado para C17H22N6O2S; 374,46, encontrado (M H+); 375,1
(1R,3S)-3-Ciano-N-((1s,3S)-3-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino)ddobutil)ddopentano-1-sulfonamida
El aislamiento del segundo isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 2 (PF-06652734), isómero cis: 300 mg (15,6 %); tiempo de retención de SFC = 8,12 minutos; RMN 1 H (400 MHz, CH3OH-d4): 88,10 (s, 1 H), 7,10 (d, 1 H), 6,66 (d, 1H), 4,83-4,87 (m, 1H), 3,67-3,78 (m, 1H), 3,63 (dd, 1H), 3,36 (s, 3H), 2,96-3,08 (m, 1H), 2,69-2,80 ( m , 2 H ) , 2 , 47 - 2 , 59 ( m , 1 H ) , 2 , 11 - 2 , 3 3 ( m , 5 H ) , 2 , 01 - 2 , 0 9 ( m , 2 H ) ; C L / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 17H 22N 6O 2S ; 374 .46 , e n c o n t r a d o ( M H ) ; 375 , 2
(1S,3R)-3-Ciano-N-((1s,3R)-3-(metil(7H-pirrolo[2,3-djpirim idin-4-il)amino)ddobutil)ddopentano-1-sulfonamida E l a i s l a m i e n t o d e l t e r c e r i s ó m e r o d e e l u c i ó n p r o p o r c io n ó e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ; P i c o 3 ( P F - 06652735 ) , i s ó m e r o c is : 22 2 m g ( 11, 5 % ) ; t ie m p o d e r e t e n c ió n d e S F C = 8 , 33 m in u t o s ; R M N 1 H ( 400 M H z , C H a O H - d ^ : 6 8 , 10 ( s , 1 H ) , 7 , 10 (d , 1 H ) , 6 ,66 ( d , 1 H ) , 4 , 83 - 4 , 87 ( m , 1 H ) , 3 , 67 - 3 , 78 ( m , 1 H ) , 3 , 63 ( d d , 1 H ) , 3 , 36 ( s , 3 H ) , 2 , 96 - 3 , 08 ( m , 1 H ) , 2 , 69 - 2 , 80 ( m , 2 H ) , 2 , 47 - 2 , 59 ( m , 1 H ) , 2 , 11 - 2 , 3 3 ( m , 5 H ) , 2 , 01 - 2 , 0 9 ( m , 2 H ) ; C L / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 17H 22N 6O 2S ; 374 .46 , e n c o n t r a d o ( M H ); 375 , 2
(1R,3R)-3-Ciano-N-((1S,3S)-3-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)ddobutil)ddopentano-1-sulfonamida E l a i s l a m i e n t o d e l c u a r t o i s ó m e r o d e e lu c ió n p r o p o r c io n ó e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ; P i c o 4 ( P F - 06609710 ) , is ó m e r o t r a n s : 230 m g ( 12 % ) ; t ie m p o d e r e t e n c ió n d e S F C = 9 , 19 m in u t o s ; R M N 1 H ( 400 M H z , m e t a n o l - d 4): 6 8 , 127 ( s , 1 H ) , 7 , 13 ­ 7 , 12 (d , 1 H ) , 6 , 70 - 6 , 69 ( d , 1 H ) , 4 , 90 - 4 , 85 ( m , 1 H ) , 3 , 78 - 3 , 71 ( m , 2 H ) , 3 , 36 ( s , 3 H ) 3 , 17 - 3 , 13 ( m , 1 H ) , 2 , 8 1 - 2 , 74 ( m , 2 H ) , 2 , 5 1 - 2 , 4 6 ( m , 1 H ) , 2 , 35 - 2 , 31 ( m , 5 H ) 2 , 29 - 2 , 11 ( m , 1 H ) , 2 , 03 - 1, 90 ( m , 1 H ) ; C L / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 17H 22N 6O 2S ; 374 , 46 , e n c o n t r a d o (M H ) ; 375 , 2
L a m e z c l a d e c l o r u r o d e c i s - y t r a n s - 3 - c i a n o c i c l o p e n t a n o - 1 - s u l f o n i l o s e p r e p a r ó c o m o s ig u e :
E t a p a 1 : 3-Oxoddopentano-1-carbonitrilo
A u n a s o l u c i ó n d e c l o r h id r a t o d e t r ie t i l a m in a ( 117 , 4 g , 854 m m o l) , c ia n u r o p o t á s ic o ( 35 , 9 g , 630 m m o l) e n m e z c l a d e a g u a ( 150 m l) y m e t a n o l ( 150 m l) s e le a ñ a d i ó g o t a a g o t a u n a s o l u c i ó n d e c i c l o p e n t - 2 - e n - 1 - o n a ( 50 g , 610 m m o l) e n m e t a n o l ( 60 m l) . L a m e z c l a s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b i e n t e d u r a n t e u n a n o c h e . E l d is o l v e n t e o r g á n i c o s e c o n c e n t r ó y la f a s e a c u o s a r e s t a n t e s e e x t r a jo c o n d ic l o r o m e t a n o ( 3 x 500 m l) . L a s c a p a s o r g á n i c a s c o m b i n a d a s s e s e c a r o n s o b r e s u lf a t o d e m a g n e s i o y e l p r o d u c t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 1 : 1 ) p a r a p r o p o r c i o n a r e l c o m p u e s t o d e l t í t u lo e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o ( 35 g , 53 % ) . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) : 6 3 , 25 - 3 , 15 ( m , 1 H ) , 2 , 6 2 - 2 , 5 2 ( m , 2 H ) , 2 , 52 - 2 , 4 0 ( m , 2 H ) , 2 , 40 - 2 , 20 ( m , 2 H ) .
E t a p a 2 : 3-Hidroxiciclopentano-1-carbonitrilo
U n a s o l u c i ó n d e 3 - o x o c i c l o p e n t a n o - 1 - c a r b o n i t r i l o ( 20 g , 183 m m o l) e n m e t a n o l ( 150 m l) s e e n f r ió a 0 ° C y s e t r a t ó c o n b o r o h id r u r o s ó d i c o ( 7 g , 183 m m o l) e n p o r c i o n e s p e q u e ñ a s . D e s p u é s , la m e z c l a s e c a l e n t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e ; la r e a c c i ó n s e a g it ó d u r a n t e u n a s p o c a s h o r a s y s e in a c t iv ó u s a n d o 2 e q u i v a l e n t e s d e á c id o a c é t ic o . E l d is o l v e n t e o r g á n ic o s e c o n c e n t r ó y la f a s e a c u o s a s e d i l u y ó u s a n d o b ic a r b o n a t o s ó d i c o a c u o s o s a t u r a d o . L a m e z c l a s e e x t r a jo u s a n d o a c e t a t o d e e t i lo ; l a s c a p a s o r g á n i c a s s e c o m b in a r o n y s e s e c a r o n s o b r e s u l f a t o d e m a g n e s i o . E l p r o d u c t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t ilo ( 1 : 1 ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o ( 18 g , 88 % ) . r M n 1 H ( 400 M H z , C D C l a ) : 6 4 , 48 - 4 , 35 ( m , 1 H ) , 3 , 10 - 2 , 72 ( m , 1 H ) , 2 , 65 - 2 , 45 ( a , 1 H ) , 2 , 30 - 1, 6 5 ( m , 6 H ) .
E t a p a 3 : 4-metilbencenosulfonato de 3-cianocidopentilo
A u n a s o l u c i ó n d e 3 - h i d r o x i c i c l o p e n t a n o - 1 - c a r b o n i t r i l o ( 18 g , 16 2 m m o l) e n d ic l o r o m e t a n o s e c o ( 200 m l) s e le a ñ a d i ó 4 - d i m e t i l a m i n o p i r i d i n a ( 500 m g , 4 , 1 m m o l) y t r ie t i la m in a ( 34 m l, 243 m m o l) . L a m e z c l a s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 5 m in u t o s y d e s p u é s s e a ñ a d i ó c l o r u r o d e p - t o lu e n o s u lf o n i l o ( 46 , 3 g , 243 m m o l) . L a m e z c l a r e s u lt a n t e s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e u n a n o c h e . L a m e z c l a s e la v ó c o n b i c a r b o n a t o s ó d i c o a c u o s o s a t u r a d o . S e e x t r a jo la c a p a d e d ic l o r o m e t a n o , s e s e c ó s o b r e s u lf a t o d e m a g n e s i o y s e c o n c e n t r ó . E l r e s i d u o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 9 : 1 a 2 : 3 ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t í t u lo e n f o r m a d e u n a c e i t e in c o l o r o ( 20 g , 46 , 5 % ) . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) : 6 7 , 78 - 7 , 76 (d , 2 H ) , 7 , 35 - 7 , 33 ( d , 2 H ) , 4 , 98 ( m , 1 H ) , 2 , 8 1 - 2 , 73 ( m , 1 H ) , 2 , 43 ( s , 3 H ) , 2 , 31 - 2 , 34 ( m , 1 H ) , 2 , 10 - 2 , 03 ( m , 4 H ) , 1, 8 4 - 1, 70 ( m , 1 H ) .
E t a p a 4 : etanotioato de S-(3-cianoddopentilo)
L a m e z c l a d e 4 - m e t i l b e n c e n o s u l f o n a t o d e 3 - c i a n o c i c l o p e n t i l o ( 20 g , 75 m m o l) y t io a c e t a t o p o t á s ic o ( 12 , 9 g , 113 m m o l) e n N , N - d i m e t i l f o r m a m i d a ( 180 m l) s e c a l e n t ó a 60 ° C d u r a n t e 5 h o r a s . L a m e z c l a s e d i l u y ó c o n m e t i l t e r c - b u t i l é t e r ( 3 x 400 m l) , s e la v ó c o n a g u a ( 50 m l) , s e s e c ó s o b r e s u lf a t o d e m a g n e s i o y s e c o n c e n t r ó p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o ( 18 g , > 100 % ) . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) : 6 3 , 93 - 3 , 86 ( m , 1 H ) , 2 , 96 ­ 2 , 90 ( m , 1 H ) , 2 , 4 5 - 2 , 4 1 ( m , 1 H ) , 2 , 37 - 2 , 22 ( m , 4 H ) , 2 , 10 - 1, 9 0 ( m , 2 H ) , 1, 70 - 1, 60 ( m , 1 H ) .
E t a p a 5 : cloruro de 3-cianociclopentano-l-sulfonilo
U n a m e z c l a d e N - c l o r o s u c c i n i m i d a ( 40 , 3 g , 300 , 2 m m o l) e n á c i d o c l o r h í d r i c o c o n c e n t r a d o ( 82 m l) y a c e t o n it r i lo ( 409 m l) s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 15 m in u t o s . U n a s o l u c ió n d e e t a n o t io a t o d e S -( 3 - c i a n o c i c l o p e n t i l o ) ( 12 g , 75 , 5 m m o l) e n a c e t o n it r i lo ( 82 m l) s e a ñ a d i ó g o t a a g o t a a 0 ° C y s e a g it ó d u r a n t e 1 h o r a . L a m e z c l a s e d i l u y ó c o n b ic a r b o n a t o s ó d i c o a c u o s o ( 50 m l) , y s e e x t r a jo c o n m e t i l t e r c - b u t i l é t e r ( 3 x 300 m l) . L a s c a p a s o r g á n i c a s c o m b i n a d a s se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de éter de petróleo y acetato de etilo (100:0 a 80:20) para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (8,2 g, 60 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCh): 84,38-4,25 (m, 1H), 3,20-3,10 (m, 1H), 2,75-2,62 (m, 1H), 2,58-2,00 (m, 5H).
Ejemplo de referencia 44: 1-[({ds-3-[M etil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)am ino]ddobutil}metil)-sulfonil]azetidina-3-carbonitrilo
Etapa 1: 3-[(terc-butoxicarbonil)amino]ciclobutanocarboxilato de cis/trans-etilo
A una solución de una mezcla de clorhidrato de 3-aminociclobutanocarboxilato de cis- y trans-etilo (cis/trans = 10:1) (documento WO 2009 60278 A1) (10 g, 55,7 mmol) y trietilamina (19,4 ml, 139,1 mmol) en diclorometano (370 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota dicarbonato de di-terc-butilo (15,8 g, 72,3 mmol). Después de que se completara la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo resultante se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (10:1 a 3:1) para proporcionar la mezcla del título en forma de un sólido de color blanco (19 g, 92 %). RMN 1 H (400 MHz, CDCla ): 84,77 (s, 1 H), 4,13 (c, 3 H), 2,68 -2,82 (m, 1 H), 2,60 (d, 2 H), 1,99 -2,17 (m, 2 H), 1,43 (s, 9 H), 1,25 (t, 3 H).
Etapa 2: cis/trans-[3-(Metilamino)ciclobutil]metanol
Se suspendió hidruro de litio y aluminio (9,14 g, 240,4 mmol) en tetrahidrofurano seco (350 ml). La mezcla se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de 3-[(terc-butoxicarbonil)amino]ciclobutanocarboxilato de cis/trans etilo (cis/trans = 10:1) (11,7 g, 48,1 mmol) en tetrahidrofurano seco (170 ml). Después de que se completara la adición, la mezcla resultante se calentó a reflujo durante una noche. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con tetrahidrofurano (1,5 l) y después se enfrió hasta 0~5 °C. Se añadieron pequeñas porciones de Na2SO4.10 H2O hasta que el desprendimiento de gas hubo cesado. La mezcla se filtró para retirar los sólidos, que se lavaron con más tetrahidrofurano (500 ml). El filtrado se concentró a sequedad proporcionado la mezcla del título (cis/trans = 10:1) en forma de un aceite (10 g, >100 %). RMN 1 H (400 MHz, CD3OD) d 3,52 (d, 2 H) 3,15 (t, 1 H) 2,29 - 2,44 (m, 5 H) 2,06 - 2,29 (m, 1 H) 1,43 - 1,69 (m, 2 H).
Etapa 3: cis/ trans-[3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]-metanol
Se añadieron yoduro potásico (173 mg) y trietilamina (13 ml, 93,8 mmol) a una solución de cis/trans-[3-(metilamino)ciclobutil]metanol (6,0 g, 52,1 mmol) en acetona (250 ml). Después, se añadió 4-Cloro-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (14,4 g, 46,9 mmol) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante una noche. Después de la evaporación del disolvente a presión reducida, el residuo se diluyó con diclorometano (500 ml). La solución se lavó secuencialmente con agua (300 ml), ácido cítrico acuoso al 2 % (300 ml) y salmuera (300 ml) y después se secó sobre sulfato sódico. Después de la filtración, la solución se filtró y se concentró para proporcionar la mezcla del título en forma de un sólido claro (15,3 g, 85 %). Una porción (5,0 g) de la mezcla del cis/trans-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)-ciclobutil]metanol se separó por cromatografía de fluidos supercríticos usando una columna Chiralpak-AD: isómero cis, 4,6 g: RMN 1 H (400 MHz, CH3OH-d4): 8 8,20 (s, 1 H), 7,98 (d, 2 H), 7,53 (d, 1 H), 7,34 (d, 2 H), 6,83 (d, 2 H), 4,99-4,95 (m, 1 H), 3,56 (d, 1 H), 3,24 (s, 3 H), 2,36 (s, 3 H), 2,34-2,28 (m, 2 H), 2,24-2,19 (m, 1 H), 2,11-2,03 (m, 2 H). CL/EM (masa exacta) calculado para C19H22N4O3S: 386,14, encontrado (M H+ ): 387,3
isómero trans, 0,4 g: RMN 1 H (400 MHz, CHaO H ^ ): 8 8,20 (s, 1H), 7,98 (d, 2 H), 7,55 (d, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,84 (d, 2H), 5,26-5,22 (m, 1H), 3,69 (d, 1H), 3,30 (s, 3H), 2,46-2,41 (m, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,19-2,14 (m, 2H). CL/EM (masa exacta) calculado para C19H22N4O3S: 386,14, encontrado (M H+): 387,3
Etapa 4: 4-metilbencenosulfonato de ds-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)cidobutil]metilo
A una solución de cis-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metanol (20 g, 51,8 mmol) y N,N-dimetilaminopiridina (12,6 g, 103,6 mmol) en diclorometano (500 ml) a 0 °C se le añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (14,8 g, 77,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y después se lavó con agua (500 ml). Los lavados acuosos combinados se extrajeron con diclorometano (2 x 800 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de diclorometano y metanol (100:0 a 95:5) para proporcionar el compuesto del título (23 g, 82 %) en forma de un sólido de color blanco. CL/EM (masa exacta) calculado para C26H23N4O5S2: 540,150, encontrado (M H+ ): 541,3.
Etapa 5: etanotioato de S-{[ds-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil}-7H-pirmlo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ddobutil]-meMo}
A una solución de tioacetato potásico (678 mg, 5,93 mmol) en N,N-dimetilformamida (5 ml) se añadió una solución de 4-metilbencenosulfonato de [cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)-ciclobutil]metilo (2,0 g, 3,70 mmol) en N,N-dimetilformamida (6 ml) gota a gota durante 5 minutos a temperatura ambiente. Después, la mezcla se calentó a 50-55 °C durante una noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se inactivó vertiéndose en una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (60 ml). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (3 x 30 ml) y salmuera (30 ml). Después de secarse sobre Na2SO4 la solución se concentró. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de diclorometano y metanol (100:0 a 80:20) para proporcionar el compuesto del título (1 ,2 g, 73 %) en forma de un sólido de color amarillo. RMN 1 H (400 MHz, CDCla): 8 8,39 (s, 1H), 8,04 (d, 2 H), 7,45 (d, 1 H), 7,27 (d, 2 H), 6,63 (d, 1 H), 4,98-4,88 (m, 1 H) 3,22 (s, 3 H) 3,02-3,00 (m, 2 H) 2,45-2,44 (m, 2 H), 2,47 (m, 3 H) 2,22 (m, 3 H) 2,21­ 2,24 (m, 1 H) 1,92-1,87 (m, 2 H); CL/EM (masa exacta) calculado para C21H24N4O3S2: 444,129, encontrado (M H+ ): 445,1.
Etapa 6 : Ácido [ds-3-(m etil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirm lo[2,3-d]pirím idin-4-il}amino)ddobutil]metanosulfónico
A una solución de S-{[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metil}etanotioato (580 mg, 1,31 mmol), en ácido fórmico (10 ml) a temperatura ambiente se le añadió una solución acuosa al 30 % de peróxido de hidrógeno (0,7 ml, 6,92 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se vertió en una solución acuosa al 33 % de bisulfato sódico (1,12 ml) y después, se agitó durante 10 minutos. Después, se añadió una solución acuosa al 33 % de hidróxido sódico (1,8 ml) para ajustar el pH a 5. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El sólido se recogió por filtración, se lavó con agua (10 ml) y se secó al vacío a aproximadamente 60 °C para proporcionar el compuesto del título (634 mg, en bruto) en forma de un sólido de color blanco. CL/EM (masa exacta) calculado para C19H22N4O5S2; 450,103, encontrado (M H+ ); 451,3.
Etapa 7: cloruro de cis-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ciclobutil]-metanosulfonilo
Se añadió gota a gota cloruro de tionilo (0,3 ml, 3,33 mmol) durante 5 minutos a una solución de ácido cis-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metanosulfónico (150 mg, 0,33 mmol) en diclorometano (20 ml) a 0 °C. Se añadieron dos gotas de N,N-dimetilformamida a la solución, que se calentó entonces a 75 °C durante 2 horas. La mezcla se enfrió y el disolvente se evaporó. El residuo se lavó con diclorometano anhidro (3 x 10 ml) para proporcionar el compuesto del título en bruto (170 mg) en forma de un sólido de color amarillo; CL/EM (masa exacta) calculado para C19H21CIN4O4S2; 468,069, encontrado (M H+); 469,2.
Etapa 8 : 1-({[ds-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}am ino)ddobutil]-metil}sulfonil)azetidina-3-carbonitrilo
A una mezcla de 2,2,2-trifluoroacetato de azetidina-3-carbonitrilo (20 mg, 0,246 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (79 mg, 0,528 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota una solución de cloruro de cis-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)-ciclobutil]metanosulfonilo (20 mg, 0,164 mmol) en tetrahidrofurano (5 ml). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas. La solución se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se concentró para proporcionar el compuesto del título en bruto (10 mg, 11 %) en forma de un sólido de color blanco. CL/EM (masa exacta) calculado para C23H26N6O4S2; 514,62, encontrado (M H+ ); 515,1
Etapa 9: 1-[({ds-3-[Metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirím idin-4-il)am ino]ddobutil}metil)sulfonil]azetidina-3-carbonitrilo
1-({[cis-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]-metil}sulfonil)azetidina-3-carbonitrilo (30 mg, 0,58 mmol) en tetrahidrofurano (5 ml) se le añadió una solución de fluoruro de tetrabutilamonio 1 M en tetrahidrofurano (78 mg, 0,3 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 4 horas y entonces se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se concentró al vacío y se diluyó con acetato de etilo (100 ml). La solución resultante se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se sometió a cromatografía usando cromatografía de capa fina preparativa eluyendo con una mezcla de acetato de etilo y metanol (20:1) para proporcionar el compuesto del título (11 mg, 52,6%) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, CHaOH-d4): 88,12 (s, 1H), 7,13-7,12 (d, 1H), 6,70-6,69 (d, 1H), 5,13-5,08 (m, 2H), 4,88-4,81 (m, 1H), 4,26­ 4,22 (m, 2H), 4,14-4,10 (m, 2H), 3,74 -3,68 (m, 1H), 3,36-3,32 (s, 3H), 2,64-2,53 (m, 3H), 2,25-2,17 (m, 2H); CL/EM (masa exacta) calculado para C-i 6H20N6O2S; 360,44, encontrado (M H+ ); 361,1
Ejemplos de referencia 45 (cis) y 46 (trans): cis- y trans-3-Ciano-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)aminolciclobutil}-ciclobutanosulfonamida
Estos compuestos se prepararon usando una mezcla (~1:1) de cloruro de cis y trans-3-cianociclobutano-1-sulfonilo. La mezcla en bruto de isómeros cis y trans se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de diclorometano y metanol (10 :0 a 10 :1 ) para proporcionar una mezcla (1 ,1 g) de los compuestos del título en forma de un sólido de color blanco (61 %). Los isómeros cis y trans se sometieron entonces a separación quiral por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC)
cis-3-Ciano-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}ciclobutanosulfonamida
El aislamiento del primer isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 1, isómero cis: 337 mg (33 %); RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6) 8 11,61 (s a, 1 H), 8,08 (s, 1 H), 7,66 (d, 1 H), 7,13 (dd, 1 H), 6,62 (dd, 1 H), 4,86 (s, 1 H), 3,84 (t, 1 H), 3,57 (d, 1 H), 3,26 - 3,41 (m, 2 H), 3,22 (s, 3 H), 2,41 - 2,70 (m, 6 H), 2,09 - 2,23 (m, 1 H); CL/EM (masa exacta) calculado para C16H20N6O2S; 360,44, encontrado (M H+ ); 361,2
trans-3-dano-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)am ino]ddobutil}ddobutanosulfonamida
El aislamiento del segundo isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 2, isómero trans: 361 mg (36 %); RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 8 11,60 (s a, 1 H), 8,08 (s, 1 H), 7,68 (d, 1 H), 7,12 (dd, 1 H), 6,61 (dd, 1 H), 4,70 - 4,99 (m, 1 H), 3,81 - 3,95 (m, 1 H), 3,51 - 3,63 (m, 2 H), 3,36 - 3,51 (m, 2 H), 3,22 (s, 3 H), 2,59 - 2,77 (m, 2 H), 2,50 - 2,59 (m, 2 H), 2,09 - 2,24 (m, 2 H); CL/EM (masa exacta) calculado para C16H20N6O2S; 360,44, encontrado (M H+); 361,2
La mezcla de cloruros de cis- y trans-3-cianociclobutano-1-sulfonilo se preparó como sigue:
Etapa 1: 3-Oxociclobutano-1-carbonitrilo
Se burbujeó gas ozono a través de una solución de 3-metilenociclobutano1-carbonitrilo (5 g, 53,73 mmol) en diclorometano (225 ml) a -78 °C durante 10 minutos hasta que la solución se volvió de color azul. La solución se purgó entonces con gas nitrógeno hasta que el color azul hubo desaparecido, y se inactivó con la adición gota a gota de sulfuro de dimetilo (1,5 ml) a -78 °C. La solución resultante se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 2: 3-Hidroxiciclobutano-1-carbonitrilo
A una solución de 3-oxociclobutano-1-carbonitrilo en metanol (150 ml) se le añadió borohidruro sódico (4,44 g, 116,84 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante una noche y se inactivó usando cloruro de amonio acuoso saturado (100 ml). La capa orgánica se retiró usando un evaporador rotatorio y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para dar el compuesto del título (6,5 g, 100%) en forma de un aceite. RMN 1H (400 MHz, CDCla): 84,25-4,17 (m, 1H), 2,67-2,78 (m, 2H), 2,50-2,61 (m, 1H), 2,24-2,38 (m, 2H).
Etapa 4: 4-metilbencenosulfonato de 3-(danom etil)-3-m etilddobutilo
A una solución de 3-hidroxiciclobutano-1-carbonitrilo (6,5 g, 67 mmol) en diclorometano seco (125 ml) se le añadió 4-dimetilaminopiridina (1,50 g, 12,22 mmol) y trietilamina (20 ml, 140 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos y después se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (19,62 g, 102,91 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado. Se extrajo la capa de diclorometano, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (0­ 50 %) para proporcionar el compuesto del título (9,5 g, 65,7 %) en forma de un sólido de color amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCla): 87,71 (d, 2H), 7,296 (d, 2H), 4,56-4,77 (m, 1H), 2,54-2,67 (m, 3H), 2,43-2,52 (m, 2H), 2,4 (s, 3H).
Etapa 5: Etanotioato de S-(3-cianoddobutilo)
La mezcla de 4-metilbencenosulfonato de 3-(cianometil)-3-metilciclobutilo (9,39 g, 37,4 mmol) y tioacetato potásico (8,60 g, 75,49 mmol) en N,N-dimetilformamida (125 ml) se calentó a 80 °C durante 2 horas y después se vertió en agua (200 ml). La mezcla se diluyó con metil terc-butil éter (2 x 150 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró para proporcionar el compuesto del título (3,52 g, 61 %) en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCh): 84,22 (m, 1H), 2,99 - 3,34 (m, 1H), 2,82 - 2,92 (m, 2H), 2,40 - 2,49 (m, 2H), 2,26 - 2,32 (s, 3H).
Etapa 5: cloruro de 3-cianociclobutano-l-sulfonilo
Una mezcla de N-clorosuccinimida (7,98 g, 60 mmol) en ácido clorhídrico concentrado (15 ml) y acetonitrilo (60 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Una solución de etanotioato de S-(3-cianociclobutilo) (2,33 g, 15 mmol) en acetonitrilo (15 ml) se añadió gota a gota a 0 °C y se agitó durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con bicarbonato sódico acuoso saturado (200 ml) y se extrajo con metil terc-butil éter (3 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de éter de petróleo y acetato de etilo (1:0 a 1:1) para proporcionar el compuesto del título (2,22 g, 83 %) en forma de un sólido de color blanco RMN 1H (400 MHz, CDCh): 8 4,53-4,47 (m, 1H), 3,52-3,45 (m, 1H), 3,14-3,06 (m, 2H), 3,03-2,95 (m, 2H).
Ejemplos de referencia 47 (cis) y 50 (trans): cis- y trans-3-[(cis-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}metil)-sulfonil]ciclobutanocarbonitrilo
Estos compuestos se prepararon usando una mezcla (~1:1) de cis- y trans-3-[({cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}metil)sulfonil]ciclobutanocarbonitrilo. La mezcla en bruto de isómeros cis y trans se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa usando un gradiente de agua y acetonitrilo (95:5 a 5:95) para proporcionar una mezcla de los compuestos del título (80 mg, 45,5 %) en forma de un sólido de color pardo claro. Los isómeros cis y trans se analizaron entonces quiralmente por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) usando condiciones de columna (col AD-34,6 x 50 mm, 60 % de etanol, 3 ml/min).
cis-3-[({cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ciclobutil}metil)sulfonil]ciclobutano-carbonitrilo
El aislamiento del primer isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 1, isómero cis: 17,3 mg (21 %); tiempo de retención de SFC = 0,992 minutos; RMN 1 H (400 MHz, CHaOH-d^: 58,12 (s, 1H), 7,13 (d, 1H), 6,69 (d, 1H), 5,12 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,43 (s, 3H), 3,27 (m, 2H), 2,77 (m, 3H), 2,58 (m, 3H), 2,21 (m, 2H); CL/EM (masa exacta) calculado para C17H21N5O2S; 359,452, encontrado (M H+ ); 360,1
trans-3-[({ds-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)am ino]ddobutil}m etil)sulfonil]ddobutano-carbonitrilo
El aislamiento del segundo isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 2, isómero trans: 17,3 mg (21 %); Tiempo de retención de SFC = 2,007 minutos. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-da ): 511,6 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,15 (d, 1H), 6,63 (d, 1H), 5,13 (m, 1H), 4,07 (m, 1H), 3,51 (m, 1H), 3,46 (m, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,26 (s, 3H), 2,75 (m, 4H), 2,40 (m, 3H), 2 ,12 (m, 2 H); C L / e M (masa exacta) calculado para C17H21N5O2S; 359,452, encontrado (M H+); 360,1
La mezcla de cis- y trans-3-[({cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}metil)-sulfonil]ciclobutanocarbonitrilo se preparó como sigue
Etapa 1: 3-Mercaptoddobutano-1-carbonitrilo
A la solución de etanotioato de S-(3-cianociclobutilo) del Ejemplo de referencia 42, etapa 5 (2,0 g, 12,9 mmol) en metanol (40 ml) se le añadió carbonato potásico (4,45 g, 32,3 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 2 horas. Después, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió ácido clorhídrico acuoso 2 N hasta pH < 4. La solución resultante se extrajo con terc-butil metil éter (3 x 25 ml) y entonces las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 x 20 ml) y salmuera (40 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se retiró el disolvente en exceso para obtener el producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (100:0 a 90:10) para obtener el compuesto del título (650 mg, 44,6 %) en forma de un aceite incoloro.
Etapa 2: 3-({[cis-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ciclobutil]-metil}sulfanil)ciclobutanocarbonitrilo
Una solución de 4-metilbencenosulfonato de cis-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metilo del Ejemplo de referencia 47, Etapa 4 (400 mg, 0,741 mmol) se agitó en N-metilpirrolidina (5 ml). Entonces se añadió 1,8-diazabicicloundec-7-eno (225 mg, 1,482 mmol) y 3-mercaptociclobutano-1-carbonitrilo (167 mg, 1,482 mmol) a la mezcla de reacción. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se añadieron agua (200 ml) y acetato de etilo (500 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 500 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron y se concentraron. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (100:0 a 50:50) para proporcionar el compuesto del título (340 mg, 95 %). CL/EM (masa exacta) calculado para C24H27N5O2S2; 481,63, encontrado (M H+ ); 482,3
Etapa 3: 3-({[cis-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il}amino)ciclobutil]-metil}sulfonil)ciclobutanocarbonitrilo
3-({[cis-3-(Metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metil}-sulfanil)ciclobutanocarbonitrilo (340 mg, 0,706 mmol) se disolvió en una mezcla de tetrahidrofurano (8 ml), etanol (8 ml) y agua (4 ml) a 0 °C. Se añadió peroxomonosulfato potásico (3,04 g, 4,94 mmol) y la reacción fue en porciones durante 1 hora a 0 °C. La reacción se calentó a temperatura ambiente, la mezcla se filtró entonces, y se lavaron los sólidos con una mezcla de tetrahidrofurano (8 ml), etanol (8 ml) y agua (4 ml), el filtrado se trató con una solución de bisulfito sódico al 10 % acuosa (20 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico se añadió para ajustar el pH a ~7. La mezcla se extrajo con diclorometano (3 x 30 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (100:0 a 10:90) para obtener el compuesto del título (250 mg, 69% ) en forma de un sólido. CL/EM (masa exacta) calculado para C24H27N5O4S2; 513,63, encontrado (M H+ ); 514,0
Etapa 4: cis y trans-3-[({ds-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)am ino]ddobutil}m etil)-sulfonil]ddobutanocarbonitrilo
A una solución de 3-({[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)-ciclobutil]metil}sulfonil)ciclobutanocarbonitrilo (250 mg, 2,76 mmol) en tetrahidrofurano (4 ml) se le añadió una solución de fluoruro de tetrabutilamonio 1 M en tetrahidrofurano (636 mg, 13,8 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 6 horas y entonces se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se concentró al vacío y se diluyó con acetato de etilo (50 ml). La solución resultante se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se purificó usando cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa preparativa usando gradiente de agua y acetonitrilo (90:10 a 10:90) para proporcionar el compuesto del título (80 mg, 45 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, CH3OH-d4): 58,13 (s, 1H), 7,13 (d, 1H), 6,69 (d, 1H), 5,11 (m, 1H), 4,07 (m, 1H), 3,49 (m, 1H), 3,47 (m, 1H), 3,36 (s, 3H), 2,92 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 2,62 (m, 3H), 2,26 (m, 2H); CL/EM (masa exacta) calculado para C17H21N5O2S; 359,452, encontrado (M H+ ); 360,2
Ejemplo de referencia 48: N-Metil-N-[ds-3-({[(3-metiloxetan-3-il)metil]sulfonil}metil)ddobutil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Etapa 1: N-metil-N-[ds-3-({[(3-metiloxetan-3-il)metil]sulfanil}metil)ddobutil]-7-[(4-metilfenil)-sulfonil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Se burbujeó nitrógeno a través de una mezcla de S-{[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)-sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)cidobutil]metil}etanotioato, Ejemplo de referencia 47, etapa 5; 539 mg, 1,21 mmol) y carbonato potásico (209 mg, 1,51 mmol) en metanol (30 ml) durante dos minutos a 0 °C seguido de la adición de 3-(bromometil)-3-metiloxetano (100 mg, 0,60 mmol). La mezcla se calentó gradualmente y se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. La reacción se concentró y se diluyó con acetato de etilo (200 ml), se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró para dar el compuesto del título (170 mg, en bruto) en forma de un sólido de color blanco. CL/EM (masa exacta) calculado para C24H30N4O3S2; 486,65, encontrado (M H+ ); 487,1
Etapa 2: N-metil-N-[cis-3-({[(3-metiloxetan-3-il)metil]sulfonil}metil)ciclobutil]-7-[(4-metilfenil)-sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
A una solución de N-metil-N-[cis-3-({[(3-metiloxetan-3-il)metil]sulfanil}metil)ciclobutil]-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (170 mg, 0,35 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml), agua (10 ml) y etanol (20 ml) se le añadió peroxomonosulfato potásico (645 mg, 1,049 mmol) en porciones a 0 °C durante 1 hora. La mezcla se calentó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, se añadió bisulfito sódico acuoso, seguido de diclorometano (20 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (152 mg, en bruto). CL/EM (masa exacta) calculado para C24H30N4O5S2; 518,65, encontrado (M H+ ); 519,2
Etapa 3: N-Metil-N-[ds-3-({[(3-metiloxetan-3-il)metil]sulfonil]metil)ddobutil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
La mezcla de N-metil-N-[cis-3-({[(3-metiloxetan-3-il)metil]sulfonil}metil)ciclobutil]-7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (152 mg, 0,293 mmol) e hidróxido de litio (62 mg, 1,47 mmol) en una mezcla de agua (10 ml) y etanol (20 ml) se agitó a 50 °C durante 2 horas. Después, la mezcla se concentró y el residuo se recogió en acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa usando un gradiente de agua y acetonitrilo (95:5 a 5:95) para dar el compuesto del título (17,6 mg, 16 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1 H (400 MHz, CH3OH-d4): 8 8,13 (s, 1H), 7,13-7,12 (d, 1H), 6,70-6,69 (d, 1H), 5,16-5,13 (m, 1H), 4,77-4,76 (m, 2H), 4,40-4,39 (m, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,36 (m, 3H), 3,31 (m, 2H), 2,65-2,62 (m, 2H), 2,26-2,23 (m, 2H), 1,67 (s, 3H); CL/EM (masa exacta) calculado para C17H24N4O3S; 364,48, encontrado (M H+ ); 365,1
Ejemplos de referencia 49 y 51 y Ejemplo 55; Los siguientes compuestos se fabricaron partiendo de cloruro de cis-[3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metanosulfonilo, de acuerdo con los procedimientos del Ejemplo de referencia 44, Etapa 8 (sulfonilación) y Etapa 9 (desprotección), sustituyendo 2,2,2-trifluoroacetato de azetidina-3-carbonitrilo por la amina apropiada en la Etapa 8.
Ejemplo de referencia 49: 3-Metil-1-[({cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ddobutil}meW )sulfonil]azetidina-3-carbonitrilo
El compuesto del título (68 mg) se preparó usando clorhidrato de 3-metilazetidina-3-carbonitrilo en la etapa de sulfonilación y se desprotegió usando el procedimiento del Ejemplo de referencia 44, Etapa 9. El compuesto se purificó usando cromatografía de capa fina preparativa eluyendo con acetato de etilo (100 %). RMN 1 H (400 MHz, CH3OH-d4): 8 8,12 (s, 1H), 7,13-7,13 (d, 1H), 6,70-6,69 (d, 1H), 5,06-5,17 (m, 1H), 4,27-4,25 (d, 2H), 3,92-3,90 (d, 2H), 3,36 (s, 3H), 3,33 (s, 2H), 2,61-2,58 (m, 3H), 2,23-2,21 (m, 1H), 1,695 (s, 3H). CL/EM (masa exacta) calculado para C17H22N6O2S; 374,467, encontrado (M H+ ); 375,1
Ejemplo de referencia 51: (1R,5R)-3-[({ds-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)am ino]ddobutil}metil)-sulfonil]-3-azabicido[3.1.0]hexano-1-carbonitrílo
El compuesto del título (120 mg) se preparó usando 2,2,2-trifluoroacetato de (1R,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-1-carbonitrilo en la etapa de sulfonilación y se desprotegió usando el procedimiento del Ejemplo de referencia 44, Etapa 9. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de diclorometano y acetato de etilo (100:0 a 95:5). RMN 1 H (400 MHz, CH3OH-d4): 8 8,107 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 5,14 (m, 1H), 3,69-3,67 (d, 1H), 3,58-3,56 (d, 1H) 3,50 (m, 1H) 3,45 (m, 1H) 3,33 (m, 1H) 3,26 (s, 3H) 2,44 (m, 2H) 2,42-2,38 (m, 3H) 2,11-2,09 (m, 1H) 1,51-1,48 (m, 1 H) 1,11-1,09 (m, 1 H); C L / e M (masa exacta) calculado para C18H22N6O2S; 386,47, encontrado (M H+); 387,0
2,2,2-trifluoroacetato de (1R,5R)-3-Azabiciclo[3.1,0]hexano-1-carbonitrilo se preparó como sigue:
Etapa 1: rac-1-formil-3-azabicido[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo racémico
Se añadió 1,1,1-triacetoxi-1,1-dihidro-1,2-benziodoxol-3(1H)-ona (6,5 g, 15,2 mmol) a una solución de terc-butil-1-(hidroximetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato racémico (Synlett 2009, 921) (2,5 g, 11,7 mmol) en diclorometano anhidro (60 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con diclorometano (60 ml), se lavó con una solución saturada acuosa de sulfito sódico, bicarbonato sódico saturado (30 ml) y salmuera (50 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró para dar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (1,7 g, 68 %). RMN 1H (400 MHz, CDCl3): 8 9,01 (d, 1 H), 3,83 (d, 1 H), 3,68 (t, 1H), 3,59 (dd, 1 H), 3,50-3,36 (m, 1 H), 2,25-2,09 (m, 1 H), 1,63 (t, 1 H), 1,43 (s, 9 H), 1,19-1,06 (m, 1 H).
Etapa 2: 1-[(hidroxiimino)metil]-3-azabiddo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo racémico
Se añadieron carbonato potásico (3,89 g, 28,2 mmol) y clorhidrato de hidroxilamina (671 mg, 9,7 mmol) a una solución de 1-formil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo racémico (1,7 g, 8,05 mmol) en diclorometano anhidro (40 ml) a temperatura ambiente y después se agitó durante 16 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (80 ml), y se lavó con agua (30 ml) y salmuera (30 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (0:100 a 83:17) para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (1,6 g, 88 %). RMN 1H (400 MHz, CDCls): 8 7,18 (s, 1 H), 3,74-3,55 (m, 3 H), 3,44-3,40 (m, 1 H), 1,74-1,72 (m, 1 H), 1,44 (s, 9 H), 1,10 (t, 1 H), 0,86-0,83 (m, 1 H).
Etapa 3: terc-Butil-1-ciano-3-azabiddo[3.1.0]hexano-3-carboxilato racémico
A una solución de terc-butil-1-[(hidroxiimino)metil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato racémico (925 mg, 4,09 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (100 ml) se le añadió N-(trietilamonio sulfonil)carbamato de metilo (2,92 g, 12,3 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 3 horas. Después de la evaporación del disolvente, el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla de éter de petróleo y acetato de etilo (5:1) para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (570 mg, 67 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla): 83,84 (dd, 1 H), 3,64 (dd, 1 H), 3,50 (d, 1 H), 3,46 (dd, 1 H), 2,21-2,12 (m, 1 H), 1,44 (s, 9 H), 0,96 (t, 1 H).
La mezcla racémica (1 g) se sometió entonces a separación quiral por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) usando condiciones de columna (col Chiral Pak AD-H, 21 x 250 mm, 20 % de etanol (0,05 % de ácido fórmico), 20 ml/min).
(1R, 5R)-1-Ciano-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo
El aislamiento del primer isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 1 (PF-06689475), 450 mg (45 %); tiempo de retención de SFC = 3,674 minutos; RMN 1H (400 MHz, CDCls): 8 3,84 (dd, 1 H), 3,64 (dd, 1 H), 3,50 (d, 1 H), 3,46 (dd, 1 H), 2,21-2,12 (m, 2 H), 1,44 (s, 9 H), 0,96 (t, 1 H)
(1S, 5S)-1-Ciano-3-azabicido[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo
El aislamiento del segundo isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 2 (PF-06689473), 420 mg (42 %); tiempo de retención de SFC = 5,118 minutos; RMN 1H (400 MHz, CDCls): 8 3,84 (dd, 1 H), 3,64 (dd, 1 H), 3,50 (d, 1 H), 3,46 (dd, 1 H), 2,21-2,12 (m, 2 H), 1,44 (s, 9 H), 0,96 (t, 1 H).
Etapa 4: 2,2,2-trifluoroacetato de (1R,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-1-carbonitrilo
A una solución de (1R,5R)-1-ciano-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo (150 mg, 0,725 mmol) en diclorometano (3 ml) se le añadió una mezcla 1:1 de diclorometano (1 ml) y ácido trifluoroacético (1 ml) gota a gota a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se concentró y se lavó con diclorometano (2 x 10 ml) para dar el compuesto del título (120 mg, > 100 %) en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplos de referencia 52 (cis) y 53 (trans): c is -y trans-3-(Difluorometil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-cidobutil}ddobutanosulfonamida
Estos compuestos se prepararon usando una mezcla (~1:1) de cis- y trans-cloruro de 3-(difluorometil)ciclobutano-1-sulfonilo. La mezcla en bruto de isómeros cis y trans se purificó por cromatografía de fase inversa para proporcionar una mezcla (0,26 g, 15,82 %) de los compuestos del título en forma de un sólido de color blanco. Los isómeros cis y trans se sometieron entonces a separación quiral por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) usando condiciones de columna (col OD-H 30 x 250 mm, 5 pm, 32 % de etanol, 60 ml/min).
trans-3-(Difluorometil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}ciclobutanosulfonamida
El aislamiento del primer isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 1, isómero trans: 160,5 mg (46,4 %); tiempo de retención de SFC = 8,28 minutos; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 11,72 (s a, 1 H), 8,10 (s, 1 H), 7,65 (d, 1 H), 7,15 (dd, 1 H), 6,64 (dd, 1 H), 6,4-6,04 (d, 1 H), 4,81 - 4,94 (m, 1 H), 3,77 (t, 1 H), 3,51 - 3,64 (m, 1 H), 3,25 (s, 3 H), 2,65-2,80 (m, 1H), 2,52 - 2,63 (m, 2 H), 2,15 - 2,45 (m, 6 H); CL/EM (masa exacta) calculado para C16H21F2N5O2S; 385,44, encontrado (M H+); 386,1
cis-3-(Difluorometil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}ciclobutanosulfonamida
El aislamiento del segundo isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 2, isómero cis: 157,8 mg (45,6 %); tiempo de retención de SFC = 8,68 minutos; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 11,62 (s a, 1 H), 8,10 (s, 1 H), 7,54 (d, 1 H), 7,15 (dd, 1 H), 6,64 (dd, 1 H), 6,04 (d, 1 H), 4,81 - 4,94 (m, 1 H), 3,77 (t, 1 H), 3,51 - 3,64 (m, 1 H), 3,25 ( s , 3 H ) , 2 , 65 - 2 , 80 ( m , 1 H ) , 2 , 52 - 2 , 63 ( m , 2 H ) , 2 , 15 - 2 , 33 ( m , 6 H ) ; C L / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 16H 21F 2N 5O 2S ; 385 , 44 , e n c o n t r a d o (M H ) ; 386 , 1
E t a p a 1 : 3-oxociclobutano-l-carboxilato de etilo
U n a m e z c l a d e á c i d o o x o c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x í l i c o ( 99 , 52 g , 0 , 90 m o l) y o r t o a c e t a t o d e t r ie t i lo ( 285 g , 1 , 76 m o l) e n t o l u e n o ( 2 l) s e c a l e n t ó a r e f lu jo d u r a n t e u n a n o c h e . E l t o l u e n o s e r e t ir ó a p r e s ió n r e d u c id a ; e l r e s i d u o s e r e p a r t ió e n t r e a c e t a t o d e e t i lo y a g u a . L a c a p a a c u o s a s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i lo ( 2 x 500 m l) . L a c a p a o r g á n i c a c o m b i n a d a s e la v ó c o n s a l m u e r a ( 500 m l) , s e s e c ó s o b r e s u lf a t o s ó d ic o , s e f ilt r ó y s e c o n c e n t r ó e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r p a r d o . N o s e r e a l i z ó p u r i f ic a c ió n a l g u n a a n t e s d e la s ig u i e n t e e t a p a . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) 6 4 , 21 ( c , 2 H ) , 3 , 34 - 3 , 47 ( m , 2 H ) , 3 , 15 - 3 , 3 4 ( m , 3 H ) , 1, 12 - 1, 3 6 (t, 3 H )
E t a p a 2 : 3-hidroxiciclobutano-1-carboxilato de etilo
A u n a s o l u c ió n d e 3 - o x o c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x i l a t o d e e t i lo ( 10 10 g , 7235 m m o l) e n e t a n o l ( 12 l) s e le a ñ a d i ó b o r o h id r u r o s ó d i c o ( 220 g , 5789 m m o l) e n p o r c i o n e s a 0 ° C d u r a n t e u n p e r io d o d e 1 h o r a . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 2 h o r a s . L a r e a c c i ó n s e e n f r ió d e n u e v o a 0 ° C y s e in a c t iv ó u s a n d o á c i d o c l o r h íd r ic o a c u o s o 1 N ( 2 l), lo q u e d io c o m o r e s u l t a d o u n p r e c ip i t a d o d e c o l o r b la n c o . L a m e z c l a s e f ilt r ó y e l f i l t r a d o s e e v a p o r ó a s e q u e d a d . E l r e s i d u o s e r e p a r t ió e n t r e a c e t a t o d e e t i lo ( 10 l) y a g u a ( 5 l), la c a p a o r g á n i c a s e r e t ir ó y la f a s e a c u o s a s e e x t r a jo d e n u e v o c o n a c e t a t o d e e t ilo ( 2 x 5 l). L a s c a p a s o r g á n i c a s c o m b i n a d a s s e la v a r o n c o n s a l m u e r a , s e s e c a r o n s o b r e s u l f a t o s ó d i c o y s e c o n c e n t r a r o n p a r a d a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 710 g , 70 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e in c o l o r o . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C l a ) 6 3 , 98 - 4 , 2 3 ( c , 3 H ) , 2 , 46 - 2 , 6 4 ( m , 3 H ) , 2 , 05 - 2 , 2 3 ( m , 2 H ) , 1, 14 - 1, 3 0 (t, 3 H ) E t a p a 3 : 3-(tosiloxi)ádobutano-1-carboxilato de etilo
E s t e c o m p u e s t o s e p r e p a r ó s i g u i e n d o e l E j e m p l o d e r e f e r e n c ia 42 , E t a p a 4 , y s u s t i t u y e n d o 3 - h i d r o x i c i c l o b u t a n o - 1 -c a r b o x i l a t o d e e t i lo p o r 3 - h i d r o x i c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o n i t r i l o . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 0 -20 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 88 , 3 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C l a ) 6 7 , 78 ( m , 2 H ) , 7 , 34 ( m , 2 H ) , 4 , 73 ( m , 1 H ) , 3 , 98 - 4 , 2 3 ( c , 2 H ) , 2 , 54 - 2 , 6 8 ( m , 1 H ) , 2 , 28 - 2 , 5 4 ( m , 7 H ) , 1, 14 - 1, 3 3 ( m , 3 H )
E t a p a 4 : 4-metilbencenosulfonato de 3-(hidroximetil)ciclobutilo
A u n a s o l u c i ó n d e 3 -( t o s i l o x i ) c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x i l a t o d e e t i lo ( 3 , 03 g , 10 , 31 m m o l) e n t e t r a h id r o f u r a n o ( 250 m l) a 0 ° C s e le a ñ a d i ó h id r u r o d e lit io y a l u m i n i o ( 783 , 3 m g , 20 , 61 m m o l) e n p o r c i o n e s . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e a g it ó a 0 ° C d u r a n t e 2 h o r a s . S e a ñ a d i ó d e c a h i d r a t o d e s u lf a t o s ó d i c o s ó l id o , la r e a c c i ó n s e f ilt r ó y s e c o n c e n t r ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 1, 94 g , 74 , 62 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e in c o l o r o . E l m a t e r ia l s e u s ó d i r e c t a m e n t e e n la s ig u i e n t e e t a p a . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) 6 7 , 76 (d , 2 H ) , 7 , 32 ( d , 2 H ) , 4 , 69 (t, 1 H ) , 3 , 46 - 3 , 63 ( m , 2 H ) , 2 , 43 ( s , 3 H ) , 2 , 16 -2 , 33 ( m , 2 H ) , 1, 77 - 2 , 0 7 ( m , 3 H )
E t a p a 5 : 4-metilbencenosulfonato de 3-formilciclobutilo
A u n a m e z c l a d e 4 - m e t i l b e n c e n o s u l f o n a t o d e 3 -( h id r o x im e t i l ) c ic l o b u t i l o ( 1, 94 g , 7 , 76 m m o l) e n d ic l o r o m e t a n o ( 200 m l) s e le a ñ a d i ó p e r y o d in a t o d e D e s s - M a r t i n ( 4 , 31 g , 10 , 07 m m o l) a 0 ° C . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e u n a n o c h e . L a r e a c c i ó n s e d i l u y ó c o n b ic a r b o n a t o s ó d i c o a c u o s o s a t u r a d o , la c a p a o r g á n i c a s e e x t r a jo , s e s e c ó s o b r e s u lf a t o s ó d i c o y s e c o n c e n t r ó . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 0 - 50 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 1, 76 g , 92 % ) c o m o u n a c e i t e in c o l o r o . R M N 1 H ( 400 M H z , D M S O - d 6) 6 9 , 55 (d , 1 H ) , 7 , 79 ( d , 2 H ) , 7 , 49 ( d , 2 H ) , 4 , 83 (t, 1 H ) , 2 , 63 - 2 , 90 ( m , 1 H ) , 2 , 43 ( s , 3 H ) , 2 , 26 - 2 , 37 ( m , 2 H ) , 2 , 11 - 2 , 26 ( m , 2 H )
E t a p a 6 : 4-metilbencenosulfonato de 3-(difluorometil)ciclobutilo
A u n a s o l u c i ó n d e 4 - m e t i l b e n c e n o s u l f o n a t o d e 3 - f o r m i l c ic l o b u t i l o ( 883 , 4 m g , 3 , 48 m m o l) e n d ic l o r o m e t a n o ( 150 m l) s e le a ñ a d i ó t r if lu o r u r o d e d ie t i l a m in o a z u f r e ( 1, 12 g , 6 , 96 m m o l) g o t a a g o t a a - 30 ° C . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e u n a n o c h e . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e v e r t ió e n m e z c l a d e d ic l o r o m e t a n o ( 50 m l) y b ic a r b o n a t o d e a m o n i o a c u o s o s a t u r a d o ( 50 m l) . L a c a p a a c u o s a s e e x t r a jo c o n d ic l o r o m e t a n o ( 2 x 100 m l) , la c a p a o r g á n i c a c o m b i n a d a s e la v ó c o n s a l m u e r a ( 50 m l) , s e s e c ó s o b r e s u lf a t o s ó d ic o , s e f ilt r ó y s e c o n c e n t r ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 820 , 2 m g , 85 , 76 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) 6 7 , 75 -7 , 86 ( m , 2 H ) , 7 , 35 (d , 2 H ) , 5 , 56 - 5 , 85 ( d d , 1 H ) , 4 , 70 - 4 , 9 1 ( m , 1 H ) , 2 , 45 ( s , 3 H ) , 2 , 14 - 2 , 4 1 ( m , 5 H ) .
E t a p a 7 : Etanotioato de S-(3-(difluorometil)ciclobutilo)
E s t e c o m p u e s t o s e p r e p a r ó s i g u i e n d o e l E j e m p l o d e r e f e r e n c i a 42 , E t a p a 5 , y s u s t i t u y e n d o 4 - m e t i l b e n c e n o s u l f o n a t o d e 3 -( d i f l u o r o m e t i l ) c ic l o b u t i l o p o r 4 - m e t i l b e n c e n o s u l f o n a t o d e 3 -( c i a n o m e t i l ) - 3 - m e t i l c i c l o b u t i l o . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 0 ­ 25 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 92 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) 6 5 , 73 ( d , 1 H ) , 4 , 12 ( c , 1 H ) , 2 , 49 - 2 , 82 ( m , 3 H ) , 2 , 27 - 2 , 31 ( m , 3 H ) , 2 , 06 - 2 , 23 ( m , 2 H ) .
E t a p a 8 : cloruro de 3-(difluorometil)ciclobutano-1-sulfonilo
E s t e c o m p u e s t o s e p r e p a r ó s i g u i e n d o e l E j e m p l o d e r e f e r e n c ia 42 , E t a p a 6 , y s u s t i t u y e n d o e t a n o t io a t o d e S -( 3 -( d i f l u o r o m e t i l ) c id o b u t i lo ) p o r e t a n o t io a t o d e S -( 3 - c i a n o c i d o b u t i l o ) . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 0 - 50 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t í t u lo ( 100 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o . R M N 1 H ( 400 m H z , C D C h ) 8 5 , 59 - 6 , 16 ( m , 1 H ) , 4 , 21 - 4 , 55 ( m , 1 H ) , 2 , 73 - 3 , 06 ( m , 3 H ) , 2 , 55 - 2 , 72 ( m , 2 H ) .
Ejemplos de referencia 54A (trans) y 54B (cis): cis- y trans-1-(3-Ciano-1-metilcidobutil)-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobutil}metanosulfonamida
Figure imgf000053_0001
1-(trans-3-Ciano-1-metilciclobutil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}-metanosulfonamida E l a i s l a m i e n t o d e l p r im e r i s ó m e r o d e e lu c ió n p r o p o r c io n ó e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ; P i c o 1, i s ó m e r o t r a n s : 7 , 0 m g ( 5 , 3 % ) ; t ie m p o d e r e t e n c ió n d e S F C = 3 , 75 m in u t o s ; R M N 1 H ( 400 M H z , M e t a n o ^ ) 8 8 , 12 ( s , 1 H ) , 7 , 14 - 7 , 13 ( m , 1 H ) , 6 , 7 1 ­ 6 , 69 ( m , 1 H ) , 4 , 85 - 4 , 84 ( m , 1 H ) , 3 , 75 - 3 , 69 ( m , 1 H ) , 3 , 36 ( m , 4 H ) , 3 , 25 ( s , 2 H ) , 2 , 79 - 2 , 70 ( m , 4 H ) , 2 , 32 - 2 , 29 ( m , 2 H ) , 2 , 2 1 - 2 , 17 ( m , 2 H ) , 1, 54 ( s , 3 H ) ; C L / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 18H 24N 6O 2S ; 388 , 49 , e n c o n t r a d o (M H ) ; 389 .0
1-(cis-3-Ciano-1-metilciclobutil)-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}-metanosulfonamida E l a i s l a m i e n t o d e l s e g u n d o is ó m e r o d e e lu c ió n p r o p o r c io n ó e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ; P i c o 2 , i s ó m e r o c i s : 18 , 8 m g ( 14 , 5 % ) ; t ie m p o d e r e t e n c ió n d e S F C = 4 , 84 m in u t o s ; R M N 1 H ( 400 M H z , C H a O H ^ ) 8 8 , 12 ( s , 1 H ) , 7 , 14 - 7 , 13 ( m , 1 H ) , 6 , 71 - 6 , 6 7 ( m , 1 H ) , 4 , 84 ( m , 1 H ) , 3 , 77 - 3 , 75 ( m , 1 H ) , 3 , 38 ( m , 4 H ) , 3 , 25 ( s , 2 H ) , 2 , 8 1 - 2 , 77 ( m , 2 H ) , 2 , 56 - 2 , 53 ( m , 2 h ), 2 , 3 5 - 2 , 27 ( m , 4 H ) , 1, 46 ( s , 3 H ) ; C L / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 18H 24N 6O 2S ; 388 , 49 , e n c o n t r a d o (M H ) ; 38 9.1
L a m e z c l a d e c l o r u r o d e c i s - y t r a n s -( 3 - c i a n o - 1 - m e t i l c i c l o b u t i l ) m e t a n o s u l f o n i l o s e p r e p a r ó c o m o s i g u e :
E t a p a 1 : 1-Metil-3-metilenociclobutanocarbonitrilo
A u n a s o l u c i ó n d e 3 - m e t i l e n o c i c l o b u t a n o c a r b o n i t r i l o ( 35 , 0 g , 373 , 0 m m o l) e n t e t r a h id r o f u r a n o ( 200 m l) s e le a ñ a d i ó g o t a a g o t a b is ( t r im e t i l s i l i l ) a m id a d e lit io ( 450 m l, 1 M ) a - 78 ° C . L a s o l u c ió n s e a g it ó d u r a n t e 1 h o r a a - 78 ° C y s e a ñ a d ió y o d o m e t a n o ( 30 m l, 448 m m o l) a la r e a c c i ó n . D e s p u é s d e 1 h o r a , la m e z c l a s e c a l e n t ó a t e m p e r a t u r a a m b i e n t e y s e a g it ó d u r a n t e u n a n o c h e . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e i n a c t iv ó c o n c l o r u r o d e a m o n i o a c u o s o ( 380 m l) y s e e x t r a jo c o n m e t i l t e r c - b u t i l é t e r ( 3 x 400 m l) . L a s c a p a s o r g á n i c a s c o m b i n a d a s s e s e c a r o n s o b r e s u l f a t o s ó d i c o y s e c o n c e n t r a r o n . E l p r o d u c t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r d e s t i l a c ió n a p r e s ió n r e d u c id a p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 20 g , 50 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e t r a n s p a r e n t e . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C l a ) : 8 4 , 90 - 4 , 89 ( m , 2 H ) , 3 , 24 - 3 , 20 ( m , 2 H ) , 2 , 67 ­ 2 , 62 ( m , 2 H ) , 1, 50 ( s , 3 H ) .
E t a p a 2 : á c i d o 1 - m e t ¡ l - 3 - m e t ¡ l e n o c ¡ c l o b u t a n o c a r b o x í l i c o
A u n a s o l u c i ó n d e 1 - m e t i l - 3 - m e t i l e n o c i c l o b u t a n o c a r b o n i t r i l o ( 10 , 0 g , 93 , 3 m m o l) e n a g u a ( 50 m l) y e t a n o l ( 50 m l) s e le a ñ a d i ó h id r ó x id o p o t á s ic o ( 25 , 6 g , 466 , 6 m m o l) . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e c a l e n t ó a r e f lu jo y s e a g it ó d u r a n t e u n a n o c h e . E l e t a n o l s e r e t ir ó a p r e s ió n r e d u c i d a y la s o l u c ió n s e e n f r ió p o r d e b a jo d e 10 ° C , s e a c i d i f i c ó c o n á c id o c l o r h í d r i c o c o n c e n t r a d o a p H 1. L a f a s e a c u o s a s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i lo ( 3 x 150 m l) . L a s c a p a s o r g á n i c a s c o m b i n a d a s s e s e c a r o n s o b r e s u lf a t o s ó d i c o y s e c o n c e n t r a r o n p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 9 g , 77 % ) . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C l a ) : 8 11, 9 0 ( s , 1 H ) , 4 , 88 - 4 , 85 ( m , 2 H ) , 3 , 23 - 3 , 17 ( m , 2 H ) , 2 , 53 - 2 , 4 1 ( m , 2 H ) , 1, 45 ( s , 3 H ) E t a p a 3 : 1 - M e t ¡ l - 3 - m e t ¡ l e n o c ¡ d o b u t a n o c a r b o x ¡ l a t o d e e t i lo
A u n a s o l u c i ó n d e á c i d o 1 - m e t i l - 3 - m e t i l e n o c i c l o b u t a n o c a r b o x í l i c o (6 g , 47 , 6 m m o l) e n d ic l o r o m e t a n o ( 30 m l) a 0 ° C s e le a ñ a d i ó g o t a a g o t a c l o r u r o d e t io n i l o ( 11, 0 m l, 143 m m o l) . L a s o l u c i ó n s e a g it ó a 0 ° C d u r a n t e 1 h o r a . S e a ñ a d i e r o n t r e s g o t a s d e N , N - d i m e t i l f o r m a m i d a a la s o l u c i ó n . L a s o l u c ió n s e a g it ó a 0 ° C d u r a n t e 30 m in u t o s . E l d is o l v e n t e s e e v a p o r ó y s e a ñ a d i e r o n d ic l o r o m e t a n o ( 20 m l) y e t a n o l ( 125 m l) a l r e s i d u o . L a s o l u c i ó n r e s u l t a n t e s e a g it ó d u r a n t e 16 h o r a s a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e . E l d is o l v e n t e s e e v a p o r ó y s e a ñ a d i ó a g u a ( 20 m l) a l r e s i d u o . L a f a s e a c u o s a s e e x t r a jo c o n d ic l o r o m e t a n o ( 4 x 20 m l) . L a s c a p a s o r g á n i c a s c o m b i n a d a s s e s e c a r o n s o b r e s u l f a t o s ó d i c o y s e c o n c e n t r a r o n . E l p r o d u c t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 20 : 1 a 10 : 1 ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 5 g , 68 % ) . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) : 8 4 , 8 5 ­ 4 , 83 ( m , 2 H ) , 4 , 17 - 4 , 12 ( m , 2 H ) , 3 , 18 - 3 , 12 ( m , 2 H ) , 2 , 48 - 2 , 42 ( m , 2 H ) , 1, 4 1 ( s , 3 H ) , 1, 2 7 - 1, 23 (t, 3 H ) .
E t a p a 4 : 1 - m e t ¡ l - 3 - o x o c ¡ d o b u t a n o - 1 - c a r b o x ¡ l a t o d e e t i lo
S e b u r b u j e ó g a s o z o n o a t r a v é s d e u n a s o l u c i ó n d e 1 - m e t i l - 3 - m e t i l e n o c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x i l a t o d e e t i lo ( 7 , 7 g , 50 m m o l) e n d ic l o r o m e t a n o ( 150 m l) a - 78 ° C d u r a n t e 10 m in u t o s h a s t a q u e la s o l u c ió n s e v o lv ió d e c o l o r a z u l . D e s p u é s d e p u r g a r s e la s o l u c i ó n c o n g a s n i t r ó g e n o , s e a ñ a d i ó g o t a a g o t a d im e t i l s u l f u r o ( 10 m l) a la s o l u c i ó n a - 78 ° C . L a s o l u c i ó n s e a g it ó d u r a n t e 30 m in u t o s a - 78 ° C y e l d is o l v e n t e s e r e t ir ó a p r e s ió n r e d u c id a . E l p r o d u c t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 7 : 1 ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 5 , 4 g , 69 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e . R M N 1 H ( 400 m H z , C D C h ) : 8 4 , 24 - 4 , 20 ( c , 2 H ) , 3 , 6 1 - 3 , 54 ( m , 2 H ) , 2 , 92 - 2 , 86 ( m , 2 H ) , 1, 57 ( s , 3 H ) , 1, 29 - 1, 27 (t, 3 H )
E t a p a 5 : 3 - h ¡ d r o x i - 1 - m e t ¡ l c ¡ c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x ¡ l a t o d e e t i lo
A u n a s o l u c i ó n d e 1 - m e t i l - 3 - o x o c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x i l a t o d e e t i lo ( 10 g , 64 m m o l) e n t e t r a h id r o f u r a n o ( 15 m l) e n f r ia d a a - 20 ° C s e le a ñ a d ió b o r o h id r u r o s ó d i c o ( 3 , 65 g , 96 m m o l) e n p o r c i o n e s p e q u e ñ a s . L a m e z c l a s e a g it ó d u r a n t e 4 h o r a s a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e . L a r e a c c i ó n s e c a l e n t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e y e n t o n c e s s e in a c t iv ó c o n a c e t o n a ( 2 m l) . E l d is o l v e n t e s e e v a p o r ó . S e a ñ a d i ó a g u a ( 10 m l) a l r e s i d u o y la f a s e a c u o s a s e e x t r a jo c o n d ic l o r o m e t a n o ( 4 x 15 m l) . L a s c a p a s o r g á n i c a s c o m b i n a d a s s e s e c a r o n s o b r e s u l f a t o s ó d i c o y s e c o n c e n t r a r o n . E l p r o d u c t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo (6 : 1 ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 6 , 2 g , 60 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e in c o l o r o . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) : 8 4 , 4 1 ­ 4 , 37 ( m , 1 H ) , 4 , 15 - 4 , 13 ( m , 2 H ) , 2 , 83 - 2 , 77 ( m , 1 H ) , 2 , 34 - 2 , 23 ( m , 2 H ) , 1, 9 0 - 1, 8 3 ( m , 1 H ) , 1, 4 0 - 1, 3 5 ( s , 3 H ) , 1, 25 - 1, 23 ( m , 3 H ) .
E t a p a 6 : 1 - m e t ¡ l - 3 -( ( m e t ¡ l s u l f o n ¡ l ) o x ¡ ) c ¡ c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x ¡ l a t o d e e t i lo
A u n a s o l u c i ó n d e 3 - h i d r o x i - 1 - m e t i l c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x i l a t o d e e t i lo ( 0 , 53 g , 3 m m o l) e n d ic l o r o m e t a n o s e c o ( 100 m l) a 0 ° C s e le a ñ a d i ó 4 - d i m e t i l a m i n o p i r i d i n a ( 0 , 6 g , 6 m m o l) . S e a ñ a d i ó u n a s o l u c i ó n d e c l o r u r o d e m e t a n o s u l f o n i lo ( 0 , 5 g , 4 , 5 m m o l) e n d ic l o r o m e t a n o ( 20 m l) g o t a a g o t a . L a m e z c l a r e s u lt a n t e s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e u n a n o c h e . L a m e z c l a s e d i l u y ó c o n a g u a , s e e x t r a jo la c a p a d e d ic l o r o m e t a n o , s e la v ó c o n s a l m u e r a , s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e m a g n e s i o y s e c o n c e n t r ó p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 0 , 59 g , 83 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C l a ) : 8 5 , 12 - 5 , 0 4 ( m , 1 H ) , 4 , 2 - 4 , 15 ( c , 2 H ) , 3 , 01 ( s , 3 H ) , 2 , 99 - 2 , 91 ( m , 1 H ) , 2 , 75 - 2 , 75 ( m , 1 H ) , 2 , 43 - 2 , 40 ( m , 1 H ) , 2 , 28 - 2 , 25 ( m , 1 H ) , 1, 15 7 ( s , 3 H ) , 1, 30 (t, 3 H )
E t a p a 7 : 3 - c ¡ a n o - 1 - m e t ¡ l c ¡ c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x ¡ l a t o d e e t i lo
A u n a s o l u c i ó n d e 1 - m e t i l - 3 -( ( m e t i l s u l f o n i l ) o x i ) c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x i l a t o d e e t i lo ( 1, 56 g , 5 m m o l) e n N ' N -d im e t i l f o r m a m id a s e c a ( 20 m l) s e le a ñ a d i ó c a r b o n a t o p o t á s ic o ( 1, 64 g , 6 m m o l) y c i a n u r o p o t á s ic o ( 0 , 58 g , 10 m m o l) . L a s o l u c i ó n s e c a l e n t ó a 120 ° C d u r a n t e 2 d í a s . L a m e z c l a s e d i l u y ó c o n a c e t a t o d e e t i lo , s e la v ó c o n s a l m u e r a , s e s e c ó s o b r e s u lf a t o d e m a g n e s i o y s e c o n c e n t r ó p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 0 , 3 g , 27 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C l a ) : 8 4 , 2 1 - 4 , 17 ( c , 2 H ) , 3 , 13 - 3 , 09 ( m , 1 H ) , 2 , 86 - 2 , 81 ( m , 2 H ) , 2 , 28 - 2 , 22 ( m , 2 H ) , 1, 57 ( s , 3 H ) , 1, 30 - 1, 24 (t, 3 H ) .
E t a p a 8 : 3 -( H ¡ d r o x ¡ m e t ¡ l ) - 3 - m e t ¡ l c ¡ c l o b u t a n o - 1 - c a r b o n ¡ t r ¡ l o
A u n a s o l u c i ó n d e 3 - c i a n o - 1 - m e t i l c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o x i l a t o d e e t i lo ( 1, 67 g , 10 m m o l) e n t e t r a h id r o f u r a n o ( 20 m l) s e le a ñ a d i ó b o r o h id r u r o d e lit io ( 0 , 44 g , 20 m m o l) . L a m e z c l a s e c a l e n t ó a 40 ° C y s e a g it ó d u r a n t e 2 d í a s . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n s e in a c t iv ó c o n c l o r u r o d e a m o n io a c u o s o s a t u r a d o ; la f a s e a c u o s a s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i lo (2 x 200 m l) . L a s c a p a s o r g á n i c a s c o m b i n a d a s s e s e c a r o n s o b r e s u l f a t o d e m a g n e s i o y s e c o n c e n t r a r o n . E l p r o d u c t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 1 : 1 ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 0 , 9 g , 72 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e in c o l o r o . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C h ) : 8 3 , 46 - 3 , 46 ( m , 2 H ) , 3 , 12 - 3 , 0 6 ( m , 1 H ) , 2 , 44 - 2 , 38 ( m , 2 H ) , 2 , 37 - 2 , 356 ( m , 2 H ) , 1, 16 - 1, 0 7 ( s , 3 H ) .
E t a p a 9 : 4 - m e t i l b e n c e n o s u l f o n a t o d e ( 3 - c ¡ a n o - 1 - m e t ¡ l c ¡ c l o b u t ¡ l ) m e t ¡ l o
E s t e c o m p u e s t o s e p r e p a r ó s i g u i e n d o e l E j e m p l o d e r e f e r e n c ia 42 , E t a p a 4 , y s u s t i t u y e n d o 3 -( h i d r o x i m e t i l ) - 3 -m e t i l c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o n i t r i l o p o r 3 - h i d r o x i c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o n i t r i l o . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 0 -20 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 88 , 3 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e . R M N 1 H ( 400 M h z , C D C h ) 8 7 , 82 - 7 , 78 ( m , 2 H ) , 7 , 38 - 7 , 36 ( m , 2 H ) , 3 , 85 ( s , 2 H ) , 3 , 11 - 3 , 0 0 ( m , 1 H ) , 2 , 46 ( s , 3 H ) , 2 , 38 - 2 , 15 ( m , 2 H ) , 2 , 10 - 2 , 07 ( m , 2 H ) , 1, 18 ( s , 3 H ) E t a p a 10 : etanotioato de S-((3-dano-1-metilddobutil)metilo)
E s t e c o m p u e s t o s e p r e p a r ó s i g u i e n d o e l E j e m p l o d e r e f e r e n c i a 42 , E t a p a 5 , y s u s t i t u y e n d o 4 - m e t i l b e n c e n o - s u l f o n a t o d e ( 3 - c i a n o - 1 - m e t i l c i c l o b u t i l ) m e t i l o p o r 4 - m e t i l b e n c e n o s u l f o n a t o d e 3 -( c i a n o m e t i l ) - 3 - m e t i l c i c l o b u t i l o . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t ilo ( 0 - 25 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 92 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o . r M n 1 H ( 400 M H z , C D C h ) 8 5 , 73 (d , 1 H ) , 4 , 12 ( m , 1 H ) , 2 , 49 - 2 , 82 ( m , 3 H ) , 2 , 27 - 2 , 31 ( m , 3 H ) , 2 , 06 - 2 , 23 ( m , 2 H ) .
E t a p a 8 : cloruro de (3-dano-1-metilddobutil)metanosulfonilo
E s t e c o m p u e s t o s e p r e p a r ó s i g u i e n d o e l E j e m p l o d e r e f e r e n c ia 42 , E t a p a 6 , y s u s t i t u y e n d o e t a n o t io a t o d e S -( ( 3 - c i a n o -1 - m e t i l c ic l o b u t i l ) m e t i l o ) p o r e t a n o t io a t o d e S -( 3 - c i a n o c i c l o b u t i l o ) . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo (6 : 1 ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 46 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C l 3 ) 8 3 , 98 ( s , 2 H ) , 3 , 24 - 3 , 17 ( m , 1 H ) , 2 , 73 - 2 , 57 ( m , 2 H ) , 2 , 4 2 - 2 , 37 ( m , 2 H ) , 1, 540 ( s , 3 H )
Ejemplo 55: N-[ds-3-({[3-(Difluommetil)azetidin-1-il]sulfonil}meW )ddobutil]-N-metil-7H-pirmlo[2,3-d]pirim idin-4-amina E l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 101 m g ) s e p r e p a r ó u s a n d o c l o r h id r a t o d e 3 -( d i f l u o r o m e t i l ) a z e t id in a e n la e t a p a d e s u l f o n i la c i ó n y s e d e s p r o t e g ió u s a n d o e l p r o c e d im i e n t o d e l E j e m p l o d e referencia 4 7 , E t a p a 9. E l r e s i d u o s e c r o m a t o g r a f ió p o r c r o m a t o g r a f ía p r e p a r a t iv a d e f a s e i n v e r s a e l u y e n d o c o n g r a d ie n t e d e a g u a y a c e t o n it r i lo ( 90 : 10 a 70 : 30 ) R M N 1 H ( 400 M H z , C H a O H - d 4): 8 8 , 15 ( s , 1 H ) , 7 , 18 - 7 , 17 (d , 1 H ) , 6 , 75 - 6 , 74 (d , 1 H ) , 6 , 27 - 5 , 98 ( m , 1 H ) , 5 , 09 - 5 , 05 ( m , 1 H ) , 4 , 10 ­ 4 , 05 ( m , 2 H ) , 3 , 99 - 3 , 95 ( m , 1 H ) , 3 , 38 ( s , 3 H ) , 3 , 30 ( m , 2 H ) , 3 , 14 - 3 , 0 9 ( m , 1 H ) , 2 , 6 3 - 2 , 57 ( m , 3 H ) , 2 , 27 - 2 , 22 ( m , 2 H ) ; C L / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 16H 21F 2N 5O 2S ; 385 , 437 , e n c o n t r a d o (M H ) ; 386 , 9
Ejemplos de referencia 56 (trans) y 57 (cis): cis- y trans-3-Fluoro-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)am ino]ddo-butil}ddobutanosulfonam ida (trans), (cis)
E s t o s c o m p u e s t o s s e p r e p a r a r o n u s a n d o u n a m e z c l a ( ~ 1 : 1 ) d e c l o r u r o d e c i s - y t r a n s - 3 - f l u o r o c i c l o b u t a n o - 1 - s u l f o n i l o . L a m e z c l a e n b r u t o d e i s ó m e r o s c i s y t r a n s s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e d ic l o r o m e t a n o y m e t a n o l ( 100 : 0 a 90 : 10 ) p a r a p r o p o r c io n a r u n a m e z c l a ( 45 m g ) d e lo s c o m p u e s t o s d e l t ít u lo e n f o r m a d e u n s ó l id o d e c o l o r b la n c o ( 25 % ) . L o s i s ó m e r o s c i s y t r a n s s e s o m e t ie r o n e n t o n c e s a s e p a r a c i ó n q u ir a l p o r c r o m a t o g r a f ía d e f lu i d o s s u p e r c r í t i c o s ( S F C ) u s a n d o c o n d i c i o n e s d e c o l u m n a ( c o l C h i r a l P a k A S , 30 x 250 m m , 20 p m , 25 % d e e t a n o l ( 0 , 05 % d e a m o n i a c o c o n c e n t r a d o ) , 80 m l / m in ) .
Trans-3-Fluoro-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]cidobutil}ddobutanosulfonamida
E l a i s l a m i e n t o d e l p r im e r i s ó m e r o d e e l u c ió n p r o p o r c io n ó e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ; P i c o 1, i s ó m e r o t r a n s : 5 , 9 m g ( 16 , 9 % ) ; t ie m p o d e r e t e n c ió n d e S F C = 4 , 01 m in u t o s ; R M N 1 H ( 400 M H z , C H 3O H - d 4) 8 8 , 12 ( s , 1 H ) , 7 , 14 (d , 1 H ) , 6 , 45 ( d , 1 H ) , 5 , 4 3 - 5 , 21 ( m , 1 H ) , 3 , 75 - 3 , 69 ( m , 1 H ) , 3 , 52 - 3 , 3 ( m , 1 H ) , 3 , 36 ( m , 3 H ) , 2 , 79 - 2 , 90 ( m , 7 H ) , 2 , 32 - 2 , 29 ( m , 2 H ) ; C L / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 15H 20F N 5O 2S ; 353 , 42 , e n c o n t r a d o ( M H ) ; 354 , 1
cis-3-Fluoro-N-{cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}ciclobutanosultonamida
E l a i s l a m i e n t o d e l s e g u n d o i s ó m e r o d e e lu c ió n p r o p o r c io n ó e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ; P i c o 2 , i s ó m e r o c i s : 4 , 3 m g ( 12 , 3 % ) ; t ie m p o d e r e t e n c ió n d e S F C = 4 , 3 m in u t o s ; R M N 1 H ( 400 M H z , C H 3O H - d 4) 8 8 , 22 ( s , 1 H ) , 7 , 21 (d , 1 H ) , 6 , 65 ( d , 1 H ) , 4 , 54 - 5 , 05 ( m , 2 H ) , 3 , 4 5 - 3 , 55 ( m , 1 H ) , 3 , 36 ( m , 4 H ) , 2 , 65 - 2 , 80 ( m , 4 H ) , 2 , 4 2 - 2 , 62 ( m , 2 H ) , 2 , 52 - 2 , 72 ( m , 2 H ) ; C L / E M ( m a s a e x a c t a ) c a l c u l a d o p a r a C 15H 20F N 5O 2S ; 353 , 42 , e n c o n t r a d o (M H ) ; 354 , 1
L a m e z c l a d e c l o r u r o d e c i s - y t r a n s - 3 - f l u o r o c i c l o b u t a n o - 1 - s u l f o n i l o s e p r e p a r ó c o m o s ig u e :
E t a p a 1 : 3-(Benciloxi)ddobutan-1-ol
E s t e c o m p u e s t o s e p r e p a r ó s i g u i e n d o e l E j e m p l o d e r e f e r e n c i a 42 , E t a p a 3 , y s u s t i t u y e n d o 3 -( b e n c i l o x i ) c i c l o b u t a n - 1 -o n a p o r 3 - h i d r o x i c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o n i t r i l o . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 100 : 0 a 60 : 40 ) p a r a p r o p o r c i o n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 3 , 75 g , 74 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C l 3 ) 8 7 , 32 - 7 , 38 ( m , 5 H ) , 4 , 42 ( s , 2 H ) , 3 , 88 - 3 , 62 ( m , 1 H ) , 3 , 72 - 3 , 6 2 ( m , 1 H ) , 2 , 75 - 2 , 65 ( m , 2 H ) , 1, 9 8 - 1, 75 ( m , 2 H ) , 1, 62 (d , 1 H )
E t a p a 2 : ((3-Fluoroddobutoxi)metil)benceno
E s t e c o m p u e s t o s e p r e p a r ó s i g u i e n d o e l E j e m p l o d e r e f e r e n c i a 43 , E t a p a 6 , y s u s t i t u y e n d o 3 -( b e n c i l o x i ) c i c l o b u t a n - 1 -o l p o r 4 - m e t i l b e n c e n o s u l f o n a t o d e 3 - f o r m i l c ic l o b u t i lo . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f ía s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 100 : 0 a 80 :20 ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 0 , 87 g , 23 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C l 3 ) 8 7 , 4 5 - 7 , 35 ( m , 5 H ) , 5 , 42 ­ 5 , 22 ( m , 1 H ) , 4 , 43 ( s , 2 H ) , 4 , 34 - 4 , 25 ( m , 1 H ) , 2 , 55 - 2 , 25 ( m , 4 H )
E t a p a 3 : 3-Fluorociclobutan-1-ol
U n a m e z c l a d e ( ( 3 - f l u o r o c i c l o b u t o x i ) m e t i l ) b e n c e n o ( 0 , 87 g , 4 , 83 m m o l) y P d a l 10 % / C ( 0 , 4 g ) e n m e t a n o l ( 40 m l) s e p r e s u r iz ó a 50 p s i c o n h id r ó g e n o y s e a g it ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 2 d í a s . D e s p u é s , la m e z c l a s e f ilt r ó s o b r e C e l i t e ™ y s e c o n c e n t r ó a l v a c í o p a r a d a r la m e z c l a d e m a t e r ia l d e p a r t id a y c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 0 , 3 g , 23 % ) e n u n a r e l a c ió n 1 : 1 e n f o r m a d e u n a c e i t e d e c o l o r a m a r i l l o . L a m e z c l a d e r e a c c i ó n e n b r u t o s e u s ó d i r e c t a m e n t e e n la s ig u i e n t e e t a p a .
E t a p a 4 : 4-metilbencenosulfonato de 3-fluorocidobutilo
E s t e c o m p u e s t o s e p r e p a r ó s i g u i e n d o e l E j e m p l o d e r e f e r e n c ia 42 , E t a p a 4 , y s u s t i t u y e n d o 3 - f l u o r o c i c l o b u t a n - 1 - o l p o r 3 - h i d r o x i c i c l o b u t a n o - 1 - c a r b o n i t r i l o . E l c o m p u e s t o e n b r u t o s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a s o b r e g e l d e s í l i c e e l u y e n d o c o n u n g r a d ie n t e d e é t e r d e p e t r ó le o y a c e t a t o d e e t i lo ( 0 - 20 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 88 , 3 % ) e n f o r m a d e u n a c e i t e . R M N 1 H ( 400 M H z , C D C l 3 ) 8 7 , 72 - 7 , 65 (d , 2 H ) , 7 , 38 - 7 , 36 (d , 2 H ) , 5 , 35 - 5 , 25 ( m , 0 , 5 H ) , 5 , 2 - 5 , 1 ( m , 0,5H), 5,1-5,0 (m, 1H), 2,63-2,42 (m, 4H), 2,36 (s, 3H)
Etapa 5: etanotioato de S-(3-fluoroc¡dobutilo)
Este compuesto se preparó siguiendo el Ejemplo de referencia 42, Etapa 5, y sustituyendo 4-metilbencenosulfonato de 3-fluoroddobutilo por 4-metilbencenosulfonato de 3-(cianometil)-3-metilcidobutilo. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (8 :1 ) para proporcionar el compuesto del título (100 %) en forma de un aceite de color amarillo.
Etapa 8 : cloruro de 3-fluorocidobutano-1-sulfonilo
Este compuesto se preparó siguiendo el Ejemplo de referencia 42, Etapa 6 , y sustituyendo etanotioato de S-(3-fluorociclobutilo) por etanotioato de S-(3-cianociclobutilo). El compuesto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo y acetato de etilo (100:0 a 80:20) para proporcionar el compuesto del título (100 %) en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo de referencia 58: 3-(2,2-Difluoroetil)-N-{ds-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ddobutil}-azetidina-1-sulfonamida
El siguiente compuesto, Ejemplo de referencia 52, se prepararon a partir de N-[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]-2-oxo-1,3-oxazolidina-3-sulfonamida (Ejemplo de referencia 51, Etapa 1) de una manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 51, Etapa 2, sustituyendo 3-(2,2-difluoroetil)azetidina por ciclopropanometilamina y usando el procedimiento de desprotección ilustrado en el Ejemplo de referencia 51, Etapa 3. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía líquida de alto rendimiento para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanquecino (32 mg, 26 %). RMN 1 H (400 MHz, metanol-d4): 88,11 (s, 1 H), 7,28 (s, 1 H), 6,42 (d, 1 H), 5,75-6,25 (dd, 1 H), 4,87-4,86 (m, 1 H), 3,87-4,0 (m, 2 H), 3,62-3,75 (m, 3 H), 3,31 (s, 3 H), 2,45­ 2,74 (m, 3 H), 2,23-2,31 (m, 2H), 2,02-2,21 (m, 2H); CL/EM (masa exacta) calculado para C16H22F2N6O2S; 400,452, encontrado (M H+ ); 401,1
Ejemplos de referencia 59A (trans) y 59B (cis): cis- y tmns-3-[({ds-3-[MeW (7H-pirmlo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}metil)-sulfonil]ciclobutanocarbonitrilo
El compuesto del título (40 mg) se preparó partiendo de etanotioato de S-{[cis-3-(metil{7-[(4-metilfenil)-sulfonil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}amino)ciclobutil]metil}, Ejemplo de referencia 47, Etapa 5, de acuerdo con los procedimientos del Ejemplo de referencia 53, etapas 1 y 2, sustituyendo 4-metilbencenosulfonato de (3-cianociclobutil)metilo por el 3-(bromometil)-3-metiloxetano apropiado en la Etapa 1. El compuesto se purificó usando cromatografía de capa fina preparativa eluyendo con diclorometano y metanol (10 :1 ) para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco. Los isómeros cis y trans se sometieron entonces a separación quiral por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) usando condiciones de columna (col AD-3, 20 x 250 mm, 55 % de etanol, 80 ml/min).
trans-3-[({cis-3-[Metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]ciclobutil}metil)sulfonil]ciclobutanocarbonitrilo
El aislamiento del primer isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 1, isómero trans: 5,7 mg (14,3 %); tiempo de retención de SFC = 1,728 minutos; RMN 1 H (400 MHz, CH3OH-d4): 8 8,12 (s, 1H), 7,13-7,12 (d, 1H), 6,70-6,69 (d, 1H), 5,14-5,10 (m, 1H), 3,36 (s, 3H), 3,23-3,14 (m, 6 H), 2,64-2,55 (m, 4H), 2,48-2,41 (m, 2H), 2,26­ 2,22 (m, 2H); CL/EM (masa exacta) calculado para C18H23N5O2S; 373,479, encontrado (M H+ ); 374,1
cis-3-[({cis-3-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino]ciclobutil}metil)sulfonil]ciclobutano-carbonitrilo
El aislamiento del segundo isómero de elución proporcionó el compuesto del título; Pico 2, isómero cis: 14,4 mg (36 %); tiempo de retención de SFC = 2,248 minutos; RMN 1 H (400 MHz, CH3OH-d4): 88,12 (s, 1H), 7,13-7,12 (d, 1H), 6,70­ 6,68 (d, 1H), 5,16-5,07 (m, 1H), 3,35 (s, 3H), 3,29-3,21 (m, 5H), 3,00-2,91 (m, 1H), 2,70-2,57 (m, 4H), 2,35-2,30 (m, 2H), 2,30-2,21 (m, 2H); CL/EM (masa exacta) calculado para C18H23N5O2S; 373,479, encontrado (M H+ ); 374,1
Ejemplo de referencia 120: N-((1S,3S)-3-(((4-(Metoximetil)piperidin-1-il)sulfonil)metil)ddobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
Etapa 1: N-((1S,3S)-3-(((4-(Metoximetil)piperidin-1-il)sulfonil)metil)ddobutil)-N-metil-7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
A una solución de ((1 S,3S)-3-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino) ciclobutil) cloruro de metanosulfonilo, ejemplo 25, etapa 7, (1 g, 2,132 mmol) en diclorometano enfriada a 5 °C se le añadió 4-(metoximetil) piperidina (413 mg, 3,2 mmol) y trietilamina (647 mg, 6,40 mmol). La suspensión de color blanco resultante se agitó a 5 °C durante 3 horas, momento en el que la CL-EM confirmó que el material de partida se había consumido y se observó el pico del producto deseado. La suspensión de color amarillo se diluyó con H2O (80 ml) y se extrajo con diclorometano (80 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (100 ml x 1), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purificó sobre gel de sílice (0 - 70 % de EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar el material del título (600 mg, 50 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco. CL-EM m/z 562,0 [M+H]+
E t a p a 2 : N-((1S,3S)-3-(((4-(Metoximetil)piperídin-1-il)sulfonil)metil)ddobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
A u n a s o l u c ió n d e N -( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( ( ( 4 -( m e t o x i m e t i l ) p i p e r i d i n - 1 - i l ) s u l f o n i l ) m e t i l ) c i d o b u t i l ) - N - m e t i l - 7 - t o s i l - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 -d ] p i r i m i d i n - 4 - a m i n a ( 600 m g , 1, 07 m m o l) e n M e O H ( 60 m l) a 28 ° C s e le a ñ a d i ó K 2C O 3 ( 443 m g , 3 , 20 m m o l) . L a s u s p e n s i ó n d e c o l o r b la n c o s e a g it ó a 50 ° C d u r a n t e 3 h , m o m e n t o e n e l q u e la r e a c c i ó n s e c o n s i d e r ó c o m p l e t a d a p o r T L C . L a s u s p e n s i ó n d e c o l o r b la n c o s e c o n c e n t r ó y s e d i l u y ó c o n H 2O ( 100 m l) . L a m e z c l a s e e x t r a jo c o n d ic l o r o m e t a n o ( 200 m l x 2 ) , s e la v ó c o n s a l m u e r a ( 100 m l x 1 ) , s e s e c ó s o b r e N a 2S O 4, s e f ilt r ó y s e c o n c e n t r ó . E l p r o d u c t o e n b r u t o s e a g it ó e n E t O A c ( 15 m l) d u r a n t e 2 h , m o m e n t o e n e l q u e e l p r o d u c t o c r is t a l iz ó e n la s o l u c ió n . L o s c r i s t a l e s s e f i lt r a r o n y s e s e c a r o n p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo ( 380 m g , 87 % d e r e n d im ie n t o ) e n f o r m a d e u n s ó l id o d e c o l o r b la n c o . R M N 1 H ( 400 M H z , D M S O - d 6 ) 8 : 11, 6 1 ( s a , 1 H ) , 8 , 10 ( s , 1 H ) , 7 , 14 ( m , 1 H ) , 8 , 62 ( m , 1 H ) , 5 , 0 7 - 5 , 15 ( m , 1 H ) , 3 , 60 (d , J = 12 , 6 H z , 2 H ) , 3 , 18 - 3 , 25 ( m , 10 H ) , 2 , 73 - 2 , 78 ( m , 2 H ) , 2 , 33 - 2 , 4 0 ( m , 3 H ) , 2 , 0 7 - 2 , 15 ( m , 2 H ) , 1, 6 3 - 1, 74 ( m , 3 H ) , 1, 12 - 1, 2 3 ( m , 2 H ) ; C L - E M m / z 408 [ M H ]
Ejemplo de referencia 140: N-((1S,3S)-3-(((1-(3-Metoxiddobutil)azetidin-3-il)sulfonil)meW )ddobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
E t a p a 1 : 3-((((1S,3S)-3-(metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)ddobutil)meW)tio)azetidina-1-carboxilato de t-butilo
A u n a s o l u c ió n d e 4 - m e t i l b e n c e n o s u l f o n a t o d e c i s -[ 3 -( m e t i l { 7 -[ ( 4 - m e t i l f e n i l ) s u l f o n i l ] - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 -i l } a m in o ) c ic l o b u t i l ] m e t i lo , e je m p l o 25 , e t a p a 4 , ( 8 , 5 g , 15 , 72 m m o l) e n M e O H ( 100 m l) s e le a ñ a d i ó K 2C O 3 ( 6 , 52 g , 4 7 , 2 m m o l) , 3 -( a c e t i l t i o ) a z e t i d i n a - 1 - c a r b o x i l a t o d e t - b u t i l o ( 4 , 36 g , 18 , 9 m m o l) a 0 ° C d u r a n t e 30 m in e n a t m ó s f e r a d e N 2. L a m e z c l a s e a g it ó a 15 ° C d u r a n t e 1 h . D e s p u é s , la m e z c l a s e c a l e n t ó a r e f lu jo a 60 ° C d u r a n t e 16 h e n a t m ó s f e r a d e N 2 , m o m e n t o e n e l q u e la C L - E M m o s t r ó q u e e l m a t e r ia l d e p a r t id a s e h a b í a c o n s u m id o . L a r e a c c i ó n s e c o n c e n t r ó , s e d i l u y ó c o n D C M ( 60 m l) e n t o n c e s s e la v ó c o n a g u a ( 10 m l x 3 ) , s e s e c ó s o b r e N a 2S O 4. L a s o l u c ió n s e c o n c e n t r ó p a r a p r o p o r c io n a r e l p r o d u c t o e n b r u t o q u e s e la v ó c o n E t O A c ( 20 m l) p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e l t ít u lo c o m o u n s ó l id o d e c o l o r r o jo ( 2600 m g , 41 % ) . E l m a t e r ia l e n b r u t o s e u s ó e n la s i g u i e n t e e t a p a s in p u r i f ic a c ió n a d i c i o n a l . C L - E M d e r e a c c i ó n e n b r u t o m/z 4 0 4 [ M H ]
E t a p a 2 : 3-((((1S,3S)-3-(metil(7H-pirmlo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)ddobutil)meW)sulfonil)azetidina-1-carboxilato de tbutilo
A u n a s o l u c i ó n d e 3 -( ( ( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( m e t i l ( 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) c i c l o b u t i l ) m e t i l ) t i o ) a z e t i d i n a - 1 - c a r b o x i l a t o d e t - b u t i l o ( 2600 m g , 6 , 443 m m o l) e n u n a m e z c l a 3 : 1 d e E t O H e n H 2O ( 120 m l) s e le a ñ a d i ó o x o n a ( 5940 m g , 9 , 66 m m o l) e n p o r c i o n e s a 0 ° C d u r a n t e 10 m in . L a m e z c l a r e s u lt a n t e s e a g it ó a 15 ° C d u r a n t e 3 h o r a s , m o m e n t o d e s p u é s d e l c u a l la C L - E M m o s t r ó q u e e l m a t e r ia l d e p a r t id a s e h a b í a c o n s u m i d o . L a m e z c l a s e in a c t iv ó c o n N a 2S O 3 s a t u r a d o a 0 ° C , e n t o n c e s s e f ilt r ó y s e c o n c e n t r ó . L a s o l u c ió n s e d i l u y ó c o n D C M ( 30 m l x 1 ) , s e la v ó c o n a g u a ( 30 m l x 2 ), s e s e c ó s o b r e N a 2S O 4 y s e c o n c e n t r ó p a r a p r o p o r c i o n a r e l c o m p u e s t o d e l t í t u lo e n f o r m a d e u n s ó l id o d e c o l o r b l a n c o ( 28 0 0 m g , e n b r u t o ) q u e s e u s ó e n la s i g u i e n t e e t a p a s in p u r i f ic a c ió n a d i c i o n a l . C L - E M m/z 4 36 , 0 [ M H ]
E t a p a 3 : 3-((((1S,3S)-3-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)amino)ddobutil)metil) sulfonil)azetidina-1-carboxilato de t-butilo
Figure imgf000057_0001
E t a p a 4 : N-((1S,3S)-3-((Azetidin-3-ilsulfonil)metil)cidobutil)-N-metil-7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
A u n a s o l u c i ó n d e l c o m p u e s t o 3 -( ( ( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( m e t i l ( 7 - t o s i l - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) c i c l o b u t i l ) m e t i l ) s u l f o n i l ) a z e t i d i n a - 1 - c a r b o x i l a t o d e t -b u t i lo ( 2800 m g , 4 , 748 m m o l) e n d io x a n o ( 10 m l) s e le a ñ a d i ó H C l / d i o x a n o ( 10 m l) . L a m e z c l a r e s u lt a n t e s e a g it ó a 15 ° C d u r a n t e 2 h o r a s , m o m e n t o t r a s e l q u e la C L - E M m o s t r ó q u e la r e a c c i ó n s e h a b í a c o m p l e t a d o . D e s p u é s , la m e z c l a s e c o n c e n t r ó p a r a p r o p o r c io n a r e l p r o d u c t o q u e s e c o m b i n ó c o n u n lo t e a d i c i o n a l y s e la v ó c o n D C M ( 50 m l) p a r a p r o p o r c i o n a r e l c o m p u e s t o d e l t í t u lo e n f o r m a d e u n s ó l i d o d e c o l o r b l a n c o ( 2900 m g , 10 0 % ) . E l m a t e r ia l e n b r u t o s e u s ó e n la s i g u i e n t e e t a p a s in p u r i f ic a c ió n . C L - E M m/z 4 9 0 , 0 [ M H ]
E t a p a 5 : N-((1S,3S)-3-(((1-(3-Metoxicidobutil)azetidin-3-il)sulfonil)metil)ddobutil)-N-metil-7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
A u n a s o l u c ió n d e N -( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( ( a z e t i d i n - 3 - i l s u l f o n i l ) m e t i l ) c i c l o b u t i l ) - N - m e t i l - 7 - t o s i l - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m i n a ( 200 m g , 0 , 408 m m o l) e n M e O H ( 20 m l) s e le a ñ a d i ó á c id o a c é t ic o ( 2 m l) y 3 - m e t o x i c i c l o b u t a n - 1 - o n a ( 164 m g , 1, 6 3 m m o l) . L a s o l u c i ó n r e s u lt a n t e s e a g it ó a 30 ° C d u r a n t e 10 m in , s e g u i d o d e la a d i c i ó n d e c ia n o b o r o h i d r u r o s ó d i c o ( 154 m g , 2 , 45 m m o l) . E s t a m e z c l a s e a g it ó a 30 ° C d u r a n t e 16 h o r a s , m o m e n t o e n e l q u e e s t a s e v o l v i ó in c o l o r a . L a Tabla 1. L o s E j e m p l o s d e r e f e r e n c i a 60 - 121, y l o s E j e m p l o s 122 - 125 ( i n c l u y e n d o P r o c e d i m i e n t o d e p r e p a r a c ió n , r r f i i í m i L E m l r f r n i n l l r i r n m r n ' R E F '
Figure imgf000059_0001
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000060_0001
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000061_0001
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000062_0001
(continuación)
Figure imgf000063_0001
(continuación)
Figure imgf000064_0001
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000065_0001
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000066_0001
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000067_0001
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000068_0001
L o s s i g u i e n t e s c o m p u e s t o s e n la T a b l a 2 s e f a b r ic a r o n p a r t ie n d o d e 4 - m e t i l b e n c e n o s u l f o n a t o d e c i s - [ 3 - ( m e t i l { 7 - [ ( 4 -m e t i l f e n i l ) s u l f o n i l ] - 7 H - p in ' o l o [ 2 , 3 - d ] p i r im i d in - 4 - i l } a m in o ) c ic l o b u t i l ] m e t i l o
( E j e m p l o d e r e f e r e n c i a 25 , E t a p a 4 ) , d e a c u e r d o c o n lo s p r o c e d im i e n t o s d e l E j e m p l o d e r e f e r e n c ia 140 E t a p a 1 ( d e s p l a z a m i e n t o d e t o s i la t o c o n r e a c t iv o d e t io a c e t a t o ) y e l E j e m p l o d e r e f e r e n c ia 33 , e t a p a 2 ( o x id a c ió n ) , s u s t i t u y e n d o p o r e l t io a c e t a t o a p r o p i a d o e n la E t a p a 1
E n d e t e r m i n a d o s c a s o s , lo s c o m p u e s t o s s e e l a b o r a n a d i c i o n a l m e n t e t a l c o m o e n e l E j e m p l o d e r e f e r e n c i a 140 , e t a p a 5 , u s a n d o e l e le c t r ó f i l o a p r o p ia d o .
Tabla 2. E j e m p l o s d e r e f e r e n c ia ( ' R E F ' ) 12 6 - 14 0 ( i n c l u y e n d o P r o c e d i m i e n t o d e p r e p a r a c ió n , e s t r u c t u r a s y d a t o s f i s i c o q u í m i c o s ) .
Figure imgf000069_0001
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000070_0001
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000071_0001
L o s s i g u i e n t e s c o m p u e s t o s e n la T a b l a 3 s e f a b r ic a r o n p a r t ie n d o d e c l o r u r o d e c i s - [ 3 - ( m e t i l { 7 - [ ( 4 - m e t i l f e n i l ) s u l f o n i l ] - 7 H -p ir r o l o [ 2 , 3 - c f ] p i r im id in - 4 - i l } a m in o ) c ic l o b u t i l ] m e t a n o s u l f o n i l o ( E j e m p l o d e r e f e r e n c i a 25 , E t a p a 7 ) , d e a c u e r d o c o n lo s p r o c e d i m i e n t o s d e l E j e m p l o d e r e f e r e n c i a 152 , E t a p a 1 ( f o r m a c ió n d e s u l f in a t o s ó d i c o ) y E t a p a 2 ( a l q u i l a c i ó n ) , s u s t i t u y e n d o p o r e l e le c t r ó f i l o a p r o p ia d o e n la E t a p a 2.
Tabla 3. E j e m p l o s d e r e f e r e n c i a 141 - 152 y E j e m p l o 153 ( i n c l u y e n d o P r o c e d i m i e n t o d e p r e p a r a c i ó n , e s t r u c t u r a s y f i i í m i L E m l r f r n i n l l r i r n m r n ' R E F '
Figure imgf000071_0002
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000072_0001
(continuación)
Figure imgf000073_0001
Ejemplo de referencia 239: cis-N-(( 1S,3S)-3-(((3,3-Difíuomddobutil)sulfonil)metil)ddobutil)-N-metil-7H-pirm lo[2,3-d]pirimidin-4-amina
E t a p a 1 : 2-((3,3-difluoroddobutil)tio)benzo[d]tiazol
A u n a s u s p e n s i ó n d e d is u l f u r o d e 2 , 2 ' - d i b e n z o t i a z o l i l o ( 677 m g , 2 , 04 m m o l) y 3 , 3 - d i f l u o r o c i c l o b u t a n o l ( 220 m g , 2 , 04 m m o l, 1 e q u iv . ) e n T H F ( 5 m l) s e le a ñ a d i ó t r i f e n i l f o s f in a ( 747 m g , 2 , 85 m m o l, 1, 4 e q u iv . ) a 20 ° C . E n 30 m in u t o s , e l a n á l i s i s d e c L - E M d e la s o l u c ió n d e c o l o r a m a r i l l o r e s u l t a n t e in d ic ó q u e la r e a c c i ó n s e h a b í a c o m p l e t a d o . L a r e a c c i ó n s e d i l u y ó c o n D C M ( 25 m l) y s e la v ó c o n N a O H 1 N ( a c . ) ( 2 x 10 m l) . L a c a p a a c u o s a c o m b i n a d a s e e x t r a jo c o n D C M ( 1 x 15 m l) y lo s e x t r a c t o s o r g á n i c o s c o m b i n a d o s s e s e c a r o n s o b r e M g S O 4, s e f i lt r a r o n y s e c o n c e n t r a r o n p a r a p r o p o r c io n a r u n p r o d u c t o e n b r u t o e n f o r m a d e u n s ó l id o d e c o l o r b l a n q u e c i n o q u e s e p u r i f ic ó p o r m e d io d e c r o m a t o g r a f ía s o b r e S i O 2 ( E t O A c , g r a d ie n t e d e H e p 5 - 30 % ) p a r a p r o p o r c io n a r e l m a t e r ia l d e s e a d o e n f o r m a d e u n s ó l id o d e c o l o r b l a n c o ( 421 m g , 80 % d e r e n d im ie n t o , p u r o a l 60 % ) q u e s e u s ó t a l c u a l e n la s i g u i e n t e e t a p a .
R M N d e 1 H e n b r u t o ( 400 M H z , C L O R O F O R M O - d ) 8 7 , 85 - 7 , 94 ( m , 1 H ) , 7 , 75 - 7 , 83 ( m , 1 H ) , 7 , 45 ( d d d , J = 1, 37 , 7 , 24 , 8 , 22 H z , 1 H ) , 7 , 29 - 7 , 38 ( m , 1 H ) , 4 , 16 - 4 , 32 ( m , 1 H ) , 3 , 19 - 3 , 38 ( m , 2 H ) , 2 , 69 - 2 , 87 ( m , 2 H )
E t a p a 2 : 2-((3,3-difíuorncidobutil)sulfonil)benzo[d]tiazol
A u n a s o l u c i ó n d e 2 -( ( 3 , 3 - d i f l u o r o c i c l o b u t i l ) s u l f o n i l ) b e n z o [ d ] t i a z o l ( 421 m g , 0 , 98 m m o l b a s a d o e n u n 60 % d e p u r e z a ) e n D C M ( 20 m l) s e le a ñ a d i ó m C P B A ( 550 m g , 2 , 45 m m o l, 2 , 5 e q u iv . ) e n u n a p o r c ió n . L a r e a c c i ó n r e s u lt a n t e s e a g it ó d u r a n t e 12 h o r a s h a s t a q u e e l m a t e r ia l d e p a r t id a s e h u b o c o n s u m i d o c o m o s e d e t e r m in ó p o r C L - E M . L a m e z c l a s e d i l u y ó c o n 10 m l d e D C M y s e la v ó c o n N a 2C O 3 s a t u r a d o ( 3 x 10 m l) . L a c a p a o r g á n i c a s e s e p a r ó y la c a p a a c u o s a s e e x t r a jo c o n D C M ( 1 x 10 m l) . L a s c a p a s o r g á n i c a s c o m b i n a d a s s e s e c a r o n s o b r e M g S O 4 , s e f i lt r a r o n y e n t o n c e s s e a d s o r b i e r o n s o b r e c e l i t e y s e p u r i f ic a r o n p o r c r o m a t o g r a f ía e n c o l u m n a ( I S C O S i O 2, 10 - 30 % d e E t O A c / h e x a n o s ) p a r a p r o p o r c io n a r u n s ó l id o d e c o l o r b l a n c o e n b r u t o . U n a p u r i f ic a c ió n a d i c i o n a l p o r c r o m a t o g r a f ía e n c o l u m n a ( 10 - 25 % d e E t O A c / H e x ) p r o p o r c io n ó 2 -( ( 3 , 3 - d i f l u o r o c ic l o b u t i l ) t io ) b e n z o [ d ] t ia z o l ( 186 m g , 6 5 % ) e n f o r m a d e u n s ó l id o d e c o l o r b la n c o .
R M N 1 H ( 400 M H z , C L O R O F O R M O - d ) 8 8 , 23 ( d d , J = 1, 37 , 7 , 61 H z , 1 H ) , 8 , 05 ( d d , J = 1, 40 , 7 , 60 H z , 1 H ) , 7 , 61 - 7 , 70 ( m , 2 H ) , 4 , 13 - 4 , 23 ( m , 1 H ) , 3 , 26 - 3 , 40 ( m , 2 H ) , 2 , 93 - 3 , 06 ( m , 2 H )
E t a p a 3 : Preparación del sulfinato sódico
A u n a s o l u c ió n d e 2 -( ( 3 , 3 - d i f l u o r o c ic l o b u t i l ) t io ) b e n z o [ d ] t ia z o l ( 186 m g , 0 , 643 m m o l) e n M e O H s e a ñ a d i ó N a O M e ( s o l u c i ó n 0 , 5 M , 1, 54 m l, 0 , 771 m m o l, 1, 2 e q u iv . ) y la s o l u c i ó n r e s u lt a n t e s e a g it ó a T A d u r a n t e 20 m in u t o s , m o m e n t o e n e l q u e la T L C in d ic ó q u e e l M P s e h a b í a c o n s u m id o . L a r e a c c i ó n s e c o n c e n t r ó y e n t o n c e s s e s u s p e n d i ó c o n h e p t a n o ( 40 m l) . E l s ó l i d o d e c o l o r b l a n c o s e f ilt r ó y s e s e c ó a l v a c í o p a r a p r o p o r c io n a r e l c o m p u e s t o d e s e a d o c o m o u n s ó l id o e n b r u t o q u e s e u s ó t a l c u a l e n la s i g u i e n t e e t a p a .
R M N 1 H e n b r u t o ( 400 M H z , D M S O - d 6) 8 2 , 52 - 2 , 66 ( m , 2 H ) , 2 , 32 - 2 , 4 4 ( m , 1 H ) , 2 , 18 - 2 , 3 1 ( m , 2 H )
E t a p a 4 : ds-N-((1S,3S)-3-(((3,3-difluomddobutil)sulfonil)metil)ddobutil)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina
A u n v i a l d e 2 d r a c m a s q u e c o n t e n í a N -( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( y o d o m e t i l ) c i c l o b u t i l ) - N - m e t i l - 7 - t o s i l - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 -a m i n a ( 111 m g , 0 , 212 m m o l. 1 e q u iv . ) , s u lf in a t o e n b r u t o ( 75 m g , 0 , 423 m m o l, 2 , 0 e q u iv . ) y K 2 C O 3 ( 146 m g , 1, 06 m m o l, 5 e q u iv . ) s e le a ñ a d i ó D M S O ( 1 m l) . L a m e z c l a r e s u lt a n t e s e a g it ó a 50 ° C d u r a n t e 2 h , m o m e n t o e n e l q u e s e e v a l u ó q u e la r e a c c i ó n s e h a b í a c o m p l e t a d o p o r C L - E M . S e a ñ a d i ó M e O H ( 0 , 5 m l) y la r e a c c i ó n s e a g it ó d u r a n t e 30 m in u t o s m á s a 50 ° C , m o m e n t o e n e l q u e la C L - E M in d ic ó e l p ic o p r in c ip a l c o r r e l a c i o n a d o c o n e l p r o d u c t o d e s p r o t e g id o . L a r e a c c i ó n s e c o n c e n t r ó y s e r e p a r t ió e n t r e a g u a ( 10 m l) y D C M ( 25 m l) . L a c a p a a c u o s a s e e x t r a jo c o n D C M ( 1 x 25 m l) . L o s e x t r a c t o s o r g á n i c o s c o m b i n a d o s s e s e c a r o n s o b r e M g S O 4, s e f i lt r a r o n y s e c o n c e n t r a r o n h a s t a d a r u n a c e i t e t r a n s p a r e n t e . E l m a t e r ia l e n b r u t o r e s u lt a n t e s e p u r i f ic ó p o r m e d io d e H P L C d e f a s e in v e r s a .
R M N 1 H ( 400 M H z , C L O R O F O R M O - d ) 8 13 , 8 3 ( s a , 1 H ) 8 , 23 ( s , 1 H ) 7 , 17 ( d d , J = 3 , 51, 2 , 34 H z , 1 H ) 6 , 65 ( d d , J = 3 , 51, 1, 95 H z , 1 H ) 5 , 12 - 5 , 3 0 ( m , 1 H ) 3 , 51 - 3 , 62 ( m , 1 H ) 3 , 46 ( s , 3 H ) 3 , 06 - 3 , 23 ( m , 2 H ) 3 , 14 ( d , J = 11, 7 1 H z , 2 H ) 2 , 87 - 3 , 00 ( m , 2 H ) 2 , 60 - 2 , 84 ( m , 3 H ) 2 , 15 - 2 , 26 ( m , 2 H ) . C L - E M m / z 371 [ M H ]
Tabla 3a. Ejemplos de referencia ('REF') 155-181, 184, 185, 190, 194, 195, 219, 228, 232, 239, 243, 245, 246, 24 2 4 2
Figure imgf000074_0001
( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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Evaluación biológica
Ensayo enzimático Caliper de JAK con ATP 1 mM
E l a r t í c u l o d e e n s a y o s e s o l u b i l i z ó e n d im e t i l s u l f ó x id o ( D M S O ) h a s t a u n a c o n c e n t r a c ió n m a d r e d e 30 m M . S e c r e ó u n a d i l u c ió n e n s e r i e s e m i l o g a r í t m i c a d e 11 p u n t o s e n D M S O c o n u n a c o n c e n t r a c i ó n m á x i m a d e 600 p M . L a p l a c a d e lo s c o m p u e s t o s d e e n s a y o t a m b ié n c o n t e n í a p o c i l l o s d e c o n t r o l p o s it iv o q u e c o n t e n í a n u n in h ib id o r c o n o c i d o p a r a d e f in i r la i n h ib ic ió n a l 10 0 % y p o c i l l o s d e c o n t r o l n e g a t iv o q u e c o n t e n í a n D M S O p a r a d e f in i r la f a lt a d e in h ib ic ió n . L a s p l a c a s d e c o m p u e s t o s e d i l u y e r o n d e 1 a 60 , d a n d o c o m o r e s u lt a d o u n a c o n c e n t r a c ió n m á x i m a d e l c o m p u e s t o d e e n s a y o d e 10 p M y u n a c o n c e n t r a c i ó n d e D M S O d e l 2 % .
Figure imgf000081_0001
Tabla 4. D a t o s p a r a e l e n s a y o e n z i m á t i c o C a l i p e r ™ d e J A K c o n A T P 1 m M ( l o s E j e m p l o s 5 5 , 12 2 a 12 5 y 15 3 s o n m l i n n i n l E m l r n n E m l r f r n i
Figure imgf000081_0002
(c o n tin u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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(c o n tin u a c ió n )
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(c o n tin u a c ió n )
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(c o n tin u a c ió n )
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(c o n tin u a c ió n )
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(c o n tin u a c ió n )
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(c o n tin u a c ió n )
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(c o n tin u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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Tabla 5. D a t o s p a r a e e n s a y o e n z m á c o C a p e ™ d e J A K c o n A T P 1 m M
( c o n t i n u a c i ó n )
Figure imgf000113_0001
( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t i n u a c i ó n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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( c o n t in u a c ió n )
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Ensayo de fosforilación de STAT3 inducido por IFN-alfa de HWB
L o s a r t í c u l o s d e e n s a y o s e p r e p a r a r o n e n f o r m a d e s o l u c i o n e s m a d r e 30 m M e n D M S O a l 1 0 0 % y d e s p u é s s e d i l u y e r o n a 5 m M . S e c r e ó u n a d i l u c ió n e n s e r i e d e 10 p u n t o s a 2 , 5 e n D M S O c o n u n a c o n c e n t r a c i ó n m á x i m a d e 5 m M . S e e f e c t u ó u n a d i l u c ió n a d i c i o n a l a ñ a d i e n d o 4 j l d e l a s s o l u c i o n e s d e a r t í c u l o d e e n s a y o a n t e r i o r e s e n 96 j l d e P B S c o n u n a c o n c e n t r a c i ó n m á x i m a d e 200 j M .
A u n a p l a c a d e p o l ip r o p i l e n o d e 96 p o c i l l o s ( V W R 82007 - 292 ) s e le a ñ a d ie r o n 90 j l d e H W B p o r c a d a p o c i l lo , s e g u i d o d e la a d ic ió n d e 5 j l d e s o l u c i o n e s d e a r t íc u l o d e e n s a y o p r e p a r a d a s a n t e r io r m e n t e p a r a d a r u n a c o n c e n t r a c ió n m á x im a d e 10 j M . L a p l a c a s e m e z c l ó e in c u b ó d u r a n t e 45 m in u t o s a 37 ° C . A c a d a p o c i l lo s e le a ñ a d i e r o n 5 j l d e I F N a lf a h u m a n o ( I F N u n i v e r s a l d e t ip o I, R & D S y s t e m s n . ° 1120 0 - 2 ; c o n c e n t r a c ió n f in a l d e 5000 U / m l ) o D - P B S ( c o n t r o l s in e s t im u l a c ió n ) , s e m e z c l ó y s e in c u b ó d u r a n t e 15 m in u t o s a 37 ° C . L a r e a c c i ó n s e in a c t iv ó a ñ a d i e n d o t a m p ó n d e l i s i s / f i j a c i ó n [ t a m p ó n d e l i s i s / f i j a c i ó n B D P h o s f l o w 5 x ( B D n . ° 558049 ) ] a t o d o s lo s p o c i l l o s a r a z ó n d e 1000 j l / p o c i l l o y s e in c u b ó d u r a n t e 20 m in u t o s a 37 ° C ; d e s p u é s d e l a v a r c o n t a m p ó n d e F A C S [ D - P B S ( I n v it r o g e n n . ° d e c a t . 14190 ) q u e c o n t e n í a B S A a l 0 , 1 % y a z i d a s ó d i c a a l 0 , 1 % ] , s e a ñ a d i e r o n 400 j l d e m e t a n o l a l 90 % / a g u a e n f r ia d o e n h ie lo a c a d a p o c i l lo y s e in c u b ó s o b r e h ie lo d u r a n t e 30 m in u t o s . S e e f e c t u ó u n la v a d o m á s c o n t a m p ó n F A C S f r ío y f in a lm e n t e s e r e s u s p e n d i e r o n t o d a s l a s m u e s t r a s e n 250 j l / p o c i l l o d e l a n t ic u e r p o a n t i - f o s f o - S T A T 3 ( p Y 705 ) c o n j u g a d o c o n A l e x a F l u o r 647 ( B D n . ° 557815 ) a u n a d i l u c ió n 1 : 12 5 e n t a m p ó n F A C S . D e s p u é s d e i n c u b a r d u r a n t e u n a n o c h e a 4 g r a d o s , s e t r a n s f i r ie r o n t o d a s l a s m u e s t r a s a u n a p l a c a d e p o l ip r o p i l e n o d e f o n d o e n U d e 96 p o c i l lo s ( F a l c o n n . ° 353077 ) y s e c o m p r o b a r o n m e d ia n t e u n a m á q u i n a d e c it o m e t r ía d e f lu jo . L o s s i g u i e n t e s E j e m p l o s d e r e f e r e n c i a , y e l E j e m p l o 55 , t ie n e n u n a s C I 50 e n t r e 19 y 297 n M e n e l e n s a y o d e I F N a d e H W B ;
1-3, 4B, 5, 6, 7B, 8, 12-15, 17A, 17B, 19-23, 25, 26, 28-30, 32, 33, 34B, 37-40, 41B, 42, 43B, 43C, 43D, 44-46, 48 53, 54A, 54B, 55-58, 59A y 59B.
Ensayo de proliferación de linfocitos T caninos in v itro
L a a c t i v a c i ó n d e l i n f o c i t o s T d e s e m p e ñ a u n p a p e l c l a v e e n u n a s e r i e d e t r a s t o r n o s in f l a m a t o r io s y a u t o in m u n it a r io s , a s í c o m o e n e l a s m a , l a s a l e r g i a s y e l p r u r it o . Y a q u e la a c t iv a c ió n d e lo s l i n f o c i t o s T p u e d e d e s e n c a d e n a r s e , e n p a r t e , p o r c i t o c i n a s q u e s e ñ a l i z a n a t r a v é s d e la r u t a d e J A K S T A T , u n in h ib id o r d e J A K p o d r ía s e r e f i c a z c o n t r a d i c h a s e n f e r m e d a d e s q u e im p l ic a n u n a a c t i v a c i ó n a b e r r a n t e d e l in f o c i t o s T .
Figure imgf000133_0001
[(Media de cpm de tratam iento farmacológico ) — (Media de cpm de BCK)]
x 10 0 = % Inhibición [(Media de cpm de tratam iento no farmacológico ) — (Media de cpm de BCK)]
Figure imgf000133_0002
E s t u d i o s n e u r o f a r m a c o c i n é t i c o s e n r a t o n e s
S e a d m in is t r a r o n s u s t a n c i a s d e p r u e b a a r a t o n e s C 57 / B L 6 p o r m e d io d e a d m i n i s t r a c i ó n s u b c u t á n e a e n la r e g ió n l u m b a r . L o s r a t o n e s p e s a b a n e n t r e 0 , 020 y 0 , 035 k g . S e r e c o g ie r o n s a n g r e , c e r e b r o y l í q u id o c e f a l o r r a q u í d e o ( L C R ) e n o b ie n 1 o b ie n 4 p u n t o s d e t ie m p o s i g u i e n d o la a d m i n i s t r a c i ó n d e la d o s i s . L o s a n i m a l e s s e a n e s t e s i a r o n c o n is o f l u r a n o a n t e s d e la r e c o g i d a d e l a s m u e s t r a s . L a s a n g r e s e r e c o g ió p o r m e d io d e p u n c ió n c a r d i a c a , E l L C R s e r e c o g ió d e la c is t e r n a m a g n a y e l c e r e b r o s e r e c o g ió t r a s d e c a p i t a c ió n . L a s a n g r e s e c e n t r i f u g ó p a r a s e p a r a r e l p l a s m a y e l p l a s m a s e t r a n s f i r ió a u n v i a l l im p io . L o s c e r e b r o s s e a c l a r a r o n c o n s o l u c i ó n s a l i n a y s e s e c a r o n a n t e s d e t r a n s f e r i r s e a u n v ia l d e r e c o g id a . C u a n d o lo s e s t u d io s s e r e a l i z a r o n p a r a r e c o g e r m u e s t r a s e n s o l o u n p u n t o d e t ie m p o , s e r e c o g ie r o n 1 h d e s p u é s d e la d o s i s . C u a n d o l o s e s t u d i o s s e r e a l i z a r o n p a r a r e c o g e r m u e s t r a s e n c u a t r o p u n t o s d e t ie m p o , s e r e c o g ie r o n 0 , 5 , 1, 2 y 4 h d e s p u é s d e la d o s i s .
L a s m u e s t r a s s e a n a l i z a r o n p a r a d e t e c t a r e l f á r m a c o u s a n d o a n á l i s i s d e C L - E M - E M . E l a n á l i s i s f a r m a c o c i n é t i c o ( P K ) s e r e a l i z ó s o l a m e n t e e n e s t u d i o s c o n 4 p u n t o s d e t ie m p o p a r a la m e d ic ió n d e C m a x , T m a x , s e m i v i d a ( T 1/2), á r e a b a jo la c u r v a 0 - T l a s t ) ( A U C 0 - T l a s t ) y á r e a b a jo la c u r v a e x t r a p o l a d a ( A U C E x t r a p ) . L o s d a t o s s e a n a l i z a r o n p o r c o m p a r a c ió n d e la A U C E x t r a p , c e r e b r o c o n r e s p e c t o a A U C E x t r a p , p l a s m a . L a f r a c c i ó n l ib r e t a n t o e n c e r e b r o c o m o e n p l a s m a s e in c o r p o r a r o n p a r a p r o d u c i r u n a r e l a c ió n d e c e r e b r o l ib r e c o n r e s p e c t o a p l a s m a l ib r e ( C b ,u /C p ,u ) . E s t a s r e l a c i o n e s p e r m it ie r o n e v a l u a r e l n iv e l d e d e t e r io r o c e r e b r a l e n u n r a t ó n . P a r a e s t u d i o s c o n s o l o u n p u n t o d e t ie m p o , e l d e t e r io r o s e e v a l u ó g e n e r a n d o u n a C b ,u /C p ,u c o n lo s v a l o r e s d e e x p o s ic i ó n a f á r m a c o a 1 h ( n o u n a r e l a c ió n d e a U c E x t r a p ) . L o s E j e m p l o s d e r e f e r e n c i a e n la t a b l a p o s t e r io r e s t á n m a r c a d o s c o n ' R E F ' .
Figure imgf000133_0003
( c o n t in u a c ió n )
Figure imgf000134_0001

Claims (3)

REIVINDICACIONES
1. U n c o m p u e s t o o u n a s a l f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b l e d e l m is m o , s e l e c c i o n a d o e n t r e e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n : N -[ c i s - 3 -( { [ 3 -( d i f l u o r o m e t i l ) a z e t i d i n - 1 - i l ] s u l f o n i l } m e t i l ) c i c l o b u t i l ] - N - m e t i l - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m i n a ;
N -[ c i s - 3 -( { [ 3 -( 2 , 2 - d i f l u o r o e t i l ) - a z e t i d i n - 1 - i l ] s u l f o n i l } m e t i l ) - c i c l o b u t i l ] - N - m e t i l - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m i n a ; N -( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( ( ( 3 -( d i f l u o r o m e t o x i ) a z e t i d i n - 1 - i l ) s u l f o n i l ) m e t i l ) c i c l o b u t i l ) - N - m e t i l - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m i n a ; N - m e t i l - N -( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( ( ( 3 -( t r i f l u o r o m e t i l ) a z e t i d i n - 1 - i l ) s u l f o n i l ) m e t i l ) c i c l o b u t i l ) - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m i n a ; N -( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( ( ( 3 , 3 - d i f l u o r o a z e t i d i n - 1 - i l ) s u l f o n i l ) m e t i l ) c i c l o b u t i l ) - N - m e t i l - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m i n a ; y , N - m e t i l - N -( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( ( ( 3 , 3 , 3 - t r i f l u o r o p r o p i l ) s u l f o n i l ) m e t i l ) c i c l o b u t i l ) - 7 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m i n a .
2. U n c o m p u e s t o d e a c u e r d o c o n la r e i v i n d i c a c i ó n 1, o u n a s a l f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b l e d e l m is m o , p a r a s u u s o e n e l t r a t a m ie n t o d e u n a a f e c c i ó n n e u r o l ó g ic a .
3. U n c o m p u e s t o d e a c u e r d o c o n la r e iv in d ic a c i ó n 2 , e n e l q u e d i c h a a f e c c ió n s e s e l e c c i o n a e n t r e e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n a p o p l e j í a , e p i l e p s i a , e n f e r m e d a d d e P a r k i n s o n , e n f e r m e d a d d e l A l z h e i m e r , d e m e n c i a d e l ló b u lo f r o n t o t e m p o r a l , e s c l e r o s i s m ú lt ip le y e n f e r m e d a d d e P ic k .
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